JP2021527700A - ヘテロ二量体タンパク質及びその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、とりわけ、がん及び自己免疫の免疫療法など、疾患の治療に用いられるヘテロ二量体タンパク質を含む組成物及び方法に関する。

Description

本発明は、がん及び自己免疫の免疫療法など、疾患の治療に用いられるヘテロ二量体タンパク質に関する。

優先権
本出願は、２０１８年６月２１日に出願された米国仮出願第６２／６８８，１６７号及び２０１８年７月２５日に出願された米国仮出願第６２／７０３，２４８号の利益を主張する。各出願の内容は、それぞれその内容全体が参照により本明細書に取り込まれる。

電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルである配列表のコンピュータ可読形式のコピー（ファイル名：ＳＨＫ−００４ＰＣ−Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５、作成日：２０１９年６月２１日、ファイルサイズ：１１２ＫＢ）の内容は、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。

タンパク質間相互作用は、細胞及び多細胞生物の正常な生理学的機能にとって重要である。例えば、サイトカインは、炎症及び免疫などの重要な生物学的プロセスを調節するために、同族の受容体に結合するリガンドとして機能する。この点で、多くの天然サイトカイン、サイトカイン受容体、インテグリン、及び他のタンパク質が存在するか、又は多量体タンパク質複合体として機能する。腫瘍壊死因子スーパーファミリー内の多量体などのいくつかの多量体はホモ三量体として機能し、サイトカインのＩＬ−１２ファミリー（例えば、ＩＬ１２、ＩＬ２３、ＩＬ２７、又はＩＬ−３５）を含む他のリガンドはヘテロ二量体を形成する。同様に、サイトカイン受容体もヘテロ二量体複合体として機能する場合がある。例えば、多くのインターロイキン受容体は、シグナル伝達のためのヘテロ二量体を形成する。

タンパク質間相互作用の調節は、様々な疾患及び病状への治療的介入に役立つ機構である。リガンドと相互作用する可溶性結合タンパク質は、潜在的にリガンドを受容体から隔離（sequester）し、それによってその特定の受容体経路の活性化を低下させ得る。あるいは、リガンドの隔離は、リガンドの除去又は分解を遅らせ、それにより、リガンドの効果の持続時間及び生物学的活性を増加させ得る。さらに、可溶性リガンドを利用して、特定の受容体を活性化又は阻害し得る。それにもかかわらず、可溶性タンパク質の合成及び製造は、ヘテロ二量体タンパク質を生成することが望ましい場合に妨げられ得る。特に、合成の効率は、ホモ二量体及びヘテロ二量体の混合物の形成によって大きく損なわれる場合がある。

したがって、治療目的の使用のためのヘテロ二量体タンパク質の効率的な合成及び製造のための新規な方法の必要性が存在している。

様々な実施形態では、本発明は、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含むヘテロ二量体タンパク質であって、前記第１のポリペプチド鎖は、アミノ末端において第１のタンパク質の第１のサブユニットを含み、前記第１のタンパク質の第１のサブユニットは、第１の電荷分極コアドメインによって、カルボキシ末端における第２のタンパク質の第１のサブユニットに連結されており、前記第２のポリペプチド鎖は、アミノ末端において前記第１のタンパク質の第２のサブユニットを含み、前記第１のタンパク質の第２のサブユニットは、第２の電荷分極コアドメインによって、カルボキシ末端における前記第２のタンパク質の第２のサブユニットに連結されている、前記ヘテロ二量体タンパク質を提供する。

様々な実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、第１の電荷分極コアドメイン及び第２の電荷分極コアドメイン上の正に帯電したアミノ酸残基と負に帯電したアミノ酸残基との間の静電相互作用を介してヘテロ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、正に帯電したアミノ酸残基は、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リシン（Ｌｙｓ）、及びアルギニン（Ａｒｇ）から選択される１又は複数のアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、前記負に帯電したアミノ酸残基は、アスパラギン酸（Ａｓｐ）及びグルタミン酸（Ｇｌｕ）から選択される１又は複数のアミノ酸を含み得る。

したがって、様々な実施形態において、第１の電荷分極コアドメイン及び／又は第２の電荷分極コアドメインは、それぞれ、コアドメインのアミノ末端及びカルボキシ末端に正に帯電したアミノ酸残基又は負に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドを含む。例示的な実施形態では、第１の電荷分極コアドメインは、アミノ末端に正に帯電したアミノ酸を有するペプチドを含んでいてもよく、前記ペプチドは、リンカー（例えば、安定化ドメイン）によって、カルボキシ末端に負に帯電したアミノ酸残基を有するペプチドに隣接している。そのような実施形態では、第２の電荷分極コアドメインは、アミノ末端に負に帯電したアミノ酸を有するペプチドを含んでいてもよく、前記ペプチドは、リンカー（例えば、安定化ドメイン）によって、カルボキシ末端に正に帯電したアミノ酸残基を有するペプチドに隣接している。別の例示的な実施形態では、第１の電荷分極コアドメインは、アミノ末端に負に帯電したアミノ酸を有するペプチドを含んでいてもよく、前記ペプチドは、リンカー（例えば、安定化ドメイン）によって、カルボキシ末端に正に帯電したアミノ酸残基を有するペプチドに隣接している。そのような実施形態では、第２の電荷分極コアドメインは、アミノ末端に正に帯電したアミノ酸を有するペプチドを含んでいてもよく、前記ペプチドは、リンカー（例えば、安定化ドメイン）によって、カルボキシ末端に負に帯電したアミノ酸残基を有するペプチドに隣接している。

様々な実施形態では、第１の電荷分極コアドメイン及び／又は第２の電荷分極コアドメインは、それぞれ、正に帯電したアミノ酸又は負に帯電したアミノ酸を有するペプチドに隣接しているリンカー（例えば、安定化ドメイン）をさらに含む。いくつかの実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、可動性アミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、又は抗体配列から所望により選択される。ある実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、ＩｇＧ１、所望によりヒトＩｇＧ１に由来する、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。別の実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、ＩｇＧ４、所望によりヒトＩｇＧ４に由来するヒ、ンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、サイトカイン、増殖因子、及び／又はホルモンから選択される。いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、サイトカインの受容体、増殖因子の受容体、及び／又はホルモンの受容体から選択される。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質において、第１のタンパク質は表１から選択され、及び／又は第２のタンパク質は表１から選択される。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、インターロイキンである。実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＬ１２αサブユニット及びＩＬ２７βサブユニットを含むＩＬ−３５である。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、サイトカインの受容体、増殖因子の受容体、及び／又はホルモンの受容体から選択される。実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、インターロイキンの受容体である。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＬ６Ｒαサブユニット及びｇｐ１３０サブユニットを含むＩＬ６受容体である。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＬ２１ｒサブユニット及びＩＬ２ｒｇサブユニットを含むＩＬ２１受容体である。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質は、ＩＦＮｇＲサブユニット及びＩＦＮＧＲ２サブユニットを含むＩＬ２１である。

いくつかの実施形態では、アミノ末端又はカルボキシ末端のタンパク質は天然にヘテロ二量体であり、反対側の末端のタンパク質は天然にヘテロ二量体ではない。

また、様々な態様において、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、ヘテロ二量体タンパク質を含む医薬組成物の有効量を、投与を必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患の治療方法において使用される。さらなる態様において、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、感染症の治療方法において使用され、前記感染症としては、これらに限定されないが、ウイルス感染又は他の細胞内病原体が挙げられる。さらに別の態様では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、がんの治療方法において使用される。

本明細書に記載の任意の態様又は実施形態は、本明細書に開示される任意の他の態様又は実施形態と組み合わせてもよい。

本発明のタンパク質工学の実施形態を示し、ＩＬ６受容体（ＩＬ６Ｒαサブユニット及びｇｐ１３０サブユニットを含む）とＩＬ−３５サイトカイン（ＩＬ１２αサブユニット及びＩＬ２７βサブユニットを含む）を含む本発明の例示的なヘテロ二量体タンパク質を示す図である。ヘテロ二量体タンパク質は、電荷分極コアドメイン間の静電相互作用によって優先的に形成される。 一過性トランスフェクション培養物からのｇｐ１３０−Ｆｃ−ＩＬ１２α及びＩＬ６ＲＡ−Ｆｃ−ＩＬ２７βの産物泳動物のウエスタンブロット分析を示す図である。分泌タンパク質は、アフィニティークロマトグラフィーを用いて捕捉され、カラムから溶出されて、ヒトＦｃ特異的抗体によって認識されるドメインを含むタンパク質を得た。タンパク質は変性条件下で泳動されたため、個々のバンドはαストランド及びβストランドについて視覚化される。 ｇｐ１３０−Ｆｃ−ＩＬ１２ａとＩＬ６ＲＡ−Ｆｃ−ＩＬ２７βの精製ヘテロ二量体タンパク質のウエスタンブロット分析を示す図である。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（左の２つのゲル）は、非変性条件下で約３００ｋＤａに単一のバンドが存在することを示した（各ブロットの分子量ラダー横の左レーン）。このバンドは、β−メルカプトエタノールとのインキュベーション後に構成要素のαストランド及びβストランドに分離でき（各ゲルの中央のレーン）、これは、予測よりも高い見かけ分子量で泳動され、グリコシル化を含む翻訳後修飾を示し得る。このことは、各ゲルの右端のレーンで確認され、αストランド及びβストランドの分子量が、Ｎ−結合型グリコシル化及びＯ−結合型グリコシル化の除去後に予測された分子量まで減少したことを示していた。右側のゲルでは、未変性ＰＡＧＥゲルを使用して、α／αホモ二量体又はβ／βホモ二量体の形態と比較した、α／βヘテロダイマーの形態で存在する精製タンパク質の割合をさらに調べた。ゲルは、α／αホモ二量体の約３０％及びβ／βホモ二量体の１０％と比較して、調製物中の総タンパク質の約６０％までのα／βヘテロ二量体の濃縮を示した。 分光光度法を用いた、捕捉されたヘテロ二量体ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５タンパク質の定量化を示す図である。 ＣＨＯ細胞におけるｇｐ１３０−α−ＩＬ１２Ａコンストラクト及びＩＬ６ＲＡ−β−ＩＬ２７Ｂコンストラクトの二重トランスフェクションとそれに続くプロテインＡを用いた分泌タンパク質の精製後のＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５コンストラクトのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）クロマトグラムを示す図である。 ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５タンパク質が固定化ヒトＩＬ−６に結合することができることを実証するために開発されたＥＬＩＳＡアッセイの概略図を示す図である。このアッセイでは、目的の種（上図中央に示す）のみがＩＬ−６に結合すると予想され、ヘテロ二量体のＩＬ−２７ａ（ＥＢＩ３）ドメインに対する抗体で特異的に検出できた。 ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５タンパク質が固定化ヒトＩＬ−６に結合することができることを実証するために開発されたＥＬＩＳＡアッセイの別の概略図を示す図である。結合タンパク質は、ＩＬ−６ＲＡドメインを用いて検出した。 抗ヒトｇｐ１３０抗体を用いて本発明の例示的なヘテロ二量体タンパク質を特異的に捕捉し、抗ヒトＩＬ−２７ａ（ＥＢＩ３）抗体で結合タンパク質を検出する、開発されたＥＬＩＳＡアッセイの概略図を示す図である。 抗ヒトｇｐ１３０抗体を用いて本発明の例示的なヘテロ二量体タンパク質を特異的に捕捉し、ＩＬ−６ＲＡドメインを用いて結合タンパク質を検出する、開発されたＥＬＩＳＡアッセイの概略図を示す図である。 ＩＬ−６ＲＡドメインを用いて本発明の例示的なヘテロ二量体タンパク質を特異的に捕捉し、抗ヒトＩＬ−２７ａ（ＥＢＩ３）抗体で結合タンパク質を検出する、開発されたＥＬＩＳＡアッセイの概略図を示す図である。 ＩＬ−６ＲＡドメイン用いて本発明の例示的なヘテロ二量体タンパク質を特異的に捕捉し、ＩＬ−６ＲＡドメインを用いて結合タンパク質を検出する、開発されたＥＬＩＳＡアッセイの概略図を示す図である。 ＩＬ−１２ａ ｐ３５を用いて本発明の例示的なヘテロ二量体タンパク質を特異的に捕捉し、抗ＩＬ−２７ａ（ＥＢＩ３）抗体を用いて結合タンパク質を検出する、開発されたＥＬＩＳＡアッセイの概略図を示す図である。 ＩＬ−１２α ｐ３５ドメインを用いて本発明の例示的なヘテロ二量体タンパク質を特異的に捕捉し、ＩＬ−６ＲＡで結合タンパク質を検出する、開発されたＥＬＩＳＡアッセイの概略図を示す図である。 抗ヒトＩＬ−２７ａ（ＥＢＩ３）抗体を用いて本発明の例示的なヘテロ二量体タンパク質を特異的に捕捉し、抗ヒトＩＬ−２７ａ（ＥＢＩ３）抗体で結合タンパク質を検出する、開発されたＥＬＩＳＡアッセイの概略図を示す図である。 抗ヒトＩＬ−２７ａ（ＥＢＩ３）抗体を用いて本発明の例示的なヘテロ二量体タンパク質を特異的に捕捉し、ＩＬ−６ＲＡドメインで結合タンパク質を検出する、開発されたＥＬＩＳＡアッセイの概略図を示す図である。 ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）クロマトグラムを示す図であり、吸光度波長は２１０ｎｍであった。 ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）クロマトグラムを示す図であり、吸光度波長は２８０ｎｍであった。 ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質を用いたＩＬ−６ ＳＩＮＫアッセイの結果を示すグラフを示す図である。 少なくともＩＬ−３５を誘導するＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質（ＨｄＡ’００として識別される）の能力を示すグラフを含む図である。「Ｈａｌｙｃｏｎ」という状態は、対照キメラタンパク質による処理を指す。 ＩＬ−２１ｒ−Ｆｃ（α）−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＬ２ｒｇ−Ｆｃ（β）−ＩＬ２７Ｂ鎖を含むＩＬ−２１Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質の概略図を示す図である。 還元脱グリコシル化条件下で約８４．４ｋＤａ及び約７８．１ｋＤａに２つの単一バンドの存在を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す図である（右端のレーン）。 ＣＨＯ細胞におけるＩＬ−２１ｒ−Ｆｃ（α）−ＩＬ１２ａコンストラクト及びＩＬ２ｒｇ−Ｆｃ（β）−ＩＬ２７Ｂコンストラクトの二重トランスフェクションとそれに続くプロテインＡを用いた分泌タンパク質の精製後のＩＬ−２１Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ ＩＦＮγＲ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）クロマトグラムを示す図である。 各ブロットの下に示される抗体でプローブしたＩＦＮｇＲ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＦＮＧＲ２−β−ＩＬ２７Ｂ鎖を含むＩＦＮγＲ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質のウエスタンブロット分析を示す図である。前記タンパク質は、非変性条件（各ブロットの分子量ラダー横の左レーン）、β−メルカプトエタノール処理による変性条件（各ゲルの中央レーン）、及び変性処理と脱グリコシル化処理の両方で泳動された。 ＣＨＯ細胞におけるＩＦＮｇＲ−α−ＩＬ１２ａ鎖コンストラクトＩＦＮＧＲ２−β−ＩＬ２７Ｂ鎖コンストラクトの二重トランスフェクションとそれに続くプロテインＡを用いた分泌タンパク質の精製後のＩＦＮγＲ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）クロマトグラムを示す図である。

本発明は、ヘテロ二量体タンパク質を合成及び製造するためのタンパク質工学プラットフォームに関する。本発明の方法は、自己免疫疾患を含むがこれに限定されない様々な疾患の治療のための免疫シグナルの調節に用いるためのヘテロ二量体タンパク質の効率的な産生を可能にする。

電荷分極コアドメイン
ある態様では、本発明は、ヘテロ二量体タンパク質に関する。様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、２種類のポリペプチド鎖を含む。第１のポリペプチド鎖は、アミノ末端において第１のタンパク質の第１のサブユニットを含み、前記第１のタンパク質の第１のサブユニットは、第１の電荷分極コアドメインによって、カルボキシ末端における第２のタンパク質の第１のサブユニットに連結されている。第２のポリペプチド鎖は、アミノ末端の前記第１のタンパク質の第２のサブユニットを含み、前記第１のタンパク質の第２のサブユニットは、第２の電荷分極コアドメインによって、カルボキシ末端における前記第２のタンパク質の第２のサブユニットに連結されている。様々な実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、第１の電荷分極コアドメイン及び第２の電荷分極コアドメイン上の正に帯電したアミノ酸残基と負に帯電したアミノ酸残基との間の静電相互作用を介してヘテロ二量体を形成する。

様々な実施形態において、第１の電荷分極コアドメイン及び／又は第２の電荷分極コアドメインが、それぞれ、前記コアドメインのアミノ末端及びカルボキシ末端に正に帯電したアミノ酸残基又は負に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドを含む。例示的な実施形態では、第１の電荷分極コアドメインは、アミノ末端に正に帯電したアミノ酸を有するペプチドを含んでいてもよく、前記ペプチドは、リンカー（例えば、安定化ドメイン）によって、カルボキシ末端に負に帯電したアミノ酸残基を有するペプチドに隣接している。第２の電荷分極コアドメインは、アミノ末端に負に帯電したアミノ酸を有するペプチドを含んでいてもよく、前記ペプチドは、リンカー（例えば、安定化ドメイン）によって、カルボキシ末端に正に帯電したアミノ酸残基を有するペプチドに隣接している。

別の例示的な実施形態では、第１の電荷分極コアドメインは、アミノ末端に負に帯電したアミノ酸を有するペプチドを含んでいてもよく、前記ペプチドは、リンカー（例えば、安定化ドメイン）によって、カルボキシ末端に正に帯電したアミノ酸残基を有するペプチドに隣接している。第２の電荷分極コアドメインは、アミノ末端に正に帯電したアミノ酸を有するペプチドを含んでいてもよく、前記ペプチドは、リンカー（例えば、安定化ドメイン）によって、カルボキシ末端に負に帯電したアミノ酸残基を有するペプチドに隣接している。

様々な実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の形成は、第１の電荷分極コアドメイン及び第２の電荷分極コアドメインのアミノ末端及びカルボキシ末端に位置する正に帯電したアミノ酸残基と負に帯電したアミノ酸残基との間の静電相互作用によって起こる。さらに、ホモ二量体タンパク質の形成は、第１の電荷分極コアドメイン及び第２の電荷分極コアドメインのアミノ末端及びカルボキシ末端に位置する正に帯電したアミノ酸残基又は負に帯電したアミノ酸残基の間の反発によって妨げられる。

様々な実施形態では、電荷分極コアドメインのアミノ末端又はカルボキシ末端に正に帯電したアミノ酸残基及び／又は負に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドは、約２〜約５０アミノ酸長である。例えば、電荷分極コアドメインのいずれかの末端に正に帯電したアミノ酸残基及び／又は負に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドは、約５０アミノ酸長、約４５アミノ酸長、約４０アミノ酸長、約３５アミノ酸長、約３０アミノ酸長、約２５アミノ酸長、約２０アミノ酸長、約１９アミノ酸長、約１８アミノ酸長、約１７アミノ酸長、約１６アミノ酸長、約１５アミノ酸長、約１４アミノ酸長、約１３アミノ酸長、約１２アミノ酸長、約１１アミノ酸長、約１０アミノ酸長、約９アミノ酸長、約８アミノ酸長、約７アミノ酸長、約６アミノ酸長、約５アミノ酸長、約４アミノ酸長、約３アミノ酸長、又は約２アミノ酸長であり得る。

様々な実施形態では、正に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドは、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リシン（Ｌｙｓ）、及びアルギニン（Ａｒｇ）から選択される１又は複数のアミノ酸を含み得る。様々な実施形態では、負に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドが、アスパラギン酸（Ａｓｐ）及びグルタミン酸（Ｇｌｕ）から選択される１又は複数のアミノ酸を含み得る。

様々な実施形態では、第１の電荷分極コアドメイン及び／又は第２の電荷分極コアドメインは、それぞれ、以下の表に示されるようなアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列に少なくとも９０％、９３％、９５％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチドを含み得る。

例えば、ある実施形態では、第１の電荷分極コアドメイン及び第２の電荷分極コアドメインは、それぞれ、配列ＹＹ_ｎＸＸ_ｎＹＹ_ｎＸＸ_ｎＹＹ_ｎ（式中、Ｘはアルギニン、ヒスチジン、又はリシンなどの正に帯電したアミノ酸であり、Ｙはセリン又はグリシンなどのスペーサーアミノ酸である；配列番号３）を含むペプチドを含み得る。例示的なペプチド配列としては、これらに限定されないが、ＲＫＧＧＫＲ（配列番号１１）又はＧＳＧＳＲＫＧＧＫＲＧＳ（配列番号１２）が挙げられる。

別の例示的な実施形態では、第１の電荷分極コアドメイン及び第２の電荷分極コアドメインは、それぞれ、配列ＹＹ_ｎＺＺ_ｎＹＹ_ｎＺＺ_ｎＹＹ_ｎ（式中、Ｚはアスパラギン酸又はグルタミン酸などの負に帯電したアミノ酸であり、Ｙはセリン又はグリシンなどのスペーサーアミノ酸である）を含むペプチドを含み得る。例示的なペプチド配列としては、これらに限定されないが、ＤＥＧＧＥＤ（配列番号１３）又はＧＳＧＳＤＥＧＧＥＤＧＳ（配列番号１４）が挙げられる。

実施形態では、以下の電荷分極コアドメイン（負−正、本明細書では「αコアドメイン」とも称される）が提供される：
ＧＳＧＳＲＫＧＧＫＲＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＤＥＧＧＥＤＧＳＧＳ（配列番号１６）。

いくつかの実施形態において、ヘテロ二量体タンパク質は、変異（variant）αコアドメインを含む。例として、前記変異体は、配列番号１６に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、以下の電荷分極コアドメイン（正−負、本明細書では「βコアドメイン」とも称される）が提供される：
ＧＳＧＳＤＥＧＧＥＤＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＲＫＧＧＫＲＧＳＧＳ（配列番号１７）。

いくつかの実施形態において、ヘテロ二量体タンパク質は、変異βコアドメインを含む。例として、前記変異体は、配列番号１７に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

様々な実施形態では、帯電したアミノ酸残基を含むペプチドは、ヘテロ二量体を安定化するための追加の方法として、静電的に帯電したコアドメイン間のジスルフィド結合を促進するための１又は複数のシステイン残基をさらに含み得る。

様々な実施形態では、第１の電荷分極コアドメイン及び第２の電荷分極コアドメインは、それぞれ、安定化ドメインとして任意に機能し得るリンカー配列を含む。様々な実施形態では、リンカーは、天然に存在するマルチドメインタンパク質に由来し得るか、又は、例えば、その内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＣｈｉｃｈｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２２（２）：１５３−１６７及びＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７−１３６９に記載されているような実験に基づいたリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーを、その内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７−１３６９及びＣｒａｓｔｏ ｅｔ．ａｌ．，（２０００），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３０９−３１２に記載されているようなリンカー設計データベース及びコンピュータープログラムを使用して設計してもよい。

いくつかの実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、ＰＥＧなどの合成リンカーである。

他の実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）はポリペプチドである。いくつかの実施形態では、前記リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、約５００アミノ酸長未満、約４５０アミノ酸長未満、約４００アミノ酸長未満、約３５０アミノ酸長未満、約３００アミノ酸長未満、約２５０アミノ酸長未満、約２００アミノ酸長未満、約１５０アミノ酸長未満、又は約１００アミノ酸長未満の長さである。例えば、前記リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、約１００アミノ酸長未満、約９５アミノ酸長未満、約９０アミノ酸長未満、約８５アミノ酸長未満、約８０アミノ酸長未満、約７５アミノ酸長未満、約７０アミノ酸長未満、約６５アミノ酸長未満、約６０アミノ酸長未満、約５５アミノ酸長未満、約５０アミノ酸長未満、約４５アミノ酸長未満、約４０アミノ酸長未満、約３５アミノ酸長未満、約３０アミノ酸長未満、約２５アミノ酸長未満、約２０アミノ酸長未満、約１９アミノ酸長未満、約１８アミノ酸長未満、約１７アミノ酸長未満、約１６アミノ酸長未満、約１５アミノ酸長未満、約１４アミノ酸長未満、約１３アミノ酸長未満、約１２アミノ酸長未満、約１１アミノ酸長未満、約１０アミノ酸長未満、約９アミノ酸長未満、約８アミノ酸長未満、約７アミノ酸長未満、約６アミノ酸長未満、約５アミノ酸長未満、約４アミノ酸長未満、約３アミノ酸長未満、又は約２アミノ酸長未満であり得る。

様々な実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、実質的にグリシン残基及びセリン残基（例えば、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、又は約９７％のグリシン及びセリン）で構成されている。

