JPH0984590A - α−リノレン酸の製造法 - Google Patents
α−リノレン酸の製造法Info
- Publication number
- JPH0984590A JPH0984590A JP26614095A JP26614095A JPH0984590A JP H0984590 A JPH0984590 A JP H0984590A JP 26614095 A JP26614095 A JP 26614095A JP 26614095 A JP26614095 A JP 26614095A JP H0984590 A JPH0984590 A JP H0984590A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- enzyme
- linolenic acid
- lipase
- density polyethylene
- low
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 種々の薬理活性を有するα−リノレン酸を工
業的に有利に製造する方法を提供すること。 【解決手段】 α−リノレン酸を含有する油脂を酵素リ
パーゼを低密度ポリエチレン微粒子に固定化した固定化
酵素と接触せしめて加水分解し、次いで生成したα−リ
ノレン酸を単離するα−リノレン酸の製造法。
業的に有利に製造する方法を提供すること。 【解決手段】 α−リノレン酸を含有する油脂を酵素リ
パーゼを低密度ポリエチレン微粒子に固定化した固定化
酵素と接触せしめて加水分解し、次いで生成したα−リ
ノレン酸を単離するα−リノレン酸の製造法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、α−リノレン酸の製造
法に関する。さらに詳しくは、種々の薬理活性を有する
α−リノレン酸を工業的に有利に製造する方法に関す
る。
法に関する。さらに詳しくは、種々の薬理活性を有する
α−リノレン酸を工業的に有利に製造する方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】多価不飽和脂肪酸は、２種類に分類でき
る。１つはα−リノレン酸、エイコサペンタエン酸（Ｅ
ＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）等のｎ−３
系であり、他方はリノール酸やアラキドン酸等のｎ−６
系である。人の栄養におけるｎ−６系脂肪酸の基本的な
役割は古くから認められてきたが、ｎ−３系脂肪酸は最
近まで重要とは考えられていなかった。ｎ−３系脂肪酸
は、細胞膜の構造と機能において主要な役割を果たして
いるとみられる。最近、癌予防やアレルギー予防に対す
るα−リノレン酸の効果が多くの注目を集めるようにな
っている。
る。１つはα−リノレン酸、エイコサペンタエン酸（Ｅ
ＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）等のｎ−３
系であり、他方はリノール酸やアラキドン酸等のｎ−６
系である。人の栄養におけるｎ−６系脂肪酸の基本的な
役割は古くから認められてきたが、ｎ−３系脂肪酸は最
近まで重要とは考えられていなかった。ｎ−３系脂肪酸
は、細胞膜の構造と機能において主要な役割を果たして
いるとみられる。最近、癌予防やアレルギー予防に対す
るα−リノレン酸の効果が多くの注目を集めるようにな
っている。
【０００３】ＥＰＡやＤＨＡは主として魚や海産動物に
存在するが、α−リノレン酸は主として陸上植物に含ま
れており、特にシソ科植物のシソやエゴマの実の油には
６０％前後も含まれている。また、食用には用いられな
いが、塗料等に使用されるアマニ油にも５０％前後α−
リノレン酸が含まれる。一方、コーン油や綿実油には殆
ど含まれていない。現在α−リノレン酸源としては、エ
ゴマ（シソ油）がそのまま食用に供されており、ＥＰＡ
やＤＨＡのように単離された脂肪酸（エステル）として
は殆ど実用的に利用されていない。
存在するが、α−リノレン酸は主として陸上植物に含ま
れており、特にシソ科植物のシソやエゴマの実の油には
６０％前後も含まれている。また、食用には用いられな
いが、塗料等に使用されるアマニ油にも５０％前後α−
リノレン酸が含まれる。一方、コーン油や綿実油には殆
ど含まれていない。現在α−リノレン酸源としては、エ
ゴマ（シソ油）がそのまま食用に供されており、ＥＰＡ
やＤＨＡのように単離された脂肪酸（エステル）として
は殆ど実用的に利用されていない。
【０００４】しかし、α−リノレン酸の機能を詳細に明
らかにするには、純粋な形で多量に脂肪酸が供給できる
ことが必要である。また、エゴマ油は大変高価であるの
で、それよりもはるかに安価なアマニ油からα−リノレ
