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ES2579805T3 - Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína - Google Patents

Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína Download PDF

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ES2579805T3
ES2579805T3 ES05811919.9T ES05811919T ES2579805T3 ES 2579805 T3 ES2579805 T3 ES 2579805T3 ES 05811919 T ES05811919 T ES 05811919T ES 2579805 T3 ES2579805 T3 ES 2579805T3
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ES
Spain
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antibody
seq
cystel
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fraction
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ES05811919.9T
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English (en)
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Charles W. Eigenbrot
Jagath Reddy Junutula
Henry Lowman
Helga E. Raab
Richard Vandlen
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Genentech Inc
Original Assignee
Genentech Inc
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Publication date
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Abstract

Un proceso para producir un anticuerpo modificado por ingeniería genética con cisteína, que comprende uno o más aminoácidos cisteína libres que tienen un valor de reactividad del tiol en el intervalo de 0,6 a 1,0 y una secuencia en la cadena pesada seleccionada de las SEQ ID NOS: 10, 11, 13, 14, 31, 5 34, 37, 38 y 42: NSLRCEDTAV (SEQ ID NO:10) LVTVCSASTKGPS (SEQ ID NO:11) LVTVSSCSTKGPS (SEQ ID NO:13) LVTVSSACTKGPS (SEQ ID NO:14) HEDPEVKFNWYVDGCEVHNAKTKPR (SEQ ID NO:31) YKCKVCNKALP (SEQ ID NO:34) KGFYPCDIAVE (SEQ ID NO:37) PPVLDCDGSFF (SEQ ID NO:38) GQGTLVTVSACSTKGPSVFPL (SEQ ID NO:42) donde la cisteína en las SEQ ID NOS: 10, 11, 13, 14, 31, 34, 37, 38 y 42 es el aminoácido cisteína libre o una secuencia en la cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NOS: 17, 19, 20, 21, 22, 24, 25 y 27: SLSASCGDRVT (SEQ ID NO:17) EIKRTCAAPSV (SEQ ID NO:19) TCAAPCVFIFPP (SEQ ID NO:20) FIFPPCDEQLK (SEQ ID NO:21) DEQLKCGTASV (SEQ ID NO:22) WKVDNCLQSGN (SEQ ID NO:24) ALQSGCSQESV (SEQ ID NO:25) GLSSPCTKSFN (SEQ ID NO:27) donde la cisteína en las SEQ ID NOS: 17, 19, 20, 21, 22, 24, 25 y 27 es el aminoácido cisteína libre; en donde el proceso comprende sustituir uno o más residuos de aminoácidos de un anticuerpo parental con el residuo de aminoácido cisteína libre, donde el anticuerpo parental se une selectivamente a un antígeno y el anticuerpo modificado por ingeniería genética con cisteína se une selectivamente al mismo antígeno que el anticuerpo parental; y en donde el anticuerpo modificado por ingeniería genética con cisteína es un anticuerpo humano, quimérico o humanizado.

Description

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DESCRIPCION
Anticuerpos y conjugados modificados por ingenierla genetica con cistelna Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a procesos para producir anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna, conjugados de anticuerpo-farmaco formados entre un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna y un resto de farmaco, a composiciones farmaceuticas y usos medicos de los conjugados anticuerpo- farmaco y a metodos de cribado de anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna para detectar la reactividad del tiol.
Antecedentes de la invencion
La terapia con anticuerpos se ha establecido para el tratamiento dirigido de pacientes con cancer, afecciones inmunologicas y angiogenicas. En los intentos por descubrir dianas celulares eficaces para el diagnostico del cancer y la terapia con anticuerpos, los investigadores han buscado identificar polipeptidos transmembrana o de otro modo asociados a tumores que se expresan especlficamente en la superficie de las celulas cancerosas en comparacion con una celula o celulas normales, no cancerosas. La identificacion de dichos polipeptidos antlgenos de la superficie celular asociados a tumores, es decir, antlgenos asociados a tumores (TAA), ha dado lugar a la capacidad de dirigirse especlficamente a las celulas cancerosas para la destruccion a traves de terapias basadas en anticuerpos.
El uso de conjugados anticuerpo-farmaco (ADC), es decir, inmunoconjugados para la administracion local de agentes citotoxicos o citostaticos, es decir, farmacos para eliminar o inhibir celulas tumorales en el tratamiento del cancer (Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549; Wu et al (2005) Nature Biotechnology 23(9):1137-1146; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614; Niculescu-Duvaz and Springer (1997) Adv. Drug Del. Rev. 26:151-172; US 4975278) permite teoricamente la administracion dirigida del resto de farmaco a los tumores y la acumulacion intracelular en los mismos, donde la administracion sistemica de estos farmacos no conjugados puede dar lugar a niveles inaceptables de toxicidad para las celulas normales, ademas de para las celulas del tumor que se pretende eliminar (Baldwin et al (1986) Lancet pp. (Mar. 15, 1986):603-05; Thorpe, (1985) Antibody Carriers of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al (ed.s), pp. 475-506). Con ello se busca la eficacia maxima con un mlnimo de toxicidad. Los esfuerzos para disenar y perfeccionar los ADC se han centrado en la selectividad de los anticuerpos monoclonales (mAb), as! como en las propiedades de union a farmacos y de liberacion de farmacos (Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549). En estas estrategias se ha descrito la utilidad tanto de los anticuerpos policlonales como de los anticuerpos monoclonales (Rowland et al (1986) Cancer Immunol. Immunother., 21: 183-87). Los farmacos utilizados en estos metodos incluyen daunomicina, doxorrubicina, metotrexato y vindesina (Rowland et al (1986) supra). Las toxinas utilizadas en los conjugados anticuerpo-toxina incluyen toxinas bacterianas tales como la toxina de la difteria, toxinas de plantas tales como ricina, toxinas de molecula pequena, tales como geldanamicina (Mandler et al (2000) J. of the NaL Cancer Inst. 92( 19):1573-1581; Mandler et al (2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028; Mandler et al (2002) Bioconjugate Chem. 13:786-791), maitansinoides (documento EP 1391213; Liu et al (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93:8618-8623) y caliqueamicina (Lode et al (1998) Cancer Res. 58:2928; Hinman et al (1993) Cancer Res. 53: 3336-3342). Las toxinas pueden llevar a cabo sus efectos citostaticos y citotoxicos mediante mecanismos que incluyen la union a tubulina, union a ADN o la inhibicion de la topoisomerasa. Algunos farmacos citotoxicos tienden a ser inactivos o menos activos cuando se conjugan con grandes anticuerpos o ligandos de receptores de protelnas.
Un conjugado anticuerpo-radioisotopo ha sido aprobado. ZEVALIN® (ibritumomab tiuxetan, Biogen/Idec) esta compuesto de un anticuerpo monoclonal IgG1 kappa murino dirigido contra el antlgeno CD20 que se encuentra sobre la superficie de linfocitos B normales y malignos y el radioisotopo 111In o 90Y que esta unido por un enlace tiourea al quelante (Wiseman et al (2000) Eur. J. Nucl. Med. 27(7):766-77; Wiseman et al (2002) Blood 99(12):4336- 42; Witzig et al (2002) J. Clin. Oncol. 20(10):2453-63; Witzig et al (2002) J. Clin. OncoL 20(15):3262-69). Aunque ZEVALIN® tiene actividad contra el linfoma no Hodgkin (LNH) de linfocitos B, la administracion tiene como resultados citopenias intensas y prolongadas en la mayorla de los pacientes. MYLOTARG™ (gemtutzumab ozogamicina, Wyeth Pharmaceuticals), un conjugado de anticuerpo-farmaco compuesto por un anticuerpo anti-CD33 hu unido a caliqueamicina, se aprobo en 2000 para el tratamiento de la leucemia mieloide aguda mediante inyeccion (Drugs of the Future (2000) 25(7): 686; patentes US-4970198; US-5079233; US-5585089; US-5606040; US- 5693762; US-5739116; US-5767285; US-5773001). Cantuzumab mertansina (Immunogen, Inc.), un conjugado de anticuerpo-farmaco compuesto del anticuerpo anti-huC242 unido a traves de un enlace disulfuro SPP al resto de farmaco maitansinoide, Dm1 (Xie et al (2004) J. of Pharm. and Exp. Ther. 308(3): 1073-82), ha avanzado a la fase II de ensayos cllnicos para el tratamiento de canceres que expresan CanAg, tales como el cancer de colon, pancreatico, gastrico y otros. MLN-2704 (Millennium Pharm., BZL Biologics, Immunogen Inc.), un conjugado de anticuerpo-farmaco compuesto por el anticuerpo monoclonal anti-antlgeno de membrana especlfico de la prostata (PSMA) ligado al resto de farmaco maitansinoide, DM1, se encuentra en desarrollo para el potencial tratamiento de los tumores de prostata.
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Los peptidos auristatina, auristatina E (AE) y monometilauristatina (MMAE), analogos sinteticos de dolastatina (documento WO 02/088172), se han conjugado con: (i) anticuerpos monoclonales quimericos cBR96 (especificos de Lewis Y en carcinomas); (ii) cAC10 que es especifico de CD30 en tumores hematologicos (Klussman, et al (2004), Bioconjugate Chemistry 15 (4): 765-773; Doronina et al (2003) Nature Biotechnology 21 (7): 778-784; Francisco et al (2003) Blood 102(4):1458-65); documento US 2004/0018194; (iii) anticuerpos anti-CD20, tales como rituxan (WO 04/032828) para el tratamiento de los canceres que expresan el CD20 y afecciones inmunitarias; (iv) anticuerpos anti-EphB2R 2H9 y anti-IL-8 para el tratamiento de cancer colorrectal (Mao et al (2004) Cancer Research 64(3):781- 788); (v) anticuerpo E-selectina (Bhaskar et al (2003) Cancer Res. 63:6387-6394) y (vi) otros anticuerpos anti-CD30 (documento WO 03/043583). Las variantes de auristatina E se divulgan en los documentos US 5767237 y US 6124431. La monometil auristatina E conjugada con anticuerpos monoclonales se divulga en Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volumen 45, Numero 623 Resumen, presentado 28 de 2004. Los analogos de auristatina MMAE y MMAF se han conjugado con diversos anticuerpos (documento WO 2005/081711).
Los medios convencionales de union, es decir, la union a traves de enlaces covalentes, de un resto de farmaco a un anticuerpo conduce generalmente a una mezcla heterogenea de moleculas en las que los restos de farmaco estan asociados a un numero de sitios en el anticuerpo. Por ejemplo, normalmente los farmacos citotoxicos se han conjugado a anticuerpos a traves de los a menudo numerosos residuos de lisina de un anticuerpo, generando una mezcla heterogenea de conjugado anticuerpo-farmaco. Dependiendo de las condiciones de reaccion, la mezcla heterogenea contiene generalmente una distribucion de anticuerpos con de 0 a aproximadamente 8, o mas, restos de farmaco adjunto. Ademas, dentro de cada subgrupo de conjugados con una relacion particular entre numero entero de restos de farmaco y anticuerpo, es una mezcla potencialmente heterogenea en la que el resto de farmaco esta unido a varios sitios en el anticuerpo. Los metodos analiticos y de preparacion son inadecuados para separar y caracterizar las moleculas de especies de conjugado anticuerpo-farmaco dentro de la mezcla heterogenea resultante de una reaccion de conjugacion. Los anticuerpos son biomoleculas grandes, complejas y estructuralmente diversas, a menudo con muchos grupos funcionales reactivos. Sus reactividades con reactivos enlazadores e intermedios farmaco-enlazador dependen de factores tales como el pH, la concentracion, la concentracion de sal y los co- disolventes. Ademas, el proceso de conjugacion multietapa puede ser no reproducible debido a las dificultades en el control de las condiciones de reaccion y la caracterizacion de los reactivos y productos intermedios.
Los tioles de la cisteina son reactivos a pH neutro, a diferencia de la mayoria de las aminas, que estan protonadas y son menos nucleofilas a un pH cercano a 7. Ya que los grupos tiol libres (RSH, sulfhidrilo) son relativamente reactivos, las proteinas con residuos de cisteina a menudo existen en su forma oxidada como oligomeros unidos por disulfuro o tienen grupos disulfuro internos formando puentes. Las proteinas extracelulares en general no tienen tioles libres (Garman, 1997, Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach, Academic Press, Londres, en la pagina 55). La cantidad de tiol libre en una proteina se puede estimar mediante el ensayo de Ellman estandar. La inmunoglobulina M es un ejemplo de un pentamero unido por disulfuro, mientras que la inmunoglobulina G es un ejemplo de una proteina con puentes disulfuro internos que las subunidades entre si. En las proteinas, tales como esta, la reduccion de los enlaces disulfuro con un reactivo tal como ditiotreitol (DTT) o selenol (Singh et al (2002) Anal. Biochem. 304:147-156) es necesaria para generar el reactivo tiol libre. Este enfoque puede tener como resultado la perdida de la estructura terciaria de los anticuerpos y la especificidad de union al antigeno.
Los grupos tiol de la cisteina de los anticuerpos son generalmente mas reactivos, es decir, mas nucleofilos, hacia los reactivos de conjugacion electrofilos que los grupos amina o hidroxilo de los anticuerpos. Los residuos de cisteina se han introducido en proteinas por tecnicas de ingenieria genetica para formar enlaces covalentes con ligandos o para formar nuevos enlaces disulfuro intramoleculares (Better et al (1994) J. Biol. Chem. 13:9644-9650; Bernhard et al (1994) Bioconjugate Chem. 5:126-132; Greenwood et al (1994) Therapeutic Immunology 1:247-255; Tu et al (1999) Proc. Natl. Acad. Sci USA 96:4862-4867; Kanno et al (2000) J. of Biotechnology, 76:207-214; Chmura et al (2001) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 98(15):8480-8484; documento US 6248564). Sin embargo, el diseno de los grupos tiol de la cisteina mediante la mutacion de los diversos residuos de aminoacidos de una proteina en aminoacidos de cisteina es potencialmente problematico, particularmente en el caso de los residuos no emparejados (Cis libre) o en los que son relativamente accesibles para la reaccion u oxidacion. En las soluciones concentradas de la proteina, ya sea en el periplasma de E. coli, los sobrenadantes de cultivo, o en la proteina parcialmente o totalmente purificada, los residuos de Cis no emparejados en la superficie de la proteina pueden unirse y oxidarse para formar disulfuros intermoleculares y, por lo tanto, dimeros o multimeros de las proteinas. La formation de un dimero de disulfuro hace que la nueva Cis no sea reactiva para la conjugacion con un farmaco, ligando u otro marcador. Por otra parte, si la proteina oxidativamente forma un enlace disulfuro intramolecular entre la Cis de nuevo diseno y un residuo de Cis existente, ambos grupos de Cis no estan disponibles para la participation sitio activo y las interacciones en el sitio activo. Ademas, la proteina puede volverse inactiva o no especifica, por un mal plegamiento o la perdida de estructura terciaria (Zhang et al (2002) Anal. Biochem. 311:1-9).
El documento WO 2004/050849 se refiere a inmunotoxinas y su uso en el tratamiento de tumores.
El documento WO 03/049704 se refiere a anticuerpos para tratar el cancer.
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El documento WO 03/060080 se refiere a los dominios variables de la inmunoglobulina canina, anticuerpos caninizados y metodos para su fabricacion y su uso.
El documento WO 94/06474 se refiere a un anticuerpo para el tratamiento contra Helicobacter pylori.
Shopes B., 1993, Molecular Immunology, Elmsford, NY, US, 30(6): 603-609 se refiere a una IgG humana disenada por ingenierla genetica con una flexibilidad limitada que inicia completamente la citolisis a traves del complemento.
Hafner F. T. et al, 2000, Analytical Chemistry, 72(23): 5779-5786, se refiere a un inmunoensayo no competitivo de pequenos analitos a nivel femtomolar por electroforesis capilar con sonda de afinidad y su uso en el analisis directo de la digoxina usando un inmunorreactivo scFv marcado de manera uniforme.
Renard M. et al, 2003, Journal of Molecular Biology, Londres, GB, 326(1): 167-175, se refiere a la derivacion de restricciones topologicas de datos funcionales para el diseno de inmunosensores fluorescentes sin reactivos.
Corneillie T. M. et al, 2004, Bioconjugate Chemistry, 15(6):1389-1391 se refiere a un anticuerpo monoclonal 2D12.5 mutante para G54C que tiene una mayor afinidad por los complejos de metales debilmente electrofilos.
Trail P. A. et al, 2003, Cancer Immunology, Immunotherapy: CII, 52(5): 328-337, se refiere a inmunoconjugados de anticuerpos monoclonales con farmaco para el tratamiento especlfico de cancer.
Schelte P. et al, 2000, Bioconjugate Chemistry, ACS, Washington, DC, US, 11(1): 118-123, se refiere a la reactividad diferencial de las funciones de maleimida y bromoacetilo con tioles y su aplicacion a la preparation de construcciones de diepltopos liposomales.
Lyons A. et al., 1990, Protein Engineering, Oxford University Press, Surrey, GB, 3(8):703-709, se refiere a la union especlfica del sitio a anticuerpos recombinantes a traves de la introduction de residuos de cistelna.
Wright S. K. et al, 1998, Analytical Biochemsitry, 265(1):8-14, se refiere a una evaluation de los metodos para la cuantificacion de las cistelnas en las protelnas.
Sumario
En consecuencia, en una realization, la presente invention proporciona un proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna que comprende uno o mas aminoacidos de cistelna libres que tiene un valor de reactividad del tiol en el intervalo de 0,6 a 1,0 y una secuencia en la cadena pesada seleccionada de las SEC ID NOS: 10, 11, 13, 14, 31, 34, 37, 38 y 42:
NSLRCEDTAV (SEQ ID NO:10)
LVTVCSASTKGPS (SEQ ID NO:11)
LVTVSSCSTKGPS (SEQ ID NO:13)
LVTVSSACTKGPS (SEQ ID NO:14)
HEDPEVKFNWYVDGCEVHNAKTKPR (SEQ ID NO:31)
YKCKVCNKALP (SEQ ID NO:34)
KGFYPCDIAVE (SEQ ID NO:37)
PPVLDCDGSFF (SEQ ID NO:38)
GQGTLVTVSACSTKGPSVFPL (SEQ ID NO:42)
donde la cistelna en las SEQ ID NOS: 10, 11, 13, 14, 31, 34, 37, 38 y 42 es el aminoacido cistelna libre; o una secuencia en la cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NOS: 17, 19, 20, 21, 22, 24, 25 y 27:
SLSASCGDRVT (SEQ ID NO:17)
EIKRTCAAPSV (SEQ ID NO:19)
TCAAPCVFIFPP (SEQ ID NO:20)
FIFPPCDEQLK (SEQ ID NO:21)
DEQLKCGTASV (SEQ ID NO:22)
WKVDNCLQSGN (SEQ ID NO:24)
ALQSGCSQESV (SEQ ID NO:25)
GLSSPCTKSFN (SEQ ID NO:27)
donde la cistelna en las SEQ ID NOS: 17, 19, 20, 21, 22, 24, 25 y 27 es el aminoacido cistelna libre; en el que el proceso comprende sustituir uno o mas residuos de aminoacidos de un anticuerpo parental con el residuo de aminoacido cistelna libre, donde el anticuerpo parental se une selectivamente a un antlgeno y el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna se une selectivamente al mismo antlgeno que el anticuerpo parental; y en el que el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna es un anticuerpo humano, quimerico o humanizado.
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El anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna puede ser mas reactivo que el anticuerpo parental con el reactivo que reacciona con el tiol.
Los residuos de aminoacidos cistelna libres pueden estar situados en las cadenas pesadas o ligeras, o en los dominios constantes o variables. Los fragmentos de anticuerpos, por ejemplo, Fab, tambien se puede manipular con uno o mas aminoacidos de cistelna en sustitucion de los aminoacidos del fragmento de anticuerpo, para formar fragmentos de anticuerpos modificados con cistelna.
El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna puede comprender:
(i) mutagenizar una secuencia de acido nucleico que codifica el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna;
(ii) expresar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna; y
(iii) aislar y purificar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna.
El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna puede comprender expresar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna en una partlcula viral seleccionada de un fago o una partlcula de fagemido.
En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona un metodo de cribado de anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna en cuanto a la reactividad del tiol que comprende:
(a) introducir uno o mas aminoacidos de cistelna en un anticuerpo parental con el fin de generar un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna;
(b) hacer reaccionar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna con un reactivo de afinidad reactivo con tiol para generar un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna marcado por afinidad, en el que el reactivo de afinidad reactivo con tiol comprende un resto de biotina y
(c) medir la union del anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna marcado por afinidad a un medio de captura, donde el medio de captura comprende estreptavidina.
En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona un compuesto conjugado anticuerpo-farmaco que comprende un anticuerpo (Ab) modificado por ingenierla genetica con cistelna que comprende un aminoacido cistelna libre que tiene un valor de reactividad del tiol en el intervalo de 0,6 a 1,0; y un resto de farmaco (D) seleccionado de un maitansinoide, una auristatina, una dolastatina y una caliqueamicina, en el que el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna esta unido a traves de uno o mas aminoacidos de cistelna libres mediante un resto enlazador (L) con D; teniendo el compuesto la Formula I:
Ab-(L-D)p I
donde p es 1, 2, 3, o 4; y en el que el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna se prepara por un proceso que comprende sustituir uno o mas residuos de aminoacidos de un anticuerpo parental con el uno o mas aminoacidos cistelna libres, donde el anticuerpo parental se une selectivamente a un antlgeno y el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna se une selectivamente al mismo antlgeno que el anticuerpo parental, en el que el compuesto conjugado anticuerpo-farmaco comprende:
una o mas secuencias de la cadena pesada seleccionada de las SEQ ID NOS: 10, 11, 13, 14, 31, 34, 37, 38 y 42:
NSLRCEDTAV (SEQ ID NO:10)
LVTVCSASTKGPS (SEQ ID NO:11)
LVTVSSCSTKGPS (SEQ ID NO:13)
LVTVSSACTKGPS (SEQ ID NO:14) HEDPEVKFNWYVDGCEVHNAKTKPR (SEQ ID NO:31) YKCKVCNKALP (SEQ ID NO:34)
KGFYPCDIAVE (SEQ ID NO:37)
PPVLDCDGSFF (SEQ ID NO:38) GQGTLVTVSACSTKGPSVFPL (SEQ ID NO:42)
donde la cistelna en las SEQ ID NOS: 10, 11,13, 14, 31, 34, 37, 38 y 42 es el aminoacido cistelna libre; o una o mas secuencias de la cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NOS: 17, 19, 20, 21, 22, 24, 25 y 27:
SLSASCGDRVT (SEQ ID NO:17)
EIKRTCAAPSV (SEQ ID NO:19)
TCAAPCVFIFPP (SEQ ID NO:20)
FIFPPCDEQLK (SEQ ID NO:21)
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WKVDNCLQSGN (SEQ ID NO:24)
ALQSGCSQESV (SEQ ID NO:25)
GLSSPCTKSFN (SEQ ID NO:27)
donde la cistelna en las SEQ ID NOS: 17, 19, 20, 21, 22, 24, 25 y 27 es el aminoacido cistelna libre y en el que el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna es un ser anticuerpo humano, quimerico o humanizado.
Ejemplos de restos de farmaco incluyen DM1, MMAE y MMAF.
El conjugado anticuerpo-farmaco de Formula I puede comprender ademas una secuencia de peptido de union a albumina (ABP); teniendo la composicion la Formula la:
ABP-Ab-(L-D)p Ia
Otro aspecto de la invencion es una composicion que comprende un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna o un conjugado anticuerpo-farmaco modificado por ingenierla genetica con cistelna y un vehlculo o diluyente fisiologicamente o farmaceuticamente aceptable. Esta composicion para uso terapeutico es esteril y se puede liofilizar.
Otro aspecto de la invencion incluye los usos medicos de los conjugados anticuerpo-farmaco y las composiciones divulgadas en la presente memoria. Las composiciones farmaceuticas incluyen combinaciones de compuestos de Formula I y uno o mas agentes quimioterapeuticos.
En algunos aspectos, la presente invencion incluye usos medicos de los conjugados anticuerpo-farmaco para el tratamiento del cancer, por ejemplo donde cuando el cancer se caracteriza por la sobreexpresion de un receptor ErbB mediante el uso de un conjugado anticuerpo-farmaco de un anticuerpo anti-ErbB.
Como alternativa o adicionalmente, la presente invencion incluye usos medicos de los conjugados de la presente invencion para el tratamiento del cancer, por ejemplo, por inhibicion del crecimiento de celulas tumorales que sobreexpresan un receptor del factor de crecimiento seleccionado del grupo que consiste en el receptor de HER2 y el receptor de EGF que comprende administrar a un paciente un compuesto conjugado anticuerpo-farmaco que se une especlficamente a dicho receptor del factor de crecimiento y un agente quimioterapeutico en el que dicho conjugado anticuerpo-farmaco y dicho Como alternativa o adicionalmente, la presente invencion incluye usos medicos de los conjugados de la presente invencion para el tratamiento del cancer en un paciente humano, por ejemplo, un paciente humano susceptible de padecer o diagnosticado con una afeccion caracterizada por la sobreexpresion del receptor ErbB2, que comprende administrar una cantidad eficaz de una combinacion de un compuesto conjugado anticuerpo-farmaco y un agente quimioterapeutico.
Breve descripcion de los dibujos
La Figura 1A muestra una representacion tridimensional del fragmento de anticuerpo hu4D5Fabv7 derivada de las coordenadas de la cristalografla de rayos X. Las posiciones de la estructura de los ejemplos de residuos de Cis modificados por ingenierla genetica de las cadenas pesada y ligera se numeran (de acuerdo con un sistema de numeracion secuencial).
La Figura 1B muestra un esquema de numeracion secuencial (fila superior), comenzando en el extremo N- terminal en comparacion con el esquema de numeracion de Kabat (fila inferior) para 4D5v7fabH. Las inserciones de la numeracion de Kabat se indican por a, b, c.
Las figuras 2A y 2B muestran las mediciones de union con la deteccion de la absorbancia a 450 nm de hu4D5Fabv8 y de las variantes de fago (TioFab) con Cis mutante de hu4D5Fabv8: (A) fago no biotinilado- hu4D5Fabv8 y (B) fago biotinilado-hu4D5Fabv8 (B) mediante el ensayo PHESELECTOR de interacciones con BSA (barra blanca), HER2 (barra rayada) o estreptavidina (barra solida).
Las Figuras 3A y 3B muestran las mediciones de union con la deteccion de la absorbancia a 450 nm de hu4D5Fabv8 (izquierda) y las variantes (TioFab) con Cis mutante de hu4D5Fabv8: (A) fago no biotinilado- hu4D5Fabv8 y (B) fago biotinilado-hu4D5Fabv8 mediante el ensayo PHESELECTOR para las interacciones con: BSA (barra blanca), HER2 (barra rayada) y estreptavidina (barra rellena). Las variantes de la cadena ligera estan en el lado izquierdo y las variantes de la cadena pesada estan en el lado derecho. Reactividad del tiol = DO450 nm para la union de estreptavidina + DO450 nm para la union a HER2 (anticuerpo).
La Figura 4A muestra los valores de accesibilidad de superficie fraccionarias de residuos de hu4D5Fabv8 de tipo silvestre. Los sitios de las cadenas ligeras estan en el lado izquierdo y los sitios de las cadenas pesadas estan en el lado derecho.
La Figura 4B muestra las mediciones de union con la deteccion de la absorbancia a 450 nm de las variantes hu4D5Fabv8 biotinilado (izquierda) y mutante hu4D5Fabv8 Cis (TioFab) para las interacciones con HER2 (dla 2), estreptavidina (SA) (dla 2), HER2 (dla 4) y SA (dla 4). Las variantes Phage-hu4D5Fabv8 Cis se aislaron y se almacenaron a 4 °C. La conjugacion con biotina se llevo a cabo el dla 2 dlas o el dla 4 seguido de los analisis PHESELECTOR para controlar su interaccion con Her2 y estreptavidina como se describe en el Ejemplo 2 y
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probar la estabilidad de los grupos tiol reactivos en las variantes TioFab manipuladas.
La Figura 5 muestra las mediciones con la deteccion de la absorbancia a 450 nm del conjugado biotina- maleimida-hu4D5Fabv8 (A121C) y el hu4D5Fabv8 de tipo silvestre no biotinilado para la union a estreptavidina y HER2. Cada Fab se ensayo a 2 ng y 20 ng.
La Figura 6 muestra el analisis de ELISA con la deteccion de la absorbancia a 450 nm de ABP-hu4DSFabv8 biotinilado de tipo silvestre (wt) y los mutantes con cistelna de ABP-hu4D5Fabv8, V110C y A121C, para la union con albumina de conejo, estreptavidina (SA) y HER2.
La Figura 7 muestra el analisis ELISA con deteccion de la absorbancia a 450 nm de mutantes con cistelna ABP- hu4D5Fabv8 biotinilado (variantes TioFab): (de izquierda a derecha) variantes con una unica Cis ABP-V110C, ABP-A121C y variantes con doble Cis ABP-V110C-A88C y ABP -V110C-A121C para la union con albumina de conejo, HER2 y estreptavidina (SA) y probando con Fab-HRP o SA-HRP.
La Figura 8 muestra la union del fago TioFab biotinilado y un anticuerpo anti-fago HRP a HER2 (arriba) y estreptavidina (abajo).
La Figura 9 muestra un ejemplo de representacion de una union de un conjugado ABP-protelna de fusion farmaco-TioFab que se une al antlgeno del receptor HER2. ABP = protelna de union a la albumina.
La Figura 10 muestra un ensayo de proliferacion celular in vitro de celulas SK-BR-3 tratadas con -•-trastuzumab; -▲- trastuzumab-SMCC-DM1 y -♦- mutante con cistelna hu4D5Fabv8 - (A121C)-BMPEO-DM1.
La Figura 11 muestra un ensayo de proliferacion celular in vitro de celulas SK-BR-3 tratadas con: trastuzumab -o- ; -•-trastuzumab-SMCC-DM1; y -□- mutante con cistelna hu4D5Fabv8 (V110C) -BMPEO-DM1.
La Figura 12 muestra el cambio medio del volumen del tumor con el tiempo en ratones desnudos atlmicos con aloinjertos de tumor mamario MMTV-HER2 Fo5, administrados en dla 0 con: 'S’ Vehlculo (tampon); -■- ABP- mutante con cistelna hu4D5Fabv8 (cadena ligera V110C)-DM1; y -•- ABP-mutante con cistelna hu4D5Fabv8 (cadena pesada de A121C)-DM1.
La Figura 13A muestra una representacion animada de la union del anticuerpo biotinilado a HER2 inmovilizado con la union del anticuerpo secundario marcado con HRP para la deteccion de la absorbancia.
La Figura 13B muestra las mediciones de union con la deteccion de la absorbancia a 450 nm de variantes de tio- trastuzumab conjugados con biotina-maleimida y trastuzumab de tipo silvestre no biotinilado en la union a HER2 inmovilizado. De izquierda a derecha: V110C (una Cis), A121C (una Cis). V110C1A121C (Cis dobles) y trastuzumab. Cada variante tio IgG y trastuzumab se probo a 1,10 y 100 ng.
La figura 14A muestra una representacion animada de la union del anticuerpo biotinilado a HER2 inmovilizado con la union de biotina a anti-IgG-HRP para la deteccion de absorbancia.
La Figura 14B muestra las mediciones de union con la deteccion de la absorbancia a 450 nm de las de variantes tio-trastuzumab conjugadas con biotina-maleimida biotina y trastuzumab de tipo silvestre no biotinilado en la union a estreptavidina inmovilizada. De izquierda a derecha V110C (una Cis), A121C (una Cis), V110C/A121C (Cis dobles) y trastuzumab. Cada variante de tio IgG y trastuzumab se probo a 1,10, y 100 ng.
La Figura 15 muestra el proceso general para preparar un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna (TioMab) expresado a partir del cultivo de celulas para la conjugacion.
La Figura 16 muestra el analisis de electroforesis en gel de poliacrilamida desnaturalizante no reductor (arriba) y reductor (abajo) de las variantes Fc TioMab 2H9 (de izquierda a derecha, carriles 1-9): A339C; S337C; S324C; A287C; V284C; V282C; V279C; V273C, y 2H9 de tipo silvestre despues de la purificacion sobre Protelna A inmovilizada El carril de la derecha es una escalera de marcador de tamano, que indica que las protelnas intactas son alrededor de 150 kDa, los fragmentos de cadena pesada de 50 kDa y los fragmentos de cadena ligera de 25 kDa.
La Figura 17A muestra el analisis de electroforesis en gel de poliacrilamida desnaturalizante no reductor (izquierda) y reductor (+ DTT) (derecha) de las variantes TioMab 2H) (de izquierda a derecha, carriles 1-4): L- V15C; S179C; S375C; S400C, despues de la purificacion sobre Protelna A inmovilizada
La Figura 17B muestra el analisis de electroforesis en gel de poliacrilamida desnaturalizante no reductor (izquierda) y reductor (+ DTT) (derecha) de las variantes TioMab 2H9 y 3A5 TioMab despues de la purificacion sobre Protelna A inmovilizada
La Figura 18 muestra el analisis de transferencia Western de variantes Tio-IgG biotiniladas. Las variantes TioMab 2H9 y 3A5 se analizaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida desnaturalizante reducida, las protelnas se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa. La presencia de anticuerpo y biotina conjugada se probaron con anti-IgG-HRP (arriba) y estreptavidina-HRP (abajo), respectivamente. Carril 1: 3A5 H-A121C. Carril 2: 3A5 L- V110C. Carril 3: 2H9H-A121C. Carril 4: 2H9 L-V110C. Carril 5: 2H9 tipo silvestre.
La Figura 19 muestra el analisis de ELISA para la union de las variantes 2H9 biotiniladas a estreptavidina probando con anti-IgG-HRP y midiendo la absorbancia a 450 nm (diagrama de barras superior). El diagrama esquematico inferior representa el diseno experimental utilizado en el analisis ELISA.
La Figura 20 muestra un ensayo de proliferacion celular in vitro de celulas SK-BR-3 tratadas con: -•- trastuzumab; -A-trastuzumab-SMCC-DM1 con una carga de farmaco de 3,4 DM1/Ab; y -♦- tio-trastuzumab (A121C)-BMPEO-DM1 con una carga de farmaco de 1,6 DM1/Ab.
La Figura 21A muestra un ensayo de proliferacion celular in vitro de celulas HT 1080EphB2 tratadas con: -O- anti-EphB2R 2H9 parental; y -0-tio 2H9 (A121C) BMPEO-DM1.
La Figura 21B muestra un ensayo de proliferacion celular in vitro de celulas BT 474 tratadas con: -O- anti- EphB2R 2H9 parental; y -□- tio 2H9 (A121C) BMPEO-DM1.
La Figura 22 muestra un ensayo de proliferacion celular in vitro de celulas PC3/neo tratadas con: -♦- 3A5 anti
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MUC16-SMCC-DM1; y -■- tio 3A5 (A121C) BMPEO-DM1.
La Figura 23 muestra un ensayo de proliferation celular in vitro de celulas PC3/MUC16 tratadas con: -♦- 3A5 anti MUC16-SMCC-DM1; y - ■- tio 3A5 (A121C) BMPEO-DM1.
La Figura 24 muestra un ensayo de proliferacion celular in vitro de celulas OVCAR-3 tratadas con: -♦- 3A5 anti MUC16-SMCC-DM1; y -■- tio 3A5 (A121C) BMPEO-DM1.
La Figura 25 muestra el cambio de volumen medio del tumor de mas de 21 dias en ratones desnudos atimicos con aloinjertos de tumor mamario MMTV-HER2 Fo5, despues de una sola dosis en el Dia 0 con: 'S’ vehiculo (tampon); -•- trastuzumab-SMCC-DM1 10 mg/kg, con una carga de farmaco de 3,4 DM1/Ab; -■- tio trastuzumab (A121C)-SMCC-DM1 21 mg/kg, con una carga de farmaco de 1,6 DM1/Ab; y -□- tio trastuzumab (A121C)-SMCC- DM1 10 mg/kg, con una carga de farmaco de 1,6 DM1/Ab.
Descripcion detallada de las realizaciones ilustrativas
Ahora se hara referencia en detalle a ciertas realizaciones de la invention, ejemplos de las cuales se ilustran en las estructuras y formulas que se acompanan. Aunque la invencion se describira junto con las realizaciones enumeradas, se entendera que no se pretende limitar la invencion a esas realizaciones. Por el contrario, la invencion pretende cubrir todas las alternativas, modificaciones y equivalentes, que pueden incluirse dentro del alcance de la presente invencion como se define por las reivindicaciones.
Un experto en la tecnica reconocera muchos metodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria, que se podrlan utilizar en la practica de la presente invencion. La presente invencion no esta en modo alguno limitada a los metodos y materiales descritos.
A menos que se defina lo contrario, los terminos tecnicos y cientlficos utilizados en la presente memoria tienen el mismo significado que se entiende comunmente por un experto ordinario en la tecnica a la que pertenece esta invencion y son consistentes con: Singleton et al (1994) Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, 2nd Ed., J. Wiley & Sons, New York, NY; and Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York.
DEFINICIONES
A menos que se indique lo contrario, los siguientes terminos y frases como se utilizan en la presente memoria estan destinados a tener los siguientes significados:
Cuando se utilizan nombres comerciales en la presente memoria, los solicitantes pretenden incluir de forma independiente la formulation con el nombre comercial del producto, el medicamento generico y el principio(s) farmaceutico activo del nombre comercial del producto.
El termino "anticuerpo" en la presente memoria se usa en el sentido mas amplio y abarca especlficamente anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, dlmeros, multlmeros, anticuerpos multiespeclficos (por ejemplo, anticuerpos biespeclficos) y fragmentos de anticuerpos, siempre que muestren la actividad biologica deseada (Miller et al (2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861). Los anticuerpos pueden ser murinos, humanos, humanizados, quimericos o derivados de otras especies. Un anticuerpo es una protelna generada por el sistema inmunitario que es capaz de reconocer y unirse a un antlgeno especlfico. (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5a Ed., Garland Publishing, Nueva York). Un antlgeno diana en general, tiene numerosos sitios de union, tambien llamados epltopos, reconocidos por las CDR en varios anticuerpos. Cada anticuerpo que se une especlficamente a un epltopo diferente tiene una estructura diferente. Por lo tanto, un antlgeno puede tener mas de un anticuerpo correspondiente. Un anticuerpo incluye una molecula de inmunoglobulina de longitud completa o una portion inmunologicamente activa de una molecula de inmunoglobulina de longitud completa, es decir, una molecula que contiene un sitio de union al antlgeno que se une inmunoespeclficamente a un antlgeno de una diana de interes o parte de la misma, incluyendo tales dianas, pero sin limitarse, a celulas cancerosas o celulas que producen anticuerpos autoinmunitarios asociados a una enfermedad autoinmunitaria. La inmunoglobulina divulgada en la presente memoria puede ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA), clase (por ejemplo, IgG, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) o subclase de molecula de inmunoglobulina. Las inmunoglobulinas se pueden derivar de cualquier especie. En un aspecto, sin embargo, la inmunoglobulina es de origen humano, murino, o de origen de conejo.
Los "fragmentos de anticuerpo" comprenden una porcion de un anticuerpo de longitud completa, generalmente la region de union al antlgeno o variable del mismo. Ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen Fab, Fab', F(ab')2 y fragmentos Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales; minicuerpos (Olafsen et al (2004) Protein Eng. Design & Sel. 17(4):315-323), fragmentos producidos por una biblioteca de expresion de Fab, anticuerpos anti-idiotlpicos (anti-Id), CDR (region determinante de la complementariedad) y fragmentos de union a epltopo de cualquiera de los anteriores que se unen inmunoespeclficamente a los antlgenos de celulas cancerosas, antlgenos virales o antlgenos microbianos, moleculas de anticuerpo de cadena unica y anticuerpos multiespeclficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.
