JP2017517518A - 増強された抗体の有効性のための普遍的グリコフォームに関する組成物および方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、糖鎖工学により操作されたＦｃ領域を含む糖タンパク質、特にモノクローナル抗体に関し、前記Ｆｃ領域は、Ｓｉａ２（α２−６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２の構造を有する最適化されたＮ−グリカンを含む。糖鎖工学により操作されたＦｃ領域は、ＦｃγＲＩＩＡまたはＦｃγＲＩＩＩＡに、野生型Ｆｃ領域を含む同等のモノクローナル抗体に比べて高い親和性で結合する。本発明のモノクローナル抗体は、ＦｃγＲによって媒介されるエフェクター細胞機能（例えば、ＡＤＣＣ）の有効性の増強が所望される疾患、障害、または感染、例えばがん、自己免疫疾患、感染症に付随する１つまたは複数の症状の予防、処置、または好転、および効果がＡＤＣＣによって媒介される治療用抗体の治療有効性の増強において特に有用である。

Description

関連出願
この出願は、２０１４年５月２７日に出願された米国仮出願連続番号第（ＵＳＳＮ）６２／００３，１３６号、２０１４年５月２７日に出願されたＵＳＳＮ ６２／００３，１０４号、２０１４年５月２８日に出願されたＵＳＳＮ ６２／００３，９０８号、２０１４年７月２日に出願されたＵＳＳＮ ６２／０２０，１９９号および２０１５年１月３０日に出願されたＵＳＳＮ ６２／１１０，３３８号への優先権の利益を主張する。これらそれぞれの内容は、それらの全体が参考として本明細書に援用される。

抗体に基づく治療には、炎症性障害、がん、感染症、および固形臓器移植片拒絶反応を含めた多くの疾患に対する有効性に関して証明された記録がある。現在、４０種を超える治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が、ＵＳＡ、ＥＵおよびいくつかの他の国において臨床使用について認可を受けている。それらの大部分はがんおよび免疫疾患の治療用である。抗腫瘍活性を有する治療用抗体の例としては、抗ＣＤ２０、抗Ｈｅｒ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＣＤ４０、抗ＣＴＬＡ−４、および抗ＰＤ−１抗体が挙げられる。

治療用抗体の大多数はモノクローナルであり、種の差異に由来する所望されない免疫学的応答を回避するためにマウス／ヒトキメラまたはヒト化抗体を発現するようにトランスジェニックヒト化マウスを組み入れるハイブリドーマ技術によって調製されたものである。最近、完全ヒト抗体の開発が主要な傾向になっており、その印象的な進行には、ファージディスプレイされた抗体ライブラリーまたは単一のＢ細胞の利用が役立っている。

多くの他の哺乳動物タンパク質と同様に、抗体は、不均一にグリコシル化されており、グリカンはＦｃ受容体と相互作用することによって抗体の活性に著しく影響を及ぼし得るので、Ｆｃ領域におけるグリコシル化が効果的かつ安全な治療用モノクローナル抗体における重要な問題になっている。したがって、これらの相互作用を理解するため、および薬物適用における安全性および有効性を改善するために、明確に定義されたＦｃ−グリカンを有する均一なモノクローナル抗体の開発が必要とされている。この目標に向かって、コアフコース残基を除去することにより、Ｆｃ−グリカンとヒトＦｃγＲＩＩＩａ受容体の相互作用が増大することに起因してＩｇＧの抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）活性が増強されることが報告されている。ＦＤＡの認可を受けた、糖鎖工学により操作された（ｇｌｙｃｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）抗体であるモガムリズマブ（ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（登録商標））およびオビヌツズマブ（ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｎ）（ＧＡ１０１）の２種は、脱フコシル化（ｄｅｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体であり、ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（登録商標）はＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞株によって産生されたものであり、ＧＡ１０１はＧｎＴ−ＩＩＩ過剰発現系から産生されたものである。さらに、長期ＲＡの単球においてより多くのＦｃγＩＩＩａが発現し、また、ＲＡ患者のＩｇＧ重鎖においてより多くのフコシル化の傾向も見いだされ、これは、炎症促進性サイトカインを中和するだけでなく、ＦｃγＩＩＩａについて自己由来の自己抗体と競合もする無フコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅ）医薬抗体を用いたＲＡ処置および寛解の可能性があることを意味する。

したがって、最適化されたＦｃグリコフォームを有する治療用モノクローナル抗体を生成することが大変興味深い。

本開示は、モノクローナル抗体、特にモノクローナル抗体の均一な集団（「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」）に対する糖鎖最適化（ｇｌｙｃｏ−ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ）Ｆｃの発見に基づく。最適化グリコフォームは、エフェクター細胞機能（例えば、ＡＤＣＣ）の有効性の増強を示す。

「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という用語は、本発明者、Ｃｈｉ−Ｈｕｅｙ Ｗｏｎｇ博士により造り出されたものであり、Ｆｃ上に単一の一様なＮ−グリカンを有するモノクローナル抗体（好ましくは、治療用モノクローナル抗体）の均一な集団を指す。均一な集団を構成する個々の糖操作抗体群は実質的に同一であり、同じエピトープに結合し、また、明確に定義されたグリカン構造および配列を有する同じＦｃグリカンを含有する。

「実質的に同一」とは、比較される対象が、当業者に理解される通り、基本的に同じという程度に酷似していることを意味する。「実質的に同一」は、「同一」を包含する。

本明細書で使用される場合、「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」（「ＧＡｂｓ」）という用語は、Ｆｃ上に同じＮ−グリカンを有するＩｇＧ分子の均一な集団を指す。「糖操作抗体（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｙ）」（「ＧＡｂ」）という用語は、糖操作抗体群内の個々のＩｇＧ分子を指す。

したがって、本開示の一態様は、Ｆｃ上に、単一の一様なＮ−グリカンであって、構造がエフェクター細胞機能の有効性を増強するための最適化Ｎ−グリカン構造であるＮ−グリカンを含むモノクローナル抗体の均一な集団の組成物に関する。

好ましい実施形態では、Ｎ−グリカンはＦｃ領域のＡｓｎ−２９７に付着している。

好ましい実施形態では、Ｎ−グリカンは、Ｓｉａ_２（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２の構造からなる。

本明細書に記載の糖操作抗体群は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで作製することができる。糖操作抗体群は、Ｆｃ糖鎖工学によって生成することができる。ある特定の実施形態では、糖操作抗体群は、哺乳動物細胞培養によって得られるモノクローナル抗体から酵素的にまたは化学酵素的に工学的に作製される。

一部の実施形態では、本明細書に記載の糖操作抗体群のＦｃ領域は、対応するモノクローナル抗体の野生型Ｆｃ領域に比べてＦｃγＲＩＩＡまたはＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合親和性の増大を示す。

一部の実施形態では、本明細書に記載の糖操作抗体群は、野生型免疫グロブリンに比べて抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）活性の増強を示す。

一部の実施形態では、糖操作抗体群は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からなる群より選択される。

モノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体、ヒトモノクローナル抗体またはキメラモノクローナル抗体であってよい。

本明細書に記載の糖操作抗体群はがん、自己免疫障害、炎症性障害または感染症に関連する抗原に結合し得る。

一部の実施形態では、本明細書に記載の糖操作抗体は、糖鎖工学により操作された抗ＣＤ２０である。いくつかの例では、本明細書に記載の糖操作抗体は、糖鎖工学により操作されたリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））である。

一部の実施形態では、本明細書に記載の糖操作抗体は、糖鎖工学により操作された抗ＨＥＲ２である。いくつかの例では、本明細書に記載の糖操作抗体は、糖鎖工学により操作されたトラスツズマブ（ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）（登録商標））である。

一部の実施形態では、本明細書に記載の糖操作抗体は、糖鎖工学により操作された抗ＴＮＦαである。いくつかの例では、本明細書に記載の糖操作抗体は、糖鎖工学により操作されたアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））である。

一部の実施形態では、本明細書に記載の糖操作抗体は、糖鎖工学により操作されたＦ１６抗体である。

本開示の別の態様は、本明細書に記載の糖操作抗体群の組成物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を特徴とする。医薬組成物は、腫瘍学、自己免疫障害、炎症性障害および感染症など、治療薬において使用することができる。

一部の実施形態では、医薬組成物を、ＦｃγＲによって媒介されるエフェクター細胞機能（例えば、ＡＤＣＣ）の有効性の増強が所望される疾患、障害、または感染、例えばがん、自己免疫疾患、感染症に付随する１つまたは複数の症状を防止する、処置する、または好転させるために、および効果がＡＤＣＣによって媒介される治療用抗体の治療有効性の増強において使用する。

本開示には、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増強するための方法であって、被験体に、ある量の本明細書に記載の糖操作抗体群を投与するステップを含む方法も含まれる。

さらに、本開示には、疾患、障害、または感染に付随する１つまたは複数の症状を防止する、処置する、または好転させるための方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法が含まれる。疾患、障害、または感染は、がん、自己免疫障害、炎症性障害および伝染性感染症からなる群より選択することができる。

本開示の別の態様は、それを必要とするヒト被験体においてウイルス性疾患を処置するための方法であって、（ａ）被験体にＮＫ細胞の抑制性受容体（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を遮断する第１の化合物を投与するステップと、（ｂ）被験体に治療有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップとを含む方法を特徴とする。

本明細書に記載のこれらの処置方法では、糖操作抗体群の医薬組成物は、単独で、または、第２の抗体、もしくは化学療法剤もしくは免疫抑制剤などの第２の治療剤と併せて投与することができる。

本出願は、種々の発行特許、公開特許出願、学術論文、および他の刊行物を参照し、全てが参照により本明細書に組み込まれる。

本発明の１つまたは複数の実施形態の詳細が以下の説明に記載されている。本発明の他の特徴または利点は、以下の図およびいくつかの実施形態の詳細な説明から、ならびに添付の特許請求の範囲からも明らかになるであろう。

図１は、ＩｇＧ１のＦｃ領域のグリカン構造のリモデリング（ｂ）によって均一な抗体を調製するための一般的な戦略（ａ）を示す。 図１は、ＩｇＧ１のＦｃ領域のグリカン構造のリモデリング（ｂ）によって均一な抗体を調製するための一般的な戦略（ａ）を示す。

図２は、種々の、糖鎖工学により操作されたリツキシマブの抗体依存性Ｂ細胞枯渇活性を示す。ヒトＢ細胞の枯渇を、新しく調製したヒトＰＢＭＣ細胞を使用して行い、ＦＡＣＳでＣＤ１９＋ＣＤ２−Ｂ細胞に基づいて分析した。（Ａ）一連の異なる、糖鎖工学により操作されたリツキシマブと比較して、２，６−ＮＳＣＴリツキシマブによって示される枯渇能力はより高いものであった。（Ｂ）１０ドナーの全血Ｂ細胞枯渇活性では、２，６−シアリル化リツキシマブの活性が無処理のリツキシマブよりも有意に高く、ｐ値は０．００１６であり、一方、モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブにより最低の活性が示された。（Ｃ）調製したラモスおよびラジのリツキシマブ抵抗性細胞は細胞表面上に発現するＣＤ２０のレベルがより低い。（Ｄ、Ｅ）２，６−ＮＳＣＴリツキシマブにより正常細胞と抵抗性細胞のどちらに対しても注目すべきＡＤＣＣ有効性が示されたが、無処理の抗体の抵抗性株に対する活性は劇的に失われた。 図２は、種々の、糖鎖工学により操作されたリツキシマブの抗体依存性Ｂ細胞枯渇活性を示す。ヒトＢ細胞の枯渇を、新しく調製したヒトＰＢＭＣ細胞を使用して行い、ＦＡＣＳでＣＤ１９＋ＣＤ２−Ｂ細胞に基づいて分析した。（Ａ）一連の異なる、糖鎖工学により操作されたリツキシマブと比較して、２，６−ＮＳＣＴリツキシマブによって示される枯渇能力はより高いものであった。（Ｂ）１０ドナーの全血Ｂ細胞枯渇活性では、２，６−シアリル化リツキシマブの活性が無処理のリツキシマブよりも有意に高く、ｐ値は０．００１６であり、一方、モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブにより最低の活性が示された。（Ｃ）調製したラモスおよびラジのリツキシマブ抵抗性細胞は細胞表面上に発現するＣＤ２０のレベルがより低い。（Ｄ、Ｅ）２，６−ＮＳＣＴリツキシマブにより正常細胞と抵抗性細胞のどちらに対しても注目すべきＡＤＣＣ有効性が示されたが、無処理の抗体の抵抗性株に対する活性は劇的に失われた。 図２は、種々の、糖鎖工学により操作されたリツキシマブの抗体依存性Ｂ細胞枯渇活性を示す。ヒトＢ細胞の枯渇を、新しく調製したヒトＰＢＭＣ細胞を使用して行い、ＦＡＣＳでＣＤ１９＋ＣＤ２−Ｂ細胞に基づいて分析した。（Ａ）一連の異なる、糖鎖工学により操作されたリツキシマブと比較して、２，６−ＮＳＣＴリツキシマブによって示される枯渇能力はより高いものであった。（Ｂ）１０ドナーの全血Ｂ細胞枯渇活性では、２，６−シアリル化リツキシマブの活性が無処理のリツキシマブよりも有意に高く、ｐ値は０．００１６であり、一方、モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブにより最低の活性が示された。（Ｃ）調製したラモスおよびラジのリツキシマブ抵抗性細胞は細胞表面上に発現するＣＤ２０のレベルがより低い。（Ｄ、Ｅ）２，６−ＮＳＣＴリツキシマブにより正常細胞と抵抗性細胞のどちらに対しても注目すべきＡＤＣＣ有効性が示されたが、無処理の抗体の抵抗性株に対する活性は劇的に失われた。 図２は、種々の、糖鎖工学により操作されたリツキシマブの抗体依存性Ｂ細胞枯渇活性を示す。ヒトＢ細胞の枯渇を、新しく調製したヒトＰＢＭＣ細胞を使用して行い、ＦＡＣＳでＣＤ１９＋ＣＤ２−Ｂ細胞に基づいて分析した。（Ａ）一連の異なる、糖鎖工学により操作されたリツキシマブと比較して、２，６−ＮＳＣＴリツキシマブによって示される枯渇能力はより高いものであった。（Ｂ）１０ドナーの全血Ｂ細胞枯渇活性では、２，６−シアリル化リツキシマブの活性が無処理のリツキシマブよりも有意に高く、ｐ値は０．００１６であり、一方、モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブにより最低の活性が示された。（Ｃ）調製したラモスおよびラジのリツキシマブ抵抗性細胞は細胞表面上に発現するＣＤ２０のレベルがより低い。（Ｄ、Ｅ）２，６−ＮＳＣＴリツキシマブにより正常細胞と抵抗性細胞のどちらに対しても注目すべきＡＤＣＣ有効性が示されたが、無処理の抗体の抵抗性株に対する活性は劇的に失われた。 図２は、種々の、糖鎖工学により操作されたリツキシマブの抗体依存性Ｂ細胞枯渇活性を示す。ヒトＢ細胞の枯渇を、新しく調製したヒトＰＢＭＣ細胞を使用して行い、ＦＡＣＳでＣＤ１９＋ＣＤ２−Ｂ細胞に基づいて分析した。（Ａ）一連の異なる、糖鎖工学により操作されたリツキシマブと比較して、２，６−ＮＳＣＴリツキシマブによって示される枯渇能力はより高いものであった。（Ｂ）１０ドナーの全血Ｂ細胞枯渇活性では、２，６−シアリル化リツキシマブの活性が無処理のリツキシマブよりも有意に高く、ｐ値は０．００１６であり、一方、モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブにより最低の活性が示された。（Ｃ）調製したラモスおよびラジのリツキシマブ抵抗性細胞は細胞表面上に発現するＣＤ２０のレベルがより低い。（Ｄ、Ｅ）２，６−ＮＳＣＴリツキシマブにより正常細胞と抵抗性細胞のどちらに対しても注目すべきＡＤＣＣ有効性が示されたが、無処理の抗体の抵抗性株に対する活性は劇的に失われた。 図２は、種々の、糖鎖工学により操作されたリツキシマブの抗体依存性Ｂ細胞枯渇活性を示す。ヒトＢ細胞の枯渇を、新しく調製したヒトＰＢＭＣ細胞を使用して行い、ＦＡＣＳでＣＤ１９＋ＣＤ２−Ｂ細胞に基づいて分析した。（Ａ）一連の異なる、糖鎖工学により操作されたリツキシマブと比較して、２，６−ＮＳＣＴリツキシマブによって示される枯渇能力はより高いものであった。（Ｂ）１０ドナーの全血Ｂ細胞枯渇活性では、２，６−シアリル化リツキシマブの活性が無処理のリツキシマブよりも有意に高く、ｐ値は０．００１６であり、一方、モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブにより最低の活性が示された。（Ｃ）調製したラモスおよびラジのリツキシマブ抵抗性細胞は細胞表面上に発現するＣＤ２０のレベルがより低い。（Ｄ、Ｅ）２，６−ＮＳＣＴリツキシマブにより正常細胞と抵抗性細胞のどちらに対しても注目すべきＡＤＣＣ有効性が示されたが、無処理の抗体の抵抗性株に対する活性は劇的に失われた。

図３は、Ｖ１５８ ＦｃγＲＩＩＩａ媒介性ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイにおける、糖鎖工学により操作されたハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）のＥＣ５０を示す。標的細胞としてＳＫＢＲ３、およびエフェクター細胞としてＶ１５８ ＦｃγＲＩＩＩａを工学的に作製したジャーカットを用い、Ｅ／Ｔ比６：１の下で実験を実施した。同じグラフに示されているデータは全て、同じマイクロプレートおよび同じエフェクター細胞のバッチで行った実験であった；９５％信頼区間の棒がプロットされていた。（Ａ）無フコシル化ハーセプチンＧ８および市販のハーセプチンにより同様のＡＤＣＣ効果が示され、これにより、抗ＦｃγＲＩＩＩａの脱フコシル化による利点が無フコシル化ハーセプチンＧ８では失われることが例示される。（Ｂ）バイセクト型（ｂｉｓｅｃｔｅｄ）およびその非バイセクト型（ｎｏｎ−ｂｉｓｅｃｔｅｄ）類似体ハーセプチンであるＧ９およびＧ４により同様のＥＣ５０値が示され、これにより、このアッセイではより良好なバイセクト型グリカン媒介性ＡＤＣＣ機能は観察されなかったことが示される。（Ｃ）ガラクトース末端を２つ有する、糖鎖工学により操作されたハーセプチンＧ１と比較して、２，６−シアリル化抗体では有意なＥＣ５０変化が観察されなかったが、２，３−シアリル化ハーセプチンでは見かけのＥＣ５０上昇が示された。結果から、Ｆｃにおける２，３−シアリル化によりエフェクター細胞活性化が低下するが、２，６結合したものではエフェクター細胞活性化は低下しないことが示された。誘導倍率（ｆｏｌｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）の曲線は、誘導された発光を、抗体を用いない対照の誘導で割った結果であった。（Ｄ）グラフ（Ａ）〜（Ｃ）においてＥＣ５０が最低である試料を選択し、市販のハーセプチンと比較した。このＡＤＣＣレポーターバイオアッセイにおいて、全ての試料でより良好な活性が実証された。 図３は、Ｖ１５８ ＦｃγＲＩＩＩａ媒介性ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイにおける、糖鎖工学により操作されたハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）のＥＣ５０を示す。標的細胞としてＳＫＢＲ３、およびエフェクター細胞としてＶ１５８ ＦｃγＲＩＩＩａを工学的に作製したジャーカットを用い、Ｅ／Ｔ比６：１の下で実験を実施した。同じグラフに示されているデータは全て、同じマイクロプレートおよび同じエフェクター細胞のバッチで行った実験であった；９５％信頼区間の棒がプロットされていた。（Ａ）無フコシル化ハーセプチンＧ８および市販のハーセプチンにより同様のＡＤＣＣ効果が示され、これにより、抗ＦｃγＲＩＩＩａの脱フコシル化による利点が無フコシル化ハーセプチンＧ８では失われることが例示される。（Ｂ）バイセクト型（ｂｉｓｅｃｔｅｄ）およびその非バイセクト型（ｎｏｎ−ｂｉｓｅｃｔｅｄ）類似体ハーセプチンであるＧ９およびＧ４により同様のＥＣ５０値が示され、これにより、このアッセイではより良好なバイセクト型グリカン媒介性ＡＤＣＣ機能は観察されなかったことが示される。（Ｃ）ガラクトース末端を２つ有する、糖鎖工学により操作されたハーセプチンＧ１と比較して、２，６−シアリル化抗体では有意なＥＣ５０変化が観察されなかったが、２，３−シアリル化ハーセプチンでは見かけのＥＣ５０上昇が示された。結果から、Ｆｃにおける２，３−シアリル化によりエフェクター細胞活性化が低下するが、２，６結合したものではエフェクター細胞活性化は低下しないことが示された。誘導倍率（ｆｏｌｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）の曲線は、誘導された発光を、抗体を用いない対照の誘導で割った結果であった。（Ｄ）グラフ（Ａ）〜（Ｃ）においてＥＣ５０が最低である試料を選択し、市販のハーセプチンと比較した。このＡＤＣＣレポーターバイオアッセイにおいて、全ての試料でより良好な活性が実証された。 図３は、Ｖ１５８ ＦｃγＲＩＩＩａ媒介性ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイにおける、糖鎖工学により操作されたハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）のＥＣ５０を示す。標的細胞としてＳＫＢＲ３、およびエフェクター細胞としてＶ１５８ ＦｃγＲＩＩＩａを工学的に作製したジャーカットを用い、Ｅ／Ｔ比６：１の下で実験を実施した。同じグラフに示されているデータは全て、同じマイクロプレートおよび同じエフェクター細胞のバッチで行った実験であった；９５％信頼区間の棒がプロットされていた。（Ａ）無フコシル化ハーセプチンＧ８および市販のハーセプチンにより同様のＡＤＣＣ効果が示され、これにより、抗ＦｃγＲＩＩＩａの脱フコシル化による利点が無フコシル化ハーセプチンＧ８では失われることが例示される。（Ｂ）バイセクト型（ｂｉｓｅｃｔｅｄ）およびその非バイセクト型（ｎｏｎ−ｂｉｓｅｃｔｅｄ）類似体ハーセプチンであるＧ９およびＧ４により同様のＥＣ５０値が示され、これにより、このアッセイではより良好なバイセクト型グリカン媒介性ＡＤＣＣ機能は観察されなかったことが示される。（Ｃ）ガラクトース末端を２つ有する、糖鎖工学により操作されたハーセプチンＧ１と比較して、２，６−シアリル化抗体では有意なＥＣ５０変化が観察されなかったが、２，３−シアリル化ハーセプチンでは見かけのＥＣ５０上昇が示された。結果から、Ｆｃにおける２，３−シアリル化によりエフェクター細胞活性化が低下するが、２，６結合したものではエフェクター細胞活性化は低下しないことが示された。誘導倍率（ｆｏｌｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）の曲線は、誘導された発光を、抗体を用いない対照の誘導で割った結果であった。（Ｄ）グラフ（Ａ）〜（Ｃ）においてＥＣ５０が最低である試料を選択し、市販のハーセプチンと比較した。このＡＤＣＣレポーターバイオアッセイにおいて、全ての試料でより良好な活性が実証された。 図３は、Ｖ１５８ ＦｃγＲＩＩＩａ媒介性ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイにおける、糖鎖工学により操作されたハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）のＥＣ５０を示す。標的細胞としてＳＫＢＲ３、およびエフェクター細胞としてＶ１５８ ＦｃγＲＩＩＩａを工学的に作製したジャーカットを用い、Ｅ／Ｔ比６：１の下で実験を実施した。同じグラフに示されているデータは全て、同じマイクロプレートおよび同じエフェクター細胞のバッチで行った実験であった；９５％信頼区間の棒がプロットされていた。（Ａ）無フコシル化ハーセプチンＧ８および市販のハーセプチンにより同様のＡＤＣＣ効果が示され、これにより、抗ＦｃγＲＩＩＩａの脱フコシル化による利点が無フコシル化ハーセプチンＧ８では失われることが例示される。（Ｂ）バイセクト型（ｂｉｓｅｃｔｅｄ）およびその非バイセクト型（ｎｏｎ−ｂｉｓｅｃｔｅｄ）類似体ハーセプチンであるＧ９およびＧ４により同様のＥＣ５０値が示され、これにより、このアッセイではより良好なバイセクト型グリカン媒介性ＡＤＣＣ機能は観察されなかったことが示される。（Ｃ）ガラクトース末端を２つ有する、糖鎖工学により操作されたハーセプチンＧ１と比較して、２，６−シアリル化抗体では有意なＥＣ５０変化が観察されなかったが、２，３−シアリル化ハーセプチンでは見かけのＥＣ５０上昇が示された。結果から、Ｆｃにおける２，３−シアリル化によりエフェクター細胞活性化が低下するが、２，６結合したものではエフェクター細胞活性化は低下しないことが示された。誘導倍率（ｆｏｌｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）の曲線は、誘導された発光を、抗体を用いない対照の誘導で割った結果であった。（Ｄ）グラフ（Ａ）〜（Ｃ）においてＥＣ５０が最低である試料を選択し、市販のハーセプチンと比較した。このＡＤＣＣレポーターバイオアッセイにおいて、全ての試料でより良好な活性が実証された。