ン酸が単離できれば、安価にα−リノレン酸源を供給で
きる。
らかにするには、純粋な形で多量に脂肪酸が供給できる
ことが必要である。また、エゴマ油は大変高価であるの
で、それよりもはるかに安価なアマニ油からα−リノレ
ン酸が単離できれば、安価にα−リノレン酸源を供給で
きる。
【０００５】特開平２−２８９６９２号公報には、α−
リノレン酸を含有する天然油脂を超臨界液体または液化
ガスを移動相とするクロマトグラフィーにより分画し、
α−リノレン酸高含有トリグリセライド画分を分取する
ことにより、α−リノレン酸高含有トリグリセライドを
製造する方法が開示されている。また、特開平１−２０
７２５７号公報には、α−リノレン酸を含む脂肪酸混合
物から、担体としてオクタデシル基結合型シリカゲルま
たはスチレン−ジビニルベンゼン系共重合体を用い、か
つ溶融液として溶解度パラメーターが１１〜１８の有機
溶剤を用いた逆相分配クロマトグラフィーにより、α−
リノレン酸を分離する方法が開示されている。
リノレン酸を含有する天然油脂を超臨界液体または液化
ガスを移動相とするクロマトグラフィーにより分画し、
α−リノレン酸高含有トリグリセライド画分を分取する
ことにより、α−リノレン酸高含有トリグリセライドを
製造する方法が開示されている。また、特開平１−２０
７２５７号公報には、α−リノレン酸を含む脂肪酸混合
物から、担体としてオクタデシル基結合型シリカゲルま
たはスチレン−ジビニルベンゼン系共重合体を用い、か
つ溶融液として溶解度パラメーターが１１〜１８の有機
溶剤を用いた逆相分配クロマトグラフィーにより、α−
リノレン酸を分離する方法が開示されている。
【０００６】α−リノレン酸のような高度不飽和脂肪酸
は非常に酸化されやすく、加温または加圧下の化学的加
水分解は不向きであり、緩和な条件下で効率よく触媒で
き、かつ副次反応がないリパーゼの利用の方が優れてい
る。酸素を用いた植物油、動物脂の化学変換は、これら
の油脂が再生可能であり、世界中の国で利用できること
から近年新しく興味がもたれてきており、多くの化学合
成品がこれらの油脂を原料にして生産されている。リパ
ーゼは入手しやすく、基質特異性が高く、さらに緩和な
条件下で効率よく触媒するという理由から、そのような
変換で主要に用いられる酵素である。一方、リパーゼは
大変高価であるので原料が液体であり、かつ最終製品に
酵素が必要でない場合には、酵素を固定化することによ
り経済性が大幅に改善されることになる。
は非常に酸化されやすく、加温または加圧下の化学的加
水分解は不向きであり、緩和な条件下で効率よく触媒で
き、かつ副次反応がないリパーゼの利用の方が優れてい
る。酸素を用いた植物油、動物脂の化学変換は、これら
の油脂が再生可能であり、世界中の国で利用できること
から近年新しく興味がもたれてきており、多くの化学合
成品がこれらの油脂を原料にして生産されている。リパ
ーゼは入手しやすく、基質特異性が高く、さらに緩和な
条件下で効率よく触媒するという理由から、そのような
変換で主要に用いられる酵素である。一方、リパーゼは
大変高価であるので原料が液体であり、かつ最終製品に
酵素が必要でない場合には、酵素を固定化することによ
り経済性が大幅に改善されることになる。
【０００７】米国特許第４,６２９,７４２号明細書に
は、脂肪族オレフィンポリマー、酸化ポリマー、イオン
性ポリマーおよびそれらのブレンドよりなる群から選ば
れる合成親油性熱可塑性脂肪族族オレフィンポリマーか
らなる微孔性構造上に、水溶液からの吸着によって固定
化されたリパーゼと、液体脂肪とを水の存在下加水分解
条件で接触させて該液体脂肪を加水分解する方法が開示
されている。
は、脂肪族オレフィンポリマー、酸化ポリマー、イオン
性ポリマーおよびそれらのブレンドよりなる群から選ば
れる合成親油性熱可塑性脂肪族族オレフィンポリマーか
らなる微孔性構造上に、水溶液からの吸着によって固定
化されたリパーゼと、液体脂肪とを水の存在下加水分解
条件で接触させて該液体脂肪を加水分解する方法が開示
されている。
【０００８】上記微孔性構造は、上記吸着の前に予め処
理されていないかあるいは上記ポリマーが溶解せず、か
つリパーゼを失活させない極性水混和性有機溶媒での湿
潤によってのみ予め処理されているかのいずれかであ
る。また、同明細書には、非イオン性ポリマーとしてポ
リプロピレンと高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）が開示
されている。
理されていないかあるいは上記ポリマーが溶解せず、か
つリパーゼを失活させない極性水混和性有機溶媒での湿
潤によってのみ予め処理されているかのいずれかであ
る。また、同明細書には、非イオン性ポリマーとしてポ