様々な実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、抗体（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２）を含む、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）のヒンジ領域である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥクラスの抗体に見られるヒンジ領域は、可動性スペーサーとして機能し、Ｆａｂ部分が空間内を自由に動くことができるようにする。定常領域とは対照的に、ヒンジドメインは構造的に多様であり、免疫グロブリンのクラス及びサブクラス間で配列及び長さの両方において異なっている。例えば、ヒンジ領域の長さ及び可動性は、ＩｇＧサブクラス間で異なっている。ＩｇＧ１のヒンジ領域は２１６〜２３１番目のアミノ酸を含み、自由に可動性であるため、Ｆａｂ断片は、対称軸の周りを回転し、２つの重鎖間ジスルフィド架橋の一方を中心とする球内を動くことができる。ＩｇＧ２のヒンジはＩｇＧ１よりも短く、１２個のアミノ酸残基及び４個のジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ領域はグリシン残基を欠いており、比較的短く、余分な重鎖間ジスルフィド架橋によって安定化された剛性のポリプロリン二重らせんを含む。これらの特性により、ＩｇＧ２分子の可動性が制限される。ＩｇＧ３は、（２１個のプロリン及び１１個のシステインを含む）６２個のアミノ酸を含み、非可動性ポリプロリン二重らせんを形成する、独自の拡張ヒンジ領域（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）によって他のサブクラスと異なる。ＩｇＧ３では、Ｆａｂ断片はＦｃ断片から比較的離れているため、分子の可動性が高まる。ＩｇＧ３の長いヒンジは、他のサブクラスと比較して高い分子量の原因でもある。ＩｇＧ４のヒンジ領域はＩｇＧ１のヒンジ領域よりも短く、その可動性はＩｇＧ１とＩｇＧ２との中間である。ヒンジ領域の可動性は、ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２の順に低下すると報告されている。他の実施形態では、リンカーはヒトＩｇＧ４に由来し、二量体化（Ｓ２２８Ｐを含む）又はＦｃＲｎ結合を増強するための１又は複数の変異を含み得る。

結晶学的研究によれば、免疫グロブリンヒンジ領域は、機能的に、上部ヒンジ領域、コア領域、及び下部ヒンジ領域の３つの領域にさらに細分化可能である。Ｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．， １９９２ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １３０：８７を参照のこと。上部ヒンジ領域には、Ｃ_Ｈ１のカルボキシル末端から、動きを制限するヒンジの最初の残基、通常は２つの重鎖間に鎖間ジスルフィド結合を形成する最初のシステイン残基までのアミノ酸が含まれる。上部ヒンジ領域の長さは、抗体のセグメントの可動性と相関する。コアヒンジ領域には重鎖間ジスルフィド架橋が含まれ、下部ヒンジ領域はＣ_Ｈ２ドメインのアミノ末端に連結し、Ｃ_Ｈ２の残基を含む。（同上）。野生型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ領域には、Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ配列が含まれており、この配列は、ジスルフィド結合の形成によって二量体化すると、回転軸として機能すると考えられる環状オクタペプチドを生成し、可動性を与える。様々な実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、任意の抗体（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２）を含む、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）の上部ヒンジ領域、コア領域、及び下部ヒンジ領域の１つ、２つ、又は３つを含む。ヒンジ領域はまた、１又は複数のグリコシル化部位を含んでいてもよく、これは、炭水化物付着のためのいくつかの構造的に異なるタイプの部位を含む。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ領域の１７アミノ酸セグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、分泌型免疫グロブリンにとって有利な特性と考えられる、腸のプロテアーゼに対するヒンジ領域ポリペプチドの耐性を付与する。様々な実施形態では、本発明のリンカー（例えば、安定化ドメイン）は、１又は複数のグリコシル化部位を含む。

様々な実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、抗体（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２）を含む、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）のＦｃドメインを含む。様々な実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、ヒトＩｇＧ４抗体に由来するヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３Ｆｃドメインを含む。様々な実施形態では、リンカー（例えば、安定化ドメイン）は、ヒトＩｇＧ１抗体に由来するヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３Ｆｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する親和性の増加及び結合の強化を示す。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインには、ＦｃＲｎへの親和性を高め、結合を強化する１又は複数の変異が含まれる。理論に拘束されることを望まないが、ＦｃＲｎへの親和性の増加及び結合の増強は、本発明のヘテロ二量体タンパク質のインビボ半減期を増加させると考えらている。

いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、（Ｋａｂａｔの番号付けによる）２５０番目、２５２番目、２５４番目、２５６番目、３０８番目、３０９番目、３１１番目、４２８番目、４３３番目、又は４３４番目のアミノ酸残基又はそれらの均等物に、１又は複数のアミノ酸置換を含む。ある実施形態では、２５０番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、グルタミンによる置換である。ある実施形態では、２５２番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、又はスレオニンによる置換である。ある実施形態では、２５４番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、スレオニンによる置換である。ある実施形態では、２５６番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、セリン、アルギニン、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸、又はスレオニンによる置換である。ある実施形態では、３０８番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、スレオニンによる置換である。ある実施形態では、３０９番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、プロリンによる置換である。ある実施形態では、３１１番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、セリンによる置換である。ある実施形態では、３８５番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、アルギニン、アスパラギン酸、セリン、スレオニン、ヒスチジン、リシン、アラニン、又はグリシンによる置換である。ある実施形態では、３８６番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、スレオニン、プロリン、アスパラギン酸、セリン、リシン、アルギニン、イソロイシン、又はメチオニンによる置換である。ある実施形態では、３８７番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、アルギニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、又はアラニンによる置換である。ある実施形態では、３８９番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、プロリン、セリン、又はアスパラギンによる置換である。ある実施形態では、４２８番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、ロイシンによる置換である。ある実施形態では、４３３番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、アルギニン、セリン、イソロイシン、プロリン、又はグルタミンによる置換である。ある実施形態では、４３４番目のアミノ酸残基でのアミノ酸置換は、ヒスチジン、フェニルアラニン、又はチロシンによる置換である。

いくつかの実施形態では、（例えば、ＩｇＧ定常領域を含む）Ｆｃドメインは、（Ｋａｂａｔ番号付けによる）２５２番目、２５４番目、２５６番目、４３３番目、４３４番目、又は４３６番目のアミノ酸残基での置換など、１又は複数の変異を含む。ある実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅの三重変異又はＹＴＥ変異を含む。他の実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ／Ｙ４３６Ｈの三重変異又はＫＦＨ変異を含む。さらなる実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、ＹＴＥ変異及びＫＦＨ変異の組み合わせを含む。

いくつかの実施形態では、本発明の改変ヒト化抗体は、２５０番目、２５３番目、３０７番目、３１０番目、３８０番目、４２８番目、４３３番目、４３４番目、及び４３５番目のアミノ酸残基に１又は複数の変異を含むＩｇＧ定常領域を含む。例示的な変異としては、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ４２８Ｌ、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｆ、Ｎ４３４Ｓ、及びＨ４３５Ａが挙げられる。ある実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ変異又はＬＳ変異を含む。ある実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ変異又はＱＬ変異を含む。別の実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｎ４３４Ａ変異を含む。ある実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ変異又はＡＡＡ変異を含む。ある実施形態では、ＩｇＧ定常領域はＩ２５３Ａ／Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ａ変異又はＩＨＨ変異を含む。別の実施形態では、ＩｇＧ定常領域はＨ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ変異を含む。ある実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ変異及びＨ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ変異の組み合わせを含む。

様々な実施形態では、Ｆｃドメインの安定性及び／又は半減期を増加させるために変異が導入される。例示的なＦｃ安定化変異体はＳ２２８Ｐである。追加の例示的なＦｃ半減期延長変異体は、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ４２８Ｌ、Ｖ３０８Ｔ、Ｌ３０９Ｐ、及びＱ３１１Ｓであり、本発明によるリンカー（例えば、安定化ドメイン）は、これらの変異体の１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つを含み得る。

実施形態では、電荷分極を欠くコアドメインは、以下の配列を有する：
ＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＩＥＧＲＭＤ（配列番号１５）。

ＩｇＧ定常領域における追加の例示的な変異は、例えば、その内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＲｏｂｂｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（２０１３），５７（１２）：６１４７−６１５３、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ（２００６），２８１（３３）：２３５１４−２４、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００２），１６９：５１７１−８０、Ｋｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１４）５１４：６４２−６４５、Ｇｒｅｖｙｓ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．（２０１５），１９４（１１）：５４９７−５０８、及び米国特許第７，０８３，７８４号に記載されている。

様々な実施形態では、リンカーは、高度に可動性であるなど、可動性であってもよいが、これに限定されない。様々な実施形態では、リンカーは、剛性のαヘリックスなど、剛性であってもよいが、これに限定されない。

様々な実施形態では、リンカーは機能性であってもよい。例えば、限定されないが、リンカーは、本発明のヘテロ二量体タンパク質の折り畳み及び／又は安定性を改善し、発現を改善し、薬物動態を改善し、及び／又は生物活性を改善するように機能し得る。別の例では、リンカーは、本発明のヘテロ二量体タンパク質を特定の細胞型又は位置に標的化するように機能し得る。

実施形態では、コアドメインは、１又は複数の「ノブ・イントゥ・ホール（Knobs-into-holes）」アミノ酸変化を含む。「ノブ・イントゥ・ホール」アミノ酸変化は、重鎖のヘテロ二量体化のために抗体工学でこれまでに用いられてきた合理的な設計戦略である。例えば、それぞれその内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＲｉｄｇｗａｙ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．“‘Ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ’ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＨ３ ｄｏｍａｉｎｓ ｆｏｒ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（７）：６１７−２（１９９６）及びＣａｒｔｅｒ，“Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ｂｙ ｄｅｓｉｇｎ．”Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２４８（１−２）：７−１５（２００１）を参照のこと。ここで、アミノ酸変化は、「α」重鎖のＣＨ３ドメインに「ノブ」を作成し、「β」重鎖のＣＨ３に「ホール」を作成するように設計されている。あるいは、ここでは、アミノ酸変化は、「β」重鎖のＣＨ３ドメインに「ノブ」を作成し、「α」重鎖のＣＨ３に「ホール」を作成するように設計されている。一例では、「ノブ」は、ＩＭＧＴによるアミノ酸の「非常に大きい」体積クラスに属するチロシン（Ｙ）によって表され、一方、「ホール」は、ＩＭＧＴによる「小さい」体積クラスに属するスレオニン（Ｔ）によって表される。アミノ酸のＩＭＧＴクラスの特性は、その全体が参照により本明細書に取り込まれるＰｏｍｍｉｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，“ＩＭＧＴ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖ−ＲＥＧＩＯＮ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．，１７，１７−３２（２００４）に記載されている。別々の重鎖上の２つのＣＨ３ドメイン間の界面では、β重鎖のスレオニン（Ｔ）Ｔ２２は、α重鎖のチロシン（Ｙ）Ｙ８６の水素結合距離内にある。Ｙ８６はＴ２２の主要なドメイン間接触であり、これらのアミノ酸は水素結合に関与している。ただし、Ｙ８６は、反対側の重鎖のＹ８６及びリシン（Ｋ）Ｋ８８とも多数のファンデルワールス接触を行う。

以下は、「ノブ・イントゥ・ホール」アミノ酸変化を含み、本発明において有用な例示的なヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３である。以下の例示的な配列は、ＩｇＧ１に基づいており、追加のエフェクター及び補体サイレンシング置換（effector and complement silencing substitution）であるＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）、及び所望により、Ｐ３２９Ｇ、並びに半減期延長変異であるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅをさらに含む。

例示的なヒトＩＧＨＧ１ノブ・イン・ホール「αコアドメイン」（Ｔ２２Ｙ）を以下に示す：
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＹＩＴＲＥＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＹＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２４）。

例示的なヒトＩＧＨＧ１ノブ・イン・ホール「βコアドメイン」（Ｙ８６Ｔ）
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＹＩＴＲＥＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＴＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２５）

本発明で有用な任意のコアドメインは、１又は複数の「ノブ・イン・ホール」変異を含み得る。

タンパク質サブユニット
様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、２種類のポリペプチド鎖を含む。様々な実施形態では、各ポリペプチド鎖は、電荷分極コアドメインによって第２のタンパク質のサブユニットに連結された第１のタンパク質のサブユニットを含む。電荷分極コアドメイン間の静電相互作用により、前記サブユニットはヘテロ二量体化されて、機能的な二量体の第１のタンパク質及び機能的な二量体の第２のタンパク質を形成する。いくつかの実施形態では、前記ポリペプチド鎖は、電荷分極コアドメインを介して連結された機能的な両側ヘテロ二量体タンパク質を形成し、これは、任意に、Ｆｃ領域などのリンカー（例えば、安定化ドメイン）を含む。

様々な実施形態では、第１のタンパク質及び第２のタンパク質は、２以上のサブユニットを有する任意の多量体タンパク質であってもよい。いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び第２のタンパク質は、サイトカイン、増殖因子、及び／又はホルモンから選択される。そのようなサイトカイン、増殖因子、及びホルモンの例としては、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、及び顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；これらに限定されないがＩＬ−１８、ＩＬ−２７、及びＩＬ−３５などのインターロイキン（ＩＬ）；これらに限定されないがＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−９Ｒ、ＩＬ−１０Ｒ、ＩＬ−１１Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１３Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２０Ｒ、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＬ−２２Ｒ、ＩＬ−２３Ｒ、ＩＬ−２７Ｒ、ＩＬ−３５Ｒなどのインターロイキン受容体；並びにこれらに限定されないが、ＥＧＦＲ、インテグリン、ニューロピリン、及びソマトスタチン受容体を含むその他のポリペプチド因子を含む、リンホカイン、モノカイン、従来のポリペプチドホルモンが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、サイトカイン、増殖因子、及びホルモンとしては、天然源から得られるタンパク質、又は組換え細菌、真核生物、若しくは哺乳動物の細胞培養系から産生されるタンパク質、及び天然配列のサイトカインの生物学的に活性な均等物が挙げられる。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、免疫調節剤、例えば、１又は複数のインターロイキン及びインターフェロンである。

いくつかの実施形態では第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、例えば、ＩＬ−１８、ＩＬ−２７、及びＩＬ−３５、又はそれらの断片、変異体、類似体、若しくはファミリーメンバーを含むインターロイキンである。インターロイキンは、リンパ球、単球、及びマクロファージによって合成される多機能性サイトカインのグループである。公知の機能としては、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、及びリンパ球）の増殖の刺激、好中球及びＴリンパ球の走化性、及び／又はインターフェロンの阻害が挙げられる。インターロイキン活性は、当技術分野で公知のアッセイを使用して決定され得る：Ｍａｔｔｈｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９８７，ｐｐ． ２２１−２２５、及びＯｒｅｎｃｏｌｅ＆Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９８９）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １，１４−２０。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ソマトスタチンなどのホルモンである。

様々な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、サイトカインの受容体、増殖因子の受容体、及び／又はホルモンの受容体である。いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、Ｉ型サイトカイン受容体、ＩＩ型サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、ＴＧＦ−β受容体、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体、及び／又はチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体である。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、Ｉ型サイトカイン受容体である。Ｉ型サイトカイン受容体は当技術分野で公知であり、ＩＬ２（βサブユニット）、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦの受容体、並びにトロンボポイエチン（ＴＰＯ）、プロラクチン、及び成長ホルモンの受容体が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なＩ型サイトカイン受容体には、ＧＭ−ＣＳＦ受容体、Ｇ−ＣＳＦ受容体、ＬＩＦ受容体、ＣＮＴＦ受容体、ＴＰＯ受容体、及びＩ型ＩＬ受容体が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＩ型サイトカイン受容体である。ＩＩ型サイトカイン受容体は、異種サブユニットから構成される多量体受容体であり、主にインターフェロンの受容体である。この受容体ファミリーには、インターフェロン−α、インターフェロン−β、及びインターフェロン−γ、ＩＬ１０、ＩＬ２２、並びに組織因子の受容体が含まれるが、これらに限定されない。例示的なＩＩ型サイトカイン受容体には、ＩＦＮ−α受容体（例えば、ＩＦＮＡＲ１及びＩＦＮＡＲ２）、ＩＦＮ−β受容体、ＩＦＮ−γ受容体（例えば、ＩＦＮＧＲ１及びＩＦＮＧＲ２）、及びＩＩ型ＩＬ受容体が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、Ｇタンパク質共役型受容体である。ケモカイン受容体は、７回膜貫通構造を有するＧタンパク質共役型受容体であり、シグナル伝達のためにＧタンパク質に共役している。ケモカイン受容体には、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体、及びＸＣケモカイン受容体（ＸＣＲ１）が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なケモカイン受容体には、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ３Ｂ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＳＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＸＣＲ１、及びＣＸ３ＣＲ１が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＴＧＦ−β受容体である。ＴＧＦ−β受容体は、１回膜貫通型（single pass）セリン／スレオニンキナーゼ受容体である。ＴＧＦ−β受容体には、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、及びＴＧＦＢＲ３が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、Ｉｇスーパーファミリー受容体である。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体は、免疫グロブリンと構造的相同性を共有している。Ｉｇスーパーファミリーの受容体には、インターロイキン１受容体、ＣＳＦ−１Ｒ、ＰＤＧＦＲ（例えば、ＰＤＧＦＲＡ及びＰＤＧＦＲＢ）、及びＳＣＦＲが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、Ｂ７スーパーファミリーメンバーである。Ｂ７スーパーファミリーメンバーは互いに構造的相同性を共有している。このファミリーのメンバーには、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２などが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、チロシンキナーゼスーパーファミリー受容体である。チロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体は、当技術分野で周知である。約５８種類の公知の受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）が、２０のサブファミリーにグループ化されている。チロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体としては、ＦＧＦ受容体、並びにＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、及びＦＧＦＲ５などのＦＧＦ受容体の様々なアイソフォームが挙げられるが、これらに限定されない。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＦＮＡＲ１及び／又はＩＦＮＡＲ２サブユニットを含むＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、（ＩＦＮｇＲとしても知られる）ＩＦＮＧＲ１サブユニット及びＩＦＮＧＲ２サブユニットを含むインターフェロン−γ受容体（ＩＦＮＧＲ）である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、及びＶＥＧＦＲ−３を含むＶＥＧＦ受容体である。

本明細書に開示される任意のヘテロ二量体タンパク質において、アミノ末端又はカルボキシ末端は天然にヘテロ二量体であり、反対側の末端のタンパク質は天然にヘテロ二量体ではない。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＬ−１Ｒ１及び／又はＩＬ−１ＲＡｃＰなどのＩＬ−１の受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、又はＩＬ−２ＲγなどのＩＬ−２の受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質はＩＬ−３受容体であり、これは、共通のβ（βｃ又はＣＤ１３１）サブユニットと対になっている固有のα鎖を有するヘテロ二量体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、１型ＩＬ−４受容体又は２型ＩＬ−４受容体などのＩＬ−４の受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質はＩＬ−６の受容体であり、これは、リガンド結合ＩＬ−６Ｒ鎖（ＣＤ１２６又はＩＬ−６Ｒα）及びシグナル伝達成分ｇｐ１３０を含む細胞表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＬ−１０受容体−１及びＩＬ−１０受容体−２などのＩＬ−１０の受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１１Ｒβ、又はｇｐ１３０などのＩＬ−１１の受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＬ−１２Ｒβ１及び／又はＩＬ−１２Ｒβ２などのＩＬ−１２の受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＬ−４受容体（ＩＬ−４Ｒα）又はＩＬ−１３Ｒα１などのＩＬ−１３の受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質はＩＬ−１８である。別の例示的な実施形態において、前記第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質は、ＩＬ−１８Ｒα及び／又はＩＬ−１８ＲβなどのＩＬ−１８の受容体である。

例示的な実施形態において、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＩＬ−２１の受容体であり、これは、ＩＬ−２１ｒ及びＩＬ−２ｒｇを含むリガンド結合ＩＬ−２１Ｒ鎖を含む、細胞表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＳＴ−２受容体又はＩＬ−１ＲＡｃＰなどのＩＬ−３３の受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質はＩＬ−３５である（例えば、ＩＬ１２αサブユニット及びＩＬ２７βサブユニットを含む）。別の例示的な実施形態では、前記第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質は、ＩＬ−３５の受容体、例えば、ＩＬ６Ｒαサブユニット及びｇｐ１３０サブユニットを含むＩＬ−３５受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、及びＥｒｂＢ４などのＥＧＰの受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、インスリン受容体及び／又はＩＧＦ１受容体若しくはＩＧＦ２受容体などのインスリン又はインスリン類似体の受容体である。

例示的な実施形態では、第１のタンパク質及び／又は第２のタンパク質は、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）受容体及び／又はエフリン受容体（ＥｐｈＲ）などのＥＰＯの受容体である。

様々な実施形態では、第１のタンパク質及び第２のタンパク質は、可溶性（例えば、非膜結合）タンパク質のドメインを含み得る。様々な実施形態では、第１のタンパク質及び第２のタンパク質は、シグナル伝達に関与する可溶性タンパク質の断片（例えば、受容体と相互作用する可溶性タンパク質の一部）を含み得る。

様々な実施形態では、第１のタンパク質及び第２のタンパク質は、膜貫通タンパク質の細胞外ドメインを含み得る。様々な実施形態では、細胞外ドメインのうちの１つは免疫阻害シグナルを伝達し、細胞外ドメインのうちの１つは免疫刺激シグナルを伝達する。

いくつかの実施形態では、細胞外ドメインとは、細胞外環境と相互作用することができる膜貫通タンパク質の一部を指す。様々な実施形態では、細胞外ドメインとは、リガンド又は受容体に結合し、細胞にシグナルを効果的に伝達するのに十分な膜貫通タンパク質の一部を指す。様々な実施形態では、細胞外ドメインは、細胞又は細胞膜の外部にある膜貫通タンパク質のアミノ酸配列全体である。様々な実施形態では、細胞外ドメインは、細胞又は細胞膜の外部にあり、当技術分野で公知の方法（例えば、インビトロリガンド結合及び／又は細胞活性化アッセイ）を用いてアッセイされ得るような、シグナル伝達及び／又はリガンド結合に必要とされる膜貫通タンパク質のアミノ酸配列の部分である。

いくつかの実施形態では、免疫阻害シグナルとは、免疫応答を軽減又は排除するシグナルを指す。例えば、腫瘍学の観点から、そのようなシグナルは抗腫瘍免疫を軽減又は排除し得る。通常の生理学的条件下では、抑制シグナルは自己寛容の維持（自己免疫の予防など）に役立ち、免疫系が病原性感染に反応している際に組織を損傷から保護するのにも役立つ。例えば、免疫阻害シグナルは、そのような阻害シグナルが遮断された際に、細胞増殖、サイトカイン産生、細胞殺傷活性、又は食作用活性の増加を検出することによって同定され得るが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、免疫刺激シグナルとは、免疫応答を増強するシグナルを指す。例えば、腫瘍学の観点から、そのようなシグナルは抗腫瘍免疫を強化し得る。例えば、免疫刺激シグナルは、白血球の増殖、サイトカイン産生、殺傷活性、又は食作用活性を直接刺激することによって同定され得るが、これらに限定されない。具体的な例としては、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−２１Ｒなどのサイトカイン受容体のリガンド（それぞれ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、又はＩＬ−２１）をコードする融合タンパク質を用いたサイトカイン受容体の直接刺激が挙げられる。これらの受容体のいずれかからの刺激は、個々のＴ細胞サブセットの増殖及びサイトカイン産生を直接刺激する場合がある。

いくつかの実施形態では、細胞外ドメインを用いて可溶性タンパク質を生成し、その受容体のリガンドによるシグナル伝達を競合的に阻害し得る。例えば、限定されないが、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２の競合的阻害は、ＰＤ−１を用いて達成することができ、又はＰＶＲの競合的阻害は、ＴＩＧＩＴを用いて達成することができる。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインを、人工的なシグナル伝達を提供するために用いてもよい。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫阻害シグナルを伝達又は遮蔽（mask）する。いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫刺激シグナルを伝達又は遮蔽する。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、それぞれがヘテロ二量体ヒトタンパク質の１つのサブユニットに由来する２つの独立した結合ドメインを含む。本発明のヘテロ二量体タンパク質の一部として形成され得る例示的なタンパク質は、表１に提示されている。様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、表１に提示される例示的なタンパク質のうちの１つを有する。様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、表１に提示される例示的なタンパク質のうちの２種類を有する。

表１
本発明の組成物及び方法に組み込むことができる例示的なタンパク質としては、以下が挙げられる（本明細書で使用される場合、「エントリー」は、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースのタンパク質エントリーを指し、「エントリー名」は、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースのタンパク質エントリーを指す）。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７−１、ＩＬ−４ Ｒ、Ｂ７−Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ−６ Ｒ、ＩＬ−７ Ｒα、ＩＬ−１０Ｒα、ＩＬ−１０Ｒβ、ＩＬ−１２Ｒβ１、ＩＬ−１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ−１３Ｒα１、ＩＬ−１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ルテグリン（ｌｕｔｅｇｒｉｎ）α４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤｌＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＬＡＧ−３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４−Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ−Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ−４、ＣＤ６９、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ−２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ−１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ−１、ＣＴＬＡ−４、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ−セレクチン、ＳＩＲＰβ１、ＳＬＡＭ、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＤＮＡＭ−１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ−１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ−２、ＴＩＭ−３、ＴＩＭ−４、Ｆｃγ ＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ−６、グラニュライシン、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＩＦＮ−γＲ１、ＩＦＮ−γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ−１Ｒ１、及びＴＳＬＰ Ｒの細胞外ドメイン（該当する場合）を含むがこれらに限定されない、ヒト白血球上に存在する１又は複数の分子を標的とするように設計され得る。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ／ＶＳＩＧ８、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも称される）、ＣＨＫ１キナーゼ及びＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、並びに様々なＢ−７ファミリーリガンド（Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−ＤＣ、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５、Ｂ７−Ｈ６、及びＢ７−Ｈ７を含むが、これらに限定されない）を含む、免疫阻害に関与する１又は複数の分子を標的とするように設計され得る。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫阻害剤の細胞外ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫阻害特性を有する可溶性タンパク質又は膜タンパク質の細胞外ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、その同族受容体への阻害性シグナルリガンドの結合を模倣するが、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、マクロファージ、又は他の白血球）への阻害性シグナル伝達を阻害する。