図４は、修飾された均一なＳＣＴグリカンをＦｃ Ａｓｎ２９７に付着させた抗インフルエンザ抗体ＦＩ６（ＦＩ６ｍ）ではＡＤＣＣ活性の増強が有意に示され、マウスが致死用量のＨ１Ｎ１ウイルス攻撃から予防的に保護されたことを示す。（ａ）細胞傷害性が、ＰＢＭＣ（エフェクター細胞）および様々な濃度の抗体と一緒にインキュベートした際にインフルエンザＨ１赤血球凝集素（ＨＡ）（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９）を発現した、溶解したＨＥＫ２９３Ｔ細胞（標的細胞）の百分率として表されている。（ｂ）ＡＤＣＣ活性を、活性化Ｔ細胞経路のＡＤＣＣシグナル伝達核因子が活性化されるとシグナルを生じるルシフェラーゼレポーターアッセイからの生物発光の増加倍率として示した。ＨＡを発現したＨＥＫ２９３Ｔ細胞（標的細胞）を、前記ルシフェラーゼレポーター（エフェクター細胞）および種々の量の抗インフルエンザ抗体ＦＩ６およびＦＩ６ｍを伴うＮＫ細胞と一緒にインキュベートした。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて４ＰＬ非線形回帰で曲線あてはめを行った。（ｃ）インフルエンザウイルスＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９（Ｈ１Ｎ１）を致死用量（１０ＭＬＤ５０）で感染させた時のマウスの生存をモニターした。感染の２時間前に、マウスの各群（Ｎ＝９）に、ＦＩ６、ＦＩ６ｍまたはＰＢＳを、それぞれ２．５ｍｇ／ｋｇで腹腔内に与えた。ＦＩ６群とＦＩ６ｍ群には有意な生存差異があった（ｐ＜０．０１）。 図４は、修飾された均一なＳＣＴグリカンをＦｃ Ａｓｎ２９７に付着させた抗インフルエンザ抗体ＦＩ６（ＦＩ６ｍ）ではＡＤＣＣ活性の増強が有意に示され、マウスが致死用量のＨ１Ｎ１ウイルス攻撃から予防的に保護されたことを示す。（ａ）細胞傷害性が、ＰＢＭＣ（エフェクター細胞）および様々な濃度の抗体と一緒にインキュベートした際にインフルエンザＨ１赤血球凝集素（ＨＡ）（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９）を発現した、溶解したＨＥＫ２９３Ｔ細胞（標的細胞）の百分率として表されている。（ｂ）ＡＤＣＣ活性を、活性化Ｔ細胞経路のＡＤＣＣシグナル伝達核因子が活性化されるとシグナルを生じるルシフェラーゼレポーターアッセイからの生物発光の増加倍率として示した。ＨＡを発現したＨＥＫ２９３Ｔ細胞（標的細胞）を、前記ルシフェラーゼレポーター（エフェクター細胞）および種々の量の抗インフルエンザ抗体ＦＩ６およびＦＩ６ｍを伴うＮＫ細胞と一緒にインキュベートした。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて４ＰＬ非線形回帰で曲線あてはめを行った。（ｃ）インフルエンザウイルスＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９（Ｈ１Ｎ１）を致死用量（１０ＭＬＤ５０）で感染させた時のマウスの生存をモニターした。感染の２時間前に、マウスの各群（Ｎ＝９）に、ＦＩ６、ＦＩ６ｍまたはＰＢＳを、それぞれ２．５ｍｇ／ｋｇで腹腔内に与えた。ＦＩ６群とＦＩ６ｍ群には有意な生存差異があった（ｐ＜０．０１）。 図４は、修飾された均一なＳＣＴグリカンをＦｃ Ａｓｎ２９７に付着させた抗インフルエンザ抗体ＦＩ６（ＦＩ６ｍ）ではＡＤＣＣ活性の増強が有意に示され、マウスが致死用量のＨ１Ｎ１ウイルス攻撃から予防的に保護されたことを示す。（ａ）細胞傷害性が、ＰＢＭＣ（エフェクター細胞）および様々な濃度の抗体と一緒にインキュベートした際にインフルエンザＨ１赤血球凝集素（ＨＡ）（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９）を発現した、溶解したＨＥＫ２９３Ｔ細胞（標的細胞）の百分率として表されている。（ｂ）ＡＤＣＣ活性を、活性化Ｔ細胞経路のＡＤＣＣシグナル伝達核因子が活性化されるとシグナルを生じるルシフェラーゼレポーターアッセイからの生物発光の増加倍率として示した。ＨＡを発現したＨＥＫ２９３Ｔ細胞（標的細胞）を、前記ルシフェラーゼレポーター（エフェクター細胞）および種々の量の抗インフルエンザ抗体ＦＩ６およびＦＩ６ｍを伴うＮＫ細胞と一緒にインキュベートした。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いて４ＰＬ非線形回帰で曲線あてはめを行った。（ｃ）インフルエンザウイルスＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９（Ｈ１Ｎ１）を致死用量（１０ＭＬＤ５０）で感染させた時のマウスの生存をモニターした。感染の２時間前に、マウスの各群（Ｎ＝９）に、ＦＩ６、ＦＩ６ｍまたはＰＢＳを、それぞれ２．５ｍｇ／ｋｇで腹腔内に与えた。ＦＩ６群とＦＩ６ｍ群には有意な生存差異があった（ｐ＜０．０１）。

定義
本発明の実施では、別段の指定のない限り、当技術分野の技術の範囲内に入る分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、および免疫学の従来の技法を使用する。そのような技法は、文献において十分に説明されている。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ編（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８９年）；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｉ巻およびＩＩ巻（Ｄ． Ｎ． Ｇｌｏｖｅｒ編、１９８５年）；Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ｒ． Ｉ． Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ．、１９８７年）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８６年）；Ｂ． Ｐｅｒｂａｌ、Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４年）；論文集、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ． Ｈ． ＭｉｌｌｅｒおよびＭ． Ｐ． Ｃａｌｏｓ編、１９８７年、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１５４巻および１５５巻（Ｗｕら編）、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、１９８７年）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８８年）；およびＨａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｉ〜ＩＶ巻（Ｄ． Ｍ． ＷｅｉｒおよびＣ． Ｃ． Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編、１９８６年）を参照されたい。

「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という用語は、本発明者、Ｃｈｉ−Ｈｕｅｙ Ｗｏｎｇ博士により造り出されたものであり、単一の一様化されたグリコフォームがＦｃ領域に結合したモノクローナル抗体（好ましくは、治療用モノクローナル抗体）の均一な集団を指す。基本的に均一な集団を構成する個々の糖操作抗体群は同一であり、同じエピトープに結合し、また、明確に定義されたグリカン構造および配列を有する同じＦｃグリカンを含有する。

本明細書で使用される場合、「抗ＣＤ２０糖操作抗体群」（「抗ＣＤ２０ＧＡｂｓ」）という用語は、Ｆｃ上に同じグリコフォームを有する抗ＣＤ２０ＩｇＧ分子の均一な集団を指す。

「抗ＣＤ２０糖操作抗体」（「抗ＣＤ２０ＧＡｂ」）という用語は、抗ＣＤ２０糖操作抗体群内の個々のＩｇＧ抗体分子を指す。本明細書で使用される場合、「分子」とは、抗原結合性断片も指し得る。

本明細書で使用される場合、「グリカン」という用語は、多糖、オリゴ糖または単糖を指す。グリカンは糖残基の単量体であってもポリマーであってもよく、直鎖であっても分枝していてもよい。グリカンとしては、天然の糖残基（例えば、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸、ガラクトース、マンノース、フコース、ヘキソース、アラビノース、リボース、キシロースなど）および／または修飾された糖（例えば、２’−フルオロリボース、２’−デオキシリボース、ホスホマンノース、６’スルホＮ−アセチルグルコサミンなど）が含まれ得る。グリカンとは、本明細書では、糖タンパク質、糖脂質、グリコペプチド、グリコプロテオーム、ペプチドグリカン、リポ多糖またはプロテオグリカンなどの複合糖質の炭水化物部分を指すためにも使用される。グリカンは、通常、単糖間のＯ−グリコシド結合のみからなる。例えば、セルロースはβ−１，４結合したＤ−グルコースで構成されるグリカン（または、より詳細にはグルカン）であり、キチンはβ−１，４結合したＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンで構成されるグリカンである。グリカンは、単糖残基のホモポリマーであってもヘテロポリマーであってもよく、直鎖であっても分枝していてもよい。グリカンは、糖タンパク質およびプロテオグリカンのようにタンパク質に付着して見いだされ得る。グリカンは、一般に、細胞の外表面上に見いだされる。Ｏ結合およびＮ結合グリカンは、真核生物では非常に一般的であるが、原核生物においても、一般的ではないが見いだされ得る。Ｎ結合グリカンは、シークオン（ｓｅｑｕｏｎ）内のアスパラギンのＲ基窒素（Ｎ）に付着して見いだされる。シークオンは、Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ配列であり、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である。

本明細書で使用される場合、「フコース」、「コアフコース」および「コアフコース残基」という用語は、互換的に使用され、Ｎ−アセチルグルコサミンとα１，６位結合したフコースを指す。

本明細書で使用される場合、「Ｎ−グリカン」、「Ｎ結合グリカン」、「Ｎ結合グリコシル化」、「Ｆｃグリカン」および「Ｆｃグリコシル化」という用語は、互換的に使用され、Ｆｃを含有するポリペプチド内のアスパラギン残基のアミド窒素と結合したＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）が付着したＮ結合オリゴ糖を指す。「Ｆｃを含有するポリペプチド」という用語は、Ｆｃ領域を含む、抗体などのポリペプチドを指す。

本明細書で使用される場合、「グリコシル化パターン」および「グリコシル化プロファイル」という用語は、互換的に使用され、糖タンパク質または抗体から酵素的にまたは化学的に放出され、次いで、それらの炭水化物構造について、例えば、ＬＣ−ＨＰＬＣ、またはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳなどを使用して分析されたＮ−グリカン種の特徴的な「指紋」を指す。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１巻、１号（２００５年）、２８〜５７頁の総説を参照されたい。

本明細書で使用される場合、「糖鎖工学により操作されたＦｃ」という用語は、本明細書で使用される場合、Ｆｃ領域上のＮ−グリカンが、酵素的にまたは化学的に変更または工学的に操作されていることを指す。「Ｆｃ糖鎖工学」という用語は、本明細書で使用される場合、糖鎖工学により操作されたＦｃを作出するために使用される酵素的または化学的なプロセスを指す。工学的操作の典型的な方法は、例えば、その内容が本明細書によって参照により組み込まれるＷｏｎｇら、ＵＳＳＮ１２／９５９，３５１に記載されている。

「均一な（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ）」、「一様な（ｕｎｉｆｏｒｍ）」、「一様に（ｕｎｉｆｏｒｍｌｙ）」および「均一性（ｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙ）」という用語は、Ｆｃ領域のグリコシル化プロファイルに関しては、互換的に使用され、１つの所望のＮ−グリカン種によって単一のグリコシル化パターンが表され、前駆Ｎ−グリカンの痕跡量はほとんどないまたは全くないことを意味するものとする。ある特定の実施形態では、前駆Ｎ−グリカンの痕跡量は約２％未満である。

「基本的に純粋な」タンパク質とは、組成物の総重量に基づいて、例えば、少なくとも約９１重量％、少なくとも約９２重量％、少なくとも約９３重量％、少なくとも約９４重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９６重量％、少なくとも約９７重量％、少なくとも約９８重量％、または少なくとも約９９重量％を含め、少なくとも約９０重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。

「基本的に均一な」タンパク質は、組成物の総重量に基づいて、例えば、少なくとも約９８．５％、少なくとも約９９％を含め、少なくとも約９８重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。ある特定の実施形態では、タンパク質は、抗体、構造バリアント、および／またはその抗原結合性断片である。

本明細書で使用される場合、「ＩｇＧ」、「ＩｇＧ分子」、「モノクローナル抗体」、「免疫グロブリン」、および「免疫グロブリン分子」という用語は、互換的に使用される。本明細書で使用される場合、「分子」とは、抗原結合性断片も指し得る。

本明細書で使用される場合、「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体について述べるものである。好ましいＦｃＲは、ネイティブな配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲはＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび代替的にスプライスされた形態を含め、ＦｃγＲＩサブクラスの受容体（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩサブクラスの受容体（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体（ＣＤ１６）が挙げられる。ＦｃγＲＩＩ受容体としてはＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「抑制受容体（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）」）があり、これらは、同様のアミノ酸配列を有し、主にその細胞質ドメインが異なる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン内に免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。抑制受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン内に免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（総説Ｍ． ｉｎ Ｄａｅｒｏｎ、Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５巻：２０３〜２３４頁（１９９７年）を参照されたい）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ ９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４巻：２５〜３４頁（１９９４年）；およびｄｅ Ｈａａｓら、Ｊ． Ｌａｂ． Ｃｌｉｎ． Ｍｅｄ． １２６巻：３３０〜４１頁（１９９５年）に概説されている。今後同定されるものを含めた他のＦｃＲが本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。この用語は、母系ＩｇＧの胎児への移行に関与する新生児受容体、ＦｃＲｎも包含する（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １１７巻：５８７頁（１９７６年）およびＫｉｍら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２４巻：２４９頁（１９９４年））。

「エフェクター機能」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体Ｆｃ領域のＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用によって生じる生化学的事象を指す。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御などが挙げられる。そのようなエフェクター機能は、当技術分野で公知の様々なアッセイを使用して評価することができる。

本明細書で使用される場合、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」という用語は、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した、分泌されたＩｇにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原を有する標的細胞に特異的に結合し、その後、細胞毒により標的細胞を死滅させることが可能になる、細胞傷害性の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「武装」させるものであり、そのような死滅に絶対必要なものである。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ ９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）の４６４頁、表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または米国特許第５，８２１，３３７号に記載されているものなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを実施することができる。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。その代わりにまたはそれに加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８年）に開示されているものなどの動物モデルにおいて評価することができる。

「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」という用語は、本明細書で使用される場合、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的な補体経路の活性化は、同族抗原に結合する抗体（適切なサブクラスのもの）に補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）が結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２巻：１６３頁（１９９６年）に記載のＣＤＣアッセイを実施することができる。

「キメラ」抗体（免疫グロブリン）は、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である重鎖および／または軽鎖の一部を有し、鎖（複数可）の残りは、別の種に由来するまたは別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体、ならびに所望の生物活性を示す限りはそのような抗体の断片、の対応する配列と同一または相同である（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８１巻：６８５１〜６８５５頁（１９８４年））。ヒト化抗体とは、本明細書で使用される場合、キメラ抗体のサブセットである。

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの部分に関して、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域残基が所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）由来の超可変領域残基で置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエントまたはアクセプター抗体）である。いくつかの場合には、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体においては見いだされない残基を含んでよい。これらの改変は、結合親和性などの抗体の性能をさらに磨くために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、一般には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域であるが、ＦＲ領域は結合親和性を改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を含んでよい。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、一般には、Ｈ鎖では６以下であり、Ｌ鎖では３以下である。ヒト化抗体は、場合により、一般にはヒト免疫グロブリンのものである免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分も含む。さらなる詳細に関しては、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８年）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ２巻：５９３〜５９６頁（１９９２年）を参照されたい。以下の総説論文およびそこに引用されている参考文献も参照されたい：ＶａｓｗａｎｉおよびＨａｍｉｌｔｏｎ、Ａｎｎ． Ａｌｌｅｒｇｙ， Ａｓｔｈｍａ ＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １巻：１０５〜１１５頁（１９９８年）；Ｈａｒｒｉｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３巻：１０３５〜１０３８頁（１９９５年）；ＨｕｒｌｅおよびＧｒｏｓｓ、Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ５巻：４２８〜４３３頁（１９９４年）。

本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、免疫応答を引き出すことができる任意の物質と定義される。本明細書で使用される場合、「抗原特異的」という用語は、特定の抗原または抗原の断片の供給により特異的な細胞増殖がもたらされるような細胞集団の性質を指す。

本明細書で使用される場合、「免疫原性」という用語は、免疫応答を刺激する免疫原、抗原、またはワクチンの能力を指す。

本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合部位と接触する、抗原分子の一部と定義される。

本明細書で使用される場合、「特異的に結合すること」という用語は、結合対（例えば、抗体と抗原）間の相互作用を指す。種々の例では、特異的に結合することは、約１０^−６モル／リットル、約１０^−７モル／リットル、または約１０^−８モル／リットル、またはそれ未満の親和性定数によって具体化することができる。

「単離された」抗体とは、同定され、その天然の環境の構成成分から分離および／または回収された抗体である。その天然の環境の混入構成成分は、抗体の研究、診断または治療的な使用に干渉する材料であり、それらとして、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が挙げられる。

「実質的に類似した」、「実質的に同じ」、「等価の」、または「実質的に等価の」という句は、本明細書で使用される場合、２つの数値（例えば、一方が分子に関連し、他方が参照／比較用（ｃｏｍｐａｒａｔｏｒ）分子に関連する）間の類似性の程度が十分に高く、したがって、当業者により、前記値（例えば、Ｋｄ値、抗ウイルス効果など）により測定される生物学的特性の文脈内で、その２つの値の差異の生物学的および／または統計的有意性がほとんどまたは全くないとみなされるだろうことを示す。前記２つの値の差異は、参照／比較用分子についての値の関数として、例えば、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、および／または約１０％未満である。

「実質的に低下した」または「実質的に異なる」という句は、本明細書で使用される場合、２つの数値（一般に、一方が分子に関連し、他方が参照／比較用分子に関連する）の差異の程度が十分に高く、したがって、当業者により、前記値（例えば、Ｋｄ値）により測定される生物学的特性の文脈内で、その２つの値の差異が統計的に有意であるとみなされるだろうことを示す。前記２つの値の差異は、参照／比較用分子についての値の関数として、例えば、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超、および／または約５０％超である。

「結合親和性」とは、一般に、分子（例えば、抗体）の単一の結合性部位とその結合パートナー（例えば、抗原）の間の非共有結合性の相互作用の総計の強度を指す。別段の指定のない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する内因性の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載のものを含めた当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般に、抗原にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、一般に、抗原により速く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する種々の方法は当技術分野で公知であり、そのいずれも本発明の目的に関して使用することができる。特定の例示的な実施形態は以下に記載されている。

抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の部分であり、抗原結合部位を含有する。

「可変性」という用語は、可変ドメインのある特定の部分が、その配列が抗体の間で広範囲にわたって異なり、特定の抗体のそれぞれのその特定の抗原に対する結合および特異性に使用されるという事実を指す。しかし、可変性は抗体の可変ドメイン全体を通して一様に分布しているのではない。可変性は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方にある相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と称される３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と称される。ネイティブな重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、大部分がベータ−シート立体配置をとっている４つのＦＲ領域を含み、これは、ベータ−シート構造の一部と接続し、いくつかの場合にはそれを形成するループを形成する３つのＣＤＲと接続している。各鎖のＣＤＲはＦＲ領域の極めて近傍に一緒に保持され、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ（１９９１年）を参照されたい）。定常ドメインは抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）への抗体の関与などの、種々のエフェクター機能を示す。