リプロピレンと高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）が開示
されている。
【０００９】しかし、固定化されたリパーゼの繰り返し
利用に対する安定性および固定化することによるリパー
ゼの活性の低下がしばし問題となる。従来、固定化リパ
ーゼを用いてα−リノレン酸を製造する方法は知られて
いない。
利用に対する安定性および固定化することによるリパー
ゼの活性の低下がしばし問題となる。従来、固定化リパ
ーゼを用いてα−リノレン酸を製造する方法は知られて
いない。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、α−
リノレン酸の工業的に有利な製造法を提供することにあ
る。本発明の他の目的は、α−リノレン酸を固定化リパ
ーゼを用いて製造する方法を提供することにある。本発
明のさらに他の目的は、低密度ポリエチレンの微粒子、
特に予めエタノールにより膨潤させた低密度ポリエチレ
ンの微粒子として、その上に固定化したリパーゼにより
加水分解せしめてα−リノレン酸を効率的にかつ容易に
製造する方法を提供することにある。本発明のさらに他
の目的および利点は、以下の説明から明らかになろう。
リノレン酸の工業的に有利な製造法を提供することにあ
る。本発明の他の目的は、α−リノレン酸を固定化リパ
ーゼを用いて製造する方法を提供することにある。本発
明のさらに他の目的は、低密度ポリエチレンの微粒子、
特に予めエタノールにより膨潤させた低密度ポリエチレ
ンの微粒子として、その上に固定化したリパーゼにより
加水分解せしめてα−リノレン酸を効率的にかつ容易に
製造する方法を提供することにある。本発明のさらに他
の目的および利点は、以下の説明から明らかになろう。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、本発明
の上記目的および利点は、α−リノレン酸を含有する油
脂を酵素リパーゼを低密度ポリエチレン微粒子に固定化
した固定化酵素と接触せしめて加水分解し、次いで生成
したα−リノレン酸を単離することを特徴とするα−リ
ノレン酸の製造法によって達成される。
の上記目的および利点は、α−リノレン酸を含有する油
脂を酵素リパーゼを低密度ポリエチレン微粒子に固定化
した固定化酵素と接触せしめて加水分解し、次いで生成
したα−リノレン酸を単離することを特徴とするα−リ
ノレン酸の製造法によって達成される。
【００１２】α−リノレン酸を含有する油脂としては、
例えばエゴマ油やシソ油等が好ましく用いられる。本発
明方法により、α−リノレン酸源として従来油脂のまま
利用されているエゴマ油やシソ油（含有量約６０％）よ
りも純度の高いα−リノレン酸を安価に提供することが
可能となった。
例えばエゴマ油やシソ油等が好ましく用いられる。本発
明方法により、α−リノレン酸源として従来油脂のまま
利用されているエゴマ油やシソ油（含有量約６０％）よ
りも純度の高いα−リノレン酸を安価に提供することが
可能となった。
【００１３】酵素リパーゼは、如何なる起源のものでも
用いることができる。例えば、豚膵臓由来のリパーゼ、
微生物由来、例えばアスペルギルスニガー（Aspergillu
s niger）、カンジダルゴサ（Candida rugosa）、ムコ
ルジャパニカス（Mucor japanicus）、リゾプスニベウ
ス（Rhizopus niveus）、リゾプスｓｐ.等が産生するリ
パーゼを入手が容易なものとして挙げることができる。
用いることができる。例えば、豚膵臓由来のリパーゼ、
微生物由来、例えばアスペルギルスニガー（Aspergillu
s niger）、カンジダルゴサ（Candida rugosa）、ムコ
ルジャパニカス（Mucor japanicus）、リゾプスニベウ
ス（Rhizopus niveus）、リゾプスｓｐ.等が産生するリ
パーゼを入手が容易なものとして挙げることができる。
【００１４】低密度ポリエチレン微粒子としては、いわ
ゆる Low Density Polyethylene （ＬＤＰＥ）と云われ
る通常密度が０.９１５ｇ／ｃｍ3程度のポリエチレンの
微粒子が好ましく用いられる。微粒子としては、平均粒
径約３５０〜１０００μｍの微粒子が好ましい。固定化
した酵素リパーゼとα−リノレン酸を含有する油脂を接
触せしめるには、例えば該油脂と固定化した酵素リパー
ゼを蒸留水中で攪拌混合する方法を挙げることができ
る。
ゆる Low Density Polyethylene （ＬＤＰＥ）と云われ
る通常密度が０.９１５ｇ／ｃｍ3程度のポリエチレンの
微粒子が好ましく用いられる。微粒子としては、平均粒
径約３５０〜１０００μｍの微粒子が好ましい。固定化
した酵素リパーゼとα−リノレン酸を含有する油脂を接
触せしめるには、例えば該油脂と固定化した酵素リパー