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El termino "anticuerpo monoclonal" tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a un anticuerpo obtenido de una poblacion de anticuerpos sustancialmente homogeneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la poblacion son identicos excepto por posibles mutaciones naturales que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente especlficos, estando dirigidos contra un unico sitio antigenico. Ademas, al contrario que las preparaciones de anticuerpos policlonales que incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epltopos), cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un unico determinante en el antlgeno. Ademas de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos en el sentido de que se pueden sintetizar de forma no contaminada por otros anticuerpos. El modificador "monoclonal" indica el caracter del anticuerpo como el obtenido de una poblacion sustancialmente homogenea de anticuerpos, y no debe interpretarse como que requiere la production del anticuerpo mediante cualquier metodo particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales a utilizar de acuerdo con la presente invention pueden producirse por el metodo del hibridoma descrito por primera vez por Kohler et al (1975) Nature 256: 495, o pueden prepararse por metodos de ADN recombinante (vease, por ejemplo: US 4816567; US 5807715). Los anticuerpos monoclonales tambien se pueden aislar de bibliotecas de anticuerpos de fagos utilizando las tecnicas descritas en Clackson et al (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al (1991) J. Mol. Biol., 222: 581-597; por ejemplo.
Los anticuerpos monoclonales de la presente invencion incluyen especlficamente anticuerpos "quimericos" en los que una portion de la cadena pesada y/o ligera es identica con, u homologa, a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de una especie particular o que pertenecen a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la cadena(s) es identica con, u homologa, a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de otras especies o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpo, as! como fragmentos de dichos anticuerpos, siempre que presenten la actividad biologica deseada (documento US 4816567; y Morrison et al (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855). Los anticuerpos quimericos de interes en la presente memoria incluyen anticuerpos "primatizados" que comprenden secuencias de union a antlgeno de dominio variable derivadas de un primate no humano (por ejemplo, mono del viejo mundo, simio, etc.) y las secuencias de la region constante humana.
Un "anticuerpo intacto" en la presente memoria es aquel que comprende los dominios VL y VH, as! como un dominio constante de la cadena ligera (CL) y los dominios constantes de la cadena pesada, CH1, CH2 y CH3. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de secuencia nativa (por ejemplo, dominios constantes de secuencia humana nativa) o variante de secuencia de aminoacidos de la misma. El anticuerpo intacto puede tener una o mas "funciones efectoras" que se refieren a aquellas actividades biologicas atribuibles a la region constante Fc (una region FC de una secuencia nativa o region Fc variante de una secuencia de aminoacidos) de un anticuerpo. Ejemplos de funciones efectoras de anticuerpo incluyen la union a Clq; citotoxicidad dependiente del complemento; union al receptor Fc; citotoxicidad mediada por celulas dependiente de anticuerpos (ADCC); fagocitosis y en la regulation negativa de los receptores de la superficie celular, tales como el receptor de linfocitos B y BCR.
Dependiendo de la secuencia de aminoacidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, los anticuerpos intactos pueden asignarse a diferentes "clases". Hay cinco clases principales de anticuerpos de inmunoglobulina intactas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y varias de estas pueden dividirse en otras "subclases" (isotipos), por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA e IgA2. Los dominios constantes de la cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de anticuerpos se denominan a, 5, £, y y p, respectivamente. Las estructuras de las subunidades y las configuraciones tridimensionales de las diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas. Las formas de Ig incluyen modificaciones en bisagra o formas sin bisagra (Roux et al (1998) J. Immunol. 161:4083-4090; Lund et al (2000) Eur. J. Biochem. 267:7246-7256; documento US 2005/0048572; documento US 2004/0229310).
Un "receptor ErbB" es una protelna tirosina quinasa receptor que pertenece a la familia de receptores ErbB, cuyos miembros son mediadores importantes del crecimiento, la diferenciacion y la supervivencia celular. La familia de receptores ErbB incluye cuatro miembros distintos incluyendo el receptor del factor de crecimiento epidermico (EGFR, ErbB1, HER1), HER2 (ErbB2 o p185neu), HER3 (ErbB3) y HER4 (ErbB4 o tiro2). Un panel de anticuerpos anti-ErbB2 se ha caracterizado usando la llnea celular del tumor de mama humano SKBR3 (Hudziak et al (1989) Mol. Cell. Biol 9(3):1165-72. La inhibition maxima se obtuvo con el anticuerpo llamado 4D5 que inhibio la proliferation celular en un 56 %. Otros anticuerpos en el panel redujeron la proliferation celular en menor grado en este ensayo. Se encontro tambien que el anticuerpo 4D5 sensibilizaba a las llneas celulares de tumor de mama que sobreexpresan ErbB2 a los efectos citotoxicos del TNF-a (documento US 5677171). Los anticuerpos anti-ErbB2 discutidos en Hudziak et al. se caracterizan adicionalmente en Fendly et al (1990) Cancer Research 50:1550-1558; Kotts et al. (1990) In Vitro 26(3)59A; Sarup et al (1991) Growth Regulation 1:72-82; Shepard et al. J. (1991) Clin. Immunol. 11(3): 117-127; Kumar et al. (1991) Mol. Cell. Biol. 11(2):979-986; Lewis et al. (1993) Cancer Immunol Immunother. 37:255-263; Pietras et al. (1994) Oncogene 9:1829-1838; Vitetta et al. (1994) Cancer Research 545301-5309; Sliwkowski et aL (1994) J. Biol. Chem. 269(20):14661-14665; Scott et al. (1991) J. BioL Chem. 266:14300-5;
D'souza et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (1994) 91:7202-7206; Lewis et al. (1996) Cancer Research 56:1457-1465; and Schaefer et al. (1997) Oncogene 15:1385-1394.
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El receptor ErbB generalmente comprendera un dominio extracelular, que puede unirse a un ligando de ErbB; un dominio transmembrana lipofilo; un dominio tirosina quinasa intracelular conservado y un dominio de serialization carboxilo terminal que alberga varios residuos de tirosina que pueden ser fosforilados. El receptor ErbB puede ser un receptor ErbB de "secuencia nativa" o una "variante de la secuencia de aminoacidos" de la misma. Preferiblemente, el receptor ErbB es un receptor ErbB humano de secuencia nativa. Por consiguiente, un "miembro de la familia de receptores ErbB" es EGFR (ErbB 1), ErbB2, ErbB3, ErbB4 o cualquier otro receptor ErbB actualmente conocido o que se identifiquen en el futuro.
Los terminos "ErbBI", "receptor del factor de crecimiento epidermico", "EGFR" y "HER1" se usan indistintamente en la presente memoria y se refieren a EGFR como se divulga, por ejemplo, en Carpenter et al (1987) Ann. Rev. Biochem, 56:881-914, incluyendo formas mutantes de origen natural mutante del mismo (por ejemplo, un mutante de deletion del EGFR como en Humphrey et al (1990) Proc. Nat. Acad. Sci. (USA) 87:4207-4211). El termino erbB1 se refiere al gen que codifica el producto protelna EGFR. Se describen anticuerpos contra HER1, por ejemplo, en Murthy et al (1987) Arch. Biochem. Biophys. 252:549-560 y en el documento WO 9525167.
El termino "ERRP" y las expresiones "protelna relacionada con el receptor EGF" y "protelna relacionada con el receptor del factor de crecimiento epidermico" se usan indistintamente en la presente memoria y se refieren a ERRP como se divulga, por ejemplo, en los documentos US 6399743 y Publication US N.° 2003/0096373.
Las expresiones "ErbB2" y "HER2" se usan indistintamente en la presente memoria y se refieren a la protelna HER2 humana descrita, por ejemplo, en Semba et al (1985) Proc. Nat. Acad. Sci. (USA) 82:6497-6501 y Yamamoto et al (1986) Nature, 319:230-234 (Genebank numero de acceso X03363). El termino "erbB2" se refiere al gen que codifica ErbB2 humano y "neu" se refiere al gen que codifica p185neu de rata. El ErbB2 preferido es ErbB2 humano de secuencia nativa.
"ErbB3" y "HER3" se refieren al polipeptido receptor como se divulga, por ejemplo, en las Patentes US-5183884 y US-5480968, as! como Kraus et al (1989) Proc. Nat Acad. Sci. (USA) 86:9193-9197. Los anticuerpos contra ErbB3 se conocen en la tecnica y se describen, por ejemplo, en las Patentes US-5183884, US-5480968 y en el documento WO 97/35885.
Los terminos "ErbB4" y "HER4" en la presente memoria se refieren al polipeptido receptor como se divulga, por ejemplo, en la Solicitud de Patente Europea EP 599.274; Plowman et al (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 17461750; y Plowman et al (1993) Nature 366:473-475, incluyendo isoformas de los mismos, por ejemplo, como se divulga en el documento WO 99/19488. Anticuerpos contra HER4, se describen, por ejemplo, en el documento WO 02/18444.
Los anticuerpos frente a receptores ErbB estan comercializados en diversas fuentes, incluyendo, por ejemplo, Santa Cruz Biotechnology, Inc., California, EE.UU.
El termino "variante de la secuencia de aminoacidos" se refiere a polipeptidos que tienen secuencias de aminoacidos que difieren en cierta medida de un polipeptido de secuencia nativa. Generalmente, las variantes de la secuencia de aminoacidos poseeran al menos aproximadamente 70 % de identidad de secuencia con al menos un dominio de union al receptor de un ligando de ErbB nativo o con por lo menos un dominio de union al ligando de un receptor ErbB nativo, y preferiblemente, seran al menos aproximadamente 80 %, mas preferiblemente, al menos aproximadamente 90 % homologas de la secuencia con tal receptor o dominios de union al ligando. Las variantes de la secuencia de aminoacidos poseen sustituciones, deleciones y/o inserciones en ciertas posiciones dentro de la secuencia de aminoacidos de la secuencia de aminoacidos nativa. Los aminoacidos se designan por los nombres convencionales, codigos de una letra y de tres letras.
"Identidad de secuencia" se define como el porcentaje de residuos en la variante de la secuencia de aminoacidos que son identicos despues de alinear las secuencias e introducir huecos, si es necesario, para lograr el maximo porcentaje de identidad de secuencia. Metodos y programas de ordenador para la alineacion son bien conocidos en la tecnica. Uno de estos programas de ordenador es "Align 2", propiedad de Genentech, Inc., que se presento con la documentation del usuario en la Oficina de Derechos de Autor de Estados Unidos, Washington, DC 20559, el 10 de diciembre de 1991.
"Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos" y "CCDA" se refieren a una reaction mediada por celulas en la que celulas citotoxicas no especlficas que expresan receptores Fc (FcR) (por ejemplo, linfocitos citollticos naturales (NK), neutrofilos y macrofagos) reconocen el anticuerpo unido en una celula diana y posteriormente causan la lisis de la celula diana. Las celulas primarias que intervienen en la ADCC, los linfocitos, NK, expresan FcyRIII solo, mientras que los monocitos expresan FcyRI, FcyRII y FcyRIII. La expresion de FcR en celulas hematopoyeticas se resume en la Tabla 3 en la pagina 464 de Ravetch y Kinet, (1991) "Annu. Rev. Immunol." 9:457-92. Para evaluar la actividad de ADCC de una molecula de interes, se puede realizar un ensayo de ADCC, in vitro, tal como el descrito en las patentes US 5500362 y US 5821337. Celulas efectoras utiles para tales ensayos incluyen celulas mononucleares de sangre periferica (PBMC) y linfocitos citollticos naturales (NK). Como alternativa, o adicionalmente, la actividad ADCC de la molecula de interes puede evaluarse in vivo, por ejemplo, en un modelo
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animal tal como el divulgado en Clynes et al (1998) Proc. NAT. ACAD. SCL (USA) 95:652-656.
Las "celulas efectoras humanas" son leucocitos que expresan uno o mas receptores de la region constante (FcR) y realizan funciones efectoras. Preferiblemente, las celulas expresan al menos FcyRIII y realizan la funcion efectora ADCC. Ejemplos de leucocitos humanos que median en la ADCC incluyen celulas mononucleares de sangre periferica (PBMC), linfocitos citolfticos naturales (NK), monocitos, linfocitos T citotoxicos y neutrofilos; prefiriendose los PBMC y los linfocitos NK. Las celulas efectoras pueden aislarse de una fuente nativa de las mismas, por ejemplo, de la sangre o PBMC como se describe en la presente memoria.
Las expresiones "receptor de Fc" o "FcR" se usan para describir un receptor que se une a la region constante Fc de un anticuerpo. El FcR preferido es una secuencia nativa del FcR humano. Ademas, un FcR preferido es uno que se une un anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye receptores de las subclases FcyRI, FcyRII y FcyRIII, incluyendo variantes alelicas y formas de corte y empalme alternativas de estos receptores. Los receptores FcyRII incluyen FcyRIIA (un "receptor activador") y FcyRiIB (un "receptor inhibidor", que tienen secuencias de aminoacidos similares que difieren principalmente en los dominios citoplasmaticos de los mismos. El receptor activador FcyRIIA contiene un motivo activador de inmunorreceptor con residuos de tirosina (ITAM) en su dominio citoplasmico. El receptor inhibidor FcyRIIB contiene un motivo inhibidor de inmunorreceptor con residuos de tirosina (ITIM) en su dominio citoplasmico. (Leer revision en M. en Daeron, "Annu. Rev. Immunol." 15:203-234 (1997)). Los FcR se revisan en Ravetch y Kinet, "Annu. Rev. Immunol", 9:457-92 (1991); Capel et al (1994) Immunomethods 4:25-34; y de Haas et al (1995) J. Lab. Clin. Med. 126:330-41. Otros FcR, incluyendo los que se identifiquen en el futuro, estan abarcados por el termino "FcR" en la presente memoria. El termino tambien incluye el receptor neonatal, FcRn, que es responsable de la transferencia de IgG maternas al feto (Guyer et al (1976) J. Immunol. 117: 587 y Kim et al (1994) J. Immunol 24: 249).
"Citotoxicidad dependiente del complemento" o "CDC" se refiere a la capacidad de una molecula para lisar una diana en presencia del complemento. La ruta de activacion del complemento se inicia por la union del primer componente del sistema del complemento (C1q) a una molecula (por ejemplo, un anticuerpo) que forma un complejo con un antlgeno cognado. Para evaluar la activacion del complemento, se puede realizar un ensayo CDC, por ejemplo, como se describe en Gazzano-Santoro y otros, J. Immunol Methods, 202:163 (1996).
"Los anticuerpos nativos" son normalmente glicoprotelnas heterotetramericas de aproximadamente 150.000 daltons, compuestas de dos cadenas ligeras (L) identicas y dos cadenas pesadas (H) identicas. Cada cadena ligera esta unida a una cadena pesada por un enlace disulfuro covalente, mientras que el numero de enlaces disulfuro varla entre las cadenas pesadas de diferentes isotipos de inmunoglobulinas. Cada cadena pesada y ligera tambien tiene puentes disulfuro intracadena regularmente espaciados. Cada cadena pesada y ligera tienen tambien un extremo un dominio variable (Vh) seguido de un numero de dominios constantes. Cada cadena ligera tiene un dominio variable en un extremo (Vl) y un dominio constante en su otro extremo. El dominio constante de la cadena ligera esta alineado con el primer dominio constante de la cadena pesada y el dominio variable de la cadena ligera esta alineado con el dominio variable de la cadena pesada. Se cree que los residuos de aminoacidos particulares forman una interfaz entre los dominios variables de la cadena ligera y la cadena pesada.
El termino "variable" se refiere al hecho de que ciertas porciones de los dominios variables difieren ampliamente en la secuencia entre anticuerpos y se utilizan en la union y especificidad de cada anticuerpo particular por su antlgeno particular. Sin embargo, la variabilidad no se distribuye uniformemente a traves de los dominios variables de los anticuerpos. Se concentra en tres segmentos llamados regiones hipervariables tanto en los dominios variables de la cadena ligera como de la cadena pesada. Las partes mas altamente conservadas de los dominios variables se denominan regiones marco (FR). Los dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras nativas comprenden cada uno cuatro FR, adoptando en gran medida una configuracion de hoja p, conectada por tres regiones hipervariables, que forman bucles que conectan, y en algunos casos forman parte de, la estructura de hoja p. Las regiones hipervariables en cada cadena se mantienen juntas en estrecha proximidad por las FR y, con las regiones hipervariables de la otra cadena, contribuyen a la formacion del sitio de union al antlgeno de los anticuerpos (ver Kabat et al (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD). Los dominios constantes no estan implicados directamente en la union de un anticuerpo a un antlgeno, pero presentan diversas funciones efectoras, como la participacion del anticuerpo en la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC).
La expresion "region hipervariable" cuando se usa en la presente memoria se refiere a los residuos de aminoacidos de un anticuerpo que son responsables de la union a antlgeno. La region hipervariable comprende generalmente residuos de aminoacidos de una "region determinante de la complementariedad" o "CDR" (por ejemplo, los residuos 24-34 (L1), 50-56 (L2) y 89-97 (L3) en el dominio variable de la cadena ligera y 31-35 (H1), 50-65 (H2) y 95-102 (H3) en el dominio variable de la cadena pesada; Kabat et al supra) y/o aquellos residuos de un "bucle hipervariable" (por ejemplo, los residuos 26-32 (L1), 50-52 (L2) y 91-96 (L3) en el dominio variable de la cadena ligera y 26-32 (H1), 5355 (H2) y 96-101 (H3) en el dominio variable de la cadena pesada; Chothia y Lesk (1987) J. Mol. Biol., 196: 901917). La "region marco" o residuos "FR" son aquellos residuos del dominio variable diferentes de los residuos de la region hipervariable tal como se definen aqul.
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La digestion con papalna de los anticuerpos produce dos fragmentos de union al antlgeno identicos, llamados fragmentos "Fab", cada uno con un unico sitio de union al antlgeno y un fragmento residual "Fc", cuyo nombre refleja su capacidad para cristalizar facilmente. El tratamiento con pepsina produce un fragmento F(ab')2 que tiene dos sitios de union al antlgeno y todavla es capaz de reticularse con el antlgeno.
"Fv" es el fragmento de anticuerpo mlnimo que contiene un sitio completo de reconocimiento del antlgeno y el sitio de union al antlgeno. Esta region consiste en un dlmero de una cadena pesada y una cadena ligera de dominio variable en estrecha asociacion no covalente. Es en esta configuracion en la que las tres regiones hipervariables de cada dominio variable interactuan para definir un sitio de union al antlgeno en la superficie del dlmero Vh-Vl. Colectivamente, las seis regiones hipervariables confieren especificidad de union al antlgeno al anticuerpo. Sin embargo, incluso un unico dominio variable (o la mitad de un Fv que comprende solo tres regiones hipervariables especlficas para un antlgeno) tiene la capacidad de reconocer y unirse al antlgeno, aunque con una afinidad menor que el sitio de union.
El fragmento Fab tambien contiene el dominio constante de la cadena ligera y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. Los fragmentos Fab' difieren de los fragmentos Fab por la adicion de unos pocos residuos en el extremo carboxi terminal de la cadena pesada del dominio CH1 incluyendo una o mas cistelnas de la region bisagra del anticuerpo. Fab'-SH es la designacion en la presente memoria para Fab' en el que el residuo(s) cistelna de los dominios constantes llevan al menos un grupo tiol libre. Los fragmentos de anticuerpo F(ab')2 se produjeron originalmente como pares de fragmentos Fab' que tienen cistelnas bisagra entre ellos. Tambien se conocen otros acoplamientos qulmicos de fragmentos de anticuerpos.
Las "cadenas ligeras" de los anticuerpos de cualquier especie de vertebrado se pueden asignar a uno de dos tipos claramente distintos, denominadas kappa (k) y lambda (A), basandose en las secuencias de aminoacidos de sus dominios constantes.
Los fragmentos de anticuerpo "Fv de cadena unica" o "scFv" comprenden los dominios Vh y Vl dominios del anticuerpo, en los que estos dominios estan presentes en una unica cadena polipeptldica. Preferiblemente, el polipeptido Fv comprende ademas un polipeptido enlazador entre los dominios VH y VL que permite que el scFv forme la estructura deseada para la union al antlgeno. Para una revision de scFv, ver Pluckthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269315 (1994). Los fragmentos scFv del anticuerpo anti-ErbB2 se describen en el documento WO 93/16185 y en las patentes US-5571894 y US-5587458.
El termino "diacuerpos" se refiere a pequenos fragmentos de anticuerpos con dos sitios de union al antlgeno, cuyos fragmentos comprenden un dominio pesado variable (VH) conectado a un dominio ligero variable (VL) en la misma cadena polipeptldica (VH - VL). Mediante el uso de un enlazador que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios en la misma cadena, los dominios son forzados a emparejarse con los dominios complementarios de otra cadena y crear dos sitios de union al antlgeno. Los diacuerpos se describen mas detalladamente en, por ejemplo, los documentos EP 404.097; WO 93/11161; y Hollinger et al (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448.
Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (por ejemplo, roedores) son anticuerpos quimericos que contienen una secuencia minima derivada de inmunoglobulina no humana. La humanizacion es un metodo para transferir la informacion de union al antlgeno murino a un aceptor de anticuerpo humano no inmunogenico y ha dado lugar a muchos farmacos terapeuticamente utiles. El metodo de humanizacion comienza generalmente mediante la transferencia de las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) murinas en una estructura de anticuerpo (Jones et al, (1986) Nature 321:522-525). Estos anticuerpos injertados con CDR generalmente no conservan su afinidad original para la union al antlgeno, y de hecho, la afinidad esta a menudo severamente deterioradas. Ademas de las CDR, para mantener la adecuada conformacion de la CDR tambien deben incorporarse residuos del marco de anticuerpos no humanos seleccionados (Chothia et al (1989) Nature 342: 877). La transferencia de residuos estructurales de raton clave al aceptor humano con el fin de apoyar la conformacion estructural de las CDR injertadas se ha demostrado que restaura la union al antlgeno y la afinidad (Riechmann et al (1992) J. Mol. Biol. 224,487-499; Foote y Winter, (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499; Presta et al (1993) J. Immunol. 151, 2623-2632; Werther et al (1996) J. Immunol. Methods 157:4986-4995; y Presta et al (2001) Thromb. Haemost 85:379-389). En su mayor parte, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las que los residuos de una region hipervariable del receptor se sustituyen por residuos de una region hipervariable de una especia no humana (anticuerpo donante), tal como raton, rata, conejo o primate no humano que tiene la especificidad, afinidad y capacidad deseada. En algunos casos, los residuos de la region marco (FR) de la inmunoglobulina humana se sustituyen por los correspondientes residuos no humanos. Ademas, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que no se encuentran en el anticuerpo receptor ni en el anticuerpo donante. Estas modificaciones se realizan para refinar aun mas el funcionamiento del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprendera sustancialmente la totalidad de al menos uno, y generalmente dos, dominios variables, en los que todos o sustancialmente todos los bucles hipervariables corresponden a los de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las FR son las de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado opcionalmente tambien comprendera al menos una porcion de una region
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constante de inmunoglobulina (Fc), generalmente la de una inmunoglobulina humana. Para mas detalles, vease el documento US 6407213; Jones et al (1986) Nature, 321:522-525; Riechmann et al (1988) Nature 332:323-329; y Presta, (1992) Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596.
Un "aminoacido con cistelna libre" se refiere a un residuo de aminoacido cistelna que ha sido introducido por ingenierla genetica en un anticuerpo parental, tiene un grupo funcional tiol (-SH), y no esta emparejado como un puente disulfuro intramolecular o intermolecular.
La expresion "valor de reactividad del tiol" es una caracterizacion cuantitativa de la reactividad de los aminoacidos con cistelna libre. El valor de reactividad del tiol es el porcentaje de un aminoacido con cistelna libre en un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna que reacciona con un reactivo que reacciona con tiol y se convierte en un valor maximo de 1. Por ejemplo, un aminoacido con cistelna libre en un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna que reacciona con un rendimiento del 100 % con un reactivo que reacciona con tiol, tal como un reactivo de biotina-maleimida, para formar un anticuerpo marcado con biotina tiene un valor de reactividad del tiol de 1,0. Otro aminoacido cistelna introducido por ingenierla genetica en el mismo o diferente anticuerpo parental que reacciona con un rendimiento del 80 % con un reactivo que reacciona con tiol tiene un valor de reactividad del tiol de 0,8. Otro aminoacido cistelna introducido por ingenierla genetica en el mismo o diferente anticuerpo parental que no reacciona totalmente con un reactivo que reacciona con tiol tiene un valor de reactividad del tiol de 0. La determinacion del valor de reactividad del tiol de una cistelna en particular puede llevarse a cabo mediante el ensayo ELISA, espectroscopla de masas, cromatografla de llquidos, autorradiografla u otras pruebas anallticas cuantitativas.
Un "anticuerpo parental" es un anticuerpo que comprende una secuencia de aminoacidos en la que uno o mas residuos de aminoacidos se sustituyen por uno o mas residuos de cistelna. El anticuerpo parental puede comprender una secuencia nativa o de tipo silvestre. El anticuerpo parental puede tener modificaciones de la secuencia de aminoacidos preexistentes (tales como adiciones, deleciones y/o sustituciones) en relacion con otras formas nativas, de tipo silvestre o modificadas de un anticuerpo. Un anticuerpo parental puede ser dirigido contra un antlgeno diana de interes, por ejemplo, un polipeptido biologicamente importante. Tambien se contemplan los anticuerpos dirigidos contra antlgenos no polipeptldicos (tales como antlgenos glicollpidos asociados a tumor; vease el documento US 5091178).
Ejemplos de anticuerpos parentales incluyen anticuerpos que tienen afinidad y selectividad por los receptores de la superficie celular y transmembrana y antlgenos asociados a tumores (TAA).
Otros ejemplos de anticuerpos parentales incluyen los seleccionados de, y sin limitacion, anticuerpo anti-receptor de estrogenos, anticuerpo anti-receptor de progesterona, anticuerpo anti-p53, anticuerpo anti-HER-2/neu, anticuerpo anti-EGFR, anticuerpo anti-catepsina D, anticuerpo anti-Bcl-2, anticuerpo anti-e-cadherina, anticuerpo anti-CA125 y anticuerpo anti-CA15-3, anticuerpo, anti-CAI9-9, anticuerpo anti-c-erbB-2, anticuerpo anti-glicoprotelna P, anticuerpo anti-CEA, anticuerpo anti-protelna del retinoblastoma, anticuerpo anti-oncoproetlna ras, anticuerpo anti-Lewis X, anticuerpo anti-Ki-67, anticuerpo anti-PCNA, anticuerpo anti-CD3, anticuerpo anti-CD4, anticuerpo anti-CD5, anticuerpo anti-CD7, anticuerpo anti-CD8, anticuerpo anti-CD9/p24, anticuerpo anti-CD10, anticuerpo anti-CD11c, anticuerpo anti-CD13, anticuerpo anti-CD14, anticuerpo anti-CD15, anticuerpo anti-CD19, anticuerpo anti-CD20, anticuerpo anti-CD22, anticuerpo anti-CD23, anticuerpo anti-CD30, anticuerpo anti-CD31, anticuerpo anti-CD33, anticuerpo anti-CD34, anticuerpo anti-CD35, anticuerpo anti-CD38, anticuerpo anti-CD41, anticuerpo anti- LCA/CD45, anticuerpo anti-CD45RO, anticuerpo anti-CD45RA, anticuerpo anti-CD39, anticuerpo anti-CD100, anticuerpo anti-CD95/Fas, anticuerpo anti-CD99, anticuerpo anti-CD106, anticuerpo anti-ubiquitina, anticuerpo anti- CD71, anticuerpo anti-c-myc, anticuerpo anti-citoqueratinas, anticuerpo anti-vimentina, anticuerpo anti-protelnas del VPH, anticuerpo anti-cadenas ligeras kappa, anticuerpo anti-cadenas ligeras lambda, anticuerpo anti-melanosomas, anticuerpo anti-antlgeno especlfico de la prostata, anticuerpo anti-S-100, anticuerpo anti-antlgeno-tau, anticuerpo anti-fibrina, anticuerpo anti-queratina y anticuerpo anti-antlgeno Tn.
Un anticuerpo "aislado" es uno que se ha identificado y separado y/o recuperado de un componente de su entorno natural. Los componentes contaminantes de su entorno natural son materiales que interferirlan con los usos diagnosticos o terapeuticos para el anticuerpo y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteicos o no proteicos. En realizaciones preferidas, el anticuerpo se purificara (1) hasta mas del 95 % en peso de anticuerpo segun se determina por el metodo de Lowry, y mas preferiblemente mas de 99 % en peso, (2) hasta un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de la secuencia de aminoacidos N-terminal o interna mediante el uso de un secuenciador de copa giratoria o (3) hasta homogeneidad mediante SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras utilizando azul de Coomassie o, preferiblemente, tincion de plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de celulas recombinantes ya que al menos un componente del entorno natural del anticuerpo no estara presente. Normalmente, sin embargo, el anticuerpo aislado se preparara mediante al menos una etapa de purificacion.
Un anticuerpo "que se une" a una diana molecular o a un antlgeno de interes, por ejemplo, el antlgeno ErbB2, es uno capaz de unirse a ese antlgeno con suficiente afinidad de tal forma que el anticuerpo sea util en dirigirse a una celula que expresa el antlgeno. Cuando el anticuerpo es uno que se une a ErbB2, por lo general, se unen
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preferentemente ErbB2 frente a otros receptores ErbB y puede ser uno que no experimente una reaccion cruzada significativa con otras protelnas tales como EGFR, ErbB3 o ErbB4. En tales realizaciones, el grado de union del anticuerpo a estas protelnas no ErbB2 (por ejemplo, union de la superficie celular a un receptor endogeno) sera menor que 10 %, determinado mediante el analisis de separation celular por fluorescencia (FACS) o radioinmunoprecipitacion (RIA). A veces, el anticuerpo anti-ErbB2 no sufrira una reaccion cruzada significativa con la protelna neu de rata, por ejemplo, como se describe en Schecter et al. (1984) Nature 312:513 y Drebin et al (1984) Nature 312:545-548.
Dianas moleculares para anticuerpos abarcados por la presente invention incluyen protelnas CD y sus ligandos, tales como, pero sin limitarse a: (i) CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD34, CD40, CD79a (CD79a) y CD79p (CD79b); (ii) miembros de la familia de receptores ErbB tales como el receptor EGF, HER2, HER3 o HER4; (iii) moleculas de adhesion celular tales como LFA-1, Macl, p150,95, VLA-4, ICAM-1, VCAM y av/p3 integrina, incluyendo o bien las subunidades alfa o beta de la misma (por ejemplo anticuerpos anti-CD11a, anti-CD18 o anti- CD11b); (iv) factores de crecimiento tales como VEGF; IgE; antlgenos de grupos sangulneos; receptor flk2/flt3; receptor de la obesidad (OB); receptor mpl, CTLA-4; protelna C, BR3, c-met, factor tisular, p7 etc; y (v) antlgenos asociados a tumores de la superficie celular y transmembrana (TAA).
A menos que se indique lo contrario, la expresion "anticuerpo monoclonal 4D5" se refiere a un anticuerpo que tiene residuos union al antlgeno de, o derivados de este, el anticuerpo murino 4D5 (ATCC CRL 10463). Por ejemplo, el anticuerpo monoclonal 4D5 puede ser un anticuerpo monoclonal murino 4D5 o una variante del mismo, tal como un 4D5 humanizado. Ejemplos de anticuerpos 4D5 humanizados incluyen huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 y huMAb4D5-8 (trastuzumab, HERCEPTIN®) como en la patente US-5821337.
Los terminos "tratar" o "tratamiento" se refieren tanto al tratamiento terapeutico como a las medidas profilacticas o preventivas, en las que el objeto es prevenir o ralentizar (reducir) un cambio o trastorno fisiologico indeseado, tal como el desarrollo o diseminacion del cancer. Para los fines de esta invencion, los resultados cllnicos beneficiosos o deseados incluyen, pero no se limitan a, el alivio de los slntomas, la disminucion del grado de la enfermedad, la estabilizacion (es decir, no empeoramiento) de la enfermedad, el retraso o ralentizacion de la progresion de la enfermedad, la mejora o paliacion del estado de enfermedad y la remision (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. "Tratamiento" tambien puede significar prolongar la supervivencia en comparacion con la supervivencia esperada si no se recibe tratamiento. Los que estan en necesidad de tratamiento incluyen aquellos que ya tienen el trastorno o afeccion, as! como los propensos a tener la afeccion o trastorno o aquellos en los que se va a prevenir la afeccion o trastorno.
El termino "cantidad terapeuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un farmaco eficaz para tratar una enfermedad o afeccion en un mamlfero. En el caso del cancer, la cantidad terapeuticamente eficaz del farmaco puede reducir el numero de celulas cancerosas; reducir el tamano del tumor; inhibir (es decir, ralentizar en cierto grado y preferiblemente detener) la infiltration de celulas cancerosas en organos perifericos; inhibir (es decir, ralentizar en cierto grado y preferiblemente detener) la metastasis tumoral; inhibir, en cierta medida, el crecimiento del tumor y/o aliviar en cierta medida uno o mas de los slntomas asociados al cancer. En la medida en que el farmaco puede prevenir el crecimiento y/o destruir las celulas cancerosas existentes, puede ser citostatico y/o citotoxico. Para la terapia del cancer, la eficacia puede medirse, por ejemplo, por la evaluation del tiempo hasta la progresion de la enfermedad (TTP) y/o la determination de la tasa de respuesta (RR).
El termino "biodisponibilidad" se refiere a la disponibilidad sistemica (es decir, niveles en sangre/plasma) de una cantidad dada de farmaco administrado a un paciente. La biodisponibilidad es un termino absoluto que indica la medicion tanto del ritmo (velocidad) como de la cantidad total (extension) del farmaco que alcanza la circulation general de una forma farmaceutica administrada.
Los terminos "cancer" y "canceroso" se refieren o describen la condition fisiologica en mamlferos que se caracteriza generalmente por un crecimiento celular no regulado. Un "tumor" comprende una o mas celulas cancerosas. Ejemplos de cancer incluyen, pero no se limitan a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia o tumores malignos linfoides. Mas ejemplos particulares de dichos canceres incluyen cancer de celulas escamosas (por ejemplo, cancer de celulas escamosas epiteliales), cancer de pulmon incluyendo cancer de pulmon microcltico, cancer de pulmon no microcltico ("CPNM"), adenocarcinoma del pulmon y carcinoma escamoso del pulmon, cancer del peritoneo, cancer hepatocelular, cancer gastrico o cancer de estomago incluyendo cancer gastrointestinal, cancer pancreatico, glioblastoma, cancer cervical, cancer de ovario, cancer de hlgado, cancer de vejiga, hepatoma, cancer de mama, cancer de colon, cancer rectal, cancer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de glandulas salivares, cancer de rinon o renal, cancer de prostata, cancer de vulva, cancer de tiroides, carcinoma hepatico, carcinoma anal, carcinoma de pene, ademas de cancer de cabeza y cuello.
Un "cancer que expresa ErbB" es aquel que comprende celulas que tienen la protelna ErbB presente en su superficie celular. Un "cancer que expresa ErbB2" es aquel que produce niveles suficientes de ErbB2 en la superficie de celulas del mismo, de tal manera que un anticuerpo anti-ErbB2 se puede unir al mismo y tener un efecto terapeutico con respecto al cancer.
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Un cancer que "sobreexpresa" un receptor antigenico es aquel que tiene niveles significativamente mas altos del receptor, tales como ErbB2, en la superficie celular del mismo, en comparacion con una celula no cancerosa del mismo tipo de tejido. Dicha sobreexpresion puede estar causada por la amplificacion genica o por el aumento de la transcripcion o la traduccion. La sobreexpresion del receptor se puede determinar en un ensayo de diagnostico o pronostico mediante la evaluacion de los niveles incrementados de la protelna del receptor presente en la superficie de una celula (por ejemplo, mediante un ensayo de inmunohistoqulmica; IHC). Como alternativa o adicionalmente, se pueden medir los niveles de acido nucleico que codifica el receptor en la celula, por ejemplo, mediante tecnicas de hibridacion in situ fluorescente (FISH; ver el documento WO 98/45479), la transferencia Southern o la reaccion en cadena de la polimerasa (PCR), tales como PCR en tiempo real cuantitativa (RT-PCR).
Los tumores que sobreexpresan ErbB2 (HER2) son calificados por las puntuaciones de inmunohistoqulmica que corresponden al numero de copias de moleculas HER2 expresadas por celula y pueden determinarse bioqulmicamente: 0=0-10.000 copias/celula, 1+ = al menos aproximadamente 200.000 copias/celula, 2+ = al menos aproximadamente 500.000 copias /celula, 3+ = aproximadamente 1-2 x 106 copias/celula. La sobreexpresion de HER2 en el nivel 3+, que conduce a la activacion independiente de ligando de la tirosina quinasa (Hudziak et al (1987) Proc. Natl Acad Sci. USA, 84: 7159-7163), se produce en aproximadamente el 30 % de los canceres de mama, y en estos pacientes, la supervivencia libre de enfermedad y la supervivencia global se ven disminuidos (Slamon et al (1989) Science, 244:707-712; Slamon et al (1987) Science, 235:177-182).
La expresion "agente citotoxico" tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una sustancia que inhibe o evita la funcion de las celulas y/o causa la destruction de las celulas. El termino pretende incluir isotopos radioactivos (por ejemplo, 211At, 131I, 125I, 90Y, 186Re, 188Re, 153Sm, 212Bi, 32P, 60C e isotopos radiactivos de Lu), agentes quimioterapeuticos y toxinas, tales como toxinas de molecula pequena o toxinas enzimaticamente activas de origen bacteriano, fungico, vegetal o animal, incluyendo los analogos sinteticos y derivados de las mismas.
Una "enfermedad autoinmunitaria" en la presente memoria es una enfermedad o afeccion que surge de y va dirigida contra los propios tejidos u organos de un individuo o un co-segregado o manifestation de las mismas o un trastorno resultante de las mismas. En muchas de estas afecciones autoinmunitarias e inflamatorias, puede existir una serie de marcadores cllnicos y de laboratorio, incluyendo, pero sin limitarse a, hipergammaglobulinemia, niveles altos de autoanticuerpos, depositos de complejos antlgeno-anticuerpo en los tejidos, beneficio de los tratamientos con corticosteroides o inmunosupresores y agregados de celulas linfoides en los tejidos afectados. Sin limitarse a ninguna teorla en cuanto a la enfermedad autoinmunitaria media por linfocitos B, se cree que los linfocitos B demuestran un efecto patogenico en enfermedades autoinmunitarias humanas a traves de una multitud de vlas mecanicas, incluyendo la production de autoanticuerpos, la formation del complejo inmunitarios, la activacion de celulas dendrlticas y linfocitos T, la slntesis de citoquinas, la liberation directa de quimiocinas y la provision de un nido para la neo-linfogenesis ectopica. Cada una de estas vlas puede participar en diferentes grados en la patologla de las enfermedades autoinmunitarias. Una enfermedad autoinmunitaria puede ser una enfermedad especlfica de un organo (es decir, la respuesta inmunitaria se dirige especlficamente contra un sistema de organos tales como el sistema endocrino, el sistema hematopoyetico, la piel, el sistema cardiopulmonar, los sistemas gastrointestinales y el hlgado, el sistema renal, el tiroides, las orejas, el sistema neuromuscular, el sistema nervioso central, etc.) o una enfermedad sistemica que puede afectar a multiples sistemas organicos (por ejemplo, lupus eritematoso sistemico (LES), artritis reumatoide, polimiositis, etc.).
El termino "citostatico" se refiere al efecto de limitar la funcion de las celulas, tales como limitar el crecimiento celular o la proliferation de las celulas.