抗体のパパイン消化により、それぞれが単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と称される２つの同一の抗原結合性断片と、容易に結晶化できることが名称に反映されている残りの「Ｆｃ」断片とが生じる。ペプシン処理により、抗原結合性部位を２つ有し、なお抗原と架橋結合することが可能なＦ（ａｂ’）２断片がもたらされる。

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および抗原結合部位を含有する最小の抗体断片である。二本鎖Ｆｖ種では、この領域は、密接に非共有結合により結びついた重鎖可変ドメイン１つと軽鎖可変ドメイン１つの二量体からなる。単鎖Ｆｖ種では、重鎖可変ドメイン１つと軽鎖可変ドメイン１つが柔軟なペプチドリンカーによって共有結合により連結していてよく、したがって、軽鎖および重鎖が二本鎖Ｆｖ種のものと類似した「二量体」構造で結びついていてよい。この立体配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位が規定される。集合的に、６つのＣＤＲによって抗原結合特異性が抗体に付与される。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＣＤＲを３つのみ含むＦｖの半分）でさえ、結合性部位全体よりも親和性は低いが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。

Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含めた重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端の数残基の付加により、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨとは、本明細書では、定常ドメインのシステイン残基（複数可）に遊離のチオール基を有するＦａｂ’に対する名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、最初は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生じた。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。

任意の脊椎動物種に由来する抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と称される、２つの明白に異なる型のうちの一方に割り当てることができる。

抗体（免疫グロブリン）は、重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンには主要なクラスが５つ存在する：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、これらの一部は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けられる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと称される。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元立体配置は周知であり、一般に、例えば、Ａｂｂａｓら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版（２０００年）に記載されている。抗体は、抗体と１つまたは複数の他のタンパク質またはペプチドとの共有結合または非共有結合による結びつきによって形成されるより大きな融合分子の一部であってよい。

「全長抗体」、「インタクトな抗体」および「全抗体」という用語は、本明細書では互換的に使用され、下で定義される通り、抗体断片ではなく実質的にインタクトな形態にある抗体を指す。この用語は、特に、Ｆｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。

「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分のみを含み、その部分は、インタクトな抗体内に存在する場合にその部分に通常付随する機能の少なくとも１つ、できるだけ多く、大多数または全てを保持する。一実施形態では、抗体断片は、インタクトな抗体の抗原結合部位を含み、したがって、抗原に結合する能力を保持する。別の実施形態では、抗体断片、例えば、Ｆｃ領域を含む断片は、ＦｃＲｎ結合、抗体半減期調節、ＡＤＣＣ機能および補体結合などの、Ｆｃ領域がインタクトな抗体内に存在する場合に通常付随する生物学的機能の少なくとも１つを保持する。一実施形態では、抗体断片は、インタクトな抗体と実質的に類似したｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有する一価抗体である。例えば、そのような抗体断片は、断片にｉｎ ｖｉｖｏにおける安定性を付与することが可能なＦｃ配列に連結した抗原結合性アームを含んでよい。

「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在し得る、可能性のある天然に存在する変異以外は同一である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特性を示す。そのようなモノクローナル抗体は、一般には、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、ここで、標的結合性ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から単一の標的結合性ポリペプチド配列を選択することを含むプロセスによって得られたものである。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローンまたは組換えＤＮＡクローンのプールなどの複数のクローンから固有のクローンを選択することであってよい。例えば、標的に対する親和性を改善するため、標的結合配列をヒト化するため、細胞培養物中でのその産生を改善するため、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるその免疫原性を低下させるため、多重特異性抗体を創出するためなどで、選択された標的結合配列をさらに変更できること、および、変更された標的結合配列を含む抗体も本発明のモノクローナル抗体であることが理解されるべきである。一般には異なる決定因子（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定因子を対象とする。モノクローナル抗体調製物は、それらの特異性に加えて、一般には他の免疫グロブリンが混入していないという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、抗体の実質的に均一な集団から得られるという抗体の特性を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の作製が必要であるとは解釈されない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁（１９７５年）；Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８８年）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３〜６８１頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１年））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２４〜６２８頁（１９９１年）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９２年）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３３８巻（２号）：２９９〜３１０頁（２００４年）；Ｌｅｅら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３４０巻（５号）：１０７３〜１０９３頁（２００４年）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０１巻（３４号）：１２４６７〜１２４７２頁（２００４年）；およびＬｅｅら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４巻（１〜２号）：１１９〜１３２頁（２００４年）を参照されたい）、およびヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部または全部を有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生させるための技術（例えば、ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；ＷＯ９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０巻：２５５１頁（１９９３年）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３６２巻：２５５〜２５８頁（１９９３年）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ７巻：３３頁（１９９３年）；米国特許第５，５４５，８０７号；５，５４５，８０６号；５，５６９，８２５号；５，６２５，１２６号；５，６３３，４２５号；５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ． Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０巻：７７９〜７８３頁（１９９２年）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３６８巻：８５６〜８５９頁（１９９４年）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ ３６８巻：８１２〜８１３頁（１９９４年）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １４巻：８４５〜８５１頁（１９９６年）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １４巻：８２６頁（１９９６年）およびＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３巻：６５〜９３頁（１９９５年）を参照されたい）を含めた様々な技法によって作出することができる。

本明細書のモノクローナル抗体は、詳細には、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であり、鎖（複数可）の残りは、別の種に由来するまたは別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体、ならびに所望の生物活性を示す限りはそのような抗体の断片、の対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体を含む（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８１巻：６８５１〜６８５５頁（１９８４年））。

以下の総説論文およびそこに引用されている参考文献も参照されたい：ＶａｓｗａｎｉおよびＨａｍｉｌｔｏｎ、Ａｎｎ． Ａｌｌｅｒｇｙ， Ａｓｔｈｍａ ＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １巻：１０５〜１１５頁（１９９８年）；Ｈａｒｒｉｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３巻：１０３５〜１０３８頁（１９９５年）；ＨｕｒｌｅおよびＧｒｏｓｓ、Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ５巻：４２８〜４３３頁（１９９４年）。

「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列内で超可変性であり、および／または構造的に定義されているループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つの超可変領域を含む；ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、およびＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。いくつもの超可変領域の記述が使用されており、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列の可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年））。Ｃｈｏｔｈｉａは、その代わりに、構造ループの場所に言及する（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年））。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループの折衷を示すものであり、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｓｏｆｔｗａｒｅに使用されている。「ｃｏｎｔａｃｔ」超可変領域は、入手可能な複合体結晶構造の解析に基づくものである。これらの超可変領域のそれぞれに由来する残基を以下に示す。
ループ Ｋａｂａｔ ＡｂＭ Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃｏｎｔａｃｔ
Ｌ１ Ｌ２４−Ｌ３４ Ｌ２４−Ｌ３４ Ｌ２６−Ｌ３２ Ｌ３０−Ｌ３６
Ｌ２ Ｌ５０−Ｌ５６ Ｌ５０−Ｌ５６ Ｌ５０−Ｌ５２ Ｌ４６−Ｌ５５
Ｌ３ Ｌ８９−Ｌ９７ Ｌ８９−Ｌ９７ Ｌ９１−Ｌ９６ Ｌ８９−Ｌ９６
Ｈ１ Ｈ３１−Ｈ３５Ｂ Ｈ２６−Ｈ３５Ｂ Ｈ２６−Ｈ３２ Ｈ３０−Ｈ３５Ｂ
（Ｋａｂａｔ番号付け）
Ｈ１ Ｈ３１−Ｈ３５ Ｈ２６−Ｈ３５ Ｈ２６−Ｈ３２ Ｈ３０−Ｈ３５
（Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け）
Ｈ２ Ｈ５０−Ｈ６５ Ｈ５０−Ｈ５８ Ｈ５３−Ｈ５５ Ｈ４７−Ｈ５８
Ｈ３ Ｈ９５−Ｈ１０２ Ｈ９５−Ｈ１０２ Ｈ９６−Ｈ１０１ Ｈ９３−Ｈ１０１

超可変領域は、以下の通り「伸長された超可変領域」を含み得る：ＶＬにおける２４−３６または２４−３４（Ｌ１）、４６−５６または５０−５６または４９−５６（Ｌ２）および８９−９７または８９−９６（Ｌ３）、ならびにＶＨにおける２６−３５（Ｈ１）、５０−６５または４９−６５（Ｈ２）および９３−１０２、９４−１０２、または９５−１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの定義のそれぞれについて、Ｋａｂａｔら、上記に従って番号付けされる。

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基とは、本明細書において定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。

「Ｋａｂａｔと同様の可変ドメイン残基の番号付け」または「Ｋａｂａｔと同様のアミノ酸位番号付け」という用語およびその変形は、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）における抗体の編集物（ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ）の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインのために使用される番号付け系を指す。この番号付け系を使用して、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲにおける短縮、または挿入に対応して、より少ないまたは追加的なアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後ろに単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔに従って残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後ろに挿入残基（Ｋａｂａｔに従って例えば残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃなど）を含み得る。所与の抗体について、「標準の」Ｋａｂａｔ番号付けされた配列を有する抗体の配列の相同性の領域におけるアラインメントによって残基のＫａｂａｔ番号付けを決定することができる。

「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖内に存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することが可能になる。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４年）を参照されたい。

「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、断片は、同じポリペプチド鎖内で接続した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（ＶＨ−ＶＬ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成が可能になるには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインは強制的に別の鎖の相補的なドメインと対形成し、２つの抗原結合部位が創出される。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９９３年）により詳細に記載されている。

「ヒト抗体」とは、ヒトによって産生された抗体および／または本明細書に開示されているヒト抗体を作出するための技法のいずれかを使用して作出された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合性残基を含むヒト化抗体を明確に排除する。

「親和性成熟した」抗体とは、その１つまたは複数のＨＶＲに１つまたは複数の変更を伴う抗体であり、その変更により、それらの変更（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗体の抗原に対する親和性の改善がもたらされる。一実施形態では、親和性成熟した抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度またはさらにはピコモル濃度の親和性を有する。親和性成熟した抗体は、当技術分野で公知の手順によって作製される。Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０巻：７７９〜７８３頁（１９９２年）には、ＶＨドメインおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟が記載されている。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１巻：３８０９〜３８１３頁（１９９４年）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ １６９巻：１４７〜１５５頁（１９９５年）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５５巻：１９９４〜２００４頁（１９９５年）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５４巻（７号）：３３１０〜９頁（１９９５年）；およびＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２６巻：８８９〜８９６頁（１９９２年）により説明されている。

「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体とは、それが結合する抗原の生物活性を阻害するまたは低下させる抗体である。ある特定の遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的にまたは完全に阻害する。

「アゴニスト抗体」とは、本明細書で使用される場合、目的のポリペプチドの機能活性の少なくとも１つを模倣する抗体である。

「障害」とは、本発明の抗体を用いた処置から利益を得る任意の状態である。障害には、哺乳動物に問題の障害の素因を与える病的状態を含めた慢性および急性の障害または疾患が含まれる。本明細書において処置される障害の非限定的な例としてはがんが挙げられる。

「細胞増殖性障害」および「増殖性障害」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。一実施形態では、細胞増殖性障害はがんである。

「腫瘍」とは、本明細書で使用される場合、悪性であるか良性であるかにかかわらず全ての新生細胞成長および増殖、ならびに全ての前がん性およびがん性細胞および組織を指す。「がん」、「がん性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」および「腫瘍」という用語は、本明細書で言及される場合、相互排他的なものではない。

「がん」および「がん性」という用語は、一般に、調節されていない細胞成長／増殖を一般に特徴とする哺乳動物の生理的状態を指すまたは記述する。がんの例としては、これだけに限定されないが、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられる。そのようながんのより詳細な例としては、扁平上皮細胞がん（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｎｃｅｒ）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、肺扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｌｕｎｇ）、腹膜がん、肝細胞がん、胃腸がん、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、神経膠芽腫、子宮頸がん（ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ）、卵巣がん（ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ）、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん（ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎がん、肝がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌、白血病および他のリンパ球増殖性障害、および種々の型の頭頸部がんが挙げられる。

本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、免疫応答を引き出すことができる任意の物質と定義される。

本明細書で使用される場合、「抗原特異的」という用語は、特定の抗原または抗原の断片の供給により特異的な細胞増殖がもたらされるような細胞集団の性質を指す。

「ＣＤ２０発現がん」という用語は、本明細書で使用される場合、がん細胞がＣＤ２０抗原の発現を示す全てのがんを指す。ＣＤ２０発現がんとは、本明細書で使用される場合、リンパ腫（好ましくはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））およびリンパ性白血病を指すことが好ましい。そのようなリンパ腫およびリンパ性白血病としては、例えば、ａ）濾胞性リンパ腫、ｂ）小型非切れ込み核細胞性リンパ腫（Ｓｍａｌｌ Ｎｏｎ−Ｃｌｅａｖｅｄ Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ）／バーキットリンパ腫（地方病性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫および非バーキットリンパ腫を含む）、ｃ）辺縁層リンパ腫（節外周辺帯Ｂ細胞リンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫、ＭＡＬＴを含む）、節性辺縁層Ｂ細胞リンパ腫（ｎｏｄａｌ ｍａｒｇｉｎａｌ ｚｏｎｅ Ｂ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ）および脾性辺縁層リンパ腫（ｓｐｌｅｎｉｃ ｍａｒｇｉｎａｌ ｚｏｎｅ ｌｙｍｐｈｏｍａ））、ｄ）マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｅ）大細胞型リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、びまん性混合細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫（Ｐｒｉｍａｒｙ Ｍｅｄｉａｓｔｉｎａｌ Ｂ−Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ）、血管中心性リンパ腫−肺Ｂ細胞リンパ腫（Ａｎｇｉｏｃｅｎｔｒｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ−Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｂ−Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ）を含む）、ｆ）ヘアリー細胞白血病、ｇ）リンパ球性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ｈ）急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ性白血病、ｉ）形質細胞新生物、形質細胞骨髄腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ｊ）ホジキン病が挙げられる。ＣＤ２０発現がんは、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であることがより好ましい。特に、ＣＤ２０発現がんは、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、バーキットリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、辺縁層リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ＨＩＶ関連リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、またはＣＮＳ原発リンパ腫である。

本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、処置される個体または細胞の自然経過を変更する試みにおける臨床介入を指し、予防法のためまたは臨床病理の過程中のいずれかで実施することができる。望ましい処置の効果としては、疾患の出現または再発の防止、症状の緩和、疾患のあらゆる直接または間接的な病理学的影響の減弱、炎症および／または組織／器官損傷の防止または減少、疾患の進行の速度の低下、病態の好転または一時的緩和（ｐａｌｌｉａｔｉｏｎ）、および寛解または予後の改善が挙げられる。一部の実施形態では、疾患または障害の発生を遅延させるために本発明の抗体を使用する。

「個体」または「被験体」は、脊椎動物である。ある特定の実施形態では、脊椎動物は、哺乳動物である。哺乳動物としては、これだけに限定されないが、農場動物（例えば、ウシなど）、競技動物、愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ、およびウマなど）、霊長類、マウスおよびラットが挙げられる。ある特定の実施形態では、脊椎動物は、ヒトである。

「哺乳動物」とは、処置の目的に関しては、ヒト、家畜動物および農場動物、ならびに動物園の動物、競技動物、または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなどを含めた、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。ある特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。

「有効量」とは、治療的または予防的結果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。

本発明の物質／分子の「治療有効量」は、個体の病態、年齢、性別、および体重、ならびに個体における所望の応答を引き出す物質／分子の能力などの因子に応じて変動し得る。治療有効量は、物質／分子のあらゆる毒性の影響または有害な影響よりも治療的に有益な影響が上回る量でもある。「予防有効量」とは、所望の予防的結果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。必ずではないが、一般に、予防用量は、被験体に疾患の前またはより早い段階で使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少なくなる。

「細胞傷害性薬剤」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞の機能を阻害するもしくは妨げ、かつ／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語は、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位元素）、化学療法剤（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、抗生物質、ならびに、断片および／もしくはそのバリアントを含めた、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素もしくは酵素的に活性な毒素などの毒素、ならびに以下に開示されている種々の抗腫瘍剤または抗がん剤を含むものとする。他の細胞傷害性薬剤が下に記載されている。殺腫瘍剤（ｔｕｍｏｒｉｃｉｄａｌ ａｇｅｎｔ）は腫瘍細胞の破壊を引き起こすものである。

「化学療法剤」はがんの処置において有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチルオロメラミンを含めた、エチレンイミンおよびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン（ｌａｐａｃｈｏｎｅ）；ラパコール（ｌａｐａｃｈｏｌ）；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、および９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）などのニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特に、カリチアマイシンガンマ１ＩおよびカリチアマイシンオメガＩ１など（例えば、Ａｇｎｅｗ、Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔｌ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ．、３３巻：１８３〜１８６頁（１９９４年）を参照されたい）；ジネミシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含めたジネミシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗薬；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；フォリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルフロルニチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）酢酸塩；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシンおよびアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラクリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ）；ラゾキサン；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、パクリタキセルのアルブミンで工学的に操作したナノ粒子製剤であるＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ−ｆｒｅｅ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌ．）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体；ならびに、上記の２つまたはそれ超の組み合わせ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語であるＣＨＯＰ、および、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））と５−ＦＵおよびロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）の組み合わせの処置レジメンの略語であるＦＯＬＦＯＸなどが挙げられる。

本明細書で使用される場合、「処置」とは、処置される個体または細胞の自然経過を変更する試みにおける臨床介入を指し、予防法のためまたは臨床病理の過程中のいずれかで実施することができる。望ましい処置の効果としては、疾患の出現または再発の防止、症状の緩和、疾患のあらゆる直接または間接的な病理学的影響の減弱、炎症および／または組織／器官損傷の防止または減少、疾患の進行の速度の低下、病態の好転または一時的緩和、および寛解または予後の改善が挙げられる。一部の実施形態では、疾患または障害の発生を遅延させるために本発明の抗体を使用する。

「個体」または「被験体」は、脊椎動物である。ある特定の実施形態では、脊椎動物は、哺乳動物である。哺乳動物としては、これだけに限定されないが、農場動物（例えば、ウシなど）、競技動物、愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ、およびウマなど）、霊長類、マウスおよびラットが挙げられる。ある特定の実施形態では、脊椎動物は、ヒトである。

「哺乳動物」とは、処置の目的に関しては、ヒト、家畜動物および農場動物、ならびに動物園の動物、競技動物、または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなどを含めた、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。ある特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。

「有効量」とは、所望される治療的または予防的結果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。

本発明の物質／分子の「治療有効量」は、個体の病態、年齢、性別、および体重、ならびに個体における所望の応答を引き出す物質／分子の能力などの因子に応じて変動し得る。治療有効量は、物質／分子のあらゆる毒性の影響または有害な影響よりも治療的に有益な影響が上回る量でもある。「予防有効量」とは、所望の予防的結果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。必ずではないが、一般に、予防用量は、被験体に疾患の前またはより早い段階で使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少なくなる。

「細胞傷害性薬剤」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞の機能を阻害するもしくは妨げ、かつ／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語は、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位元素）、化学療法剤（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、抗生物質、ならびに、その断片および／もしくはバリアントを含めた、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素もしくは酵素的に活性な毒素などの毒素、および以下に開示されている種々の抗腫瘍剤または抗がん剤を含むものとする。他の細胞傷害性薬剤が下に記載されている。殺腫瘍剤は腫瘍細胞の破壊を引き起こすものである。

「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「緩和（ａｌｌｅｖｉａｔｉｏｎ）」とは、治療的処置および予防または防止措置の両方を指し、ここで、目的は、標的とした病的状態または障害を防止するまたは減速させる（減らす）ことである。処置を必要とするものとしては、すでに障害を有するものならびに障害を有しやすいものまたは障害が防止されるべきものが挙げられる。被験体または哺乳動物は、治療量の抗体を本発明の方法に従って受けた後、患者が以下のうちの１つまたは複数の観察可能かつ／または測定可能な低下または不在を示した場合、感染に対して成功裏に「処置」されている：感染細胞の数の低下または感染細胞の不在；感染した総細胞のパーセントの低下；ならびに／または特定の感染に付随する症状のうちの１つまたは複数のいくらかの程度までの軽減；罹患率および死亡率の低下、ならびに生活の質の問題の改善。疾患における成功裏の処置および改善を評価するための上記のパラメータは医師によく知られている常套的な手順によって容易に測定可能である。

「治療有効量」という用語は、被験体または哺乳動物における疾患または障害を「処置する」ために有効な抗体または薬物の量を指す。前述の「処置すること」の定義を参照されたい。

１種または複数種の別の治療剤「と組み合わせた（ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）」投与は、同時（並行（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ））投与および任意の順序での連続した（ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ）投与を含む。

「担体」とは、本明細書で使用される場合、使用される投与量および濃度でそれに暴露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理的に許容される担体は、水性ｐＨ緩衝溶液である。生理的に許容される担体の例としては、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含めた抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。

糖操作抗体群
培養物中で哺乳動物細胞から産生された組換えタンパク質のグリコシル化は、治療用抗体の有効な使用を確実にすることにおける重要なプロセスである（Ｇｏｏｃｈｅｅら、１９９１年；ＪｅｎｋｉｎｓおよびＣｕｒｌｉｎｇ、１９９４年）。哺乳動物の細胞培養では、全てが同じ性質を有するわけではない、グリコシル化パターンの不均一な混合物が送達される。治療用タンパク質の安全性、有効性および血清中半減期のような性質は、これらのグリコシル化パターンの影響を受ける可能性がある。本発明者らは、「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という名称の新規クラスのモノクローナル抗体を開発することにより、グリコフォーム不均一性問題に成功裏に対処した。

「糖操作抗体群（ｇｌｙｃｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という用語は、本発明者、Ｃｈｉ−Ｈｕｅｙ Ｗｏｎｇ博士により造り出されたものであり、Ｆｃ上に単一の一様化されたグリコフォームを有するモノクローナル抗体（好ましくは、治療用モノクローナル抗体）の均一な集団を指す。均一な集団を構成する個々の糖操作抗体群は同一であり、同じエピトープに結合し、また、明確に定義されたグリカン構造および配列を有する同じＦｃグリカンを含有する。

糖操作抗体群は、市販されているまたは開発中のモノクローナル抗体（好ましくは、治療用モノクローナル抗体）から生成することができる。治療的使用のためのモノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体、ヒトモノクローナル抗体またはキメラモノクローナル抗体であってよい。