ゼを蒸留水中で攪拌混合する方法を挙げることができ
る。
【００１５】また、低密度ポリエチレン微粒子上に酵素
リパーゼを固定化させるには、該微粒子と酵素リパーゼ
を含有する緩衝液とをそのまま接触せしめてもよいが、
好ましくは該微粒子をエタノールと接触せしめ膨潤さ
せ、次いで酵素リパーゼを含む緩衝液と接触せしめるの
が好ましい。この際、エタノールは低密度ポリエチレン
微粒子１ｇ当り０.５〜３ｍｌの割合で用いるのが最適
である。そして、エタノールで膨潤させた低密度ポリエ
チレン微粒子を酵素リパーゼを溶解した緩衝液と少なく
とも１時間攪拌下に接触せしめて固定化酵素を調製する
のが有利である。
リパーゼを固定化させるには、該微粒子と酵素リパーゼ
を含有する緩衝液とをそのまま接触せしめてもよいが、
好ましくは該微粒子をエタノールと接触せしめ膨潤さ
せ、次いで酵素リパーゼを含む緩衝液と接触せしめるの
が好ましい。この際、エタノールは低密度ポリエチレン
微粒子１ｇ当り０.５〜３ｍｌの割合で用いるのが最適
である。そして、エタノールで膨潤させた低密度ポリエ
チレン微粒子を酵素リパーゼを溶解した緩衝液と少なく
とも１時間攪拌下に接触せしめて固定化酵素を調製する
のが有利である。
【００１６】本発明によれば、油脂の加水分解により生
成したα−リノレン酸は、反応混合物から固定化リパー
ゼを分離したのち、逆相クロマトグラフィー等の常法に
より単離することができる。以下、実施例により本発明
方法をさらに詳述する。
成したα−リノレン酸は、反応混合物から固定化リパー
ゼを分離したのち、逆相クロマトグラフィー等の常法に
より単離することができる。以下、実施例により本発明
方法をさらに詳述する。
【００１７】
試験例１ リパーゼの固定化条件−膨潤剤エタノールの添加量の検
討 ２０ｍｇの低密度ポリエステル粉末（ＬＤＰＥ）（Accu
rel EP 400, AKZO社製）に、エタノールを０〜２００μ
ｌ加えて膨潤させ、豚膵臓リパーゼ（シグマ社製）酵素
液（１.２ｍｇの粗酵素を４００μｌの５０ｍＭリン酸
緩衝剤（ｐＨ７）に溶解）を添加して、３７℃で１時間
攪拌しながら吸着させた。吸着されずに上清に残った酵
素タンパク量を色素結合法により測定し、次式により固
定化率を求めた。
討 ２０ｍｇの低密度ポリエステル粉末（ＬＤＰＥ）（Accu
rel EP 400, AKZO社製）に、エタノールを０〜２００μ
ｌ加えて膨潤させ、豚膵臓リパーゼ（シグマ社製）酵素
液（１.２ｍｇの粗酵素を４００μｌの５０ｍＭリン酸
緩衝剤（ｐＨ７）に溶解）を添加して、３７℃で１時間
攪拌しながら吸着させた。吸着されずに上清に残った酵
素タンパク量を色素結合法により測定し、次式により固
定化率を求めた。
【００１８】
【数１】
【００１９】結果を表１に示す。これより、ＬＤＰＥ１
ｍｇあたり０.５〜３.５μｌのエタノールを加えてから
酵素を固定化するのが好適であることがわかった。
ｍｇあたり０.５〜３.５μｌのエタノールを加えてから
酵素を固定化するのが好適であることがわかった。
【００２０】
【表１】
【００２１】試験例２ リパーゼの固定化条件−酵素液容量の検討 ２０ｍｇの低密度ポリエステル粉末（ＬＤＰＥ）に、エ
タノールを４０μｌ加えて膨潤させ、２００〜２４００
μｌの緩衝液に溶解した酵素液を添加した。３７℃で１
時間攪拌しながら吸着させ、吸着されずに上清に残った
酵素タンパク量を色素結合法により測定し、固定化率を
求めた。結果を表２に示す。これより、酵素液容量は固
定化率にほとんど影響を及ぼさないことがわかった。
タノールを４０μｌ加えて膨潤させ、２００〜２４００
μｌの緩衝液に溶解した酵素液を添加した。３７℃で１
時間攪拌しながら吸着させ、吸着されずに上清に残った
酵素タンパク量を色素結合法により測定し、固定化率を
求めた。結果を表２に示す。これより、酵素液容量は固
定化率にほとんど影響を及ぼさないことがわかった。
【００２２】
【表２】
【００２３】試験例３ リパーゼの固定化条件−攪拌時間の検討 ２０ｍｇの低密度ポリエステル粉末（ＬＤＰＥ）に、エ
タノールを４０μｌ加えて膨潤させ、６００μｌの緩衝
液に溶解した酵素液を添加した。３７℃で１０分から２
時間攪拌しながら吸着させ、吸着されずに上清に残った
酵素タンパク量を色素結合法により測定し、固定化率を
求めた。結果を表３に示す。これより、攪拌１０分で最
大吸着量の６７％が固定化され、１時間以上で一定とな
ることがわかった。
タノールを４０μｌ加えて膨潤させ、６００μｌの緩衝
液に溶解した酵素液を添加した。３７℃で１０分から２
時間攪拌しながら吸着させ、吸着されずに上清に残った
酵素タンパク量を色素結合法により測定し、固定化率を
求めた。結果を表３に示す。これより、攪拌１０分で最
大吸着量の６７％が固定化され、１時間以上で一定とな