Un "agente quimioterapeutico" es un compuesto qulmico util en el tratamiento del cancer. Ejemplos de agentes quimioterapeuticos incluyen Erlotinib (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), bortezomib (VELCADE®, Millenium Pharm.), fulvestrant (FASLODEX®, Astrazeneca), Sutent (SU11248, Pfizer), letrozol (FEMaRa®, Novartis), mesilato de imatinib (GLEEVEC®, Novartis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), oxaliplatino (Eloxatin®, Sanofi), 5-FU (5- fluorouracilo), leucovorina, rapamicina (Sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), lapatinib (GSK572016, GlaxoSmithKline), lonafarnib (ScH 66336), sorafenib (BAY43-9006, Bayer Labs.) y gefitinib (IRESSA®, Astrazeneca), AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen); agentes alquilantes tales como tiotepa y ciclofosfamida y CYTOXAN®; sulfonatos de alquilo, tales como busulfan, improsulfan y piposulfan; aziridinas tales como benzodopa, carboquona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilamelaminas incluyendo altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilomelamina; acetogeninas (especialmente bullatacina y bullatacinona); una camptotecina (incluyendo el analogo sintetico topotecan); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluyendo sus analogos sinteticos adozelesina, carzelesina y bizelesina); criptoficinas (particularmente criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluyendo los analogos sinteticos, KW-2189 y CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; una sarcodictina; espongistatina; mostazas de nitrogeno tales como clorambucilo, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de oxido de mecloretamina, melfalan, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimnustina; antibioticos tales como los antibioticos enedina (por ej., caliqueamicina, especialmente caliqueamicina gamma1I y caliqueamicina omegaI1 (Angew Chem Intl. Ed. Engl. (1994)33: 183-186); dinemicina, incluyendo dinemicina A; bifosfonatos, tales como clodronato; una esperamicina; as! como el cromoforo neocarzinostatina y cromoforos relacionados, cromoforos de antibioticos enedina),
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aclacinomisinas, actinomicina, antramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina ADRIAMYCIN® (incluyendo morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina y desoxidoxorrubicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas tales como mitomicina C, acido micofenolico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina; antimetabolitos tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); analogos del acido folico tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; analogos de purina tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; analogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; androgenos tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antiadrenergicos anti tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; recuperador de acido folico tal como acido frollnico; aceglatona; glucosido aldofosfamida; acido aminolevullnico; eniluracilo; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglucido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinan; lonidainina; maitansinoides tales como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; losoxantrona; acido podofillnico; 2- etilhidrazida; procarbazina; complejo polisacarido PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxina; sizofiran; espirogermanio; acido tenuazonico; triazicuona; 2,2',2°- triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinosido ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por ejemplo, TAXOL® paclitaxel (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), formulacion de nanopartlculas manipuladas con albumina de paclitaxel sin Cremophor ABRAXANE™ (American Pharmaceutical Partners, Schaumburg, Illinois) y docetaxel TAXOTERE® (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, Francia); cloranbucilo; gemcitabina GEMZAR®; 6- tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; analogos de platino tales como cisplatino y carboplatino; vinblastina; platino; etoposido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorrelbina NAVELBINE®; novantrona; teniposido; edatrexato; daunomicina; aminopterina; Xeloda; ibandronato; CPT-11; inhibidor de la topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides tales como acido retinoico; capecitabina; y sales, acidos o derivados farmaceuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
Tambien incluidos en esta definicion de "agente quimioterapeutico" son: (i) agentes anti-hormonales que actuan para regular o inhibir la accion hormonal sobre tumores tales como anti-estrogenos y moduladores selectivos de receptores estrogenicos (SERM), incluyendo, por ejemplo, el tamoxifeno (incluyendo tamoxifeno NOLVADEX®), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona y toremifeno FARESTON. (ii) inhibidores de la aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, que regula la produccion de estrogenos en las glandulas suprarrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, acetato de megestrol MEGASE®, exemestano AROMASIN®, formestano, fadrozol, vorozol RIVISOR®, letrozol FIMERA® y anastrozol ARIMIDEX®; (iii) antiandrogenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina; as! como troxacitabina (un 1,3-dioxolano nucleosido analogo de citosina); (iv) inhibidores de la aromatasa; (v) inhibidores de la protelna quinasa; (vi) inhibidores de la quinasa de llpidos; (vii) oligonucleotidos antisentido, particularmente aquellos que inhiben la expresion de genes en las vlas de senalizacion implicadas en la proliferacion de celulas aberrantes, tales como, por ejemplo, PKC-alfa, Ralf y H-Ras; (viii) ribozimas tales como un inhibidor de la expresion de VEGF (por ejemplo, ribozima ANGIOZYME®) y un inhibidor de la expresion de HER2; (ix) las vacunas tales como vacunas de terapia genica, por ejemplo, vacuna ALLOVECTIN®, vacuna LEUVECTIN® y vacuna VAXID®; PROLEUKIN® rII- 2; inhibidor de la topoisomerasa 1 LURTOTECAN®; rmRH ABARELIX®; (x) agentes anti-angiogenicos, tales como bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); y (xi) sales, acidos o derivados farmaceuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
En la presente memoria, la expresion "farmaco dirigido a EGFR" se refiere a un agente terapeutico que se une a EGFR y, opcionalmente, inhibe la activacion de EGFR. Ejemplos de tales agentes incluyen anticuerpos y moleculas pequenas que se unen a EGFR. Los ejemplos de anticuerpos que se unen a EGFR incluyen MAb 579 (ATCC CRL HB 8506), MAb 455 (ATCC CRL HB8507), MAb 225 (ATCC CRL 8508), MAb 528 (ATCC CRL 8509) (vease, el documento US 4943533, Mendelsohn et al.) y variantes de los mismos, tales como 225 quimerizado (C225 o cetuximab; ERBITUX®) y 225 reconformado humano (H225) (vease el documento WO 96/40210, Imclone Systems Inc.); anticuerpos que se unen al EGFR mutante tipo II (patente US5.212.290); anticuerpos humanizados y quimericos que se unen a EGFR, como se describe en el documentoUS 5891996 y anticuerpos humanos que se unen a EGFR, como ABX-EGF (vease el documento WO 98/50433, Abgenix). El anticuerpo anti-EGFR se puede conjugar con un agente citotoxico, generando as! un inmunoconjugado (vease, por ejemplo, el documento EP 659,439A2, Merck Patent GmbH). Ejemplos de moleculas pequenas que se unen a EGFR incluyen ZD1839 o Gefitinib (IRESSA™; Astra Zeneca), Erlotinib HCl (CP-358774, TARCEVA™; Genentech/OSI) y AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen).
Los inhibidores de la protelna quinasa incluyen inhibidores de la tirosina quinasa que inhiben en cierta medida la actividad tirosina quinasa de una tirosina quinasa, como un receptor ErbB. Ejemplos de tales inhibidores incluyen los farmacos dirigidos a EGFR citados en el parrafo precedente, as! como quinazolinas, tales como PD 153035.4-(3- cloroanilino) quinazolina, piridopirimidinas, pirimidopirimidinas, pirrolopirimidinas, como CGP 59326. CGP 60261 y CGP 62706 y pirazolopirimidinas, 4- (fenilamino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidinas, curcumina (diferuloil metano, 4,5-bis (4-fluoroanilino)ftalimida), tirfostinas que contienen restos nitrotiofeno; PD-0183805 (Warner-Lambert); moleculas
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antisentido (por ejemplo, aquellas que se unen al acido nucleico que codifica ErbB); quinoxalinas (documento US 5804396); trifostinas (documento US 5804396); ZD6474 (Astra Zeneca); PTK-787 (Novartis/Schering AG); inhibidores de pan-ErbB, tales como CI-1033 (Pfizer); Affinitac (ISIS 3521; Isis/Lilly); mesilato de imatinib (Gleevec; Novartis); PKI 166 (Novartis); GW2016 (Glaxo SmithKline); CI-1033 (Pfizer); EKB-569 (Wyeth); semaxanib (Sugen); ZD6474 (AstraZeneca); PTK-787 (Novartis/Schering AG); INC-1C11 (Imclone); o como se describe en cualquiera de las siguientes publicaciones de patentes: WO 99/09016 (American Cyanamid); WO 98/43960 (American Cyanamid); WO 97/38983 (Warner Lambert); WO 99/06378 (Warner Lambert); WO 99/06396 (Warner Lambert); WO 96/30347 (Pfizer, Inc); WO 96/33978 (Zeneca); WO 96/3397 (Zeneca) y WO 96/33980 (Zeneca).
Un "agente anti-angiogenico" se refiere a un compuesto que bloquea, o interfiere con, hasta cierto punto, el desarrollo de los vasos sangulneos. El factor anti-angiogenico puede, por ejemplo, ser una molecula pequena o anticuerpo que se une a un factor de crecimiento o receptor del factor de crecimiento implicado en la promocion de la angiogenesis. El factor anti-angiogenico preferido en la presente memoria es un anticuerpo que se une al factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF).
El termino "citocina" es un termino generico para las protelnas liberadas por una poblacion de celulas que actuan sobre otra celula como mediadores intercelulares. Ejemplos de tales citocinas son linfocinas, monocinas y hormonas polipeptldicas tradicionales. Entre las citocinas se incluyen hormonas de crecimiento tales como la hormona de crecimiento humano, hormona del crecimiento humano N-metionilo y hormona de crecimiento bovina; hormona paratiroidea; tiroxina; insulina; proinsulina; relaxina; prorrelaxina; hormonas glicoprotelnas, tales como hormona estimulante del follculo (FSH), hormona estimulante del tiroides (TSH) y hormona luteinizante (LH); factor de crecimiento hepatico; factor de crecimiento de fibroblastos; prolactina; lactogeno placentario; factor de necrosis tumoral-a y p; sustancia inhibidora de Muller; peptido asociado a la gonadotropina de raton; inhibina; activina; factor de crecimiento endotelial vascular; integrina; trombopoyetina (TPO); factores de crecimiento nervioso, tales como NGF-p; factor de crecimiento de plaquetas, factores de crecimiento transformante (TGF) tales como TGF-a y TGF-p; factor de crecimiento similar a la insulina I y II; eritropoyetina (EPO); factores osteoinductores; interferones tales como el interferon a, p, y y; factores estimulantes de las colonias (CSF) tales como CSF de macrofagos (M-CSF); CSF de granulocitos y macrofagos (GM-CSF); y CSF de granulocitos (G-CSF); interleucinas (IL) tales como IL-1, IL- 1a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL- 11, IL-12; un factor de necrosis tumoral como TNF-a o TNF-p y otros factores de polipeptidos que incluyen LIF y el ligando kit (KL). Tal como se utiliza en la presente memoria, el termino citocina incluye protelnas de fuentes naturales o de cultivo celular recombinante y equivalentes biologicamente activos de las citocinas de secuencia nativa.
El termino "profarmaco" tal como se utiliza en esta solicitud se refiere a un precursor o forma derivada de una sustancia farmaceuticamente activa que es menos citotoxica para las celulas tumorales en comparacion con el farmaco original y es capaz de ser enzimaticamente o hidrollticamente activada o convertida en la forma parental mas activa. Vease, por ejemplo, Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) y Stella et al "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery" Directed Drug Delivery, Borchardt et al (ed.), pp. 247-267, Humana Press (1985). Los profarmacos de esta invencion incluyen, pero no se limitan a, profarmacos que contienen fosfato, profarmacos que contienen tiofosfato, profarmacos que contienen sulfato, profarmacos que contienen peptidos, profarmacos modificados con D- aminoacidos, profarmacos glicosilados, profarmacos que contienen p-lactama, profarmacos que contienen fenoxiacetamida opcionalmente sustituidos, profarmacos que contienen fenilacetamida opcionalmente sustituidos, 5- fluorocitosina y otros profarmacos 5-fluorouridina que pueden convertirse en el farmaco libre citotoxico mas activo. Ejemplos de farmacos citotoxicos que pueden derivarse en una forma profarmaco para su uso en esta invencion incluyen, pero no se limitan a, los agentes quimioterapeuticos descritos anteriormente.
Un "liposoma" es una veslcula pequena compuesta de varios tipos de llpidos, fosfollpidos y/o tensioactivo que es util para la administracion de un farmaco (tal como los anticuerpos anti-ErbB2 divulgados en la presente memoria y, opcionalmente, un agente quimioterapeutico) a un mamlfero. Los componentes del liposoma se disponen comunmente en una formacion de bicapa, similar a la disposicion de los llpidos de las membranas biologicas.
El termino "prospecto" se utiliza para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en los envases comerciales de productos terapeuticos, que contienen information sobre las indicaciones, uso, dosis, administracion, contraindicaciones y/o advertencias sobre el uso de tales productos terapeuticos.
"Expresion en fagos" es una tecnica por la cual los polipeptidos variantes se expresan como protelnas de fusion con una protelna de la cubierta en la superficie del fago, por ejemplo, fagos filamentosos, partlculas. Una utilidad de la expresion en fagos radica en el hecho de que grandes bibliotecas de variantes de protelnas aleatorias se pueden clasificar rapidamente y de manera eficiente en cuanto a aquellas secuencias que se unen a una molecula diana con alta afinidad. La expresion de las bibliotecas de peptidos y protelnas en fagos se ha utilizado para el cribado de millones de polipeptidos para detectar aquellos que tienen propiedades de union especlficas. Para la expresion de peptidos pequenos al azar y protelnas pequenas se han usado metodos de expresion en fago polivalentes, generalmente a traves de fusiones con cualquiera de pIII o pVIII del fago filamentoso (Wells y Lowman, (1992) Curr. Opin. Struct. Biol., 3: 355-362, y las referencias citadas en el mismo). En la expresion de fagos monovalente, una biblioteca de protelna o peptido se fusiona con una protelna de la envoltura del fago o una portion del mismo y se
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expresa a bajos niveles en presencia de la protelna de tipo silvestre. Los efectos de la avidez se reducen con respecto al fago polivalente de modo que la clasificacion se hace sobre la base de la afinidad del ligando intrlnseco y se usan vectores fagemidos, que simplifican las manipulaciones de ADN. Lowman and Wells, Methods: A companion to Methods in Enzmology, 3:205-0216 (1991). La expresion en fagos incluye tecnicas para la produccion de moleculas similares a anticuerpos (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, p627-628; Lee et al).
Un "fagemido" es un vector de plasmido que tiene un origen de replication bacteriano, por ejemplo, Co1E1 y una copia de una region intergenica de un bacteriofago. El fagemido puede usarse en cualquier bacteriofago conocido, incluyendo bacteriofago filamentoso y bacteriofago lambdoide. El plasmido tambien contendra generalmente un marcador seleccionable para la resistencia a los antibioticos. Los segmentos de ADN clonados en estos vectores pueden propagarse como plasmidos. Cuando se proporcionan celulas que albergan estos vectores con todos los genes necesarios para la produccion de partlculas de fago, el modo de replicacion del plasmido cambia a la replicacion de clrculo rodante para generar copias de una cadena del ADN del plasmido y las partlculas de fago para envoltura. El fagemido puede formar partlculas de fago infecciosas o no infecciosas. Este termino incluye fagemidos que contienen un gen de protelna de la envoltura del fago o un fragmento de la misma unido a un gen polipeptido heterologo como una fusion de genes de tal manera que el polipeptido heterologo se expresa en la superficie de la partlcula del fago.
"Enlazador", "unidad enlazadora" o "enlace" se refiere a un resto qulmico que comprende un enlace covalente o una cadena de atomos que une covalentemente un anticuerpo con un resto de farmaco. En diversas realizaciones, un enlazador se especifica como L. Los enlazadores incluyen un radical divalente tal como un alquildiilo, un arileno, un heteroarileno, restos tales como: -(CR2)nO(CR2)n-, unidades repetitivas de alquiloxi (por ejemplo, polietilenoxi, PEG, polimetilenoxi) y alquilamino (por ejemplo, polietilenamino, Jeffamine™) y ester de diacido y amidas, incluyendo succinato, succinamida, diglicolato, malonato y caproamida.
El termino "marcador" se refiere a cualquier resto que puede unirse covalentemente a un anticuerpo y que funciona para: (i) proporcionar una senal detectable; (ii) interactuar con una segunda etiqueta para modificar la senal detectable proporcionada por la primera o segunda etiqueta, por ejemplo, FRET (transferencia de energla de resonancia de fluorescencia); (iii) estabilizar las interacciones o aumentar la afinidad de union, con el antlgeno o ligando; (iv) afectar a la movilidad, por ejemplo, movilidad electroforetica o permeabilidad celular, por carga, hidrofobicidad, forma u otros parametros flsicos o (v) proporcionar un resto de captura, para modular la afinidad de ligando, union al anticuerpo/antlgeno o complejacion ionica.
Las definiciones estereoqulmicas y convenciones utilizadas en la presente memoria generalmente siguen lo descrito en S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York y Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., New York. Muchos compuestos organicos existen en formas opticamente activas, es decir, tienen la capacidad de rotar el plano de la luz polarizada en un plano. En la description de un compuesto opticamente activo, los prefijos D y L, o R y S, se utilizan para denotar la configuration absoluta de la molecula alrededor de su centro(s) quiral. Los prefijos d y l o (+) y (-) se emplean para designar el signo de rotation de la luz polarizada en un plano por el compuesto, significando (- ) o 1 que el compuesto es levogiro. Un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrogiro. Para una estructura qulmica dada, estos estereoisomeros son identicos, excepto que son imagenes especulares uno del otro. Un estereoisomero especlfico tambien puede ser referido como un enantiomero y una mezcla de tales isomeros a menudo se denomina mezcla enantiomerica. Una mezcla 50:50 de enantiomeros se denomina mezcla racemica o un racemato, la cual puede ocurrir cuando no ha habido una estereoseleccion o estereoespecificidad en una reaction qulmica o proceso. Los terminos "mezcla racemica" y "racemato" se refieren a una mezcla equimolar de dos especies enantiomericas, carentes de actividad optica.
La expresion "sal farmaceuticamente aceptable", como se usa en la presente memoria, se refiere a sales organicas o inorganicas farmaceuticamente aceptables de un ADC. Ejemplos de sales incluyen, pero no se limitan, a sales sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, bisulfato, fosfato, fosfato acido, isonicotinato, lactato, salicilato, citrato acido, tartrato, oleato, tanato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluensulfonato y pamoato (es decir, 1,1'-metilen-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)). Una sal farmaceuticamente aceptable puede implicar la inclusion de otra molecula tal como un ion acetato, un ion succinato u otro contraion. El contraion puede ser cualquier resto organico o inorganico que estabiliza la carga en el compuesto original. Ademas, una sal farmaceuticamente aceptable puede tener mas de un atomo cargado en su estructura. Los casos en los que multiples atomos cargados son parte de la sal farmaceuticamente aceptable pueden tener multiples contraiones. Por lo tanto, una sal farmaceuticamente aceptable puede tener uno o mas atomos cargados y/o uno o mas contraiones.
"Solvato farmaceuticamente aceptable" se refiere a una asociacion de una o mas moleculas de disolvente y un ADC. Ejemplos de disolventes que forman solvatos farmaceuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, agua, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, acido acetico y etanolamina.
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Las siguientes abreviaturas se usan en la presente memoria y tienen las definiciones indicadas: BME es beta- mercaptoetanol, Boc es N-(t-butoxicarbonil), cit es citrulina (acido 2-amino-5-ureido pentanoico), dap es dolaprolna, DCC es 1,3-diciclohexilcarbodiimida, DCM es diclorometano, DEA es dietilamina, DEAD es dietilazodicarboxilato, DEPC es dietilfosforilcianidato, DIAD es diisopropilazodicarboxilato, DIEA es N,N-diisopropiletilamina, dil es dolaisoleucina, DMA es dimetilacetamida, DMAP es 4-dimetilaminopiridina, DME es etilenglicol dimetil eter (o 1,2- dimetoxietano), DMF es N,N-dimetilformamida, DMSO es dimetilsulfoxido, doe es dolafenina, dov es N,N- dimetilvalina, DTNB es 5,5'-ditiobis (acido 2-nitrobenzoico), DTPA es acido dietilentriaminopentaacetico, DTT es ditiotreitol, EDCI es clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, EEDQ es 2-etoxi-1-etoxicarbonil -1,2- dihidroquinolina, ES-MS es espectrometrla de masas de electronebulizacion, EtOAc es acetato de etilo, Fmoc es N- (9-fluorenilmetoxicarbonilo), gly es glicina, HATU es hexafluorofosfato de O- (7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'- tetrametiluronio, HOBt es 1-hidroxibenzotriazol, HPLC es cromatografla llquida de alto rendimiento, ile es isoleucina, lys es lisina, MeCN (CH3CN) es acetonitrilo, MeOH es metanol, Mtr es 4-anisildifenilmetil (o 4-metoxitritil), nor es (1S, 2R)-(+)-norefedrina, PAB es p-aminobencilcarbamoil, PBS es solucion salina tamponada con fosfato (pH 7), PEG es polietilenglicol, Ph es fenilo, Pnp es p-nitrofenilo, MC es 6-maleimidocaprollo, phe es L-fenilalanina, PyBrop es hexafluorofosfato de bromo-fris-pirrolidino, SEC es cromatografla de exclusion por tamano, Su es succinimida, TFA es acido trifluoroacetico, TLC es cromatografla en capa fina. UV es ultravioleta, y val es valina.
ANTICUERPOS MANIPULADOS CON CISTEINA
Los compuestos de la divulgacion incluyen anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna donde uno o mas aminoacidos de un anticuerpo de tipo silvestre o anticuerpo parental se sustituyen con un aminoacido cistelna. Cualquier forma de anticuerpo puede ser modificado por ingenierla genetica de este modo, es decir, mutado. Por ejemplo, un fragmento de anticuerpo Fab parental puede ser disenado para formar un Fab modificado por ingenierla genetica con cistelna, referido aqul como "TioFab". De manera similar, un anticuerpo monoclonal parental puede ser disenado para formar un "TioMab". Debe tenerse en cuenta que la mutacion de sitio unico produce un unico residuo de cistelna modificado por ingenierla genetica en un TioFab, mientras que una mutacion de sitio unico produce dos residuos cistelna modificados por ingenierla genetica en un TioMab, debido a la naturaleza dimerica de los anticuerpos IgG. Los mutantes con residuos de cistelna (Cis) ("modificados por ingenierla genetica") se evaluan en cuanto a la reactividad de los grupos tiol de la cistelna. El valor de la reactividad tiol es un termino relativo, numerico en el intervalo de 0 a 1,0 y se puede medir por cualquier anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna. Los valores de la reactividad del tiol de los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna de la divulgacion estan en los intervalos de 0,6 a 1,0; 0,7 a 1,0; o 0,8 a 1,0.
Los metodos de diseno, seleccion y preparation de la invention permiten anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna que son reactivos con funcionalidad electrofila. Estos metodos permiten otros compuestos conjugados de anticuerpos tales como compuestos conjugado anticuerpo-farmaco (ADC) con moleculas del farmaco en sitios designados, disenados selectivos. Los residuos de cistelna reactivos en la superficie de un anticuerpo permiten conjugar especlficamente un resto de farmaco a traves de un grupo reactivo tiol tal como maleimida o haloacetilo. La reactividad nucleofila de la funcionalidad tiol de un residuo de Cis frente a un grupo maleimida es aproximadamente 1000 veces mayor en comparacion con cualquier otra funcionalidad de aminoacidos en una protelna, tal como un grupo amino de residuos de lisina o el grupo amino N-terminal. La funcionalidad tiol especlfica en reactivos yodoacetilo y maleimida puede reaccionar con grupos amina, pero a pH mas alto (> 9,0) y se requieren tiempos de reaction mas largos (Garman, 1997, Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach. Academic Press, Londres).
Los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna de la divulgacion conservan preferentemente la capacidad de union de sus anticuerpos homologos parentales de tipo silvestre. Por lo tanto, los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna son capaces de unirse, preferiblemente especlficamente, a los antlgenos. Tales antlgenos incluyen, por ejemplo, antlgenos asociados a tumores (TAA), protelnas receptoras de la superficie celular y otras moleculas de la superficie celular, protelnas transmembrana, protelnas de serialization, factores de regulation de supervivencia celular, factores de regulation de proliferation celular, moleculas asociadas a (por ejemplo, moleculas conocidas o que se sospecha que contribuyen funcionalmente) el desarrollo o la diferenciacion de tejidos, linfocinas, citocinas, moleculas implicadas en la regulacion del ciclo celular, moleculas que participan en la vasculogenesis y moleculas asociadas (por ejemplo, moleculas conocidas o que se sospecha que contribuyen funcionalmente) a la angiogenesis. El antlgeno asociado a un tumor puede ser un factor de diferenciacion de cluster (es decir, una protelna CD). Un antlgeno al cual se puede unir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna puede ser un miembro de un subconjunto de una de las categorlas mencionadas anteriormente, en el que el otro subconjunto(s) de dicha categorla comprende otras moleculas/antlgenos que tienen una caracterlstica distinta (con respecto al antlgeno de interes).
El anticuerpo parental puede ser tambien un anticuerpo humanizado seleccionado de huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 y huMAb4D5-8 (Trastuzumab, HERCEPTIN®) como se describe en la Tabla 3 del documento US 5821337, 520C9 humanizado (WO 93/21319) y anticuerpos humanizados 2C4 como se describe en la presente memoria.
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Los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna de la divulgacion pueden unirse especlficamente y eficazmente al sitio con un reactivo que reacciona con tiol. El reactivo que reacciona con tiol puede ser un reactivo enlazador multifuncional, es decir, un reactivo marcador de afinidad (por ejemplo un reactivo enlazador de biotina), un marcador de deteccion (por ejemplo, un reactivo fluoroforo), un reactivo de inmovilizacion de la fase solida (por ejemplo SEPHAROSE™, poliestireno o vidrio), o un intermedio farmaco-enlazador. Un ejemplo de un reactivo que reacciona con tiol es N-etilmaleimida (NEM). En un ejemplo de realizacion, la reaccion de un TioFab con un reactivo enlazador de biotina proporciona un TioFab biotinilado mediante el cual se puede detectar y medir la presencia y la reactividad del residuo de cistelna modificado por ingenierla genetica. La reaccion de un TioFab con un reactivo enlazador multifuncional proporciona un TioFab con un enlazador funcionalizado que puede reaccionar adicionalmente con un reactivo que es un resto de farmaco u otro marcador. La reaccion de un TioFab con un intermedio enlazador de un farmaco proporciona un conjugado TioFab-farmaco.
Ejemplos de metodos descritos aqul pueden aplicarse en general a la identificacion y produccion de anticuerpos, y mas en general, a otras protelnas a traves de la aplicacion de las etapas de diseno y cribado descritas en este documento.
Este enfoque se puede aplicar a la conjugacion de otros agentes reactivos con tiol en los que el grupo reactivo es, por ejemplo, una maleimida, una yodoacetamida, un disulfuro de piridilo u otra pareja de conjugacion de tiol reactiva (Haugland, 2003, Molecular Probes Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, Molecular Probes, Inc.; Brinkley, 1992, Bioconjugate Chem. 3:2; Garman, 1997, Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach, Academic Press, London; Means (1990) Bioconjugate Chem. 1:2; Hermanson, G. in Bioconjugate Techniques (1996) Academic Press, San Diego, pp. 40-55, 643-671). La pareja puede ser un agente citotoxico (por ejemplo, una toxina tal como la doxorrubicina o la toxina pertussis), un fluoroforo tal como un colorante fluorescente como fluorescelna o rodamina, un agente quelante para la formacion de imagenes o metal radioterapeutico, un marcador de peptidilo o no peptidilo o etiqueta de deteccion, o un agente modificador del aclaramiento, tal como diversos isomeros de polietilenglicol, un peptido que se une a un tercer componente u otro hidrato de carbono o agente lipofilo.
Los sitios identificados en el fragmento de anticuerpo de ejemplo, hu4D5Fabv8 de la presente invencion estan principalmente en el dominio constante de un anticuerpo, que esta bien conservado a traves de todas las especies de anticuerpos. Estos sitios deben ser ampliamente aplicables a otros anticuerpos, sin mas necesidad de diseno estructural o del conocimiento de las estructuras de anticuerpos especlficos y sin interferencias en las propiedades de union al antlgeno inherentes a los dominios variables de union al anticuerpo.
Los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna que pueden ser utiles en el tratamiento del cancer incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos contra los receptores de superficie celular y antlgenos asociados a tumores (TAA). Tales anticuerpos pueden ser utilizados como anticuerpos desnudos (sin conjugar a un resto de farmaco o de marcador) o como conjugados anticuerpo-farmaco (ADC) de Formula I. Los antlgenos asociados a tumores son conocidos en la tecnica, y pueden prepararse para su uso en la generacion de anticuerpos usando metodos e informacion que son bien conocidos en la tecnica. En los intentos por descubrir dianas celulares eficaces para el diagnostico y la terapia del cancer, los investigadores han intentado identificar polipeptidos transmembrana o de otro modo asociados a tumores que se expresan especlficamente en la superficie de uno o mas tipos particulares de celulas cancerosas en comparacion con una o mas celulas no cancerosas normales. A menudo, dichos polipeptidos asociados a tumores se expresan mas abundantemente en la superficie de las celulas cancerosas en comparacion con la superficie de las celulas no cancerosas. La identificacion de dichos polipeptidos antlgenos de la superficie celular asociados a tumores ha dado lugar a la capacidad de dirigirse especlficamente a las celulas cancerosas para la destruccion a traves de terapias basadas en anticuerpos.
Ejemplos de TAA incluyen, pero no se limitan a, TAA (1)-(36) enumerados a continuation. Por conveniencia, se enumera a continuacion la informacion relativa a estos antlgenos, todos los cuales son conocidos en la tecnica e incluye nombres, nombres alternativos, numeros de acceso GenBank y de referencia(s) primaria(s), siguiendo las convenciones de identificacion de secuencias de acidos nucleicos y de protelnas del Centro Nacional de Informacion sobre Biotecnologla (NCBI). Las secuencias de acidos nucleicos y protelnas que corresponden a TAA (1)-(36) estan disponibles en bases de datos publicas tales como GenBank. Los antlgenos asociados a tumores dirigidos por anticuerpos incluyen todas las secuencias de aminoacidos variantes e isoformas que poseen al menos aproximadamente 70 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad de secuencia con respecto a las secuencias identificadas en las referencias citadas, o que presentan sustancialmente las mismas propiedades biologicas o caracterlsticas como un TAA que tiene una secuencia que se encuentra en las referencias citadas. Por ejemplo, un TAA que tiene una secuencia variante en general es capaz de unirse especlficamente a un anticuerpo que se une especlficamente al TAA con la secuencia correspondiente en la lista.
ANTIGENOS ASOCIADOS A TUMORES (1)-(36)
(1) BMPR1B (receptor de la protelna morfogenetica osea tipo 1B, N.° de acceso de Genbank. NM_001203) ten
Dijke,P., et al Science 264 (5155):101-104 (1994), Oncogene 14 (11):1377-1382 (1997));
WO2004063362 (Reivindicacion 2); WO2003042661 (Reivindicacion 12); US2003134790-A1 (Pagina 38-39);
WO2002102235 (Reivindicacion 13; Pagina 296); WO2003055443 (Pagina 91-92); WO200299122 (Ejemplo 2;
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Pagina 528-530); WO2003029421 (Reivindicacion 6); WO2003024392 (Reivindicacion 2; Fig 112);
WO200298358 (Reivindicacion 1; Pagina 183); WO200254940 (Pagina 100-101); WO200259377(Pagina 349350); WO200230268 (Reivindicacion 27; Pagina 376); WO200148204 (Ejemplo; Fig 4) NP_001194 receptor de la protelna morfogenetica osea tipo 1B /pid=NP_001194.1-Referencias cruzadas: MIM:603248; NP_001194.1; AY065994
(2) E16 (LAT1, SLC7A5, N.° de acceso de Genbank. NM_003486) Biochem. Biophys. Res. Commun. 255 (2), 283-288 (1999), Nature 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W., et al (1992) J. Biol. Chem. 267 (16):11267- 11273); WO2004048938 (Ejemplo 2); WO2004032842 (Ejemplo IV); WO2003042661 (Reivindicacion 12); WO2063016475 (Reivindicacion 1); WO200278524 (Ejemplo 2);
WO200299074 (Reivindicacion 19; Pagina 127-129); WO200286443 (Reivindicacion 27; Paginas 222, 393); WO2003003906 (Reivindicacion 10; Pagina 293); WO200264798 (Reivindicacion 33; Pagina 93-95); WO200014228.(Reivindicacion 5; Pagina 133-136); US2003224454 (Fig 3); WO2003025138 (Reivindicacion 12; Pagina 150);
NP_003477 familia de vehlculos de soluto 7 (vehlculo de aminoacidos cationicos, sistema y+), miembro 5 /pid=NP_003477.3 - Homo sapiens Referencias cruzadas: MIM:600182; NP_003477.3; NM_015923;
NM_003486_1
(3) STEAP1 (antlgeno epitelial de seis dominios transmembrana de la prostata, N.° de acceso de Genbank. NM_012449) Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001), Hubert, R.S., et al (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (25):14523-14528); WO004065577 (Reivindicacion 6); WO2004027049 (Fig 1L); EP1394274 (Ejemplo 11); WO2004016225 (Reivindicacion 2); WO2003042661 (Reivindicacion 12); US2003157089 (Ejemplo 5); US2003185830 (Ejemplo 5); US2003064397 (Fig 2); WO200289747 (Ejemplo 5; Pagina 618-619); WO2003022995 (Ejemplo 9; Fig 13A, Example 53; Pagina 173, Example 2; Fig 2a);
NP_036581 antlgeno epitelial de seis dominios transmembrana de la prostata Referencias cruzadas: MIM:604415; NP_036581.1; NM_012449_1
(4) 0772P (CA125, MUC16, N.° de acceso de Genbank. AF361486) J. Biol. Chem. 276 (29):27371-27375 (2001)); WO2004045553 (Reivindicacion 14); WO200292836 (Reivindicacion 6; Fig 12); WO200283866 (Reivindicacion 15; Pagina 116-121); US2003124140 (Ejemplo 16); Referencias cruzadas: GI:34501467; AAK741203; AF361486_1
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, factor potenciador de megacariocitos, mesotelina, N.° de acceso de Genbank. NM_005823) Yamaguchi, N., et al Biol. Chem. 269 (2), 805-808 (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (20):11531-11536 (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A 93 (1):136-140 (1996), J. BioL Chem. 270 (37):21984- 21990 (1995)); WO2003101283 (Reivindicacion 14); (WO2002102235 (Reivindicacion 13; Pagina 287-288); WO2002101075 (Reivindicacion 4; Pagina 308-309); WO200271928 (Pagina 320-321); WO9410312 (Pagina 5257); Referencias cruzadas: MIM:601051; NP_005814.2; NM_005823_1
(6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, familia de vehlculos de soluto 34 (fosfato sodico), miembro 2, vehlculo de fosfato dependiente de sodio tipo II 3b, N.° de acceso de Genbank. NM_006424) J. Biol. Chem. 277 (22):19665-19672 (2002), Genomics 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A., et al (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3):578-582); WO2004022778 (Reivindicacion 2); EP1394274 (Ejemplo 11);
WO2002102235 (Reivindicacion 13; Pagina 326); EP875569 (Reivindicacion 1; Pagina 17-19); WO200157188 (Reivindicacion 20; Pagina 329); WO2004032842 (Ejemplo IV); WO200175177 (Reivindicacion 24; Pagina 139140); Referencias cruzadas: MIM:604217; NP_006415.1; NM_006424_1
(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforina 5b Hlog, dominio sema, siete repeticiones de trombospondina (tipo 1 y similar a tipo 1), dominio transmembrana (TM) y dominio citoplasmatico corto, (semaforina) 5B, N.° de acceso de Genbank. AB040878) Nagase T., et al (2000) DNA Res. 7 (2):143-150); WO2004000997 (Reivindicacion 1); WO2003003984 (Reivindicacion 1); WO200206339 (Reivindicacion 1; Pagina 50); WO200188133 (Reivindicacion 1; Pagina 41-43, 48-58); WO2003054152 (Reivindicacion 20); WO2003101400 (Reivindicacion 11);
Acceso: Q9P283; EMBL; AB040878; BAA95969.1. Genew; HGNC:10737;
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, gen RIKEN cDNA 2700050C12, N.° de acceso de Genbank. AY358628); Ross et al (2002) Cancer Res. 62:2546-2553;
US2003129192 (Reivindicacion 2); US2004044180 (Reivindicacion 12); US2004044179 (Reivindicacion 11); US2003096961 (Reivindicacion 11); US2003232056 (Ejemplo 5); WO2003105758 (Reivindicacion 12); US2003206918 (Ejemplo 5); EP1347046 (Reivindicacion 1); WO2003025148 (Reivindicacion 20);
Referencias cruzadas: GI:37182378; AAQ88991.1; AY358628_1
(9) ETBR (receptor de endotelina tipo B, N.° de acceso de Genbank. AY275463);
Nakamuta M., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991; Ogawa Y., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 178,248-255, 1991; Arai H., et al Jpn. Circ. J. 56, 1303-1307, 1992; Arai H., et al J. Biol. Chem. 268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M., et al Biochem. Biophys. Res. Commun.178, 656-663,1991;
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Elshourbagy N.A., et al J. Biol. Chem. 268, 3873-3879,1993; Haendler B., et al J. Cardiovasc. Pharmacol. 20, si- 84, 1992; Tsutsumi M., et al Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.8.A. 99, 16899-16903, 2002; Bourgeois C., et al J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y., et al Biol. Chem. 272, 21589-21596, 1997; Verheij JB., et al Am. J. Med. Genet. 108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W., et al Eur. J. Hum. Genet. 5.180-185, 1997; Puffenberger E.G., et al Cell 79,1257-1266,1994; Attie T., et al, Hum. Mol. Genet. 4, 2407-2409, 1995; Auricchio A., et al Hum. Mol. Genet. 5:351-354,1996; Amiel J., et al Hum. Mol. Genet 5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W., et al Nat. Genet. 12, 445-447,1996; Svensson PJ., et al Hum. Genet. 103,145148,1998; Fuchs 8., et al Mol. Med. 7,115-124, 2001; Pingault V., et al (2002) Hum. Genet. 111,198-206; WO004045516 (Reivindicacion 1); WO2004048938 (Ejemplo 2); W02004040000 (Reivindicacion 151); W02003087768 (Reivindicacion 1); W0200301647 (Reivindicacion 1); W02003016475 (Reivindicacion 1); W0200261087 (Fig 1); W0200301649 (Fig 6); W02003025138 (Reivindicacion 12; Pagina 144); W0200198351 (Reivindicacion 1; Pagina 124-125); EP522868 (Reivindicacion 8; Fig 2); W0200177172 (Reivindicacion 1; Pagina 297-299); U82003109676; U86518404 (Fig 3); U85773223 (Reivindicacion la; Col 31-34);
W0004001004;
(10) M8G783 (RNF124, protelna hipotetica FLJ20315, N.° de acceso de Genbank. NM_017763); W02003104275 (Reivindicacion 1); W02004046342 (Ejemplo 2); W02003042661 (Reivindicacion 12); W02003083074 (Reivindicacion 14; Pagina 61); W02003018621 (Reivindicacion 1); W02003024392 (Reivindicacion 2; Fig 93); W0200166689 (Ejemplo 6);
(11) 8TEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, 8TAMP1, 8TEAP2, 8TMP, gen asociado al cancer de prostata 1, protelna asociada al cancer de prostata 1, antlgeno epitelial de seis dominios transmembrana de la prostata 2, protelna de la prostata de seis dominios transmembrana, N.° de acceso de Genbank. AF455138)
Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002)); W02003087306; U82003064397 (Reivindicacion 1; Fig 1); W0200272596 (Reivindicacion 13; Pagina 54-55); W0200172962 (Reivindicacion 1; Fig 4B); W02003104270 (Reivindicacion 11); W02003104270 (Reivindicacion 16); U82004005598 (Reivindicacion 22); W02003042661 (Reivindicacion 12); U82003060612 (Reivindicacion 12; Fig 10); W0200226822 (Reivindicacion 23; Fig 2); W0200216429 (Reivindicacion 12; Fig 10);
Referencias cruzadas: GI:22655488; AAN04080.1; AF455138_1
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, canal cationico de potencial de receptor transitorio, subfamilia M, miembro 4, N.° de acceso de Genbank. NM_017636)
Xu, X.Z, et al Proc. Natl. Acad. 8ci. U.8.A. 98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol. Chem. 278 (33):30813-30820 (2003)); U82003143557 (Reivindicacion 4); W0200040614 (Reivindicacion 14; Pagina 100-103); W0200210382 (Reivindicacion 1; Fig 9A); W02003042661 (Reivindicacion 12); W0200230268 (Reivindicacion 27; Pagina 391); U82003219806 (Reivindicacion 4); W0200162794 (Reivindicacion 14; Fig 1A- D);
Referencias cruzadas: MIM:606936; NP_060106.2; NM_017636_1
(13) CRIPT0 (CR, CR1, CRGF, CRIPT0, TDGF1, factor de crecimiento derivado de teratocarcinoma, N.° de acceso de Genbank. NP_003203 o NM_003212)
Ciccodicola, A., et al EMB0 J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am. J. Hum. Genet. 49 43):555-565 (1991)); U82003224411 (Reivindicacion 1); W02003083041 (Ejemplo 1); W02003034984 (Reivindicacion 12); W0200288170 (Reivindicacion 2; Pagina 52-53); W02003024392 (Reivindicacion 2; Fig 58); W0200216413 (Reivindicacion 1; Pagina 94-95, 105); W0200222808 (Reivindicacion 2; Fig 1); U85854399 (Ejemplo 2; Col 1718); U85792616 (Fig 2); Referencias cruzadas: MIM:187395; NP_003203.1; NM_003212_1
(14) CD21 (CR2 (Receptor del complemento 2) o C3DR (C3d/receptor del virus de Epstein Barr) o Hs.73792 N.° de acceso de Genbank. M26004)
Fujisaku et al (1989) J. Biol. Chem. 264 (4):2118-2125); Weis J.J., et al J. Exp. Med. 167,1047-1066,1988; Moore M., et al Proc. Natl. Acad. 8ci. U.8.A. 84,9194-9198,1987; Barel M., et al Mol. Immunol. 35,1025-1031,1998; Weis JJ., et al Proc. Natl. Acad. 8ci. U.8.A. 83, 5639-5643, 1986; 8inha 8.K., et al (1993) J. Immunol.150, 53115320; W02004045520 (Ejemplo 4);
U82004005538 (Ejemplo 1); W02003062401 (Reivindicacion 9); W02004045520 (Ejemplo 4);
W09102536 (Fig 9.1.-9.9); W02004020595 (Reivindicacion 1);
Acceso: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786.1.