「親抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、糖操作抗体を作製するために使用されるモノクローナル抗体を指す。親抗体は、哺乳動物細胞培養物、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓまたは昆虫細胞株などの細胞培養によって得ることができる。親抗体は哺乳動物細胞培養物中で産生されることが好ましい。親抗体はＦＤＡの認可を受けたものであってもよく、開発中のものであってもよい。

モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術、組換え技術、およびファージディスプレイ技術、またはこれらの組み合わせの使用を含めた、多種多様な当技術分野で公知の技法を使用して調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野で公知であり、例えば、それぞれの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８８年）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３〜６８１頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１年）において教示されているものを含めたハイブリドーマ技法を使用して産生させることができる。「モノクローナル抗体」（「ｍＡｂ」と省略される）という用語は、本明細書で使用される場合、ハイブリドーマ技術により産生された抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核生物クローン、原核生物クローン、またはファージクローンを含めた単一のクローンに由来する抗体を指し、それが産生される方法を指すものではない。「モノクローナル抗体」は、２つのタンパク質、すなわち重鎖および軽鎖を含む、あるいはそれからなることができる。

治療用モノクローナル抗体からＦｃ糖鎖工学によって導出された機能的に活性な糖操作抗体群が本明細書に記載されている。最適化グリコフォームを有する糖操作抗体群は、治療用モノクローナル抗体と比較してより強力な生物活性を示す。最適化グリコフォームを有する糖操作抗体群により、治療的使用のための代替物がもたらされ得ることが意図されている。

本発明の糖操作抗体群は、Ｆｃ上の単一の一様化されたグリコフォーム（Ｎ−グリカン）からなる。一部の実施形態では、Ｎ−グリカンはＦｃ領域のＡｓｎ−２９７に付着している。

本発明によるＮ−グリカンは、「トリマンノースコア（ｔｒｉｍａｎｎｏｓｅ ｃｏｒｅ）」または「五糖コア」とも称されるＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２という共通の五糖コアを有し、ここで、「Ｍａｎ」はマンノースを指し、「Ｇｌｃ」はグルコースを指し、「ＮＡｃ」はＮ−アセチルを指し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを指す。

一部の実施形態では、Ｎ−グリカンは二分岐（ｂｉａｎｔｅｎｎａｒｙ）構造を有する。

本明細書に記載のＮ−グリカンは、「バイセクティング（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）」ＧｌｃＮＡｃを含む鎖内置換を有し得る。グリカンがトリマンノースコア上にバイセクティングＧｌｃＮＡｃを含む場合、構造は、Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_３と表される。グリカンがトリマンノースコアに付着したコアフコースを含む場合、構造は、Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆ）と表される。Ｎ−グリカンは、１つまたは複数の末端シアル酸（例えば、Ｎ−アセチルノイラミン酸）を含んでよい。「Ｓｉａ」と表される構造は、末端シアル酸を指す。シアリル化は、二分岐構造のα１−３アームまたはα１−６アームのいずれかにおいて起こり得る。

一部の実施形態では、本明細書に記載のＮ−グリカンは、α２−６末端シアル酸を少なくとも１つ含む。ある特定の実施形態では、Ｎ−グリカンは、α２−６末端シアル酸を１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ−グリカンは、α２−６末端シアル酸を２つ含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載のＮ−グリカンは、α２−３末端シアル酸を少なくとも１つ含む。ある特定の実施形態では、Ｎ−グリカンは、α２−３末端シアル酸を１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ−グリカンは、α２−３末端シアル酸を２つ含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載のＮ−グリカンは、ガラクトースを少なくとも１つ含む。ある特定の実施形態では、Ｎ−グリカンは、ガラクトースを１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ−グリカンは、ガラクトースを２つ含む。

本開示によるＮ−グリカンは、コアフコースを含まないことが好ましい。

表１は、糖操作抗体群における例示的なＮ−グリカンの一覧である。
Ｆｃにおけるグリコシル化は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣおよび循環半減期を含めた種々の免疫グロブリンエフェクター媒介性機能に影響を及ぼす可能性がある。ＡＤＣＣ増強は、治療用抗体の薬効を改善するための重要な戦略である。ＡＤＣＣ増強には、薬物費用の低減という利益のために、有効薬物投与量を低減させる潜在性がある。本明細書に記載の糖操作抗体群は、機能的性質を特徴とし得る。

（Ｉ）がんに対する糖操作抗体群
本明細書に記載の糖操作抗体群はがんを処置するために有用であり得る。がん療法のための多数の治療用モノクローナル抗体がＦＤＡにより認可されており、さらに多くが、臨床試験において、単独で、または他の処置と組み合わせてのいずれかで試験されている。これらのモノクローナル抗体（「親抗体」）を使用して、糖操作抗体群を作製することができる。

がんに対する例示的なモノクローナル抗体としては、これだけに限定されないが、アド−トラスツズマブエムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ）、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベリムマブ（Ｂｅｎｌｙｓｔａ）、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）、ブレンツキシマブベドチン（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）、カボザンチニブ（Ｃｏｍｅｔｒｉｑ）、カナキヌマブ（Ｉｌａｒｉｓ）、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、デノスマブ（Ｘｇｅｖａ）、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ）、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ）、オビヌツズマブ（Ｇａｚｙｖａ）、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ）、ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｔａ）、ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ、Ｍａｂｔｈｅｒａ）、シルツキシマブ（Ｓｙｌｖａｎｔ）、トシリズマブ、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ）およびトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）が挙げられる。

抗ＣＤ２０糖操作抗体群（抗ＣＤ２０ＧＡｂ）
「ＣＤ２０」抗原は、末梢血またはリンパ系器官に由来するＢ細胞の９０％超の表面に見いだされる、分子量およそ３５ｋＤの非グリコシル化膜貫通リンタンパク質である。ＣＤ２０は、初期プレＢ細胞発生の間に発現し、形質細胞分化まで残る。ＣＤ２０は、ヒト幹細胞、リンパ球前駆細胞または正常な形質細胞においては見いだされない。ＣＤ２０は、正常なＢ細胞ならびに悪性Ｂ細胞のどちらにも存在する。文献におけるＣＤ２０に対する他の名称としては、「Ｂリンパ球制限分化抗原」および「Ｂｐ３５」が挙げられる。ＣＤ２０抗原は、例えば、ＣｌａｒｋおよびＬｅｄｂｅｔｔｅｒ、Ａｄｖ． Ｃａｎ Ｒｅｓ． ５２巻：８１〜１４９頁（１９８９年）およびＶａｌｅｎｔｉｎｅら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６４巻（１９号）：１１２８２〜１１２８７頁（１９８９年）に記載されている。

本開示は、「抗ＣＤ２０糖操作抗体群」（「抗ＣＤ２０ＧＡｂ」）と称される新規クラスの抗ＣＤ２０抗体を特徴とする。抗ＣＤ２０糖操作抗体群は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体からＦｃ糖鎖工学によって生成することができる。均一な集団を構成する個々の抗ＣＤ２０糖操作抗体群は同一であり、明確に定義されたグリカン構造および配列を有する同じＦｃグリカンを含有する。本発明による抗ＣＤ２０ＧＡｂは、その親抗体が結合するのと同じ、細胞膜上のヒトＣＤ２０抗原のエピトープに特異的に結合する。

「親抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、抗ＣＤ２０糖操作抗体を作製するために使用される抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を指す。

親抗体は、哺乳動物細胞培養物、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓまたは昆虫細胞株などの細胞培養によって得ることができる。親抗体は哺乳動物細胞培養物中で産生されることが好ましい。親抗体はＦＤＡの認可を受けたものであってもよく、開発中のものであってもよい。例示的な親抗体としては、これだけに限定されないが、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、オクレリズマブ、１１Ｂ８または７Ｄ８（ＷＯ２００４／０３５６０７に開示されている）、Ｃ６などの、ＷＯ２００５／１０３０８１に開示されている抗ＣＤ２０抗体、ＩＭＭＵ−１０６（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）などの、ＷＯ２００３／６８８２１に開示されている抗ＣＤ抗体、ＡＭＥ−１３３（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ／Ｌｉｌｌｙ）などの、ＷＯ２００４／１０３４０４に開示されている抗ＣＤ２０抗体、および、ＴＲＵ−０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ）などの、ＵＳ２００３／０１１８５９２に開示されている抗ＣＤ２０抗体、「Ｙ２Ｂ８」（ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））（Ｂｉｏｇｅｎ−Ｉｄｅｃ，Ｉｎｃ．）と称される９０Ｙ標識２Ｂ８マウス抗体（例えば、米国特許第５，７３６，１３７号、Ａｎｄｅｒｓｏｎら；ＡＴＣＣ寄託物ＨＢ１１３８８）；マウスおよびキメラ２Ｈ７抗体（例えば、米国特許第５，６７７，１８０号、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら）；ｒｈｕＭＡｂ２Ｈ７および他のバージョン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）などのヒト化２Ｈ７抗体（例えば、ＷＯ２００４／０５６３１２、Ａｄａｍｓら、および下に示されている他の参考文献）；ＣＤ２０に対するヒトモノクローナル抗体（ＧｅｎＭａｂ Ａ／Ｓ／Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）（例えば、ＷＯ２００４／０３５６０７およびＷＯ２００５／１０３０８１、Ｔｅｅｌｉｎｇら）；ＣＤ２０の細胞外エピトープに結合するキメラ化またはヒト化モノクローナル抗体（Ｂｉｏｍｅｄｉｃｓ Ｉｎｃ．）（例えば、ＷＯ２００６／１０６９５９、Ｎｕｍａｚａｋｉら）；ヒト化ＬＬ２および同様の抗体（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）（例えば、米国特許第７，１５１，１６４号およびＵＳ２００５／０１０６１０８、Ｈａｎｓｅｎ）；キメラＡ２０（ｃＡ２０）またはヒト化Ａ２０抗体（ｈＡ２０、ＩＭＭＵＮ−１０６Ｔ、ベルツズマブ）などのＡ２０抗体（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）（例えば、ＵＳ２００３／０２１９４３３、Ｈａｎｓｅｎら）；ＣＤ２０に対する完全ヒト抗体（Ａｍｇｅｎ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）（例えば、ＷＯ２００６／１３０４５８、Ｇａｚｉｔら）；ＣＤ２０に対する抗体（Ａｖｅｓｔｈａ Ｇｅｎｇｒａｉｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｐｖｔ Ｌｔｄ．）（例えば、ＷＯ２００６／１２６０６９、Ｍｏｒａｗａｌａ）；および、ＧＡ１０１などの、ＣＤ２０に対するキメラまたはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｒｏｃｈｅ／ＧｌｙｃＡｒｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ）（例えば、ＷＯ２００５／０４４８５９；ＵＳ２００５／０１２３５４６；ＵＳ２００４／００７２２９０；およびＵＳ２００３／０１７５８８４、Ｕｍａｎａら）が挙げられる。

一部の実施形態では、本明細書に記載の例示的な抗ＣＤ２０ＧＡｂは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態では、抗ＣＤ２０ＧＡｂは、リツキシマブの軽鎖配列および重鎖配列を含む。
以下の表２は、リツキシマブの重鎖および軽鎖配列を示す。

一部の実施形態では、Ｎ−グリカンはＦｃ領域のＡｓｎ−２９７に付着している。

本発明によるＮ−グリカンは、「トリマンノースコア」または「五糖コア」とも称されるＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２という共通の五糖コアを有し、ここで、「Ｍａｎ」はマンノースを指し、「Ｇｌｃ」はグルコースを指し、「ＮＡｃ」はＮ−アセチルを指し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを指す。

一部の実施形態では、Ｎ−グリカンは二分岐構造を有する。

本明細書に記載のＮ−グリカンは、「バイセクティング」ＧｌｃＮＡｃを含む鎖内置換を有し得る。グリカンがトリマンノースコア上にバイセクティングＧｌｃＮＡｃを含む場合、構造は、Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_３と表される。グリカンがトリマンノースコアに付着したコアフコースを含む場合、構造は、Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２（Ｆ）と表される。Ｎ−グリカンは、１つまたは複数の末端シアル酸（例えば、Ｎ−アセチルノイラミン酸）を含んでよい。「Ｓｉａ」と表される構造は、末端シアル酸を指す。シアリル化は、二分岐構造のα１−３アームまたはα１−６アームのいずれかにおいて起こり得る。

一部の実施形態では、本明細書に記載のＮ−グリカンは、α２−６末端シアル酸を少なくとも１つ含む。ある特定の実施形態では、Ｎ−グリカンは、α２−６末端シアル酸を１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ−グリカンは、α２−６末端シアル酸を２つ含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載のＮ−グリカンは、α２−３末端シアル酸を少なくとも１つ含む。ある特定の実施形態では、Ｎ−グリカンは、α２−３末端シアル酸を１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ−グリカンは、α２−３末端シアル酸を２つ含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載のＮ−グリカンは、ガラクトースを少なくとも１つ含む。ある特定の実施形態では、Ｎ−グリカンは、ガラクトースを１つ含む。好ましい実施形態では、Ｎ−グリカンは、ガラクトースを２つ含む。

本開示によるＮ−グリカンは、コアフコースを含まないことが好ましい。

表３は、抗ＣＤ２０糖操作抗体群における例示的なＮ−グリカンの一覧である。本開示の複数の実施形態は、本明細書において列挙されているＮ−グリカンのいずれを含んでもよく排除してもよい。

抗ＣＤ２０糖操作抗体群の生物学的特性
Ｆｃにおけるグリコシル化は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣおよび循環半減期を含めた種々の免疫グロブリンエフェクター媒介性機能に影響を及ぼす可能性がある。ＡＤＣＣ増強は、治療用抗体の薬効を改善するための重要な戦略である。ＡＤＣＣ増強には、薬物費用の低減という利益のために、有効薬物投与量を低減させる潜在性がある。本明細書に記載の抗ＣＤ２０糖操作抗体群は、機能的性質を特徴とし得る。抗ＣＤ２０ＧＡｂには、ヒトＣＤ２０発現細胞に対するアポトーシスを含めた細胞増殖阻害活性がある。一部の実施形態では、抗ＣＤ２０ＧＡｂは、その親抗体と比較してより強力な細胞増殖阻害活性を示す。

抗ＣＤ２０糖操作抗体群のＡＤＣＣ活性
本発明による糖操作抗体のＡＤＣＣ活性の増大は、これだけに限定されないが、親抗体のＡＤＣＣ活性と比較して、少なくとも約６倍、約７倍、約８倍、約９倍 約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約３５倍、約４０倍、約５０倍、約６０倍、および約８０倍を含め、少なくとも約５倍、または、少なくともおよそ、本明細書において列挙されている任意の２つの数字の間の範囲内の値である。

表４は、リツキシマブと比較した抗ＣＤ２０ＧＡｂｓのＡＤＣＣ活性の増強の例の一覧である。例示的なアッセイは、実施例に記載されている。

本明細書に記載のいくつかの抗ＣＤ２０ＧＡｂｓ、特にＧＡｂ１０１およびＧＡｂ１０４は、その親抗体であるリツキシマブと比較してＡＤＣＣ活性の増強を示す。本発明の糖操作抗体群は、Ｂ細胞媒介性悪性腫瘍およびＢ細胞またはＢ細胞によって産生される抗体が関与する免疫学的疾患に対する治療剤として優れた効果を示し得、治療剤の開発における抗ＣＤ２０ＧＡｂの使用は本発明の目的であることが意図されている。

抗ＣＤ２０糖操作抗体群のＣＤＣ活性
驚いたことに、本明細書に記載の糖操作抗体により、ＣＤＣに影響を及ぼすことなく、ＡＤＣＣの改善をもたらすことができる。例示的なＣＤＣアッセイが実施例に記載されている。例示的な実施形態では、糖操作抗体のＡＤＣＣは増大するが、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）などの他の免疫グロブリン型エフェクター機能は同様のままである、または有意には影響を受けない。

ＦｃγＲＩＩＩと抗ＣＤ２０糖操作抗体群の間の結合
表５は、抗ＣＤ２０ＧＡｂｓおよびリツキシマブの例示的なＦｃγＲＩＩＩＡ結合の一覧である。ＦｃγＲＩＩＩＡ結合は、当技術分野で公知のアッセイを使用して測定することができる。例示的なアッセイが実施例に記載されている。Ｆｃ受容体結合は、抗ＣＤ２０ＧＡｂとリツキシマブの相対比として決定することができる。例示的な実施形態では、Ｆｃ受容体結合は、少なくとも１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍または２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、１００倍またはそれを超えて増大する。

結合データから、リツキシマブと比較して、抗ＣＤ２０ＧＡｂｓ、特にＧＡｂ１０１およびＧＡｂ１０４が標的分子ＣＤ２０に対してより強力な結合親和性を示すことが示された。

総合すると、抗ＣＤ２０Ｇａｂｓは、リツキシマブと比較して、ＡＤＣＣ活性の増強およびより強力なＦｃγＲＩＩＩＡ結合親和性を示す。本発明の糖操作抗体群により、単独で、またはそのような抗体を２種またはそれ超含む組成物中のいずれかで、および場合によって化学療法などの他の処置と組み合わせて、優れた臨床応答をもたらすことができることが意図されている。ＡＤＣＣが増強された抗ＣＤ２０糖操作抗体により、Ｂ細胞リンパ腫および他の疾患に対する代替治療薬をもたらすことができることが意図されている。本発明の糖操作抗体群のエフェクター機能の増大は、より低濃度かつ低頻度で投薬することが可能になり、それにより、抗体毒性および／または抗体耐性の発生の潜在性が減少することを意味するので、有利なことに、本発明の糖操作抗体群を使用して、現在の投与経路および現在の治療レジメンを変更することができる。さらに、エフェクター機能の改善により、組換え宿主系で産生された対応する抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を用いた処置には以前に抵抗性または不応性であった臨床的適応症を処置するための新しい手法がもたらされる。

抗ＣＤ２０ＧＡｂの調製
本発明の抗ＣＤ２０糖操作抗体群は、市販されているまたは前臨床または臨床開発中の抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（「親抗体」）からＦｃ糖鎖工学によって作製することができる。モノクローナル抗体は治療用モノクローナル抗体であることが好ましい。Ｆｃ糖鎖工学は、酵素的にまたは化学酵素的に行うことができる。好ましい実施形態では、親抗体はリツキシマブである。

本発明の糖操作抗体群におけるＮ−グリカンは、脱フコシル化されていることが好ましい。

Ｎ−グリカンの脱フコシル化は、ＦｃドメインのＮ−グリカン内のコアフコースを除去するプロセスである。脱フコシル化は酵素的に使用することができる。Ｎ−グリカンは２つのＦｃドメイン間に埋め込まれているので、酵素的脱フコシル化効率は、立体的な障害、すなわち、フコシダーゼのフコース残基への接近がＦｃドメインの一部によって遮断されることに起因して、はるかに低い。

多くのα−フコシダーゼが当技術分野で公知である。例としては、Ｔｕｒｂｏ ｃｏｒｎｕｔｕｓ、Ｃｈａｒｏｎｉａ ｌａｍｐａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｕｌｍｉｎａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、ウシ腎臓（Ｇｌｙｋｏ）、ニワトリ肝臓に由来するα−フコシダーゼ（Ｔｙａｇａｒａｊａｎら、１９９６年、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ６巻：８３〜９３頁）およびＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｍａｎｉｈｏｔｉｓに由来するα−フコシダーゼＩＩ（Ｇｌｙｋｏ、ＰＲＯｚｙｍｅ）が挙げられる。同様に多種多様なフコシダーゼが市販されている（とりわけ、Ｇｌｙｋｏ、Ｎｏｖａｔｏ、Ｃａｌｉｆ．；ＰＲＯｚｙｍｅ、Ｓａｎ Ｌｅａｎｄｒｏ、Ｃａｌｉｆ．；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｏｒｐ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）。しかし、コアフコースをＮ結合グリカンから効率的に除去することが分かっているα−フコシダーゼは存在しない。

ＷＯ２０１３／１２０６６では、ウシ腎臓由来のα−フコシダーゼによる（Ｆｕｃα１，６）ＧｌｃＮＡｃ−リツキシマブの脱フコシル化が開示された。ＷＯ２０１３／１２０６６に記載の通り、（Ｆｕｃα１，６）ＧｌｃＮＡｃ−リツキシマブの反応混合物をウシ腎臓由来のα−フコシダーゼ（Ｐｒｏｚｙｍｅから市販されている）と一緒に３７℃で２０日間インキュベートして、（Ｆｕｃα１，６）ＧｌｃＮＡｃ−リツキシマブのフコースが完全に除去された。

免疫グロブリンの熱不安定性が報告されている（Ｖｅｒｍｅｅｒら、Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｊ． Ｊａｎ ７８巻：３９４〜４０４頁（２０００年））。Ｆａｂ断片は加熱処理に対する感受性が最も高く、一方、Ｆｃ断片は、ｐＨの低下に対する感受性が最も高い。抗体の熱安定性および機能活性を検査するために、ＷＯ２０１３／１２０６６に記載されているものと同じ実験を実施し、３７℃で３日間熱処理した後に抗体がＣＤ２０に対する結合親和性を約１０％失ったことを見いだした。さらに、本発明者らは、３７℃で７日間熱処理した後に抗体がＣＤ２０に対する結合親和性を約２０％失ったことを見いだした。ＷＯ２０１３／１２０６６に記載の通り、抗体のＣＤ２０に対する結合親和性は、３７℃で２０日間などの持続的な熱処理後に有意に失われることが意図されている。

治療的価値が改善された糖操作抗体群を合成するための本発明者らの試みにおいて、Ｎ結合グリカンからフコース残基を効率的に除去することができるＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ α−フコシダーゼ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＹＰ＿２１２８５５．１）が予想外に発見された。効率的な脱フコシル化は、特定の酵素を使用して成功裏に達成されている。重要なことに、本発明の糖操作抗体群の作出効率は、図１において例示されているように、容易なＮ−グリカンの脱フコシル化をもたらす特定のα−フコシダーゼを使用することによって有益に改善されている。

したがって、本発明は、α−フコシダーゼの組成物、および、α−フコシダーゼを使用してＮ−グリカンのコアフコースを除去するための、改善された方法を提供する。α−フコシダーゼは、配列番号５またはそのバリアントの配列に対して少なくとも８０％、８５％ ９０％、９５％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。脱フコシル化の改善された方法は、抗体をα−フコシダーゼと接触させるステップを含み、ここで、α−フコシダーゼは、配列番号５、そのバリアントまたは断片の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。

