TW201843176A - 抗-par2抗體及其用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供能夠結合PAR2之抗體及抗原結合片段。在一些實施例中,該等抗PAR2抗體或其抗原結合片段以pH依賴性方式結合PAR2。本發明進一步提供製造及使用該等抗體及抗原結合片段之方法。
Description
本發明提供能夠結合PAR2之抗體及抗原結合片段。在一些實施例中,該等抗PAR2抗體或其抗原結合片段以pH依賴性方式結合PAR2。本發明進一步提供製造及使用該等抗體及抗原結合片段之方法。
慢性疼痛係一種會影響任何人的病況,且對患者、醫療保健系統及經濟會造成負擔。在美國,大約1億人遭受慢性疼痛且由疼痛所致之醫療保健之總年增量成本,包括醫藥成本及所損失時間及工資之經濟成本經估計介於$5600億與$6350億美元之間(Institute of Medicine of The National Academies, 2011)。然而,在慢性疼痛患者之調查中,一半以上的人覺得他們對於其疼痛之控制非常小,甚至無法控制(2006 Voices of Chronic Pain Survey, American Pain Foundation)。疼痛會因癌症至糖尿病至關節炎之多種病況及疾病引起,且可分為以下類別:傷害感受性、神經性及混合型疼痛。傷害感受性疼痛由神經纖維刺激(例如由熱、機械或化學刺激)定義,而神經性疼痛為由諸如神經損傷、疾病及重要地發炎之多種病因引起。發炎是生物體募集免疫細胞及將免疫因子釋放至損傷或感染位點之過程,發言因此係為損傷修復之有益過程以及疼痛之病因。 許多疼痛治療抑制發炎。兩種常用類別之消炎疼痛治療劑為類固醇消炎藥及非類固醇消炎藥(NSAID)。類固醇消炎藥通常抑制前列腺素及白三烯(發炎產物)。此類藥物為可靠且強力的,但具有嚴重副作用風險,包括例如減小之骨骼密度、體重波動、免疫系統抑制及生長/青春期不規律(Irving, P. M.等人 (2007) Aliment Pharmacol Ther. 26(3):313-329;Goodman等人 J Am Acad Orthop Surg. 2007年8月;15(8):450-60)。NSAID抑制環加氧酶-1及/或2 (COX-1及/或COX-2),其本身催化二十碳四烯酸反應為前列腺素。慢性疼痛及發炎可能需要長期治療,其COX酶之長期抑制會導致胃腸道問題,諸如胃出血及潰瘍。鑒於與此類抗發炎疼痛治療相關之風險,需要治療疼痛之替代方法。 G蛋白偶合受體(GPCR)為共用七個連接N端細胞外域及C端細胞內域之跨膜域之共同結構基元之膜蛋白質家族(Granier等人,Nat Chem Biol. 2012年8月; 8(8): 670-673)。GPCR感測細胞外信號,諸如光子、激素、趨化因子等,且活化細胞內G蛋白。存在許多GPCR家族,諸如Frizzled、Rhodopsin、Secretin、Adhesion及蛋白酶活化受體(PAR)家族(Zhang等人 Nature. 2012年12月20日; 492(7429): 387-392;Zhang等人 Mol Cells. 2015年10月;38(10):836-42)。儘管各種GPCR家族共用總體結構特徵,但其展現不同功能,結合至不同配位體,且藉由不同機制活化。GPCR之PAR家族之活化與發炎及傷害感受相關(Gieseler等人 Cell Commun Signal. 2013; 11: 86)。 已識別四種PAR受體:PAR1、PAR2、PAR3及PAR4 (Macfarlane等人 Pharmacol Rev. 2001年6月;53(2):245-82;Gieseler等人 Cell Commun Signal. 2013; 11: 86)。已顯示PAR2活化放大發炎及傷害感受,使得其抑制成為消炎疼痛療法之有吸引力的目標。不同於其他GPCR,PAR係藉由其細胞外域之蛋白水解裂解活化,該蛋白水解裂解展現充當繫栓活化配位體之N端序列。特定言之,PAR2係藉由胰蛋白酶及類胰蛋白酶裂解及活化。 已在血管化組織、氣管、骨母細胞、心血管組織、角質細胞、外分泌腺、白血球、肥大細胞、腸上皮、腎、神經元、胰臟及多種平滑肌類型中偵測到PAR2表現(Macfarlane 見上文)。PAR2亦牽涉與神經性發炎、傷害感受及疼痛傳遞相關之多種疾病或病況。PAR2可藉由若干宿主及病原體源性絲胺酸蛋白酶(例如胰蛋白酶、肥大細胞類胰蛋白酶、組織激肽釋放酶或凝血級聯TF-FVIIa及FVa-FXa之成員)活化。 已顯示單株抗體適用於多種治療應用且當前出售許多抗體治療劑(Maggon, Curr Med Chem. 2007;14(18):1978-87;Brekke及Sandlie, Nat Rev Drug Discov 2: 52-62, 2003)。血流循環中最常見類型之抗體為免疫球蛋白G (IgG)。IgG抗體對於治療目的之有用性取決於若干因素,包括抗體針對其標靶之特異性、其結合至標靶之強度以及可產生抗體之有效程度及自血清清除抗體之速度(抗體之血清半衰期)。抗體之血清半衰期常藉由FcRn (新生兒Fc受體)調節,FcRn結合至免疫球蛋白G (IgG)之Fc域。在活體內,認為IgG藉由流體相胞飲作用非特異性地吸收(Pyzik等人,J Immunol. 2015年5月15日;194(10):4595-603)。一旦處於核內體中,IgG結合至FcRn,其將IgG分類至再循環核內體中且返回細胞表面,遠離溶酶體且遠離降解。儘管IgG之再循環速率經估計為分級分解率之44%,但抗體治療劑仍可在投與後幾天內耗盡(Kim, Jonghan等人 Clin. Immunol. 122.2 (2007): 146-155)。 與發炎相關之疼痛通常為慢性病況。使治療分子之投與劑量及頻率最小化為所需的。因此,需要新消炎疼痛治療劑。標準單株抗體為有吸引力的候選物,但在一些情況下可受其血清半衰期限制。因此,可能需要替代療法。
本發明提供結合PAR2之抗體。本發明之抗體尤其適用於抑制PAR2介導之信號傳導及治療由PAR2活性及/或信號傳導引起或與其相關之疾病及病症。在一些實施例中,本發明提供相比於pH 6.0,在pH 7.4時係以較大親和力結合至PAR2之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中,相比於pH 6.0,抗體或抗原結合片段在pH 7.4時係以大至少5、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100倍之親和力結合至PAR2。在一些實施例中,本發明提供包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之抗體或其抗原結合片段,其中VH包含:i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 3中,ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 4中;及iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 5中;且其中VL包含:i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 8,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 8中;ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 9,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 9中;及iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 10,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 10中;其中當在PAR2結合分析中在pH 7.4下測試時,相比於具有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 2之VH及具有胺基酸序列SEQ ID NO: 7之VL的抗體或抗原結合片段,胺基酸取代、缺失或插入降低抗體或其抗原結合片段對於人類PAR2之結合親和力不超過1000、800、700、500、400、300、200、100、50或10倍。在一些實施例中,胺基酸取代、缺失或插入包含同源取代。在一些實施例中,相比於存在於序列SEQ ID NO: 2中之CDR胺基酸序列,抗體或抗原結合片段在VH CDR中具有不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、插入或缺失。在一些實施例中,相比於存在於序列SEQ ID NO: 7中之CDR胺基酸序列,抗體或抗原結合片段在VL CDR中具有不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、插入或缺失。在一些實施例中,1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、插入或缺失為經組胺酸之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個取代。 在一些實施例中,本發明提供包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之抗體或其抗原結合片段,其中VH包含:i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3;ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4,但其中組胺酸視情況存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置1至17 (例如位置4、5及7-17)之胺基酸位置中之任何一或多者處;及iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5,但其中組胺酸視情況存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置1-8之胺基酸位置中之任何一或多者處;且其中VL包含:i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 8;ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 9;及iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 10,但其中組胺酸視情況存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置1-14之胺基酸位置中之任何一或多者處。在一些實施例中,VH包含:i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3,ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4,iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5,且VL包含:i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 8,ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 9,iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 10。在一些實施例中,本發明提供包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之抗體或其抗原結合片段,其中VH包含:i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 13,ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 14,iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 15,且其中VL包含:i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 18,ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 19,iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 20。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5、8、12、16及17之胺基酸位置處;且其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置2及3之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置7之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置8之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置12之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置15之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置16之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置17之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5及8之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5、8、12及16之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5、8、12、16及17之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置2之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置3之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置2及3之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置1之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置5之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置6之胺基酸位置處。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置14之胺基酸位置處。在一些實施例中,VH-CDR2包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 4、14、24、34、44、54、64、74、84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794及811-818。在一些實施例中,VH-CDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 5、15、25、35、45、55、65、75、85、95、105、115、125、135、145、155、165、175、185、195、205、215、225、235、245、255、265、275、285、295、305、315、325、335、345、355、365、375、385、395、405、415、425、435、445、455、465、475、485、495、505、515、525、535、545、555、565、575、585、595、605、615、625、635、645、655、665、675、685、695、705、715、725、735、745、755、765、775、785、795及819-820。在一些實施例中,VL-CDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790及800。在一些實施例中,VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 14之胺基酸序列,其中VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 15之胺基酸序列,且其中VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。在一些實施例中,VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO:811之胺基酸序列,VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 819之胺基酸序列,且VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。在一些實施例中,VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 814之胺基酸序列,VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 820之胺基酸序列,且VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。在一些實施例中,VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 816之胺基酸序列,VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 15之胺基酸序列,且VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。在一些實施例中,VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 818之胺基酸序列,VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 15之胺基酸序列,且VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。在一些實施例中,VH包含與SEQ ID NO: 803-806中之每一者至少90%一致之構架區。在一些實施例中,VH包含與SEQ ID NO: 803-806中之每一者至少95%一致之構架區。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 803-806之構架區。在一些實施例中,VL包含與SEQ ID NO: 807-810中之每一者至少90%一致之構架區。在一些實施例中,VL包含與SEQ ID NO: 807-810中之每一者至少95%一致之構架區。在一些實施例中,VL包含對應於SEQ ID NO: 807-810之構架區。在一些實施例中,VH包含與選自由以下組成之群的序列至少80%、85%、90%、92%、93%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列:SEQ ID NO: 2、12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、782及792。在一些實施例中,VL包含與選自由以下組成之群的序列至少80%、85%、90%、92%、93%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列:SEQ ID NO: 7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、767、777、787及797。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 12之胺基酸序列且其中VL包含對應於SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 821之胺基酸序列且VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 824之胺基酸序列且VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 827之胺基酸序列且VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 831之胺基酸序列且VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段為抗原結合片段。在一些實施例中,抗原結合片段為scFv。在一些實施例中,抗原結合片段為Fab'。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段為抗體。在一些實施例中,抗體為單株抗體。在一些實施例中,抗體為IgG抗體。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段為人類化的。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段為人類的。在一些實施例中,VH由包含與以下中之任一者至少90%一致之核苷酸序列之核酸編碼:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。在一些實施例中,VH由包含與以下中之任一者至少95%一致之核苷酸序列之核酸編碼:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。在一些實施例中,VH由包含以下中之任一者之核苷酸序列之核酸編碼:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。在一些實施例中,VL由包含與以下中之任一者至少90%一致之核苷酸序列之核酸編碼:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。在一些實施例中,VL由包含與以下中之任一者至少95%一致之核苷酸序列之核酸編碼:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。在一些實施例中,VL由包含以下中之任一者之之核苷酸序列之核酸編碼:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。在一些實施例中,VH由包含與SEQ ID NO: 11至少90%一致之核苷酸序列之核酸編碼。在一些實施例中,VH由包含與SEQ ID NO: 11至少95%一致之核苷酸序列之核酸編碼。在一些實施例中,VH由包含SEQ ID NO: 11之核苷酸序列之核酸編碼。在一些實施例中,VL由包含與SEQ ID NO: 16至少90%一致之核苷酸序列之核酸編碼。在一些實施例中,VL由包含與SEQ ID NO: 16至少95%一致之核苷酸序列之核酸編碼。在一些實施例中,VL由包含SEQ ID NO: 16之核苷酸序列之核酸編碼。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段結合至PAR2。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段阻止胰蛋白酶、類胰蛋白酶及/或間質蛋白酶與PAR2相互作用。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段阻止胰蛋白酶、類胰蛋白酶及/或間質蛋白酶裂解PAR2。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段預防PAR2細胞外域之裂解。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段抑制繫栓配體之暴露。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段阻止繫栓配體與PAR2之第二跨膜環相互作用。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段相比於在pH 6.0,在pH 7.4時係以更大的親和力結合至PAR2。在一些實施例中,當在PAR2結合分析中在pH 7.4下與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,抗體或抗原結合片段之IC50
小於100 nM。在一些實施例中,當在PAR2結合分析中在pH 7.4下與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,抗體或抗原結合片段之IC50
小於50 nM。在一些實施例中,當在PAR2結合分析中在pH 7.4下與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,抗體或抗原結合片段之IC50
小於40 nM。在一些實施例中,當在PAR2結合分析中在pH 6.0下與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,抗體或抗原結合片段之IC50
大於500 nM。在一些實施例中,當在PAR2結合分析中在pH 6.0下與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,抗體或抗原結合片段之IC50
大於1000 nM。在一些實施例中,當在PAR2結合分析中在pH 6.0下與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,抗體或抗原結合片段之IC50
大於1100 nM。在一些實施例中,當在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,抗體或抗原結合片段在pH 7.4時之IC50
相比於pH 6.0時低20倍以上。在一些實施例中,當在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,抗體或抗原結合片段在pH 7.4時之IC50
