ES2203615T3 - Nucleosidos terapeuticos. - Google Patents

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A CIERTOS ANALOGOS NUCLEOSIDOS DE LA PURINA QUE CONTIENEN UN ANILLO CARBOCICLICO EN LUGAR DEL RESIDUO DE AZUCAR, A LAS SALES, ESTERES Y DERIVADOS FARMACOLOGICAMENTE ACEPTABLES DE LOS MISMOS, A PROCESOS PARA SU PREPARACION, A FORMULACIONES FARMACEUTICAS QUE LOS CONTIENEN Y AL USO DE TALES COMPUESTOS EN TERAPIAS, PARTICULARMENTE PARA EL TRATAMIENTO O PROFILAXIS DE CIERTAS INFECCIONES VIRALES.

Description

Nucleósidos terapéuticos.

La presente invención se refiere a intermedios útiles en la preparación de análogos de nucleósidos de purina que contienen un anillo carbocíclico en lugar del residuo de azúcar.

El virus de la hepatitis B (VHB) es un pequeño virus que contiene ADN que infecta a los seres humanos. Es un miembro de la clase de virus muy relacionados conocidos como hepadnavirus, cada uno de cuyos miembros infecta selectivamente huéspedes mamíferos o aves, como por ejemplo marmotas y patos.

VHB es un patógeno vírico con consecuencias muy importantes a nivel mundial. Es más habitual en los países asiáticos y, principalmente, en el Africa subsahariana. El virus está relacionado etiológicamente con el carcinoma hepatocelular primario y se cree que causa el 80% del cáncer de hígado mundial. En Estados Unidos más de diez mil personas son hospitalizadas debido a la enfermedad por VHB cada año, una media de 250 mueren fulminantemente.

Estados Unidos contiene, en la actualidad, una combinación estimada de 500.000-1 millón de portadores infecciosos. La hepatitis activa crónica se desarrolla en más del 25% de los portadores, y a menudo progresa hacia cirrosis. Se estima que 5000 personas morirán de cirrosis relacionada con el VHB cada año en los Estados Unidos, y que, quizás, 1000 morirán de cáncer de hígado relacionado con el VHB. Aunque existe una vacuna universal para VHB, aún continua la necesidad de compuestos anti-VHB eficaces. La gran persistencia de los portadores infectados, estimada en 220 millones en todo el mundo, no obtendrá ventajas de la vacunación y continuará teniendo un alto riesgo de padecer enfermedades del hígado inducidas por VHB. Esta población de portadores sirve como fuente de infección para individuos susceptibles, perpetuando el caso de la enfermedad particularmente en zonas endémicas o en grupos de alto riesgo como por ejemplo los que abusan de las drogas IV y los homosexuales. Por lo tanto, hay una gran necesidad de agentes antivíricos eficaces, para controlar la infección crónica y reducir la progresión hacia el carcinoma hepatocelular.

Los efectos clínicos de la infección con VHB varían desde dolor de cabeza, fiebre, malestar, náuseas, vómitos, anorexia y dolores abdominales. La replicación del virus se controla, normalmente por la respuesta inmune, durando la recuperación semanas o meses en los seres humanos, pero la infección puede ser más severa, llevando a una enfermedad del hígado crónica persistente como se ha esbozado anteriormente. En "Viral Infections of Humans" (segunda edición, Ed., Evans, A.S. (1982) Plenum Publishing Corporation, Nueva York), Capítulo 12, se describe en detalle la etiología de las infecciones de la hepatitis vírica.

De los virus de ADN, el grupo herpes es la fuente de la mayoría de enfermedades víricas comunes en el hombre. El grupo incluye citomegalovirus (CMV), virus Epstein-Barr (EBV), virus varicela zoster (VZV), virus herpes simplex (HSV) y herpes virus 6 humano (HHV6).

En común con otros herpes virus, la infección con CMV lleva a una asociación de por vida del virus y el huésped y, después de una infección primaria, el virus se puede esparcir durante un buen número de años. Los efectos clínicos varían desde la muerte y enfermedades importantes (microcefalia, hepatosplenemegalia, icteria, oligofrenia) a desarrollo insuficiente, susceptibilidad a infecciones en el pecho y el oído hasta la falta de cualquier efecto obvio de enfermedad. La infección por CMV en pacientes con SIDA es la causa principal de morbilidad, en el 40 a 80% de la población adulta, está presente en una forma latente y se puede reactivar en pacientes inmunocomprometidos.

EBV provoca mononucleosis infecciosa y se sugiere también como el agente causante del cáncer nasofaríngeo, linfoma inmunoblástico, linfoma de Burkitt y leucoplaquia velluda.

VZV provoca varicela y herpes. La varicela es la enfermedad primaria producida en un huésped sin inmunidad. En chicos jóvenes, suele ser una enfermedad suave caracterizada por una erupción vesicular y fiebre. Los herpes es la forma recurrente de la enfermedad que tiene lugar en adultos que se vieron infectados previamente con varicela. Las manifestaciones clínicas de los herpes incluye neuralgia y una erupción cutánea vesicular que es unilateral y dermatomal en distribución. La propagación de la inflamación puede conducir a parálisis o convulsiones y puede llegarse al coma si se ven afectadas las meninges. En pacientes inmunodeficientes, VZV se puede diseminar, provocando enfermedades serias e incluso fatales.

HSV1 y HSV2 son algunos de los agentes infecciones más habituales en el hombre. La mayoría de estos virus pueden persistir en las células neuronales del huésped. Una vez infectado, los individuos tienen el riesgo de que vuelva a ocurrir la manifestación clínica de la infección que puede ser doloroso tanto física como psicológicamente. La infección por HSV se caracteriza, a menudo, por lesiones extensivas de la piel, boca y/o genitales. Las infecciones primarias pueden ser subclínicas aunque tienden a ser más severas en individuos expuestos previamente al virus. Las infecciones oculares por HSV pueden llevar a queratitis o cataratas. La infección en recién nacidos, en pacientes inmunocomprometidos o la penetración de la infección en el sistema nervioso central puede resultar fatal. HHV6 es el agente causante de la roséola infantil (exantema súbito) en niños que se caracteriza por fiebre y la aparición de una erupción después de que baje la fiebre. HHV6 se ha visto implicado también en los síndromes de fiebre y/o erupción y neumonía o hepatitis en pacientes inmunocomprometidos.

Según un primer aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto de fórmula (VIIa), o una mezcla racémica del mismo con su enantiómero de imagen especular:

1

en la que R^{6} es terc-butoxicarbonilo.

Se ha presentado que el análogo carbocíclico de 2'-desoxiguanosina (2'-CDG), es decir, (1R*,3S*,4R*)-2-amino-1,9-dihidro-9-[3-hidroxi-4-(hidroximetil)ciclopentil]-6H-purina-6-ona, es activa contra diversos virus. Por lo tanto, en Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 1989, Vol. 86, pp 8541-8544, se describe que la 2'-CDG inhibe la replicación vírica de la hepatitis B. J. Med. Chem. (1987) 30, pp 746-749 y Biochemical Pharmacology (1990) Vol. 40, nº 7, pp 1515-1522, presentan la 2'-CDG, especialmente el enantiómero (+), como activa frente el virus del herpes simplex de tipo 1 (HSV-1). Además, la 2'-CDG y los análogos generales de la misma se describen junto con una pluralidad de otros compuestos en las siguientes publicaciones de patentes: U.S. 4.543.255 (que hace referencia a HSV1 y HSV2), PCT 90/16671 (que hace referencia a la hepatitis B), EP 219838, PCT 91/13549 (que hace referencia al citomegalovirus (CMV)). Otra publicación relacionada con la 2'-CDG y la preparación de la misma son J. Med. Chem. (1984) 27, pp 1416-1421 y J. Chem. Soc. Chem. Commun. (1987) pp 1083-1084.

Ahora se ha descubierto que ciertos análogos de la 2'-CDG, de los que se hace referencia más adelante, son útiles para el tratamiento o profilaxis de ciertas infecciones víricas. Dichos análogos incluyen compuestos de fórmula (I):

2

en la que R^{1} representa hidrógeno;

alquenil C_{3-8} oxi; cicloalcoxi C_{3-8} (por ejemplo, ciclopentoxi); cicloalquenil C_{4-8} oxi (por ejemplo, ciclopenten-3-iloxi); ariloxi (por ejemplo, fenoxi) o arilalcoxi (por ejemplo, benciloxi) en los que el arilo puede estar sustituido con uno o más alquilo C_{1-4}, halógeno, hidroxi, alcoxi C_{1-4}, amino o nitro; alquenil C_{3-6} tio (por ejemplo, aliltio); cicloalquil C_{3-6} tio; cicloalquenil C_{4-8} tio; ariltio (por ejemplo, feniltio) o arilalquiltio (por ejemplo, benciltio) en los que el arilo puede estar sustituido con uno o más alquilo C_{1-4}, halógeno, hidroxi, alcoxi C_{1-4}, amino o nitro;

un grupo amino, -NR^{2}R^{3}, en el que R^{2} y R^{3} pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente entre hidrógeno; alquilo C_{1-8}; alcoxi C_{1-6}; hidroxialquilo C_{1-6} (por ejemplo, hidroxietilo); alcoxi C_{1-6} alquilo (por ejemplo, metoxietilo); cicloalquilo C_{3-7} (por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo o ciclopentilo) en los que el cicloalquilo puede estar sustituido por uno o más alquilo C_{1-6} o hidroxi; arilo (por ejemplo, fenilo) o aralquilo (por ejemplo, bencilo) en los que el arilo puede estar sustituido con uno o más alquilo C_{1-4}, halógeno, hidroxi, alcoxi C_{1-4}, amino o nitro; alquenilo C_{3-6} (por ejemplo, alilo); o R^{2} y R^{3} forman conjuntamente un anillo de 4 a 8 miembros (por ejemplo, azetidinilo o pirrolidinilo); con tal que R^{2} y R^{3} no pueden ser ambos hidrógeno o ambos alquilo C_{1-8};

4-morfolinilo, 1-piperazinilo o 1-pirrolilo;

o un derivado farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Debe entenderse que la definición anterior engloba los enantiómeros particulares descritos en la fórmula (I), incluyendo tautómeros de purina, en solitario o combinados con sus enantiómeros de imagen especular que no se han descrito. Son preferidos, los enantiómeros por la fórmula (I), los enantiómeros "pertinentes" y, más preferiblemente, el enantiómero pertinente se proporciona sustancialmente exento del enantiómero correspondiente hasta el extremo de que está mezclado, generalmente, con menos del 10% p/p, preferiblemente, menos del 5% p/p, más preferiblemente menos del 2% p/p y más preferiblemente menos del 1% p/p del enantiómero correspondiente basado en el peso total de la mezcla.

Sin embargo, el procedimiento descrito se refiere a la preparación de los enantiómeros contrarios vía los Ejemplos de referencia 8-10, Ejemplos 4-7 y Ejemplo 8.

Cuando en esta memoria descriptiva se hace referencia a un resto alquilo, éste incluye metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo y hexilo.

Además, la referencia a cicloalquilo C_{3-7} incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.

Preferiblemente, R^{1} representa un cicloalquil C_{3-7} amino, más preferiblemente ciclopropilo.

Ejemplos particularmente preferidos de los compuestos de fórmula (I), que presentan una menor toxicidad que la 2'-CDG, son:

a)

(+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-(ciclopropilamino)-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol.

b)

(+)-(1S,2R,4S)-4-(2-amino-6-(ciclopropilmetilamino)-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol.

c)

(+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-(1-pirrolidinil)-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol.

d)

(+)-(1S,2R,4R)-4-[6-(aliltio)-2-amino-9H-purin-9-il]-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol.

e)

(+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-(ciclopentiloxi)-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol.

f)

(+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-(1-azetidinil)-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol.

y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Los compuestos de fórmula (I) se pueden usar en la fabricación de un medicamento para usar en el tratamiento de infecciones víricas como infecciones hepadnavíricas e infecciones por herpes virus. Hasta ahora, se ha demostrado que los compuestos de fórmula (I) son activos contra infecciones por el virus de la hepatitis B (VHB) y el citomegalovirus (CMV), aunque los primeros resultados sugieren también que los compuestos pueden ser activos también contra otras infecciones por herpes virus como por ejemplo EBV, VZV, HSVI y II y HHV6.

Otras afecciones víricas que se pueden tratar se han descrito en la introducción anterior de esta memoria descriptiva.

Además, los compuestos de fórmula (I) se pueden usar de la siguiente manera:

a)

Uso de un compuesto de fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para usar en el tratamiento o profilaxis de una infección hepadnavírica como por ejemplo hepatitis B o una infección por herpes virus como por ejemplo CMV.

b)

Uso de un compuesto de fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de cualquiera de las infecciones o afecciones mencionadas anteriormente.

Por "derivado farmacéuticamente aceptable" se entiende cualquier sal, éster, o sal de dicho éster farmacéutica o farmacológicamente aceptable, de un compuesto de fórmula (I), o de cualquier compuesto que, tras la administración a un receptor, sea capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de fórmula (I) o un metabolito antivíricamente activo o un residuo del mismo.

Los ésteres preferidos de los compuestos de fórmula (I) incluyen ésteres de ácido carboxílico en los que el resto no carbonilo del grupo éster se selecciona entre una cadena alquílica lineal o ramificada, por ejemplo, n-propilo, t-butilo, n-butilo, alcoxialquilo (por ejemplo, metoximetilo), aralquilo (por ejemplo, bencilo), ariloxialquilo (por ejemplo, fenoximetilo), arilo (por ejemplo, fenilo opcionalmente sustituido por halógeno, alquilo C_{1-4} o alcoxi C_{1-4} o amino); ésteres de sulfonato como por ejemplo alquil- o aralquilsulfonilo (por ejemplo, metanosulfonilo); ésteres de aminoácidos (por ejemplo, L-valilo o L-isoleucilo); y ésteres de mono-, di- o trifosfato. Los ésteres de fosfato se pueden esterificar adicionalmente, por ejemplo, un alcohol C_{1-20} o un derivado reactivo del mismo, o mediante 2,3-di(C_{6-24})acilglicerol.

Con respecto a ésteres descritos anteriormente, a menos que se especifique otra cosa, un resto alquilo presente contiene, ventajosamente, de 1 a 18 átomos de carbono, particularmente de 3 a 6 átomos de carbono como por ejemplo el pentanoato. Cualquier resto arilo presente en dichos ésteres comprende, ventajosamente, un grupo fenilo.

Cualquier referencia a cualquiera de los compuestos anteriores incluye también una referencia a una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de ácido carboxílicos orgánica como por ejemplo ácido acético, láctico, tartárico, málico, isetiónico, lactobiónico, p-aminobenzoico y succínico; ácidos sulfónicos orgánicos como por ejemplo ácido metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico y p-toluenosulfónico y ácidos inorgánicos como por ejemplo ácido clorhídrico, sulfúrico, fosfórico y sulfámico.

Los compuestos anteriores de fórmula (I) y sus derivados farmacéuticamente aceptables se pueden utilizar junto con otros agentes terapéuticos para el tratamiento de las infecciones o afecciones anteriores. Ejemplos de dichos agentes terapéuticos adicionales incluyen agentes que son eficaces para el tratamiento de infecciones víricas o afecciones relacionadas como por ejemplo nucleósidos acíclicos (por ejemplo, aciclovir), agentes inmunomoduladores como por ejemplo timosina, inhibidores de la ribonucleótido reductasa como por ejemplo 5-[(2-cloroanilino)tiocarbonil)tiocarbonil)tiocarbonohidrazona de 2-acetilpiridina, interferones como por ejemplo interferón \alpha, 1-\beta-D-arabinofuranosil-5-(1-propinil)uracilo, 3'-azido-3'-desoxitimidina, ribavirina y ácido fosfonofórmico. Los compuestos que componen dicha terapia combinada se pueden administrar simultáneamente, o en formulaciones separadas o combinadas, o en tiempos diferentes, por ejemplo, secuencialmente de manera que se consiga un efecto combinado.

Los compuestos de fórmula (I), a los que también se hace referencia en la presente memoria descriptiva como ingrediente activo, se pueden administrar para terapia por cualquier vía adecuada, incluyendo la vía oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo transdérmica, bucal y sublingual), vaginal y parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica). Debe entenderse que la vía preferida variará con la afección y la edad del receptor, la naturaleza de la infección y el ingrediente activo elegido.