抗ＣＤ２０糖操作抗体を作出するための、改善された方法であって、（ａ）抗ＣＤ２０モノクローナル抗体をα−フコシダーゼおよび少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、単一のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する脱フコシル化抗体を得るステップと、（ｂ）適切な条件下でＧｌｃＮＡｃに炭水化物部分を付加するステップと、を含む方法が本明細書の記載に含まれる。

一部の実施形態では、本発明の方法による抗ＣＤ２０モノクローナル抗体はリツキシマブである。

Ｎ−グリカン内のオリゴ糖の可変性部分を切り取るために、エンドグリコシダーゼを使用する。本明細書で使用されるエンドグリコシダーゼの例としては、これだけに限定されないが、ＥｎｄｏＡ、ＥｎｄｏＦ、ＥｎｄｏＦ１、ＥｎｄｏＦ２、ＥｎｄｏＦ３、ＥｎｄｏＨ、ＥｎｄｏＭ、ＥｎｄｏＳ、ＥｎｄｏＳ２およびそのバリアントが挙げられる。

本発明の方法によるα−フコシダーゼは、配列番号５、その機能的バリアントの配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。

一部の実施形態では、α−フコシダーゼは、配列番号５、そのバリアントまたは断片の配列に対して少なくとも９０％または９５％同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態では、α−フコシダーゼは、組換えＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ α−フコシダーゼである。

本発明の方法のステップ（ａ）により、単一のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する脱フコシル化抗体が導かれる。その後、トランスグリコシラーゼを使用した酵素媒介性グリコシル化を実施して、指定の炭水化物部分をＧｌｃＮＡｃに付加し、糖鎖を伸長させる。したがって、糖操作抗体群の均一な集団を作製することができる。本明細書に記載のトランスグリコシラーゼの例としては、これだけに限定されないが、ＥｎｄｏＡ、ＥｎｄｏＦ、ＥｎｄｏＦ１、ＥｎｄｏＦ２、Ｅｎｄｏ Ｆ３、ＥｎｄｏＨ、ＥｎｄｏＭ、ＥｎｄｏＳ、Ｅｎｄｏ Ｓ２およびそのバリアントが挙げられる。

一部の実施形態では、本発明の方法による炭水化物部分は、Ｓｉａ_２（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−３／α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−６／α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−３／α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−６／α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−３）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−３）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２およびＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２からなる群より選択される。

好ましい実施形態では、炭水化物部分は、Ｓｉａ_２（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−３／α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−６／α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−３／α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ_２（α２−６／α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−３）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−３）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−６）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｓｉａ（α２−３）ＧａｌＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２、ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２およびＧａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_３Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２からなる群より選択される。

本発明の方法におけるステップ（ｂ）により、糖鎖の伸長が導かれる。糖鎖を伸長させるための１つの方法は、酵素により触媒されるグリコシル化反応を通じたものである。グリコシル化反応は付加反応であり、いかなる酸、水などの付随的な排除も伴わずに進行するので、酵素により触媒されるグリコシル化反応の中でも、糖ドナーとして糖オキサゾリンを使用するグリコシル化がオリゴ糖の合成に関して有用であることが当技術分野で周知である（Ｆｕｊｉｔａら、Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ ２００１年、１５２８巻、９〜１４頁）。

一部の実施形態では、炭水化物部分は、糖オキサゾリンである。

適切な条件は、反応混合物を少なくとも２０分、３０分、４０分、５０分、６０分、７０分、８０分、９０分または１００分、好ましくは６０分未満にわたってインキュベートすることも含む。インキュベーションは室温で行うことが好ましく、およそ２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃または４５℃で行うことがより好ましく、およそ３７℃で行うことが最も好ましい。

本発明のα−フコシダーゼのポリペプチドは、それらの単離または精製を補助するために、誘導体化または修飾することができることが理解されよう。したがって、本発明の一実施形態では、本発明において使用するためのポリペプチドを、分離手段に直接かつ特異的に結合することができるリガンドを付加することによって誘導体化または修飾する。あるいは、ポリペプチドを、結合対の一方のメンバーを付加することによって誘導体化または修飾し、分離手段に、結合対の他方のメンバーを付加することによって誘導体化または修飾される試薬を含める。任意の適切な結合対を使用することができる。本発明において使用するためのポリペプチドを、結合対の一方のメンバーを付加することによって誘導体化または修飾する好ましい実施形態では、ポリペプチドにヒスチジン−タグを付けるまたはビオチン−タグを付けることが好ましい。一般には、ヒスチジンまたはビオチンタグのアミノ酸コード配列を遺伝子レベルで含め、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて組換えによりタンパク質を発現させる。ヒスチジンまたはビオチンタグは、一般には、ポリペプチドの一端、Ｎ末端またはＣ末端のいずれかに存在する。ヒスチジンタグは、一般には６つのヒスチジン残基からなるが、これより長くてもよく、一般には、最大７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸または２０アミノ酸またはそれ未満、例えば、５アミノ酸、４アミノ酸、３アミノ酸、２アミノ酸または１アミノ酸であってよい。さらに、ヒスチジンタグは、アミノ酸置換、好ましくは上で定義されている保存的置換を１つまたは複数含有してよい。

本明細書に記載のバリアントポリペプチドは、アミノ酸配列が配列番号５のものから変動するものであるが、配列番号５のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む酵素の同じまたは同様の機能を示す。

本明細書で使用される場合、配列に関するパーセント（％）配列同一性は、配列をアラインメントし、必要であれば、最大のパーセント配列同一性を達成するためにギャップを導入した後の、参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である候補ポリペプチド配列内のアミノ酸残基の百分率と定義される。パーセント配列同一性を決定するためのアラインメントは、当技術分野の技術の範囲内である種々のやり方で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含めた、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。

本発明のいくつかの好ましい実施形態が実施例において実証されている。

非ヒト抗体をヒト化するための方法は当技術分野で周知である。一般に、ヒト化抗体には、非ヒトである供給源から１つまたは複数のアミノ酸残基が導入されている。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「移入」残基と称され、一般には、「移入」可変ドメインから取得される。ヒト化は、基本的に、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３〜３２７頁（１９８８年）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９巻：１５３４〜１５３６頁（１９８８年））の方法に従って、齧歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列の代わりに使用することによって実施することができる。したがって、そのような「ヒト化」抗体はキメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）であり、非ヒト種に由来する対応する配列で置換されているインタクトなヒト可変ドメインが実質的により少ない。実際には、ヒト化抗体は、一般には、いくつかのＣＤＲ残基および場合によっていくつかのＦＲ残基が齧歯類抗体における類似部位由来の残基で置換されたヒト抗体である。

ヒト化抗体の作出に使用する軽鎖および重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低下させるために非常に重要である。いわゆる「最良適合」法に従って、齧歯類抗体の可変ドメインの配列を公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングする。次いで、齧歯類の配列に最も近いヒト配列をヒト化抗体のヒトフレームワーク（ＦＲ）として許容する（Ｓｉｍｓら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１巻：２２９６頁（１９９３年）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、１９６巻：９０１頁（１９８７年））。別の方法では、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８９巻：４２８５頁（１９９２年）；Ｐｒｅｓｔａｅｔａｌ．、Ｊ． Ｉｍｍｎｏｌ．、１５１巻：２６２３頁（１９９３年））。

さらに、抗体を、抗原に対する高親和性および他の好都合な生物学的性質を保持させながらヒト化することが重要である。この目標を達成するために、好ましい方法に従って、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の３次元モデルを使用した、親の配列および種々の概念的なヒト化産物の分析のプロセスによって調製される。３次元免疫グロブリンモデルが一般に利用可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の可能性のある３次元コンフォメーション構造を例示し、表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の検査により、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンのそれの抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このように、ＦＲ残基をレシピエントから選択し、組み合わせ、配列に移入し得、したがって、標的抗原（複数可）に対する親和性の増大などの所望の抗体特性を達成する。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接かつほぼ実質的に関与する。

あるいは、現在、免疫化すると内在性免疫グロブリン産生の不在下でヒト抗体の完全なレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製することが可能である。例えば、キメラおよび生殖細胞系変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失により、内在性抗体産生の完全な阻害がもたらされることが記載されている。そのような生殖細胞系変異体マウスにおけるヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイの移行により、抗原による攻撃に際してヒト抗体の産生がもたらされる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、９０巻：２５５１頁（１９９３年）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：２５５〜２５８頁（１９９３年）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．、７巻：３３頁（１９９３年）を参照されたい。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーから導出することもできる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２２７巻：３８１頁（１９９１年）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９１年））。

抗ＨＥＲ２糖操作抗体群（抗ＨＥＲ２ＧＡｂ）
ＨＥＲ２遺伝子は、乳がんのおよそ３０％で過剰発現または増幅される。ＨＥＲ２が過剰発現または増幅している乳がん患者では、無病生存期間および全生存期間が短縮される。ＨＥＲ２タンパク質は、固有であり、ＨＥＲ２遺伝子が過剰発現するがんの抗体療法に対する有用な標的であると考えられている。抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体であるトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））がこの標的に関する悪性のがんに対する療法において成功裏に使用されており、これは、ＨＥＲ２過剰発現乳がんの処置に関して１９９８年にＦＤＡによる認可を受けた。これだけに限定されないが、乳がんを含めた、ＨＥＲ２を発現する細胞が関与する様々な疾患の予防および／または処置においてより有効である、ＨＥＲ２に対する改善された治療用抗体がなお必要とされている。

本開示は、「抗ＨＥＲ２糖操作抗体群」（「抗ＨＥＲ２ＧＡｂ」）と称される新規クラスの抗ＨＥＲ２抗体を特徴とする。抗ＨＥＲ２糖操作抗体群は、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体からＦｃ糖鎖工学によって生成することができる。均一な集団を構成する個々の抗ＨＥＲ２糖操作抗体群は同一であり、明確に定義されたグリカン構造および配列を有する同じＦｃグリカンを含有する。本発明による抗ＨＥＲ２ＧＡｂは、その親抗体と同じヒトＨＥＲ２抗原のエピトープに特異的に結合する。

「親抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、抗ＨＥＲ２糖操作抗体を作製するために使用される抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体を指す。

親抗体は、哺乳動物細胞培養物、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓまたは昆虫細胞株などの細胞培養によって得ることができる。親抗体は哺乳動物細胞培養物中で産生されることが好ましい。親抗体はＦＤＡの認可を受けたものであってもよく、開発中のものであってもよい。ＦＤＡの認可を受けた抗ＨＥＲ２治療用抗体としては、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｔａ）、アド−トラスツズマブエムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）が挙げられる。

一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＨＥＲ２ＧＡｂは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態では、抗ＨＥＲ２ＧＡｂは、トラスツズマブの軽鎖配列および重鎖配列を含む。
以下の表７は、トラスツズマブの重鎖および軽鎖配列を示す。

Ｆｃにおけるグリコシル化は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣおよび循環半減期を含めた種々の免疫グロブリンエフェクター媒介性機能に影響を及ぼす可能性がある。ＡＤＣＣ増強は、治療用抗体の薬効を改善するための重要な戦略である。ＡＤＣＣ増強には、薬物費用の低減という利益のために、有効薬物投与量を低減させる潜在性がある。本明細書に記載の抗ＨＥＲ２糖操作抗体群は、機能的性質を特徴とし得る。抗ＨＥＲ２ＧＡｂは、ヒトＨＥＲ２発現細胞に対するアポトーシスを含めた細胞増殖阻害活性を有する。一部の実施形態では、抗ＨＥＲ２ＧＡｂは、その親抗体と比較してより強力な細胞増殖阻害活性を示す。

本発明による糖操作抗体のＡＤＣＣ活性は、親抗体のＡＤＣＣ活性と比較して、少なくとも３倍増大した、好ましくは少なくとも９倍、より好ましくは少なくとも１０倍増大したＡＤＣＣ活性、好ましくは少なくとも１２倍増大したＡＤＣＣ活性、好ましくは少なくとも２０倍増大したＡＤＣＣ活性、最も好ましくは少なくとも３０倍増大したＡＤＣＣ活性である。

本発明の糖操作抗体のＡＤＣＣ溶解活性は、ＳＫＢＲ５、ＳＫＢＲ３、ＬｏＶｏ、ＭＣＦ７、ＯＶＣＡＲ３および／またはＫａｔｏ ＩＩＩなどの標的がん細胞株を使用して、親抗体と比較して測定することができる。

表８は、トラスツズマブと比較した、抗ＨＥＲ２ＧＡｂｓの例示的なＡＤＣＣ活性の増強の一覧である。例示的なアッセイが実施例に記載されている。

本明細書に記載のいくつかの抗ＨＥＲ２ＧＡｂｓ、特にＧＡｂ１０１およびＧＡｂ１０４は、その親抗体であるリツキシマブと比較してＡＤＣＣ活性の増強を示す。本発明の糖操作抗体群は、ＨＥＲ２陽性疾患に対する治療剤として優れた効果を示し得、治療剤の開発における抗ＨＥＲ２ＧＡｂの使用は本発明の目的であることが意図されている。

驚いたことに、本明細書に記載の糖操作抗体により、ＣＤＣに影響を及ぼすことなく、ＡＤＣＣの改善をもたらすことができる。例示的なＣＤＣアッセイが実施例に記載されている。例示的な実施形態では、糖操作抗体のＡＤＣＣは増大するが、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）などの他の免疫グロブリン型エフェクター機能は同様のままである、または有意には影響を受けない。

表９は、抗ＨＥＲ２ＧＡｂｓおよびハーセプチンの例示的なＦｃγＲＩＩＩＡ結合の一覧である。

ＦｃγＲＩＩＩＡ結合は、当技術分野で公知のアッセイを使用して測定することができる。例示的なアッセイが実施例に記載されている。Ｆｃ受容体結合は、抗ＨＥＲ２ＧＡｂ 対 トラスツズマブの相対比として決定することができる。例示的な実施形態では、Ｆｃ受容体結合は、少なくとも２．５倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍または２０倍、３０倍、４０倍、５０倍またはそれを超えて増大する。

結合データから、トラスツズマブと比較して、抗ＨＥＲ２ＧＡｂｓ、特にＧＡｂ１０１およびＧＡｂ１０４が標的分子ＨＥＲ２に対してより強力な結合親和性を示すことが示された。

総合すると、抗ＨＥＲ２ＧＡｂｓ、特にＧＡｂ１０１およびＧＡｂ１０４は、トラスツズマブと比較して、ＡＤＣＣ活性の増強およびより強力なＦｃγＲＩＩＩＡ結合親和性を示す。本発明の糖操作抗体群により、単独で、または、好ましくは、そのような抗体を２種またはそれ超含む組成物中のいずれかで、および場合によって化学療法などの他の処置と組み合わせて優れた臨床応答をもたらすことができることが意図されている。ＡＤＣＣが増強された抗ＨＥＲ２糖操作抗体により、ＨＥＲ２陽性疾患に対する代替治療薬をもたらすことができることが意図されている。本発明の糖操作抗体群のエフェクター機能の増大は、より低濃度かつ低頻度で投薬することが可能になり、それにより、抗体毒性および／または抗体耐性の発生の潜在性が減少することを意味するので、有利なことに、本発明の糖操作抗体群を使用して、現在の投与経路および現在の治療レジメンを変更することができる。さらに、それらのエフェクター機能の改善により、組換え宿主系において産生された対応する抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体を用いた処置には以前に抵抗性または不応性であった臨床的適応症を処置するための新しい手法がもたらされる。

本発明の抗ＨＥＲ２糖操作抗体群は、市販されているまたは前臨床または臨床開発中の抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（「親抗体」）からＦｃ糖鎖工学によって作製することができる。モノクローナル抗体は治療用モノクローナル抗体であることが好ましい。Ｆｃ糖鎖工学は、酵素的にまたは化学酵素的に実施することができる。好ましい実施形態では、親抗体はトラスツズマブである。

本発明の糖操作抗体群におけるＮ−グリカンは、脱フコシル化されていることが好ましい。

抗ＨＥＲ２糖操作抗体を作出するための方法は、抗ＣＤ２０糖操作抗体を作出するための、本明細書に記載の方法と同様である。簡単に述べると、方法は、（ａ）抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体をα−フコシダーゼおよび少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、単一のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する脱フコシル化抗体を得るステップと、（ｂ）適切な条件下でＧｌｃＮＡｃに所望の炭水化物部分を付加するステップとを含む。

好ましい実施形態では、炭水化物部分は、Ｓｉａ_２（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃである。

（ＩＩ）自己免疫および／または炎症に対する糖操作抗体群
本明細書に記載の糖操作抗体群は、自己免疫および／または炎症を処置するために有用であり得る。自己免疫および炎症に対する例示的なモノクローナル抗体としては、これだけに限定されないが、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ；Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ／Ｅｌａｎ）、ベドリズマブ（ＭＬＮ２；Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｔａｋｅｄａ）、ベリムマブ（Ｂｅｎｌｙｓｔａ；Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、アタシセプト（ＴＡＣＩ−Ｉｇ；Ｍｅｒｃｋ／Ｓｅｒｏｎｏ）、アレファセプト（Ａｍｅｖｉｖｅ；Ａｓｔｅｌｌａｓ）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４；Ｔｏｌｅｒｘ／ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１；ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ／Ｍａｂｔｈｅｒａ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ／Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ；Ｇｅｎｍａｂ／ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、オクレリズマブ（２Ｈ７；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ／Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、エプラツズマブ（ｈＬＬ２；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ／ＵＣＢ）、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ／ＭａｂＣａｍｐａｔｈ；Ｇｅｎｚｙｍｅ／Ｂａｙｅｒ）、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ；Ａｌｅｘｉｏｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、オマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、カナキヌマブ（Ｉｌａｒｉｓ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、メポリズマブ（Ｂｏｓａｔｒｉａ；ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、レスリズマブ（ＳＣＨ５５７００；Ｃｅｐｔｉｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、トシリズマブ（Ａｃｔｅｍｒａ／ＲｏＡｃｔｅｍｒａ；Ｃｈｕｇａｉ／Ｒｏｃｈｅ）、ウステキヌマブ（Ｓｔｅｌａｒａ；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、ブリアキヌマブ（ＡＢＴ−８７４；Ａｂｂｏｔｔ）、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ；Ａｍｇｅｎ／Ｐｆｉｚｅｒ）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｍｅｒｃｋ）、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ／Ｔｒｕｄｅｘａ；Ａｂｂｏｔｔ）、セルトリズマブペゴル（Ｃｉｍｚｉａ；ＵＣＢ）、およびゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）が挙げられる。

抗ＴＮＦα糖操作抗体群（抗ＴＮＦαＧＡｂ）
単球およびマクロファージは、内毒素または他の刺激に応答して、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）および腫瘍壊死因子−β（ＴＮＦβ）として公知のサイトカインを分泌する。ＴＮＦαは、１７ｋＤタンパク質サブユニットの可溶性ホモ三量体である（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６２巻：６９５１〜６９５４頁（１９８７年））。膜に結合した２６ｋＤの前駆形態のＴＮＦも存在する（Ｋｒｉｅｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ ５３巻：４５〜５３頁（１９８８年））。ＴＮＦ−αは、先天免疫の重要な調節因子である炎症反応の強力な誘導因子であり、細胞内細菌およびある特定のウイルスの感染に対するＴｈ１免疫応答の調節において重要な役割を果たす。しかし、調節不全ＴＮＦは、多数の病理学的状況の一因となる可能性もある。これらの病理学的状況としては、関節リウマチ、クローン病、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎および重症慢性尋常性乾癬を含めた免疫媒介性炎症性疾患（ＩＭＩＤ）が挙げられる。

本開示は、「抗ＴＮＦα糖操作抗体群」（「抗ＴＮＦαＧＡｂｓ」）と称される新規クラスの抗ＴＮＦαモノクローナル抗体を特徴とする。抗ＴＮＦα糖操作抗体群は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体（「親抗体」）からＦｃ糖鎖工学によって生成することができる。「親抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、抗ＴＮＦα糖操作抗体群を作製するために使用される抗ＴＮＦαモノクローナル抗体を指す。均一な集団を構成する個々の抗ＴＮＦα糖操作抗体群は同一であり、明確に定義されたグリカン構造および配列を有する同じＦｃグリカンを含有する。本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体群は、その親抗体が結合するのと同じヒトＴＮＦα抗原のエピトープに結合し得る。

親抗体は、哺乳動物細胞、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓまたは昆虫細胞などの細胞において産生させることができる。親抗体は哺乳動物細胞において産生させることが好ましい。親抗体はＦＤＡの認可を受けたものであってもよく、開発中のものであってもよい。認可を受けたまたは開発中の抗ＴＮＦαモノクローナル抗体としては、インフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、ＣＤＰ８７０（セルトリズマブ）、ＴＮＦ−ＴｅＡｂおよびＣＤＰ５７１が挙げられる。

本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖を含み得る。本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体は、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））の軽鎖配列および重鎖配列を含み得る。
以下の表１０は、アダリムマブの重鎖および軽鎖配列を示す。

本発明の抗ＴＮＦα糖操作抗体は、抗ＴＮＦαモノクローナル抗体（「親抗体」）からＦｃ糖鎖工学によって作製することができる。一部の実施形態では、親抗体はアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））である。

抗ＴＮＦα糖操作抗体を作出するための方法は、抗ＣＤ２０糖操作抗体を作出するための、本明細書に記載の方法と同様である。簡単に述べると、方法は、（ａ）抗ＴＮＦαモノクローナル抗体をα−フコシダーゼおよび少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、単一のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する脱フコシル化抗体を得るステップと、（ｂ）適切な条件下でＧｌｃＮＡｃに所望の炭水化物部分を付加するステップとを含む。

好ましい実施形態では、炭水化物部分は、Ｓｉａ_２（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃである。

