ES2653545T3 - Producción mejorada de lípidos que contienen ácidos grasos polienoicos por cultivos de alta densidad de microorganismos del orden Thraustochytriales en fermentadores - Google Patents
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Abstract
Un procedimiento para producir lípidos microbianos eucariotas que comprende: (a) añadir una fuente de carbono no alcohol y una fuente de nutriente limitante a un medio de fermentación que comprende microorganismos del orden Thraustochytriales; (b) proporcionar condiciones suficientes para que dichos microorganismos produzcan dichos lípidos microbianos y (c) recuperar dichos lípidos microbianos, en el que al menos el 15% de dichos lípidos microbianos son lípidos poliinsaturados y en el que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante una etapa de aumento de densidad de biomasa es mayor que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante una etapa de producción de lípidos.
Description
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DESCRIPCIÓN
Producción mejorada de lípidos que contienen ácidos grasos polienoicos por cultivos de alta densidad de microorganismos del orden Thraustochytriales en fermentadores.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a un nuevo procedimiento para cultivar microorganismos del orden Thraustochytriales y recuperar lípidos microbianos. En particular, la presente invención se refiere a producir lípidos poliinsaturados microbianos.
Antecedentes de la invención
Se ha creído en general que la producción de ácidos grasos polienoicos (ácidos grasos que contienen 2 o más enlaces carbono-carbono insaturados) en microorganismos eucariotas requiere la presencia de oxígeno molecular (es decir, condiciones aerobias). Esto es debido a que se cree que el doble enlace cis formado en los ácidos grasos de todos los microorganismos eucariotas no parasitarios implica una reacción de desaturación dependiente de oxígeno, directa, (sistemas de desaturasa microbiana oxidativa). Otros lípidos microbianos eucariotas que se sabe que requieren oxígeno molecular incluyen esteroles fúngicos y vegetales, oxicarotenoides (es decir, xantofilas), ubiquinonas y compuestos preparados a partir de cualquiera de estos lípidos (es decir, metabolitos secundarios).
Se ha demostrado que algunos microbios eucariotas (tales como algas; hongos, incluyendo levaduras y protistas) son buenos productores de ácidos grasos polienoicos en fermentadores. Sin embargo, el cultivo de muy alta densidad (mayor que aproximadamente 100 g/l de biomasa microbiana, especialmente a escala comercial) puede conducir a contenidos disminuidos en ácidos grasos polienoicos y por lo tanto productividad disminuida de ácidos grasos polienoicos. Esto puede ser debido en parte a diversos factores incluyendo la dificultad de mantener altos niveles de oxígeno disuelto debido a la alta demanda de oxígeno desarrollada por la alta concentración de microbios en el caldo de fermentación. Los métodos para mantener mayor nivel de oxígeno disuelto incluyen aumentar la velocidad de aireación y/o usar oxígeno puro en vez de aire para aireación y/o aumentar la velocidad con que se remueve en el fermentador. Estas soluciones generalmente aumentan el coste de la producción de lípidos y el coste de capital del equipo de fermentación y pueden producir problemas adicionales. Por ejemplo, la aireación aumentada puede conducir fácilmente a graves problemas de formación de espuma en el fermentador a altas densidades de células y el mezclamiento aumentado puede conducir a ruptura celular microbiana debido a fuerzas de cizallamiento aumentadas en el caldo de fermentación (esto produce que los lípidos se liberen en el caldo de fermentación donde pueden llegar a oxidarse y/o degradarse mediante enzimas). La ruptura celular microbiana es un problema aumentado en las células que han experimentado limitación o agotamiento de nitrógeno para inducir la formación de lípidos, dando como resultado paredes celulares más débiles.
Como resultado, cuando se cultivan microbios eucariotas productores de lípidos a concentraciones celulares muy altas, sus lípidos contienen en general sólo cantidades muy pequeñas de ácidos grasos polienoicos. Por ejemplo, la levadura Lipomyces starkeyi se ha cultivado a una densidad de 153 g/l con concentración de lípidos resultantes de 83 g/l en 140 horas usando alcohol como fuente de carbono. Sin embargo, el contenido en ácidos grasos polienoicos de la levadura a una concentración mayor que 100 g/l dio como promedio sólo 4,2% de ácidos grasos totales (bajando desde una alta de 11,5% de ácido graso total a una densidad celular de 20-30 g/l). Yamauchi et al., J. Ferment. Technol, 1.983, 61, 275-280. Esto da como resultado una concentración de ácidos grasos polienoicos de sólo aproximadamente 3,5 g/l y una productividad de ácidos grasos polienoicos promedio de sólo aproximadamente 0,025 g/l/h. Adicionalmente, el único ácido graso polienoico indicado en los lípidos de levaduras fue C18:2.
Se ha demostrado que otra levadura, Rhodotorula glutinus, presenta una productividad de lípidos promedio de aproximadamente 0,49 g/l/h, pero también un contenido en ácidos grasos polienoicos total bajo en sus lípidos (15,8% de ácidos grasos totales, 14,7% de C18:2 y 1,2% de C18:3) dando como resultado una productividad de ácidos grasos polienoicos en un cultivo discontinuo alimentado de sólo aproximadamente 0,047 g/l/h y 0,077 g/l/h en cultivo continuo.
Uno de los presentes autores ha demostrado previamente que algunas microalgas marinas en el orden Thraustochytriales pueden ser excelentes productores de ácidos grasos polienoicos en fermentadores, especialmente cuando se cultivan a niveles de baja salinidad y especialmente a niveles de cloruro muy bajos. Otros han descrito que Thraustochytrids presenta una productividad de ácidos grasos polienoicos promedio (DHA, C22: 6n-3 y DPA, C22:5n-6) de aproximadamente 0,158 g/l/h, cuando se cultiva a densidad celular de 59 g/l en 120 horas. Sin embargo, esta productividad sólo se consiguió a una salinidad de aproximadamente 50% de agua de mar, una concentración que produciría una seria corrosión en fermentadores de acero inoxidable convencionales.
Beach et al, Biochimica et Biophysica Acta, vol. 316, No1, 1 enero 1973, paginas 56-65, describe un pocedeimiento para producir lípidos con Crypthecodinium Cohnii.
La patente internacional WO 98/03671 describe un procedimiento para preparar lípidos que contienen ácido docosahexaenoico (DHA) y/o ácido docosapentaenoico (DPA) (ambos por sus siglas en inglés) cultivando microorganismos y un microorganismo pertenece al género Ulkenia con la capacidad para producir los lípidos.
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Lena Hansson et al., Appl. Microbiol Biotechnol (1986) 24 : 187 - 192 describen formación de lípidos por la levadura Cryptococcus albidus en cultivos de quimiostatos limitados en nitrógeno y en limitados en carbono.
La patente europea EP0823475 describe una cepa SR21 del género Schizochytrium (FERM BP-5034) que tiene la capacidad de producir la serie (n-3) de ácido docosahexaenoico y la serie (n-6) de ácido docosapentaenoico en un medio y recuperar dicha grasa del cultivo.
La patente internacional WO 9408467 indica un procedimiento para cultivar la microflora Thraustochytrium, Schizochytrium y mezclas de los mismos, que incluye el cultivo de la microflora en un medio de fermentación que contiene sales sódicas que no contienen cloruro.
Los costes de producción de lípidos microbianos que contienen ácidos grasos polienoicos y especialmente los ácidos grasos altamente insaturados, tales como C18:4n-3, C20:4n-6, C20:5n3, C22:5n-3, C22:5n-6 y C22:6n-3, han permanecido altos en parte debido a las densidades limitadas a las que se han cultivado los microbios eucariotas que contienen alto contenido en ácidos grasos polienoicos y la disponibilidad limitada de oxígeno ambas a estas altas concentraciones celulares y las mayores temperaturas necesarias para conseguir alta productividad.
Por lo tanto, hay una necesidad de un procedimiento para cultivar microorganismos a alta concentración que facilite aún la producción aumentada de lípidos conteniendo ácidos grasos polienoicos.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona un procedimiento para producir lípidos microbianos eucariotas que comprende:
(a) añadir una fuente de carbono no alcohol y una fuente de nutriente limitante a un medio de fermentación que comprende microorganismos del orden Thraustochytriales;
(b) proporcionar condiciones suficientes para que dichos microorganismos produzcan dichos lípidos microbianos y
(c) recuperar dichos lípidos microbianos,
en el que al menos el 15% de dichos lípidos microbianos son lípidos poliinsaturados y en el que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante una etapa de aumento de densidad de biomasa es mayor que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante una etapa de producción de lípidos.
Realizaciones
Las realizaciones de la presente invención proporcionan un procedimiento para cultivar microorganismos eucariotas del orden Thraustochytriales que son capaces de producir al menos aproximadamente 20% de su biomasa como lípidos y un método para producir los lípidos. Los lípidos contienen uno o más ácidos grasos polienoicos. El procedimiento comprende añadir a un medio de fermentación que comprende microorganismos eucariotas del orden Thraustochytriales una fuente de carbono no alcohol y una fuente de nutriente limitante. Preferiblemente, la fuente de carbono y la fuente de nutriente limitante se añaden a una velocidad suficiente para aumentar la densidad de biomasa del medio de fermentación a al menos aproximadamente 100 g/l.
El procedimiento comprende una fase de aumento de la densidad de biomasa y una fase de producción de lípidos. En una realización, la fase de aumento de la densidad de biomasa comprende añadir la fuente de carbono y la fuente de nutriente limitante y la fase de producción de lípidos comprende añadir la fuente de carbono sin añadir la fuente de nutriente limitante para crear las condiciones que induzcan la producción de lípidos.
En la presente invención, la cantidad de oxígeno disuelto presente en el medio de fermentación durante la fase de producción de lípidos es menor que la cantidad de oxígeno disuelto presente en el medio de fermentación durante la fase de aumento de la densidad de biomasa.
En una realización, se cultivan microorganismos en un procedimiento alimentado discontinuo.
Una realización proporciona mantener un nivel de oxígeno menor que aproximadamente 3% de saturación en el medio de fermentación durante la segunda mitad del procedimiento de fermentación.
Se describe también un procedimiento para producir lípidos microbianos eucariotas que comprende:
(a) cultivar microorganismos eucariotas en un medio de fermentación para aumentar la densidad de biomasa de dicho medio de fermentación a al menos aproximadamente 100 g/l;
(b) proporcionar condiciones de fermentación suficientes para permitir que dichos microorganismos produzcan dichos lípidos y
(c) recuperar dichos lípidos,
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en los que más del aproximadamente 15% de dichos lípidos son lípidos poliinsaturados.
Otra realización proporciona un procedimiento de recuperación de lípidos que comprende:
(d) retirar agua de dicho medio de fermentación para proporcionar microorganismos secos y
(e) aislar dichos lípidos de dichos microorganismos secos.
Preferiblemente, la etapa de eliminación de agua comprende poner en contacto el medio de fermentación directamente en un secador de tambor sin centrifugación previa.
Otro aspecto proporciona un procedimiento de recuperación de lípidos que comprende:
(d) tratar en caldo de fermentación para permeabilizar, lisar o romper las células microbianas y
(e) recuperar los lípidos del caldo de fermentación por separación por gravedad y preferiblemente centrifugación, con o sin la ayuda de un disolvente soluble en agua para ayudar a la ruptura de la emulsión lípido/agua.
Preferiblemente, las células microbianas se tratan en la etapa (c) en un fermentador o un recipiente similar.
Se describe además un método para enriquecer el contenido en ácidos grasos polienoicos de un microorganismo. El método incluye fermentar los microorganismos en un medio de cultivo con un nivel de oxígeno disuelto menor que 10%.
Se describe además un procedimiento heterotrófico para producir productos y microorganismos. El procedimiento incluye cultivar los microorganismos que contienen genes de policétido sintasa en un medio de cultivo y mantener el nivel de oxígeno disuelto en el cultivo a menos de aproximadamente 10 por ciento.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 es una tabla y una representación gráfica de diversos parámetros de producción de lípidos de un microorganismo frente a la cantidad de oxígeno disuelto en un medio de fermentación.
Descripción detallada de la invención
El procedimiento de la presente invención se puede usar para producir lípidos altamente insaturados (es decir, lípidos que contienen 4 o más enlaces carbono-carbono insaturados) tales como ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y/u omega-6, incluyendo ácido docosahexaenoico (es decir, DHA) y otros compuestos insaturados, poliinsaturados y altamente insaturados que se encuentran en la naturaleza. Como se usa en la presente memoria, el término "lípido" incluye fosfolípidos; ácidos grasos libres; ésteres de ácidos grasos; triacilgliceroles; esteroles y ésteres de esterol; carotenoides; xantofilas (por ej., oxicarotenoides); hidrocarburos; compuestos derivados de isoprenoides y otros lípidos conocidos para un experto en la materia.
Específicamente, los procedimientos de la presente invención son útiles en el cultivo de microorganismos del orden Thraustochytriales que producen ácido o ácidos grasos polienoicos y para producir ácido o ácidos grasos polienoicos microbianos.
Aunque los procedimientos de la presente invención se pueden usar para cultivar una amplia variedad de microorganismos del orden Thraustochytriales y para obtener compuestos que contengan lípidos poliinsaturados producidos por los mismos, por brevedad, conveniencia e ilustración, esta descripción detallada de la invención discutirá procedimientos para cultivar microorganismos del orden Thraustochytriales que sean capaces de producir lípidos comprendiendo ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y/u omega-6, en particular microorganismos que sean capaces de producir DHA (o compuestos estrechamente relacionados tales como DPA, EPA o ARA). Más en particular, se discutirán realizaciones preferidas de la presente invención con referencia a un procedimiento para cultivar microorganismos marinos del orden Thraustochytriales, más específicamente Thraustochytriales del género Thraustochytrium y Schizochytrium, incluyendo Thraustochytriales que se describen en las Patentes de EE.UU. cedidas comúnmente N° 5.340.594 y 5.340.742, ambas expedidas a Barclay. Se debería observar que muchos expertos están de acuerdo con que Ulkenia no es un género separado, sino que es de hecho parte del género Schizochytrium. Como se usa en la presente memoria, el género Schizochytrium incluirá Ulkenia.
Los microorganismos preferidos son aquéllos que producen los compuestos de interés por sistemas de la policétido sintasa. Dichos microorganismos incluyen microorganismos que tienen un sistema de policétido sintasa endógeno y microorganismos en los que se ha logrado genéticamente un sistema de policétido sintasa. Los policétidos son productos naturales estructuralmente diversos que presentan un amplio intervalo de actividades biológicas, incluyendo propiedades antibióticas y farmacológicas. La biosíntesis de la cadena principal de la cadena carbonada de los policétidos es catalizada por policétido sintasas. Como las sintasas de ácidos grasos relacionadas estructuralmente y mecanísticamente, las policétido sintasas catalizan las condensaciones descarboxilativas repetidas entre tioésteres acílicos que extienden la cadena carbonada dos carbonos cada vez. Sin embargo, a diferencia de las sintasas de ácido graso, las policétido sintasas pueden generar gran variabilidad estructural en el
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producto final. Los sistemas de la policétido sintasa individuales pueden hacer esto usando unidades de partida distintas de acetato, utilizando malonato de metilo o etilo como la unidad extendedora y variando el ciclo reductor de cetorreducción, deshidratación y reducción de enoílo sobre el grupo beta-ceto formado después de cada condensación. Es de particular interés aquí que los dobles enlaces carbono-carbono que se introducen por la etapa de deshidratación se puedan mantener en el producto final. Además, aunque estos dobles enlaces están inicialmente en la configuración trans, se pueden convertir en la configuración cis encontrada en DHA (y otros ácidos grasos polienoicos de interés) por isomerización enzimática. Ambas reacciones de deshidrasa y de isomerización pueden tener lugar en ausencia de oxígeno molecular.
Preferiblemente, según la presente invención se proporciona un procedimiento heterotrófico para producir productos y microorganismos. El procedimiento comprende preferiblemente cultivar los microorganismos en un medio de cultivo en el que los microorganismos contienen un sistema de policétido sintasa. Preferiblemente, el nivel de oxígeno disuelto se mantiene a menos de aproximadamente 8 por ciento, más preferiblemente a menos de aproximadamente 4 por ciento, más preferiblemente a menos de aproximadamente 3 por ciento y más preferiblemente a menos de aproximadamente 1 por ciento.
Asumiendo un régimen de producción relativamente constante de lípidos por un alga, es fácilmente evidente que la mayor densidad de biomasa conducirá a una cantidad total mayor de lípidos producidos por volumen. Los procedimientos de fermentación convencionales actuales para cultivar algas proporcionan una densidad de biomasa de desde aproximadamente 50 a aproximadamente 80 g/l o menos. Los presentes autores han encontrado que usando los procedimientos de la presente invención, se puede conseguir una densidad de biomasa significativamente mayor que la densidad de biomasa conocida en la actualidad. Preferiblemente, los procedimientos de la presente invención producen densidad de biomasa de al menos aproximadamente 100 g/l, más preferiblemente al menos aproximadamente 130 g/l, aún más preferiblemente al menos aproximadamente 150 g/l, incluso más preferiblemente aún al menos aproximadamente 170 g/l y lo más preferiblemente mayor que 200 g/l. Así, con dicha densidad de biomasa alta, incluso si el régimen de producción de lípidos del alga disminuye ligeramente, el régimen de producción de lípidos total por volumen es significativamente mayor que en los procedimientos conocidos en la actualidad.
Los procedimientos de la presente invención para cultivar microorganismos del orden Thraustochytriales incluyen añadir una fuente de carbono no alcohol y una fuente de un nutriente limitante a un medio de fermentación que comprende los microorganismos a una velocidad suficiente para aumentar la densidad de biomasa del medio de fermentación a los descritos anteriormente. Como se usa en la presente memoria, el término "fuente de nutriente limitante" se refiere a una fuente de un nutriente (incluyendo el propio nutriente) esencial para el crecimiento de un microorganismo por que, cuando se agota el nutriente limitante del medio de cultivo, su ausencia limita sustancialmente el crecimiento o la replicación del microorganismo, adicional. Sin embargo, puesto que los otros nutrientes aún se encuentran en abundancia, el organismo puede continuar fabricando y acumulando productos intracelulares y/o extracelulares. Eligiendo un nutriente limitante específico, se puede controlar el tipo de productos que se acumulan. Por lo tanto, proporcionar una fuente de nutriente limitante a una cierta velocidad permite que se controlen tanto la velocidad de crecimiento del microorganismo como la producción o acumulación de productos deseados (por ejemplo, lípidos). Este procedimiento de fermentación, donde se añade uno o más sustratos (por ejemplo, una fuente de carbono y una fuente de nutriente limitante) en incrementos, se refiere en general como un procedimiento de fermentación alimentado discontinuo. Se ha encontrado que cuando se añade el sustrato a un procedimiento de fermentación discontinuo la gran cantidad de fuente de carbono presente (por ejemplo, aproximadamente 200 g/l o más por 60 g/l de densidad de biomasa) presentó un efecto perjudicial sobre los microorganismos. Sin estar limitados por ninguna teoría, se cree que dicha alta cantidad de fuente de carbono produce efectos perjudiciales, incluyendo estrés osmótico, para los microorganismos e inhibe la productividad inicial de los microorganismos. Los procedimientos de la presente invención evitan este efecto perjudicial no deseado al tiempo que se proporciona una cantidad suficiente del sustrato para conseguir la densidad de biomasa descrita anteriormente de los microorganismos.
