Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

CN107074945A - 增进抗体功效的通用糖型的组合物及方法 - Google Patents

增进抗体功效的通用糖型的组合物及方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107074945A
CN107074945A CN201580027960.XA CN201580027960A CN107074945A CN 107074945 A CN107074945 A CN 107074945A CN 201580027960 A CN201580027960 A CN 201580027960A CN 107074945 A CN107074945 A CN 107074945A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
virus
cell
disease
cancer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201580027960.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN107074945B (zh
Inventor
翁启惠
吴宗益
马彻
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Academia Sinica
Original Assignee
Academia Sinica
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Academia Sinica filed Critical Academia Sinica
Publication of CN107074945A publication Critical patent/CN107074945A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107074945B publication Critical patent/CN107074945B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/42Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06Antipsoriatics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00Drugs for disorders of the nervous system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02Ophthalmic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18Antivirals for RNA viruses for HIV
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/20Antivirals for DNA viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/20Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • A61P35/02Antineoplastic agents specific for leukemia
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1018Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241Tumor Necrosis Factors
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/24Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72Increased effector function due to an Fc-modification
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y302/00Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y302/00Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01051Alpha-L-fucosidase (3.2.1.51)
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurology (AREA)

Abstract

本发明涉及增进抗体功效的通用糖型的组合物及方法。本发明揭示关于糖蛋白,尤其单株抗体,其包括糖改造Fc区,其中该Fc区包括具有Sia2(α2‑6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2的结构的优化N‑聚糖。相对于包括野生型Fc区的相当单株抗体,所述糖改造Fc区以较大亲和力结合FcγRIIA或FcγRIIIA。本发明的单株抗体尤其可用于预防、治疗或改善期望由FcγR调介的效应细胞功能(例如ADCC)的功效增进的疾病、病症或感染(例如癌症、自体免疫疾病、传染性疾病)有关的一或多种症状,且可用于增进藉由ADCC调介效应的治疗抗体的治疗功效。