様々な実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、免疫抑制受容体の細胞外ドメイン及び免疫刺激リガンドの細胞外ドメインを含み、これらは、腫瘍細胞の免疫阻害シグナルを遮蔽（mask）しながらＴ細胞に免疫刺激を送達し得るが、これに限定されない。様々な実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、Ｔ細胞活性化の最終的な結果をもたらすシグナルを伝達する。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫刺激特特性を有する可溶性タンパク質又は膜タンパク質の細胞外ドメインを含む。

実施形態において、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、Ｇｐ１３０の細胞外ドメインを含む。Ｇｐ１３０（インターロイキン６受容体サブユニットβ、ＩＬ−６Ｒβ、ＩＬ−６ＲＢ、及びＩＬ−６ＳＴとしても知られる）は、シグナル伝達分子である。ＩＬ６、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＩＬ１１、ＣＴＦ１、及びＢＳＦ３の受容体システムは、シグナル伝達を開始するためにＧｐ１３０を利用し得る。ＩＬ６がＩＬ６Ｒに結合すると、ＩＬ６ＳＴのホモ二量体化及びヤヌスキナーゼを活性化する高親和性受容体複合体の形成が誘導される。これにより、Ｇｐ１３０チロシン残基がリン酸化され、次にＳＴＡＴ３が活性化される。Ｇｐ１３０は、免疫応答、造血、疼痛管理、及び骨代謝を調節するシグナルを媒介する（類似性による）。

いくつかの実施形態において、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、Ｇｐ１３０の細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、ヒトＧｐ１３０などのＧｐ１３０の公知のアミノ酸配列と、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有し得る。

いくつかの実施形態において、Ｇｐ１３０の細胞外ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＬＬＤＰＣＧＹＩＳＰＥＳＰＶＶＱＬＨＳＮＦＴＡＶＣＶＬＫＥＫＣＭＤＹＦＨＶＮＡＮＹＩＶＷＫＴＮＨＦＴＩＰＫＥＱＹＴＩＩＮＲＴＡＳＳＶＴＦＴＤＩＡＳＬＮＩＱＬＴＣＮＩＬＴＦＧＱＬＥＱＮＶＹＧＩＴＩＩＳＧＬＰＰＥＫＰＫＮＬＳＣＩＶＮＥＧＫＫＭＲＣＥＷＤＧＧＲＥＴＨＬＥＴＮＦＴＬＫＳＥＷＡＴＨＫＦＡＤＣＫＡＫＲＤＴＰＴＳＣＴＶＤＹＳＴＶＹＦＶＮＩＥＶＷＶＥＡＥＮＡＬＧＫＶＴＳＤＨＩＮＦＤＰＶＹＫＶＫＰＮＰＰＨＮＬＳＶＩＮＳＥＥＬＳＳＩＬＫＬＴＷＴＮＰＳＩＫＳＶＩＩＬＫＹＮＩＱＹＲＴＫＤＡＳＴＷＳＱＩＰＰＥＤＴＡＳＴＲＳＳＦＴＶＱＤＬＫＰＦＴＥＹＶＦＲＩＲＣＭＫＥＤＧＫＧＹＷＳＤＷＳＥＥＡＳＧＩＴＹＥＤＲＰＳＫＡＰＳＦＷＹＫＩＤＰＳＨＴＱＧＹＲＴＶＱＬＶＷＫＴＬＰＰＦＥＡＮＧＫＩＬＤＹＥＶＴＬＴＲＷＫＳＨＬＱＮＹＴＶＮＡＴＫＬＴＶＮＬＴＮＤＲＹＬＡＴＬＴＶＲＮＬＶＧＫＳＤＡＡＶＬＴＩＰＡＣＤＦＱＡＴＨＰＶＭＤＬＫＡＦＰＫＤＮＭＬＷＶＥＷＴＴＰＲＥＳＶＫＫＹＩＬＥＷＣＶＬＳＤＫＡＰＣＩＴＤＷＱＱＥＤＧＴＶＨＲＴＹＬＲＧＮＬＡＥＳＫＣＹＬＩＴＶＴＰＶＹＡＤＧＰＧＳＰＥＳＩＫＡＹＬＫＱＡＰＰＳＫＧＰＴＶＲＴＫＫＶＧＫＮＥＡＶＬＥＷＤＱＬＰＶＤＶＱＮＧＦＩＲＮＹＴＩＦＹＲＴＩＩＧＮＥＴＡＶＮＶＤＳＳＨＴＥＹＴＬＳＳＬＴＳＤＴＬＹＭＶＲＭＡＡＹＴＤＥＧＧＫＤＧＰＥＦＴＦＴＴＰＫＦＡＱＧＥＩＥ（配列番号１８）。

いくつかの実施形態において、ヘテロ二量体タンパク質は、Ｇｐ１３０の細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、配列番号１８に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の１つの鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

当業者は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に取り込まれる、Ｈｉｂｉ ｅｔ ａｌ，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｎ ＩＬ−６ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ，ｇｐ１３０”Ｃｅｌｌ ６３（６），１１４９−１１５７（１９９０）、Ｗａｅｔｚｉｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｎ−ｌｉｎｋｅｄ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｂｕｔ ｎｏｔ ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ １３０”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（３），１７８１−１７８９（２０１０）、Ｓｃｈｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，“ｇｐ１３０ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ Ｄ２−Ｄ３ ｉｎｔｅｒｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙ”，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．４５０（３），４８７−４９６（２０１３）、Ｂｒａｖｏ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａ ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｇｐ１３０”，ＥＭＢＯ Ｊ．１７（６），１６６５−１６７４（１９９８）、Ｃｈｏｗ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａｎ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｇｐ１３０ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９１（５５１１），２１５０−２１５５（２００１）、Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｘａｍｅｒｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６／ＩＬ−６ ａｌｐｈａ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ／ｇｐ１３０ ｃｏｍｐｌｅｘ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３００（５６２８），２１０１−２１０４（２００３）、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｔｉｒｅ ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｇｐ１３０： ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ｔｈｅ ｔａｌｌ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２８），２１２１４−２１２１８（２０１０）などの文献を参照することにより、Ｇｐ１３０の公知のアミノ酸配列の変異体を選択することができる。

実施形態において、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−６ＲＡの細胞外ドメインを含む。ＩＬ−６ＲＡ（インターロイキン６受容体サブユニットα、ＩＬ−６受容体サブユニットα、ＩＬ−６Ｒサブユニットα、及びＩＬ−６Ｒ−αとしても知られる）は、インターロイキン６の受容体の一部である。ＩＬ６に低親和性で結合するが、シグナルを伝達しない。シグナルの活性化には、ｇｐ１３０との結合が必要である。活性化により、免疫応答、急性期反応、造血の調節がもたらされ得る。低濃度の可溶型ＩＬ６受容体は、ＩＬ６活性のアゴニストとして作用する。ＩＬ６及びこの受容体の調節不全の産生は、多発性骨髄腫、自己免疫疾患、前立腺がんなどの多くの疾患の病因に関与している。

実施形態において、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−６ＲＡの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、ヒトＩＬ−６ＲＡなどのＩＬ−６ＲＡの公知のアミノ酸配列と、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有し得る。

実施形態において、ＩＬ−６ＲＡの細胞外ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＬＡＰＲＲＣＰＡＱＥＶＡＲＧＶＬＴＳＬＰＧＤＳＶＴＬＴＣＰＧＶＥＰＥＤＮＡＴＶＨＷＶＬＲＫＰＡＡＧＳＨＰＳＲＷＡＧＭＧＲＲＬＬＬＲＳＶＱＬＨＤＳＧＮＹＳＣＹＲＡＧＲＰＡＧＴＶＨＬＬＶＤＶＰＰＥＥＰＱＬＳＣＦＲＫＳＰＬＳＮＶＶＣＥＷＧＰＲＳＴＰＳＬＴＴＫＡＶＬＬＶＲＫＦＱＮＳＰＡＥＤＦＱＥＰＣＱＹＳＱＥＳＱＫＦＳＣＱＬＡＶＰＥＧＤＳＳＦＹＩＶＳＭＣＶＡＳＳＶＧＳＫＦＳＫＴＱＴＦＱＧＣＧＩＬＱＰＤＰＰＡＮＩＴＶＴＡＶＡＲＮＰＲＷＬＳＶＴＷＱＤＰＨＳＷＮＳＳＦＹＲＬＲＦＥＬＲＹＲＡＥＲＳＫＴＦＴＴＷＭＶＫＤＬＱＨＨＣＶＩＨＤＡＷＳＧＬＲＨＶＶＱＬＲＡＱＥＥＦＧＱＧＥＷＳＥＷＳＰＥＡＭＧＴＰＷＴＥＳＲＳＰＰＡＥＮＥＶＳＴＰＭＱＡＬＴＴＮＫＤＤＤＮＩＬＦＲＤＳＡＮＡＴＳＬＰＶＱＤＳＳＳＶＰＬＰ（配列番号１９）。

いくつかの実施形態において、ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−６ＲＡの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、配列番号１９に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の１つの鎖は、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

当業者は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に取り込まれる、Ｙａｍａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６（ＢＳＦ−２／ＩＦＮ ｂｅｔａ ２）ｒｅｃｅｐｔｏｒ”Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１（４８６７），８２５−８２８（１９８８）、Ｂｕｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ／ｌｉｐｉｄ ｒａｆｔｓ ｏｆ ａｐｉｃａｌｌｙ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｍｕｔａｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｐ８０”Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．８４（１０），８１９−８３１（２００５）、Ｙａｗａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＩＬ−６ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ＩＬ−６−ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｆｏｒ ＩＬ−６ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｇｐ１３０”ＥＭＢＯ Ｊ．１２（４），１７０５−１７１２（１９９３）、Ｈｏｒｉｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｏｌｕｂｌｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｒｅｌｅａｓｅｄ ｆｒｏｍ Ｔ ｃｅｌｌ ｏｒ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ”Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（８），１９４５−１９４８（１９９４）、Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｈｅｘａｍｅｒｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６／ＩＬ−６ ａｌｐｈａ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ／ｇｐ１３０ ｃｏｍｐｌｅｘ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３００（５６２８），２１０１−２１０４（２００３）などの文献を参照することにより、ＩＬ−６ＲＡの公知のアミノ酸配列の変異体を選択することができる。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−１２Ａの細胞外ドメインを含む。ＩＬ−１２Ａ（インターロイキン１２サブユニットα及びＩＬ−１２サブユニットｐ３５としても知られる）は、活性化Ｔ細胞及びＮＫ細胞の増殖因子として作用し、ＮＫ／リンホカイン活性化キラー細胞の溶解活性を増強し、ＰＢＭＣを休止させることによりＩＦＮ−γの産生を刺激するサイトカインである。サイトカインは、この遺伝子によってコードされる３５ｋＤのサブユニットと、サイトカイン受容体ファミリーのメンバーである４０ｋＤのサブユニットで構成されるジスルフィド結合ヘテロ二量体である。このサイトカインは、インターフェロンγ（ＩＮＦ−γ）のＴ細胞依存性誘導に必要であり、Ｔｈ１細胞及びＴｈ２細胞の両方の分化に重要である。このサイトカインに対するリンパ球の応答は、転写タンパク質ＳＴＡＴ４の活性化因子によって媒介される。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−１２Ａの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、ヒトＩＬ−１２ＡなどのＩＬ−１２Ａの公知のアミノ酸配列と、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−１２Ａの細胞外ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ（配列番号２０）。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−１２Ａの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、配列番号２０に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の１つの鎖は、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

当業者は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に取り込まれる、Ｗｏｌｆ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｃＤＮＡ ｆｏｒ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ，ａ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｔ ａｎｄ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６（９），３０７４−３０８１ （１９９１）、Ｄｅｖｅｒｇｎｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅ ３ ａｎｄ ｔｈｅ ｐ３５ ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １２ ｆｏｒｍ ａ ｎｏｖｅｌ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｎ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４（２２），１２０４１−１２０４６（１９９７）、Ｙｏｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｈａｒｇｅｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｄｏｍｉｎａｔｅ ａ ｕｎｉｑｕｅ ｉｎｔｅｒｌｏｃｋｉｎｇ ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ ｉｎ ｔｈｅ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２”，ＥＭＢＯ Ｊ．１９（１４），３５３０−３５４１（２０００）などの文献を参照することにより、ＩＬ−１２Ａの公知のアミノ酸配列の変異体を選択することができる。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−２７Ｂの細胞外ドメインを含む。ＩＬ−２７β（インターロイキン２７サブユニットβ、ＩＬ−２７サブユニットβ、及びＩＬ−２７Ｂとしても知られる）は、ＩＬ−１２ａと共にインターロイキン３５（ＩＬ−３５）を形成する。ＩＬ−３５は、ＩＬ−１２α鎖及びＩＬ−２７β鎖で構成される二量体タンパク質であり、それぞれＩＬ１２Ａ及びＥＢＩ３と称される２つの別々の遺伝子によってコードされている。ＩＬ−２７は炎症誘発特性及び抗炎症特性を有しており、Ｔヘルパー細胞の発達を調節し、Ｔ細胞の増殖を抑制し、細胞傷害性Ｔ細胞の活性を刺激し、Ｂ細胞のアイソタイプスイッチを誘導することができ、自然免疫細胞に様々な影響を及ぼす。その遺伝子は、エプスタイン・バーウイルス感染に応答したＢリンパ球での誘導発現によって同定された。ＩＬ−２７は、ＣＤ４＋Ｔ細胞のＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路をある程度は活性化することにより、Ｔ細胞及び炎症反応を調節する。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−２７Ｂの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、ヒトＩＬ−２７ＢなどのＩＬ−２７Ｂの公知のアミノ酸配列と、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−２７Ｂの細胞外ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＲＫＧＰＰＡＡＬＴＬＰＲＶＱＣＲＡＳＲＹＰＩＡＶＤＣＳＷＴＬＰＰＡＰＮＳＴＳＰＶＳＦＩＡＴＹＲＬＧＭＡＡＲＧＨＳＷＰＣＬＱＱＴＰＴＳＴＳＣＴＩＴＤＶＱＬＦＳＭＡＰＹＶＬＮＶＴＡＶＨＰＷＧＳＳＳＳＦＶＰＦＩＴＥＨＩＩＫＰＤＰＰＥＧＶＲＬＳＰＬＡＥＲＱＬＱＶＱＷＥＰＰＧＳＷＰＦＰＥＩＦＳＬＫＹＷＩＲＹＫＲＱＧＡＡＲＦＨＲＶＧＰＩＥＡＴＳＦＩＬＲＡＶＲＰＲＡＲＹＹＶＱＶＡＡＱＤＬＴＤＹＧＥＬＳＤＷＳＬＰＡＴＡＴＭＳＬＧＫ（配列番号２１）。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−２７Ｂの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、配列番号２１に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の１つの鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

当業者は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に取り込まれる、Ｄｅｖｅｒｇｎｅ“Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅ ３ ａｎｄ ｔｈｅ ｐ３５ ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １２ ｆｏｒｍ ａ ｎｏｖｅｌ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｎ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４（２２），１２０４１−１２０４６（１９９７）、Ｐｆｌａｎｚ ｅｔ ａｌ．，“ＩＬ−２７，ａ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ＥＢＩ３ ａｎｄ ｐ２８ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｎｄｕｃｅｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｉｖｅ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ”，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １６（６），７７９−７９０ （２００２）、Ｂａｔｔｅｎ ａｎｄ Ｇｈｉｌａｒｄｉ“Ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２７”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８５（７），６６１−６７２（２００７）などの文献を参照することにより、ＩＬ−２７Ｂの公知のアミノ酸配列の変異体を選択することができる。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なα鎖は、（１）配列番号１８のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１６又は配列番号２４と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなα鎖は「Ｇｐ１３０−α−ＩＬ１２Ａ」と称される場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＧｐ１３０−α−ＩＬ１２Ａ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＬＬＤＰＣＧＹＩＳＰＥＳＰＶＶＱＬＨＳＮＦＴＡＶＣＶＬＫＥＫＣＭＤＹＦＨＶＮＡＮＹＩＶＷＫＴＮＨＦＴＩＰＫＥＱＹＴＩＩＮＲＴＡＳＳＶＴＦＴＤＩＡＳＬＮＩＱＬＴＣＮＩＬＴＦＧＱＬＥＱＮＶＹＧＩＴＩＩＳＧＬＰＰＥＫＰＫＮＬＳＣＩＶＮＥＧＫＫＭＲＣＥＷＤＧＧＲＥＴＨＬＥＴＮＦＴＬＫＳＥＷＡＴＨＫＦＡＤＣＫＡＫＲＤＴＰＴＳＣＴＶＤＹＳＴＶＹＦＶＮＩＥＶＷＶＥＡＥＮＡＬＧＫＶＴＳＤＨＩＮＦＤＰＶＹＫＶＫＰＮＰＰＨＮＬＳＶＩＮＳＥＥＬＳＳＩＬＫＬＴＷＴＮＰＳＩＫＳＶＩＩＬＫＹＮＩＱＹＲＴＫＤＡＳＴＷＳＱＩＰＰＥＤＴＡＳＴＲＳＳＦＴＶＱＤＬＫＰＦＴＥＹＶＦＲＩＲＣＭＫＥＤＧＫＧＹＷＳＤＷＳＥＥＡＳＧＩＴＹＥＤＲＰＳＫＡＰＳＦＷＹＫＩＤＰＳＨＴＱＧＹＲＴＶＱＬＶＷＫＴＬＰＰＦＥＡＮＧＫＩＬＤＹＥＶＴＬＴＲＷＫＳＨＬＱＮＹＴＶＮＡＴＫＬＴＶＮＬＴＮＤＲＹＬＡＴＬＴＶＲＮＬＶＧＫＳＤＡＡＶＬＴＩＰＡＣＤＦＱＡＴＨＰＶＭＤＬＫＡＦＰＫＤＮＭＬＷＶＥＷＴＴＰＲＥＳＶＫＫＹＩＬＥＷＣＶＬＳＤＫＡＰＣＩＴＤＷＱＱＥＤＧＴＶＨＲＴＹＬＲＧＮＬＡＥＳＫＣＹＬＩＴＶＴＰＶＹＡＤＧＰＧＳＰＥＳＩＫＡＹＬＫＱＡＰＰＳＫＧＰＴＶＲＴＫＫＶＧＫＮＥＡＶＬＥＷＤＱＬＰＶＤＶＱＮＧＦＩＲＮＹＴＩＦＹＲＴＩＩＧＮＥＴＡＶＮＶＤＳＳＨＴＥＹＴＬＳＳＬＴＳＤＴＬＹＭＶＲＭＡＡＹＴＤＥＧＧＫＤＧＰＥＦＴＦＴＴＰＫＦＡＱＧＥＩＥＧＳＧＳＲＫＧＧＫＲＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＤＥＧＧＥＤＧＳＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ^＊（配列番号２２）。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なβ鎖は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１７又は配列番号２５と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなα鎖は「ＩＬ６ＲＡ−β−ＩＬ２７Ｂ」と称される場合もある。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＩＬ６ＲＡ−β−ＩＬ２７Ｂ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＬＡＰＲＲＣＰＡＱＥＶＡＲＧＶＬＴＳＬＰＧＤＳＶＴＬＴＣＰＧＶＥＰＥＤＮＡＴＶＨＷＶＬＲＫＰＡＡＧＳＨＰＳＲＷＡＧＭＧＲＲＬＬＬＲＳＶＱＬＨＤＳＧＮＹＳＣＹＲＡＧＲＰＡＧＴＶＨＬＬＶＤＶＰＰＥＥＰＱＬＳＣＦＲＫＳＰＬＳＮＶＶＣＥＷＧＰＲＳＴＰＳＬＴＴＫＡＶＬＬＶＲＫＦＱＮＳＰＡＥＤＦＱＥＰＣＱＹＳＱＥＳＱＫＦＳＣＱＬＡＶＰＥＧＤＳＳＦＹＩＶＳＭＣＶＡＳＳＶＧＳＫＦＳＫＴＱＴＦＱＧＣＧＩＬＱＰＤＰＰＡＮＩＴＶＴＡＶＡＲＮＰＲＷＬＳＶＴＷＱＤＰＨＳＷＮＳＳＦＹＲＬＲＦＥＬＲＹＲＡＥＲＳＫＴＦＴＴＷＭＶＫＤＬＱＨＨＣＶＩＨＤＡＷＳＧＬＲＨＶＶＱＬＲＡＱＥＥＦＧＱＧＥＷＳＥＷＳＰＥＡＭＧＴＰＷＴＥＳＲＳＰＰＡＥＮＥＶＳＴＰＭＱＡＬＴＴＮＫＤＤＤＮＩＬＦＲＤＳＡＮＡＴＳＬＰＶＱＤＳＳＳＶＰＬＰＧＳＧＳＤＥＧＧＥＤＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＲＫＧＧＫＲＧＳＧＳＲＫＧＰＰＡＡＬＴＬＰＲＶＱＣＲＡＳＲＹＰＩＡＶＤＣＳＷＴＬＰＰＡＰＮＳＴＳＰＶＳＦＩＡＴＹＲＬＧＭＡＡＲＧＨＳＷＰＣＬＱＱＴＰＴＳＴＳＣＴＩＴＤＶＱＬＦＳＭＡＰＹＶＬＮＶＴＡＶＨＰＷＧＳＳＳＳＦＶＰＦＩＴＥＨＩＩＫＰＤＰＰＥＧＶＲＬＳＰＬＡＥＲＱＬＱＶＱＷＥＰＰＧＳＷＰＦＰＥＩＦＳＬＫＹＷＩＲＹＫＲＱＧＡＡＲＦＨＲＶＧＰＩＥＡＴＳＦＩＬＲＡＶＲＰＲＡＲＹＹＶＱＶＡＡＱＤＬＴＤＹＧＥＬＳＤＷＳＬＰＡＴＡＴＭＳＬＧＫ^＊（配列番号２３）。

Ｇｐ１３０−α−ＩＬ１２Ａ鎖及びＩＬ６ＲＡ−β−ＩＬ２７Ｂ鎖が（細胞内又はインビトロで）組み合わされると、それらは本明細書でＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５と称されるヘテロ二量体タンパク質を形成する。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−２１ｒの細胞外ドメインを含む。インターロイキン２１受容体（ＩＬ−２１受容体及びＩＬ−２１Ｒとしても知られる）は、Ｉ型サイトカイン受容体に属するインターロイキン２１の受容体であり、インターロイキン２、インターロイキン４、インターロイキン７、インターロイキン９、及びインターロイキン１５の受容体によっても共有される受容体サブユニットである共通γ鎖とヘテロ二量体受容体複合体を形成することが示されている。この受容体はＩＬ２１の増殖促進シグナルを伝達し、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖と分化に重要である。この受容体へのリガンドの結合により、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＳＴＡＴ１、及びＳＴＡＴ３を含む複数の下流シグナル伝達分子の活性化がもたらされる。マウスにおける同様の遺伝子のノックアウト研究は、免疫グロブリン産生の調節におけるこの遺伝子の役割を示唆している。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−２１ｒの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、ヒトＩＬ−２１ｒなどのＩＬ−２１ｒの公知のアミノ酸配列と、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−２１ｒの細胞外ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＣＰＤＬＶＣＹＴＤＹＬＱＴＶＩＣＩＬＥＭＷＮＬＨＰＳＴＬＴＬＴＷＱＤＱＹＥＥＬＫＤＥＡＴＳＣＳＬＨＲＳＡＨＮＡＴＨＡＴＹＴＣＨＭＤＶＦＨＦＭＡＤＤＩＦＳＶＮＩＴＤＱＳＧＮＹＳＱＥＣＧＳＦＬＬＡＥＳＩＫＰＡＰＰＦＮＶＴＶＴＦＳＧＱＹＮＩＳＷＲＳＤＹＥＤＰＡＦＹＭＬＫＧＫＬＱＹＥＬＱＹＲＮＲＧＤＰＷＡＶＳＰＲＲＫＬＩＳＶＤＳＲＳＶＳＬＬＰＬＥＦＲＫＤＳＳＹＥＬＱＶＲＡＧＰＭＰＧＳＳＹＱＧＴＷＳＥＷＳＤＰＶＩＦＱＴＱＳＥＥＬＫＥ（配列番号２６）。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ−２１ｒの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、配列番号２６に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の１つの鎖は、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