相比於pH 6.0時低25倍以上。在一些實施例中,當在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,抗體或抗原結合片段在pH 7.4時之IC50
相比於pH 6.0時低30倍以上。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段在人類A549細胞中的鈣內流分析之IC50
小於3.0×10- 10
M。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段在人類A549細胞中的鈣內流分析之IC50
小於1.5×10- 10
M。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段在大鼠KNRK細胞中的鈣內流分析之IC50
小於7.0×10- 10
M。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段在大鼠KNRK細胞中的鈣內流分析之IC50
小於5.5×10- 10
M。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段在食蟹獼猴CYNOM-K1細胞中的鈣內流分析之IC50
小於7.0×10- 11
M。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段在食蟹獼猴CYNOM-K1細胞中的鈣內流分析之IC50
小於5.0×10- 11
M。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段在鼠類LL/2細胞中的鈣內流分析之IC50
小於6.0×10- 11
M。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段在鼠類LL/2細胞中的鈣內流分析之IC50
小於4.0×10- 11
M。在一些實施例中,相比於缺乏組胺酸修飾之抗體或抗原結合片段,該抗體或抗原結合片段更緩慢地自經治療患者之血清清除。在一些實施例中,當在PAR2結合分析中在pH 7.4測試時,相比於具有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 2之VH及具有胺基酸序列SEQ ID NO: 7之VL的抗體或抗原結合片段,視情況存在之一或多個組胺酸降低抗體或其抗原結合片段對於人類PAR2之結合親和力不超過1000、800、700、500、400、300、200、100、50或10倍。 在一些實施例中,本發明提供能夠表現本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者之核酸。在一些實施例中,核酸包含與以下中之任一者至少90%一致之核苷酸序列:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。在一些實施例中,核酸包含與以下中之任一者至少95%一致之核苷酸序列:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。在一些實施例中,核酸包含以下中之任一者之核苷酸序列:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。在一些實施例中,本發明提供包含與以下中之任一者至少90%一致之核苷酸序列的核酸:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。在一些實施例中,核酸包含與以下中之任一者至少95%一致之核苷酸序列:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。在一些實施例中,核酸包含以下中之任一者之核苷酸序列:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。在一些實施例中,本發明提供包含與SEQ ID NO: 11至少90%一致之核苷酸序列的核酸。在一些實施例中,核酸包含與SEQ ID NO: 11至少95%一致之核苷酸序列。在一些實施例中,核酸包含SEQ ID NO: 11之核苷酸序列。在一些實施例中,本發明提供包含與SEQ ID NO: 16至少90%一致之核苷酸序列的核酸。在一些實施例中,核酸包含與SEQ ID NO: 16至少95%一致之核苷酸序列。在一些實施例中,核酸包含SEQ ID NO: 16之核苷酸序列。 在一些實施例中,本發明提供包含本文所揭示之核酸中之任一者之載體。在一些實施例中,本發明提供包含本文所揭示之核酸中之任何一或多者之載體集合。 在一些實施例中,本發明提供包含本文所揭示之載體中之任何一或多者之宿主細胞。 在一些實施例中,本發明提供包含醫藥學上可接受之載劑及本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者之組合物。 在一些實施例中,本發明提供包含本文所揭示之抗體或其抗原結合片段中之任一者之凍乾組合物。 在一些實施例中,本發明提供包含本文所揭示之抗體或其抗原結合片段中之任一者之復原凍乾組合物。在一些實施例中,組合物經調配以藉由口含錠、噴霧、經口投藥、延遲釋放或持續釋放、經黏膜投藥、糖漿、黏膜黏著劑、經頰調配物、黏膜黏著錠劑、局部投藥、非經腸投藥、注射、皮下投藥、口服溶液、經直腸投藥、經頰投藥或經皮投藥來投與。 在一些實施例中,本發明提供包含本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者或本文所揭示之組合物中之任一者之套組。 在一些實施例中,本發明提供一種用於治療有需要之個體之疼痛之方法,其包含向個體投與醫藥學上有效量之本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者。在一些實施例中,本發明提供一種用於治療有需要之個體之疼痛之方法,其包含向個體投與醫藥學上有效量之本文所揭示之組合物中之任一者。在一些實施例中,疼痛選自由以下組成之群:傷害感受性、神經性及混合型疼痛。在一些實施例中,疼痛係與頭痛、慢性頭痛、偏頭痛、癌症、病毒感染、類風濕性關節炎、骨關節炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、肝病、多發性硬化症、脊髓損傷、疱疹後神經痛、糖尿病神經病變、下背痛、發炎性心臟病、腎病、胃炎、牙齦炎、牙周病、哮喘、慢性阻塞性肺病、自體免疫疾病、大腸急躁症、纖維肌痛、腿痛、腿不寧症候群、糖尿病神經病變、過敏性病況、手術操作、急性或慢性物理性損傷、骨折或擠壓傷、脊髓損傷、發炎疾病、非發炎性神經性或功能不良性疼痛病況或其組合相關聯。在一些實施例中,疼痛為骨關節炎疼痛。在一些實施例中,個體為人類。 在一些實施例中,本發明提供一種產生本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者之方法,其包含以下步驟:在培養細胞中表現本文所揭示之核酸中之任一者,純化抗體或抗原結合片段。
相關申請案之交叉參考 本申請案主張2017年3月16日申請之美國臨時申請案第62/472,462號及2018年3月2日申請之美國臨時申請案第62/637,766號之優先權。前述申請案以全文引用之方式併入本文中。 序列表 本申請案含有序列表,其已以ASCII格式以電子方式提交且其全部內容以引用之方式併入本文中。該ASCII複本創建於2018年3月8日,名為1848081-0002-093-WO1_SL.txt且大小為351,668位元組。 在描述本發明之前,應理解,本發明不限於描述之特定方法及實驗條件,因為此類方法及條件可變化。亦應理解,本文所用之術語僅出於描述特定實施例之目的,且不意欲作為限制性的。 除非另外規定,否則本文所使用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域之一般熟習此項技術者通常所理解相同之含義。 雖然類似或等效於本文所描述之彼等方法及材料之任何方法及材料可用於本發明之實踐或測試中,但現在描述較佳方法及材料。 A.定義
除非上下文另外明確指示,否則如本說明書及所附申請專利範圍中所用,單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個指示物。 胺基酸在本文中可由其通常已知之三字母符號或由IUPAC-IUB生物化學命名法委員會(Biochemical Nomenclature Commission)所推薦之單字母符號來提及。同樣,核苷酸可由其通常可接受之單字母密碼來提及。 在此處方便地指出「及/或」當用於本文中時,欲視為伴以或不伴以另一者而特定揭示兩個指定特徵或組分中之每一者。舉例而言,「A及/或B」欲視為特定揭示(i) A、(ii) B及(iii) A及B中之每一者,正如在本文中個別地陳述每一者一般。 術語「多肽」、「肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用,且係指胺基酸殘基之聚合物。該等術語適用於胺基酸聚合物,其中一或多個胺基酸殘基為相應天然存在之胺基酸的人工化學模擬物,以及適用於天然存在之胺基酸聚合物及非天然存在之胺基酸聚合物。 如本文所用之表述「蛋白酶活化受體2」、「PAR2」及其類似者係指具有與SEQ ID NO: 801中之任一者之胺基酸序列,或其生物學活性片段至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列的人類PAR2蛋白質。 術語「繫栓配位體」係指自身結合至且活化PAR2受體的PAR2之N端部分區域。在一些實施例中,PAR2之繫栓配位體部分直至蛋白酶(例如凝血酶或胰蛋白酶)以蛋白分解方式裂解PAR2酶之一部分才暴露。在一些實施例中,繫栓配位體對應於與SEQ ID NO: 802中之任一者之胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之多肽。 如本文所用,「結合PAR2之抗體」、「抗PAR2抗體」及其類似者包括結合膜結合PAR2或其片段之抗體及其抗原結合片段。在一些實施例中,抗PAR2抗體或其抗原結合片段結合至PAR2之繫栓配位體部分。 B.抗體及其抗原結合片段
如本文所用,「本發明之抗體或抗原結合片段」係指本文提供之抗體及抗原結合片段中之任何一或多者。本發明之抗體及抗原結合片段包含有包含重鏈可變域之重鏈(VH)及包含輕鏈可變域之輕鏈(VL)。VH域包含三個CDR,諸如本文提供且如藉由Chothia、Kabat或IMGT系統所定義或識別之CDR中之任一者。此等CDR通常穿插有構架區(FR),且在一起包含VH域。類似地,VL包含三個CDR,諸如本文提供且如藉由Chothia、Kabat或IMGT系統所定義之CDR中之任一者。此等CDR通常穿插有構架區(FR),且在一起包含VL域。諸如FR1、FR2、FR3及/或FR4之FR區域可藉由Chothia、Kabat或IMGT系統類似地定義或識別。在整個本申請案中,當CDR指示為如藉由Chothia、Kabat或IMGT系統所識別或定義時,意謂CDR係根據該系統(例如Chothia CDR、Kabat CDR或IMGT CDR)。此等術語中之任一者可用於指示指代Chothia、Kabat或IMGT CDR。 如本文所用,術語「抗體」亦包括完整抗體分子之抗原結合片段。如本文所用,術語抗體之「抗原結合部分」、抗體之「抗原結合片段」及其類似者包括特異性結合抗原以形成複合體之任何天然存在、以酶方式可獲得之合成或基因工程改造多肽或醣蛋白。抗體之抗原結合片段可使用任何適合之標準技術衍生自例如完整抗體分子,諸如涉及編碼抗體可變域及視情況存在之恆定域之DNA之操縱及表現的蛋白水解消化或重組基因工程改造技術。此類DNA為已知的及/或易於購自例如商業來源、DNA文庫(包括例如噬菌體-抗體文庫),或可合成。DNA可以化學方式或藉由使用分子生物學技術定序及操縱,例如以將一或多個可變域及/或恆定域配置為適合之組態,或引入密碼子,產生半胱胺酸殘基,修飾、添加或缺失胺基酸等。 在一些實施例中,本發明提供相比於pH 6.0時,在pH 7.4時係以較大親和力結合至PAR2之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中,相比於pH 6.0時,抗體或抗原結合片段在pH 7.4時係以大至少5、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100倍之親和力結合至PAR2。在一些實施例中,本發明提供包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之抗體或其抗原結合片段,其中VH包含:i),VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 3中,ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 4中;及iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 5中;且其中VL包含:i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 8,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 8中;ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 9,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 9中;及iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 10,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 10中;其中當在PAR2結合分析中在pH 7.4下測試時,相比於具有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 2之VH及具有胺基酸序列SEQ ID NO: 7之VL的抗體或抗原結合片段,胺基酸取代、缺失或插入降低抗體或其抗原結合片段對於人類PAR2之結合親和力不超過1000、800、700、500、400、300、200、100、50、10或5倍。在一些實施例中,胺基酸取代、缺失或插入包含同源取代。在一些實施例中,相比於存在於序列SEQ ID NO: 2中之CDR胺基酸序列,抗體或抗原結合片段在VH CDR中具有不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、插入或缺失。在一些實施例中,相比於存在於序列SEQ ID NO: 7中之CDR胺基酸序列,抗體或抗原結合片段在VL CDR中具有不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、插入或缺失。在一些實施例中,1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、插入或缺失為經組胺酸之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個取代。 在一些實施例中,本發明提供包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之抗體或其抗原結合片段,其中VH包含:i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 13,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 13中;ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 14,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 14中;及iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 15,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 15中;且其中VL包含:i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 18,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 18中;ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 19,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 19中;及iii) VL-CDR3具有胺基酸序列SEQ ID NO: 20;但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於序列SEQ ID NO: 20中;其中當在PAR2結合分析中在pH 7.4下測試時,相比於具有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 12之VH及具有胺基酸序列SEQ ID NO: 17之VL的抗體或抗原結合片段,胺基酸取代、缺失或插入降低抗體或其抗原結合片段對於人類PAR2之結合親和力不超過1000、800、700、500、400、300、200、100、50、10或5倍。在一些實施例中,胺基酸取代、缺失或插入包含同源取代。在一些實施例中,相比於存在於序列SEQ ID NO: 12中之CDR胺基酸序列,抗體或抗原結合片段在VH CDR中具有不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、插入或缺失。在一些實施例中,相比於存在於序列SEQ ID NO: 17中之CDR胺基酸序列,抗體或抗原結合片段在VL CDR中具有不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、插入或缺失。在一些實施例中,本發明提供包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之抗體或其抗原結合片段,其中VH包含:i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 13,ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 14,iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 15,且其中VL包含:i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 18,ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 19,iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 20。在一些實施例中,1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、插入或缺失為經組胺酸之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個取代。 在一些實施例中,本發明提供抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域;其中VH域包含以下中之任一者中所闡述之胺基酸序列之至少一個、兩個或全部三個CDR (例如如使用Chothia、IMGT或Kabat系統中之任一者所量測):SEQ ID NO: 2、12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、782及792。在一些實施例中,本發明提供抗體或抗原結合片段,其中抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域;其中VH域包含以下中之任一者中所闡述之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3 (例如如使用Chothia、IMGT或Kabat系統中之任一者所量測):SEQ ID NO: 2、12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、782及792。在一些實施例中,本發明提供抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域;其中VH域包含SEQ ID NO: 2或12中所闡述之胺基酸序列之至少一個、兩個或全部三個CDR (例如如使用Chothia、IMGT或Kabat系統中之任一者所量測)。在一些實施例中,本發明提供抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域;其中VL域包含以下中之任一者中所闡述之胺基酸序列之至少一個、兩個或全部三個CDR (例如如使用Chothia、IMGT或Kabat系統中之任一者所量測):SEQ ID NO: 7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、767、777、787及797。在一些實施例中,本發明提供抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域;其中VL域包含以下中之任一者中所闡述之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3 (例如如使用Chothia、IMGT或Kabat系統中之任一者所量測):SEQ ID NO: 7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、767、777、787及797。在一些實施例中,本發明提供抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域;其中VL域包含SEQ ID NO: 7或17中所闡述之胺基酸序列之至少一個、兩個或全部三個CDR (例如如使用Chothia、IMGT或Kabat系統中之任一者所量測)。在一些實施例中,本發明提供抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域;其中VH域包含以下中之任一者中所闡述之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3 (例如如使用Chothia、IMGT或Kabat系統中之任一者所量測):SEQ ID NO: 2、12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、782及792,且其中VL域包含以下中之任一者中所闡述之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3 (例如如使用Chothia、IMGT或Kabat系統中之任一者所量測):SEQ ID NO: 7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、767、777、787及797。在一些實施例中,本發明提供抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變(VL)域及重鏈可變(VH)域;其中VH域包含SEQ ID NO: 2或12中所闡述之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3 (例如如使用Chothia、IMGT或Kabat系統中之任一者所量測),且其中VL域包含SEQ ID NO: 7或17中所闡述之胺基酸序列之CDR1、CDR2及CDR3 (例如如使用Chothia、IMGT或Kabat系統中之任一者所量測)。 一旦已確定編碼此類抗體之核苷酸序列,可藉由重組方法產生嵌合或人類化抗體。將編碼抗體之核酸引入至宿主細胞中且使用此項技術中眾所周知且如本文中所揭示之材料及程序表現。在一些實施例中,VH係藉由包含與以下中之任一者至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列的核酸編碼:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。在一些實施例中,VH係藉由包含與SEQ ID NO: 1或11至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列的核酸編碼。在一些實施例中,VL係藉由包含與以下中之任一者至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列的核酸編碼:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。在一些實施例中,VL係藉由包含與SEQ ID NO: 6或16至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列的核酸編碼。 本發明包括結合PAR2之抗PAR2抗體及其抗原結合片段。在一些實施例中,抗體為中和及/或阻斷之抗PAR2抗體或抗原結合片段。如本文所用,「中和」或「阻斷」之抗體或抗原結合片段意欲指與PAR2之結合:(i)干擾PAR2與蛋白酶(例如胰蛋白酶、類胰蛋白酶及/或間質蛋白酶)之間的相互作用;(ii)抑制PAR2藉由蛋白酶之裂解;(iii)抑制PAR2信號傳導或PAR2活化;及/或(iv)導致PAR2之至少一種生物功能之抑制的抗體或抗原結合片段。在一些實施例中,本發明之抗體或抗原結合片段抑制PAR2之活化。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段抑制非活性、未裂解PAR2轉化為活性、裂解PAR2。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段抑制繫栓配位體之暴露。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段抑制PAR2受體藉由其繫栓配位體之活化。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段抑制繫栓配位體與PAR2之第二跨膜域的結合。由抗-PAR2中和或阻斷抗體引起之抑制不必完整,只要其可使用適當分析偵測。在一些實施例中,相比於不受抑制之活性PAR2,抗體或其抗原結合片段抑制PAR2活性至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或100%。偵測代表性抗PAR2抗體或抗原結合片段之活性的分析之一些實例描述於範例部分中。熟練技工瞭解其他抗PAR2抗體活性分析。 在特定實施例中,本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者干擾PAR2與蛋白酶之間的相互作用。在一些實施例中,蛋白酶為胰蛋白酶。在一些實施例中,蛋白酶為嗜中性白血球彈性蛋白酶。在一些實施例中,蛋白酶為嗜中性白血球蛋白酶3。在一些實施例中,蛋白酶為肥大細胞類胰蛋白酶。在一些實施例中,蛋白酶為組織因子/因子VIIa/因子Xa。在一些實施例中,蛋白酶激肽釋放酶相關肽酶。在一些實施例中,蛋白酶為膜繫栓絲胺酸蛋白酶-1/間質蛋白酶1。在一些實施例中,蛋白酶為寄生蟲半胱胺酸蛋白酶。在一些實施例中,抗PAR2抗體或抗原結合片段以小於約15 nM之IC50