Description

增进抗体功效的通用糖型的组合物及方法
相关申请案
本发明主张以下优先权:美国临时申请案美国申请序号(USSN)62/003,136,申请于2014年5月27日、USSN 62/003,104,申请于2014年5月27日、USSN 62/003,908,申请于2014年5月28日、USSN 62/020,199,申请于2014年7月2日及USSN 62/110,338,申请于2015年1月30日。其内容各自以全文引用方式并入本文中。
背景技术
基于抗体的疗法具有已证实记录的抵抗许多疾病(包含发炎性病症、癌症、传染性疾病及实体器官移植排斥)的功效。当前,在美国、欧盟及若干其他国家,超过40种治疗性单株抗体(mAb)已批准用于临床应用中。大部分这些抗体用于癌症及免疫疾病的疗法中。具有抗肿瘤活性的治疗抗体的实例包含抗CD20、抗Her2、抗EGFR、抗CD40、抗CTLA-4及抗PD-1抗体。
大部分治疗抗体是单株抗体且通过杂交瘤技术制得,其中纳入转基因人类化小鼠来表达鼠类/人类嵌合或人类化抗体以避免源自物种差异的不期望免疫学反应。最近,全人类抗体的研发已变为主要趋势且其印象深刻的进展受益于噬菌体展示抗体文库或单一B细胞的利用。
类似于许多其他哺乳动物蛋白质,抗体发生异质糖基化,且Fc区中的糖基化已成为高效且安全的治疗性单株抗体的研发中的重要问题,此乃因聚糖可经由与Fc受体的相互作用而显着影响抗体活性。因此,需要研发具有充分定义的Fc-聚糖以理解这些相互作用且改良医药的安全性及功效的均质单株抗体。为此,已报导,去除核心岩藻糖残基将增进IgG的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性,此乃因Fc-聚糖与人类FcγRIIIa受体之间的相互作用有所增加。两种FDA批准的糖改造抗体莫格利珠单抗(mogamulizumab)及奥比图珠单抗(obinutuzuman)(GA101)是去岩藻糖基化抗体,其中通过FUT8基因敲除CHO细胞系产生且GA101是来自GnT-III过度表达系统。此外,较多FcγIIIa表达于长期RA的单核球上,且较大岩藻糖基化趋势亦发现于RA患者的IgG重链中,从而暗示可使用不仅中和促发炎性细胞介素且亦与自体自身抗体竞争FcγIIIa的非岩藻糖基化医药抗体达成RA治疗及缓解。
因此,极为关注使用优化Fc糖型生成治疗性单株抗体。
发明内容
本揭示内容是基于用于单株抗体、具体而言单株抗体的均质群体(「糖抗体」)的糖-优化Fc的发现。优化糖型展现效应细胞功能(例如ADCC)的增进功效。
术语「糖抗体」是由发明者Dr.Chi-Huey Wong创造,其是指在Fc上具有单一均质N-聚糖的单株抗体(优选地治疗性单株抗体)的均质群体。构成均质群体的个别糖抗体实质上相同,结合相同表位,且含有具有充分定义的聚糖结构及序列的相同Fc聚糖。
「实质上相同」意指所比较对象具有基本上相同的接近相似性,如由熟习此项技术者所理解。「实质上相同」涵盖「相同」。
如本文中所使用,术语「糖抗体(glycoantibodies)」(「GAbs」)是指在Fc上具有相同N-聚糖的IgG分子的均质群体。术语「糖抗体(glycoantibody)」(「GAb」)是指糖抗体(glycoantibodies)中的个别IgG分子。
因此,本揭示内容的一态样涉及在Fc上包括单一均质N-聚糖的单株抗体的均质群体的组合物,其中所述结构是构用于增进效应细胞功能的功效的优化N-聚糖结。
在优选实施例中,N-聚糖附接至Fc区的Asn-297。
在优选实施例中,其中N-聚糖是由Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2的结构组成。
可在活体外产生本文所阐述的糖抗体。可通过Fc糖改造生成糖抗体。在某些实施例中,自通过哺乳动物细胞培养获得的单株抗体以酶方式或化学酶方式改造糖抗体。
在一些实施例中,相对于相应单株抗体中的野生型Fc区,本文所阐述糖抗体的Fc区展现对FcγRIIA或FcγRIIIA的增加的结合亲和力。
在一些实施例中,本文所阐述的糖抗体展相对于野生型免疫球蛋白现增进的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。
在一些实施例中,糖抗体是选自由人类IgG1、IgG2、IgG3及IgG4组成的群。
单株抗体可为人类化、人类或嵌合抗体。
本文所阐述的糖抗体可结合与癌症、自体免疫病症、发炎性病症或传染性疾病有关的抗原。
在一些实施例中,本文所阐述的糖抗体是糖改造抗CD20。在一些实例中,本文所阐述的糖抗体是糖改造利妥昔单抗(Rituximab)
在一些实施例中,本文所阐述的糖抗体是糖改造抗HER2。在一些实例中,本文所阐述的糖抗体是糖改造曲妥珠单抗(Trastuzumab)
在一些实施例中,本文所阐述的糖抗体是糖改造抗TNFα。在一些实例中,本文所阐述的糖抗体是糖改造阿达木单抗(Adalimumab)
在一些实施例中,本文所阐述的糖抗体是糖改造F16抗体。
本揭示内容的另一态样描述一种医药组合物,其包括本文所阐述糖抗体的组合物及医药上可接受的载剂。所述医药组合物可用于治疗学(例如肿瘤学)、自体免疫病症、发炎性病症及传染性疾病。
在一些实施例中,所述医药组合物可用于预防、治疗或改善一或多种与期望由FcγR调介的效应细胞功能(例如ADCC)的增进功效的疾病、病症或感染(例如癌症、自体免疫疾病、传染性疾病)有关的症状,且可用于增进其效应通过ADCC调介的治疗抗体的治疗功效。
本文所揭示者亦包含增进抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性的方法,所述方法包括向个体投与一定量的本文所阐述的糖抗体。
另外,本文所揭示者包含预防、治疗或改善一或多种与疾病、病症或感染有关的症状的方法,所述方法包括向有需要的个体投与治疗有效量的本文所阐述的医药组合物。所述疾病、病症或感染可选自由癌症、自体免疫病症、发炎性病症及传染性感染组成的群。
本揭示内容的另一态样描述治疗有需要的人类个体的病毒性疾病的方法,其包括:(a)向个体投与阻断NK细胞的抑制受体的第一化合物,及(b)向个体投与治疗有效量的本文所阐述的医药组合物。
在本文所阐述的这些治疗方法中,糖抗体的医药组合物可单独或连同第二治疗剂(例如第二抗体或化学治疗剂或免疫抑制剂)投与。
本申请案涉及各种颁布专利、公开专利申请案、期刊论文及其他公开案,其皆以引用方式并入本文中。
本发明一或多个实施例的详细内容陈述于下文说明书中。根据下列图式及若干实施例的详细说明亦及随附申请专利范围,本发明的其他特征或优点将显而易见。
附图说明
图1.展示(a)用于经由重塑IgG1的Fc区上的聚糖结构(b)来制备均质抗体的一般策略。
图2.展示各种糖改造利妥昔单抗的抗体依赖性B细胞消耗活性。使用新制人类PBMC细胞实施人类B细胞的消耗且在FACS上基于CD19+CD2-B细胞分析。(A)与一系列不同糖改造利妥昔单抗相比,2,6-NSCT利妥昔单抗展示较高消耗能力。(B)在10种供体的全血B细胞消耗活性中,2,6-唾液酸化利妥昔单抗的活性显着大于未处理利妥昔单抗且p值为0.0016,而单-GlcNAc利妥昔单抗展示最低活性。(C)Ramos及Raji的所制得利妥昔单抗抗性细胞在细胞表面上表达较低含量的CD20。(D、E)2,6-NSCT利妥昔单抗展示针对正常细胞及抗性细胞的显着ADCC功效,而未处理抗体明显损失其针对抗性菌株的活性。
图3.展示V158FcγRIIIa介导的ADCC报告基因生物分析中的糖改造Herceptin的EC50。在6:1的E/T比率下使用SKBR3作为靶细胞且使用V158FcγRIIIa改造Jurkat作为效应细胞实施实验。同一图形中展示的所有数据是在同一微量板及同一批次效应细胞中进行的实验;绘制95%置信区间的条。(A)非岩藻糖基化Herceptin G8及商业Herceptin展示类似ADCC效应,从而阐释抗FcγRIIIa的去岩藻糖基化优点在非岩藻糖基化Herceptin G8中损失。(B)二等分及其非二等分类似物Herceptin G9及G4展示类似EC50值,从而指示在此分析中观察到并无优选二等分聚糖介导的ADCC功能。(C)与具有两个半乳糖末端的糖改造Herceptin G1相比,观察到在2,6-唾液酸化抗体中并无显着EC50变化,而在2,3-唾液酸化Herceptin中展示表观EC50增加。结果指示,Fc上的2,3-唾液酸化将较低效应细胞活化,但2,6-连接者并非如此。倍数诱导曲线是所诱导发光除以无抗体对照的诱导的结果。(D)选择图形(A)至(C)中具有最低EC50的试样且与商业Herceptin进行比较。所有试样在此ADCC报告基因生物分析中皆显示优选活性。
图4.展示,具有附接至Fc Asn297的改质均质SCT聚糖的抗流感抗体FI6(FI6m)显着展示其ADCC活性增进且预防性保护小鼠免受H1N1病毒攻击的致死剂量影响。(a)细胞毒性表示为在与PBMC(效应细胞)及各种浓度抗体一起培育时经流感H1血凝素(HA)(A/加利福尼亚州(California)/07/09)表达的裂解HEK293T细胞(靶细胞)的百分比。(b)ADCC活性展示为来自荧光素酶报告基因分析的在经活化T细胞路径的ADCC信号传导细胞核因子活化时发出信号的生物发光的倍数增加。将HA表达的HEK293T细胞(靶细胞)与NK细胞以及所述荧光素酶报告基因(效应细胞)及各种量的抗流感抗体FI6及FI6m一起培育。使用软件GraphPad Prism以4PL非线性回归进行曲线拟合。(c)在流感病毒A/加利福尼亚州/07/09(H1N1)的致死剂量(10MLD50)感染下监测小鼠的存活。在感染的前2小时,向每一群组的小鼠(N=9)经腹膜腔内分别给予2.5mg/kg FI6、FI6m或PBS。FI6及FI6m组具有显着存活差异(p<0.01)。
具体实施方式
定义
除非另外指示,否则本发明实践将采用熟习此项技术者熟知的分子生物学、微生物学、重组DNA及免疫学的习用技术。这些技术全面阐释于文献中。例如参见MolecularCloning A Laboratory Manual,第2版,由Sambrook、Fritsch及Maniatis编辑(ColdSpring Harbor Laboratory Press,1989);DNA Cloning,第I及II卷(D.N.Glover编辑,1985);Culture Of Animal Cells(R.I.Freshney,Alan R.Liss公司,1987);ImmobilizedCells And Enzymes(IRL Press,1986);B.Perbal,A Practical Guide To MolecularCloning(1984);the treatise,Methods In Enzymology(Academic Press公司,N.Y.);Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells(J.H.Miller及M.P.Calos编辑,1987,ColdSpring Harbor Laboratory);Methods In Enzymology,第154及155卷(Wu等人,编辑),Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology(Mayer及Walker编辑,Academic Press,London,1987);Antibodies:A Laboratory Manual,Harlow及Lanes(ColdSpring Harbor Laboratory Press,1988);及Handbook Of Experimental Immunology,第I-IV卷(D.M.Weir及C.C.Blackwell,编辑,1986)。
术语「糖抗体」是由发明者Dr.Chi-Huey Wong创造,其是指具有结合Fc区的单一均质糖型的单株抗体(优选地治疗性单株抗体)的均质群体。构成基本上均质群体的个别糖抗体相同,结合相同表位,且含有具有充分定义的聚糖结构及序列的相同Fc聚糖。
如本文中所使用,术语「抗CD20糖抗体」(「anti-CD20glycoantibodies,anti-CD20GAbs」)是指在Fc上具有相同糖型的抗CD20IgG分子的均质群体。
如本文中所使用,术语「抗CD20糖抗体」(「anti-CD20glycoantibody,anti-CD20GAb」)是指抗CD20糖抗体(anti-CD20glycoantibodies)中的个别IgG分子。
如本文中所使用,术语「聚糖」是指多糖、寡糖或单糖。聚糖可为糖残基的单体或聚合物且可为直链或具支链。聚糖可包含天然糖残基(例如葡萄糖、N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基神经胺酸、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、己糖、阿拉伯糖、核糖、木糖等)及/或改质糖(例如2′-氟核糖、2′-脱氧核糖、磷酸甘露糖、6′硫N-乙酰基葡糖胺等)。聚糖在本文中亦用于是指糖偶联物(例如糖蛋白、糖脂、糖肽、糖蛋白质组、肽多糖、脂多糖或蛋白聚糖)的碳水化合物部分。聚糖通常仅由单糖之间的O-糖苷链接组成。举例而言,纤维素是由β-1,4-连接D-葡萄糖构成的聚糖(或更具体而言葡聚糖),且甲壳质是由β-1,4-连接N-乙酰基-D-葡糖胺构成的聚糖。聚糖可为单糖残基的均聚物或异聚物,且可为直链或具支链。聚糖可发现附接至蛋白质,如在糖蛋白及蛋白聚糖中。其通常发现于细胞的外表面上。O-及N-连接聚糖极常见于真核细胞中,但亦可发现(但较不常见)于原核细胞中。N-连接聚糖发现附接至序列子中天门冬酰胺的R-基团氮(N)。序列子是Asn-X-Ser或Asn-X-Thr序列,其中X是除坚果糖外的任一氨基酸。
如本文中所使用,术语「岩藻糖」、「核心岩藻糖」及「核心岩藻糖残基」可互换使用且是指在α1,6-位连接至N-乙酰基葡糖胺的岩藻糖。
如本文中所使用,术语「N-聚糖」、「N-连接聚糖」、「N-连接糖基化」、「Fc聚糖」及「Fc糖基化」可互换使用且是指由连接至含Fc多肽中天门冬酰胺残基的酰胺氮的N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)附接的N-连接寡糖。术语「含Fc多肽」是指包括Fc区的多肽(例如抗体)。
如本文中所使用,术语「糖基化模式」及「糖基化特征」可互换使用且是指以酶方式或以化学方式自糖蛋白或抗体释放且然后(例如)使用LC-HPLC或MALDI-TOF MS及诸如此类分析碳水化合物结构的N-聚糖物质的特征性「指纹」。例如参见Current AnalyticalChemistry,第1卷,第1期(2005),第28-57页中的综述;其全部内容以引用方式并入本文中。
如本文中所使用,术语「糖改造Fc」在本文中使用时是指Fc区上的N-聚糖以酶方式或以化学方式发生改变或改造。本文所用的术语「Fc糖改造」是指用于制备糖改造Fc的酶或化学制程。改造的实例性方法阐述于(例如)Wong等人,USSN12/959,351中,其内容以引用方式并入本文中。
在Fc区糖基化特征背景中的术语「均质」、「均匀」、「均匀地」及「均质性」可互换使用且欲指由一种期望N-聚糖物质代表的单一糖基化模式,其中具有较少或并无痕量前体N-聚糖。在某些实施例中,前体N-聚糖的痕量是小于约2%。
「基本上纯」蛋白质意指基于组合物的总重量包括至少约90重量%(包含(例如)至少约91重量%、至少约92重量%、至少约93重量%、至少约94重量%、至少约95重量%、至少约96重量%、至少约97重量%、至少约98重量%或至少约99重量%)的蛋白质的组合物。
「基本上均质」蛋白质意指基于组合物的总重量包括至少约98重量%的蛋白质(包含(例如)至少约98.5%、至少约99%)的组合物。在某些实施例中,蛋白质是抗体、结构变体及/或其抗原结合片段。
如本文中所使用,术语「IgG」、「IgG分子」、「单株抗体」、「免疫球蛋白」及「免疫球蛋白分子」可互换使用。
如本文中所使用,术语「Fc受体」或「FcR」阐述结合抗体的Fc区的受体。优选FcR是原始序列人类FcR。另外,优选FcR是结合IgG抗体者(γ受体)且包含FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)及FcγRIII(CD16)亚类的受体,包含这些受体的对偶基因变体及选择性剪接形式。FcγRII受体包含FcγRIIA(「活化型受体」)及FcγRIIB(「抑制型受体」),二者具有主要在胞质结构域上有所不同的类似氨基酸序列。活化型受体FcγRIIA在其胞质结构域中含有免疫受体酪胺酸活化基序(ITAM)。抑制型受体FcγRIIB在其胞质结构域中含有免疫受体酪胺酸抑制基序(ITIM)。(参见M.inAnnu.Rev.Immunol.15:203-234(1997)中的综述)。在Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol9:457-92(1991);Capel等人,Immunomethods 4:25-34(1994);及de Haas等人,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中对FcR进行综述。本文的术语「FcR」涵盖其他FcR,包含彼等欲在将来鉴别者。所述术语亦包含新生儿受体(FcRn),所述受体负责将母体IgG转移至胎儿体内(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)及Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))。
本文所用的术语「效应物功能」是指源自抗体Fc区与Fc受体或配体的相互作用的生物化学事件。实例性「效应物功能」包含C1q结合、补体依赖性细胞毒性、Fc受体结合、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、吞噬作用、细胞表面受体(例如B细胞受体BCR)下调。可使用业内已知的各种分析来分析这些效应物功能。
如本文中所使用,「抗体依赖性细胞介导的细胞毒性」或「ADCC」是指以下细胞毒性形式:其中结合存在于某些细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性球及巨噬细胞)上的Fc受体(FcR)的经分泌Ig使这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合带抗原靶细胞且随后利用细胞毒素杀死所述靶细胞。抗体「攻击」细胞毒性细胞且为所述杀死绝对所需。用于介导ADCC的原代细胞(NK细胞)仅表达FcγRIII,而单核球表达FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR于造血细胞上的表达汇总于Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol9:457-92(1991)的第464页表3中。为评价所关注分子的ADCC活性,可实施活体外ADCC分析,例如阐述于美国专利第5,500,362号或美国专利第5,821,337号中者。可用于这些分析的效应细胞包含周边血单核细胞(PBMC)及天然杀伤(NK)细胞。另一选择为或另外,可在活体内(例如在诸如揭示于Clynes等人,PNAS(USA)95:652-656(1998)中的动物模型等动物模型中)评价所关注分子的ADCC活性。
本文所用的术语「补体依赖性细胞毒性」或「CDC」是指在补体存在下靶细胞的裂解。经典补体途径的活化是通过补体系统的第一补体(C1q)与抗体(适当亚类)的结合来起始,这些抗体结合其同族抗原。为评价补体活化,可实施CDC分析,例如如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods 202:163(1996)中所阐述。
「嵌合」抗体(免疫球蛋白)中重链及/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属特定抗体种类或亚类的抗体的相应序列相同或同源,而所述(等)链的其余部分与衍生自另一物种或属另一抗体种类或亚类的抗体的相应序列相同或同源;且包含这些抗体的片段,只要其展现期望生物活性即可(美国专利第4,816,567号;Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。本文所用的人类化抗体是嵌合抗体的子组。
「人类化」形式的非人类(例如鼠类)抗体是含有最少量源自非人类免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在极大程度上,人类化抗体是如下人类免疫球蛋白(接受者或受体抗体):其中接受者的超变区残基由来自非人类物种(例如小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类动物)的超变区(供体抗体)的具有期望特异性、亲和力及容量的残基所代替。在一些情况下,人类免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基由相应非人类残基代替。另外,人类化抗体可包括未在接受者抗体或供体抗体中发现的残基。作出这些改质以进一步改善抗体性能,例如结合亲和力。通常,人类化抗体将包括实质上全部的至少一个且通常两个可变结构域,其中全部或实质上全部超变环对应于非人类免疫球蛋白的彼等超变环,且全部或实质上全部FR区为人类免疫球蛋白序列的彼等FR区,但FR区可包含改良结合亲和力的一或多个氨基酸取代。FR中的这些氨基酸取代的数量通常在H链中不超过6,且在L链中不超过3。人类化抗体视情况亦包括通常人类免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。其他细节参见Jones等人,Nature 321:522-525(1986);Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988);及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。亦参见下列综述文件及其中所引用的参考文献:Vaswani及Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998);Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995);Hurle及Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)。
如本文中所使用,术语「抗原」定义为任一能够诱发免疫反应的物质。如本文中所使用,术语「抗原特异性」是指特定抗原或抗原片段的供应产生特异性细胞增殖的细胞群体的性质。
如本文中所使用,术语「免疫原性」是指免疫原、抗原或疫苗刺激免疫反应的能力。
如本文中所使用,术语「表位」定义为抗原分子中接触抗体的抗原结合位点或T细胞受体的部分。
如本文中所使用,术语「特异性结合」是指结合对(例如抗体及抗原)之间的相互作用。在各种情况下,特异性结合可体现为亲和力常数为约10-6莫耳/公升、约10-7莫耳/公升或约10-8莫耳/公升或更小。
「分离」抗体是已经鉴定并自其天然环境组份中分离及/或回收的抗体。其天然环境的污染组份是会干扰抗体的研究、诊断或治疗用途的材料,且可包含酶、激素及其他蛋白质性溶质或非蛋白质性溶质。
本文所用的词组「实质上类似」、「实质上相同」、「等效」或「实质上等效」表示两个数值(例如一个值与分子有关且另一者与参考/对比分子有关)之间具有足够高相似度,从而熟习此项技术者会认为所述两个值之间的差异在通过这些值(例如Kd值、抗病毒效应等)所量测生物特性的背景下具有较少或不具有生物及/或统计学显着性。所述两个值之间的差异是(例如)小于约50%、小于约40%、小于约30%、小于约20%及/或小于约10%,其随参考/对比分子的值而变化。
本文所用的词组「实质上减少」或「实质上不同」表示两个数值(通常一个值与分子有关且另一值与参考/对比分子有关)之间具有足够高差异度,从而熟习此项技术者会认为所述两个值之间的差异在通过这些值(例如Kd值)所量测生物学特性的背景下具有统计学显着性。所述两个值的间的差异是(例如)大于约10%、大于约20%、大于约30%、大于约40%及/或大于约50%,其随参考/对比分子的值而变化。
「结合亲和力」通常是指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间的非共价相互作用的总强度。除非另外指示,否则本文所用的「结合亲和力」是指固有结合亲和力,其反映结合对的成员(例如抗体及抗原)之间的1:1相互作用。分子X对于其配偶体Y的亲和力通常可表示为解离常数(Kd)。可通过业内已知的常用方法(包含彼等阐述于本文中者)来量测亲和力。低亲和力抗体通常缓慢地结合抗原且往往易于解离,而高亲和力抗体通常较快结合抗原且往往较长时间保持结合。多种量测结合亲和力的方法为业内已知,其任一者皆可用于本发明目的。具体阐释性实施例阐述于下文中。
抗体的「可变区」或「可变结构域」是指抗体重链或轻链的胺基末端结构域。这些结构域通常是抗体的最可变部分且含有抗原结合位点。
术语「可变」是指如下事实:在抗体之间可变结构域的某些部分于序列上存在广泛差异且可用于实现每一特定抗体对其特定抗原的结合及特异性。然而,可变性在整个抗体可变结构域中并非均匀分布。在轻链及重链可变结构域二者中所述可变性均集中在三个称为互补决定区(CDR)或超变区的区段上。可变结构域的保守程度较高的部分称为框架(FR)。原始重链及轻链的可变结构域各自包括4个由三个CDR连结的主要采用β薄片构形的FR区,这些CDR形成连结且在一些情形下形成β薄片结构的一部分的环。每一链中的CDR藉助FR区保持紧密靠近,且与来自另一链的CDR一起促进形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md(1991))。恒定结构域并不直接参与抗体与抗原的结合,但展现各种效应物功能,例如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。
抗体的木瓜酶消化产生两个相同抗原结合片段,称为「Fab」片段,其各自具有单一抗原结合位点;及残余「Fc」片段,其名称反映其易于结晶的能力。经胃蛋白酶处理产生F(ab’)2片段,所述片段具有两个抗原组合位点且仍然能够交联抗原。
「Fv」是含有完全抗原识别及结合位点的最小抗体片段。在双链Fv物质中,此区域是由一个重链可变结构域与一个轻链可变结构域的紧密非共价结合二聚体组成。在单链Fv物质中,一个重链可变结构域及一个轻链可变结构域可通过柔性肽连接体共价连接,从而这些轻链及重链可以与双链Fv物质中类似的「二聚体」结构来缔合。每一可变结构域的3个CDR以此构形相互作用以界定VH-VL二聚体的表面上的抗原结合位点。六个CDR共同赋予了所述抗体抗原结合特异性。然而,即使单一可变结构域(或Fv的一半,其仅包括三个对抗原具有特异性的CDR)亦具有识别并结合抗原的能力,但其亲和力低于完整结合位点。
Fab片段亦含有轻链恒定结构域及重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab'片段与Fab片段的不同的处在于在重链CH1结构域的羧基末端添加几个残基,包含一或多个来自抗体铰链区的半胱胺酸。在本文中,Fab'-SH是恒定结构域中的半胱胺酸残基具有游离硫醇基的Fab'的名称。F(ab')2抗体片段最初是作为在其间具有铰链半胱胺酸的Fab'片段对产生。亦已知抗体片段的其他化学偶合。
根据恒定结构域的氨基酸序列,可将来自任何脊椎动物物种的抗体(免疫球蛋白)的「轻链」指定为两种完全不同类型(称为卡帕(κ)及兰布达(λ))中的一种。
端视抗体(免疫球蛋白)重链中恒定结构域的氨基酸序列,可将抗体(免疫球蛋白)指定为不同种类。存在5大类抗体:IgA、IgD、IgE、IgG及IgM,且这些类别中的若干可进一步分成子类(同种型),例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ及μ。不同种类的免疫球蛋白的亚单位结构及三维构形已众所周知且通常阐述于(例如)Abbas等人,Cellular及Mol.Immunology,第4版(2000)中。抗体可为较大融合分子的一部分,其是通过抗体与一或多种其他蛋白质或肽的共价或非共价缔合来形成。
术语「全长抗体」、「完整抗体」与「全抗体」在本文中可互换使用,其是指呈实质上完整形式的抗体,且不为如下文所定义的抗体片段。这些术语尤其是指重链含有Fc区的抗体。
「抗体片段」仅包括完整抗体的一部分,其中所述部分保留至少一种及(至多)大部分或所有通常在存在于完整抗体中时与所述部分有关的功能。在一实施例中,抗体片段包括完整抗体的抗原结合位点且由此保留结合抗原的能力。在另一实施例中,抗体片段(例如包括Fc区者)在存在于完整抗体中时保留通常与Fc区有关的生物功能中的至少一者,例如FcRn结合、抗体半衰期调变、ADCC功能及补体结合。在一实施例中,抗体片段是活体内半衰期实质上类似于完整抗体的单价抗体。举例而言,此一抗体片段可包括连接至能赋予片段活体内稳定性的Fc序列的抗原结合臂。
本文所用的术语「单株抗体」是指自实质上均质抗体的群体获得的抗体,亦即,除可少量存在的可能天然突变外,构成所述群体的个别抗体均相同。因此,修饰语「单株」指示并非独立抗体混合物的抗体性质。所述单株抗体通常包含含有结合靶的多肽序列的抗体,其中靶结合多肽序列是通过包含自复数个多肽序列选择单一靶结合多肽序列的制程获得。举例而言,选择制程可为自复数个纯系(例如一组杂交瘤纯系、噬菌体纯系或重组DNA纯系)选择独特纯系。应理解,可进一步改变所选靶结合序列以(例如)改良对靶的亲和力,人类化靶结合序列,改良其在细胞培养物中的产生,减小其活体内免疫原性,产生多特异性抗体等,且包括经改变靶结合序列的抗体亦是本发明的单株抗体。与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多株抗体制剂相比,单株抗体制剂的每一单株抗体针对抗原上的单个决定簇。除特异性外,单株抗体制剂的优势亦在于其通常不受其他免疫球蛋白污染。修饰语「单株」指示抗体特征是自实质上均质的抗体群体获得,且不应理解为需要通过任一特定方法来产生所述抗体。举例而言,拟用于本发明的单株抗体可通过各种技术制得,包含(例如)杂交瘤方法(例如Kohler等人,Nature,256:495(1975);Harlow等人,Antibodies:ALaboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第2版,1988);Hammerling等人,Monoclonal Antibodies and T-Cell hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA方法(例如参见美国专利第4,816,567号)、噬菌体展示技术(例如参见Clackson等人,Nature,352:624-628(1991);Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992);Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004);Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004);Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004);及Lee等人,J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004))及用于在动物中产生具有一部分或所有编码人类免疫球蛋白序列的人类免疫球蛋白基因座或基因的人类或人类样抗体的技术(例如参见WO98/24893;WO96/34096;WO96/33735;WO91/10741;Jakobovits等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551(1993);Jakobovits等人,Nature 362:255-258(1993);Bruggemann等人,Year in Immunol.7:33(1993);美国专利第5,545,807号、第5,545,806号、第5,569,825号、第5,625,126号、第5,633,425号、第5,661,016号;Marks等人,Bio.Technology 10:779-783(1992);Lonberg等人,Nature 368:856-859(1994);Morrison,Nature 368:812-813(1994);Fishwild等人,Nature Biotechnol.14:845-851(1996);Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996)及Lonberg及Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995)。
具体而言,本文的单株抗体包含「嵌合」抗体,其中重链及/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属特定抗体种类或亚类的抗体的相应序列相同或同源,而所述(等)链的其余部分与衍生自另一物种或属另一抗体种类或亚类的抗体的相应序列相同或同源;以及这些抗体的片段,只要其展现期望生物学活性即可(美国专利第4,816,567号;及Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。
亦参见下列综述文件及其中所引用的参考文献:Vaswani及Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998);Harris,Biochem.Soc.Transactions23:1035-1038(1995);Hurle及Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)。
本文所用的术语「超变区」、「HVR」或「HV」是指抗体可变结构域中序列超变及/或结构上形成所定义环的区域。通常,抗体包括6个超变区;3个位于VH中(H1、H2、H3),且3个位于VL中(L1、L2、L3)。本文使用且涵盖多个超变区的描述。Kabat互补决定区(CDR)是基于序列可变性且使用最为广泛(Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。而Chothia是指结构环的位置(Chothia及Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM超变区代表Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷方案且用于OxfordMolecular的AbM抗体建模软件中。「接触」超变区是基于对可获得复杂晶体结构的分析。来自这些超变区中每一者的残基如下所述。
Loop Kabat AbM Chothia Contact
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B
(Kabat编号)
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35
(Chothia编号)
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101
超变区可包括如下「经延伸超变区」:VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56或49-56(L2)及89-97或89-96(L3)以及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(H2)及93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些定义中的每一者,根据Kabat等人(见上文)对可变结构域残基编号。
「框架」或「FR」残基是彼等除如本文所定义超变区残基外的可变结构域残基。
术语「如Kabat中的可变结构域残基编号」或「如Kabat中的氨基酸位置编号」及其变化形式是指在Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)中用于抗体编译的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用此编号系统,实际线性氨基酸序列可含有较少或额外的对应于可变结构域FR或HVR的缩短或插入的氨基酸。举例而言,重链可变结构域可包含在H2的残基52后的单氨基酸插入(根据Kabat编号的残基52a)及重链FR残基82后的插入残基(例如,根据Kabat编号的残基82a、82b及82c等)。可通过将抗体序列的同源区与「标准」Kabat编号序列比对来确定给定抗体残基的Kabat编号。
「单链Fv」或「scFv」抗体片段包括抗体的VH及VL结构域,其中这些结构域是以单一多肽链存在。通常,scFv多肽进一步包括VH结构域与VL结构域之间的多肽连接体,其使得scFv能够形成用于抗原结合的期望结构。关于scFv的综述,参见Pluckthun,ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg及Moore编辑,Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994)。
术语「双链抗体」是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段,这些片段包括在同一多肽链(VH-VL)中与轻链可变结构域(VL)链接的重链可变结构域(VH)。通过使用过短而不容许在同一链上的两个结构域之间配对的连接体,迫使这些结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。双链抗体更全面地阐述于(例如)EP 404,097;WO93/1161;及Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)中。
「人类抗体」是拥有对应于由人类产生的抗体的氨基酸序列的氨基酸序列及/或使用用于制备如本文所揭示人类抗体的任一技术者。此人类抗体的定义明确排除包括非人类抗原结合残基的人类化抗体。
「亲和力成熟」抗体是在其一或多个HVR中存在一或多处改变的抗体,这些改变会使抗体对抗原的亲和力与不拥有彼等改变的亲代抗体有所改良。在一实施例中,亲和力成熟抗体对靶抗原具有毫微莫耳或甚至皮莫耳亲和力。亲和力成熟抗体是通过业内已知程序产生。Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)阐述通过VH及VL结构域改组达成亲和力成熟。CDR及/或框架残基的随机突变诱发阐述于以下文献中:Barbas等人,ProcNat.Acad.Sci.USA 91:3809-3813(1994);Schier等人,Gene169:147-155(1995);Yelton等人,J.Immunol.155:1994-2004(1995);Jackson等人,J.Immunol.154(7):3310-9(1995);及Hawkins等人,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。
「阻断性」抗体或「拮抗剂」抗体是抑制或降低所结合抗原的生物活性的抗体。某些阻断性抗体或拮抗剂抗体实质上或完全地抑制抗原的生物活性。
本文所用的「激动剂抗体」是模拟所关注多肽的功能活性中的至少一者的抗体。
「病症」是任一受益于本发明抗体的治疗的病状。此包含慢性及急性病症或疾病,包含使哺乳动物易患所讨论病症的彼等病理学病状。本文拟治疗病症的非限制性实例包含癌症。
术语「细胞增殖性病症」及「增殖性病症」是指与一定程度的异常细胞增殖有关的病症。在一实施例中,细胞增殖性病症是癌症。
本文所用的「肿瘤」是指所有肿瘤性细胞生长及增殖(无论是恶性的抑还是良性的)以及所有癌前期及癌性细胞及组织。本文中所提及的术语「癌症」、「癌性」、「细胞增殖性病症」、「增殖性病症」及「肿瘤」并不相互排斥。
术语「癌症」及「癌性」通常是指或阐述哺乳动物的特征通常在于细胞生长/增殖失调的生理学病状。癌症的实例包含但不限于癌瘤、淋巴瘤(例如何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’slymphoma)及非何杰金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma))、母细胞瘤、肉瘤及白血病。这些癌症的更特定实例包含鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状癌瘤、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰脏癌、胶质母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌瘤、唾液腺癌瘤、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌瘤、白血病及其他淋巴增生性病症及各种类型的头颈癌。
如本文中所使用,术语「抗原」定义为任一能够诱发免疫反应的物质。
如本文中所使用,术语「抗原特异性」是指供应特定抗原或抗原片段造成特异性细胞增殖的一种细胞群体的性质。
本文所用的术语「表达CD20的癌症」是指癌细胞展示表达CD20抗原的所有癌症。优选地,本文所用的表达CD20的癌症是指淋巴瘤(优选为B-细胞非何杰金氏淋巴瘤(NHL))及淋巴细胞白血病。这些淋巴瘤及淋巴细胞白血病包含(例如)a)滤泡性淋巴瘤;b)小无裂细胞淋巴瘤/伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)(包含地方性伯基特氏淋巴瘤、偶发性伯基特氏淋巴瘤及非伯基特氏淋巴瘤);c)边缘区淋巴瘤(包含结节外边缘区B细胞淋巴瘤(黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤,MALT)、结节边缘区B细胞淋巴瘤及脾脏边缘区淋巴瘤);d)外套细胞淋巴瘤(MCL);e)大细胞淋巴瘤(包含B-细胞弥漫性大细胞淋巴瘤(DLCL)、弥漫性混合细胞淋巴瘤、免疫母细胞性淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤-肺B-细胞淋巴瘤);f)多毛细胞白血病;g)淋巴细胞淋巴瘤、沃尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulinemia);h)急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)/小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、B-细胞前淋巴细胞白血病;i)浆细胞肿瘤、浆细胞性骨髓瘤、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤;j)何杰金氏病(Hodgkin's disease)。所述表达CD20的癌症更优选是B-细胞非何杰金氏淋巴瘤(NHL)。表达CD20的癌症尤其是外套细胞淋巴瘤(MCL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B-细胞弥漫性大细胞淋巴瘤(DLCL)、伯基特氏淋巴瘤、多毛细胞白血病、滤泡性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、边缘区淋巴瘤、移植后淋巴增生性病症(PTLD)、HIV伴发性淋巴瘤、沃尔登斯特伦巨球蛋白血症或原发性CNS淋巴瘤。
如本文中所使用,「治疗」是指试图改变所治疗个体或细胞的自然过程的临床介入,且可用于预防或在临床病理学过程期间实施。治疗的期望效应包含防止疾病发生或复发、缓解症状、减少疾病的任何直接或间接病理结果、防止或降低发炎及/或组织/器官损害、降低疾病进展速率、改善或缓和疾病状态及缓解或改良预后。在一些实施例中,使用本发明抗体来延迟疾病或病症的发生。
「个体(individual或subject)」是脊椎动物。在某些实施例中,脊椎动物是哺乳动物。哺乳动物包含(但不限于)农场动物(例如牛)、运动动物、宠物(例如猫、狗及马)、灵长类动物、小鼠及大鼠。在某些实施例中,脊椎动物是人类。
用于治疗目的的「哺乳动物」是指任何归类为哺乳动物的动物,包含人类、家畜及农场动物,以及动物园动物、运动动物或宠物(例如狗、马、猫、牛等)。在某些实施例中,哺乳动物是人类。
「有效量」是指在所需剂量及时间段内有效达成期望治疗或预防结果的量。
本发明的物质/分子的「治疗有效量」可根据诸如以下因素而变化:个体的疾病状态、年龄、性别及体重,以及物质/分子于所述个体内引发期望反应的能力。治疗有效量亦为物质/分子的治疗有益效应胜过其任何毒性或有害效应的量。「预防有效量」是指在所需剂量及时间段内有效达成期望预防结果的量。通常(但未必),因预防剂量是在患病之前或患病早期用于个体中,故预防有效量会小于治疗有效量。
本文所用的术语「细胞毒性剂」是指抑制或阻止细胞功能及/或引起细胞破坏的物质。所述术语意欲包含放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu的放射性同位素);化学治疗剂(例如胺甲蝶呤(methotrexate)、阿霉素(adriamicin)、长春花生物碱(长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、依托泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法仑(melphalan)、丝裂霉素C(mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、道诺霉素(daunorubicin)或其他嵌入剂);酶及其片段,例如溶核酶;抗生素;及毒素,例如来自细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素,包含其片段及/或变体;及下文所揭示的各种抗肿瘤剂或抗癌剂。其他细胞毒性剂阐述于下文中。杀肿瘤剂引起肿瘤细胞破坏。