(15) CD79b (CD79B, CD79p, IGb (inmunoglobulina beta asociada), B29, N.° de acceso de Genbank. NM_000626 o 11038674)
Proc. Natl. Acad. 8ci. U.8.A. (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):3068-3076, Muller et al (1992) Eur.J. Immunol. 22 (6):1621-1625); W02004016225 (Reivindicacion 2, Fig 140); W02003087768. U82004101874 (Reivindicacion 1. pagina 102); W02003062401 (Reivindicacion 9); W0200278524 (Ejemplo 2); U82002150573 (Reivindicacion 5, pagina 15); U85644033; W02003048202 (Reivindicacion 1, paginas 306 y 309); W0 99/558658, U86534482 (Reivindicacion 13, Fig 17A/B); W0200055351 (Reivindicacion 11, paginas 1145-1146); Referencias cruzadas: MIM:147245; NP_000617.1; NM_000626_1
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(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (protelna 1a de anclaje de fosfatasa que contiene el dominio SH2), SPAP1B, SPAP1C, N.° de acceso de Genbank. NM_030764, AY358130)
Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (17):9772-9777 (2001), Xu, MJ., et al (2001) Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 (3):768-775; WO2004016225 (Reivindicacion 2); WO2003077836; WO200138490 (Reivindicacion 5; Fig 18D-1-18D-2); WO2003097803 (Reivindicacion 12); WO2003089624 (Reivindicacion 25);
Referencias cruzadas: MIM:606509; NP_1103912; NM_030764_1
(17) HER2 (ErbB2, N.° de acceso de Genbank. M11730)
Coussens L., et al Science (1985) 230(4730):1132-1139); Yamamoto T., et al Nature 319, 230-234,1986; Semba K., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., et al J. Cell Biol. 165, 869-880, 2004; Kuhns JJ., et al J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., et al Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A., et al (1993) Genomics 15, 426-429;
WO2004048938 (Ejemplo 2); WO2004027049 (Fig 1I); WO2004009622; WO2003081210; WO2003089904 (Reivindicacion 9); WO2003016475 (Reivindicacion 1); US2003118592; WO2003008537 (Reivindicacion 1); WO2003055439 (Reivindicacion 29; Fig 1A-B); WO2003025228 (Reivindicacion 37; Fig 5C); WO200222636 (Ejemplo 13; Pagina 95-107); WO200212341 (Reivindicacion 68; Fig 7); WO200213847 (Pagina 71-74); WO200214503 (Pagina 114-117); WO200153463 (Reivindicacion 2; Pagina 41-46); WO200141787 (Pagina 15); WO200044899 (Reivindicacion 52; Fig 7); WO200020579 (Reivindicacion 3; Fig 2); US5869445.(Reivindicacion 3; Col 31-38); WO9630514 (Reivindicacion 2; Pagina 56-61); EP1439393 (Reivindicacion 7); WO2004043361 (Reivindicacion 7);
WO2004022709; WO200100244 (Ejemplo 3; Fig 4);
Acceso: P04626; EMBL; M11767; AAA35808.1. EMBL; M11761; AAA35808.1.
(18) NCA (CEACAM6, N.° de acceso de Genbank. M18728);
Barnett T., et al Genomics 3,59-66,1988; Tawaragi Y., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:16899-16903,2002; WO2004063709;
EP1439393 (Reivindicacion 7); WO2004044178 (Ejemplo 4); WO2004031238; WO2003042661 (Reivindicacion 12);
WO200278524 (Ejemplo 2); WO200286443 (Reivindicacion 27; Pagina 427); WO200260317 (Reivindicacion 2); Acceso: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915.1. EMBL; M18728;
(19) MDP (DPEP1, N.° de acceso de Genbank. BC017023)
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002)); WO2003016475 (Reivindicacion 1);
WO200264798 (Reivindicacion 33; Pagina 85-87); JP05003790 (Fig 6-8); WO9946284 (Fig 9);
Referencias cruzadas: MIM:179780; AAH17023.1; BC017023_1
(20) IL20Ra (IL20Ra, ZCYTOR7, N.° de acceso de Genbank. AF184971);
Clark H.F., et al Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Mungall A.J., et al Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H., et al Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L., et al J. Immunol. 167, 3545-3549. 2001; Parrish-Novak J., et al J. Biol. Chem. 277, 47517-47523, 2002; Pletnev S., et al (2003) Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., et al (2004) J. Immunol. 172, 2006-2010; EP1394274 (Ejemplo 11); US2004005320 (Ejemplo 5); WO2003029262 (Pagina 7475); WO2003002717 (Reivindicacion 2; Pagina 63); WO200222153 (Pagina 45-47); US2002042366 (Pagina 2021); WO200146261 (Pagina 57-59); WO200146232 (Pagina 63-65); WO9837193 (Reivindicacion 1; Pagina 5559);
Acceso: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320.1.
(21) Brevican (BCAN, BEHAB, N.° de acceso de Genbank. AF229053) Gary S.C.. et al Gene 256, 139-147, 2000; Clark H.F., et al Genome Res. 13, 2265-2270, 2003;
Strausberg RL., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; US2003186372 (Reivindicacion 11); US2003186373 (Reivindicacion 11); US2003119131 (Reivindicacion 1; Fig 52); US2003119122 (Reivindicacion 1; Fig 52); US2003119126 (Reivindicacion 1); US2003119121 (Reivindicacion 1; Fig 52); US2003119129 (Reivindicacion 1); US2003119130 (Reivindicacion 1); US2003119128 (Reivindicacion 1; Fig 52); US2003119125 (Reivindicacion 1); WO2003016475 (Reivindicacion 1); WO200202634 (Reivindicacion 1);
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5. N.° de acceso de Genbank. NM_04442) Chan,J. and Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); WO2003042661 (Reivindicacion 12);
WO200053216 (Reivindicacion 1; Pagina 41); WO2004065576 (Reivindicacion 1); WO2004020583
(Reivindicacion 9); WO2003004529 (Pagina 128-132); WO200053216 (Reivindicacion 1; Pagina 42);
Referencias cruzadas: MIM:600997; NP_004433.2; No_004442_1
(23) ASLG659 (B7h, N.° de acceso de Genbank. AX092328)
US20040101899 (Reivindicacion 2); WO2003104399 (Reivindicacion 11); WO2004000221 (Fig 3);
US2003165504 (Reivindicacion 1); US2003124140 (Ejemplo 2); US2003065143 (Fig 60); WO2002102235 (Reivindicacion 13; Pagina 299);
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US2003091580 (Ejemplo 2); WO200210187 (Reivindicacion 6; Fig 10); WO200194641 (Reivindicacion 12; Fig 7b);
WO200202624 (Reivindicacion 13; Fig 1A-1B); US2002034749 (Reivindicacion 54; Pagina 45-46);
WO200206317 (Ejemplo 2;
Pagina 320-321, Reivindicacion 34; Pagina 321-322); WO200271928 (Pagina 468-469); WO200202587 (Ejemplo 1; Fig 1); WO200140269 (Ejemplo 3; Paginas 190-192); WO200036107 (Ejemplo 2; Pagina 205-207); WO2004053079 (Reivindicacion 12); WO2003004989 (Reivindicacion 1); WO200271928 (Pagina 233-234, 452453); WO 0116318;
(24) PSCA (Precursor del antlgeno de las celulas madre prostaticas, N.° de acceso de Genbank. AJ297436) Reiter RE., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95,1735-1740,1998; Gu Z, et al Oncogene 19, 1288-1296,2000; Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275(3):783-788; WO2004022709,
EP1394274 (Ejemplo 11); US2004018553 (Reivindicacion 17); WO2003008537 (Reivindicacion 1); WO200281646 (Reivindicacion 1; Pagina 164); WO2003003906 (Reivindicacion 10; Pagina 288): WO200140309 (Ejemplo 1; Fig 17); US2001055751 (Ejemplo 1; Fig 1b); WO200032752 (Reivindicacion 18; Fig 1); WO9851805 (Reivindicacion 17; Pagina 97); WO9851824 (Reivindicacion 10; Pagina 94); WO9840403 (Reivindicacion 2; Fig 1B);
Acceso: 043653; EMBL; AF043498; AAC39607.1.
(25) GEDA (N.° de acceso de Genbank. AY260763);
protelna de tipo companero de fusion de la HMGIC de lipoma AAP14954 /pid=AAP14954.1 - Especie Homo sapiens: Homo sapiens (humano)
WO2003054152 (Reivindicacion 20); WO2003000842 (Reivindicacion 1); WO2003023013 (Ejemplo 3, Reivindicacion 20); US2003194704 (Reivindicacion 45);
Referencias cruzadas: GI:30102449; AAP14954.1; AY260763_1
(26) BAFF-R (receptor del factor de activacion de linfocitos B, receptor BLyS 3, BR3, N.° de acceso de Genbank. AF116456); receptor de BAFF/pid=NP_443177.1 - Homo sapiens Thompson, J.S., et al Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO2004058309; WO2004011611;
WO2003045422 (Ejemplo; Pagina 32-33); WO2003014294 (Reivindicacion 35; Fig 6B); WO2003035846 (Reivindicacion 70; Pagina 615-616); WO200294852 (Col 136-137); WO200238766 (Reivindicacion 3; Pagina 133); WO200224909 (Ejemplo 3; Fig 3);
Referencias cruzadas: MIM:606269; NP_443177.1; NM_052945_1; AF132600
(27) CD22 (isoforma CD22-B del receptor de linfocitos B, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814, N.° de acceso de Genbank. AK026467);
Wilson et al (1991) J. Exp. Med. 173:137-146; WO2003072036 (Reivindicacion 1; Fig 1);
Referencias cruzadas: MIM:107266; NP_001762.1; NM_001771_1
(28) CD79a (CD79A, CD79a, inmunoglobulina alfa asociada, una protelna especlfica de linfocitos B que interacciona covalentemente con la Ig beta (CD79B) y forma un complejo sobre la superficie con moleculas de IgM, transduce una senal implicada en la diferenciacion de linfocitos B), pI: 4.84, MW: 25028 TM: 2 [P] Gene Chromosome: 19q13.2, N.° de acceso de Genbank. NP_001774.10)
WO2003088808, US20030228319; WO2003062401 (Reivindicacion 9); US2002150573 (Reivindicacion 4, paginas 13-14);
WO9958658 (Reivindicacion 13, Fig 16); WO9207574 (Fig 1); US5644033; Ha et al (1992) J. Immunol. 148(5):1526-1531; Mueller et al (1992) Eur. J. Biochem. 22:1621-1625; Hashimoto et al (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud'homme et al (1992) Clin. Exp. Immunol. 90(1 ):141-146; Yu et al (1992) J. Immunol. 148(2) 633-637; Sakaguchi et al (1988) EMBO J. 7(11):3457-3464;
(29) CXCR5 (receptor del linfoma de Burkitt 1, un receptor acoplado a la protelna G que se activa por la quimiocina CXCL13, interviene en la migracion de linfocitos y en la defensa humoral, desempena un papel en la infeccion por VIH-2 y quizas en el desarrollo del SIDA, linfoma, mieloma y leucemia); 372 aa, pI: 854 MW: 41959 TM: 7 [P] Gene Chromosome: 11q23.3, N.° de acceso de Genbank. NP_001707.1)
WO2004040000; WO2004015426; US2003105292 (Ejemplo 2); US6555339 (Ejemplo 2); WO200261087 (Fig 1); WO200157188 (Reivindicacion 20, pagina 269); WO200172830 (paginas 12-13); WO200022129 (Ejemplo 1, paginas 152-153, Ejemplo 2, paginas 254-256); WO9928468 (Reivindicacion 1, pagina 38); US5440021 (Ejemplo 2, col 49-52); WO9428931 (Paginas 56-58); WO9217497 (Reivindicacion 7, Fig 5); Dobner et al (1992) Eur. J. Immunol. 22:2795-2799; Barella et al (1995) Biochem. J. 309:773-779;
(30) HLA-DOB (Subunidad beta de la molecula MHC de clase II (antlgeno Ia) que une los peptidos y los presenta a los linfocitos T CD4+); 273 aa, pI: 656 MW: 30820 TM: 1 [P] Gene Chromosome: 6p21.3, N.° de acceso de Genbank. NP_002111.1)
Tonnelle et al (1985) eMbOJ. 4(11):2839-2847; Jonsson et al (1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck et al (1992) J. Mol. Biol. 228:433-441; Strausberg et al (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903; Servenius et al (1987) J. Biol. Chem. 262:8759-8766; Beck et al (1996) J. Mol. Biol. 255:1-13; Naruse et al (2002) Tissue
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Antigens 59:512-519; WO9958658 (Reivindicacion 13, Fig 15); US6153408 (Col 35-38); US5976551 (col 168170); US6011146 (col 145-146); Kasahara et al (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar et al (1985) J. Biol. Chem. 260(26):14111-14119;
(31) P2X5 (canal ionico activado por ligando del receptor purinergico P2X 5, canal ionico activado por ATP extracelular, puede estar implicado en la transmision sinaptica y la neurogenesis, cuya deficiencia puede contribuir a la fisiopatologla de la inestabilidad idiopatica del detrusor); 422 aa), pi: 7.63, MW: 47206 TM: 1 [P] Gene Chromosome: 17p13.3, N.° de acceso de Genbank. NP_002552.2)
Le et al (1997) FEBS Lett. 418(1-2):195-199; WO2004047749; WO2003072035 (Reivindicacion 10); Touchman et al (2000) Genome Res. 10:165-173; WO200222660 (Reivindicacion 20); WO2003093444 (Reivindicacion 1); WO2003087768 (Reivindicacion 1); WO2003029277 (Pagina 82);
(32) CD72 (antlgeno de diferenciacion de linfocitos B CD72, Lyb-2) SECUENCIA DE PROTEINAS COMPLETA Full maeaity...tafrfpd (1..359; 359 aa), pi: 8.66, MW: 40225 TM: 1 [P] Gene Chromosome: 9p13.3, N.° de acceso de Genbank. NP_001773.1)
WO2004042346 (Reivindicacion 65); WO2003026493 (Paginas 51-52, 57-58); WO200075655 (Paginas 105106); Von Hoegen et al (1990) J. Immunol. 144(12):4870-4877; Strausberg et al (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903;
(33) LY64 (antlgeno linfocitario 64 (RP105), protelna de membrana tipo I de la familia de protelnas con repeticiones ricas en leucina (LRR), regula la activacion de linfocitos B y la apoptosis, la perdida de funcion esta asociada a una mayor actividad en pacientes con lupus eritematoso sistemico); 661 aa, pI: 6.20, MW: 74147 TM: [P] Gene Chromosome: 5q12, N.° de acceso de Genbank. NP_005573.1)
US2002193567; WO9707198 (Reivindicacion 11, paginas 39-42); Miura et al (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura et al (1998) Blood 92:2815-2822; WO2003083047; WO9744452 (Reivindicacion 8, paginas 57-61); WO200012130 (Paginas 24-26);
(34) FcRH1 (protelna de tipo receptor Fc 1, un supuesto receptor del dominio Fc de inmunoglobulina que contiene los dominios similares a Ig tipo C2 e ITAM, puede tener un papel en la diferenciacion de linfocitos B); 429 aa, pI: 5.28, MW: 46925 TM: 1 [P] Gene Chromosome: 1q21-1q22, N.° de acceso de Genbank. NP_443170.1) WO2003077836; WO200138490 (Reivindicacion 6, Fig 18E-1-18-E-2); Davis et al (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777; WO2003089624 (Reivindicacion 8); EP1347046 (Reivindicacion 1); WO2003089624 (Reivindicacion 7);
(35) IRTA2 (receptor 2 de la superfamilia de inmunoglobulinas asociado a la translocacion, un supuesto inmunorreceptor con posibles papeles en el desarrollo de los linfocitos B y la linfomagenesis; en algunas neoplasias de linfocitos B se produce alteracion de la regulacion del gen mediante translocacion); 977 aa, pI: 6.88 MW: 106468 TM: 1 [p] Gene Chromosome: Iq21, N.° de acceso de Genbank. Humano:AF343662, AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; Raton:AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571.1 WO2003024392 (Reivindicacion 2, Fig 97); Nakayama et al (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127; WO2003077836; WO200138490 (Reivindicacion 3, Fig 18B-1-18B-2);
(36) TENB2 (TMEFF2, tomorregulina, TPEF, HPP1, TR, supuesto proteoglicano transmembrana, relacionado con Familia EGF/heregulina de los factores de crecimiento y folistatina); 374 aa, Acceso NCBI: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI Gene: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; N.° de acceso de Genbank. AF179274; AY358907, CAF85723, CQ782436
WO2004074320 (SEQ ID NO 810); JP2004113151 (SEQ ID NOS 2,4, 8); WO2003042661 (SEQ ID NO 580); WO2003009814 (SEQ ID NO 411); EP1295944 (Paginas 69-70); WO200230268 (Pagina 329); WO200190304 (SEQ ID NO 2706); US2004249130; US2004022727; WO2004063355; US2004197325; US2003232350; US2004005563; US2003124579; Horie et al (2000) Genomics 67:146-152; Uchida et al (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:593-602; Liang et al (2000) Cancer Res. 60:4907-12; Glynne-Jones et al (2001) Int J Cancer. Oct 15;94(2):178-84.
El anticuerpo parental tambien puede ser una protelna de fusion que comprende una secuencia de peptido de union a albumina (ABP) (Dennis et al. (2002). "Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins" J Biol Chem. 277:35035-35043; WO 01/45746). Los anticuerpos de la invention incluyen protelnas de fusion con secuencias de ABP ensenadas por: (i) Dennis et al (2002) J Biol Chem. 277: 3503535043 en las Tablas III y IV, pagina 35038; (ii) US 20040001827 en [0076] SEQ ID NOS: 9-22 y (iii) WO 01/45746 en las paginas 12-13, SEQ ID NOS: z1-z14.
MUTAGENESIS
El ADN que codifica una variante de una secuencia de aminoacidos del polipeptido de partida se prepara por varios metodos conocidos en la tecnica. Estos metodos incluyen, pero no se limitan a, la preparation por mutagenesis dirigida al sitio (o mediada por oligonucleotidos), mutagenesis por PCR y mutagenesis de cassette de un ADN
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preparado anteriormente que codifica el polipeptido. Las variantes de anticuerpos recombinantes pueden ser construidas tambien mediante manipulacion de fragmentos de restriccion o mediante PCR de extension por solapamiento con los oligonucleotidos sinteticos. Los cebadores mutagenicos codifican la sustitucion(s) del codon de cistelna. Se pueden emplear tecnicas de mutagenesis estandar para generar ADN que codifica tales anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna mutantes. Los detalles generales pueden encontrarse en Sambrook et al Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989; y Ausubel et al Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing y Wiley-Interscience, Nueva York, N. Y., 1993.
La mutagenesis dirigida es un metodo para preparar variantes de sustitucion, es decir, protelnas mutantes. Esta tecnica es bien conocida en la tecnica (vease, por ejemplo, Carter (1985) et al Nucleic Acids Res. 13: 4431-4443; Ho et al (1989) Gen (Amst.) 77:51-59; y Kunkel et al (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 82: 488). En resumen, en la realizacion de la mutagenesis dirigida al sitio de ADN, el ADN de partida se altera hibridando primero un oligonucleotido que codifica la mutacion deseada con una sola hebra de tal ADN de partida. Despues de la hibridacion, se utiliza una ADN polimerasa para sintetizar una segunda hebra entera, usando el oligonucleotido hibridado como cebador, y utilizando la cadena sencilla del ADN de partida como molde. Asl, el oligonucleotido que codifica la mutacion deseada se incorpora en el ADN de doble cadena resultante. La mutagenesis dirigida al sitio puede llevarse a cabo dentro del gen que expresa la protelna que se mutageniza en un plasmido de expresion y el plasmido resultante puede ser secuenciado para confirmar la introduccion de las mutaciones de sustitucion de cistelna deseadas (Liu et al (1998) J. Biol. Chem. 273:20252-20260). Los protocolos y formato de mutagenesis dirigida al sitio incluyen los que estan disponibles comercialmente, por ejemplo QuikChange® Multi Site-Directed Mutagenesis Kit (Stratagene, La Jolla, CA).
La mutagenesis por PCR tambien es adecuada para hacer variantes de secuencia de aminoacidos del polipeptido de partida. Ver Higuchi, (1990) en PCR Protocols, pp.177-183, Academic Press; Ito et al (1991) Gen 102: 67-70; Bernhard et al (1994) Bioconjugate Chem. 5: 126-132; y Vallette et al (1989) Nuc. Acids Res. 17: 723-733. En resumen, cuando se utilizan pequenas cantidades de ADN molde como material de partida en una PCR, los cebadores que difieren ligeramente en la secuencia de la region correspondiente en un ADN molde se pueden utilizar para generar cantidades relativamente grandes de un fragmento de ADN especlfico que difiere de la secuencia molde solo en las posiciones donde los cebadores difieren del molde.
Otro metodo para preparar variantes, la mutagenesis de casete, se basa en la tecnica descrita por Wells et al (1985) Gene 34: 315-323. El material de partida es el plasmido (u otro vector) que comprende el aDn del polipeptido de partida a mutar. Se identifican el codon o codones en el ADN de partida a mutar. Debe haber un sitio de endonucleasa de restriccion unico en cada lado del sitio(s) de mutacion identificado. Si no existen tales sitios de restriccion, pueden generarse usando el metodo de mutagenesis mediada por oligonucleotidos descrito anteriormente para introducirlos en localizaciones apropiadas en el ADN del polipeptido de partida. El ADN del plasmido se corta en estos sitios para linealizarlo. Se sintetiza un oligonucleotido de doble cadena que codifica la secuencia del ADN entre los sitios de restriccion pero que contiene la mutacion(es) deseada usando tecnicas estandar, en el que las dos hebras del oligonucleotido se sintetizan por separado y luego se hibridan juntas utilizando tecnicas estandar. Este oligonucleotido de doble cadena se conoce como el cassette. Este casete esta disenado para tener extremos 5' y 3' que son compatibles con los extremos del plasmido linearizado, de modo que pueda ligarse directamente al plasmido. Este plasmido contiene ahora la secuencia de ADN mutada. El aDn mutante que contiene las sustituciones de cistelna codificadas puede ser confirmado mediante secuenciacion de ADN.
Las mutaciones individuales tambien son generadas por mutagenesis dirigida de oligonucleotidos utilizando ADN plasmldico de doble hebra como molde mediante mutagenesis basada en PCR (Sambrook y Russel, (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition; Zoller et al (1983) Methods Enzymol. 100:468-500; Zoller, MJ. y Smith, M. (1982) Nucl. Acids Res. 10:6487-6500).
En la presente invention, se uso hu4D5Fabv8 expresado en el fago M13 (Gerstner et al (2002) "Sequence Plasticity In The Antigen-Binding Site Of A Therapeutic Anti-HER2 Antibody", J Mol. 321: 851-62) para los experimentos como un sistema modelo. Las mutaciones de cistelna se introdujeron en las construcciones hu4D5Fabv8-fago, hu4D5Fabv8 y ABP-hu4D5Fabv8. Las preparaciones de hu4D5-TioFab-fago se llevaron a cabo utilizando el metodo de precipitation con polietilenglicol (PEG) como se describio anteriormente (Lowman, Henry B. (1998) Methods in Molecular Biology (Totowa, New Jersey) 87 (Combinatorial Peptide Library Protocols) 249- 264).
Los oligonucleotidos se preparan por el metodo de slntesis de fosforamidita (US 4415732; US 4458066; Beaucage, S. and Iyer, R. (1992) "Advances in the synthesis of oligonucleotides by the phosphoramidite approach", Tetrahedron 48:2223-2311). El metodo de la fosforamidita implica ademas la adicion clclica de unidades monomericas de nucleotido con un resto 3' fosforamidita reactivo a una cadena de oligonucleotido en crecimiento en un soporte solido compuesto de vidrio de poro controlado o de poliestireno altamente reticulado y lo mas comunmente en la direction 3' a 5' en la cual el nucleosido 3' terminal esta unido al soporte solido en el principio de la slntesis (US 5047524; US 5262530). El metodo se practica generalmente usando sintetizadores disponibles comercialmente automatizados (Applied Biosystems, Foster City, CA). Los oligonucleotidos pueden marcarse qulmicamente con restos no
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isotopicos para la deteccion, captura, estabilizacion u otros fines (Andrus, A. "Chemical methods for 5' non-isotopic labelling of PCR probes and primers" (1995) en PCR 2: A Practical Approach, Oxford University Press, Oxford, pp. 39-54; Hermanson, G. in Bioconjugate Techniques (1996) Academic Press, San Diego, pp. 40-55, 643-671; Keller, G. and Manak, M. en DNA Probes Second Edition (1993), Stockton Press, New York, pp. 121-23).
ENSAYO PHESELECTOR
El ensayo PHESELECTOR (ELISA de fagos para la seleccion de tioles reactivos) permite la deteccion de grupos cistelna reactivos en anticuerpos en un formato de ELISA de fagos. El proceso de recubrimiento de la protelna (por ejemplo anticuerpo) de interes en las superficies del pocillo, seguido de la incubacion con las partlculas de fago y, a continuacion el anticuerpo secundario marcado con HRP con deteccion de absorbancia se detalla en el Ejemplo 2. Las protelnas mutantes expresadas en el fago se pueden seleccionar de una manera rapida, robusta y con alto rendimiento. Se pueden producir bibliotecas de anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna y someterse a seleccion de union utilizando el mismo enfoque para identificar sitios adecuadamente reactivos de incorporacion de Cis libre de bibliotecas de fagos de protelnas aleatorias de anticuerpos u otras protelnas. Esta tecnica incluye hacer la reaccion de las protelnas mutantes de cistelna que se expresan en fagos con un reactivo de afinidad o grupo informador que tambien es reactivo con tiol. La Figura 8 ilustra el Ensayo PHESELECTOR mediante una representacion esquematica que representa la union de Fab o TioFab a HER2 (arriba) y TioFab biotinilado a estreptavidina (abajo).
EXPRESION Y PURIFICACION DE PROTEINAS
El ADN que codifica los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna se alsla facilmente y se secuencia utilizando procedimientos convencionales (por ej., usando sondas de oligonucleotidos que son capaces de unirse especlficamente a genes que codifican las cadenas pesada y ligera de anticuerpos murinos). Las celulas de hibridoma sirven como una fuente de tal ADN. Una vez aislado, el ADN podrla colocarse en vectores de expresion, que luego son transfectados en celulas hospedadoras, tales como celulas de E. coli, celulas COS de simio, celulas de ovario de hamster chino (CHO) o de otras celulas hospedadoras de mamlfero, tales como celulas de mieloma (US 5807715; US 2005/0048572; Us 2004/0229310) que de otro modo no producen la protelna del anticuerpo, para obtener la slntesis de anticuerpos monoclonales en las celulas hospedadoras recombinantes. Los rendimientos de los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna hu4D5Fabv8 fueron similares a hu4D5Fabv8 de tipo silvestre. Los artlculos de revision sobre la expresion recombinante en bacterias de ADN que codifican el anticuerpo incluyen Skerra et al (1993) Curr. Opinion in Immunol. 5: 256-262 y Pluckthun (1992) Immunol. Revs. 130: 151-188.
Despues del diseno y seleccion, los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna, por ejemplo, TioFabs, con residuos de Cis no emparejados altamente reactivos, se pueden producir por: (i) expresion en una celula bacteriana, por ejemplo, sistema de E. coli o un sistema de cultivo de celulas de mamlfero (WO 01/00245), por ejemplo, celulas de ovario de hamster chino (CHO) y (ii) purificacion utilizando tecnicas de purificacion de protelnas comunes (Lowman et al (1991) J. Biol. Chem. 266(17):10982-10988).
Los TioFabs se expresaron despues de la induccion en 34B8, una cepa de E. coli no supresora (Baca et al (1997) Journal of Biological Chemistry 272(16):10678-84). Vease el ejemplo 3a. El sedimento celular cosechado se resuspendio en PBS (solucion salina tamponada con fosfato), la lisis total de celulas se llevo a cabo mediante el paso a traves de un microfluidizador y los TioFabs se purificaron por cromatografla de afinidad con protelna G SEPHAROSE™ (Amersham). Los TioFabs se conjugaron con biotina-PEO-maleimida como se ha descrito anteriormente y los TioFabs biotinilados se purificaron adicionalmente por cromatografla de filtracion en gel Superdex-200™ (Amersham), que elimino la biotina libre-PEO-maleimida y la fraccion oligomerica de TioFabs.
anAlisis DE ESPECTROSCOPIA DE MASAS
Se empleo el analisis de cromatografla llquida de ionizacion por electronebulizacion y espectrometrla de masas (LC- ESI-MS) para la determinacion del peso molecular exacto de Fab conjugado con biotina (Cole, R.B. Electro Spray Ionization Mass Spectrometry: Fundamentals, Instrumentation And Applications. (1997) Wiley, New York). La secuencia de aminoacidos del peptido hu4D5Fabv8 (A121C) biotinilado se determino por digestion trlptica seguida por analisis de LC-ESI-MS en tandem (Tabla 4, Ejemplo 3b).
El fragmento de anticuerpo Fab hu4D5Fabv8 contiene aproximadamente 445 residuos de aminoacidos, incluyendo 10 residuos de Cis (cinco en la cadena ligera y cinco en la cadena pesada). La estructura de alta resolucion del fragmento variable 4D5 humanizado (Fv4D5) se ha establecido, ver: Eigenbrot et al "X-Ray Structures Of The Antigen-Binding Domains From Three Variants Of Humanized Anti-P185her2 Antibody 4D5 And Comparison With Molecular Modeling" (1993) J Mol Biol. 229:969-995). Todos los residuos de Cis estan presentes en forma de enlaces disulfuro, por lo tanto, estos residuos no tienen ningun grupo tiol reactivo para conjugar con el farmaco- maleimida (a no ser tratados con un agente reductor). Por lo tanto, el residuo Cis recien modificado por ingenierla genetica, puede permanecer sin emparejar y es capaz de reaccionar con, es decir, conjugarse con un reactivo enlazador electrofilo o intermedio farmaco-enlazador, tal como un farmaco-maleimida. La figura 1A muestra una
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representacion tridimensional del fragmento de anticuerpo hu4D5Fabv8 derivado por las coordenadas de cristal de rayos X. Las posiciones de estructura de los residuos de Cis modificados por ingenieria genetica de las cadenas pesada y ligera se numeran de acuerdo con un sistema de numeracion secuencial. Este sistema de numeracion secuencial se correlaciona con el sistema de numeracion de Kabat (Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Servicio de Salud Publica, Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MD) para la variante 4d5v7fabH de trastuzumab de acuerdo con la Figura 1B que muestra el esquema de numeracion secuencial (fila superior), comenzando en el extremo N-terminal, se diferencia del esquema de numeracion de Kabat (fila inferior) mediante inserciones senaladas por a, b, c. Usando el sistema de numeracion de Kabat, la secuencia de aminoacidos lineal real puede contener menos o mas aminoacidos adicionales correspondientes a un acortamiento de, o insercion en, un Fr o CDR del dominio variable. Los sitios variantes de la cadena pesada modificados por ingenieria genetica con cisteina se identifican por la numeracion secuencial y los esquemas de numeracion de Kabat en la siguiente tabla:
Variantes de cadena pesada 4D5Fab
Numeracion secuencial Numeracion de Kabat
A40C
Ala-40 Ala-40
A88C
Ala-88 Ala-84
S119C
Ser-119 Ser-112
S120C
Ser-120 Ser-113
A121C
Ala-121 Ala-114
S122C
Ser-122 Ser-115
A175C
Ala-175 Ala-168
Los Fabs mutantes de Cis-fagemido M13 (Figuras 3A y 3B) pueden seleccionarse rapidamente en comparacion con las proteinas Fab. La union del fagemido-TioFab al antigeno y a la estreptavidina se puede ensayar mediante el recubrimiento de HER2 y estreptavidina, respectivamente, en placas de ELISA seguido de ensayo con anti-Fab-HRP (peroxidasa de rabano picante) como se describe en el Ejemplo 2 y se representa en la Figura 8. Este metodo permitio el control simultaneo del efecto sobre la union al antigeno y la reactividad del grupo tiol por el residuo de Cis modificado por ingenieria genetica/molecula de biotina conjugada. Ademas, el metodo puede ser aplicado para detectar los grupos tiol reactivos de cualquier proteina expresada en el fago M13. Los fagemido-TioFabs conjugados o no conjugados se purifican mediante precipitacion con PEG simple.
El fragmento de union a antigeno de 4D5 humanizado (hu4D5Fab) se expresa bien en E. coli y se ha expresado en un bacteriofago (Garrard et al (1993) Gene 128: 103-109). El fragmento de anticuerpo Fab hu4D5Fabv8 se expreso en el fago M13 como un sistema modelo en el ensayo basado en ELISA para investigar la reactividad del tiol. La Figura 8 es una representacion grafica del ensayo PHESELECTOR, que representa la union de un fago TioFab biotinilado y un anticuerpo anti-fago-HRP a HER2 (arriba) y estreptavidina (abajo). Se seleccionaron inicialmente cinco residuos de aminoacidos (L-Ala43, H-Ala40, H-Ser119, Ala121 y H-H-Ser122) a partir de informacion de la estructura cristalina como remotos respecto a la superficie de union al antigeno (Eigenbrot et al (1993) J Mol Biol. 229: 969-995). La estructura cristalina de rayos X de la base de datos de proteinas se designa como 1FVC. Los residuos de Cis fueron disenados en estas posiciones por mutagenesis dirigida al sitio. Las preparaciones TioFab- fago se aislaron y se hicieron reaccionar con el reactivo de biotinilacion.
Las variantes conjugadas y no conjugadas con biotina se ensayaron para HER2 y la union a estreptavidina utilizando un ensayo PHESELECTOR basado en ELISA (Figura 8, Ejemplo 2) con un anticuerpo anti-fago conjugado con HRP (peroxidasa de rabano picante). La interaccion de fago-hu4D5Fabv8 no biotinilado (Figura 2A) y fago-hu4D5Fabv8 bitoinilado (Figura 2B) con BSA (barra en blanco), HER2 (barra gris) o estreptavidina (barra rellena) se controlo a traves de un anticuerpo anti-M13-peroxidasa de rabano picante (HRP) mediante el desarrollo de una reaccion de HRP estandar y midiendo la absorbancia a 450 nm. La absorbancia producida por la rotacion de un sustrato colorimetrico se midio a 450 nm. La reactividad de TioFab con HER2 mide la union al antigeno. La reactividad de TioFab con estreptavidina mide el grado de biotinilacion. La reactividad de TioFab con BSA es un control negativo para la interaccion no especifica. Como se ve en la Figura 2A, todas las variantes TioFab-fago tienen una union similar a HER2 en comparacion con la del 4D5Fabv8-fago de tipo silvestre. Ademas, la conjugacion con biotina no interfirio en la union de TioFab a HER2 (Figura 2B).
Sorprendentemente e inesperadamente, las muestras TioFabs-fago mostraron niveles variables de actividad de union a estreptavidina. De todos los fagos TioFabs ensayados, el anticuerpo modificado por ingenieria genetica con cisteina A121C exhibio la reactividad del tiol maxima. Aunque hu4D5Fabv8-fago de tipo silvestre se incubo con las mismas cantidades de biotina-maleimida, estos fagos tenian poca union a estreptavidina, lo que indica que los residuos de cisteina preexistentes (que participan en formation de enlaces disulfuro) de hu4D5Fabv8 y de las proteinas de la cubierta del fago M13 no interferian con la conjugacion especifica del sitio de biotina-maleimida. Estos resultados demuestran que el ensayo ELISA de fagos se puede utilizar con exito para seleccionar grupos tiol reactivos en la superficie de Fab.
El ensayo PHESELECTOR permite cribar grupos tiol reactivos en anticuerpos. Un ejemplo es la identification de la variante A121C por este metodo. La molecula Fab entera puede buscarse eficazmente para identificar mas variantes
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de tioFab con grupos tiol reactivos. Un parametro, la accesibilidad superficial fraccionada, se empleo para identificar y cuantificar la accesibilidad de disolvente a los residuos de aminoacidos en un polipeptido. La accesibilidad superficial puede expresarse como el area superficial (A2) que puede ponerse en contacto por una molecula de disolvente, por ejemplo, agua. El espacio de agua ocupado es aproximadamente como una esfera de 1,4 A de radio. El software esta libremente disponible o susceptible a licencia (Secretary to CCP4, Daresbury Laboratory, Warrington, WA4 4AD, United Kingdom, Fax: (+44) 1925 603825, o por internet:

www.ccp4.ac.uk/dist/html/INDEX.html) como la Suite CCP4 de programas de cristalografla que emplean algoritmos para calcular la accesibilidad superficial de cada aminoacido de una protelna con coordenadas derivadas de cristalografla de rayos X (The CCp4 Suite: Programs for Protein Crystallography" (1994) Acta. Cryst. D50:760-763). Dos ejemplos de modulos de software ejemplo que realizan los calculos de accesibilidad superficial son "AREAIMOL" y "SURFACE", basados en los algoritmos de B. Lee y F.M. Richards (1971) J. Mol. Biol. 55: 379-400. AREAIMOL defines la superficie accesible al disolvente de una protelna en el sitio del centro de una esfera de sonda (que representa una molecula de disolvente) ya que rueda sobre la superficie de van der Waals de la protelna. AREAIMOL calcula el area superficial accesible al disolvente generando puntos de superficie sobre una esfera extensa alrededor de cada atomo (a una distancia del centro del atomo igual a la suma del radio del atomo y la sonda) y eliminando aquellos que se encuentran dentro de esferas equivalentes asociadas a atomos vecinos. AREAIMOL encuentra el area accesible al disolvente de atomos en un archivo de coordenadas PDB y resume el area accesible por residuo, por cadena y para la molecula completa. Areas accesibles (o diferencias de areas) para atomos individuales pueden escribirse a un archivo de salida pseudo-PDB. AREAIMOL supone un unico radio para cada elemento y solo reconoce un numero limitado de elementos diferentes. A los tipos de atomos desconocidos (es decir, los que no estan en la base de datos interna de AREAIMOL) se les asignara el radio por defecto de 1,8 A. La lista de atomos reconocidos es:
Atomo Numero atomico
C
6
N
7
O
8
Mg
12
S
16
P
15
Cl
17
Co
27
Radio de van der Waals (A)
1,80 1,65 1,60 1,60 1,85 1,90
1,80
1,80
AREAIMOL y SURFACE informan accesibilidades absolutas, es decir, el numero de Angstroms (A) cuadrados. La accesibilidad superficial fraccionada se calcula por referencia a un estado patron relevante para un aminoacido dentro de un polipeptido. El estado de referencia es el tripeptido Gly-X-Gly en la que X es el aminoacido de interes, y el estado de referencia deberla ser una conformacion 'extendida', es decir, como aquellas en cadenas beta. La conformacion extendida maximiza la accesibilidad de X. Un area accesible calculada se divide entre el area accesible en un estado de referencia del tripeptido Gly-X-Gly e informa el cociente, que es la accesibilidad fraccionada. El porcentaje de accesibilidad es la accesibilidad fraccionada multiplicada por 100.