值活體外阻斷PAR2與蛋白酶(例如胰蛋白酶)之間的相互作用,如藉由諸如範例部分中所述之結合分析所量測。在某些實施例中,本發明之抗體或抗原結合片段在pH 7.4時係以小於約200 nM、150 nM、100 nM、50 nM、40 nM、30 nM、20 nM、10 nM、1 nM、500 pM、400 pM、200 pM、100 pM、50 pM、5 pM、1 pM或0.1 pM之IC50
值活體外阻斷PAR2與蛋白酶(例如胰蛋白酶)之間的相互作用。在某些實施例中,本發明之抗體或抗原結合片段在pH 6.0時係以大於約300 nM、500 nM、750 nM、1000 nM、1100 nM或1200 nM之IC50
值活體外阻斷PAR2與蛋白酶(例如胰蛋白酶)之間的相互作用。在某些實施例中,抗PAR2抗體或其片段之IC50
係以抗原決定基競爭分析,諸如以本文提供之範例部分中所述之抗原決定基競爭分析量測。在一些實施例中,抗PAR2抗體或其片段之IC50
係以細胞效能分析量測。在一些實施例中,細胞效能分析利用人類細胞(例如A549細胞)、大鼠細胞(例如KNRK細胞)、食蟹獼猴細胞(例如CYNOM-K1細胞)或鼠類細胞(例如LL/2細胞)。在一些實施例中,細胞效能分析係利用鈣內流分析(例如本文提供之範例部分中所述之鈣內流分析)。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段以鈣內流分析係以小於1 nM、500 pM、400 pM、200 pM、100 pM、50 pM、10 pM、5 pM、1 pM或0.1 pM之IC50
抑制鈣內流。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段藉由胰蛋白酶阻止PAR2之異常活化。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段抑制/減輕發炎誘發之疼痛。 在特定實施例中,本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者干擾PAR2與蛋白酶(例如胰蛋白酶)之間的相互作用。在一些實施例中,抗體阻止蛋白酶(例如胰蛋白酶)結合、裂解及/或活化PAR2。本發明提供在生理、細胞外pH (亦即pH 7.4)時係以高親和力結合PAR2分子之抗PAR2抗體及其抗原結合片段。在一些實施例中,抗體及抗體之抗原結合片段在pH 7.4時(例如在25℃或37℃下)係以小於約5 nM、1 nM、900 pM、800 pM、700 pM、650 pM、600 pM、500 pM、200 pM、100 pM或50 pM之KD
結合PAR2。在一些實施例中,抗體及抗體之抗原結合片段在弱酸性pH (諸如pH 6.0)時(例如在25℃下或37℃)係以大於約1 nM、5 nM、10 nM、15 nM、20 nM、25 nM、30 nM、40 nM、50 nM、60 nM、80 nM或100 nM之KD
結合PAR2。在一些實施例中,弱酸性pH為內體區室之pH。在一些實施例中,KD
可根據當前標準方法,諸如使用表面電漿子共振(SPR)或石英晶體微天平(QCM)量測。本發明亦包括以大於約1.5分鐘、1.75分鐘、2分鐘、2.5分鐘、3分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘或30分鐘之解離半衰期(t1/2)特異性結合於PAR2之抗PAR2抗體及其抗原結合片段,該解離半衰期如在pH 7.4時在25℃或37℃下使用諸如表面電漿子共振之分析所量測。在一些實施例中,抗PAR2抗體及其抗原結合片段以小於約1分鐘、45秒、30秒、20秒、15秒、13秒、7秒、5秒或3秒之解離半衰期(t1/2)結合至PAR2,該解離半衰期如在弱酸性pH (例如pH 6)時在25℃或37℃下使用諸如表面電漿子共振之分析所量測。在一些實施例中,弱酸性pH為內體區室之pH。在一些實施例中,KD
可根據當前標準方法,諸如使用表面電漿子共振(SPR)或石英晶體微天平(QCM)量測。本發明之抗體或抗原結合片段可具有上述生物特性中之一或多者,或其任何組合。本發明之抗體之其他生物特性將在一般熟習此項技術者審閱本發明,包括本文提供之範例部分後顯而易見。 如應用於多肽,術語「大體類似性」或「大體上類似」意謂兩個肽序列在諸如藉由程式GAP或BESTFIT,使用默認空位權重最佳比對時,具有至少95%序列一致性,甚至更佳至少98%或99%序列一致性。不一致殘基位置之差異較佳為保守性胺基酸取代。在一些實施例中,相比於參考序列(例如胺基酸序列SEQ ID NO: 2、7、12或17中之任一者),本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個保守胺基酸取代。「保守胺基酸取代」為其中胺基酸殘基經具有類似化學特性(例如電荷或疏水性)之側鏈(R基團)的另一胺基酸殘基取代的胺基酸取代。大體而言,保守性胺基酸取代將不會實質上改變蛋白質之功能特性。在其中兩個或兩個以上胺基酸序列彼此間差異為保守性取代的情況下,可上調序列一致性或相似度百分比以根據保守取代性質加以校正。進行此調節的方式為熟習此項技術者所熟知。參見例如Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331。含有具有類似化學特性之側鏈的胺基酸之群之實例包括(1)脂族側鏈:甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸;(2)脂族羥基側鏈:絲胺酸及蘇胺酸;(3)含有醯胺之側鏈:天冬醯胺及麩醯胺酸;(4)芳族側鏈:苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸;(5)鹼性側鏈:離胺酸、精胺酸及組胺酸;(6)酸性側鏈:天冬胺酸及麩胺酸,及(7)含硫側鏈為半胱胺酸及甲硫胺酸。較佳保守胺基酸取代群組為:纈胺酸-白胺酸-異白胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、離胺酸-精胺酸、丙胺酸-纈胺酸、麩胺酸鹽-天冬胺酸及天冬醯胺-麩醯胺酸。 或者,保守置換為在揭示於Gonnet等人 (1992) Science 256: 1443-1445中之PAM250對數似然性矩陣中具有正值之任何變化。「適度保守」置換為在PAM250對數似然性矩陣中具有非負值之任何變化。 抗體(免疫球蛋白)視其重鏈恆定域之胺基酸序列而定,可歸為不同類別。存在五種主要類別之免疫球蛋白:IgA、IgD、IgE、IgG及IgM,且此等類別中之若干者可進一步分成子類(同型),例如IgG1
、IgG2
、IgG3
、IgG4
、IgA1
及IgA2
。對應於不同類別免疫球蛋白之重鏈恆定域分別稱作α、δ、ε、γ及μ。不同類別之免疫球蛋白的次單位結構及三維構型為熟知的且一般描述於例如Abbas等人,Cellular and Mol . Immunology
, 第4版. (W.B. Saunders, Co., 2000)中。抗體可為由抗體與一或多種其他蛋白質或肽共價或非共價結合所形成的較大融合分子之一部分。 抗原結合片段之非限制性實例包括:(i) Fab片段;(ii) Fab'片段;(iii) F(ab')2片段;(iv) Fd片段;(v) Fv片段;(vi)單鏈Fv (scFv)分子;(vii) dAb片段;及(viii)由模擬抗體之高變區(例如經分離互補決定區(CDR),諸如CDR3肽),或限制性FR3-CDR3-FR4肽之胺基酸殘基組成之最小識別單位。其他工程改造分子,諸如域特異性抗體、單域抗體、駱駝抗體、域缺失抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、微型抗體、奈米抗體(例如單價奈米抗體、二價奈米抗體等)、阿德奈汀(adnectin)、小模組免疫藥物(SMIP)及鯊魚可變IgNAR域亦包涵於如本文所用之表述「抗原結合片段」內。 抗體之抗原結合片段將通常包含至少一個可變域(例如VH或VL中之至少一者)。可變域可為任何尺寸或胺基酸組成且一般將包含與一或多個構架序列相鄰或同框之至少一個CDR。在具有與VL域相關聯之VH域的抗原結合片段中,VH及VL域可在任何適合之配置內相對於彼此定位。舉例而言,可變區可為二聚體且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚體。或者,抗體之抗原結合片段可含有單體VH或VL域。 在某些實施例中,抗體之抗原結合片段可含有至少一個共價連接至至少一個恆定域之可變域。可發現於本發明抗體之抗原結合片段內之可變域及恆定域之非限制性、例示性構型包括:(i) VH-CH1;(ii) VH-CH2;(iii) VH- CH3;(iv) VH-CH1-CH2;(V) VH-CH1-CH2-CH3;(vi) VH-CH2-CH3;(vii) VH-CL;(viii) VL-CH1;(ix) VL-CH2;(x) VL-CH3;(xi) VL-CH1-CH2;(xii) VL-CH1-CH2-CH3;(xiii) VL-CH2-CH3;及(xiv) VL-CL。在可變域及恆定域之任何構型,包括以上列出之例示性構型中之任一者中,可變域及恆定域可直接彼此連接或可藉由完全或部分鉸鏈區或連接區連接。鉸鏈區可由至少2個(例如5、10、15、20、40、60個或更多個)胺基酸組成,該等胺基酸在單一多肽分子中之相鄰可變域及/或恆定域之間產生可撓性或半可撓性鍵。在一些實施例中,鉸鏈區包含甘胺酸-絲胺酸連接子。 此外,本發明抗體之抗原結合片段可包含彼此及/或與一或多個單體VH或VL域非共價締合(例如藉由二硫鍵)的以上列出之可變域及恆定域構型中之任一者之均二聚體或雜二聚體(或其他多聚體)。 如同完整抗體分子,抗原結合片段可為單特異性或多特異性的(例如雙特異性的)。抗體之多特異性抗原結合片段將通常包含至少兩個不同可變域,其中各可變域能夠特異性結合於獨立抗原或相同抗原上之不同抗原決定基。任何多特異性抗體型式,包括本文所揭示之例示性雙特異性抗體型式可使用此項技術中可用之常規技術而適用於本發明抗體之抗原結合片段的情況下。 在本發明之某些實施例中,本發明之抗PAR2抗體為人類抗體。如本文所用,術語「人類抗體」意欲包括具有衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區之抗體。本發明之人類抗體可包括未藉由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基(例如在活體外藉由隨機或位點特異性突變誘發或在活體內藉由體細胞突變引入之突變),例如在CDR中且在一些實施例中,CDR3。然而,如本文所用之術語「人類抗體」不意欲包括CDR序列衍生自已移植至人類構架序列上之另一哺乳動物物種,諸如小鼠之生殖系的抗體。 本發明抗體可在一些實施例中為重組人類抗體。如本文所用,術語「重組人類抗體」意欲包括藉由重組方式製備、表現、產生或分離之所有人類抗體,諸如使用轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體(進一步描述於下文);自重組、組合人類抗體文庫分離之抗體(進一步描述於下文);自對於人類免疫球蛋白基因而言為轉殖基因之動物(例如小鼠)分離之抗體(參見例如Taylor等人 (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295)或藉由涉及見人類免疫球蛋白基因序列剪接為其他DNA序列之任何其他方式製備、表現、產生或分離之抗體。此類重組人類抗體具有衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區。然而,在某些實施例中,該等重組人類抗體可經受活體外突變誘發(或當使用人類Ig序列之動物轉殖基因時,為活體內體細胞突變誘發),且因此重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列雖然衍生自且關於人類生殖系VH及VL序列,但該等胺基酸序列為可不活體內天然存在於人類抗體生殖系抗體庫內之序列。 人類抗體可以與鉸鏈異質性相關之兩種形式存在。在一種形式中,免疫球蛋白分子包含大致150-160 kDa之穩定四鏈構築體,其中二聚體藉由鏈間重鏈二硫鍵固持在一起。在第二形式中,二聚體不經由鏈間二硫鍵連接且形成由共價耦合輕鏈及重鏈組成的約75-80 kDa之分子(半抗體)。此等形式極難以分離,甚至在親和純化之後亦如此。 第二形式於各種完整IgG同型中之出現頻率係歸因於(但不限於)與抗體之鉸鏈區同型相關之結構差異。人類lgG4
鉸鏈之鉸鏈區中之單一胺基酸取代可將第二形式之出現顯著減少(Angal等人 (1993) Molecular Immunology 30:105)至通常使用人類lgG1
鉸鏈觀測之水準。當前揭示內容涵蓋在鉸鏈、CH2或CH3區中具有一或多個突變之抗體,該一或多個突變可為例如在生產中提高所需抗體形式之產率所需。 本發明抗體可為經分離抗體或經分離抗原結合片段。如本文所用,「經分離抗體」或「經分離抗原結合片段」意謂已自其天然環境之至少一種組分識別及分離及/或回收之抗體或抗原結合片段。舉例而言,已自生物體之至少一種組分,或自抗體天然地存在或天然地產生之組織或細胞分離或移除之抗體或抗原結合片段為出於本發明目的之「經分離抗體」或「經分離抗原結合片段」。經分離抗體亦包括重組細胞內之原位抗體。經分離抗體或抗原結合片段為已經受至少一個純化或分離步驟之抗體或抗原結合片段。根據某些實施例,經分離抗體或抗原結合片段可大體上不含其他細胞材料及/或化學物質。 相比於衍生抗體之對應生殖系序列,本文所揭示之抗PAR2抗體或抗原結合片段可在重鏈及輕鏈可變域之構架區及/或CDR區中包含一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失。本發明包括衍生自本文所揭示之胺基酸序列中之任一者之抗體及其抗原結合片段,其中一或多個構架區及/或CDR區內之一或多個胺基酸突變為衍生抗體或抗原結合片段之生殖系序列之對應殘基,或另一人類生殖系序列之對應殘基,或對應生殖系殘基之保守胺基酸取代(此類序列變化在本文中統稱為「生殖系突變」)。一般熟習此項技術者以本文所揭示之重鏈及輕鏈可變區序列起始,可容易地產生許多包含一或多個個別生殖系突變或其組合之抗體及抗原結合片段。在某些實施例中,VH及/或VL域內之所有構架區及/或CDR殘基突變回衍生抗體之原始生殖系序列中發現之殘基。在其他實施例中,僅某些殘基突變回原始生殖系序列,例如僅FR1之前8個胺基酸內或FR4之最後8個胺基酸內發現之突變殘基,或僅CDR1、CDR2或CDR3內發現之突變殘基。在其他實施例中,構架區及/或CDR殘基中之一或多者突變為不同生殖系序列(亦即不同於最初衍生抗體之生殖系序列的生殖系序列)之對應殘基。在一些實施例中,VH構架區1包含與序列SEQ ID NO: 803至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中,VH構架區2包含與序列SEQ ID NO: 804至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中,VH構架區3包含與序列SEQ ID NO: 805至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中,VH構架區4包含與序列SEQ ID NO: 806至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中,VL構架區1包含與序列SEQ ID NO: 807至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中,VL構架區2包含與序列SEQ ID NO: 808至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中,VL構架區3包含與序列SEQ ID NO: 809至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中,VL構架區4包含與序列SEQ ID NO: 810至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中,相比於SEQ ID NO: 803-806中之任一者之參考序列,VH構架包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個保守取代。在一些實施例中,相比於SEQ ID NO: 807-810中之任一者之參考序列,VL構架包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個保守取代。 此外,本發明抗體可在構架區及/或CDR區內含有兩個或大於兩個生殖系突變之任何組合,例如其中某些個別殘基突變為特定生殖系序列之對應殘基,而不同於原始生殖系序列之某些其他殘基得以維持或突變為不同生殖系序列之對應殘基。在獲得後,可容易地測試含有一或多個生殖系突變之抗體及抗原結合片段之一或多種所需特性,諸如改良之結合特異性、增加之結合親和力、改良或增強之拮抗或促效生物特性(視具體情況)、降低之免疫原性等。以此一般方式獲得之抗體及抗原結合片段包涵於本發明內。 本發明亦包括抗PAR2抗體,其包含具有一或多個保守取代的本文所揭示之VH、VL及/或CDR胺基酸序列中之任一者之變異體。舉例而言,本發明包括具有VH、VL及/或CDR胺基酸序列之抗PAR2抗體,該等胺基酸序列相對於本文所揭示之VH、VL及/或CDR胺基酸序列中之任一者具有例如10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個保守胺基酸取代。 術語「抗原決定基」係指與稱為互補位之抗體分子之可變區中之特異性抗原結合位點相互作用的抗原決定子。單一抗原可具有一個以上的抗原決定基。因此,不同抗體可結合至抗原上之不同區域且可具有不同生物效果。抗原決定基可為構形或線性的。構形抗原決定基由來自線性多肽鏈之不同區段之空間並列胺基酸產生。線性抗原決定基為由多肽鏈中之相鄰胺基酸殘基產生之抗原決定基。在某些情況下,抗原決定基可包括抗原上之醣類、磷醯基或磺醯基部分。 應注意,本發明之抗體或抗原結合片段中之任一者之任何部分可類似地經修飾,諸如藉由抗原決定基標籤、一或多個PEG部分及其類似物。此外,抗體或抗原結合片段可包含超過一個抗原決定基標籤,諸如2個抗原決定基標籤,或可包括0個抗原決定基標籤。 當參考核酸或其片段時,術語「大體一致性」或「大體上一致」指示當與經另一核酸(或其互補鏈)之適當核苷酸插入或缺失最佳比對時,在至少約95%,且更佳至少約96%、97%、98%或99%之核苷酸鹼基中存在核苷酸序列一致性,如藉由序列一致性之任何熟知算法,諸如FASTA、BLAST或Gap所量測,如下文所論述。與參考核酸分子具有大體一致性之核酸分子可在某些情況下編碼與藉由參考核酸分子編碼之多肽具有相同或大體類似胺基酸序列之多肽。 通常使用序列分析軟體來量測多肽之序列類似性,其亦稱為序列一致性。蛋白質分析軟體使用分配於各種取代、缺失及其他修飾,包括保守胺基酸取代之類似性的量度來匹配類似序列。舉例而言,GCG軟體含有諸如Gap及Bestfit之程式,其可在預設參數下使用以測定密切相關之多肽,諸如來自生物體之不同物種的同源多肽之間,或野生型蛋白與其突變蛋白之間的序列同源性或序列一致性。參見例如GCG版本6.1。亦可使用使用預設或推薦參數之FASTA,GCG版本6.1之程式來比較多肽序列。FASTA (例如FASTA2及FASTA3)提供查詢序列與檢索序列之間的最佳重疊區域之比對及序列一致性百分比(Pearson (2000) 見上文)。當比較本發明序列與含有來自不同生物體之大量序列之資料庫時,另一較佳算法為使用預設參數之電腦程式BLAST,尤其為BLASTP或TBLASTN。參見例如Altschul等人 (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410及Altschul等人 (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-402。在一些實施例中,使用EMBOSS Needle成對序列比對來比較序列。 在一些實施例中,抗體或抗原結合片段為抗原結合片段。在一些實施例中,抗原結合片段為scFv。在一些實施例中,抗原結合片段為Fab'。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段為抗體。在一些實施例中,抗體為單株抗體。 隨著開發單株抗體,抗體變得適用作醫藥劑且受關注。使用藉由培養物中之連續細胞株產生抗體分子之任何方法產生單株抗體。製備單株抗體之適合方法之實例包括Kohler等人 (1975, Nature 256:495-497)之融合瘤方法及人類B細胞融合瘤方法(Kozbor, 1984, J. Immunol. 133:3001;及Brodeur等人,1987, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, (Marcel Dekker, Inc., New York), 第51-63頁)。在許多情況下,融合瘤用於產生鼠類或嚙齒動物來源之初始抗體。彼初始抗體可接著經修飾,諸如使用重組技術以產生嚙齒動物變異體、嵌合抗體、人類化抗體及其類似物。存在其他產生初始抗體之方法,且此類方法為此項技術中已知的。然而,不管用於產生初始抗體或甚至初始抗體之變異體的方法,非人源之任何給定抗體可隨後經修飾以增加其人類化。 本發明之抗體或抗原結合片段可藉由使用組合文庫篩選具有所需的一或多種活性之抗體而製得。舉例而言,此項技術中已知多種方法用於產生噬菌體呈現庫及針對具有所需結合特徵之抗體篩選此類文庫。此類方法一般描述於Hoogenboom等人 Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien等人編, Human Press, Totowa, NJ, 2001)中。舉例而言,一種產生所關注之抗體的方法係經由使用噬菌體抗體文庫,如Lee等人,J. Mol. Biol. (2004), 340(5): 1073-93中所述。 原則上,合成抗體純系藉由篩檢含有噬菌體之噬菌體庫來選擇,該等庫呈現融合至噬菌體鞘蛋白之抗體可變區(Fv)之各種片段。該等噬菌體文庫藉由針對所要抗原的親和層析來淘選。能夠結合至所要抗原的表現Fv片段之純系吸附至抗原且因此與庫中之非結合純系分離。結合純系隨後自抗原溶離,且可藉由額外抗原吸附/溶離循環進一步增濃。本發明抗體中之任一者可如下獲得:藉由設計適合之抗原篩選程序以選擇所關注之噬菌體純系,接著使用Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), 第1-3卷中所述之來自所關注之噬菌體純系之Fv序列及適合之恆定區(Fc)序列構築全長抗體純系。可有利的是增加非人類抗體之人類化以使其更適用於人類個體及細胞,無論用於診斷、治療或研究目的。抗體可經修飾以用作治療劑。此類抗體(包括抗體片段)之實例包括嵌合、人類化及全人類抗體。此項技術中存在許多用於產生嵌合、人類化及人類抗體之方法。在本發明之情況下,若VH域或VL域中之至少一者為人類化的,則將抗體視為人類化的。此外,若FR區中之至少一者之至少一部分的胺基酸序列已相對於親本非人類(例如鼠類)抗體經修飾,使得彼部分之胺基酸序列對應於人類抗體或人類共同序列之胺基酸序列,則VH或VL域為人類化的。在某些實施例中,VH域之至少一個、兩個、三個或四個FR區及/或VL域之至少一個、兩個、三個或四個FR區已經修飾(整體或部分)以使得其序列與人類序列更密切相關。對於前述任一者,在某些實施例中,人類化抗體片段可提供於人類或非人類輕鏈及/或重鏈恆定區(例如包含CL及CH1、鉸鏈、CH2及/或CH3域中之一或多者)之背景下。在某些實施例中,本發明之人類化抗體或抗原結合片段將提供於人類輕鏈及/或重鏈恆定域(若存在)之背景下。組合本文所述之人類化輕鏈可變域及/或重鏈可變域中之任一者之抗體及抗體結合片段為例示性的本發明之抗體及抗原結合片段。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段為人類化的。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段為嵌合的。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段為人類的。 根據本發明之某些實施例,提供包含Fc域之抗PAR2抗體,該Fc域相比於中性pH時(例如在酸性pH下)包含一或多個增強或減弱抗體與FcRn受體之結合的突變。舉例而言,本發明包括在Fc域之CH2或CH3區中包含突變之抗PAR2抗體,其中該等突變在酸性環境下(例如在pH範圍介於約5.5至約6.0之核內體中)會增加Fc域與FcRn之親和力。當向動物投與此類突變抗體時,會導致抗體之血清半衰期增加。此類Fc修飾之非限制性實例包括例如位置250 (例如E或Q);250及428 (例如L或F);252 (例如L/Y/F/W或T)、254 (例如S或T)及256 (例如S/R/Q/E/D或T)處之修飾;或位置428及/或433 (例如H/L/R/S/P/Q或K)及/或434 (例如H/F或Y)處之修飾;或位置250及/或428處之修飾;或位置307或308 (例如308F、V308F)及434處之修飾。在一個實施例中,修飾包含428L (例如M428L)及434S (例如N434S)修飾;428L、259I (例如V259I)及308F (例如V308F)修飾;433K (例如H433K)及434 (例如434Y)修飾;252、254及256 (例如252Y、254T及256E)修飾;250Q及428L修飾(例如T250Q及M428L);及307及/或308修飾(例如308F或308P)。