En general, una dosis adecuada para cada una de las afecciones mencionadas anteriormente varía en el intervalo de 0,01 a 250 mg por kilogramo de masa corporal del receptor (por ejemplo, un ser humano) por día, preferiblemente en el intervalo de 0,1 a 100 mg por kilogramo de masa corporal por día y más preferiblemente en el intervalo de 1,0 a 20 mg por kilogramo de masa corporal por día. (A menos que se indique otra cosa, todas las masas del ingrediente activo se calculan como la del compuesto inicial de fórmula (I); para las sales o ésteres del mismo, las masas se aumentan proporcionalmente). La dosis deseada se presenta, preferiblemente, como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más subdosis administradas a intervalos apropiados a lo largo del día. Estas subdosis se pueden administrar en formas de dosificación unitarias que contienen, por ejemplo, de 10 a 1000 mg, preferiblemente de 20 a 500 mg y más preferiblemente de 100 a 400 mg del ingrediente activo por forma de dosificación unitaria.

Idealmente, el ingrediente activo se debe administrar para lograr un pico de concentraciones en plasma del compuesto activo de 0,025 a 100 \muM, preferiblemente de 0,1 a 70 \muM, más preferiblemente de 0,25 a 50 \muM. Esto se puede conseguir, por ejemplo, por la inyección intravenosa de una disolución del 0,1 a 5% del ingrediente activo, opcionalmente en suero fisiológico, o se administra oralmente como un bolo que contiene de 0,1 a 250 mg/kg del ingrediente activo. Los niveles en sangre deseables se pueden contener mediante una infusión continua para proporcionar de 0,01 a 5,0 mg/kg/hora o mediante infusiones intermitentes que contienen 0,4 a 15 mg/kg del ingrediente activo.

Mientras sea posible administrar el ingrediente activo en solitario, es preferible presentarlo como formulación farmacéutica. Las formulaciones comprenden, al menos, un ingrediente activo, junto con uno o más vehículos aceptables del mismo y, opcionalmente, otros agentes terapéuticos. Cada vehículo debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación e inocuos para el paciente. Las formulaciones incluyen las adecuadas para administración oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo transdérmica, bucal y sublingual), vaginal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica). Las formulaciones se pueden presentar, convenientemente, en forma de dosificación unitaria y se pueden preparar por cualquier procedimiento conocido en la técnica farmacéutica. Dichos procedimientos incluyen la etapa de poner en contacto el ingrediente activo con el vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan poniendo en contacto uniforme e íntimo el ingrediente activo con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y después, si fuera necesario, se conforma el producto.

Las composiciones adecuadas para administración transdérmica se pueden presentar como parches concebidos para mantenerse en contacto íntimo con la epidermis del receptor durante un periodo de tiempo prolongado. Dichos parches contienen, adecuadamente, el compuesto activo 1) en una disolución acuosa, opcionalmente tamponada o 2) disuelto y/o disperso en un adhesivo o 3) disperso en un polímero. Una concentración adecuada del compuesto activo es del 1% al 25%, preferiblemente del 3% al 15%. Como posibilidad particular, el compuesto activo se puede administrar a partir del parche por electrotransporte o intoforesis, según se describe de manera general en Pharmaceutical Research, 3 (6), 318 (1986).

Las formulaciones adecuadas para administración oral se pueden presentar como unidades discretas como por ejemplo cápsulas, pastillas o comprimidos, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del ingrediente activo; como polvo o gránulos; como disolución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite. El ingrediente activo se puede presentar también como un bolo, electuario o pasta.

Se puede preparar un comprimido por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos que se comprimen se pueden preparar comprimiendo en una máquina adecuada el ingrediente activo en una forma que fluya libremente como por ejemplo polvo o gránulos, opcionalmente mezclados con un aglutinante (por ejemplo, povidona, gelatina, hidroxipropilmetilcelulosa), lubricante, diluyente inerte, conservante, desintegrante (por ejemplo, glicolato sódico de almidón, providona reticulada, carboximetilcelulosa sódica reticulada), agente tensioactivo o dispersante. Los comprimidos que se moldean se pueden preparar moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecida con un diluyente líquido inerte. Los comprimidos se pueden recubrir o ranurar, opcionalmente, y se pueden formular para proporcionar una liberación lenta o controlada del ingrediente activo de su interior, usando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones variables proporcionando el perfil de liberación deseado. Los comprimidos se pueden proporcionar, opcionalmente, con un recubrimiento entérico, para proporcionar la liberación en partes del intestino distintas del estómago.

Las formulaciones adecuadas para administración tópica en la boca incluyen píldoras que comprenden el ingrediente activo en una base aromatizada, normalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte como por ejemplo gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arábiga; y elixires bucales que comprenden el ingrediente activo en un vehículo líquido adecuado.

Las formulaciones para administración rectal pueden estar presentes como supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato.

Las formulaciones adecuadas para administración vaginal pueden estar presentes como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de pulverización que contienen, además del ingrediente activo, dichos vehículos que en la técnica se sabe que son apropiados.

Las formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen disoluciones para inyección estériles isotónicas, acuosas y no acuosas, que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y solutos que hacen que la disolución sea isotónica con la sangre del receptor pretendido; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones se pueden presentar en envases sellados de dosis unitarias o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales y se pueden almacenar en condiciones de secado por congelación (liofilización) que sólo requiere añadir el vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Las disoluciones y suspensiones para inyecciones extemporáneas se pueden preparar a partir de polvos estériles, gránulos y comprimidos de la clase descrita previamente.

Las unidades de dosificación preferidas para las formulaciones son aquellas que contienen una dosis o unidad diaria, una subdosis diaria, según se ha mencionado anteriormente en la presente memoria descriptiva, o una fracción apropiada de la misma, de un ingrediente activo.

Debe entenderse que, además de los ingredientes mencionados particularmente anteriormente, las formulaciones pueden incluir otros agentes convencionales en la técnica, considerando el tipo de formulación en cuestión, por ejemplo, las adecuadas para administración oral pueden incluir agentes adicionales como por ejemplo agentes edulcorantes, espesantes y aromatizantes.

Los compuestos de fórmula (I) anterior y los derivados de los mismos, en solitario o combinados con sus enantiómeros correspondientes, se pueden preparar mediante un procedimiento que comprende tratar un compuesto de fórmula (Ia) solo o combinado con su enantiómero (en el que Z representa un grupo precursor para dicho grupo R^{1}, estando definido R^{1} como en la fórmula (I)).

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La conversión de (Ia) a (I) se puede llevar a cabo de manera convencional, por ejemplo, por tratamiento de un compuesto de fórmula (Ia) en la que Z representa un grupo saliente (por ejemplo, halo, como un grupo cloro) con una amina apropiada (por ejemplo, metilamina o dimetilamina) o un alcóxido apropiado (por ejemplo, metóxido sódico o n-butóxido potásico) o un alquilsulfuro adecuado (por ejemplo, metilmercáptido sódico) o con hidrogenosulfuro sódico o tiourea, proporcionando la 6-tiopurina (R^{1} = mercapto) que posteriormente se alquila con los agentes de alquilación apropiados (por ejemplo, yoduro de n-propilo, cloruro de alilo y sulfato de dimetilo) en presencia de un equivalente de base (por ejemplo, hidróxido sódico o t-butóxido potásico), proporcionando los compuestos alquiltio correspondientes de fórmula (I).

Los compuestos de fórmula (Ia) utilizados como materiales de partida en el procedimiento anterior se pueden preparar haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (II) solo o combinado con su enantiómero (siendo Z tal y como se ha definido en la fórmula (Ia) y R^{4} y R^{5} son iguales o diferentes y pueden ser hidrógeno, formilo o un grupo aminoprotector como por ejemplo un alcanoílo C_{2-6}, por ejemplo, acetilo o isobutilo, o alcoxi C_{2-6} carbonilo, por ejemplo, terc-butoxicarbonilo) con un derivado reactivo de ácido fórmico (por ejemplo, trietilortoformiato o acetato de dietoximetilo), opcionalmente con un codisolvente como por ejemplo dimetilacetamida o dimetilformamida.

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Se entiende que cuando R^{5} es distinto de hidrógeno o formilo, es necesario que la desprotección se realice, preferiblemente, mediante un tratamiento con ácido mineral acuoso diluido antes del tratamiento con un derivado reactivo de ácido fórmico. En estos casos, la sal de ácido mineral resultante de (II), siendo R^{4} y R^{5} hidrógeno, se transforma eficazmente en los compuestos de fórmula (Ia) por tratamiento con derivados de ácido fórmico, por ejemplo, trietilortoformiato, preferiblemente a 25ºC durante varias horas. Cuando se hacen reaccionar otros compuestos de fórmula (II) con derivados de ácido fórmico, la reacción se lleva a cabo, convenientemente, añadiendo ligeramente más de un equivalente de un ácido fuerte anhidro, por ejemplo, con 1,1 equivalentes de ácido etanosulfónico por equivalente de (II) o 4 equivalentes de ácido clorhídrico acuoso concentrado por equivalente de (II), preferiblemente a 25ºC. Se entiende que el tratamiento posterior de los productos resultantes con ácido acuoso diluido, por ejemplo, ácido clorhídrico 1N a 25ºC durante varias horas separa los derivados formados, por ejemplo, por reacción de los grupos hidroxi con trietilortoformiato.

Los compuestos de fórmula (II) utilizados como materiales de partida en el procedimiento anterior se pueden preparar haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (IIIa) solo o combinado con su enantiómero con una pirimidina sustituida apropiadamente, por ejemplo, 2,5-diamino-4,6-dicloropirimidina o, preferiblemente, derivados de la misma, por ejemplo, N-(4,6-dicloro-5-formamido-2-pirimidinil)isobutiramida según se describe en el documento EP 434450, 26 de junio, 1991. Esta reacción se lleva a cabo, preferiblemente, a 80-120ºC, por ejemplo, a reflujo en n-butanol o t-butanol con 1-2 equivalentes de una base, por ejemplo, trietilamina o carbonato potásico, durante 1 a 3 horas.

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Los compuestos de fórmula (IIIa), solos o combinados con sus enantiómeros, utilizados como materiales de partida según se ha descrito anteriormente, se pueden preparar, por ejemplo, desprotegiendo los compuestos protegidos de fórmula (IIIb) por procedimientos conocidos en la técnica (T.W. Green, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley, New York, 1981, pp 218-287; J.F.W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, New York, 1973, pp 43-93).

Más preferiblemente, cuando R^{6} = terc-butoxicarbonilo (BOC) la desprotección se puede llevar a cabo por reacción con un ácido de pKa menor de tres según se sabe en la técnica y que se ilustra a continuación. El aminodiol de estructura (IIIa) se obtiene, por tanto, en forma de su sal, que es adecuada para usarla en la reacción para preparar compuestos de fórmula (I). Se obtiene la base libre del aminodiol (IIIa), por ejemplo, poniendo en contacto la sal con una resina de intercambio aniónico de tipo amonio cuaternario en su forma hidróxido, según se ilustra a continuación.

Los compuestos de fórmula (IIIb) utilizados como materiales de partida que se han descrito anteriormente se pueden preparar, por ejemplo, por destilación de los compuestos de fórmula (IVa) protegidos por reacción con ión fluoruro, como se sabe en la técnica y se ilustra a continuación (T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley, New York, 1981, pp 218-287; J.F.W. McOmie, "Protective Groups invención Organic Chemistry", Plenum Press, New York, 1973, pp. 43-93; W.T. Markiewicz, Tetrahedron Letters 1980, 21, 4523-4524); W.T. Markewicz y M. Wiewiorowski, Nucleic Acids Research Special Publication nº 4, 3185-3188; W.T. Markewicz, J. Chem. Research (S) 1979, 24-25; C.H.M. Verdegaal, P.L. Jansee, J.F.M. de Rooij, G. Veeneman y J.H. VanBoom, Recueil 1981, 100, 200-204; C. Gioeli, M. Kwiatkowski, B. Oberg y J.B. Chattopadhyaya, Tetrahedron Letters 1981, 22, 1741-1744).

6

Es sorprendente, a la vista de la técnica anterior que sea suficiente sustancialmente menos de dos equivalentes de ión fluoruro para llevar a cabo la desprotección. En el caso actual, se encontró que era suficiente aproximadamente un equivalente de fluoruro de tetraetilamonio.

Los compuestos de fórmula (IVa) utilizados como materiales de partida que se han descrito anteriormente se pueden preparar, por ejemplo, mediante una primera tiocarbonatación de los compuestos de fórmula (IVc) para preparar tiocarbonatos de fórmula (IVb), y después una reducción de los tiocarbonatos de fórmula (IVb) con, por ejemplo, hidruro de tributilestaño tal y como se sabe en la técnica. (M.J. Robins y J.S. Wilson, J. Am. Chem. Soc. 1981, 103, 932-933; M.J. Robins, J.S. Wilson y F. Hansske, J. Am. Chem. Soc. 1985, 105, 4059-4065; W. Hartwing, Tetrahedron 1983, 39, 2609-2645 y las referencias en los mismos; D.H.R. Barton, D. Crich, A. Löbberding y S.Z. Zard, Tetrahedron 1986, 42, 2329-2338; D.H.R. Barton y S.W. McCombie, J. Chem. Soc., Perkin, 1975, 1574-1585; D.H.R. Barton, W.B. Motherwell y A. Stange, Synthesis 1981, 743-745; N. Katagiri, M. Nomura, M. Muto y C. Kaneko, Chem. Pharm. Bull. 1991, 39, 1682-1688) y se ilustra a continuación.

Los compuestos de fórmula (IVc) utilizados como materiales de partida que se han descrito anteriormente se pueden preparar, por ejemplo, por protección selectiva mediante reacción de los compuestos de fórmula (V) con disiloxano de 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropilo tal y como se sabe en la técnica (W.T. Markiewicz, N.S. Padyukova, Z. Samek, J. Smrt, Collection Czechoslov. Chem. Commun. 1980, 45, 1860-1865; W.T. Markiewicz, Tetrahedron Letters 1980, 21, 4523-4524; W.T. Markiewicz y M. Wiewiorowski, Nucleic Acids Research Special Publication nº 4, 3185-3188; W.T. Markiewicz, J. Chem. Research (S) 1979, 24-25; C.H.M. Verdegaal, P.L. Jansse, J.F.M. deRooij, G. Veeneman y J.H. vanBoom, Recueil 1981, 100, 200-204; C. Gioeli, M. Kwiatkowski, B. Oberg y J.B. Chattopadhyaya, Tetrahedron Letters 1981, 22, 1741-1744) y se ilustra a continuación.

7

R^{6} = un grupo protector tal y como se define más adelante

Los compuestos de fórmula (V) utilizados como materiales de partida descritos anteriormente se pueden preparar, por ejemplo, por cis-dihidroxilación de compuestos de estructura (VIIa) usando una cantidad catalítica de tetróxido de osmio y N-metil morfolina-N-óxido como si se sabe en la técnica (V. VanRheenen, R.C. Kelly y D.Y. Cha, Tetrahedron Letters 1976, 1973-1976; M. Schröder, Chem. Rev. 1980, 80, 187-213). La reacción de cis-hidroxilación da como resultado una mezcla de dos isómeros geométricos de estructura (VI) y (V). La separación de estos isómeros se puede conseguir mediante procedimientos convencionales como por ejemplo cromatografía o cristalización selectiva. Los isómeros en los que R^{6} es BOC se separan más fácilmente por cristalización, tal y como se ilustra a continuación.

8

Los compuestos de fórmula (VIIa) utilizados como materiales de partida que se han descrito anteriormente se pueden preparar, por ejemplo, protegiendo el compuesto de fórmula (VIIb) por procedimientos conocidos en la técnica (T.W. Green, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenam Press, New York, 1973, pp. 43-93). Los preferidos son R^{6} = alcanoílo C_{2-6} (por ejemplo, acetilo) y alquiloxicarbonilo C_{2-6} (por ejemplo, terc-butoxicarbonilo, BOC). El más preferido es R^{6} = BOC, que se ilustra a continuación.

El (-)-aminoalcohol resuelto de fórmula (VIIb) o un derivado protegido (VIIa) se puede usar ahora para sintetizar nucleósidos carbocíclicos resueltos, (por ejemplo, (1S,4R)-4-(2-amino-6-(ciclopropilamino)-9H-purin-9-il)-2-ciclopenteno-1-metanol) tal y como se ilustra en el documento EP 434450 (US 5.087.697) y en los ejemplos posteriores. Por lo tanto, se puede obtener un enantiómero de un nucleósido carbocíclico aplicando reacciones que forman la base pirimidínica o purínica correspondiente de un nucleósido deseado, tal y como se sabe en la técnica y se ilustra en la presente memoria descriptiva.

Se entenderá que las etapas desde la formación del (-)-aminoalcohol resuelto de fórmula (VIIb) hasta la formación de (1S,4R)-4-(2-amino-6-(ciclopropilamino)-9H-purin-9-il)-2-ciclopenteno-1-metanol se describen en el documento EP 434450 (US 5.087.697), en particular, los Ejemplos 1-5, 15-19, 26-28 y se describen en la presente memoria descriptiva (Ejemplos de Referencia 23-26).