Los procedimientos de la presente invención para cultivar microorganismos incluyen una fase de aumento de la densidad de biomasa. En la fase de aumento de densidad de biomasa, el objetivo principal del procedimiento de fermentación es aumentar la densidad de biomasa en el medio de fermentación para obtener la densidad de biomasa descrita anteriormente. La velocidad de adición de fuente de carbono se mantiene típicamente a un nivel o intervalo particular que no produzca un efecto perjudicial significativo sobre la productividad de los microorganismos o la viabilidad de los microorganismos que resulten de capacidades insuficientes del equipo de fermentación para retirar calor de, y transferir gases a y desde, el caldo líquido. Un intervalo apropiado de la cantidad de fuente de carbono necesaria para un microorganismo particular durante un procedimiento de fermentación es conocido para un experto en la materia. Una fuente de carbono de la presente invención es una fuente de carbono no alcohólica, es decir, una fuente de carbono que no contiene alcohol. Como se usa en la presente memoria, un "alcohol" se refiere a un compuesto que tiene 4 o menos átomos de carbono con un grupo hidroxi, por ejemplo, metanol, etanol e isopropanol pero para el propósito de esta invención no incluye hidroxiácidos orgánicos tales como ácido láctico y compuestos similares. Más preferiblemente, una fuente de carbono de la presente invención es un carbohidrato, incluyendo, pero no limitado a, fructosa, glucosa, sacarosa, melazas y almidón. Otras fuentes de carbono y fuentes de nitrógeno, simples y complejas, adecuadas, se describen en las patentes referidas anteriormente. Típicamente,
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sin embargo, se usa un carbohidrato, preferiblemente jarabe de maíz, como la fuente de carbono principal. Los ácidos grasos, en la forma de hidroxiácidos grasos, triglicéridos y di- y monoglicéridos también pueden servir como fuente de carbono.
Son fuentes de nitrógeno preferidas en particular: urea, nitrato, nitrito, proteína de soja, aminoácidos, proteína, agua empleada para remojar el maíz, extracto de levadura, subproductos animales, sal amónica inorgánica, más preferiblemente sales de amonio de sulfato, hidróxido y lo más preferiblemente hidróxido de amonio. Otras fuentes de nutrientes limitantes incluyen fuentes de carbono (como se definió anteriormente), fuentes de fosfato, fuentes de vitaminas (tales como fuentes de vitamina B12, fuentes de pantotenato, fuentes de tiamina) y fuentes de metales traza (tales como fuentes de cinc, fuentes de cobre, fuentes de cobalto, fuentes de níquel, fuentes de hierro, fuentes de manganeso, fuentes de molibdeno) y fuentes de metales principales (tales como fuentes de magnesio, fuentes de calcio, fuentes de sodio, fuentes de potasio y fuentes de sílice, etc.). Fuentes de metales traza y fuentes de metales principales pueden incluir sales de sulfato y cloruro de estos metales (por ejemplo, pero no limitado a, MgSO4-7H2O; MnCl2-4H2O; ZnSO4'7H2O; CoCl2'6H2O; Na2MoO4'2H2O; CuSO4'5H2O; MSO46 H2O; FeSO4'7H2O; CaCh; K2SO4; KCl y Na2SO4).
Cuando se usa amonio como fuente de nitrógeno, el medio de fermentación se hace ácido si no se controla por adición de base o tampones. Cuando se usa hidróxido de amonio como la fuente de nitrógeno principal, también se puede usar para proporcionar un control del pH. Los microorganismos del orden Thraustochytriales, en particular Thraustochytriales del género Thraustochytrium y Schizochytrium, se cultivarán por un amplio intervalo de pH, por ejemplo de aproximadamente pH 5 a aproximadamente pH 11. Un intervalo de pH apropiado para fermentación de un microorganismo particular está dentro del conocimiento de un experto en la materia.
Los procedimientos de la presente invención para cultivar microorganismos incluyen una fase de producción. En esta fase, el uso principal del sustrato por los microorganismos no es aumentar la densidad de biomasa sino más bien usar el sustrato para producir lípidos. Se debería apreciar que los lípidos también son producidos por los microorganismos durante la fase de aumento de la densidad de biomasa; sin embargo, como se indicó anteriormente, el objetivo principal en la fase de aumento de la densidad de biomasa es aumentar la densidad de biomasa. Típicamente, durante la fase de producción se reduce o preferiblemente se detiene la adición del sustrato nutriente limitante.
Previamente se creía en general que la presencia de oxígeno disuelto (OD) en el medio de fermentación es crucial en la producción de compuestos poliinsaturados, incluyendo ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y/u omega-6, por microorganismos eucariotas. Así, se creía en general que era preferida una cantidad relativamente grande de oxígeno disuelto en el medio de fermentación. Sorprendentemente e inesperadamente, sin embargo, los presentes autores han encontrado que el régimen de producción de lípidos aumenta espectacularmente cuando se reduce el nivel de oxígeno disuelto durante la fase de producción. Así, aunque el nivel de oxígeno disuelto en el medio de fermentación durante la fase de aumento de la densidad de biomasa es preferiblemente al menos aproximadamente 8% de la saturación y preferiblemente al menos aproximadamente 4% de la saturación, durante la fase de producción el oxígeno disuelto en el medio de fermentación se reduce a aproximadamente 3% de la saturación o menos, preferiblemente aproximadamente 1% de la saturación o menos y más preferiblemente aproximadamente 0% de saturación. Al comienzo de la fermentación el OD puede estar en, o cerca de, la saturación y a medida que crecen los microbios se permite la desviación hasta estos valores de ajuste de OD bajos. En una realización particular, la cantidad de nivel de oxígeno disuelto en el medio de fermentación varía durante el procedimiento de fermentación. Por ejemplo, para un procedimiento de fermentación con tiempo de fermentación total de desde aproximadamente 90 horas a aproximadamente 100 horas, el nivel de oxígeno disuelto en el medio de fermentación se mantiene a aproximadamente 8% durante las primeras 24 horas, aproximadamente 4% desde la aproximadamente 24a hora a aproximadamente 40a hora y aproximadamente 0,5% o menos de la aproximadamente 40' hora al final del procedimiento de fermentación.
La cantidad de oxígeno disuelto presente en el medio de fermentación se puede controlar controlando la cantidad de oxígeno en la cámara de aire del fermentador o preferiblemente controlando la velocidad a la que se remueve (o se agita) el medio de fermentación. Por ejemplo, una velocidad a la que se remueve (o agita) alta da como resultado una cantidad relativamente mayor de oxígeno disuelto en el medio de fermentación que una velocidad a la que se remueve baja. Por ejemplo, en un fermentador de aproximadamente 52.996 litros (14.000 galones) de capacidad la velocidad a la que se remueve se fija a de aproximadamente 5 rad/s (50 rpm) a aproximadamente 7 rad/s (70 rpm) durante las primeras 12 horas, de aproximadamente 6 rad/s (55 rpm) a aproximadamente 8 rad/s (80 rpm) durante aproximadamente la 12' hora a aproximadamente 18' hora y de aproximadamente 7 rad/s (70 rpm) a aproximadamente 9 rad/s (90 rpm) de aproximadamente la 18' hora al final del procedimiento de fermentación para conseguir el nivel de oxígeno disuelto discutido anteriormente para un tiempo del procedimiento de fermentación total de desde aproximadamente 90 horas a aproximadamente 100 horas. Un intervalo particular de velocidades a las que se remueve necesarias para conseguir una cantidad particular de oxígeno disuelto en el medio de fermentación se puede determinar fácilmente por un experto en la materia.
Una temperatura preferida para los procedimientos de la presente invención es al menos aproximadamente 20°C, más preferiblemente al menos aproximadamente 25°C y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 30°C. Se debería apreciar que el agua fría puede retener una cantidad mayor de oxígeno disuelto que el agua caliente.
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Así, una temperatura mayor del medio de fermentación presenta el beneficio adicional de reducir la cantidad de oxígeno disuelto, que se desea en particular como se describió anteriormente.
Algunos microorganismos pueden requerir una cierta cantidad de minerales salinos en el medio de fermentación. Estos minerales salinos, especialmente iones cloruro, pueden producir corrosión del fermentador y otro equipo de tratamiento aguas abajo. Para prevenir o reducir estos efectos no deseados debido a una cantidad relativamente grande de iones cloruro presentes en el medio de fermentación, los procedimientos de la presente invención también pueden incluir usar sales de sodio que no contienen cloruro, preferiblemente sulfato de sodio, en el medio de fermentación como fuente de sodio. Más en particular, una porción significativa de los requerimientos de sodio de la fermentación es suministrada como sales de sodio que no contienen cloruro. Por ejemplo, menos de aproximadamente 75% del sodio en el medio de fermentación es suministrado como cloruro de sodio, más preferiblemente menos de aproximadamente 50% y más preferiblemente menos de aproximadamente 25%. Los microorganismos de la presente invención se pueden cultivar a concentraciones de cloruro de menor que aproximadamente 3 g/l, más preferiblemente menor que aproximadamente 500 mg/l, más preferiblemente menor que aproximadamente 250 mg/l y más preferiblemente entre aproximadamente 60 mg/l y aproximadamente 120 mg/l.
Las sales de sodio que no contienen cloruro pueden incluir sosa (una mezcla de carbonato de sodio y óxido de sodio), carbonato de sodio, bicarbonato de sodio, sulfato de sodio y mezclas de los mismos y preferiblemente incluyen sulfato de sodio. Sosa, carbonato de sodio y bicarbonato de sodio tienden a aumentar el pH del medio de fermentación, requiriéndose así etapas de control para mantener el pH apropiado del medio. La concentración de sulfato de sodio es eficaz para satisfacer los requerimientos de salinidad de los microorganismos, preferiblemente la concentración de sodio es (expresada como g/l de Na) al menos aproximadamente 1 g/l, más preferiblemente en el intervalo de desde aproximadamente 1 g/l a aproximadamente 50 g/l y más preferiblemente en el intervalo de desde aproximadamente 2 g/l a aproximadamente 25 g/l.
Diversos parámetros de fermentación para inocular, cultivar y recuperar microorganismos se discuten con detalle en la Patente de EE.UU. N° 5.130.242. Se puede usar cualquier método de aislamiento conocido en la actualidad para aislar los microorganismos del medio de fermentación, incluyendo centrifugación, filtración, ultrafiltración, decantación y evaporación de disolvente. Los presentes autores han encontrado que debido a dicha alta densidad de biomasa que resulta de los procedimientos de la presente invención, cuando se usa una centrífuga para recuperar los microorganismos se prefiere diluir el medio de fermentación por adición de agua, que reduce la densidad de biomasa, permitiendo de ese modo una separación más eficaz de los microorganismos del medio de fermentación.
Las muy altas densidades de biomasa conseguidas en la presente invención también facilitan los procedimientos "sin disolvente" para la recuperación de lípidos microbianos. Los procedimientos preferidos para lisar las células en el fermentador se describen en la Solicitud de Patente Provisional de EE.UU. N° de Serie 60/177.125 titulada "SOLVENTLESS EXTRACTION PROCESS" presentada el 19 de enero de 2.000, la Solicitud de Patente de EE.UU. N° de Serie 09/766.500 titulada "SOLVENTLESS EXTRACTION PROCESS" presentada el 19 de enero de 2.001 (ahora Patente de EE.UU. N° 6.750.048) y la Publicación de Patente Internacional PCT N° WO 01/53.512 titulada "SOLVENTLESS EXTRACTION PROCESS" presentada el 19 de enero de 2.001. Los procedimientos preferidos para recuperar los lípidos una vez que las células se permeabilizan, se rompen o se lisan en el fermentador (que permite que se rompa la emulsión de lípidos y que se recupere la fracción rica en lípidos) incluyen el procedimiento de desaceitado señalado líneas generales en la Patente Internacional WO 96/05278. En este procedimiento, se añade un compuesto soluble en agua, por ejemplo, alcohol o acetona, a la emulsión de aceite/agua para romper la emulsión y se separa la mezcla resultante por separación por gravedad, por ejemplo, centrifugación. Este procedimiento también se puede modificar para usar otros agentes (solubles en agua y/o lípidos) para romper la emulsión.
Alternativamente, se recuperan los microorganismos en una forma seca a partir del medio de fermentación por evaporación de agua del medio de fermentación, por ejemplo, poniendo en contacto el medio de fermentación directamente (es decir, sin concentración previa, por ejemplo, por centrifugación) con un secador tal como un aparato secador de tambor, es decir, un procedimiento de recuperación de secador de tambor directo. Cuando se usa el procedimiento de recuperación de secador de tambor directo para aislar los microorganismos, típicamente se emplea un secador de tambor calentado con vapor. Además cuando se usa el procedimiento de recuperación de secador de tambor directo, la densidad de biomasa del medio de fermentación es preferiblemente al menos aproximadamente 130 g/l, más preferiblemente al menos aproximadamente 150 g/l y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 180 g/l. Esta alta densidad de biomasa se desea en general para el procedimiento de recuperación de secador de tambor directo debido a una densidad de biomasa menor, el medio de fermentación comprende una cantidad suficiente de agua para enfriar el tambor significativamente, dando como resultado así un secado incompleto de los microorganismos. Otros métodos de secado de células, incluyendo secado por atomización, son conocidos para un experto en la materia.
Los procedimientos de la presente invención proporcionan un régimen de producción de lípidos promedio de al menos aproximadamente 0,5 g/l/h, preferiblemente al menos aproximadamente 0,7 g/l/h, más preferiblemente al menos aproximadamente 0,9 g/l/h y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 1,0 g/l/h. Por otra parte, los
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lípidos producidos por los procedimientos de la presente invención contienen lípidos poliinsaturados en la cantidad mayor que aproximadamente 15%, preferiblemente mayor que aproximadamente 20%, más preferiblemente mayor que aproximadamente 25%, incluso más preferiblemente mayor que aproximadamente 30% y lo más preferiblemente mayor que aproximadamente 35%. Los lípidos se pueden recuperar de microorganismos secos o de los microorganismos en el medio de fermentación. En general, al menos aproximadamente 20% de los lípidos producidos por los microorganismos en los procedimientos de la presente invención son ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y/u omega-6, preferiblemente al menos aproximadamente 30% de los lípidos son ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y/u omega-6, más preferiblemente al menos aproximadamente 40% de los lípidos son ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y/u omega-6 y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 50% de los lípidos son ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y/u omega-6. Alternativamente, los procedimientos de la presente invención proporcionan un régimen de producción de ácido graso omega-3 promedio (por ej., DHA) de al menos aproximadamente 0,2 g de ácido graso omega-3 (por ej., DHA)/l/h, preferiblemente al menos aproximadamente 0,3 g de ácido graso omega-3 (por ej., DHA)/l/h, más preferiblemente al menos aproximadamente 0,4 g de ácido graso omega-3 (por ej., DHA)/l/h y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 0,5 g de ácido graso omega-3 (por ej., DHA)/l/h. Alternativamente, los procedimientos pueden proporcionar un régimen de producción de ácido graso omega-6 promedio (por ej., DPAn-6) de al menos aproximadamente 0,07 g de ácido graso omega-6 (por ej., DPAn-6)/l/h, preferiblemente al menos aproximadamente 0,1 g de ácido graso omega-6 (por ej., DPAn-6)/l/h, más preferiblemente al menos aproximadamente 0,13 g de ácido graso omega-6 (por ej., DPAn- 6)/l/h y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 0,17 g de ácido graso omega-6 (por ej., DPAn-6)/l/h. Más alternativamente, al menos aproximadamente 25% del lípido es DHA (basado en éster metílico de ácido graso total), preferiblemente al menos aproximadamente 30%, más preferiblemente al menos aproximadamente 35% y lo más preferiblemente al menos aproximadamente 40%.
Los microorganismos, lípidos extraídos de ahí, la biomasa que queda después de extracción de lípidos o combinaciones de los mismos se pueden usar directamente como un ingrediente alimenticio, tal como un ingrediente en bebidas, salsas, alimentos con base láctea (tales como leche, yogur, queso y helado) y productos horneados; suplemento nutricional (en formas de cápsula o comprimido); alimentación o suplemento alimenticio para cualquier animal cuya carne o productos son consumidos por seres humanos; suplemento alimenticio, incluyendo alimentos infantiles y leche maternizada y productos farmacéuticos (en aplicación de tratamiento directo o adjunto). El término "animal" significa cualquier organismo que pertenece al reino Animalia e incluye, sin limitación, cualquier animal del que procede carne de ave de corral, marisco, ternera, cerdo o cordero. El marisco es derivado de, sin limitación, pescado, camarones y crustáceos. El término "productos" incluye cualquier producto distinto de carne derivado de tales animales, incluyendo, sin limitación, huevos, leche u otros productos. Cuando se alimentan dichos animales, se pueden incorporar lípidos poliinsaturados a la carne, leche, huevos u otros productos de esos animales para aumentar el contenido de estos lípidos.
Ejemplos
La cepa de Schizochytrium usada en estos ejemplos produce dos ácidos polienoicos principales, DHAn-3 y DPAn-6 en la relación de en general aproximadamente 3:1 y pequeñas cantidades de otros ácidos polienoicos, tales como EPA y C20:3, en una amplia variedad de condiciones de fermentación. Así, aunque los siguientes ejemplos sólo enumeran la cantidad de DHA, se puede calcular fácilmente la cantidad de DPA(n-6) producida usando la relación ya descrita.