在另一實施例中,修飾包含265A (例如D265A)及/或297A (例如D297A)修飾。前述Fc域突變及本文所揭示之抗體可變域內之其他突變之所有可能的組合涵蓋於本發明範疇內。在一些實施例中,抗體包含三重突變L234F/L235E/P331S (「TM」)。TM造成人類IgG1分子與人類C1q、CD64、CD32A及CD16之結合活性的極度減少。參見例如Oganesyan等人,Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 64:700-704 (2008)。藉由修飾經識別為參與Fc與FcRn受體之間相互作用的胺基酸殘基亦可產生半衰期增加的抗體。舉例而言,將三重突變M252Y/S254T/T256E (『YTE』)引入人類免疫球蛋白G (IgG)分子之CH2域中,使其與人類新生兒Fc受體(FcRn)之結合增加。參見美國專利第7.083,784號,其內容以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中,抗體包含YTE修飾。 根據本發明之某些實施例,提供在VH及/或VL域中包含一或多個突變之抗PAR2抗體,該一或多個突變增強或減弱抗體與PAR2之結合,例如相比於中性pH,在酸性pH下。舉例而言,本發明包括在VH域之CDR2 (SEQ ID NO: 4)或CDR3 (SEQ ID NO: 5)區及/或VL域之CDR3 (SEQ ID NO: 10)中包含突變之抗PAR2抗體,其中突變藉由組胺酸置換一或多個胺基酸且降低VH及/或VL域與PAR2在酸性環境中(例如在pH範圍介於約5.5至約6.0之核內體中)之親和力。當向動物投與此類突變抗體時,會導致抗體之血清半衰期增加。此類VH修飾之非限制性實例包括例如CDR2 (SEQ ID NO: 4)之胺基酸位置4、5、7、8、10、11、12、14、15、16及17及CDR3 (SEQ ID NO: 5)之1、2、4、5及7處之修飾。此類VL修飾之非限制性實例包括例如CDR3 (SEQ ID NO: 10)之位置1、2、4、5、6、7、8、9、12及14處之修飾。在另一實施例中,VH包含CDR2 (SEQ ID NO: 4)之位置5、8、12、16及17及CDR3 (SEQ ID NO: 5)之位置2及3處之修飾。前述VH及VL域突變,及本文所揭示之Fc域內之其他突變之所有可能的組合涵蓋於本發明範疇內。在一些實施例中,本發明提供包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之抗體或其抗原結合片段,其中VH包含:i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3,;ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4,但其中組胺酸視情況存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置1至17 (例如4、5及7-17)之胺基酸位置中之任何一或多者處;及iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5,但其中組胺酸視情況存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置1-8之胺基酸位置中之任何一或多者處;且其中VL包含:i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 8;ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 9;及iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 10,但其中組胺酸視情況存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置1-14之胺基酸位置中之任何一或多者處。在一些實施例中,VH包含:i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3,ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4,iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5,且其中VL包含:i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 8,ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 9,iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 10。在一些實施例中,抗體或其抗原片段在對應於SEQ ID NO: 4之位置7、8、12、15、16或17中之任何一或多者之胺基酸位置組處具有胺酸。在一些實施例中,抗體或其抗原片段在對應於SEQ ID NO: 5之位置2或3中之任何一或多者之胺基酸位置組處具有胺酸。在一些實施例中,抗體或其抗原片段在對應於SEQ ID NO: 10之位置1、5、6或14中之任何一或多者之胺基酸位置組處具有胺酸。在一些實施例中,組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5、8、12、16及17之胺基酸位置處;且其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置2及3之胺基酸位置處。在一些實施例中,VH-CDR2包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 4、14、24、34、44、54、64、74、84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794及811-818。在一些實施例中,VH-CDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 5、15、25、35、45、55、65、75、85、95、105、115、125、135、145、155、165、175、185、195、205、215、225、235、245、255、265、275、285、295、305、315、325、335、345、355、365、375、385、395、405、415、425、435、445、455、465、475、485、495、505、515、525、535、545、555、565、575、585、595、605、615、625、635、645、655、665、675、685、695、705、715、725、735、745、755、765、775、785、795及819-820。在一些實施例中,VL-CDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790及800。在一些實施例中,VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 14之胺基酸序列,其中VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 15之胺基酸序列,且其中VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。在一些實施例中,VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 811之胺基酸序列,VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 819之胺基酸序列,且VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。在一些實施例中,VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 814之胺基酸序列,VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 820之胺基酸序列,且VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。在一些實施例中,VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 816之胺基酸序列;VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 15之胺基酸序列,且VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。在一些實施例中,VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 818之胺基酸序列,VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 15之胺基酸序列,且VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。在一些實施例中,VH包含各自與SEQ ID NO: 803-806至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之構架區。在一些實施例中,VL包含各自與SEQ ID NO: 807-810至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之構架區。在一些實施例中,VH包含與選自由以下組成之群的序列中之任一者至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列:SEQ ID NO: 2、12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、782及792。在一些實施例中,VL包含與選自由以下組成之群的序列中之任一者至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列:SEQ ID NO: 7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、767、777、787及797。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 12之胺基酸序列且VL包含對應於SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 821之胺基酸序列且VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 824之胺基酸序列且VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 827之胺基酸序列且VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。在一些實施例中,VH包含對應於SEQ ID NO: 831之胺基酸序列且VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。 本發明亦包括包含嵌合重鏈恆定(CH)區之抗PAR2抗體,其中嵌合CH區包含衍生自超過一種免疫球蛋白同型之CH區之片段。舉例而言,本發明抗體可包含嵌合CH區,其包含衍生自人類IgG1
、人類IgG2
或人類IgG4
分子之CH2域之一部分或全部,以及衍生自人類IgG1
、人類IgG2
或人類IgG4
分子之CH3域之一部分或全部。根據某些實施例,本發明抗體包含具有嵌合鉸鏈區之嵌合CH區。舉例而言,嵌合鉸鏈可包含衍生自人類IgG1
、人類IgG2
或人類IgG4
鉸鏈區之「上鉸鏈」胺基酸序列(根據EU編號之位置216至227之胺基酸殘基),以及衍生自人類IgG1
、人類IgG2
或人類IgG4
鉸鏈區之「下鉸鏈」序列(根據EU編號之位置228至236之胺基酸殘基)。 根據某些實施例,嵌合鉸鏈區包含衍生自人類IgG1
或人類IgG4
上鉸鏈之胺基酸殘基及衍生自人類IgG2
下鉸鏈之胺基酸殘基。包含如本文所述之嵌合CH區之抗體可在某些實施例中展現經改良Fc效應功能而不會不利地影響抗體之治療或藥物動力學特性。(參見例如US 2015-0203591 A1)。 本發明包括與PAR2之一或多個胺基酸相互作用之抗PAR2抗體或抗原結合片段。抗體結合之抗原決定基可由PAR2之3個或3個以上(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個)胺基酸之單一連續序列組成。或者,抗原決定基可由PAR2之複數個非連續胺基酸(或胺基酸序列)組成。一般熟習此項技術者已知之各種技術可用於判定抗體是否在多肽或蛋白質內「與一或多個胺基酸相互作用」。例示性技術包括例如諸如描述Antibodies, Harlow及Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)之常規交叉阻斷分析、丙胺酸掃描突變分析、肽墨點分析(Reineke, 2004, Methods Mol Biol 248:443-463)及肽裂解分析。另外,可採用諸如抗原決定基切除、抗原決定基提取及抗原化學修飾之方法(Tomer 2000 Protein Science 9:487-496)。可用於識別與抗體相互作用之多肽內之胺基酸的另一方法為藉由質譜偵測之氫/氘交換。一般而言,氫/氘交換方法涉及氘標記所關注蛋白質,接著使抗體與氘標記蛋白質結合。隨後,將蛋白質/抗體複合物轉移至水以允許氫-氘交換在除了經抗體保護之殘基(其保持經氘標記)以外的所有殘基處發生。在抗體解離之後,對目標蛋白質進行蛋白酶裂解及質譜分析,藉此展現對應於與抗體相互作用之特定胺基酸的氘標記殘基。參見例如Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267 (2):252-259;Engen及Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A。 本發明進一步包括與本文所述之抗體或抗原結合片段中之任一者(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 12及17之抗體或抗原結合片段)結合至相同抗原決定基之抗PAR2抗體或其抗原結合片段。同樣,本發明亦包括與本文所述之抗體或抗原結合片段中之任一者(例如包含胺基酸序列SEQ ID NO: 12及17之抗體或抗原結合片段)競爭結合至PAR2之抗PAR2抗體及抗原結合片段。熟練技工可藉由使用此項技術中已知且例示於本文中之常規方法容易地確定抗體是否與參考抗PAR2抗體結合至相同抗原決定基,或競爭結合。舉例而言,為確定測試抗體是否與本發明之參考抗PAR2抗體結合至相同抗原決定基,使參考抗體結合至PAR2蛋白質。然後,評估測試抗體結合至PAR2分子之能力。若測試抗體在與參考抗PAR2抗體飽和結合之後能夠結合至PAR2,則可得出測試抗體與參考抗PAR2抗體結合至不同抗原決定基的結論。另一方面,若測試抗體在與參考抗PAR2抗體飽和結合之後不能夠結合至PAR2分子,則測試抗體可與本發明之參考抗PAR2抗體所結合之抗原決定基結合至相同抗原決定基。可隨後進行其他常規實驗(例如肽突變及結合分析),以確認所觀測之測試抗體之結合缺失事實上是否係由於結合至與參考抗體相同之抗原決定基,或位阻(或另一現象)是否引起所觀測之結合缺失。此類實驗可使用ELISA、RIA、Biacore、流動式細胞測量術或此項技術中可用之任何其他定量或定性抗體結合分析來進行。根據本發明之某些實施例,若例如1、5、10、20或100倍過量之一種抗體抑制另一種抗體之結合至少50%,但較佳75%、90%或甚至99% (如在競爭性結合分析中量測),則兩種抗體結合至相同(或重疊)抗原決定基(參見例如Junghans等人,Cancer Res. 1990:50:1495-1502)。 或者,若降低或消除一種抗體之結合的抗原中之基本上所有胺基酸突變降低或消除另一種抗體之結合,則將兩種抗體視為結合至相同抗原決定基。若僅一個子集的降低或消除一種抗體之結合的胺基酸突變降低或消除另一種抗體之結合,則將兩種抗體視為具有「重疊抗原決定基」。 為確定抗體是否與參考抗PAR2抗體競爭結合(或交叉競爭結合),在兩個定向進行上述結合方法:在第一定向中,使參考抗體在飽和條件下結合至PAR2蛋白質,接著評估測試抗體與PAR2分子之結合。在第二定向中,使測試抗體在飽和條件下結合至PAR2分子,接著評估參考抗體與PAR2分子之結合。若在兩個定向中,僅第一(飽和)抗體能夠結合至PAR2分子,則推斷測試抗體及參考抗體競爭結合至PAR2。如一般熟習此項技術者應瞭解,與參考抗體競爭結合之抗體可能未必與參考抗體結合至相同抗原決定基,但可藉由結合重疊或相鄰抗原決定基而與參考抗體位阻結合。 用於產生單株抗體,包括全人類單株抗體之方法為此項技術中已知的。任何此類已知方法可用於本發明之背景下以製造特異性結合於人類PAR2之人類抗體。 舉例而言,使用VELOCIMMUNE™技術,或用於產生全人類單株抗體之任何其他已知方法,起初分離與PAR2具有高親和力之嵌合抗體,其具有人類可變區及小鼠恆定區。如在以下實驗部分中,關於所需特徵,包括親和力、選擇性、抗原決定基等表徵及選擇抗體。必要時,小鼠恆定區經所需人類恆定區,例如野生型或經修飾lgG1
或lgG4
替換以產生全人類抗PAR2抗體。雖然所選恆定區可根據特定用途而改變,但高親和力抗原結合及標靶特異性特徵存在於可變區。在某些情況下,全人類抗PAR2抗體直接自抗原陽性B細胞分離。 本發明之抗PAR2抗體及抗體片段涵蓋具有可不同於所描述抗體之胺基酸序列,但保留結合PAR2 (例如SEQ ID NO: 801),或更特定言之,在一些實施例中,PAR2繫栓配位體(例如SEQ ID NO: 802)之能力之胺基酸序列的蛋白質。當相比於親本序列時,此類變異體抗體及抗體片段包含一或多個胺基酸添加、缺失或取代,但展現基本上等效於所描述抗體之生物活性。同樣,本發明之編碼抗PAR2抗體之DNA序列涵蓋當相比於所揭示之序列時包含一或多個核苷酸添加、缺失或取代,但編碼基本上生體等效於本發明之抗PAR2抗體或抗體片段之抗PAR2抗體或抗體片段的序列。此類變異體胺基酸及DNA序列之實例描述於上文。 若(例如)兩種抗體或抗原結合片段為藥物等效物或藥物替代物,則將兩種抗體或抗原結合片段視為生物等效的,當在類似實驗條件下以相同莫耳劑量(單次劑量或多次劑量)投與時,該等藥物等效物或藥物替代物之吸收速率及程度不展示顯著差異。若一些抗體或抗原結合片段在吸收程度上但不在吸收速率上等效,則將其視為等效物或藥物替代物,且又可將其視為生物等效的,因為吸收速率中之此類差異係故意的且反映在標記中,對於在例如慢性使用方面達到有效主體藥物濃度不是必要的,且對於所研究之特定藥品而言被視為醫療上無關緊要的。 在一些實施例中,若兩種抗體或抗原結合片段在安全性、純度及效能中不存在臨床上有意義的差異,則其為生物等效的。 在一些實施例中,若患者可在參考產品與生物產品之間轉換一或多次而無相比於不具有此類轉換之持續療法的副作用,包括免疫原性之臨床顯著變化或減弱的有效性之風險之預期增加,則兩種抗體或抗原結合片段為生物等效的。 在一些實施例中,若兩種抗體或抗原結合片段均在已知用於一或多種使用條件的一或多種常用作用機制的程度上藉由此類機制起作用,則其為生物等效的。 生體相等性可藉由活體內及活體外方法展示。生物等效性量測包括例如(a)人類或其他哺乳動物中之活體內測試,其中抗體或其代謝物之濃度係隨時間變化量測於血液、血漿、血清或其他生物流體中;(b)與人類活體內生物可用性資料相關且合理地預測人類活體內生物可用性資料之活體外測試;(c)人類或其他哺乳動物中之活體內測試,其中隨時間變化量測抗體(或其標靶)之適當急性藥理學效應;及(d)確立抗體之安全性、功效、或生物可用性或生體等效性之良好控制的臨床試驗。 本發明之抗PAR2抗體之生物等效變異體可藉由例如進行殘基或序列之各種取代或使對於生物活性非必需之末端或內部殘基或序列缺失而構築。舉例而言,對於生物活性非必需之半胱胺酸殘基可缺失或經其他胺基酸置換以阻止在複性後形成不必要或不恰當的分子內二硫橋鍵。在其他情形下,生物等效抗體或抗原結合片段可包括抗PAR2抗體變異體,其包含修改抗體或抗原結合片段之糖基化特徵之胺基酸變化,例如消除或移除糖基化之突變。 根據某些實施例,本發明提供結合至人類PAR2但不結合至來自其他物種之PAR2的抗PAR2抗體或抗原結合片段。本發明亦包括結合至人類PAR2及來自一或多個非人類物種之PAR2的抗PAR2抗體。舉例而言,本發明之抗PAR2抗體可結合至人類PAR2且可視具體情況結合或不結合至小鼠、大鼠、天竺鼠、倉鼠、沙鼠、豬、貓、狗、兔、山羊、綿羊、母牛、馬、駱駝、食蟹獼猴、狨猴、恆河猴或黑猩猩PAR2中之一或多者。根據某些實施例,抗體或抗原結合片段結合至人類A549細胞、大鼠KNRK細胞、食蟹獼猴CYNOM-K1細胞或小鼠LL/2細胞中之PAR2。 本發明涵蓋結合至治療部分(「免疫結合物」),諸如細胞毒素、化學治療劑、免疫抑制劑或放射性同位素之抗PAR2單株抗體。用於形成免疫結合物之適合之細胞毒性劑及化學治療劑之實例為此項技術中已知的(參見例如WO 05/103081)。 在一些實施例中,本發明抗體可為單特異性、雙特異性或多特異性的。多特異性抗體可對一種靶多肽之不同抗原決定基具有特異性或可含有對超過一種靶多肽具有特異性之抗原結合域。參見例如Tutt等人,1991 , J. Immunol. 147:60-69;Kufer等人,2004, Trends Biotechnol. 22:238-244。本發明之抗PAR2抗體或抗原結合片段可連接至另一功能分子,例如另一肽或蛋白質,或與其共表現。舉例而言,抗體或其抗原結合片段可功能上連接(例如藉由化學偶合、遺傳融合、非共價締合或以其他方式)至一或多個其他分子實體,諸如另一抗體或抗原結合片段以產生具有第二結合特異性之雙特異性或多特異性抗體。舉例而言,本發明包括雙特異性抗體,其中免疫球蛋白之一個臂對人類PAR2或其片段具有特異性,且免疫球蛋白之另一個臂對第二治療標靶具有特異性或結合至治療部分。 可用於本發明之情形下之例示性雙特異性抗體或抗原結合片段型式涉及使用第一免疫球蛋白(Ig) CH3域及第二Ig CH3域,其中第一及第二Ig CH3域在至少一個胺基酸中彼此不同,且其中相比於不具有胺基酸差異之雙特異性抗體,至少一個胺基酸差異減少雙特異性抗體與蛋白A之結合。在一個實施例中,第一Ig CH3域結合蛋白A且第二Ig CH3域含有減小或消除蛋白A結合之突變,諸如H95R修飾(由IMGT外顯子編號;H435R由EU編號)。第二CH3可進一步包含Y96F修飾(藉由IMGT;Y436F藉由EU)。可發現於第二CH3內之其他修飾包括:lgG1抗體之情況下之D16E、L18M、N44S、K52N、V57M及V82I (藉由IMGT;D356E、L358M、N384S、K392N、V397M及V422I藉由EU);lgG2抗體之情況下之N44S、K52N及V82I (IMGT;N384S、K392N及V422I藉由EU);及lgG4抗體之情況下之Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q及V82I (藉由IMGT;Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q及V422I藉由EU)。上文所述的雙特異性抗體型式之變化涵蓋在本發明之範疇內。 可用於本發明之背景下之其他例示性雙特異性型式包括(但不限於)例如基於scFv或雙功能抗體雙特異性型式、IgG-scFv融合體、雙重可變域(DVD)-lg、四源雜交瘤(Quadroma)、臼包杵、常見輕鏈(例如具有臼包杵之常見輕鏈等)、互換Mab、互換Fab、(SEED)體、白胺酸拉鏈、Duobody、lgG1/lgG2、雙重作用Fab (DAF)-lgG及Mab<2>雙特異性型式(關於前述型式之綜述,參見例如Klein等人 2012, mAbs 4:6, 1 -1 1,及其中所引用之參考文獻)。亦可使用肽/核酸結合構築雙特異性抗體或抗原結合片段,例如其中具有正交化學反應性之非天然胺基酸用於產生位點特異性抗體-寡核苷酸結合物,其接著自組裝為具有界定組成、價數及幾何結構之多聚複合物。(參見例如Kazane等人,J. Am. C em. Soc. [電子版:2012年12月4日])。 C.核酸及表現系統