「化学治疗剂」是可用于治疗癌症的化学化合物。化学治疗剂的实例包含烷基化剂,例如噻替哌(thiotepa)及(环磷酰胺);磺酸烷基酯,例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan);氮杂环丙烷,例如苯得哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米得哌(meturedopa)及乌得哌(uredopa);伸乙基亚胺及甲基蜜胺,包含六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基嘧胺、三伸乙基磷酰胺、三伸乙基硫代磷酰胺及三羟甲基嘧胺;多聚乙酰(尤其布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone));δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)、);β-拉帕醌(lapachone);拉帕醇(lapachol);秋水仙碱(colchicine);桦木酸;喜树碱(camptothecin)(包含合成类似物托泊替康(topotecan)CPT-11(伊立替康(irinotecan),)、乙酰基喜树碱(acetylcamptothecin)、莨菪素及9-胺基喜树碱);苔藓虫素(bryostatin);卡利司他汀(callystatin);CC-1065(包含其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)及比折来新(bizelesin)合成类似物);鬼臼毒素(podophyllotoxin);鬼臼酸;替尼泊苷(teniposide);念珠藻素(cryptophycin)(尤其念珠藻素1及念珠藻素8);多拉司他汀(dolastatin);多卡米星(duocarmycin)(包含合成类似物KW-2189及CB1-TM1);艾榴素(eleutherobin);水鬼蕉碱(pancratistatin);匍枝珊瑚醇(sarcodictyin);海绵抑制素(spongistatin);氮芥,例如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥胆甾醇酯(phenesterine)、泼尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥;亚硝基脲,例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine);抗生素,例如烯二炔抗生素(例如卡奇霉素(calicheamicin),尤其卡奇霉素γ1I及卡奇霉素ωI 1(例如参见Agnew,Chem.Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994));达内霉素(dynemicin),包含达内霉素A;埃斯波霉素(esperamicin);以及新制癌菌素发色团(neocarzinostatin chromophore)及有关色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝胺酸、博来霉素(bleomycin)、放线菌素c(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、更生霉素(dactinomycin)、道诺霉素、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-侧氧基-L-正白胺酸、多柔比星(包含吗啉基-多柔比星、氰基吗啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星及脱氧阿霉素)、泛艾霉素(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、埃达霉素(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(例如丝裂霉素C)、霉酚酸、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、波弗霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲菌素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代谢剂,例如胺甲蝶呤及5-氟尿嘧啶(5-FU);叶酸类似物,例如二甲叶酸(denopterin)、胺甲蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate);嘌呤类似物,例如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤;嘧啶类似物,例如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-阿扎尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine);雄激素,例如卡普睪酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolonepropionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪内酯(testolactone);抗肾上腺剂,例如胺鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);叶酸补充剂,例如亚叶酸;醋葡醛内酯;醛磷酰胺糖苷;胺基酮戊酸;恩尿嘧啶(eniluracil);安吖啶(amsacrine);贝斯特布西(bestrabucil);比生群(bisantrene);依达曲沙(edatraxate);地磷酰胺(defofamine);秋水仙胺(demecolcine);地吖醌(diaziquone);依氟鸟胺酸(elfornithine);依利乙铵(elliptinium acetate);埃坡霉素(epothilone);依托格鲁(etoglucid);硝酸镓;羟基脲;香菇多糖;氯尼达明(lonidamine);类美坦辛(maytansinoids),例如美坦辛(maytansine)及安丝菌素(ansamitocin);米托胍腙(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);美得眠(mopidanmol);硝基胺;喷司他汀(pentostatin);蛋胺氮芥(phenamet);吡柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(losoxantrone);2-乙基酰肼;丙卡巴肼(procarbazine);多糖复合物(JHS NaturalProducts,Eugene,Oreg.);雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西佐喃(sizofuran);锗螺胺(spirogermanium);替奴佐酸(tenuazonic acid);三亚胺醌(triaziquone);2,2′,2″-三氯三乙胺;单端孢霉烯(trichothecene)(尤其T-2毒素、疣孢菌素A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)及蛇形菌索(anguidine));乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine)达卡巴嗪(dacarbazine);甘露氮芥(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二溴卫矛醇(mitolactol);哌泊溴烷(pipobroman);加赛特辛(gacytosine);阿糖胞苷(arabinoside)(「Ara-C」);噻替哌(thiotepa);类紫杉醇(taxoid),例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)(Bristol-Myers SquibbOncology,Princeton,N.J.)、太平洋紫杉醇的无克列莫佛(Cremophor)、经白蛋白改造的奈米颗粒调配物(ABRAXANETM)(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.)及多西紫杉醇(doxetaxel)(-Poulenc Rorer,Antony,France);苯丁酸氮芥;吉西他滨(gemcitabine)6-硫鸟嘌呤;巯嘌呤;胺甲蝶呤;铂类似物,例如顺铂(cisplatin)及卡铂(carboplatin);长春碱铂;依托泊苷(VP-16);异环磷酰胺;米托蒽醌;长春新碱奥沙利铂(oxaliplatin);醛氢叶酸;长春瑞滨(vinorelbine)诺肖林(novantrone);依达曲沙(edatrexate);道诺霉素(daunomycin);胺基蝶呤(aminopterin);伊班膦酸盐(ibandronate);拓扑异构酶抑制剂RFS 2000;二氟甲基鸟胺酸(DMFO);类视色素,例如视黄酸;卡培他滨(capecitabine)上述药剂中任一者的医药上可接受的盐、酸或衍生物;以及上述药剂中的两者或更多者的组合,例如环磷酰胺、多柔比星、长春新碱及泼尼松龙(prednisolone)的组合疗法的缩写CHOP及利用与5-FU及醛氢叶酸组合的奥沙利铂(ELOXATINTM)的治疗方案的缩写FOLFOX。
如本文中所使用,「治疗」是指试图改变所治疗个体或细胞的自然过程的临床介入,且可用于预防或在临床病理学过程期间实施。治疗的期望效应包含防止疾病发生或复发、缓解症状、减少疾病的任何直接或间接病理结果、防止或降低发炎及/或组织/器官损害、降低疾病进展速率、改善或缓和疾病状态及缓解或改良预后。在一些实施例中,使用本发明抗体来延迟疾病或病症的发生。
「个体(individual或subject)」是脊椎动物。在某些实施例中,脊椎动物是哺乳动物。哺乳动物包含(但不限于)农场动物(例如牛)、运动动物、宠物(例如猫、狗及马)、灵长类动物、小鼠及大鼠。在某些实施例中,脊椎动物是人类。
用于治疗目的的「哺乳动物」是指任何归类为哺乳动物的动物,包含人类、家畜及农场动物,以及动物园动物、运动动物或宠物(例如狗、马、猫、牛等)。在某些实施例中,哺乳动物是人类。
「有效量」是指在所需剂量及时间段内有效达成期望治疗或预防结果的量。
本发明的物质/分子的「治疗有效量」可根据诸如以下因素而变化:个体的疾病状态、年龄、性别及体重,以及物质/分子于所述个体内引发期望反应的能力。治疗有效量亦为物质/分子的治疗有益效应胜过其任何毒性或有害效应的量。「预防有效量」是指在所需剂量及时间段内有效达成期望预防结果的量。通常(但未必),因预防剂量是在患病之前或患病早期用于个体中,故预防有效量会小于治疗有效量。
本文所用的术语「细胞毒性剂」是指抑制或阻止细胞功能及/或引起细胞破坏的物质。所述术语意欲包含放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu的放射性同位素);化学治疗剂(例如胺甲蝶呤、阿霉素、长春花生物碱(长春新碱、长春碱、依托泊苷)、多柔比星、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、道诺霉素或其他嵌入剂);酶及其片段,例如溶核酶;抗生素;及毒素,例如来自细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素,包含其片段及/或变体;及下文所揭示的各种抗肿瘤剂或抗癌剂。其他细胞毒性剂阐述于下文中。杀肿瘤剂引起肿瘤细胞破坏。
「治疗(treating或treatment)」或「缓解」是指治疗性治疗及预防性(prophylactic或preventative)措施;其中目标是预防或减缓(减弱)靶定病理学病状或病症。彼等需要治疗者包含彼等已患有病症者以及彼等易于患有病症者或彼等拟预防病症者。若在接受治疗量的本发明方法的抗体之后,患者展示下列情形中的一或多者的可观察及/或可量测减小或不存在,则个体或哺乳动物成功「治疗」感染:减小感染细胞数量或不存在感染细胞;减小总感染细胞的百分比;及/或减轻(至一定程度)一或多种与特定感染有关的症状;减小发病率及死亡率;及改良生活质量问题。用于评价疾病的成功治疗及改良的上述参数可易于通过医师熟知的常规程序量测。
术语「治疗有效量」是指有效「治疗」个体或哺乳动物的疾病或病症的抗体或药物的量。参见「治疗」的先前定义。
与一或多种其他治疗剂「组合」投与包含以任一顺序同时(并行)及连续投与。
本文所用的「载剂」包含在所用剂量及浓度下对所暴露细胞或哺乳动物无毒的医药上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂。通常,生理学上可接受的载剂是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载剂的实例包含缓冲剂,例如磷酸盐、柠檬酸盐及其他有机酸;抗氧化剂,包含抗坏血酸,低分子量(小于约10个残基)多肽;蛋白质,例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水性聚合物,例如聚乙烯吡咯啶酮;氨基酸,例如甘胺酸、麸酰胺酸、天门冬酰胺、精胺酸或离胺酸;单糖、二糖及其他碳水化合物,包含葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合剂,例如EDTA;糖醇,例如甘露糖醇或山梨糖醇;形成盐的抗衡离子,例如钠;及/或非离子型表面活性剂,例如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)及PLURONICSTM
糖抗体
自培养物中的哺乳动物细胞所产生重组蛋白的糖基化是确保有效使用治疗抗体的重要过程(Goochee等人,1991;Jenkins及Curling,1994)。哺乳动物细胞培养递送并不皆具有相同性质的糖基化模式的异质混合物。这些糖基化模式可影响诸如治疗性蛋白质的安全性、功效及血清半衰期等性质。已通过研发新颖种类的单株抗体(称为「糖抗体」)来成功解决糖型异质性问题。
术语「糖抗体」是由发明人Dr.Chi-Huey Wong创造,其是指在Fc上具有单一均质糖型的单株抗体(优选为治疗性单株抗体)的均质群体。构成均质群体的个别糖抗体相同,结合相同表位,且含有明确定义的聚糖结构及序列的相同Fc聚糖。
糖抗体可自市售或研发中的单株抗体(优选为治疗性单株抗体)生成。用于治疗性应用的单株抗体可为人类化、人类或嵌合单株抗体。
本文所用的术语「亲代抗体」是指用于产生糖抗体的单株抗体。亲代抗体可通过细胞培养例如哺乳动物细胞培养物、嗜甲醇酵母菌(Pichia pastoris)或昆虫细胞系获得。优选地,亲代抗体是在哺乳动物细胞培养物中产生。亲代抗体可为FDA批准或正处于研发中。
单株抗体可使用业内已知的多种技术,包含使用杂交瘤、重组及噬菌体展示技术或其组合制得。举例而言,单株抗体可使用杂交瘤技术,包含业内已知及教示于以下者产生:例如Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual(Cold Spring HarborLaboratory Press,第2版,1988);Hammerling等人,Monoclonal Antibodies and T-CellHybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981);每一者的全部内容以引用方式并入本文中。本文所用的术语「单株抗体」(缩写为「mAb」)不限于经由杂交瘤技术产生的抗体。术语「单株抗体」是指源自单一纯系(包含任何真核、原核或噬菌体纯系)的抗体而并非指产生其的方法。「单株抗体」可包括两种蛋白质(亦即重链及轻链)或由其组成。
本文阐述自治疗性单株抗体由Fc糖改造衍生的功能活性糖抗体。具有优化糖型的糖抗体展现较治疗性单株抗体强的生物活性。预期具有优化糖型的糖抗体可提供治疗性应用的替代物。
本发明糖抗体由Fc上的单一均质糖型(N-聚糖)组成。在一些实施例中,N-聚糖附接至Fc区的Asn-297。
本发明的N-聚糖具有Man3GlcNAc2共有五糖核心,其亦称为「三甘露糖核心」或「五糖核心」,其中「Man」是指甘露糖,「Glc」是指葡萄糖,「NAc」是指N-乙酰基,且GlcNAc是指N-乙酰基葡糖胺。
在一些实施例中,N-聚糖具有二分枝结构。
本文所阐述的N-聚糖可具有链内取代,包括「二等分」GlcNAc。在聚糖于三甘露糖核心上包括二等分GlcNAc时,所述结构表示为Man3GlcNAc3。在聚糖包括附接至三甘露糖核心的核心岩藻糖时,所述结构表示为Man3GlcNAc2(F)。N-聚糖可包括一或多种末端唾液酸(例如N-乙酰基神经胺酸)。表示为「Sia」的结构是指末端唾液酸。唾液酸化可发生于二分枝结构的α1-3或α1-6臂上。
在一些实施例中,本文所阐述的N-聚糖包括至少一个α2-6末端唾液酸。在某些实施例中,N-聚糖包括一个α2-6末端唾液酸。在一优选实施例中,N-聚糖包括两个α2-6末端唾液酸。
在一些实施例中,本文所阐述的N-聚糖包括至少一个α2-3末端唾液酸。在某些实施例中,N-聚糖包括一个α2-3末端唾液酸。在一优选实施例中,N-聚糖包括两个α2-3末端唾液酸。
在一些实施例中,本文所阐述的N-聚糖包括至少一种半乳糖。在某些实施例中,N-聚糖包括一种半乳糖。在一优选实施例中,N-聚糖包括两种半乳糖。
优选地,本揭示内容的N-聚糖不含核心岩藻糖。
表1列示糖抗体中的实例性N-聚糖。
表1.
Fc上的糖基化可影响各种免疫球蛋白效应物调介的功能,包含ADCC、CDC及循环半衰期。ADCC增进是用于改良治疗抗体药物功效的关键策略。可降低有效药物剂量以达成较低药物成本的益处。本文所阐述的糖抗体的特征可在于功能性质。
(I)用于癌症的糖抗体
本文所阐述的糖抗体可用于治疗癌症。FDA已批准多种用于癌症疗法的治疗性单株抗体,且许多种正在临床试验中单独或与其他治疗剂组合进行研究。可使用这些单株抗体(「亲代抗体」)产生糖抗体。
用于癌症的实例性单株抗体包含但不限于Ado-艾曲妥珠单抗(Ado-trastuzumabemtansine)(Kadcyla)、阿来组单抗(Alemtuzumab)(Campath)、贝利木单抗(Belimumab)(Benlysta)、贝伐珠单抗(Bevacizumab)(Avastin)、贝伦妥单抗-维多汀(Brentuximabvedotin)(Adcetris)、卡博替尼(Cabozantinib)(Cometriq)、卡那单抗(Canakinumab)(Ilaris)、西妥昔单抗(Cetuximab)(Erbitux)、德奴单抗(Denosumab)(Xgeva)、替伊莫单抗(Ibritumomab tiuxetan)(Zevalin)、伊匹单抗(Ipilimumab)(Yervoy)、尼沃鲁单抗(Nivolumab)(Opdivo)、奥奴珠单抗(Obinutuzumab)(Gazyva)、奥法木单抗(Ofatumumab)(Arzerra、HuMax-CD20)、帕尼单抗(Panitumumab)(Vectibix)、皮落株单抗(Pembrolizumab)(Keytruda)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)(Perjeta)、雷莫芦单抗(Ramucirumab)(Cyramza)、利妥昔单抗(Rituxan、Mabthera)、司妥昔单抗(Siltuximab)(Sylvant)、托珠单抗(Tocilizumab)、托西莫单抗(Tositumomab)(Bexxar)及曲妥珠单抗(Herceptin)。
抗CD20糖抗体(抗CD20GAb)
「CD20」抗原是分子量大约为35kD的非糖基化跨膜磷蛋白,其发现于来自周边血或淋巴样器官的大于90%的B细胞的表面上。CD20表达于早期前B细胞发育期间且保留至血浆细胞分化;其并未发现于人类干细胞、淋巴样祖细胞或正常血浆细胞上。CD20存在于正常B细胞以及恶性B细胞上。文献中的用于CD20的其他名称包含「B-淋巴球限制分化抗原」及「Bp35」。CD20抗原阐述于(例如)Clark及Ledbetter,Adv.Can Res.52:81-149(1989)及Valentine等人,J.Biol.Chem.264(19):11282-11287(1989)中。
本揭示内容描述新颖种类的抗CD20抗体,称为「抗CD20糖抗体」(「抗CD20GAb」)。抗CD20糖抗体可通过Fc糖改造自抗CD20单株抗体生成。构成均质群体的个别抗CD20糖抗体相同且含有具有充分定义的聚糖结构及序列的相同Fc聚糖。本发明的抗CD20GAb特异性结合细胞膜上人类CD20抗原的相同表位,如其亲代抗体。
本文所用的术语「亲代抗体」是指用于产生抗CD20糖抗体的抗CD20单株抗体。
亲代抗体可通过细胞培养(例如哺乳动物细胞培养、嗜甲醇酵母菌或昆虫细胞系)获得。优选地,亲代抗体是在哺乳动物细胞培养物中产生。亲代抗体可为FDA批准或正处于研发中。实例性亲代抗体包含但不限于利妥昔单抗、奥法木单抗、托西莫单抗、欧力珠单抗(Ocrelizumab)、11B8或7D8(揭示于W02004/035607中)、揭示于WO 2005/103081中的抗CD20抗体(例如C6)、揭示于W02003/68821中的抗CD抗体(例如IMMU-106(来自Immunomedics))、揭示于W02004/103404中的抗CD20抗体(例如AME-133(来自Applied MolecularEvolution/Lilly))及揭示于US 2003/0118592中的抗CD20抗体(例如TRU-015(来自Trubion Pharmaceuticals公司))、90Y标记的2B8鼠类抗体(指定为「Y2B8」,)(Biogen-Idec公司)(例如Anderson等人的美国专利第5,736,137号;ATCC寄存号:HB11388);鼠类及嵌合2H7抗体(例如Robinson等人的美国专利第5,677,180号);人类化2H7抗体(例如rhuMAb2H7及其他形式(Genentech公司))(例如Adams等人的WO 2004/056312及下文所述的其他参考文献);针对CD20的人类单株抗体(GenMab A/S/Medarex公司)(例如Teeling等人的WO 2004/035607及WO 2005/103081);结合CD20的细胞外表位的嵌合或人类化单株抗体(Biomedics公司)(例如Numazaki等人的WO 2006/106959);人类化LL2及类似抗体(Immunomedics公司)(例如Hansen的美国专利第7,151,164号及US 2005/0106108);A20抗体(Immunomedics公司),例如嵌合A20(cA20)或人类化A20抗体(hA20,IMMUN-106T,维妥珠单抗(veltuzumab))(例如Hansen等人的US 2003/0219433);针对CD20的全人类抗体(Amgen/AstraZeneca)(例如Gazit等人的WO 2006/130458);针对CD20的抗体(AvesthaGengraine Technologies Pvt有限公司)(例如Morawala的WO 2006/126069);及CD20的嵌合或人类化B-Ly1抗体(Roche/GlycArt Biotechnology AG),例如GA101(例如WO 2005/044859;US 2005/0123546;US 2004/0072290;及Umana等人的US 2003/0175884)。
在一些实施例中,本文所阐述的实例性抗CD20GAb包括具有SEQ ID NO:1中所陈述氨基酸序列的重链及具有SEQ ID NO:2中所陈述氨基酸序列的轻链。在一优选实施例中,抗CD20GAb包括利妥昔单抗的轻链序列及重链序列。
下表2展示利妥昔单抗的重链及轻链序列
在一些实施例中,N-聚糖附接至Fc区的Asn-297。
本发明的N-聚糖具有Man3GlcNAc2的共有五糖核心,其亦称为「三甘露糖核心」或「五糖核心」,其中「Man」是指甘露糖,「Glc」是指葡萄糖,「NAc」是指N-乙酰基,且GlcNAc是指N-乙酰基葡糖胺。
在一些实施例中,N-聚糖具有二分枝结构。
本文所阐述的N-聚糖可具有链内取代,包括「二等分」GlcNAc。在聚糖于三甘露糖核心上包括二等分GlcNAc时,所述结构表示为Man3GlcNAc3。在聚糖包括附接至三甘露糖核心的核心岩藻糖时,所述结构表示为Man3GlcNAc2(F)。N-聚糖可包括一或多种末端唾液酸(例如N-乙酰基神经胺酸)。表示为「Sia」的结构是指末端唾液酸。唾液酸化可发生于二分枝结构的α1-3或α1-6臂上。
在一些实施例中,本文所阐述的N-聚糖包括至少一个α2-6末端唾液酸。在某些实施例中,N-聚糖包括一个α2-6末端唾液酸。在一优选实施例中,N-聚糖包括两个α2-6末端唾液酸。
在一些实施例中,本文所阐述的N-聚糖包括至少一个α2-3末端唾液酸。在某些实施例中,N-聚糖包括一个α2-3末端唾液酸。在一优选实施例中,N-聚糖包括两个α2-3末端唾液酸。
在一些实施例中,本文所阐述的N-聚糖包括至少一种半乳糖。在某些实施例中,N-聚糖包括一种半乳糖。在一优选实施例中,N-聚糖包括两种半乳糖。
优选地,本揭示内容的N-聚糖不含核心岩藻糖。
表3列示抗CD20糖抗体中的实例性N-聚糖。本揭示内容实施例可包含或不包含本文所列示的任一N-聚糖。
表3.
抗CD20糖抗体的生物特性
Fc上的糖基化可影响各种免疫球蛋白效应物调介的功能,包含ADCC、CDC及循环半衰期。ADCC增进是用于改良治疗抗体药物功效的关键策略。可降低有效药物剂量以达成较低药物成本的益处。本文所阐述的抗CD20糖抗体的特征可在于功能性质。抗CD20GAb具有细胞生长抑制活性,包含针对人类CD20表达细胞的细胞凋亡。在一些实施例中,抗CD20GAb展现强于其亲代抗体的细胞生长抑制活性。
抗CD20糖抗体的ADCC活性
与亲代抗体的ADCC活性相比,本发明糖抗体的增加的ADCC活性为至少约5倍,包含但不限于至少约6倍、约7倍、约8倍、约9倍、约10倍、约15倍、约20倍、约25倍、约30倍、约35倍、约40倍、约50倍、约60倍及约80倍或至少约本文所列示任两个数值之间的范围内的值。
表4列示与利妥昔单抗相比抗CD20GAb的实例性增进的ADCC活性。实例性分析阐述于实例中。
表4.
本文所阐述的诸多抗CD20GAbs、尤其GAb 101及GAb 104与其亲代抗体利妥昔单抗相比展现增进的ADCC活性。本发明糖抗体预计可作为治疗剂展现用于涉及B细胞或由B细胞所产生抗体的B细胞介导的恶性肿瘤及免疫学疾病的优良效应,且本发明目标是使用抗CD20GAb来研发治疗剂。
抗CD20糖抗体的CDC活性
本文所阐述的糖抗体令人吃惊地能够提供改良的ADCC且并不影响CDC。实例性CDC分析阐述于实例中。在实例性实施例中,糖抗体的ADCC有所增加,但其他免疫球蛋白型效应物功能(例如补体依赖性细胞毒性(CDC))保持类似或并不显着影响。
FcγRIII与抗CD20糖抗体之间的结合
表4列示抗CD20GAb及利妥昔单抗的实例性FcγRIIIA结合。可使用业内已知分析量测FcγRIIIA结合。实例性分析阐述于实例中。Fc受体结合可测定为抗CD20GAb对利妥昔单抗的相对比率。实例性实施例中的Fc受体结合增加至少1.2倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍或20倍、30倍、40倍、50倍、100倍或更高。
表5.
与利妥昔单抗相比,结合数据展示,抗CD20GAb、尤其GAb101及GAb104对靶分子CD20展现较强结合亲和力。
总而言之,与利妥昔单抗相比,抗CD20GAb展现增进的ADCC活性及较强FcγRIIIA结合亲和力。本发明糖抗体预计可单独或以包括两种或更多种这些抗体的组合物形式及视情况与其他治疗(例如化学疗法)组合提供优良临床反应。ADCC增进的抗CD20糖抗体预计可提供用于B细胞淋巴瘤及其他疾病的替代治疗。本发明糖抗体可有利地用于改变当前投与途径及当前治疗方案,此乃因其增加的效应物功能意味着其可以较低浓度及较小频率投用,由此减小抗体毒性及/或抗体耐受性产生的可能。另外,改良的效应物功能产生治疗先前抵抗使用重组宿主系统中所产生相应抗CD20单株抗体的治疗或难以治疗的临床适应症的新方式。
抗CD20GAb的制备
本发明的抗CD20糖抗体可通过Fc糖改造自市售或处于临床前或临床研发中的抗CD20单株抗体(「亲代抗体」)产生。优选地,单株抗体是治疗性单株抗体。Fc糖改造可以酶方式或以化学酶方式实施。在一优选实施例中,亲代抗体是利妥昔单抗。
本发明糖抗体中的N-聚糖优选地经去岩藻糖基化。
N-聚糖的去岩藻糖基化是去除Fc结构域的N-聚糖中的核心岩藻糖的过程。可以酶方式采用去岩藻糖基化。因N-聚糖埋入两个Fc结构域之间,酶去岩藻糖基化效率因空间阻碍(亦即,岩藻糖苷酶至岩藻糖残基的接近由Fc结构域的位置阻断)而极低。
业内已知许多α-岩藻糖苷酶。实例包含来自角蝾螺(Turbo cornutus)、白法螺(Charonia lampas)、粪炭疽杆菌(Bacillus fulminans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、牛肾(Glyko)、鸡肝的α-岩藻糖苷酶(Tyagarajan等人,1996,Glycobiology 6:83-93)及来自木薯黄单孢杆菌(Xanthomonas manihotis)的α-岩藻糖苷酶II(Glyko,PROzyme)。许多种类的岩藻糖苷酶亦市面有售(尤其是Glyko,Novato,Calif.;PROzyme,San Leandro,Calif.;Calbiochem-Novabiochem公司,SanDiego,Calif.)。然而,已知并无α-岩藻糖苷酶自N-连接聚糖有效去除核心岩藻糖。
WO 2013/12066揭示通过来自牛肾的α-岩藻糖苷酶对(Fucαl,6)GlcNAc-利妥昔单抗实施去岩藻糖基化。如WO 2013/12066中所阐述,将(Fucαl,6)GlcNAc-利妥昔单抗的反应混合物与来自牛肾的α-岩藻糖苷酶(自Prozyme购得)在37℃下一起培育20天以完全去除(Fucαl,6)GlcNAc-利妥昔单抗中的岩藻糖。
已报导免疫球蛋白的热不稳定性(Vermeer等人,Biophys J.Jan 78:394-404(2000))。Fab片段对热处理最敏感,而Fc片段对降低的pH最敏感。为检验抗体的热稳定性及功能活性,实施与WO 2013/12066中所阐述相同的实验,且发现在37℃下热处理3天的后抗体损失对CD20的约10%的结合亲和力。另外,发现在37℃下热处理7天之后,抗体损失对CD20的约20%的结合亲和力。预计在延长热处理(例如在37℃下20天)之后,抗体显着损失对CD20的结合亲和力,如WO 2013/12066中所阐述。
在试图合成具有改良治疗价值的糖抗体时,意外发现能够自N-连接聚糖有效去除岩藻糖残基的脆弱类杆菌(Bacteroides fragilis)α-岩藻糖苷酶(GenBank登录编号:YP_212855.1)。已使用特异性酶成功达成有效去岩藻糖基化。重要的是,已通过使用产生N-聚糖的简易去岩藻糖基化的特异性α-岩藻糖苷酶来有益地改良制备本发明糖抗体的效率,如图1中所图解说明。
因此,本发明提供α-岩藻糖苷酶的组合物及使用α-岩藻糖苷酶去除N-聚糖的核心岩藻糖的改良方法。α-岩藻糖苷酶包括氨基酸序列与SEQ ID NO:5的序列具有至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致性的多肽或其变体。去岩藻糖基化的改良方法包括使抗体与α-岩藻糖苷酶接触,且其中α-岩藻糖苷酶包括氨基酸序列与SEQ ID NO:5的序列具有至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致性的多肽、变体或其片段。
本文所阐述者包含制备抗CD20糖抗体的改良方法,所述方法包括以下步骤:(a)使抗CD20单株抗体与α-岩藻糖苷酶及至少一种糖苷内切酶接触,由此得到具有单一N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)的去岩藻糖基化抗体,及(b)在适宜条件下向GlcNAc中添加碳水化合物部分。
在一些实施例中,本发明方法的抗CD20单株抗体是利妥昔单抗。
使用糖苷内切酶修剪N-聚糖中的寡糖的可变部分。本文所用的糖苷内切酶的实例包含但不限于EndoA、EndoF、EndoF1、EndoF2、EndoF3、EndoH、EndoM、EndoS、EndoS2及其变体。
本发明方法的α-岩藻糖苷酶包括氨基酸序列与SEQ ID NO:5的序列具有至少85%一致性的多肽、其功能变体。
在一些实施例中,α-岩藻糖苷酶包括氨基酸序列与SEQ ID NO:5的序列具有至少90%或95%一致性的多肽、其变体或片段。
在某些实施例中,α-岩藻糖苷酶是重组类杆菌(Bacteroides)α-岩藻糖苷酶。
本发明方法中的步骤(a)得到具有单一N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)的去岩藻糖基化抗体。随后使用转糖苷酶实施酶调介糖基化以向GlcNAc中添加指定碳水化合物部分且延长糖链。可由此产生糖抗体的均质群体。如本文所阐述的转糖苷酶的实例包含但不限于EndoA、EndoF、EndoF1、EndoF2、Endo F3、EndoH、EndoM、EndoS、Endo S2及其变体。
在一些实施例中,本发明方法的碳水化合物部分是选自由以下组成的群:Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、GalGlcNAcMan3GlcNAc2、Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、GlcNAc3Man3GlcNAc2、GlcNAc2Man3GlcNAc2、GlcNAcMan3GlcNAc2及Man3GlcNAc2
在优选实施例中,碳水化合物部分是选自由以下组成的群:Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、GalGlcNAcMan3GlcNAc2及Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2
本发明方法中的步骤(b)引起糖链延伸。糖链延伸的一种方法是经由酶催化糖基化反应。业内众所周知,使用糖恶唑啉作为酶催化糖基化反应中的糖供体进行糖基化可用于合成寡糖,此乃因糖基化反应是加成反应且其进行并不伴随酸、水或诸如此类的任何消除。(Fujita等人,Biochim.Biophys.Acta 2001,1528,9-14)
在一些实施例中,碳水化合物部分是糖恶唑啉。
适宜条件亦包含将反应混合物培育至少20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟、70分钟、80分钟、90分钟或100分钟、优选地小于60分钟。培育优选地发生于室温下、更优选地在大约20℃、25℃、30℃、35℃、40℃或45℃下及最优选地在大约37℃下。
应理解,本发明的α-岩藻糖苷酶的多肽可进行衍生或改质以有助于其分离或纯化。因此,在本发明的一实施例中,通过添加能够直接及特异性结合分离构件的配体来衍生或改质用于本发明的多肽。另一选择为,通过添加结合对的一个成员来衍生或改质多肽且分离构件包括通过添加结合对的另一成员来衍生或改质的试剂。可使用任何适宜结合对。在通过添加结合对的一个成员来衍生或改质用于本发明的多肽的一优选实施例中,多肽优选地加组胺酸卷标或加生物素卷标。通常,在基因层面上包含组胺酸或生物素卷标的氨基酸编码序列且蛋白质重组表达于大肠杆菌(E.coli.)中。组胺酸或生物素标签通常存在于多肽的一端(在N-末端或C-末端处)。组胺酸标签通常是由6个组胺酸残基组成,但其可长于此长度(通常长达7、8、9、10或20个氨基酸)或较短(例如5、4、3、2或1个氨基酸)。另外,组胺酸标签可含有一或多种氨基酸取代、优选地如上文所定义的保守取代。
如本文所阐述的变体多肽是彼等氨基酸序列自SEQ ID NO:5中的氨基酸序列有所变化者,但与包括具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的多肽的酶展现相同或类似功能。
如本文中所使用,关于序列的序列一致性百分比(%)定义为在比对序列且引入间隙(若需要)以达成最大百分比序列的后,候选多肽序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的一致性百分比。出于确定序列一致性百分比的目的,比对可以熟习此项技术者所熟知的多种方式来达成,例如使用可公开获得的计算机软件,例如BLAST、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。彼等熟习此项技术者可测定用于量测比对的适当参数,包含在所比较序列的全长范围内达成最大比对所需要的任何算法。
本发明的一些优选实施例显示于实例中。
用于人类化非人类抗体的方法为业内所熟知。通常,人类化抗体具有自非人类来源引入至其中的一或多个氨基酸残基。这些非人类氨基酸残基经常称为「引入」残基,其通常取自「引入」可变结构域。基本上可遵循Winter及合作者的方法(Jones等人,Nature,321:522-525(1986);Riechmann等人,Nature,332:323-327(1988);Verhoeyen等人,Science,239:1534-1536(1988))通过用啮齿类动物的CDR序列取代人类抗体的对应序列来实施人类化。因此,这些「人类化」抗体为嵌合抗体(美国专利第4,816,567号),其中实质上少于一个完好人类可变结构域已由来自非人类物种的对应序列所取代。实际上,人类化抗体通常为人类抗体,其中一些CDR残基及可能一些FR残基由来自啮齿类动物抗体中类似位点的残基所取代。
拟用于制备人类化抗体的人类可变结构域(轻及重)的选择对于减小抗原性极为重要。根据所谓的「最佳拟合」方法,针对已知人类可变结构域序列的整个文库来筛选啮齿类动物抗体的可变结构域的序列。然后将最接近啮齿类动物的人类序列视为用于人类化抗体的人类框架(FR)(Sims等人,J.Immunol.,151:2296(1993);Chothia等人,J.Mol.Biol.,196:901(1987))。另一方法使用衍生自轻链或重链的特定子组的所有人类抗体的共有序列的特定框架。相同框架可用于若干不同人类化抗体(Carter等人,Proc.Natl.AcadSci.USA,89:4285(1992);Prestaetal.,J.Immnol.,151:2623(1993))。
另外重要的是,人类化抗体应保留对抗原的高亲和力及其他有利的生物性质。为达成此目标,根据优选方法可通过使用亲代与人类化序列的三维模型分析亲代序列及各种概念性人类化产物的方法来制备人类化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是市面有售且为彼等熟习此项技术者所熟知。可使用计算机程序,这些计算机程序可阐释并显示所选候选免疫球蛋白序列的可能的三维构型结构。通过观察这些显示内容可分析残基在候选免疫球蛋白序列功能行使中的可能作用,亦即分析可影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以此方式,可自接受者序列及引入序列中选择FR残基并合并以达成期望抗体特性,例如对靶抗原的亲和力增加。一般而言,CDR残基直接且最为实质性地参与影响抗原结合。
另一选择为,目前可产生转基因动物(例如小鼠),这些转基因动物在免疫后能够在不产生内源性免疫球蛋白的情况下产生完整人类抗体谱。举例而言,已阐述在嵌合及种系突变体小鼠中抗体重链接合区(JH)基因的纯合缺失导致内源性抗体产生的完全抑制。将人类种系免疫球蛋白基因数组转入这些种系突变体小鼠中可在受到抗原攻击后引起人类抗体的产生。例如参见Jakobovits等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:2551(1993);Jakobovits等人,Nature,362:255-258(1993);Bruggermann等人,Year in Immuno.,7:33(1993).人类抗体亦可衍生自噬菌体展示文库(Hoogenboom等人,J.Mol.Biol.,227:381(1991);Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991))。
抗HER2糖抗体(抗HER2GAb)
HER2基因在大约30%的乳癌中过度表达或扩增。具有HER2过度表达或扩增的乳癌患者具有缩短的无疾病及总体存活期。HER2蛋白质可视为用于过度表达HER2基因的癌症的抗体疗法的独特及有用靶。单株抗体抗HER2曲妥珠单抗已成功用于与此靶相关的恶性癌症的疗法,其由FDA在1998年批准用于治疗过度表达HER2的乳癌。仍需要针对HER2的改良治疗抗体,其更有效地预防及/或治疗各种涉及表达HER2的细胞的疾病,包含但不限于乳癌。
本揭示内容描述新颖种类的抗HER2抗体,称为「抗HER2糖抗体」(「抗HER2GAb」)。抗HER2糖抗体可通过Fc糖改造自抗HER2单株抗体生成。构成均质群体的个别抗HER2糖抗体相同且含有具有充分定义的聚糖结构及序列的相同Fc聚糖。本发明的抗HER2GAb特异性结合人类HER2抗原的相同表位,如其亲代抗体。
本文所用的术语「亲代抗体」是指用于产生抗HER2糖抗体的抗HER2单株抗体。
亲代抗体可通过细胞培养(例如哺乳动物细胞培养、嗜甲醇酵母菌或昆虫细胞系)获得。优选地,亲代抗体是在哺乳动物细胞培养物中产生。亲代抗体可为FDA批准或正处于研发中。FDA批准的抗HER2治疗抗体包含曲妥珠单抗(Herceptin)、拉帕替尼(Lapatinib)(Tykerb)、帕妥珠单抗(Perjeta)、Ado-艾曲妥珠单抗(Kadcyla,Genentech)。
在一些实施例中,本文所阐述的抗HER2GAb包括具有SEQ ID NO:3中所陈述氨基酸序列的重链及具有SEQ ID NO:4中所陈述氨基酸序列的轻链。在一优选实施例中,抗HER2GAb包括曲妥珠单抗的轻链序列及重链序列。
下表7展示曲妥珠单抗的重链及轻链序列
表7.
Fc上的糖基化可影响各种免疫球蛋白效应物调介的功能,包含ADCC、CDC及循环半衰期。ADCC增进是用于改良治疗抗体药物功效的关键策略。可降低有效药物剂量以达成较低药物成本的益处。本文所阐述的抗HER2糖抗体的特征可在于功能性质。抗HER2GAb具有细胞生长抑制活性,包含针对人类HER2表达细胞的细胞凋亡。在一些实施例中,抗HER2GAb展现强于其亲代抗体的细胞生长抑制活性。
与亲代抗体的ADCC活性相比,本发明糖抗体的ADCC活性增加至少3倍、优选地至少9倍、更优选地ADCC活性增加至少10倍、优选地ADCC活性增加至少12倍、优选地ADCC活性增加至少20倍、最优选地ADCC活性增加至少30倍。
可与亲代抗体相比使用靶癌症细胞系(例如SKBR5、SKBR3、LoVo、MCF7、OVCAR3及/或Kato III)来量测发明性糖抗体的ADCC裂解活性。
表8列示与曲妥珠单抗相比抗HER2GAb的实例性增进的ADCC活性。实例性分析阐述于实例中。
表8.
与其亲代抗体利妥昔单抗相比,本文所阐述的诸多抗HER2GAb、尤其GAb101及GAb104展现增进的ADCC活性。本发明糖抗体预计可作为治疗剂展现用于HER2阳性疾病的优良效应,且本发明目标是使用抗HER2GAb来研发治疗剂。
本文所阐述的糖抗体令人吃惊地能够提供改良的ADCC且并不影响CDC。实例性CDC分析阐述于实例中。在实例性实施例中,糖抗体的ADCC有所增加,但其他免疫球蛋白型效应物功能(例如补体依赖性细胞毒性(CDC))保持类似或并不显着影响。
表9列示抗HER2GAb及Herceptin的实例性FcγRIIIA结合。
表9.
可使用业内已知分析量测FcγRIIIA结合。实例性分析阐述于实例中。Fc受体结合可测定为抗HER2GAb对曲妥珠单抗的相对比率。实例性实施例中的Fc受体结合增加至少2.5倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍或20倍、30倍、40倍、50倍或更高。
与曲妥珠单抗相比,结合数据展示,抗HER2GAb、尤其GAb101及GAb104对靶分子HER2展现较强结合亲和力。
总而言之,与曲妥珠单抗相比,抗HER2GAb、尤其GAb101展现增进的ADCC活性及较强FcγRIIIA结合亲和力。本发明糖抗体预计可单独或优选地以包括两种或更多种这些抗体的组合物形式及视情况与其他治疗(例如化学疗法)组合提供优良临床反应。ADCC增进的抗HER2糖抗体预计可提供用于HER2阳性疾病的替代治疗。本发明糖抗体可有利地用于改变当前投与途径及当前治疗方案,此乃因其增加的效应物功能意味着其可以较低浓度及较小频率投用,由此减小抗体毒性及/或抗体耐受性产生的可能。另外,其改良的效应物功能产生治疗先前抵抗使用重组宿主系统中所产生相应抗HER2单株抗体的治疗或难以治疗的临床适应症的新方式。
本发明的抗HER2糖抗体可通过Fc糖改造自市售或处于临床前或临床研发中的抗HER2单株抗体(「亲代抗体」)产生。优选地,单株抗体是治疗性单株抗体。Fc糖改造可以酶方式或以化学酶方式实施。在一优选实施例中,亲代抗体是曲妥珠单抗。
本发明糖抗体中的N-聚糖优选地经去岩藻糖基化。
制备抗HER2糖抗体的方法类似于本文所阐述制备抗CD20糖抗体的方法。简言之,所述方法包括以下步骤:(a)使抗HER2单株抗体与α-岩藻糖苷酶及至少一种糖苷内切酶接触,由此得到具有单一N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)的去岩藻糖基化抗体,及(b)在适宜条件下向GlcNAc中添加期望碳水化合物部分。
在优选实施例中,碳水化合物部分是Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc。
(II)用于自体免疫性及/或发炎的糖抗体
本文所阐述的糖抗体可用于治疗自体免疫性及/或发炎。用于自体免疫性及发炎的实例性单株抗体包含但不限于那他珠单抗(Natalizumab)(Tysabri;Biogen Idec/Elan)、维多珠单抗(Vedolizumab)(MLN2;Millennium Pharmaceuticals/Takeda)、贝利木单抗(Benlysta;Human Genome Sciences/GlaxoSmithKline)、阿塞西普(Atacicept)(TACI-Ig;Merck/Serono)、阿来塞普(Alefacept)(Amevive;Astellas)、奥泰朱单抗(Otelixizumab)(TRX4;Tolerx/GlaxoSmithKline)、泰利珠单抗(Teplizumab)(MGA031;MacroGenics/Eli Lilly)、利妥昔单抗(Rituxan/Mabthera;Genentech/Roche/BiogenIdec)、奥法木单抗(Arzerra;Genmab/GlaxoSmithKline)、欧力珠单抗(Ocrelizumab)(2H7;Genentech/Roche/Biogen Idec)、依哌佐单抗(Epratuzumab)(hLL2;Immunomedics/UCB)、阿来组单抗(Campath/MabCampath;Genzyme/Bayer)、阿巴西普(Abatacept)(Orencia;Bristol-Myers Squibb)、艾库珠单抗(Eculizumab)(Soliris;Alexionpharmaceuticals)、奥马珠单抗(Omalizumab)(Xolair;Genentech/Roche/Novartis)、卡那单抗(Ilaris;Novartis)、美泊利单抗(Mepolizumab)(Bosatria;GlaxoSmithKline)、来利珠单抗(Reslizumab)(SCH55700;Ception Therapeutics)、托珠单抗(Actemra/RoActemra;Chugai/Roche)、优特克单抗(Ustekinumab)(Stelara;Centocor)、布雷奴单抗(Briakinumab)(ABT-874;Abbott)、依那西普(Etanercept)(Enbrel;Amgen/Pfizer)、英夫利昔单抗(Infliximab)(Remicade;Centocor/Merck)、阿达木单抗(Humira/Trudexa;Abbott)、赛妥珠单抗(Certolizumab pegol)(Cimzia;UCB)及戈利木单抗(Golimumab)(Simponi;Centocor)。
抗TNFα糖抗体(抗TNFαGAb)
单核球及巨噬细胞对于内毒素或其他刺激反应而分泌称为肿瘤坏死因子-α(TNFα)及肿瘤坏死因子-β(TNFβ)的细胞介素。TNFα是可溶性17kD蛋白质亚单位的同三聚体(homotrimer)(Smith,等人,J.Biol.Chem.262:6951-6954(1987))。亦存在TNF的膜结合26kD前体形式(Kriegler等人,Cell 53:45-53(1988))。TNF-α是发炎反应的强诱导剂,是先天免疫性的关键调节剂且在调节针对细胞内细菌及某些病毒感染的Th1免疫反应中发挥重要作用。然而,失调的TNF亦可有助于诸多病理学情况。这些病理情况包含免疫介导的发炎疾病(IMIDs),包含类风湿性关节炎、克罗恩氏病(Crohn's disease)、牛皮癣性关节炎、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎及严重慢性斑块状牛皮癣。
本揭示描述新颖种类的抗TNFα单株抗体,称为「抗TNFα糖抗体」(「抗TNFαGAb」)。抗TNFα糖抗体可自抗TNFα单株抗体(「亲代抗体」)由Fc糖改造生成。本文所用的术语「亲代抗体」是指用于产生抗TNFα糖抗体的抗TNFα单株抗体。构成均质群体的个别抗TNFα糖抗体相同且含有明确定义的聚糖结构及序列的相同Fc聚糖。本发明的抗TNFα糖抗体可结合人类TNFα抗原的相同表位,如其亲代抗体。
亲代抗体可在诸如哺乳动物细胞、嗜甲醇酵母菌或昆虫细胞等细胞中产生。优选地,亲代抗体是在哺乳动物细胞中产生。亲代抗体可为FDA批准或正处于研发中。经批准或处于研发中的抗TNFα单株抗体包含英夫利昔单抗、阿达木单抗、戈利木单抗、CDP870(赛妥珠单抗)、TNF-TeAb及CDP571。
本发明的抗TNFα糖抗体可包括具有SEQ ID NO:1中所述氨基酸序列的重链及具有SEQ ID NO:2中所述氨基酸序列的轻链。本发明的抗TNFα糖抗体可包括阿达木单抗的轻链序列及重链序列。下表10展示阿达木单抗的重链及轻链序列
表10.
本发明的抗TNFα糖抗体可通过Fc糖改造自抗TNFα单株抗体(「亲代抗体」)产生。在一些实施例中,亲代抗体是阿达木单抗
制备抗TNFα糖抗体的方法类似于本文所阐述制备抗CD20糖抗体的方法。简言之,所述方法包括以下步骤:(a)使抗TNFα单株抗体与α-岩藻糖苷酶及至少一种糖苷内切酶接触,由此得到具有单一N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)的去岩藻糖基化抗体,及(b)在适宜条件下向GlcNAc中添加期望碳水化合物部分。
在优选实施例中,碳水化合物部分是Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc。
(III)用于传染性疾病的糖抗体
在一些实施例中,本文所阐述的糖抗体可用于治疗传染性疾病。
用于传染性疾病的实例性单株抗体包含但不限于抗依波拉(Ebola)抗体(例如MB-003(c13C6、h13F6及c6D8)、ZMab(m1H3、m2G4及m4G7)及ZMapp(c13C6、c2G4、c4G7))、抗HIV抗体(例如_VRC01、VRC02、VRC03、VRC06、b12、HJ16、8ANC131、8ANC134、CH103、NIH45、NIH46、NIH45G54W、NIH46G54W、3BNC117、3BNC60、VRC-PG04、1NC9、12A12、12A21、VRC23、PG9、PGT145、PGDM1400、PG16、2G12、PGT121、PGT128、PGT135、4E10、10E8、Z13及2F5)及抗流感抗体(例如C179、CR6261、F10、FI6、CR8020、CH65、C05、TCN-032、D005、CR9114及S139/1)。
抗病毒糖抗体
在一些实施例中,本揭示内容描述新颖种类的糖改造FI6单株抗体。FI6单株抗体是中和抗流感A病毒抗体。中和抗体对流感A病毒具有反应。抗体的重链及轻链的氨基酸序列是彼等阐述于PCT公开案WO 2013011347中者。
制备FI6糖抗体的方法类似于本文所阐述制备抗CD20糖抗体的方法。简言之,所述方法包括以下步骤:(a)使FI6单株抗体与α-岩藻糖苷酶及至少一种糖苷内切酶接触,由此得到具有单一N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)的去岩藻糖基化抗体,及(b)在适宜条件下向GlcNAc中添加期望碳水化合物部分。
在优选实施例中,碳水化合物部分是Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc。
医药组合物
本揭示内容的医药组合物可用于治疗。举例而言,所述医药组合物可用于预防、治疗或改善一或多种与期望由FcγR调介的效应细胞功能(例如ADCC)的增进功效的疾病、病症或感染(例如癌症、自体免疫疾病、传染性疾病)有关的症状,且可用于增进其效应通过ADCC调介的治疗抗体的治疗功效。
在制备如本文所阐述的抗体之后,可产生「预冻干调配物」。用于制备调配物的抗体优选地基本上纯且期望地基本上均质(亦即不含污染蛋白质等)。「基本上纯」蛋白质意指基于组合物的总重量包括至少约90重量%蛋白质、优选地至少约95重量%的组合物。「基本上均质」蛋白质意指基于组合物的总重量包括至少约99重量%蛋白质的组合物。在某些实施例中,蛋白质是抗体。