Ejemplo 1
Este ejemplo ilustra el efecto del contenido de oxígeno en un medio de fermentación sobre la productividad de lípidos.
Se midieron los resultados de la fermentación de Schizochytrium ATCC N° 20888 a diversos niveles de contenido de oxígeno disuelto. Los resultados se presentan en la Figura 1, donde CRA es concentración residual de azúcar y PCS es peso seco celular.
Ejemplo 2
Este ejemplo también ilustra el efecto de contenido en oxígeno bajo en el medio de fermentación sobre el contenido en DHA (% en peso seco) del producto de biomasa final.
Se realizó un experimento de tipo "a escala reducida" en matraces Erlenmeyer de 250 ml para imitar el efecto del bajo contenido de oxígeno sobre el contenido de DHA en células Schizochytrium sp., cultivadas en fermentadores a gran escala. Se cultivó Schizochytrium sp (ATCC 20888) en un medio O4-4. Este medio de cultivo consistió en lo siguiente sobre una base por litro disuelta en agua desionizada: Na2SO4 12,61 g; MgSO4-7H2O 1,2 g; KCl 0,25 g; CaCl2 0,05 g; glutamato monosódico 7,0 g; glucosa 10 g; KH2PO4 0,5 g; NaHCO3 0,1 g; extracto de levadura 0,1 g; mezcla de vitaminas 1,0 ml; metales PII 1,00 ml. La mezcla de metales PII contiene (por litro): 6,0 g de Na2AEDT, 0,29 g de FeCla^^O, 6,84 g de H3BO3, 0,86 g de MnCM^O, 0,06 g de ZnCh, 0,026 g de CoCl2'6H2O, 0,052 g de MSO4H2O, 0,002 de CuSO4'H2O y 0,005 g de Na2MoO4'2H2O. La mezcla de vitaminas contiene (por litro): 100 mg de tiamina, 0,5 mg de biotina y 0,5 mg de cianocobalamina. El pH del medio de cultivo se ajustó a 7,0 y se esterilizó
después por filtrado.
La idea detrás de este experimento a escala reducida fue cultivar las células en matraces de agitación con diferentes volúmenes de medio de cultivo en los matraces - los matraces casi llenos (por ej., 200 ml en un matraz de agitación de 250 ml) no mezclarían bien sobre una mesa oscilatoria y por lo tanto a medida que crecen las células se 5 generarían condiciones de oxígeno disuelto bajo. Por lo tanto, se establecieron 4 tratamientos en el experimento, cada uno realizado por duplicado: (1) se cargaron matraces de 250 ml con 50 ml de medio de cultivo; (2) se cargaron matraces de 250 ml con 100 ml de medio de cultivo; (3) se cargaron matraces de 250 ml con 150 ml de medio de cultivo y (4) se cargaron matraces de agitación de 250 ml con 200 ml de medio de cultivo. Cada uno de los ocho matraces se inoculó con células de un cultivo de 48 horas de Schizochytrium cultivado en medio O4-4 en las 10 condiciones del tratamiento 1 y a 28°C y 23 rad/s (220 rpm) en una mesa oscilatoria. Los ocho matraces del experimento se pusieron en una mesa oscilatoria [23 rad/s (220 rpm)] en una incubadora (28°C) y se cultivaron durante 48 horas en la oscuridad. Al final del experimento, se midieron los niveles de oxígeno disuelto (OD) en cada matraz como medidor de oxígeno disuelto YSI, (YSI Inc.), también se determinó el pH del medio de cultivo y el peso seco celular y su contenido en ácidos grasos también se midió. Los resultados del experimento se indican en líneas 15 generales en la Tabla 1.
Tabla 1. Resultados de experimento a escala reducida que examina el efecto de concentraciones bajas de oxígeno disuelto sobre el contenido en ácidos grasos altamente insaturados de cadena larga (DHA % en peso seco) de Schizochytrium sp.
- ml de medio
- FAME DHA Biomasa PH OD
- (% TFA) (% en peso seco) (g/l) Final (% sat)
- 50
- 16,5 7,4 4,2 7,4 31
- 100
- 17,0 6,5 3,9 7,2 29
- 150
- 22,4 9,2 2,7 7,0 11
- 200
- 35,9 14,5 1,8 6,9 3
20 Los resultados indican que el contenido en lípidos (como % FAME) y contenido en DHA (% en peso seco) fueron mayores para células cultivadas a niveles bajos de oxígeno disuelto - cuanto menor el nivel de oxígeno disuelto mayor el contenido en lípidos y DHA. Esto es inesperado debido a que en general se había creído que el oxígeno era necesario para formar enlaces no saturados (dobles). Es sorprendente que se formara tanto DHA a un nivel de oxígeno disuelto bajo, debido a que DHA es uno de los ácidos grasos más insaturados. Aunque la producción de 25 biomasa disminuye a medida que disminuye el nivel de oxígeno disuelto, aumenta el contenido en DHA. Por lo tanto, es ventajoso presentar una fase de crecimiento con niveles de oxígeno disuelto superiores para maximizar la formación de biomasa y disminuir después el nivel de oxígeno disuelto para maximizar la producción de ácidos grasos de cadena larga.
Ejemplo 3
30 Este ejemplo ilustra la reproducibilidad de los procedimientos de la presente invención.
Se produjeron microorganismos usando fermentadores con un volumen de trabajo nominal de 1.200 galones (4.543 l). Se concentró el caldo de fermentación resultante y se secaron los microorganismos usando un secador de tambor. Se extrajeron lípidos de alícuotas de los microorganismos resultantes y se purificaron para producir un aceite refinado, blanqueado y desodorizado. Se añadieron aproximadamente 3.000 ppm de acetato de d-1-a- 35 tocoferilo para fines de suplemento nutricional previamente a análisis del lípido.
Se realizaron nueve fermentaciones de Schizochytrium ATCC N° 20888 y los resultados se presentan en la Tabla 2. El nivel de oxígeno disuelto fue aproximadamente 8% durante las primeras 24 horas y aproximadamente 4% después.
Tabla 2. Resultados de fermentación alimentada discontinua para la producción de DHA de Schizochytrium sp.
- Entrada
- Periodo (H) Rendimiento (g/l) DHA2 (%) FAME3 (%) Productividad4
- 1
- 100,3 160,7 17,8 49,5 0,285
- 2
- 99,8 172,4 19,4 51,3 0,335
- 3
- 84,7 148,7 14,4 41,4 0,253
- 4
- 90,2 169,5 19,7 53,9 0,370
- 5
- 99,0 164,1 12,5 38,9 0,207
- 6
- 113,0 187,1 19,7 47,2 0,326
- 7
- 97,0 153,5 13,7 41,0 0,217
- 8
- 92,8 174,8 16,4 48,6 0,309
- Prom.5
- 97,1 166,4 16,7 46,5 0,288
- D.E.b
- 8,4 12,3 2,9 5,4 0,058
- CV'(%)
- 8,7 7,4 17,3 11,7 20,2
1. rendimiento real de densidad de biomasa.
2. contenido en DHA como % en peso seco celular.
3. contenido total en ácidos grasos como % en peso seco celular (medido como ésteres metílicos).
4. (gramos de DHA)/l/h.
5. promedio
6. desviación estándar
7. coeficientes de variabilidad. Los valores de los coeficientes de variabilidad por debajo de 5% indican un procedimiento que presenta excelente reproducibilidad, los valores entre 5% y 10% indican un procedimiento que presenta buena reproducibilidad y los valores entre 10% y 20% indican un procedimiento que presenta una reproducibilidad razonable.
Se alimentó jarabe de maíz hasta que el volumen en el fermentador alcanzó aproximadamente 1.200 galones (4.543 l), momento en que se detuvo la adición de jarabe de maíz. Se detuvo el procedimiento de fermentación una vez que la concentración de azúcar residual cayó por debajo de 5 g/l. El periodo típico, desde la inoculación al final, fue aproximadamente 100 horas.
5 El caldo de fermentación, es decir, el medio de fermentación, se diluyó con agua usando aproximadamente una relación 2:1 para reducir el contenido en cenizas del producto final y ayudar a mejorar la separación de fases durante la etapa de centrifugación. La pasta de células concentradas se calentó a 160° F (aproximadamente 71°C) y se secó en un secador de doble tambor Blaw Knox [(107x91 cm) (42"x36")]. Preferiblemente, sin embargo, los microorganismos se secaron directamente en un secador de tambor sin centrifugación previa.
10 El resultado de los análisis de lípidos extraídos de alícuotas de cada una de las entradas en la Tabla 2 se resume en la Tabla 3.
Tabla 3. Análisis de la biomasa microbiana producida en las fermentaciones alimentadas discontinuas señaladas en líneas generales en la Tabla 2.
- Entrada
- % DHA relativo a FAME1 Lípido Total % en peso
- 1
- 36,0 72,3
- 2
- 37,8 70,3
- 3
- 34,8 61,5
- 4
- 36,5 74,8
- 5
- 32,1 52,8
- 6
- 41,7 67,7
5
10
15
20
25
- 7
- 33,4 49,9
- 8
- 33,7 61,4
- Promedio
- 35,8 63,8
- Desviación Estándar3
- 3,0 9,1
- CV4 (%)
- 8,5 14,2
1. véase la Tabla 2.
2. véase la discusión anterior.
3. desviación estándar
4. coeficientes de variabilidad. Los valores de los coeficientes de variabilidad por debajo de 5% indican un procedimiento que presenta excelente reproducibilidad, los valores entre 5% y 10% indican un procedimiento que presenta buena reproducibilidad y los valores entre 10% y 20% indican un procedimiento que presenta una reproducibilidad razonable.
A menos que se indique de otro modo, el medio de fermentación usado por toda la sección Ejemplos incluye los siguientes ingredientes, donde el primer número indica concentración objetivo nominal y el número entre paréntesis indica intervalo aceptable: sulfato de sodio 12 g/l (11-13); KCl 0,5 g/l (0,45-0,55); MgSO4'7H2O 2 g/l (1,8-2,2); antiespumante Hodag K-60 0,35 g/l (0,3-0,4); K2SO4 0,65 g/l (0,60-0,70); KH2PO4 1 g/l (0,9-1,1); (NH4)2SO4 1 g/l (0,95-1,1); CaCl2-2H2O 0,17 g/l (0,15-0,19); jarabe de maíz 95 DE (base en sólidos) 4,5 g/l (2-10); MnCM^O 3 mg/l (2,7-3,3); ZnSO4'7H2O 3 mg/l (2,7-3,3); CoCl2'6H2O 0,04 mg/l (0,035-0,045); Na2MoO4'2H2O 0,04 mg/l (00,045); CuSO4-5H2O 2 mg/l (1,8-2,2); MSO46H2O 2 mg/l (1,8-2,2); FeSO4'7H2O 10 mg/l (9-11); tiamina 9,5 mg/l (415); vitamina B12 0,15 mg/l (0,05-0,25) y Pantotenato de Calcio 3,2 mg/l (1,3-5,1). Además, se usa disolución de NH4OH al 28% como fuente de nitrógeno.
El contenido en ceniza de los microorganismos secos es aproximadamente 6% en peso.
Ejemplo 4
Este ejemplo ilustra el efecto del nivel de oxígeno disuelto reducido en el medio de fermentación sobre la productividad de microorganismos en la escala de 14.000 galones (52.996 l).
Usando el procedimiento descrito en el Ejemplo 3, se realizó una fermentación de volumen nominal 14.000 galones (52.996 l) usando una cepa natural de Schizochytrium, que se puede obtener usando procedimientos de aislamiento descritos en las Patentes de EE.UU. N° 5.340.594 y 5.340.742 ya mencionadas. El nivel de oxígeno disuelto en el medio de fermentación fue aproximadamente 8% durante las primeras 24 horas, aproximadamente 4% desde la 24a hora a la 40a hora y aproximadamente 0,5% desde la 40a hora al final del procedimiento de fermentación. Los resultados de este nivel de oxígeno disuelto menor en procedimientos de medio de fermentación se presentan en la Tabla 4.
Tabla 4. Resultados de fermentaciones alimentadas discontinuas de escala de 14.000 galones (52.996 l) de Schizochytrium a concentraciones de oxígeno disuelto reducidas.
- Entrada
- Periodo (H) Rendimiento (g/l) % DHA % FAME % DHA rel. a FAME Productividad DHA (g de DHA/l/h)
- 1
- 82,0 179,3 21,7 52,4 41,4 0,474
- 2
- 99,0 183,1 22,3 55,0 40,5 0,412
- 3
- 72,0 159,3 - - 40,9 -
- 4
- 77,0 161,3 - - 43,2 -
- 5
- 100,0 173,0 23,9 53,3 44,9 0,413
- 6
- 102,0 183,3 21,6 50,8 42,6 0,388
- 7
- 104,0 185,1 23,7 55,0 43,1 0,422
- 8
- 88,0 179,3 22,3 52,6 42,4 0,454
- 9
- 100,0 166,4 22,5 53,5 42,1 0,374
- 10
- 97,0 182,6 22,8 51,6 44,1 0,429
- 11
- 87,5 176,5 19,8 45,6 43,5 0,399
- 12
- 67,0 170,8 18,8 48,1 39,1 0,479
- 13
- 97,0 184,9 23,2 52,7 44,0 0,442
- 14
- 102,0 181,9 23,6 52,9 44,6 0,421
- 15
- 102,0 186,9 19,9 47,8 41,8 0,365
- 16
- 97,0 184,4 19,6 45,5 43,0 0,373
- 17
- 98,0 174,7 19,7 45,1 43,7 0,351
- 18
- 103,5 178,8 18,3 44,5 41,2 0,316
- 19
- 102,0 173,7 15,8 43,1 36,7 0,269
- 20
- 94,0 190,4 19,3 46,9 41,1 0,391
- 21
- 72,0 172,5 22,8 52,8 43,2 0,546
- 22
- 75,0 173,1 21,0 51,7 40,8 0,485
- 23
- 75,0 152,7 20,3 50,3 40,4 0,413
- 24
- 75,5 172,5 21,9 51,7 42,3 0,500
- 25
- 61,0 156,4 17,3 45,7 37,8 0,444
- 26
- 74,5 150,6 20,2 50,1 40,2 0,408
- 27
- 70,5 134,3 14,8 40,6 36,6 0,282
- 28
- 75,5 146,1 21,3 49,7 42,8 0,412
- 29
- 82,0 174,3 21,4 50,4 42,5 0,455
- 30
- 105,0 182,3 21,7 50,7 42,8 0,377
- 31
- 66,0 146,2 16,4 44,6 36,7 0,363
- Prom.
- 87,2 171,5 20,6 49,5 41,6 0,409
- D.E.
- 13,9 14,1 2,4 3,8 2,3 0,061
- CV
- 16,0% 8,2% 11,6% 7,7% 5,5% 15,0%
Ejemplo 5
Este ejemplo ilustra el efecto del nivel de oxígeno disuelto reducido en el medio de fermentación sobre la productividad de los microorganismos en una escala de 41.000 galones (155.202 l).
5 Se emplearon los mismos procedimientos que en el Ejemplo 4 excepto que se realizó la fermentación en un fermentador de 41.000 galones (155.202 l). Se aumentaron los volúmenes de los medios de cultivo para mantener las concentraciones de compuestos fijadas como objetivo en esta escala. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
12
Tabla 5. Fermentación a escala de 41.000 galones (155.202 l) de Schizochytrium
- Entrada
- Periodo (H) Rendimiento (g/l) % DHA % FAME % DHA rel. a FAME Productividad DHA (g de DHA/l/h)
- 1
- 75,0 116,1 17,3 46,1 37,4 0,268
- 2
- 99,0 159,3 17,4 47,0 37,1 0,280
- 3
- 103,0 152,6 16,0 47,2 33,8 0,237
- 4
- 68,0 136,8 17,9 45,9 39,1 0,360
- 5
- 84,0 142,0 17,5 47,0 37,2 0,296
- Prom.
- 85,8 141,4 17,2 46,6 36,9 0,288
- D.E.
- 15,1 16,6 0,7 0,6 1,9 0,046
- CV
- 17,5% 11,8 4,2% 1,3% 5,2% 15,8%
Ejemplo 6
Este ejemplo ilustra el efecto de nitrógeno extra sobre el procedimiento de fermentación de la presente invención.
5 Se realizaron cuatro series de experimentos alimentados discontinuos a escala de 250 l usando un procedimiento similar al del Ejemplo 4. Se realizaron dos experimentos de control y dos experimentos conteniendo amoníaco extra (x1,15 y x1,25 la cantidad normal). Los resultados se presentan en la Tabla 6.
Tabla 6. Efectos de amoníaco extra sobre la fermentación de Schizochytrium.