Otro aspecto de la presente invención incluye un procedimiento de preparación de (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-metanol, compuesto (VIIb), su enantiómero de imagen especular y mezclas de dichos enantiómeros. Cada enantiómero de imagen especular se puede usar para preparar de manera convencional, nucleósidos carbocíclicos antivíricos de la configuración enantiomérica correspondiente, por ejemplo, según se describe en Molec. Pharm. 37, 395-401 (1990) y J. Med. Chem. 30, 746-749 (1987). Este procedimiento comprende reducir el ácido (-)-(2S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-carboxílico, compuesto (VIII), su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros.

9

Es preferible que el compuesto (VIII) o su imagen especular estén en forma de sal, (VIIIa) o (VIIIb). Las referencias posteriores a (VIII), (VIIIa) y (VIIIb) también incluyen los enantiómeros de imagen especular de los mismos y mezclas de los enantiómeros correspondientes. Las sales (VIIIa) adecuadas incluyen las sales de litio, sodio, potasio, magnesio o calcio. La más preferida es la sal de sodio (W = Na en la estructura (VIIIa)). Las sales adecuadas (VIIIb) son aquellas en las que el conjugado ácido (XH) de la sal posee un pKa menor de dos. Las sales adecuadas (VIIIb) incluyen, por lo tanto, clorhidrato, sulfato, bisulfato, bromhidrato o sal de ácido sulfónico orgánico.

También es preferible que la sal (VIIIb) sea una sal de ácido sulfónico orgánico. Es más preferible que la sal de ácido sulfónico orgánico sea una sal de ácido alquil C_{1-6} sulfónico (por ejemplo, metanosulfonilo) o una sal de ácido aril sulfonilo (por ejemplo, toluenosulfonilo). En la estructura (VIIIb), X representaría, más preferiblemente, por ejemplo, un grupo metanosulfonato o toluenosulfonato, respectivamente.

El agente reductor para transformar (VIII), (VIIIa) o (VIIIb) en (VIIb) o para transformar los enantiómeros de imagen especular respectivos es, preferiblemente, un hidruro de aluminio, como por ejemplo hidruro de diisobutilaluminio, hidruro de bis(2-metoxietoxi)aluminio sódico, hidruro de litio y aluminio, hidruro de sodio y aluminio, tri-terc-butoxialuminohidruro de litio, etc. El más preferido es el hidruro de litio y aluminio (D.A. Dickman, A.I. Meyers, G.A. Smith y R.E. Cawley, Org. Syn. Coll. Vol VII, 530-533). Ventajosamente, también se usa una fuente de ión fluoruro como por ejemplo NaF (H. Yamamoto y K. Maruoka, J. Org. Chem. 1981, 103, 4186-4194) se usa también para ayudar en la liberación del producto del aluminio que lo contamina después de la reacción de reducción. La trietanolamina (J. Powell, N. James y S.J. Smith, Synthesis, 1986, 338-340) se puede usar en lugar del fluoruro, pero es menos preferida.

El disolvente para la reacción de reducción es, preferiblemente, un éter como por ejemplo THF. Es preferible también añadir agua (1-15% p/p) al éter antes de aislar el producto, para aumentar la solubilidad de (VIIb).

El compuesto (VIIb), su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros, se puede preparar mediante un procedimiento que comprende hacer reaccionar (-)-2-azabiciclo[2.2.1]PET-5-en-3-ona (IX), su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros con uno o más equivalentes de un ácido y uno o más equivalentes de agua. Los ácidos preferidos son los que tienen un pKa menor de dos, más preferiblemente son ácidos que dan directamente las sales (VIIIb) descritas anteriormente que incluyen, por ejemplo, ácido metanosulfónico y ácido toluenosulfónico.

10

La temperatura de reacción puede variar entre 10ºC y 120ºC, pero más preferiblemente varía entre 30ºC y 70ºC.

La elección del disolvente para esta reacción de hidrólisis puede ser bastante variada, desde agua hasta disolventes hidrocarbonados. El disolvente preferido es el que se usará en la etapa de reducción posterior. En este caso, el intermedio (VIII o VIIIa o VIIIb) se puede usar directamente, sin aislamiento.

El compuesto (VIII) y las sales (VIIIa) se preparan a partir de la sal (VIIIb), poniéndola en contacto con una base y aislando el producto por precipitación, cristalización, evaporación, etc. como saben los expertos en la técnica. Para preparar (VIII) se puede usar casi cualquier base con un pKa mayor de 3,5. La sal (VIIIa) se puede preparar poniendo en contacto (VIIIb) con una base que contiene (W+). Por ejemplo, la sal de sodio se puede preparar poniendo en contacto (VIIIb) con aproximadamente dos equivalentes de la base hidróxido sódico.

En la presente invención, también es posible eliminar fácilmente el color y las impurezas de la sal del intermedio (VIII) lavando en el tanque (patente de los Estados Unidos 4.734.194, 29 de marzo, 1988). Bajo el protocolo ilustrado a continuación, se encontró que las sales de toluenosulfonato y metanosulfonato tienen la ventaja particular de que se filtran excepcionalmente rápido.

La sal de ácido sulfónico del compuesto (VIII), su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros, se preparará llevando a cabo una reacción de hidrólisis oxidativa sobre el aducto de Diels-Alder entre el ciclopentadieno y el sulfonilcianuro de alquilo o arilo (X).

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en el que R^{7} es alquilo o arilo C_{1-6}, su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros. Es preferible que R^{7} sea metilo, fenilo o tolilo. El más preferido es tolilo.

En la bibliografía (J.C. Jagt y A.M. VanLeusen, J. Org. Chem. 1974, 39, 564-566) se muestra que el aducto (X) de Diels-Alder es un precursor particularmente conveniente para la lactama (IX) mediante una reacción de hidrólisis. Por lo tanto, aplicando una reacción de hidrólisis oxidativa al aducto (X) de Diels-Alder, se puede obtener directamente el compuesto (VIIIb) en su forma más preferida, y se evita una etapa en el proceso global para preparar el compuesto (VIIb).

La reacción de hidrólisis oxidativa se llevó a cabo poniendo en contacto el aducto (X) de Diels-Alder con al menos un equivalente de agua, al menos un equivalente de un agente oxidante y, preferiblemente, una cantidad catalítica de un ácido.

La elección del disolvente puede ser muy variada. Es preferible utilizar un disolvente que posea un riesgo bajo cuando se combina con el agente de oxidación. Es más preferible usar agua como disolvente y como agente hidrolítico.

Los agentes de oxidación adecuados son los que no oxidan un doble enlace. Los preferidos son los peróxidos, el más preferido es el peróxido de hidrógeno. Se pueden usar de uno a cinco equivalentes del agente oxidante.

En la realización preferida, en la que se usa una cantidad catalítica de ácido, se puede usar cualquier ácido de pKa menor de 3, aunque es preferible que el ácido utilizado sea el mismo que la sal del compuesto (VIIIb) que se forma a partir del aducto (VIIIb) de Diels-Alder. Por ejemplo, si R = tolilo en el aducto (X), la hidrólisis oxidativa da la sal de toluenosulfonato del compuesto (VIIIb). En este caso, el ácido toluenosulfónico sería el ácido preferido. Si R = metilo en el aducto (X), el ácido preferido sería el ácido metanosulfónico, etc. La cantidad de catalizador ácido puede variar entre 0 y 50% molar con respecto al aducto (X) de Diels-Alder.

Todas las estructuras mostradas anteriormente pretenden representar el racemato junto el enantiómero sencillo descrito. Por lo tanto, la presente invención pretende englobar tanto los racematos como los enantiómeros puros, sustancialmente exentos de sus isómeros de imagen especular.

Se puede convertir un compuesto de fórmula (I) es un éster farmacéuticamente aceptable por reacción con un agente de esterificación apropiado, por ejemplo, un haluro o anhídrido ácido. El compuesto de fórmula (I), incluyendo los ésteres de los mismo, se puede transformar en sales farmacéuticamente aceptables del mismo de manera convencional, por ejemplo, por tratamiento con un ácido apropiado. Un éster o una sal de un éster de fórmula (I) se puede transformar en el compuesto inicial, por ejemplo, por hidrólisis.

Los siguientes Ejemplos pretenden ilustrar. El término "ingrediente activo" tal y como se usa en los ejemplos se refiere a un compuesto de fórmula (I) o a un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo.

Ejemplo de Referencia A

Formulaciones en forma de comprimido

Las siguientes formulaciones A y B se prepararon mediante granulación en húmedo de los ingredientes con una disolución de povidona, seguida de la adición de estearato de magnesio y compresión.

Formulación A

		mg/comprimido	mg/comprimido
(a)	Ingrediente activo	250		250
(b)	Lactosa B.P.	210		26
(c)	Povidona B.P.	15		9
(d)	Glicolato sódico de almidón	20		12
(e)	Estearato de magnesio	5		3
		\overline{500}		\overline{300}

Formulación B

		mg/comprimido	mg/comprimido
(a)	Ingrediente activo	250		250
(b)	Lactosa	150		-
(c)	Avicel pH 101	60		26
(c)	Povidona B.P.	15		9
(d)	Glicolato sódico de almidón	20		12
(e)	Estearato de magnesio	5		3
		\overline{500}		\overline{300}

Formulación C

		mg/comprimido
(a)	Ingrediente activo	100
(b)	Lactosa	200
(c)	Almidón	50
(d)	Povidona	5
(e)	Estearato de magnesio	4
		\overline{359}

Las siguientes formulaciones, D y E, se prepararon por compresión directa de los ingredientes mezclados. La lactosa usada en la formulación E era del tipo de compresión directa (Dairy Crest - "Zeparox").

Formulación D

	mg/comprimido
Ingrediente activo	250
Almidón pregelatinizado NF15	150
	\overline{400}

Formulación E

	mg/comprimido
Ingrediente activo	250
Lactosa	150
Avicel	100
	\overline{500}

Formulación F (formulación de liberación controlada)

La formulación se preparó mediante granulación en húmedo de los ingredientes (a continuación) con una disolución de povidona seguida de la adición de estearato de magnesio y compresión.

		mg/comprimido
(a)	Ingrediente activo	500
(b)	Hidroxipropilmetilcelulosa	112
	(Methocel K4M Premium)
(c)	Lactosa B.P.	53
(d)	Povidona B.P.C.	28
(e)	Estearato de magnesio	7
		\overline{700}

Ejemplo de Referencia B

Formulaciones en forma de cápsula Formulación A

Se preparó una formulación en forma de cápsula mezclando los ingredientes de la Formulación D en el Ejemplo de Referencia A anterior, llenando una cápsula dura de gelatina de dos partes. La formulación B (debajo) se preparó de manera similar.

Formulación B

		mg/cápsula
(a)	Ingrediente activo	250
(b)	Lactosa B.P.	143
(c)	Glicolato sódico de almidón	25
(d)	Estearato de magnesio	2
		\overline{420}

Formulación C

		mg/cápsula
(a)	Ingrediente activo	250
(b)	Macrogol 4000 B.P.	350
		\overline{600}

Las cápsulas se prepararon fundiendo el macrogol 4000 BP, dispersando el ingrediente activo en el fundido y se rellena con el fundido una cápsula dura de gelatina de dos partes.

Formulación D

	mg/cápsula
Ingrediente activo	250
Lecitina	100
Aceite de maní	100
	\overline{450}

Las cápsulas se prepararon dispersando el ingrediente activo en la lecitina y el aceite de maní y rellenando con la dispersión cápsulas blandas y elásticas de gelatina.

Formulación E (cápsula de liberación controlada)

La siguientes formulación en forma de cápsula de liberación controlada se preparó extruyendo los ingredientes a, b y c usando una extrusora, seguido de la esferonización del extruído y secado. Los gránulos secos se recubrieron entonces con una membrana controladora de la liberación (d) y se llenaron en una cápsula dura de gelatina, de dos piezas.

		mg/cápsula
(a)	Ingrediente activo	250
(b)	Celulosa microcristalina	125
(c)	Lactosa B.P.	125
(d)	Etilcelulosa	13
		\overline{513}

Ejemplo de referencia C

Formulación inyectable Formulación A

Ingrediente activo	0,200 g
Disolución de ácido clorhídrico, 0,1 M	c.s. a pH 4,0 a 7,0
Disolución de hidróxido sódico, 0,1 M	c.s. a pH 4,0 a 7,0
Agua estéril	c.s. a 10 ml

El ingrediente activo se disolvió en la mayoría del agua (35ºC-40ºC) y el pH se ajustó entre 4,0 y 7,0 con el ácido clorhídrico o el hidróxido sódico, según correspondiera. Se preparó el lote hasta el volumen deseado con agua y se filtró a través de un filtro microporoso estéril al interior de un vial estéril de 10 ml de vidrio ambarino (tipo 1) y se selló con cierres y sobrecierres estériles.

Formulación B

Ingrediente activo	0,125 g
Tampón de fosfato estéril, exento de pirógenos, pH 7	c.s. hasta 25 ml

Ejemplo de referencia D

Inyección intramuscular

Ingrediente activo	0,20 g
Alcohol bencílico	0,10 g
Glicofurol	1,45 g
Agua para inyección	c.s. hasta 3,00 ml

El ingrediente activo se disolvió en el glicofurol. Después se añadió el alcohol bencílico y se disolvió, y se añadieron 3 ml de agua. Después, se filtró la mezcla a través de un filtro microporoso estéril y se selló en viales estériles de 3 ml de vidrio ambarino (tipo 1).

Ejemplo de referencia E

Jarabe

Ingrediente activo	0,2500 g
Disolución de sorbitol	1,5000 g
Glicerol	2,0000 g
Benzoato sódico	0,0050 g
Aroma, melocotón 17,42,3169	0,0125 ml
Agua purificada	c.s. a 5,0000 ml

El ingrediente activo se disolvió en una mezcla de glicerol y la mayor parte del agua purificada. Después se añadió una disolución acuosa del benzoato sódico a la disolución, seguida de la adición de la disolución de sorbitol y finalmente el aromatizante. El volumen se preparó con agua purificada y se mezcló bien.

Ejemplo de referencia F

Supositorio

	mg/supositorio
Ingrediente activo (63 lm)*	250
Grasa dura, BP (Witepsol H15 - Dynamit Nobel)	1170
	\overline{2020}

* El ingrediente activo se usó como un polvo en el que al menos el 90% de las partículas tenían un diámetro de 63 lm o menor.

Se fundió un quinto del Witepsol H15 en un recipiente con camisa de vapor a 45ºC como máximo. El ingrediente activo se criba a través de un tamiz de 200 lm y se añadió a la base fundida con mezcla, usando un silverson equipado con un cabezal de corte, hasta conseguir una dispersión sin grumos. Se añadió el resto de Witepsol H15 a la suspensión, manteniendo la mezcla a 45ºC y agitando para asegurar una mezcla homogénea. Se hizo pasar toda la suspensión a través de una criba de 250 lm de acero inoxidable y, con agitación continua, se dejó enfriar hasta 40ºC. A una temperatura de 38ºC a 40ºC, se rellenaron 2,02 g de la mezcla en moldes plásticos adecuados de 2 ml. Los supositorios se dejaron enfriar hasta temperatura ambiente.

Ejemplo de referencia G

Pesarios

	mg/pesario
Ingrediente activo (63 lm)	250
Dextrosa anhidra	380
Almidón de patata	363
Estearato de magnesio	7
	\overline{1000}

Los ingredientes anteriores se mezclaron directamente y los pesarios se prepararon por compresión directa de la mezcla resultante.

Ensayo antivírico

Se ensayó el citomegalovirus humano (HCMV) en monocapas de células MRCS (pulmón embrionario humano) en bandejas multipocillo. Se determinó la actividad de los compuestos en el ensayo de reducción de placa, en la que se infecta una monocapa celular con una suspensión de HCMV. Después se incorpora un intervalo de concentraciones del compuesto a ensayar (de molaridad conocida) en la sobrecapa de carboximetilcelulosa. Los números de placa de cada concentración se expresan como porcentaje del control y se dibuja una curva dosis-respuesta. A partir de esta curva se estima la concentración inhibidora al 50% (CI_{50}).

Actividad anti-HCMV

Compuesto	CI_{50} (\muM)
Ejemplo de referencia 15	3,1
Ejemplo de referencia 16	2,8

Ensayo de toxicidad

Se ensayó la toxicidad de los compuestos de fórmula (I) en células progenitoras de médula ósea humana, in vitro, mediante el procedimiento de Domsife, R.E. et al., 1991, Antimicrob. Agents Chemother., 35: 322-328. Se llevaron a cabo tres ensayos por separado usando médula de tres donantes diferentes.