考虑期望剂量体积、投与模式等来确定预冻干调配物中的抗体量。在所选蛋白质是完整抗体(全长抗体)的情形下,约2mg/mL至约50mg/mL、优选地约5mg/mL至约40mg/mL及最优选地约20-30mg/mL是实例性起始蛋白质浓度。蛋白质通常存在于溶液中。举例而言,蛋白质可存在于pH为约4-8及优选地约5-7的pH缓冲溶液中。实例性缓冲剂包含组胺酸、磷酸盐、Tris、柠檬酸盐、琥珀酸盐及其他有机酸。缓冲剂浓度可为约1mM至约20mM或约3mM至约15mM,此端视(例如)缓冲剂及调配物(例如复原调配物)的期望等渗性而定。优选缓冲剂是组胺酸,其中如下文所显示此可具有冻干保护性质。经证实,琥珀酸盐为另一有用缓冲剂。
将冻干保护剂添加至预冻干调配物中。在优选实施例中,冻干保护剂是非还原糖,例如蔗糖或海藻糖。预冻干调配物中冻干保护剂的量通常应使得在复原后所得调配物等渗。然而,高渗复原调配物亦可适宜。此外,冻干保护剂的量不应过低而使蛋白质在冻干后发生不可接受的程度的降解/聚集。在冻干保护剂是糖(例如蔗糖或海藻糖)且蛋白质是抗体的情形下,预冻干调配物中的实例性冻干保护剂浓度为约10mM至约400mM及优选地约30mM至约300mM及最优选地约50mM至约100mM。
选择用于每一蛋白质及冻干保护剂的蛋白质对冻干保护剂的组合比率。在使用抗体作为所选蛋白质且使用糖(例如蔗糖或海藻糖)作为冻干保护剂以用于生成具有高蛋白质浓度的等渗复原调配物的情形下,冻干保护剂对抗体的莫耳比率可为约100莫耳至约1500莫耳冻干保护剂对1莫耳抗体及优选地约200莫耳至约1000莫耳冻干保护剂对1莫耳抗体、例如约200莫耳至约600莫耳冻干保护剂对1莫耳抗体。
在本发明的优选实施例中,已发现期望将表面活性剂添加至预冻干调配物中。另一选择为,或此外,可将表面活性剂添加至冻干调配物及/或复原调配物中。实例性表面活性剂包含非离子型表面活性剂,例如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或80);泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛沙姆188);曲拉通(Triton);十二烷基硫酸钠(SDS);月桂基硫酸钠;辛基糖苷钠;月桂基-、肉豆蔻基-、亚麻油基-或硬脂酰基-磺基甜菜碱;月桂基-、肉豆蔻基-、亚麻油基-或硬脂酰基-肌胺酸;亚麻油基-、肉豆蔻基-或鲸蜡基-甜菜碱;月桂酰胺基丙基-、椰子酰胺基丙基-、亚麻油酰胺基丙基-、肉豆蔻酰胺基丙基-、棕榈油酰胺基丙基-或异硬脂酰胺基丙基-甜菜碱(例如月桂酰胺基丙基);肉豆蔻酰胺基丙基-、棕榈油酰胺基丙基-或异硬脂酰胺基丙基-二甲胺;甲基椰油基牛黄酸钠或甲基油基牛磺酸二钠;及MONAQUATTM系列(Mona Industries公司,Paterson,N.J.)、聚乙二醇、聚丙二醇及乙二醇与丙二醇的共聚物(例如Pluronics、PF68等)。所添加表面活性剂的量应可减少复原蛋白质的聚集并使在复原后微粒的形成最小化。举例而言,表面活性剂可以约0.001-0.5%及优选地约0.005-0.05%的量存在于预冻干调配物中。
在本发明的某些实施例中,在制备预冻干调配物时使用冻干保护剂(例如蔗糖或海藻糖)及增积剂(例如甘露醇或甘胺酸)的混合物。增积剂可使得产生均匀冻干饼状物且其中并无过量气穴等。
其他医药上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂(例如彼等阐述于Remington'sPharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)中者)可包含于预冻干调配物(及/或冻干调配物及/或复原调配物)中,前提是其不会不利地影响调配物的期望特性。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所用剂量及浓度下对接受者无毒且包含:额外缓冲剂;防腐剂;共溶剂;抗氧化剂,包含抗坏血酸及甲硫胺酸;螯合剂,例如EDTA;金属错合物(例如Zn-蛋白质错合物);生物可降解聚合物,例如聚酯;及/或成盐抗衡离子,例如钠。
本文所阐述的医药组合物及调配物优选地较为稳定。「稳定」调配物/组合物是以下物质:其中抗体在储存后基本上保持其物理及化学稳定性及完整性。用于量测蛋白质稳定性的各种分析技术在业内可获得且综述于Peptide and Protein Drug Delivery,247-301,Vincent Lee编辑,Marcel Dekker公司,New York,N.Y.,Pubs.(1991)及Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10:29-90(1993)中。可于所选时间段的所选温度下量测稳定性。
用于活体内投与的调配物必须无菌。此易于通过过滤经由无菌过滤膜在冻干及复原之前或之后达成。另一选择为,举例而言,可通过在约120℃下对除蛋白质外的成份实施高压灭菌约30分钟来达成整个混合物的无菌性。
在将蛋白质、冻干保护剂及其他可选组份混合至一起之后,将调配物冻干。许多不同冻干剂可用于此目的,例如(Hull,USA)或(Leybold-Heraeus,Germany)冻干剂。冷冻-干燥是通过冷冻调配物且随后使来自冷冻内容物的冰在适于初级干燥的温度下升华来达成。在此条件下,产物温度低于调配物的共熔点或陷缩温度。通常,在通常介于约50毫托至250毫托之间的适宜压力下,用于初级干燥的搁板温度将介于约-30℃至25℃之间(前提是产物在初级干燥期间保持冷冻)。容纳试样的容器(例如玻璃小瓶)的调配物、大小及类型以及液体体积主要取决于干燥所需的时间,其可介于几小时至数天(例如40-60hr)之间。二级干燥阶段可在约0-40℃下实施,其主要取决于容器的类型及大小及所采用蛋白质的类型。然而,在本文中发现,二级干燥步骤可能未必需要。举例而言,冻干的整个除水期中的搁板温度可介于约15℃-30℃(例如约20℃)之间。二级干燥所需的时间及压力将使得产生适宜冻干饼状物,此端视(例如)温度及其他参数而定。二级干燥时间取决于产物中的期望残余水分含量,且通常持续至少约5小时(例如10-15小时)。压力可与初级干燥步骤期间所采用的压力相同。冷冻-干燥条件可端视调配物及小瓶大小而变化。
在一些情况下,可期望在容器中冻干蛋白质调配物,其中复原蛋白质以避免转移步骤。此情况下的容器可为(例如)3、5、10、20、50或100cc小瓶。作为一般主张,冻干将得到冻干调配物,其中其水分含量小于约5%及优选地小于约3%。
在期望阶段、通常在向患者投与蛋白质时,可使用稀释剂复原冻干调配物,从而复原调配物中的蛋白质浓度为至少50mg/mL、例如约50mg/mL至约400mg/mL、更优选地约80mg/mL至约300mg/mL及最优选地约90mg/mL至约150mg/mL。复原调配物中的这些高蛋白质浓度可视为尤其可用于预期皮下递送复原调配物的情形。然而,对于其他投与途径(例如静脉内投与)而言,可能期望复原调配物中的蛋白质浓度较低(例如在复原调配物中约5-50mg/mL或约10-40mg/mL蛋白质)。在某些实施例中,复原调配物中的蛋白质浓度显着高于预冻干调配物。举例而言,复原调配物中的蛋白质浓度可为预冻干调配物的约2-40倍、优选地3-10倍及最优选地3-6倍(例如至少三倍或至少四倍)。
复原通常是在约25℃的温度下进行以确保完全水合,但可视需要采用其他温度。复原所需的时间将端视(例如)稀释剂的类型、赋形剂及蛋白质的量而定。实例性稀释剂包含无菌水、注射用抑菌水(BWFI)、pH缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液(Ringer's solution)或右旋糖溶液。稀释剂视情况含有防腐剂。实例性防腐剂已在上文中加以阐述,且诸如苄醇或酚醇等芳族醇为优选防腐剂。利用蛋白质及防腐剂功效测试通过评价不同防腐剂浓度的兼容性来测定所采用防腐剂的量。举例而言,若防腐剂是芳族醇(例如苄醇),则其可以约0.1%-2.0%及优选地约0.5%-1.5%但最优选地约1.0%-1.2%的量存在。优选地,复原调配物具有小于6000个颗粒/小瓶,这些颗粒的大小>10μm。
治疗应用
本文所揭示者包含预防、治疗或改善一或多种与疾病、病症或感染有关的症状的方法,所述方法包括向有需要的个体投与治疗有效量的本文所阐述的医药组合物。疾病、病症或感染包含但不限于癌症、自体免疫病症、发炎性病症及传染性感染。
(I)癌症的治疗
本揭示内容的医药组合物可用于癌症。本文所揭示者包含治疗患者的癌症的方法,所述方法包括向患者投与有效量的本文所阐述的医药组合物。
癌症的实例包含但不限于听神经瘤、腺癌、肾上腺癌、肛门癌、血管肉瘤(例如淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、血管肉瘤)、盲肠癌、良性单株丙球血症、胆管癌(例如胆管上皮癌)、膀胱癌、乳癌(例如乳腺癌、乳头状癌、乳房癌、乳房髓质癌瘤)、脑癌(例如脑膜瘤;神经胶质瘤,例如星形细胞瘤、少突神经胶质瘤;髓母细胞瘤)、支气管癌、类癌肿瘤、子宫颈癌(例如子宫颈腺癌)、绒毛膜癌、脊索瘤、颅咽管瘤、结肠直肠癌(例如结肠癌、直肠癌、结肠直肠腺癌)、上皮癌瘤、室管膜瘤、内皮肉瘤(例如卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、多发性特发性出血性肉瘤)、子宫内膜癌(例如子宫癌、子宫肉瘤)、食道癌(例如食道腺癌、巴雷特氏腺癌(Barrett’s adenocarinoma))、尤因氏肉瘤(Ewing sarcoma)、眼癌(例如眼内黑素瘤、视网膜母细胞瘤)、家族性嗜伊红细胞增多症、胆囊癌、胃癌(例如胃腺癌)、胃肠道间质肿瘤(GIST)、头颈癌(例如头颈鳞状细胞癌瘤)、口腔癌(例如口腔鳞状细胞癌瘤(OSCC)、喉癌(例如喉头癌、咽癌、鼻咽癌、口咽癌))、造血癌症(例如白血病,例如急性淋巴细胞性白血病(ALL)(例如B细胞ALL、T细胞ALL)、急性髓细胞白血病(AML)(例如B细胞AML、T细胞AML)、慢性髓细胞白血病(CML)(例如B细胞CML、T细胞CML)及慢性淋巴细胞性白血病(CLL)(例如B细胞CLL、T细胞CLL);淋巴瘤,例如何杰金氏淋巴瘤(HL)(例如B细胞HL、T细胞HL)及非何杰金氏淋巴瘤(NHL)(例如B细胞NHL,例如弥漫性大细胞淋巴瘤(DLCL)(例如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)))、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、外套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区B细胞淋巴瘤(例如黏膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤、结节边缘区B细胞淋巴瘤、脾脏边缘区B细胞淋巴瘤)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤(亦即「瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症」)、多毛细胞白血病(HCL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前驱B-淋巴母细胞淋巴瘤及原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤;及T细胞NHL,例如前驱T-淋巴母细胞淋巴瘤/白血病、周边T细胞淋巴瘤(PTCL)(例如皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)(例如蕈样真菌病、塞扎里症候群(Sezary syndrome))、血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、结节外天然杀伤T细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、退行性大细胞淋巴瘤);如上文所阐述的一或多种白血病/淋巴瘤的混合物;及多发性骨髓瘤(MM))、重链疾病(例如α链疾病、γ链疾病、μ链疾病)、血管母细胞瘤、发炎性肌纤维母细胞肿瘤、免疫细胞淀粉样变性、肾癌(例如肾母细胞瘤(亦称为维尔姆斯氏肿瘤(Wilms’tumor)、肾细胞癌瘤)、肝癌(例如肝细胞癌(HCC)、恶性肝瘤)、肺癌(例如支气管原癌瘤、小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌)、平滑肌肉瘤(LMS)、肥大细胞增多症(例如全身性肥大细胞增多症)、骨髓增殖异常症候群(MDS)、间皮瘤、骨髓增殖性病症(MPD)(例如真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原因不明性髓样化生(AMM)(亦称为骨髓纤维化(MF))、慢性特发性骨髓纤维化、慢性髓细胞白血病(CML)、慢性嗜中性白血病(CNL)、嗜酸细胞增多症候群(HES))、神经母细胞瘤、神经纤维瘤(例如神经纤维瘤病(NF)类型1或类型2、神经鞘瘤病)、神经内分泌癌(例如胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NET)、类癌肿瘤)、骨肉瘤、卵巢癌(例如囊腺癌、卵巢胚胎性癌瘤、卵巢腺癌)、乳头状腺癌、胰脏癌(例如胰脏腺癌、胰管内乳头状黏液性赘瘤(IPMN)、岛细胞肿瘤)、阴经癌(例如阴经及阴囊的佩吉特氏病(Paget’s disease))、松果体瘤、原始神经外胚层肿瘤(PNT)、前列腺癌(例如前列腺腺癌)、直肠癌、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、皮肤癌(例如鳞状细胞癌瘤(SCC)、角质棘皮瘤(KA)、黑素瘤、基底细胞癌瘤(BCC))、小肠癌(例如盲肠癌)、软组织肉瘤(例如恶性性纤维组织细胞瘤(MFH)、脂肪肉瘤、恶性周边神经鞘肿瘤(MPNST)、软骨肉瘤、纤维肉瘤、黏液肉瘤)、皮脂腺癌瘤、汗腺癌瘤、滑膜瘤、睪丸癌(例如精原细胞瘤、睪丸胚胎性癌瘤)、甲状腺癌(例如甲状腺乳头状癌瘤、乳头状甲状腺癌瘤(PTC)、甲状腺髓样癌)、尿道癌、阴道癌及外阴癌(例如外阴的佩吉特氏病)。
在一些实施例中,所提供糖抗体可用于治疗肺癌。在一些实施例中,所提供化合物可用于治疗小肺癌。在一些实施例中,所提供化合物可用于治疗非小肺癌。在一些实施例中,所提供化合物可用于治疗大肠癌。在一些实施例中,所提供化合物可用于治疗胰脏癌。在一些实施例中,所提供化合物可用于治疗胆管癌或子宫内膜癌。
使用抗CD20糖抗体的治疗
在一些实施例中,本揭示内容描述治疗有需要的人类个体的癌症的方法,其包括向个体投与治疗有效量的抗CD20糖抗体及医药上可接受的载剂。
癌症的实例包含但不限于B细胞淋巴瘤、NHL、前体B细胞淋巴母细胞白血病/淋巴瘤及成熟B细胞赘瘤、B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)/小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、B细胞前淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤(MCL),滤泡性淋巴瘤(FL)、低度(low-grade)、中度及高度(FL),皮肤滤泡中心淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、MALT型边缘区B细胞淋巴瘤、结节边缘区B细胞淋巴瘤、脾脏型边缘区B细胞淋巴瘤、多毛细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、浆细胞瘤、浆细胞骨髓瘤、移植后淋巴增生性病症、沃尔登斯特伦巨球蛋白血症及退行性大细胞淋巴瘤(ALCL)。
在某些实施例中,癌症是B细胞淋巴瘤,例如非何杰金氏淋巴瘤。
使用抗HER2糖抗体的治疗
在一些实施例中,本揭示内容描述治疗有需要的人类个体的癌症的方法,其包括向个体投与治疗有效量的抗HER2糖抗体及医药上可接受的载剂。
癌症的实例包含但不限于乳癌、脑癌、肺癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胰脏癌、结肠癌、肾癌、子宫颈癌、卵巢癌及前列腺癌。在一些实施例中,癌症是脑癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌或胰脏癌。
在本文所阐述的这些治疗方法中,糖抗体的医药组合物可单独或连同第二治疗剂(例如第二抗体或化学治疗剂或免疫抑制剂)投与。
在某些实施例中,第二治疗剂是抗癌剂。抗癌剂涵盖生物治疗抗癌剂以及化学治疗剂。实例性生物治疗抗癌剂包含但不限于干扰素、细胞介素(例如肿瘤坏死因子、干扰素α、干扰素γ)、疫苗、造血生长因子、单株血清治疗剂、免疫刺激剂及/或免疫调节剂(例如IL-1、2、4、6或12)、免疫细胞生长因子(例如GM-CSF)及抗体(例如HERCEPTIN(曲妥珠单抗)、T-DM1、AVASTIN(贝伐珠单抗)、ERBITUX(西妥昔单抗)、VECTIBIX(帕尼单抗)、RITUXAN(利妥昔单抗)、BEXXAR(托西莫单抗))。实例性化学治疗剂包含但不限于抗雌激素(例如他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)及甲地孕酮(megestrol))、LHRH激动剂(例如戈舍瑞林(goscrclin)及亮丙瑞林(leuprolide))、抗雄激素(例如氟利坦(flutamide)及比卡鲁胺(bicalutamide))、光动力疗法(例如维替泊芬(vertoporfin)(BPD-MA)、酞菁、光敏剂Pc4及去甲氧基-竹红菌甲素A(2BA-2-DMHA))、氮芥(例如环磷酰胺、异环磷酰胺、曲磷胺、苯丁酸氮芥、雌莫司汀及美法仑)、亚硝基脲(例如卡莫司汀(BCNU)及洛莫司汀(CCNU))、烷基磺酸酯(例如白消安及曲奥舒凡(treosulfan))、三氮烯(例如达卡巴嗪、替莫唑胺(temozolomide))、含铂化合物(例如顺铂、卡铂、奥沙利铂)、长春花生物碱(例如长春新碱、长春碱、长春地辛及长春瑞滨)、类紫杉醇(例如太平洋紫杉醇或太平洋紫杉醇等效物,例如奈米颗粒白蛋白结合太平洋紫杉醇(ABRAXANE)、二十二碳六烯酸结合-太平洋紫杉醇(DHA-太平洋紫杉醇,Taxoprexin)、聚麸胺酸盐结合-太平洋紫杉醇(PG-太平洋紫杉醇、聚麸胺酸太平洋紫杉醇(paclitaxel poliglumex)、CT-2103、XYOTAX)、肿瘤活化前药(TAP)ANG1005(结合三个太平洋紫杉醇分子的Angiopep-2)、太平洋紫杉醇-EC-1(结合erbB2识别肽EC-1的太平洋紫杉醇)及葡萄糖偶联太平洋紫杉醇(例如2'-太平洋紫杉醇琥珀酸甲酯2-吡喃葡萄糖基酯);多西紫杉醇(docetaxel)、taxol)、表鬼白毒素(例如依托泊苷、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)、替尼泊苷、托泊替康、9-胺基喜树碱、伊立替康注射液(camptoirinotecan)、伊立替康、克立那托(crisnatol)、丝裂霉素C(mytomycin C))、抗代谢物、DHFR抑制剂(例如胺甲蝶呤、二氯胺甲喋呤(dichloromethotrexate)、三甲曲沙、依达曲沙)、IMP去氢酶抑制剂(例如霉酚酸、噻唑羧胺核苷(tiazofurin)、利巴韦林(ribavirin)及EICAR)、核糖核苷酸抑制剂(例如羟基脲及去铁胺(deferoxamine))、尿嘧啶类似物(例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷、脱氧氟尿苷、雷替曲塞(ratitrexed)、替加氟-尿嘧啶(tegafur-uracil)、卡培他滨)、胞嘧啶类似物(例如阿糖胞苷(ara C)、胞嘧啶阿糖胞苷及氟达拉滨)、嘌呤类似物(例如巯基嘌呤及硫鸟嘌呤)、维他命D3类似物(例如EB 1089、CB1093及KH 1060)、异戊烯化抑制剂(例如洛伐他汀(lovastatin))、多巴胺能神经毒素(例如1-甲基-4-苯基吡啶鎓离子)、细胞周期抑制剂(例如星状孢子素(staurosporine))、放线菌素(例如放线菌素D、更生霉素)、博来霉素(例如博来霉素A2、博来霉素B2、培洛霉素)、蒽环类抗生素(例如道诺霉素、多柔比星、聚乙二醇化脂质多柔比星、埃达霉素、泛艾霉素、吡柔比星、佐柔比星、米托蒽醌)、MDR抑制剂(例如维拉帕米(verapamil))、Ca2+ATPase抑制剂(例如毒胡萝卜内酯(thapsigargin))、伊马替尼(imatinib)、沙立度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomide)、酪胺酸激酶抑制剂(例如阿昔替尼(axitinib)(AG013736)、博舒替尼(bosutinib)(SKI-606)、西地尼布(cediranib)(RECENTINTM,AZD2171)、达沙替尼(dasatinib)(BMS-354825)、埃罗替尼(erlotinib)吉非替尼(gefitinib)伊马替尼(CGP57148B,STI-571)、拉帕替尼来他替尼(lestaurtinib)(CEP-701)、来那替尼(neratinib)(HKI-272)、尼罗替尼(nilotinib)司马沙尼(semaxanib)(司马西尼(semaxinib),SU5416)、舒尼替尼(sunitinib)(SU11248)、托西尼布(toceranib)凡德他尼(vandetanib)(ZD6474)、瓦他拉尼(vatalanib)(PTK787,PTK/ZK)、曲妥珠单抗贝伐珠单抗利妥昔单抗西妥昔单抗帕尼单抗兰尼单抗(ranibizumab)尼罗替尼索拉非尼(sorafenib)依维莫司(everolimus)阿来组单抗吉妥单抗(gemtuzumab ozogamicin)西罗莫司(temsirolimus)ENMD-2076、PCI-32765、AC220、乳酸多韦替尼(dovitinib lactate)(TKI258、CHIR-258)、BIBW 2992(TOVOKTM)、SGX523、PF-04217903、PF-02341066、PF-299804、BMS-777607、ABT-869、MP470、BIBF 1120AP24534、JNJ-26483327、MGCD265、DCC-2036、BMS-690154、CEP-11981、替沃扎尼(tivozanib)(AV-951)、OSI-930、MM-121、XL-184、XL-647及/或XL228)、蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米(bortezomib)(VELCADE))、mTOR抑制剂(例如雷帕霉素(rapamycin)、特姆莫司(temsirolimus)(CCI-779)、依维莫司(everolimus)(RAD-001)、地磷莫司(ridaforolimus)、AP23573(Ariad)、AZD8055(AstraZeneca)、BEZ235(Novartis)、BGT226(Norvartis)、XL765(SanofiAventis)、PF-4691502(Pfizer)、GDC0980(Genetech)、SF1126(Semafoe)及OSI-027(OSI))、奥利默森(oblimersen)、吉西他滨、洋红霉素(carminomycin)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、培美曲塞(pemetrexed)、环磷酰胺、达卡巴嗪、丙卡巴肼(procarbizine)、泼尼松龙(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、喜树碱(campathecin)、普利霉素(plicamycin)、天门冬酰胺酶(asparaginase)、胺基蝶呤(aminopterin)、甲胺喋呤(methopterin)、泊非霉素(porfiromycin)、美法仑、异长春碱(leurosidine)、长春罗新(leurosine)、瘤克宁锭、曲贝替定(trabectedin)、丙卡巴肼(procarbazine)、圆皮海绵内酯(discodermolide)、洋红霉素、胺基蝶呤及六甲基密胺(hexamethyl melamine)。
(II)自体免疫及/或发炎性疾病的治疗
在一些实施例中,本文所阐述的糖抗体可用于治疗自体免疫及/或发炎性疾病。
使用抗CD20糖抗体的治疗
在一些实施例中,本揭示内容描述治疗有需要的人类个体的自体免疫或发炎性疾病的方法,其包括向个体投与治疗有效量的抗CD20糖抗体及医药上可接受的载剂。
自体免疫或发炎性疾病的实例包含但不限于类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮(SLE)、韦格纳氏病(Wegener's disease)、发炎性肠疾病、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、自体免疫性血小板减少症、多发性硬化、牛皮癣、IgA肾病变、IgM多发性神经病变、重症肌无力、血管炎、糖尿病、雷诺氏症候群(Reynaud's syndrome)、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、胃炎、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto'sthyroiditis)、强直性脊柱炎、C型肝炎相关冷球蛋白血症性血管炎、慢性局灶性脑炎、大疱性类天疱疮、血友病A、膜性增殖性肾小球肾炎、成人及幼年型皮肌炎、成人型多肌炎、慢性荨麻疹、原发性胆汁性肝硬变、视神经脊髓炎、格雷夫氏甲状腺机能障碍性疾病(Graves'dysthyroid disease)、大疱性类天疱疮、膜性增殖性肾小球肾炎、丘-施二氏症候群(Churg-Strauss syndrome)、哮喘、牛皮癣性关节炎、皮炎、呼吸下窘迫症候群、脑膜炎、脑炎、葡萄膜炎、湿疹、动脉粥样硬化、白血球黏附缺陷、幼年发病型糖尿病、莱特尔氏病(Reiter's disease)、贝切特氏病(Behcet's disease)、溶血性贫血、特应性皮炎、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)、欧门氏症候群(Omenn's syndrome)、慢性肾衰竭、急性感染性单核白血球增多症、HIV及疱疹相关疾病、全身性硬化、薛格连氏症候群(Sjorgen's syndrome)及肾小球肾炎、皮肌炎、ANCA、再生障碍性贫血、自体免疫溶血性贫血(AIHA)、因子VIII缺陷、血友病A、自体免疫嗜中性白血球减少症、卡斯尔曼氏症候群(Castleman's syndrome)、古德巴斯德症候群(Goodpasture's syndrome)、实体器官移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、自体免疫肝炎、淋巴样间质性肺炎(HIV)、闭塞性细支气管炎(非移植)、格-巴二氏症候群(Guillain-Barre syndrome)、大血管血管炎、巨细胞(高安氏(Takayasu's))动脉炎、中血管血管炎、川畸氏病(Kawasaki's disease)及结节性多动脉炎(polyarteritis nodosa)。在某些实施例中,自体免疫或发炎性疾病是类风湿性关节炎。
使用抗TNFα糖抗体的治疗
在一些实施例中,本揭示内容描述治疗有需要的人类个体的自体免疫或发炎性疾病的方法,其包括向个体投与治疗有效量的抗TNFα糖抗体及医药上可接受的载剂。
(III)传染性疾病的治疗
在一些实施例中,本文所阐述的糖抗体可用于治疗由细菌或病毒感染引起的传染性疾病。
传染性疾病的实例包含但不限于人类免疫缺陷病毒(HIV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、巨细胞病毒(CMV)、依波拉病毒(Ebola virus)、A型肝炎病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒(HCV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、汉江病毒(Hantaan virus)、流感病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、人类疱疹病毒6(HHV-6)、人类疱疹病毒8(HHV-8)、人类乳头状瘤病毒或小病毒、SARS病毒、麻疹病毒;腮腺炎病毒;风疹病毒;狂犬病病毒;乳头状瘤病毒;牛痘病毒;水痘带状疱疹病毒;天花病毒;脊髓灰白质炎病毒;鼻病毒;呼吸道合胞病毒;恶性疟原虫(P.falciparum);间日疟原虫(P.vivax);三日疟原虫(P.malariae);卵形疟原虫(P.ovale);白喉杆菌(Corynebacterium diphtheriae);破伤风杆菌(Clostridium tetani);肉毒杆菌(Clostridium botulinum);百日咳博德特菌(Bordetella pertussis);流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae);脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、血清组A、B、C、W135及/或Y;肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae);无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes);金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus);炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis);卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis);沙眼披衣菌(Chlamydiatrachomatis);肺炎披衣菌(Chlamydia pneumoniae);鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis);土拉文氏杆菌(Francisella tularensis);沙门菌属(Salmonella species);霍乱弧菌(Vibrio cholerae);毒性大肠杆菌;人类内源性反转录病毒;其他微生物病原体;其他微生物毒素、过敏原、肿瘤抗原、自体抗原及异体抗原、化学物质或毒素。在某些实施例中,传染性疾病是由HIV、HCV或其组合引起。
使用FI6糖抗体的方法
在一些实施例中,本揭示内容描述治疗有需要的人类个体的病毒性疾病的方法,其包括向个体投与治疗有效量的FI6糖抗体及医药上可接受的载剂。
病毒性疾病可由以下病毒引起:HIV(人类免疫缺陷病毒)、RSV(呼吸道合胞病毒)、CMV(巨细胞病毒)、依波拉病毒、A型肝炎病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒、水痘带状疱疹病毒(VZV)、汉江病毒、流感病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、人类疱疹病毒6(HHV-6)、人类疱疹病毒8(HHV-8)、人类乳头状瘤病毒或小病毒。在单独特定实施例中,病毒性疾病是由HIV或由C型肝炎病毒引起。
在一些实施例中,本揭示内容描述治疗有需要的人类个体的病毒性疾病的方法,其包括:(a)向个体投与阻断NK细胞的抑制受体的第一化合物,及(b)向个体投与治疗有效量的本文所阐述的医药组合物。
「治疗(Treating或treatment)」或「缓解」是指治疗性治疗及预防性(prophylactic或preventative)措施;其中目标是预防或减缓(减弱)靶定病理学病状或病症。彼等需要治疗者包含彼等已患有病症者以及彼等易于患有病症者或彼等拟预防病症者。若在接受治疗量的本发明方法的抗体之后,患者展示下列情形中的一或多者的可观察及/或可量测减小或不存在,则个体或哺乳动物成功「治疗」感染:减小感染细胞数量或不存在感染细胞;减小总感染细胞的百分比;及/或减轻(至一定程度)一或多种与特定感染有关的症状;减小发病率及死亡率;及改良生活质量问题。用于评价疾病的成功治疗及改良的上述参数可易于通过医师熟知的常规程序量测。
术语「治疗有效量」是指有效「治疗」个体或哺乳动物的疾病或病症的抗体或药物的量。参见「治疗」的先前定义。
与一或多种其他治疗剂「组合」投与包含以任一顺序同时(并行)及连续投与。
本文所用的「载剂」包含在所用剂量及浓度下对所暴露细胞或哺乳动物无毒的医药上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂。通常,生理学上可接受的载剂是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载剂的实例包含缓冲剂,例如磷酸盐、柠檬酸盐及其他有机酸;抗氧化剂,包含抗坏血酸,低分子量(小于约10个残基)多肽;蛋白质,例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水性聚合物,例如聚乙烯吡咯啶酮;氨基酸,例如甘胺酸、麸酰胺酸、天门冬酰胺、精胺酸或离胺酸;单糖、二糖及其他碳水化合物,包含葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合剂,例如EDTA;糖醇,例如甘露糖醇或山梨糖醇;形成盐的抗衡离子,例如钠;及/或非离子型表面活性剂,例如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)及PLURONICSTM
本发明包含下列实例以证明本发明的优选实施例。彼等熟习此项技术者应了解,下列实例中揭示的技术代表本发明者发现在实践本发明中运行良好的技术,且因此可认为构成其实践的优选方式。然而,彼等熟习此项技术者借助于本揭示内容应了解,可对所揭示特定实施例作出多种改变且仍获得相同或类似结果,此并不背离本发明的精神及范围。
实例
实例性一般程序
方法A:通过硫代-聚糖供体的糖基化
为活化用于糖基化的分子筛将其链接至真空系统并加热1小时。在将经活化分子筛冷却至室温之后,将其添加至含有供体(1.5~2.0当量,对于一位置糖基化)及受体(1.0当量)的烧瓶。向混合物中添加二氯甲烷,且然后将溶液在室温下搅拌3h。在-78℃下向溶液中添加N-碘琥珀酰亚胺(NIS,1.7~2.2当量)及三氟甲烷磺酸三甲基硅烷基酯(TMSOTf,0.1当量),且然后在-20℃下搅拌溶液。通过薄层层析(TLC)分析监测反应,所述分析是在玻璃背衬硅胶板(Merck DC Kieselgel 60F254)上实施且通过UV光(254nm)及酸性钼酸铵铈观察。在受体完全消耗之后,使用饱和NaHCO3(水溶液)及20%Na2S2O3终止反应,且然后经由硅藻土垫过滤混合物。在使用两份二氯甲烷萃取水层之后,使用盐水洗涤合并的有机层,通过MgSO4干燥,并浓缩。通过硅胶管柱层析(使用甲苯/乙酸乙酯作为洗脱系统)纯化粗制物以得到产物(产率展示于反应图中)。
方法B:通过氟化物-聚糖供体的糖基化
将存于无水甲苯中的三氟甲磺酸银(5当量)、双(环戊二烯基)二氯化铪(3.5当量)及经活化分子筛的混合物在室温下搅拌1h。然后将反应混合物冷却至-50℃,添加存于甲苯中的受体(1.0当量)及供体(1.2~1.5当量)的溶液。将混合物在-10℃下搅拌2-8h。在TLC指示受体完全消耗之后,使用Et3N终止反应,使用EtOAc稀释并经由硅藻土过滤。使用NaHCO3水溶液及盐水溶液洗涤滤液。通过Na2SO4干燥有机层并在真空中浓缩。通过硅胶管柱层析(使用甲苯/乙酸乙酯作为洗脱系统)纯化粗制物以得到产物(产率展示于反应图中)。
方法C:O-乙酰基的去保护
将NaOMe(0.25当量)添加至存于THF/甲醇(2/3)中的起始材料(1.0当量)的溶液中。在室温下搅拌反应液并通过TLC分析监测。在乙酰基完全去保护之后,通过IR-120中和溶液,过滤,并浓缩。通过硅胶管柱层析(使用己烷/乙酸乙酯作为洗脱系统)纯化粗制物以得到产物(产率展示于反应图中)。
方法D:O-Troc的去保护
将Zn粉(20当量)及乙酸(0.2当量)添加至存于THF中的起始材料(1.0当量)的溶液中。在室温下搅拌反应液并通过薄层层析(TLC)分析监测。在Troc基团完全去保护之后,过滤溶液,并浓缩。通过硅胶管柱层析(使用己烷/乙酸乙酯作为洗脱系统)纯化粗制物以得到产物(产率展示于反应图中)。
方法E:亚苄基的去保护
将对甲苯磺酸(pTSA,1.5当量)添加至存于ACN/MeOH(2/1)中的起始材料(1.0当量)的溶液中。在室温下搅拌反应液并通过薄层层析(TLC)分析监测。在亚苄基完全去除之后,通过三甲胺终止反应且然后浓缩。通过硅胶管柱层析(使用己烷/乙酸乙酯作为洗脱系统)纯化粗制物以得到产物(产率展示于反应图中)。
方法F:整体去保护
将经保护寡糖(50mmol)及10mL乙二胺:nBuOH(1/4)的混合物在90℃下搅拌过夜。蒸发挥发物,且使粗制物与10mL Ac2O/吡啶(1/2)反应过夜。使用高真空去除溶剂,且通过急骤管柱层析(使用丙酮/甲苯作为洗脱系统)纯化产物。使用甲醇钠在MeOH(10mL)中对产物实施去乙酰基化过夜。通过使用IR-120中和反应液,然后过滤并在真空中浓缩。通过急骤管柱层析(使用丙酮/甲苯作为洗脱系统)纯化残余物。将产物溶于10mL MeOH:H2O:HCOOH(6/3/1)中,添加Pd(OH)2(50重量%),且将反应液实施氢化过夜。经由硅藻土过滤反应混合物并在真空中浓缩。通过G-15凝胶管柱层析使用水作为洗脱剂纯化残余物。冻干产物以得到白色粉末(产率展示于反应图中)。
方法G:酶(2,6)-唾液酸化
将起始材料(5μmol)、CTP(1μmol)、Neu5Ac(9.5μmol)、PEP(10μmol)、α-2,6唾液酸转移酶(200μL,估计浓度为2mg/L)、CMK(80单位)、PK(40单位)及PPA(40单位)溶于50μmol含有1%BSA的二甲基胂酸钠(pH7.4)(130μL)中。将反应液在37℃及轻微搅动下培育2d。通过使用G-15凝胶层析(洗脱剂为H2O)纯化产物以在冻干之后提供白色固体形式的期望产物。
结构单元:
合成不对称N-聚糖的实验程序
反应图1
合成不对称N-聚糖的实验程序
反应图2
反应图3
合成二等分-GlcNAc N-聚糖的实验程序
反应图4
实例1:IgG1抗体的糖改造
此研究的目标是制备在抗癌及抗发炎功能中具有优化活性的同源抗体。因此,选择市售利妥昔单抗IgG1作为模型,此乃因其已用于治疗癌症及自体免疫疾病。首先使用糖蛋白重塑的策略获得在Fc区中具有单-GlcNAc的均质抗体,然后使用单-GlcNAc抗体连接纯合成聚糖以获得用于活性分析的均质抗体(图1a)。组合使用来自大肠杆菌的岩藻糖苷酶BfFucH与糖苷内切酶(仅来自酿脓链球菌(Streptococcus pyogene)的EndoS或Endo F1/F3或Endo F1/S的混合物)以在一天内一锅式制备均质单-GlcNAc糖基化抗体。此岩藻糖苷酶更有效于来自牛肾者(其需要培育20天(23))。已发现,在37℃培育一周导致利妥昔单抗结构发生劣化且使得针对其抗原的结合亲和力损失约15%(支持信息)。然后,通过使用EndoS突变体(23),将一系列合成聚糖恶唑啉成功转移至单-GlcNAc利妥昔单抗中以形成在Fc区具有不同聚糖的均质利妥昔单抗,从而用于后续结合及功能分析。
实例2:2,3-及2,6-唾液酸化利妥昔单抗之间的特性
尽管Ravetch组报导2,6-唾液酸化IVIG与2,3-唾液酸化IVIG相比是负责抗发炎活性的主要结构,但其与不同FcγR的详细相互作用尚未研究(11)。另外,Raju的研究展示,抗体中的高唾液酸化程度会使ADCC劣化(12),但尚未明了2,6-及2,3-唾液酸化抗体对细胞毒性具有类似效应。为研究这些唾液酸化链接的差异,自单-GlcNAc利妥昔单抗制备2,6-及2,3-唾液酸化抗体(表示为2,6NSCT-利妥昔单抗及2,3NSCT-利妥昔单抗)。与未改质利妥昔单抗相比,单-GlcNAc利妥昔单抗展示完全损失或实质上减小针对FcγRIIIa、FcγRIIa、FcγRI及C1q(除FcγRIIb外)的结合亲和力。然而,在延长聚糖以形成2,6-NSCT-利妥昔单抗的结构之后,其针对FcγRIIa、FcγRIIb及尤其FcγRIIIa的结合亲和力有所增加,但针对C1q观察到并无显着变化(表11A)。有所不同地,对于2,3-NSCT-利妥昔单抗而言,仅与FcγRIIIa的相互作用部分地有所增加,但其与对FcγRIIb及FcγRIIa的识别未变或甚至有所降低(表11A)。对应于C1q对利妥昔单抗及2,6-NSCT-利妥昔单抗的相当结合亲和力,FACS结果展示,两种抗体在CDC中显示相同趋势(表11B)。然而,2,3-NSCT-利妥昔单抗的细胞毒性低于2,6-NSCT-利妥昔单抗,如通过半最大有效浓度(EC50)的较高值所展示(表11B)。
除CDC外,ADCC亦是考虑与抗体相关的细胞毒性的关键问题。据报导,IgG1的去岩藻糖基化经由增加非岩藻糖基化Fc-聚糖与FcγRIIIa之间的相互作用来有效提高ADCC效应(5、33)。在PBMC介导的ADCC分析中监测PI染色的死细胞,所述ADCC是通过未处理利妥昔单抗及经处理mAb、2,3-NSCT-及2,6-NSCT-利妥昔单抗在流式细胞仪上使用三种不同CFSE标记的B淋巴瘤细胞(Raji、Ramos及SKW6.4)来诱导。实际上,与商业利妥昔单抗相比,2,6-NSCT-及2,3-NSCT-利妥昔单抗皆展示与FcγRIIIa的较强相互作用及ADCC的较小EC50(表11A及11C)。有趣的是,2,6-唾液酸基链接展示极佳亲和力及针对FcγRIIIa及ADCC的效应,而2,3-链接具有较弱活性。相同抗体的ADCC结果在不同靶细胞(包含Raji、Ramos及SKW6.4)中相当(表11C)。
实例3:各种非岩藻糖基化利妥昔单抗的结合亲和力及B细胞消耗活性
为研究细胞毒性是否受2,6-唾液酸化影响,制备其他均质非岩藻糖基化利妥昔单抗,包含彼等含有二等分改质的聚糖、3’-臂中的单-唾液酸化、三甘露糖核心、末端GlcNAc端、半乳糖尾及其他不对称聚糖者。在表面血浆共振分析中,并无经改质非岩藻糖基化利妥昔单抗显示针对FcγRIIIa的结合亲和力强于2,6-NSCT-利妥昔单抗,但观察到在不同糖型中具有一定Kd变化(表12)。然后,在PBMC介导的人类B细胞的消耗中通过在流式细胞仪上分析CD19+CD3-B细胞来实施经改造抗体的细胞毒性诱导研究。对应于SPR数据,在抗体浓度为10ng/mL或更大时,2,6-NSCT-利妥昔单抗的B细胞消耗功效极佳(图2A)。另外,在10个供体的全血B细胞消耗测试中,2,6-NSCT-利妥昔单抗的活性亦显着高于非改质利妥昔单抗且p值为0.0016,而单-GlcNAc利妥昔单抗展示最低活性(图2B)。这些数据指示,免疫球蛋白G1上的2,3-及2,6-唾液酸化针对其功能具有不同活性且2,6-NSCT较利妥昔单抗有益于B细胞消耗。这些结果难以在先前研究中验证,此乃因许多试样是来自CHO细胞,其表达具有含有2,3-唾液酸化但缺乏2,6-链接的各种聚糖的蛋白质(34)。
实例4:2,6-NSCT利妥昔单抗针对抗性细胞系的ADCC功效
如同许多医药,利妥昔单抗因高剂量及长期给药而出现抗性(35、36)。为理解2,6-NSCT-利妥昔单抗是否是有效用于药物抗性细胞,制备Ramos及Raji的利妥昔单抗抗性细胞系以在2,6-NSCT改质利妥昔单抗的不同浓度下评估其PBMC介导的ADCC(图2C-E)。在与利妥昔单抗共培养较长时间段之后,Ramos及Raji B细胞进化成彼等在表面上具有较小CD20表达者(图2C)。因此,非改质利妥昔单抗明显损失其针对抗性菌株的活性并不令人吃惊(图2D及2E)。然而,2,6-NSCT利妥昔单抗展示针对非抗性及抗性细胞的极佳ADCC活性。
实例5:各种非岩藻糖基化Herceptin的FcγRIIIa结合亲和力
为另外评估源自2,6-NSCT聚糖改质的印象深刻的细胞毒性是否可应用于其他抗体,使用不同聚糖结构改质另一抗体Herceptin且加以评估。
糖改造Herceptin及FcγRIIIa的动力学结合分析列示于表3中。类似于ELISA分析中的2,3-及2,6-NSCT-利妥昔单抗的亲和力差异,2,6-NSCT-Herceptin对FcγRIIIa展示较强相互作用,而使用2,3-NSCT-Herceptin观察到有害效应。同时,Fc非岩藻糖基化的效应更显着于使用2,6-或2,3-链接的唾液酸化的效应。另外,所有糖改造Herceptin的相应Kd展示类似于利妥昔单抗中的情形的趋势(表13)。与其他抗体(G3、G4、G5、G6、G7、G9及2,3-NSCT)相比,抗体(例如G1、G2及2,6-NSCT)对FcγRIIIa的亲和力增加9倍以上。具体而言,在利妥昔单抗及Herceptin的两种情形下,非岩藻糖基化糖改造G8几乎损失其针对ADCC活性的去岩藻糖基化优点。在与非二等分类似物G4相比时,具有二等分聚糖的抗体G9展示在利妥昔单抗及Herceptin中针对FcγRIIIa的亲和力略微但并不显着地增加。总而言之,2,6-NSCT-Herceptin在SPR分析中在这些非岩藻糖基化类似物中实际上亦展示极佳FcγRIIIa结合亲和力。
为另外理解对Herceptin的FcγRIIIa介导的ADCC的Fc糖基化效应,实施ADCC报告基因生物分析,其利用V158FcγRIIIa改造Jurkat效应细胞的经活化T细胞(NFAT)路径的信号传导细胞核因子并采用SKBR3作为靶细胞且E/T比率为6。与动力学数据一致,非岩藻糖基化G8Herceptin的EC50展示损失FcγRIIIa活性且显示对岩藻糖基化Herceptin的类似ADCC效应(图3A)。有趣的是,先前研究展示,抗体上由增加含量的β(1,4)-N乙酰基葡糖胺基转移酶III产生的更多二等分聚糖与其较强ADCC相关(37)。与之相反,研究展示,在Herceptin及利妥昔单抗的二等分及非二等分抗体G9及G4之间观察到并无显着Kd差异且Herceptin糖型的EC50值在FcγRIIIa细胞调介分析中展示类似细胞毒性特征(图3B)。因此可推断出,二等分IgG1在FcγRIIIa主导的ADCC中并不具有优选功能。
此外,与非唾液酸化G1-Herceptin相比,2,3-唾液酸化Herceptin的ADCC明显减小,而2,6-NSCT Herceptin仍维持其活性(图3C),从而指示2,3-链接引起唾液酸化介导的ADCC减小。为探究2,6-NSCT在抗体医药中的潜在用途,选择在每一板中具有最低EC50的糖改造非岩藻糖基化Herceptin试样进行其他活性研究(图3D),且发现所有试样皆展现良好细胞毒性且能够在低浓度下杀死一半癌症细胞。
实例6:2,6-NSCT聚糖改质在抗病毒抗体中的ADCC效应
为探究2,6-NSCT聚糖在Fc改质中的用途,评估抗体的均质2,6-NSCT聚糖改质是否可增加抗病毒抗体去除病毒感染细胞的ADCC效应。制备抗流感广泛中和抗体FI6,其已知结合各种流感亚型的血凝素(HA)的干区且其中和活性与ADCC有关(38)。将FI6抗体的Fc聚糖改质为均质2,6-NSCT聚糖且与人类HEK293T细胞(其表达细胞表面上的HA以模拟流感感染细胞)混合;然后,通过靶细胞中PBMC调介的杀死及效应细胞中经活化T细胞(NFAT)路径的ADCC信号传导细胞核因子的活化来量测ADCC效应。细胞毒性结果展示,均质2,6-NSCT聚糖改质FI6(FI6m)实际上展现其ADCC活性显着高于(增加2至3倍)常见未改质FI6抗体(图4A)。此外,在使用均质FI6m时,亦观察到效应物NK细胞的ADCC信号传导NFAT路径的活化的发生2倍增进(图4B)。所述观察指示,抗病毒抗体的均质2,6-NSCT聚糖改质可为增进病毒感染细胞上ADCC的效应物功能的一般策略。
接下来,测试通过FI6的均质2,6-NSCT改质的活体外ADCC增进在给予致死剂量感染的流感H1N1的小鼠模型中是否可转换为保护。单株FI6的被动转移已展示会保护先前的H1N1感染(39)。实际上,使用均质2,6-NSCT聚糖改质,在使用A/加利福尼亚州/07/2009H1N1病毒攻击小鼠时,FI6m展示显着优选的保护(图4C)。在使用复合型聚糖的混合物时,FI6m的存活率为66%且常用FI6为11%。总而言之,已显示,在流感病毒感染小鼠模型中,通过抗体的均质2,6-NSCT聚糖改质所达成的活体外ADCC增进与病毒感染的活体内保护一致。
表11.商业利妥昔单抗及糖改造2,3-NSCT-及2,6-NSCT-利妥昔单抗FcγR的结合特性及功能分析。
(A)在ELISA中实施单-GlcNAc、2,3-NSCT-及2,6-NSCT-利妥昔单抗针对FcγRs及C1q的结合实验。去糖基化致使单-GlcNAc利妥昔单抗损失其针对FcγRIIIa、FcγRIIa、FcγRI及C1q的结合亲和力,而2,3-及2,6-唾液酸化抗体保留其亲和力,且2,6-唾液酸化利妥昔单抗展示与FcγRIIa、FcγRIIb及FcγRIIIa的增进的相互作用。(B)在FACS中实施CDC分析。2,6-NSCT-利妥昔单抗与未处理抗体展示类似CDC活性,但2,3-NSCT-利妥昔单抗的结果展示减小的CDC功效以及较高的EC50值。(C)新鲜PBMC介导的ADCC分析。使用3种不同B细胞Raji、Ramos及SKW6.4实施分析实验。结果展示,通过EC50值量测的活性自未改质利妥昔单抗至糖改造非岩藻糖基化2,3-NSCT-利妥昔单抗显着增加,其中2,6-NSCT-利妥昔单抗最高。
表12.通过表面血浆共振分析量测的糖改造利妥昔单抗IgG1与FcγRIIIa的结合亲和力。
藉助人类Fab捕获套组捕获所分析抗体且使用单一循环动力学方法进行检测。
表13.使用表面血浆共振分析的糖改造Herceptin IgG1与FcγRIIIa的结合亲和力。
通过山羊抗人类F(ab’)2的F(ab’)2片段捕获所分析抗体且通过单一循环动力学方法使用双重参考进行检测。所展示数据代表2个重复值。
表11.
(A)
EC50(nM) Roche-利妥昔单抗 2,6-NSCT-利妥昔单抗 2,3-NSCT-利妥昔单抗 N-利妥昔单抗
FcγRIIIa 6.2~9.0 0.24~0.27(30x) 1.2 36.3
FcγRIIa 5.4 3.0(2.1x) 16.5 >110
FcγRI 0.19 0.23 0.85
FcγRIIb 0.51 0.28(1.8x) 0.53 0.32
C1q 6.5 8.0 >>50
表12.
*使用商业利妥昔单抗的KD值除以糖改造利妥昔单抗的KD值来计算倍数
表13.
*使用商业Herceptin的KD值除以糖改造Herceptin的KD值来计算倍数。