- Periodo (H)
- Rendimiento (g/l) Productividad Biomasa Eficacia conversión Contenido DHA Contenido FAME Productividad DHA
- Objetivo de azúcar: 7 g/l, Valor de ajuste pH alcalino: 5,5, Valor de ajuste pH ácido: 7,3, NH3 x1,0
- 48
- 178 3,71 g/l/h 51,5% 10,7% 37,8% 0,40 g/l/h
- 60
- 185 3,08 g/l/h 46,9% 16,3% 47,2% 0,50 g/l/h
- 72
- 205 2,85 g/l/h 45,2% 17,4% 47,4% 0,50 g/l/h
- 84
- 219 2,61 g/l/h 43,8% 17,1% 45,5% 0,45 g/l/h
- 90
- 221 2,46 g/l/h 44,1% 18,4% 48,9% 0,45 g/l/h
- Objetivo de azúcar: 7 g/l, Valor de ajuste pH alcalino: 5,5, Valor de ajuste pH ácido: 7,3, NH3x1,15
- 48
- 171 3,56 g/l/h 55,6% 12,0% 36,3% 0,43 g/l/h
- 60
- 197 3,28 g/l/h 54,6% 9,4% 38,4% 0,31 g/l/h
- 72
- 191 2,65 g/l/h 52,8% 9,4% 40,0% 0,25 g/l/h
(continuación)
- Periodo (H)
- Rendimiento (g/l) Productividad Biomasa Eficacia conversión Contenido DHA Contenido FAME Productividad DHA
- 84
- 190 2,26 g/l/h 52,5% 10,0% 42,5% 0,23 g/l/h
- 90
- 189 2,10 g/l/h 52,2% 9,2% 43,3% 0,19 g/l/h
- Objetivo de azúcar: 7 g/l, Valor de ajuste pH alcalino: 5,5, Valor de ajuste pH ácido: 7,3, NH3 x1,25
- 48
- 178 3,71 g/l/h 56,4% 11,5% 33,7% 0,43 g/l/h
- 60
- 179 2,98 g/l/h 48,6% 10,3% 36,0% 0,31 g/l/h
- 72
- 180 2,50 g/l/h 48,8% 12,0% 37,6% 0,30 g/l/h
- 84
- 181 2,15 g/l/h 46,1% 13,6% 40,1% 0,29 g/l/h
- 90
- 185 2,06 g/l/h 45,7% 12,6% 40,7% 0,26 g/l/h
- Objetivo de azúcar: 7 g/l, Valor de ajuste pH alcalino: 5,5, Valor de ajuste pH ácido: 7,3, NH3 x1,0
- 48
- 158 3,29 g/l/h 55,7% 13,1% 36,5% 0,43 g/l/h
- 60
- 174 2,90 g/l/h 48,9% 17,9% 39,2% 0,52 g/l/h
- 72
- 189 2,63 g/l/h 45,7% 21,0% 39,4% 0,55 g/l/h
- 84
- 196 2,33 g/l/h 44,1% 22,4% 40,1% 0,52 g/l/h
- 90
- 206 2,29 g/l/h 44,8% 22,1% 40,3% 0,51 g/l/h
5
10
- Periodo (h)
- Rendimiento (g/l) Productividad Biomasa Eficacia Conversión Contenido % DHA Contenido % FAME Productividad DHA
- 24
- 118 4,92 g/l/h 78,2% 7,4 18,8 0,36 g/l/h
- 30
- 138 4,60 g/l/h 60,3% 10,6 30,9 0,49 g/l/h
- 36
- 138 3,83 g/l/h 46,6% 11,6 36,5 0,44 g/l/h
- 42
- 175 4,17 g/l/h 49,8% 13,4 41,7 0,56 g/l/h
- 48
- 178 3,71 g/l/h 45,1% 18,7 52,8 0,69 g/l/h
- * OO
- 164 3,42 g/l/h 41,5% 15,3 33,1 0,52 g/l/h
- 54
- 196 3,63 g/l/h 45,7% 16,6 51,2 0,60 g/l/h
- 60
- 190 3,17 g/l/h 41,7% 16,9 33,9 0,54 g/l/h
- 72
- 189 2,62 g/l/h 39,1% 15,6 31,8 0,41 g/l/h
- 84
- 195 2,32 g/l/h 38,5% 16,4 32,7 0,38 g/l/h
En general, el nitrógeno extra presenta un efecto negativo sobre la realización de fermentación, ya que se observaron reducciones significativas en la productividad de DHA para los dos lotes en los que se añadió amoníaco extra. Como se muestra en la Tabla 6, los lotes de control dieron como resultado niveles finales de DHA de 18,4% y 22,1% del peso seco celular total frente al 9,2% (amoníaco x1,15) y 12,6% (amoníaco x1,25) para lotes enriquecidos en nitrógeno extra.
Ejemplo 7
Este ejemplo muestra un perfil cinético de un procedimiento de fermentación de la presente invención.
Se realizó un experimento alimentado discontinuo a escala de 1.000 galones (3.785 l) usando un procedimiento similar al del Ejemplo 4. El perfil cinético del procedimiento de fermentación se muestra en la Tabla 7.
Tabla 7. Perfil cinético para una fermentación Alimentada Discontinua a escala de 1.000 galones (3.785 l) de Schizochytrium.
5
10
15
20
25
30
35
- 90
- 200 2,22 g/l/h 39,0% 18,8 33,3 0,42 g/l/h
- 90
- 171 1,90 g/l/h 33,3% 22,2 61,6 0,42 g/l/h **
* Se analizaron dos muestras separadas a las 48 horas.
** Esto es para una muestra de pesos secos celulares lavadas (PCS). Otros valores indicados son para muestras no lavadas.
Ejemplo 8
Este ejemplo ilustra el efecto de la cantidad de fuente de carbono sobre la productividad.
Se realizaron tres procedimientos de fermentación diferentes usando el procedimiento del Ejemplo 4 usando diversas cantidades de fuente de carbono. Los resultados se muestran en la Tabla 8.
Tabla 8. Resultados de la fermentación para diversas cantidades de fuente de carbono sobre la fermentación de Schizochytrium.
- Periodo (h)
- Rendimiento (g/l) Carga de Carbono Eficacia Conversión Contenido % DHA Contenido % FAME Productividad (g/l/h)
- 90
- 171 51,3% 33,3% 22,2 61,6 0,42
- 94
- 122 40,5% 30,1% 19,1 57,3 0,25
- 59
- 73 20,0% 36,5% 11,9 40,8 0,15
Ejemplo 9
Este ejemplo ilustra el efecto de la limitación de nutriente sobre la eficacia de conversión de carbono en biomasa, lípido y lo más específicamente DHA.
Se realizó un experimento de cultivo continuo para investigar el efecto de la limitación de nutriente cultivando Schizochytrium ATCC N° 20888 en un fermentador Applikon de 2 l de volumen en medio de crecimiento basal (ICM- 2) que consistía en los siguientes compuestos (concentración nominal): ingredientes del Grupo I: Na2SO4 (18,54 g/l), MgSO4'7H2O (2,0 g/l) y KCl (0,572 g/l); ingredientes del Grupo II (cada uno preparado por separado): glucosa (43,81 g/l), KH2PO4 (1,28 g/l), CaCl2'2H2O (0,025 g/l) y (NH4)2SO4 (6,538 g/l); ingredientes del Grupo III: Na2AEDT (6,0 mg/l), FeCla-6H2O (0,29 mg/l), H3BO3 (6,84 mg/l), MnCM^O (0,86 mg/l), ZnSO4'7H2O (0,237 mg/l), CoCl2'2H2O (0,026 mg/l), Na2MoO4'2H2O (0,005 mg/l), CuSO4'5H2O (0,002 mg/l) y MSO46H2O (0,052 mg/l) e ingredientes del Grupo IV: tiamina HCl (0,2 mg/l), Vitamina B12 (0,005 mg/l), Pantotenato de calcio (0,2 mg/l). Los Grupos I y II fueron esterilizados en autoclave, mientras que los Grupos III y IV se esterilizaron por filtración previamente a la adición al fermentador. El medio de cultivo se inoculó después con Schizochytrium y se cultivó en condiciones controladas de 30°C, pH 5,5 y oxígeno disuelto de 20% de saturación hasta que se consiguió una densidad de células máxima.
Después se estableció un modo de operación continuo bombeando simultáneamente medio de alimentación ICM-2 estéril al fermentador y retirando el caldo conteniendo células de Schizochytrium a un caudal suficiente para mantener una velocidad de dilución de 0,06 h-1, hasta que se consiguió un estado estacionario. Para investigar el efecto de limitación de nutriente, se disminuyó el compuesto que contenía el nutriente requerido especificado en el medio de alimentación ICM-2 de manera que se agotara este nutriente en el caldo que contenía células de salida, de manera que el crecimiento de las células estuviera limitado por ausencia del nutriente requerido particular. Una vez que se estableció la operación de estado estacionario para cada condición, se midieron las concentraciones de biomasa seca del caldo, glucosa residual y nutriente limitante, el contenido en lípidos de la célula y el contenido en DHA de las células. La eficacia de conversión de glucosa en biomasa se calculó dividiendo la glucosa total consumida por la biomasa seca total formada y se expresó sobre una base en porcentaje.
Los efectos de crecimiento limitante por cada nutriente individual se estudiaron repitiendo este experimento para cada nutriente individual enumerado en la tabla siguiente. Los resultados finales se resumen en la tabla siguiente:
Tabla 9. Efecto de limitación de nutriente sobre el rendimiento de biomasa, eficacia de conversión (glucosa -> biomasa), contenido en lípidos y contenido en DHA de Schizochytrium sp.
- Nutriente Limitante
- Biomasa1 (g/l) Yx/s2 CRA3 (g/l) Contenido en Lípidos4 (%) Contenido en DHA5 (%)
- Glucosa
- 18,7 46,8 0,0 19,8 7,3
- Nitrógeno
- 14,5 36,3 0,6 47,5 10,3
- Fosfato
- 17,8 44,5 0,8 37,0 8,2
- Tiamina
- 7,5 18,8 7,7 11,1 4,0
- Cinc
- 16,0 40,0 1,3 27,8 7,2
- Cobre
- 14,0 35,0 10,4 13,8 5,3
- Cobalto
- 14,5 36,3 0,0 22,2 6,9
- Níquel
- 17,8 44,5 0,0 21,9 8,0
- Hierro
- 15,9 39,8 3,5 18,5 7,2
- Manganeso
- 12,5 31,3 3,4 26,1 8,0
- Magnesio
- 13,9 34,8 5,3 18,7 6,4
- Calcio
- 16,7 41,8 4,3 18,7 6,4
- Vitamina B12
- 19,6 49,0 0,0 17,5 6,3
- Molibdeno
- 18,9 47,3 0,0 19,3 7,0
- Pantotenato
- 19,2 48,0 0,0 20,4 6,7
- Sodio
- 17,9 44,8 1,8 21,8 8,2
- Potasio
- 13,0 32,5 8,8 14,1 5,3
1. concentración de biomasa seca (gramos/litro)
2. coeficiente de rendimiento (% biomasa producida/glucosa consumida)
3. concentración en glucosa residual en caldo (gramos/litro)
4. contenido en lípidos de biomasa seca (g de lípido (como FAME)/g de biomasa seca)
5. contenido en DHA de biomasa seca (g de DHA/g de biomasa seca)
Es evidente a partir de la tabla que la limitación de nitrógeno dio como resultado la más alta acumulación de DHA en las células, seguido por fosfato, sodio, níquel, manganeso, glucosa (carbono), cinc e hierro. Esta información se puede emplear comercialmente por alimentación de uno o más de estos nutrientes a una fermentación discontinua a una velocidad suficiente para limitar el crecimiento de las células. En el caso más preferido, se alimenta nitrógeno de 5 una manera limitante a la fermentación discontinua para maximizar el contenido en DHA de las células. Otros nutrientes (o mezclas de los mismos) se pueden alimentar de una manera limitante para maximizar la producción de biomasa u otros productos valiosos. Otros elementos o nutrientes requeridos biológicamente que no se evaluaron, tales como azufre, también se podían emplear como nutrientes limitantes en esta estrategia de control de la fermentación.
10 Ahora se describirán varias características y realizaciones preferidas con referencia a los siguientes párrafos (párr.) numerados.
1. Un procedimiento para producir lípidos que contienen ácidos grasos polienoicos a partir de microorganismos eucariotas capaces de producir al menos aproximadamente 20% de su biomasa como lípidos, que comprende añadir a un medio de fermentación que comprende dichos microorganismos una fuente de carbono no alcohol y una
15 fuente de nutriente limitante a una velocidad suficiente para aumentar la densidad de biomasa de dicho medio de fermentación a al menos aproximadamente 100 g/l.
2. El procedimiento del párrafo 1, en el que dicho procedimiento comprende una fase de aumento de la densidad de
biomasa y una fase de producción, en el que dicha fase de aumento de la densidad de biomasa comprende añadir
5
10
15
20
25
30
35
40
45
dicha fuente de carbono y dicha fuente de nutriente limitante y dicha fase de producción comprende añadir dicha fuente de carbono sin nada o con poco de dicha fuente de nutriente limitante adicional para inducir condiciones limitantes de nutriente que induzcan la producción de lípidos.
3. El procedimiento del párrafo 2, en el que la cantidad de oxígeno disuelto presente en dicho medio de fermentación durante dicha fase de producción es menor que la cantidad de oxígeno disuelto presente en dicho medio de fermentación durante dicha fase de aumento de la densidad de biomasa.
4. El procedimiento del párrafo 3, en el que la cantidad de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante dicha fase de aumento de la densidad de biomasa es al menos aproximadamente 4%.
5. El procedimiento del párrafo 4, en el que la cantidad de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante dicha fase de producción es menor que aproximadamente 1%.
6. El procedimiento del párrafo 1, en el que dicha fuente de carbono no alcohol comprende un carbohidrato.
7. El procedimiento del párrafo 1, en el que dicha fuente de nutriente limitante se selecciona del grupo que consiste en: fuentes de nitrógeno, fuentes de carbono, fuentes de fosfato, fuentes de vitaminas (tales como fuentes de vitamina B12, fuentes de pantotenato, fuentes de tiamina), fuentes de metales traza (tales como fuentes de cinc, fuentes de cobre, fuentes de cobalto, fuentes de níquel, fuentes de hierro, fuentes de manganeso, fuentes de molibdeno) y fuentes de metales principales (tales como fuentes de magnesio, fuentes de calcio, fuentes de sodio, fuentes de potasio), fuentes de sílice y mezclas de los mismos.
8. El procedimiento del párrafo 7, en el que dichas fuentes de metales traza y fuentes de metales principales se seleccionan del grupo que consiste en sales de sulfato y cloruro de estos metales (tales como MgSÜ4-7H2O; MnCl2-4H2O; ZnSO4'7H2O; CoCl2'6H2O; Na2MoO4'2H2O; CuSO4'5H2O; MSO46H2O; FeSO4'7H2O; CaCh; K2SO4; KCl y Na2SO4) y mezclas de los mismos.
9. El procedimiento del párrafo 1, en el que dicha fuente de nutriente limitante comprende una fuente de nitrógeno.
10. El procedimiento del párrafo 9, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende una sal de amonio inorgánica.
11. El procedimiento del párrafo 9, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende hidróxido de amonio.
12. El procedimiento del párrafo 10, en el que el pH del medio de fermentación se controla por dicha fuente de nutriente limitante.
13. El procedimiento del párrafo 1, en el que dicho medio de fermentación está a una temperatura de al menos aproximadamente 20°C.
14. El procedimiento del párrafo 1, en el que dicho procedimiento produce lípidos a una velocidad promedio de al menos aproximadamente 0,5 g/l/h.
15. El procedimiento del párrafo 14, en el que al menos aproximadamente el 15% de dichos lípidos son lípidos poliinsaturados.
16. El procedimiento del párrafo 14, en el que la cantidad total de ácidos grasos omega-3 y omega-6 es al menos aproximadamente el 20% de dichos lípidos.
17. El procedimiento del párrafo 14, en el que al menos aproximadamente 25% de dichos lípidos es ácido docosahexaenoico.
18. El procedimiento del párrafo 1, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: algas; hongos (incluyendo levaduras), protistas, bacterias y mezclas de los mismos, en el que dichos microorganismos son capaces de producir ácidos grasos polienoicos u otros lípidos que en general se había creído que requerían oxígeno para su síntesis.
19. El procedimiento del párrafo 18, en el que dichos microorganismos son capaces de producir lípidos a un nivel de oxígeno del medio de fermentación de aproximadamente menos del 3% de saturación.
20. El procedimiento del párrafo 18, en el que dichos microorganismos se cultivan en un procedimiento de alimentación discontinua.
21. El procedimiento del párrafo 20, que comprende además mantener un nivel de oxígeno menor que aproximadamente el 3% de saturación en dicho medio de fermentación durante la fase de producción de dicho procedimiento de fermentación.
22. El procedimiento del párrafo 1, en el que dichos microorganismos son microalgas y microorganismos de tipo alga.
5
10
15
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35
40
45
23. El procedimiento del párrafo 1, en el que dichos microorganismos son Stramenopiles.
24. El procedimiento del párrafo 1, en el que dichos microorganismos son del orden Thraustochytriales.
25. El procedimiento del párrafo 1, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: Thraustochytrium, Schizochytrium y mezclas de los mismos.
26. Un procedimiento para cultivar microorganismos eucariotas capaces de producir al menos aproximadamente el 20% de su biomasa como lípidos, comprendiendo dicho procedimiento añadir a un medio de fermentación que comprende dichos microorganismos una fuente de carbono y una fuente de nutriente limitante a una velocidad suficiente para aumentar la densidad de biomasa de dicho medio de fermentación a al menos aproximadamente 100 g/l, en el que dicho procedimiento produce al menos una velocidad promedio de aproximadamente 0,5 g/l/h de lípidos y en el que al menos aproximadamente el 15% de los lípidos totales producidos por dichos microorganismos son lípidos poliinsaturados.
27. El procedimiento del párrafo 26, en el que dicho procedimiento comprende además:
(a) una fase de aumento de la densidad de biomasa, en la que el nivel de oxígeno disuelto en el medio de fermentación es al menos aproximadamente 4% y
(b) una fase de alta producción de lípidos, en la que el nivel de oxígeno disuelto en el medio de fermentación es menor que aproximadamente el 1%.
28. El procedimiento del párrafo 26, en el que dicha fuente de carbono es una fuente de carbono no alcohol.
29. El procedimiento del párrafo 26, en el que dicha fuente de nutriente limitante se selecciona del grupo que consiste en: fuentes de nitrógeno, fuentes de carbono, fuentes de fosfato, fuentes de vitaminas (tales como fuentes de vitamina B12, fuentes de pantotenato, fuentes de tiamina), fuentes de metales traza (tales como fuentes de cinc, fuentes de cobre, fuentes de cobalto, fuentes de níquel, fuentes de hierro, fuentes de manganeso, fuentes de molibdeno) y fuentes de metales principales (tales como fuentes de magnesio, fuentes de calcio, fuentes de sodio, fuentes de potasio) y fuentes de sílice y mezclas de los mismos.
30. El procedimiento del párrafo 29, en el que dichas fuentes de metales traza y fuentes de metales principales se seleccionan del grupo que consiste en sales de sulfato y cloruro de estos metales (tales como MgSÜ4-7H2O; MnCl2-4H2O; ZnSO4'7H2O; CoCl2'6H2O; Na2MoO4'2H2O; CuSO4'5H2O; MSO46H2O; FeSO4'7H2O; CaCh; K2SO4; KCl y Na2SO4) y mezclas de los mismos.
31. El procedimiento del párrafo 26, en el que dicha fuente de nutriente limitante comprende una fuente de nitrógeno.
32. El procedimiento del párrafo 31, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende una sal de amonio inorgánica.
33. El procedimiento del párrafo 26, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: algas, hongos (incluyendo levadura), protistas, bacterias y mezclas de los mismos,
en el que dichos microorganismos son capaces de producir ácidos grasos polienoicos u otros lípidos que en general se había creído que requerían oxígeno para su síntesis.