在一些實施例中,本發明提供能夠表現本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者之核酸。核酸可為單鏈或雙鏈的DNA或RNA分子。在其他實施例中,抗體或抗原結合片段核酸序列可與異源核苷酸序列,或在DNA文庫中分離、重組及/或融合。在一些實施例中,核酸包含與以下中之任一者至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781及/或791。在一些實施例中,核酸包含與以下中之任一者至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及/或796。在特定實施例中,核酸包含與SEQ ID NO: 1、6、11及/或16至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核苷酸序列。 在某些實施例中,編碼抗體或抗原結合片段之核酸亦包括在高度嚴格條件下雜交至編碼上文提及之抗體或抗原結合片段核苷酸序列或其補體序列中之任一者之聚核苷酸的核苷酸序列。在一些實施例中,核酸在高度嚴格條件下雜交至編碼與以下中之任一者至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列的聚核苷酸:SEQ ID NO: 2、12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、782及792。在一些實施例中,核酸在高度嚴格條件下雜交至編碼與以下中之任一者至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列的聚核苷酸:SEQ ID NO: 7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、767、777、787及797。一般熟習此項技術者將易於理解,促進DNA雜交之適當嚴格度條件可變化。舉例而言,可在約45℃下在6.0 × 氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中進行雜交,隨後在50℃下洗滌2.0 × SSC。舉例而言,洗滌步驟中之鹽濃度可選自50℃下約2.0 × SSC的低嚴格度至50℃下約0.2 × SSC的高嚴格度。另外,洗滌步驟中之溫度可自室溫(約22℃)的低嚴格條件增加至約65℃的高嚴格條件。可改變溫度及鹽兩者,或溫度或鹽濃度可保持恆定,而改變另一變數。在一個實施例中,本發明提供在室溫下在6 × SSC下的低嚴格度條件下雜交,隨後在室溫下在2 × SSC下洗滌的核酸。 由於基因密碼中之簡併而不同於編碼抗體或其抗原結合片段之核酸的經分離核酸亦在本發明之範疇內。舉例而言,藉由一種以上三重態指定多種胺基酸。指定相同胺基酸之密碼子或同義語(例如CAU及CAC為組胺酸之同義語)可引起不影響蛋白質之胺基酸序列之「靜默」突變。然而,吾人預期引起本發明蛋白質之胺基酸序列改變之DNA序列多形現象將存在於哺乳動物細胞中。熟習此項技術者將瞭解編碼特定蛋白質之核酸之一或多種核苷酸(多達約3-5%之核苷酸)之此等變異可由於天然對偶基因變異而存在於給定物種之個體中。本發明之範疇內涵蓋任何及全部此類核苷酸變異及所得胺基酸多態現象。 在一些實施例中,本發明提供包含本文所揭示之核酸中之任一者的載體。在一些實施例中,本發明提供包含本文所揭示之載體中之任一者之宿主細胞。 不管當本發明抗體為全長抗體或抗原結合片段時,本發明之抗體及抗原結合片段可以重組方式表現於細胞株中。在此等實施例中,編碼特定抗體或抗原結合片段之序列可用於轉化適合之宿主細胞,諸如哺乳動物宿主細胞或酵母菌宿主細胞。根據此等實施例,轉化可使用將聚核苷酸引入至宿主細胞中之任何已知方法實現,包括例如將聚核苷酸包裝於病毒中(或包裝至病毒載體中)及藉由病毒(或載體)或藉由此項技術中已知之轉染程序轉導宿主細胞。一般而言,所用轉化程序可取決於待轉化之宿主。用於將異源聚核苷酸引入至哺乳動物細胞中之方法為此項技術中熟知的,且包括(但不限於)聚葡萄糖介導之轉染、磷酸鈣沈澱、凝聚胺介導之轉染、原生質體融合、電穿孔、聚核苷酸囊封於脂質體中及DNA直接顯微注射至細胞核中。 根據本發明之某些實施例,編碼本發明之重鏈恆定區(全部或一部分)、重鏈可變區、本發明之輕鏈恆定區或輕鏈可變區之胺基酸序列的核酸分子係使用標準接合技術插入至適當表現載體中。在一較佳實施例中,重鏈或輕鏈恆定區附加至適當可變區之C端且接合至表現載體。通常選擇在所用特定宿主細胞中具有功能性之載體(亦即載體與宿主細胞機構相容,從而可進行基因之擴增及/或基因之表現)。關於表現載體之綜述,參見Goeddel (編), 1990, Meth. Enzymol. 第185卷, Academic Press. N.Y。在抗體表現之情況下,重鏈及輕鏈可自相同載體(例如自存在於相同載體上之相同或不同啟動子)表現或重鏈及輕鏈可自不同載體表現。在某些實施例中,重鏈及輕鏈自轉染至相同宿主細胞中且共表現之不同載體表現。不管當重鏈及輕鏈表現於來自相同或不同載體之相同宿主細胞中時,鏈可隨後締合以形成抗體(或抗體片段,取決於表現之重鏈及輕鏈部分)。 通常,用於任何宿主細胞中之表現載體將含有用於質體維持及用於選殖及表現外源性核苷酸序列之序列。該等序列(在某些實施例中共同稱為「側接序列」)通常將包括一或多個以下核苷酸序列:啟動子、一或多個強化子序列、複製起點、轉錄終止序列、含有供體及受體剪接位點之完整內含子序列、編碼用於多肽分泌之前導序列的序列、核糖體結合位點、聚腺苷酸化序列、用於插入編碼待表現多肽之核酸的多酶切點接頭區域及可選擇性標記元素。載體之此等部分已為所熟知,且存在許多可選擇及用於蛋白質表現之一般可用載體。吾人可基於所需宿主細胞及應用容易地選擇載體。 複製起點通常為在市面上購得之彼等原核表現載體的一部分,且該起點幫助載體在宿主細胞中擴增。若所選載體不含複製起點位點,則其可基於已知序列化學合成且連接至載體中。舉例而言,來自質體pBR322(New England Biolabs, Beverly, Mass.)之複製起點適合於大多數革蘭氏陰性細菌(gram-negative bacteria),且各種病毒起點(例如SV40、多瘤病毒、腺病毒、水泡性口炎病毒(VSV)或乳突狀瘤病毒(諸如HPV或BPV))適用於在哺乳動物細胞中選殖載體。通常,哺乳動物表現載體不需要複製起點組分(例如通常僅使用SV40起點,因為其亦含有病毒早期啟動子)。 本發明之表現及選殖載體將通常含有藉由宿主生物體識別且可操作地連接於編碼重鏈及/或輕鏈之分子的啟動子。啟動子為位於結構基因之起始密碼子上游(亦即5')之非轉錄序列(通常在約100至1000 bp內),其控制結構基因之轉錄。啟動子通常分成兩種類別之一:誘導性啟動子及組成性啟動子。誘導性啟動子回應於培養條件之一些變化(諸如存在或不存在營養物或溫度變化)引發在其控制下自DNA之轉錄量增加。另一方面,組成性啟動子引發連續基因產物產生;亦即,對基因表現之控制極小或無控制。大量可由多種潛在宿主細胞所別之啟動子已為吾人所熟知。適合之啟動子可操作地連接於編碼包含本發明之抗體或抗原結合片段之重鏈或輕鏈的DNA。在某些實施例中,相同啟動子用於重鏈及輕鏈兩者。在其他實施例中,不同啟動子(存在於相同或不同載體上)用於各鏈。 適合用於酵母菌宿主之啟動子亦在此項技術中熟知。酵母菌增強子有利地與酵母菌啟動子一起使用。適合用於哺乳動物宿主細胞之啟動子已為所熟知,且包括(但不限於)自諸如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(諸如腺病毒2)、牛乳頭狀瘤病毒、鳥肉瘤病毒、巨細胞病毒、反轉錄病毒、B型肝炎病毒及最佳猴病毒40 (SV40)之病毒的基因組獲得之啟動子。其他適合之哺乳動物啟動子包括異源哺乳動物啟動子,例如熱休克啟動子及肌動蛋白啟動子。 可關注之其他啟動子包括(但不限於):SV40早期啟動子區(Bernoist及Chambon, 1981, Nature 290:304-10);CMV啟動子;包含於勞斯肉瘤病毒之3'長末端重複序列中之啟動子(Yamamoto等人,1980, Cell 22:787-97);疱疹胸苷激酶啟動子(等人,1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1444-45);金屬硫蛋白基因之調節序列(Brinster等人,1982, Nature 296:39-42);原核表現載體,諸如β-內醯胺酶啟動子(Villa-Kamaroff等人,1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75:3727-31);或tac啟動子(DeBoer等人,1983, Proc. Natl.Acad. Sci. USA 80:21-25)。亦關注以下動物轉錄控制區,其展現組織特異性且已用於轉殖基因動物中:在胰腺泡細胞中具活性之彈性蛋白酶I基因控制區(Swift等人,1984, Cell 38:639-46;Ornitz等人,1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409 (1986);MacDonald, 1987, Hepatology 7:425-515);在胰臟β細胞中具活性之胰島素基因控制區(Hanahan, 1985, Nature 315:115-22);在淋巴細胞中具活性之免疫球蛋白基因控制區(Grosschedl等人,1984, Cell 38:647-58;Adames等人,1985, Nature 318:533-38;Alexander等人,1987, Mol. Cell. Biol. 7:1436-44);在睾丸、乳房、淋巴及肥大細胞中具活性之小鼠乳房腫瘤病毒控制區(Leder等人,1986, Cell 45:485-95);在肝中具活性之白蛋白基因控制區(Pinkert等人,1987, Genes and Devel. 1:268-76);在肝中具活性之α-胎-蛋白質基因控制區(Krumlauf等人,1985, Mol. Cell. Biol. 5:1639-48;Hammer等人,1987, Science 235:53-58);在肝中具活性之α 1-抗胰蛋白酶基因控制區(Kelsey等人,1987, Genes and Devel. 1:161-71);在骨髓細胞中具活性之β-血球蛋白基因控制區(Mogram等人,1985, Nature 315:338-40;Kollias等人,1986, Cell 46:89-94);在大腦中之少突膠質細胞中具活性之髓鞘鹼性蛋白質基因控制區(Readhead等人,1987, Cell 48:703-12);在骨胳肌肉中具活性之肌球蛋白輕鏈-2基因控制區(Sani, 1985, Nature 314:283-86);及在下丘腦中具活性之促性腺釋放激素基因控制區(Mason等人,1986, Science 234:1372-78)。 載體亦可包括增強子序列以提高編碼輕鏈或重鏈之DNA的轉錄。 本發明之表現載體可構築自起始載體,諸如市售載體。此類載體可含有或可不含所有的所需側接序列。當本文所述的側接序列中之一或多者尚未存在於載體中時,其可個別地獲得且接合至載體。用於獲得各側接序列之方法為熟習此項技術者所熟知。 在已構築載體且編碼包含本發明之抗體或抗原結合片段之輕鏈或重鏈或輕鏈及重鏈之核酸分子已插入至載體之恰當位點中之後,完整載體可插入至適合之宿主細胞中以進行擴增及/或多肽表現。將表現載體轉化至選擇宿主細胞中可藉由包括轉染、感染、鈣磷酸鹽共沈澱、電穿孔、顯微注射、脂質體轉染、DEAE聚葡萄糖介導轉染或其他已知技術之熟知方法實現。所選方法將部分地隨所用宿主細胞之類型而變。此等方法及其他適合之方法已為熟練技工所熟知。 宿主細胞當在適當條件下培養時,合成本發明之抗體或抗原結合片段,其可隨後自培養基收集(若宿主細胞將其分泌至培養基中)或直接自產生其之宿主細胞收集(若其未經分泌)。適當宿主細胞之選擇將視多種因素而定,諸如所需表現量、活性所需或必需之多肽修飾(諸如糖基化或磷酸化)及摺疊成生物活性分子之容易性。 作為用於表現之宿主細胞可用的哺乳動物細胞株為此項技術中熟知的且包括(但不限於)購自美國菌種保藏中心(A.T.C.C.)之許多永生化細胞株,包括(但不限於)中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人類肝細胞癌細胞(例如Hep G2)及許多其他細胞株。在另一實施例中,吾人可選擇來自B細胞譜系之細胞株,其不製造其自身的抗體,但具有製造及分泌異源抗體之能力(例如小鼠骨髓瘤細胞株NS0及SP2/0)。在其他實施例中,使用除哺乳動物細胞以外的細胞,諸如酵母細胞株(例如畢赤酵母(Pichia))。 在某些實施例中,細胞株穩定表現本發明之抗體或抗原結合片段。在其他實施例中,細胞短暫表現本發明之抗體或抗原結合片段。 D.治療調配物及投藥
本發明提供包含本發明之抗PAR2抗體或其抗原結合片段之醫藥組合物。本發明之醫藥組合物係藉由適合之載劑、賦形劑及提供改良之轉移、遞送、耐受性及其類似性質之其他藥劑調配。眾多適當調配物可發現於所有醫藥化學家已知的處方集:Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa中。此等調配物包括例如散劑、糊劑、軟膏、凍膠、蠟、油、脂質、含有脂質(陽離子型或陰離子型)之微脂粒(諸如LIPOFECTINT™, Life Technologies, Carlsbad,CA)、無水吸收糊劑、水包油及油包水乳液、乳液聚乙二醇(各種分子量之聚乙二醇)、半固體凝膠及含有聚乙二醇之半固體混合物。亦參見Powell等人「Compendium of excipients for parenteral formulations」 PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311。 向患者投與之抗體的劑量可視患者之年齡及身材、目標疾病、狀況、投與途徑及其類似者而變化。較佳劑量通常根據體重或體表面積計算。視病況之嚴重度而定,可調節治療之頻率及持續時間。投與抗PAR2抗體或抗原結合片段之有效劑量及排程可憑經驗確定;舉例而言,可藉由週期性評估監測患者進展,且相應地調節劑量。此外,可使用此項技術中之熟知方法(例如Mordenti等人,1991 , Pharmaceut. Res. 8:1351)進行劑量之種間按比例調整。 各種遞送系統為吾人所知且可用於投與本發明之醫藥組合物,例如囊封於脂質體中、微米粒子、微膠囊、能夠表現突變病毒之重組細胞、受體介導之內飲作用(見例如Wu等人,1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432)。引入方法包括(但不限於)皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜外及經口途徑。該組合物可藉由任何便利途徑投與,例如藉由輸注或快速注射、藉由經由上皮或黏膜皮膚內層(例如口腔黏膜、直腸黏膜及腸黏膜等)吸收且可與其他生物學活性劑一起投與。可全身性或局部投予。 在一些實施例中,抗體及其抗原結合片段在治療與中樞神經系統相關,且特定言之與大腦相關之病況及病症中具有效用。儘管當向個體之大腦投與諸如抗體或抗原結合片段之大分子時必須考慮各種因素,亦即抗體或抗原結合片段越過血腦屏障(BBB)之能力,熟練技工瞭解向大腦投與此類大分子之方法。舉例而言,在一些實施例中,抗體或抗原結合片段經一或多種陽離子型多元胺,諸如己二胺或丁二胺共價修飾以提高抗體或抗原結合片段跨越BBB內化之可能性。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段為雙特異性抗體或抗原結合片段,其中抗體或片段靶向PAR2且亦靶向促進跨越BBB之輸送之受體(例如運鐵蛋白受體、胰島素受體及TMEM30A)。在一些實施例中,抗體或抗原結合片段結合至靶向促進跨越BBB之輸送之受體(例如運鐵蛋白受體、胰島素受體及TMEM30A)的藥劑。在一些實施例中,BBB在投與抗體或片段之前或期間經臨時破壞。在一些實施例中BBB藉助於超音波、輻射、生物化學處理(例如經諸如NS-1619之KCa
受體促效劑)或動脈內輸注濃縮高滲溶液而臨時破壞。 可使用標準針及注射器皮下或靜脈內遞送本發明之醫藥組合物。此外,關於皮下遞送,筆式遞送裝置易於在遞送本發明之醫藥組合物時應用。此類筆式遞送裝置可為可再用或拋棄式的。可再用筆式遞送裝置一般利用含有醫藥組合物之可替換藥筒。在已投與套筒內之所有醫藥組合物且套筒為空的後,可容易地丟棄空套筒且用含有醫藥組合物之新套筒替換。可接著再使用筆式遞送裝置。在拋棄式筆式遞送裝置中,不存在可替換套筒。實際上,拋棄式筆式遞送裝置用容納在該裝置內之儲集器中的醫藥組合物預填充。一旦清空儲集器之醫藥組合物,棄去整個裝置。 許多可再用筆式及自動注射器遞送裝置應用於本發明之醫藥組合物的皮下遞送。實例包括(但不限於)AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK)、DISETRONIC™筆(Disetronic Medical Systems, Berghdorf, Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25™筆、HUMALOG™筆、HUMALIN 70/30™筆(Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN)、NOVOPEN™ I、II及III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark)、NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark)、BD™筆(Becton Dickinson, Franklin Lakes, N.J.)、OPTIPENT™、OPTIPEN PRO™、OPTIPEN STARLET™及OPTICLIKT™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Germany),僅列舉幾例。應用於皮下遞送本發明之醫藥組合物之拋棄式筆式遞送裝置之實例包括(但不限於)SOLOSTAR™筆(sanofi-aventis)、FLEXPEN™ (Novo Nordisk)及KWIKPEN™ (Eli Lilly)、SURECLICK™自動注射器(Amgen, Thousand Oaks, CA)、PENLET™(Haselmeier, Stuttgart, Germany)、EPIPEN (Dey, L.P.)及HUMIRA™筆(Abbott Labs, Abbott Park IL),僅列舉幾例。 在某些情形中,醫藥組合物可在控制釋放系統中遞送。在一個實施例中,可使用泵(參見Langer,見上文;Sefton 1987 CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201)。在另一實施例中,可使用聚合材料;參見Medical Applications of Controlled Release, Langer及Wise (編), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida。在又一實施例中,可將控制釋放系統接近組合物之標靶置放,因此僅需要全身劑量之一部分(參見例如Goodson, 1984, Medical Applications of Controlled Release, 見上文, 第2卷, 第115-138頁)。其他控制釋放系統論述於Langer, 1990, Science 249:1527-1533之綜述中。 可注射製劑可包括用於靜脈內、皮下、鞘內、皮內及肌肉內注射、滴液輸液等之劑型。此等可注射製劑可藉由公開已知之方法製備。舉例而言,可注射製劑可例如藉由在習知用於注射之無菌水性介質或油性介質中溶解、懸浮或乳化本文所揭示之抗體或抗原結合片段或上文所述之其鹽中之任一者而製備。作為注射用水性介質,存在例如生理鹽水、含有葡萄糖及其他助劑之等滲溶液等,其可與適當增溶劑,諸如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子界面活性劑[例如聚山梨醇酯80、HCO-50 (氫化蓖麻油之聚氧乙烯(50 mol)加合物)]等組合使用。採用例如芝麻油、大豆油等作為油性介質,其可與增溶劑(諸如苯甲酸苯甲酯、苯甲醇等)組合使用。由此製備之注射液較佳填充於適當安瓿中。 上文所述之用於經口或非經腸使用之醫藥組合物宜製備成適於擬合活性成分劑量之單位劑量的劑型。此類呈單位劑量之劑型包括例如錠劑、丸劑、膠囊、注射劑(安瓿)、栓劑等。所含的前述抗體之量一般為每個呈單位劑量之劑型約5至約500 mg;尤其呈注射劑形式,對於其他劑型,所含的前述抗體或抗原結合片段較佳為約5至約100 mg及約10至約250 mg。 E.抗體之治療用途
對於本文所描述之方法中之任一者,本發明涵蓋使用本發明之抗體或抗原結合片段中之任一者。 在一些實施例中,本發明提供治療涉及非所需及/或異常PAR2活性之個體病症的方法,其包含投與本文所述之抗體或抗原結合片段中之任一者。如本文所用,「病症」、「病況」及「疾病」可互換地使用以指代本文所揭示之病症、病況或疾病中之任一者。在一些實施例中,涉及非所需及/或異常PAR2活性之疾病/病症/病況為與異常或非所需發炎相關之疾病/病症/病況。涉及異常或非所需PAR2活性之疾病/病症/病況之實例包括急性或慢性疼痛、急性或慢性瘙癢、急性或慢性發炎(例如急性或慢性關節、肺部、大腦、胃腸道、牙周組織、皮膚及血管系統發炎)、自身免疫病症、牙周炎、骨關節炎、類風濕性關節炎、發炎性腸病、關節炎、牛皮癬、肥胖、糖尿病、心血管疾病、胰臟炎、癌症(例如乳癌、肺癌、結腸癌、胃癌或前列腺癌)、哮喘、纖維化、胃潰瘍、纖維化或纖維化病症、阿茲海默氏病(Alzheimer's Disease)、帕金森氏病(Parkinson's Disease)、接觸性皮炎、克羅恩氏病(Crohn's Disease)、潰瘍性結腸炎、成人呼吸窘迫症候群(ARDS)、絲球體腎炎及腦膜炎。在一些實施例中,本發明提供治療個體之方法,該個體患有代謝症候群,或一或多種與代謝症候群相關之病況,諸如內臟脂肪沈積、高血壓、葡萄糖及胰島素穩態受損、胰島素抗性、內皮損傷、心血管肥大、發炎、血管炎症、動脈粥樣硬化、心室收縮功能障礙、纖維化及脂肪肝病。在特定實施例中,本發明提供治療疼痛,例如與本文所揭示之疾病/病症/病況中之任一者相關之疼痛(例如骨關節炎疼痛)之方法。在一些實施例中,個體為哺乳動物。在一些實施例中,個體為人類。 在一些實施例中,本發明提供干擾蛋白酶(例如胰蛋白酶)與PAR2之間的相互作用之方法,其包含向細胞投與本文所述之抗體或抗原結合片段中之任一者之步驟。在一些實施例中,本發明提供抑制細胞上之PAR2之繫栓配位體之暴露的方法,其包含向細胞投與本文所述之抗體或抗原結合片段中之任一者之步驟。在一些實施例中,本發明提供抑制PAR2之繫栓配位體與PAR2蛋白質之第二跨膜環之間的相互作用之方法,其包含向細胞投與本文所述之抗體或抗原結合片段中之任一者之步驟。在一些實施例中,本發明提供抑制細胞上之PAR2受體之活化之方法,其包含向細胞投與本文所述之抗體或抗原結合片段中之任一者之步驟。在一些實施例中,細胞為神經元(例如感覺神經元)。在一些實施例中,細胞在活體外。在其他實施例中,細胞在個體內。在一些實施例中,個體為哺乳動物。在一些實施例中,個體為人類。在一些實施例中,個體罹患本文所揭示之病症中之任一者。 對於本文所描述之方法中之任一者,本發明涵蓋一種方法之任何一或多個步驟與另一方法之任何一或多個步驟之組合。此等方法涉及向有需要之個體投與有效量的適合於特定疾病或病況之本發明化合物。在特定實施例中,此等方法涉及向有需要之個體之細胞遞送本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者。 術語「治療(treatment/treating)」、「緩解」及其類似術語在本文中用於總體上意謂獲得所需藥理學及/或生理學效應,且亦可用以指改善、緩解治療之病況之一或多種症狀及/或減輕其嚴重度。效應可就完全或部分延緩疾病、病況或其症狀之起始或復發而言為預防性的,及/或可就部分或完全治癒疾病或病況及/或可歸因於該疾病或病況之不良作用而言為治療性的。如本文中所使用之「治療」涵蓋對哺乳動物,特定言之人類之疾病或病狀之任何治療,且包括以下中之任何一或多者:(a)預防疾病或病況發生於可易患該疾病或病狀但又尚未診斷患有其之個體內;(b)抑制疾病或病況(例如,阻止其發展);或(c)減輕疾病或病況(例如,導致該疾病或病況之消退,獲得對一或多種症狀之改善)。舉例而言,「治療」疼痛(例如骨關節炎疼痛)涉及減輕、抑制、緩解或消除所治療個體之疼痛症狀。藉由治療該疾病之方法之個體群包括患有非所要病狀或疾病之個體以及具有發展該病狀或疾病之風險之個體。 對於本文所描述之方法中之任一者,本發明涵蓋使用在整個本申請中描述之抗體或抗原結合片段中之任一者。另外,對於本文所描述之方法中之任一者,本發明涵蓋一種方法之任何一或多個步驟與另一方法之任何一或多個步驟之組合。 在某些實施例中,本發明提供治療與本文所揭示之疾病/病況/病症中之任一者相關之病況,例如急性或慢性疼痛(例如骨關節炎疼痛)之方法。此等方法涉及向個體投與治療有效量之如上文所述之抗體或抗原結合片段中之任一者。此等方法尤其旨在治療性及預防性治療動物,且更特定言之人類。本發明涵蓋前述態樣及實施例中之任一者之所有組合,以及與實施方式中所闡述之實施例及實例中之任一者之組合。 術語「治療有效劑量」意謂對於所投與者產生所需效應之劑量。精確劑量將視治療目的而定且將由熟習此項技術者使用已知技術可確定(參見例如Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding)。 在某些實施例中,本發明之抗體或抗原結合片段中之任一者可單獨或與一或多種額外化合物或療法組合投與以治療本文所揭示之疾病/病況/病症中之任一者,例如急性或慢性疼痛(例如骨關節炎疼痛)。舉例而言,本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者可與一或多種治療化合物結合共投與。當指示共投與時,組合療法可涵蓋同時或交替投與。另外,組合可涵蓋急性或慢性投與。視情況,抗體/抗原結合片段及額外化合物以加性或協同方式起作用以治療本文所揭示之疾病/病況/病症中之任一者,例如急性或慢性疼痛(例如骨關節炎疼痛)。用於組合療法之額外化合物包括(但不限於)小分子、多肽、抗體、反義寡核苷酸及siRNA分子。在一些實施例中,額外化合物為以下中之任何一或多者:消炎藥、鎮痛藥、非類固醇消炎藥(NSAID)、皮質類固醇、透明質酸、乙醯胺苯酚、可待因、氫可酮錠劑(lorcet)、氫可酮與對乙醯胺基酚錠劑(lortab)、維柯丁(vicodin)、氫可酮、嗎啡、羥氫可待因、鹽酸羥考酮製劑(Roxicodone)、撲熱息痛(Percocet)、阿司匹林(aspirin)、塞內昔布(celecoxib)、普瑞巴林(pregabalin)、關節融合物、關節置換物、阿巴西普(abatacept)、阿達木單抗(adalimumab)、阿那白滯素(anakinra)、賽妥珠單抗(certolizumab)、依那西普(etanercept)、戈利木單抗(golimumab)、英利昔單抗(infliximab)、利妥昔單抗(rituximab)、托西利單抗(tocilizumab)及托法替尼(tofacitinib)。視組合療法之性質,可在投與另一療法時及/或其後繼續投與本發明之抗體或抗原結合揭示物。抗體或抗原結合片段投與可以單次劑量或以多次劑量進行。在一些情況下,抗體或抗原結合片段投與在另一療法之前至少若干天開始,而在其他情況下,投與在即將投與另一療法之前或在投與另一療法時開始。在一些實施例中,本文所揭示之額外化合物中之任一者結合至本文所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者。 在組合療法之另一實例中,本發明之抗體或抗原結合片段中之任一者可用作與一或多種額外治療模式組合之治療方案的一部分。舉例而言,此類其他治療模式包括(但不限於)食療、職業療法、物理療法、精神療法、按摩、針灸、針壓、助行器、輔助動物及其類似者。 應注意,儘管本文所述之抗體或抗原結合片段可與其他療法組合使用,但在某些實施例中,抗體或抗原結合片段係以唯一療法形式提供。不管單獨或與其他藥物或治療方案組合投與,抗體或抗原結合片段之劑量、頻率、投與途徑及投與時序係由醫師基於患者之狀況及需要而確定。 根據本發明之某些實施例,多個劑量之抗PAR2抗體或其抗原結合片段(或包含抗PAR2抗體及本文中提及之額外療法中之任一者之組合的醫藥組合物)可經界定時程向個體投與。根據本發明之此態樣的方法包含向個體依序投與多個劑量之本發明之抗PAR2抗體或抗原結合片段。如本文所用,「依序投與」意謂各劑量之抗PAR2抗體或抗原結合片段係在不同時間點,例如在由預定間隔(例如小時、天、週或月)分隔之不同日期向該個體投與。本發明包括包含依序向患者投與單一初始劑量之抗PAR2抗體或抗原結合片段,接著投與一或多個第二劑量之抗PAR2抗體或抗原結合片段,且視情況接著投與一或多個第三劑量之抗PAR2抗體或抗原結合片段的方法。 術語「初始劑量」、「第二劑量」及「第三劑量」係指投與本發明之抗PAR2抗體或抗原結合片段之時序。因此,「初始劑量」為在治療方案開始時投與之劑量(亦稱為「基線劑量」);「第二劑量」為在初始劑量之後投與之劑量;且「第三劑量」為在第二劑量之後投與之劑量。初始、第二及第三劑量可全部含有相同量之抗PAR2抗體或抗原結合片段,但一般可就投與頻率而言彼此不同。然而,在某些實施例中,包含於初始、第二及/或第三劑量中之抗PAR2抗體或抗原結合片段的量在治療過程期間彼此不同(例如按需要上調或下調)。在某些實施例中,兩個或大於兩個(例如2、3、4或5個)劑量在治療方案開始時作為「起始劑量」投與,接著以較低頻率投與後續劑量(例如維持劑量)。 F.抗體或抗原結合片段之診斷 / 其他用途