\newpage

Toxicidad celular I_{50} (\muM)^{+}

Compuesto	CFU-GM	BFU-E
Ej. 22	34 \pm 14	> > 50
Ej. 23	14 \pm 1	55 \pm 15
2'-CDG	0,4 \pm 0,3	4 \pm 2

+ 50% inhibición de células progenitoras de médula ósea.

Ejemplo de referencia 1

Metanosulfonato del ácido (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-carboxílico

Se filtró una disolución de (-)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-en-3-ona (97,45 g, 0,8929 mol, Enzymatix Ltd.) en tetrahidrofurano (500 ml) y se calentó hasta 35ºC. Se añadió una disolución de ácido metanosulfónico (63,7 ml, 0,9817 mol) en agua (24,1 ml, 1,34 mol) durante el transcurso de 1,5 horas de manera que la exoterma resultante no excede de 45ºC. La suspensión resultante se calentó a 60ºC durante tres horas, después se dejó enfriar hasta temperatura ambiente durante el transcurso de 15 horas. La suspensión se filtró y la torta se lavó dos veces con tetrahidrofurano anhidro (200 ml). Se eliminó una muestra analítica de la torta húmeda y se secó dando el compuesto del título como un sólido blanco (1,264 g); p.f. 167-169,2ºC; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,6 (a s, 1H, CO_{2}H), 8,04 (a s, 3H, NH_{3}^{+}), 6,10 (dt, J = 5,6, 2,0, 2,0 Hz, 1H, vinilo), 5,85 (dt, J = 5,3, 2,3, 2,3 Hz, 1H, vinilo), 4,19 (a s, w_{1/2} = 20 Hz, 1H, H alílico), 3,61 (m, w_{1/2} = 22 Hz, 1H, H alílico), 2,53 quinteto, J = 5,3 Hz (solapamiento con el pico DMSO), ½ CH_{2}), 2,39 (s, 3H, CH_{3}SO_{3}H), 1,93 (dt, J = 6,7, 6,7, 13,7 Hz, 1H, ½ CH_{2}); [\alpha]^{20}_{578}-87,4º, [\alpha]^{20}_{546}-101,2º, [\alpha]^{20}_{436}-186,7º, [\alpha]^{20}_{365}-316,2º (c = 1,42, metanol); CL-EM (CH_{4}): 128 (M+1); El-EM: 127 (M).

Análisis calculado para C_{7}H_{13}NO_{5}S: C, 37,66, H, 5,87; N, 6,27; S, 14,36.

Encontrado: C, 37,65; H, 5,88; N, 6,30; S, 14,44.

El resto de la torta húmeda se usó directamente en el siguiente ejemplo.

Ejemplo 1 (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopentano-1-metanol

La torta de metanosulfonato de ácido (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-carboxílico humedecida en tetrahidrofurano preparada en el ejemplo anterior se suspendió en tetrahidrofurano seco (400 ml) y se transfirió mediante una cánula a una disolución de agitación rápida de hidruro de litio y aluminio en tetrahidrofurano (1,0 molar, 1600 ml, 1,6 mol, Aldrich), se enfrió en un baño de hielo/acetona. La velocidad de transferencia se limitó para controlar la velocidad de liberación del gas y para mantener la temperatura entre 0º y 10ºC (tiempo total de adición, 1,5 horas). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante el transcurso de dos horas, y después se sometió a reflujo durante 16 horas.

Aproximadamente, se eliminaron 1,6 l de disolvente por destilación, la suspensión resultante se enfrió en un baño de hielo-acetona, después se trató con dietiléter (seco, 1 l) y fluoruro sódico (403,3 g, 9,605 mol, Aldrich). Se añadió lentamente agua (86 ml, 4,8 mol) a una velocidad tal (tres horas) que la temperatura se mantuvo por debajo de 5ºC y el desprendimiento de hidrógeno fue moderado. La suspensión resultante se filtró y la torta se lavó con tetrahidrofurano (200 ml) y después con un 7% de agua-tetrahidrofurano (500 ml). El análisis cuantitativo por HPLC (véase Ejemplo 3, a continuación) del filtrado mostró que contenía 60,04 g del compuesto del título. La torta se resuspendió en un 7% de agua-tetrahidrofurano (1 l) durante media hora, se filtró y se lavó con un 7% de agua-tetrahidrofurano (400 ml) y después con un 10% de agua-tetrahidrofurano (300 ml). El análisis cuantitativo por HPLC (véase Ejemplo 2, a continuación) del filtrado mostró que contenía 26,70 g del compuesto del título. La torta se resuspendió en metanol
(1 l) durante 16 horas, se filtró y se lavó con metanol (500 ml). El análisis cuantitativo por HPLC (véase Ejemplo 3, a continuación) del filtrado mostró que contenía 4,09 g del compuesto del título. El rendimiento total del compuesto del título fue, por lo tanto, de 90,83 g, 0,8027 mol, o el 90,5% del rendimiento teórico para la muestra analítica eliminada.

Ejemplo 2 Análisis de (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-metanol y su enantiómero (+)-(1R,4S)-4-amino-2-ciclopenteno-1-metanol

Se caracterizaron muestras de los compuestos del título por el procedimiento de Brückner, H., Wittner, R. y Godel, H., "Automated Enantioseparation of Amino Acids by Derivatization with o-Phthaldialdehyde and N-Acylated Cysteines", J. Chrom., 476(1989) 73-82. Usando o-phthaldialdehído y N-acetil-L-cisteína como reactivos de derivatización. En la separación cromatográfica se usó una columna Optima II ODS 100 x 4,5 mm, de 3 \mum (III Suplies Co., Meriden, CT) y un gradiente de elución de 0,9 ml/minutos usando inicialmente un 100% de tampón de acetato sódico, 40 mM, pH 6,5, con una rampa lineal del 18% de acetonitrilo durante 15 minutos y posteriormente se mantuvo al 18% de acetonitrilo durante 15 minutos. La detección se realizó a 338 nm. Las muestras se resolvieron en tampón de borato 0,1 molar, pH 10,4. La identidad y pureza de las muestras se estableció por comparación con patrones de autentificación (véase el documento EP 434450 (26 de junio de 1991)). El tiempo de retención del isómero (1S,RS) fue de aproximadamente 21 minutos. El tiempo de retención del isómero (1R,4S) fue de aproximadamente 22 minutos.

Ejemplo 3 (-)-(1R,4S)-N-[4-hidroximetil)-2-ciclopenten-1-il]carbamato de terc-butilo

El primer filtrado del Ejemplo 1, que contenía (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-metanol se enfrió en un baño de hielo-acetona y se trató con dicarbonato de di-terc-butilo (199,42 g, 0,9265 mol, Aldrich). La mezcla se concentró a vacío hasta un volumen de 300 ml, y se añadió al segundo filtrado del Ejemplo 1, que mientras tanto se había enfriado en un baño de hielo-acetona. La mezcla se dejó agitar y calentar hasta temperatura ambiente durante el transcurso de 18 horas, durante las que el gas evolucionó y se formó una disolución transparente. Esta disolución se combinó con el último filtrado del Ejemplo 1 que se evaporó a vacío hasta dar una mezcla de aceite y sólidos. La disolución resultante se evaporó a vacío hasta dar un aceite. El aceite se dividió entre acetato de etilo (300 ml) y tampón de fosfato (100 ml de dihidrogenofosfato potásico 1,5 molar ajustado a pH 7,0 con un 50% de hidróxido sódico-agua). Se separaron las fases, la fase acuosa se reextrajo dos veces con acetato de etilo (200 ml). Las fases orgánicas se secaron sobre sulfato sódico y se filtraron a través de gel de sílice (50 g). El disolvente se eliminó a vacío dando un aceite (220,78 g) que se recogió en hexanos (300 ml). Se añadió una cantidad mínima de acetato de etilo (aproximadamente 50 ml) para disolver el aceite, y la disolución se dejó cristalizar durante el transcurso de tres días. Los cristales se filtraron, se lavaron con un 20% de acetato de etilo/hexanos y se secaron por succión hasta un peso constante (156,1 g, 0,732 mol, 82,6% del teórico) del compuesto del título; p.f. 73-73,7ºC; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 6,72 (d, J = 7,9 Hz, 1H, NH), 5,80 y 5,60 (dos m, 2H, CH=CH), 4,59 (t, J=5,2Hz, 1H, OH), 4,45 (m, 1H, CHN), 3,35 (m, solapamiento H_{2}O, CH_{2}O), 2,60 (m, 1H, CH), 2,30 (m, 1H, ½ CH_{2}), 1,40 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}), 1,2 (m, 1H, ½ CH_{2}); [\alpha]^{20}_{589}-2,78º, -[\alpha]^{20}_{578}-2,84º, [\alpha]^{20}_{546}-3,06º, [\alpha]^{20}_{436}-3,39º, [\alpha]^{20}_{365}-0,95º (c = 5,07, metanol); CL-EM (CH_{4}): 214 (M+1); TLC (sílice, 10% metanol-cloroformo, visualización con yodo), R_{f} = 0',51.

Análisis calculado para C_{11}H_{19}O_{3}N: C, 61,95, H, 8,98; N, 6,57.

Encontrado: C, 61,87; H, 8,96; N, 6,59.

Se recuperaron 10,14 g adicionales de material cristalino desde el agua precursora por cristalización y cromatografía, dando un rendimiento total de 166,24 g (0,780 mol, 87,9% del teórico a partir del material de partida de lactama del Ejemplo de referencia 1).

Se encontró que era conveniente preparar el compuesto del título directamente a partir de 2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-en-3-ona, la mezcla racémica o el enantiómero (-), de la siguiente manera. Se calentó 2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-en-3-ona (6,00 g, 55,0 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (30 ml) hasta 34ºC y se agitó mientras se añadían gota a gota ácido metanosulfónico (3,6 ml, 55 mmol) y agua (0,99 ml, 55 mmol), durante 10 minutos. Se observó una exoterma de 10ºC a los 5 minutos y empezó a cristalizar un sólido cristalino. La mezcla se sometió a reflujo (baño de aceite a 74ºC) durante 2,5 horas. La mezcla se enfrió a -10ºC y se añadió una disolución de hidruro de litio y aluminio (1,0 M en tetrahidrofurano, 100 ml). Los primeros 15 ml se añadieron durante 10 minutos y se observó una exoterma de 7ºC. Los 85 ml restantes se añadieron rápidamente sin observarse ninguna exoterma. La mezcla se mantuvo a reflujo durante 30 minutos y el reflujo continuó durante 18 horas. La mezcla se enfrió a 25ºC y se añadió fluoruro sódico (25,2 g, 0,600 mol) y, después de agitar durante 30 minutos, se añadió agua (5,3 ml) gota a gota durante 10 minutos a la mezcla enfriada (0ºC). La mezcla se agitó durante 30 minutos a 25ºC y se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (12,6 ml, 55,0 mmol). Esta mezcla se agitó durante 16 horas, se filtró y la torta se trituró con acetato de etilo (2 x 50 ml). El combinado filtrado-lavado se lavó con agua (20 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se evaporó y el jarabe residual se cristalizó en acetato de etilo:hexanos / 1:2 (30 ml) dando el compuesto del título como cristales blancos (10,32 g, 88%), de propiedades idénticas a las de la muestra descrita anteriormente.

Ejemplo de referencia 2

(-)-(1R,2S,3R,4R)-N-[2,3-dihidroxi-4-(hidroximetil)-1-ciclopentil]carbamato de terc-butilo

A una mezcla de N-metilmorfolina-N-óxido (146,2 g, 60% en agua, 0,749 mol) y tetróxido de osmio (9,75 g, 2,5% en terc-butanol, 0,959 mmol) en acetona (1 l), agitando a -8ºC en un baño hielo-acetona, se añadió de una sola vez (-)-(1R,4S)-N-[4-hidroximetil-2-ciclopenten-1-il]carbamato de terc-butilo (152,10 g, 0,7132 mol, del Ejemplo anterior). La mezcla resulante se dejó calentar a temperatura ambiente durante 16 horas; durante dicho tiempo se hizo homogénea. Se añadió más tetróxido de osmio (2,602 g, 0,256 mmol), y la disolución se agitó a 20ºC durante cuatro horas, después a 40ºC durante dos horas; para entonces se juzgó que la reacción había finalizado por TLC (sílice, 10% metanol-cloroformo, visualización con yodo seguida de carbón de vanilina, material de partida: R_{f} = 0,51, productos: R_{f} = 0,22, isómero (2S,3R) y R_{f} = 0,36, isómero (2R,3S). La proporción de isómeros (2S,3R)/(2R,3S) fue de aproximadamente 73:27, según se juzgó por ^{1}H-RMN y TLC. Se añadió agua (75 ml), seguida de cloroformo (2 l). La mezcla bifásica resultante se enfrió en un baño de hielo y con agitación muy suave (para evitar la mezcla de fases), se añadió sulfato de cobre anhidro (457,8 g, Alfa) en varias porciones. La suspensión resultante se dejó agitar a temperatura ambiente aproximadamente 16 horas, después se filtró con filtros auxiliares (Celita 545 y 512). La torta se lavó con tetrahidrofurano (6 l) hasta que no se eluyó más producto. El filtrado se evaporó a vacío hasta un aceite oscuro sustancialmente exento de N-metilmorfolina. El aceite se filtró a través de gel de sílice (300 g) y se eluyó con tetrahidrofurano (3 l) hasta que se eluyó todo el producto. El eluído se concentró a 200 ml y se añadieron hexanos (aproximadamente 300 ml). La cristalización comenzó espontáneamente, y se dejó continuar a -5ºC durante aproximadamente 16 horas. Los cristales se recuperaron por filtración, se lavaron moderadamente con un 50% de acetato de etilo-hexanos, y se secó por succión hasta un peso constante (105,78 g, 0,428 mol, 60,0% del teórico). La recristalización en el acetato de etilo del reflujo (200 ml) proporcionó el compuesto del título como cristales blancos (93,85 g, 0,3795 mol, 53,2% del teórico); p.f. = 115,8-117º; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: (a d, J = 7,4 Hz, 1H, NH), 4,52 (t, J = 5,2 Hz, 1H, CH_{2}OH), 4,43 (d, J = 5,1 Hz, 1H, CHOH), 4,31 (d, J = 4,9 Hz, 1H, CHOH), 3,54-3,41 (multiplete de solapamiento, 3H, CHN y CHOH), 3,34 (m, solapado con HOD, w_{1/2} = 20 Hz, CH_{2}OH), 1,99 (dt, J = 12,5, 6,8, 6,8 Hz, 1H, HOCH_{2}CH), 1,85 (a, m, w_{1/2} = 30 Hz, 1H, ½ CH_{2}), 1,39 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}), 0,98 (dt, J = 12,4, 7,8, 7,8 Hz, 1H, ½ CH_{2}); [\alpha]^{20}_{589}-8,08º, [\alpha]^{20}_{578}-5,57º, [\alpha]^{20}_{546}-9,95º, [\alpha]^{20}_{436}-18,22º, [\alpha]^{20}_{365}-29,36º (c = 1,02, metanol); CL-EM (CH_{4}): 248 (M+1).

Análisis calculado para C_{11}H_{21}O_{5}N: C, 53,43, H, 8,56; N, 5,66.

Encontrado: C, 53,45; H, 8,58; N, 5,69.

Se obtuvo una muestra del isómero (-)-(2R,3S) (25,60 g) a partir de las aguas precursoras por cristalización fraccionada en acetato de etilo; p.f. 106-107,2ºC; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: (a d, J = 7,6 Hz, 1H, NH), 4,77 (d, J = 4,9 Hz, 1H, CHOH), 4,58 (d, J = 4,1 Hz, 1H, CHOH), 4,35 (a t, w_{1/2} = 15 Hz, 1H, CH_{2}OH), 3,89 (a t, w_{1/2} = 10 Hz, 1H, OCH), 3,73 (a s, 2H, OCH, NCH), 3,50 (a m, w_{1/2} = 20 Hz, 1H, ½ OCH_{2}), 3,38 (a m, oscurecido por HOD, ½ OCH_{2}), 1,90 (m, w_{1/2} = 24 Hz, 2H, OCH_{2}OH, ½ CH_{2}), 1,38 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}), 1,27 (m, 1H, ½ CH_{2}); [\alpha]^{20}_{589}-7,92º, [\alpha]^{20}_{578}-8,14º, [\alpha]^{20}_{546}-9,05º, [\alpha]^{20}_{436}-14,81º, [\alpha]^{20}_{365}-21,19º (c = 1,36, metanol); CL-EM (CH_{4}): 248 (M+1).

Análisis calculado para C_{11}H_{21}O_{5}N: C, 53,23, H, 8,57; N, 5,64.

Encontrado: C, 53,20; H, 8,55; N, 5,61.