Claims (31)

1.一种包括单株抗体或其抗原结合片段之均质群体之组合物,其中每一糖抗体或抗原结合片段分子在Fc区上包括单一均质N-聚糖,其中所述N-聚糖具有Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2之结构,且其中所述N-聚糖经优化以改良效应细胞功能。
2.如权利要求1之组合物,其中所述Fc区上之N-聚糖相对于相应单株抗体中之野生型Fc区对FcγRIIA或FcγRIIIA展现增加的结合亲和力。
3.如权利要求1的组合物,其中这些单株抗体相对于相应野生型单株抗体展现改良的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。
4.如权利要求1的组合物,其中这些单株抗体选自人类IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
5.如权利要求1的组合物,其中这些单株抗体结合至少一种与癌症、自体免疫或发炎疾病或传染性疾病有关的抗原。
6.如权利要求1的组合物,其中这些单株抗体结合至与癌症有关的抗原。
7.如权利要求6的组合物,其中所述抗原选自由以下组成的群:GD2、GD3、GM2、Globo-H、SSEA-3、SSEA-4、CD16A、CD30、CD32B、CD33、CD52、EpCAM、CEA、gpA33、HER2/neu、A33、CD5、CD11c、CD19、CD20、CD22、CD23、CD27、CD40、CD45、CD79a、CD79b、CD103、CTLA4、ErbB1、ErbB3、ErbB4、VEGF受体、TNF-α受体、TNF-β受体或TNF-γ受体、gpA33、黏液素、TAG-72、CAIX、PSMA、叶酸结合蛋白、VEGF、VEGFR、整合素αVβ3、整合素α5β1、EGFR、ERBB2、ERBB3、MET、IGF1R、EPHA3、TRAILR1、TRAILR2、RANKL、FAP及腱糖蛋白(Tenascin)。
8.如权利要求1的组合物,其中这些单株抗体结合至与自体免疫或发炎疾病有关的抗原。
9.如权利要求1的组合物,其中所述抗原选自由介白素5及其受体、肿瘤坏死因子及其受体组成的群。
10.如权利要求1的组合物,其中这些单株抗体结合于病毒感染细胞上表现的抗原。
11.如权利要求1的组合物,其中所述抗原选自由gp120、CXCR4及Vero毒素组成的群。
12.如权利要求1的组合物,其中所述组合物是在活体外产生。
13.一种医药调配物,其包括如权利要求1的组合物及医药上可接受的载剂。
14.一种增进抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性的方法,所述方法包括向有需要的个体投与一量的如权利要求1的组合物。
15.一种预防、治疗或改善一或多种与疾病、病症或感染有关的症状的方法,所述方法包括向有需要的个体投与治疗有效量的如权利要求13的医药调配物。
16.如权利要求15的方法,其中所述疾病、病症或感染选自由以下组成的群:癌症、自体免疫病症、发炎病症或传染性感染。
17.如权利要求16的方法,其中所述癌症选自由以下组成的群:脑癌、肺癌、乳癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胰脏癌、结肠癌、肾癌、子宫颈癌、卵巢癌及前列腺癌。
18.如权利要求16的方法,其中所述癌症选自由以下组成的群:B细胞淋巴瘤、NHL、前体B细胞淋巴母细胞白血病/淋巴瘤及成熟B细胞赘瘤、B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)/小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、B细胞前淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、低度(low-grade)、中度及高度(FL)、皮肤滤泡中心淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、MALT型边缘区B细胞淋巴瘤、结节边缘区B细胞淋巴瘤、脾脏型边缘区B细胞淋巴瘤、多毛细胞(hairy cell)白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、浆细胞瘤、浆细胞骨髓瘤、移植后淋巴增生性病症、沃尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)及退行性(anaplastic)大细胞淋巴瘤(ALCL)。
19.如权利要求16的方法,其中所述自体免疫或发炎疾病选自由以下组成的群:类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、溃疡性结肠炎、韦格纳氏病(Wegener's disease)、发炎性肠疾病、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、自体免疫性血小板减少症、多发性硬化、牛皮癣、IgA肾病变、IgM多发性神经病变、重症肌无力、血管炎、糖尿病、雷诺氏症候群(Reynaud's syndrome)、薛格连氏症候群(Sj orgen's syndrome)及肾小球肾炎。
20.如权利要求19的方法,其中所述自体免疫或发炎疾病是类风湿性关节炎。
21.如权利要求16的方法,其中所述传染性疾病是由以下针对人类的病原体引起:诸如人类免疫缺陷病毒(HIV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、巨细胞病毒(CMV)、依波拉病毒(Ebolavirus)、A型肝炎病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒(HCV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、汉江病毒(Hantaan virus)、流感病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、人类疱疹病毒6(HHV-6)、人类疱疹病毒8(HHV-8)、人类乳头状瘤病毒或小病毒、SARS病毒、麻疹病毒;腮腺炎病毒;风疹病毒;狂犬病病毒;乳头状瘤病毒;牛痘病毒;水痘带状疱疹病毒;天花病毒;脊髓灰白质炎病毒;鼻病毒;呼吸道合胞病毒;恶性疟原虫(P.falciparum);间日疟原虫(P.vivax);三日疟原虫(P.malariae);卵形疟原虫(P.ovale);白喉杆菌(Corynebacterium diphtheriae);破伤风杆菌(Clostridiumtetani);肉毒杆菌(Clostridium botulinum);百日咳博德特菌(Bordetella pertussis);流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae);脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis),血清群A、B、C、W135及/或Y;肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae);无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes);金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus);炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis);卡他莫拉菌(Moraxellacatarrhalis);沙眼披衣菌(Chlamydia trachomatis);肺炎披衣菌(Chlamydiapneumoniae);鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis);土拉文氏杆菌(Francisellatularensis);沙门菌属(Salmonella species);霍乱弧菌(Vibrio cholerae);毒性大肠杆菌;人类内源性反转录病毒;其他微生物病原体;其他微生物毒素、过敏原、肿瘤抗原、自体抗原及异体抗原、化学物质或毒素。
22.如权利要求21的方法,其中所述传染性疾病是由HIV、HCV或其组合引起。
23.如权利要求15的方法,其中期望由FcγR所调介的效应细胞功能的功效增进以预防、治疗或改善一或多种与所述疾病、病症或感染有关的症状。
24.如权利要求15的方法,其中期望ADCC增进以预防、治疗或改善一或多种与所述疾病、病症或感染有关的症状。
25.如权利要求15的方法,其中所述医药组合物是单独或连同选自由第二抗体、化学治疗剂及免疫抑制剂组成的群的第二治疗剂投与。
26.一种治疗有需要人类个体的病毒性疾病的方法,其包括:(a)向所述个体投与阻断NK细胞的抑制受体的第一化合物,及(b)向所述个体投与治疗有效量的如权利要求13的医药调配物。
27.如权利要求26的方法,其中所述病毒性疾病是由以下引起:HIV(人类免疫缺陷病毒)、RSV(呼吸道合胞病毒)、CMV(巨细胞病毒)、依波拉病毒、A型肝炎病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒、水痘带状疱疹病毒(VZV)、汉江病毒、流感病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、人类疱疹病毒6(HHV-6)、人类疱疹病毒8(HHV-8)、人类乳头状瘤病毒或小病毒。
28.如权利要求1的组合物,其中这些单株抗体包括利妥昔单抗(Rituximab)的轻链序列及重链序列。
29.如权利要求1的组合物,其中这些单株抗体包括曲妥珠单抗(Trastuzumab)的轻链序列及重链序列。
30.如权利要求1的组合物,其中这些单株抗体包括阿达木单抗(Adalimumab)(Humira)的轻链序列及重链序列。
31.如权利要求1的组合物,其中这些单株抗体是FI6单株抗体。
CN201580027960.XA 2014-05-27 2015-05-27 增进抗体功效的通用糖型的组合物及方法 Active CN107074945B (zh)