ることがわかった。
【００２４】
【表３】
【００２５】試験例４ リパーゼの固定化条件の検討−リパーゼの種類の影響 ２０ｍｇの低密度ポリエステル粉末（ＬＤＰＥ）に、エ
タノールを４０μｌ加えて膨潤させ、豚膵臓リパーゼあ
るいは種々の微生物起源工業用のリパーゼ（天野製薬
（株）製）を溶解した酵素液（１.２ｍｇ粗酵素／６０
０μｌ緩衝液）を添加し、３７℃で１０分から１時間攪
拌しながら吸着させ、固定化率を求めた。結果を表４に
示す。これより、どの起源のリパーゼも良好に固定化さ
れることがわかった。
タノールを４０μｌ加えて膨潤させ、豚膵臓リパーゼあ
るいは種々の微生物起源工業用のリパーゼ（天野製薬
（株）製）を溶解した酵素液（１.２ｍｇ粗酵素／６０
０μｌ緩衝液）を添加し、３７℃で１０分から１時間攪
拌しながら吸着させ、固定化率を求めた。結果を表４に
示す。これより、どの起源のリパーゼも良好に固定化さ
れることがわかった。
【００２６】
【表４】
【００２７】実施例１ 固定化リパーゼによるシソ油の加水分解−固定化による
酵素活性の変化 ８００ｍｇの低密度ポリエステル粉末（ＬＤＰＥ）に、
１.６ｍｌのエタノールを加えて膨潤させ、豚膵臓リパ
ーゼあるいは種々の微生物起源工業用のリパーゼ（天野
製薬（株）製）を溶解した酵素液（４８ｍｇ粗酵素／２
４ｍｌ緩衝液）を添加し、３７℃で１時間攪拌しながら
吸着させ、未吸着の酵素をろ過により除去し、減圧下で
乾燥して固定化リパーゼを得た。シソ油（サミット製
油）２５０μｌ、蒸留水２５０μｌおよび固定化酵素
（０.５〜２ｍｇ粗酵素）または未固定の酵素（０.５〜
８ｍｇ粗酵素）を混合し、窒素気流下で２４時間攪拌し
反応させた。１ｍｌのアセトン−エタノール混液（５
０：５０、ｖ／ｖ）を加えて反応を停止し、分解により
遊離した脂肪酸を０.１ＮのＫＯＨ滴定により定量し
た。シソ油を２ＮのＫＯＨ／メタノールで完全加水分解
して得られる脂肪酸を１００％として分解率を求めた。
結果を図１に示す。Candida rugosa、Rhizopus sp.、Mu
cor javanicus および Rhizopus niveus由来のリパーゼ
の固定化前と固定化後の酵素活性（分解率）の変化は、
それぞれ８０→８０％、６０→７０％、３０→４０％お
よび３０→４０％であった。すなわち固定化による酵素
活性の低下は見られなかった。
酵素活性の変化 ８００ｍｇの低密度ポリエステル粉末（ＬＤＰＥ）に、
１.６ｍｌのエタノールを加えて膨潤させ、豚膵臓リパ
ーゼあるいは種々の微生物起源工業用のリパーゼ（天野
製薬（株）製）を溶解した酵素液（４８ｍｇ粗酵素／２
４ｍｌ緩衝液）を添加し、３７℃で１時間攪拌しながら
吸着させ、未吸着の酵素をろ過により除去し、減圧下で
乾燥して固定化リパーゼを得た。シソ油（サミット製
油）２５０μｌ、蒸留水２５０μｌおよび固定化酵素
（０.５〜２ｍｇ粗酵素）または未固定の酵素（０.５〜
８ｍｇ粗酵素）を混合し、窒素気流下で２４時間攪拌し
反応させた。１ｍｌのアセトン−エタノール混液（５
０：５０、ｖ／ｖ）を加えて反応を停止し、分解により
遊離した脂肪酸を０.１ＮのＫＯＨ滴定により定量し
た。シソ油を２ＮのＫＯＨ／メタノールで完全加水分解
して得られる脂肪酸を１００％として分解率を求めた。
結果を図１に示す。Candida rugosa、Rhizopus sp.、Mu
cor javanicus および Rhizopus niveus由来のリパーゼ
の固定化前と固定化後の酵素活性（分解率）の変化は、
それぞれ８０→８０％、６０→７０％、３０→４０％お
よび３０→４０％であった。すなわち固定化による酵素
活性の低下は見られなかった。
【００２８】実施例２ 固定化リパーゼによるシソ油の加水分解−α−リノレン
酸の収率 実施例１で製造した固定化リパーゼ（Candida rugosa
由来）を用い、シソ油（サミット製油）２５０μｌ、蒸
留水２５０μｌおよび固定化酵素（２ｍｇ粗酵素）を混
合し、３７℃、窒素気流下で２４時間攪拌し反応させ
た。２ｍｌの１ＮＨＣｌを加えて反応を停止し、２.５
ｍｌの石油エーテルで４回、α−リノレン酸を抽出し
た。α−リノレン酸の定量はＨＰＬＣにより行った（カ
ラム：Inertsil ODS-2, 4.6×250mm、溶出液：０.１％
トリフルオロ酢酸−９０％メタノール、流速：１ｍｌ／
ｍｉｎ、検出：ＵＶ２０３ｎｍ）。シソ油を２ＮのＫＯ
Ｈ／メタノールで完全加水分解して得られるα−リノレ
ン酸を１００％として収率を求めると、９７％であっ
た。
酸の収率 実施例１で製造した固定化リパーゼ（Candida rugosa
由来）を用い、シソ油（サミット製油）２５０μｌ、蒸
留水２５０μｌおよび固定化酵素（２ｍｇ粗酵素）を混
合し、３７℃、窒素気流下で２４時間攪拌し反応させ