Ejemplo de referencia 3

(-)-(6aR,8R,9S,9aR)-N-(hexahidro-9-hidroxi-2,2,4,4-tetraisopropil-ciclopenta [f]-1,3,5,2,4-trioxadisilocin-8-il)-car- bamato de terc-butilo

El producto del Ejemplo anterior, (-)-(1R,2S,3R,4R)-N-[2,3-dihidroxi-4-(hidroximetil)-1-ciclopentil]carbamato de terc-butilo (92,97 g, 0,3760 mol) e imidazol (103,0 g, 1,513 mol, Aldrich) se disolvieron en N,N-dimetilformamida seca (200 ml, Aldrich), y se enfriaron hasta -7ºC en un baño de hielo-acetona. Se añadió de una vez, con agitación rápida, 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (1221,2 g, 0,3842 mol, Cambridge, refraccionado) (aproximadamente ½ minuto) y se lavó inmediatamente con ciclohexano (10 ml). Una exoterma inmediata llevó la temperatura a 35ºC, y después se mantuvo. A 10ºC, el baño refrigerante se eliminó y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante dos días. La mezcla de reacción se dividió entre ciclohexano y agua helada (200 ml de cada uno). La fase inferior (pH = 7) se extrajo con dos partes adicionales de ciclohexano (200 ml cada una) y, después, cada uno de los extractos orgánicos se lavó secuencialmente con cuatro partes de agua (150 ml) y una parte de sulfato sódico acuoso saturado. Las fases orgánicas se secaron sobre sulfato sódico anhidro, después se filtraron y se concentraron a vacío hasta un volumen de aproximadamente 250 ml (disolución ligeramente amarilla), que se usó directamente en el siguiente Ejemplo.

Se preparó una muestra del compuesto del título de manera similar, pero purificada por cromatografía sobre gel de sílice (eluído con 20% de acetato de etilo-hexanos), dando un vidrio incoloro, que cristalizó durante el reposo, con las siguientes características: p.f. 63,5-65,2ºC; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 6,96 (a d, J = 4,8 Hz, 1H, NH), 4,24 (d, J = 4,8 Hz, 1H, OH), 3,93 (dd, J = 7,3, 5,5 Hz, 1H, NCH), 3,83 (dd, J = 13, 2,7 Hz, 1H, OCH), 3,65 (c, J = 4,7 Hz, 2H, CH_{2}O), 3,53 (a d, J\sim6 Hz, 1H, OCH), 2,09-1,80 (a m, 2H, CH y ½ CH_{2}), 1,39 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}), 1,04 (m, w ½ = 13 Hz, 29H, CH(CH_{3})_{2} y ½ CH_{2}, oscurecido); [\alpha]^{20}_{589}-15,45º, [\alpha]^{20}_{578}-16,23º, [\alpha]^{20}_{546}-19,21º, [\alpha]^{20}_{436}-33,62º, [\alpha]^{20}_{365}-52,43º (c = 0,779, metanol, corregido para 0,3 H_{2}O); CL-EM (CH_{4}): 490 (M+1); TLC (sílice, 20% acetato de etilo-hexanos, visualización con yodo). R_{f} = 0,46.

Análisis calculado para C_{23}H_{47}NO_{6}Si_{2}-0,3 H_{2}O: C, 55,79, H, 9,69; N, 2,83.

Encontrado: C, 55,81; H, 9,57; N, 2,82.

Ejemplo de referencia 4

(-)-(6aR,8R,9S,9aR)-N-(hexahidro-2,2,4,4-tetraisopropil-9-((fenoxitiocarbonil)oxi)-ciclopenta[f]-1,3,5,2,4-trioxadisilocin-8-il)carbamato de terc-butilo

La disolución de (-)-(6aR,8R,9S,9aR)-N-(hexahidro-9-hidroxi-2,2,4,4-tetraisopropil-ciclopenta[f]-1,3,5,2,4-trioxadisilocin-8-il)-carbamato de terc-butilo (0,3760 mmol) en ciclohexano, obtenida en el Ejemplo anterior, se diluyó hasta un volumen total de 500 ml con ciclohexano. Se añadieron N-hidroxisuccinimida (8,568 g, 74,45 mmol) y piridina (33,2 ml, 0,410 mol), después, con agitación rápida, se añadió gota a gota una disolución de tionocloroformiato de fenilo (70,8 g, 0,410 mol) en ciclohexano (50 ml) durante el transcurso de 20 minutos. La mezcla oscura resultante se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente, después se sometió a reflujo durante cuatro horas. Se añadió piridina (7,1 ml, 88 mmol), y después tionocloroformiato de fenilo (15,09 g, 87,41 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante tres joras. Se añadieron piridina (5,0 ml, 62 mmol) y feniltionocloroformiato (9,903 g, 57,37 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo otras 3,5 horas más; para entonces se juzgó que la reacción había finalizado por TLC (sílice, 20% acetato de etilo-hexanos, visualización con yodo, seguida de carbón de vanilina, material de partida: R_{f} = 0,46, producto: R_{f} = 0,49). La mezcla se destiló hasta un volumen de aproximadamente 400 ml, se enfrió a temperatura ambiente, después se filtró a través de un lecho de filtro auxiliar (1 cm, Celita 545) en una atmósfera seca de nitrógeno. La torta resultante de clorhidrato de piridina se lavó con ciclohexano (200 ml), dando una disolución del compuesto del título en ciclohexano.

Una muestra preparada de manera similar, pero purificada por cromatografía sobre gel de sílice (eludía con 10% acetato de etilo-hexanos) dio un aceite incoloro con las siguientes características: ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 7,56-7,28 (m, 4H, o- y m-ArH), 7,11 (a d, J = 7,3 Hz, 2H, NH y p-ArH), 5,49 (dd, J = 5,3, 3,3 Hz, 1H, SCOCH), 4,33 (a m, w_{1/2} = 20 Hz, 1H, NCH), 3,88 (m, 2H, ½ CH_{2}O y OCH), 3,71 (a dd, J\sim12,3 Hz, 1H, ½ OCH_{2}), 2,11-1,88 (a m, 2H, ½ CH_{2} y CH), 1,40 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}), 1,05 (d, J = 4,9 Hz, solapado con multiplete, 29H, ½ CH_{2} + 4CH(CH_{3})_{2}); [\alpha]^{20}_{589}-3,17º, [\alpha]^{20}_{578}-33,1º, [\alpha]^{20}_{546}-37,4º, [\alpha]^{20}_{436}-61,3º, [\alpha]^{20}_{365}-71,4º (c = 1,19, metanol, corregido para 0,15 cloruro de metileno, 0,10 acetato de etilo y 0,10 agua);

Análisis calculado para C_{30}H_{51}O_{7}NSi_{2}S\cdot15CH_{2}Cl_{2} \cdot0,10C_{4}H_{8}O_{2}\cdot0,10H_{2}O: C, 56,51, H, 8,12; N, 2,16; S, 4,94.

Encontrado: C, 56,77; H, 8,41; N, 2,19; S, 4,98.

Ejemplo de referencia 5

(-)-(6aR,8R,9aS)-N-(hexahidro-2,2,4,4-tetraisopropilciclopenta[f]-1,3,5,2,4-trioxadisilocin-8-il)carbamato de terc- butilo

La disolución de (-)-(6aR,8R,9S,9aR)-N-(hexahidro-2,2,4,4-tetraisopropil-9-((fenoxitiocarbonil)oxi)-ciclopenta
[f]-1,3,5,2,4-trioxadisilocin-8-il)carbamato de terc-butilo en ciclohexano (0,3760 mol) preparada en el Ejemplo anterior se desgasificó en una atmósfera de nitrógeno. Se añadieron hidruro de tributilestaño (207,4 g, 0,713 mol) y 2,2'-azo bis (2-metilpropionitrilo) (12,79 g, 77,86 mmol), se repitió la desgasificación y la disolución negra se sometió a reflujo durante cuatro horas; durante este tiempo se volvió de color ámbar, y se juzgó que la reacción había finalizado mediante TLC (sílice, 20% acetato de etilo-hexanos, visualizado con yodo seguido de carbón de vanilina, material de partida: R_{f} = 0,49, producto: R_{f} = 0,36, mancha blanca). La disolución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadió un 5% de hidróxido de amonio-agua (500 ml). La fase inferior (acuosa) se extrajo con dos partes de hexano (de 200 ml cada una) y, después, cada uno de los extractos orgánicos se lavó, secuencialmente, con un 5% de amoniaco acuoso (dos partes de 500 ml, para eliminar el fenol), agua (500 ml) y sulfato sódico acuoso saturado (200 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico y después se aplicaron a una columna de gel de sílice (aproximadamente 1 kg), que se eluyó con hexanos (1 l), 5% de acetato de etilo-hexanos (1 l), 20% de acetato de etilo-hexanos (1 l) y acetato de etilo. Se evaporaron todas las fracciones que contenían producto hasta un aceite ambarino (322,5 g). Éste se purificó adicionalmente por cromatografía sobre dos columnas de gel de sílice (1 kg cada una, eluído con un gradiente de acetato de etilo-hexanos), dando el compuesto del título en dos partes como un aceite (74,32 g y 73,82 g, respectivamente, total 148,14 g, 0,313 mol, 83,2% del teórico a partir del producto triol del Ejemplo de referencia 2). Una muestra preparada de manera similar, pero considerada como la fracción central de la cromatografía dio un vidrio incoloro, cristalizando con las siguientes características: p.f. 66-67,0ºC; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 6,93 (a d, J = 6 Hz, 1H, NH), 4,22 (c, J = 6,8 Hz, 1H, NCH), 3,84 (dd, J = 3,1, 11,5 Hz, 2H, CH_{2}O), 3,61 (dd, J = 6,5, 9 Hz, 1H, OCH), 1,91-1,73 (a m, 4H, CH, ½ CH_{2}, CH_{2}), 1,38 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}), 1,02 (m, w_{1/2} = 21 Hz, 29H, 4CH(CH_{3})_{2} y ½ CH_{2}, oscurecido); [\alpha]^{20}_{589}-2,78º, [\alpha]^{20}_{578}-2,84º, [\alpha]^{20}_{546}-3,06º, [\alpha]^{20}_{436}-3,39º, [\alpha]^{20}_{365}-0,95º (c = 5,07, metanol); CL-EM (CH_{4}): 474 (M+1).

Análisis calculado para C_{23}H_{47}NO_{5}Si_{2}: C, 58,31, H, 10,00; N, 2,96.

Encontrado: C, 58,33; H, 10,00; N, 2,97.

Ejemplo de referencia 6

(+)-(1R,3S,4R)-N-[3-hidroxi-4-(hidroxi-4-(hidroximetil)-1-ciclopentil]carbamato de terc-butilo

A una disolución de (-)-(6aR,8R,9aS)-N-(hexahidro-2,2,4,4-tetraisopropilciclopenta[f]-1,3,5,2,4-trioxadisilocin-8-il)carbamato de terc-butilo (74,32 g, 0,1569 mol, correspondiente a la primera parte del producto del Ejemplo anterior) en tetrahidrofurano (300 ml) se añadió hidrato de fluoruro de tetraetil de amonio (24,62 g, aproximadamente 0,15 mol, Aldrich). Se rompieron los conglomerados de sólido, la mezcla se desgasificó (nitrógeno) y después se sometió a reflujo durante 45 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se aplicó a una columna de gel de sílice (200 g) y se eluyó con tetrahidrofurano (3 l). El eluído se concentró a vacío hasta dar un aceite ambarino, que se recogió en hexanos (150 ml). La cristalización empezó espontáneamente y se la dejó continuar a -5ºC durante dos días. Los cristales del compuesto del título bruto se recogieron por filtración, se lavaron moderadamente con un 10% de acetato de etilo-hexanos y se secaron por succión hasta peso constante (25,08 g, 0,1084 mol). El procedimiento se repitió sobre la segunda parte del producto del Ejemplo anterior (73,82 g, 0,1558 mol), dando compuesto del título bruto adicional (27,28 g, 0,1180 mol). Las dos partes del compuesto del título bruto se combinaron y recristalizaron en acetato de etilo hirviendo (250 ml), dando cristales blancos del compuesto del título (46,67 g, 0,2018 mol, 53,7% del teórico a partir del producto tiol del Ejemplo de referencia 2), que tiene las siguientes características: p.f. 126-127,9ºC; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 6,75 (a d, J = 7,8 Hz, 1H, NH), 4,49 (t, J = 4,5 Hz, CH_{2}OH) superposición 4,47 (d, J = 4,3 Hz, CHOH) con integración total de 2H, 3,80-3,93 (m, 2H, CHN y CHOH), 3,34 (m, w_{1/2} = 20 Hz, CH_{2}OH), 2,25 (dt, 1H, CHCH_{2}), 1,79-1,63 (m, 2H, CH_{2}CHOH), 1,63-1,50 (m, 1H, ½ CH_{2}), 1,38 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}), 1,11-0,96 (m, 1H, ½ CH_{2}); CL-EM (CH_{4}): 232 (M+1).

Análisis calculado para C_{11}H_{21}O_{4}N: C, 57,12, H, 9,15; N, 6,06.

Encontrado: C, 57,07; H, 9,12; N, 6,08.

Una muestra cromatográficamente homogénea del compuesto del título preparada de manera similar mostró:
[\alpha]^{20}_{589}+15,4º, [\alpha]^{20}_{578}+16,0º, [\alpha]^{20}_{546}+18,2º, [\alpha]^{20}_{436}+30,1º, [\alpha]^{20}_{365}+43,7º (c = 0,51, metanol, corregido para solvatación con 0,13 H_{2}O).

Ejemplo de referencia 7

(+)-(1S,2R,4R)-4-amino-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol

El producto del Ejemplo precedente, (+)-(1R,3S,4R)-N-[3-hidroxi-4-(hidroxi-4-(hidroximetil)-1-ciclopentil]carbamato de terc-butilo (2,351 g, 10,17 mmol) se suspendió en ácido clorhídrico acuoso (1,0 molar, 25,4 ml, 25,4 mmol) y se calentó suavemente (60-80ºC) hasta que se formó una disolución incolora, y persistió la liberación de gas (aproximadamente 15 minutos). La disolución se dejó enfriar a temperatura ambiente, después se concentró a vacío hasta dar un jarabe, que se recogió en agua (aproximadamente 20 ml) y se reconcentró. El jarabe resultante de la sal de clorhidrato se aplicó a una columna de resina intercambiadora de iones de amina cuaternaria (aproximadamente 50 ml de Amberlita IRA-400, forma de hidróxido, lavada hasta neutralidad con agua) y eluída con agua (500 ml). El agua se evaporó a vacío, dejando el compuesto del título como un jarabe incoloro (1,62 g). ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 3,90 (dt, J = 4,7, 4,7, 6,4 Hz, 1H, NCH), 3,47-3,23 (m, oscurecido por el ancho pico OH, \sim3H, CH_{2}O y CHO), 1,97 (dt, J = 7,3, 7,3, 12,7 Hz, 1H, CHCH_{2}OH), 1,78 (a sexteto, J = 5 Hz, 1H, ½ CH_{2}); [\alpha]^{20}_{589}+35,9º, [\alpha]^{20}_{578}+37,3º, [\alpha]^{20}_{546}+42,3º,
[\alpha]^{20}_{436}+69,9º, [\alpha]^{20}_{365}+103,0º (c = 2,49, metanol, corregido para 1,3 H_{2}O); CL-EM (CH_{4}): 132 (M+1).

Análisis calculado para C_{6}H_{13}O_{2}N\cdot1,3 H_{2}O: C, 46,62, H, 10,17; N, 9,06.

Encontrado: C, 46,61; H, 9,99; N, 8,93.