（ＩＩＩ）感染症に対する糖操作抗体群
一部の実施形態では、本明細書に記載の糖操作抗体群は、感染症を処置するために有用である。

感染症に対する例示的なモノクローナル抗体としては、これだけに限定されないが、ＭＢ−００３（ｃ１３Ｃ６、ｈ１３Ｆ６およびｃ６Ｄ８）、ＺＭａｂ（ｍ１Ｈ３、ｍ２Ｇ４およびｍ４Ｇ７）およびＺＭａｐｐ（ｃ１３Ｃ６、ｃ２Ｇ４、ｃ４Ｇ７）などの抗エボラ抗体、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０２、ＶＲＣ０３、ＶＲＣ０６、ｂ１２、ＨＪ１６、８ＡＮＣ１３１、８ＡＮＣ１３４、ＣＨ１０３、ＮＩＨ４５、ＮＩＨ４６、ＮＩＨ４５Ｇ５４Ｗ、ＮＩＨ４６Ｇ５４Ｗ、３ＢＮＣ１１７、３ＢＮＣ６０、ＶＲＣ−ＰＧ０４、１ＮＣ９、１２Ａ１２、１２Ａ２１、ＶＲＣ２３、ＰＧ９、ＰＧＴ１４５、ＰＧＤＭ１４００、ＰＧ１６、２Ｇ１２、ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２８、ＰＧＴ１３５、４Ｅ１０、１０Ｅ８、Ｚ１３および２Ｆ５などの抗ＨＩＶ抗体、ならびにＣ１７９、ＣＲ６２６１、Ｆ１０、ＦＩ６、ＣＲ８０２０、ＣＨ６５、Ｃ０５、ＴＣＮ−０３２、Ｄ００５、ＣＲ９１１４およびＳ１３９／１などの抗インフルエンザ抗体が挙げられる。

抗ウイルス糖操作抗体群
一部の実施形態では、本開示は、新規クラスの、糖鎖工学により操作されたＦＩ６モノクローナル抗体を特徴とする。Ｆ１６モノクローナル抗体は、中和抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体である。中和抗体は、Ａ型インフルエンザウイルスに対して応答する。抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１３０１１３４７に記載されているものと同様である。

ＦＩ６糖操作抗体を作出するための方法は、抗ＣＤ２０糖操作抗体を作出するための、本明細書に記載の方法と同様である。簡単に述べると、方法は（ａ）ＦＩ６モノクローナル抗体をα−フコシダーゼおよび少なくとも１種のエンドグリコシダーゼと接触させ、それにより、単一のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する脱フコシル化抗体を得るステップと、（ｂ）適切な条件下でＧｌｃＮＡｃに所望の炭水化物部分を付加するステップとを含む。

好ましい実施形態では、炭水化物部分は、Ｓｉａ_２（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃである。

医薬組成物
本開示による医薬組成物は、治療薬に使用することができる。例えば、医薬組成物は、ＦｃγＲによって媒介されるエフェクター細胞機能（例えば、ＡＤＣＣ）の有効性の増強が所望される疾患、障害、または感染、例えばがん、自己免疫疾患、感染症に付随する１つまたは複数の症状を防止する、処置する、または好転させるために、および効果がＡＤＣＣによって媒介される治療用抗体の治療有効性の増強において使用することができる。

抗体を本明細書に記載の通り調製した後、「凍結乾燥前製剤」を作製することができる。製剤を調製するための抗体は、基本的に純粋であることが好ましく、基本的に均一であることが望ましい（すなわち、混入タンパク質などを含まない）。「基本的に純粋な」タンパク質とは、組成物の総重量に基づいて、少なくとも約９０重量％、好ましくは少なくとも約９５重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。「基本的に均一な」タンパク質とは、組成物の総重量に基づいて、少なくとも約９９重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。ある特定の実施形態では、タンパク質は抗体である。

凍結乾燥前製剤中の抗体の量は、所望の用量体積、投与の様式（複数可）などを考慮に入れて決定する。選択されたタンパク質がインタクトな抗体（全長抗体）である場合、例示的な出発タンパク質濃度は、約２ｍｇ／ｍＬから約５０ｍｇ／ｍＬまで、好ましくは約５ｍｇ／ｍＬから約４０ｍｇ／ｍＬまで、最も好ましくは約２０ｍｇ／ｍＬから３０ｍｇ／ｍＬまでである。タンパク質は、一般に、溶液中に存在する。例えば、タンパク質は、ｐＨ緩衝溶液中に約４〜８、好ましくは約５〜７のｐＨで存在し得る。例示的な緩衝液としては、ヒスチジン、リン酸、トリス、クエン酸、コハク酸および他の有機酸が挙げられる。緩衝液の濃度は、例えば、緩衝液および製剤（例えば、再構成製剤）の所望の等張性に応じて、約１ｍＭから約２０ｍＭまで、または約３ｍＭから約１５ｍＭまでであり得る。以下で実証される通り、凍結保護性を有し得るという点で、ヒスチジンが好ましい緩衝液である。コハク酸が別の有用な緩衝液であることが示された。

凍結保護剤を凍結乾燥前製剤に添加する。好ましい実施形態では、凍結保護剤は、スクロースまたはトレハロースなどの非還元糖である。凍結乾燥前製剤中の凍結保護剤の量は、一般に、再構成した時に得られる製剤が等張性になるような量である。しかし、高張性の再構成製剤も適切であり得る。さらに、凍結保護剤の量は、凍結乾燥した時に許容されない量のタンパク質の分解／凝集が起こるほど少ないものであってはならない。凍結保護剤が糖（例えば、スクロースまたはトレハロースなど）であり、タンパク質が抗体である場合、凍結乾燥前製剤中の例示的な凍結保護剤濃度は、約１０ｍＭから約４００ｍＭまで、好ましくは約３０ｍＭから約３００ｍＭまで、最も好ましくは約５０ｍＭから約１００ｍＭまでである。

タンパク質と凍結保護剤の比は、各々のタンパク質と凍結保護剤の組み合わせに対して選択する。タンパク質濃度が高い等張性の再構成製剤を生成するためにタンパク質としての選択された抗体と、凍結保護剤としての糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）との場合、抗体に対する凍結保護剤のモル比は、１モルの抗体に対して約１００モルから約１５００モルまでの凍結保護剤、好ましくは１モルの抗体に対して約２００モルから約１０００モルまでの凍結保護剤、例えば、１モルの抗体に対して約２００モルから約６００モルまでの凍結保護剤であり得る。

本発明の好ましい実施形態では、凍結乾燥前製剤に界面活性剤を添加することが望ましいことが見いだされた。その代わりに、またはそれに加えて、凍結乾燥製剤および／または再構成製剤に界面活性剤を添加することができる。例示的な界面活性剤としては、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０または８０）；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；トリトン；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｌａｕｒｅｌ ｓｕｌｆａｔｅ）；オクチルグリコシドナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｏｃｔｙｌ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；ラウリルスルホベタイン、ミリスチルスルホベタイン、リノレイルスルホベタイン、またはステアリルスルホベタイン；ラウリルサルコシン、ミリスチルサルコシン、リノレイルサルコシンまたはステアリルサルコシン；リノレイルベタイン、ミリスチルベタイン、またはセチルベタイン；ラウロアミドプロピルベタイン、コカミドプロピルベタイン、リノールアミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピルベタイン、パルニドプロピルベタイン、またはイソステアラミドプロピルベタイン（例えばラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピルジメチルアミン、パルミドプロピルジメチルアミン、またはイソステアラミドプロピルジメチルアミン；ナトリウムメチルココイルタウレート、または二ナトリウムメチルオレイルタウレート；およびＭＯＮＡＱＵＡＴＴＭシリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐａｔｅｒｓｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリプロピルグリコール（ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌ ｇｌｙｃｏｌ）、およびエチレンとプロピレングリコールの共重合体（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ＰＦ６８など）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。添加する界面活性剤の量は、再構成されたタンパク質の凝集が減少し、再構成後の微粒子物の形成が最小限になるような量にする。例えば、界面活性剤は、凍結乾燥前製剤中に、約０．００１〜０．５％、好ましくは約０．００５〜０．０５％の量で存在してよい。

本発明のある特定の実施形態では、凍結乾燥前製剤の調製において、凍結保護剤（例えば、スクロースまたはトレハロースなど）と増量剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）の混合物を使用する。増量剤により、中に過剰なポケットを伴わない一様な凍結乾燥ケーキなどの作製が可能になり得る。

製剤の所望の特性に悪影響を及ぼさないのであれば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版、Ｏｓｏｌ， Ａ．編（１９８０年）に記載されているものなどの、他の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を凍結乾燥前製剤（および／または凍結乾燥製剤および／または再構成製剤）に含めることができる。許容される担体、賦形剤または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して非毒性のものであり、それらとして、追加的な緩衝剤；防腐剤；共溶媒；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ポリエステルなどの生分解性ポリマー；ならびに／またはナトリウムなどの塩形成性対イオンが挙げられる。

本明細書に記載の医薬組成物および製剤は、安定であることが好ましい。「安定な」製剤／組成物とは、保管に際してその中の抗体の物理的安定性および化学的安定性および完全性が基本的に保持される製剤／組成物である。タンパク質安定性を測定するための種々の分析技法が当技術分野において利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７〜３０１頁、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、Ｐｕｂｓ（１９９１年）およびＪｏｎｅｓ， Ａ． Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ． １０巻：２９〜９０頁（１９９３年）に概説されている。安定性は、選択された温度で選択された期間にわたって測定することができる。

ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用する製剤は、無菌であるべきである。これは、凍結乾燥および再構成の前またはその後に滅菌濾過膜を通して濾過することによって容易に達成される。あるいは、混合物全体の無菌性は、タンパク質以外の成分を、例えば約１２０℃で約３０分にわたってオートクレーブすることによって達成することができる。

タンパク質、凍結保護剤および他の任意選択の構成成分を混合した後、製剤を凍結乾燥する。この目的のために、Ｈｕｌｌ５０（登録商標）（Ｈｕｌｌ、ＵＳＡ）またはＧＴ２０（登録商標）（Ｌｅｙｂｏｌｄ−Ｈｅｒａｅｕｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）フリーズドライヤーなどの多くの異なるフリーズドライヤーが利用可能である。フリーズドライは、製剤を凍結させ、その後、一次乾燥に適した温度で凍結した内容物から氷を昇華させることによって達成される。この条件の下で、産物の温度は製剤の共融点または崩壊温度を下回る。一般には、一次乾燥の棚温度は、一般には約５０〜２５０ｍＴｏｒｒにわたる適切な圧力で、約−３０〜２５℃にわたる（産物が一次乾燥の間凍結したままであることを条件とする）。乾燥に必要な時間は、主に、製剤、試料を保持する容器のサイズおよび型（例えば、ガラスバイアル）ならびに液体の体積により規定され、これは、数時間から数日（例えば、４０〜６０時間）までにわたる。二次乾燥段階は、主に、使用する容器の型およびサイズならびにタンパク質の型に応じて、約０〜４０℃で行うことができる。しかし、本明細書では、二次乾燥ステップは必要でない場合があることが見いだされた。例えば、凍結乾燥の水除去相全体を通した棚温度は、約１５〜３０℃（例えば、約２０℃）であり得る。二次乾燥に必要な時間および圧力は、例えば温度および他のパラメータに応じて、適切な凍結乾燥ケーキが生じる時間および圧力である。二次乾燥時間は、産物中の所望の残留水分レベルにより規定され、一般には、少なくとも約５時間（例えば、１０〜１５時間）かかる。圧力は、一次乾燥ステップの間に使用する圧力と同じであってよい。フリーズドライ条件は、製剤およびバイアルサイズに応じて変動し得る。

いくつかの場合には、移行ステップを回避するために、タンパク質の再構成を行う容器中でタンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましい。この場合、容器は、例えば、３ｃｃ、５ｃｃ、１０ｃｃ、２０ｃｃ、５０ｃｃまたは１００ｃｃのバイアルであってよい。一般命題として、凍結乾燥により、水分含量が約５％未満、および好ましくは約３％未満である凍結乾燥製剤がもたらされる。

所望の段階、一般には、タンパク質を患者に投与する時に、希釈剤を用いて凍結乾燥製剤を再構成し、したがって、再構成製剤中のタンパク質の濃度を少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬから約４００ｍｇ／ｍＬまで、より好ましくは約８０ｍｇ／ｍＬから約３００ｍｇ／ｍＬまで、最も好ましくは約９０ｍｇ／ｍＬから約１５０ｍｇ／ｍＬまでにすることができる。そのような再構成製剤中の高タンパク質濃度は、再構成製剤の皮下送達が意図されている場合に特に有用であると考えられる。しかし、静脈内投与などの他の投与経路に関しては、再構成製剤中のタンパク質の濃度はより低いことが所望される場合がある（例えば、再構成製剤中、約５〜５０ｍｇ／ｍＬ、または約１０〜４０ｍｇ／ｍＬのタンパク質）。ある特定の実施形態では、再構成製剤中のタンパク質の濃度は、凍結乾燥前製剤中のタンパク質の濃度よりも有意に高い。例えば、再構成製剤中のタンパク質の濃度は、凍結乾燥前製剤中のタンパク質の濃度の約２〜４０倍、好ましくは３〜１０倍、最も好ましくは３〜６倍（例えば、少なくとも３倍または少なくとも４倍）であり得る。

一般には、再構成は、完全な湿潤化（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）を確実にするために約２５℃の温度で行うが、所望であれば他の温度を使用することができる。再構成に必要な時間は、例えば、希釈剤の型、賦形剤（複数可）およびタンパク質の量に依存する。例示的な希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）、滅菌食塩溶液、リンゲル液またはデキストロース溶液が挙げられる。希釈剤は、場合によって防腐剤を含有する。例示的な防腐剤が上に記載されており、好ましい防腐剤はベンジルまたはフェノールアルコールなどの芳香族アルコールである。使用する防腐剤の量は、異なる防腐剤濃度をタンパク質との適合性について評価すること、および防腐剤有効性試験によって決定する。例えば、防腐剤が芳香族アルコール（例えば、ベンジルアルコールなど）である場合、約０．１〜２．０％、好ましくは約０．５〜１．５％、しかし最も好ましくは約１．０〜１．２％の量で存在してよい。再構成製剤は、サイズが１０μｍ超の粒子をバイアル当たり６０００個未満有する。

治療適用
本開示には、疾患、障害、または感染に付随する１つまたは複数の症状を防止する、処置する、または好転させるための方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法が含まれる。疾患、障害、または感染としては、これだけに限定されないが、がん、自己免疫障害、炎症性障害および伝染性感染症が挙げられる。

（Ｉ）がんの処置
本開示による医薬組成物は、がんに使用することができる。本開示には、患者においてがんを処置するための方法であって、患者に、有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法が含まれる。

がんの例としては、これだけに限定されないが、聴神経腫、腺癌、副腎がん、肛門がん、血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）（例えば、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ））、虫垂がん、良性単クローン性高ガンマグロブリン血症、胆道がん（例えば、胆管細胞癌）、膀胱がん、乳がん（ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、乳腺癌、乳房の乳頭癌、乳がん（ｍａｍｍａｒｙ ｃａｎｃｅｒ）、乳腺髄様癌）、脳がん（例えば、髄膜腫；神経膠腫、例えば、星状細胞腫、乏枝神経膠腫；髄芽腫）、気管支がん、カルチノイド腫瘍、子宮頸がん（例えば、子宮頸部の腺癌）、絨毛癌、脊索腫、頭蓋咽頭腫、結腸直腸がん（例えば、結腸がん、直腸がん、結腸直腸腺癌）、上皮癌、上衣腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）（例えば、カポジ肉腫、多発性特発性出血性肉腫）、子宮体がん（例えば、子宮がん、子宮肉腫）、食道がん（ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、食道腺癌、バレット腺癌）、ユーイング肉腫、眼がん（例えば、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫）、家族性過好酸球増加症、胆嚢がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、胃腺癌）、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭頸部がん（例えば、頭頸部扁平上皮癌、口腔がん（例えば、口腔扁平上皮癌（ＯＳＣＣ）、のどのがん（例えば、喉頭がん、咽頭がん、鼻咽頭がん、中咽頭がん））、造血系のがん（例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）（例えば、Ｂ細胞ＡＬＬ、Ｔ細胞ＡＬＬ）、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）（例えば、Ｂ細胞ＡＭＬ、Ｔ細胞ＡＭＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）（例えば、Ｂ細胞ＣＭＬ、Ｔ細胞ＣＭＬ）、および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（例えば、Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ細胞ＣＬＬ）などの白血病；ホジキンリンパ腫（ＨＬ）（例えば、Ｂ細胞ＨＬ、Ｔ細胞ＨＬ）および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（例えば、びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＣＬ）（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）などのＢ細胞ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁層Ｂ細胞リンパ腫（例えば、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、結節性辺縁層Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁層Ｂ細胞リンパ腫）、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（すなわち、「ワルデンシュトレームマクログロブリン血症」）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫および中枢神経系（ＣＮＳ）原発リンパ腫などのリンパ腫；および前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）（例えば、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（例えば、菌状息肉症、セザリー症候群）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、節外性ナチュラルキラーＴ細胞リンパ腫、腸疾患型Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫）などのＴ細胞ＮＨＬ；上記の１つまたは複数の白血病／リンパ腫の混合型；ならびに多発性骨髄腫（ＭＭ））、重鎖病（例えば、アルファ鎖病、ガンマ鎖病、ミュー鎖病）、血管芽細胞腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｉｃ ｔｕｍｏｒ）、免疫細胞アミロイドーシス、腎がん（例えば、腎芽腫、別名ウィルムス腫瘍、腎細胞癌）、肝がん（例えば、肝細胞がん（ＨＣＣ）、悪性ヘパトーマ）、肺がん（例えば、気管支原性肺癌、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、肺腺癌）、平滑筋肉腫（ＬＭＳ）、肥満細胞症（例えば、全身性肥満細胞症）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、中皮腫、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）（例えば、真性赤血球増加症（ＰＶ）、本態性血小板増加症（ＥＴ）、原因不明骨髄様化生（ＡＭＭ）、別名骨髄線維症（ＭＦ）、慢性特発性骨髄線維症、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、好酸球増加症候群（ＨＥＳ））、神経芽細胞腫、神経線維腫（例えば、神経線維腫症（ＮＦ）１型または２型、神経鞘腫症）、神経内分泌がん（例えば、胃腸膵神経内分泌腫瘍（ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｔｒｉｎｅ ｔｕｍｏｒ）（ＧＥＰ−ＮＥＴ）、カルチノイド腫瘍）、骨肉腫、卵巣がん（ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、嚢胞腺癌、卵巣胎児性癌、卵巣腺癌）、乳頭状腺癌、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、膵腺癌、膵管内乳頭粘液性腫瘍（ＩＰＭＮ）、膵島細胞腫瘍）、陰茎がん（例えば、陰茎および陰嚢のパジェット病）、松果体腫、未分化神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＴ）、前立腺がん（例えば、前立腺腺癌）、直腸がん、横紋筋肉腫、唾液腺がん、皮膚がん（例えば、扁平上皮癌（ＳＣＣ）、角化棘細胞腫（ＫＡ）、黒色腫、基底細胞癌（ＢＣＣ））、小腸がん（例えば、虫垂がん）、軟部肉腫（例えば、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、脂肪肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、軟骨肉腫、線維肉腫、粘液肉腫）、脂腺癌、汗腺癌、滑膜腫、精巣がん（例えば、セミノーマ、精巣胎児性癌）、甲状腺がん（例えば、甲状腺の乳頭癌（ｐａｐｉｌｌａｒｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｙｒｏｉｄ）、甲状腺乳頭癌（ｐａｐｉｌｌａｒｙ ｔｈｙｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）（ＰＴＣ）、甲状腺髄様がん）、尿道がん、膣がんおよび外陰がん（例えば、外陰部のパジェット病）が挙げられる。

一部の実施形態では、提供される糖操作抗体群は、肺がんの処置において有用である。一部の実施形態では、提供される化合物は小細胞肺がん（ｓｍａｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の処置において有用である。一部の実施形態では、提供される化合物は、非小細胞肺がん（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の処置において有用である。一部の実施形態では、提供される化合物は、大腸がんの処置において有用である。一部の実施形態では、提供される化合物は、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｓ ｃａｎｃｅｒ）の処置において有用である。一部の実施形態では、提供される化合物は、胆道がん（ｂｉｌｉａｒｙ ｔｒａｃｔ ｃａｎｃｅｒ）または子宮体がんの処置において有用である。

抗ＣＤ２０糖操作抗体群を使用した処置
一部の実施形態では、本開示は、それを必要とするヒト被験体においてがんを処置するための方法であって、被験体に治療有効量の抗ＣＤ２０糖操作抗体群および薬学的に許容される担体を投与するステップを含む方法を特徴とする。

がんの例としては、これだけに限定されないが、Ｂ細胞リンパ腫、ＮＨＬ、前駆Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫および成熟Ｂ細胞新生物、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞性前リンパ性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、低悪性度、中悪性度および高悪性度（ＦＬ）、皮膚濾胞中心リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｃｅｎｔｅｒ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁層Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴ型辺縁層Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁層Ｂ細胞リンパ腫、脾臓型辺縁層Ｂ細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、および未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）が挙げられる。

ある特定の実施形態では、がんは、非ホジキンリンパ腫などのＢ細胞リンパ腫である。

抗ＨＥＲ２糖操作抗体群を使用した処置
一部の実施形態では、本開示は、それを必要とするヒト被験体においてがんを処置するための方法であって、被験体に治療有効量の抗ＨＥＲ２糖操作抗体群および薬学的に許容される担体を投与するステップを含む方法を特徴とする。

がんの例としては、これだけに限定されないが、乳がん（ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、脳がん、肺がん、口腔がん、食道がん（ｅｓｏｐｈａｇｕｓ ｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、肝がん、胆管がん、膵がん（ｐａｎｃｒｅａｓ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、腎がん、子宮頸部がん、卵巣がん（ｏｖａｒｙ ｃａｎｃｅｒ）および前立腺がんが挙げられる。一部の実施形態では、がんは、脳がん、肺がん、乳がん（ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、卵巣がん（ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ）、前立腺がん、結腸がん、または膵がん（ｐａｎｃｒｅａｓ ｃａｎｃｅｒ）である。

本明細書に記載のこれらの処置方法では、糖操作抗体群の医薬組成物は、単独で、または、第２の抗体、もしくは化学療法剤もしくは免疫抑制剤などの第２の治療剤と併せて投与することができる。

ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、抗がん剤である。抗がん剤は、生物療法抗がん剤ならびに化学療法剤を含む。例示的な生物療法抗がん剤としては、これだけに限定されないが、インターフェロン、サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子、インターフェロンα、インターフェロンγ）、ワクチン、造血成長因子、モノクローナル血清療法、免疫賦活薬および／または免疫調節剤（例えば、ＩＬ−１、２、４、６、または１２）、免疫細胞増殖因子（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）および抗体（例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（トラスツズマブ）、Ｔ−ＤＭ１、ＡＶＡＳＴＩＮ（ベバシズマブ）、ＥＲＢＩＴＵＸ（セツキシマブ）、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（パニツムマブ）、ＲＩＴＵＸＡＮ（リツキシマブ）、ＢＥＸＸＡＲ（トシツモマブ））が挙げられる。例示的な化学療法剤としては、これだけに限定されないが、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、およびメゲストロール）、ＬＨＲＨアゴニスト（例えば、ゴセレリン（ｇｏｓｃｒｃｌｉｎ）およびロイプロリド）、抗アンドロゲン薬（例えば、フルタミドおよびビカルタミド）、光ダイナミック療法（例えば、ベルテポルフィン（ｖｅｒｔｏｐｏｒｆｉｎ）（ＢＰＤ−ＭＡ）、フタロシアニン、光増感剤Ｐｃ４、およびデメトキシ−ヒポクレリンＡ（２ＢＡ−２−ＤＭＨＡ））、ナイトロジェンマスタード（例えば、シクロホスファミド、イホスファミド、トロホスファミド、クロラムブシル、エストラムスチン、およびメルファラン）、ニトロソウレア（例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ））、アルキルスルホネート（例えば、ブスルファンおよびトレオスルファン）、トリアゼン（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド）、白金含有化合物（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビン）、タキソイド（例えば、パクリタキセル、または、ナノ粒子アルブミン結合型パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ）、ドコサヘキサエン酸が結合したパクリタキセル（ＤＨＡ−パクリタキセル、Ｔａｘｏｐｒｅｘｉｎ）、ポリグルタミン酸が結合したパクリタキセル（ＰＧ−パクリタキセル、パクリタキセルポリグルメクス、ＣＴ−２１０３、ＸＹＯＴＡＸ）、腫瘍により活性化されるプロドラッグ（ＴＡＰ）ＡＮＧ１００５（３分子のパクリタキセルと結合したＡｎｇｉｏｐｅｐ−２）、パクリタキセル−ＥＣ−１（ｅｒｂＢ２認識ペプチドＥＣ−１が結合したパクリタキセル）、およびグルコース−コンジュゲートしたパクリタキセル、例えば、２’−パクリタキセルメチル２−グルコピラノシルスクシネート；ドセタキセル、タキソールなどのパクリタキセル等価物）、エピポドフィリン（例えば、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド、トポテカン、９−アミノカンプトテシン、カンプトイリノテカン、イリノテカン、クリスナトール、マイトマイシンＣ）、代謝拮抗薬、ＤＨＦＲ阻害剤（例えば、メトトレキサート、ジクロロメトトレキセート、トリメトレキサート、エダトレキサート）、ＩＭＰデヒドロゲナーゼ阻害剤（例えば、ミコフェノール酸、チアゾフリン、リバビリン、およびＥＩＣＡＲ）、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤（例えば、ヒドロキシウレアおよびデフェロキサミン）、ウラシル類似体（例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロクスウリジン、ドキシフルリジン、ラルチトレキセド（ｒａｔｉｔｒｅｘｅｄ）、テガフール−ウラシル、カペシタビン）、シトシン類似体（例えば、シタラビン（ａｒａ Ｃ）、シトシンアラビノシド、およびフルダラビン）、プリン類似体（例えば、メルカプトプリンおよびチオグアニン）、ビタミンＤ３類似体（例えば、ＥＢ１０８９、ＣＢ１０９３、およびＫＨ１０６０）、イソプレニル化阻害剤（例えば、ロバスタチン）、ドーパミン作動性神経毒（例えば、１−メチル−４−フェニルピリジニウムイオン）、細胞周期阻害剤（例えば、スタウロスポリン）、アクチノマイシン（例えば、アクチノマイシンＤ、ダクチノマイシン）、ブレオマイシン（例えば、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ペプロマイシン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ペグ化リポソーム性ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン、ミトキサントロン）、ＭＤＲ阻害剤（例えば、ベラパミル）、Ｃａ^２＋ＡＴＰアーゼ阻害剤（例えば、タプシガルジン）、イマチニブ、サリドマイド、レナリドマイド、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、ボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）、セジラニブ（ＲＥＣＥＮＴＩＮ（商標）、ＡＺＤ２１７１）、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（登録商標）、ＢＭＳ−３５４８２５）、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、ＣＧＰ５７１４８Ｂ、ＳＴＩ−５７１）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＴＹＶＥＲＢ（登録商標））、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、セマクサニブ（セマキシニブ、ＳＵ５４１６）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、ＳＵ１１２４８）、トセラニブ（ＰＡＬＬＡＤＩＡ（登録商標））、バンデタニブ（ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＰＴＫ／ＺＫ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、エベロリムス（ＡＦＩＮＩＴＯＲ（登録商標））、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標））、ＥＮＭＤ−２０７６、ＰＣＩ−３２７６５、ＡＣ２２０、乳酸ドビチニブ（ｄｏｖｉｔｉｎｉｂ ｌａｃｔａｔｅ）（ＴＫＩ２５８、ＣＨＩＲ−２５８）、ＢＩＢＷ２９９２（ＴＯＶＯＫ（商標））、ＳＧＸ５２３、ＰＦ−０４２１７９０３、ＰＦ−０２３４１０６６、ＰＦ−２９９８０４、ＢＭＳ−７７７６０７、ＡＢＴ−８６９、ＭＰ４７０、ＢＩＢＦ１１２０（ＶＡＲＧＡＴＥＦ（登録商標））、ＡＰ２４５３４、ＪＮＪ−２６４８３３２７、ＭＧＣＤ２６５、ＤＣＣ−２０３６、ＢＭＳ−６９０１５４、ＣＥＰ−１１９８１、ティボザニブ（ＡＶ−９５１）、ＯＳＩ−９３０、ＭＭ−１２１、ＸＬ−１８４、ＸＬ−６４７、および／またはＸＬ２２８）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ））、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９）、エベロリムス（ＲＡＤ−００１）、リダフォロリムス、ＡＰ２３５７３（Ａｒｉａｄ）、ＡＺＤ８０５５（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＥＺ２３５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＧＴ２２６（Ｎｏｒｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ７６５（Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＰＦ−４６９１５０２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＧＤＣ０９８０（Ｇｅｎｅｔｅｃｈ）、ＳＦ１１２６（Ｓｅｍａｆｏｅ）およびＯＳＩ−０２７（ＯＳＩ））、オブリメルセン、ゲムシタビン、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、シクロホスファミド、ダカルバジン、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂｉｚｉｎｅ）、プレドニゾロン、デキサメタゾン、カンプトテシン（ｃａｍｐａｔｈｅｃｉｎ）、プリカマイシン、アスパラギナーゼ、アミノプテリン、メトプテリン（ｍｅｔｈｏｐｔｅｒｉｎ）、ポルフィロマイシン、メルファラン、レウロシジン（ｌｅｕｒｏｓｉｄｉｎｅ）、レウロシン（ｌｅｕｒｏｓｉｎｅ）、クロラムブシル、トラベクテジン、プロカルバジン、ディスコデルモリド、カルミノマイシン、アミノプテリン、およびヘキサメチルメラミンが挙げられる。

（ＩＩ）自己免疫疾患および／または炎症性疾患の処置
一部の実施形態では、本明細書に記載の糖操作抗体群は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患を処置するために有用である。

抗ＣＤ２０糖操作抗体群を使用した処置
一部の実施形態では、本開示は、それを必要とするヒト被験体において自己免疫疾患または炎症性疾患を処置するための方法であって、被験体に治療有効量の抗ＣＤ２０糖操作抗体群および薬学的に許容される担体を投与するステップを含む方法を特徴とする。

自己免疫疾患または炎症性疾患の例としては、これだけに限定されないが、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ウェゲナー病、炎症性腸疾患、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、重症筋無力症、血管炎、糖尿病、レイノー症候群（Ｒｅｙｎａｕｄ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎、Ｃ型肝炎関連クリオグロブリン血症性血管炎、慢性限局性脳炎（ｃｈｒｏｎｉｃ ｆｏｃａｌ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）、水疱性類天疱瘡、血友病Ａ、膜性増殖性糸球体腎炎（ｍｅｍｂｒａｎｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｇｌｏｍｅｒｕｌｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、成人皮膚筋炎および若年性皮膚筋炎、成人多発性筋炎、慢性蕁麻疹、原発性胆汁性肝硬変、視神経脊髄炎、グレーブス甲状腺異常症、水疱性類天疱瘡、膜性増殖性糸球体腎炎（ｍｅｍｂｒａｎｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｇｌｏｎｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、チャーグ・ストラウス症候群、喘息、乾癬性関節炎、皮膚炎、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎（ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｔｓ）、ぶどう膜炎、湿疹、アテローム性動脈硬化症、白血球接着不全症、若年発症糖尿病、ライター病、ベーチェット病、溶血性貧血、アトピー性皮膚炎、ウェゲナー肉芽腫症、オーメン症候群、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、ＨＩＶおよびヘルペス関連疾患、全身性硬化症、シェーグレン症候群（Ｓｊｏｒｇｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）および糸球体腎炎、皮膚筋炎、ＡＮＣＡ、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠損症、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、固形臓器移植片拒絶反応、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、自己免疫性肝炎、リンパ性間質性肺炎（ＨＩＶ）、閉塞性細気管支炎（非移植）、ギラン・バレー症候群、大型血管炎（ｌａｒｇｅ ｖｅｓｓｅｌ ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、巨細胞（高安）動脈炎、中型血管炎（ｍｅｄｉｕｍ ｖｅｓｓｅｌ ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、川崎病、および結節性多発性動脈炎が挙げられる。ある特定の実施形態では、自己免疫疾患または炎症性疾患は関節リウマチである。

抗ＴＮＦα糖操作抗体群を使用した処置
一部の実施形態では、本開示は、それを必要とするヒト被験体において自己免疫疾患または炎症性疾患を処置するための方法であって、被験体に治療有効量の抗ＴＮＦα糖操作抗体群および薬学的に許容される担体を投与するステップを含む方法を特徴とする。

（ＩＩＩ）感染症の処置
一部の実施形態では、本明細書に記載の糖操作抗体群は、細菌またはウイルス感染によって引き起こされる感染症を処置するために有用である。

感染症の例としては、これだけに限定されないが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エボラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、エプスタイン・バーウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ハンターンウイルス、インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ−８）、ヒトパピローマウイルス、またはパルボウイルス、ＳＡＲＳウイルス、麻疹ウイルス；流行性耳下腺炎ウイルス；風疹ウイルス；狂犬病ウイルス；パピローマウイルス；ワクシニアウイルス；水痘帯状疱疹ウイルス；痘瘡ウイルス；ポリオウイルス；ライノウイルス；呼吸器合胞体ウイルス；Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ；Ｐ．ｖｉｖａｘ；Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ；Ｐ．ｏｖａｌｅ；Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ；Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ；Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ；Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ；Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ；Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ；Ｃｈｌａｙｍｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ；Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ；Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ；Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ；Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ；毒性Ｅ．ｃｏｌｉ；ヒト内在性レトロウイルス；他の微生物病原体；他の微生物毒素、アレルゲン、腫瘍抗原、自己抗原および同種異系抗原、化学物質または毒素が挙げられる。ある特定の実施形態では、感染症は、ＨＩＶ、ＨＣＶ、またはこれらの組み合わせによって引き起こされる。

ＦＩ６糖操作抗体群を使用した処置
一部の実施形態では、本開示は、それを必要とするヒト被験体においてウイルス性疾患を処置するための方法であって、被験体に治療有効量のＦＩ６糖操作抗体群および薬学的に許容される担体を投与するステップを含む方法を特徴とする。

ウイルス性疾患は、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、ＲＳＶ（呼吸器合胞体ウイルス）、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）、エボラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ハンターンウイルス、インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ−８）、ヒトパピローマウイルス、またはパルボウイルスによって引き起こされ得る。別々の特定の実施形態では、ウイルス性疾患は、ＨＩＶによって、またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる。

一部の実施形態では、本開示は、それを必要とするヒト被験体においてウイルス性疾患を処置するための方法であって、（ａ）被験体にＮＫ細胞の抑制性受容体を遮断する第１の化合物を投与するステップと、（ｂ）被験体に治療有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与するステップとを含む方法を特徴とする。

「処置すること」または「処置」または「緩和」とは、治療的処置および予防または防止措置の両方を指し、ここで、目的は、標的とした病的状態または障害を防止するまたは減速させる（減らす）ことである。処置を必要とするものとしては、すでに障害を有するものならびに障害を有しやすいものまたは障害が防止されるべきものが挙げられる。被験体または哺乳動物は、治療量の抗体を本発明の方法に従って受けた後、患者が以下の１つまたは複数のうちの観察可能かつ／または測定可能な低下または不在を示した場合、感染に対して成功裏に「処置」されている：感染細胞の数の低下または感染細胞の不在；感染した総細胞のパーセントの低下；ならびに／または特定の感染に付随する症状のうちの１つまたは複数のいくらかの程度までの軽減；罹患率および死亡率の低下、ならびに生活の質の問題の改善。疾患における成功裏の処置および改善を評価するための上記のパラメータは医師によく知られている常套的な手順によって容易に測定可能である。

「治療有効量」という用語は、被験体または哺乳動物における疾患または障害を「処置する」ために有効な抗体または薬物の量を指す。前述の「処置すること」の定義を参照されたい。

１種または複数種の別の治療剤「と組み合わせた」投与は、同時（並行）投与および任意の順序での連続した投与を含む。

「担体」とは、本明細書で使用される場合、使用される投与量および濃度でそれに暴露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理的に許容される担体は、水性ｐＨ緩衝溶液である。生理的に許容される担体の例としては、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含めた抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。

以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含まれる。以下の実施例に開示されている技法は、本発明者により、本発明の実施においてよく機能することが発見された技法であり、したがって、それを実施するための好ましい方式を構成するとみなすことができることが当業者には理解されるべきである。しかし、当業者は、本開示に照らして、開示されている特定の実施形態に多くの変更を行うことができ、それでもなお、本発明の主旨および範囲から逸脱することなく同様または類似の結果が得られることを理解するべきである。

例示的な一般手順

方法Ａ：チオ−グリカンドナーによるグリコシル化
グリコシル化のために、モレキュラーシーブＭＳ−４Åを活性化するために真空系に接続し、１時間加熱した。活性化したモレキュラーシーブを室温まで冷却した後、ドナー（１位置のグリコシル化について１．５〜２．０当量）およびアクセプター（１．０当量）を含有するフラスコに添加した。混合物にジクロロメタンを添加し、次いで、溶液を室温で３時間撹拌した。−７８℃で溶液にＮ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ、１．７〜２．２当量）およびトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（ＴＭＳＯＴｆ、０．１当量）を添加し、次いで、−２０℃で溶液を撹拌した。反応を、裏がガラスのシリカゲルプレート（Ｍｅｒｃｋ ＤＣ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０Ｆ_２５４）で行った薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析によってモニターし、ＵＶ光（２５４ｎｍ）および酸性モリブデン酸アンモニウムセリウムによって可視化した。アクセプターが完全に消費された後、飽和ＮａＨＣＯ_{３（ａｑ）}および２０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３を用いて反応をクエンチし、次いで、混合物を、セライトのパッドを通して濾過した。２部分のジクロロメタンを用いて水層を抽出した後、合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出系としてトルエン／酢酸エチル）によって精製して、産物を生じさせた（収率をスキーム上に示した）。

方法Ｂ：フッ化物−グリカンドナーによるグリコシル化
乾燥トルエン中トリフルオロメタンスルホン酸銀（５当量）、ビス（シクロペンタジエニル）ハフニウムジクロリド（３．５当量）および４Åの活性化したモレキュラーシーブの混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、反応混合物を−５０℃まで冷却し、トルエン中アクセプター（１．０当量）およびドナー（１．２〜１．５当量）の溶液を添加した。混合物を−１０℃で２〜８時間撹拌した。ＴＬＣによりアクセプターの完全な消費が示された後、Ｅｔ_３Ｎを用いて反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃで希釈し、セライトを通して濾過した。濾液を水性ＮａＨＣＯ_３およびブライン溶液で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出系としてトルエン／酢酸エチル）によって精製して産物を生じさせた（収率をスキーム上に示した）。

方法Ｃ：Ｏ−アセチルの脱保護
ＮａＯＭｅ（０．２５当量）をＴＨＦ／メタノール（２／３）中出発材料（１．０当量）の溶液に添加した。反応を室温で撹拌し、ＴＬＣ分析によってモニターした。アセチル基を完全に脱保護した後、溶液をＩＲ−１２０によって中和し、濾過し、濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出系としてヘキサン／酢酸エチル）によって精製して産物を生じさせた（収率をスキーム上に示した）。

方法Ｄ：Ｏ−Ｔｒｏｃの脱保護
Ｚｎ粉末（２０当量）および酢酸（０．２当量）をＴＨＦ中出発材料（１．０当量）の溶液に添加した。反応を室温で撹拌し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析によってモニターした。Ｔｒｏｃ基を完全に脱保護した後、溶液を濾過し、濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出系としてヘキサン／酢酸エチル）によって精製して産物を生じさせた（収率をスキーム上に示した）。

方法Ｅ：ベンジリデンの脱保護
ｐ−トルエンスルホン酸（ｐＴＳＡ、１．５当量）をＡＣＮ／ＭｅＯＨ（２／１）中出発材料（１．０当量）の溶液に添加した。反応を室温で撹拌し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析によってモニターした。ベンジリデン基を完全に除去した後、トリメチルアミンによって反応をクエンチし、次いで、濃縮した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出系としてヘキサン／酢酸エチル）によって精製して産物を生じさせた（収率をスキーム上に示した）。

方法Ｆ：全体的な脱保護
保護されたオリゴ糖（５０ｍｍｏｌ）とエチレンジアミン：ｎＢｕＯＨ（１／４）１０ｍＬの混合物を９０℃で一晩撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、粗製物をＡｃ_２Ｏ／ピリジン（１／２）１０ｍＬと一晩反応させた。高真空を使用して溶媒を除去し、産物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出系としてアセトン／トルエン）によって精製した。産物を、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中ナトリウムメトキシドを使用して一晩にわたって脱アセチル化した。ＩＲ−１２０を使用することによって反応を中和し、次いで、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出系としてアセトン／トルエン）によって精製した。産物をＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ：ＨＣＯＯＨ（６／３／１）１０ｍＬに溶解させ、Ｐｄ（ＯＨ）_２（５０重量％）を添加し、反応物を一晩にわたって水素化した。反応混合物を、セライトを通して濾過し、減圧下で濃縮した。残留物を、溶離液として水を使用してＧ−１５ゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。産物を凍結乾燥して白色粉末を生じさせた（収率をスキーム上に示した）。

方法Ｇ：酵素的（２，６）−シアリル化
出発材料（５μｍｏｌ）、ＣＴＰ（１μｍｏｌ）、Ｎｅｕ５Ａｃ（９．５μｍｏｌ）、ＰＥＰ（１０μｍｏｌ）、α−２，６シアリルトランスフェラーゼ（２００μＬ、推定濃度２ｍｇ／Ｌ）、ＣＭＫ（８０単位）、ＰＫ（４０単位）、およびＰＰＡ（４０単位）を、１％ＢＳＡ（１３０μＬ）を含有する５０μｍｏｌのカコジル酸ナトリウム（ｐＨ７．４）に溶解させた。反応物を３７℃で穏やかに撹拌しながら２日間インキュベートした。Ｇ−１５ゲルクロマトグラフィー（溶離液Ｈ_２Ｏ）を使用することによって産物を精製して、凍結乾燥後に所望の産物を白色固体としてもたらした。

（実施例１）
ＩｇＧ１抗体の糖鎖工学
この試験の目的は、抗がん機能および抗炎症機能の両方に関して活性が最適化された均一な抗体を調製することである。したがって、市販のリツキシマブＩｇＧ１は、がんおよび自己免疫疾患の両方の処置に使用されているので、これをモデルとして選択する。糖タンパク質リモデリングの戦略を使用してまずＦｃ領域にモノ−ＧｌｃＮＡｃを有する均一な抗体を得、次いで、純粋な合成グリカンをモノ−ＧｌｃＮＡｃ抗体と連結して活性アッセイのための均一な抗体を得た（図１ａ）。１日以内にワンポットで均一なモノ−ＧｌｃＮＡｃグリコシル化抗体を調製するために、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のフコシダーゼＢｆＦｕｃＨを、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅ由来のＥｎｄｏＳ単独またはＥｎｄｏ Ｆ１／Ｆ３またはＥｎｄｏ Ｆ１／Ｓの混合物のいずれかのエンドグリコシダーゼと組み合わせて使用した。このフコシダーゼは、２０日のインキュベーションが必要なウシ腎臓に由来するフコシダーゼ（２３）よりも効率的であった。３７℃で１週間のインキュベーションにより、リツキシマブ構造の劣化が引き起こされ、その抗原に対する結合親和性が約１５％失われることが見いだされている（補足情報）。次いで、ＥｎｄｏＳ変異体（２３）を使用することにより、一連の合成グリカンオキサゾリンをモノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブに成功裏に移行させて、その後の結合アッセイおよび機能アッセイのための、Ｆｃ領域に異なるグリカンを有する均一なリツキシマブを形成した。

