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Eficacia Antimicrobiana
Eficacia Antimicrobiana
Eficacia Antimicrobiana
1. OBJETIVO
2. ALCANCE
Este procedimiento aplica para los productos de... con formas farmacéuticas de base acuosa,
multidosis tópicas y orales.
3. DEFINICIONES
3.4 Control positivo: el control positivo de esta prueba se tiene con el fin de conocer el
número de UFC inoculadas al inicio y posteriormente para verificar que lo que inhibe el
producto si es por los conservantes, mas no por deterioro de la cepa con el tiempo.
4. RESPONSABILIDAD
5.3. El procedimiento debe volver a realizarse si se produce algún cambio en los materiales o
métodos, el producto o los materiales que están en contacto directo con el producto y que
pueda alterar los resultados de la prueba.
5.4. Debe establecerse la capacidad promotora del crecimiento de los medios usados en este
procedimiento.
5.5. Las cepas a utilizar no deben de tener más de cinco pases a partir de la cepa original.
5.6. Usar los cultivos de los siguientes microorganismos:1 Candida albicans (ATCC Nº 10231),
Aspergillus brasiliensis (ATCC Nº 16404), Escherichia coli (ATCC Nº 8739), Pseudomonas
aeruginosa (ATCC Nº 9027) y Staphylococcus aureus (ATCC Nº 6538). Los microorganismos viables
empleados en el procedimiento deben formar parte de un cultivo de crecimiento reciente (p.ej.en fase
logarítmica de crecimiento) a excepción de las esporas A. brasiliensis.
5.8. El área de Estabilidad debe de informar al área de Microbiología a cuáles productos se le debe
realizar el análisis de eficacia antimicrobiana.
5.9. Para realizar dicha prueba se debe haber realizado la validación de la aptitud del método o se puede
de realizar a la par.
6. DESARROLLO
6.2. Procedimiento
6.2.1.1. Los microorganismos viables empleados en el procedimiento deben formar parte de un cultivo
de crecimiento reciente (en fase logarítmica de crecimiento) a excepción de las esporas A. brasiliensis y
se deben cultivar por separado cada cepa bacteriana y fúngica de prueba. A continuación, se describen
las condiciones de cultivo para cada inóculo (ver la Tabla 1)
Escherichia coli Agar Digerido de 32,5 ± 2,5° 18–24 horas 3–5 días
(ATCC Nº 8739) Caseína y Soja
Staphylococcus aureus Agar Digerido de 32,5 ± 2,5° 18–24 horas 3–5 días
(ATCC Nº 6538) Caseína y Soja
Candida albicans Agar Sabouraud 22,5 ± 2,5° 44–52 horas 3–5 días
(ATCC Nº 10231)
Aspergillus brasiliens Agar Sabouraud 22,5 ± 2,5° 6–10 días 6–10 días
(ATCC Nº 16404)
6.2.1.2. Para cosechar los cultivos bacterianos y de C. albicans, emplear solución salina SR
estéril, lavar la superficie de crecimiento y recogerlo en un recipiente adecuado. Para
cosechar las esporas de A. brasiliensis, usar solución salina SR estéril que contenga 0,05%
de polisorbato 80. La suspensión de esporas debe tratarse asépticamente (p.ej., filtración a
través de lana de vidrio estéril) para eliminar hifas.
6.2.1.3. Las suspensiones microbianas que se usan para inoculaciones deben ajustarse
teniendo en cuenta lograr una turbidez de 0.5 en la escala MacFarland para obtener un
recuento microbiano de aproximadamente 1x10 8 UFC/mL. mL. Usar las suspensiones
bacterianas y de levaduras dentro de las 2 horas o dentro de las 24 horas, si se almacenan
entre 2° y 8°. Se puede preparar una suspensión de esporas estable y mantenerla a 2°–8°
hasta 7 días.
6.2.2. Inoculación al producto
6.2.2.1. Tomar cinco envases originales, si hay suficiente volumen de producto disponible en
cada envase y si el envase del producto puede ser penetrado asépticamente, o en cinco
recipientes bacteriológicos estériles con tapa, de tamaño adecuado a los que se ha
transferido un volumen suficiente de producto.
6.2.2.2. Identificar los recipientes con el nombre de cada uno de los microorganismos, fecha
de inoculación, fecha de los tiempos de análisis, según la categoría.