34. El procedimiento del párrafo 26, en el que dichos microorganismos son Stramenopiles.
35. El procedimiento del párrafo 26, en el que dichos microorganismos son microalgas.
36. El procedimiento del párrafo 26, en el que dichos microorganismos son del orden Thraustochytriales.
37. El procedimiento del párrafo 26, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: Thraustochytrium, Schizochytrium y mezclas de los mismos.
38. El procedimiento del párrafo 26, en el que la cantidad total de ácidos grasos omega-3 y omega-6 es al menos aproximadamente el 20 % de dichos lípidos.
39. El procedimiento del párrafo 26, en el que al menos aproximadamente el 25 % de dichos lípidos es ácido docosahexaenoico.
40. Un procedimiento para cultivar microorganismos eucariotas que comprende añadir a un medio de fermentación que comprende dichos microorganismos una fuente de carbono y una fuente de nutriente limitante a una velocidad suficiente para aumentar la densidad de biomasa de dicho medio de fermentación a al menos aproximadamente 100 g/l, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: algas, hongos (incluyendo levadura), protistas, bacterias y mezclas de los mismos, y en el que dichos microorganismos son capaces de producir al menos aproximadamente el 20% de su biomasa como lípidos comprendiendo algunos ácidos grasos polienoicos.
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41. El procedimiento del párrafo 40, en el que dicho procedimiento produce lípidos microbianos a una velocidad promedio de al menos aproximadamente 0,5 g/l/h.
42. El procedimiento del párrafo 41, en el que más de aproximadamente el 15% de dichos lípidos son lípidos poliinsaturados.
43. El procedimiento del párrafo 41, en el que la cantidad total de ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y omega-6 son al menos aproximadamente el 20% de dichos lípidos.
44. El procedimiento del párrafo 41, en el que al menos aproximadamente el 25% de dichos lípidos es ácido docosahexaenoico.
45. El procedimiento del párrafo 40, en el que dicho procedimiento produce de promedio al menos aproximadamente 0,2 g/l/h de ácido docosahexaenoico.
46. El procedimiento del párrafo 40, en el que dicha fuente de carbono no es un alcohol.
47. El procedimiento del párrafo 46, en el que dicha fuente de carbono es un carbohidrato.
48. El procedimiento del párrafo 40, en el que dicha fuente de nutriente limitante se selecciona del grupo que consiste en: fuentes de nitrógeno, fuentes de carbono, fuentes de fosfato, fuentes de vitaminas (tales como fuentes de vitamina B12, fuentes de pantotenato, fuentes de tiamina), fuentes de metales traza (tales como fuentes de cinc, fuentes de cobre, fuentes de cobalto, fuentes de níquel, fuentes de hierro, fuentes de manganeso, fuentes de molibdeno) y fuentes de metales principales (tales como fuentes de magnesio, fuentes de calcio, fuentes de sodio, fuentes de potasio), fuentes de sílice y mezclas de los mismos.
49. El procedimiento del párrafo 48, en el que dichas fuentes de metales traza y fuentes de metales principales se
seleccionan del grupo que consiste en sales de sulfato y cloruro de estos metales (tales como MgSÜ4-7H2O;
MnCl2-4H2O; ZnSO4'7H2O; CoCl2'6H2O; Na2MoO4'2H2O; CuSO4'5H2O; MSO46H2O; FeSO4'7H2O; CaCh; K2SO4;
KCl y Na2SO4) y mezclas de los mismos.
50. El procedimiento del párrafo 40, en el que dichas fuentes de nutriente limitante comprenden una fuente de nitrógeno.
51. El procedimiento del párrafo 50, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende una sal de amonio inorgánica.
52. El procedimiento del párrafo 40, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende hidróxido de amonio.
53. El procedimiento del párrafo 40, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: algas, hongos (incluyendo levadura), protistas, bacterias y mezclas de los mismos, en el que dichos microorganismos son capaces de producir ácidos grasos polienoicos u otros lípidos que en general se había creído que requerían oxígeno para su síntesis.
54. El procedimiento del párrafo 40, en el que dichos microorganismos son microalgas y microorganismos de tipo alga.
55. El procedimiento del párrafo 40, en el que dichos microorganismos son Stramenopiles.
56. Un procedimiento para producir lípidos microbianos eucariotas que comprende:
(a) cultivar microorganismos eucariotas en un medio de fermentación para aumentar la densidad de biomasa de dicho medio de fermentación a al menos aproximadamente 100 g/l;
(b) proporcionar condiciones de fermentación suficientes para permitir que dichos microorganismos produzcan dichos lípidos y
(c) recuperar dichos lípidos, en el que más de aproximadamente el 15% de dichos lípidos son lípidos poliinsaturados.
57. El procedimiento del párrafo 56, en el que un nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante dicha etapa de crecimiento de microorganismos es mayor que el nivel de oxígeno disuelto en el medio de fermentación durante dicha etapa de producción de lípidos.
58. El procedimiento del párrafo 56, en el que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante la etapa de crecimiento de los microorganismos es al menos aproximadamente el 4%.
59. El procedimiento del párrafo 56, en el que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante la etapa de producción de lípidos es menor que aproximadamente el 1%.
60. El procedimiento del párrafo 56, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: algas, hongos (incluyendo levadura), protistas, bacterias y mezclas de los mismos, en el que dichos
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microorganismos son capaces de producir ácidos grasos polienoicos u otros lípidos que en general se había creído que requerían oxígeno para su síntesis.
61. El procedimiento del párrafo 56, en el que dichos microorganismos son Stramenopiles.
62. El procedimiento del párrafo 56, en el que dichos microorganismos son microalgas y microorganismos de tipo alga.
63. El procedimiento del párrafo 56, en el que dichos microorganismos son del orden Thraustochytriales.
64. El procedimiento del párrafo 56, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: Thraustochytrium, Schizochytrium y mezclas de los mismos.
65. El procedimiento del párrafo 56, en el que la cantidad total de ácidos grasos omega-3 y omega-6 es al menos aproximadamente el 20% de dichos lípidos microbianos.
66. El procedimiento del párrafo 56, en el que al menos aproximadamente el 25% de dichos lípidos microbianos es ácido docosahexaenoico.
67. El procedimiento del párrafo 56, en el que dicho procedimiento produce ácido docosahexaenoico a una velocidad promedio de al menos aproximadamente 0,2 g/l/h.
68. El procedimiento del párrafo 56, en el que dicha etapa de recuperación de lípidos comprende:
(d) retirar agua de dicho medio de fermentación para proporcionar microorganismos secos y
(e) aislar dichos lípidos de dichos microorganismos secos.
69. El procedimiento del párrafo 68, en el que dicha etapa de eliminación de agua comprende poner en contacto dicho medio de fermentación directamente en un secador de tambor sin centrifugación previa.
70. El procedimiento del párrafo 56, en el que dicha etapa de recuperación de lípidos comprende:
(d) tratar el caldo de fermentación para permeabilizar, lisar o romper las células microbianas y
(e) recuperar los lípidos del caldo de fermentación por separación por gravedad con o sin la ayuda de un agente para ayudar a la ruptura de la emulsión lípido/agua.
71. El procedimiento del párrafo 70, en el que dichas células microbianas se tratan en la etapa (d) en un fermentador o un recipiente similar.
72. El procedimiento del párrafo 70, en el que dicha separación por gravedad comprende centrifugación.
73. El procedimiento del párrafo 56, en el que dicha etapa de crecimiento de microorganismos comprende añadir una fuente de carbono y una fuente de nutriente limitante.
74. El procedimiento del párrafo 73, en el que dicha fuente de carbono no es alcohol.
75. El procedimiento del párrafo 74, en el que dicha fuente de carbono comprende un carbohidrato.
76. El procedimiento del párrafo 73, en el que dicha fuente de nutriente limitante se selecciona del grupo que consiste en: fuentes de nitrógeno, fuentes de carbono, fuentes de fosfato, fuentes de vitaminas (tales como fuentes de vitamina B12, fuentes de pantotenato, fuentes de tiamina), fuentes de metales traza (tales como fuentes de cinc, fuentes de cobre, fuentes de cobalto, fuentes de níquel, fuentes de hierro, fuentes de manganeso, fuentes de molibdeno) y fuentes de metales principales (tales como fuentes de magnesio, fuentes de calcio, fuentes de sodio, fuentes de potasio), fuentes de sílice y mezclas de los mismos.
77. El procedimiento del párrafo 76, en el que dichas fuentes de metales traza y fuentes de metales principales se
seleccionan del grupo que consiste en sales de sulfato y cloruro de estos metales (tales como MgSO4-7H2O;
MnCl2-4H2O; ZnSO4-7H2O; CoCl2-6H2O; Na2MoO4-2H2O; CuSO4-5H2O; MSO46H2O; FeSO4-7H2O; CaCh; K2SO4;
KCl y Na2SO4) y mezclas de los mismos.
78. El procedimiento del párrafo 73, en el que dicha fuente de nutriente limitante comprende una fuente de nitrógeno.
79. El procedimiento del párrafo 78, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende una sal de amonio inorgánica.
80. El procedimiento del párrafo 78, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende hidróxido de amonio.
81. Un procedimiento para producir lípidos microbianos eucariotas que comprende:
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(a) añadir una fuente de carbono no alcohol y una fuente de nutriente limitante a un medio de fermentación que comprende dichos microorganismos;
(b) proporcionar condiciones suficientes para que dichos microorganismos produzcan dichos lípidos microbianos y
(c) recuperar dichos lípidos microbianos,
en el que al menos aproximadamente el 15% de dichos lípidos microbianos son lípidos poliinsaturados.
82. El procedimiento del párrafo 81, en el que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante una etapa de aumento de densidad de biomasa es mayor que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante una etapa de producción de lípidos.
83. El procedimiento del párrafo 81, en el que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante una etapa de aumento de densidad de biomasa es al menos aproximadamente 4%.
84. El procedimiento del párrafo 81, en el que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante una etapa de producción de lípidos es aproximadamente 1% o menor.
85. El procedimiento del párrafo 81, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: algas, hongos (incluyendo levadura), protistas, bacterias y mezclas de los mismos.
86. El procedimiento del párrafo 81, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: algas, hongos (incluyendo levadura), protistas, bacterias y mezclas de los mismos, en el que dichos microorganismos son capaces de producir ácidos grasos polienoicos u otros lípidos que en general se había creído que requerían oxígeno para su síntesis.
87. El procedimiento del párrafo 81, en el que dichos microorganismos son Stramenopiles.
88. El procedimiento del párrafo 81, en el que dichos microorganismos son microalgas y microorganismos de tipo alga.
89. El procedimiento del párrafo 81, en el que dichos microorganismos son del orden Thraustochytriales.
90. El procedimiento del párrafo 81, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: Thraustochytrium, Schizochytrium y mezclas de los mismos.
91. El procedimiento del párrafo 81, en el que dicho procedimiento produce dichos lípidos microbianos a una velocidad promedio de al menos aproximadamente 0,5 g/l/h.
92. El procedimiento del párrafo 91, en el que la cantidad total de ácidos grasos omega-3 y omega-6 es al menos aproximadamente el 20% de dichos lípidos microbianos.
93. El procedimiento del párrafo 81, en el que al menos aproximadamente el 25% de dichos lípidos es ácido docosahexaenoico.
94. El procedimiento del párrafo 81, en el que dicho procedimiento produce ácido docosahexaenoico a una velocidad promedio de al menos aproximadamente 0,2 g/l/h.
95. El procedimiento del párrafo 58, en el que dicha etapa de recuperación de lípidos comprende:
(d) retirar agua de dicho medio de fermentación para proporcionar microorganismos secos y
(e) aislar dichos lípidos de dichos microorganismos secos.
96. El procedimiento del párrafo 95, en el que dicha etapa de eliminación de agua comprende evaporar agua de dicho medio de fermentación sin centrifugación previa.
97. El procedimiento del párrafo 81, en el que dicha etapa de recuperación de lípidos comprende:
(d) tratar el caldo de fermentación para permeabilizar, lisar o romper las células microbianas y
(e) recuperar los lípidos del caldo de fermentación por separación por gravedad con o sin la ayuda de un agente para ayudar a la ruptura de la emulsión lípido/agua.
98. El procedimiento del párrafo 97, en el que dichas células microbianas se tratan en la etapa (d) en un fermentador o un recipiente similar.
99. El procedimiento del párrafo 97, en el que dicha separación por gravedad comprende centrifugación.
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100. El procedimiento del párrafo 81, en el que dicha fuente de carbono no alcohol comprende un carbohidrato.
101. El procedimiento del párrafo 81, en el que dicha fuente de nutriente limitante se selecciona del grupo que consiste en: fuentes de nitrógeno, fuentes de carbono, fuentes de fosfato, fuentes de vitaminas (tales como fuentes de vitamina B12, fuentes de pantotenato, fuentes de tiamina), fuentes de metales traza (tales como fuentes de cinc, fuentes de cobre, fuentes de cobalto, fuentes de níquel, fuentes de hierro, fuentes de manganeso, fuentes de molibdeno) y fuentes de metales principales (tales como fuentes de magnesio, fuentes de calcio, fuentes de sodio, fuentes de potasio), fuentes de sílice y mezclas de los mismos.
102. El procedimiento del párrafo 101, en el que dichas fuentes de metales traza y fuentes de metales principales se seleccionan del grupo que consiste en sales de sulfato y cloruro de estos metales (tales como MgSO4-7H2O; MnCl2-4H2O; ZnSO4'7H2O; CoCl2'6H2O; Na2MoO4'2H2O; CuSO4'5H2O; MSO46H2O; FeSO4'7H2O; CaCh; K2SO4; KCl y Na2SO4) y mezclas de los mismos.
103. El procedimiento del párrafo 81, en el que dicha fuente de nutriente limitante comprende una fuente de nitrógeno.
104. El procedimiento del párrafo 103, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende una sal de amonio inorgánica.
105. El procedimiento del párrafo 103, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende hidróxido de amonio.
106. Un procedimiento para producir lípidos microbianos eucariotas que comprende:
(a) añadir una fuente de carbono y una fuente de nutriente limitante a un medio de fermentación que comprende microorganismos eucariotas y proporcionar condiciones suficientes para mantener un nivel de oxígeno disuelto de al menos aproximadamente 4% en dicho medio de fermentación para producir una densidad de biomasa de al menos aproximadamente 100 g/l;
(b) proporcionar condiciones suficientes para mantener un nivel de oxígeno disuelto de aproximadamente 1% o menor en dicho medio de fermentación y proporcionar condiciones suficientes para permitir que dichos microorganismos produzcan dichos lípidos y
(c) recuperar dichos lípidos microbianos,
en el que al menos aproximadamente el 15% de dichos lípidos microbianos son lípidos poliinsaturados.
107. El procedimiento del párrafo 106, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en: algas, hongos (incluyendo levadura), protistas, bacterias y mezclas de los mismos.
108. El procedimiento del párrafo 106, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en:
algas, hongos (incluyendo levadura), protistas, bacterias y mezclas de los mismos, en el que dichos
microorganismos son capaces de producir ácidos grasos polienoicos u otros lípidos que en general se había creído que requerían oxígeno para su síntesis.
109. El procedimiento del párrafo 106, en el que dichos microorganismos son Stramenopiles.
110. El procedimiento del párrafo 106, en el que dichos microorganismos son microalgas y microorganismos de tipo alga.
111. El procedimiento del párrafo 106, en el que dichos microorganismos son del orden Thraustochytriales.
112. El procedimiento del párrafo 106, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en:
Thraustochytrium, Schizochytrium y mezclas de los mismos.
113. El procedimiento del párrafo 106, en el que al menos aproximadamente el 20% de dichos lípidos microbianos son ácidos grasos omega-3 y omega-6.
114. El procedimiento del párrafo 106, en el que al menos aproximadamente el 25% de dichos lípidos microbianos es ácido docosahexaenoico.
115. El procedimiento del párrafo 106, en el que dicho procedimiento produce ácido docosahexaenoico a una velocidad promedio de al menos aproximadamente 0,2 g/l/h.
116. El procedimiento del párrafo 106, en el que la etapa de recuperación de lípidos comprende:
(d) retirar agua de dicho medio de fermentación para proporcionar microorganismos secos y
(e) aislar dichos lípidos de dichos microorganismos secos.
117. El procedimiento del párrafo 116, en el que la etapa de eliminación de agua comprende evaporar el agua
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directamente de dicho medio de fermentación sin centrifugación previa.
118. El procedimiento del párrafo 106, en el que la etapa de recuperación de lípidos comprende:
(d) tratar el caldo de fermentación para permeabilizar, lisar o romper las células microbianas y
(e) recuperar los lípidos del caldo de fermentación por separación por gravedad con o sin la ayuda de un agente para ayudar a la ruptura de la emulsión lípido/agua.
119. El procedimiento del párrafo 106, en el que dichas células microbianas se tratan en la etapa (d) en un fermentador o un recipiente similar.
120. El procedimiento del párrafo 118, en el que dicha separación por gravedad comprende centrifugación.
121. Un método para enriquecer el contenido en ácidos grasos polienoicos de un microorganismo que comprende
fermentar dicho microorganismo en un medio de cultivo con un nivel de oxígeno disuelto menor que 10%.
122. El procedimiento del párrafo 121, en el que dicho nivel de oxígeno disuelto es menor que 5 por ciento.
123. El procedimiento del párrafo 121, en el que dicho nivel de oxígeno disuelto es menor que 1 por ciento.
124. El procedimiento del párrafo 121, en el que durante una fase de crecimiento inicial, el nivel de oxígeno disuelto
es mayor que aproximadamente 10 por ciento y durante una fase de producción posterior el nivel de oxígeno disuelto es menor que 10 por ciento.
125. El procedimiento del párrafo 121, en el que dicho microorganismo contiene genes de policétido sintasa.
126. Un procedimiento heterotrófico para producir productos y microorganismos que comprende:
a. cultivar dichos microorganismos en un medio de cultivo en el que dichos microorganismos contienen genes de policétido sintasa y
b. mantener el nivel de oxígeno disuelto en menos de aproximadamente 10 por ciento.
127. El procedimiento del párrafo 126, en el que dicho nivel de oxígeno disuelto es menor que aproximadamente 5 por ciento.
128. El procedimiento del párrafo 126, en el que dicho nivel de oxígeno disuelto es menor que aproximadamente 1 por ciento.
129. El procedimiento del párrafo 126, en el que dichos genes de policétido sintasa se encuentran de manera natural en dichos microorganismos.
130. El procedimiento del párrafo 126, en el que dichos genes de policétido sintasa se introducen genéticamente en dichos microorganismos.