Otro algoritmo a modo de ejemplo para calcular la accesibilidad superficial se basa en el modulo SOLV del programa xsae (Broger, C., F. Hoffman-LaRoche, Basilea) que calcula la accesibilidad fraccionada de un residuo de aminoacido con respecto a una esfera de agua basada en las coordenadas de rayos X del polipeptido.
La accesibilidad superficial fraccionada para cada aminoacido en hu4D5Fabv7 se calculo usando la informacion de la estructura cristalina (Eigenbrot et al. (1993) J Mol Biol. 229: 969-995). Los valores de accesibilidad superficial fraccionada para los aminoacidos de la cadena ligera y la cadena pesada de hu4D5Fabv7 se muestran en orden descendente en la Tabla 1.
Tabla 1.
hu4D5Fabv7-cadena ligera
SER
A 202 frac acc= 101,236 ASP A 151 frac acc= 41,586
GLY
A 41 frac acc= 90,775 SER A 12 frac acc= 40,633
GLY
A 157 frac acc= 88,186 ASN A 210 frac acc= 40,158
ASP
A 1 frac acc= 87,743 SER A 63 frac acc= 39,872
SER
A 156 frac acc= 83,742 ARG A 66 frac acc= 39,669
GLY
A 57 frac acc= 81,611 PRO A 8 frac acc= 39,297
SER
A 168 frac acc= 79,680 SER A 65 frac acc= 39,219
SER
A 56 frac acc= 79,181 SER A 77 frac acc= 38,820
LYS
A 169 frac acc= 77,591 THR A 180 frac acc= 38,296
SER
A 60 frac acc= 75,291 ASP A 185 frac acc= 38,234
THR
A 109 frac acc= 74,603 THR A 31 frac acc= 38,106
CYS
A 214 frac acc= 72,021 THR A 94 frac acc= 37,452
LYS
A 126 frac acc= 71,002 THR A 93 frac acc= 37,213
SER
A 67 frac acc= 66,694 THR A 197 frac acc= 36,709
ARG
A 18 frac acc= 66,126 SER A 182 frac acc= 36,424
ASN
A 152 frac acc= 65,415 GLY A 128 frac acc= 35,779
SER
A 127 frac acc= 65,345 LYS A 207 frac acc= 35,638
LYS
A 190 frac acc= 65,189 ASP A 17 frac acc= 35,413
LYS
A 145 frac acc= 63,342 GLY A 200 frac acc= 35,274
GLN
A 199 frac acc= 62,470 GLU A 165 frac acc= 35,067
GLU
A 143 frac acc= 61,681 ALA A 112 frac acc= 34,912
GLN
A 3 frac acc= 59,976 GLN A 79 frac acc= 34,601
LYS
A 188 frac acc= 59,680 VAL A 191 frac acc= 33,935
ARG
A 24 frac acc= 59,458 SER A 208 frac acc= 33,525
PHB
A 53 frac acc= 58,705 LYS A 39 frac acc= 33,446
SER
A 9 frac acc= 58,446 GLU A 123 frac acc= 32,486
GLN
A 27 frac acc= 57,247 THR A 69 frac acc= 32,276
ALA
A 153 frac acc= 56,538 SER A 76 frac acc= 32,108
SER
A 203 frac acc= 55,864 HIS A 189 frac acc= 31,984
LYS
A 42 frac acc= 54,730 ARG A 108 frac acc= 31,915
GLY
A 16 frac acc= 54,612 ASN A 158 frac acc= 31,447
LYS
A 45 frac acc= 54,464 VAL A 205 frac acc= 31,305
PRO
A 204 frac acc= 53,172 SER A 14 frac acc= 31,094
GLU
A 213 frac acc= 53,084 GLN A 155 frac acc= 30,630
ALA
A 184 frac acc= 52,556 GLU A 187 frac acc= 30,328
VAL
A 15 frac acc= 52,460 ARG A 211 frac acc= 30,027
SER
A 7 frac acc= 51,936 LYS A 183 frac acc= 29,751
LEU
A 154 frac acc= 51,525 ASN A 138 frac acc= 29,306
GLN
A 100 frac acc= 51,195 ASP A 170 frac acc= 29,041
SER
A 10 frac acc= 49,907 SER A 159 frac acc= 27,705
THR
A 5 frac acc= 48,879 GLN A 147 frac acc= 27,485
THR
A 206 frac acc= 48,853 THR A 22 frac acc= 27,121
ASP
A 28 frac acc= 48,758 ALA A 43 frac acc= 26,801
GLY
A 68 frac acc= 48,690 ARG A 142 frac acc= 26,447
THR
A 20 frac acc= 48,675 LEU A 54 frac acc= 25,882
ASP
A 122 frac acc= 47,359 ASP A 167 frac acc= 25,785
PRO
A 80 frac acc= 46,984 THR A 129 frac aoc= 23,880
SER
A 52 frac acc= 46,917 ALA A 144 frac acc= 23,652
SER
A 26 frac acc= 46,712 VAL A 163 frac acc= 22,261
TYR
A 92 frac acc= 46,218 PRO A 95 f rac acc= 20,607
LYS
A 107 frac acc= 45,912 ALA A 111 frac acc= 19,942
GLU
A 161 frac acc= 45,100 LYS A 103 frac acc= 18,647
VAL
A 110 frac acc= 44,844 LEU A 181 frac acc= 18,312
GLU
A 81 frac acc= 44,578 THR A 72 frac acc= 18,226
PRO
A 59 frac acc= 44,290 GLU A 195 frac acc= 18,006
ASN
A 30 frac acc= 42,721 THR A 178 frac acc= 17,499
GLN
A 160 frac acc= 42,692 THR A 85 frac acc= 17,343
SER
A 114 frac acc= 42,374 ASP A 70 frac acc= 17,194
PRO
A 40 frac acc= 41,928 LEU A 11 frac acc= 16,568
PHE
A 116 frac acc= 16,406 LEU A 125 frac acc= 2,398
THR
A 97 frac acc= 16,204 PRO A 96 frac acc= 2,387
ARG
A 61 frac acc= 16,192 LEU A 47 frac acc= 2,180
TYR
A 49 frac acc= 16,076 ALA A 51 frac acc= 1,837
SER
A 50 frac acc= 15,746 PHE A 118 frac acc= 1,779
LYS
A 149 frac acc= 15,510 PHE A 62 frac acc= 1,581
GLU
A 55 frac acc= 14,927 ALA A 25 frac acc= 1,538
LEU
A 201 frac acc= 14,012 VAL A 133 frac acc= 1,315
GLY
A 64 frac acc= 13,735 ASP A 82 frac acc= 1,141
GLY
A 212 frac acc= 13,396 LEU A 179 frac acc= 0,872
PHE
A 98 frac acc= 12,852 GLN A 124 frac acc= 0,787
THR
A 74 frac acc= 12,169 MET A 4 frac acc= 0,778
SER
A 171 frac acc= 11,536 SER A 177 frac acc= 0,693
PRO
A 141 frac acc= 11,073 SER A 131 frac acc= 0,693
PHE
A 83 frac acc= 10,871 LEU A 135 frac acc= 0,654
THR
A 164 frac acc= 10,325 PHE A 71 frac acc= 0,593
ALA
A 32 frac acc= 9,971 TRP A 35 frac acc= 0,448
HIS
A 198 frac acc= 9,958 PHE A 209 frac acc= 0,395
VAL
A 146 frac acc= 9,861 TYR A 186 frac acc= 0,259
SER
A 121 frac acc= 9,833 LEU A 78 frac acc= 0,157
ALA
A 13 frac acc= 9,615 VAL A 196 frac acc= 0,000
GLU
A 105 frac acc= 9,416 VAL A 132 frac acc= 0,000
SER
A 162 frac acc= 9,304 VAL A 104 frac acc= 0,000
ILE
A 117 frac acc= 8,780 VAL A 33 frac acc= 0,000
HIS
A 91 frac acc= 8,557 VAL A 29 frac acc= 0,000
ALA
A 193 frac acc= 8,547 TYR A 192 frac acc= 0,000
GLN
A 37 frac acc= 8,442 TYR A 86 frac acc= 0,000
VAL
A 58 frac acc= 8,281 TYR A 36 frac acc= 0,000
PRO
A 120 frac acc= 8,095 THR A 102 frac acc= 0,000
GLN
A 38 frac acc= 6,643 SER A 174 frac acc= 0,000
PRO
A 113 frac acc= 6,594 PHE A 139 frac acc= 0,000
GLY
A 101 frac acc= 6,558 LEU A 136 frac acc= 0,000
TYR
A 140 frac acc= 5,894 LEU A 73 frac acc= 0,000
VAL
A 115 frac acc= 5,712 ILE A 75 frac acc= 0,000
TYR
A 87 frac acc= 4,539 ILE A 48 frac acc= 0,000
SER
A 176 frac acc= 4,106 ILE A 21 frac acc= 0,000
ILE
A 2 frac acc= 4,080 GLN A 90 frac acc= 0,000
ASN
A 137 frac acc= 3,906 GLN A 89 frac acc= 0,000
TRP
A 148 frac acc= 3,676 CYS A 194 frac acc= 0,000
GLY
A 99 frac acc= 3,550 CYS A 134 frac acc= 0,000
PRO
A 44 frac acc= 3,543 CYS A 88 frac acc= 0,000
LEU
A 175 frac acc= 3,488 CYS A 23 frac acc= 0,000
VAL
A 19 frac acc= 3,420 ALA A 130 frac acc= 0,000
ILE
A 106 frac acc= 3,337 ALA A 84 frac acc= 0,000
PRO
A 119 frac acc= 2,953 ALA A 34 frac acc= 0,000
LEU
A 46 frac acc= 2,887
GLN
A 6 frac acc= 2,860
TYR
A 173 frac acc= 2,825
VAL
A 150 frac acc= 2,525
GLN
A 166 frac acc= 2,525
THR
A 172 frac acc= 2,436
hu4D5Fabv7-cadena pesada
SER
B 179 frac acc= 99,479 PRO B 14 frac acc= 45,729
GLY
B 42 frac acc= 95,850 THR B 54 frac acc= 45,503
GLU
B 1 frac acc= 87,276 THR B 200 frac acc= 45,369
GLY
B 66 frac acc= 84,541 LEU B 177 frac acc= 45,337
ASP
B 102 frac acc= 83,794 GLY B 8 frac acc= 44,898
SER
B 75 frac acc= 80,567 SER B 7 frac acc= 43,530
GLY
B 140 frac acc= 80,344 THR B 69 frac acc= 43,503
ASN
B 211 frac acc= 79,588 PRO B 220 frac acc= 43,378
GLY
B 197 frac acc= 78,676 LYS B 208 frac acc= 43,138
ASP
B 62 frac acc= 77,716 LYS B 30 frac acc= 42,380
GLY
B 103 frac acc= 77,176 ALA B 23 frac acc= 41,952
SER
B 163 frac acc= 76,664 GLU B 46 frac acc= 41,430
SER
B 139 frac acc= 74,946 SER B 25 frac acc= 41,323
LYS
B 213 frac acc= 74,442 ARG B 87 frac acc= 41,282
ALA
B 165 frac acc= 74,339 LYS B 124 frac acc= 40,888
THR
B 167 frac acc= 73,934 ASN B 28 frac acc= 40,529
SER
B 122 frac acc= 72,870 GLN B 3 frac acc= 39,824
SER
B 194 frac acc= 71,959 THR B 123 frac acc= 39,306
PRO
B 41 frac acc= 71,540 SER B 63 frac acc= 38,867
THR
B 198 frac acc= 68,668 GLY B 56 frac acc= 38,582
SER
B 222 frac acc= 68,128 GLY B 169 frac acc= 38,469
LYS
B 43 frac acc= 67,782 THR B 172 frac acc= 38,421
GLY
B 26 frac acc= 67,782 PRO B 209 frac acc= 38,309
THR
B 138 frac acc= 65,826 GLY B 101 frac acc= 38,040
ASP
B 31 frac acc= 64,222 TYR B 109 frac acc= 36,829
GLY
B 15 frac acc= 64,172 LYS B 221 frac acc= 36,520
SER
B 168 frac acc= 62,100 GLY B 44 frac acc= 35,147
SER
B 120 frac acc= 61,332 GLY B 181 frac acc= 34,735
LYS
B 76 frac acc= 61,092 THR B 58 frac acc= 34,457
GLY
B 141 frac acc= 59,419 GLY B 9 frac acc= 34,254
SER
B 137 frac acc= 59,179 VAL B 5 frac acc= 34,198
TYR
B 57 frac acc= 58,916 ALA B 121 frac acc= 33,049
GLU
B 89 frac acc= 58,483 SER B 127 frac acc= 32,390
SER
B 180 frac acc= 56,289 GLY B 10 frac acc= 32,230
LYS
B 65 frac acc= 55,044 SER B 71 frac acc= 30,659
ASP
B 215 frac acc= 54,656 ASP B 73 frac acc= 30,245
GLN
B 13 frac acc= 53,719 LEU B 115 frac acc= 29,867
GLN
B 112 frac acc= 53,215 LEU B 11 frac acc= 29,825
TYR
B 105 frac acc= 51,940 ASN B 84 frac acc= 29,765
ALA
B 88 frac acc= 51,602 SER B 210 frac acc= 28,656
GLY
B 164 frac acc= 50,259 GLU B 155 frac acc= 28,162
PRO
B 192 frac acc= 49,826 SER B 160 frac acc= 26,526
THR
B 158 frac acc= 49,694 CYS B 223 frac acc= 26,270
THR
B 142 frac acc= 48,896 GLY B 16 frac acc= 26,158
ASN
B 55 frac acc= 48,344 ILE B 202 frac acc= 26,068
LYS
B 136 frac acc= 48,312 GLN B 82 frac acc= 25,836
ARG
B 19 frac acc= 48,082 SER B 193 frac acc= 25,550
PRO
B 156 frac acc= 47,366 ASN B 77 frac acc= 25,418
PRO
B 174 frac acc= 47,157 ARG B 59 frac acc= 25,301
LYS
B 217 frac acc= 47,102 VAL B 93 frac acc= 25,254
GLN
B 199 frac acc= 46,650 THR B 74 frac acc= 24,902
SER
B 17 frac acc= 45,980 GLU B 219 frac acc= 24,778
SER
B 85 frac acc= 45,824 ASN B 206 frac acc= 24,647
VAL
B 170 frac acc= 24,549 PRO B 154 frac acc= 6,767
TYR
B 52 frac acc= 24,298 PRO B 133 frac acc= 6,767
ALA
B 175 frac acc= 23,804 TRP B 99 frac acc= 6,502
LYS
B 216 frac acc= 23,277 THR B 32 frac acc= 6,291
VAL
B 214 frac acc= 23,150 LEU B 45 frac acc= 4,649
GLY
B 125 frac acc= 22,802 VAL B 128 frac acc= 4,515
ASN
B 162 frac acc= 22,245 ILE B 51 frac acc= 4,307
ALA
B 72 frac acc= 22,166 SER B 186 frac acc= 4,084
ALA
B 40 frac acc= 21,974 PHE B 173 frac acc= 3,969
LEU
B 18 frac acc= 20,273 ARG B 38 frac acc= 3,734
THR
B 212 frac acc= 20,170 TRP B 47 frac acc= 3,561
LEU
B 182 frac acc= 19,619 VAL B 118 frac acc= 3,409
TYR
B 33 frac acc= 19,398 ALA B 24 frac acc= 3,376
THR
B 190 frac acc= 19,365 TYR B 95 frac acc= 3,242
VAL
B 176 frac acc= 18,941 GLU B 6 frac acc= 3,216
SER
B 21 frac acc= 18,929 ALA B 144 frac acc= 3,167
SER
B 119 frac acc= 18,877 ILE B 70 frac acc= 1,958
THR
B 91 frac acc= 18,237 GLY B 111 frac acc= 1,868
ASP
B 151 frac acc= 17,849 LEU B 4 frac acc= 1,808
THR
B 114 frac acc= 17,601 TYR B 201 frac acc= 1,758
SER
B 134 frac acc= 17,571 LEU B 148 frac acc= 1,744
LEU
B 196 frac acc= 17,090 PHE B 68 frac acc= 1,708
TYR
B 60 frac acc= 16,575 VAL B 188 frac acc= 1,315
TYR
B 183 frac acc= 15,968 CYS B 22 frac acc= 0,935
VAL
B 2 frac acc= 15,901 TRP B 161 frac acc= 0,876
PRO
B 130 frac acc= 15,342 LEU B 131 frac acc= 0,654
LEU
B 166 frac acc= 15,268 VAL B 205 frac acc= 0,495
GLY
B 100 frac acc= 15,003 ALA B 92 frac acc= 0,356
PHE
B 27 frac acc= 14,383 ALA B 79 frac acc= 0,356
ASN
B 204 frac acc= 13,873 VAL B 64 frac acc= 0,263
PHE
B 104 frac acc= 13,836 ILE B 29 frac acc= 0,227
TYR
B 80 frac acc= 13,490 VAL B 218 frac acc= 0,000
VAL
B 159 frac acc= 12,782 VAL B 189 frac acc= 0,000
ARG
B 67 frac acc= 12,362 VAL B 149 frac acc= 0,000
GLN
B 178 frac acc= 12,131 VAL B 116 frac acc= 0,000
HIS
B 171 frac acc= 11,412 VAL B 48 frac acc= 0,000
SER
B 184 frac acc= 11,255 VAL B 37 frac acc= 0,000
ARG
B 98 frac acc= 11,115 TYR B 152 frac acc= 0,000
PRO
B 53 frac acc= 11,071 TYR B 94 frac acc= 0,000
GLN
B 39 frac acc= 11,037 TRP B 36 frac acc= 0,000
SER
B 195 frac acc= 10,909 SER B 187 frac acc= 0,000
ASP
B 108 frac acc= 10,525 SER B 97 frac acc= 0,000
LEU
B 185 frac acc= 10,464 MET B 107 frac acc= 0,000
GLY
B 113 frac acc= 10,406 MET B 83 frac acc= 0,000
THR
B 78 frac acc= 10,213 LEU B 145 frac acc= 0,000
THR
B 117 frac acc= 9,990 LEU B 86 frac acc= 0,000
LYS
B 150 frac acc= 9,447 LEU B 81 frac acc= 0,000
VAL
B 157 frac acc= 9,323 LEU B 20 frac acc= 0,000
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
VAL
B 12 frac acc= 9,207 ILE B 34 frac acc= 0,000
TRP
B 110 frac acc= 9,069 HIS B 207 frac acc= 0,000
ALA
B 143 frac acc= 8,903 HIS B 35 frac acc= 0,000
SER
B 135 frac acc= 8,897 GLY B 146 frac acc= 0,000
PHE
B 129 frac acc= 8,895 CYS B 203 frac acc= 0,000
ARG
B 50 frac acc= 8,639 CYS B 147 frac acc= 0,000
ALA
B 61 frac acc= 8,547 CYS B 96 frac acc= 0,000
ALA
B 132 frac acc= 7,882 ASP B 90 frac acc= 0,000
VAL
B 191 frac acc= 7,366 ALA B 106 frac acc= 0,000
PRO
B 126 frac acc= 7,258 ALA B 49 frac acc= 0,0000
PHE
B 153 frac acc= 6,918
Se aplicaron los siguientes dos criterios para identificar los residuos de hu4D5Fabv8 que pueden ser disenados para sustituir con residuos de Cis:
1. Los residuos de aminoacidos que estan completamente enterrados se eliminan, es decir, menos de 10 % de accesibilidad superficial fraccionada. La Tabla 1 muestra que hay 134 residuos (cadena ligera) y 151 (cadena pesada) de hu4D5Fabv8 que son mas del 10 % accesibles (accesibilidad superficial fraccionada). Los diez primeros residuos accesibles Ser, Ala y Val fueron seleccionados debido a su estrecha similitud estructural con Cis con respecto a otros aminoacidos, introduciendo solo las limitaciones estructurales mlnimas en el anticuerpo mediante las nuevas manipulaciones con Cis. Tambien se pueden cribar otros sitios de sustitucion de cistelna y pueden ser utiles para la conjugacion.
2. Los residuos se clasifican en funcion de su papel en las interacciones funcionales y estructurales de Fab. Se seleccionaron los residuos que no estan involucrados en las interacciones con el antlgeno y distantes de los enlaces disulfuro existentes. Los residuos de Cis recien modificados por ingenierla genetica deben ser distintos de, y no interferir con, la union al antlgeno ni desemparejar con cistelnas implicadas en la formacion de enlaces disulfuro.
Los siguientes residuos de hu4D5Fabv8 poselan los criterios anteriores y se seleccionaron para ser reemplazado con Cis: L-V15,LA43, L-V110, L-A144, L-S168, H-A88, H-A121, H-S122, H-A175 y H-S179 (mostrado en la Figura 1).
La reactividad del tiol puede ser generalizada a cualquier anticuerpo en el que la sustitucion de aminoacidos con aminoacidos cistelna reactivos pueda hacerse dentro de los intervalos en la cadena ligera seleccionados de: L-10 a L-20; L-38 a L-48; L-105 a L-115; L-139 a L-149; L-163 a L-173; y dentro de los intervalos en la cadena pesada seleccionados de: H-35 a H-45; H-83 a H-93; H-114 a H-127 y H-170 a H-184 y en la region Fc dentro de los intervalos seleccionados de H-268 a H-291; H-319 a H-344; H-370 a H-380 y H-395 a H-405.
La reactividad del tiol tambien puede ser generalizada a ciertos dominios de un anticuerpo, tales como el dominio constante de la cadena ligera (CL) y los dominios constantes de la cadena pesada, CH1, CH2 y CH3. Las sustituciones de cistelna que resulta en valores de reactividad del tiol de 0,6 y mayores se pueden hacer en los dominios constantes de cadena pesada de anticuerpos intactos, 5, £, y y p: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, respectivamente, incluyendo la IgG subclases: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4. IgA e IgA2.
Es evidente a partir de los datos de la estructura cristalina que los 10 mutantes Cis seleccionados estan muy lejos del sitio de combinacion del antlgeno, tales como la interfaz con HER2 en este caso. Estos mutantes pueden ser probados experimentalmente para efectos indirectos sobre las interacciones funcionales. Las reactividades del tiol de todas las variantes Fab Cis se midieron y se calcularon como se describe en los Ejemplos 1 y 2, y se presentan en la Tabla 2. Los residuos de L-V15C, L-V110C, H-A88C y H-A121C tienen grupos tiol reactivos y estables (Figuras 3A y 3B). Los mutantes V15C, V110C, A144C, S168C son variantes de Cis de la cadena ligera. Los mutantes A88C, A121C, A175C, S179C son variantes de Cis de la cadena pesada. Era sorprendente e inesperado que los sitios con alta accesibilidad superficial fraccionada no tuvieron la mas alta reactividad de tiol tal como se calcula mediante el ensayo PHESELECTOR (Tabla 2). En otras palabras, la accesibilidad superficial fraccionada (Tablas 1, 2) no se correlacionaron con la reactividad tiol (Tabla 2). De hecho, los residuos de Cis modificados por ingenierla genetica en los sitios con moderada accesibilidad superficial de 20 % a 80 % (Figura 4A, Tabla 1), o sitios parcialmente expuestos, como los residuos de Ala o Val, presentaban una reactividad del tiol mejor, es decir, > 0,6, (Figura 3B, Tabla 2) que la Cis introducida en los residuos de Ser, necesitando por lo tanto el uso del ensayo PHESELECTOR en la seleccion de sitios reactivos con tiol ya que la information de la estructura cristalina por si sola no es suficiente para seleccionar estos sitios (Figura 3B y 4a ).
Los datos de reactividad del tiol se muestran en las figuras 3A y 3B para los residuos de aminoacidos de los mutantes 4D5 TioFab Cis: (3A) fago-TioFabs no biotinilado (control) y (3B) biotinilado. Los grupos tiol reactivos en el superficie del anticuerpo/Fab se identificaron mediante un ensayo de PHESELECTOR para la interaction de fago- hu4D5Fabv8 no biotinilado (3A) y fago-hu4D5Fabv8 biotinilado (3B) con BSA (barra en blanco), HER2 (barra) o estreptavidina (barra rellena). El ensayo se llevo a cabo como se describe en el Ejemplo 2. Las variantes de la cadena ligera estan en el lado izquierdo y las variantes de la cadena pesada estan en el lado derecho. La union de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
los mutantes 4D5 TioFab Cis no biotinilado es baja como se esperaba, pero se mantenla una fuerte union a HER2. La relacion entre la union a estreptavidina y a HER2 de los mutantes de Cis 4D5 TioFab biotinilados da los valores de reactividad del tiol de la Tabla 2. La absorbancia de fondo a 450 nm o cantidades pequenas de union a protelna no especlficas de los mutantes de Cis 4D5 TioFab biotinilados con BSA es tambien evidente en la Figura 3B. Los valores de accesibilidad superficial fraccionada de los residuos de aminoacidos seleccionados que fueron sustituidos con un residuo de Cis se muestran en la Figura 4A. La accesibilidad superficial fraccionada se calculo a partir de la estructura hu4D5Fabv7 disponible y se muestra en la Tabla 1 (Eigenbrot et al. (1993) J Mol Biol. 229: 969-995). Los parametros conformacionales de las estructuras hu4D5Fabv7 y hu4D5Fabv8 son muy constantes y permiten la determinacion de cualquier correlacion entre los calculos de la accesibilidad superficial fraccionada de hu4D5Fabv7 y la reactividad del tiol de los mutantes de cistelna hu4D5Fabv8. La reactividad del tiol medido de los residuos de Cis del fago TioFab introducidos en los residuos parcialmente expuestos (Ala o Val) tienen mejor reactividad del tiol en comparacion con los introducidos en los residuos de Ser (Tabla 2). Se puede observar a partir de los mutantes de Cis TioFab de la Tabla 2 que hay poca o ninguna correlacion entre los valores de reactividad del tiol y la accesibilidad superficial fraccionada.
Los aminoacidos en las posiciones L-15, L-43, L-110, L-144, L-168, H-40, H-88, H-119, H-121, H-122, H-175 y H - 179 de un anticuerpo pueden generalmente ser mutados (sustituidos) con aminoacidos de cistelna libres. Intervalos dentro de los 5 residuos de aminoacidos en cada lado de estas posiciones tambien pueden ser sustituidos por aminoacidos de cistelna libre, es decir, L-10 a L-20; L-38 a L-48; L-105 a L-115; L-139 a L-149; L-163 a L-173; H-35 a H-45; H-83 a H-93; H-114 a H-127 y H-170 a H-184, as! como los intervalos en la region Fc seleccionada de H-268 a H-291; H-319 a H-344; H-370 a H-380 y H-395 a H-405, para producir los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna de la invencion.
Tabla 2. Reactividad del tiol de los fago-TioFabs
Construction fago-TioFab
Reactividad del tiol Accesibilidad superficial fraccionada (%) de la Tabla 1)
hu4D5Fabv8-wt
0.125 -
L-V15C
0.934 52.46
L-A43C
0.385 26.80
L-V110C
0.850 44.84
L-A144C
0.373 23.65
L-S168C
0.514 79.68
H-A40C
0.450 21.97
H-A88C
0.914 51.60
H-S119C
0.680 18.88
H-A121C
0.925 33.05
H-S122C
0.720 72.87
H-A175C
0.19 23.80
H-S179C
0.446 99.48
L = cadena ligera, H = cadena pesada, A = alanina, S = serina, V = valina, C = cistelna La reactividad del tiol se mide como la relacion entre la DO450nm para la union a estreptavidina y la DO450nm para la union a HER2 (anticuerpo) (Ejemplo 2). El valor de reactividad del tiol de 1 indica la biotinilacion completa del tiol de la cistelna.
Se seleccionaron dos variantes de Cis de la cadena ligera (L-V15C y L-V110C) y dos de la cadena pesada (H-A88C y H-A121C) para el analisis adicional, ya que estas variantes mostraban la mayor reactividad del tiol (Tabla 2).
A diferencia de la purification del fago, la preparation de Fab puede requerir 2-3 dlas, dependiendo de la escala de production. Durante este tiempo, los grupos tiol pueden perder reactividad debido a la oxidation. Para investigar la estabilidad de los grupos tiol en hu4D5Fabv8-fago, se midio la estabilidad de la reactividad del tiol de los fago- tioFabs (Figura 4B). Despues de la purificacion del TioFab-fago, en el dla 1, dla 2 y dla 4, todas las muestras fueron conjugadas con biotina-PEO-maleimida y se ensayaron con ensayo ELISA de fagos (PHESELECTOR) para determinar la union a HER2 y estreptavidina. L-V15C, L-V110C, H-A88C y H-A121C retienen cantidades significativas de reactividad del tiol en comparacion con otras variantes TioFab (Figura 4B).
ANTICUERPOS MANIPULADOS CON CISTEINA MARCADOS
Los anticuerpos de la invencion modificados por ingenierla genetica con cistelna pueden conjugarse con cualquier resto marcador que pueda unirse covalentemente al anticuerpo mediante un grupo tiol de cistelna reactivo, (Singh et al. (2002) Anal. Biochem. 304: 147-15; Harlow E. y Lane, D. (1999) Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Lundblad R.L. (1991) Chemical Reagents for Protein Modification, 2a ed. CRC Press, Boca Raton, FL). El marcador unido puede servir para: (i) proporcionar una senal detectable; (ii) interactuar con un segundo marcador para modificar la senal detectable proporcionada por el primero o segundo marcador, por ejemplo, para dar FRET (transferencia de energla por resonancia de fluorescencia); (iii)
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estabilizar interacciones o aumentar la afinidad de union, con antlgeno o ligando; (iv) afectar la movilidad, por ejemplo, movilidad electroforetica o permeabilidad a celulas, por carga, hidrofobia, forma u otros parametros flsicos, o (v) proporcionar un resto de captura, para modular la afinidad de ligandos, union a anticuerpo/antlgeno o complejacion ionica.
Los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna marcados pueden ser utiles en ensayos de diagnostico, por ejemplo, para detectar la expresion de un antlgeno de interes en celulas especlficas, tejidos o suero. Para aplicaciones de diagnostico, el anticuerpo normalmente se marcara con un resto detectable. Existen numerosos marcadores que pueden agruparse generalmente en las siguientes categorlas:
(a) Radioisotopos (radionuclidos), tales como 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y,99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At o 213Bi. Los anticuerpos marcados con radioisotopos son utiles en experimentos de estudios de imagenes dirigidos a receptores. El anticuerpo puede marcarse con reactivos de ligando que se unen, quelan o complejan de otro modo un metal de radioisotopo en el que el reactivo es reactivo con el tiol de la cistelna manipulada del anticuerpo, usando las tecnicas descritas en Current Protocols in Immunology, volumenes 1 y 2, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, NY, Pubs. (1991). Los ligandos quelantes que pueden complejar un ion metalico incluyen DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA y TETA (Macrocyclics, Dallas, TX). Los radionuclidos pueden ser dirigidos por complejacion con los conjugados de anticuerpo-farmaco de la invencion (Wu et al (2005) Nature Biotechnology 23(9): 1137-1146). Radioisotopos (radionuclidos), tales como 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At o 213Bi.
Los complejos metal-quelato adecuados como marcadores de anticuerpos para los experimentos de estudios de imagen se divulgan en: los documentos US 5342606; US 5428155; US 5316757; US 5480990; US 5462725; US 5428139; US 5385893; US 5739294; US 5750660; US 5834456; Hnatowich et al (1983) J. Immunol. Methods 65:147-157; Meares et al (1984) Anal. Biochem. 142:68-78; Mirzadeh et al (1990) Bioconjugate Chem.1:59-65; Meares et al (1990) J. Cancer1990, Suppl. 10:21-26; Izard et al (1992) Bioconjugate Chem. 3:346-350; Nikula et al (1995) Nucl. Med. Biol. 22:387-90; Camera et al (1993) Nucl. Med. Biol. 20:955-62; Kukis et al (1998) J. NucL Med. 39:2105-2110; Verel et al (2003) J. Nucl. Med. 44:1663-1670; Camera et al (1994) J. Nucl. Med. 21:640646; Ruegg et al (1990) Cancer Res. 50:4221-4226; Verel et al (2003) J. Nucl. Med. 44:1663-1670; Lee et al (2001) Cancer Res. 61:4474-4482; Mitchell, et al (2003) J. Nucl. Med. 44:1105-1112; Kobayashi et al (1999) Bioconjugate Chem. 10:103-111; Miederer et al (2004) J. Nucl. Med. 45:129-137; DeNardo et al(1998) Clinical Cancer Research 4:2483-90; Blend et al (2003) Cancer Biotherapy & Radiopharmaceuticals 18:355-363; Nikula et al (1999) J. Nucl. Med. 40:166-76; Kobayashi et al (1998) J. NucL Med. 39:829-36; Mardirossian et al (1993) Nucl. Med. Biol. 20:65-74; Roselli et al (1999) Cancer Biotherapy & Radiopharmaceuticals, 14:209-20.
(b) Marcadores fluorescentes tales como quelatos de tierras raras (quelatos de europio), tipos de fluorescelna que incluyen FITC, 5-carboxifluorescelna, 6-carboxifluorescelna; tipos de rodamina que incluyen TAMRA; dansilo; Lissamina; cianinas; ficoeritrinas; rojo Texas; y analogos de los mismos. Las marcas fluorescentes pueden conjugarse con anticuerpos usando, por ejemplo, las tecnicas divulgadas, por ejemplo, en Current Protocols in Immunology, supra. Colorantes fluorescentes y reactivos marcadores fluorescentes incluyen aquellos que estan comercialmente disponibles de Invitrogen/Molecular Probes (Eugene, OR) y Pierce Biotechnology, Inc. (Rockford, IL).
(c) Existen o se han divulgado diversos marcadores de enzima-sustrato (documento US 4275149) . La enzima generalmente cataliza una alteracion qulmica de un sustrato cromogenico que puede medirse usando diversas tecnicas. Por ejemplo, la enzima puede catalizar un cambio de color en un sustrato, que puede medirse espectrofotometricamente. Como alternativa, la enzima puede alterar la fluorescencia o quimioluminiscencia del sustrato. Mas arriba se describen tecnicas para cuantificar un cambio en la fluorescencia. El sustrato quimioluminiscente se excita electronicamente por una reaccion qulmica y entonces puede emitir luz que puede medirse (usando, por ejemplo, un quimioluminometro) o dona energla a un aceptor fluorescente. Algunos ejemplos de marcadores enzimaticos incluyen luciferasas (por ejemplo, luciferasa de luciernaga y luciferasa bacteriana; documento US 4.737.456), luciferina, 2,3-dihidroftalazindionas, malato deshidrogenasa, ureasa, peroxidasa tal como peroxidasa de rabano picante (HRP) , fosfatasa alcalina (AP) , p-galactosidasa, glucoamilasa, lisozima, sacarido oxidasas (por ejemplo, glucosa oxidasa, galactosa oxidasa y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa), oxidasas heteroclclicas (tales como uricasa y xantina oxidasa), lactoperoxidasa, microperoxidasa. Tecnicas para conjugar enzimas con anticuerpos se describen en O'Sullivan et al (1981) "Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay", en Methods in Enzym. (ed. J. Langone & H. Van Vunakis) , Academic Press, Nueva York, 73: 147-166.
Ejemplos de combinaciones de enzima-sustrato incluyen, por ejemplo:
(i) Peroxidasa de rabano picante (HRP) con peroxidasa de hidrogeno como sustrato, en el que la peroxidasa de hidrogeno oxida un precursor de colorante (por ejemplo, ortofenilendiamina (OPD) o clorhidrato de 3,3',5,5'- tetrametilbencidina (TMB) ;
(ii) fosfatasa alcalina (AP) con fosfato de para-nitrofenilo como sustrato cromogenico; y
(iii) p-galactosidasa (p-D-Gal) con un sustrato cromogenico (por ejemplo, p-nitrofenil-p-D-galactosidasa) o sustrato fluorogenico 4-metilumbeliferil-p-D-galactosidasa.
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Estan disponibles numerosas otras combinaciones de enzima-sustrato para aquellos expertos en la materia. Para una revision general veanse los documentos US 4275149 y US 4318980.
Un marcador puede conjugarse indirectamente con un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna. Por ejemplo, el anticuerpo puede conjugarse con biotina y cualquiera de las tres amplias categorlas de marcadores mencionados anteriormente con avidina o estreptavidina, o viceversa. La biotina se une selectivamente a estreptavidina y, por tanto, el marcador puede conjugarse con el anticuerpo de este modo indirecto. Como alternativa, para lograr la conjugation indirecta del marcador con la variante de polipeptido, la variante de polipeptido se conjuga con un hapteno pequeno (por ejemplo, digoxina) y uno de los diferentes tipos de marcadores mencionados anteriormente se conjuga con una variante de polipeptido anti-hapteno (por ejemplo, anticuerpo anti- digoxina). Por tanto, puede lograrse la conjugacion indirecta del marcador con la variante de polipeptido (Hermanson, G. (1996) en Bioconjugate Techniques Academic Press, San Diego).
La variante de polipeptido de la presente invention puede emplearse en cualquier metodo de ensayo conocido, tal como ELISA, ensayos de union competitiva, ensayos de tipo sandwich directos e indirectos y ensayos de inmunoprecipitacion (Zola, (1987) Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pag. 147-158, CRC Press, Inc.).
Un marcador de detection puede ser util para localizar, visualizar y cuantificar un evento de union o reconocimiento. Los anticuerpos marcados de la invencion pueden detectar receptores de la superficie celular. Otro uso para los anticuerpos detectablemente marcados es un metodo de inmunocaptura basada en perlas que comprende conjugar una perla con un anticuerpo marcado fluorescente y detectar una senal de fluorescencia tras la union de un ligando. Las metodologlas de deteccion de la union similares utilizan el efecto de la resonancia de plasmones superficiales (SPR) para medir y detectar interacciones anticuerpo-antlgeno.
Los marcadores de deteccion tales como colorantes fluorescentes y colorantes quimioluminiscentes (Briggs et al.
(1997) "Synthesis of Functionalised Fluorescent Dyes and Their Coupling to Amines and Amino Acids" J. Chem. Soc., Perkin-Trans. 1: 1051-1058) proporcionan una senal detectable y generalmente son aplicables al marcado de anticuerpos, preferiblemente con las siguientes propiedades: (i) el anticuerpo marcado deberla producir una senal muy alta con bajo ruido de manera que pequenas cantidades de anticuerpos pudieran detectarse con sensibilidad tanto en ensayos sin celulas como basados en celulas; y (ii) el anticuerpo marcado deberla ser fotoestable de manera que la senal fluorescente pudiera observarse, monitorizarse y registrarse sin fotoblanqueamiento significativo. Para aplicaciones que implican la union a la superficie celular del anticuerpo marcado a membranas o superficies celulares, especialmente celulas vivas, los marcadores preferentemente (iii) tienen buena solubilidad en agua para lograr concentration de conjugado y sensibilidad de deteccion eficaces y (iv) no son toxicos para celulas vivas de manera que no alteran los procesos metabolicos normales de las celulas ni producen muerte celular prematura.
La cuantificacion directa de la intensidad de fluorescencia celular y la enumeration de eventos fluorescentemente marcados, por ejemplo, union a la superficie celular de conjugados de peptido-colorante pueden realizarse en un sistema (sistema FMAT® 8100 HTS, Applied Biosystems, Foster City, Calif.) que automatiza ensayos no radiactivos de mezcla y lectura, con celulas vivas o perlas (Miraglia, "Homogeneous cell- and beadbased assays for high throughput screening using fluorometric microvolume assay technology", (1999) J. of Biomolecular Screening 4: 193204). Los usos de anticuerpos marcados tambien incluyen ensayos de union a receptor de la superficie celular, ensayos de inmunocaptura, ensayos inmunoadsorbentes ligados a fluorescencia (FLISA), escision de caspasas (Zheng, "Caspase-3 controls both cytoplasmic and nuclear events associated with Fas-mediated apoptosis in vivo"
(1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 618-23; documento US 6.372.907), apoptosis (Vermes, "A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V" (1995) J. Immunol. Methods 184: 39-51) y ensayos de citotoxicidad. La tecnologla de ensayo de microvolumenes fluorometricos puede usarse para identificar la regulation positiva o negativa por una molecula que es dirigida a la superficie celular (Swartzman, "A homogeneous and multiplexed immunoassay for high-throughput screening using fluorometric microvolume assay technology", (1999) Anal. Biochem. 271: 143-51).