Ejemplo de referencia 8

4-toluenosulfonato del ácido (\pm)-cis-4-amino-2-ciclopenteno-1-carboxílico

Se cargó un matraz de 500 ml de tres bocas con articulaciones verticales con (\pm)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-en-3-ona (48,66 g, 0,4458 mol, Cambridge) y equipado con un agitador mecánico, termómetro con un adaptador para entrada de gas conectado al suministro de nitrógeno y un embudo de polvo, y se añadió hidrato de ácido 4-toluenosulfónico (93,52 g, 0,416 mol, 1,1 equiv), junto con una pequeña cantidad del compuesto del título como siembra. El embudo de polvo se sustituyó por un condensador a reflujo y el matraz se sumergió en un baño de aceite equilibrado previamente a 35ºC. En 10 minutos comenzó la cristalización, seguida de un pico exotérmico a 60ºC en otros 15 minutos. Después del pico exotérmico, el baño se reinicializó a 60-65ºC, y la mezcla de reacción se calentó dos horas a 60-65ºC (temperatura interna), hasta que una TLC del sobrenadante líquido (sílice, acetato de etilo como eluyente, visualización con yodo) muestra la ausencia de la lactama de partida contra una mancha de autentificación. Después, la mezcla se enfrió en un baño de hielo a \sim5ºC. Se conectó un tubo de vidrio con un extremo sinterizado mediante un tubo flexible a un matraz de filtro conectado, a su vez, a una fuente de vacío. El condensador se eliminó del matraz que contenía la suspensión, se detuvo el agitador, y con un barrido de nitrógeno desde la entrada de gas, el extremo sinterizado del tubo se empujó hacia el fondo del matraz bajo el agitador. Se aplicó vacío hasta que se eliminó el líquido completamente, los sólidos se resuspendieron en tetrahidrofurano seco (100 ml) y se repitió la operación de filtración. Los sólidos blancos resultantes se resuspendieron en tetrahidrofurano seco (200 ml) y la boca abierta se tapó con un tabique. La suspensión resultante del compuesto del título se usó directamente en el siguiente Ejemplo; una muestra analítica preparada de manera similar, excepto porque se seca primero por succión y después aplicando vacío; p.f. 191-193ºC; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,62 (a s, 1H, CO_{2}H), 7,93 (a s, 3H, NH_{3}^{+}), 7,47 y 7,11 (dd, 8,0 Hz, 2H cada una, Ar-H), 6,11 (dt, J = 5,7, 1,9, 1,9, Hz, 1H, vinilo), 5,82 (dt, J = 5,7, 2,8, 2,8 Hz, 1H vinilo), 4,20 (a m, w_{1/2} = 21 Hz, 1H, H alílico), 3,61 (a tt?, w_{1/2} = 21 Hz, 1H, alílico), 2,29 (s, 3H, CH_{3}), 2,50 (dt?, J = 5,8, 5,8, 11,5 Hz, (solapamiento con el pico DMSO), ½ CH_{2}), 1,92 (dt, J = 6,7, 6,7, 13,4 Hz, 1H, ½ CH_{2}).

Análisis calculado para C_{13}H_{17}O_{5}N_{5}: C, 52,16, H, 5,72; N, 4,68; S, 10,71.

Encontrado: C, 52,16; H, 5,76; N, 4,66; S, 10,62.

Ejemplo 4

(\pm)-cis-4-amino-2-ciclopenteno-1-metanol

Un matraz seco de 2 l y tres bocas equipado con un agitador mecánico, termómetro con adaptador para entrada de gas conectado al suministro de nitrógeno y tabique. El matraz se purgó con nitrógeno, se sumergió en un baño de hielo-acetona, y se añadió una disolución de hidruro de litio y aluminio en tetrahidrofurano (1,0 molar, 800 ml, 0,80 mol, Aldrich) mediante una cánula. Se usó tetrahidrofurano seco (2 x 15 ml) para enjuagar la disolución de hidruro de litio y aluminio. Cuando la disolución se enfrió a 0ºC, la suspensión de la sal 4-toluenosulfonato del ácido (\pm)-cis-4-amino-2-ciclopenteno-1-carboxílico en tetrahidrofurano preparada en el Ejemplo anterior se introdujo mediante una cánula con agitación, a una velocidad adecuada para mantener la temperatura por debajo de 10ºC y un desprendimiento de hidrógeno moderado (aproximadamente una hora). El matraz se enjuagó con tetrahidrofurano seco (2 x 15 ml) y el tabique se sustituyó con un condensador a reflujo. La disolución transparente resultante, ligeramente ambarina se calentó lentamente hasta un reflujo suave durante el transcurso de dos horas, al cabo de las cuales se hizo turbia. Después de estar a reflujo durante toda la noche (16 horas), se retiró el baño calefactor, se añadió fluoruro sódico (136,3 g, 3,25 mol, reactivo en polvo), y el condensador se reinicializó para destilación hacia abajo. La mezcla se destiló hasta una suspensión fina (se recogieron 700 ml de destilado), después se enfrió en un baño de hielo. Se añadió dietiléter (seco, 500 ml) y se condensador se sustituyó por un embudo de adición que contenía agua (43 ml, 2,4 mol). El agua se añadió muy lentamente (dos horas), teniendo cuidado para controlar la velocidad de desprendimiento de hidrógeno y manteniendo la temperatura a 10 \pm 5ºC. Mientras tanto, se añadió agua (54 ml) al destilado recuperado anteriormente y se añadió suficiente tetrahidrofurano adicional para obtener un volumen final de 900 ml (6% H_{2}O). La mezcla de reacción se filtró por succión y la torta se lavó con tetrahidrofurano (100 ml). Parte de la disolución de agua-tetrahidrofurano al 6% (300 ml) se usó para suspender-lavar la torta, que después se devolvió al matraz de reacción. La torta se trituró (25 minutos) en agua-tetrahidrofurano al 6% (400 ml), se filtró y se lavó con agua-tetrahidrofurano al 6% (200 ml). Los filtrados combinados se concentraron hasta un aceite amarillo pálido a vacío (44,07 g, 67,8% por HPLC, véase Ejemplo 2). Este aceite, que contenía el compuesto del título puro, agua y trazas de sal de tosilato, se oscureció rápidamente en las condiciones ambientales. Se hizo reaccionar inmediatamente para formar el derivado N-BOC, un sólido cristalino estable (véase el siguiente Ejemplo). La torta de filtrado se devolvió al matraz y se trituró en metanol (800 ml) durante 48 horas. La suspensión resultante se filtró en un filtro de caucho, y la torta se lavó con metanol (200 ml). El filtrado se concentró a vacío hasta un sólido amarillo (56,80 g, rendimiento 20,9% por HPLC; rendimiento global total 88,7%). Este extracto se tomó también del derivado N-BOC (véase el siguiente Ejemplo).

Ejemplo 5 (\pm)-cis-N-[4-hidroximetil)-2-ciclopenten-1-il]carbamato de terc-butilo

El primer extracto del ejemplo previo que contiene (\pm)-cis-4-amino-2-ciclopenteno-1-metanol (0,4459 mol) se disolvió en 2:1 1,4-dioxano-agua (1,2 l). Se añadió bicarbonato sódico (48,69 g, 0,580 mol), la mezcla se enfrió en un baño de hielo-agua y se añadió di-terc-butildicarbonato (110,25 g, 0,490 mol, Aldrich 97%) de una sola vez con agitación rápida. La mezcla resultante se calentó hasta temperatura ambiente durante el transcurso de una hora, después se concentró a vacío hasta un volumen de aproximadamente 400 ml. La suspensión se recogió en cloroformo (300 ml), se separaron las fases y la fase acuosa (superior) se reextrajo con cloroformo (cinco partes de 300 ml cada una) hasta que no se observó producto en el extracto por TLC (sílice, 10% metanol-cloroformo, visualización con yodo, R_{f} = 0,51). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a vacío dando el compuesto del título como un aceite. El extracto final del ejemplo anterior se hizo reaccionar de manera similar, y el compuesto del título bruto obtenido de esta manera se combinó con la parte anterior, el material combinado se recogió en hexanos y se evaporó a vacío para eliminar el cloroformo residual. Entonces, el aceite cristalizó espontáneamente. Se trituró en hexanos fríos y se filtró dando el compuesto del título bruto como un sólido cristalino, que se secó por succión hasta un peso constante (79,98 g, 0,3750 mol). La recristalización en acetato de etilo hirviendo (70 ml) y hexanos (300 ml) dio el compuesto del título como un sólido cristalino, blanquecino (73,43 g, 0,3443 mol); p.f. 54-55,5ºC; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 6,72 (d, J = 7,9 Hz, 1H, NH), 5,80 y 5,60 (dos m, 2H, CH=CH), 4,59 (t, J = 5,2 Hz, 1H, OH), 4,45 (m, 1H, CHN), 3,35 (m, solapamiento H_{2}O, CH_{2}O), 2,60 (m, 1H, CH), 2,30 (m, 1H, ½ CH_{2}), 1,40 (s, 9H, C(CH_{3})_{3}), 1,2 (m, 1H, ½ CH_{2}).

Análisis calculado para C_{11}H_{19}NO_{9}: C, 61,94; H, 8,98; N, 6,57.

Encontrado: C, 62,00; H, 8,99; N, 6,55.

Se combinaron las aguas madre, se cromatografiaron sobre gel de sílice (700 g, 30% acetato de etilo-hexanos y 5% metanol-cloroformo) y se cristalizaron como en el caso anterior dando una segunda parte del compuesto del título (10,49 g, 0,0492 mmol). El rendimiento total fue, por tanto, 0,3935 mol o 88,9% del teórico a partir de la (\pm)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-en-3-ona de partida (corregido para las alícuotas tomadas).

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Ejemplo 6 (\pm)-cis-4-amino-2-ciclopenteno-1-metanol

Por el procedimiento del Ejemplo de referencia 8 y el Ejemplo 4, pero en una escala de aproximadamente el doble (97,40 g, 0,8924 mol de (\pm)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-en-3-ona) se obtuvo el compuesto del título como extractos que contenían el compuesto del título (0,7926 mol, 88,8% del teórico, permitiendo la toma de alícuotas, tal y como se ha determinado por el procedimiento del Ejemplo 2).

Ejemplo 7 (\pm)-cis-N-(4-[hidroximetil)-2-ciclopenten-1-il]carbamato de terc-butilo

Los extractos de tetrahidrofurano combinados del Ejemplo anterior se concentraron a vacío hasta 1031 g, se enfriaron en un baño de hielo-agua, y se añadió una mezcla de bicarbonato sódico (97,46 g, 1,16 mol) en agua (500 ml). Seguido de di-terc-butildicarbonato (204,5 g, 0,9501 mol). La mezcla se agitó a 5ºC durante dos días. Los extractos de metanol del Ejemplo anterior se evaporaron hasta dar un sólido oleoso (136,64 g), que se añadió a la mezcla. Después de calentar a temperatura ambiente, los disolventes orgánicos se evaporaron a vacío y la suspensión resultante se extrajo con hexanos, tres partes de cloruro de metileno, después otra vez con hexanos (200 ml cada vez). Los extractos orgánicos se evaporaron hasta dar un aceite, que se cristalizó a partir de hexanos (aproximadamente 300 ml), dando el compuesto del título (154,15 g, 0,7229 mol), idéntico al producto del Ejemplo 5. Se obtuvo un producto adicional por cromatografía de las aguas precursoras (10,5 g, 0,0491 mol, 86,6% del teórico a partir de la lactama de partida, permitiendo la toma de alícuotas).

Ejemplo de referencia 9

Metanosulfonato del ácido (\pm)-cis-4-amino-2-ciclopenteno-1-carboxílico

Partiendo de (\pm)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-en-3-ona (5,111 g, 46,83 mmol, Cambridge), por el procedimiento del Ejemplo de referencia 1, se preparó el compuesto del título (10,268 g, 45,99 mmol, 98,2%); p.f. 137-139ºC; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 12,6 (a s, 1H, CO_{2}H), 8,04 (a s, 3H, NH_{3}^{+}), 6,10 (dt, J = 5,6, 2,0, 2,0 Hz, 1H, vinilo), 5,85 (dt, J = 5,3, 2,3, 2,3 Hz, 1H, vinilo), 4,19 (a s, w_{1/2} = 20 Hz, 1H, vinilo), 3,61 (m, w_{1/2} = 22 Hz, 1H, H alílico), 2,53 (quintuplete, J = 5,3 Hz (solapamiento con el pico DMSO), ½ CH_{2}), 2,39 (s, 3H, CH_{3}SO_{3}H), 1,93 (dt, J = 6,7, 6,7, 13,7 Hz, 1H, ½ CH_{2}); CL-EM (CH_{4}): 128 (M+1); EI-EM: 127 (M).

Análisis calculado para C_{11}H_{19}NO_{5}S: C, 37,66; H, 5,87; N, 6,27; S, 14,36.

Encontrado: C, 37,60; H, 5,85; N, 6,25; S, 14,30.

Ejemplo de referencia 10

4-toluenosulfonato del ácido (\pm)-cis-4-amino-2-ciclopenteno-1-carboxílico

A una disolución que contiene una cantidad catalítica de ácido 4-toluenosulfónico (10 mg) en peróxido de hidrógeno acuoso al 30% (0,30 ml, 2,7 mmol) se añadió 3-tosil-2-azabiciclo[2.2.1]hepta-2,5-dieno (369 mg, 1,49 mmol), preparado por el procedimiento de J.C. Jagt y A.M. van Leusen, J. Org. Chem. 1974, 39, 564-566, en partes, con agitación rápida. Se observó una gran exoterma, que se estabilizó a 75ºC durante la última media hora de la adición. Después de agitar a 70ºC durante 40 minutos, la mezcla se diluyó repetidamente con agua (6 ml en total) y se filtró hasta que se obtuvo una disolución transparente. La disolución se evaporó hasta dar un aceite que cristalizó (349 mg). Éste se trituró en tetrahidrofurano, se filtró y se secó a vacío dando el compuesto del título (202 mg, 45,2% del teórico), espectro ^{1}H-RMN idéntico al del producto del Ejemplo de referencia 8.

Ejemplo de referencia 11

Diclorhidrato de (\pm)-(1R*,2S*,4S*)-4-[2-amino-6-(ciclopropilmetilamino)-9H-purin-9-il]-2-(hidroximetil)-1-ciclo- pentanol

Se sometieron a reflujo (\pm)-(1R*,2S*,4S*)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol (250 mg, 0,88 mmol) (Shealy et al; patente de los Estados Unidos 4.543.255; 24 de septiembre de 1985), etanol (1 ml) y ciclopropilmetilamina (4,0 ml) en atmósfera de nitrógeno durante 1,5 horas. La disolución enfriada se evaporó hasta sequedad después de añadir hidróxido sódico 1N (0,88 ml). El residuo se absorbió sobre gel de sílice. El compuesto del título se eluyó en una columna de gel de sílice con un 5% de metanol-cloroformo como un vidrio incoloro (220 mg). El vidrio se disolvió en etanol absoluto (8,5 ml) y se diluyó con ácido clorhídrico 1M en dietiléter (5 ml). El precipitado blanco resultante se lavó con dietiléter y se secó dando el diclorhidrato del compuesto del título como un polvo blanco (210 mg, 48%), p.f. > 250ºC; espectro de masas (CI), 301 (M+1).

Análisis calculado para C_{15}H_{22}N_{6}O_{2}\cdot2HCl: C, 46,04; H, 6,18; N, 21,48; Cl, 18,12.

Encontrado: C, 46,00; H, 6,21; N, 21,36; S, 18,05.

Ejemplo de referencia 12

Diclorhidrato de (\pm)-(1R*,2S*,4S*)-4-[2-amino-6-(ciclopropilamino)-9H-purin-9-il ]-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol

De la misma manera que en el ejemplo 18, con ciclopropilamina, el compuesto del título se obtuvo como su diclorhidrato a partir de etanol-éter como un polvo blanco (272 mg, rendimiento 85% a partir de 0,9 mmol de 6-cloropurina), p.f. >250ºC; espectro de masas (CI), 305 (M+1).

Análisis calculado para C_{14}H_{2}N_{6}O_{2}\cdot2HCl\cdot0,85H_{2}O: C, 42,83; H, 6,08; N, 21,41; Cl, 18,06.

Encontrado: C, 42,84; H, 6,08; N, 21,40; S, 18,04.

Ejemplo de referencia 13

(+)-(1S,2R,4R)-4-(6-cloro-5-formamido-2-isobutiramido-4-pirimidinil)-2-(hidroximetil )-1-ciclopentanol

Se agitaron N-(3-hidroxi-4-(hidroximetil)-1-ciclopentil)carbamato de (1R,3S,4R)-terc-butilo (5,00 g, 21,6 mmol), ácido clorhídrico 1N (44 ml) y dioxano (10 ml) a temperatura ambiente durante dos horas. Esta disolución se evaporó hasta dar un aceite incoloro (3,92 g). Este aceite se sometió a reflujo con trietilamina (9,0 ml) y N-(4,6-dicloro-5-formamida-2-pirimidil)isobutiramida (en el documento EP 434450, 26 de junio de 1991) (5,99 g, 21,6 mmol) en alcohol t-butílico (75 ml) durante 1,0 horas. La disolución enfriada se trató con hidróxido sódico 1N (44 ml) y se evaporó hasta dar un jarabe que se cromatografió sobre gel de sílice. El compuesto del título se eluyó con MeOH:CHCl_{3}/1:4 como una espuma sólida tostada (6,79 g, 83%). Con dicha muestra se formó una suspensión en dietiléter dando un polvo blanquecino, p.f.: colapsa a 105-108ºC; espectro de masas (Cl, CH_{4}) 372 (M+1); ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,06 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 1,22 (m, 1H), 1,80 (m, 3H), 2,19 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 3,35 (m, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,57 (m, 3H), [7,11 (d, J = 7,8 Hz), 7,39 (d, J = 7,8 Hz), 1H]; [7,89 (d, J = 11,4 Hz), 8,16 (s), 1H], [8,82 (d, J = 11,4 Hz), 9,29 (s), 1H], [10,17 (s), 10,23 (s), 1H], [\alpha]^{20}_{589}+23,6º, [\alpha]^{20}_{578}+24,9º, [\alpha]^{20}_{546}+28,9º, [\alpha]^{20}_{436}+53,4º, [\alpha]^{20}_{365}+96,2º (c = 0,71, metanol).