131. El procedimiento del párrafo 126, en el que durante una fase de crecimiento inicial, el nivel de oxígeno disuelto es mayor que aproximadamente 10 por ciento y durante una fase de producción posterior el nivel de oxígeno disuelto es menor que aproximadamente 10 por ciento.
Claims (16)
- 510152025303540REIVINDICACIONES1. Un procedimiento para producir lípidos microbianos eucariotas que comprende:(a) añadir una fuente de carbono no alcohol y una fuente de nutriente limitante a un medio de fermentación que comprende microorganismos del orden Thraustochytriales;(b) proporcionar condiciones suficientes para que dichos microorganismos produzcan dichos lípidos microbianos y(c) recuperar dichos lípidos microbianos,en el que al menos el 15% de dichos lípidos microbianos son lípidos poliinsaturados y en el que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante una etapa de aumento de densidad de biomasa es mayor que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante una etapa de producción de lípidos.
- 2. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante dicha etapa de aumento de densidad de biomasa es al menos 4% de saturación.
- 3. El procedimiento según la reivindicación 1 o 2, en el que el nivel de oxígeno disuelto en dicho medio de fermentación durante dicha etapa de producción de lípidos es 1% de saturación o menos.
- 4. El procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que dichos microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en Thraustochytrium, Schizochytrium y mezclas de los mismos.
- 5. El procedimiento según la reivindicación 4, en el que dichos microorganismos son Schizochytrium.
- 6. El procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que al menos aproximadamente el 25% de dichos lípidos es ácido docosahexaenoico.
- 7. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho procedimiento produce ácido docosahexaenoico a una velocidad promedio de al menos 0,2 g/l/h.
- 8. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho procedimiento produce dichos lípidos microbianos a una velocidad promedio de al menos aproximadamente 0,5 g/l/h.
- 9. El procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que dicha fuente de carbono comprende un carbohidrato.
- 10. El procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que dicha fuente de nutriente limitante se selecciona del grupo que consiste en: fuentes de nitrógeno, fuentes de carbono, fuentes de fosfato, fuentes de vitaminas (tales como fuentes de vitamina B12, fuentes de pantotenato, fuentes de tiamina), fuentes de metales traza (tales como fuentes de cinc, fuentes de cobre, fuentes de cobalto, fuentes de níquel, fuentes de hierro, fuentes de manganeso, fuentes de molibdeno) y fuentes de metales principales (tales como fuentes de magnesio, fuentes de calcio, fuentes de sodio, fuentes de potasio), fuentes de sílice y mezclas de los mismos.
- 11. El procedimiento según la reivindicación 10, en el que dichas fuentes de metales traza y fuentes de metales principales se seleccionan del grupo que consiste en sales de sulfato y cloruro de estos metales (tales como MgSO4-7H2O; MnCM^O; ZnSOW^O; CoCl2'6H2O; Na2MoO4'2H2O; CuSO4'5H2O; MSO46H2O; FeSO4'7H2O; CaCh; K2SO4; KCl y Na2SO4) y mezclas de los mismos.
- 12. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que dicha fuente de nutriente limitante comprende una fuente de nitrógeno.
- 13. El procedimiento según la reivindicación 12, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende una sal de amonio inorgánica.
- 14. El procedimiento según la reivindicación 12, en el que dicha fuente de nitrógeno comprende hidróxido de amonio.
- 15. El procedimiento según la reivindicación 14, en el que puede usarse dicha fuente de nutriente limitante para proporcionar control del pH.
- 16. El procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que el pH del medio de fermentación es de aproximadamente pH 5 a aproximadamente pH 11.
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060094089A1 (en) * | 1988-09-07 | 2006-05-04 | Martek Biosciences Corporation | Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids |
| US5340742A (en) * | 1988-09-07 | 1994-08-23 | Omegatech Inc. | Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids |
| US6451567B1 (en) * | 1988-09-07 | 2002-09-17 | Omegatech, Inc. | Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms |
| EP0823475B1 (en) | 1995-04-17 | 2009-06-17 | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology | Novel microorganisms capable of producing highly unsaturated fatty acids and process for producing highly unsaturated fatty acids by using the microorganisms |
| US20080175953A1 (en) * | 1995-06-07 | 2008-07-24 | Martek Biosciences Corporation | Process for the Heterotrophic Production of Microbial Products with High Concentrations of Omega-3 Highly Unsaturated Fatty Acids |
| CA2786722A1 (en) * | 2000-01-28 | 2001-08-02 | Martek Biosciences Corporation | Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors |
| EP2330407B1 (en) * | 2001-09-14 | 2013-05-29 | ARKRAY, Inc. | Method, tool and device for measuring concentration |
| US7560123B2 (en) * | 2004-08-12 | 2009-07-14 | Everett Laboratories, Inc. | Compositions and methods for nutrition supplementation |
| WO2003092628A2 (en) * | 2002-05-03 | 2003-11-13 | Martek Biosciences Corporation | High-quality lipids and methods for producing by enzymatic liberation from biomass |
| US8617617B2 (en) * | 2002-12-10 | 2013-12-31 | Everett Laboratories, Inc. | Methods and kits for co-administration of nutritional supplements |
| US6814983B2 (en) * | 2002-12-10 | 2004-11-09 | Everett Laboratories, Inc. | Compositions and methods for nutrition supplementation |
| US20050019880A1 (en) * | 2003-03-31 | 2005-01-27 | Council Of Scientific And Industrial Research | Method of enhancing levels of polyunsaturated fatty acids in thraustochytrid protists |
| BRPI0410491A8 (pt) * | 2003-04-24 | 2017-10-24 | Univ Vanderbilt | Composições e métodos para o controle de insetos |
| US7622269B2 (en) * | 2004-03-19 | 2009-11-24 | Tyratech, Inc. | Methods of screening tyramine- and octopamine-expressing cells for compounds and compositions having potential insect control activity |
| US20060263403A1 (en) * | 2003-04-24 | 2006-11-23 | Essam Enan | Compositions and methods for controlling insects involving the tyramine receptor |
| AU2003902794A0 (en) * | 2003-06-03 | 2003-06-19 | Agresearch Limited | Improvements in grass endophytes |
| US7267976B2 (en) * | 2003-07-02 | 2007-09-11 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Acyltransferases for alteration of polyunsaturated fatty acids and oil content in oleaginous yeasts |
| US20070015263A1 (en) * | 2003-09-01 | 2007-01-18 | Mogens Wumpelmann | Method for increasing yield of biomass of and/or components of biomass from marine microorganisms |
| KR20150125731A (ko) * | 2003-10-02 | 2015-11-09 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 변형량의 염소 및 칼륨을 사용하는 미세조류 중에 고농도 디에치에이의 생산 |
| CA2542574C (en) * | 2003-11-12 | 2014-03-18 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Delta-15 desaturases suitable for altering levels of polyunsaturated fatty acids in oleaginous plants and yeast |
| EA009568B1 (ru) * | 2003-12-30 | 2008-02-28 | ДСМ АйПи ЭССЕТС Б.В. | Способ деаэрации |
| US8101587B2 (en) | 2004-08-12 | 2012-01-24 | Everett Laboratories, Inc. | Kits for nutrition supplementation |
| JP4849806B2 (ja) * | 2005-02-08 | 2012-01-11 | 日本水産株式会社 | 新規な菌体処理方法を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法 |
| US8241868B2 (en) | 2005-02-08 | 2012-08-14 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | Production of polyunsaturated fatty acids using cell treatment method |
| US8163515B2 (en) | 2005-06-07 | 2012-04-24 | Ocean Nutrition Canada Limited | Eukaryotic Microorganisms for producing lipids and antioxidants |
| EA200800225A1 (ru) | 2005-07-01 | 2008-06-30 | Мартек Байосайенсиз Корпорейшн | Содержащий полиненасыщенные жирные кислоты маслопродукт и его применения и получение |
| US8177262B2 (en) * | 2005-07-28 | 2012-05-15 | Hydril Company Lp | Mid-seal for expandable connections |
| ATE474909T1 (de) * | 2005-12-29 | 2010-08-15 | Abl Biotechnologies Ltd | Neuer schizochytrium-limacinum-stamm, der sich für die produktion von lipiden und extrazellulären polysacchariden eignet, sowie verfahren hierfür |
| BRPI0708873A2 (pt) * | 2006-06-27 | 2011-06-14 | Tyratech Inc | composiÇÕes e mÉtodos para tratar infecÇÕes parasÍticas |
| US8685471B2 (en) * | 2006-07-17 | 2014-04-01 | Tyratech, Inc. | Compositions and methods for controlling insects |
| MX2009001346A (es) * | 2006-08-01 | 2009-04-17 | Ocean Nutrition Canada Ltd | Microbios productores de aceite y metodos de modificacion de los mismos. |
| US9637714B2 (en) * | 2006-12-28 | 2017-05-02 | Colorado State University Research Foundation | Diffuse light extended surface area water-supported photobioreactor |
| EP2077724A2 (en) * | 2007-01-16 | 2009-07-15 | Tyratech, Inc. | Pest control compositions and methods |
| AP2300A (en) * | 2007-06-14 | 2011-10-31 | Nickolaos Mitropoulos | Algae growth for biofuels. |
| WO2008155410A1 (en) * | 2007-06-21 | 2008-12-24 | Novozymes A/S | Production of lipids containing poly-unsaturated fatty acids |
| AU2008269989B2 (en) * | 2007-06-29 | 2014-02-27 | Dsm Ip Assets B.V. | Production and purification of esters of polyunsaturated fatty acids |
| GB0713121D0 (en) * | 2007-07-06 | 2007-08-15 | Univ Keele | Refrigerated gas equilibration device |
| KR20100067111A (ko) * | 2007-09-12 | 2010-06-18 | 마텍 바이오싸이언스스 코포레이션 | 생물학적 오일 및 생산 및 이의 용도 |
| ITMI20072343A1 (it) * | 2007-12-14 | 2009-06-15 | Eni Spa | Processo per la produzione di biomassa algale ad alto contenuto lipidico |
| US7989195B2 (en) * | 2008-02-20 | 2011-08-02 | Washington State University Research Foundation | Heterotrophic algal high cell density production method and system |
| ES2326022B1 (es) | 2008-03-25 | 2010-06-07 | Neuron Biopharma, S.A. | Procedimiento mejorado para la produccion de biodiesel. |
| EP2265724A4 (en) * | 2008-04-09 | 2013-01-23 | Solazyme Inc | Direct chemical modification of microbial biomass and microbial oils |
| JP5171422B2 (ja) * | 2008-06-19 | 2013-03-27 | ルネサスエレクトロニクス株式会社 | 感光性組成物、これを用いたパターン形成方法、半導体素子の製造方法 |
| US20100050502A1 (en) * | 2008-08-21 | 2010-03-04 | LiveFuels, Inc. | Systems and methods for hydrothermal conversion of algae into biofuel |
| US20100077654A1 (en) * | 2008-09-23 | 2010-04-01 | LiveFuels, Inc. | Systems and methods for producing biofuels from algae |
| US20100236137A1 (en) * | 2008-09-23 | 2010-09-23 | LiveFuels, Inc. | Systems and methods for producing eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid from algae |
| EP2342347A1 (en) * | 2008-09-23 | 2011-07-13 | Livefuels, Inc | Systems and methods for producing biofuels from algae |
| DK2339925T3 (da) | 2008-10-14 | 2022-10-31 | Corbion Biotech Inc | Fødevaresammensætninger af mikroalgebiomasse |
| US8809037B2 (en) | 2008-10-24 | 2014-08-19 | Bioprocessh20 Llc | Systems, apparatuses and methods for treating wastewater |
| US20110239318A1 (en) * | 2008-11-18 | 2011-09-29 | LiveFuels, Inc. | Methods for producing fish with high lipid content |
| CN102325874A (zh) * | 2008-12-19 | 2012-01-18 | α-J研究有限合伙公司 | 通过使细胞增殖与海藻产品生产分离来最优化海藻产品的生产 |
| EP2401386A4 (en) * | 2009-02-25 | 2013-03-13 | Vb Medicare Pvt Ltd | IMPROVED METHODS FOR THE FERMENTATIVE MANUFACTURE OF DOCOSAHEXAENIC ACID |
| US8207363B2 (en) | 2009-03-19 | 2012-06-26 | Martek Biosciences Corporation | Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof |
| ES2749850T3 (es) | 2009-04-14 | 2020-03-24 | Corbion Biotech Inc | Nuevas composiciones alimenticias a base de algas |
| WO2010121094A1 (en) | 2009-04-17 | 2010-10-21 | Livefuels. Inc. | Systems and methods for culturing algae with bivalves |
| CA2760921A1 (en) | 2009-05-04 | 2010-11-11 | Primafuel, Inc. | Improved recovery of desired co-products from fermentation stillage streams |
| CN101899481A (zh) * | 2009-05-25 | 2010-12-01 | 华盛顿州立大学 | 异养海藻高密度生产的方法和系统 |
| CN102656261B (zh) | 2009-09-18 | 2015-07-01 | 菲科尔生物技术国际公司 | 利用控制的光照的微藻发酵 |
| BR122015020119B8 (pt) | 2010-01-19 | 2021-05-04 | Dsm Ip Assets Bv | óleo microbiano, produtos alimentícios para um animal não humano e biomassa isolada |
| CN102971430A (zh) | 2010-03-11 | 2013-03-13 | Bp生物燃料英国有限公司 | 与在压缩式发动机中的应用相关的方法、生物油、生物燃料、装置和生物体 |
| BR112012022914A2 (pt) | 2010-03-12 | 2015-10-06 | Univ Colorado State Res Found | sistema fotobiorreator e método para conter crescimento de algas |
| KR101147450B1 (ko) | 2010-05-04 | 2012-05-21 | 한국생명공학연구원 | 신규 유지성 미세조류 ｋｒｓ１０１ 균주 및 이를 이용한 바이오오일의 제조방법 |
| US8617857B2 (en) | 2010-05-04 | 2013-12-31 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Thraustochytrid-based microalgae, and method for preparing bio-oil by using same |
| WO2011153246A2 (en) | 2010-06-01 | 2011-12-08 | Martek Biosciences Corporation | Extraction of lipid from cells and products therefrom |
| WO2011159682A1 (en) | 2010-06-14 | 2011-12-22 | Raveendran Pottathil | Methods for the production of algae derived oils |
| US10479969B2 (en) | 2010-10-11 | 2019-11-19 | Phycoil Biotechnology International. Inc. | Utilization of wastewater for microalgal cultivation |
| CN102485898A (zh) * | 2010-12-02 | 2012-06-06 | 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 | 微生物发酵生产脂质的方法 |
| WO2012109375A2 (en) * | 2011-02-08 | 2012-08-16 | Phycal Inc. | Methods for improved mixed trophic algal culture |
| AU2012226528B2 (en) | 2011-03-07 | 2015-08-20 | Dsm Nutritional Products Ag | Engineering thraustochytrid microorganisms |
| US9487716B2 (en) | 2011-05-06 | 2016-11-08 | LiveFuels, Inc. | Sourcing phosphorus and other nutrients from the ocean via ocean thermal energy conversion systems |
| KR101895651B1 (ko) | 2011-06-23 | 2018-09-05 | 알에이치오 리뉴어블스, 인크. | 방향족 분자를 위한 재조합 생산 시스템 |
| US8183227B1 (en) | 2011-07-07 | 2012-05-22 | Chemo S. A. France | Compositions, kits and methods for nutrition supplementation |
| CA2837215C (en) * | 2011-07-13 | 2021-03-23 | Alltech, Inc. | Algal lipid compositions and methods of preparing and utilizing the same |
| BR122015020126B1 (pt) | 2011-07-21 | 2022-03-03 | Dsm Ip Assets B.V | Composição contendo óleo microbiano diluído |
| EP3831952A1 (en) * | 2011-07-21 | 2021-06-09 | DSM IP Assets B.V. | Methods of making eicosapentaenoic acid in microorganisms |
| WO2013032333A1 (en) * | 2011-09-01 | 2013-03-07 | Algae Biotech S.L. | Oral dosage units containing astaxanthin, phospholipids and omega-3 fatty acids |
| US8168611B1 (en) | 2011-09-29 | 2012-05-01 | Chemo S.A. France | Compositions, kits and methods for nutrition supplementation |
| EP2836578A1 (en) | 2012-04-09 | 2015-02-18 | BP Biofuels UK Ltd. | Low polysaccharide microorganisms for production of biofuels and other renewable materials |
| US10100338B2 (en) * | 2012-05-22 | 2018-10-16 | Ineos Bio S.A. | Method of operation of a syngas fermentation process |
| RU2539766C2 (ru) * | 2012-08-03 | 2015-01-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | ШТАММ Arthrospira platensis (Nordst.) Geitl. rsemsu T/05-117 - ПРОДУЦЕНТ ЛИПИДОСОДЕРЖАЩЕЙ БИОМАССЫ |
| CN102864111B (zh) * | 2012-10-10 | 2013-07-17 | 江南大学 | 一株产二十二碳六烯酸的裂殖壶菌菌株 |
| MX2015004819A (es) | 2012-10-17 | 2015-08-14 | Solazyme Roquette Nutritionals Llc | Granulos de harina de microalgas y proceso para la preparacion de los mismos. |
| EP2724625A1 (en) | 2012-10-26 | 2014-04-30 | Roquette Freres | Microalgal flour granules and process for preparation thereof |