当業者は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に取り込まれる、Ｏｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ａ ｔｙｐｅ Ｉ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｓｔ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ＩＬ−２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｅｔａ ｃｈａｉｎ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９７（２１），１１４３９−１１４４４（２０００）、Ｋｏｔｌａｒｚ ｅｔ ａｌ．，“Ｌｏｓｓ−ｏｆ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ＩＬ−２１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｅｎｅ ｃａｕｓｅ ａ ｐｒｉｍａｒｙ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１０（３），４３３−４４３（２０１３）、Ｈａｍｍｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＩＬ−２１Ｒ）ｂｏｕｎｄ ｔｏ ＩＬ−２１ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｈａｔ ｓｕｇａｒ ｃｈａｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ＷＳＸＷＳ ｍｏｔｉｆ ｉｓ ｉｎｔｅｇｒａｌ ｐａｒｔ ｏｆ ＩＬ−２１Ｒ”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８７（１２），９４５４−９４６０（２０１２）などの文献を参照することにより、ＩＬ−２１ｒの公知のアミノ酸配列の変異体を選択することができる。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ２ＲＧの細胞外ドメインを含む。インターロイキン２受容体サブユニットγ（サイトカイン受容体共通サブユニットγ、ＩＬ−２受容体サブユニットγ、ＩＬ−２Ｒサブユニットγ、及びＩＬ−２ＲＧとしても知られる）は、インターロイキン２、インターロイキン４、インターロイキン７、及びインターロイキン２１の受容体を含む、様々なインターロイキンの受容体の共通サブユニットであるため、共通γ鎖と称される。この遺伝子の変異は、Ｘ連鎖性重症複合免疫不全症（ＸＳＣＩＤ）及びそれほど重症ではない免疫不全疾患であるＸ連鎖性複合免疫不全症（ＸＳＣＩＤ）を引き起こす。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ２ＲＧの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、ヒトＩＬ２ＲＧなどのＩＬ２ＲＧの公知のアミノ酸配列と、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ＩＬ２ＲＧの細胞外ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＬＮＴＴＩＬＴＰＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡ（配列番号２７）。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ２ＲＧの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、配列番号２７に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の１つの鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

当業者は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に取り込まれる、Ｔａｋｅｓｈｉｔａ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｍｍａ ｃｈａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＩＬ−２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７（５０６８），３７９−３８２（１９９２）、Ｒａｔｔｈｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１５ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｈｕｍａｎ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ ｂｙ ａ Ｓｙｋ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ：ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ＩＬ−１５Ｒａｌｐｈａ ｃｈａｉｎ”，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７６（１），１６２−１６８（２００４）、Ｂａｍｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−４ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ”，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２（９），８３９−８５１（１９９４）、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ ｗｉｔｈ ｉｔｓ ａｌｐｈａ，ｂｅｔａ，ａｎｄ ｇａｍｍａｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ” Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１０（５７５１），１１５９−１１６３（２００５）、Ｓｔａｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ＩＬ−２ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ：ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ａ ｈｅｔｅｒｏｔｒｉｍｅｒｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０３（８），２７８８−２７９３（２００６）などの文献を参照することにより、ＩＬ２ＲＧの公知のアミノ酸配列の変異体を選択することができる。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なα鎖は、（１）配列番号２６のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１６又は配列番号２４と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなα鎖は「ＩＬ２１ｒ−α−ＩＬ１２ａ」と称される場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＩＬ２１ｒ−α−ＩＬ１２ａ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＣＰＤＬＶＣＹＴＤＹＬＱＴＶＩＣＩＬＥＭＷＮＬＨＰＳＴＬＴＬＴＷＱＤＱＹＥＥＬＫＤＥＡＴＳＣＳＬＨＲＳＡＨＮＡＴＨＡＴＹＴＣＨＭＤＶＦＨＦＭＡＤＤＩＦＳＶＮＩＴＤＱＳＧＮＹＳＱＥＣＧＳＦＬＬＡＥＳＩＫＰＡＰＰＦＮＶＴＶＴＦＳＧＱＹＮＩＳＷＲＳＤＹＥＤＰＡＦＹＭＬＫＧＫＬＱＹＥＬＱＹＲＮＲＧＤＰＷＡＶＳＰＲＲＫＬＩＳＶＤＳＲＳＶＳＬＬＰＬＥＦＲＫＤＳＳＹＥＬＱＶＲＡＧＰＭＰＧＳＳＹＱＧＴＷＳＥＷＳＤＰＶＩＦＱＴＱＳＥＥＬＫＥＧＳＧＳＲＫＧＧＫＲＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＤＥＧＧＥＤＧＳＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ（配列番号２８）。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なβ鎖は、（１）配列番号２７のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１７又は配列番号２５と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなβ鎖は「ＩＬ２ｒｇ−β−ＩＬ２７Ｂ」と称される場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＩＬ２ｒｇ−β−ＩＬ２７Ｂ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＬＮＴＴＩＬＴＰＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＧＳＧＳＤＥＧＧＥＤＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＲＫＧＧＫＲＧＳＧＳＲＫＧＰＰＡＡＬＴＬＰＲＶＱＣＲＡＳＲＹＰＩＡＶＤＣＳＷＴＬＰＰＡＰＮＳＴＳＰＶＳＦＩＡＴＹＲＬＧＭＡＡＲＧＨＳＷＰＣＬＱＱＴＰＴＳＴＳＣＴＩＴＤＶＱＬＦＳＭＡＰＹＶＬＮＶＴＡＶＨＰＷＧＳＳＳＳＦＶＰＦＩＴＥＨＩＩＫＰＤＰＰＥＧＶＲＬＳＰＬＡＥＲＱＬＱＶＱＷＥＰＰＧＳＷＰＦＰＥＩＦＳＬＫＹＷＩＲＹＫＲＱＧＡＡＲＦＨＲＶＧＰＩＥＡＴＳＦＩＬＲＡＶＲＰＲＡＲＹＹＶＱＶＡＡＱＤＬＴＤＹＧＥＬＳＤＷＳＬＰＡＴＡＴＭＳＬＧＫ（配列番号２９）。

ＩＬ２１ｒ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＬ２ｒｇ−β−ＩＬ２７Ｂ鎖が（細胞内又はインビトロで）組み合わされると、それらは本明細書でＩＬ−２１Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５と称されるヘテロ二量体タンパク質を形成する。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なα鎖は、（１）配列番号２６のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１７又は配列番号２５と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなα鎖は「ＩＬ２１ｒ−β−ＩＬ１２ａ」と称される場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＩＬ２１ｒ−β−ＩＬ１２ａ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＣＰＤＬＶＣＹＴＤＹＬＱＴＶＩＣＩＬＥＭＷＮＬＨＰＳＴＬＴＬＴＷＱＤＱＹＥＥＬＫＤＥＡＴＳＣＳＬＨＲＳＡＨＮＡＴＨＡＴＹＴＣＨＭＤＶＦＨＦＭＡＤＤＩＦＳＶＮＩＴＤＱＳＧＮＹＳＱＥＣＧＳＦＬＬＡＥＳＩＫＰＡＰＰＦＮＶＴＶＴＦＳＧＱＹＮＩＳＷＲＳＤＹＥＤＰＡＦＹＭＬＫＧＫＬＱＹＥＬＱＹＲＮＲＧＤＰＷＡＶＳＰＲＲＫＬＩＳＶＤＳＲＳＶＳＬＬＰＬＥＦＲＫＤＳＳＹＥＬＱＶＲＡＧＰＭＰＧＳＳＹＱＧＴＷＳＥＷＳＤＰＶＩＦＱＴＱＳＥＥＬＫＥＧＳＧＳＤＥＧＧＥＤＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＲＫＧＧＫＲＧＳＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ（配列番号３７）。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なβ鎖は、（１）配列番号２７のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１６又は配列番号２４と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む：。このようなβ鎖は「ＩＬ２ｒｇ−α−ＩＬ２７Ｂ」と称される場合もある

実施形態では、本発明で使用されるＩＬ２ｒｇ−α−ＩＬ２７Ｂ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＬＮＴＴＩＬＴＰＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＧＳＧＳＲＫＧＧＫＲＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＤＥＧＧＥＤＧＳＧＳＲＫＧＰＰＡＡＬＴＬＰＲＶＱＣＲＡＳＲＹＰＩＡＶＤＣＳＷＴＬＰＰＡＰＮＳＴＳＰＶＳＦＩＡＴＹＲＬＧＭＡＡＲＧＨＳＷＰＣＬＱＱＴＰＴＳＴＳＣＴＩＴＤＶＱＬＦＳＭＡＰＹＶＬＮＶＴＡＶＨＰＷＧＳＳＳＳＦＶＰＦＩＴＥＨＩＩＫＰＤＰＰＥＧＶＲＬＳＰＬＡＥＲＱＬＱＶＱＷＥＰＰＧＳＷＰＦＰＥＩＦＳＬＫＹＷＩＲＹＫＲＱＧＡＡＲＦＨＲＶＧＰＩＥＡＴＳＦＩＬＲＡＶＲＰＲＡＲＹＹＶＱＶＡＡＱＤＬＴＤＹＧＥＬＳＤＷＳＬＰＡＴＡＴＭＳＬＧＫ（配列番号３６）。

ＩＬ２１ｒ−β−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＬ２ｒｇ−α−ＩＬ２７Ｂ鎖が（細胞内又はインビトロで）組み合わされると、それらは本明細書でＩＬ−２１Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５と称される場合もあるヘテロ二量体タンパク質を形成する。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＦＮｇＲの細胞外ドメインを含む。ＩＦＮｇＲ（インターフェロンγ受容体１、ＩＦＮ−γ受容体１、ＩＦＮ−γ−Ｒ１、ＩＦＮ−γ−Ｒ−α、ＩＦＮγＲ、及びＩＦＮＧＲ１としても知られる）はＩＦＮＧＲ２と結合して、サイトカインインターフェロンγ（ＩＦＮＧ）の受容体を形成する。リガンド結合は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化を刺激する。これは、感染性病原体に対する細胞応答に必要なＩＦＮ−γ経路において重要な役割を果たす。ＩＦＮＧＲ１の遺伝的多様性は、ヘリコバクターピロリ感染症への感受性と関連している。さらに、ＩＦＮＧＲ１の欠損は、家族性汎発性非定型マイコバクテリア感染症としても知られるメンデル遺伝型マイコバクテリア易感染症の原因である。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＦＮｇＲの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、ヒトＩＦＮｇＲなどのＩＦＮｇＲの公知のアミノ酸配列と、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ＩＦＮｇＲの細胞外ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＭＧＴＡＤＬＧＰＳＳＶＰＴＰＴＮＶＴＩＥＳＹＮＭＮＰＩＶＹＷＥＹＱＩＭＰＱＶＰＶＦＴＶＥＶＫＮＹＧＶＫＮＳＥＷＩＤＡＣＩＮＩＳＨＨＹＣＮＩＳＤＨＶＧＤＰＳＮＳＬＷＶＲＶＫＡＲＶＧＱＫＥＳＡＹＡＫＳＥＥＦＡＶＣＲＤＧＫＩＧＰＰＫＬＤＩＲＫＥＥＫＱＩＭＩＤＩＦＨＰＳＶＦＶＮＧＤＥＱＥＶＤＹＤＰＥＴＴＣＹＩＲＶＹＮＶＹＶＲＭＮＧＳＥＩＱＹＫＩＬＴＱＫＥＤＤＣＤＥＩＱＣＱＬＡＩＰＶＳＳＬＮＳＱＹＣＶＳＡＥＧＶＬＨＶＷＧＶＴＴＥＫＳＫＥＶＣＩＴＩＦＮＳＳＩＫＧ（配列番号３０）。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＦＮｇＲの細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、配列番号３０に対して、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の１つの鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

当業者は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に取り込まれる、Ａｇｕｅｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ”Ｃｅｌｌ ５５（２），２７３−２８０（１９８８）；Ｓｔｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２（９），２４２３−２４３０（１９９３）；Ｓａｋａｔｓｕｍｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｊａｋ ｋｉｎａｓｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｌｐｈａ ａｎｄ ｂｅｔａ（ａｃｃｅｓｓｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ）ｃｈａｉｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｏ ｆｏｒｍ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｕｎｉｔ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ＳＴＡＴ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（２９），１７５２８−１７５３４（１９９５）；Ｗａｌｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａ ｃｏｍｐｌｅｘ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｓｏｌｕｂｌｅ ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ”，Ｎａｔｕｒｅ ３７６（６５３７），２３０−２３５（１９９５）；Ｓｏｇａｂｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＩＦＮｇａｍｍａＲ）ａｌｐｈａ−ｃｈａｉｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ｈｏｍｏｌｏｇ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｘ−ｒａｙ ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａ６ ｆａｂ−ＩＦＮｇａｍｍａＲ１−１０８ ｃｏｍｐｌｅｘ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３（４），８８２−８９７（１９９７）；Ｔｈｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，“Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ ｔｈｉｒｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｐｌｅｘ”，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ８（９），９２７−９３６（２０００）；ｖａｎ ｄｅ Ｗｅｔｅｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ＩＦＮ−ｇａｍｍａＲ１．”Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７：１０２３−１０３０（２０１０）などの文献を参照することにより、ＩＦＮｇＲの公知のアミノ酸配列の変異体を選択することができる。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＦＮＧＲ２の細胞外ドメインを含む。ＩＦＮＧＲ２（インターフェロンγ受容体２、ＩＦＮ−γ受容体２、及びＩＦＮ−γ−Ｒ２としても知られる）は、γインターフェロン受容体の非リガンド結合β鎖である。ヒトインターフェロンγ受容体は、ＩＦＮＧＲ１とＩＦＮＧＲ２のヘテロ二量体である。リガンド結合は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化を刺激する。リガンド結合に関与する他の受容体サブユニットとは対照的に、ＩＦＮＧＲ２はシグナル伝達に必要である。ＩＦＮＧＲ２の欠陥は、家族性汎発性非定型マイコバクテリア感染症としても知られるメンデル遺伝型マイコバクテリア易感染症（ＭＳＭＤ）の原因である。ＭＳＭＤは、常染色体劣性遺伝、常染色体優性遺伝、又はＸ連鎖遺伝を伴う遺伝的に不均一な疾患である。

いくつかの実施形態では、本発明において有用なヘテロ二量体タンパク質は、ＩＦＮＧＲ２の細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、ヒトＩＦＮＧＲ２などのＩＦＮＧＲ２の公知のアミノ酸配列と、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ＩＦＮＧＲ２の細胞外ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：
ＳＱＬＰＡＰＱＨＰＫＩＲＬＹＮＡＥＱＶＬＳＷＥＰＶＡＬＳＮＳＴＲＰＶＶＹＱＶＱＦＫＹＴＤＳＫＷＦＴＡＤＩＭＳＩＧＶＮＣＴＱＩＴＡＴＥＣＤＦＴＡＡＳＰＳＡＧＦＰＭＤＦＮＶＴＬＲＬＲＡＥＬＧＡＬＨＳＡＷＶＴＭＰＷＦＱＨＹＲＮＶＴＶＧＰＰＥＮＩＥＶＴＰＧＥＧＳＬＩＩＲＦＳＳＰＦＤＩＡＤＴＳＴＡＦＦＣＹＹＶＨＹＷＥＫＧＧＩＱＱＶＫＧＰＦＲＳＮＳＩＳＬＤＮＬＫＰＳＲＶＹＣＬＱＶＱＡＱＬＬＷＮＫＳＮＩＦＲＶＧＨＬＳＮＩＳＣＹＥＴＭＡＤＡＳＴＥＬＱＱ（配列番号３１）。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＦＮＧＲ２の細胞外ドメインの変異体を含む。例として、前記変異体は、配列番号３１に対して少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の１つの鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

当業者は、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に取り込まれる、Ｓｏｈ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ ａｃｃｅｓｓｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ”，Ｃｅｌｌ ７６（５），７９３−８０２（１９９４）、Ｓａｋａｔｓｕｍｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｊａｋ ｋｉｎａｓｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｌｐｈａ ａｎｄ ｂｅｔａ（ａｃｃｅｓｓｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ）ｃｈａｉｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｏ ｆｏｒｍ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｕｎｉｔ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ＳＴＡＴ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（２９），１７５２８−１７５３４（１９９５）、Ｒｏｓｅｎｚｗｅｉｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｄｉｐｅｐｔｉｄｅ ｍｏｔｉｆ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ＩＦＮ−ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ＩＦＮ−ｇａｍｍａ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３（６），３９９１−３９９９（２００４）、Ｍｉｋｕｌｅｃｋｙ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ”，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ ７５，１０１７−１０２４（２０１６）、Ｋｏｔｅｎｋｏ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｐｌｅｘ．”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２０９１５−２０９２１（１９９５）などの文献を参照することにより、ＩＦＮＧＲ２の公知のアミノ酸配列の変異体を選択することができる。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なα鎖は、（１）配列番号３０のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１６又は配列番号２４と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなα鎖は「ＩＦＮｇＲ−α−ＩＬ１２ａ」と称される場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＩＦＮｇＲ−α−ＩＬ１２ａ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＭＧＴＡＤＬＧＰＳＳＶＰＴＰＴＮＶＴＩＥＳＹＮＭＮＰＩＶＹＷＥＹＱＩＭＰＱＶＰＶＦＴＶＥＶＫＮＹＧＶＫＮＳＥＷＩＤＡＣＩＮＩＳＨＨＹＣＮＩＳＤＨＶＧＤＰＳＮＳＬＷＶＲＶＫＡＲＶＧＱＫＥＳＡＹＡＫＳＥＥＦＡＶＣＲＤＧＫＩＧＰＰＫＬＤＩＲＫＥＥＫＱＩＭＩＤＩＦＨＰＳＶＦＶＮＧＤＥＱＥＶＤＹＤＰＥＴＴＣＹＩＲＶＹＮＶＹＶＲＭＮＧＳＥＩＱＹＫＩＬＴＱＫＥＤＤＣＤＥＩＱＣＱＬＡＩＰＶＳＳＬＮＳＱＹＣＶＳＡＥＧＶＬＨＶＷＧＶＴＴＥＫＳＫＥＶＣＩＴＩＦＮＳＳＩＫＧＧＳＧＳＲＫＧＧＫＲＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＤＥＧＧＥＤＧＳＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ（配列番号３２）。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なβ鎖は、（１）配列番号３１のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１７又は配列番号２５と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなβ鎖は「ＩＦＮＧＲ２−β−ＩＬ２７Ｂ」と称される場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＩＦＮＧＲ２−β−ＩＬ２７Ｂ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＳＱＬＰＡＰＱＨＰＫＩＲＬＹＮＡＥＱＶＬＳＷＥＰＶＡＬＳＮＳＴＲＰＶＶＹＱＶＱＦＫＹＴＤＳＫＷＦＴＡＤＩＭＳＩＧＶＮＣＴＱＩＴＡＴＥＣＤＦＴＡＡＳＰＳＡＧＦＰＭＤＦＮＶＴＬＲＬＲＡＥＬＧＡＬＨＳＡＷＶＴＭＰＷＦＱＨＹＲＮＶＴＶＧＰＰＥＮＩＥＶＴＰＧＥＧＳＬＩＩＲＦＳＳＰＦＤＩＡＤＴＳＴＡＦＦＣＹＹＶＨＹＷＥＫＧＧＩＱＱＶＫＧＰＦＲＳＮＳＩＳＬＤＮＬＫＰＳＲＶＹＣＬＱＶＱＡＱＬＬＷＮＫＳＮＩＦＲＶＧＨＬＳＮＩＳＣＹＥＴＭＡＤＡＳＴＥＬＱＱＧＳＧＳＤＥＧＧＥＤＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＲＫＧＧＫＲＧＳＧＳＲＫＧＰＰＡＡＬＴＬＰＲＶＱＣＲＡＳＲＹＰＩＡＶＤＣＳＷＴＬＰＰＡＰＮＳＴＳＰＶＳＦＩＡＴＹＲＬＧＭＡＡＲＧＨＳＷＰＣＬＱＱＴＰＴＳＴＳＣＴＩＴＤＶＱＬＦＳＭＡＰＹＶＬＮＶＴＡＶＨＰＷＧＳＳＳＳＦＶＰＦＩＴＥＨＩＩＫＰＤＰＰＥＧＶＲＬＳＰＬＡＥＲＱＬＱＶＱＷＥＰＰＧＳＷＰＦＰＥＩＦＳＬＫＹＷＩＲＹＫＲＱＧＡＡＲＦＨＲＶＧＰＩＥＡＴＳＦＩＬＲＡＶＲＰＲＡＲＹＹＶＱＶＡＡＱＤＬＴＤＹＧＥＬＳＤＷＳＬＰＡＴＡＴＭＳＬＧＫ（配列番号３３）。

ＩＦＮｇＲ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＦＮＧＲ２−β−ＩＬ２７Ｂ鎖が（細胞内又はインビトロで）組み合わされると、それらは本明細書でＩＦＮγＲ−Ｆｃ−ＩＬ−３５と称されるヘテロ二量体タンパク質を形成する。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なα鎖は、（１）配列番号３０のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１７又は配列番号２５と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなα鎖は「ＩＦＮｇＲ−β−ＩＬ１２ａ」と称される場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＩＦＮｇＲ−β−ＩＬ１２ａ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＭＧＴＡＤＬＧＰＳＳＶＰＴＰＴＮＶＴＩＥＳＹＮＭＮＰＩＶＹＷＥＹＱＩＭＰＱＶＰＶＦＴＶＥＶＫＮＹＧＶＫＮＳＥＷＩＤＡＣＩＮＩＳＨＨＹＣＮＩＳＤＨＶＧＤＰＳＮＳＬＷＶＲＶＫＡＲＶＧＱＫＥＳＡＹＡＫＳＥＥＦＡＶＣＲＤＧＫＩＧＰＰＫＬＤＩＲＫＥＥＫＱＩＭＩＤＩＦＨＰＳＶＦＶＮＧＤＥＱＥＶＤＹＤＰＥＴＴＣＹＩＲＶＹＮＶＹＶＲＭＮＧＳＥＩＱＹＫＩＬＴＱＫＥＤＤＣＤＥＩＱＣＱＬＡＩＰＶＳＳＬＮＳＱＹＣＶＳＡＥＧＶＬＨＶＷＧＶＴＴＥＫＳＫＥＶＣＩＴＩＦＮＳＳＩＫＧＧＳＧＳＤＥＧＧＥＤＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＲＫＧＧＫＲＧＳＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ（配列番号３８）。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なβ鎖は、（１）配列番号３１のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１６又は配列番号２４と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなβ鎖は「ＩＦＮＧＲ２−α−ＩＬ２７Ｂ」と称される場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＩＦＮＧＲ２−α−ＩＬ２７Ｂ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＳＱＬＰＡＰＱＨＰＫＩＲＬＹＮＡＥＱＶＬＳＷＥＰＶＡＬＳＮＳＴＲＰＶＶＹＱＶＱＦＫＹＴＤＳＫＷＦＴＡＤＩＭＳＩＧＶＮＣＴＱＩＴＡＴＥＣＤＦＴＡＡＳＰＳＡＧＦＰＭＤＦＮＶＴＬＲＬＲＡＥＬＧＡＬＨＳＡＷＶＴＭＰＷＦＱＨＹＲＮＶＴＶＧＰＰＥＮＩＥＶＴＰＧＥＧＳＬＩＩＲＦＳＳＰＦＤＩＡＤＴＳＴＡＦＦＣＹＹＶＨＹＷＥＫＧＧＩＱＱＶＫＧＰＦＲＳＮＳＩＳＬＤＮＬＫＰＳＲＶＹＣＬＱＶＱＡＱＬＬＷＮＫＳＮＩＦＲＶＧＨＬＳＮＩＳＣＹＥＴＭＡＤＡＳＴＥＬＱＱＧＳＧＳＲＫＧＧＫＲＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＤＥＧＧＥＤＧＳＧＳＲＫＧＰＰＡＡＬＴＬＰＲＶＱＣＲＡＳＲＹＰＩＡＶＤＣＳＷＴＬＰＰＡＰＮＳＴＳＰＶＳＦＩＡＴＹＲＬＧＭＡＡＲＧＨＳＷＰＣＬＱＱＴＰＴＳＴＳＣＴＩＴＤＶＱＬＦＳＭＡＰＹＶＬＮＶＴＡＶＨＰＷＧＳＳＳＳＦＶＰＦＩＴＥＨＩＩＫＰＤＰＰＥＧＶＲＬＳＰＬＡＥＲＱＬＱＶＱＷＥＰＰＧＳＷＰＦＰＥＩＦＳＬＫＹＷＩＲＹＫＲＱＧＡＡＲＦＨＲＶＧＰＩＥＡＴＳＦＩＬＲＡＶＲＰＲＡＲＹＹＶＱＶＡＡＱＤＬＴＤＹＧＥＬＳＤＷＳＬＰＡＴＡＴＭＳＬＧＫ（配列番号３９）。

ＩＦＮｇＲ−β−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＦＮＧＲ２−α−ＩＬ２７Ｂ鎖が（細胞内又はインビトロで）組み合わされると、それらは本明細書でＩＦＮγＲ−Ｆｃ−ＩＬ−３５と称される場合もあるヘテロ二量体タンパク質を形成する。

ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質の一実施形態は、上記に開示されており、すなわち、Ｇｐ１３０−α−ＩＬ１２Ａ鎖及びＩＬ６ＲＡ−β−ＩＬ２７Ｂ鎖を含む。別の実施形態において、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ６ＲＡ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びＧｐ１３０−β−ＩＬ２７ｂを含み得る。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なα鎖は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１６又は配列番号２４と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなα鎖は「ＩＬ６ＲＡ−α−ＩＬ１２ａ」と称される場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＩＬ６ＲＡ−α−ＩＬ１２ａ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＬＡＰＲＲＣＰＡＱＥＶＡＲＧＶＬＴＳＬＰＧＤＳＶＴＬＴＣＰＧＶＥＰＥＤＮＡＴＶＨＷＶＬＲＫＰＡＡＧＳＨＰＳＲＷＡＧＭＧＲＲＬＬＬＲＳＶＱＬＨＤＳＧＮＹＳＣＹＲＡＧＲＰＡＧＴＶＨＬＬＶＤＶＰＰＥＥＰＱＬＳＣＦＲＫＳＰＬＳＮＶＶＣＥＷＧＰＲＳＴＰＳＬＴＴＫＡＶＬＬＶＲＫＦＱＮＳＰＡＥＤＦＱＥＰＣＱＹＳＱＥＳＱＫＦＳＣＱＬＡＶＰＥＧＤＳＳＦＹＩＶＳＭＣＶＡＳＳＶＧＳＫＦＳＫＴＱＴＦＱＧＣＧＩＬＱＰＤＰＰＡＮＩＴＶＴＡＶＡＲＮＰＲＷＬＳＶＴＷＱＤＰＨＳＷＮＳＳＦＹＲＬＲＦＥＬＲＹＲＡＥＲＳＫＴＦＴＴＷＭＶＫＤＬＱＨＨＣＶＩＨＤＡＷＳＧＬＲＨＶＶＱＬＲＡＱＥＥＦＧＱＧＥＷＳＥＷＳＰＥＡＭＧＴＰＷＴＥＳＲＳＰＰＡＥＮＥＶＳＴＰＭＱＡＬＴＴＮＫＤＤＤＮＩＬＦＲＤＳＡＮＡＴＳＬＰＶＱＤＳＳＳＶＰＬＰＧＳＧＳＲＫＧＧＫＲＧＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＤＥＧＧＥＤＧＳＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ（配列番号３４）。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体キメラタンパク質において有用なβ鎖は、（１）配列番号１８のアミノ酸配列又はその変異体を含む第１のドメイン、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列又はその変異体を含む第２のドメイン、及び（ｃ）配列番号１７又は配列番号２５と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むαコアドメイン又はその変異体を含む。このようなβ鎖は「Ｇｐ１３０−β−ＩＬ２７ｂ」と称される場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるＧｐ１３０−β−ＩＬ２７ｂ鎖は、以下のアミノ酸配列を有する：
ＥＬＬＤＰＣＧＹＩＳＰＥＳＰＶＶＱＬＨＳＮＦＴＡＶＣＶＬＫＥＫＣＭＤＹＦＨＶＮＡＮＹＩＶＷＫＴＮＨＦＴＩＰＫＥＱＹＴＩＩＮＲＴＡＳＳＶＴＦＴＤＩＡＳＬＮＩＱＬＴＣＮＩＬＴＦＧＱＬＥＱＮＶＹＧＩＴＩＩＳＧＬＰＰＥＫＰＫＮＬＳＣＩＶＮＥＧＫＫＭＲＣＥＷＤＧＧＲＥＴＨＬＥＴＮＦＴＬＫＳＥＷＡＴＨＫＦＡＤＣＫＡＫＲＤＴＰＴＳＣＴＶＤＹＳＴＶＹＦＶＮＩＥＶＷＶＥＡＥＮＡＬＧＫＶＴＳＤＨＩＮＦＤＰＶＹＫＶＫＰＮＰＰＨＮＬＳＶＩＮＳＥＥＬＳＳＩＬＫＬＴＷＴＮＰＳＩＫＳＶＩＩＬＫＹＮＩＱＹＲＴＫＤＡＳＴＷＳＱＩＰＰＥＤＴＡＳＴＲＳＳＦＴＶＱＤＬＫＰＦＴＥＹＶＦＲＩＲＣＭＫＥＤＧＫＧＹＷＳＤＷＳＥＥＡＳＧＩＴＹＥＤＲＰＳＫＡＰＳＦＷＹＫＩＤＰＳＨＴＱＧＹＲＴＶＱＬＶＷＫＴＬＰＰＦＥＡＮＧＫＩＬＤＹＥＶＴＬＴＲＷＫＳＨＬＱＮＹＴＶＮＡＴＫＬＴＶＮＬＴＮＤＲＹＬＡＴＬＴＶＲＮＬＶＧＫＳＤＡＡＶＬＴＩＰＡＣＤＦＱＡＴＨＰＶＭＤＬＫＡＦＰＫＤＮＭＬＷＶＥＷＴＴＰＲＥＳＶＫＫＹＩＬＥＷＣＶＬＳＤＫＡＰＣＩＴＤＷＱＱＥＤＧＴＶＨＲＴＹＬＲＧＮＬＡＥＳＫＣＹＬＩＴＶＴＰＶＹＡＤＧＰＧＳＰＥＳＩＫＡＹＬＫＱＡＰＰＳＫＧＰＴＶＲＴＫＫＶＧＫＮＥＡＶＬＥＷＤＱＬＰＶＤＶＱＮＧＦＩＲＮＹＴＩＦＹＲＴＩＩＧＮＥＴＡＶＮＶＤＳＳＨＴＥＹＴＬＳＳＬＴＳＤＴＬＹＭＶＲＭＡＡＹＴＤＥＧＧＫＤＧＰＥＦＴＦＴＴＰＫＦＡＱＧＥＩＥ（配列番号３５）。

ＩＬ６ＲＡ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びＧｐ１３０−β−ＩＬ２７ｂ鎖が（細胞内又はインビトロで）組み合わされると、それらは本明細書でＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５と称される場合もあるヘテロ二量体タンパク質を形成する。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、公知のサイトカイン、増殖因子、及び／又はホルモンのいずれかの変異体を含み得る。様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、公知のサイトカイン受容体、増殖因子受容体、及び／又はホルモン受容体のいずれかの変異体を含み得る。様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、公知の細胞外ドメインのいずれかの変異体、例えば、公知のアミノ酸又は核酸配列と、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、公知のタンパク質配列のいずれかに対して１又は複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、前記１又は複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、及び短縮化から独立して選択され得る。

いくつかの実施形態では、アミノ酸変異はアミノ酸置換であり、保存的置換及び／又は非保存的置換を含み得る。

「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解性、疎水性、親水性、及び／又は両親媒性における類似性に基づいて行われ得る。２０種類の天然アミノ酸は、（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅの６つの標準アミノ酸群に分類することができる。

本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、上記の６つの標準アミノ酸群の同じ群内にリストされた別のアミノ酸によるアミノ酸の交換として定義される。例えば、ＧｌｕによるＡｓｐの交換により、そのように修飾されたポリペプチド中の１つの負電荷が保持される。さらに、グリシン及びプロリンは、α−ヘリックスを破壊する能力に基づいて、互いに置換され得る。

本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、上記の６つの標準アミノ酸群（１）〜（６）の異なる群にリストされた別のアミノ酸によるアミノ酸の交換として定義される。

様々な実施形態では、置換には非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロリシン、Ｎ−ホルミルメチオニンβ−アラニン、ＧＡＢＡ及びδ−アミノレブリン酸、４−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、一般的なアミノ酸のＤ−異性体、２，４−ジアミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、デザイナーアミノ酸、例えば、βメチルアミノ酸、Ｃαメチルアミノ酸、Ｎαメチルアミノ酸、及び一般的なアミノ酸類似体）も含まれ得る。

コドン縮重を考慮に入れることを含めて、遺伝コードを参照することによりヘテロ二量体タンパク質のヌクレオチド配列に突然変異を加えてもよい。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、（例えば、腫瘍に対して）免疫活性化を促進することが可能であり、それを含む方法で使用することができる。様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫阻害を抑制すること（例えば、腫瘍を生存させること）が可能であり、それを含む方法で使用することができる。様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫活性化の改善及び／又は免疫阻害抑制の改善をもたらす。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫応答の振幅を調節すること、例えば、エフェクター出力のレベルを調節することが可能であるか、又はそれを含む方法で使用することができる。いくつかの実施形態では、例えば、がんの治療に使用される場合、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫阻害と比較して免疫刺激の程度を変化させて、これらに限定されないが、サイトカイン産生、増殖、又は標的殺傷能のレベルの上昇を刺激することを含む、Ｔ細胞応答の振幅を増大させる。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、いくつかの実施形態において、腫瘍細胞の表面上の抑制性リガンドを遮蔽し、その免疫抑制性リガンドを免疫刺激性リガンドで置換することが可能であるか、又はそれらが関与する方法で使用される。したがって、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、いくつかの実施形態において、抑制性免疫シグナルを減少又は排除すること、及び／又は免疫刺激シグナルを増大又は活性化することが可能であるか、又はそれを含む方法において使用される。例えば、抑制性シグナルを有する（したがって免疫応答を回避する）腫瘍細胞は、腫瘍細胞を攻撃可能なＴ細胞に結合する陽性シグナルと置き換えられ得る。したがって、いくつかの実施形態では、抑制性免疫シグナルは、本発明のヘテロ二量体タンパク質によって遮蔽され、刺激性免疫シグナルが活性化される。そのような有益な特性は、本発明のヘテロ二量体タンパク質の単一コンストラクトアプローチによって強化される。例えば、単一置換はほぼ同時に実施することができ、単一置換は、臨床的に重要な部位（例えば、腫瘍微小環境）で局所的になるように調整される。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫刺激性受容体／リガンド対の結合を刺激又は増強することが可能であるか、それを含む方法で使用される。

他の実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、免疫調節を増強、回復、促進、及び／又は刺激することが可能であるか、又はそれらが関与する含む方法で使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の本発明のヘテロ二量体タンパク質は、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、Ｔヘルパー細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、及び樹状細胞を含むがこれらに限定されない、腫瘍細胞に対する１又は複数の免疫細胞の活性又は活性化を回復、促進、及び／又は刺激する。いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、Ｔ細胞の活性、及び／又は活性化を増強、回復、促進、及び／又は刺激し、これは非限定的な例として、１又は複数のＴ細胞固有シグナルを活性化及び／又は刺激することを含み、前記シグナルは、生存促進シグナル；オートクリン成長シグナル又はパラクリン成長シグナル；ｐ３８ ＭＡＰＫ媒介シグナル、ＥＲＫ媒介シグナル、ＳＴＡＴ媒介シグナル、ＪＡＫ媒介シグナル、ＡＫＴ媒介シグナル、又はＰＩ３Ｋ媒介シグナル；抗アポトーシスシグナル；及び／又は炎症誘発性サイトカイン産生、Ｔ細胞遊走、若しくはＴ細胞腫瘍浸潤のうちの１又は複数を促進及び／又はこれらに必要なシグナルを含む。

いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、腫瘍又は腫瘍微小環境へのＴ細胞（細胞毒性Ｔリンパ球、Ｔヘルパー細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を含むがこれらに限定されない）、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、樹状細胞、単球、及びマクロファージ（例えば、Ｍ１及びＭ２のうちの１又は複数）のうちの１又は複数の増加を引き起こすことが可能であるか、又はそれらが関与する方法で使用される。いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、腫瘍及び／又は腫瘍微小環境（ＴＭＥ）への免疫抑制細胞（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、及び腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ））の動員を阻害及び／又は減少させることが可能であるか、又はそれらが関与する方法で使用される。いくつかの実施形態では、本発明の治療法は、腫瘍部位及び／又はＴＭＥにおけるＭ１マクロファージとＭ２マクロファージの比率を、Ｍ１マクロファージを優先するように変更し得る。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、本明細書に記載の有効量のヘテロ二量体タンパク質を対象に投与することを含む、Ｔ細胞不活化及び／又は腫瘍に対する免疫寛容を阻害及び／又は低減することが可能であり、それを含む方法において使用することができる。いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、及びＩＬ−２２のうちの１又は複数を含むがこれらに限定されない様々なサイトカインの血清レベルを増加させることができる。いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、治療された対象の血清中のＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２２、又はＩＦＮγを増強することができる。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、抗腫瘍ＣＤ８＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞死を阻害、遮断、及び／又は低減させる、又は腫瘍促進Ｔ細胞の細胞死を刺激、誘導、及び／又は増加させる。Ｔ細胞の疲弊（exhaustion）は、増殖機能及びエフェクター機能の進行性喪失を特徴とするＴ細胞機能不全の状態であり、クローンの欠失に至る。したがって、腫瘍促進Ｔ細胞は、多くの慢性感染症及びがんの間に生じるＴ細胞機能不全の状態を指す。この機能不全は、不十分な増殖機能及び／又はエフェクター機能、抑制性受容体の持続的発現、及び機能的エフェクターＴ細胞又はメモリーＴ細胞の転写状態とは異なる転写状態によって定義される。疲弊は、感染及び腫瘍の最適な制御を妨げる。さらに、抗腫瘍ＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞は、腫瘍に対する免疫応答を開始することができるＴ細胞を指す。例示的な腫瘍促進Ｔ細胞としては、Ｔｒｅｇ、１又は複数のチェックポイント阻害性受容体を発現するＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｈ２細胞、並びにＴｈ１７細胞が挙げられるが、これらに限定されない。チェックポイント阻害性受容体とは、無制御な免疫応答を防止又は阻害する免疫細胞上で発現する受容体（例えば、ＣＴＬＡ−４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＴＩＭ−３）を指す。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、制御性Ｔ細胞に対するエフェクターＴ細胞の比率を増加させることが可能であり、それを含む方法で使用することができる。例示的なエフェクターＴ細胞としては、ＩＣＯＳ^＋エフェクターＴ細胞；細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、αβ ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４５ＲＯ^＋）；ＣＤ４^＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβ ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ⁻７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）；ＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβ ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ⁻７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）；エフェクターメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４^＋、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ⁻７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ−１５Ｒ^＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ）；セントラルメモリーＴ細胞（例えば、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ２７^＋；又はＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ−７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ−１５Ｒ^＋）；ＣＤ６２Ｌ^＋エフェクターＴ細胞；早期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^＋ＣＤ６２Ｌ−）及び後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７−ＣＤ６２Ｌ−）（それぞれＴｅｍＥ及びＴｅｍＬ）を含むＣＤ８^＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）；ＣＤ１２７（^＋）ＣＤ２５（ｌｏｗ／−）エフェクターＴ細胞；ＣＤ１２７（⁻）ＣＤ２５（⁻）エフェクターＴ細胞；ＣＤ８^＋幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えば、ＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（^＋））；ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３^＋、ＣＸＣＲ６^＋、及びＣＣＲ５^＋；又はαβ ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ−１２Ｒ^＋、ＩＦＮγＲ^＋、ＣＸＣＲ３^＋）、ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＣＲ３^＋、ＣＣＲ４^＋、及びＣＣＲ８^＋；又はαβ ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ−４Ｒ^＋、ＩＬ−３３Ｒ^＋、ＣＣＲ４^＋、ＩＬ−１７ＲＢ^＋、ＣＲＴＨ２^＋）；ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えば、αβ ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋）；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えば、αβ ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ−２３Ｒ^＋、ＣＣＲ６^＋、ＩＬ−１Ｒ^＋）；ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７^＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７（⁻）エフェクターＴ細胞；並びにＩＬ−２、ＩＬ−４、及び／又はＩＦＮ−γを分泌するエフェクターＴ細胞が挙げられる。例示的な制御性Ｔ細胞としては、ＩＣＯＳ^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＦＯＸＰ３^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ２５⁻制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ２５高制御性Ｔ細胞、ＴＩＭ−３^＋ＰＤ−１^＋制御性Ｔ細胞、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）^＋制御性Ｔ細胞、ＣＴＬＡ−４／ＣＤ１５２^＋制御性Ｔ細胞、ニューロピリン−１（Ｎｒｐ−１）^＋制御性Ｔ細胞、ＣＣＲ４^＋ＣＣＲ８^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ６２Ｌ（Ｌ−セレクチン）^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＢｌｏｗ制御性Ｔ細胞、ＣＤ１２７ｌｏｗ制御性Ｔ細胞、ＬＲＲＣ３２／ＧＡＲＰ^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ３９^＋制御性Ｔ細胞、ＧＩＴＲ^＋制御性Ｔ細胞、ＬＡＰ^＋制御性Ｔ細胞、１Ｂ１１^＋制御性Ｔ細胞、ＢＴＬＡ^＋制御性Ｔ細胞、１型制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）、Ｔヘルパー３型（Ｔｈ３）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞表現型の調節細胞（ＮＫＴｒｅｇｓ）、ＣＤ８^＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋ＣＤ２８⁻制御性Ｔ細胞、及び／又はＩＬ−１０、ＩＬ−３５、ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−α、ガレクチン−１、ＩＦＮ−γ及び／又はＭＣＰ１を分泌する制御性Ｔ細胞が挙げられる。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、エフェクターＴ細胞を約１２時間以内、約２４時間以内、約４８時間以内、約７２時間以内、若しくは約９６時間以内、又は約１週間以内若しくは約２週間以内の間、一過性に刺激することが可能であり、それを含む方法で使用することができる。様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、制御性Ｔ細胞を約１２時間以内、約２４時間以内、約４８時間以内、約７２時間以内、若しくは約９６時間以内、又は約１週間以内若しくは約２週間以内の間、一過性に枯渇又は阻害することが可能であり、それを含む方法で使用することができる。様々な実施形態では、エフェクターＴ細胞の一過性の刺激及び／又は制御性Ｔ細胞の一過性の枯渇若しくは阻害は、実質的に、患者の血流、又は例えば、骨髄、リンパ節、脾臓、胸腺、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）、非リンパ組織などのリンパ組織を含む特定の組織／場所において、若しくは腫瘍微小環境において起こる。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、使用の容易さ及び製造の容易さを含む利点を提供するが、これらに限定されない。これは、２つの異なる免疫療法剤が１つの製品に組み合わされ、２つの独立した製造プロセスではなく単一の製造プロセスが可能になるためである。さらに、２つの別々の薬剤の代わりに単一の薬剤を投与することで、投与が容易になり、患者のコンプライアンスが向上する。さらに、例えば、多数のジスルフィド結合及びグリコシル化などの翻訳後修飾を含む大きな多量体タンパク質であるモノクローナル抗体とは対照的に、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、製造がより容易であり、より費用効果が高い。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、２つの免疫療法剤の部位特異的相互作用の改善を可能にするため、相乗的な治療効果を提供する。いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、オフサイト毒性及び／又は全身毒性を低減する能力を提供する。

疾患：治療法及び患者の選択
様々な実施形態では、本発明は、１又は複数の自己免疫疾患又は自己免疫障害の治療のためのヘテロ二量体タンパク質の使用に関する。様々な実施形態では、自己免疫疾患又は自己免疫障害の治療は、免疫刺激よりも免疫阻害に有利になるように、本発明のヘテロ二量体タンパク質を用いて免疫系を調節することを含み得る。本発明のヘテロ二量体タンパク質で治療可能な例示的な自己免疫疾患又は自己免疫障害には、体自身の抗原が免疫応答の標的となるものが含まれ、例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、糖尿病、強直性脊椎炎、シェーグレン症候群、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）、多発性硬化症、サルコイドーシス、乾癬、グレーブス病、橋本病、乾癬、過敏反応（例えば、アレルギー、花粉症、喘息、及び急性浮腫を引き起こすＩ型過敏反応）、及び血管炎が挙げられる。

本発明のヘテロ二量体タンパク質を使用して治療又は予防され得る例示的な自己免疫疾患又は自己免疫症状としては、多発性硬化症、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギランバレー症候群、強膜症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本病、線維筋痛症、メニエール症候群、移植拒絶反応（例えば、同種移植片拒絶反応の予防）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、及びその他の自己免疫疾患が挙げられるが、これらに限定されない。

様々な実施形態では、本発明は、がん及び／又は腫瘍、例えば、がん及び／又は腫瘍の治療又は予防に関する。本明細書に記載されるように、がんの治療は、様々な実施形態において、免疫阻害よりも免疫刺激に有利になるように、本発明のヘテロ二量体タンパク質を用いて免疫系を調節することを含み得る。

がん又は腫瘍は、身体の器官及び系の正常な機能を妨げる、細胞の無制御な増殖及び／又は異常な細胞生存の増加及び／又はアポトーシスの阻害を指す。良性及び悪性のがん、ポリープ、過形成、並びに休眠腫瘍又は微小転移巣が含まれる。また、免疫系によって妨げられない異常な増殖を有する細胞（例えば、ウイルス感染細胞）も含まれる。がんは、原発性がん又は転移性がんであってもよい。原発性がんは、臨床的に検出可能となる発生部位のがん細胞領域であってもよく、原発性腫瘍であってもよい。対照的に、転移性がんは、ある臓器又は部分から、隣接していない別の臓器又は部分への疾患の転移（spread）であってもよい。転移性がんは、局所領域において周囲の正常組織に浸透及び浸潤する能力を獲得し、局所転移であり得る新しい腫瘍を形成する、がん細胞によって引き起こされることがある。がんはまた、リンパ管及び／又は血管の壁を貫通する能力を獲得するがん細胞によって引き起こされることがあり、その後、がん細胞は血流を通って他の部位及び体内の組織に循環し得る（それにより循環腫瘍細胞である）。がんは、リンパ性転移又は血行性転移などのプロセスが原因であり得る。がんはまた、別の部位で静止し、血管又は壁を通して再浸透し、増殖し続け、最終的に別の臨床的に検出可能な腫瘍を形成する腫瘍細胞によって引き起こされ得る。がんはこの新たな腫瘍であってもよく、転移性（又は二次性）腫瘍であってもよい。

がんは、転移した腫瘍細胞によって引き起こされることがあり、これは二次性腫瘍又は転移性腫瘍であり得る。腫瘍の細胞は、元の腫瘍の細胞と同じであり得る。一例として、乳がん又は結腸がんが肝臓に転移する場合、二次性腫瘍は、肝臓に存在するが、異常な肝細胞ではなく、異常な乳房細胞又は結腸細胞で構成されている。したがって、肝臓の腫瘍は、肝臓がんではなく、転移性乳がん又は転移性結腸がんであり得る。

がんはどの組織からでも発生し得る。がんは、黒色腫、結腸、乳房、又は前立腺に由来していてもよく、したがって、元々はそれぞれ皮膚、結腸、乳房、又は前立腺であった細胞で構成され得る。がんはまた、白血病又はリンパ腫であってもよい、血液学的悪性腫瘍であり得る。がんは、肝臓、肺、膀胱、又は腸などの組織に浸潤し得る。

本発明の代表的ながん及び／又は腫瘍としては、これらに限定されないが、基底細胞癌、胆道がん；膀胱がん；骨がん；脳及び中枢神経系のがん；乳がん：腹膜がん；子宮頸がん；絨毛癌；結腸がん及び直腸がん；結合組織がん；消化器がん；子宮内膜がん；食道がん；眼のがん；頭頸部がん；胃がん（胃腸がんを含む）；神経膠芽腫；肝癌；肝細胞癌；上皮内新生物；腎臓がん又は腎がん；喉頭がん；白血病；肝臓がん；肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔がん（唇、舌、口、及び咽頭）；卵巣がん；膵臓がん；前立腺がん；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸がん；呼吸器がん；唾液腺癌；肉腫；皮膚がん；扁平上皮がん；胃がん；精巣がん；甲状腺がん；子宮がん又は子宮内膜がん；泌尿器系がん；外陰がん；ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫並びにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度のびまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小非切断細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；並びにその他の癌及び肉腫；及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連する浮腫）、及びメグズ症候群などが挙げられる。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、治療抵抗性のがんを有する対象を治療するために使用される。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、１種類又は複数種類の免疫調節剤に抵抗性のある対象を治療するために使用される。例えば、いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、１２週間程度の治療後に、治療に対して応答を示さない、又は進展さえも示さない対象を治療するために使用される。例えば、いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ−１剤及び／又はＰＤ−Ｌ１剤及び／又はＰＤ−Ｌ２剤に不応性であり、例えばニボルマブ（ＯＮＯ−４５３８／ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ社）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ、Ｍｅｒｃｋ社）、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１、Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ社）、ＭＫ−３４７５（Ｍｅｒｃｋ社）、ＢＭＳ ９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ社）、イブルチニブ（ＰＨＡＲＭＡＣＹＣＬＩＣＳ、ＡｂｂＶｉｅ社）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）、及び／又はＭＰＤＬ３２８ＯＡ（Ｒｏｃｈｅ社）に抵抗性の患者が含まれる。例えば、いくつかの実施形態において、対象は、抗ＣＴＬＡ−４剤に対して抵抗性であり、例えば、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ）に抵抗性の患者（例えば、黒色腫患者）である。したがって、様々な実施形態において、本発明は、１種類又は複数種類の免疫調節剤の単剤療法を含む、様々な療法に対して非反応性の患者を救済するがん治療の方法を提供する。