本發明之抗PAR2抗體亦可用以偵測及/或量測樣品中之PAR2或PAR2表現細胞,例如出於診斷目的。舉例而言,抗PAR2抗體或其抗原結合片段可用於診斷藉由PAR2之異常表現(例如過度表現、低表現、缺乏表現等)表徵之病況或疾病。PAR2之例示性診斷分析可包含例如使獲自患者之樣品與本發明之抗PAR2抗體接觸,其中抗PAR2抗體經可偵測標籤或報告分子標記。 或者,未標記之抗PAR2抗體可與自身可偵測地標記之二級抗體組合用於診斷應用。可偵測標籤或報告分子可為放射性同位素,諸如3
H、14
C、32
P、35
S或125
I;螢光或化學發光部分,諸如異硫氰酸螢光素或若丹明;或酶,諸如鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根過氧化酶或螢光素酶。可用於偵測或量測樣品中之PAR2的特定例示性分析包括酶聯免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)及螢光活化細胞分選(FACS)。 本發明之組合物具有多種用途。舉例而言,本發明之抗體及抗原結合片段適用於研究活體外及/或活體內細胞及組織中之較佳細胞及組織分佈。類似地,單獨或結合至異源藥劑之抗體及抗原結合片段適用作顯影劑,諸如用於離體或活體內診斷應用。舉例而言,結合至放射性部分之抗體或抗原結合片段適用於離體或活體內成像研究。類似地,本發明之抗體或抗原結合片段中之任一者類似地適用。 當活體外使用時,本發明之抗體及抗原結合片段適合於識別用於遞送之抗體或抗原結合片段之結合搭配物(例如識別結合抗體或抗原結合片段之蛋白質或肽),及評估定位及運輸。類似地,當活體內使用時,抗體或抗原結合片段適用於識別用於遞送之抗體或抗原結合片段之結合搭配物(例如識別結合抗體或抗原結合片段之蛋白質或肽)、評估定位及運輸、評估生物分佈及半衰期及評估免疫原性。 G.動物 / 細胞模型
熟練技工已知將適用於檢查抗體或其片段中之任一者之許多動物模型。參見例如Kuyinu等人,2016, J Orthop Surg Res, 11(19): 10.1186/s13018-016-0346-5。在一些實施例中,動物模型為藉由用化學品,諸如單碘乙酸鈉(MIA)或角叉菜膠治療動物產生之基於疼痛之模型。在一些實施例中,化學品注射於在動物中誘發疼痛之位點。在一些實施例中,動物模型為手術後引入損傷(例如切口),諸如前交叉韌帶切斷術、半月板切除術或內側半月板切斷術之動物。在一些實施例中,動物模型為與發炎病症,諸如下食道刺激、結腸發炎、胃潰瘍、膀胱發炎、胰臟發炎及子宮發炎相關之動物模型。參見例如National Research Council Committee on Recognition and Alleviation of Pain in Laboratory Animals, 「Models of Pain」, 2009中提及之動物模型。 H. 套組
在某些實施例中,本發明亦提供包含一或多個用至少一種本發明之抗體或抗原結合片段填充之容器的醫藥封裝或套組。視情況與此類容器相關的可為呈由管理藥劑或生物產品之製造、使用或銷售的政府機構規定之形式的說明,該說明反映(a)經該機構批准製造、使用或銷售以用於人類投與,(b)使用說明,或兩者。 實例 提出以下實例以便為一般熟習此項技術者提供如何製得及使用本發明之方法及組合物之完整揭示內容及描述,且不意欲限制本發明人視作其揭示內容之範疇。已努力確保關於所用數量(例如量、溫度等)的精確度,但應考慮存在一些實驗性誤差及偏差。除非另外指明,否則份數為重量份,分子量為平均分子量,溫度以攝氏度計,且壓力為大氣壓或接近大氣壓。實例 1 : 產生對於 PAR2 具有 pH 敏感結合之抗體 產生重組人類、大鼠及食蟹獼猴 PAR2 及 PAR1 蛋白質。
包含細胞外殘基1-75之人類、大鼠及食蟹獼猴(食蟹猴)PAR2 (蛋白酶活化受體2)構築體經N端AviTag™ (Avidity LLC)及C端Flag及聚組胺酸標籤設計且選殖至載體pDEST12.2 OriP FH (Life Technologies)中。包含細胞外殘基1-102之人類PAR1 (蛋白酶活化受體1)構築體經C端Flag及聚組胺酸標籤設計且選殖至載體pDEST12.2 OriP FH (Life Technologies)中。構築體表現於HEK293細胞中且使用標準親和力及尺寸排外層析純化自培養基純化。為產生生物素標記之蛋白質,AviTag™係根據製造商之說明書以酶方式進行生物素標記。 構築組合組胺酸掃描文庫
設計分離池寡核苷酸以在Par0067之VHCDR2、VHCDR3或VLCDR3之各位置處引入組胺酸或野生型胺基酸。隨後構築三個Par0067 scFv噬菌體呈現文庫,其中在VHCDR2、VHCDR3或VLCDR3中存在0%與100%之間的組胺酸殘基。 選擇 pH 敏感 Par0067 變異體 scFv
對組合組胺酸掃描文庫進行基於親和力之噬菌體呈現選擇,其目的在於分離在pH 7.4時結合至PAR2但在pH 6.0時結合減少之Par0067變異體。為達成此目標,使用降低濃度之生物素標記之重組人類PAR2對各文庫進行四輪選擇(Hawkins, RE等人,1992年8月5日;226(3):889-96)。在各輪中,噬菌體藉由抗生蛋白鏈菌素塗佈之順磁珠粒(dynabeads®
)預培育1小時以移除任何抗生蛋白鏈菌素結合劑。隨後藉由DYNAL®
磁體移除抗生蛋白鏈菌素珠粒且丟棄且將其餘的噬菌體添加至pH 7.4之生物素標記之重組人類PAR2。進行選擇2小時,隨後添加抗生蛋白鏈菌素塗佈之順磁珠粒以捕獲生物素標記之重組人類PAR2結合噬菌體。珠粒用PBS Tween (PBST)洗滌5次,隨後在低pH緩衝液(pH 5.5-pH 6.0)中溶離特定scFv。接著如先前(Osbourn JK.等人 Immunotechnology, 2(3):181-96, 1996)所描述地救援所選scFv噬菌體粒子,且在降低濃度之生物素標記PAR2存在下重複選擇程序(1 nM-0.05 nM,經4輪)。 將 scFv 重新格式化為 IgG1 - TM
抗體自scFv轉化為全免疫球蛋白G1三重突變體(IgG1-TM,併有突變L234F、L235E及P331S之IgG1 Fc序列)抗體型式,其基本上如Persic等人 (1997, Gene, 187, 9-18)所描述,具有以下修飾。OriP片段包括於表現載體中以促進與CHO短暫細胞一起使用及允許游離型複製。將可變重鏈(VH)域選殖至含有人類重鏈恆定域及調節元件之載體中以在哺乳動物細胞中表現完整IgG1-TM重鏈。類似地,將可變輕鏈(VL)域選殖至表現人類輕鏈(λ)恆定域及調節元件之載體中以在哺乳動物細胞中表現完整IgG輕鏈。為獲得IgG,將重鏈及輕鏈IgG表現載體轉染至CHO短暫哺乳動物細胞中(Daramola等人 Biotechnol Prog 30(1):132-41 (2014))。IgG經表現且分泌於培養基中。收集物在純化之前過濾,隨後使用蛋白A層析純化IgG。將培養上清液裝載於適當尺寸之Ceramic Protein A (BioSepra)上且用50 mM Tris-HCl pH 8.0、250 mM NaCl洗滌。使用0.1 M檸檬酸鈉(pH 3.0)自管柱溶離結合IgG且藉由添加Tris-HCl (pH 9.0)中和。使用Nap10管柱(Amersham, #17-0854-02)將溶離物質緩衝交換至PBS中,且使用基於IgG胺基酸序列之消光係數以分光光度法測定IgG濃度(Mach等人,Anal . Biochem . 200
(1):74-80 (1992))。使用SEC-HPLC且藉由SDS-PAGE分析經純化之IgG之聚集及降解純度。 篩選 pH 敏感 Par0067 變異體 scFv 及 IgG
為了篩選及剖析具有潛在pH依賴性結合之抗體,使用生物化學抗原決定基競爭分析型式。使用均相時差式螢光(HTRFTM
)技術之分析經設計以評估測試抗體(scFv或IgG)抑制結合至人類PAR2細胞外域(ECD)之親本Par0067 IgG抗體之相互作用的能力。重要的是該分析在兩種不同pH值(pH 7.4及pH 6.0)實施。 pH 7.4及pH 6.0之平行分析(如上文所述)首先用於在單點384孔高通量篩選(HTS)中篩選未純化的粗scFv(細菌提取物)。此單點平行HTS型式使得能夠篩選測試好幾千scFv且導致結合至人類PAR2之親本Par0067 IgG在pH 6.0時之相互作用的抑制相對於在pH 7.4時減少之彼等抗體繼續前進以進行進一步表徵。隨後,接著以多點劑量反應IC50
型式實施相同抗原決定基競爭分析方法以測試純化scFv及純化IgG(在後一情況下,需要如部分C中陳述的分析設計之小修改)。同樣,分析係在pH 7.4及pH 6.0實施,然而,在此等實驗中,吾人對相對於pH 7.4觀測之對應劑量反應抑制曲線,pH 6.0之劑量反應抑制曲線顯示大量右移(亦即顯著增加之IC50
值)之測試抗體最有興趣。 以下方案包括用於未純化的粗scFv之單點測試以及純化scFv及IgG之後續測試的方法。 部分 A : 一般分析條件 : 分析緩衝液 :
分析緩衝液在使用當天新製。對於pH 7.4時之實驗,DPBS (Gibco 14190-086)補充有KF (0.4M)(VWR,103444T)及BSA (0.1%w/v)(PAA,K05-013),接著再檢查pH且視需要微調至pH 7.4。對於pH 6.0時之實驗,儘管保持所有其他緩衝液組分與上文概述之pH 7.4分析緩衝液相同,但pH 6.0分析緩衝液係使用200 mM MES (Sigma,M-5287)(與DPBS相對)之鹼緩衝液調配。在添加KF (0.4 M)及BSA (0.1%w/v)之後,接著用HCL將基於200 mM MES之緩衝液調節至pH 6.0。分析盤 :
分析係使用黑色淺孔384盤(圓底,非結合)(Corning,4514)進行分析體積 :
20 µl培育及讀盤 :
分析盤係在室溫下培育2小時,隨後在Envision盤讀取器上使用標準HTRFTM
讀取方案讀取。 部分 B : 測試 scFv : ( 未純化細菌溶解物及純化 scFv ) 添加順序及分析組分 :
總計 nsb 測試 Par0067 IgG (×4[最終]) 5µl 5µl 5µl 測試scFv(×4[最終]) - - 5µl 分析緩衝液 5µl 5µl - Bio-人類-PAR2 ECD (×4[最終]) 5µl - 5µl 分析緩衝液 - 5µl - 銪穴狀化合物標記之抗生蛋白鏈菌素 加上XL665
標記之抗人類-Fc (均為×4[最終])5µl 5µl 5µlPar0067 IgG 製備 / 添加 :
使未經標記之純化Par0067 IgG ( 內部產生)在上文描述於部分A中之兩種分析緩衝液(pH 7.4及pH 6.0)中之每一者中均接近4.44 nM (1.11 nM最終[分析])之濃度。將5 µl/孔之適當pH 4.44 nM Par0067 IgG溶液添加至相關分析盤(pH 7.4及pH 6.0)之所有孔。測試 scFv 製備 / 添加:
a) 對於pH 7.4及pH 6.0時之未純化粗細菌溶解物scFv樣品之平行單點HTS,樣品首先按需要使用pH 7.4或pH 6.0分析緩衝液預稀釋至其純濃度之40%。隨後,接著將5 µl之40%預稀釋樣品轉移至適當分析(pH 7.4或pH 6.0)中以給出10.0%之最終分析樣品濃度(在20 µl最終分析體積中)。親本Par0067 scFv包括於所有HTS實驗中作為對照,特定pH依賴性抗體在其變得可用(用於基準測試)時同樣如此。 b) 對於純化scFv抗體之多點劑量反應IC50
測試,自純未稀釋樣品(亦即未進行預稀釋步驟)之¼之最終分析測試樣品。接著在384孔聚丙烯Greiner盤上在兩種分析緩衝液(pH 7.4及6.0)中之每一者中製備重複11點1:3連續稀釋液。將5 µl/孔之各連續稀釋液自相關pH scFv稀釋盤轉移至對應分析盤(pH 7.4及pH 6.0)。將5 µl適當pH分析緩衝液添加至總孔及非特定孔。親本Par0067純化scFv包括於所有多點劑量反應IC50
實驗中作為對照,特定pH依賴性純化scFv在其變得可用(用於基準測試)時同樣如此。資料呈現在表1中。生物素標記之人類 PAR2 ECD 製備 / 添加:
將內部產生之生物素標記之人類PAR2 ECD稀釋至兩種分析緩衝液(pH 7.4及pH 6.0)中之每一者中,得到4.0 nM之工作溶液(1 nM最終分析濃度)。接著將5 µl/孔之適當4.0 nM生物素標記之人類PAR2 ECD工作溶液添加至除陰性結合對照孔之外的對應分析盤(pH 7.4及pH 6.0)之所有孔。將5 µl/孔之適當pH分析緩衝液添加至陰性結合孔。HTRF 偵測試劑製備 / 添加 :
將銪穴狀化合物標記之抗生蛋白鏈菌素(CisBio,610SAKLB)及XL665
標記之抗人類Fc (CisBio,61HFCXLB)各稀釋至各pH分析緩衝液(pH 7.4及pH 6.0)中,得到濃度為6.0 nM (銪穴狀化合物標記之抗生蛋白鏈菌素)及40 nM (XL665
標記之抗人類Fc)之組合工作溶液。允許×4倍稀釋至分析中,此產生1.5 nM (銪穴狀化合物標記之抗生蛋白鏈菌素)及10 nM (XL665
標記之抗人類Fc)之最終分析濃度。接著將5 µl/孔之相關pH組合HTRFTM
偵測試劑工作溶液添加至對應分析盤(pH 7.4及pH 6.0)之所有孔。 部分 C : 測試純化 IgG : 添加順序及分析組分 :
總計 nsb 測試 Dylight650
標記之Par0067 IgG (×4[最終]) 5µl 5µl 5µl 測試IgG (×4[最終]) - - 5µl 分析緩衝液 5µl 5µl - Bio-人類-PAR2 ECD (×4[最終]) 5µl - 5µl 分析緩衝液 - 5µl - 銪穴狀化合物標記之抗生蛋白鏈菌素(×4[最終]) 5µl 5µl 5µlPar0067 IgG Dylight650 標記 :
使用Dylight650
標記套組(Thermo Scientific目錄號84536)進行Par0067 IgG之Dylight650
標記。內部產生之純化Par0067 IgG之標記係根據製造商之推薦標記程序進行。最終Dylight650
標記之Par0067 IgG濃度在2.7莫耳染料/莫耳IgG之平均Dylight650
與IgG染料併入比下測定為0.56 mg/ml。Dylight650 標記之 Par0067 IgG 製備 / 添加 :
Dylight650
標記之Par0067 IgG (0.56 mg/ml,3,733 nM)在上文描述於材料部分中之兩種分析緩衝液(pH 7.4及pH 6.0)中之每一者中均接近4.44 nM (得到1.11 nM最終[分析])之濃度。將5 µl/孔之適當pH 4.44 nM Dylight650
Par0067 IgG溶液添加至相關分析盤(pH 7.4及pH 6.0)之所有孔。測試 IgG 連續稀釋 / 添加 :
親本Par0067 IgG (在所有分析中用作參考/對照)經預稀釋以在兩種不同pH分析緩衝液中得到2000 nM儲備液(以便得到500 nM之最終分析IgG濃度)。自純未稀釋樣品(亦即未進行預稀釋步驟)之¼之最終分析濃度測試所有測試IgG或其他參考/對照IgG。接著在384孔聚丙烯Greiner盤上在兩種分析緩衝液(pH 7.4及6.0)中之每一者中製備重複11點1:3連續稀釋液。5 µl/孔自相關pH IgG稀釋盤轉移至對應分析盤(pH 7.4及pH 6.0)。將5 µl適當pH分析緩衝液添加至總孔及非特定孔。生物素標記之人類 PAR2 ECD 製備 / 添加:
將內部產生之生物素標記之人類PAR2 ECD稀釋至兩種分析緩衝液(pH 7.4及pH 6.0)中之每一者中,得到4.0 nM之工作溶液(1 nM最終分析濃度)。接著將5 µl/孔之適當4.0 nM生物素標記之人類PAR2 ECD工作溶液添加至除陰性結合對照孔之外的對應分析盤(pH 7.4及pH 6.0)之所有孔。將5 µl/孔之適當pH分析緩衝液添加至陰性結合孔。HTRF 偵測試劑製備 / 添加:
將銪穴狀化合物標記之抗生蛋白鏈菌素(CisBio,610SAKLB)稀釋至各pH分析緩衝液(pH 7.4及pH 6.0)中,得到濃度為6.0 nM之工作溶液。允許×4倍稀釋至分析中,此產生1.5 nM之最終分析銪穴狀化合物標記之抗生蛋白鏈菌素濃度。接著將5 µl/孔之相關pH銪穴狀化合物標記之抗生蛋白鏈菌素工作溶液添加至對應分析盤(pH 7.4及pH 6.0)之所有孔。 部分 D : 資料分析 :
665nm及620nm計數首先轉化為665/620比值。接著根據以下方程式計算Δ F (%): ΔF (%) = ( ( 樣品比 - 陰性比 ) / 陰性比 ) × 100
陰性比值係在不存在Par0067 IgG的情況下自相關陰性結合對照孔計算。 接著根據以下方程式計算特異性結合%: 特異性結合% ={(樣品% Δ F - 陰性結合% Δ F) /(總結合% Δ F - 陰性結合% ΔF)} × 100 對於單點HTS,分別在x軸及y軸上標繪pH 6.0相對於pH 7.4時之特異性結合%,以使相對於pH 7.4,在pH 6.0處具有較少抑制(較高特異性結合%)之scFv的分佈可視化。 對於多點劑量反應曲線,相對於測試純化抗體濃度(scFv或IgG)標繪特異性結合%值。經由S形劑量反應抑制可變斜率曲線擬合(4參數邏輯方程式),使用Graphpad Prism軟體測定IC50
值。表 1 多個組胺酸重組為單一 scFv
來自在Par0067抗原決定基競爭結合分析中展示pH依賴性結合之scFv的組胺酸殘基係使用定點突變誘發重組(Reikofski J及Tao BY, 1992, Biotechnol Adv, 10(4): 535-547)。在競爭結合分析中以全免疫球蛋白G1三重突變體(IgG1-TM)形式再測試在兩種不同CDR中含有組胺酸之所得scFv (表2)以識別相比於親本抗體Par0067,pH依賴性結合進一步提高之變異體。相比於參考Par0067抗體CDR序列的組胺酸修飾純系中之每一者之序列比對提供於圖1A-1B及2A-2B中。表 2
IC=不完整曲線;ND=未展示 如藉由 BIACORE™ 所測定的抗 PAR2 Fab 針對 人類、大鼠及食蟹獼猴 PAR2 之 親和力
抗PAR2抗體之抗原結合片段(Fab)經表現(Spooner J.等人 (2015) Biotechnol Bioeng. 112:1472-7)且藉由Biacore測定針對各種物種(人類、大鼠及食蟹獼猴)之重組PAR2的親和力。Biacore 親和力分析
抗PAR2 Fabs之親和力係使用Biacore T100在25℃下在各種pH (pH 7.4、pH 6.0及pH 5.6)下量測。使用具有N端Avi 標籤及C端Flag-His標籤之重組人類、大鼠及食蟹獼猴PAR2進行實驗。 使用標準胺偶合技術將抗生蛋白鏈菌素在10 mM乙酸鈉(pH 4.5)中呈4 μg/mL之濃度下共價固定至C1晶片表面。達成大致30-100 RU之最終抗生蛋白鏈菌素表面。重組生物素標記之PAR2物種(內部產生)以HBS-EP+緩衝液中之4 μg/mL滴定至抗生蛋白鏈菌素晶片表面上,以實現飽和Fab結合(Rmax
)。此分析物低結合水準確保最小質量輸送效果。 抗PAR2 Fab在HBS-EP+緩衝液pH 7.4或MES-BS-EP+pH 6.0緩衝液中或在MES-BS-EP+ pH 5.6緩衝液中連續稀釋(0.39 nM-25 nM)且以50 μl/min流經晶片,伴以3分鐘締合及至多30分鐘解離。在相同條件下進行多次僅緩衝劑注射以允許雙參考減去最終感測器圖譜集,使用BiaEval軟體(2.0.1版本)對其進行分析。晶片表面藉由4 M MgCl2
之脈衝完全再生。 所選純系之BiaCore親和力結果提供於下表3至13中。表 3 : Par0067 Fab 。 表 4 : PaB670048 Fab 。 表 5 : PaB670084 Fab 。 表 6 : PaB670076 Fab 。 表 7 : PaB670120 Fab 。 表 8 : PaB670128 Fab 。 表 9 : PaB670048 Fab 。 表 10 : PaB670129 Fab 。 表 11 : PaB670136 Fab 。 表 12 : PaB670103 Fab 。 表 13 : 3 種 不同 pH 下之 PaB670129 Fab 。 實例 2 :基於細胞之 PAR2 及 PAR1 活性分析
表現內源性PAR2之人類A549細胞、大鼠KNRK、小鼠LL/2或食蟹獼猴CYNOM-K1細胞或過度表現人類PAR2之人類1321N1-hPAR2-cl8細胞係以每孔5,000(人類、食蟹獼猴)或7,000(小鼠、大鼠)個細胞接種在經PDL塗佈之組織培養盤(Greiner Bio-One)上。細胞負載有Fluo-Screen Quest™ Fluo-8 No Wash Calcium染料(AAT Bioquest, Inc)。細胞在室溫下經稀釋於分析緩衝液(HBSS,0.1% BSA,20 mM HEPES)中之IgG或Fab預處理1小時。對於小鼠及食蟹獼猴分析,細胞分別用0.5 nM或10 nM凝血酶預處理,以使PAR1活性脫敏。在螢光成像盤讀取器(FLIPR) Tetra (Molecular Devices)上量測針對11 nM (人類)、400 nM (小鼠)或80 nM (大鼠、食蟹獼猴)胰蛋白酶(Polymun)之PAR2鈣反應。為測定針對人類PAR1之功能活性,亦在FLIPR tetra上測定A549人類細胞株這種凝血酶驅動之鈣反應,且在此等分析中,中和抗PAR1 IgG WEDE15 (Beckman Coulter)及ATAP2 (Life Technologies)係用作陽性對照。為測定針對多種蛋白酶之功能活性,過度表現人類PAR2之1321N1-hPAR2-cl8細胞經PaB670129預處理,隨後藉由0.5 nM胰蛋白酶、500 nM類胰蛋白酶或1 nM間質蛋白酶刺激鈣釋放。在添加蛋白酶且每孔計算峰值RFU之前、期間及之後量測螢光量測值。針對抗體濃度計算反應% (相對於單獨的蛋白酶)且使用GraphPad Prism軟體測定IC50
。 此等分析所得之人類、食蟹獼猴、大鼠及小鼠細胞之結果提供於圖3 (分別為A、B、C及D)中,在圖3E及圖6 (PAR1特異性資料)中計算PAR2 IC50
。IC50
計算展示PaB670129有力地抑制表現內源性PAR2之人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴細胞中之胰蛋白酶誘導之PAR2鈣反應(圖3E)。此外,在人類A549細胞中,凝血酶誘導之PAR1活化作用不會被PaB670129抑制,但會被沃拉帕沙及抗PAR1單株抗體有效地阻斷(圖6)。此等資料展示PaB670129為PAR2之強力及特定拮抗劑。將PaB670129單獨應用於表現PAR2之細胞對基礎細胞鈣水準並無影響,表明PaB670129在PAR2處不具有任何促效活性(圖4A)。此外,PaB670129有力地拮抗針對包括胰蛋白酶、類胰蛋白酶及間質蛋白酶之多種蛋白酶的PAR2誘發之反應(圖4B)。原發性 DRG 神經膠質 - 神經元 PAR2 鈣分析
製備史泊格多利大鼠(Sprague dawley rat)幼畜背根神經節(DRG)之解離培養物且在層黏連蛋白及PDL塗佈之組織培養盤(Greiner Bio-One)上生長。培養盤在用於分析之前在37度下培育24-72小時。細胞負載有2 µM Fura-2鈣染料(Life Technologies)。細胞在含有20 nM PAR2抗體之成像緩衝液(HBSS,20 mM HEPES,0.1 mM苯磺唑酮,10 µM PAR1拮抗劑沃拉帕沙)中培育。接著藉由在裝備有氙弧燈(Xenon arc lamp)之Olympus IX81顯微鏡上Fura-2比率成像來定量細胞內鈣,該氙弧燈回應於施加促效劑凝血酶(Sigma)及間質蛋白酶(R&D Systems)PAR2活化肽LIGRLO (SEQ ID NO: 832)(Peptides International)及高細胞外鉀(50 mM)而在340及380 nm處激發。計算每個視野下的神經元相對於神經膠質之數目(神經元定義為會顯示對高鉀之反應)。接著計算每個視野的總間質蛋白酶敏感性神經元及神經膠質。來自鈣分析之結果提供於圖5A-F中且說明PaB670129抗體有效地降低針對DRG神經元(圖5A-C)及非神經元細胞(圖5D-F)中之間質蛋白酶之敏感性。實例 3 : 抗 PAR2 抗體在發炎性關節痛之大鼠模型中之效應
在史泊格多利大鼠之同側膝蓋中關節內投與碘乙酸單鈉(MIA)導致產生起初與發炎性反應相關之穩固且長效之痛覺過敏及異常疼痛。咸信在此動物模型中產生此等跡象為臨床相關的;反映由呈現與諸如骨關節炎(OA)或類風濕性關節炎之潛在病況相關之慢性發炎性疼痛之患者顯示的症狀(Bove等人,2003;Fernihough等人,2004;Kalbhen 1987)。先前已展示(使用負重作為端點),MIA誘導之痛覺過敏之時程遵循雙相模式:具有Cox-2敏感之早期、主要呈發炎性之組分;及會被黃金標準塞內昔布顯著降低。此早期發炎性階段容易造成更慢性疼痛表現型,該表現型為普瑞巴林(PGB)敏感且是塞內昔布不敏感的,此推測是潛在更為神經病型的組分。負重
:未處理大鼠在兩個後爪之間同等地分佈其體重。然而,當注射之(左)後膝發炎和/或疼痛時,重量經再分佈以使得較小重量置於受影響肢體上(受傷肢體上之負重減小)。各後肢之負重係使用大鼠傷殘測試儀(Linton Instruments, UK)來量測。 將史泊格多利大鼠置於傷殘測試儀中,其中後爪在獨立感測器上且經4秒記錄由兩個後肢施加之平均力。程序