| US9394505B2 (en) | 2012-12-04 | 2016-07-19 | Flint Hills Resources, Lp | Recovery of co-products from fermentation stillage streams |
| US10023884B2 (en) | 2013-01-18 | 2018-07-17 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Microorganism producing docosahexaenoic acid and utilization thereof |
| EP2762009A1 (de) | 2013-02-05 | 2014-08-06 | Evonik Industries AG | Verbesserung der Bioverfügbarkeit von Wertstoffen aus Mikroorganismen |
| DE102013201978A1 (de) | 2013-02-07 | 2014-08-07 | Evonik Industries Ag | Verbesserte Bioverfügbarkeit von Wertstoffen aus Mikroorganismen |
| EP2953480B1 (de) | 2013-02-05 | 2020-06-03 | Evonik Operations GmbH | Verbesserung der bioverfügbarkeit von wertstoffen aus mikroorganismen |
| EP2762008A1 (de) | 2013-02-05 | 2014-08-06 | Evonik Industries AG | Verbesserung der Bioverfügbarkeit von Wertstoffen aus Mikroorganismen durch Verwendung eines Rotor-Stator Systems für den Zellaufschluss |
| CA2904827C (en) * | 2013-03-11 | 2020-10-27 | Life Science Nutrition As | Natural lipids containing non-oxidizable fatty acids |
| EP2970926B1 (en) | 2013-03-13 | 2018-01-31 | DSM Nutritional Products AG | Engineering microorganisms |
| EP2777400A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-17 | Roquette Freres | Microalgal flour granules and process for preparation thereof |
| CN105073976A (zh) | 2013-03-29 | 2015-11-18 | 罗盖特兄弟公司 | 微藻生物质蛋白质富集方法 |
| EP2826384A1 (de) | 2013-07-16 | 2015-01-21 | Evonik Industries AG | Verfahren zur Trocknung von Biomasse |
| FR3008581B1 (fr) * | 2013-07-19 | 2016-11-04 | Roquette Freres | Farine de microalgues riches en lipides et procede de preparation |
| JP2016533180A (ja) | 2013-10-18 | 2016-10-27 | ロケット フレールＲｏｑｕｅｔｔｅ Ｆｒｅｒｅｓ | 微細藻類バイオマスのテクスチャー方法 |
| US9605289B2 (en) | 2013-11-12 | 2017-03-28 | Roshan Viswanath Makam | Process of production and extra-cellular secretion of lipids |
| KR101541521B1 (ko) | 2013-11-28 | 2015-08-03 | 롯데케미칼 주식회사 | 미세조류를 이용한 도코사헥사엔산 생산방법 |
| JP2016537986A (ja) | 2013-11-29 | 2016-12-08 | ロケット フレールＲｏｑｕｅｔｔｅ Ｆｒｅｒｅｓ | 微細藻類バイオマスのカロテノイドおよびタンパク質を富化するためのプロセス |
| DK3082459T3 (en) | 2013-11-29 | 2019-04-23 | Corbion Biotech Inc | GRANULATES OF MICROALGE BIOMASS MULTIPLE PROTEIN AND METHOD OF PRODUCING THEREOF |
| FR3015516B1 (fr) * | 2013-12-19 | 2016-01-22 | Roquette Freres | Procede d'enrichissement en dha de la biomasse de microalgues du genre thraustochytrium |
| EP2958982B1 (en) | 2013-12-20 | 2019-10-02 | Mara Renewables Corporation | Methods of recovering oil from microorganisms |
| KR102435265B1 (ko) | 2013-12-20 | 2022-08-22 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 미생물 세포로부터의 미생물 오일의 수득 방법 |
| JP6919827B2 (ja) | 2013-12-20 | 2021-08-18 | ディーエスエム ニュートリショナル プロダクツ アーゲーＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ＡＧ | 微生物から油を回収する方法 |
| CA2934491C (en) | 2013-12-20 | 2023-09-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Processes for obtaining microbial oil from microbial cells |
| AR098895A1 (es) | 2013-12-20 | 2016-06-22 | Dsm Ip Assets Bv | Proceso para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas |
| EP3082793B1 (en) | 2013-12-20 | 2020-04-15 | DSM IP Assets B.V. | Processes for obtaining microbial oil from microbial cells |
| KR102435269B1 (ko) | 2013-12-20 | 2022-08-22 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 미생물 세포로부터의 미생물 오일의 수득 방법 |
| KR20160108339A (ko) | 2014-01-20 | 2016-09-19 | 로께뜨프레르 | 미세조류 바이오매스의 단백질 증량 방법 |
| DK3110930T3 (da) * | 2014-02-28 | 2020-06-08 | Delft Advanced Biofuels B V | Fremgangsmåde til genvinding af lipider eller carbonhydrider |
| CA3159974C (en) | 2014-05-22 | 2024-06-11 | MARA Renewables Corporation | Methods of oil production in microorganisms |
| US20150352034A1 (en) | 2014-06-08 | 2015-12-10 | Solazyme, Inc. | Personal Care Products Containing Microalgae or Extracts Thereof |
| RU2742437C2 (ru) * | 2014-07-03 | 2021-02-05 | Де Файндер Груп, Инк. | Ацидофильные штаммы Fusarium oxysporum, способы их получения и способы их применения |
| WO2016050554A1 (de) | 2014-10-02 | 2016-04-07 | Evonik Degussa Gmbh | Pufas enthaltendes futtermittel mit hoher abriebfestigkeit und hoher wasserstabilität |
| WO2016050552A1 (de) | 2014-10-02 | 2016-04-07 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur herstellung einer pufas enthaltenden biomasse mit hoher zellstabilität |
| US11324234B2 (en) | 2014-10-02 | 2022-05-10 | Evonik Operations Gmbh | Method for raising animals |
| BR112017006834B1 (pt) | 2014-10-02 | 2022-04-26 | Evonik Operations Gmbh | Processo para a preparação de um alimento para animais compreendendo pufas, produto extrudado de alimento para animais e método de criação de animais |
| KR102501032B1 (ko) | 2014-10-16 | 2023-02-16 | 마라 리뉴어블즈 코퍼레이션 | 반복 유가 배양 방법 |
| EP3839041A1 (en) | 2014-10-16 | 2021-06-23 | Mara Renewables Corporation | Semi-continuous culture methods |
| US10570427B2 (en) * | 2014-10-31 | 2020-02-25 | Lanzatech New Zealand Limited | Fermentation process for the production of lipids |
| EP3225691B1 (en) * | 2014-11-28 | 2020-10-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing isoprenoid compound |
| FR3030191B1 (fr) | 2014-12-18 | 2018-03-23 | Corbion Biotech, Inc. | Composition pour produit frit allege en matiere grasse et procede de fabrication |
| US9890402B2 (en) | 2015-01-24 | 2018-02-13 | Indian Oil Corporation Limited | Thraustochytrid based process for treating waste effluents |
| FR3031984B1 (fr) | 2015-01-27 | 2019-05-24 | Roquette Freres | Procede d'enrichissement de la biomasse de microalgues du genre traustochytrium en dha et en acides amines arg et glu |
| EP3274430B1 (en) | 2015-03-24 | 2022-08-03 | Corbion Biotech, Inc. | Microalgal compositions and uses thereof |
| AR104042A1 (es) * | 2015-03-26 | 2017-06-21 | Mara Renewables Corp | Producción de alta densidad de biomasa y aceite utilizando glicerol en bruto |
| AU2016293487B2 (en) | 2015-07-13 | 2021-07-01 | MARA Renewables Corporation | Enhancing microalgal metabolism of xylose |
| CN104974944B (zh) * | 2015-07-15 | 2018-05-25 | 南京工业大学 | 一种产dha的裂殖壶菌基因工程菌及其构建方法和应用 |
| ITUB20152958A1 (it) | 2015-08-06 | 2017-02-06 | Eni Spa | Metodo per concentrare una sospensione cellulare comprendente una biomassa mucillaginosa di lieviti oleaginosi. |
| CN105002227B (zh) * | 2015-08-24 | 2018-09-07 | 青岛旭能生物工程有限责任公司 | 一种通过流加策略提高摇瓶发酵裂殖壶菌生产二十二碳六烯酸的方法 |
| CN105018539B (zh) * | 2015-08-24 | 2019-02-12 | 青岛旭能生物工程有限责任公司 | 一种培养裂殖壶菌高产dha的方法 |
| CN105420122A (zh) * | 2015-12-23 | 2016-03-23 | 通威股份有限公司 | 可高密度培养的裂殖壶菌及其生产富含dha的油脂的方法 |
| WO2017131188A1 (ja) * | 2016-01-28 | 2017-08-03 | 日本水産株式会社 | 高度不飽和脂肪酸を含む油脂の製造方法 |
| CN109153964B (zh) | 2016-03-01 | 2023-06-13 | 芬德集团公司 | 丝状真菌生物垫、及其生产方法和使用方法 |
| US10851395B2 (en) | 2016-06-10 | 2020-12-01 | MARA Renewables Corporation | Method of making lipids with improved cold flow properties |
| AU2017297760B2 (en) | 2016-07-13 | 2021-09-23 | Dsm Ip Assets B.V. | Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass |
| CN109563527A (zh) | 2016-07-13 | 2019-04-02 | 赢创德固赛有限公司 | 将脂质与裂解的含脂质生物质分开的方法 |
| WO2018011275A1 (en) | 2016-07-13 | 2018-01-18 | Evonik Degussa Gmbh | Method for isolating lipids from lipid-containing cells |
| US10059906B2 (en) | 2016-07-20 | 2018-08-28 | MARA Renewables Corporation | Solventless winterization of microbial oil |
| EP3487970B1 (en) | 2016-07-20 | 2023-04-05 | Mara Renewables Corporation | Method of production of flowable crude microbial oil |
| CN106359930A (zh) * | 2016-08-29 | 2017-02-01 | 界首市任寨乡天佑家庭农场 | 一种用于生产epa、dpa含量高的功能性牛肉饲料 |
| ES2872009T3 (es) | 2016-12-27 | 2021-11-02 | Evonik Degussa Gmbh | Método de aislamiento de lípidos a partir de una biomasa que contiene lípidos |
| WO2018122057A1 (en) | 2016-12-27 | 2018-07-05 | Evonik Degussa Gmbh | Method of isolating lipids from a lipids containing biomass |
| CN109777607B (zh) * | 2016-12-30 | 2022-06-10 | 内蒙古金达威药业有限公司 | 一种纯化dha毛油的方法 |
| TWI661780B (zh) * | 2017-02-10 | 2019-06-11 | 台原藥股份有限公司 | 含不飽和脂肪酸的素食組合物 |
| WO2019013832A1 (en) | 2017-07-12 | 2019-01-17 | Bunge Global Innovation Llc | METHOD FOR EXTRACTING OIL FROM ALGAE BIOMASS |
| BR112020003326A2 (pt) * | 2017-08-17 | 2020-11-17 | Evonik Operations Gmbh | produção acentuada de lipídios pela limitação de pelo menos duas fontes de nutrientes limitantes |
| WO2019034354A1 (en) | 2017-08-17 | 2019-02-21 | Evonik Degussa Gmbh | ENHANCED PRODUCTION OF LIPIDS BY LIMITING AT LEAST TWO SOURCES OF NUTRIENT LIMITING |
| SG10201911092WA (en) | 2017-08-30 | 2020-01-30 | Sustainable Bioproducts Inc | Edible composition with filamentous fungi and bioreactor system for the cultivation thereof |
| WO2019048327A1 (en) | 2017-09-05 | 2019-03-14 | Evonik Degussa Gmbh | METHOD FOR SEPARATING LIPIDS IN A BIOMASS CONTAINING LYDE LIPIDS |
| EP3470502A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-17 | Evonik Degussa GmbH | Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass |
| WO2019121752A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Evonik Degussa Gmbh | Method of isolating lipids from a lipids containing biomass |
| EP3527664A1 (en) | 2018-02-15 | 2019-08-21 | Evonik Degussa GmbH | Method of isolating lipids from a lipids containing biomass |
| WO2019122030A1 (en) | 2017-12-22 | 2019-06-27 | Dsm Ip Assets B.V. | Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass |
| WO2019185910A2 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Novel use of substituted 2h-chromens and their derivatives |
| WO2019185888A1 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Novel use of tocopherols |
| WO2019185898A1 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Novel use of substituted 2h-chromens and their derivatives |
| WO2019185941A1 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Novel use of substituted chroman-6-ols with extended lipophilic side chains |
| EP3774758A2 (en) | 2018-03-29 | 2021-02-17 | DSM IP Assets B.V. | Novel use of substituted chroman-6-ols with extended lipophilic side chains |
| WO2019185889A1 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Novel use of carnosic acid |
| WO2019185939A1 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Use of twin-chromanols as antioxidants in oil |
| BR112020019776A2 (pt) | 2018-03-29 | 2021-01-05 | Dsm Ip Assets B.V. | Uso inovador de croman-6-óis substituídos |
| WO2019185904A1 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Chroman-6-ols with an extended lipophilic side chain in position 2, their manufacture and use |
| BR112020019749A2 (pt) | 2018-03-29 | 2021-03-02 | Dsm Ip Assets B.V. | uso inovador de cromanóis duplos |
| WO2019185942A1 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Use of tocotrienols as antioxidants |
| WO2019185891A1 (en) | 2018-03-29 | 2019-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Novel use of substituted chroman-6-ols |
| BR112020023222A2 (pt) | 2018-05-15 | 2021-03-23 | Evonik Operations Gmbh | método de isolamento de lipídios a partir de uma biomassa contendo lipídios lisados por inversão por emulsão |
| WO2019219443A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Evonik Operations Gmbh | Method of isolating lipids from a lipids containing biomass with aid of hydrophobic silica |
| CN109022284B (zh) * | 2018-09-03 | 2021-05-21 | 杭州园泰生物科技有限公司 | 提高球等鞭金藻生物量以及dha产量的方法 |
| FR3085825B1 (fr) | 2018-09-14 | 2021-07-16 | Fermentalg | Huile de microorganismes riche en acide docosahexaenoique |
| FR3085962B1 (fr) | 2018-09-14 | 2021-06-18 | Fermentalg | Procede d'extracton d'une huile riche en pufa |
| EP3877535A1 (de) * | 2018-11-09 | 2021-09-15 | Evonik Operations GmbH | Verfahren zur herstellung einer leicht aufschliessbaren biomasse mit erhöhtem gehalt an polyungesättigten fettsäuren |
| BR112021008842A2 (pt) | 2018-11-09 | 2021-08-17 | Evonik Operations Gmbh | método para produzir uma biomassa com um teor aumentado de ácidos graxos poli-insaturados |
| KR102286636B1 (ko) * | 2019-01-31 | 2021-08-05 | 한국생명공학연구원 | 로리오라이드 생산성이 높은 신규 미세조류 |
| AR118204A1 (es) | 2019-02-27 | 2021-09-22 | The Fynder Group Inc | Materiales alimenticios que comprenden partículas de hongos filamentosos, y diseño de biorreactor de membrana |
| WO2020257320A1 (en) | 2019-06-18 | 2020-12-24 | The Fynder Group, Inc. | Fungal textile materials and leather analogs |
| EP3933016A1 (en) | 2020-06-30 | 2022-01-05 | Evonik Operations GmbH | Method of isolating lipids from a lipids containing biomass |
| TWI766669B (zh) * | 2021-04-29 | 2022-06-01 | 大自然環保科技有限公司 | 有機液體生物醱酵槽裝置 |
| WO2022228687A1 (en) | 2021-04-29 | 2022-11-03 | S2B Gmbh & Co. Kg | Biotechnological production of terpenes |
| EP4180513A1 (en) | 2021-11-15 | 2023-05-17 | Indian Oil Corporation Limited | An improved process for production of enriched algal biomass |
| EP4198136A3 (en) | 2021-12-16 | 2023-08-30 | Indian Oil Corporation Limited | Methods and formulations for enhancing high value lipids |
| KR20240141784A (ko) | 2022-01-25 | 2024-09-27 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 다중불포화 지방산 생산을 증가시키기 위한 배지 조정 및 영양소 공급 접근법 |
Family Cites Families (140)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2879162A (en) | 1956-10-04 | 1959-03-24 | Du Pont | Augmenting poultry feed |
| US2890989A (en) * | 1957-07-01 | 1959-06-16 | Ralph F Anderson | Method for the production of carotenes |
| GB857161A (en) | 1958-01-07 | 1960-12-29 | Boots Pure Drug Co Ltd | Improvements in the propagation of fungi |
| US3108402A (en) * | 1961-03-16 | 1963-10-29 | Grain Processing Corp | Production of carotenoid pigments |
| US3444647A (en) | 1961-08-08 | 1969-05-20 | Masahito Takahashi | Process of cultivating algae |
| US3142135A (en) * | 1962-02-13 | 1964-07-28 | Grain Processing Corp | Production of carotenoids by the cultivation of algae |
| US3282794A (en) | 1963-09-19 | 1966-11-01 | Ajinomoto Kk | Method of producing citrulline by bacterial fermentation |
| US3296079A (en) | 1963-12-09 | 1967-01-03 | Pfizer & Co C | Products sweetened without sugar and characterized by freedom from aftertaste |
| US3316674A (en) | 1964-09-11 | 1967-05-02 | Yakult Honsha Kk | Method of new industrial cultivation of unicellular green algae such as chlorella |
| GB1143405A (en) | 1965-02-25 | 1969-02-19 | Unilever Ltd | Processing of foodstuffs and the like |
| GB1123884A (en) | 1966-05-23 | 1968-08-14 | Pfizer & Co C | Animal feed compositions |
| FR1557635A (es) | 1967-04-20 | 1969-02-21 | ||
| US3661663A (en) | 1968-08-21 | 1972-05-09 | Owens Corning Fiberglass Corp | Method of producing siliceous fiber corrosion inhibiting composites |
| DE1901980A1 (de) * | 1969-01-16 | 1970-09-03 | Wunder Kg Heinrich | Sicherheits-Skibindung mit ausschwenkbarem Andrueckbacken |
| US3761588A (en) | 1969-02-06 | 1973-09-25 | Meiji Seika Kaisha | Antibiotics and production thereof |
| US3617299A (en) | 1969-09-15 | 1971-11-02 | Abbott Lab | Animal feed premix resistant to static charge and method of making same |
| US3647482A (en) * | 1970-03-04 | 1972-03-07 | Gen Mills Inc | Reduction and modification of the unpleasant aftertaste of saccharin |
| GB1401956A (en) | 1971-09-11 | 1975-08-06 | Marmite Ltd | Growing of yeast and other microorganisms |
| US3924017A (en) | 1972-07-28 | 1975-12-02 | Gen Foods Corp | Sweetness inducer |
| JPS564233B2 (es) * | 1973-03-30 | 1981-01-29 | ||
| US3908026A (en) * | 1973-04-19 | 1975-09-23 | Procter & Gamble | Culinary composition containing paramethoxycinnamaldehyde as a flavoring agent and sweetener |
| US3908028A (en) | 1973-04-19 | 1975-09-23 | Procter & Gamble | Soft drink composition containing paramethoxycinnamaldehyde as a flavoring agent and sweetner |