Los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna marcados de la invencion son utiles como biomarcadores y sondas para estudios de imagen por los diversos metodos y tecnicas de estudios de imagen biomedicas y moleculares tales como: (i) RMN (resonancia magnetica nuclear); (ii) MicroCT (tomografla computerizada); (iii) SPECT (tomografla computerizada por emision de foton unico); (iv) PET (tomografla de emision de positrones) Chen et al. (2004) Bioconjugate Chem. 15:41-49; (v) bioluminiscencia; (vi) fluorescencia; y (vii) ultrasonidos. La inmunoescintigrafla es un procedimiento de obtencion de imagenes en el que anticuerpos marcados con sustancias radiactivas se administran a un animal o paciente humano y se toma una imagen de sitios en el cuerpo en los que se localiza el anticuerpo (documento US 6528624). Los biomarcadores de obtencion de imagenes pueden medirse objetivamente y evaluarse como un indicador de procesos biologicos normales, procesos patogenicos o respuestas farmacologicas a una intervention terapeutica. Los biomarcadores pueden ser de varios tipos: tipo 0 son marcadores de la historia de una enfermedad y establecen una correlation longitudinal con Indices cllnicos conocidos, por ejemplo, evaluation de RMN de inflamacion sinovial en artritis reumatoide; los marcadores de tipo I capturan el efecto de una intervencion segun un mecanismo de action, aun cuando el mecanismo pueda no asociarse a un desenlace cllnico; los marcadores de tipo II sirven como criterios de valoracion indirectos en los que
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el cambio en, o senal de, el biomarcador predice un beneficio cllnico para "validar" la respuesta elegida como diana, tal como la erosion osea medida en artritis reumatoide por CT. Por tanto los biomarcadores de obtencion de imagenes pueden proporcionar informacion terapeutica farmacodinamica (PD) sobre: (i) expresion de una protelna diana, (ii) union de un agente terapeutico a la protelna diana, es decir, selectividad, y (iii) datos farmacocineticos de eliminacion y semivida. Las ventajas de los biomarcadores de obtencion de imagenes in vivo con respecto a los biomarcadores basados en laboratorio incluyen: tratamiento no invasivo, cuantificable, evaluacion del cuerpo entero, dosificacion y evaluacion repetitiva, es decir, multiples momentos temporales y efectos posiblemente transferibles de resultados precllnicos (animal pequeno) a cllnicos (ser humano). Para algunas aplicaciones, la obtencion de imagenes biologicas suplanta o minimiza el numero de experimentos en animales en estudios precllnicos.
Marcadores para obtencion de imagenes con radionuclidos incluyen radionuclidos, tales como 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 99Tc, 111In, 123I, 24I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At, o 213Bi. El ion radionuclido metalico puede estar
complejado con un enlazador quelante tal como DOTA. Los reactivos de enlazadores tales como DOTA-maleimida (4-maleimidobutiramidobencil-DOTA) pueden prepararse mediante la reaccion de aminobencil-DOTA con acido 4- maleimidobutlrico (Fluka) activado con cloroformiato de isopropilo (Aldrich), siguiendo el procedimiento de Axworthy et al (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97(4) : 1802-1807). Los reactivos de DOTA-maleimida reaccionan con los aminoacidos de cistelna libres de los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna y proporcionan un ligando de complejacion con metal sobre el anticuerpo (Lewis et al. (1998) Bioconj. Chem. 9:72-86). Los reactivos de marcado de enlazadores quelantes tales como DOTA-NHS (ester de mono-N-hidroxisuccinimida de acido 1,4,7,10- tetraazaciclododecano-1,4,7,10-tetraacetico) estan comercialmente disponibles (Macrocyclics, Dallas, TX). La obtencion de imagenes diana del receptor con anticuerpos marcados con radionuclidos puede proporcionar un marcador de la activacion de la ruta por deteccion y cuantificacion de acumulacion progresiva de anticuerpos en tejido tumoral (Albert y col. (1998) Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:1207-1210). Los radiometales conjugados pueden continuar con la degradacion intracelular tras la lisosomica.
Los metodos de marcaje de peptidos son bien conocidos. Ver Haugland, 2003, Molecular Probes Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, Molecular Probes, Inc.; Brinkley, 1992, Bioconjugate Chem. 3:2; Garman, (1997) Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach, Academic Press, London; Means (1990) Bioconjugate Chem. 1:2; Glazer et al (1975) Chemical Modification of Proteins Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology (T. S. Work and E. Work, Eds.) American Elsevier Publishing Co., New York; Lundblad, R. L. and Noyes, C. M. (1984) Chemical Reagents for Protein Modification, Vols. I and it, CRC Press, New York; Pfleiderer, G. (1985) "Chemical Modification of Proteins", Modern Methods in Protein Chemistry, H. Tschesche, Ed., Walter DeGryter, Berlin and New York; and Wong (1991) Chemistry of Protein Conjugation and Cross-linking, CRC Press, Boca Raton, Fla.); De Leon-Rodriguez et al (2004) Chem.Eur. J. 10:1149-1155; Lewis et al (2001) Bioconjugate Chem. 12:320-324; Li et al (2002) Bioconjugate Chem. 13:110-115; Mier et al (2005) BioconjugateChem. 16:240-237.
Los peptidos y protelnas marcados con dos restos, un indicador fluorescente e inhibidor de la fluorescencia, en suficiente proximidad se someten a transferencia de energla por resonancia de fluorescencia (FRET). Los grupos indicadores son normalmente colorantes fluorescentes que son excitados por luz a cierta longitud de onda y transfieren energla a un grupo aceptor, o inhibidor de la fluorescencia, con el desplazamiento de Stokes apropiado para la emision a brillo maximo. Los colorantes fluorescentes incluyen moleculas con aromaticidad prolongada, tales como fluorescelna y rodamina, y sus derivados. El indicador fluorescente puede inhibirse parcialmente o significativamente por el resto inhibidor de la fluorescencia en un peptido intacto. Tras la escision del peptido por una peptidasa o proteasa puede medirse un aumento detectable en la fluorescencia (Knight, C. (1995) "Fluorimetric Assay of Proteolytic Enzymes", Methods in Enzymology, Academic Press, 248: 18-34).
Los anticuerpos marcados de la invencion tambien pueden usarse como agente de purificacion por afinidad. En este proceso, el anticuerpo marcado se inmoviliza sobre una fase solida tal como una resina Sephadex o papel de filtro usando metodos muy conocidos en la tecnica. El anticuerpo inmovilizado se pone en contacto con una muestra que contiene el antlgeno que va a purificarse, y despues el soporte se lava con un disolvente adecuado que eliminara sustancialmente todo el material en la muestra, excepto el antlgeno que va a purificarse, que esta unido a la variante de polipeptido inmovilizada. Finalmente, el soporte se lava con otro disolvente adecuado, tal como tampon glicina, pH 5, 0, que liberara el antlgeno de la variante de polipeptido.
Los reactivos de marcado normalmente llevan funcionalidad reactiva que puede reaccionar (i) directamente con un tiol de la cistelna de un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna para formar el anticuerpo marcado, (ii) con un reactivo de enlazador para formar un producto intermedio de enlazador-marcador o (iii) con un anticuerpo de enlazador para formar el anticuerpo marcado. La funcionalidad reactiva de reactivos de marcado incluye: maleimida, haloacetilo, yodoacetamida, ester de succinimidilo (por ejemplo, NHS, N-hidroxisuccinimida), isotiocianato, cloruro de sulfonilo, 2, 6-diclorotriazinilo, ester de pentafluorofenilo y fosforamidito, aunque tambien pueden usarse otro grupos funcionales.
Un ejemplo de grupo funcional reactivo es el ester de N-hidroxisuccinimidilo (NHS) de un sustituyente de grupo carboxilo sustituyente de un marcador detectable, por ejemplo, biotina o un colorante fluorescente. El ester de nHs del marcador puede formarse previamente, aislarse, purificarse y/o caracterizarse, o puede formarse in situ y
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hacerse reaccionar con un grupo nucleofilo de un anticuerpo. Normalmente, la forma carboxilo del marcador se activa haciendo reaccionar con alguna combinacion de un reactivo de carbodiimida, por ejemplo, diciclohexilcarbodiimida, diisopropilcarbodiimida, o un reactivo de uronio, por ejemplo, TSTU (tetrafluoroborato de O- (N-succinimidil) N,N,N', N'-tetrametiluronio), HBTU (hexafluorofosfato de (O-benzotriazol-1-il) -N, N,N',N'- tetrametiluronio) o HATU (hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il) -N,N,N',N'-tetrametiluronio), un activador, tal como 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) y N-hidroxisuccinimida para dar el ester de NHS del marcador. En algunos casos, el marcador y el anticuerpo pueden acoplarse por activacion in situ del marcador y reaccion con el anticuerpo para formar el conjugado marcador-anticuerpo en una etapa. Otros reactivos activantes y de acoplamiento incluyen TBTU (hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazo-1-il)-1-1,3,3-tetrametiluronio), TFFH (2-fluoro-hexafluorofosfato de N,N',N",N"'-tetrametiluronio), PyBOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio), EEDQ (2- etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidro-quinolina), DCC (diciclohexilcarbodiimida) ; DIPCDI (diisopropilcarbodiimida) , MSNT (1- (mesitilen-2-sulfonil)-3-nitro-1H-1,2,4-triazol) y haluros arilsulfonilo, por ejemplo, cloruro de triisopropilbencenosulfonilo.
CONJUGACION DE BIOTINA-MALEIMIDA CON TIOFABS
Las propiedades de los TioFab anteriormente descritas fueron establecidas en la presencia de fago debido a que la fusion del Fab a la protelna de la cubierta del fago puede alterar potencialmente la accesibilidad o reactividad del tiol de la Cis. Por lo tanto, las construcciones de TioFab se clonaron en un vector de expresion bajo el promotor de la fosfatasa alcalina (Chang et al (1987) Gen 55: 189-196) y la expresion del TioFab se indujo mediante celulas de E. coli en crecimiento en el medio libre de fosfato. Los TioFabs se purificaron en una columna de Protelna G SEPHAROSE™ y se analizaron en geles de SDS-PAGE reductores y no reductores. Estos analisis permiten la evaluacion de si los TioFabs retuvieron su grupo tiol reactivo o si se volvieron inactivos mediante la formacion de enlaces disulfuro intramoleculares o intermoleculares. Los TioFabs L-V15C, L-V110C, H-A88C y H-A121C se expresaron y se purificaron por cromatografla en columna de Protelna G-SEPHAROSE™ (ver secciones Metodos para mas detalles). Las protelnas purificadas se analizaron en gel de SDS-PAGE en condiciones reductoras (con DTT) y no reductoras (sin DTT) condiciones. Se pueden utilizar otros agentes reductores tales como BME (beta- mercaptoetanol) en el gel para escindir grupos disulfuro intercatenarios. Es evidente a partir del analisis en gel de SDS-PAGE que la fraccion principal (-90 %) de TioFab esta en la forma monomerica, mientras que hu4D5Fabv8 de tipo silvestre esta esencialmente en la forma monomerica (47 kDa).
TioFab (A121C) y hu4D5Fabv8 de tipo silvestre se incubaron con exceso de 100 veces de biotina-maleimida durante 3 horas a temperatura ambiente y los Fab biotinilados se cargaron en una columna de filtracion en gel Superdex- 200™. Esta etapa de purificacion fue util en la separation de Fab monomerico de Fab oligomerico y tambien del exceso de biotina-maleimida libre (o farmaco citotoxico libre).
La Figura 5 muestra la validation de las propiedades de TioFab variantes en ausencia del contexto del fago. Las protelnas de fusion sin fago, hu4D5Fabv8 y hu4D5Fabv8-A121C (TioFab-A121C), se expresaron y se purificaron usando perlas de protelna-G agarosa seguido de incubation con un exceso de 100 veces molar de biotina- maleimida. Se comparo la union a estreptavidina y HER2 de un TioFab modificado por ingenierla genetica con Cis biotinilado y un Fab de tipo silvestre no biotinilado. El grado de conjugation de biotina (la interaction con estreptavidina) y su capacidad de union a HER2 se controlaron mediante analisis ELISA. Cada Fab se ensayo a 2 ng y 20 ng.
El A121C-TioFab biotinilado retuvo una union a HER2 comparable a la de hu4D5Fabv8 de tipo silvestre (Figura 5). El Fab de tipo silvestre y A121C-TioFab se purificaron por cromatografla en columna de filtracion en gel. Las dos muestras se ensayaron para la union a HER2 y estreptavidina mediante ELISA usando anticuerpo de cabra anti- Fab-HRP como anticuerpo secundario. Tanto el de tipo silvestre (barra en blanco) como TioFab (barra punteada) tienen una union similar a HER2 pero solo TioFab retuvo la union estreptavidina. Solo se observo un nivel de fondo de interaccion con estreptavidina con hu4D5Fabv8 de tipo silvestre no biotinilado (Figura 5). El analisis de espectro de masas (LC-ESI-MS) TioFab (A121C) biotinilado dio como resultado un pico principal con 48294.5 daltons en comparacion con hu4D5Fabv8 de tipo silvestre (47737 daltons). La diferencia de 537,5 daltons entre las dos moleculas se corresponde exactamente con una sola conjugando biotina-maleimida con el TioFab. Los resultados de la secuenciacion de protelnas por espectrometrla de masas (analisis LC-ESI-espectrometrla de masas en tandem) confirmaron ademas que la molecula de biotina conjugada estaba en el residuo Cis recien disenados (Tabla 4, Ejemplo 3).
CONJUNGACION ESPECIFICA DEL SITIO DE BIOTINA-MALEIMIDA AL PEPTIDO DE UNION A ALBUMINA (ABP)-TIOFABS S
La union de la protelna al plasma puede ser un medio eficaz para mejorar las propiedades farmacocineticas de las moleculas de vida corta. La albumina es la protelna mas abundante en el plasma. Los peptidos de union a albumina del suero (ABP) pueden alterar la farmacodinamica de protelnas de dominios activos fusionadas que incluyen alteration de la captation, penetration y difusion en el tejido. Estos parametros farmacodinamicos pueden modularse por selection especlfica de la secuencia de peptidos de union a la albumina del suero apropiada (documento US 20040001827). Una serie de peptidos de union a albumina se identificaron por cribados de
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expresion en fago (Dennis et al. (2002) "Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins" J Biol Chem. 277: 35035-35043; documento WO 01/45746) . Los compuestos de la invencion incluyen secuencias de ABP ensenadas por: (i) Dennis et al (2002) J Biol Chem. 277:35035-35043 en las Tablas III y IV, pagina 35038; (ii) documento US 20040001827 en [0076] SEQ ID NOS: 9-22 y (iii) documento WO 01/45746 en las paginas 12-13, SEQ ID NOS: z1-z14.
Los peptidos de union a albumina (ABP)-Fab son modificados por ingenierla genetica fusionando un peptido de union a albumina con, por ejemplo, el extremo C de la cadena pesada de Fab en la relacion estequiometrica 1:1 (1 ABP/1 Fab) . Se mostro que la asociacion de estos ABP-Fab a albumina aumentaba su semivida mas de 25 veces en conejos y ratones. Por tanto, los residuos de Cis reactivos anteriormente descritos pueden introducirse en estos ABP-Fab y usarse para la conjugacion especlfica del sitio con farmacos citotoxicos, seguido de estudios en animales in vivo. La figura 9 muestra un grafico de un conjugado de una fusion peptido de union a albumina-Fab (ABP-Fab) con enlazador de farmaco.
Ejemplos de secuencias de peptidos de union a albumina a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, las secuencias de aminoacidos enumeradas en SEQ ID NOS: 1-5:
CDKTHTGGGSQRLMEDICLPRWGCLWEDDF SEQ ID NO:1 QRLMEDICLPRWGCLWEDDF SEQ ID NO:2 QRLIEDICLPRWGCLWEDDF SEQ ID NO:3 RLIEDICLPRWGCLWEDD SEQ ID NO:4 DICLPRWGCLW SEQ ID NO:5
El peptido de union a albumina (ABP) une secuencias de albumina de multiples especies (raton, rata, conejo, bovino, rhesus, babuino, y humanos) con Kd (conejo) = 0,3 pM. El peptido de union a albumina no compite con ligandos conocidos por unirse a la albumina y tiene una semivida (T1^) en conejo de 2,3 h. Las protelnas ABP-TioFab se purificaron en BSA-SEPHAROSE™ seguido de conjugacion de biotina-maleimida y la purificacion por cromatografla en columna Superdex-S200 como se describe en las secciones anteriores. Las protelnas biotiniladas purificadas fueron homogeneas y carentes de cualquier forma oligomerica (Ejemplo 4).
La Figura 6 muestra las variantes peptido de union a albumina (ABP)-TioFab. Los analisis ELISA se llevaron a cabo para ensayar la capacidad de union de ABP-hu4D5Fabv8-wt, ABP-hu4D5Fabv8-V110C y ABP-hu4D5Fabv8-A121C con albumina de conejo, estreptavidina y HER2. Los ABP-TioFab biotinilados son capaces de unirse a la albumina y HER2 con una afinidad similar a la de ABP-hu4D5Fabv8 de tipo silvestre como se confirmo por ELISA (Figura 6) y analisis de la cinetica de union BIAcore (Tabla 3). Una placa de ELISA se recubrio con albumina, HER2 y SA como se ha descrito. La union de ABP-TioFab biotinilados a la albumina, HER2 y SA se ensayaron con anti-Fab HRP. Los ABP-TioFab biotinilados eran capaces de unirse a estreptavidina en comparacion con ABP-hu4D5Fabv8 tipo silvestre control no biotinilado lo que indica que los ABP-TioFab se conjugaron con biotina-maleimida como los TioFab de una manera especlfica del sitio ya que se utilizaron los mismos mutantes Cis para ambas variantes (figura 6).
Tabla 3. Analisis de la cinetica BIAcore para la union de HER2 y albumina de conejo a ABP-hu4D5Fabv8 de tipo ________________________________silvestre biotinilado y TioFabs________________________________
Anticuerpo
kon (M-1s-1) koff (s-1) (nM)
Union a HER2
tipo silvestre
4,57 x 105 4,19 x 10-5 0,0917
V110C
4,18 x 105 4,05 x 10-5 0,097
A121C
3,91 x 105 4,15 x 10-5 0,106
Union a albumina de conejo
tipo silvestre
1,66 x 105 0,0206 124
V110C
2,43 x 165 0,0331 136
A121C
1,70 x 105 0,0238 140
ABP = peptido de union a albumina
Como alternativa, un peptido de union a albumina puede enlazarse con el anticuerpo mediante union covalente a traves de un resto enlazador.
DISENO DE ABP-TIOFAB CON DOS GRUPOS TIOL LIBRES POR FAB
Los resultados anteriores indican que las cuatro variantes (L-V15C, L-V110C, H-A88C y H-A121C) tioFab (anticuerpos Fab modificados por ingenierla genetica con cistelna) tienen grupos tiol reactivos que se pueden utilizar para la conjugacion especlfica del sitio con un reactivo marcador, reactivo enlazador o intermedio farmaco- enlazador. L-V15C puede ser expresado y purificado pero con rendimientos relativamente bajos. Sin embargo los rendimientos de expresion y purificacion de las variantes L-V110C, H-A88C y H-A121C fueron similares a los de hu4D5Fabv8. Por lo tanto estos mutantes se pueden utilizar para el analisis adicional y recombinar para obtener mas
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de un grupo tiol por Fab. Con vistas a este objetivo, se construyeron un grupo tiol en la cadena ligera y uno en la cadena pesada para obtener dos grupos tiol por molecula de Fab (L-V110C/HA88C y L-V110C/H-A121C). Estas dos variantes dobles de Cis se expresaron en un sistema de expresion de E. coli y se purificaron. Se encontro que la homogeneidad de los ABP-TioFab purificados biotinilados era similar a la de las variantes individuales de Cis.
Se investigaron los efectos del diseno y obtencion de dos residuos de Cis reactivos por Fab (Figura 7). La presencia de una segunda biotina se ensayo determinando la union de ABP-TioFab biotinilado a SA usando estreptavidina- HRP (Figura 7). Para el analisis de HER2/Fab, se revistio una placa de ELISA con HER2 y se ensayo con anti-Fab HRP. Para el analisis de SA/Fab, se revision una placa de ELISA con SA y se ensayo con anti-Fab HRP. Para el analisis de SA/SA, se revision una placa de ELISA se revistio con SA y se ensayo con SA-HRP. La Figura 7. Los analisis de ELISA para la interaction de las variantes Cis ABP-hu4D5Fabv8 biotiniladas con HER2, estreptavidina (SA), HER2/Fab, 10 SA /Fab y SA/SA indican que las interacciones fueron controlados por anti-Fab-HRP, SA-HRP, respectivamente. SA/Fab controla la presencia de biotina sola por Fab y mas de una biotina por Fab se controla por analisis de SA/SA. La union de HER2 con dobles mutantes Cis es similar a la de las variantes de Cis individuales (Figura 7). Sin embargo, el grado de biotinilacion en dobles mutantes Cis fue mayor en comparacion con una las variantes de una sola Cis debido a la existencia de mas de un grupo tiol libre por molecula de Fab (Figura 7).
MANIPUACION DE VARIANTES TIO IgG DE TRASTUZUMAB
La cistelna se introdujo en el anticuerpo monoclonal de longitud completa, trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech Inc.) en determinados residuos. Los mutantes Cis sencillos H-A88C, H-A121C y L-V110C de trastuzumab, y los mutantes dobles de cis V110C-A121C y V110C-A121C de trastuzumab se expresaron en celulas CHO (ovario de hamster chino) mediante fermentation transitoria en medios que contienen cistelna 1 mM. La secuencia de la cadena pesada mutante A88C (450 aa) es la SEQ ID NO: 6. La secuencia de la cadena pesada mutante A121C (450 aa) es la SEQ ID NO: 7. La secuencia de la cadena ligera mutante V110C (214 aa) es la SEQ ID NO: 8.
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNlKD’rYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRY ADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRCEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEFVTVSWNSGALTSGVHTFPAVI/QSS GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN S TYRWS VLTVLHQDWIiMGKEYKCKVSKKAliPAP IE KTIS KAKGQPRE PQVYTL P PSREE MTKKQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
qqgnvfscsvmhealhhhytqkslslspgk
SEQ ID NO:6
EVOLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNI kdtyihwvrqapgkglewvariyptngytry adsvxgrfti sadtskntaylqmnslrabdtavyycsrwggdgfyamdywgqgtlvtvss
CSTKGPSVFPLAPSSKSTSGC-TAALGCLiVKDYFPEFVTVSWNSGALTSGVKTFPAVLQSS
GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEIiIiGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFHWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN
STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSHKALPAPIEKTISXAKGQPREPQVYTLPPSREE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENKYXTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD1CSRW
QQGNVFSCSVMHEALHHHYTQKSLSLSPGK
SBQ ID NO:7
I . •
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPS RFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTCAAPSVFIFPP SDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLT LSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC '
SEQ ID NO:8
De acuerdo con una realization, los anticuerpos tio-trastuzumab anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna comprenden una o mas de las siguientes secuencias de cadena pesada de la region variable con un amino acido cistelna libre (SEQ ID NOS: 9-16).
Mutante
Secuencia SEQ ID NO:
A40C
WVRQCPGKGL SEQ ID NO:9
A88C
NSLRCEDTAV SEQ ID NO:10
S119C
LVTVCSASTKGPS SEQ ED NO:11
S120C
LVTVSCASTKGPS SEQ ID NO:12
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A121C
LVTVSSCSTKGPS SEQ ID NO:13
S122C
LVTVSSACTKGPS SEQ ID NO:14
A175C
HTFPCVLQSSGLYS SEQ ID NO:15
S179C
HTFPAVLQCSGLYS SEQ ID NO:16
De acuerdo con otra realizacion, los anticuerpos tio-trastuzumab modificados por ingenierla genetica con cistelna comprenden una o mas de las siguientes secuencias de la cadena ligera de la region variable con un amino acido cistelna libre (SEQ ID NOS: 17-27).
Mutante
Secuencia SEQ ID NO:
V15C
SLSASCGDRVT SEQ ID NO:17
A43C
QKPGKCPKLLI SEQ ID NO:18
V110C
EIKRTCAAPSV SEQ ID NO:19
S114C
TCAAPCVFIFPP SEQ ID NO:20
S121C
FIFPPCDEQLK SEQ ID NO:21
S127C
DEQLKCGTASV SEQ ID NO:22
A144C
FYPRECKVQWK SEQ ID NO:23
A153C
WKVDNCLQSGN SEQ ID NO:24
N158C
ALQSGCSQESV SEQ ID NO:25
S168C
VTEQDCKDSTY SEQ ID NO:26
V205C
GLSSPCTKSFN SEQ ID NO:27
Las variantes de IgG tio-trastuzumab de longitud completa resultantes se analizaron para determinar la reactividad del tiol y la actividad de union a HER2. La figura 13A muestra una representacion animada de la union del anticuerpo biotinilado a HER2 inmovilizada y al anticuerpo secundario marcado con HRP para la deteccion de absorbancia. La Figura 13B muestra las mediciones de union a HER2 inmovilizado con la deteccion de la absorbancia a 450 nm (de izquierda a derecha): trastuzumab tipo silvestre (WT) no biotinilado, variantes de tio-trastuzumab conjugadas con biotina-maleimida V110C (cis sencilla), A121C (cis sencilla) y V110C-A121C (cis dobles). Cada variante tio IgG y trastuzumab se ensayo a 1,10 y 100 ng. Las mediciones muestran que los TioMab anti-HER2 biotinilados retienen la actividad de union a HER2.
La figura 14A muestra una representacion animada de una union de un anticuerpo biotinilado a HER2 inmovilizada con la union de biotina a anti-IgG-HRP para la deteccion de la absorbancia. La Figura 14B muestra las mediciones de union con la deteccion de la absorbancia a 450 nm de variantes de tio-trastuzumab conjugado con biotina- maleimida y trastuzumab de tipo silvestre no biotinilado en la union a estreptavidina. De izquierda a derecha: V110C (cis sencilla), A121C (cis sencilla), V110C/A121C (cis doble) y trastuzumab. Cada variante de tio IgG trastuzumab y trastuzumab parental se ensayo a 1, 10 y 100 ng. Las mediciones muestran que los TioMabs HER2 tienen una alta reactividad tiol.
La cistelna se introdujo en el anticuerpo anti-EphB2R 2H9 de longitud completa en ciertos residuos. El mutante cis sencillo H-A121C de 2H9 se expreso en celulas CHO (ovario de hamster chino) mediante fermentacion transitoria en medios que contienen cistelna 1 mM. La secuencia de la cadena pesada mutante (450 aa) de 2H9 A121C es la SEQ ID NO: 28.
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTEYWMHWVRQAPGKGLEWVGFXNPSTGYTDY NQKFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRRPKIPRHANVFWGQGTIiVTVSS CSTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCI.VKDYFPEFVTVSWNSGAI.TSGVHTFPAVLQSS GLYELSSWTVPSSSLGTQTYICNVHHKPENTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEUjGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKKQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESMGQPEKNYKTTPPVLDSDGSPFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:28
Los anticuerpos tio-2H9 modificados por ingenierla genetica con cistelna comprenden las siguientes secuencias de la cadena pesada de la region constante Fc con un amino acido cistelna libre (SEQ ID NOS: 29-38).
Mutante
Secuencia SEQ ID NO:
V273C
HEDPECKFNWYVDGVEVHNAKTKPR SEQ ID NO:29
V279C
HEDPEVKFNWYCDGVEVHNAKTKPR SEQ ID NO:30
V282C
HEDPEVKFNWYVDGCEVHNAKTKPR SEQ ID NO:31
V284C
HEDPEVKFNWYVDGVECHNAKTKPR SEQ ID NO:32
A287C
HEDPEVKFNWYVDGVEVHNCKTKPR SEQ ID NO:33
S324C
YKCKVCNKALP SEQ ID NO:34
S337C
IEKTICKAKGQPR SEQ ID NO:35
A339C
IEKTISKCKGQPR SEQ ID NO:36
S375C
KGFYPCDIAVE SEQ ID NO:37
S400C
PPVLDCDGSFF SEQ ID NO:38
La Figura 16 muestra el analisis SDS-PAGE (electroforesis en gel de poliacrilamida) desnaturalizante no reductor (arriba) y reductor (abajo) de las variantes de Fc TioMab 2H9 (de izquierda a derecha, carriles 1-9): A339C; S337C; S324C; A287C; v284C; V282C; V279C y V273C, con el tipo silvestre 2H9, despues de la purificacion sobre la 5 Protelna A inmovilizada. El carril de la derecha es una escalera marcador de tamano, indicando que las protelnas intactas son aproximadamente de 150 kDa, los fragmentos de cadena pesada de 50 kDa y los fragmentos de cadena ligera de aproximadamente 25 kDa. La figura 17A muestra el analisis de electroforesis en gel de poliacrilamida no reductor (izquierda) y reductor (derecha) de las variantes de TioMab 2H9 (de izquierda a derecha, carriles 1-4): L-V15C; S179C; S375C; S400C, despues de la purificacion sobre la Protelna A inmovilizada. La Figura 10 17B muestra el analisis de electroforesis en gel de poliacrilamida desnaturalizante no reductor (izquierda) y reductor
(+DTT) (derecha) de las variantes de TioMab adicionales 2H9 y 3A5 despues de la purificacion sobre la Protelna A inmovilizada. Las variantes de TioMab 2H9 (en el Fab as! como la region Fc) se expresaron y purificaron como se describe. Como se ve en las figuras 16, 17A y 17B, todas las protelnas son homogeneas en sDS-PAGE seguido por el procedimiento de reduction y la oxidation del Ejemplo 11 para preparar TioMab reactivos para la conjugation 15 (Ejemplo 12).
La cistelna se introdujo en el anticuerpo anti-MUC16 3A5 de longitud completa en ciertos residuos. El mutante de Cis sencillo H-A121C de 3A5 se expreso en celulas CHO (ovario de hamster chino) mediante fermentation transitoria en medios que contienen cistelna 1 mM. La secuencia de la cadena pesada mutante 3A5 A121C (446 aa) 20 comprende la SEQ ID NO: 39.
DVQLQESGPGLVNPSqSLSLTCTVTGYSITHDYAWNWIRQFPGNKLBWMGYINYSGYTTY HPSLKSRI SI TRDTSKHQFFmUlSVTTEDTATYYCARWDGGLTYWGQGTLVTVSACSTK GPSVFPLAPESKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWKSGALTSGVHTFPAVIiQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKFSHTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEIJjGGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHHAKTKPREEQYHSTYR WSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKTVLPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPEREEMTKN
qvsltclvkgfypsdiaveweengqpennykttppvldsdgsfflysicltvdksrwqqgn
VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:39
Los anticuerpos anti-MUC16 tio-3A5 modificados por ingenierla genetica con cistelna comprenden las siguientes 25 secuencias de la cadena pesada de la region variable con un aminoacido cistelna libre (SEQ ID NOS: 40-44).
Mutante
Secuencia SEQ ID NO:
F45C
NWIRQCPGNK SEQ ID NO:40
A90C
LNSCTTEDTAT SEQ ID NO:41
A121C
GQGTLVTVSACSTKGPSVFPL SEQ ID NO:42
A175C
HTFPCVLQSSGLYS SEQ ID NO:43
V176C
HTFPACLQSSGLYS SEQ ID NO:44
Los anticuerpos anti-MUC16 tio-3A5 modificados por ingenierla genetica con cistelna comprenden las siguientes secuencias de la cadena ligera de la region variable con un aminoacido cistelna libre (SEQ ID NOS: 45-49).
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Mutante
Secuencia SEQ ID NO:
L15C
FLSVSCGGRVT SEQ ID NO:45
A43C
QKPGNCPRLLI SEQ ID NO:46
V110C
EIKRTCAAPSV SEQ ID NO:47
A144C
FYPRECKVQWK SEQ ID NO:48
S168C
VTEQDCKDSTY SEQ ID NO:49
REACTIVIDAD DEL TIOL DE LOS TIOMAB
La reactividad de los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna IgG de longitud completa se midio 35 por biotinilacion y union a estreptavidina. Se establecio un ensayo de transferencia Western se creo para detectar el
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TioMab que se conjuga especlficamente con biotina-maleimida. En este ensayo, los anticuerpos se analizaron en SDS-PAGE y la presencia de biotina se probo especlficamente por incubacion con estreptavidina-HRP. Como se ve en la figura 18, la interaction estreptavidina-HRP o bien se observa en la cadena pesada o cadena ligera dependiendo de en la cual se esta usando la variante cis manipulada y no se ve interaccion con el tipo silvestre, lo que indica que las variantes TioMab especlficamente se conjugaron con la biotina en el residuo Cis modificado por ingenierla genetica. La figura 18 muestra el analisis en gel de desnaturalizacion de las variantes Tio-IgG biotiniladas, reducidas tras la captura en anti-IgG-HRP inmovilizada (parte superior del gel) y estreptavidina-HRP (gel inferior). Carril 1: 3A5 H-A121C. Carril 2: 3A5 L-V110C. Carril 3: 2H9 H-A121C. Carril 4: ZH9 L-V110C. Carril 5: anti-2H9 EphB2R parental, de tipo silvestre. Cada mutante (carriles 1-4) fue capturado por los anticuerpos anti-IgG con detection de HRP (arriba) lo que indica que la selectividad y afinidad fueron retenidas. La captura por estreptavidina inmovilizada con deteccion de HRP (parte inferior) confirmo la localization de la biotina en las cadenas pesadas y ligeras. La ubicacion de la mutation de cistelna en los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna en los carriles 1 y 3 es la cadena pesada. La ubicacion de la mutacion de cistelna en los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna en los carriles 2 y 4 es la cadena ligera. El sitio de la mutacion de la cistelna se somete a conjugation con el reactivo de biotina-maleimida.
El analisis de los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna TioMab de la Figura 18 y una variante 2H9 V15C por LC/MS dio indication cuantitativa de la reactividad del tiol (Tabla 5).
Tabla 5. Cuantificacion por LC/MS de la biotinilacion de los TioMab - reactividad del tiol
Variante TioMab
Numero de biotina por TioMab
2H9 wt
0.0
2H9 L-V15C
0.6
2H9 L-V110C
0.5
2H9 H-A121C
2.0
3A5 L-V110C
1.0
3A5 H-A121C
2.0
La introduction de la cistelna se llevo a cabo en el dominio constante, es decir region Fc, de los anticuerpos IgG. Varios sitios de aminoacidos se convirtieron en sitios de cistelna y los mutantes expresados, los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna, fueron evaluados en cuanto a la reactividad del tiol. Las variantes de Fc TioMab 2H9 biotilinadas se evaluaron en cuanto a la reactividad del tiol por cuantificacion con HRP por captura en estreptavidina inmovilizada en un ensayo ELISA (Figura 19). Se establecio un ensayo ELISA para cribar rapidamente los residuos de Cis con grupos tiol reactivos. Como se representa en el diagrama esquematico de la figura 19, la interaccion estreptavidina-biotina se controla probando con anti-IgG-HRP seguido de la medicion de la absorbancia a 450 nm. Estos resultados confirmaron las variantes 2H9-TioFc V282C, A287C, A339C. S375C y S400C tenlan reactividad del tiol de moderada a alta reactividad. El grado de conjugacion de biotina de las variantes de Fc TioMab 2H9 se cuantifico por analisis de LS/MS como se informa en la Tabla 6. El analisis LS/MS confirmo que las variantes A282C, S375C y S400C tenlan 100% de conjugacion con biotina y V284C y A339C tenlan 50% de conjugacion, lo que indica la presencia de un grupo tiol de la cistelna reactivo. Las otras variantes TioFc, y la parental, de tipo silvestre 2H9, o bien tenlan muy poca o ninguna biotinilacion.
Tabla 6 Cuantificacion por LC/MS de la biotinilacion de los Fc TioMab 2H9
Variante de Fc TioMab 2H9
% de biotinilacion
V273C
0
V279C
31
V282C
100
V284C
50
A287C
0
S324C
71
S337C
0
A339C
54
S375C
100
S400C
100
(2H9 tipo silvestre)
0
REACTIVIDAD DEL TIOL DE LAS VARIANTES DE LA CADENA LIGERA DE FAB TIO-4D5
El cribado de varias variantes Fab de la cadena ligera modificados por ingenieria genetica con cisteina del anticuerpo antiErbB2 4D5 dio un numero de variantes con un valor de reactividad tiol de 0,6 y mayor (Tabla 7), tal como se mide por el ensayo de PHESELECTOR de la Figura 8. Los valores de reactividad tiol de la Tabla 7 se normalizan a la variante TioFab de la cadena pesada 4D5 (HC-A121C) que se fija en 100%, suponiendo biotinilacion completa de la variante HC-A121C, y representada como valores por ciento.
5
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25
30
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40
45
50
Tabla 7 Reactividad del tiol en valores porcentuales de las variantes de la cadena ligera de TioFab 4D5
Variante de TioFab 4D5
Valor de reactividad del tiol (%)
V15C
100
V110C
95
S114C
78
S121C
75
S127C
75
A153C
82
N158C
77
V205C
78
(HC-A121C)
100
(tipo silvestre 4D5)
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CONJUGADOS ANTICUERPO-FARMACO
Los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna de la invencion se pueden conjugar con cualquier agente terapeutico, es decir, resto de farmaco, el cual se puede unir covalentemente al anticuerpo a traves de un grupo tiol de cistelna reactivo.
Un ejemplo de realization de un compuesto conjugado anticuerpo-farmaco (ADC) comprende un anticuerpo (Ab) modificado por ingenierla genetica con cistelna y un resto de farmaco (D) en el que el anticuerpo tiene uno o mas aminoacidos de cistelna libres que tienen un valor de reactividad del tiol en el intervalo de 0,6 a 1,0 y el anticuerpo esta unido a traves del uno o mas aminoacidos libres por un resto enlazador (L) a D; teniendo la composition la Formula L
Ab-(L-D)p I
donde p es 1, 2, 3, o 4. El numero de restos de farmaco que pueden estar conjugados a traves de un resto enlazador reactivo con tiol a una molecula de anticuerpo esta limitado por el numero de residuos de cistelna que se introducen por los metodos descritos en la presente memoria. Ejemplos de ADC de Formula I, por tanto, comprenden anticuerpos que tienen 1, 2, 3, o 4 aminoacidos modificados por ingenierla genetica con cistelna.
Otro ejemplo de realizacion de un compuesto conjugado anticuerpo-farmaco (ADC) comprende un anticuerpo (Ab) modificado por ingenierla genetica con cistelna, un peptido de union a albumina (ABP) y un resto de farmaco (D) en el que el anticuerpo esta unido al resto de farmaco por un resto enlazador (L) y el anticuerpo esta unido al peptido de union a albumina mediante un enlace amida o un segundo resto enlazador; teniendo la composicion la Formula la:
ABP-Ab-(L-D)p la
donde p es 1,2, 3, o 4.
Los compuestos de ADC de la invencion incluyen aquellos que tienen utilidad para la actividad contra el cancer. En particular, los compuestos incluyen un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna conjugado, es decir, unido covalentemente por un enlazador, a un resto de farmaco, es decir, la toxina. Cuando el farmaco no esta conjugado con un anticuerpo, el farmaco tiene un efecto citotoxico o citostatico. La actividad biologica del resto de farmaco se modula as! por la conjugation a un anticuerpo. Los conjugados anticuerpo-farmaco (ADC) de la invencion proporcionan selectivamente una dosis eficaz de un agente citotoxico al tejido tumoral mediante el cual se puede lograr una mayor selectividad, es decir, una dosis mas baja eficaz.