た。２ｍｌの１ＮＨＣｌを加えて反応を停止し、２.５
ｍｌの石油エーテルで４回、α−リノレン酸を抽出し
た。α−リノレン酸の定量はＨＰＬＣにより行った（カ
ラム：Inertsil ODS-2, 4.6×250mm、溶出液：０.１％
トリフルオロ酢酸−９０％メタノール、流速：１ｍｌ／
ｍｉｎ、検出：ＵＶ２０３ｎｍ）。シソ油を２ＮのＫＯ
Ｈ／メタノールで完全加水分解して得られるα−リノレ
ン酸を１００％として収率を求めると、９７％であっ
た。
【００２９】実施例３ 固定化リパーゼによるシソ油の加水分解−繰り返し安定
性 実施例１で製造した固定化リパーゼ（Candida rugosa
由来）を用い、シソ油（サミット製油）２５０μｌ、蒸
留水２５０μｌおよび固定化酵素（４.５ｍｇ粗酵素）
を混合し、３７℃、窒素気流下で２４時間攪拌し反応さ
せ、実施例１と同様にして分解率を求めた。反応後、固
定化酵素をろ過で分けヘキサンで洗浄後、再び上記と同
様にシソ油の加水分解を行った。反応を１０回繰り返し
た時の分解率の変化を図２に示す。このように反応を繰
り返しても酵素活性はほとんど変化せず、１０回目の反
応時の活性は最初の反応時の９６％であった。
性 実施例１で製造した固定化リパーゼ（Candida rugosa
由来）を用い、シソ油（サミット製油）２５０μｌ、蒸
留水２５０μｌおよび固定化酵素（４.５ｍｇ粗酵素）
を混合し、３７℃、窒素気流下で２４時間攪拌し反応さ
せ、実施例１と同様にして分解率を求めた。反応後、固
定化酵素をろ過で分けヘキサンで洗浄後、再び上記と同
様にシソ油の加水分解を行った。反応を１０回繰り返し
た時の分解率の変化を図２に示す。このように反応を繰
り返しても酵素活性はほとんど変化せず、１０回目の反
応時の活性は最初の反応時の９６％であった。
【００３０】実施例４ 固定化リパーゼによるアマニ油の加水分解−α−リノレ
ン酸の分離 実施例１と同様にして製造した固定化リパーゼ（Candid
a rugosa 由来）を用い、アマニ油（日清製油（株）
製）２０ｍｌ、蒸留水２０ｍｌおよび固定化酵素（８０
ｍｇ粗酵素）を混合し、窒素気流下、３７℃で２４時間
攪拌し、アマニ油の加水分解を行った。エタノール２０
０ｍｌ、３３％水酸化カリウム８ｍｌ、蒸留水８０ｍｌ
を加えて攪拌し、不ケン化物をｎ−ヘキサンで抽出して
除去し、水層に６Ｎの塩酸２４ｍｌを加えて中和し、ｎ
−ヘキサンで遊離脂肪酸を抽出した。減圧乾燥後、遊離
脂肪酸１２.６５ｇを得た。この１部をＨＰＬＣ（カラ
ム：カプセルパックＣ１８（資生堂）、溶出：９０％メ
タノール）にかけると、図３のような分離パターンが得
られた。
ン酸の分離 実施例１と同様にして製造した固定化リパーゼ（Candid
a rugosa 由来）を用い、アマニ油（日清製油（株）
製）２０ｍｌ、蒸留水２０ｍｌおよび固定化酵素（８０
ｍｇ粗酵素）を混合し、窒素気流下、３７℃で２４時間
攪拌し、アマニ油の加水分解を行った。エタノール２０
０ｍｌ、３３％水酸化カリウム８ｍｌ、蒸留水８０ｍｌ
を加えて攪拌し、不ケン化物をｎ−ヘキサンで抽出して
除去し、水層に６Ｎの塩酸２４ｍｌを加えて中和し、ｎ
−ヘキサンで遊離脂肪酸を抽出した。減圧乾燥後、遊離
脂肪酸１２.６５ｇを得た。この１部をＨＰＬＣ（カラ
ム：カプセルパックＣ１８（資生堂）、溶出：９０％メ
タノール）にかけると、図３のような分離パターンが得
られた。
【００３１】
【発明の効果】本発明によるα−リノレン酸の製造法
は、化学分解ではなく酵素分解という穏やかな方法を利
用しているため、α−リノレン酸の劣化が少なく、酵素
（リパーゼ）を固定化しているため、基質（シソ油）や
酵素からのα−リノレン酸の分離が容易である。本法に
よる固定化酵素は繰り返し利用でき、また固相への固定
化による酵素活性の低下が殆どみられないといった経済
性でも優れている。さらに、本法によりほぼ１００％の
収率でシソ油よりα−リノレン酸を分解することができ
る。
は、化学分解ではなく酵素分解という穏やかな方法を利
用しているため、α−リノレン酸の劣化が少なく、酵素
（リパーゼ）を固定化しているため、基質（シソ油）や
酵素からのα−リノレン酸の分離が容易である。本法に
よる固定化酵素は繰り返し利用でき、また固相への固定
化による酵素活性の低下が殆どみられないといった経済
性でも優れている。さらに、本法によりほぼ１００％の
収率でシソ油よりα−リノレン酸を分解することができ
る。
【図１】固定化リパーゼと未固定のリパーゼのシソ油の
分解活性の比較。
分解活性の比較。
【図２】繰り返し使用した固定化酵素のシソ油の分解活
性の変化。
性の変化。
【図３】アマニ油を加水分解して得られた脂肪酸の分離
パターン。
パターン。
【符号の説明】 ａ Candida rugosa ｂ Rhizopus sp. ｃ Mucor javanicus ｄ Rhizopus niveus