Análisis calculado para C_{15}H_{22}N_{5}O_{4}Cl\cdot0,45H_{2}O\cdot0,35EtOH: C, 45,61; H, 6,36; N, 17,68; S, 8,95.

Encontrado: C, 47,84; H, 6,19; N, 17,42; Cl, 9,02.

Ejemplo de referencia 14

(+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)ciclopentanol

Se mantuvo (1S,2R,4R)-4-(6-cloro-5-formamido-2-isobutiramido-4-pirimidinil)-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol (6,25 g, 16,8 mmol) a 55ºC en ácido clorhídrico 1N (85 ml) durante 4 horas. La evaporación dio un aceite oscuro que se disolvió en N,N-dimetilformamida (20 ml) y trietilortoformiato (85 ml). La disolución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Los volátiles se eliminaron a vacío y el aceite residual se agitó en ácido clorhídrico 1N (100 ml) durante 5 horas. La disolución se neutralizó con hidróxido sódico y se evaporó hasta dar un jarabe marrón. La cromatografía sobre gel de sílice con metanol:cloroformo/15:85 dio el compuesto del título como una espuma sólida (3,9 g). La cristalización en acetonitrilo:metanol (1:1) dio el compuesto del título como cristales blancos (2,59 g, 53%); p.f. 143-144ºC; espectro de masas (Cl, CH_{4}) 284 (M+1); ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 1,67 (m, 1H), 2,01 (m, 2H), 2,17 (m, 1H), 2,33 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,52 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 4,65 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 4,91 (m, 1H), 6,88 (a s, 2H), 8,25 (s, 1H), [\alpha]^{20}_{589}+17,5º, [\alpha]^{20}_{578}+18,3º,[\alpha]^{20}_{546}+20,5º, [\alpha]^{20}_{436}+34,2º, [\alpha]^{20}_{365}+49,4º (c = 0,67, metanol).

Análisis calculado para C_{11}H_{14}N_{5}O_{2}Cl\cdot0,5H_{2}O: C, 45,13; H, 5,16; N, 23,11; Cl, 12,11.

Encontrado: C, 45,05; H, 5,02; N, 23,73; Cl, 12,13.

Ejemplo de referencia 15

(+)-(1S,2R,4R)-4-[2-amino-6-(ciclopropilmetilamino)-9H-purin-9-il]-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol

De la misma manera que para el racemato, Ejemplo de referencia 11, el compuesto del título se aisló, después de la cromatografía, como una espuma sólida blanca (48% a partir de 2,0 mmoles de (+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)ciclopentanol); p.f.: colapsa a 79-83ºC; espectro de masas (Cl, CH_{4}) 319 (M+1); ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 7,83 (s, 1, H-8), 5,79 (a s, 2, NH_{2}), 4,95-4,80 (m, 1, CHN), 4,75 (d, J = 4,0 Hz, 1, OH), 4,64 (t, J = 5,2 Hz, 1, CH_{2}OH), 4,05 (a m, 1, CHO), 3,60-3,35 (m, 2, CH_{2}O), 3,25-3,15 (m, solapamiento s a 3,25, 4, CHNMe, CH_{3}), 2,35-2,20 (m, 1, CH), 2,20-2,0 (m, 1, ½ CH_{2}), 2,0-1,85 (m, 2, metileno), 0,85-0,60 (m, 4, 2CH_{2} de ciclopropilo); [\alpha]^{20}_{589}+10,6º, [\alpha]^{20}_{578}+10,8º, [\alpha]^{20}_{546}+12,3º, [\alpha]^{20}_{436}+20,6º, [\alpha]^{20}_{365}+31,3º (c = 0,84, metanol).

Análisis calculado para C_{15}H_{22}N_{6}O_{2}\cdot0,5H_{2}O\cdot0,04EtOH: C, 55,02; H, 7,11; N, 25,53.

Encontrado: C, 55,02; H, 7,06; N, 25,59.

Ejemplo de referencia 16

(+)-(1S,2R,4R)-4-[2-amino-6-(ciclopropilamino)-9H-purin-9-il]-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol

Se sometieron a reflujo (+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)ciclopentanol (425 mg, 1,5 mmol), ciclopropilamina (Aldrich, 1,4 ml) y etanol (4 ml) durante 3 horas. A la disolución enfriada se añadió hidróxido sódico 1N (1,5 ml). El aceite residual que quedó tras la evaporación de los volátiles a vacío se cromatografió sobre gel de sílice. El compuesto del título se eluyó con metanol:acetato de etilo/15:85 como una espuma sólida blanca que solidificó dando un polvo blanco en metanol-acetonitrilo (309 mg, 68%); p.f. 174-176ºC; espectro de masas (Cl, CH_{4}) 305 (M+1); ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 7,79 (s, 1, H-8), 7,25 (d, J = 2,9 Hz, 1, NH), 5,79 (s, 2, NH_{2}), 4,90-4,75 (m, 1, CH-N), 4,73 (d, J = 4,0 Hz, 1, OH), 4,63 (t, J = 5,3 Hz, 1, CHOH), 4,08-4,00 (m, 1, CHO), 3,58-3,38 (m, 2, CH_{2}O), 3,05-2,95 (m, 1 CH-NH), 2,35-2,20 (m, 1, CH), 2,18-2,0 (m, 1, ½ CH_{2}), 2,0-1,9 (m, 2, metileno), 1,7-1,5 (m, 1, ½ CH_{2}), 0,70-0,50 (m, 4, 2CH_{2} de ciclopropilo); [\alpha]^{20}_{589}+7,72º, [\alpha]^{20}_{578}+7,87º, [\alpha]^{20}_{546}+8,77º, [\alpha]^{20}_{436}+14,4º,
[\alpha]^{20}_{365}+20,1º (c = 0,66, metanol).

Análisis calculado para C_{14}H_{20}N_{6}O_{2}: C, 55,25; H, 6,62; N, 27,62.

Encontrado: C, 55,21; H, 6,59; N, 27,54.

Ejemplo de referencia 17

(+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-1,6-dihidro-6-tioxo-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol

Se sometieron a reflujo (+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)ciclopentanol (1,70 g, 6,00 mmol) y tiourea (456 mg, 6,00 mmol) en agua (15 ml) durante 1,0 horas. La disolución enfriada se ajustó a pH 5 con bicarbonato sódico acuoso saturado. El precipitado resultante se filtró, se lavó con agua y se secó dando el compuesto del título como un polvo blanco (1,20 g, 71%); p.f. 290-291ºC desc; espectro de masas (Cl, CH_{4}) 282 (M+1); ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 11,90 (a s, 1, NH), 8,03 (s, 1, H-8), 6, 78 (a s, 2, NH_{2}), 4,95-4,70 (m, solapamiento d a 4,78, J = 2,7 Hz, total 2, CHN y OH), 4,7-4,6 (m, 1, CH_{2}OH), 4,1-4,0 (m, 1, CHOH), 3,6-3,4 (m, 2, CH_{2}O), 2,4-2,2 (m, 1, CH), 2,2-1,9 (m, 3, metileno), 1,7-1,5 (m, 1, ½ CH_{2}); [\alpha]^{20}_{589}+6,43º, [\alpha]^{20}_{578}+6,71º, [\alpha]^{20}_{546}+7,43º, [\alpha]^{20}_{436}+8,43º, [\alpha]^{20}_{365}+8,43º (c = 0,70, NaOH 0,1 N).

Análisis calculado para C_{11}H_{15}N_{5}SO_{2}: C, 46,96; H, 5,37; N, 24,90; S, 11,40.

Encontrado: C, 46,83; H, 5,40; N, 24,88; S, 11,47.

Ejemplo de referencia 18

(+)-(1S,2R,4R)-4-[2-amino-6-(1-pirrolidinil)-9H-purin-9-il]-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol

Se sometieron a reflujo (+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)ciclopentanol (426 mg, 1,5 mmol), pirrolidina (99%, Aldrich, 1,26 ml) y etanol (8 ml) durante 20 minutos. A la disolución enfriada se añadió hidróxido sódico 1N (1,5 ml). Los volátiles se evaporaron y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice. El compuesto del título se eluyó con un 12% de metanol-cloroformo como una espuma sólida blanca que solidificó en etanol al 95% dando un polvo blanco (324 mg, 64%); p.f. 114-117ºC; espectro de masas (Cl, CH_{4}) 319 (M+1); ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 7,81 (s, 1, H-8), 5,76 (a s, 2, NH_{2}), 5,0-4,8 (m, 1, CHN), 4,76 (d, J = 4,1 Hz, 1, OH), 4,66 (t, J = 5,2 Hz, 1, CH_{2}OH), 4,15-4,0 (m, solapamiento a m a 4,1-3,4 y m a 3,6-3,35, total 7, CHO, 2CH_{2}N y CH_{2}O), 2,4-2,2 (m, 1, ½ CH_{2}), 2,2-1,8 (m, 7, metilenos), 1,7-1,5 (m, 1, ½ CH_{2}); [\alpha]^{20}_{589}+10,5º, [\alpha]^{20}_{578}+11,0º, [\alpha]^{20}_{546}+12,4º, [\alpha]^{20}_{436}+19,5º, [\alpha]^{20}_{365}+25,5º (c = 1,43, metanol).

Análisis calculado para C_{15}H_{22}N_{6}O_{2}\cdot0,2H_{2}O\cdot0,3EtOH: C, 55,80; H, 7,26; N, 25,03.

Encontrado: C, 56,01; H, 7,31; N, 24,82.

Ejemplo de referencia 19

(+)-(1S,2R,4R)-4-[6-(aliltio)-2-amino-9H-purin-9-il]-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol

Se agitaron (+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-1,6-dihidro-6-tioxo-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)ciclopentanol (351 mg, 1,25 mmol) e hidróxido sódico 1N (1,25 ml) con cloruro de alilo (0,15 ml) durante 5 horas. La disolución se neutralizó con ácido clorhídrico y se evaporaron los volátiles. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice. El compuesto del título se eluyó con un 12% de metanol-cloroformo como una espuma sólida blanca que solidificó como un polvo blanco en acetonitrilo (240 mg, 60%); p.f. 133-134ºC; espectro de masas (Cl, CH_{4}) 322 (M+1); ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 8,07 (s, 1, H8), 6,51 (a s, 2, NH_{2}), 6,10-5,85 (m, 1, CH=), 5,45-5,30 (m, 1, ½ CH_{2}=), 5,15-5,05 (m, 1, ½ CH_{2}=), 5,0-4,8 (m, 1, CHN), 4,79 (d, J = 4,1 Hz, 1, OH ), 4,66 (t, J = 5,2 Hz, 1, CH_{2}OH), 4,15-4,0 (m, 1, CHO), 3,98 (d, J = 6,9 Hz, 2, CH_{2}S), 3,6-3,4 (m, 2, CH_{2}O), 2,4-1,9 (m, 4, CH + metilenos), 1,75-1,55 (m, 1, ½ CH_{2}); [\alpha]^{20}_{589}+9,30º,
[\alpha]^{20}_{578}+9,68º, [\alpha]^{20}_{546}+11,1º, [\alpha]^{20}_{436}+18,6º, [\alpha]^{20}_{365}+25,4º (c = 0,79, metanol).

Análisis calculado para C_{14}H_{19}N_{5}O_{2}S: C, 52,32; H, 5,96; N, 21,79; S, 9,98.

Encontrado: C, 25,35; H, 5,94; N, 21,82; S, 9,88.

Ejemplo de referencia 20

(+)-(1S,2R,4R)-4-[2-amino-6-(1-azetidinil)-9H-purin-9-il]-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol

Se mantuvieron (+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)ciclopentanol (340 mg, 1,20 mmol), azetidina (98%, Aldrich, 1,0 ml) y metanol (6 ml) a 60ºC en un tubo sellado durante 18 horas. A la disolución enfriada se añadió hidróxido sódico 1N (1,2 ml). Los volátiles se evaporaron y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice. El compuesto del título se eluyó con metanol:acetato de etilo / 15:85 como una espuma blanca que solidificó dando un polvo blanco en metanol-acetonitrilo (333 mg, 91%), p.f. 194-195ºC; espectro de masas (Cl, CH_{4}) 305 (M+1); ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 7,81 (s, 1, H8), 5,88 (a s, 2, NH_{2}), 4,95-4,80 (m, 1, CH-N), 4,76 (d, J = 3,9 Hz, 1, OH), 4,66 (t, J = 5,0 Hz, 1, CH_{2}-OH), 4,4-4,15 (a m, 4, 2CH_{2}N), 4,10-4,0 (m, 1, CHO), 3,6-3,4 (m, 2, CH_{2}O), 2,5-1,9 (m, 6, metileno), 1,75-1,5 (m, 1, ½ CH_{2}); [\alpha]^{20}_{589}+10,1º, [\alpha]^{20}_{578}+10,7º, [\alpha]^{20}_{540}+11,9º, [\alpha]^{20}_{436}+18,3º, [\alpha]^{20}_{365}+25,2º (c = 0,812, metanol).

Análisis calculado para C_{14}H_{20}N_{6}O_{2}: C, 55,25; H, 6,62; N, 27,62.

Encontrado: C, 55,31; H, 6,63; N, 27,71.

Ejemplo de referencia 21

(+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-(ciclopentiloxi)-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)-1-ciclopentanol

Se añadió hidruro sódico (dispersión oleosa al 60%, 113 mg) a ciclopentanol (7 ml). A la disolución resultante, una vez terminada la efervescencia, se añadió (+)-(1S,2R,4R)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-(hidroximetil)ciclopentanol (400 mg, 1,4 mmol). La disolución se mantuvo a 85ºC durante 40 minutos, se enfrió a temperatura ambiente y se neutralizó con ácido clorhídrico 1N. Los volátiles se eliminaron y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice. El compuesto del título se eluyó con metanol:cloroformo / 15:85 como una espuma sólida blanca que se solidificó en acetonitrilo:metanol / 20:1 como un polvo blanco (223 mg, 48%), p.f. 181-182ºC; espectro de masas (Cl, CH_{4}) 305 (M+1); ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 7,97 (s, 1, H8), 6,32 (a s, 2, NH_{2}), 5,60 (m, 1, CHO de ciclopentilo), 5,0-4,8 (m, 1, CHN), 4,78 (d, J = 4,1 Hz, 1, OH), 4,66 (t, J = 5,1 Hz, 1, CH_{2}-OH), 4,1 (m, 1, CHOH), 3,6-3,4 (m, 2, CH_{2}O), 2,4-1,9 (m, 6, metileno), 1,9-1,5 (m, 7, metileno); [\alpha]^{20}_{589}+9,34º, +9,85º, [\alpha]^{20}_{546}+11,1º, [\alpha]^{20}_{430}+18,2º, [\alpha]^{20}_{365}+26,6º (c = 0,782, metanol).

Análisis calculado para C_{16}H_{23}N_{5}O_{3}: C, 57,65; H, 6,95; N, 21,01.

Encontrado: C, 57,74; H, 6,94; N, 20,91.