様々な実施形態では、本発明は、腫瘍微小環境内の細胞又は組織を標的とするヘテロ二量体タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、腫瘍微小環境内の細胞又は組織は、ヘテロ二量体タンパク質の標的又は結合パートナーの１又は複数を発現する。腫瘍微小環境とは、細胞、分泌タンパク質、生理学的小分子、及び血管を含む、腫瘍が存在する細胞環境を指す。いくつかの実施形態では、腫瘍微小環境内の細胞又は組織は、腫瘍血管系；腫瘍浸潤リンパ球；線維芽細網細胞；内皮前駆細胞（ＥＰＣ）；がん関連線維芽細胞；周皮細胞；他の間質細胞；細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の成分；樹状細胞；抗原提示細胞；Ｔ細胞；制御性Ｔ細胞；マクロファージ；好中球；及び腫瘍の近位に位置する他の免疫細胞のうちの１種類又は複数種類である：。様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質はがん細胞を標的とする。いくつかの実施形態では、がん細胞は、ヘテロ二量体タンパク質の標的又は結合パートナーの１又は複数を発現する。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、本明細書に記載の受容体のうちのいずれかを発現する細胞（例えば、がん細胞又は免疫細胞）を標的とし得る。例えば、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、本明細書に記載されるように、サイトカイン、増殖因子、及び／又はホルモンの受容体のうちのいずれかを発現する細胞を標的とし得る。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、これらに限定されないが本明細書に記載の様々な化学療法剤を含む、本明細書の他の部分に記載される「追加の薬剤」などの追加の薬剤に対して抵抗性である患者におけるヘテロ二量体タンパク質による治療を提供する。

いくつかの態様では、本発明のキメラ剤は、細胞内病原体を排除するために使用される。いくつかの態様では、本発明のキメラ剤は、１又は複数の感染症を治療するために使用される。いくつかの実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、ウイルス感染症（例えば、ＨＩＶ及びＨＣＶを含む）、寄生虫感染症（例えば、マラリアを含む）、及び細菌感染症を治療する方法で使用される。様々な実施形態では、感染症は免疫抑制を誘発する。例えば、ＨＩＶ感染は、しばしば感染した対象に免疫抑制をもたらす。したがって、本明細書の他の部分に記載されるように、そのような感染症の治療は、様々な実施形態において、免疫阻害よりも免疫刺激に有利になるように本発明のヘテロ二量体タンパク質を用いて免疫系を調節することを含み得る。あるいは、本発明は、免疫活性化を誘発する感染症の治療方法を提供する。たとえば、腸内寄生虫感染症は、慢性免疫活性化に関連している。これらの実施形態において、そのような感染症の治療は、免疫刺激よりも免疫阻害に有利になるように、本発明のヘテロ二量体タンパク質を用いて免疫系を調節することを含み得る。

様々な実施形態では、本発明は、これらに限定されないが、例えば、呼吸器、パピローマウイルス感染症、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、及び肝炎ウイルス感染などの内臓のウイルス感染症の急性又は慢性のウイルス感染症を含む、ウイルス感染を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、フラビウイルス科のウイルスによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、フラビウイルス科のウイルスは、黄熱病ウイルス、ウエストナイルウイルス、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、及びＣ型肝炎ウイルスから選択される。他の実施形態では、ウイルス感染は、ピコルナウイルス科のウイルス、例えば、ポリオウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルスなどによって引き起こされる。他の実施形態では、ウイルス感染は、オルトミクソウイルス科のメンバー、例えばインフルエンザウイルスによって引き起こされる。他の実施形態では、ウイルス感染は、レトロウイルス科のメンバー、例えばレンチウイルスによって引き起こされる。他の実施形態では、ウイルス感染は、パラミクソウイルス科のメンバー、例えば、呼吸器多核体ウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ルブラウイルス（例えば、ムンプスウイルス）、麻疹ウイルス、及びヒトメタニューモウイルスなどによって引き起こされる。他の実施形態では、ウイルス感染は、ブニヤウイルス科のメンバー、例えばハンタウイルスによって引き起こされる。他の実施形態では、ウイルス感染は、レオウイルス科のメンバー、例えばロタウイルスによって引き起こされる。

様々な実施形態では、本発明は、原生動物感染症又は蠕虫感染症などの寄生虫感染症を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、寄生虫感染は、原虫寄生虫によるものである。いくつかの実施形態では、オリチツィアブ（ｏｒｉｔｉｚｉａｂ）寄生虫は、消化管内原虫、組織原虫、又は血液原虫から選択される。例示的な原虫寄生虫としては、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｙｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｍｕｒｉｓ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ ｇａｍｂｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｔｉｄａ ｃｒｕｓｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍｅｘｉｃａｎａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、及びＨｉｓｔｏｍｏｎａｓ ｍｅｌｅａｇｒｉｄｉｓが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、寄生虫感染は、線虫（例えば、Ａｄｅｎｏｐｈｏｒｅａ）などの蠕虫寄生虫による。いくつかの実施形態では、寄生虫は双腺綱（例えば、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、及びＤｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ ｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ）から選択される。いくつかの実施形態では、寄生虫は吸虫（例えば、住血吸虫、肝吸虫、腸管寄生吸虫、及び肺吸虫）から選択される。いくつかの実施形態では、寄生虫は以下から選択される：Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｇｉｇａｎｔｉｃａ、Ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｅｓ ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｅｓ、及びＰａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ。いくつかの実施形態では、寄生虫は条虫（例えば、Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ、Ｔａｅｎｉａ ｓａｇｉｎａｔａ、Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ ｎａｎａ、及びＥｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ）から選択される。

様々な実施形態では、本発明は、細菌感染症を治療する方法を提供する。様々な実施形態では、細菌感染は、グラム陽性菌、グラム陰性菌、好気性細菌及び／又は嫌気性細菌による。様々な実施形態では、細菌は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓａｒｃｉｎａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｎｉｓｓｅｒｉａ、Ｂａｃｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ、及び他の生物から選択されるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、細菌は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ ｍｏｒｇａｎｉｉ、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ａｌｃａｌｉｆａｃｉｅｎｓ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｒｅｔｔｇｅｒｉ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｓｔｕａｒｔｉｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ、Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｔｕｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｏｌｉ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｋｉｎｇｅｌｌａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ３４５２Ａ 相同性グループ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｏｖａｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｅｇｇｅｒｔｈｉｉ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｌａｎｃｈｎｉｃｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｙｉｃｕｓ ｓｕｂｓｐ． ｈｙｉｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ、又はＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓから選択されるが、これらに限定されない。

さらに別の態様では、本発明は、これらに限定されないが、本明細書の他の部分に記載されている疾患又は障害、並びに炎症性疾患又は障害、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植片拒絶、及びＴ細胞増殖性障害などのＴ細胞媒介性の疾患及び障害を治療及び予防する方法に関する。

いくつかの態様では、本発明のキメラ剤は、例えば、免疫刺激シグナルを有する細胞外ドメインを介して、Ｔ細胞を活性化する方法において使用される。

いくつかの態様では、本発明のキメラ剤は、免疫抑制シグナルの細胞伝達を防止する方法において使用される。

併用療法及び抱合
いくつかの実施形態では、本発明は、ヘテロ二量体タンパク質及び対象に追加の薬剤を投与することをさらに含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、同時投与及び／又は同時処方に関する。本明細書に記載の組成物のいずれも、同時処方及び／又は同時投与してもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質は、別の薬剤と同時投与されると相乗的に作用し、そのような薬剤が単剤療法として使用される際に通常使用される用量よりも低い用量で投与される。様々な実施形態では、本明細書で参照される任意の薬剤は、本明細書に記載されるヘテロ二量体タンパク質のいずれかと組み合わせて使用され得る。

様々な実施形態では、本明細書に開示されるヘテロ二量体タンパク質のいずれも、本明細書に開示される別のヘテロ二量体タンパク質と同時投与され得る。理論に縛られることを望むものではないが、自然免疫応答を誘発する１又は複数のヘテロ二量体タンパク質と適応免疫応答を誘発する１又は複数のヘテロ二量体タンパク質の投与を含む併用レジメンは、相乗効果（例えば、相乗抗腫瘍効果）を提供し得ると考えられている。

様々な実施形態では、自然免疫応答を誘導する任意のヘテロ二量体タンパク質を本発明で利用し得る。様々な実施形態では、適応免疫応答を誘導する任意のヘテロ二量体タンパク質を本発明で利用し得る。

いくつかの実施形態では、本発明は、これに限定されないが、がんへの適用を含む、追加の薬剤としての化学療法剤に関する。化学療法剤の例としては、これらに限定されないが、チオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮシクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファンなどのアルキルスルホン酸塩；ベンゾドーパ、カルボクオン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、ウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｍｅ）を含む、エチレンイミン及びメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（例えば、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成トポテカン類似体を含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙ ｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビセレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体であるＫＷ−２１８９及びＣＢ １−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロランブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなど；ニトロソ尿素、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなど；
抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマＩＩ及びカリケアマイシンオメガＩＩ（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照）；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダイネマイシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；並びにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）など、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮドキソルビシン（モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなど；
代謝拮抗物質、例えば、メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）など；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなど；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニンなど；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど；抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど；葉酸補充剤、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）など；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポシロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；マイタンシノイド、例えば、マイタンシン及びアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）など；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；；ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社、オレゴン州ユージーン）；ラゾキサン；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（例えば、Ｔ−２トキシン、ベラキュリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａ、及びアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ社、ニュージャージー州プリンストン）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒフリー、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ社、イリノイ州シャンバーグ）、及びＴＡＸＯＴＥＲＥ ドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ社、アントニー、フランス）；クロラムブシル；ＧＥＭＺＡＲ ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチンなど；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ−１１）（イリノテカンと５−ＦＵ及びロイコボリンの処置レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン処置レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含む、オキサリプラチン；ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ）；細胞増殖を低減させる、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）及びＶＥＧＦ−Ａ、並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、又は誘導体が挙げられる。さらに、前記治療方法は、放射線の使用をさらに含み得る。さらに、前記治療方法は、光線力学療法の使用をさらに含み得る。

様々な実施形態では、本発明の追加の薬剤は、これに限定されないが、がんへの適用を含む、ＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２及び／又はＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２との結合を遮断、低減、及び／又は阻害する薬剤（非限定的な例として、ニボルマブ（ＯＮＯ−４５３８／ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ社）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ、Ｍｅｒｃｋ社）、ＭＫ−３４７５（Ｍｅｒｃｋ社）、ＢＭＳ ９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ社）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（Ｒｏｃｈｅ社）のうちの１又は複数）；ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）を増加及び／又は刺激、及び／又はＣＤ１３７（４−１ＢＢ）と１又は複数の４−１ＢＢリガンドとの結合を増加及び／又は刺激する薬剤（非限定的な例として、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３及び抗−４−１ＢＢ抗体）；及びＣＴＬＡ−４の活性、及び／又はＣＴＬＡ−４と１又は複数のＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ−２、及びＰＰＰ２Ｒ５Ａ及び／又はＯＸ４０とＯＸ４０Ｌとの結合を遮断、低減、及び／又は阻害する薬剤（非限定的な例として、ＧＢＲ８３０（Ｇｌｅｎｍａｒｋ社）、ＭＥＤＩ６４６９（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ社））から選択される１又は複数の免疫調節剤である。

いくつかの実施形態では、本発明は、これに限定されないが、感染性疾患への適用を含む、追加の薬剤としての抗感染症剤に関する。いくつかの実施形態では、抗感染症剤は、これらに限定されないが、アバカビル、アシクロビル、アデホビル、アンプレナビル、アタザナビル、シドホビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンフビルチド、エトラビリン、ファムシ、及びホスカルネットを含む抗ウイルス剤である。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、これらに限定されないが、セファロスポリン系抗生物質（セファレキシン、セフロキシム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、及びセフトビプロール）、フルオロキノロン系抗生物質（シプロ（ｃＣｉｐｒｏ）、Ｌｅｖａｑｕｉｎ、ｆｌｏｘｉｎ、テクイン（ｔｅｑｕｉｎ）、アベロックス（ａｖｅｌｏｘ）、及びｎｏｒｆｌｏｘ）、テトラサイクリン系抗生物質（テトラサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、及びドキシサイクリン）、ペニシリン系抗生物質（アモキシシリン、アンピシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バンコマイシン、及びメチシリン）、モノバクタム系抗生物質（アズトレオナム）、及びカルバペネム系抗生物質（エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、及びメロペネム）を含む抗菌剤である。いくつかの実施形態では、抗感染症剤としては、抗マラリア剤（例えば、クロロキン、キニーネ、メフロキン、プリマキン、ドキシサイクリン、アルテメテル／ルメファントリン、アトバコン／プログアニル、及びスルファドキシン／ピリメタミン）、メトロニダゾール、チニダゾール、イベルメクチン、ピランテルパモ酸塩、及びアルベンダゾールが挙げられる。

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、これに限定されないが、自己免疫への適用を含む、免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイド性抗炎症剤又は非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症剤である。ステロイド、特に副腎皮質ステロイド及びそれらの合成類似体は、当技術分野で周知である。本発明において有用な副腎皮質ステロイドの例としては、限定されないが、ヒドロキシルトリアムシノロン、α−メチルデキサメタゾン、β−メチルベタメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、吉草酸クロベタゾール、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、二酢酸ジフロラゾン、吉草酸ジフルコルトロン、フルアドレノロン（ｆｌｕａｄｒｅｎｏｌｏｎｅ）、フルクロロンアセトニド、ピバル酸フルメタゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、酢酸フルプレドニデン（フルプレドニリデン）、フルランドレノロン（ｆｌｕｒａｎｄｒｅｎｏｌｏｎｅ）、ハルシノニド、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、二酢酸ジフルオロゾン、フルラドレノロン、フルドロコルチゾン、二酢酸ジフルロゾン、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾン及びそのエステルの残部、クロロプレドニゾン、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルプレドナート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、並びにジプロピオン酸ベクロメタゾンが挙げられる。本発明で使用することができるＮＳＡＩＤとしては、サリチル酸、アセチルサリチル酸、メチルサリチル酸、グリコールサリチル酸、サリチルアミド、ベンジル−２，５−ジアセトキシ安息香酸、イブプロフェン、スリンダク、ナプロキセン、ケトプロフェン、エトフェナメート、フェニルブタゾン、及びインドメタシンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、アルキル化剤、代謝拮抗薬（例えば、アザチオプリン、メトトレキサート）、細胞傷害性抗生物質、抗体（例えば、バシリキシマブ、ダクリズマブ、及びムロモナブ）、抗イムノフィリン（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス）、インターフェロン（ｉｎｔｅｆｅｒｏｎ）、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、及び低分子生物学的薬剤（例えば、フィンゴリモド、ミリオシン）などの細胞分裂阻害剤であり得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、共有結合が組成物の活性を妨げないように、すなわち、組成物への任意のタイプの分子の共有結合によって修飾される誘導体を含む。例えば、限定されるものではないが、誘導体としては、とりわけ、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンド又は他のタンパク質への結合などによって修飾された組成物が挙げられる。これらに限定されないが、特定の化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含む公知の技術によって、多数の化学修飾のいずれかを実施することができる。さらに、前記誘導体は、１又は複数の非古典的アミノ酸を含んでいてもよい。さらに他の実施形態では、本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、例示的な実施形態において、毒素、化学療法剤、放射性同位元素、及びアポトーシス又は細胞死を引き起こす薬剤を含む細胞毒性剤をさらに含む。そのような薬剤は、本明細書に記載の組成物に抱合することができる。

したがって、本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、翻訳後に修飾されて、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば、蛍光色素、酵素、基質、生物発光材料、放射性材料などの検出可能な部分、及び化学発光部分、又は例えば、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒素、細胞毒性剤、及び放射性物質などの機能的部分が追加され得る。

処方
本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、無機酸又は有機酸と反応することができる充分に塩基性の官能基、あるいは無機塩基又は有機塩基と反応して薬学的に許容される塩を形成することができるカルボキシル基を有することができる。当技術分野で周知のように、薬学的に許容される酸付加塩は、薬学的に許容される酸から形成される。そのような塩としては、例えば、その全体が参照により本明細書に取り込まれるＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７）及びＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２に記載される薬学的に許容される塩が挙げられる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、薬学的に許容される塩の形態である。

さらに、本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、薬学的に許容される担体又はビヒクルを含む組成物の成分として対象に投与することができる。そのような組成物は、適切な投与のための形態を提供するために、任意に、適切な量の薬学的に許容される非薬効成分（excipient）を含み得る。医薬用の非薬効成分は、水、並びに石油、動物、植物、又は合成由来の油、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、及びごま油などを含む油などの液体であり得る。医薬用の非薬効成分は、例えば、生理食塩水、アラビアガム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、及び尿素などであってもよい。さらに、補助剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤、及び着色剤を使用してもよい。ある実施形態では、薬学的に許容される非薬効成分は、対象に投与される際に無菌である。本明細書に記載の任意の薬剤が静脈内投与される場合、水は有用な非薬効成分である。生理食塩水、並びにデキストロース水溶液及びグリセロール水溶液もまた、特に注射可能な溶液のために、液体非薬効成分として使用し得る。適切な医薬用の非薬効成分としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、及びエタノールなども挙げられる。本明細書に記載の任意の薬剤は、必要に応じて、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を含んでいてもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、生理食塩水緩衝液（これらに限定されないが、ＴＢＳ及びＰＢＳなどを含む）に再懸濁される。

様々な実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、半減期を延長するか、又は薬力学的特性及び薬物動態学的特性を改善するために、別の薬剤と抱合／融合され得る。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧとして）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン又はＨＡＳ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、及びトランスフェリンなどと融合又は抱合され得る。様々な実施形態では、個々のヘテロ二量体タンパク質のそれぞれは、その内容全体が参照により本明細書に取り込まれるＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５−２３９，ＢｉｏＤｒｕｇｓに記載されている１又は複数の薬剤に融合される。

投与、投薬、及び治療のレジメン
本発明は、様々な製剤中の本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）を含む。本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、溶液、懸濁液、乳濁液、液滴、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル、液体含有カプセル、粉末、徐放性製剤、坐剤、乳濁液、エアロゾル、スプレー、懸濁液、又は使用に適したその他の形態であり得る。タンパク質配列をコードするＤＮＡコンストラクト又はＲＮＡコンストラクトを使用してもよい。ある実施形態では、前記組成物はカプセルの形態である（例えば、米国特許第５，６９８，１５５号を参照）。適切な医薬品添加剤の他の例は、参照により本明細書に取り込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １４４７−１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｓ．，１９ｔｈ ｅｄ．１９９５）に記載されている。

必要に応じて、ヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）を含む製剤はまた、可溶化剤を含み得る。また、薬剤は、当技術分野で公知の適切なビヒクル又は送達デバイスを用いて送達してもよい。本明細書に概説される併用療法は、単一の送達ビヒクル又は送達デバイスで同時送達することも可能である。投与のための組成物は、所望により、例えば、注射部位の痛みを軽減するためのリグノカインなどの局所麻酔薬を含み得る。

本発明のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）を含む製剤は、単位剤形で簡便に提示することができ、薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。そのような方法は、通常、治療薬を、１又は複数の副成分を構成する担体と結合させる工程を含む。典型的には、製剤は、治療薬を液体担体、微粉化された固体担体、又はその両方と均一かつ密接に結合させ、次いで、必要に応じて、生成物を所望の製剤の剤形に成形（例えば、湿式又は乾式造粒、粉末ブレンドなどに成形した後、当技術分野で公知の従来の方法を使用して錠剤化）することによって調製される。

ある実施形態では、本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、本明細書に記載の投与様式に適合した組成物として通常の手順に従って処方される。

投与経路としては、例えば、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、鼻腔内投与、硬膜外投与、経口投与、舌下投与、鼻腔内投与、脳内投与、膣内投与、経皮投与、直腸投与、吸入による投与、又は特に耳、鼻、眼、又は皮膚への局所的投与が挙げられる。いくつかの実施形態では、投与は経口又は非経口注射によって行われる。ほとんどの場合、投与により、本明細書に記載の任意の薬剤が血流に放出される。

本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、経口投与され得る。そのようなヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）はまた、他の任意の簡便な経路、例えば、静脈内注入又はボーラス注射によって、上皮又は粘膜皮膚の裏層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜及び腸粘膜など）を介した吸収によって投与可能であり、別の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与可能である。投与は全身的又は局所的であり得る。様々な送達システム、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、カプセルなどへのカプセル化が知られており、投与するために使用してもよい。

特定の実施形態では、治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましい場合がある。ある実施形態では、例えばがんの治療において、ヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、腫瘍微小環境（例えば、腫瘍細胞を取り囲む及び／又は腫瘍細胞に供給する、細胞、分子、細胞外マトリックス及び／又は例えば腫瘍血管系を含む血管；腫瘍浸潤リンパ球；線維芽細胞細網細胞；内皮前駆細胞（ＥＰＣ）；がん関連線維芽細胞；周皮細胞；他の間質細胞；細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の成分；樹状細胞；抗原提示細胞；Ｔ細胞；制御性Ｔ細胞；マクロファージ；好中球；及び腫瘍の近位にある他の免疫細胞）又はリンパ節へで投与される、及び／又は腫瘍微小環境又はリンパ節を標的とする。様々な実施形態では、例えば、がんの治療において、ヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、腫瘍内に投与される。

様々な実施形態では、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、従来の免疫療法（例えば、ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ、ＹＥＲＶＯＹ、及びＴＥＣＥＮＴＲＩＱのうちの１又は複数による治療）で見られるよりも少ない副作用をもたらし二重効果を可能にする。例えば、本発明のヘテロ二量体タンパク質は、皮膚、胃腸管、腎臓、末梢神経系及び中枢神経系、肝臓、リンパ節、目、膵臓、並びに内分泌系を含む様々な組織及び臓器に影響を与える通常観察される免疫関連の有害事象（下垂体炎、大腸炎、肝炎、間質性肺炎、発疹、リウマチ性疾患など）を軽減又は防止する。さらに、本発明の局所投与、例えば、腫瘍内投与は、従来の免疫療法（例えば、ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ、ＹＥＲＶＯＹ、及びＴＥＣＥＮＴＲＩＱのうちの１又は複数による治療）で使用されるような、標準的な全身投与、例えば、静脈内注入で見られる有害事象を未然に防ぐ。

非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、及び関節内への注射及び注入）に適した剤形としては、例えば、溶液、懸濁液、分散液、及び乳濁液などが挙げられる。それらはまた、使用直前に無菌の注射可能な媒体に溶解又は懸濁することが可能な無菌の固体組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造され得る。それらは、例えば、当技術分野で公知の懸濁剤又は分散剤を含み得る。

本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）の投与量及び投与スケジュールは、これらに限定されないが、治療される疾患、対象の一般的な健康、及び投与する医師の裁量を含む様々なパラメーターに依存し得る。本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質を、それを必要とする対象への追加の薬剤の投与の前（例えば、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間前）、投与と同時、又は投与の後（例えば、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間後）に投与してもよい。様々な実施形態では、本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質及び追加の薬剤は、１分間、１０分、３０分間、１時間未満、１時間、１時間〜２時間、２時間〜３時間、３時間〜４時間、４時間〜５時間、５時間〜６時間、６時間〜７時間、７時間〜８時間、８時間〜９時間、９時間〜１０時間、１０時間〜１１時間、１１時間〜１２時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、又は４週間の間隔で投与される。

様々な実施形態では、本発明は、自然免疫応答を誘発するヘテロ二量体タンパク質と、適応免疫応答を誘発する別のヘテロ二量体タンパク質との同時投与に関する。そのような実施形態では、自然免疫応答を誘発するヘテロ二量体タンパク質は、適応免疫応答を誘発するヘテロ二量体タンパク質の投与の前、同時、又は後に投与され得る。例えば、前記ヘテロ二量体タンパク質は、１分間、１０分間、３０分間、１時間未満、１時間、１時間〜２時間、２時間〜３時間、３時間〜４時間、４時間〜５時間、５時間〜６時間、６時間〜７時間、７時間〜８時間、８時間〜９時間、９時間〜１０時間、１０時間〜１１時間、１１時間〜１２時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、又は４週間の間隔で投与され得る。例示的な実施形態では、自然免疫応答を誘発するヘテロ二量体タンパク質及び適応応答を誘発するヘテロ二量体タンパク質は、１週間の間隔で投与される、又は隔週で投与される（すなわち、自然免疫応答を誘発するヘテロ二量体タンパク質の投与の１週間後に適応免疫応答を誘発するヘテロ二量体タンパク質が投与されるなど）。

本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）の投与量は、症状の重症度、症状を治療又は予防するかどうか、ならびに治療される対象の年齢、体重、及び健康を含むいくつかの要因に依存し得る。さらに、特定の対象のゲノム薬理学（治療薬の薬物動態、薬力学、又は有効性プロファイルに対する遺伝子型の影響）の情報は、使用される投与量に影響を与える場合がある。さらに、正確な個々の投与量は、投与される薬剤の特定の組み合わせ、投与時間、投与経路、製剤の性質、排泄速度、治療される特定の疾患、障害の重症度、及び障害の解剖学的位置を含む様々な要因に応じてある程度調整可能である。投与量のある程度の変動が予想され得る。

本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）の非経口注射による投与について、投与量は、１日当たり約０．１ｍｇ〜約２５０ｍｇ、１日当たり約１ｍｇ〜約２０ｍｇ、又は１日当たり約３ｍｇ〜約５ｍｇであり得る。通常、経口又は非経口投与時、本明細書に記載の任意の薬剤の投与量は、１日当たり約０．１ｍｇ〜約１５００ｍｇ、１日当たり約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、１日当たり約０．５ｍｇ〜約５ｍｇ、又は１日当たり約２００ｍｇ〜約１，２００ｍｇ（例えば、１日当たり、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１，０００ｍｇ、約１，１００ｍｇ、約１，２００ｍｇ）であり得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）の投与は、１回の処置当たり約０．１ｍｇ〜約１５００ｍｇ、１回の処置当たり約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、１回の処置当たり約０．５ｍｇ〜約５ｍｇ、１回の処置当たり約２００ｍｇ〜約１，２００ｍｇ（例えば、１回の処置当たり、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１，０００ｍｇ、約１，１００ｍｇ、約１，２００ｍｇ）の投与量での非経口注射によるものである。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）の適切な投与量は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇ又は体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇ、例えば、体重１ｋｇ当たり、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約１．１ｍｇ、約１．２ｍｇ、約１．３ｍｇ、約１．４ｍｇ、約１．５ｍｇ、約１．６ｍｇ、約１．７ｍｇ、約１．８ｍｇ、約１．９ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇの範囲内であり、それらの間の全ての値と範囲を含む。