6.2.2.3. Adicionar el volumen de suspensión del inóculo empleado está entre 0,5% y 1,0%
del volumen del producto para minimizar los efectos potenciales en el producto. Por ejemplo,
si el volumen total de la preparación a probar es 120 mL, el volumen del estímulo debe ser
entre 0.6 mL y 1.2 mL (un microorganismo por cada envase). Para el desarrollo de esta
prueba se deben tener en cuenta los microorganismos descritos en la tabla 1.
1 Inyectables, otros parenterales incluyendo emulsiones, productos óticos, productos nasales estériles y
productos oftálmicos preparados con bases o vehículos acuosos
2 Productos empleados de manera tópica preparados con bases o vehículos acuosos, productos nasales no
estériles y emulsiones, incluyendo aquéllos que se aplican a membranas mucosas
6.2.2.6. Tomar 10g o mL del producto inoculado y transferirlo a un frasco que contenga 90 ml
de caldo + el neutralizante validado en la aptitud del método de recuento microbiano para
cada producto, este será la dilucion 10-1 (ejemplo: caldo caso al 1% de tween 80) y realizar
dilución hasta 10-6 con solución salina. El mismo proceso se realiza con el control positivo en
el tiempo 0 con el fin de verificar la carga microbiana, pero haciendo dilución solo con
solución salina
6.2.2.7. Incubar los 5 frascos de producto que contienen los microorganismos a una
temperatura de 22.5° C +/-2.5° C, durante el tiempo que diga cada categoría.
6.2.2.8. Realizar siembra en profundidad de todas las diluciones, por duplicado y adicionar
entre 18 mL – 20 mL de Agar Casoy para las bacterias y de Agar Sabouraud para los hongos
y levaduras. Homogenizar de la siguiente manera: Mover la caja de Petri de arriba hacia
abajo 5 veces, rotar la caja 5 veces en el sentido de las agujas del reloj, mover la caja 5
veces en sentido horizontal y rotar la caja 5 veces en sentido contrario de las agujas del reloj.
Posteriormente dejar solidificar e incubar de 30° C - 35° C las bacterias y 20° C -25° C los
hongos y levaduras.
6.2.2.9. Pasado el tiempo de incubación según tabla 1, retirar las cajas de las incubadoras y
seleccionar las cajas correspondientes a una dilución determinada y que muestren el mayor
número de colonias, menor de 250 para bacterias y 50 para hongos, sacar la media
aritmética de los dos recuentos y multiplicar por el inverso de la dilución. Revisar las cajas de
todas las diluciones para verificar que el número de UFC presentes disminuyen a medida que
aumentan las diluciones.
6.2.2.10. Según la categoría del producto y el tiempo estipulado a verificar (ver tabla 3),
retirar los recipientes de la incubadora y realizar el mismo proceso según numeral 6.2.2.6. y
6.2.2.8.
6.2.2.12. Reportar los resultados obtenidos en cada uno de los tiempos y comparar los
recuentos en cada tiempo con la especificación según la categoría del producto analizado.
Los datos obtenidos quedan registrados en la hoja de trabajo “Resultados de la prueba de
eficacia antimicrobiana”. Y en los anexos descritos en este procedimiento.
6.2.2.12. Para el control negativo, tomar una alícuota del diluyente con neutralizante y
sembrar por duplicado (en dos cajas de Petri), adicionar entre 18 mL - 20 mL de Agar Casoy
e incubar de 30 º C -35º C durante 3 a 5 días y en otras dos cajas entre 18 mL -20 mL de
Agar sabouraud en el caso de levaduras y hongos e incubar a 20 º C - 25º C durante 3 a 7
días.
6.2.2.13. Realizar siembra de análisis a producto terminado (análisis de rutina) según POE,
PCC-024 y reportar los resultados en los anexos descritos en este procedimiento.