:在遞送之後,大鼠在研究開始之前經歷7天之最低習慣化時段。使未處理大鼠適應飼養籠中之程序房間,其中可任意取用食物及水。經若干天進行負重室習慣化。在最後一天獲取基線負重讀數。 在第0天,在最終基線讀取之後,使用在無菌條件下以3:1混合之異氟醚及氧氣使動物麻醉。對左膝區域刮毛且用希必潔(hibiscrub)溶液清潔。 經由將25 µl之80 mg/ml (2 mg)MIA (Sigma,I2512)溶液注射至左後腿之膝關節中而誘發骨關節炎(OA)。用生理鹽水注射假處理組動物。使動物在溫暖環境中恢復,隨後返回至其飼養籠。 動物在MIA後產生發炎性反應且可保護及舔舐受影響區域。因此小心地監測大鼠之痛苦或嚴重疼痛之出人意料的跡象,以使得可緊接著挑出顯示此類跡象之任何動物。 動物在第一週每天稱重且隨後每幾天稱重。在注射MIA之後第3、7、10及14天關於慢性疼痛產生評估負重。在第18天,獲取負重量測結果且根據動物之拉丁方設計中之MIA窗口將動物分級且隨機分為治療組。抗體給藥方案
:動物在第18天用Par0067 (PAR2+ve) 10 mg/kg或同型對照(PAR2-ve) 10 mg/kg(靜脈內)治療且在抗體給與後4小時及1、2、6、8、10及14天獲取另外的負重量測結果。普瑞巴林及塞內昔布給藥方案
:動物在MIA注射後第24、25、26、27及28天每天給與PGB (30 mg/kg經口;2 ml/kg)或塞內昔布(50 mg/kg經口;2 ml/kg)。在第24、26及28天在給藥後1小時獲取負重評估結果且在第32天在藥物治療中止後獲取另一讀數。 在給藥後第1、2、6、10及14天,在負重評估之後,自抗體及同型對照治療組(n=5/組)經由尾靜脈獲取400 µl血液用於pk分析。研究評估
:獲取右後爪及左後爪之負重讀數且計算差值。資料表示為同側/對側百分比((WB左側/WB右側)×100) (平均值 ± 平均值標準誤差)。計算
:同側讀數/對側讀數×100。未處理WB差異-給藥前WB差異定義為MIA窗口。統計分析
:重複量測ANOVA,接著使用InVivoStat (invivostat.co.uk)進行計劃比較測試,(p<0.05視為顯著)。藉由在各時間點比較治療組與媒劑對照組來分析資料。 注射2 mg MIA至膝關節中引起自第3天開始顯而易見的顯著發炎及過敏性反應,如藉由受傷與非受傷後爪之間的負重轉變所偵測。此MIA誘導之高活動性反應直至第18天(且對於媒劑處理對照動物更久)仍在所有組中顯見,此時投與第一測試劑。注射生理鹽水對負重無影響。 如圖7A中所展示,在第24-28每天投與普瑞巴林(30 mg/kg)之後可見過敏性之顯著及明顯逆轉,弱殘餘效應在第32天事先中止治療之後仍顯而易見。相比之下,在第24-28天每天投與塞內昔布(50 mg/kg)最多僅顯示過敏性之較弱逆轉。此藥理學概況表明MIA反應之此階段期間觀測之高活動性在本質上主要為神經性而非發炎性的。 如亦在圖7A中展示,在給與Par0067 4後小時可見過敏性之顯著逆轉,直至第28天(給藥後10天)。在相同時段期間不可見同型對照之效應。圖7B說明用不同濃度之Par0067治療之效應。實例 4 : PAR2 抗體 PaB670129 對 雌性 C57BL / 6 小鼠中部分神經結紮誘導之機械痛覺過敏之逆轉的效應 介紹
如由Seltzer (1990)所描述之坐骨神經部分結紮(PNL)為據報導充當臨床前神經性疼痛模型之多種神經結紮模型中之一者。其產生可使用如由Randall及Selitto (1957)所描述之疼痛測試儀量測之深度機械痛覺過敏。此實例描述投與抗PAR2抗體PaB670129對此神經損傷/神經性疼痛模型中之痛覺過敏的效應。程序
六十隻雌性C57BL/6小鼠在研究開始之前至少5天出於識別目的而插入應答器。使用疼痛測試儀(Randall及Selitto 1957)(Ugo Basile)測定機械痛覺過敏。將遞增力輪流施加至各後爪之背側表面直至觀測到回縮反應。此時停止施加力且以公克為單位記錄體重。對於同側及對側爪,資料表示為以公克為單位之回縮臨限值。在確立基線讀數後,將小鼠以大致相同同側/對側比分成2組,對其進行手術以使坐骨神經部分結紮或充當假手術對照。用異氟醚使經歷手術之小鼠麻醉。此後,藉由經大腿中部之水平面上的切口進行鈍器解剖而暴露大致1 cm之左側坐骨神經。縫合線(8/0 Virgin Silk:Ethicon)接著穿過第三背神經且緊密地連接。接著使用膠水閉合切口且使小鼠在開始測試之前恢復至少六天。假手術小鼠進行相同方案,但在暴露神經之後,縫合小鼠且使其恢復。 在手術後第7及10天測試小鼠之痛覺過敏起始。將任何顯示大於80%之同側/對側比之小鼠分類為非反應者且自研究移除。在第10天之測試後,小鼠另外再分組,得到最終治療組; A.第1組:假手術+同型對照10 mg/kg皮下(N=10) B.第2組:神經結紮+同型對照10 mg/kg皮下(N=9) C.第3組:神經結紮+依那西普0.3 mg/kg皮下(N=9) D.第4組:神經結紮+PaB670129 3 mg/kg皮下(N=9) E.第5組:神經結紮+PaB670129 10 mg/kg皮下(N=9) F.第6組:神經結紮+PaB670129 50 mg/kg皮下(N=9) 在第13天向小鼠投與稀釋於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之對照或測試分子且在給藥後4小時以及給藥後1、2、4及7天再測試機械痛覺過敏之變化。資料分析
在各測試時間處對於各動物獲取同側及對側讀數。同側及對側後肢之負重表示為比率且使用雙向ANOVA分析(PRISM)組資料且在適當時使用杜凱氏測試(Tukey's test)進行成對比較。結果
坐骨神經部分結紮引起機械痛覺過敏,其表現為當相比於假手術對照時,同側/對側比在第7及10天之顯著減小。在用同型對照治療後,經歷手術之小鼠之機械痛覺過敏水準與給藥前水準相比不顯示任何變化,指示無影響。投與內部黃金標準,依那西普(0.3 mg/kg皮下)引起給藥後4小時直至7天之痛覺過敏之顯著逆轉,與前述研究中所見之結果一致。PaB670129以劑量相關方式引起同側/對側比之逆轉,其中峰值效應在10 mg/kg及50 mg/kg處均可見。3 mg/kg之最低劑量儘管在給藥後1、2及7天處顯著,但顯示較小效應(參見圖8)。 坐骨神經部分結紮誘發與先前報導結果一致之持久機械痛覺過敏。不希望受理論所束縛,咸信此充當神經性疼痛中觀測之疼痛的臨床前相關物。投與PaB670129顯示此痛覺過敏之顯著及劑量相關逆轉,指示PAR2抗體在神經性疼痛治療中之潛在用途。 參考書目: · Persic, L.等人 An integrated vector system for the eukaryotic expression of antibodies or their fragments after selection from phage display libraries. Gene 187, 9-18 (1997)。 · Reikofski J及Tao BY (1992) Polymerase chain reaction (PCR) techniques for site-directed mutagenesis. Biotechnol Adv, 10(4): 535-547。 · Bove SE, Calcaterra SL, Brooker RM, Huber CM, Guzman RE, Juneau PL等人 Weight bearing as a measure of disease progression and efficacy of anti-inflammatory compounds in a model of monosodium iodoacetate-induced osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage 2003; 11 (11): 821-30. eng。 · Fernihough J, Gentry C, Malcangio M, Fox A, Rediske J, Pellas T等人 Pain related behaviour in two models of osteoarthritis in the rat knee. Pain 2004; 112 (1-2): 83-93. eng。 · Kalbhen DA. Chemical model of osteoarthritis--a pharmacological evaluation. J Rheumatol 1987; 14 Spec No: 130-1. eng。 · Clark RA, Shoaib M, Hewitt KN, Stanford SC, Bate ST (2012)., A comparison of InVivoStat with other statistical software packages for analysis of data generated from animal experiments, J Psychopharmacology, 26(8), 1136-1142。 · Myska Improving Biosensor Analysis. Journal of Molecular Recognition. 1999 · D.G. Myska Improving Biosensor Analysis. Journal of Molecular Recognition. 1999;12 : 279-284。 · Myska DG, Improving Biosensor Analysis. Journal of Molecular Recognition. 1999; 12: 279-284。 · A.W. Drake, M.L. Tang, G.A. Papalia, G. Landes, M. Haak-Frendscho, S.L. Klakamp, Biacore surface matrix effects on the binding kinetics and affinity of an antigen/antibody complex, Anal. Biochem. 429 (2012) 58-69 · Pace CN, Vajdos F, Fee L, Grisley G及Grey T, How to measure and predict the molar absorption coefficient of a protein, Protein Sci. 1995; 4: 2411-2423。 · Spooner J, Keen J, Nayyar K, Birkett N, Bond N, Bannister D, Tigue N, Higazi D, Kemp B, Vaughan T, Kippen A, Buchanan A. (2015) Evaluation of strategies to control Fab light chain dimer during mammalian expression and purification: A universal one-step process for purification of correctly assembled Fab. Biotechnol Bioeng. 112:1472-7。 · Daramola O, Stevenson J, Dean G, Hatton D, Pettman G, Holmes W, Field R (2014) A high yielding CHO transient system: co-expression of genes encoding EBNA-1 and GS enhances transient protein expression. Biotechnol Prog. 30(1):132-41。 · Mach H, Middaugh CR, Lewis RV (1992) Statistical determination of the average values of the extinction coefficients of tryptophan and tyrosine in native proteins. Anal. Biochem. 200
(1):74-80。 · Seltzer Z, Dubner R, Shir Y (1990). A novel behavioural model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury. Pain 43: 205-218 · Randall LO, Selitto JJ (1957). A method for measurement of analgesic activity on inflamed tissue. Arch Int Pharmacodyn Ther. 111(4): 409-419 序列表: PRT=胺基酸序列
SEQ ID NO: 801-人類PAR2前原蛋白(GenBank寄存編號NP_005233.3)SEQ ID NO: 802-人類PAR2繫栓配位體SEQ ID NO: 803- 例示性VH構架區1SEQ ID NO: 804- 例示性VH構架區2SEQ ID NO: 805- 例示性VH構架區3SEQ ID NO: 806- 例示性VH構架區4SEQ ID NO: 807- 例示性VL構架區1SEQ ID NO: 808- 例示性VL構架區2SEQ ID NO: 809- 例示性VL構架區3SEQ ID NO: 810- 例示性VL構架區4SEQ ID NO: 811- 例示性VH CDR2SEQ ID NO: 812- 例示性VH CDR2SEQ ID NO: 813- 例示性VH CDR2SEQ ID NO: 814- 例示性VH CDR2SEQ ID NO: 815- 例示性VH CDR2SEQ ID NO: 816- 例示性VH CDR2SEQ ID NO: 817- 例示性VH CDR2SEQ ID NO: 818- 例示性VH CDR2SEQ ID NO: 819- 例示性VH CDR3SEQ ID NO: 820- 例示性VH CDR3SEQ ID NO: 821-- 例示性VHSEQ ID NO: 822 -- 例示性VHSEQ ID NO: 823 -- 例示性VHSEQ ID NO: 824 -- 例示性VHSEQ ID NO: 825 -- 例示性VHSEQ ID NO: 826 -- 例示性VHSEQ ID NO: 827 -- 例示性VHSEQ ID NO: 828 -- 例示性VHSEQ ID NO: 829 -- 例示性VHSEQ ID NO: 830 -- 例示性VHSEQ ID NO: 831 - 例示性VH參考文獻併入 本文所引用之所有公開案及專利均以引用的方式併入本文中,其引用的程度就如同已特定或個別地將各個別公開案或專利以引用的方式併入本文中一般。 儘管已論述本發明之特定實施例,但以上說明為說明性而非限制性的。當回顧本說明書及下文申請專利範圍時,本發明之許多變化形式對於熟習此項技術者將變得顯而易見。本發明之完整範疇以及其等效物之完整範疇,及說明書,以及此類變化形式,應參照申請專利範圍確定。
申請之本專利或專利申請案含有至少一個彩製圖式。在申請且支付必要費用後,專利局將提供附有彩圖之此專利或專利申請公開案之複本。圖1A及1B為說明相比於Par0067之相同CDR的各種純系之VH CDR2 (按出現之次序分別為SEQ ID NO 4、14、24、34、44、54、64、74、84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784及794)及CDR3 (按出現之次序分別為SEQ ID NO 5、15、25、35、45、55、65、75、85、95、105、115、125、135、145、155、165、175、185、195、205、215、225、235、245、255、265、275、285、295、305、315、325、335、345、355、365、375、385、395、405、415、425、435、445、455、465、475、485、495、505、515、525、535、545、555、565、575、585、595、605、615、625、635、645、655、665、675、685、695、705、715、725、735、745、755、765、775、785及795)中之序列差異之表。Par0067及所有指定純系之CDR1及構架區相同(亦即Par0067及純系中之每一者包含序列SEQ ID NO: 3及803-806)。 圖2A及2B為說明相比於Par0067之相同CDR的各種純系之VL CDR3 (按出現之次序分別為SEQ ID NO 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790及800)中之序列差異之表。Par0067及所有指定純系之CDR1、CDR2及構架區相同(亦即純系包含序列SEQ ID NO: 8、9及807-810)。 圖3提供來自使用各種基於IgG之抗體之細胞效能分析的IC50
資料。用於細胞分析中之每一者中之細胞類型經指定。NI=非抑制性。 圖4A提供A549細胞中針對胰蛋白酶之PaB670129相對於等效濃度下針對抗體之促效反應之IC50
曲線。圖4B提供PaB670129針對不同PAR2蛋白酶活化劑之IC50
曲線。 圖5A-5F說明來自實驗之結果,其中大鼠背根神經節(DRG)感覺神經元或非神經元細胞係在存在或不存在PaB670129 (在本文中亦稱為PaB670129)之情況下用間質蛋白酶處理。用同型對照(20 nM)預處理之大鼠DRG感覺神經元顯示間質蛋白酶誘導之鈣瞬變(5A)。用PaB670129 IgG1TM (20 nM)預處理之感覺神經元不回應於間質蛋白酶(5B);回應於間質蛋白酶之神經元之%定量於(5C)中。用同型對照(20 nM)預處理之DRG之非神經元細胞亦顯示間質蛋白酶誘導之鈣瞬變(8D),但用PaB670129 IgG1TM (20 nM)預處理之非神經元細胞並非如此(5E);回應於間質蛋白酶之非神經元細胞之%定量於(5F)中。圖5A-5E將「LIGRLO」揭示為SEQ ID NO: 832。 圖6說明PaB670129 (相對於抗PAR1抗體或沃拉帕沙(Vorapaxar))對人類A549細胞中凝血酶誘導之PAR1活化之效應。 圖7A描繪說明不同處理(包括PAR2抗體Par0067)對大鼠中藉由單碘乙酸鹽(MIA)誘發之同側/對側過敏性%之效應的圖示。圖7B描繪說明不同劑量之PaB670129或同型對照抗體對大鼠中藉由MIA誘發之同側/對側過敏性%之效應的圖示。「i.v.」意謂靜脈內,且「p.o.」意謂經口(per os/oral)。圖8描繪說明不同劑量之PaB670129或同型對照抗體對小鼠中藉由周圍神經部分結紮誘發之同側/對側過敏性%之效應的圖示。「s.c.」意謂皮下。N=9-10每組。資料係使用雙向ANOVA分析,以時間及處理作為相依因子。使用杜凱氏事後測試(Tukey's Post Hoc test)獲得後續統計顯著性。個體比較顯示* P<0.05;** P<0.01;*** P<0.001相對於Op + 同型對照10 mg/kg。
Claims (127)
- 一種包含重鏈可變域(heavy chain variable domain;VH)及輕鏈可變域(light chain variable domain;VL)之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含: i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於該序列SEQ ID NO: 3中; ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於該序列SEQ ID NO: 4中;及 iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於該序列SEQ ID NO: 5中; 且其中該VL包含: i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 8,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於該序列SEQ ID NO: 8中; ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 9,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於該序列SEQ ID NO: 9中;及 iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 10,但其中1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入視情況存在於該序列SEQ ID NO: 10中; 其中當於pH 7.4下以PAR2結合分析進行測試時,相比於具有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 2之VH及具有胺基酸序列SEQ ID NO: 7之VL的抗體或抗原結合片段,該等胺基酸取代、缺失或插入降低該抗體或其抗原結合片段對於人類PAR2之結合親和力不超過1000、800、700、500、400、300、200、100、50或10倍。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該等胺基酸取代、缺失或插入包含同源取代。
- 一種包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含: i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3; ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4,但其中組胺酸視情況存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置1-17之胺基酸位置中任何一或多者處;及 iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5,但其中組胺酸視情況存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置1-8之胺基酸位置中任何一或多者處; 且其中該VL包含: i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 8; ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 9;及 iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 10,但其中組胺酸視情況存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置1-14之胺基酸位置中任何一或多者處。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含: i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 3, ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 4, iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 5, 且其中該VL包含: i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 8, ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 9, iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 10。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含: i) VH-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 13, ii) VH-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 14, iii) VH-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 15, 且其中該VL包含: i) VL-CDR1,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 18, ii) VL-CDR2,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 19, iii) VL-CDR3,其具有胺基酸序列SEQ ID NO: 20。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5、8、12、16及17之胺基酸位置處;且其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置2及3之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至6中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至7中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置7之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至7中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置8之胺基酸位置處。
- 如請求項1或5至7中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置12之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至10中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置15之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至11中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置16之胺基酸位置處。