（実施例２）
２，３−シアリル化リツキシマブと２，６−シアリル化リツキシマブの間の特性
Ｒａｖｅｔｃｈのグループにより、２，６−シアリル化ＩＶＩＧが、２，３−シアリル化ＩＶＩＧと比較して、抗炎症活性を担う主要な構造であったことが報告されたが、種々のＦｃγＲとの詳細な相互作用は試験されていない（１１）。さらに、Ｒａｊｕの試験から、抗体における高レベルのシアリル化により、ＡＤＣＣが劣化することが示されたが（１２）、２，６−シアリル化抗体および２，３−シアリル化抗体の両方が細胞傷害性に対して同様の効果を有するかどうかは明らかにならなかった。これらのシアリル化結合の差異を試験するために、本発明者らは、モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブから２，６−シアリル化抗体および２，３−シアリル化抗体を調製した（２，６ＮＳＣＴ−リツキシマブおよび２，３ＮＳＣＴ−リツキシマブと名付けた）。非修飾リツキシマブと比較して、モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブでは、ＦｃγＲＩＩｂに対する結合親和性以外は、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩおよびＣ１ｑに対する結合親和性の完全な喪失または実質的な低下が示された。しかし、グリカンを伸長させて２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブの構造を形成した後には、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、および特にＦｃγＲＩＩＩａに対するその結合親和性が増大したが、Ｃ１ｑに対しては有意な変化は観察されなかった（表１１Ａ）。それとは異なり、２，３−ＮＳＣＴ−リツキシマブについては、ＦｃγＲＩＩＩａとの相互作用のみが部分的に増大したが、ＦｃγＲＩＩｂおよびＦｃγＲＩＩａに対するその認識は変化しなかったか、さらには低下した（表１１Ａ）。Ｃ１ｑのリツキシマブおよび２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブに対する同等の結合親和性に対応して、ＦＡＣＳの結果から、どちらの抗体もＣＤＣに関して並行した傾向を示すことが示された（表１１Ｂ）。しかし、最大半量の有効濃度（ＥＣ５０）の値がより高いことにより示される通り、２，３−ＮＳＣＴ−リツキシマブの細胞傷害性は２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブの細胞傷害性よりも低かった（表１１Ｂ）。

抗体に関連する細胞傷害性の考察においては、ＣＤＣに加えてＡＤＣＣも重要な問題である。ＩｇＧ１の脱フコシル化により、無フコシル化Ｆｃ−グリカンとＦｃγＲＩＩＩａとの間の相互作用が増大することによってＡＤＣＣ効果が有効に生じることが報告された（５、３３）。本発明者らは、３つの異なるＣＦＳＥ標識Ｂリンパ腫細胞、ラジ、ラモスおよびＳＫＷ６．４を使用したフローサイトメトリーにおいて、無処理のリツキシマブ、および処理したｍＡｂである２，３−ＮＳＣＴ−および２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブによって誘導された、ＰＢＭＣ媒介性ＡＤＣＣアッセイにおけるＰＩ染色死細胞をモニターした。実際に、市販のリツキシマブと比較して、２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブおよび２，３−ＮＳＣＴ−リツキシマブのどちらでも、ＦｃγＲＩＩＩａとのより強力な相互作用およびＡＤＣＣにおけるより小さなＥＣ５０が示された（表１１Ａおよび１１Ｃ）。興味深いことに、２，６−シアリル結合により、ＦｃγＲＩＩＩａおよびＡＤＣＣに対する優れた親和性および効果が示され、一方２，３−結合は、より弱い活性を有した。同じ抗体のＡＤＣＣ結果は、ラジ、ラモスおよびＳＫＷ６．４を含めた異なる標的細胞の間で同等である（表１１Ｃ）。

（実施例３）
種々の無フコシル化リツキシマブの結合親和性およびＢ細胞枯渇活性
細胞傷害性が２，６−シアリル化の影響を受けたかどうかを試験するために、本発明者らは、バイセクト型修飾、３’アームにおけるモノ−シアリル化、トリマンノースコア、末端ＧｌｃＮＡｃ終端（ｅｎｄｉｎｇ）、ガラクトース尾部のグリカンおよび他の非対称グリカンを含有するものを含めた、他の均一な無フコシル化リツキシマブを調製した。表面プラズマ共鳴分析では、修飾された無フコシル化リツキシマブのいずれも、ＦｃγＲＩＩＩａに対して２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブよりも強力な結合親和性を示さなかったが、異なるグリコフォームの間でいくらかのＫｄ変動が観察された（表１２）。次いで、本発明者らは、フローサイトメトリーでＣＤ１９^＋ＣＤ３⁻Ｂ細胞を分析することにより、ヒトＢ細胞のＰＢＭＣ媒介性枯渇における工学的に操作した抗体の細胞傷害性誘導試験を実施した。ＳＰＲデータに対応して、２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブのＢ細胞枯渇の有効性は、抗体濃度が１０ｎｇ／ｍＬまたはそれ超である場合に極めて優れていた（図２Ａ）。さらに、２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブの活性はまた、非修飾リツキシマブよりも有意に高く、１０ドナーの全血Ｂ細胞枯渇試験におけるｐ値は０．００１６であり、一方、モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブにより最低の活性が示された（図２Ｂ）。これらのデータにより、免疫グロブリンＧ１における２，３−シアリル化および２，６−シアリル化は、免疫グロブリンＧ１の機能に対して異なる活性を有し、Ｂ細胞枯渇のためにはリツキシマブに対する２，６−ＮＳＣＴが有益であることが示された。そのような結果は、以前の試験では、試料の多くがＣＨＯ細胞に由来するものであり、この細胞は、２，３−シアリル化を含有するが２，６結合が欠乏した種々のグリカンを有するタンパク質を発現するので、ほとんど検証されていない（３４）。

（実施例４）
抵抗性細胞株に対する２，６−ＮＳＣＴリツキシマブのＡＤＣＣ有効性
多くの医薬品と同じく、リツキシマブには、高投与量および長期間の薬物適用に起因して抵抗性が生じている（３５、３６）。２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブが薬物抵抗性細胞に対して有効であるかどうかを理解するために、本発明者らは、ラモスおよびラジのリツキシマブ抵抗性細胞株を調製して、異なる濃度の２，６−ＮＳＣＴ修飾リツキシマブの下でのそれらのＰＢＭＣ媒介性ＡＤＣＣを評価した（図２Ｃ〜Ｅ）。長期間にわたってリツキシマブと共培養した後、ラモスＢ細胞およびラジＢ細胞の両方が表面上でのＣＤ２０発現が少ないものに進化した（図２Ｃ）。結果として、非修飾リツキシマブの抵抗性株に対する活性が劇的に失われたことは驚くことではない（図２Ｄおよび２Ｅ）。しかし、２，６−ＮＳＣＴリツキシマブによって示されたＡＤＣＣ活性は非抵抗性細胞と抵抗性細胞のどちらに対しても非常に優れたものであった。

（実施例５）
種々の無フコシル化ハーセプチンのＦｃγＲＩＩＩａ結合親和性
２，６−ＮＳＣＴグリカン修飾により引き出される印象的な細胞傷害性を他の抗体に適用することができるかどうかをさらに評価するために、別の抗体、ハーセプチンを異なるグリカン構造を用いて修飾し、評価した。

糖鎖工学により操作されたハーセプチンとＦｃγＲＩＩＩａの動力学的結合分析が表４に列挙されている。ＥＬＩＳＡ分析における２，３−ＮＳＣＴ−リツキシマブと２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブの親和性の差異と同様に、２，６−ＮＳＣＴ−ハーセプチンではＦｃγＲＩＩＩａとのより強力な相互作用が示されたが、２，３−ＮＳＣＴ−ハーセプチンでは有害な影響が観察された。その一方で、Ｆｃ無フコシル化の効果は、２，６−結合または２，３−結合のいずれを用いたシアリル化の効果よりも有意であった。さらに、全ての糖鎖工学により操作されたハーセプチンの対応するＫｄについては、リツキシマブの場合と同様の傾向が示された（表１３）。Ｇ１、Ｇ２、および２，６−ＮＳＣＴなどの抗体のＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性は、他の同様のＧ３、Ｇ４、Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７、Ｇ９および２，３−ＮＳＣＴと比較して９倍超増大した。特別に、リツキシマブおよびハーセプチンのどちらの場合でも、無フコシル化された、糖鎖工学により操作されたＧ８では、ＡＤＣＣ活性に対する脱フコシル化による利点がほとんど失われた。バイセクト型グリカンを有する抗体であるＧ９では、リツキシマブおよびハーセプチンのどちらにおいても、非バイセクト型類似体であるＧ４と比較した場合に、ＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性のわずかだが有意でない増大が示された。全体として、２，６−ＮＳＣＴ−ハーセプチンはまた、実際に、ＳＰＲ分析において、これらの無フコシル化類似体の中でも非常に優れたＦｃγＲＩＩＩａ結合親和性を示した。

ハーセプチンのＦｃγＲＩＩＩａ媒介性ＡＤＣＣに対するＦｃグリコシル化の効果をさらに理解するために、本発明者らは、Ｖ１５８ ＦｃγＲＩＩＩａを工学的に作製したジャーカットエフェクター細胞の活性化Ｔ細胞のシグナル伝達核因子（ＮＦＡＴ）経路を利用し、ＳＫＢＲ３を標的細胞とし、Ｅ／Ｔ比を６としたＡＤＣＣレポーターバイオアッセイを行った。動力学的データと一致して、無フコシル化Ｇ８ハーセプチンのＥＣ５０により、ＦｃγＲＩＩＩａ活性の喪失が示され、フコシル化ハーセプチンと同様のＡＤＣＣ効果が示された（図３Ａ）。興味深いことに、以前の試験から、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩのレベルの上昇によって抗体上のバイセクト型グリカンがより多くなることが、より強力なＡＤＣＣと相関することが示された（３７）。それどころか、本発明者らの試験から、ハーセプチンおよびリツキシマブのバイセクト型抗体および非バイセクト型抗体であるＧ９とＧ４の間で有意なＫｄの差異は観察されなかったことが示され、ハーセプチングリコフォームのＥＣ５０値により、ＦｃγＲＩＩＩａ細胞媒介性アッセイにおいて同様の細胞傷害性プロファイルが示された（図３Ｂ）。したがって、本発明者らは、バイセクト型ＩｇＧ１が、ＦｃγＲＩＩＩａが優位なＡＤＣＣではより良好には働かないと結論づけた。

さらに、非シアリル化Ｇ１−ハーセプチンと比較して、２，３−シアリル化ハーセプチンのＡＤＣＣは明らかに低下したが、２，６−ＮＳＣＴハーセプチンの活性はなお維持され（図３Ｃ）、これにより、シアリル化媒介性ＡＤＣＣの低下が、２，３−結合によって引き起こされることが示される。抗体薬物適用における２，６−ＮＳＣＴの潜在的な有用性を探究するために、本発明者らは、各プレートにおいてＥＣ５０が最低である、糖鎖工学により操作された無フコシル化ハーセプチン試料をさらなる活性試験のために選択し（図３Ｄ）、全ての試料が良好な細胞傷害性を示し、低濃度でがん細胞の半分を死滅させることができることが見いだされた。

（実施例６）
抗ウイルス抗体における２，６−ＮＳＣＴグリカン修飾のＡＤＣＣ効果
Ｆｃ修飾における２，６−ＮＳＣＴグリカンの利用を探究するために、本発明者らは、抗体の均一の２，６−ＮＳＣＴグリカン修飾により、ウイルス感染細胞を除去するために抗ウイルス抗体のＡＤＣＣ効果を増大させることができるかどうかを評価した。本発明者らは、インフルエンザの種々の亜型の赤血球凝集素（ＨＡ）のステム領域に結合することが公知であり、その中和活性がＡＤＣＣに関連づけられている（３８）広範囲に中和する抗インフルエンザ抗体、ＦＩ６を調製した。ＦＩ６抗体のＦｃグリカンを修飾して均一な２，６−ＮＳＣＴグリカンにし、細胞表面上にＨＡを発現させてインフルエンザ感染細胞を模倣したヒトＨＥＫ２９３Ｔ細胞と混合し、次いで、ＡＤＣＣ効果を標的細胞におけるＰＢＭＣ媒介性死滅およびエフェクター細胞の活性化Ｔ細胞のＡＤＣＣシグナル伝達核因子（ＮＦＡＴ）経路の活性化の両方によって測定した。細胞傷害性の結果から、実際に、均一な２，６−ＮＳＣＴグリカン修飾ＦＩ６（ＦＩ６ｍ）により示されるＡＤＣＣ活性が通常の非修飾ＦＩ６抗体よりも有意に高い（２〜３倍の増大）ことが示された（図４Ａ）。さらに、エフェクターＮＫ細胞のＡＤＣＣシグナル伝達ＮＦＡＴ経路の活性化も、均一なＦＩ６ｍを使用した場合、２倍の増強が観察された（図４Ｂ）。本発明者らの観察により、抗ウイルス抗体の均一な２，６−ＮＳＣＴグリカン修飾が、ウイルス感染細胞に対するＡＤＣＣのエフェクター機能を増強するための一般戦略になり得ることが示された。

次に、本発明者らは、ＦＩ６の均一な２，６−ＮＳＣＴ修飾によるｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＡＤＣＣ増強を、致死用量のインフルエンザＨ１Ｎ１を感染させたマウスモデルにおける保護に転換することができるかどうかを試験した。ＦＩ６モノクローナルの受動移行により、Ｈ１Ｎ１感染から保護されることが以前に示されている（３９）。実際に、均一な２，６−ＮＳＣＴグリカン修飾を有すると、マウスをＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９ Ｈ１Ｎ１ウイルスで攻撃した際にＦＩ６ｍによりなされる保護は有意により良好なものになる（図４Ｃ）。生存率は、ＦＩ６ｍでは６６％であったのに対して複合型グリカンの混合物を有する通常のＦＩ６では１１％であった。結論として、本発明者らにより、インフルエンザウイルス感染マウスモデルにおいて、抗体の均一な２，６−ＮＳＣＴグリカン修飾によるｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＡＤＣＣ増強は、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるウイルス感染からの保護と一致することが実証された。

表１１．市販のリツキシマブおよび糖鎖工学により操作された２，３−ＮＳＣＴ−リツキシマブおよび２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブのＦｃγＲ結合特性および機能アッセイ。

（Ａ）モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブ、２，３−ＮＳＣＴ−リツキシマブおよび２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブのＦｃγＲおよびＣ１ｑに対する結合実験をＥＬＩＳＡで実施した。脱グリコシルにより、モノ−ＧｌｃＮＡｃリツキシマブのＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩおよびＣ１ｑに対する結合親和性が失われたが、２，３−シアリル化抗体および２，６−シアリル化抗体ではそれらの親和性が回復し、２，６−シアリル化リツキシマブでは、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂおよびＦｃγＲＩＩＩａとの相互作用の増強が示された。（Ｂ）ＦＡＣＳで実施したＣＤＣアッセイ。２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブにより、無処理の抗体と同様のＣＤＣ活性が示されたが、２，３−ＮＳＣＴ−リツキシマブの結果からは、ＣＤＣ有効性の低下が示され、ＥＣ５０値はより高かった。（Ｃ）新鮮なＰＢＭＣ媒介性ＡＤＣＣアッセイ。３つの異なるＢ細胞、ラジ、ラモスおよびＳＫＷ６．４を用いてアッセイ実験を行った。結果から、ＥＣ５０値により測定された活性が、非修飾リツキシマブから糖鎖工学により操作された無フコシル化２，３−ＮＳＣＴ−リツキシマブまで有意に増大し、２，６−ＮＳＣＴ−リツキシマブの活性が最も高いことが示された。

表１２．表面プラズマ共鳴分析により測定された、糖鎖工学により操作されたリツキシマブＩｇＧ１のＦｃγＲＩＩＩａに対する結合親和性。

分析した抗体をヒトＦａｂ捕捉キットによって捕捉し、単一サイクルの動力学的方法を用いて検出した。

表１３．表面プラズマ共鳴分析を使用した、糖鎖工学により操作されたハーセプチンＩｇＧ１のＦｃγＲＩＩＩａに対する結合親和性。

分析した抗体をヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）_２のＦ（ａｂ’）_２断片によって捕捉し、二重照合（ｄｏｕｂｌｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｉｎｇ）を用いて単一サイクルの動力学的方法によって検出した。示されているデータは、２つの反復の代表である。

Claims (31)

1. モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片の均一な集団を含む組成物であって、各糖操作抗体または抗原結合性断片分子は、Ｆｃ領域上に単一の一様なＮ−グリカンを含み、前記Ｎ−グリカンは、Ｓｉａ_２（α２−６）Ｇａｌ_２ＧｌｃＮＡｃ_２Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２の構造を有し、前記Ｎ−グリカンは、エフェクター細胞機能を改善するように最適化されている、組成物。
2. 前記Ｆｃ領域上の前記Ｎ−グリカンが、対応するモノクローナル抗体の野生型Ｆｃ領域に比べてＦｃγＲＩＩＡまたはＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合親和性の増大を示す、請求項１に記載の組成物。
3. 前記モノクローナル抗体が、対応する野生型モノクローナル抗体に比べて改善された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す、請求項１に記載の組成物。
4. 前記モノクローナル抗体がヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から選択される、請求項１に記載の組成物。
5. 前記モノクローナル抗体が、少なくともがん、自己免疫疾患もしくは炎症性疾患、または感染症に関連する抗原に結合する、請求項１に記載の組成物。
6. 前記モノクローナル抗体が、がんに関連する抗原に結合する、請求項１に記載の組成物。
7. 前記抗原が、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ３０、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、Ａ３３、ＣＤ５、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１０３、ＣＴＬＡ４、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＶＥＧＦ受容体、ＴＮＦ−α受容体、ＴＮＦ−β受容体、またはＴＮＦ−γ受容体、ｇｐＡ３３、ムチン、ＴＡＧ−７２、ＣＡＩＸ、ＰＳＭＡ、葉酸結合性タンパク質、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰおよびテネイシンからなる群より選択される、請求項６に記載の組成物。
8. 前記モノクローナル抗体が、自己免疫疾患または炎症性疾患に関連する抗原に結合する、請求項１に記載の組成物。
9. 前記抗原が、インターロイキン５およびその受容体、腫瘍壊死因子およびその受容体からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
10. 前記モノクローナル抗体が、ウイルス感染細胞において発現される抗原に結合する、請求項１に記載の組成物。
11. 前記抗原が、ｇｐ１２０、ＣＸＣＲ４およびベロ毒素からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
12. ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて作製される、請求項１に記載の組成物。
13. 請求項１に記載の組成物と薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
14. 抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増強するための方法であって、それを必要とする被験体に、ある量の請求項１に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
15. 疾患、障害、または感染に付随する１つまたは複数の症状を防止する、処置する、または好転させるための方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の請求項１３に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
16. 前記疾患、前記障害、または前記感染が、がん、自己免疫障害、炎症性障害または伝染性感染症からなる群より選択される、請求項１５に記載の方法。
17. 前記がんが、脳がん、肺がん、乳がん、口腔がん、食道がん、胃がん、肝がん、胆管がん、膵がん、結腸がん、腎がん、子宮頸部がん、卵巣がんおよび前立腺がんからなる群より選択され、一部の実施形態では、前記がんは、脳がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、結腸がん、または膵がんである、請求項１６に記載の方法。
18. 前記がんが、Ｂ細胞リンパ腫、ＮＨＬ、前駆Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫および成熟Ｂ細胞新生物、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞性前リンパ性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、低悪性度、中悪性度および高悪性度（ＦＬ）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁層Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴ型辺縁層Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁層Ｂ細胞リンパ腫、脾臓型辺縁層Ｂ細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、および未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）からなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
19. 前記自己免疫疾患または前記炎症性疾患が、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、潰瘍性大腸炎、ウェゲナー病、炎症性腸疾患、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、重症筋無力症、血管炎、糖尿病、レイノー症候群、シェーグレン症候群および糸球体腎炎からなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
20. 前記自己免疫疾患または前記炎症性疾患が関節リウマチである、請求項１９に記載の方法。
21. 前記感染症が、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エボラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、エプスタイン・バーウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ハンターンウイルス、インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ−８）、ヒトパピローマウイルス、またはパルボウイルス、ＳＡＲＳウイルス、麻疹ウイルス；流行性耳下腺炎ウイルス；風疹ウイルス；狂犬病ウイルス；パピローマウイルス；ワクシニアウイルス；水痘帯状疱疹ウイルス；痘瘡ウイルス；ポリオウイルス；ライノウイルス；呼吸器合胞体ウイルス；Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ；Ｐ．ｖｉｖａｘ；Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ；Ｐ．ｏｖａｌｅ；Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ；Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ；Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ；Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ；Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ；Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ；Ｃｈｌａｙｍｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ；Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ；Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ；Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ；Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ；毒性Ｅ．ｃｏｌｉ；ヒト内在性レトロウイルス；他の微生物病原体；他の微生物毒素、アレルゲン、腫瘍抗原、自己抗原および同種異系抗原、化学物質または毒素などのヒト病原体によって引き起こされる、請求項１６に記載の方法。
22. 前記感染症が、ＨＩＶ、ＨＣＶ、またはこれらの組み合わせによって引き起こされる、請求項２１に記載の方法。
23. 前記疾患、前記障害、または前記感染に付随する１つまたは複数の症状を防止する、処置する、または好転させるために、ＦｃγＲによって媒介されるエフェクター細胞機能の有効性の増強が所望される、請求項１５に記載の方法。
24. 前記疾患、前記障害、または前記感染に付随する１つまたは複数の症状を防止する、処置する、または好転させるために、ＡＤＣＣ増強が所望される、請求項１５に記載の方法。
25. 前記医薬組成物を、単独で、または、第２の抗体、化学療法剤および免疫抑制剤からなる群より選択される第２の治療剤と併せて投与する、請求項１５に記載の方法。
26. ウイルス性疾患の処置を必要とするヒト被験体においてウイルス性疾患を処置するための方法であって、（ａ）前記被験体にＮＫ細胞の抑制性受容体を遮断する第１の化合物を投与するステップと、（ｂ）前記被験体に治療有効量の請求項１３に記載の医薬組成物を投与するステップとを含む、方法。
27. 前記ウイルス性疾患が、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、ＲＳＶ（呼吸器合胞体ウイルス）、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）、エボラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ハンターンウイルス、インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ−８）、ヒトパピローマウイルス、またはパルボウイルスによって引き起こされ、別々の特定の実施形態では、前記ウイルス性疾患は、ＨＩＶまたはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる、請求項２６に記載の方法。
28. 前記モノクローナル抗体が、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））の軽鎖配列および重鎖配列を含む、請求項１に記載の組成物。
29. 前記モノクローナル抗体が、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））の軽鎖配列および重鎖配列を含む、請求項１に記載の組成物。
30. 前記モノクローナル抗体が、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）の軽鎖配列および重鎖配列を含む、請求項１に記載の組成物。
31. 前記モノクローナル抗体がＦ１６モノクローナル抗体である、請求項１に記載の組成物。