En una realizacion, la biodisponibilidad del ADC de la invencion, o un metabolito intracelular del ADC, se mejora en un mamlfero en comparacion con un compuesto de farmaco que comprende el resto de farmaco del ADC. Tambien, la biodisponibilidad del ADC, o un metabolito intracelular del ADC se mejora en un mamlfero en comparacion con el analogo de la ADC que no tiene el resto de farmaco.
RESTOS DE FARMACO
El resto de farmaco (D) de los conjugados anticuerpo-farmaco (ADC) incluye cualquier compuesto, resto o grupo que tiene un efecto citotoxico o citostatico. Restos de farmaco incluyen: (i) agentes quimioterapeuticos, que pueden funcionar como inhibidores de la microtubulina, inhibidores de la mitosis, inhibidores de la topoisomerasa, o intercaladores de ADN; (ii) las toxinas de protelnas, que pueden funcionar enzimaticamente; y (iii) radioisotopos.
Ejemplos de restos de farmaco incluyen, pero no se limitan a, un maitansinoide, una auristatina, un dolastatina, un tricoteceno, CC1065, una caliqueamicina y otros antibioticos de enedina, un taxano, una antraciclina, y estereoisomeros, isosteros, analogos o derivados de los mismos.
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Compuestos maitansina adecuados para el uso como restos de farmaco maitansinoide son bien conocidos en la tecnica, y se pueden aislar de fuentes naturales de acuerdo con metodos conocidos, producidos mediante tecnicas de ingenierla genetica (vease Yu et al (2002) PROC. NAT. ACAD. SCL (USA) 99:7968-7973) o maitansinol y analogos de maitansinol preparados sinteticamente de acuerdo con metodos conocidos.
Ejemplos de restos de farmaco maitansinoides incluyen aquellos que tienen un anillo aromatico modificado, tal como: C-19-descloro (documento US 4256746) (preparado por reduccion con hidruro de litio y aluminio de ansamitocina P2); C-20-hidroxi (o C-20-desmetilo) +/-C-19-descloro (patentes US-4361650 y US-4307016) (preparado por desmetilacion usando Streptomyces o Actinomyces o decloracion usando LAH) y C-20-desmetoxi, C- 20-aciloxi (-OCOR), +/-descloro (patente US-4.294.757) (preparado por acilacion usando cloruros de acilo) y aquellos que tienen modificaciones en otras posiciones.
Ejemplos de restos de farmacos maitansinoides tambien incluyen aquellos que tienen modificaciones tales como: C- 9-SH (documento US 4424219) (preparado por la reaccion de maitansinol con H2S o P2S5); C-14- alcoximetilo(desmetoxi/CH2OR) (documento US 4331598); C-14-hidroximetilo o aciloximetilo (CH2OH o CH2OAc) (documento US 4450254) (preparado a partir de Nocardia); C-15-hidroxi/aciloxi (documento US 4.364.866) (preparado por la conversion de maitansinol por Streptomyces); C-15-metoxi (patentes US-4.313.946 y US- 4.315.929) (aislado de Trewia nudiflora); C-18-N-desmetilo (patentes US-4.362.663 y US-4.322.348) (preparado por la desmetilacion de maitansinol por Streptomyces) y 4,5-desoxi (documento US 4371533) (preparado por la reduccion con tricloruro de titanio/LAH de maitansinol). Por ejemplo, para la formation de un enlace ester, son adecuadas la position C-3 que tiene un grupo hidroxilo, la position C-14 modificada con hidroximetilo, la position C- 15 modificada con un grupo hidroxilo y la posicion C-20 que tiene un grupo hidroxilo.
El resto de farmaco (D) de los conjugados anticuerpo-farmaco (ADC) de Formula I incluye maitansinoides que tienen la estructura:
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donde la llnea ondulada indica la union covalente del atomo de azufre de D a un enlazador (L) de un conjugado anticuerpo-farmaco (ADC). R puede ser independientemente H o un alquilo C1-C6 seleccionado de metilo, etilo, 1- propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-butilo, 2-metil-2-propilo, 1-pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, 2-metil-2-butilo, 3-metil-2-butilo, 3-metil-1-butilo, 2-metil-1-butilo, 1-hexilo, 2-hexilo, 3-hexilo, 2-metil-2 pentilo, 3-metil-2-pentilo, 4- metil-2-pentilo, 3-metil-3-pentilo, 2-metil-3-pentilo, 2,3-dimetil-2-butilo y 3,3-dimetil-2-butilo. La cadena de alquileno que une el grupo amida al atomo de azufre puede ser metanilo, etanilo o propilo, es decir, m es 1, 2, o 3.
Los compuestos maitansina inhiben la proliferation celular mediante la inhibicion de la formacion de microtubulos durante la mitosis a traves de la inhibition de la polimerizacion de la protelna microtubular, tubulina (Remillard et al (1975), Science 189: 1002-1005). La maitansina y los maitansinoides son altamente citotoxicos pero su uso cllnico en la terapia del cancer ha sido en gran medida limitada por sus graves efectos secundarios sistemicos atribuidos principalmente a su escasa selectividad para los tumores. Los ensayos cllnicos con maitansina se hablan suspendido debido a los efectos adversos graves en el sistema nervioso central y el sistema gastrointestinal (Issel et al (1978) Can. El tratamiento Rev. 5: 199-207).
Los restos de farmacos maitansinoides son restos de farmaco atractivos en conjugados de anticuerpo farmaco debido a que son: (i) relativamente accesibles para preparar por fermentation o modification qulmica o derivatizacion de productos de fermentacion, (ii) favorecen la derivatizacion con grupos funcionales adecuados para la conjugacion mediante enlazadores no disulfuro con anticuerpos, (iii) estables en plasma, y (iv) eficaces contra varias llneas celulares tumorales (documentos US 2005/0169933; WO 2005/037992; US 5208020).
Como sucede con otros restos de farmaco, todos los estereoisomeros del resto de farmaco maitansinoide se contemplan para los compuestos de la invention, es decir, cualquier combination de las configuraciones R y S en los carbonos quirales de D. En una realization, el resto de farmaco maitansinoide (D) tendra la siguiente estereoqulmica:
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Ejemplos de realizaciones de restos de farmaco maitansinoide incluyen: DM1, DM1, (CR2)m = CH2CH2; DM3, (CR2)m = CH2CH2CH(CH3) y DM4. (CR2)m = CH2CH2C(CH3)2, que tienen las estructuras:
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El enlazador puede unirse a la molecula de maitansinoide en diversas posiciones, dependiendo del tipo de enlace. Por ejemplo, puede formarse un enlace ester mediante la reaccion con un grupo hidroxilo usando tecnicas de acoplamiento convencionales. La reaccion puede producirse en la posicion C-3 que tiene un grupo hidroxilo, la posicion C-14 modificada con hidroximetilo, la posicion C-15 modificada con un grupo hidroxilo y la posicion C-20 que tiene un grupo hidroxilo. En una realizacion preferida, el enlace se forma en la posicion C-3 del maitansinol o un analogo de maitansinol.
Los conjugados resto de farmaco (D) de los conjugados anticuerpo-farmaco (ADC) de Formula I tambien incluyen dolastatinas y sus analogos peptldicos, las auristatinas (patentes US-5.635.483; US-5.780.588). Se ha demostrado que las dolastatinas y auristatinas interfieren con la dinamica de los microtubulos, la hidrolisis de GTP y la division nuclear y celular (Woyke et al. (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45 (12):3580-3584) y tienen actividad anticancerlgena (documento US 5.663.149) y antifungica (Pettit y col. (1998) Antimicrob. Agents and Chemother. 42:2961-2965). Varias formas de un resto de farmaco dolastatina o auristatina se pueden unir covalentemente a un anticuerpo a traves del extremo N (amino) o el extremo C (carboxilo) del resto de farmaco peptldico (documento WO 02/088172; Doronina et al (2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784; Francisco et al (2003) Blood 102(4):1458- 1465).
Los restos de farmaco incluyen dolastatinas, auristatinas (documentos US 5635483; US 5780588; US 5767237; US 6124431) y analogos y derivados de las mismas. Se ha demostrado que las dolastatinas y auristatinas interfieren con la dinamica de los microtubulos, la hidrolisis de GTP y la division nuclear y celular (Woyke et al. (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45 (12):3580-3584) y tienen actividad anticancerlgena (documento US 5.663.149) y antifungica (Pettit y col. (1998) Antimicrob. Agents and Chemother. 42:2961-2965). El resto de farmaco de dolastatina o auristatina puede estar unido al anticuerpo a traves del extremo N (amino) o al extremo C (carboxilo) del resto de farmaco peptldico (documento WO 02/088172).
Ejemplos de realizaciones de auristatina incluyen los restos de farmaco monometilauristatina unida al N terminal DE y DF, divulgadas en: el documento WO 2005/081711; Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research Volumen 45, Numero de resumen 623, presentado el 28 de marzo de 2004, la divulgacion de cada uno de los cuales se incorporan expresamente por referencia en su totalidad.
El resto de farmaco (D) de los conjugados anticuerpo-farmaco (ADC) de Formula I incluyen los restos de farmaco monometilauristatina MMAE y MMAF unidos a traves del N-terminal con el anticuerpo, y que tiene las estructuras:
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Normalmente, los restos de farmaco basados en peptidos pueden prepararse formando un enlace peptldico entre dos o mas aminoacidos y/o fragmentos de peptido. Tales enlaces peptldicos pueden prepararse, por ejemplo, segun
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el metodo de slntesis en fase llquida (vease E. Schroder y K Lubke, "The Peptides", volumen 1, pag. 76-136, 1965, Academic Press) que es muy conocido en el campo de la qulmica de los peptidos.
El resto de farmaco incluye caliqueamicina y analogos y derivados de la misma. La familia de antibioticos de la caliqueamicina puede producir roturas de ADN bicatenario a concentraciones inferiores a picomolares. Para la preparacion de conjugados de la familia de la caliqueamicina veanse los documentos US 5712374; US 5714586; US 5739116; US 5767285; US 5770701, US 5770710; US 5773001; US 5877296. Los analogos estructurales de la caliqueamicina que pueden usarse incluyen, pero no se limitan a, Y11, a2', as', N-acetil-Y1', PSAG y 9h (Hinman et al Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al Cancer Research 58:2925-2928 (1998).
Las toxinas protelna incluyen: cadena A de la difteria, fragmentos activos de no union de toxina difterica, cadena A de exotoxina (de Pseudomonas aeruginosa), cadena A de ricina (Vitetta et al (1987) Science, 238:1098), cadena A de abrina, cadena A de modecina, alfa-sarcina, protelnas de Aleurites fordii, protelnas de diantina, protelnas de Phytolaca americana (PAP', PAP'' y PAP-S), inhibidor de Momordica charantia, curcina, crotina, inhibidor de Saponaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina y los tricotecenos (documento WO 93/21232).
Radioisotopos terapeuticos incluyen: 32P, 33P, 90Y, 125I, 131I, 131In, 153Sm, 186Re, 188Re, 211At, 212Bi, 212Pb e isotopos
radiactivos de Lu.
El radioisotopo u otros marcadores se pueden incorporar en el conjugado segun las formas conocidas (Fraker et al (1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 80:49-57; "Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy" Chatal, CRC Press 1989). El acido 1-isotiocianatobencil-3-metildietilentriaminapentaacetico (MX-DTPA) marcado con carbono 14 es un ejemplo de agente quelante para la conjugacion del radionuclido con el anticuerpo (documento WO94/11026).
ENLAZADORES
Un "enlazador" (L) es un resto bifuncional o multifuncional que puede ser utilizado para enlazar uno o mas restos de farmacos (D) y una unidad de anticuerpo (Ab) para formar conjugados anticuerpo-farmaco (ADC) de Formula I. Los conjugados anticuerpo-farmaco (ADC) se pueden preparar convenientemente usando un enlazador que tiene funcionalidad reactiva para la union al farmaco y al anticuerpo. Un tiol de cistelna de un anticuerpo (Ab) modificado por ingenierla genetica con cistelna pueden formar un enlace con un grupo funcional de un reactivo enlazador, un resto de farmaco o intermedio farmaco-enlazador.
En un aspecto, un enlazador tiene un sitio reactivo que tiene un grupo electrofilo que es reactivo frente a una cistelna nucleofila presente en un anticuerpo. El tiol de la cistelna del anticuerpo es reactivo con un grupo electrofilo en un enlazador y forma un enlace covalente con un enlazador. Grupos electrofilos utiles incluyen, pero no se limitan a, grupos maleimida y haloacetamida.
Los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna reaccionan con reactivos enlazadores o intermedios farmaco-enlazador, con grupos funcionales electrofilos tales como maleimida o a-halo carbonilo, de acuerdo con el metodo de conjugacion en la pagina 766 de Klussman, et al (2004), Bioconjugate Chemistry 15(4): 765-773 y de acuerdo con el protocolo del Ejemplo 4.
En una realizacion, el enlazador L de un ADC tiene la Formula:
-Aa-WwYy
en la que:
- A- es una unidad de estirador covalentemente unida a un tiol de la cistelna del anticuerpo (Ab); a es 0 o 1;
cada -W- es independientemente una unidad de aminoacido; w es independientemente un numero entero que oscila de 0 a 12;
-Y- es una unidad espaciadora covalentemente unida al resto de farmaco; e y es 0, 1 o 2.
UNIDAD DE ESTIRADOR
La unidad de estirador (-A-), cuando esta presente, puede unir una unidad de anticuerpo a una unidad de aminoacido (-W-). A este respecto, un anticuerpo (Ab) tiene un grupo tiol de la cistelna libre que puede formar un enlace con un grupo funcional electrofilo de una unidad de estirador. Unidades de estirador representativas de esta realizacion se representan dentro de los corchetes cuadrados de Formulas IIIa y IIIb en las que Ab-, -W-, -Y-, -D, w e y son como se definen anteriormente y R17 es un radical divalente seleccionado de (CH2)r, carbociclilo C3-C8, O- (CH2)n arileno, (CH2)r-arileno, -arileno-(CH2)r-, (CH2)r-(carbociclilo C3-C8), (carbociclilo C3-Cs)-(CH2)r, heterociclilo C3- Ca, (CH2)r-(heterocicliclo C3-C8), -(heterociclilo C3-Cs)-(CH2)r-, -(CH2)rC(O)NRb-(CH2)r-, -(CH2CH2O)r-, -(CH2CH2O)r-
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CH2-, -(CH2)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-, -(CH2)rC-(O)NRb(CH2CH2O)r-CH2-, -(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-, -
(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-CH2-, and -(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2)r-; donde Rb es H, alquilo Ci-Ca, fenilo o bencilo; y r es independientemente un numero entero que oscila de 1-10.
Arileno incluye radicales de hidrocarburo aromatico divalente de 6-20 atomos de carbono derivados por la eliminacion de dos atomos de hidrogeno del sistema de anillo aromatico parental. Grupos arileno tlpicos incluyen, pero no se limitan a, radicales derivados de benceno, benceno sustituido, naftaleno, antraceno, bifenilo y similares.
Grupos heterociclilo incluyen un sistema de anillo en el que uno o mas atomos del anillo es un heteroatomo, por ejemplo, nitrogeno, oxlgeno y azufre. El radical heterociclo comprende 1 a 20 atomos de carbono y 1 a 3 heteroatomos seleccionados de N, O, P y S. Un heterociclo puede ser un monociclo que tiene 3 a 7 miembros de anillo (2 a a atomos de carbono y 1 a 3 heteroatomos seleccionados de N, O, P y S) o un biciclo que tiene 7 a 10 miembros de anillo (4 a 9 atomos de carbono y 1 a 3 heteroatomos seleccionados de N, O, P y S), por ejemplo: un sistema de biciclo [4,5], [5,5], [5,6] o [6,6]. Los heterociclos se describen en Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, Nueva York, 1968), particularmente los Capltulos 1, 3, 4, 6, 7 y 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, Nueva York, 1950 hasta el presente), en particular los volumenes 13, 14, 16, 19 y 28; y J. Am. Chem. Soc. (1960) 82: 5566.
Ejemplos de heterociclos incluyen a modo de ejemplo y no limitacion piridilo, dihidropiridilo, tetrahidropiridilo (piperidilo), tiazolilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidrotiofenilo oxidado con azufre, pirimidinilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, tetrazolilo, benzofuranilo, tianaftalenilo, indolilo, indolenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, piperidinilo, 4-piperidonilo, pirrolidinilo, 2-pirrolidonilo, pirrolinilo, tetrahidrofuranilo, bistetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, bis-tetrahidropiranilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, decahidroquinolinilo, octahidroisoquinolinilo, azocinilo, triazinilo, 6H-1,2,5-tiadiazinilo, 2H,6H-1,5,2-ditiazinilo, tienilo, tiantrenilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, fenoxatinilo, 2H-pirrolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, pirazinilo, piridazinilo, indolizinilo, isoindolilo, 3H-indolilo, 1 H-indazolilo, purinilo, 4H-quinolizinilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinnolinilo, pteridinilo, 4H-carbazolilo, carbazolilo, p-carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, pirimidinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, furazanilo, fenoxazinilo, isocromanilo, cromanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, piperazinilo, indolinilo, isoindolinilo, quinuclidinilo, morfolinilo, oxazolidinilo, benzotriazolilo, bencisoxazolilo, oxindolilo, benzoxazolinilo e isatinollo
Grupos carbociclilo incluyen un anillo saturado o insaturado que tiene 3 a 7 atomos de carbono como un monociclo o 7 a 12 atomos de carbono como un biciclo. Carbociclos monoclclicos tienen 3 a 6 atomos de anillo, todavla mas normalmente 5 o 6 atomos de anillo. Carbociclos biclclicos tienen 7 a 12 atomos de anillo, por ejemplo, dispuestos como un sistema de biciclo [4,5], [5,5], [5,6] o [6,6], o 9 o 10 atomos de anillo dispuestos como un sistema de biciclo [5,6] o [6,6]. Ejemplos de carbociclos monoclclicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, 1ciclopent-1-enilo, 1- ciclopent-2-enilo, 1-ciclopent-3-enilo, ciclohexilo, 1-ciclohex-1-enilo, 1-ciclohex-2-enilo, 1ciclohex-3-enilo, cicloheptilo y ciclooctilo.
Debe entenderse de todos los ejemplos de realizaciones de ADC de Formula I tales como III-VI, que incluso cuando no se denote expresamente, de 1 a 4 restos de farmaco estan unidos a un anticuerpo (p = 1-4), dependiendo del numero de residuos de cistelna modificados por ingenierla genetica.
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CH2—CONH—R17-C<0)—Ww-Yy—D I
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Un ejemplo de unidad de estirador es el de Formula Ilia y se deriva de maleimido-caproil (MC) en la que R17 es -
(CH2)5-:
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Un ejemplo de unidad de estirador es el de Formula Ilia y se deriva de maleimido-propanoil (MP) en la que R17 es - (CH2)5-:
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Otro ejemplo de unidad de estirador es el de Formula Ilia en la que R17 es -(CH2CH2OV-CH2- y r es 2:
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Otro ejemplo de unidad de estirador es el de Formula Ilia en la que R17 es -(CH2)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-CH2- donde Rb es H y cada r es 2:
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Otro ejemplo de unidad de estirador es el de Formula IIIa en la que R17 es -(CH2)5-:
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En otra realizacion, la unidad de estirador esta ligada a la unidad de anti-anticuerpo por un enlace disulfuro entre un atomo de azufre de la unidad de anticuerpo y un atomo de azufre de la unidad de estirador. Una unidad de estirador representativa de este realizacion se representa por la Formula IV en la que R17, Ab-, -W-, -Y-, -D, w e y son como se definen anteriormente.
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En otra realizacion mas, el grupo reactivo del estirador contiene un grupo funcional reactivo con tiol que puede formar un enlace con un tiol de la cistelna libre de un anticuerpo. Ejemplos de grupos funcionales de reaccion con tiol incluyen, pero no se limitan a, maleimida, a-haloacetilo, esteres activados tales como esteres de succinimida, esteres 4-nitrofenllios, esteres pentafluorofenllicos, esteres tetrafluorofenllicos, anhldridos, cloruros de acido, cloruros de sulfonilo, isocianatos e isotiocianatos. Unidades de estirador representativas de esta realizacion se representan por las Formulas Va y Vb, en las que -R17-, Ab-, -W-, -Y-, -D, w e y son como se definen anteriormente
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En otra realizacion, el enlazador puede ser un enlazador de tipo dendrltico para la union covalente de mas de un resto de farmaco mediante un resto de enlazador multifuncional de ramificacion con un anticuerpo (Sun et al. (2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12: 2213-2215; Sun et al. (2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768; King (2002) Tetrahedron Letters 43:1987-1990). Los enlazadores dendrlticos pueden aumentar la relacion molar entre el farmaco y el anticuerpo, es decir, la carga, que esta relacionada con la potencia del ADC. Por tanto, si un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna lleva solo un grupo tiol de la cistelna reactivo, una multitud de restos de farmaco pueden unirse mediante un enlazador dendrltico.
UNIDAD DE AMINOACIDO
El enlazador puede comprender residuos de aminoacidos. La unidad de aminoacido (-Ww-), cuando esta presente, une el anticuerpo (Ab) con el resto de farmaco (D) del conjugado de anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna-farmaco (ADC) de la invencion.
-Ww- es una unidad de dipeptido, tripeptido, tetrapeptido, pentapeptido, hexapeptido, heptapeptido, octapeptido, nonapeptido, decapeptido, undecapeptido o dodecapeptido. Los residuos de aminoacidos que comprenden la unidad de aminoacido incluyen aquellos que se producen naturalmente, ademas de aminoacidos menores y analogos de aminoacidos que no existen de forma natural, tales como citrulina. Cada unidad de -W- tiene independientemente la formula denotada a continuacion en los corchetes y w es un numero entero que oscila de 0 a 12:
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en la que R19 es hidrogeno, metilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo, bencilo, p-hidroxibencilo, -CH2OH, -CH(OH)CH3, - CH2CH2SCH3, -CH2CONH2, -CH2COOH, -CH2CH2CONH2, -CH2CH2COOH,-(CH2)3NHC(=NH)NH2, -(CH2)3NH2, - (CH2)3NHCOCH3, -(CH2)3NHCHO, -(CH2)4NHC(=NH)NH2,-(CH2)4NH2, -(CH2)4NHCOCH3, -(CH2)4NHCHO, - (CH2)3NHCONH2, -(CH2)4NHCONH2,-CH2CH2CH(OH)CH2NH2, 2-piridilmetil-, 3-piridilmetil-, 4-piridilmetil-, fenilo, ciclohexilo,
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La unidad de aminoacido puede escindirse enzimaticamente por una o mas enzimas, que incluyen una proteasa asociada a tumor, para liberar el resto de farmaco (-D), que en una realizacion se protona in vivo tras la liberacion para proporcionar un farmaco (D).
Pueden disenarse unidades -Ww- utiles y optimizarse en su selectividad para la escision enzimatica por una enzima particular, por ejemplo, una proteasa asociada a tumor. En una realizacion, una unidad -Ww- es aquella cuya escision se cataliza por la catepsina B, C y D, o una proteasa de plasmina.
Ejemplos de unidades de aminoacido -Ww- incluyen un dipeptido, un tripeptido, un tetrapeptido o un pentapeptido. Ejemplos de dipeptidos incluyen: valina-citrulina (vc o val-cit), alaninafenilalanina (af o ala-phe). Ejemplos de tripeptidos incluyen: glicina-valina-citrulina (gly-val-cit) y glicinaglicina-glicina (gly-gly-gly).
Si R19 es distinto de hidrogeno, el atomo de carbono al que R19 esta unido es quiral. Cada atomo de carbono con el que R19 esta unido esta independientemente en la configuracion (S) o (R), o es una mezcla racemica. Por tanto, las unidades de aminoacidos pueden ser enantiomericamente puras, racemicas o diaestereomericas.
UNIDAD ESPACIADORA
La unidad espaciadora (-Yy-), cuando esta presente (y = 1 o 2), une una unidad de aminoacido (-Ww-) con el resto de farmaco (D) cuando una unidad de aminoacido esta presente (w = 1-12). Como alternativa, la unidad espaciadora une la unidad de estirador con el resto de farmaco cuando la unidad de aminoacido esta ausente. La unidad espaciadora tambien une el resto de farmaco con la unidad de anticuerpo cuanto tanto la unidad de aminoacido como la unidad de estirador estan ausentes (w, y = 0). Las unidades espaciadoras son de dos tipos generales: auto- inmolativas y no auto-inmolativas. Una unidad espaciadora no auto-inmolativa es una en la que parte o toda la unidad espaciadora sigue unida al resto de farmaco despues de la escision, particularmente enzimatica, de una unidad de aminoacido del conjugado de anticuerpo-farmaco o el resto de farmaco-enlazador. Si un ADC que contiene una unidad espaciadora de glicina-glicina o una unidad espaciadora de glicina se somete a escision enzimatica por una proteasa asociada a celula de tumor, una proteasa asociada a celula de cancer o una proteasa asociada a linfocito, una glicina-glicina-resto de farmaco o una glicina-resto de farmaco se escinde de Ab-Aa-Ww-. En una realizacion, dentro de la celula diana tiene lugar una reaccion de hidrolisis independiente, escindiendo la glicina-resto de farmaco unido y liberando el farmaco.
En otra realizacion, -Yy- es una unidad de p-aminobencilcarbamollo (PAB) (vease Esquemas 2 y 3) cuya porcion de fenileno esta sustituida con Qm en la que Q es -alquilo C1-C8, -O-(alquilo C1-C8), -halogeno, -nitro o -ciano; y m es un numero entero que oscila de 0-4.
Ejemplos de realizaciones de una unidad espaciadora no auto-inmolativa (-Y-) son: - Gly-Gly-; -Gly-; -Ala-Phe-; -Val- Cit-.
En una realizacion se proporciona un resto de farmaco-enlazador o un ADC en el que la unidad espaciadora esta ausente (y = 0), o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable de los mismos.
Como alternativa, un ADC que contiene una unidad espaciadora auto-inmolativa puede liberar -D. En una realizacion,
-Y- es un grupo PAB que esta ligado a -Ww- por el atomo de nitrogeno amino del grupo PAB, y conectado directamente con -D por un grupo carbonato, carbamato o eter, en el que el ADC tiene la estructura a modo de ejemplo
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en la que Q es -alquilo Ci-Cs, -O-(alquilo Ci-Cs), -halogeno, -nitro o -ciano; m es un numero entero que oscila de 0-4; y p oscila de 1 a 4.
Otros ejemplos de espaciadores auto-inmolativos incluyen, pero no se limitan a, compuestos aromaticos que son electronicamente similares al grupo PAB tal como derivados de 2-aminoimidazol-5-metanol (Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9: 2237) y orto o para-aminobencilacetales. Pueden usarse espaciadores que experimentan ciclacion tras la hidrolisis del enlace amida, tales como amidas de acido 4-aminobutlrico sustituidas y sin sustituir (Rodrigues et al. (1995) Chemistry Biology 2:223), sistemas de anillo biciclo[2.2.1] y biciclo[2.2.2] apropiadamente sustituidos (Storm et al. (1972) J. Amer. Chem. Soc. 94: 5815) y amidas de acido 2-aminofenilpropionico (Amsberry et al. (1990) J. Org. Chem. 55: 5867). La eliminacion de farmacos que contienen amina que estan sustituidos en la glicina (Kingsbury y col. (1984) J. Med. Chem. 27:1447) tambien son ejemplos de espaciador auto-inmolativo util en ADC.
En una realizacion, la unidad espaciadora es un bis(hidroximetil)estireno (BHMS) ramificado, que se puede usar para incorporar y liberar multiples farmacos, que tiene la estructura:
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que comprende una unidad de dendrlmero 2-(4-aminobenciliden)propan-1,3-diol (WO 2004/043493; de Groot et al (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4490-4494), en la que Q es alquilo -C1-C8, -O-alquilo-C1-Cs, -halogeno, -nitro o ciano; m es un numero entero que oscila de 0-4; n es 0 o 1 y p oscila de 1 a 4.
ENLAZADORES DENDRITICOS
En otra realizacion, el enlazador L puede ser un enlazador de tipo dendrltico para la union covalente de mas de un resto de farmaco mediante un resto de enlazador multifuncional de ramificacion con un anticuerpo (Sun et al. (2002) Bioorganic & Medicinal Chemistr y Letters 12: 2213-2215; Sun et al. (2003) Bioorganic & Medicinal Chemistr y 11:1761-1768). Los enlazadores dendrlticos pueden aumentar la relacion molar entre farmaco y anticuerpo, es decir, la carga, que esta relacionada con la potencia del ADC. Por tanto, si un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna lleva solo un grupo tiol de la cistelna reactivo, una multitud de restos de farmaco pueden unirse mediante un enlazador dendrltico.
Los siguientes ejemplos de realizaciones de reactivos de enlazador dendrltico permiten conjugar hasta nueve reactivos de resto de farmaco nucleofilos por reaccion con los grupos funcionales de la mostaza de nitrogeno cloroetilo:
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O
CH2OCHaCH2CNHCH2CY3
En otra realizacion de una unidad espaciadora, se pueden emplear como enlazadores en los compuestos de la invencion enlazadores dendriticos ramificados con unidades de dendrimero 2,6-bis(hidroximetil)-p-cresol y 2,4,6- tris(hidroximetil)-fenol auto-inmolativos (WO 2004/01993; Szalai et al (2003) J. Amer. Chem. Soc. 125:15688-15689; Shamis et al (2004) J. Amer. Chem. Soc. 126:1726-1731; Amir et al (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4494-4499).
En otra realizacion, los restos D son los mismos.
En otra realizacion mas, los restos D son diferentes.
En un aspecto, las unidades espaciadoras (-Yy-) se representan por las Formulas (X)-(XII):
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en la que Q es -alquilo C1-C8, -O-(alquilo C1-C8), -halogeno, -nitro o -ciano y m es un numero entero que oscila de 0-4;
HN—CH2—CO-j j—NHCH2C(0)-NHCH2C(0)-
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Realizaciones de los compuestos de conjugado anticuerpo-farmaco de Formula I incluyen XIIIa (val-cit), XIIIb (MC- val-cit), XIIIc (MC-val-cit-PAB):
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Ejemplos de otras realizaciones de compuestos de conjugado anticuerpo-farmaco de la Formula la incluyen XlVa-e:
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donde X es:
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Y es:
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y R es independientemente H o alquilo C1-C6 y n es 1 a 12.
En otra realization, un enlazador tiene un grupo funcional reactivo que tiene un grupo nucleofilo que es reactivo con un grupo electrofilo presente en un anticuerpo. Grupos electrofilos utiles en un anticuerpo incluyen, pero no se limitan a, grupos carbonilo de aldehldo y cetona. El heteroatomo de un grupo nucleofilo de un enlazador puede reaccionar con un grupo electrofilo en un anticuerpo y formar un enlace covalente con una unidad de anticuerpo. Grupos nucleofilos utiles en un enlazador incluyen, pero no se limitan a, hidrazida, oxima, amino, hidracina, tiosemicarbazona, carboxilato de hidracina y arilhidrazida. El grupo electrofilo en un anticuerpo proporciona un sitio conveniente para la union con un enlazador.
Normalmente, los enlazadores de tipo peptido pueden prepararse formando un enlace peptldico entre dos o mas aminoacidos y/o fragmentos de peptido. Tales enlaces peptldicos pueden prepararse, por ejemplo, segun el metodo de slntesis en fase llquida (E. Schroder y K. Lubke (1965) "The Peptides", volumen 1, pag. 76-136, Academic Press) que es muy conocido en el campo de la qulmica de los peptidos.
Los productos intermedios de enlazador pueden ensamblarse con cualquier combination o secuencia de reacciones que incluyen unidades de espaciador, estirador y de aminoacido. Las unidades de espaciador, estirador y de aminoacido pueden emplear grupos funcionales reactivos que son de naturaleza electrofila, nucleofila o de radicales libres. Grupos funcionales reactivos incluyen, pero no se limitan a
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donde X es un grupo saliente, por ej., O-mesilo, O-tosilo, -Cl, -Br, -I o maleimida.
En otra realizacion, el enlazador puede estar sustituido con grupos que modulan la solubilidad o reactividad. Por ejemplo, un sustituyente cargado tal como sulfonato (-SO3-) o amonio puede aumentar la solubilidad en agua del reactivo y facilitar la reaction de acoplamiento del reactivo de enlazador con el anticuerpo o el resto de farmaco, o facilitar la reaccion de acoplamiento de Ab-L (producto intermedio de anticuerpo-enlazador) con D, o D-L (producto intermedio de farmaco-enlazador) con Ab, dependiendo de la ruta de slntesis empleada para preparar el ADC.
Los compuestos de la invention contemplan expresamente, pero no se limitan a, ADC preparado con reactivos enlazadores: BMPEO, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SlAB, sulfo-SMCC y sulfo-SMPB y SVSB (succinimidil-(4-vinilsulfona) benzoato) y que incluye reactivos bis-maleimida: DTME, BMB, BMDB, BMH, BMOE, BM(PEO)3 y BM(PEO)4, que estan disponibles comercialmente de Pierce Biotechnology, Inc., Departamento de Servicio al Cliente, Apartado postal Box 117, Rockford, IL. 61105 U.S.A., U.S.A. 1-800-874-3723, Internacional + 815-968-0747. Ver paginas 467-498, 2003-2004 Manual de Aplicaciones y Catalogo. Los reactivos bis-maleimida permiten la union del grupo tiol de un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna a un resto de farmaco que contiene tiol, marcador o enlazador intermedio, de forma secuencial o concurrente. Otros grupos funcionales ademas de maleimida, que son reactivos con un grupo tiol de un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna, resto de farmaco, marcador o enlazador intermedio incluyen yodoacetamida, bromoacetamida, vinil piridina, disulfuro, disulfuro de piridilo, isocianato e isotiocianato.
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BM(PEO)3 BM(PEO)4
Reactivos enlazadores utiles tambien se pueden obtener a traves de otras fuentes comerciales, tales como Molecular Biosciences Inc.(Boulder, CO), o sintetizarse de acuerdo con procedimientos descritos en Toki et al (2002) 5 J. Org. Chem. 67: 1866-1872; Walker, M. A. (1995) J. Org. Chem. 60: 5352-5355; Frisch et al (1996) Bioconjugate Chem. 7: 180-186 y en los documentos US 6214345; WO 02/088172; US 2003130189; US2003096743; WO 03/026577; WO 03/043583 y WO 04/032828.
Se pueden introducir los estiradores de Formula (IIIa) en un enlazador por reaccion de los siguientes reactivos 10 enlazadores con el N terminal de una unidad de aminoacidos:
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donde n es un numero entero que oscila de 1 a 10 y T es -H o -SO3Na;
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donde n es un numero entero que oscila de 0 a 3;
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Se pueden introducir unidades de estirador en un enlazador por reaccion de los siguientes reactivos bifuncionales con el N terminal de una unidad de aminoacido:
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donde X es Br o I. Unidades estirador de formula tambien se pueden introducir en un enlazador por reaccion de los siguientes reactivos bifuncionales con el N terminal de una unidad de aminoacidos:
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Se pueden introducir unidades de estirador de Formula (Va) en un enlazador por reaccion de los siguientes intermedios con el N-terminal de una unidad de aminoacido:
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Los estiradores de isotiocianato de la formula mostrada a continuacion pueden prepararse a partir de cloruros de acido isotiocianatocarboxllico como se describe en Angew. Chem., (1975)87(14), 517.
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en la que -R17- es como se describe en la presente memoria.
Un ejemplo de enlazador dipeptldico valina-citrulina (val-cit o vc) que tiene un estirador maleimida y un espaciador para-aminobencilcarbamollo (PAB) auto-inmolativo tiene la estructura:
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donde Q es alquilo -Ci-Cs, -O-(alquilo Ci-Cs), -halogeno, nitro o ciano y m es un numero entero de 0-4.
Un ejemplo de un reactivo enlazador dipeptldico phe-lys(Mtr) que tiene una unidad estiradora y una unidad espaciador auto-inmolativa de p-aminobencilo se puede preparar de acuerdo con Dubowchik, et al. (1997) Tetrahedron Letters, 38: 5257-60, y tiene la estructura:
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donde Mtr es mono-4-metoxitritilo, Q es -alquilo Ci-Cs, -O-(alquilo Ci-Cs), -halogeno, nitro o ciano; y m es un numero entero de 0-4.
Ejemplos de compuestos conjugados anticuerpo-farmaco de la invencion incluyen:
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donde Val es valina; Cit es citrulina; p es 1, 2, 3, o 4; y Ab es un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna. Otros ejemplos de conjugados anticuerpo-farmaco en los que el resto de farmaco maitansinoide DM1 esta
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unido a traves de un enlazador BMPEO a un grupo tiol de trastuzumab tienen la estructura:
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donde Ab es un anticuerpo modificado por ingenieria genetica con cisteina; n es 0, 1, o 2; y p es 1,2,3 o 4. PREPARACION DE CONJUGADOS ANTICUERPO-FARMACO
El ADC de Formula I puede prepararse por varias rutas empleando reacciones de quimica organica, condiciones y reactivos conocidos para aquellos expertos en la materia, que incluyen: (1) reaccion de un grupo cisteina de un anticuerpo modificado por ingenieria genetica con cisteina con un reactivo de enlazador, para formar el producto intermedio de anticuerpo-enlazador Ab-L, mediante un enlace covalente, seguido de la reaccion con un resto de farmaco D activado; y (2) reaccion de un grupo nucleofilo de un resto de farmaco con un reactivo de enlazador, para formar el producto intermedio de farmaco-enlazador D-L, mediante un enlace covalente, seguido de la reaccion con un grupo cisteina de un anticuerpo modificado por ingenieria genetica con cisteina. Los procedimientos de conjugacion (1) y (2) pueden emplearse con varios anticuerpos modificados por ingenieria genetica con cisteina, restos de farmaco y enlazadores para preparar los conjugados de anticuerpo-farmaco de Formula I.
Los grupos tiol de la cisteina del anticuerpo son nucleofilos y pueden reaccionar para formar enlaces covalentes con grupos electrofilos en los reactivos de enlazador y productos intermedios de farmaco-enlazador que incluyen: (i) esteres activos tales como esteres de NHS, esteres de HOBt, haloformiatos y haluros de acido; (ii) haluros de alquilo y bencilo tales como haloacetamidas; (iii) aldehidos, cetonas, grupos carboxilo y maleimida; y (iv) disulfuros, que incluyen disulfuros de piridilo, por intercambio de sulfuro. Grupo nucleofilos en un resto de farmaco incluyen, pero no se limitan a: grupos amina, tiol, hidroxilo, hidrazida, oxima, hidracina, tiosemicarbazona, carboxilato de hidracina y arilhidrazida que pueden reaccionar para formar enlaces covalentes con grupos electrofilos en restos de enlazador y reactivos de enlazador
La maitansina puede, por ejemplo, convertirse en May-SSCH3, que se puede reducir en el tiol libre, May-SH, y reaccionar con un anticuerpo modificado (Chari et al (1992) Cancer Research 52:127-131) para generar un inmunoconjugado maitansinoide-anticuerpo con un enlace disulfuro. Se han descrito conjugados anticuerpo- maitansinoide con enlaces disulfuro (documentos WO 04/016801; US 6884874; US 2004/039176 A1; WO 03/068144; US 2004/001838 A1; patentes US-6441163, US-5208020, US-5416064; WO 01/024763). El enlazador de disulfuro SPP se construye con el reactivo enlazador N-succinimidil 4-(2-piridiltio) pentanoato.