Applications Claiming Priority (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462003104P 2014-05-27 2014-05-27
US201462003136P 2014-05-27 2014-05-27
US62/003,136 2014-05-27
US62/003,104 2014-05-27
US201462003908P 2014-05-28 2014-05-28
US62/003,908 2014-05-28
US201462020199P 2014-07-02 2014-07-02
US62/020,199 2014-07-02
US201562110338P 2015-01-30 2015-01-30
US62/110,338 2015-01-30
PCT/US2015/032745 WO2015184009A1 (en) 2014-05-27 2015-05-27 Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107074945A true CN107074945A (zh) 2017-08-18
CN107074945B CN107074945B (zh) 2021-08-24

Family

ID=54699741

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580027982.6A Pending CN106661562A (zh) 2014-05-27 2015-05-27 得自类杆菌属的岩藻糖苷酶及其用途
CN201580027960.XA Active CN107074945B (zh) 2014-05-27 2015-05-27 增进抗体功效的通用糖型的组合物及方法
CN201580073451.0A Active CN107406495B (zh) 2014-05-27 2015-07-13 治疗及检测癌症的组合物及方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580027982.6A Pending CN106661562A (zh) 2014-05-27 2015-05-27 得自类杆菌属的岩藻糖苷酶及其用途

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580073451.0A Active CN107406495B (zh) 2014-05-27 2015-07-13 治疗及检测癌症的组合物及方法

Country Status (12)

Country Link
US (4) US10023892B2 (zh)
EP (4) EP3149161B1 (zh)
JP (5) JP6894239B2 (zh)
KR (5) KR20230033737A (zh)
CN (3) CN106661562A (zh)
AU (3) AU2015267052A1 (zh)
CA (2) CA2950577A1 (zh)
DK (2) DK3149045T3 (zh)
FI (1) FI3149045T3 (zh)
IL (2) IL249195B (zh)
TW (2) TWI654202B (zh)
WO (2) WO2015184009A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途