| GB1466853A (en) | 1973-05-22 | 1977-03-09 | Simon Rosedowns Ltd | Extraction |
| US3879890A (en) * | 1974-02-06 | 1975-04-29 | Canadian Patents Dev | Algal polysaccharide production |
| US4162324A (en) * | 1975-11-21 | 1979-07-24 | Merck & Co., Inc. | Antibiotics 890A1 and 890A3 |
| IT1109471B (it) * | 1976-08-17 | 1985-12-16 | Deral Sa | Procedimento e prodotto per la conservazione e la valorizzazione di vegetali a verde e dei sotto prodotti umidi delle industrie agro alimentari |
| JPS5944020B2 (ja) | 1978-01-27 | 1984-10-26 | 協和醗酵工業株式会社 | 油脂酵母による海産魚類の飼育方法 |
| US4229544A (en) * | 1978-08-08 | 1980-10-21 | Payfer Laboratories Inc. | Living organism packaging |
| US4304794A (en) | 1978-12-14 | 1981-12-08 | Chimicasa Gmbh | Artificial-sweetener composition and process of preparing and using same |
| US4232122A (en) | 1979-01-17 | 1980-11-04 | Z-L Limited Partnership | Antioxidants, antioxidant compositions and methods of preparing and using same |
| JPS55111794A (en) * | 1979-02-19 | 1980-08-28 | Agency Of Ind Science & Technol | Production of lipid having high linolic acid content |
| US4405649A (en) | 1979-05-07 | 1983-09-20 | Marvin Dudley | Process for producing premium quality fish meal from whole fish |
| IL57712A (en) * | 1979-07-03 | 1984-02-29 | Yissum Res Dev Co | Cultivation of halophilic algae of the dunaliella species for the production of fuel-like product |
| DE3011185A1 (de) | 1980-03-22 | 1981-10-01 | Kali-Chemie Pharma Gmbh, 3000 Hannover | Verfahren zur gewinnung von fuer physiologische zwecke direkt verwendbarem rin(paragraph)lecithin |
| GB2098065A (en) | 1981-04-14 | 1982-11-17 | Nippon Suisan Kaisha Ltd | Antithrombotic compositions containing docosahexaenoic acid |
| US4426396A (en) | 1981-06-11 | 1984-01-17 | Union Oil Company Of California | Preservation of harvested crops and animal feedstuffs |
| IL63734A (en) | 1981-09-04 | 1985-07-31 | Yeda Res & Dev | Lipid fraction,its preparation and pharmaceutical compositions containing same |
| EP0089983B1 (en) * | 1981-10-07 | 1986-01-29 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Method for harvesting algae |
| US4383038A (en) | 1981-12-10 | 1983-05-10 | Ethyl Corporation | Process for the preparation of L-proline by cultivating algae |
| DE3368377D1 (en) | 1982-04-16 | 1987-01-29 | Nestle Sa | Lipid composition for oral, enteral or parenteral feeding |
| JPS58196068A (ja) | 1982-05-12 | 1983-11-15 | Nec Corp | 電歪効果素子 |
| JPS58213613A (ja) | 1982-06-03 | 1983-12-12 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 球型活性炭の製造方法 |
| US4670285A (en) * | 1982-08-06 | 1987-06-02 | The University Of Toronto Innovations Foundation | Infant formula |
| US4425396A (en) * | 1982-09-28 | 1984-01-10 | The B. F. Goodrich Company | Insulative panel |
| US4588600A (en) * | 1983-04-18 | 1986-05-13 | Scm Corporation | Dry premix composition for imparting a fried appearance to baked foods |
| JPS6087798A (ja) | 1983-10-21 | 1985-05-17 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 藻類によるエイコサペンタエン酸の生産方法 |
| JPS60105471A (ja) | 1983-11-14 | 1985-06-10 | Nisshin Flour Milling Co Ltd | 健康食品卵の生産方法 |
| JPS60133094A (ja) | 1983-12-21 | 1985-07-16 | 日清製油株式会社 | 高純度エイコサペンタエン酸の製造法 |
| EP0155420B1 (en) * | 1984-02-09 | 1988-03-23 | The Agency of Industrial Science and Technology | A method for the preparation of a fungal body and a lipid rich in gamma-linolenic acid therefrom |
| JPS61170366A (ja) | 1985-01-21 | 1986-08-01 | Nisshin Kararingu Kk | 多価不飽和脂肪酸含有魚類を主成分とする食品の製造方法 |
| IL74497A (en) | 1985-03-05 | 1990-02-09 | Proterra Ag | Pharmaceutical compositions containing phenyl carbamate derivatives and certain phenyl carbamate derivatives |
| US4634533A (en) | 1985-04-26 | 1987-01-06 | Somerville Robert L | Method of converting brines to useful products |
| US4792418A (en) | 1985-08-14 | 1988-12-20 | Century Laboratories, Inc. | Method of extraction and purification of polyunsaturated fatty acids from natural sources |
| US4749522A (en) | 1985-10-31 | 1988-06-07 | Angio-Medical Corporation | Supercritical fluid extraction of animal derived materials |
| DE3603000A1 (de) | 1986-01-31 | 1987-08-06 | Milupa Ag | Neue polyensaeure-reiche fettmischung und deren verwendung bei der herstellung von saeuglingsnahrungen |
| JPS6340711A (ja) | 1986-08-06 | 1988-02-22 | Ngk Insulators Ltd | β型窒化珪素の製造法 |
| US4758438A (en) * | 1986-10-14 | 1988-07-19 | Stroz John J | Sweetener composition |
| US4804555A (en) | 1986-10-21 | 1989-02-14 | General Mills, Inc. | Physical process for simultaneous deodorization and cholesterol reduction of fats and oils |
| US5023091A (en) | 1987-03-23 | 1991-06-11 | The Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Ruminant feed method of making and method of using |
| US5064665A (en) | 1987-03-23 | 1991-11-12 | The Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Method of making and using a ruminant feed |
| US4957748A (en) | 1987-03-23 | 1990-09-18 | The Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Ruminant feed, method of making and method of using |
| JPS63237745A (ja) | 1987-03-27 | 1988-10-04 | Harumi Okuyama | α−リノレン酸系脂肪酸の含有率が高められた動物性食品の生産方法 |
| US4764392A (en) * | 1987-04-01 | 1988-08-16 | Q.P. Corporation | Margarine containing fish oil |
| US4918104A (en) | 1987-06-16 | 1990-04-17 | Weiss Howard S | Method and composition for increasing the concentration of omega-3 polyunsaturated fatty acids in poultry and poultry eggs and poultry and eggs resulting therefrom |
| KR890701751A (ko) * | 1987-07-20 | 1989-12-21 | 원본 미기재 | 오메가-3(n-3) 지질의 미생물 생성물 |
| CA1263270A (en) | 1987-08-19 | 1989-11-28 | Bruce J. Holub | Animal feed supplement |
| US4871551A (en) | 1988-02-08 | 1989-10-03 | Microbio Resources, Inc. | Pigmentation supplements for animal feed compositions |
| JP2723243B2 (ja) | 1988-02-25 | 1998-03-09 | サントリー株式会社 | 高度不飽和脂肪酸添加動物飼料 |
| JPH01218573A (ja) * | 1988-02-25 | 1989-08-31 | Yoshio Tanaka | ドナリエラ藻体含有固形状食品の製造法 |
| US4822500A (en) | 1988-02-29 | 1989-04-18 | Texas United Chemical Corporation | Saturated brine well treating fluids and additives therefore |
| US4874629A (en) | 1988-05-02 | 1989-10-17 | Chang Stephen S | Purification of fish oil |
| US5985348A (en) | 1995-06-07 | 1999-11-16 | Omegatech, Inc. | Milk products having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids |
| US20060094089A1 (en) | 1988-09-07 | 2006-05-04 | Martek Biosciences Corporation | Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids |
| US6451567B1 (en) | 1988-09-07 | 2002-09-17 | Omegatech, Inc. | Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms |
| US5340742A (en) * | 1988-09-07 | 1994-08-23 | Omegatech Inc. | Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids |
| US5130242A (en) | 1988-09-07 | 1992-07-14 | Phycotech, Inc. | Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids |
| US6977167B2 (en) | 1988-09-07 | 2005-12-20 | Martek Biosciences Corporation | Mixtures of omega-3 and omega-6 highly unsaturated fatty acids from euryhaline microorganisms |
| US5698244A (en) * | 1988-09-07 | 1997-12-16 | Omegatech Inc. | Method for raising animals having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids |
| US5340594A (en) * | 1988-09-07 | 1994-08-23 | Omegatech Inc. | Food product having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids |
| US7033584B2 (en) | 1988-09-07 | 2006-04-25 | Omegatech, Inc. | Feeding Thraustochytriales to poultry for increasing omega-3 highly unsaturated fatty acids in eggs |
| US5012761A (en) | 1988-11-17 | 1991-05-07 | Oh Suk Y | Chicken egg having relatively high percentage of long chain fatty acids and method of reducing heart related disease in humans using such eggs |
| JP2664452B2 (ja) | 1988-12-23 | 1997-10-15 | サントリー株式会社 | 魚貝類用餌料 |
| DE3920679A1 (de) | 1989-06-23 | 1991-01-10 | Milupa Ag | Fettmischung zur herstellung von nahrungen, insbesondere saeuglingsnahrungen |
| US5272085A (en) | 1989-10-31 | 1993-12-21 | Queen's University | Sodium tolerance genes derived from schizosaccharomyces pombe |
| US5407957A (en) | 1990-02-13 | 1995-04-18 | Martek Corporation | Production of docosahexaenoic acid by dinoflagellates |
| US5244921A (en) * | 1990-03-21 | 1993-09-14 | Martek Corporation | Eicosapentaenoic acids and methods for their production |
| JPH0458847A (ja) | 1990-06-23 | 1992-02-25 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | 抗肥満症油脂および抗肥満症食品 |
| US5297625A (en) | 1990-08-24 | 1994-03-29 | Associated Universities, Inc. | Biochemically enhanced oil recovery and oil treatment |
| JP3102645B2 (ja) | 1990-10-15 | 2000-10-23 | 雪印乳業株式会社 | 栄養補給用栄養組成物 |
| US5133963A (en) * | 1990-12-21 | 1992-07-28 | Shuntaro Ise | Method of producing commercially useful poultry products with increased concentrations of Omega-3 polyunsaturated fatty acids |
| PH11992043811B1 (en) * | 1991-01-24 | 2002-08-22 | Martek Corp | Arachidonic acid and methods for the production and use thereof |
| BR9205526A (pt) | 1991-01-24 | 1994-04-19 | Martek Corp Sociedade Norte Am | Misturas de oleos microbianos e usos dos mesmos |
| DE4101976C2 (de) | 1991-01-24 | 1995-09-21 | Adatomed Pharma Chiron | Behandlungssystem für Netzhautentfaltung |
| US5658767A (en) | 1991-01-24 | 1997-08-19 | Martek Corporation | Arachidonic acid and methods for the production and use thereof |
| JPH0728677B2 (ja) | 1991-01-25 | 1995-04-05 | 理研ビタミン株式会社 | 養魚飼料用油脂組成物及びこれを用いた養魚飼料 |
| JPH04271754A (ja) | 1991-02-26 | 1992-09-28 | Nippon Nousan Kogyo Kk | 家畜、家禽用飼料および畜肉の生産方法 |
| KR940005180B1 (ko) | 1991-08-20 | 1994-06-13 | 주식회사 우방랜드 | n-3 지방산이 축적된 돈육 생산용 사료 조성물 |
| FR2686619B1 (fr) | 1992-01-28 | 1995-07-13 | Commissariat Energie Atomique | Procede de production selective de lipides poly-insatures a partir d'une culture de micro-algues du type porphyridium et cuve utilisee dans ce procede. |
| GB2266652B (en) | 1992-05-06 | 1995-11-22 | Woobang Land Company Ltd | Feed composition for a broiler |
| US6410281B1 (en) * | 1992-07-10 | 2002-06-25 | Omegatech, Inc. | Reducing corrosion in a fermentor by providing sodium with a non-chloride sodium salt |
| KR940007396A (ko) | 1992-09-30 | 1994-04-27 | 스마 요시츠기 | 교차 홈 타입의 등속회전 조인트 |
| JP2558050B2 (ja) | 1993-02-18 | 1996-11-27 | イセ食品株式会社 | 鶏用飼料 |
| JPH078215A (ja) * | 1993-04-30 | 1995-01-13 | Kawasaki Steel Corp | ドコサヘキサエン酸含有海洋性微細藻類食品素材およびその製造方法 |
| JPH07255387A (ja) | 1994-03-24 | 1995-10-09 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | 食用家禽用飼料及び該飼料を用いる食用家禽の飼養方 法 |
| CA2197187C (en) | 1994-08-16 | 2007-03-27 | Bernd Best | Process for extracting native products which are not water-soluble from native substance mixtures by means of centrifugal force |
| EP0823475B1 (en) * | 1995-04-17 | 2009-06-17 | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology | Novel microorganisms capable of producing highly unsaturated fatty acids and process for producing highly unsaturated fatty acids by using the microorganisms |
| JP2764572B2 (ja) * | 1995-04-17 | 1998-06-11 | 工業技術院長 | ドコサヘキサエン酸生産能を有する新規微生物及びそれを用いたドコサヘキサエン酸の製造方法 |
| JPH08322475A (ja) | 1995-05-29 | 1996-12-10 | Nisshin Flour Milling Co Ltd | 家禽類用飼料 |
| ATE303726T1 (de) | 1995-05-30 | 2005-09-15 | Suntory Ltd | Hühnereier mit einem hohen anteil an mehrfach ungesättigten fettsäuren, verfahren für deren herstellung und die verwendung derselben |
| US20080175953A1 (en) * | 1995-06-07 | 2008-07-24 | Martek Biosciences Corporation | Process for the Heterotrophic Production of Microbial Products with High Concentrations of Omega-3 Highly Unsaturated Fatty Acids |
| JPH0965971A (ja) * | 1995-09-04 | 1997-03-11 | Mitsuo Fukushige | 加熱調理容器 |
| JPH0965871A (ja) * | 1995-09-04 | 1997-03-11 | Kawasaki Steel Corp | 海洋性微細藻類の培養方法 |
| JPH0984590A (ja) | 1995-09-21 | 1997-03-31 | Itouen:Kk | α−リノレン酸の製造法 |
| JPH09110888A (ja) | 1995-10-17 | 1997-04-28 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | リン脂質組成物 |
| US6255505B1 (en) * | 1996-03-28 | 2001-07-03 | Gist-Brocades, B.V. | Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass |
| EP0821068A3 (en) | 1996-03-29 | 1999-06-02 | Rohm And Haas Company | Novel sphingolipids and a process thereto |
| EP0935667B1 (en) * | 1996-07-23 | 2006-12-06 | Nagase Chemtex Corporation | Process for preparing docosahexaenoic acid and docosapentaenoic acid |
| FI964692A0 (fi) * | 1996-11-25 | 1996-11-25 | Primalco Ltd | Foerbaettrad cellulassammansaettning foer bioefterbehandling av textilmaterial som innehaoller cellulosa |
| EP2256211A3 (en) * | 1997-02-20 | 2011-02-16 | DSM IP Assets B.V. | Fermentative production of valuable compounds on an industrial scale using chemically defined media |
| US6566583B1 (en) | 1997-06-04 | 2003-05-20 | Daniel Facciotti | Schizochytrium PKS genes |
| CA2283422A1 (en) * | 1997-06-04 | 1998-12-10 | Calgene, Llc | Production of polyunsaturated fatty acids by expression of polyketide-like synthesis genes in plants |
| HUP0003079A3 (en) * | 1997-08-14 | 2001-02-28 | Martek Biosciences Corp Columb | A method for increasing incorporation efficiency of omega-3 highly unsaturated fatty acid in poultry meat |
| DE19749413A1 (de) | 1997-11-07 | 1999-05-12 | Hoechst Ag | Neuartige Sophoroselipide, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung |
| DE19838011C2 (de) * | 1998-08-21 | 2000-01-13 | Christoph Syldatk | Verfahren zur biotechnischen Herstellung von Fettsäuremethylestern ("Biodiesel") auf Molkebasis |
| US7271315B2 (en) | 1999-01-14 | 2007-09-18 | Martek Biosciences Corporation | PUFA polyketide synthase systems and uses thereof |
| US7247461B2 (en) | 1999-01-14 | 2007-07-24 | Martek Biosciences Corporation | Nucleic acid molecule encoding ORFA of a PUFA polyketide synthase system and uses thereof |
| DE19903095C2 (de) * | 1999-01-27 | 2003-05-22 | Nutrinova Gmbh | Gewinnung von gamma-Linolensäure aus Protozoen der Gattung Colpidium |
| US6596766B1 (en) * | 1999-03-04 | 2003-07-22 | Suntory Limited | Utilization of material containing docosapentaenoic acid |
| CA2786722A1 (en) * | 2000-01-28 | 2001-08-02 | Martek Biosciences Corporation | Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors |
| US6338866B1 (en) | 2000-02-15 | 2002-01-15 | Applied Food Biotechnology, Inc. | Pet foods using algal or fungal waste containing fatty acids |
| TWI337619B (en) | 2001-04-16 | 2011-02-21 | Martek Biosciences Corp | Pufa polyketide synthase systems and uses thereof |
| AU2004225485B2 (en) | 2003-03-26 | 2008-08-21 | Dsm Ip Assets B.V. | PUFA polyketide synthase systems and uses thereof |
| US7208160B2 (en) * | 2003-08-26 | 2007-04-24 | Sol Katzen | Process of treating sea algae and halophytic plants |
| DE102004017370A1 (de) | 2004-04-08 | 2005-10-27 | Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh | PUFA-PKS Gene aus Ulkenia |
| JP4821409B2 (ja) * | 2006-03-31 | 2011-11-24 | アイシン・エィ・ダブリュ株式会社 | 自動変速機の油圧制御装置 |
| US8585552B2 (en) * | 2006-08-01 | 2013-11-19 | GM Global Technology Operations LLC | Torque converter clutch lock on method and low slip regulation |
| US7485073B2 (en) * | 2006-08-02 | 2009-02-03 | Horng-Jiun Chang | Muscle exerciser |
| BRPI0817320B1 (pt) | 2007-09-25 | 2019-07-09 | Monsanto Technology Llc | Composições de tinta e substrato impresso |
| CN102741267B (zh) | 2009-03-19 | 2020-06-23 | 帝斯曼知识产权资产有限公司 | 多不饱和脂肪酸合酶核酸分子和多肽，及其组合物、制备方法和用途 |
| FR3015516B1 (fr) | 2013-12-19 | 2016-01-22 | Roquette Freres | Procede d'enrichissement en dha de la biomasse de microalgues du genre thraustochytrium |
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