別の実施形態では、送達は、小胞、特にリポソームにおけるものであり得る（Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３、Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３−３６５（１９８９）を参照）。

本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、制御放出又は徐放手段によって、又は当業者に周知の送達デバイスによって投与され得る。例としては、これらに限定されないが、それぞれその全体が参照により本明細書に取り込まれる、米国特許第３，８４５，７７０号、第３，９１６，８９９号、第３，５３６，８０９号、第３，５９８，１２３号、第４，００８，７１９号、第５，６７４，５３３号、第５，０５９，５９５号、第５，５９１，７６７号、第５，１２０，５４８号、第５，０７３，５４３号、第５，６３９，４７６号、第５，３５４，５５６号、及び第５，７３３，５５６号に記載のものが挙げられる。そのような剤形は、例えば、ヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、ゲル、透過性膜、浸透圧システム、多層コーティング、微粒子、リポソーム、ミクロスフェア、又はそれらの組み合わせを使用して、様々な比率で所望の放出プロファイルを提供し、１又は複数の有効成分の制御放出又は持続放出を提供するために有用であり得る。有効成分の制御放出又は徐放は、これらに限定されないが、ｐＨの変化、温度の変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度又は利用可能性、水の濃度又は利用可能性、又はその他の生理学的条件若しくは化合物を含む、様々な条件によって刺激され得る。

別の実施形態では、高分子材料を使用してもよい（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照、またＬｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０、Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１、Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５を参照）。

別の実施形態では、制御放出システムを治療される標的領域の近くに配置してもよく、したがって、全身用量のごく一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３）による総説において検討されている他の制御放出システムを使用してもよい。

本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）の投与は、独立して、１日に１〜４回、１カ月に１〜４回、１年に１〜６回、又は２年、３年、４年、若しくは５年に１回であり得る。投与は、１日、又は１カ月、２カ月、３カ月、６カ月、１年、２年、３年の期間であり得、対象の生涯にわたって投与されてもよい。

本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）を利用する投与計画は、対象の種類、種、年齢、体重、性別、及び病状、治療される症状の重症度、投与経路、対象の腎機能又は肝機能、個人の薬理ゲノミクス構成、並びに使用される本発明の特定の化合物を含む、様々な要因に従って選択することができる。本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、１日１回の用量で投与してもよく、又は１日総投与量を１日２回、３回、又は４回の分割用量で投与してもよい。さらに、本明細書に記載の任意のヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）は、投与レジメン全体を通して断続的ではなく連続的に投与してもよい。

細胞及び核酸
様々な実施形態では、本発明は、本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質（第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含むヘテロ二量体タンパク質）をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。様々な実施形態では、前記発現ベクターはＤＮＡ又はＲＮＡを含む。様々な実施形態では、発現ベクターは哺乳動物発現ベクターである。

原核生物のベクター及び真核生物のベクターはいずれもヘテロ二量体タンパク質の発現に使用することができる。原核生物のベクターには、大腸菌配列に基づくコンストラクトが含まれる（例えば、Ｍａｋｒｉｄｅｓ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ １９９６，６０：５１２−５３８を参照）。大腸菌での発現に使用できる調節領域の非限定的な例としては、ｌａｃ、ｔｒｐ、ｌｐｐ、ｐｈｏＡ、ｒｅｃＡ、ｔａｃ、Ｔ３、Ｔ７、及びλＰ_Ｌが挙げられる。原核生物発現ベクターの非限定的な例としては、λｇｔ１１などのλｇｔベクターシリーズ（Ｈｕｙｎｈ ｅｔ ａｌ．，“ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｖｏｌ．Ｉ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，”１９８４，（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．），ｐｐ．４９−７８，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ）及びｐＥＴベクターシリーズ（Ｓｔｕｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ １９９０，１８５：６０−８９）が挙げられ得る。ただし、原核生物の宿主−ベクター系は、哺乳類細胞の翻訳後プロセシングの多くを実行できない。したがって、真核生物の宿主−ベクターシステムは特に有用であり得る。哺乳類の宿主細胞におけるヘテロ二量体タンパク質の発現には、様々な調節領域を使用することができる。例えば、ＳＶ４０初期プロモーター及びＳＶ４０後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスの末端反復配列（ＲＳＶ−ＬＴＲ）プロモーターを使用することができる。哺乳動物細胞において有用であり得る誘導性プロモーターとしては、これらに限定されないが、メタロチオネインＩＩ遺伝子、マウス乳がんウイルス糖質コルチコイド応答性末端反復配列（ＭＭＴＶ−ＬＴＲ）、β−インターフェロン遺伝子、及びｈｓｐ７０遺伝子に関連したプロモーターが挙げられる（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９８９，４９：２７３５−４２及びＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９０，１０：１６５−７５を参照）。熱ショックプロモーター又はストレスプロモーターもまた、組換え宿主細胞における融合タンパク質の発現を促進するために有利である場合がある。

いくつかの実施形態では、本発明の発現ベクターは、ヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）の少なくとも第１のポリペプチド鎖及び／又は第２のポリペプチド鎖をコードする核酸、又は発現制御領域に動作可能に連結されたその補体、若しくは哺乳類細胞で機能するその補体を含む。発現制御領域は、発現ベクターで形質転換されたヒト細胞において阻害剤及び／又は刺激剤が産生されるように、動作可能に連結された阻害剤及び／又は刺激剤をコードする核酸の発現を駆動することができる。

発現制御領域は、プロモーター及びエンハンサーなどの調節性ポリヌクレオチドであり（本明細書ではエレメントと呼ばれることもある）、動作可能に連結された核酸の発現に影響を与える。本発明の発現ベクターの発現制御領域は、ヒト細胞において動作可能に連結されたコード化核酸を発現することができる。ある実施形態では、細胞は腫瘍細胞である。別の実施形態では、細胞は非腫瘍細胞である。ある実施形態では、発現制御領域は、動作可能に連結された核酸に調節可能な発現を与える。シグナル（刺激とも称される）は、そのような発現制御領域に動作可能に連結された核酸の発現を増加又は減少させることができる。シグナルに応答して発現を増加させるそのような発現制御領域は、しばしば誘導性と呼ばれる。シグナルに応答して発現を減少させるそのような発現制御領域は、しばしば抑制性とよばれる。通常、そのようなエレメントによって与えられる増加又は減少の量は、存在するシグナルの量に比例し、シグナルの量が多いほど、発現の増減が大きくなる。

ある実施形態では、本発明は、合図（ｃｕｅ）に応答して一時的に高レベルの発現をもたらすことができる誘導性プロモーターの使用を意図している。例えば、腫瘍細胞の近くでは、そのような発現制御配列を含むヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）の発現ベクターで形質転換された細胞は、形質転換された細胞を適切な合図に曝露することによって、高レベルの薬剤を一時的に産生するように誘導される。例示的な誘導性発現制御領域としては、小分子化学物質などの合図で刺激される誘導性プロモーターを含む領域が挙げられる。特定の例が、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に取り込まれる、米国特許第５，９８９，９１０号、第５，９３５，９３４号、第６，０１５，７０９号、及び第６，００４，９４１号に見出される。

発現制御領域及び遺伝子座制御領域としては、天然プロモーター及びエンハンサーエレメントなどの完全長プロモーター配列、並びに完全長機能又は非変異機能の全部又は一部を保持する部分配列又はポリヌクレオチド変異体が挙げられる。本明細書で使用される場合、「機能的」という用語及びその文法的変形語は、核酸の配列、部分配列、又は断片に関して使用される場合、その配列が天然の核酸配列の１又は複数の機能（例えば、非変異体配列又は非修飾配列）を有することを意味する。

本明細書で使用される場合、「動作可能な連結」は、それらが意図された方法で機能することを可能にするように記載された構成要素の物理的並置を指す。核酸と動作可能に連結された発現制御エレメントの例では、制御エレメントが核酸の発現を調節するような関係である。典型的には、転写を調節する発現制御領域は、転写された核酸の５′末端の近く（すなわち、「上流」）に並置される。発現制御領域はまた、転写された配列の３′末端（すなわち、「下流」）又は転写物内（例えば、イントロン内）に位置してもよい。発現制御エレメントは、転写された配列から（例えば、その核酸から１００〜５００個、５００〜１０００個、２０００〜５０００個、又はそれ以上のヌクレオチド）離れた距離に配置されてもよい。発現制御エレメントの特定の例はプロモーターであり、これは通常、転写された配列の５′に位置する。発現制御エレメントの別の例は、転写された配列の５′若しくは３′、又は転写された配列内に位置し得るエンハンサーである。

ヒト細胞で機能する発現系は当技術分野で周知であり、ウイルス系が挙げられる。通常、ヒト細胞で機能するプロモーターは、哺乳類のＲＮＡポリメラーゼに結合し、コード配列のｍＲＮＡへの下流（３′）転写を開始することができる任意のＤＮＡ配列である。プロモーターは、通常、コード配列の５′末端の近位に配置される転写開始領域と、典型的には、転写開始部位の２５〜３０塩基対上流に位置するＴＡＴＡボックスを有する。ＴＡＴＡボックスは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩに正しい部位でＲＮＡ合成を開始するように指示すると考えられている。プロモーターはまた、典型的には、ＴＡＴＡボックスの上流の１００〜２００塩基対内に典型的に位置する上流プロモーターエレメント（エンハンサーエレメント）も含むことがある。上流のプロモーターエレメントは、転写が開始される速度を決定し、どちらの方向にも作用し得る。ウイルス遺伝子はしばしば高度に発現され、広い宿主範囲を有するため、プロモーターとして特に使用されるのは、哺乳動物ウイルス遺伝子由来のプロモーターである。例としては、ＳＶ４０初期プロモーター、マウス乳がんウイルスＬＴＲプロモーター、アデノウイルス主要後期プロモーター、単純ヘルペスウイルスプロモーター、及びＣＭＶプロモーターが挙げられる。

典型的には、哺乳動物細胞によって認識される転写終結配列及びポリアデニル化配列は、翻訳終止コドンの３′に位置する調節領域であり、したがって、プロモーターエレメントと共に、コード配列に隣接する。成熟ｍＲＮＡの３′末端は、部位特異的な翻訳後切断及びポリアデニル化によって形成される。転写ターミネーター及びポリアデニル化シグナルの例としては、ＳＶ４０に由来するものが挙げられる。イントロンはまた、発現コンストラクトに含まれ得る。

生細胞に核酸を導入するために利用可能な様々な技術がある。インビトロでの哺乳動物細胞への核酸の移入に適した技術としては、リポソームの使用、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ポリマーに基づくシステム、ＤＥＡＥ−デキストラン、ウイルス形質導入、リン酸カルシウム沈殿法などが挙げられる。インビボ遺伝子導入のために、リポソームを含む多くの技術及び試薬も使用され得る。キトサン及びゼラチンなどの天然ポリマーに基づく送達ビヒクル、及びウイルスベクターもまた、インビボ形質導入に適している。状況によっては、腫瘍細胞表面膜タンパク質に特異的な抗体又はリガンドなどの標的化剤を提供することが望ましい。リポソームを使用する場合、例えば、特定の細胞型に対して指向性を有するキャプシドタンパク質又はその断片、循環中に内部移行を受けるタンパク質に対する抗体、細胞内局在を標的とし、細胞内半減期を増強するタンパク質などのエンドサイトーシスに関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質は、標的化のため、及び／又は取り込みを促進するために使用することができる。である。受容体を介したエンドサイトーシスの技術は、例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２，４４２９−４４３２（１９８７）及びＷａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７，３４１０−３４１４（１９９０）に記載されている。

必要に応じて、例えば、組込み配列などの遺伝子送達剤も使用することが可能である。多数の組込み配列が当技術分野で公知である（例えば、Ｎｕｎｅｓ−Ｄｕｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２６：３９１−４０６，１９９８、Ｓａｄｗｏｓｋｉ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６５：３４１−３５７，１９８６、Ｂｅｓｔｏｒ， Ｃｅｌｌ，１２２（３）：３２２−３２５，２００５、Ｐｌａｓｔｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，ＴＩＧ １５：３２６−３３２，１９９９、Ｋｏｏｔｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４３：４１３−４３９，２００３を参照）。これらには、リコンビナーゼ及びトランスポザーゼが含まれる。例としては、Ｃｒｅ（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５０：４６７−４８６，１９８１）、ｌａｍｂｄａ（Ｎａｓｈ，Ｎａｔｕｒｅ，２４７，５４３−５４５，１９７４）、ＦＩｐ（Ｂｒｏａｃｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２９：２２７−２３４，１９８２）、Ｒ（Ｍａｔｓｕｚａｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１７２：６１０−６１８，１９９０）、ｃｐＣ３１（例えば、Ｇｒｏｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３５：６６７−６７８，２００４を参照）、マリナーファミリーのトランスポザーゼであるｓｌｅｅｐｉｎｇ ｂｅａｕｔｙ（Ｐｌａｓｔｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，上記参照）、並びにレトロウイルス又はレンチウイルスのＬＴＲ配列及びＡＡＶのＩＴＲ配列など、ウイルス統合をもたらす成分を有する、ＡＡＶ、レトロウイルス、及びアンチウイルスなどのウイルスを統合するための成分（Ｋｏｏｔｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，４３：４１３−４３９，２００３）が挙げられる。また、直接的かつ標的化された遺伝子統合戦略を使用して、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ９、ジンクフィンガー、ＴＡＬＥＮ、及びメガヌクレアーゼ遺伝子編集技術を含むキメラ融合タンパク質をコードする核酸配列を挿入してもよい。

ある態様では、本発明は、ウイルスベクターであるヘテロ二量体タンパク質（及び／又は追加の薬剤）を発現させるための発現ベクターを提供する。遺伝子治療に有用な多くのウイルスベクターが公知である（例えば、Ｌｕｎｄｓｔｒｏｍ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２１：１ １７，１２２，２００３を参照）。例示的なウイルスベクターとしては、アンチウイルス（ＬＶ）、レトロウイルス（ＲＶ）、アデノウイルス（ＡＶ）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、及びαウイルスから選択されるものが挙げられるが、他のウイルスベクターも使用され得る。インビボでの使用には、αウイルス及びアデノウイルスなど、宿主ゲノムに組み込まれなアデノウイルスターが使用に適している。αウイルスの例示的な種類としては、シンドビスウイルス、ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）ウイルス、及びセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）が挙げられる。インビトロでの使用には、レトロウイルス、ＡＡＶ、及びアンチウイルスなど、宿主ゲノムに組み込まれるウイルスベクターが適している。ある実施形態では、本発明は、インビボで固形腫瘍を本発明のウイルスベクターと接触させることを含む、インビボでヒト細胞を形質導入する方法を提供する。

様々な実施形態では、本発明は、本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質を含む発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。

発現ベクターは、本発明のヘテロ二量体タンパク質を産生するために宿主細胞に導入され得る。細胞は、例えば、インビトロで培養され得るか、又は遺伝子操作されてもよい。有用な哺乳動物宿主細胞としては、これらに限定されないが、ヒト、サル、及びげっ歯類に由来する細胞が挙げられる（例えば、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ ｉｎ“Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，”１９９０，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏを参照）。これらには、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓細胞株（例えば、ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胎児腎臓株（例えば、懸濁培養での増殖のためにサブクローン化された２９３細胞、２９３−ＥＢＮＡ細胞、又は２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ １９７７，３６：５９）、新生仔ハムスター腎臓細胞（例えば、ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞−ＤＨＦＲ（例えば、ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８０，７７：４２１６）、ＤＧ４４ ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ−Ｋ１細胞、マウスセルトリ細胞（Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ １９８０，２３：２４３−２５１）、マウス線維芽細胞（例えば、ＮＩＨ−３Ｔ３）、サル腎臓細胞（例えば、ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８７）、ヒト子宮頸がん細胞（例えば、ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（例えば、ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝細胞（例えば、ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（例えば、Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、及びマウス乳がん細胞（例えば、ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）が含まれる。本明細書に記載の融合タンパク質を発現するための例示的ながん細胞の種類としては、マウス線維芽細胞株 ＮＩＨ３Ｔ３、マウスルイス肺癌細胞株 ＬＬＣ、マウス肥満細胞腫細胞株 Ｐ８１５、マウスリンパ腫細胞株 ＥＬ４及びその卵白アルブミン発現株 Ｅ．Ｇ７、マウスメラノーマ細胞株 Ｂ１６Ｆ１０、マウス線維肉腫細胞株 ＭＣ５７、並びにヒト小細胞肺癌細胞株 ＳＣＬＣ＃２及びＳＣＬＣ＃７が挙げられる。

宿主細胞は、健康なヒト、がん患者、及び感染症の患者を含む正常又は罹患した対象、民間研究機関の保管細胞、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎなどの公的な培養コレクション、又は商業的供給業者から得ることができる。

インビトロ、エクスビボ、及び／又はインビボでのヘテロ二量体タンパク質の産生に使用できる細胞としては、限定されるものではないが、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞、血液細胞（Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球など）、様々な幹細胞又は前駆細胞、特に（例えば、骨髄から得られるような）造血幹細胞又は造血前駆細胞、臍帯血、末梢血、胎児肝臓などが挙げられる。細胞の種類の選択は、治療又は予防される腫瘍又は感染症の種類に依存し、当業者によって決定され得る。

Ｆｃ含有巨大分子（Ｆｃ融合タンパク質など）の製造及び精製は、製品間で若干の変更を加えて、標準化プロセスとなった。例えば、多くのＦｃ含有巨大分子は、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞（又はその変異体）又はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（又はその変異体）によって、あるいは場合によっては細菌法又は合成法によって産生される。製造後、ＨＥＫ細胞又はＣＨＯ細胞によって分泌されるＦｃ含有巨大分子は、プロテインＡカラムに結合することで精製され、その後、様々な方法を使用して「磨かれる」。一般的に言えば、精製されたＦｃ含有巨大分子は、液体の形で一定期間保存され、長期間凍結されるか、場合によっては凍結乾燥される。様々な実施形態では、本明細書で企図されるヘテロ二量体タンパク質の産生は、従来のＦｃ含有巨大分子と比較して、特有の特徴を有し得る。特定の例では、ヘテロ二量体タンパク質は、特定のクロマトグラフィー樹脂を使用して、又はプロテインＡの捕捉に依存しないクロマトグラフィー法を使用して精製され得る。他の実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、オリゴマー状態又は複数のオリゴマー状態で精製され、特定の方法を使用して特定のオリゴマー状態に濃縮され得る。理論に拘束されることなく、これらの方法には、特定の塩濃度、ｐＨ、添加剤組成などwp含む特定の緩衝液による処理が含まれる場合がある。他の例では、そのような方法は、あるオリゴマー状態を別のオリゴマー状態よりも優先する処理を含むことができる。本明細書で得られるヘテロ二量体タンパク質は、当技術分野で特定される方法を使用してさらに「磨く」ことができる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は非常に安定しており、広範囲のｐＨ曝露（ｐＨ３〜１２）に耐えることができ、多数回の凍結／解凍ストレス（３回を超える凍結／解凍サイクル）に耐えることができ、高温での長時間のインキュベーション（４０℃で２週間以上）に耐えることができる。他の実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、そのようなストレス条件下での分解、脱アミド化などの証拠もなく、未変化（intact）のままであることが示されている。

対象及び／又は動物
いくつかの実施形態では、対象及び／又は動物は、哺乳動物、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ウサギ、ヒツジ、又はサル、チンパンジー、若しくはヒヒなどの非ヒト霊長類である。他の実施形態では、対象及び／又は動物は、例えばゼブラフィッシュなどの非哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象及び／又は動物は、蛍光標識された（例えば、ＧＦＰを有する）細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、対象及び／又は動物は、蛍光細胞を含むトランスジェニック動物である。

いくつかの実施形態では、対象及び／又は動物はヒトである。いくつかの実施形態では、前記ヒトは小児である。他の実施形態では、前記ヒトは成人である。他の実施形態では、前記ヒトは老人である。他の実施形態では、前記ヒトは患者として称され得る。

特定の実施形態では、前記ヒトの年齢は、約０〜約６ヶ月齢、約６〜約１２ヶ月齢、約６〜約１８ヶ月齢、約１８〜約３６ヶ月齢、約１〜約５歳、約５〜約１０歳、約１０〜約１５歳、約１５〜約２０歳、約２０〜約２５歳、約２５〜約３０歳、約３０〜約３５歳、約３５〜約４０歳、約４０〜約４５歳、約４５〜約５０歳、約５０〜約５５歳、約５５〜約６０歳、約６０〜約６５歳、約６５〜約７０歳、約７０〜約７５歳、約７５〜約８０歳、約８０〜約８５歳、約８５〜約９０歳、約９０〜約９５歳、又は約９５〜約１００歳である。

他の実施形態では、前記対象は非ヒト動物であり、したがって、本発明は獣医学的使用に関する。特定の実施形態では、前記非ヒト動物は家庭用ペットである。別の特定の実施形態では、前記非ヒト動物は家畜である。

キット
本発明は、本明細書に記載の任意の薬剤の投与を単純化することができるキットを提供する。本発明の例示的なキットは、単位剤形で本明細書に記載される任意の組成物を含む。ある実施形態では、単位剤形は、本明細書に記載の任意の薬剤及び薬学的に許容される担体、希釈剤、非薬効成分、又はビヒクルを含む、無菌であり得る予め充填されるシリンジなどの容器である。キットは、本明細書に記載の任意の薬剤の使用を指示するラベル又は印刷された説明書をさらに含むことができる。キットには、開瞼器、局所麻酔薬、及び投与部位洗浄剤も含まれる場合がある。キットはまた、本明細書に記載の１種類又は複数種類の追加の薬剤をさらに含んでいてもよい。ある実施形態では、キットは、有効量の本発明の組成物及び有効量の別の組成物（本明細書に記載されるものなど）を含む容器を含む。

定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。

本明細書で使用されるように、具体的に述べられていないか、文脈から明らかでない限り、「又は」という用語は包括的であると理解され、「又は」と「及び」との両方を包含する。

本明細書で使用されるように、具体的に述べられていないか、文脈から明らかでない限り、「約」という用語は、当技術分野における通常の許容範囲内、例えば、平均の２標準偏差内であると理解される。「約」は、記載されている値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％以内であると理解される。文脈から別段明確でない限り、本明細書で提供される全ての数値は、「約」という用語によって修飾される。

記載された範囲は、記載された範囲の間にある値及び限界値である任意の値であると理解される。例として、１〜５の範囲内には、１、２、３、４、及び５が含まれ、１から１０の範囲内には、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０が含まれ、１〜１００の範囲内には、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び１００が含まれる。

別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が関係する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似又は同等の他のプローブ、組成物、方法、及びキットを本発明の実施に使用してもよいが、好ましい材料及び方法が本明細書に記載されている。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図するものではないことを理解されたい。

本明細書に記載の任意の態様又は実施形態は、本明細書に開示される任意の他の態様又は実施形態と組み合わせてもよい。

本発明は、特許請求の範囲に記載された本発明の範囲を限定しない以下の実施例にさらに記載される。

実施例１：ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質の構築及び特徴解析
電荷分極コアドメインによってＩＬ−３５に連結されたＩＬ６受容体（ＩＬ６Ｒ）を含むヘテロ二量体タンパク質を構築した（例えば、図１を参照）。具体的には、ヘテロ二量体タンパク質は、２種類のポリペプチド鎖を含む。第１のポリペプチド鎖は、電荷分極コアドメインによってＩＬ−３５サブユニットＩＬ１２αに連結されたＩＬ６ＲサブユニットＧｐ１３０を含む。第２のポリペプチド鎖は、電荷分極コアドメインによってＩＬ−３５サブユニットＩＬ２７βに連結されたＩＬ６ＲサブユニットＩＬ６Ｒαを含む。ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ６ＲＡ−β−ＩＬ２７βコンストラクト及びｇｐ１３０−α−ＩＬ１２αコンストラクトの両方を用いた二重一過性トランスフェクションによって哺乳動物細胞で発現された。クーマシー染色は、発現されたタンパク質の存在を示し、これは、抗ヒトＩｇＧウエスタンブロットを用いて、αコンストラクト及びβコンストラクトのおおよその分子量に対応するタンパク質を含むことが確認された（例えば、図２を参照）。

非還元条件下、還元条件下、及び還元かつ脱グリコシル化条件下での精製タンパク質の追加の分析により、ヘテロ二量体構築物の会合（assembly）のさらなる証拠が得られた。具体的には、ウエスタンブロットによる抗ヒトＦｃ及び抗ヒトＩＬ−６Ｒによる染色は、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５を含むα／βヘテロ二量体のおおよその分子量に対応する単一の高分子量バンドの存在を示した。このヘテロ二量体は、還元条件下で構成要素であるα鎖及びβ鎖に分解することができ、アミノ酸含有量のみに基づいて予測された分子量よりも高い見かけの分子量を示した。これは、グリコシル化部位の既知の存在のために予想されたものであり、α鎖及びβ鎖の脱グリコシル化により、ウエスタン分析によってそれらの個々のタンパク質が予測された分子量で見られた（例えば、図３を参照）。