Families Citing this family (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
WO2010009271A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Academia Sinica Glycan arrays on ptfe-like aluminum coated glass slides and related methods
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
GB201201314D0 (en) * 2012-01-26 2012-03-07 Isis Innovation Composition
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
AU2013306098A1 (en) 2012-08-18 2015-02-12 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
CN104902898B (zh) 2012-12-07 2018-02-23 凯莫森特里克斯股份有限公司 二唑内酰胺
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
EP3013365B1 (en) 2013-06-26 2019-06-05 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
WO2014210564A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
CA2923579C (en) 2013-09-06 2023-09-05 Academia Sinica Human inkt cell activation using glycolipids with altered glycosyl groups
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US9982041B2 (en) 2014-01-16 2018-05-29 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
EP3129767B1 (en) 2014-03-27 2021-09-01 Academia Sinica Reactive labelling compounds and uses thereof
AU2015267047A1 (en) 2014-05-27 2017-01-05 Academia Sinica Anti-CD20 glycoantibodies and uses thereof
JP7062361B2 (ja) 2014-05-27 2022-05-06 アカデミア シニカ 抗her2糖操作抗体群およびその使用
AU2015267052A1 (en) 2014-05-27 2016-12-15 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
US10118969B2 (en) * 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
JP7063538B2 (ja) 2014-05-28 2022-05-09 アカデミア シニカ 抗TNFα糖操作抗体群およびその使用
WO2016040369A2 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Academia Sinica HUMAN iNKT CELL ACTIVATION USING GLYCOLIPIDS
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
WO2016118961A1 (en) * 2015-01-24 2016-07-28 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
CA2972072A1 (en) 2015-01-24 2016-07-28 Academia Sinica Novel glycan conjugates and methods of use thereof
EP3250590B1 (en) * 2015-01-30 2021-09-15 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced anti-ssea4 antibody efficacy
WO2016196740A1 (en) * 2015-06-02 2016-12-08 The Rockefeller University Tri-specific antibodies for hiv therapy
TW201808978A (zh) 2016-03-08 2018-03-16 中央研究院 N-聚醣及其陣列之模組化合成方法
SG11201808626WA (en) * 2016-04-07 2018-10-30 Chemocentryx Inc Reducing tumor burden by administering ccr1 antagonists in combination with pd-1 inhibitors or pd-l1 inhibitors
AU2017316663B2 (en) 2016-08-22 2024-02-22 CHO Pharma Inc. Antibodies, binding fragments, and methods of use
EP3288086A1 (en) 2016-08-26 2018-02-28 LG Electronics Inc. Solar cell module and method for manufacturing the same
CA3048452C (en) * 2016-12-29 2021-06-15 Development Center For Biotechnology Processes for preparing glycoprotein-drug conjugates
EP3533451B1 (en) 2017-01-21 2022-07-27 Guangzhou Hanfang Pharmaceuticals Co., Ltd. Application of paeoniflorin-6'-o-benzene sulfonate in medicine for treating sjögren's syndrome
US10260056B2 (en) 2017-03-17 2019-04-16 New England Biolabs, Inc. Cleavage of fucose in N-glycans
JP7265494B2 (ja) * 2017-07-06 2023-04-26 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 糖タンパク質を作製するための細胞培養方法
US12077792B2 (en) * 2018-05-15 2024-09-03 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Engineered microorganisms for production of 2′fucosyllactose and l-fucose
CN110760492A (zh) * 2018-07-25 2020-02-07 复旦大学 一种岩藻糖苷酶及其在制备孟买型红细胞中的应用
WO2021026264A1 (en) * 2019-08-05 2021-02-11 Cho Pharma, Inc. Fusion protein for remodeling antibody glycoform
JP7523789B2 (ja) 2019-09-04 2024-07-29 独立行政法人国立病院機構 抗炎症性非フコシル化免疫グロブリン製剤及びその製造方法
TW202216771A (zh) * 2020-06-26 2022-05-01 德商拜耳廠股份有限公司 用於治療應用之ccr8抗體
US20220143172A1 (en) * 2020-11-06 2022-05-12 CHO Pharma Inc. Immune composition comprising antigen and glycoengineered antibody thereof
CA3222409A1 (en) * 2021-06-07 2022-12-15 Amgen Inc. Using fucosidase to control afucosylation level of glycosylated proteins
CN113960232B (zh) * 2021-10-28 2024-02-20 苏州大学 一种基于唾液特异性岩藻糖基化结构糖谱及其检测方法和应用
CN116554330B (zh) * 2023-07-04 2023-09-01 天津旷博同生生物技术有限公司 一种抗人cd24工程抗体及应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110263828A1 (en) * 2009-12-02 2011-10-27 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
CN102333872A (zh) * 2009-02-25 2012-01-25 默沙东公司 在糖工程化的酵母巴斯德毕赤酵母中对半乳糖同化途径的代谢工程化
WO2013120066A1 (en) * 2012-02-10 2013-08-15 University Of Maryland, Baltimore Chemoenzymatic glycoengineering of antibodies and fc fragments thereof