Ejemplo de referencia 22

(1S,4R)-[2-(2-amino-6-cloro-4-pirimidinil)amino]-2-ciclopenteno-1-metanol

Una disolución de (-)-2-azabiciclo[2.2.1]hept-5-en-3-ona (Enzymatix lote nº LN1253, 30,0 g, 275 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (150 ml) en un matraz de 2 l de fondo redondo con 3 bocas, en atmósfera de nitrógeno, equipado con un termómetro y un agitador mecánico, después se calentó a 35ºC (se disolvió la mayoría del sólido). Mientras tanto, se preparó una disolución de ácido metanosulfónico (28,0 g, 291 mmol) y agua (5,35 g, 297 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) (precaución, la mezcla es muy exotérmica). Esta disolución se añadió lentamente, gota a gota, mediante un embudo de adición al matraz de 2 l durante 10 minutos. Inicialmente, la disolución se enturbió, y para el final de la adición apareció algún sólido en los laterales del matraz. La mezcla se calentó hasta un reflujo suave durante 3 horas (temperatura interna 62-65ºC), después se enfrió (-15ºC). Una muestra secada al aire del sólido blanco tuvo un ^{1}H-RMN idéntico al de la muestra de metanosulfonato del ácido (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-carboxílico, descrito en el Ejemplo 1. Se añadió a la mezcla, gota a gota, una disolución de hidruro de litio y aluminio en tetrahidrofurano (Aldrich, 525 ml, 525 mmol) (lentamente al principio, más rápidamente después) de manera que la temperatura del recipiente permaneció por debajo de 0ºC. Después de que finalizara la adición (necesitó aproximadamente 35 min.) la mezcla se calentó lentamente hasta 22ºC y se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas, después se sometió a reflujo durante 5 horas y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadió fluoruro sódico (150 g, 3,57 mol), se continuó agitando durante 30 minutos, después se enfrió la mezcla en un baño de hielo (5ºC). Se añadió agua (38 g, 1 mol) gota a gota, de manera que la temperatura de recipiente permaneció por debajo de 20ºC (durante 30 minutos), después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos y se filtró. La torta de filtrado se lavó con tetrahidrofurano/metanol (5:2, 700 ml), se agitó durante 15 minutos y se filtró. Esta extracción se repitió y los tres filtrado se combinaron y enfriaron (0ºC), después se volvieron a filtrar. Se concentró una alícuota de 1 ml de esta disolución dando (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-metanol como un aceite incoloro con un análisis idéntico al de la muestra descrita en los Ejemplos 2 y 3. Lo que queda de la disolución se concentró parcialmente a vacío, se diluyó con 1-butanol (500 ml), se concentró más para eliminar el tetrahidrofurano y el metanol y se transfirió a un matraz de 1 l y 3 bocas, en atmósfera de nitrógeno, equipado con un termómetro y un condensador de reflujo. Se añadieron trietiamina (125 ml, 900 mmol) y 2-amino-4,6-dicloropirimidina (47,0 g, 286 mmol), y la mezcla se sometió a reflujo durante 4 horas (temperatura interna 107-108ºC). La disolución de reacción se concentró parcialmente a vacío y se trató con hidróxido sódico 5N (60 ml, 300 mmol). La disolución se concentró a vacío, se diluyó con tolueno (100 ml) y se concentró más para eliminar la trietilamina restante. El aceite residual se recogió en cloroformo (500 ml) y metanol (100 ml), después se filtró la mezcla. La torta de filtrado se lavó con metanol/cloroformo (1:9), después se concentró el filtrado a vacío y el aceite residual se disolvió en cloroformo y se cargó en una columna de gel de sílice que contiene 300 g de sílice. La columna se eluyó inicialmente con un 3% de etanol/cloroformo, después con un 8% de etanol/cloroformo dando fracciones puras del compuesto en cuestión; éstas se concentraron a vacío hasta peso constante dando (1S,4R)-[2-(2-amino-6-cloro-4-pirimidinil)amino]-2-ciclopenteno-1-metanol como una goma tostada pálida (53,1 g, 75%); p.f. 73-75ºC como hidrato de un sólido tostado pálido (metanol/agua). ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 7,00-7,10 (a s, 1H); 6,35-6,45 (a s, 2H), 5,87 (m, 1H), 5,73 (s, 1H), 5,71 (m, 1H), 4,90-5,05 (a s, 1H), 4,64 (t, 1H, J = 5 Hz), 3,36 (m, 2H), 2,60-2,75 (m, 1H), 2,30-2,40 (m, 1H), 1,20-1,30 (m,1H). EM(Cl): m/z 241 (m + H^{+}, 100).
[\alpha]^{20}_{589}-27,3 (c = 0,54, metanol).

Análisis calculado para C_{10}H_{13}ClN_{4}O\cdotH_{2}O: C, 46,43; H, 5,84; N, 21,66.

Encontrado: C, 46,49; H, 5,81; N, 21,79.

Ejemplo de referencia 23

(1S,4R)-4-{(2-amino-6-cloro-5-((4-clorofenil)azo)-4-pirimidinil)amino}-2-ciclopenteno-1-metanol

Una disolución enfriada con hielo (5ºC) de 4-cloroanilina (5,74 g, 45 mmol) en una mezcla de agua (50 ml) y ácido clorhídrico concentrado (13,6 ml) se trató, gota a gota, con una disolución enfriada (5ºC) de nitrito sódico (3,11 g, 45 mmol) en agua (25 ml) a una velocidad que permitió mantener la temperatura del recipiente por debajo de 10ºC. Esta disolución se colocó en un embudo de goteo y se añadió, gota a gota, a una disolución agitada mecánicamente, enfriada (5ºC) de acetato sódico trihidrato (49 g, 360 mmol) e hidrato de (1S,4R)-(2-(2-amino-6-cloro-4-pirimidinil)amino)-2-ciclopenteno-1-metanol (9,99 g, 40 mmol) en agua/ácido acético (1:1, 100 ml) a una velocidad que permitió mantener la temperatura del recipiente por debajo de 10ºC. La mezcla se calentó y agitó a temperatura ambiente durante 18 h, y después se filtró. La torta de filtrado se lavó con agua, se secó al aire, y se trituró en acetonitrilo dando 14,26 g (91%) del compuesto del título como un hidrato (1:0,75); p.f. 218-20ºC (desc.). ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 10,25 (d, 1H, J = 7 Hz); 7,70 (d, 2H, J = 9 Hz); 7,55 (d, 2H, J = 9 Hz); 5,94 (m, 1H); 5,83 (m, 1H); 5,20-5,30 (m, 1H); 3,35-3,50 (m, 2H); 2,70-2,80 (m, 1H); 2,40-2,50 (m, 1H); 1,40-1,55 (m, 1H). EM(Cl): m/z 283 (m-anillo C5, 60); 343 (m-Cl, 40); 379 (m + H^{+} +100). [\alpha]^{20}_{589}+26,8º (c = 0,51, metanol).

Análisis calculado para C_{16}H_{16}Cl_{2}N_{6}O\cdot0,75H_{2}O: C, 48,93; H, 4,49; N, 21,40.

Encontrado: C, 49,02; H, 4,51; N, 21,42.

Ejemplo de referencia 24

(1S,4R)-(4-(2,5-diamino-6-cloro-4-pirimidinil)amino)-2-ciclopenten-1-metanol

Una suspensión de hidrato de (1S,4R)-(4-{(2-amino-6-cloro-5-((4-clorofenil)azo)-4-pirimidinil)-amino)-2-ciclopenteno-1-metanol (0,76 g, 2,0 mmol) en metanol/ácido acético/agua (6:2:1, 9 ml) se trató en partes, durante 10 minutos, con polvo de zinc (1,0 g, 15,3 mmol) de manera que la temperatura del recipiente permaneció durante 1 hora y a 40ºC durante 1 hora, después se concentró a vacío añadiendo tolueno para eliminar el ácido acético y el agua. El residuo se recogió en un 5% de isopropanol-cloroformo y se cargó en una columna de gel de sílice, que se eluyó con un 8% de isopropanol-cloroformo, después con un 15% de isopropanol-cloroformo dando fracciones puras del compuesto en cuestión, que se combinaron y concentraron a vacío dando (1S,4R)-(4-(2,5-diamino-6-cloro-4-pirimidinil)amino)-2-ciclopenten-1-metanol como un sólido rosa tostado (0,39 g, 76%); p.f. 159,5-161,0ºC. ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 6,41 (d, 1H, J = 7 Hz); 5,85-5,95 (m, 1H); 5,70-5,80 (m, 1H); 5,62 (a s, 2H); 5,00 (m, 1H); 1,20-1,40 (m, 1H). EM(Cl): m/z 160 (m-anillo C5, 90); 255 (m + H^{+} +100). [\alpha]^{20}_{589}+0,37º, [\alpha]^{20}_{436}-9,41º (c = 0,54, metanol).

Análisis calculado para C_{10}H_{14}ClN_{5}O: C, 46,97; H, 5,52; N, 27,39.

Encontrado: C, 47,03; H, 5,54; N, 27,45.

Ejemplo de referencia 25

(1S,4R)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-ciclopenteno-1-metanol

Se trató una suspensión de hidrato de (1S,4R)-(4-{(2-amino-6-cloro-5-((4-clorofenil)azo )-4-pirimidinil)-amino)-2-ciclopenteno-1-metanol (1,96 g, 5 mmol) en tetrahidrofurano (15 ml) con ácido acético/agua (1:1,5 ml), después con polvo de zinc (1,63 g, 25 mmol) en partes, de manera que se mantuvo la temperatura del recipiente por debajo de 35ºC. El color amarillo oscuro se decoloró después de 10 minutos, y después de otros 50 minutos la disolución se filtró para eliminar las sales de zinc precipitadas. La torta de filtrado se enjuagó con tetrahidrofurano y el filtrado se volvió a filtrar para eliminar las sales de zinc adicionales, después se concentró a vacío añadiendo tolueno para facilitar la eliminación de agua y ácido acético. El residuo se enjuagó con tolueno/hexano para separar parte del subproducto 4-cloroanilina, se recogió en ortoformiato de trietilo (40 ml), se enfrió en un baño de hielo (5ºC) y se trató, gota a gota, con ácido clorhídrico concentrado (1,9 ml). La mezcla se agitó a 5ºC durante 5 horas (enseguida se formó una suspensión tostada), se calentó lentamente hasta temperatura ambiente, y se agitó durante 18 horas más, después se enfrió en un baño de hielo y se filtró. La torta de filtrado se agitó con éter (filtrado reservado) y este sólido se recogió en agua (30 ml), se filtró y los sólidos se lavaron con agua. El filtrado acuoso se basificó con carbonato sódico hasta pH 9, después se extrajo con un 5% de isopropanol-cloroformo (3 x 25 ml). Los extractos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío hasta dar una espuma tostada residual (0,85 g). El filtrado orgánico anterior se concentró a vacío y el residuo se recogió en ácido clorhídrico 1N (30 ml), se agitó durante 1 hora, se filtró y se ajustó el pH del filtrado a 6 con hidróxido sódico 5 N (6 ml), después se basificó con carbonato sódico. Esta suspensión acuosa se extrajo con un 5% de isopropanol-cloroformo (3 x 25 ml) y los extractos orgánicos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se concentraron a vacío hasta dar una espuma tostada (0,55 g). Se combinaron los dos lotes, se disolvieron en cloroformo templado y se cargaron en una columna de gel de sílice, que se eluyó con un 7% de metanol-cloroformo dando fracciones puras que contenían el compuesto en cuestión. Éstas se concentraron a vacío y la espuma residual cristalizó en acetato de etilo (2 montones) dando 0,86 g (65%) del compuesto del título como un sólido tostado pálido; p.f. 160-162ºC. ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 8,04 (s, 1H); 6,91 (s, 2H); 6,15 (m, 1H); 5,90 (m, 1H); 5,45 (m, 1H); 4,73 (t, 1H, J = 5 Hz); 3,45 (t, 2H, J = 5 Hz); 2,80-2,95 (m, 1H); 2,55-2,70 (m, 1H); 1,60-1,70 (m, 1H). EM(Cl): m/z 170 (m-anillo C5, 100); 230 (m-Cl, 50); 266 (m + H^{+} +100). [\alpha]^{20}_{589}-104º, [\alpha]^{20}_{436}-267º (c = 0,29, metanol).

Análisis calculado para C_{11}H_{12}ClN_{5}O: C, 49,73; H, 4,55; N, 26,36.

Encontrado: C, 49,89; H, 4,61; N, 26,25.

Ejemplo de referencia 26

(-)-(1S,4R)-4-[2-amino-6-(ciclopropilmetilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclopenteno-1-metanol

Se sometieron a reflujo (1S,4R)-4-(2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-ciclopenteno-1-metanol (274 mg, 1,00
mmol), N-ciclopropil-N-metilamina (0,71 g, 10 mmol) y etanol absoluto durante 5,0 horas. Se evaporaron los volátiles y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice. El compuesto del título se eluyó con un 10% de metanol-cloroformo como un vidrio incoloro. La evaporación de la disolución de etanol dando el compuesto del título como una espuma sólida incolora (293 mg, 98%). ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta: 0,56 y 0,63 (2m, 4, 2-ciclopropilCH_{2}), 1,56 y 2,60 (2m, 2, ciclopentilCH_{2}), 2,85 (m, 1, H-4'), 3,02 (m, 1, ciclopropil CHNH); 3,43 (m, 2, CH_{2}OH); 4,71 (t, 1, CH_{2}OH); 5,40 (m, 1, H-1'); 5,85-5,70 (m solapado con s a 5,77, 3, NH_{2} y =CH); 6,09 (m, 1, =CH); 7,23 (d, 1, NHCH), 7,58 (s, 1, purina H-8). EM(Cl): m/z 287 (m + 1). [\alpha]^{20}_{589}-59,7º, [\alpha]^{20}_{436}-128º (c = 0,15, metanol).

Análisis calculado para C_{24}H_{18}N_{6}O\cdot0,15 EtOH\cdot0,05 H_{2}O: C, 58,39; H, 6,51; N, 28,57.

Encontrado: C, 58,11; H, 6,84; N, 28,92.

Ejemplo 8 (+)-(1R,4S)-4-amino-2-ciclopenteno-1-metanol

Se agitó una mezcla de ácido (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-carboxílico (Chiros Ltd., Cambridge, Inglaterra; 40,00 g, 0,315 mol) en tetrahidrofurano seco (300 ml) en un baño de hielo mientras se añadía hidruro de litio y aluminio 1M en tetrahidrofurano (Aldrich, 485 ml) durante 1,5 horas. No se permitió que la temperatura durante esta adición sobrepasara los 0ºC. la mezcla se llevó a temperatura ambiente y después a reflujo durante una hora y se mantuvo a reflujo durante 2,5 horas. Se dejó que la mezcla se enfriara a temperatura ambiente y se añadió fluoruro sódico (89,6 g) y se continuó agitando durante 0,5 horas más. La mezcla se enfrió (baño de hielo) y se añadió agua (23 ml) lentamente. Se continuó agitando durante 0,5 horas más. El precipitado se filtró y se extrajo con un 40% de metanol-tetrahidrofurano (2 x 300 ml). El filtrado-lavado se concentró a vacío hasta dar un aceite incoloro que se oscureció rápidamente al aire y la luz. Dicha muestra se secó a temperatura ambiente / 0,2 mmHg hasta dar un aceite amarillo pálido; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) idéntico al del enantiómero descrito en el Ejemplo de referencia 1, \delta: 5,67 (m, 2, CH=CH); 3,8-3,7 (m, 1, CHN), 3,32 (d, J = 6,0 Hz, solapado por el ancho pico D_{2}O intercambiable, centrado en 3,18, CH_{2}O, OH, NH_{2} y H_{2}O en disolvente); 2,68-2,56 (m, 1, H-1), 2,28-2,18 (m, 1, ½ CH_{2}); espectro de masas (Cl): 114 (M+1); [\alpha]^{20}_{589}+55,0º, [\alpha]^{20}_{578}+58,3º, [\alpha]^{20}_{546}+67,4º, [\alpha]^{20}_{436}+119º (c = 0,242, metanol).

Análisis calculado para C_{6}H_{11}NO\cdot0,31H_{2}O: C, 60,69; H, 9,86; N, 11,80.

Encontrado: C, 61,12; H, 9,79; N, 11,38.

Claims (7)

1. Un compuesto de fórmula (VIIa), a continuación, o una mezcla racémica del mismo con su enantiómero de imagen especular:

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en la que R^{6} es terc-butoxicarbonilo.

2. Un compuesto según se reivindica en la reivindicación 1, que es (\pm)-cis-N-[4-(hidroximetil)-2-ciclopenten-1-il]carbamato de terc-butilo.

3. Un compuesto según se reivindica en la reivindicación 1, que es (-)-(1R,4S)-N-[4-(hidroximetil)-2-ciclopenten-1-il]carbamato de terc-butilo.

4. Un procedimiento de preparación de (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-metanol de fórmula (VIIb), a continuación, su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros:

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como intermedio en la preparación de un compuesto de fórmula (VIIa) según se reivindica en la reivindicación 1, que comprende reducir ácido (-)-(1S,4R)-4-amino-2-ciclopenteno-1-carboxílico de fórmula (VIII), a continuación, o una sal del mismo, su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros:

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5. Un procedimiento según se reivindica en la reivindicación 4, en el que el compuesto de fórmula (VIII), su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros está en forma de una sal de base o una sal de adición de ácido de fórmula (VIIIa) o (VIIIb), respectivamente, su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros:

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en la que W^{+} representa un catión y X^{-} representa un anión

6. Un procedimiento según se reivindica en la reivindicación 5 en el que el compuesto de fórmula (VIII), su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros se utiliza en forma de un compuesto de fórmula (VIIIb), su enantiómero de imagen especular o una mezcla de dichos enantiómeros en la que X^{-} representa el anión de un ácido sulfónico orgánico.

7. Un procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 4 ó 6 en el que la reducción se efectúa usando un hidruro de aluminio.