Claims (4)
- 【請求項１】 α−リノレン酸を含有する油脂を酵素リ
パーゼを低密度ポリエチレン微粒子に固定化した固定化
酵素と接触せしめて加水分解し、次いで生成したα−リ
ノレン酸を単離することを特徴とするα−リノレン酸の
製造法。 - 【請求項２】 低密度ポリエチレン微粒子をエタノール
とせしめて膨潤させ、次いで酵素リパーゼと接触せしめ
て調製した固定化酵素を用いる請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 エタノールを低密度ポリエチレン微粒子
１ｇ当り０.５〜３ｍｌの割合で用いる請求項２に記載
の方法。 - 【請求項４】 エタノールで膨潤させた低密度ポリエチ
レン微粒子を酵素リパーゼを溶解した緩衝液と少なくと
も１時間攪拌下に接触せしめて調製した固定化酵素を用
いる請求項２に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26614095A JPH0984590A (ja) | 1995-09-21 | 1995-09-21 | α−リノレン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26614095A JPH0984590A (ja) | 1995-09-21 | 1995-09-21 | α−リノレン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0984590A true JPH0984590A (ja) | 1997-03-31 |
Family
ID=17426875
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26614095A Pending JPH0984590A (ja) | 1995-09-21 | 1995-09-21 | α−リノレン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0984590A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100348568C (zh) * | 2005-10-18 | 2007-11-14 | 中国人民解放军第四军医大学药物研究所 | 椒目提取高纯度α－亚麻酸的方法及其药物应用 |
| CN100363326C (zh) * | 2005-12-30 | 2008-01-23 | 安阳化学工业集团有限责任公司 | 纯度大于80%的α-亚麻酸的生产工艺 |
| US9848623B2 (en) | 2000-01-28 | 2017-12-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by very high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors |
| JP2019054738A (ja) * | 2017-09-20 | 2019-04-11 | 花王株式会社 | 脂肪酸類の製造方法 |
| JP2019094445A (ja) * | 2017-11-24 | 2019-06-20 | 花王株式会社 | アマニ油の製造方法 |
-
1995
- 1995-09-21 JP JP26614095A patent/JPH0984590A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9848623B2 (en) | 2000-01-28 | 2017-12-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by very high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors |
| CN100348568C (zh) * | 2005-10-18 | 2007-11-14 | 中国人民解放军第四军医大学药物研究所 | 椒目提取高纯度α－亚麻酸的方法及其药物应用 |
| CN100363326C (zh) * | 2005-12-30 | 2008-01-23 | 安阳化学工业集团有限责任公司 | 纯度大于80%的α-亚麻酸的生产工艺 |
| JP2019054738A (ja) * | 2017-09-20 | 2019-04-11 | 花王株式会社 | 脂肪酸類の製造方法 |
| JP2019094445A (ja) * | 2017-11-24 | 2019-06-20 | 花王株式会社 | アマニ油の製造方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5204776B2 (ja) | Ｅｐａ濃縮油およびｄｈａ濃縮油の製造方法 | |