さらに、ＳＤＳの存在はタンパク質の多量体化に寄与する電荷相互作用を妨害し得るため、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５コンストラクトをＢｌｕｅ Ｎａｔｉｖｅ ＰＡＧＥでさらに分析した。これらのデータは、分泌されたタンパク質の大部分（６０％と推定される）がα／βヘテロ二量体を表すことを示している（図３）。精製ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５タンパク質の濃度を分光光度分析によって確認した（例えば、図４を参照）。

ＣＨＯ細胞におけるｇｐ１３０−Ｆｃ（α）−ＩＬ１２Ａコンストラクト及びＩＬ６ＲＡ−Ｆｃ（β）−ＩＬ２７Ｂコンストラクトの二重トランスフェクションとそれに続くプロテインＡを用いた分泌タンパク質の精製後のＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を実施した。ＳＥＣによる単一のピークの出現は、２種類のコンストラクトにおける電荷分極リンカードメイン（Ｆｃ−α及びＦｃ−β）を使用することから意図された、単一種類のヘテロ二量体タンパク質のみが存在する可能性が高いことを示した（図５）。

会合したＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体が同族のリガンド（例えば、ＩＬ−６）と結合する能力を保持していること、及び会合したヘテロ二量体の各構成タンパク質（すなわち、ＩＬ−６ＲＡ、ｇｐ１３０、ＩＬ２７β／ＥＢＩ３、及びＩＬ１２α）に対する特異的抗体によって認識されることを確認するために、一連のＥＬＩＳＡアッセイを実施してＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体の特異的存在を実証した。図６〜図１５に示されるように、ＥＬＩＳＡアッセイの概略図は、各図の上部に示されている。概略図には、捕捉及び検出の戦略が示されている。それぞれの場合において、組換えＩＬ−６による捕捉及び抗ＩＬ−２７Ｂ／ＥＢＩ３による検出（図６）、組換えＩＬ−６による捕捉及び抗ヒトＩＬ−６ＲＡによる検出（図７）、抗ヒトｇｐ１３０による捕捉及び抗ＩＬ２７Ｂ／ＥＢＩ３による検出（図８）、抗ヒトｇｐ１３０による捕捉及び抗ヒトＩＬ−６ＲＡによる検出（図９）、抗ＩＬ−６ＲＡによる捕捉及び抗ＩＬ２７Ｂ／ＥＢＩ３による検出（図１０）、抗ＩＬ−６ＲＡによる検出及び抗ＩＬ−６ＲＡによる捕捉（図１１）、抗ヒトｐ３５による捕捉及び抗ＩＬ−２７Ｂ／ＥＢＩ３による検出（図１２）、抗ヒトｐ３５による捕捉及び抗ヒトＩＬ−６ＲＡによる検出（図１３）、抗ヒトｐ３５による捕捉及び抗ＩＬ２７Ｂ／ＥＢＩ３による検出（図１４）、及び抗ＩＬ２７Ｂ／ＥＢＩ３による捕捉及び抗ヒトＩＬ−６ＲＡによる検出（図１５）を介してＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体の存在が観察された。

例示的な電荷分極コアドメイン（負−正、すなわち「αコアドメイン」）の配列は、配列番号１６に提供され、ノブ・イン・ホール変異を含む例示的なαコアドメインは、配列番号２４に提供される。

例示的な電荷分極コアドメイン（正−負、すなわち「βコアドメイン」）の配列は、配列番号１７に提供され、ノブ・イン・ホール変異を含む例示的なβコアドメインは、配列番号２５に提供される。

例示的なポリペプチド鎖の成分の配列は、Ｇｐ１３０ ＥＣＤ（タイプ１）については配列番号１８に、ＩＬ−６ＲＡ ＥＣＤ（タイプ１）については配列番号１９に、ＩＬ−１２ａ（タイプ２、ＩＬ−３５の第１の部分）については配列番号２０に、及びＩＬ−２７ｂ（タイプ２、ＩＬ−３５の第２の部分）については配列番号２１に示されている。

例示的なＧｐ１３０−α−ＩＬ１２Ａ鎖は配列番号２２に記載された配列を有し、例示的なＩＬ６ＲＡ−β−ＩＬ２７Ｂ鎖は配列番号２３に記載された配列を有した。

別の実施形態において、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ６ＲＡ−α−ＩＬ１２ａ鎖（配列番号３４）及びＧｐ１３０−β−ＩＬ２７ｂ（配列番号３５）を含み得る。

実施例２：ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質のさらなる特徴解析
ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質を用いてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を実施した。ＳＥＣによる吸光度波長２１０ｎｍでの単一のピークの出現は、２種類のコンストラクトにおける電荷分極リンカードメイン（Ｆｃ−α及びＦｃ−β）を使用することから意図された、単一種類のタンパク質のみが存在する可能性が高いことを示した（図１６Ａ）。興味深いことに、２８０ｎｍの吸光度波長でのＳＥＣは、２番目の低分子量バンドを示した（図１６Ｂ）。

次に、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質をＩＬ−６ＳＩＮＫアッセイで使用した。ここでは、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質のＩＬ−６隔離能力を試験した。生存について外因性ＩＬ６に依存するＢ細胞株であるＤＳ−１細胞の培養物を、外因性ＩＬ６の存在下でＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質とともにインキュベートした。ＤＳ−１細胞がＩＬ６に曝露されていない場合、細胞死が起こる。したがって、これらの実験は、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質がＩＬ６を隔離し、ＤＳ−１細胞死を引き起こす可能性があるかどうかを判断するために実施した。

ＤＳ−１細胞をＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５の存在下でＩＬ−６に対するモル比を増加させながら２４時間培養した。細胞死は、カスパーゼ３／７活性（ルシフェラーゼの読み出し）によって測定した。

図１７は、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質（ロット’００及びロット’４８として識別される）が、ＤＳ−１細胞において細胞死を誘導できることを示している。実際、使用したロットに応じて、ヘテロ二量体タンパク質は、トシリズマブ（ＤＳ−１のＩＬ６への結合を阻害する抗ヒトＩＬ−６受容体モノクローナル抗体）よりも７〜２８１倍大きいＩＬ−６の隔離を示した。

次に、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質の機能を試験した。ＩＬ−３５は、ＣＤ４Ｔ細胞で非定型の調節表現型を誘導することが報告されており、ＩＬ−３５の産生に伴うＦｏｘＰ３の産生がほとんど又は全くないことを特徴としている。さらに、ＩＬ−３５はＴＧＦ−βとＩＬ−１０の産生を止めることが公知である。

ここで、磁気的に濃縮されたヒトナイーブＣＤ４Ｔ細胞を、単一のドナーから単離し、αＣＤ３／αＣＤ２８ビーズで活性化し、示された薬剤の存在下で５日間培養した（図１８に示す）。全ｍＲＮＡを単離し、ＲＴ−ｑＰＣＲを実施した。

図１８は、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質（ＨｄＡ’００として識別される）がＩＬ−３５（ＥＢ１３とＩＬ１２Ａの二量体である）産生を誘導することを示している。驚くべきことに、このヘテロ二量体タンパク質はＦｏｘＰ３の産生も増加させる。さらに、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質は、他の処理された薬剤とは異なり、細胞増殖を許容していた。ＩＬ−３５はＴＧＦ−β及びＩＬ−１０の産生を遮断することが公知であるが、ＩＬ−６Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質は検出可能なレベルのＩＬ−１０産生をもたらした（対象の２倍）。最終的に、ヘテロ二量体タンパク質はＩＬ−６産生に顕著な影響を与えない。

実施例３：ＩＬ−２１Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質の構築及び特徴解析
ＩＬ２１ｒ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＬ２ｒｇ−β−ＩＬ２７Ｂ鎖をコードするコンストラクトをＣＨＯ細胞に二重ルトランスフェクトした後、プロテインＡを用いて分泌タンパク質を精製した。ＩＬ２１ｒ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＬ２ｒｇ−β−ＩＬ２７Ｂ鎖が（細胞内又はインビトロで）組み合わされると、それらは本明細書でＩＬ−２１Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５と称されるヘテロ二量体タンパク質を形成する（図１９Ａ）。

発現したヘテロ二量体タンパク質についてウエスタンブロットを行った。これらにより、変性条件及び脱グリコシル化条件下で、ＩＬ２１ｒ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＬ２ｒｇ−β−ＩＬ２７Ｂ鎖の予測された分子量に対応するバンドが明らかになった（図１９Ｂ）。

ＩＬ−２１Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質を用いてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を実施した。ＳＥＣによる単一のピークの出現は、２種類のコンストラクトにおける電荷分極リンカードメイン（Ｆｃ−α及びＦｃ−β）を使用することから意図された、単一種類のタンパク質のみが存在する可能性が高いことを示した（図２０）。

これらの実験では、例示的な電荷分極コアドメイン（負−正、すなわち「αコアドメイン」）配列は配列番号１６に提供され、ノブ・イン・ホール変異を含む例示的なαコアドメインは配列番号２４に提供される。例示的な電荷分極コアドメイン（正−負、すなわち「βコアドメイン」）配列は配列番号１７に提供され、ノブ・イン・ホール変異を含む例示的なβコアドメインは配列番号２５に提供される。

本実施例で使用される例示的なポリペプチド鎖の成分の配列は、ＩＬ−２１ｒの細胞外ドメインについては配列番号２６に、ＩＬ２ＲＧの細胞外ドメインについては配列番号２７に、ＩＬ−１２ａについては配列番号２０に、及びＩＬ−２７ｂについては配列番号２１に記載されている。例示的なＩＬ２１ｒ−α−ＩＬ１２ａ鎖、配列番号２８に記載された配列を有し、例示的なＩＬ２ｒｇ−β−ＩＬ２７Ｂ鎖は配列番号２９に記載された配列を有していた。

別の実施形態において、ＩＬ−２１Ｒ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＬ２ｒｇ−α−ＩＬ２７Ｂ鎖（配列番号３６）及びＩＬ２１ｒ−β−ＩＬ１２ａ（配列番号３７）を含み得る。

実施例４：ＩＦＮγＲ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質の構築及び特徴解析
ＩＦＮｇＲ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＦＮＧＲ２−β−ＩＬ２７Ｂ鎖をコードするコンストラクトをＣＨＯ細胞に二重トランスフェクトした後、プロテインＡを用いて分泌タンパク質を精製した。ＩＦＮｇＲ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びＩＦＮＧＲ２−β−ＩＬ２７Ｂ鎖が（細胞内又はインビトロで）組み合わされると、それらは本明細書でＩＦＮγＲ−Ｆｃ−ＩＬ−３５と称されるヘテロ二量体タンパク質を形成する。

ＩＦＮｇＲ−α−ＩＬ１２ａ鎖及び各ブロットの下に示される抗体でプローブされたｈＩＦＮＧＲ２−β−ＩＬ２７Ｂ鎖を含むＩＦＮγＲ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質についてウエスタンブロットを実施した。これらは、変性条件及び脱グリコシル化条件下で、ＩＦＮｇＲ−α−ＩＬ１２ａ鎖及びｈＩＦＮＧＲ２−β−ＩＬ２７Ｂ鎖の予測された分子量に対応するバンドを明らかにした（図２１）。黄色の強調表示で示されているバンドは、非特異的バンドである。

ＩＦＮγＲ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質を用いてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を実施した。ＳＥＣによる単一のピークの出現は、２種類のコンストラクトにおける電荷分極リンカードメイン（Ｆｃ−α及びＦｃ−β）を使用することから意図された、単一種類のタンパク質のみが存在する可能性が高いことを示した（図２２）。

これらの実験では、例示的な電荷分極コアドメイン（負−正、すなわち「αコアドメイン」）配列は配列番号１６に提供され、ノブ・イン・ホール変異を含む例示的なαコアドメインは配列番号２４に提供される。例示的な電荷分極コアドメイン（正−負、すなわち「βコアドメイン」）配列は配列番号１７に提供され、ノブ・イン・ホール変異を含む例示的なβコアドメインは配列番号２５に提供される。

本実施例で使用される例示的なポリペプチド鎖の成分の配列は、ＩＦＮｇＲの細胞外ドメインについては配列番号３０に、ＩＦＮＧＲ２の細胞外ドメインについては配列番号３１に、ＩＬ−１２ａについては配列番号２０に、及びＩＬ−２７ｂについては配列番号２１に記載されている。例示的なＩＦＮｇＲ−α−ＩＬ１２ａ鎖は配列番号３２に記載された配列を有し、例示的なＩＦＮＧＲ２−β−ＩＬ２７Ｂ鎖は配列番号３３に記載された配列を有していた。

別の実施形態において、ＩＦＮγＲ−Ｆｃ−ＩＬ−３５ヘテロ二量体タンパク質は、ＩＦＮＧＲ２−α−ＩＬ２７Ｂ鎖（配列番号３９）及びＩＦＮｇＲ−β−ＩＬ１２ａ（配列番号３８）を含み得る。

均等物
本発明は、その特定の実施形態に関連して説明されてきたが、本発明はさらに変更可能であり、以下の発明（通常は本発明の原理）の変形、使用、又は適合を含むことを目的とし、本発明が関係する当技術分野内の公知又は慣習的な実践の範囲内にあり、前述及び添付の特許請求の範囲において以下のように説明される本質的な特徴に適用され得る、本開示からの逸脱が含まれることが理解されよう。

当業者は、日常的な実験のみを使用して、本明細書に具体的に記載された特定の実施形態と均等のものを多数認識するか、又は確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。

参照による取り込み
本明細書で参照される全ての特許及び刊行物は、それらの全体が参照により本明細書に取り込まれる。

本明細書で論じられる刊行物は、本出願の出願日の以前のそれらの開示の目的にのみ提供される。本明細書のいかなるものも、本発明が先行発明によりそのような刊行物に先行する権利がないことを認めるものと解釈されるべきではない。

本明細書で使用される場合、全ての見出しは単に効率性のためのものであり、いかなる方法でも開示を制限することを意図したものではない。個々のセクションの内容は、全てのセクションに等しく適用され得る。

Claims (42)

1. 第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含むヘテロ二量体タンパク質であって、
   前記第１のポリペプチド鎖は、アミノ末端において第１のタンパク質の第１のサブユニットを含み、前記第１のタンパク質の第１のサブユニットは、第１の電荷分極コアドメインによって、カルボキシ末端における第２のタンパク質の第１のサブユニットに連結されており、
   前記第２のポリペプチド鎖は、アミノ末端において前記第１のタンパク質の第２のサブユニットを含み、前記第１のタンパク質の第２のサブユニットは、第２の電荷分極コアドメインによって、カルボキシ末端における前記第２のタンパク質の第２のサブユニットに連結されており、
   前記第１のポリペプチド鎖及び前記第２のポリペプチド鎖は、前記第１の電荷分極コアドメイン及び前記第２の電荷分極コアドメイン上の正に帯電したアミノ酸残基と負に帯電したアミノ酸残基との間の静電相互作用を介してヘテロ二量体を形成する、
   前記ヘテロ二量体タンパク質。
2. 前記第１の電荷分極コアドメイン及び／又は前記第２の電荷分極コアドメインが、可動性アミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、又は抗体配列から所望により選択されるポリペプチドリンカーを含む、請求項１に記載のヘテロ二量体タンパク質。
3. 前記リンカーが合成リンカー、所望によりＰＥＧである、請求項２に記載のヘテロ二量体タンパク質。
4. 前記リンカーが、ＩｇＧ１、所望によりヒトＩｇＧ１に由来する、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む、請求項２に記載のヘテロ二量体タンパク質。
5. 前記リンカーが、ＩｇＧ４、所望によりヒトＩｇＧ４に由来する、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む、請求項２に記載のヘテロ二量体タンパク質。
6. 前記第１の電荷分極コアドメイン及び／又は前記第２の電荷分極コアドメインが、前記電荷分極コアドメインのアミノ末端及びカルボキシ末端に正に帯電したアミノ酸残基及び／又は負に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドをさらに含む、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
7. 前記正に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドが、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リシン（Ｌｙｓ）、及びアルギニン（Ａｒｇ）から選択される１又は複数のアミノ酸を含み得る、請求項６に記載のヘテロ二量体タンパク質。
8. 前記正に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドが、Ｙ_ｎＸ_ｎＹ_ｎＸ_ｎＹ_ｎ（式中、Ｘはアルギニン、ヒスチジン、又はリシンなどの正に帯電したアミノ酸であり、Ｙはセリン又はグリシンなどのスペーサーアミノ酸である）（配列番号１）、ＹＹ_ｎＸＸ_ｎＹＹ_ｎＸＸ_ｎＹＹ_ｎ（式中、Ｘはアルギニン、ヒスチジン、又はリシンなどの正に帯電したアミノ酸であり、Ｙはセリン又はグリシンなどのスペーサーアミノ酸である）（配列番号３）、及びＹ_ｎＸ_ｎＣＹ_ｎＸ_ｎＹ_ｎ（式中、Ｘはアルギニン、ヒスチジン、又はリシンなどの正に帯電したアミノ酸であり、Ｙはセリン又はグリシンなどのスペーサーアミノ酸である）（配列番号５）から選択される配列を含む、請求項７に記載のヘテロ二量体タンパク質。
9. 前記正に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドが、配列ＲＫＧＧＫＲ（配列番号１１）又はＧＳＧＳＲＫＧＧＫＲＧＳ（配列番号１２）を含む、請求項８に記載のヘテロ二量体タンパク質。
10. 前記負に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドが、アスパラギン酸（Ａｓｐ）及びグルタミン酸（Ｇｌｕ）から選択される１又は複数のアミノ酸を含み得る、請求項６記載のヘテロ二量体タンパク質。
11. 前記負に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドが、Ｙ_ｎＺ_ｎＹ_ｎＺ_ｎＹ_ｎ（式中、Ｚはアスパラギン酸又はグルタミン酸などの負に帯電したアミノ酸であり、Ｙはセリン又はグリシンなどのスペーサーアミノ酸である）（配列番号２）、ＹＹ_ｎＺＺ_ｎＹＹ_ｎＺＺ_ｎＹＹ_ｎ（式中、Ｚはアスパラギン酸又はグルタミン酸などの負に帯電したアミノ酸であり、Ｙはセリン又はグリシンなどのスペーサーアミノ酸である）（配列番号４）、及びＹ_ｎＺ_ｎＣＹ_ｎＺ_ｎＹ_ｎ（式中、Ｚはアスパラギン酸又はグルタミン酸などの負に帯電したアミノ酸であり、Ｙはセリン又はグリシンなどのスペーサーアミノ酸である）（配列番号６）から選択される配列を含む、請求項９に記載のヘテロ二量体タンパク質。
12. 前記正に帯電したアミノ酸残基を含むペプチドが、配列ＤＥＧＧＥＤ（配列番号１３）又はＧＳＧＳＤＥＧＧＥＤＧＳ（配列番号１４）を含む、請求項８に記載のヘテロ二量体タンパク質。
13. 前記第１の電荷分極コアドメイン及び／又は前記第２の電荷分極コアドメインが、水素結合及び／又はファンデルワールス力の増大によってヘテロ二量体化を促進するための１又は複数のアミノ酸変化を含む、請求項１〜請求項１２のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
14. 前記１又は複数のアミノ酸変化が、ノブ・イン・ホール（knob-in-hole）モチーフを作成する、請求項１３に記載のヘテロ二量体タンパク質。
15. 前記ノブ・イン・ホールモチーフは、前記第１の電荷分極コアドメインにおいて１又は複数のチロシン（Ｙ）残基を１又は複数のスレオニン（Ｔ）残基で置換する１又は複数のアミノ酸変化によって形成される、及び／又は前記第２の電荷分極コアドメインにおいて１又は複数のスレオニン（Ｔ）残基を１又は複数のチロシン（Ｙ）残基で置換する１又は複数のアミノ酸変化によって形成される、請求項１４に記載のヘテロ二量体タンパク質。
16. 前記ノブ・イン・ホールモチーフは、前記第２の電荷分極コアドメインにおいて１又は複数のチロシン（Ｙ）残基を１又は複数のスレオニン（Ｔ）残基で置換する１又は複数のアミノ酸変化によって形成される、及び／又は前記第１の電荷分極コアドメインにおいて１又は複数のスレオニン（Ｔ）残基を１又は複数のチロシン（Ｙ）残基で置換する１又は複数のアミノ酸変化によって形成される、請求項１４又は請求項１５に記載のヘテロ二量体タンパク質。
17. 前記電荷分極コアドメインの一方又は両方は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）、並びに所望によりＰ３２９Ｇから選択される１又は複数のエフェクター及び補体サイレンシング置換（effector and complement silencing substitution）を含む、請求項１３〜請求項１６のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
18. 前記電荷分極コアドメインの一方又は両方は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅから選択される１又は複数の半減期延長変異を含む、請求項１３〜請求項１７のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
19. 前記第１のタンパク質が表１から選択される、請求項１〜請求項１８のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
20. 前記第２のタンパク質が表１から選択される、請求項１〜請求項１９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
21. 前記第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質が、サイトカイン、増殖因子、及び／又はホルモンから選択される、請求項１〜請求項２０のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
22. 前記第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質が、インターロイキンである、請求項２１に記載のヘテロ二量体タンパク質。
23. 前記第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質が、ＩＬ１２αサブユニット及びＩＬ２７βサブユニットを含むＩＬ−３５である、請求項２２に記載のヘテロ二量体タンパク質。
24. 前記第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質が、サイトカインの受容体、増殖因子の受容体、及び／又はホルモンの受容体から選択される、請求項１〜請求項２３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
25. 前記第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質が、インターロイキンの受容体である、請求項２４に記載のヘテロ二量体タンパク質。
26. 前記第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質が、ＩＬ６Ｒαサブユニット及びｇｐ１３０サブユニットを含むＩＬ６受容体である、請求項２５に記載のヘテロ二量体タンパク質。
27. 前記第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質が、ＩＬ２１ｒサブユニット及びＩＬ２ｒｇサブユニットを含むＩＬ２１受容体である、請求項２５に記載のヘテロ二量体タンパク質。
28. 前記第１のタンパク質及び／又は前記第２のタンパク質が、ＩＦＮｇＲサブユニット及びＩＦＮＧＲ２サブユニットを含むＩＬ２１受容体である、請求項２５に記載のヘテロ二量体タンパク質。
29. 前記ヘテロ二量体タンパク質が、（ｉ）免疫阻害シグナルを低減又は排除すること、及び（ｉｉ）免疫刺激シグナルを増加又は活性化することの両方が可能である、請求項１〜請求項２８のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
30. 前記ヘテロ二量体タンパク質が、制御性Ｔ細胞に対するエフェクターＴ細胞の比率を増加させることができる、請求項１〜請求項２９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
31. 前記ヘテロ二量体タンパク質は、細胞傷害性Ｔ細胞の亜集団、エフェクターメモリーＴ細胞の亜集団、セントラルメモリーＴ細胞の亜集団、ＣＤ８^＋幹細胞メモリーエフェクター細胞の亜集団、ＴＨ１エフェクターＴ細胞の亜集団、ＴＨ２エフェクターＴ細胞の亜集団、ＴＨ９エフェクターＴ細胞の亜集団、ＴＨ１７エフェクターＴ細胞の亜集団、及び／又はＩＬ−２、ＩＬ−４、及び／又はＩＦＮ−γを分泌するエフェクターＴ細胞の亜集団を増加させることができる、及び／又は減少を防止することができる、請求項１〜請求項３０のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
32. 請求項１〜請求項３１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質を含む、医薬組成物。
33. 請求項１〜請求項３２のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質の前記第１のポリペプチド鎖及び／又は前記第２のポリペプチド鎖をコードする核酸を含む、発現ベクター。
34. 前記発現ベクターが、哺乳動物発現ベクターである、請求項３３に記載の発現ベクター。
35. 前記発現ベクターが、ＤＮＡ又はＲＮＡを含む、請求項３４に記載の発現ベクター。
36. 請求項３３〜請求項３５のいずれか一項に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
37. 請求項３２に記載の医薬組成物の有効量を、投与を必要とする対象に投与することを含む、がんを治療する方法。
38. 請求項３２に記載の医薬組成物の有効量を、投与を必要とする対象に投与することを含む、自己免疫疾患又は自己免疫障害を治療する方法。
39. 請求項３２に記載の医薬組成物の有効量を、投与を必要とする対象に投与することを含む、患者の免疫応答を調節する方法。
40. 前記患者のＴ細胞が、免疫刺激シグナルを有する細胞外ドメインによって活性化されている、請求項３７〜請求項３９のいずれか一項に記載の方法。
41. 前記患者が腫瘍を有し、１又は複数の腫瘍細胞による、免疫阻害シグナルを有する細胞外ドメインにより活性化される免疫抑制シグナルの伝達が防止されている、請求項３７〜請求項３９のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記自己免疫疾患又は前記自己免疫障害が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、糖尿病、強直性脊椎炎、シェーグレン症候群、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）、多発性硬化症、サルコイドーシス、乾癬、グレーブス病、橋本病、乾癬、過敏反応（例えば、アレルギー、花粉症、喘息、及び急性浮腫を引き起こすＩ型過敏反応）、及び血管炎から選択される、請求項３８に記載の方法。

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