Family Cites Families (396)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
US4137230A (en) 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
USRE30985E (en) 1978-01-01 1982-06-29 Serum-free cell culture media
US4265814A (en) 1978-03-24 1981-05-05 Takeda Chemical Industries Matansinol 3-n-hexadecanoate
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
JPS5562090A (en) 1978-10-27 1980-05-10 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55164687A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS5566585A (en) 1978-11-14 1980-05-20 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS55164685A (en) 1979-06-08 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55164686A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4309428A (en) 1979-07-30 1982-01-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Maytansinoids
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
US4270537A (en) 1979-11-19 1981-06-02 Romaine Richard A Automatic hypodermic syringe
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4419446A (en) 1980-12-31 1983-12-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA process utilizing a papilloma virus DNA as a vector
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4596792A (en) 1981-09-04 1986-06-24 The Regents Of The University Of California Safe vaccine for hepatitis containing polymerized serum albumin
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
US4601978A (en) 1982-11-24 1986-07-22 The Regents Of The University Of California Mammalian metallothionein promoter system
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4599230A (en) 1984-03-09 1986-07-08 Scripps Clinic And Research Foundation Synthetic hepatitis B virus vaccine including both T cell and B cell determinants
US4599231A (en) 1984-03-09 1986-07-08 Scripps Clinic And Research Foundation Synthetic hepatitis B virus vaccine including both T cell and B cell determinants
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US4601903A (en) 1985-05-01 1986-07-22 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Vaccine against Neisseria meningitidis Group B serotype 2 invasive disease
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
US6024983A (en) 1986-10-24 2000-02-15 Southern Research Institute Composition for delivering bioactive agents for immune response and its preparation
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
CA1283827C (en) 1986-12-18 1991-05-07 Giorgio Cirelli Appliance for injection of liquid formulations
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5079233A (en) 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
GB8704027D0 (en) 1987-02-20 1987-03-25 Owen Mumford Ltd Syringe needle combination
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US4849222A (en) 1987-03-24 1989-07-18 The Procter & Gamble Company Mixtures for treating hypercholesterolemia
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4940460A (en) 1987-06-19 1990-07-10 Bioject, Inc. Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US5004697A (en) 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5053394A (en) 1988-09-21 1991-10-01 American Cyanamid Company Targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
JP2670680B2 (ja) 1988-02-24 1997-10-29 株式会社ビーエムジー 生理活性物質含有ポリ乳酸系微小球およびその製造法
US5339163A (en) 1988-03-16 1994-08-16 Canon Kabushiki Kaisha Automatic exposure control device using plural image plane detection areas
JPH01287029A (ja) 1988-05-13 1989-11-17 Mect Corp 新規抗ウィルス剤
ATE135397T1 (de) 1988-09-23 1996-03-15 Cetus Oncology Corp Zellenzuchtmedium für erhöhtes zellenwachstum, zur erhöhung der langlebigkeit und expression der produkte
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
FR2638359A1 (fr) 1988-11-03 1990-05-04 Tino Dalto Guide de seringue avec reglage de la profondeur de penetration de l'aiguille dans la peau
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
DK0479909T3 (da) 1989-06-29 1997-04-07 Medarex Inc Bispecifikke reagenser til AIDS-behandling
US5690938A (en) 1989-07-07 1997-11-25 Oravax, Inc. Oral immunization with multiple particulate antigen delivery system
US5518725A (en) 1989-09-25 1996-05-21 University Of Utah Research Foundation Vaccine compositions and method for induction of mucosal immune response via systemic vaccination
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5238843A (en) 1989-10-27 1993-08-24 Genencor International, Inc. Method for cleaning a surface on which is bound a glycoside-containing substance
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
ATE139258T1 (de) 1990-01-12 1996-06-15 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US5061620A (en) 1990-03-30 1991-10-29 Systemix, Inc. Human hematopoietic stem cell
US5268164A (en) 1990-04-23 1993-12-07 Alkermes, Inc. Increasing blood-brain barrier permeability with permeabilizer peptides
US5112596A (en) 1990-04-23 1992-05-12 Alkermes, Inc. Method for increasing blood-brain barrier permeability by administering a bradykinin agonist of blood-brain barrier permeability
BR9106374A (pt) 1990-04-24 1993-03-30 Univ Newcastle Res Ass Vacina oral e processo de extrair uma imunoresponsta em um mamifero
CZ288492B6 (en) 1990-04-24 2001-06-13 Biota Scient Management Derivatives of alpha-D-neuraminic acid, process of their preparation, their use and pharmaceutical preparations based thereon
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
DE69132709T2 (de) 1990-06-29 2002-06-20 Large Scale Biology Corp., Vacaville Melaninproduktion durch transformierte mikroorganismen
US5190521A (en) 1990-08-22 1993-03-02 Tecnol Medical Products, Inc. Apparatus and method for raising a skin wheal and anesthetizing skin
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
ATE300615T1 (de) 1990-08-29 2005-08-15 Genpharm Int Transgene mäuse fähig zur produktion heterologer antikörper
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5714374A (en) 1990-09-12 1998-02-03 Rutgers University Chimeric rhinoviruses
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
WO1992006691A1 (en) 1990-10-19 1992-04-30 Biota Scientific Management Pty. Ltd. Anti-viral compounds that bind the active site of influenza neuramidase and display in vivo activity against orthomyxovirus and paramyxovirus
US5508192A (en) 1990-11-09 1996-04-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Bacterial host strains for producing proteolytically sensitive polypeptides
US5264365A (en) 1990-11-09 1993-11-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Protease-deficient bacterial strains for production of proteolytically sensitive polypeptides
ATE164395T1 (de) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5527288A (en) 1990-12-13 1996-06-18 Elan Medical Technologies Limited Intradermal drug delivery device and method for intradermal delivery of drugs
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
AU1991592A (en) 1991-04-30 1992-12-21 Alkermes, Inc. Cationized antibodies against intracellular proteins
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
GB9118204D0 (en) 1991-08-23 1991-10-09 Weston Terence E Needle-less injector
SE9102652D0 (sv) 1991-09-13 1991-09-13 Kabi Pharmacia Ab Injection needle arrangement
CA2116774C (en) 1991-09-19 2003-11-11 Paul J. Carter Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
DE69229477T2 (de) 1991-09-23 1999-12-09 Cambridge Antibody Technology Ltd., Melbourn Methoden zur Herstellung humanisierter Antikörper
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
US5288502A (en) 1991-10-16 1994-02-22 The University Of Texas System Preparation and uses of multi-phase microspheres
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2122719A1 (en) 1991-11-19 1993-05-27 Jack M. Gwaltney, Jr. Combined virustatic antimediator (covam) treatment of common colds
JPH0826057B2 (ja) 1992-01-16 1996-03-13 株式会社ディ・ディ・エス研究所 シアル酸オリゴ糖誘導体及び微粒子キャリヤー
US5667988A (en) 1992-01-27 1997-09-16 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
ATE503496T1 (de) 1992-02-06 2011-04-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Biosynthetisches bindeprotein für tumormarker
US5328483A (en) 1992-02-27 1994-07-12 Jacoby Richard M Intradermal injection device with medication and needle guard
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US5326856A (en) 1992-04-09 1994-07-05 Cytogen Corporation Bifunctional isothiocyanate derived thiocarbonyls as ligands for metal binding
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
JP2904647B2 (ja) 1992-06-12 1999-06-14 株式会社蛋白工学研究所 5−ブロム−4−クロロインド−3−イル−2−シアル酸の製造方法
PT651805E (pt) 1992-07-17 2007-02-28 Dana Farber Cancer Inst Inc Método de ligação intracelular de moléculas-alvo
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
WO1994002178A1 (en) 1992-07-27 1994-02-03 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Targeting of liposomes to the blood-brain barrier
AU668423B2 (en) 1992-08-17 1996-05-02 Genentech Inc. Bispecific immunoadhesins
US5569189A (en) 1992-09-28 1996-10-29 Equidyne Systems, Inc. hypodermic jet injector
DE69328435T2 (de) 1992-10-22 2000-09-14 Kirin Beer K.K., Tokio/Tokyo Neues sphingolglycolipid und verwendung davon
US5807722A (en) 1992-10-30 1998-09-15 Bioengineering Resources, Inc. Biological production of acetic acid from waste gases with Clostridium ljungdahlii
US5334144A (en) 1992-10-30 1994-08-02 Becton, Dickinson And Company Single use disposable needleless injector
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
ATE196606T1 (de) 1992-11-13 2000-10-15 Idec Pharma Corp Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörpern, die gegen ein differenzierung-antigen gerichtet sind, dessen expression auf menschliche b lymphozyt beschränkt ist, für die behandlung von b-zell-lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
JP3523285B2 (ja) * 1993-01-22 2004-04-26 雪印乳業株式会社 糖分解酵素の製造法
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5374541A (en) 1993-05-04 1994-12-20 The Scripps Research Institute Combined use of β-galactosidase and sialyltransferase coupled with in situ regeneration of CMP-sialic acid for one pot synthesis of oligosaccharides
US20020037517A1 (en) 1993-05-28 2002-03-28 Hutchens T. William Methods for sequencing biopolymers
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
AU7980794A (en) 1993-10-22 1995-05-08 Genentech Inc. Methods and compositions for microencapsulation of antigens for use as vaccines
US5369017A (en) 1994-02-04 1994-11-29 The Scripps Research Institute Process for solid phase glycopeptide synthesis
EP0746564B1 (en) 1994-02-25 1998-12-02 E.I. Du Pont De Nemours And Company 4-n-substituted sialic acids and their sialosides
WO1995024176A1 (en) 1994-03-07 1995-09-14 Bioject, Inc. Ampule filling device
US5466220A (en) 1994-03-08 1995-11-14 Bioject, Inc. Drug vial mixing and transfer device
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5622701A (en) 1994-06-14 1997-04-22 Protein Design Labs, Inc. Cross-reacting monoclonal antibodies specific for E- and P-selectin
JP3053873B2 (ja) 1994-08-12 2000-06-19 イムノメディクス,インコーポレイテッド B細胞リンパ腫細胞および白血病細胞に特異的な免疫結合体およびヒト化抗体
US5639635A (en) 1994-11-03 1997-06-17 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
CA2207869A1 (en) 1994-12-02 1996-06-06 Chiron Corporation Method of promoting an immune response with a bispecific antibody
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US5599302A (en) 1995-01-09 1997-02-04 Medi-Ject Corporation Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6673533B1 (en) 1995-03-10 2004-01-06 Meso Scale Technologies, Llc. Multi-array multi-specific electrochemiluminescence testing
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
JPH11511238A (ja) 1995-04-25 1999-09-28 イロリ 遠隔プログラム可能なメモリ付きマトリックス及びその使用
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
US5837234A (en) 1995-06-07 1998-11-17 Cytotherapeutics, Inc. Bioartificial organ containing cells encapsulated in a permselective polyether suflfone membrane
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
WO1997005267A2 (en) 1995-07-26 1997-02-13 Maxim Pharmaceuticals Mucosal delivery of polynucleotides
DE19544393A1 (de) 1995-11-15 1997-05-22 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Synergistische herbizide Mischungen
US5893397A (en) 1996-01-12 1999-04-13 Bioject Inc. Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus
US6027888A (en) 1996-04-05 2000-02-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for producing soluble, biologically-active disulfide-bond containing eukaryotic proteins in bacterial cells
GB9607549D0 (en) 1996-04-11 1996-06-12 Weston Medical Ltd Spring-powered dispensing device
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
US6340702B1 (en) 1996-07-22 2002-01-22 Sankyo Company, Limited Neuraminic acid derivatives, their preparation and their medical use
US6506564B1 (en) 1996-07-29 2003-01-14 Nanosphere, Inc. Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor
EA001603B1 (ru) 1996-11-14 2001-06-25 Байота Сайентифик Менеджмент Пти Лтд. Новые соединения и методы их применения
EP2305027B1 (en) 1996-12-03 2014-07-02 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
TW555562B (en) 1996-12-27 2003-10-01 Kirin Brewery Method for activation of human antigen-presenting cells, activated human antigen-presenting cells and use thereof
EP0970114B1 (en) 1997-04-18 2006-07-12 Novartis AG Neoglycoproteins
US5993412A (en) 1997-05-19 1999-11-30 Bioject, Inc. Injection apparatus
US6083715A (en) 1997-06-09 2000-07-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for producing heterologous disulfide bond-containing polypeptides in bacterial cells
JPH1135593A (ja) 1997-07-18 1999-02-09 Daikin Ind Ltd 2−フルオロフコシル−n−アロイルグルコサミン誘導体及びその中間物、並びにそれらの製造方法
TW480247B (en) 1997-12-12 2002-03-21 Gilead Sciences Inc Novel compounds useful as neuraminidase inhibitors and pharmaceutical compositions containing same
IT1298087B1 (it) 1998-01-08 1999-12-20 Fiderm S R L Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni
AU765703B2 (en) 1998-03-27 2003-09-25 Bruce J. Bryan Luciferases, fluorescent proteins, nucleic acids encoding the luciferases and fluorescent proteins and the use thereof in diagnostics, high throughput screening and novelty items
AU3369999A (en) 1998-04-02 1999-10-25 Genentech Inc. Antibody variants and fragments thereof
AU3657899A (en) 1998-04-20 1999-11-08 James E. Bailey Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6455571B1 (en) 1998-04-23 2002-09-24 Abbott Laboratories Inhibitors of neuraminidases
DE69930424T2 (de) 1998-05-06 2006-12-14 Genentech, Inc., South San Francisco Anti-HER2 Antikörperzusammensetzung
JP3773153B2 (ja) 1998-05-29 2006-05-10 独立行政法人理化学研究所 シアル酸誘導体
US6528286B1 (en) 1998-05-29 2003-03-04 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process for producing glycoproteins
DE69905832T2 (de) 1998-09-18 2004-02-05 Massachusetts Institute Of Technology, Cambridge Biologische Verwendungen von halbleitenden Nanokristallen
FR2783523B1 (fr) * 1998-09-21 2006-01-20 Goemar Lab Sa Fuco-oligosaccharides, enzyme pour leur preparation a partir des fucanes, bacterie productrice de l'enzyme et applications des fuco-oligosaccharides a la protection des plantes
US6994966B2 (en) 2000-02-17 2006-02-07 Glycominds Ltd. Combinatorial complex carbohydrate libraries and methods for the manufacture and uses thereof
US6696304B1 (en) 1999-02-24 2004-02-24 Luminex Corporation Particulate solid phase immobilized protein quantitation
AUPP913999A0 (en) 1999-03-12 1999-04-01 Biota Scientific Management Pty Ltd Novel chemical compounds and their use
US7090973B1 (en) * 1999-04-09 2006-08-15 Oscient Pharmaceuticals Corporation Nucleic acid sequences relating to Bacteroides fragilis for diagnostics and therapeutics
US7854934B2 (en) 1999-08-20 2010-12-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Glycoconjugates, glycoamino acids, intermediates thereto, and uses thereof
US6824780B1 (en) 1999-10-29 2004-11-30 Genentech, Inc. Anti-tumor antibody compositions and methods of use
AUPQ422399A0 (en) 1999-11-24 1999-12-16 University Of New South Wales, The Method of screening transformed or transfected cells
US6727356B1 (en) 1999-12-08 2004-04-27 Epoch Pharmaceuticals, Inc. Fluorescent quenching detection reagents and methods
US7019129B1 (en) 2000-05-09 2006-03-28 Biosearch Technologies, Inc. Dark quenchers for donor-acceptor energy transfer
US7863020B2 (en) 2000-06-28 2011-01-04 Glycofi, Inc. Production of sialylated N-glycans in lower eukaryotes
US6514221B2 (en) 2000-07-27 2003-02-04 Brigham And Women's Hospital, Inc. Blood-brain barrier opening
AU2001286930A1 (en) 2000-08-30 2002-03-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Glucocorticoid blocking agents for increasing blood-brain barrier permeability
AUPR001000A0 (en) 2000-09-08 2000-10-05 Biota Scientific Management Pty Ltd Novel chemical compounds and their use
US7034036B2 (en) 2000-10-30 2006-04-25 Pain Therapeutics, Inc. Inhibitors of ABC drug transporters at the blood-brain barrier
US20030083299A1 (en) 2000-11-04 2003-05-01 Ferguson Ian A. Non-invasive delivery of polypeptides through the blood-brain barrier
JP2002153272A (ja) 2000-11-24 2002-05-28 Inst Of Physical & Chemical Res 生体分子マイクロアレイ
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
AU2002338446A1 (en) 2001-01-23 2002-11-05 University Of Rochester Medical Center Methods of producing or identifying intrabodies in eukaryotic cells
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
DE10121982B4 (de) 2001-05-05 2008-01-24 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Nanopartikel aus Protein mit gekoppeltem Apolipoprotein E zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und Verfahren zu ihrer Herstellung
JP2002371087A (ja) 2001-06-15 2002-12-26 Mitsubishi Chemicals Corp 有機ホスホン酸
JP4317010B2 (ja) 2001-07-25 2009-08-19 ピーディーエル バイオファーマ,インコーポレイティド IgG抗体の安定な凍結乾燥医薬製剤
WO2003009815A2 (en) 2001-07-25 2003-02-06 Biomarin Pharmaceutical Inc. Compositions and methods for modulating blood-brain barrier transport
CN1561389A (zh) 2001-07-25 2005-01-05 纽约大学 糖基神经酰胺作为用于抗传染病和癌症的疫苗的佐剂的用途
CA2455365C (en) 2001-08-03 2014-07-29 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
WO2003031464A2 (en) 2001-10-10 2003-04-17 Neose Technologies, Inc. Remodeling and glycoconjugation of peptides
US7732002B2 (en) 2001-10-19 2010-06-08 Cabot Corporation Method for the fabrication of conductive electronic features
AUPR879601A0 (en) 2001-11-09 2001-12-06 Biota Scientific Management Pty Ltd Novel chemical compounds and their use
US6873914B2 (en) 2001-11-21 2005-03-29 Icoria, Inc. Methods and systems for analyzing complex biological systems
WO2003068821A2 (en) 2002-02-14 2003-08-21 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US20030162695A1 (en) 2002-02-27 2003-08-28 Schatzberg Alan F. Glucocorticoid blocking agents for increasing blood-brain barrier permeability
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
AU2003219277A1 (en) 2002-03-14 2003-09-29 Medical Research Council Intracellular antibodies
DE60328481D1 (de) 2002-05-14 2009-09-03 Novartis Vaccines & Diagnostic Schleimhautapplizierter impfstoff, der das adjuvanz chitosan und menigokokkenantigene enthält
WO2004005313A2 (en) 2002-07-08 2004-01-15 Pliva - Istrazivacki Institut D.O.O. Hybrid molecules of macrolides with steroid/non-steroid anti-inflammatory, antineoplastic and antiviral active molecules
US20080070324A1 (en) 2002-07-15 2008-03-20 Floyd Alton D Quantity control device for microscope slide staining assays
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US20040062682A1 (en) 2002-09-30 2004-04-01 Rakow Neal Anthony Colorimetric sensor
KR20090088973A (ko) 2002-10-17 2009-08-20 젠맵 에이/에스 Cd20에 대한 인간 모노클로날 항체
JP4995423B2 (ja) 2002-12-03 2012-08-08 ブランシェット・ロックフェラー・ニューロサイエンスィズ・インスティテュート 物質を血液−脳関門を渡って輸送するための人工低密度リポタンパク質キャリア
RU2326127C2 (ru) 2002-12-16 2008-06-10 Джинентех, Инк. Варианты иммуноглобулинов и их применение
ES2897506T3 (es) 2003-01-09 2022-03-01 Macrogenics Inc Identificación y modificación de anticuerpos con regiones Fc variantes y métodos de utilización de los mismos
US8367374B2 (en) * 2003-01-22 2013-02-05 Roche Glycart Ag Fusion constructs and use of same to produce antibodies with increased Fc receptor binding affinity and effector function
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
US20040259142A1 (en) 2003-06-04 2004-12-23 Imperial College Innovations Limited Products and methods
EP1639090A4 (en) 2003-06-09 2008-04-16 Univ Michigan COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING AND DIAGNOSING CANCER
JP4148844B2 (ja) 2003-06-11 2008-09-10 ソニー・エリクソン・モバイルコミュニケーションズ株式会社 情報端末装置及び音声付画像ファイルの出力方法
HUE033129T2 (en) * 2003-07-24 2017-11-28 Innate Pharma Sa Methods and compositions for increasing the efficacy of therapeutic antibodies using compounds that potentiate NK cells
WO2005014035A2 (en) * 2003-08-08 2005-02-17 Novo Nordisk Health Care Ag Use of galactose oxidase for selective chemical conjugation of protractor molecules to proteins of therapeutic interest
US20050089473A1 (en) 2003-09-10 2005-04-28 Cedars-Sinai Medical Center Potassium channel mediated delivery of agents through the blood-brain barrier
DE602004030810D1 (de) 2003-09-15 2011-02-10 Smart Tech Lp Implantate mit befestigten silylierten therapeutischen mitteln
EP1689439A2 (en) 2003-09-22 2006-08-16 Acidophil LLC Small molecule compositions and methods for increasing drug efficiency using compositions thereof
US7019288B2 (en) 2003-09-30 2006-03-28 Sequenom, Inc. Methods of making substrates for mass spectrometry analysis and related devices
US20050221337A1 (en) 2003-10-02 2005-10-06 Massachusetts Institute Of Technology Microarrays and microspheres comprising oligosaccharides, complex carbohydrates or glycoproteins
BR122020013239B1 (pt) 2003-11-05 2022-05-10 Roche Glycart Ag Anticorpo anti-cd20 humano tipo ii humanizado, seus usos, bem como composição farmacêutica
KR101520209B1 (ko) 2003-11-06 2015-05-13 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
US20050255491A1 (en) 2003-11-13 2005-11-17 Lee Frank D Small molecule and peptide arrays and uses thereof
JP2007527539A (ja) 2004-03-05 2007-09-27 ザ スクリプス リサーチ インスティテュート ハイスループットグリカンマイクロアレイ
US20050221397A1 (en) 2004-03-30 2005-10-06 Northern Advancement Center For Science & Technology RM2 antigen (beta1,4-GalNAc-disialyl-Lc4) as prostate cancer-associated antigen
EP1740946B1 (en) 2004-04-20 2013-11-06 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
ITMI20040928A1 (it) 2004-05-07 2004-08-07 Uni Di Bologna Dipartiment O D Procedura per la preparazione di coniugati della doxorubicina con l'albumina umana lattosaminata
AU2005258281A1 (en) 2004-06-24 2006-01-05 The Scripps Research Institute Arrays with cleavable linkers
KR20190126461A (ko) 2004-07-22 2019-11-11 제넨테크, 인크. Her2 항체 조성물
US8022043B2 (en) 2004-08-27 2011-09-20 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Ceramide derivatives as modulators of immunity and autoimmunity
WO2006060171A2 (en) 2004-11-16 2006-06-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions related to phage-nanoparticle assemblies
WO2006055925A2 (en) 2004-11-19 2006-05-26 Swiss Federal Institute Of Technology Microarrays for analyte detection
WO2006064983A1 (en) 2004-12-14 2006-06-22 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology Monoclonal antibody specific human embryonic stem cell
EP1833489A4 (en) 2004-12-28 2011-08-03 Univ Rockefeller GLYCOLIPIDS AND RELATED ANALOGUES AS ANTIGENS OF NKT LYMPHOCYTES
US7923013B2 (en) 2004-12-28 2011-04-12 The Rockefeller University Glycolipids and analogues thereof as antigens for NKT cells
WO2006072624A2 (en) 2005-01-06 2006-07-13 Novo Nordisk A/S Compositions and methods for treating viral infection
US7837990B2 (en) 2005-03-28 2010-11-23 The Rockefeller University In vivo expanded NKT cells and methods of use thereof
CA2603414C (en) 2005-03-31 2012-09-18 Biomedics Inc. Anti-cd20 monoclonal antibody
BRPI0610203A2 (pt) 2005-05-24 2010-06-01 Avestha Gengraine Tech Pvt Ltd processo de preparação in vivo de anti-corpo monoclonal anti-cd 20 biologicamente ativo e composição farmacêutica
US20110129412A1 (en) 2005-06-02 2011-06-02 Astrazeneca Ab Antibodies Directed to CD20 and Uses Thereof
PT1896071E (pt) * 2005-06-30 2015-07-09 Janssen Biotech Inc Métodos e composições com melhorias na atividade terapêutica
JP2007036104A (ja) 2005-07-29 2007-02-08 Nec Electronics Corp 半導体装置およびその製造方法
JP2009508476A (ja) * 2005-08-31 2009-03-05 セントカー・インコーポレーテツド 高められたエフェクター機能をもつ抗体定常領域の製造用の宿主細胞株
CA2628255C (en) 2005-10-31 2016-04-19 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating and diagnosing cancer
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
US7781203B2 (en) 2005-12-29 2010-08-24 Corning Incorporated Supports for assaying analytes and methods of making and using thereof
US20090060921A1 (en) * 2006-01-17 2009-03-05 Biolex Therapeutics, Inc. Glycan-optimized anti-cd20 antibodies
CA2647632C (en) 2006-03-27 2017-06-27 University Of Maryland Biotechnology Institute Glycoprotein synthesis and remodeling by enzymatic transglycosylation
EA014533B1 (ru) 2006-05-18 2010-12-30 Ветеринермедицинише Универзитет Вин Способы обнаружения вирусов гриппа
EP2035034A4 (en) 2006-06-09 2009-11-18 Univ Maryland GLYCOSYLATION-CONTROLLED ANTIBODY THERAPY
JP5215298B2 (ja) 2006-07-12 2013-06-19 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング グリコシル化された基質から切断される末端単糖の固相検出
JP2008025989A (ja) 2006-07-15 2008-02-07 Keio Gijuku 局在表面プラズモン共鳴法と質量分析法によるリガンドの分析方法及びそのためのセンサー素子
CA2660516A1 (en) 2006-08-18 2008-02-21 Oncotherapy Science, Inc. Treating or preventing cancers over-expressing reg4 or kiaa0101
AU2007325283B2 (en) 2006-11-27 2012-08-30 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
US8765390B2 (en) 2006-12-08 2014-07-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Identification and isolation of squamous carcinoma stem cells
CA2591496C (en) 2006-12-18 2014-09-02 Japan Science And Technology Agency Method of measuring interaction between biomaterial and sugar chain, method of evaluating biomaterial in sugar chain selectivity, method of screening biomaterial, method of patterning biomaterials, and kits for performing these methods
US20100068806A1 (en) 2007-01-18 2010-03-18 Suomen Punainen Risti, Veripalvelu Novel methods and reagents directed to production of cells
AU2008206887B9 (en) 2007-01-18 2011-07-07 Glykos Finland Oy Novel specific cell binders
CA2675521C (en) 2007-01-22 2016-04-26 Raven Biotechnologies Human cancer stem cells
WO2008103824A1 (en) 2007-02-23 2008-08-28 Chinese Academy Of Inspection And Quarantine (Caiq) Sensitivity-enhanced dot-antibody linked immunogold assay for virus detection
EP2123271B1 (en) 2007-03-07 2011-10-05 Daiichi Sankyo Company, Limited Drug for treatment of influenza
US20080220988A1 (en) 2007-03-07 2008-09-11 Ada Technologies, Inc. Preparing carbohydrate microarrays and conjugated nanoparticles
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
EP2125024B1 (en) 2007-03-23 2013-02-13 TO-BBB Holding B.V. Targeted intracellular delivery of antiviral agents
US7943330B2 (en) 2007-03-23 2011-05-17 Academia Sinica Tailored glycoproteomic methods for the sequencing, mapping and identification of cellular glycoproteins
US20080260774A1 (en) 2007-04-13 2008-10-23 Chi-Huey Wong Alpha-galactosyl ceramide analogs and their use as immunotherapies
MX2009011500A (es) 2007-04-23 2010-01-29 Schering Corp Anticuerpos anti-mdl-1.
US8082480B2 (en) 2007-06-27 2011-12-20 Presagis Distributed checksum computation
CN101883850B (zh) 2007-07-12 2014-11-12 桑格摩生物科学股份有限公司 用于失活α-1,6岩藻糖基转移酶(FUT8)基因表达的方法和组合物
EP2022848A1 (en) 2007-08-10 2009-02-11 Hubrecht Institut A method for identifying, expanding, and removing adult stem cells and cancer stem cells
CN101828114B (zh) 2007-08-24 2015-03-11 Lsip基金运营联合公司 妇科癌症的检出方法
AU2008292859C1 (en) 2007-08-31 2014-03-06 Academia Sinica Synthesis of oseltamivir containing phosphonate congeners with anti-influenza activity
FR2921387B1 (fr) 2007-09-26 2012-04-20 Sanofi Pasteur Procede de production du virus de la grippe
US8647626B2 (en) 2007-10-02 2014-02-11 Avaxia Biologics, Incorporated Compositions comprising TNF-specific antibodies for oral delivery
US20090123439A1 (en) 2007-11-09 2009-05-14 The Jackson Laboratory Diagnostic and prognosis methods for cancer stem cells
WO2009083246A1 (en) 2007-12-31 2009-07-09 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Antibodies to tnf alpha
JP5690713B2 (ja) 2008-03-21 2015-03-25 ダニスコ・ユーエス・インク バイオマスの加水分解促進用ヘミセルラーゼ強化組成物
EP2272854B1 (en) 2008-03-25 2015-08-05 Riken Novel glycolipid and use thereof
EP2952897B1 (en) 2008-04-09 2017-03-22 Becton, Dickinson and Company Sensitive immunoassays using coated nanoparticles
US8383554B2 (en) 2008-04-14 2013-02-26 Academia Sinica Quantitative microarray of intact glycolipid CD1d interaction and correlation with cell-based cytokine production
US7846744B2 (en) * 2008-04-22 2010-12-07 Ravetch Jeffrey V Methods of identifying anti-inflammatory compounds
US8906832B2 (en) 2008-04-30 2014-12-09 Academia Sinica Quantitative analysis of carbohydrate-protein interactions using glycan microarrays: determination of surface and solution dissociation constants
CN105363034A (zh) 2008-05-23 2016-03-02 香港大学 治疗流感的联合疗法
US20110137570A1 (en) * 2008-05-30 2011-06-09 Anthony Lapadula Methods for structural analysis of glycans
AU2009268937A1 (en) 2008-06-16 2010-01-14 Aj Park Compositions for inducing immune responses specific to Globo H and SSEA3 and uses thereof in cancer treatment
CN102066940B (zh) 2008-06-16 2015-05-13 中央研究院 根据对抗Globo H及其片段的抗体量的癌症诊断
JP2010014691A (ja) 2008-06-20 2010-01-21 Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk 腹水中のメソテリン及び/又は巨核球増強因子を検出するための方法、キット、試薬及び装置
US20100003674A1 (en) 2008-07-03 2010-01-07 Cope Frederick O Adult stem cells, molecular signatures, and applications in the evaluation, diagnosis, and therapy of mammalian conditions
US7928077B2 (en) 2008-07-11 2011-04-19 Academia Sinica Alpha-galactosyl ceramide analogs and their use as immunotherapies
WO2010009271A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Academia Sinica Glycan arrays on ptfe-like aluminum coated glass slides and related methods
US20100022916A1 (en) 2008-07-24 2010-01-28 Javanbakhsh Esfandiari Method and Apparatus for Collecting and Preparing Biological Samples for Testing
GB0816679D0 (en) 2008-09-11 2008-10-22 Univ Bath Compounds for treating viral infections
US8080415B2 (en) 2008-09-26 2011-12-20 Eureka Therapeutics, Inc. Modified host cells and uses thereof
WO2010050190A1 (ja) 2008-10-27 2010-05-06 北海道公立大学法人札幌医科大学 がん幹細胞分子マーカー
AR074196A1 (es) * 2008-11-17 2010-12-29 Genentech Inc Metodo y formulacion para reducir la agregacion de una macromolecula bajo condiciones fisiologicas
ES2555220T3 (es) 2009-03-27 2015-12-29 Academia Sinica Donantes de sialil-fosfato selectivos para la preparación de sialósidos y matrices de sialósidos para la detección del virus de la gripe
EP2427211A4 (en) * 2009-05-04 2013-05-01 Abbott Biotech Ltd STABLE FORMULATIONS WITH HIGH PROTEIN CONCENTRATION OF ANTI-TNF-ALPHA HUMAN ANTIBODIES
WO2011005756A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Puretech Ventures, Llc Delivery of agents targeted to microbiota niches
AU2010273118B2 (en) 2009-07-15 2015-10-29 The University Of British Columbia 2,3-fluorinated glycosides as neuraminidase inhibitors and their use as anti-virals
BR112012001395A2 (pt) 2009-07-22 2019-09-24 Enzon Pharmaceuticals Inc metodo para tratar um câncer her2 positivo em um mamifero metodo para aumentar os efetivos de antagonistas do receptor her2 em um mamifero apresentando um cancêr her2 positivo metodo para inibir o crescimento ou proliferação de células her2 positivas em um mamifero
WO2011031236A1 (en) 2009-09-14 2011-03-17 Thailand Excellence Center For Tissue Engineering Phytochemical compositions including xanthones for anti-inflammatory, anti-cytokine storm, and other uses
WO2011074621A1 (ja) 2009-12-18 2011-06-23 株式会社医学生物学研究所 メソセリン(msln)に対する抗体及びその用途
EP2347769A1 (en) 2010-01-20 2011-07-27 Glycotope GmbH Cancer stem cell markers and uses thereof
CA2789623A1 (en) 2010-02-11 2011-08-18 Alexion Pharmaceutical, Inc. Therapeutic methods using anti-cd200 antibodies
CN102858949B (zh) 2010-02-24 2016-07-06 默沙东公司 用于增加在巴氏毕赤酵母中生产的治疗性糖蛋白上的n-糖基化位点占据的方法
AR080513A1 (es) 2010-03-12 2012-04-11 Inmunogen Inc Moleculas de union cd37 y sus inmunoconjugados
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
EP2558571A4 (en) 2010-04-16 2014-09-24 Immune Disease Inst Inc DELAYED POLYPEPTIDE EXPRESSION FROM MODIFIED SYNTHETIC RNAS AND USES THEREOF
WO2011143262A2 (en) 2010-05-10 2011-11-17 Sinica, Academia Zanamivir phosphonate congeners with anti-influenza activity and determining oseltamivir susceptibility of influenza viruses
WO2011145957A1 (en) 2010-05-20 2011-11-24 Auckland Uniservices Limited Agents and methods for detection and/or imaging of hypoxia
BR112012030179A8 (pt) * 2010-05-27 2023-03-14 Merck Sharp & Dohme Polipeptídeo contendo fc
GB201015569D0 (en) 2010-09-16 2010-10-27 Medical Res Council Blood assay for prions
WO2012082635A1 (en) 2010-12-13 2012-06-21 Ancora Pharmaceuticals, Inc. Synthetic oligosaccharide group a streptococcus
BR112013017382B1 (pt) 2011-01-05 2021-03-16 National Taiwan University método de preparação de um composto de fórmula (5)
WO2012116432A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 Mcmaster University Treatment of cancer with dopamine receptor antagonists
US10851174B2 (en) 2011-03-03 2020-12-01 University Of Maryland, Baltimore Core fucosylated glycopeptides and glycoproteins: chemoenzymatic synthesis and uses thereof
WO2012162277A1 (en) 2011-05-25 2012-11-29 Merck Sharp & Dohme Corp. METHOD FOR PREPARING Fc-CONTAINING POLYPEPTIDES HAVING IMPROVED PROPERTIES
LT3418300T (lt) 2011-07-18 2021-01-11 Institute For Research In Biomedicine Neutralizuojantys antikūnai prieš gripo virusą a ir jų panaudojimas
WO2013012066A1 (ja) 2011-07-21 2013-01-24 京セラ株式会社 照明装置、イメージセンサヘッドおよびこれを備える読取装置
CA2841458C (en) 2011-08-12 2019-07-16 Nissan Chemical Industries, Ltd. Tricyclic heterocyclic compounds and jak inhibitors
CA2853809A1 (en) * 2011-10-31 2013-05-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Method for preparing antibodies having improved properties
WO2013074598A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Fc CONTAINING POLYPEPTIDES HAVING INCREASED ANTI-INFLAMMATORY PROPERTIES AND INCREASED FcRN BINDING
EP2604281B1 (en) 2011-12-14 2014-07-30 Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) Clicked somatostatin conjugated analogs for biological applications
WO2013106937A1 (en) 2012-01-19 2013-07-25 The University Of British Columbia 3' equatorial-fluorine-substituted neuraminidase inhibitor compounds, compositions and methods for the use thereof as anti-virals
GB201201314D0 (en) 2012-01-26 2012-03-07 Isis Innovation Composition
US9846160B2 (en) 2012-02-27 2017-12-19 Board Of Regents, The University Of Texas Systems Ganglioside GD2 as a marker and target on cancer stem cells
US20150231219A1 (en) 2012-04-02 2015-08-20 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Dosage and administration of monospecific and bispecific anti-igr-1r and anti-erbb3 antibodies
WO2013151649A1 (en) 2012-04-04 2013-10-10 Sialix Inc Glycan-interacting compounds
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
EP2855745A4 (en) 2012-06-01 2016-01-20 Momenta Pharmaceuticals Inc METHODS RELATING TO ADALIMUM AB
AU2013306098A1 (en) 2012-08-18 2015-02-12 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
TWI573876B (zh) 2012-08-20 2017-03-11 中央研究院 寡醣之大規模酵素合成
US9547009B2 (en) 2012-08-21 2017-01-17 Academia Sinica Benzocyclooctyne compounds and uses thereof
WO2014070957A1 (en) 2012-10-30 2014-05-08 Esperance Pharmaceuticals, Inc. Antibody/drug conjugates and methods of use
JP6506024B2 (ja) * 2012-11-05 2019-04-24 全薬工業株式会社 抗体又は抗体組成物の製造方法
WO2014078373A1 (en) 2012-11-13 2014-05-22 Iogenetics, Llc Antimicrobial compositions
CN103045647A (zh) * 2012-11-29 2013-04-17 大连大学 核心岩藻糖基转移酶基因沉默细胞模型的建立及鉴定方法
GB201305986D0 (en) 2013-04-03 2013-05-15 Asociaci N Ct De Investigaci N Cooperativa En Biomateriales Synthesis and use of isotopically-labelled glycans
EP2983720B1 (en) 2013-04-13 2018-08-01 Universidade de Coimbra Platform for targeted delivery to tumor cells and uses thereof
CN104225616A (zh) 2013-06-08 2014-12-24 中南大学 一种靶向卵巢癌干细胞的抗肿瘤生物制剂
EP3013365B1 (en) 2013-06-26 2019-06-05 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
WO2014210564A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
TWI599370B (zh) * 2013-07-26 2017-09-21 中央研究院 靈芝多醣誘發之抗體介導抗腫瘤活性
AU2014317092B2 (en) 2013-09-05 2018-02-08 Universiteit Gent Cells producing Fc containing molecules having altered glycosylation patterns and methods and use thereof
CA2923579C (en) 2013-09-06 2023-09-05 Academia Sinica Human inkt cell activation using glycolipids with altered glycosyl groups
JP2016530892A (ja) 2013-09-12 2016-10-06 テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド ラキニモド応答性を有する遺伝子発現バイオマーカー
CN103436627B (zh) 2013-09-13 2016-02-03 四川大学华西医院 一种恶性乳腺癌干细胞的筛查试剂盒
WO2015054039A1 (en) * 2013-10-08 2015-04-16 Merck Sharp & Dohme Corp. Fc CONTAINING POLYPEPTIDES HAVING INCREASED BINDING TO FcGammaRIIB
US9982041B2 (en) * 2014-01-16 2018-05-29 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
TWI682033B (zh) * 2014-03-17 2020-01-11 泉盛生物科技股份有限公司 製造具有經修飾的糖苷化作用之重組糖蛋白之方法
EP3129767B1 (en) 2014-03-27 2021-09-01 Academia Sinica Reactive labelling compounds and uses thereof
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
AU2015267047A1 (en) 2014-05-27 2017-01-05 Academia Sinica Anti-CD20 glycoantibodies and uses thereof
AU2015267052A1 (en) 2014-05-27 2016-12-15 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
JP7062361B2 (ja) 2014-05-27 2022-05-06 アカデミア シニカ 抗her2糖操作抗体群およびその使用
JP7063538B2 (ja) * 2014-05-28 2022-05-09 アカデミア シニカ 抗TNFα糖操作抗体群およびその使用
JP6588084B2 (ja) 2014-08-19 2019-10-09 ミルテニイ バイオテック ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ssea4抗原に特異的なキメラ抗原受容体
TWI587871B (zh) 2014-08-22 2017-06-21 中央研究院 新穎之聚醣共軛物及其用途
WO2016040369A2 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Academia Sinica HUMAN iNKT CELL ACTIVATION USING GLYCOLIPIDS
CA2960282A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 The Regents Of The University Of California Macropinocytosing human anti-cd46 antibodies and targeted cancer therapeutics
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
WO2016118090A1 (en) 2015-01-23 2016-07-28 Agency For Science, Technology And Research Cancer specific antigen-binding proteins
CA2972072A1 (en) 2015-01-24 2016-07-28 Academia Sinica Novel glycan conjugates and methods of use thereof
EP3250590B1 (en) * 2015-01-30 2021-09-15 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced anti-ssea4 antibody efficacy
US20170283878A1 (en) 2015-12-11 2017-10-05 Academia Sinica Modulation of globoseries glycosphingolipid synthesis and cancer biomarkers
TW201808978A (zh) 2016-03-08 2018-03-16 中央研究院 N-聚醣及其陣列之模組化合成方法
KR20180121786A (ko) 2016-03-29 2018-11-08 오비아이 파머 인코퍼레이티드 항체, 제약 조성물 및 방법
AU2017316663B2 (en) 2016-08-22 2024-02-22 CHO Pharma Inc. Antibodies, binding fragments, and methods of use
CN110234341A (zh) 2016-08-24 2019-09-13 醣基生医股份有限公司 利用糖苷内切酶突变体重塑糖蛋白及其使用方法
EP3541414B1 (en) 2016-11-21 2024-08-28 OBI Pharma, Inc. Conjugated biological molecules, pharmaceutical compositions and methods
WO2020006176A1 (en) 2018-06-27 2020-01-02 Obi Pharma, Inc. Glycosynthase variants for glycoprotein engineering and methods of use

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102333872A (zh) * 2009-02-25 2012-01-25 默沙东公司 在糖工程化的酵母巴斯德毕赤酵母中对半乳糖同化途径的代谢工程化
US20110263828A1 (en) * 2009-12-02 2011-10-27 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
WO2013120066A1 (en) * 2012-02-10 2013-08-15 University Of Maryland, Baltimore Chemoenzymatic glycoengineering of antibodies and fc fragments thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WEI HUANG ET AL.,: "Chemoenzymatic Glycoengineering of Intact IgG Antibodies for Gain of Functions", 《J AM CHEM SOC》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116903738A (zh) * 2022-08-02 2023-10-20 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种低甘露糖型抗人肿瘤坏死因子-α单抗及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
EP3149045B1 (en) 2023-01-18
CN107406495B (zh) 2021-07-27
KR20230004916A (ko) 2023-01-06
DK3245225T3 (da) 2021-10-18
FI3149045T3 (fi) 2023-03-20
EP3149045A4 (en) 2017-12-27
AU2021200644B2 (en) 2024-07-18
KR20170098954A (ko) 2017-08-30
IL249195A0 (en) 2017-01-31
IL249183A0 (en) 2017-01-31
AU2021200644A1 (en) 2021-03-04
US20150344544A1 (en) 2015-12-03
US10023892B2 (en) 2018-07-17
DK3149045T3 (da) 2023-03-06
CN107406495A (zh) 2017-11-28
EP3245225A4 (en) 2018-10-31
AU2015267052A1 (en) 2016-12-15
CA2950423A1 (en) 2015-12-03
KR20230033737A (ko) 2023-03-08
EP3149161B1 (en) 2021-07-28
IL249183B (en) 2020-11-30
TWI717319B (zh) 2021-02-01
EP3904388A1 (en) 2021-11-03
EP3149161A1 (en) 2017-04-05
TW201614068A (en) 2016-04-16
JP2017517518A (ja) 2017-06-29
EP3245225B1 (en) 2021-09-22
KR102576850B1 (ko) 2023-09-11
JP2017520241A (ja) 2017-07-27
CN107074945B (zh) 2021-08-24
JP2020041003A (ja) 2020-03-19
WO2015184008A1 (en) 2015-12-03
KR20170005142A (ko) 2017-01-11
US20190119713A1 (en) 2019-04-25
JP6894239B2 (ja) 2021-06-30
TW201613970A (en) 2016-04-16
KR20170010003A (ko) 2017-01-25
AU2015267051B2 (en) 2022-03-17
JP7093612B2 (ja) 2022-06-30
AU2015267051A1 (en) 2017-01-12
US20200165649A1 (en) 2020-05-28
JP2020171320A (ja) 2020-10-22
US20160017390A1 (en) 2016-01-21
JP2018509385A (ja) 2018-04-05
WO2015184009A1 (en) 2015-12-03
IL249195B (en) 2021-10-31
TWI654202B (zh) 2019-03-21
CN106661562A (zh) 2017-05-10
EP3245225A1 (en) 2017-11-22
US11319567B2 (en) 2022-05-03
EP3149045A1 (en) 2017-04-05
EP3149161A4 (en) 2017-12-27
CA2950577A1 (en) 2015-12-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2021200644B2 (en) Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
AU2021200784B2 (en) Anti-CD20 glycoantibodies and uses thereof
CN103987405B (zh) 抗pd‑l1抗体及其用途
TWI732738B (zh) 抗TNF-α醣抗體及其用途
CN106661099A (zh) 抗her2醣抗体及其用途
CN107614521A (zh) 增进抗体功效的通用糖型组合物及方法
US11377485B2 (en) Methods for modifying human antibodies by glycan engineering

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TG01 Patent term adjustment