| JP4236128B2 (ja) | 精油組成物 | |
| JP5111363B2 (ja) | 高度不飽和脂肪酸濃縮油の製造方法 | |
| CA2627832A1 (en) | Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass | |
| JP2020513750A (ja) | グリセリドの形態におけるｎ−３脂肪酸の酵素的濃縮 | |
| FR2780734A1 (fr) | Procede de production d'analogues de la capsaicine, et procede de production d'huile ou graisses les contenant | |
| EP3848466A1 (en) | Production method for highly unsaturated fatty acid-containing glyceride using lipase hydrolysis reaction | |
| Yao et al. | Co-immobilization of bi-lipases on magnetic nanoparticles as an efficient catalyst for synthesis of functional oil rich in diacylglycerols, phytosterol esters and α-linolenic acid | |
| AU2007250913B2 (en) | Method of recovering lipase activity | |
| JPH08302384A (ja) | 高度不飽和脂肪酸の酵素分画方法 | |
| JP5481903B2 (ja) | 高純度長鎖不飽和脂肪酸メントールエステルの製造方法 | |
| JPH0984590A (ja) | α−リノレン酸の製造法 | |
| JP3840459B2 (ja) | グリセリドおよびその製造方法 | |
| JP2002171993A (ja) | 食品用ステロール脂肪酸エステルの製造方法 | |
| JP3526632B2 (ja) | 高度不飽和脂肪酸含有油脂 | |
| Kosugi et al. | Large‐scale immobilization of lipase fromPseudomonas fluorescens biotype I and an application for sardine oil hydrolysis | |
| Hayes et al. | The isolation and recovery of fatty acids with Δ5 unsaturation from meadowfoam oil by lipase-catalyzed hydrolysis and esterification | |
| JPH11123097A (ja) | ジグリセリドの製造法 | |
| JPH11263750A (ja) | 長鎖不飽和脂肪酸メントールエステルおよび酵素法によるその製造方法 | |
| JPH06287594A (ja) | ドコサヘキサエン酸含有トリグリセリドの製造法 | |
| JP4694939B2 (ja) | 脂肪酸類の製造方法 | |
| JP6645804B2 (ja) | 構造油脂の製造方法 | |
| EP0421867A1 (fr) | Procédé de production d'un mélange de glycérides enrichis en acides gamma linolénique et stéaridonique | |
| JP3853767B2 (ja) | 共役脂肪酸メントールエステルおよびその製造方法 | |
| JP2004248671A (ja) | 共役リノール酸異性体の精製方法およびその用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Effective date: 20050613 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
|
| A521 | Written amendment |
Effective date: 20050811 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050905 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20051205 |