- 如請求項1或5至11中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置17之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至11中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5及8之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至11中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5、8、12及16之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至11中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 4之位置5、8、12、16及17之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至16中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置2之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至17中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置3之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至18中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 5之位置2及3之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至19中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置1之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至20中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置5之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至21中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置6之胺基酸位置處。
- 如請求項3或5至22中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中組胺酸存在於對應於SEQ ID NO: 10之位置14之胺基酸位置處。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH-CDR2包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 4、14、24、34、44、54、64、74、84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794及811-818。
- 如請求項3或24之抗體或其抗原結合片段,其中該VH-CDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 5、15、25、35、45、55、65、75、85、95、105、115、125、135、145、155、165、175、185、195、205、215、225、235、245、255、265、275、285、295、305、315、325、335、345、355、365、375、385、395、405、415、425、435、445、455、465、475、485、495、505、515、525、535、545、555、565、575、585、595、605、615、625、635、645、655、665、675、685、695、705、715、725、735、745、755、765、775、785、795及819-820。
- 24或25中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該VL-CDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列:SEQ ID NO: 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790及800。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 14之胺基酸序列,其中該VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 15之胺基酸序列,且其中該VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 811之胺基酸序列,其中該VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 819之胺基酸序列,且其中該VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 814之胺基酸序列,其中該VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 820之胺基酸序列,且其中該VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 816之胺基酸序列,其中該VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 15之胺基酸序列,且其中該VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH-CDR2包含對應於SEQ ID NO: 818之胺基酸序列,其中該VH-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 15之胺基酸序列,且其中該VL-CDR3包含對應於SEQ ID NO: 10或20之胺基酸序列。
- 如請求項1至31中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含與SEQ ID NO: 803-806中之每一者至少90%一致之構架區。
- 如請求項1至31中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含與SEQ ID NO: 803-806中之每一者至少95%一致之構架區。
- 如請求項1至31中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該VH包含對應於SEQ ID NO: 803-806之構架區。
- 如請求項1至34中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該VL包含與SEQ ID NO: 807-810中之每一者至少90%一致之構架區。
- 如請求項1至34中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該VL包含與SEQ ID NO: 807-810中之每一者至少95%一致之構架區。
- 如請求項1至34中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該VL包含對應於SEQ ID NO: 807-810之構架區。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含與選自由以下組成之群的序列至少80%、85%、90%、92%、93%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列:SEQ ID NO: 2、12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、782、792及821-831。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VL包含與選自由以下組成之群的序列至少80%、85%、90%、92%、93%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列:SEQ ID NO: 7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、767、777、787及797。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含對應於SEQ ID NO: 821之胺基酸序列且其中該VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含對應於SEQ ID NO: 824之胺基酸序列且其中該VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含對應於SEQ ID NO: 827之胺基酸序列且其中該VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含對應於SEQ ID NO: 831之胺基酸序列且其中該VL包含對應於SEQ ID NO: 7或17之胺基酸序列。
- 如請求項3之抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含對應於SEQ ID NO: 12之胺基酸序列且其中該VL包含對應於SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。
- 如請求項1至44中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段為抗原結合片段。
- 如請求項45之抗體或抗原結合片段,其中該抗原結合片段為scFv。
- 如請求項45之抗體或抗原結合片段,其中該抗原結合片段為Fab'。
- 如請求項1至44中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段為抗體。
- 如請求項48之抗體或抗原結合片段,其中該抗體為單株抗體。
- 如請求項48或49之抗體或抗原結合片段,其中該抗體為IgG抗體。
- 如請求項1至50中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段為人類化的。
- 如請求項1至50中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段為人類的。
- 如請求項1至52中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該VH由包含與以下中之任一者至少90%一致之核苷酸序列的核酸編碼:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。
- 如請求項53之抗體或抗原結合片段,其中該VH由包含與以下中之任一者至少95%一致之核苷酸序列的核酸編碼:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。
- 如請求項53之抗體或抗原結合片段,其中該VH由包含以下中之任一者之核苷酸序列的核酸編碼:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。
- 如請求項1至55中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該VL由包含與以下中之任一者至少90%一致之核苷酸序列的核酸編碼:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。
- 如請求項56之抗體或抗原結合片段,其中該VL由包含與以下中之任一者至少95%一致之核苷酸序列的核酸編碼:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。
- 如請求項56之抗體或抗原結合片段,其中該VL由包含以下中之任一者之核苷酸序列的核酸編碼:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。
- 如請求項1至58中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該VH由包含與SEQ ID NO: 11至少90%一致之核苷酸序列的核酸編碼。
- 如請求項59之抗體或抗原結合片段,其中該VH由包含與SEQ ID NO: 11至少95%一致之核苷酸序列的核酸編碼。
- 如請求項59之抗體或抗原結合片段,其中該VH由包含SEQ ID NO: 11之核苷酸序列的核酸編碼。
- 如請求項1至61中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該VL由包含與SEQ ID NO: 16至少90%一致之核苷酸序列的核酸編碼。
- 如請求項62之抗體或抗原結合片段,其中該VL由包含與SEQ ID NO: 16至少95%一致之核苷酸序列的核酸編碼。
- 如請求項62之抗體或抗原結合片段,其中該VL由包含SEQ ID NO: 16之核苷酸序列的核酸編碼。
- 如請求項1至64中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段結合至PAR2。
- 如請求項1至65中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段阻止胰蛋白酶、類胰蛋白酶及/或間質蛋白酶與PAR2相互作用。
- 如請求項1至66中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段阻止胰蛋白酶、類胰蛋白酶及/或間質蛋白酶裂解PAR2。
- 如請求項1至67中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段阻止裂解PAR2細胞外域。
- 如請求項1至68中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段抑制繫栓配位體(tethered ligand)之暴露。
- 如請求項1至69中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段阻止該繫栓配位體與PAR2之第二跨膜環相互作用。
- 如請求項1至70中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在pH 7.4相比於在pH 6.0係以更大的親和力結合至PAR2。
- 如請求項1至70中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在pH 7.4以小於約5 nM、1 nM、900 pM、800 pM、700 pM、650 pM、600 pM、500 pM、200 pM、100 pM或50 pM之KD 結合PAR2。
- 如請求項72之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在pH 7.4以小於約700 pM之KD 結合PAR2。
- 如請求項1至70中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在pH 6.0以大於約1 nM、5 nM、10 nM、15 nM、20 nM、25 nM、30 nM、40 nM、50 nM、60 nM、80 nM或100 nM之KD 結合PAR2。
- 如請求項1至70中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在pH 6.0以大於約30 nM之KD 結合PAR2。
- 如請求項1至75中任一項之抗體或抗原結合片段,其中當該抗體或抗原結合片段於pH 7.4下在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,該抗體或抗原結合片段之IC50 小於100 nM。
- 如請求項1至76中任一項之抗體或抗原結合片段,其中當該抗體或抗原結合片段於pH 7.4下在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,該抗體或抗原結合片段之IC50 小於50 nM。
- 如請求項1至77中任一項之抗體或抗原結合片段,其中當該抗體或抗原結合片段於pH 7.4下在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,該抗體或抗原結合片段之IC50 小於40 nM。
- 如請求項1至78中任一項之抗體或抗原結合片段,其中當該抗體或抗原結合片段於pH 6.0下在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,該抗體或抗原結合片段之IC50 大於500 nM。
- 如請求項1至79中任一項之抗體或抗原結合片段,其中當該抗體或抗原結合片段於pH 6.0下在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,該抗體或抗原結合片段之IC50 大於1000 nM。
- 如請求項1至80中任一項之抗體或抗原結合片段,其中當該抗體或抗原結合片段於pH 6.0下在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,該抗體或抗原結合片段之IC50 大於1100 nM。
- 如請求項1至81中任一項之抗體或抗原結合片段,其中當該抗體或抗原結合片段在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,該抗體或抗原結合片段在pH 7.4時之IC50 相比於pH 6.0時低20倍以上。
- 如請求項1至82中任一項之抗體或抗原結合片段,其中當該抗體或抗原結合片段在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,該抗體或抗原結合片段在pH 7.4時之IC50 相比於pH 6.0時低25倍以上。
- 如請求項1至83中任一項之抗體或抗原結合片段,其中當該抗體或抗原結合片段在PAR2結合分析中與具有SEQ ID NO: 3-5及8-10之CDR的抗體或抗原結合片段競爭時,該抗體或抗原結合片段在pH 7.4時之IC50 相比於pH 6.0時低30倍以上。
- 如請求項1至84中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在人類A549細胞中的鈣內流分析(calcium influx assay)之IC50 小於3.0×10- 10 M。
- 如請求項1至85中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在人類A549細胞中的鈣內流分析之IC50 小於1.5×10- 10 M。
- 如請求項1至86中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在大鼠KNRK細胞中的鈣內流分析之IC50 小於7.0×10- 10 M。
- 如請求項1至87中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在大鼠KNRK細胞中的鈣內流分析之IC50 小於5.5×10- 10 M。
- 如請求項1至88中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在食蟹獼猴CYNOM-K1細胞中的鈣內流分析之IC50 小於7.0×10- 11 M。
- 如請求項1至89中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在食蟹獼猴CYNOM-K1細胞中的鈣內流分析之IC50 小於5.0×10- 11 M。
- 如請求項1至90中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在鼠類LL/2細胞中的鈣內流分析之IC50 小於6.0×10- 11 M。
- 如請求項1至91中任一項之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段在鼠類LL/2細胞中的鈣內流分析之IC50 小於4.0×10- 11 M。
- 如請求項92之抗體或抗原結合片段,其中該抗體或抗原結合片段相比於缺乏組胺酸修飾之抗體或抗原結合片段,該抗體或抗原結合片段更緩慢地自經治療患者之血清清除。
- 如請求項3及5至93中任一項之抗體或抗原結合片段,其中當在pH 7.4進行PAR2結合分析測試時,相比於具有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 2之VH及具有胺基酸序列SEQ ID NO: 7之VL的抗體或抗原結合片段,視情況存在之一或多個組胺酸降低該抗體或其抗原結合片段對於人類PAR2之結合親和力不超過1000、800、700、500、400、300、200、100、50或10倍。
- 一種能夠表現如請求項1至94中任一項之抗體或抗原結合片段之核酸。
- 一種核酸,其包含與以下中之任一者至少90%一致之核苷酸序列:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。
- 如請求項96之核酸,其中該核酸包含與以下中之任一者至少95%一致之核苷酸序列:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。
- 如請求項96之核酸,其中該核酸包含以下中之任一者之核苷酸序列:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、181、191、201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、771、781、791及833-841。
- 一種核酸,其包含與以下中之任一者至少90%一致之核苷酸序列:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。
- 如請求項99之核酸,其中該核酸包含與以下中之任一者至少95%一致之核苷酸序列:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。
- 如請求項99之核酸,其中該核酸包含以下中之任一者之核苷酸序列:SEQ ID NO: 6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、766、776、786及796。
- 一種核酸,其包含與SEQ ID NO: 11至少90%一致之核苷酸序列。
- 如請求項102之核酸,其中該核酸包含與SEQ ID NO: 11至少95%一致之核苷酸序列。
- 如請求項102之核酸,其中該核酸包含SEQ ID NO: 11之核苷酸序列。
- 一種核酸,其包含與SEQ ID NO: 16至少90%一致之核苷酸序列。
- 如請求項105之核酸,其中該核酸包含與SEQ ID NO: 16至少95%一致之核苷酸序列。
- 如請求項105之核酸,其中該核酸包含SEQ ID NO: 16之核苷酸序列。
- 一種載體,其包含如請求項95至107中任一項之核酸。
- 一種載體集合,其包含:a)如請求項96至98或102至104中任一項之核酸;及b)如請求項99至101及105至107中任一項之核酸。
- 一種宿主細胞,其包含如請求項108或109之載體中之一或多者。
- 一種組合物,其包含醫藥學上可接受之載劑及如請求項1至94中任一項之抗體或抗原結合片段。
- 一種凍乾組合物,其包含如請求項1至94中任一項之抗體或其抗原結合片段。
- 一種復原凍乾組合物,其包含如請求項1至94中任一項之抗體或其抗原結合片段。
- 如請求項111至113中任一項之組合物,其中該組合物經調配以藉由口含錠、噴霧、經口投藥、延遲釋放或持續釋放、經黏膜投藥、糖漿、黏膜黏著劑、經頰調配物、黏膜黏著錠劑、局部投藥、非經腸投藥、注射、皮下投藥、口服溶液、經直腸投藥、經頰投藥或經皮投藥來投與。
- 一種套組,其包含如請求項1至94中任一項之抗體或抗原結合片段或如請求項111至114中任一項之組合物。
- 一種用於治療有需要之個體之疼痛之方法,其包含向該個體投與醫藥學上有效量之如請求項1至94中任一項之抗體或抗原結合片段。
- 一種用於治療有需要之個體之疼痛之方法,其包含向該個體投與醫藥學上有效量之如請求項111至114中任一項之組合物。
- 如請求項116或117之方法,其中該疼痛選自由以下組成之群:傷害感受性、神經性及混合型疼痛。
- 如請求項116或117中任一項之方法,其中該疼痛係與以下相關聯:頭痛、慢性頭痛、偏頭痛、癌症、病毒感染、類風濕性關節炎、骨關節炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、肝病、多發性硬化症、脊髓損傷、疱疹後神經痛、糖尿病神經病變、下背痛、發炎性心臟病、腎病、胃炎、牙齦炎、牙周病、哮喘、慢性阻塞性肺病、自體免疫疾病、大腸急躁症、纖維肌痛、腿痛、腿不寧症候群、糖尿病神經病變、過敏性病況、手術操作、急性或慢性物理性損傷、骨折或擠壓傷、脊髓損傷、發炎疾病、非發炎性神經性或功能不良性疼痛病況或其組合。
- 如請求項119之方法,其中該疼痛為骨關節炎疼痛。
- 如請求項116至120中任一項之方法,其中該個體為人類。
- 一種產生如請求項1至94中任一項之抗體或抗原結合片段之方法,其包含以下步驟: 在培養細胞中表現如請求項95至106中任一項之核酸, 純化該抗體或抗原結合片段。
- 一種如請求項1至94中任一項之抗體或抗原結合片段之用途,其用於製造供治療疼痛用之藥物。
- 如請求項123之用途,其中該疼痛選自由以下組成之群:傷害感受性、神經性及混合型疼痛。
- 如請求項123或124之用途,其中該疼痛係與以下相關聯:頭痛、慢性頭痛、偏頭痛、癌症、病毒感染、類風濕性關節炎、骨關節炎、克羅恩氏病、肝病、多發性硬化症、脊髓損傷、疱疹後神經痛、糖尿病神經病變、下背痛、發炎性心臟病、腎病、胃炎、牙齦炎、牙周病、哮喘、慢性阻塞性肺病、自體免疫疾病、大腸急躁症、纖維肌痛、腿痛、腿不寧症候群、糖尿病神經病變、過敏性病況、手術操作、急性或慢性物理性損傷、骨折或擠壓傷、脊髓損傷、發炎疾病、非發炎性神經性或功能不良性疼痛病況或其組合。
- 如請求項123至125中任一項之用途,其中該疼痛為骨關節炎疼痛。
- 如請求項123至126中任一項之用途,其中該個體為人類。
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