En productos de la Categoría 2
Bacterias A los 14 días, una reducción logarítmica de no menos de 2,0 desde el
recuento inicial; y
a los 28 días ningún incremento con respecto al recuento de los 14 días
Levaduras y Hongos Filamentosos Ningún incremento a los 14 y 28 días con respecto al recuento inicial
En productos de la Categoría 3
Bacterias A los 14 días, una reducción logarítmica de no menos de 1,0 desde el
recuento inicial; y
a los 28 días ningún incremento con respecto al recuento de los 14 días
Levaduras y Hongos Filamentosos Ningún incremento a los 14 y 28 días con respecto al recuento inicial
En productos de la Categoría 4
Bacterias, Levaduras y Hongos Ningún incremento a los 14 y 28 días con respecto al recuento inicial
Filamentosos
NOTA: Laexpresión "ningún incremento" en los recuentos se define como no más de 0,5 unidades Log10, por
encima del valor con el que se compara.
ANEXO 1
INOCULO
1ML
108 1ML 1ML 1ML 1ML 1ML
S.aureus
1,2mL 2 3 4 5 6
10- 10- 10- 10- 10-
106 10-1
90 ml Caldo +
neutralizante+
120ml PT +
10g PT con
S.aureus S.aureus
Sembrar 1 ml por duplicado
Nota: esta siembra se debe realizar en todos los tiempos con todos los microorganismos de
prueba.
ANEXO 1
Informe de Análisis Microbiológico de Producto Terminado
(Farmacéutico y Cosmético)
CLIENTE: ____________________________________ PRODUCTO: _____________________________________
DIRECCIÓN: __________________________________ NÚMERO DE LOTE: ________________________________
FECHA INICIO DE ANALISIS: ____________________ N°. CONTROL: MCI_________________________________
FECHA FINAL DE ANALISIS: ____________________ TIEMPO DE ESTABILIDAD: __________________________
FECHA DE FABRICACIÓN: ______________________ FECHA DE VENCIMIENTO: _________________________
DESCRIPCION DE LA MUESTRA: ______________________________________________________________________
RESULTADOS
Resultado Recuento Reducción logarítmica
Fecha Tiempo Microorganismo de UFC/ml desde el recuento inicial
Escherichia coli ATCC Nº 8739
T0 Pseudomonas aeruginosa ATCC Nº 9027
Inmediatament Staphylococcus aureus ATCC Nº 6538
e después de la
Candida albicans ATCC Nº 10231
inoculación
Aspergillus brasiliens ATCC Nº 16404
Escherichia coli ATCC Nº 8739
T1 Pseudomonas aeruginosa ATCC Nº 9027
___ Días Staphylococcus aureus ATCC Nº 6538
después de la Candida albicans ATCC Nº 10231
inoculación Aspergillus brasiliens ATCC Nº 16404
Escherichia coli ATCC Nº 8739
T2 Pseudomonas aeruginosa ATCC Nº 9027
___ Días Staphylococcus aureus ATCC Nº 6538
después de la Candida albicans ATCC Nº 10231
inoculación
Aspergillus brasiliens ATCC Nº 16404
Escherichia coli ATCC Nº 8739
T3 Pseudomonas aeruginosa ATCC Nº 9027
___ Días Staphylococcus aureus ATCC Nº 6538
después de la Candida albicans ATCC Nº 10231
inoculación
Aspergillus brasiliens ATCC Nº 16404
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ESPECIFICACIONES DE ACEPTACIÓN PARA LA EFICACIA ANTIMICROBIANA
Categoría 1
Bacterias: A los 7 días, una reducción logarítmica de no menos de 1,0 desde el recuento
inicial calculado; a los 14 días, una reducción logarítmica de no menos de 3,0 del recuento
inicial; y a los 28 días ningún incremento con respecto al recuento de los 14 días.
Categoría 2
Bacterias: A los 14 días, una reducción logarítmica de no menos de 2,0 desde el recuento
inicial; y a los 28 días ningún incremento con respecto al recuento de los 14 días
Categoría 3
Bacterias: A los 14 días, una reducción logarítmica de no menos de 1,0 desde el recuento
inicial; y a los 28 días ningún incremento con respecto al recuento de los 14 días
Categoría 4
Bacterias, Levaduras y Hongos Filamentosos: Ningún incremento a los 14 y 28 días con
respecto al recuento inicial
NOTA: La expresión "ningún incremento" en los recuentos se define como no más de 0,5
unidades Log10, por encima del valor con el que se compara.
CONCLUSION:
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ANALISTA DE MICROBIOLOGIA DIRECTOR DE CONTROL DE CALIDAD
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Control de Modificaciones