En ciertas condiciones, los anticuerpos modificados por ingenieria genetica con cisteina pueden hacerse reactivos para la conjugacion con reactivos de enlazador mediante tratamiento con un agente reductor tal como DTT (reactivo de Cleland, ditiotreitol) o TCEP (clorhidrato de tris(2-carboxietil) fosfina; Getz et al. (1999) Anal. Biochem. Vol 273: 73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA). Los anticuerpos monoclonales modificados por ingenieria genetica con cisteina de longitud completa (TioMab) expresados en celulas CHO se reducen con aproximadamente un exceso de 50 veces de TCEP durante 3 h a 37 °C para reducir enlaces disulfuro que pueden formarse entre los residuos de cisteina recientemente introducidos y la cisteina presente en los medios de cultivo. El TioMab reducido se diluye y se carga sobre una columna HiTrap S en acetato sodico 10 mM, pH 5, y se eluye con PBS que contiene cloruro sodico 0,3 M. Los enlaces disulfuro se restablecieron entre residuos de cisteina presentes en el Mab parental con sulfato de cobre (CuSO4) acuoso diluido (200 nM) a temperatura ambiente, durante la noche. Pueden usarse otros oxidantes, es decir, agentes de oxidacion, y condiciones de oxidacion, que se conocen en la tecnica. Tambien es eficaz la oxidacion con aire ambiente. Esta etapa de reoxidacion parcial suave forma eficientemente disulfuros dentro de las cadenas con alta fidelidad. Un exceso de aproximadamente 10 veces de producto intermedio de farmaco-enlazador, por ejemplo. BM(PEO)4-DM1, se anadio, se mezclo y se dejo reposar durante aproximadamente una hora a temperatura ambiente para efectuar la conjugacion y formar el conjugado de anticuerpo (Tiomab)-farmaco. La mezcla de conjugacion se filtro en gel y se cargo y se eluyo mediante una columna HiTrap S para eliminar el producto intermedio de farmaco-enlazador en exceso y otras impurezas.
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La Figura 15 muestra el proceso general para preparar un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna expresado a partir de cultivo celular para la conjugacion. Los aductos de cistelna, supuestamente junto con diversos enlaces disulfuro entre cadenas, se escinden reductoramente para dar una forma reducida del anticuerpo. Los enlaces disulfuro entre cadenas entre residuos de cistelna emparejados se vuelven a formar bajo condiciones de oxidacion parcial, tal como exposicion a oxlgeno ambiental. Los residuos de cistelna recientemente introducidos, modificados por ingenierla genetica y desemparejados siguen estando disponibles para la reaccion con reactivos de enlazador o productos intermedios de farmaco-enlazador para formar los conjugados del anticuerpo de la invencion. Los TioMab expresados en llneas celulares de mamlfero producen aducto de Cis externamente conjugado con una Cis manipulada mediante la formacion de enlaces -S-S-. De ahl que los TioMab purificados se traten con los procedimientos de reduction y reoxidacion como se describen en el Ejemplo 11 para producir TioMab reactivos. Estos TioMab se usan para conjugarse con farmacos citotoxicos que contienen maleimida, fluoroforos y otras marcas.
Se prepararon varios conjugados de anticuerpo TioFab y TioMab-anticuerpo (Ejemplos 4-8) El mutante de cistelna hu4D5Fabv8 (V110C) se conjugo con el resto de farmaco maitansinoide DM1 con un reactivo enlazador bis- maleimido BMPEO para formar hu4D5Fabv8 (V110C) -BMPEO-DM1 (Ejemplo 8).
ENSAYOS DE PROLIFERACION CELULAR IN VITRO
Generalmente, la actividad citotoxica o citostatica de un conjugado anticuerpo-farmaco (ADC) se mide mediante: exposicion de las celulas de mamlfero que tiene las protelnas del receptor, por ejemplo HER2, al anticuerpo del ADC en un medio de cultivo celular; cultivando las celulas durante un perlodo de aproximadamente 6 horas a aproximadamente 5 dlas y midiendo la viabilidad celular. Los ensayos in vitro basados en celulas se usaron para medir la viabilidad (proliferation), la citotoxicidad, y la induction de la apoptosis (activation de la caspasa) del ADC de la invencion.
La potencia in vitro de los conjugados anticuerpo-farmaco se midio mediante un ensayo de proliferacion celular (Figuras 10 y 11, Ejemplo 9). El ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo® es un metodo de ensayo homogeneo disponible comercialmente (Promega Corp., Madison, WI), basado en la expresion recombinante de la luciferasa de Coleoptera (patentes US-5583024; US-5674713 y US-5700670). Este ensayo de proliferacion celular determina el numero de celulas viables en cultivo basandose en la cuantificacion del ATP presente, un indicador de las celulas metabolicamente activas (Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88; documento US 6602677). El ensayo CellTiter-Glo® se llevo a cabo en formato de 96 pocillos, por lo que es susceptible de cribado de alto rendimiento automatizado (HTS) (Cree et al Drogas (1995) AntiCancer 6: 398-404). El procedimiento de ensayo homogeneo implica la adicion de un unico reactivo (CellTiter-Glo® Reactivo) directamente a las celulas cultivadas en medio suplementado con suero. No se requiere el lavado de celulas ni la elimination de etapas de pipeteado medias y multiples. El sistema detecta tan solo 15 celulas/pocillo en un formato de 384 pocillos en 10 minutos despues de la adicion del reactivo y la mezcla. Las celulas pueden ser tratadas continuamente con ADC, o pueden ser tratadas y separadas con ADC. Generalmente, las celulas tratadas brevemente, es decir, 3 horas, mostraron los mismos efectos de potencia que las celulas tratadas de forma continua.
El formato "medida anadir-mezclar" homogeneo provoca la lisis celular y la generation de una senal luminiscente proporcional a la cantidad de ATP presente. La cantidad de ATP es directamente proporcional al numero de celulas presentes en el cultivo. El ensayo CellTiter-Glo® genera una senal luminiscente "tipo resplandor" producida por la reaccion de la luciferasa, que tiene una semivida generalmente mayor de cinco horas, dependiendo del tipo de celulas y medio utilizados. Las celulas viables se reflejan en unidades relativas de luminiscencia (RLU). El sustrato, luciferina de escarabajo, se descarboxila oxidativamente por la luciferasa de luciernaga recombinante con la conversion concomitante de ATP en AMP y la generacion de fotones. La vida media prolongada elimina la necesidad de utilizar inyectores de reactivos y proporciona flexibilidad para el procesamiento de modo continuo o por lotes de placas multiples. Este ensayo de proliferacion celular se puede utilizar con varios formatos multipocillo, por ejemplo, formato de 96 o 384 pocillo. Los datos pueden ser registrados por luminometro o un dispositivo de obtencion de imagenes por camara CCD. La salida de la luminiscencia se presenta como unidades relativas de luz (RLU), medidas en el tiempo. Como alternativa, los fotones de luminiscencia pueden ser contadas en un contador de centelleo en presencia de un agente de centelleo. Las unidades de luz se pueden representar entonces como CPS - recuentos por segundo.
Luciferasa
ATP -tLuciferina+ Oz—-----------Oxiluciferina + AMP + PPi + COg+luz
Mg+Z
Los efectos antiproliferativos de los conjugados anticuerpo-farmaco se midieron por la proliferacion celular, el ensayo de destruction celular in vitro anterior contra la llnea celular de tumor de mama SK-BR-3 (Figuras 10 y 11). Los valores de CI50 del ADC se establecieron contra las celulas SK-BR-3, que son conocidas por sobreexpresar la protelna del receptor HER2.
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La Figura 10 muestra que trastuzumab-SMCC-DMI (CI50 = 0,008-0,015 qg/ml) era mas potente que el conjugado de mutante de cistelna de la cadena pesada hu4D5Fabv8 - (A121C) -BMPEO-DM1 (q= 0,04pg/ml). Ambos conjugados fueron significativamente mas potentes en la destruccion de celulas que trastuzumab desnudo (CI50 = 0,1 qg/ml). La carga de farmacos para el trastuzumab-SMCC-DM1 fue de 2,8 DM1/Ab y para hu4D5Fabv8 (A121C)-BMPEO-Dm1 fue de 0,6 DM1/Ab.
La Figura 11 muestra que trastuzumab-SMCC-DM1 (CI50 = 0,008 a 0,015 qg/ml) fue mas potente que el mutante de cistelna de la cadena ligera hu4D5Fabv8 (V110C)-BMPEO-DM1 (CI50= 0,07 qg/ml). Ambos conjugados eran mas potentes en la destruccion de celulas que el trastuzumab desnudo (CI50 = 0,1 qg/ml). La carga de farmacos para el trastuzumab-SMCC-DM1 fue de 2,8 DM1/Ab y para hu4D5Fabv8 (V110C)-BMPEO-DM1 fue de 0,9 DM1/Ab.
Los conjugados de IgG TioMab de longitud completa se ensayaron para determinar in vitro la eficacia la proliferacion celular y en comparacion con los anticuerpos parentales. La Figura 20 muestra los resultados de un ensayo de celulas SK-BR-3 tratadas con: anticuerpo trastuzumab parental (HERCEPTIN®, Genentech, Inc.); trastuzumab- SMCC-DM1 con una carga de farmaco de aproximadamente 3,4 DM1/Ab y tio-trastuzumab (A121C)-BMPEO-DM1 con una carga de farmaco de aproximadamente 1,6 DM1/Ab. El conjugado trastuzumab-SMCC-DM1 esta ligado al anticuerpo a traves del enlazador ester NHS con amino reactivo SMCC, mientras que los conjugados tio- trastuzumab (A121C)-BMPEO-DM1 se unen mediante el enlazador maleimida BMPEO con tiol reactivo. Ambos conjugados eran potentes contra las celulas SK-BR-3 y mostraron una actividad comparable, mientras que trastuzumab no ejercio ningun efecto citotoxico. La Figura 21A muestra los resultados de un ensayo de celulas HT 1080EphB2 tratadas con: anti-EphB2R 2H9 parental y conjugado tio BMPEO-DM1 2H9 (A121C). La Figura 21B muestra los resultados de un ensayo de celulas BT 474 tratadas con: anti-EphB2R 2H9 parental y conjugado tio BMPEO-DM1 2H9 (A121C). El conjugado TioMab 2H9 contra las celulas HT 1080EphB2 y BT 474, era mas potente que el conjugado de anticuerpo parental 2H9. El conjugado Tio-2H9-BMPEO-DM1 mostro actividad de destruccion celular funcional en la llnea celular especlfica EphB2 (HT1080EphH2) en comparacion con una llnea celular no EphB2, BT474 en la que solo se observa actividad marginal.
Los conjugados de anticuerpo-farmaco se compararon en el caso en el que el anticuerpo es un anticuerpo parental y en el caso en el que el anticuerpo es un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna. La Figura 22 muestra los resultados de un ensayo de celulas PC3/neo tratadas con: anti-MUC16-SMCC-DM1 3A5 y tio 3A5 (A121C) BMPEO-DM1. La Figura 23 muestra los resultados de un ensayo de celulas PC3/MUC16 tratadas con: 3A5 anti MUC16-SMCC-DM1 y tio 3A5 (A121C) BMPEO-DM1. La Figura 24 muestra los resultados de un ensayo de celulas OVCAR-3 tratados con: 3A5 anti MUC16-SMCC-DM1 y tio 3A5 (A121C) BMPEO-DM1. Tio-3A5-BMPEO- DM1 no mostro ninguna actividad significativa de destruccion celular en la llnea celular PC3/neo de control, aunque mostro una actividad comparable a 3A5-SMCC-DM1 en la llnea celular PC3/MUC16. El conjugado Tio-3A5-DM1 tambien mostro actividad en el OVCAR-3 que expresa antlgeno MUC16 endogeno.
EFICACIA IN VIVO
La eficacia in vivo de dos conjugados peptido de union a albumina-DM1 DM1 (maitansinoide)-anticuerpo-farmaco (ADC) de la invencion se midio con un modelo en raton de explante transgenico de alta expresion de HER2 (Figura 12, Ejemplo 10). Se propago un aloinjerto del raton transgenico Fo5 mmtv que no responde a, o responde mal a, la terapia con HERCEPTlN®. Los sujetos fueron tratados una vez con ABP-rhuFab4D5-cis (cadena ligera)-DM1; ABP- rhuFab4D5 (cadena pesada)-DM1 y el control de tampon de PBS placebo (vehlculo) y se controlaron durante mas de 3 semanas para medir el tiempo de duplicacion del tumor, el log de muerte celular y la reduccion del tumor.
Muestra
Dosis Ti PR CR TDV (dlas)
Vehlculo (tampon PBS)
7/7 0/7 0/7 3
ABP-rhuFab4D5-V110C (cadena ligera)-DM1 (0,9 DM1/Ab)
25 mg por kg (1012 qg/m2 de DM1) 7/7 7/7 0/7 14
ABP-rhuFab4D5-A121C(cadena pesada)-DM1 (0,6 DM1/Ab)
37,5 mg por kg (1012 qg/m2 de DM1) 7/7 4/7 0/7 16
El termino Ti es el numero de animales en el grupo de estudio con tumor en T = 0 + total de animales en el grupo.
El termino PR es el numero de animales que alcanzan la remision parcial del tumor + animales con tumor en el momento T = 0 en el grupo. El termino CR es el numero de animales que alcanzan la remision completa del tumor + animales con tumor a T = 0 en el grupo. El termino TDV es el tiempo de duplicacion del tumor, es decir, el tiempo en dlas para que el volumen del tumor del control se duplique.
Los siete ratones tratados con 25 mg por kg (1,012 pg/m2 de DM1) de ABP-rhuFab4D5-cis (cadena ligera)-DM1 eran todos positivos para el tumor y un animal mostro remision parcial despues de 20 dlas. Los siete ratones tratados con 37,5 mg por kg (1,012 pg/m2 de DM1) de ABP-rhuFab4D5-cis (cadena pesada)-DM1 eran todas positivos para el tumor y cuatro animales mostraron remision parcial despues de 20 dlas.
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La variante de anticuerpo IgG TioMab de longitud completa con la mutacion de cistelna A121C y conjugada con el enlazador BMPEO y el resto de farmaco DM1 fue probado frente al conjugado trastuzumab-SMCC-DM1 parental en ratones portadores del tumor MMTV-HER2 Fo5. El tamano del tumor en el dla 0 de la inyeccion fue de aproximadamente 100-200 mm de tamano. La figura 25 muestra el cambio de volumen medio del tumor de mas de 21 dlas en ratones desnudos atlmicos con aloinjertos de tumor mamario MMTV-HER2 Fo5, despues de una sola dosis en el Dla 0 con: Vehlculo (tampon); trastuzumab-SMCC-DM1 10 mg/kg; tio trastuzumab (A121C)-SMCC-DM1 21 mg/kg y tio trastuzumab (A121C) -SMCC-DM1 10 mg/kg.
Muestra
Dosis Ti PR CR
Vehlculo (tampon PBS)
10/10 0/10 0/10
trastuzumab-SMCC-DM1 3,4 DM1/Ab
10 mg Ab por kg de raton (490 ug/m2 de DM1) 10/10 7/10 0/10
tio-trastuzumab (A121C)-BMPEO-DM1 1,6 DM1/Ab
21 mg Ab por kg de raton (496 ug/m2 de DM1) 8/10 6/10 4/10
tio-trastuzumab (A121C)-BMPEO-DM1 1,6 DM1/Ab
10 mg Ab por kg de raton (236 ug/m2 de DM1) 10/10 0/10 0/10
Puede verse en la figura 25 que cada conjugado ejerce un efecto significativo de retraso del crecimiento del tumor en relacion con placebo (vehlculo). Cada uno de los diez ratones en los cuatro grupos anteriores recibio una sola inyeccion en el dla 1. El conjugado trastuzumab-SMCC-DM1 parental se cargo con mas del doble (3,4 DM1/Ab) el numero de restos de farmaco que el conjugado modificado por ingenierla genetica con cistelna tio-trastuzumab (A121C)-BMPEO-DM1 (1,6 DM1/Ab). La cantidad eficaz de DM1 era por lo tanto aproximadamente igual entre trastuzumab-SMCC-DM1 parental y tio-trastuzumab (A121C)-BMPEO-DM1 (21 mg Ab) de dosis mas alta. Estas dos muestras mostraron la mayor potencia. Catorce dlas despues de la inyeccion, la mayorla de los animales que recibieron estos conjugados estaban en remision parcial o completa. La menor eficacia de la muestra de tio- trastuzumab (A121C)-BMPEO-DM1 de dosis inferior confirmo una respuesta relacionada con la dosis de DM1. Tio- Trastuzumab-DM1 se dosifico en una cantidad de anticuerpo equivalente (10 mg/kg) o de farmaco DM1 (21 mg/kg) a la del conjugado trastuzumab-SMCC-DM1 de control. Como se ve en la Figura 25, Tio-BMPEO-DM1 (21 mg/kg) mostro ligeramente mejor respuesta que el del grupo de trastuzumab-SMCC-DM1, ya que algunos de los animales mostraron una respuesta completa con Tiomab-DM1 mientras que solo habla respuesta parcial con trastuzumab- SMCC-DM1.
ADMINISTRACION DE CONJUGADOS ANTICUERPO-FARMACO
Los conjugados de anticuerpo-farmaco (ADC) de la invencion pueden administrarse por cualquier via apropiada para la afeccion que va a tratarse. El ADC se administrara normalmente por via parenteral, es decir, infusion, subcutanea, intramuscular, intravenosa, intradermica, intratecal y epidural.
formulaciones farmaceuticas
Las formulaciones farmaceuticas de los conjugados anticuerpo-farmaco (ADC) terapeuticos de la invencion se preparar normalmente para administracion parenteral, es decir, bolo, inyeccion intravenosa, intratumoral, con un vehlculo parenteral farmaceuticamente aceptable y en unidad de administracion de forma inyectable. Un conjugado anticuerpo-farmaco (ADC) que tiene el grado de pureza deseado se mezcla opcionalmente con diluyentes, vehlculos, excipientes o estabilizantes farmaceuticamente aceptables (Remington's Pharmaceutical Sciences, 16a edicion, Osol, A. Ed. (1980), en forma de soluciones acuosas o liofilizadas u otras formulaciones acuosas.
Los diluyentes, vehlculos, excipientes o estabilizadores aceptables son no toxicos para los receptores a las dosificaciones y concentraciones empleadas e incluyen tampones tales como fosfato, citrato, histidina y otros acidos organicos; antioxidantes que incluyen acido ascorbico y metionina; conservantes (tales como cloruro de octadecildimetilbencilamonio; cloruro de hexametonio) ; cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; alcohol fenolico, butllico o bencllico; alquilparabenos tales como metil o propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3- pentanol; y m-cresol); polipeptidos de bajo peso molecular (inferior a aproximadamente 10 residuos); protelnas tales como albumina de suero, gelatina o inmunoglobulinas; pollmeros hidrofilos tales como polivinilpirrolidona; aminoacidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina; monosacaridos, disacaridos y otros hidratos de carbono que incluyen glucosa, manosa o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; azucares tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sal tales como sodio; complejos metalicos (por ejemplo, complejos de Zn-protelna) y/o tensioactivos no ionicos tales como TWEEN™, PLURONICS™ o polietilenglicol (PEG). Por ejemplo, formulaciones anti-ErbB2 liofilizadas se describen en el documento WO 97/04801.
Los principios activos tambien pueden estar atrapados en una microcapsula preparada, por ejemplo, por tecnicas de coacervacion o por polimerizacion interfacial, por ejemplo, microcapsula de hidroximetilcelulosa o de gelatina y microcapsula de poli-(metacilato de metilo), respectivamente, en sistemas de administracion de farmacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albumina, microemulsiones, nanopartlculas y nanocapsulas) o en
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macroemulsiones. Tales tecnicas se desvelan en Remington's Pharmaceutical Sciences, 16a edicion, Osol, A. Ed. (1980).
Pueden prepararse preparaciones de liberacion sostenida. Ejemplos adecuados de preparaciones de liberacion sostenida incluyen matrices semipermeables de pollmeros hidrofobos solidos que contienen el ADC, cuyas matrices que estan en forma de artlculos moldeados, por ejemplo, pellculas o microcapsula. Ejemplos de matrices de liberacion sostenida incluyen poliesteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(metacrilato de 2-hidroxietilo) o poli(alcohol vinllico)), polilactidas (patente US-3773919), copollmeros de acido L-glutamico y L-glutamato de gamma-etilo, etileno-acetato de vinilo no degradable, copollmeros de acido lactico-acido glicolico degradables tales como LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas por copollmero de acido lactico-acido glicolico y acetato de leuprolida) y acido poli-D-(-)-3-hidroxibutlrico.
Las formulaciones que van a usarse para la administracion in vivo son generalmente esteriles, las cuales se realizan facilmente por filtracion a traves de membranas de filtracion esteriles.
Las formulaciones incluyen aquellas adecuadas para las vlas de administracion anteriores. Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificacion unitaria y pueden prepararse por cualquiera de los metodos bien conocidos en la tecnica de la farmacia. Las tecnicas y formulaciones en general se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Tales metodos incluyen la etapa de poner en asociacion el principio activo al vehlculo que constituye uno o mas componentes accesorios. En general, las formulaciones se preparan poniendo uniforme e Intimamente en asociacion el principio activo a vehlculos llquidos o vehlculos solidos finamente divididos o ambos, y despues, si es necesario, dando forma al producto.
Las suspensiones acuosas de la invencion contienen los materiales activos en mezcla con excipientes adecuados para la fabrication de suspensiones acuosas. Tales excipientes incluyen un agente de suspension, tal como carboximetilcelulosa de sodio, croscarmelosa, povidona, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma de acacia y agentes dispersantes o humectantes tales como un fosfatido de origen natural (por ejemplo, lecitina), un producto de condensation de un oxido de alquileno con un acido graso (por ejemplo, estearato de polioxietileno), un producto de condensacion de oxido de etileno con un alcohol alifatico de cadena larga (por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol), un producto de condensacion de oxido de etileno con un ester parcial derivado de un acido graso y un anhldrido de hexitol (por ejemplo, monooleato de polioxietilensorbitan). La suspension acuosa tambien puede contener uno o mas conservantes tales como p-hidroxi- benzoato de etilo o n-propilo, uno o mas agentes colorantes, uno o mas agentes aromatizantes y uno o mas agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina.
Las composiciones farmaceuticas de ADC pueden estar en la forma de una preparation inyectable esteril, tal como una suspension acuosa u oleaginosa inyectable esteril. Esta suspension se puede formular segun la tecnica conocida usando agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspension que se han mencionado anteriormente. La preparacion inyectable esteril puede ser tambien una solution o suspension inyectable esteril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no toxico, tal como una solucion en 1,3-butano-diol o puede prepararse como un polvo liofilizado. Entre los vehlculos y disolventes aceptables que pueden emplearse estan agua, solucion de Ringer y solucion isotonica de cloruro sodico. Ademas, los aceites fijos, esteriles, convencionalmente se pueden emplear como medio disolvente o de suspension. Para este proposito se puede emplear cualquier aceite fijo blando incluyendo mono- o digliceridos sinteticos. Ademas, en la preparacion de inyectables se pueden usar tambien acidos grasos tales como acido oleico.
La cantidad de principio activo que se puede combinar con el material vehlculo para producir una forma de dosificacion unica variara dependiendo del hospedador tratado y del modo particular de administracion. Por ejemplo, una solucion acuosa destinada a la infusion intravenosa puede contener de aproximadamente 3 a 500 pg de principio activo por mililitro de solucion con el fin de que se pueda realizar la infusion de un volumen adecuado a una velocidad de aproximadamente 30 ml/h.
Las formulaciones adecuadas para administracion parenteral incluyen soluciones de inyeccion esteriles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostaticos y solutos que hacen la formulation isotonica con la sangre del receptor previsto y suspensiones esteriles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspension y agentes espesantes.
Aunque la administracion oral de protelnas terapeuticas esta desfavorecida debido a la hidrolisis o la desnaturalizacion en el intestino, las formulaciones de ADC adecuadas para la administracion oral se pueden preparar como unidades discretas tales como capsulas, sellos o comprimidos conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del ADC.
Las formulaciones se pueden envasar en envases de dosis unitaria o multidosis, por ejemplo ampollas selladas y viales, y pueden almacenarse en un estado secado por congelation (liofilizado) que requiere solo la adicion del vehlculo llquido esteril, por ejemplo, agua para inyeccion inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones para inyeccion extemporanea se preparan a partir de polvos esteriles, granulos y comprimidos del tipo
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descrito previamente. Las formulaciones de dosificacion unitaria preferidas son aquellas que contienen una dosis diaria o unidad de subdosis diaria, como se ha indicado anteriormente, o una fraccion apropiada de la misma, del principio activo.
La invencion proporciona ademas composiciones veterinarias que comprenden al menos un principio activo como se ha definido anteriormente junto con un vehlculo veterinario para el mismo. Los vehlculos veterinarios son materiales utiles para el proposito de administrar la composicion y pueden ser materiales solidos, llquidos o gaseosos que son de otro modo inertes o aceptables en la tecnica veterinaria y son compatibles con el principio activo. Estas composiciones veterinarias se pueden administrar por via parenteral, por via oral o por cualquier otra via deseada.
TRATAMIENTOS CONJUGADO ANTICUERPO-FARMACO
Se contempla que los conjugados de anticuerpo-farmaco (ADC) de la presente invencion puedan usarse para tratar diversas enfermedades o trastornos, por ejemplo, caracterizados por la expresion en exceso de un antlgeno de tumor. Ejemplos de afecciones o trastornos hiperproliferativos incluyen tumores benignos o malignos; leucemia y tumores malignos linfoides. Otros incluyen trastornos neuronales, de la glia, astroclticos, hipotalamicos, glandulares, macrofagicos, epiteliales, del estroma, blastocelicos; inflamatorios, angiogenicos e inmunologicos, que incluyen autoinmunitarios. Todavla otros incluyen canceres de prostata, pulmon y colon.
Los compuestos de ADC que se identifican en los modelos animales y ensayos basados en celulas pueden probarse adicionalmente en primates superiores que tienen un tumor y ensayos cllnicos humanos. Los ensayos cllnicos humanos pueden disenarse para probar la eficacia del anticuerpo monoclonal anti-HER2 HERCEPTIN® en pacientes con canceres de mama metastasico que sobreexpresan HER2 que han recibido terapia anticancerosa anterior extensa como se describe por Baselga et al. (1996) J. Clin. Oncol. 14:737-744. El ensayo cllnico puede disenarse para evaluar la eficacia de un AND en las combinaciones con reglmenes terapeuticos conocidos, tal como radioterapia y/o quimioterapia que implican agentes quimioterapeuticos y/o citotoxicos.
En general, la enfermedad o trastorno a tratar es una enfermedad proliferativa, tal como el cancer. Ejemplos de cancer a tratar incluyen, pero no se limitan a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia o tumores malignos linfoides. Mas ejemplos particulares de tales canceres incluyen cancer de celulas escamosas (por ejemplo, cancer de celulas escamosas epiteliales) , cancer de pulmon que incluye cancer de pulmon microcltico, cancer de pulmon no microcltico, adenocarcinoma de pulmon y carcinoma escamoso de pulmon, cancer de peritoneo, cancer hepatocelular, cancer gastrico o de estomago que incluye cancer gastrointestinal, cancer pancreatico, glioblastoma, cancer de cuello uterino, cancer de ovario, cancer de hlgado, cancer de vejiga, cancer de las vlas urinarias, hepatoma, cancer de mama, cancer de colon, cancer rectal, cancer colorrectal, carcinoma de endometrio o uterino, carcinoma de las glandulas salivales, cancer de rinon o renal, cancer de prostata, cancer de vulva, cancer de tiroides, carcinoma hepatico, carcinoma anal, carcinoma de pene, ademas de cabeza y cuello.
El cancer puede comprender celulas que expresan HER-2, de forma que el ADC de la presente invencion puede unirse a las celulas cancerosas. Para determinar la expresion de ErbB2 en el cancer estan disponibles diversos ensayos de diagnostico/pronostico. En una realizacion, la sobreexpresion de ErbB2 puede analizarse por IHC, por ejemplo, usando el HERcEPTEST (Dako). Los cortes de tejido incluidos en parafina de una biopsia de tumor pueden someterse al ensayo de IHC y examinarse los criterios de la intensidad de tincion de la protelna ErbB2 como sigue: Puntuacion 0, no se observa tincion o la tincion de la membrana se observa en menos de 10 % de las celulas tumorales; Puntuacion 1+, se detecta una tincion de membrana debil/apenas perceptible en mas del 10 % de las celulas tumorales, las celulas solo se tinen en parte de su membrana; Puntuacion 2+, se observa una tincion debil a moderada completa de la membrana en mas del 10 % de las celulas tumorales; Puntuacion 3+, se observa un tincion moderada a fuerte de la membrana completa en mas del 10 % de las celulas tumorales. Esos tumores con puntuaciones 0 o 1+ para la evaluacion de la sobreexpresion de ErbB2 pueden caracterizarse como que no sobreexpresan ErbB2, mientras que aquellos tumores con puntuaciones de 2+ o 3+ pueden caracterizarse como que sobreexpresan ErbB2.
Como alternativa, o adicionalmente, pueden llevarse a cabo ensayos FISH tales como INFORM™ (Ventana Co, Ariz.) o PATHVISION™ (Vysis, Ill.) en el tejido tumoral incluido en parafina y fijado en formalina para determinar el grado (dado el caso) de sobreexpresion de ErbB2 en el tumor.
Las enfermedades autoinmunitarias para las que pueden ser utilizados los compuestos de ADC en el tratamiento incluyen trastornos reumatologicos (tales como, por ejemplo, artritis reumatoide, slndrome de Sjogren, esclerodermia, lupus tal como LES y nefritis lupica, polimiositis/ dermatomiositis, crioglobulinemia, slndrome de anticuerpos anti-fosfollpido, y artritis psoriasica), artrosis, trastornos gastrointestinales y hepaticos autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, enfermedades inflamatorias del intestino (por ejemplo, colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn), gastritis autoinmunitaria y anemia perniciosa, hepatitis autoinmunitaria, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria y enfermedad cellaca), vasculitis (tales como, por ejemplo, vasculitis asociada a ANCA, incluyendo vasculitis de Churg-Strauss, granulomatosis de Wegener y poliarteriitis), trastornos neurologicos autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, esclerosis multiple, opsoclonus mioclono, miastenia grave, neuromielitis optica, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y polineuropatlas autoinmunitarias), trastornos renales
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(como, por ejemplo, glomerulonefritis, slndrome de Goodpasture y la enfermedad de Berger), trastornos dermatologicos autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, psoriasis, urticaria, habones, penfigo vulgaris, penfigoide bulloso y lupus eritematoso cutaneo), alteraciones hematologicas (tales como, por ejemplo, purpura trombocitopenica, purpura trombocitopenica trombotica, purpura postransfusional y anemia hemolltica autoinmunitaria), aterosclerosis, uveitis, enfermedades de la audicion autoinmunitarias (tales como, por ejemplo, enfermedad del oldo interno y perdida de audicion), enfermedad de Behcet, slndrome de Raynaud, trasplante de organos, y trastornos endocrinos autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, enfermedades autoinmunitarias relacionadas con la diabetes tales como la diabetes mellitus insulino dependiente (DMID), enfermedad de Addison, y enfermedad tiroidea autoinmunitaria (por ejemplo, enfermedad de Graves y tiroiditis)). De estas enfermedades, las mas preferidas incluyen, por ejemplo, la artritis reumatoide, colitis ulcerosa, vasculitis asociada a ANCA, lupus, esclerosis multiple, slndrome de Sjogren, enfermedad de Graves, DMID, anemia perniciosa, tiroiditis, y glomerulonefritis.
Para la prevention o el tratamiento de enfermedad, la dosificacion apropiada de un ADC dependera del tipo de enfermedad que vaya a tratarse, como se define anteriormente, la gravedad y la evolution de la enfermedad, si la molecula se administra para fines preventivos o terapeuticos, terapia previa, la historia clinica del paciente y la respuesta al anticuerpo, y el criterio del medico. La molecula se administra adecuadamente al paciente de una vez o durante una serie de tratamientos. Dependiendo del tipo y la gravedad de la enfermedad, aproximadamente 1 pg/kg a 15 mg/kg (por ejemplo 0, 1-20 mg/kg) de molecula es un dosificacion candidata inicial para administration al paciente, tanto si es, por ejemplo, por una o por mas administraciones separadas como por infusion continua. Una dosificacion diaria tipica podria oscilar de aproximadamente 1 pg/kg a 100 mg/kg o mas, dependiendo de los factores mencionados anteriormente. Un ejemplo de dosificacion de ADC que va a administrarse a un paciente esta en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/kg de peso del paciente.
Para administraciones repetidas durante varios dias o mas, dependiendo de la afeccion, el tratamiento es sostenido hasta que se produce una supresion deseada de los sintomas de la enfermedad. Un ejemplo de pauta de dosificacion comprende administrar una dosis de carga inicial de aproximadamente 4 mg/kg, seguido de una dosis de mantenimiento semanal de aproximadamente 2 mg/kg de un anticuerpo anti-ErbB2. Pueden ser utiles otras pautas posologicas. El progreso de esta terapia se monitoriza facilmente por tecnicas y ensayos convencionales.
TERAPIA DE COMBINACION
Un conjugado de anticuerpo-farmaco (ADC) de la invention puede combinarse en una formulation de combination farmaceutica, o pauta de dosificacion, como terapia de combinacion, con al menos un segundo compuesto que tiene propiedades anticancerigenas. El al menos segundo compuesto de la formulacion de combinacion farmaceutica o pauta de dosificacion tiene preferentemente actividades complementarias a las del ADC de la combinacion de forma que no se afectan adversamente entre si.
El segundo compuesto puede ser un agente quimioterapeutico, agente citotoxico, citocina, agente inhibidor del crecimiento, agente antihormonal y/o cardioprotector. Tales moleculas estan adecuadamente presentes en combinacion en cantidades que son eficaces para el fin previsto. Una composition farmaceutica que contiene un ADC de la invencion tambien puede tener una cantidad terapeuticamente eficaz de un agente quimioterapeutico tal como un inhibidor de la formation de tubulina, un inhibidor de la topoisomerasa o un aglutinante de ADN.
Pueden combinarse otras pautas terapeuticas con la administracion de un agente anticancerigeno identificado segun la presente invencion. La terapia de combinacion puede administrarse como una pauta simultanea o secuencial. Si se administra secuencialmente, la combinacion puede administrarse en dos o mas administraciones. La administracion combinada incluye coadministracion, usando formulaciones separadas o una unica formulacion farmaceutica y administracion consecutiva en cualquier orden, en el que preferentemente hay un periodo de tiempo mientras que ambos (o todos) los agentes activos ejercen simultaneamente sus actividades biologicas.
En una realization, el tratamiento con un ADC implica la administracion combinada de un agente anticancerigeno identificado en la presente memoria y uno o mas agentes quimioterapeuticos o agentes inhibidores del crecimiento, que incluyen coadministracion de mezclas de diferentes agentes quimioterapeuticos. Agentes quimioterapeuticos incluyen taxanos (tales como paclitaxel y docetaxel) y/o antibioticos de antraciclina. La preparation y los programas de dosificacion para tales agentes quimioterapeuticos pueden usarse segun instrucciones del fabricante o como se determina empiricamente por el medico experto. La preparacion y las pautas posologicas para tal quimioterapia tambien se describen en "Chemotherapy Service", (1992) Ed., M.C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, Md.
El ADC se puede combinar con un compuesto anti-hormonal; por ejemplo, un compuesto anti-estrogeno como el tamoxifeno; una anti-progesterona, tal como onapristona (documento EP 616812) o un anti-androgeno, tal como flutamida, en dosis conocidas para tales moleculas. Cuando el cancer a tratar es un cancer independiente de hormonas, el paciente puede haber sido previamente sometido a terapia anti-hormonal y, despues de que el cancer se convierte en hormono independiente, el ADC (y opcionalmente otros agentes como se describe en la presente memoria) se pueden administrar al paciente. Puede ser beneficioso coadministrar tambien un cardioprotector (para prevenir o reducir la disfuncion miocardica asociada a la terapia) o una o mas citocinas al paciente. Ademas de los
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reglmenes terapeuticos anteriores, el paciente puede someterse a extirpacion quirurgica de las celulas cancerosas y/o radioterapia.
Dosificaciones adecuadas para cualquiera de los agentes anteriormente coadministrados son aquellas usadas en la presente y pueden reducirse debido a la accion combinada (sinergia) del agente recientemente identificado y otros agentes o tratamientos quimioterapeuticos.
La terapia de combinacion puede proporcionar "sinergia" y demuestra ser "sinergica", es decir, el efecto conseguido cuando los principios activos se usan juntos es mayor que la suma de los efectos que resultan del uso de los compuestos por separado. Puede obtenerse un efecto sinergico cuando los principios activos: (1) se coformulan y se administran simultaneamente en una formulacion de dosificacion unitaria combinada; (2) se administran por alternancia o en paralelo como formulaciones separadas; o (3) por alguna otra pauta. Si se administra en terapia de alternancia, un efecto sinergico puede obtenerse cuando los compuestos se administran secuencialmente, por ejemplo, por diferentes inyecciones en jeringuillas separadas. En general, durante la terapia de alternancia, una dosificacion eficaz de cada principio activo se administra secuencialmente, es decir, seriadamente, mientras que en terapia de combinacion, las dosificaciones eficaces de dos o mas principios activos se administran juntas.
METABOLITOS DE LOS CONJUGADOS ANTICUERPO-FARMACO
Dentro del alcance de esta invencion tambien se encuentran los productos metabolicos in vivo de los compuestos de ADC descritos en la presente memoria, hasta el punto de que tales productos son novedosos y no obvios con respecto a la tecnica anterior. Tales productos pueden resultar, por ejemplo, de la oxidacion, reduccion, hidrolisis, amidacion, esterificacion o escision enzimatica del compuesto administrado. Por consiguiente, la invencion incluye compuestos novedosos y no obvios producidos mediante un proceso que comprende poner en contacto un compuesto de la presente invencion con un mamlfero durante un periodo de tiempo suficiente para dar un producto metabolico del mismo.
Los productos de metabolitos normalmente se identifican preparando un ADC radiomarcado (por ejemplo, 14C o 3H), administrandolo parenteralmente en una dosis detectable (por ejemplo, superior a aproximadamente 0,5 mg/kg) a un animal tal como rata, raton, cobaya, mono, o al hombre, dejando tiempo suficiente para que se produzca el metabolismo (normalmente aproximadamente 30 segundos a 30 horas) y aislando sus productos de conversion de la orina, sangre u otras muestras biologicas. Estos productos se alslan facilmente ya que estan marcados (otros se alslan por el uso de anticuerpos que pueden unirse a epitopes que sobreviven en el metabolito). Las estructuras de metabolito se determinan de forma convencional, por ejemplo, por analisis de EM, EM/CL o RMN. En general, el analisis de metabolitos se hace de la misma forma que los estudios de metabolismo de farmacos convencionales muy conocidos para aquellos expertos en la materia. Los productos de conversion, mientras que no se encuentren de otro modo in vivo, son utiles en ensayos de diagnostico para la dosificacion terapeutica de los compuestos de ADC de la invencion.
METODOS DE OBTENCION DE IMAGENES DE ANTICUERPOS MARCADOS
En otra realization de la invencion, los anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna pueden marcarse mediante el tiol de la cistelna con radionuclidos, colorantes fluorescentes, restos de sustratos desencadenantes de bioluminiscencia, restos de sustratos desencadenantes de quimioluminiscencia, enzimas y otros marcadores de detection para experimentos de obtencion de imagenes con aplicaciones de diagnostico, farmacodinamicas y terapeuticas. Generalmente, el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cisteina marcado, es decir, "biomarcador" o "sonda", se administra mediante inyeccion, perfusion o ingestion oral a un organismo vivo, por ejemplo, ser humano, roedor u otro animal pequeno, un organo perfundido o muestra de tejido. La distribution de la sonda se detecta durante un transcurso de tiempo y se representa por una imagen.
articulos manufacturados
En otra realizacion se proporciona un articulo manufacturado o "kit", que contiene materiales utiles para el tratamiento de los trastornos descritos anteriormente. El articulo manufacturado comprende un envase y una etiqueta o prospecto sobre o asociado al recipiente. Envases adecuados incluyen, por ejemplo, frascos, viales, jeringuillas, envase blister, etc. Los envases pueden formarse a partir de varios materiales tales como vidrio o plastico. El envase contiene una composition de conjugado de anticuerpo-farmaco (ADC) que es eficaz para tratar la afeccion y puede tener un puerto de acceso esteril (por ejemplo, el envase puede ser una bolsa de solution intravenosa o un vial que tiene un tapon perforable por una aguja de inyeccion hipodermica). Al menos un agente activo en la composicion es un ADC. La etiqueta o prospecto indica que la composicion se usa para tratar la afeccion de election, tal como cancer. Como alternativa o adicionalmente, el articulo manufacturado puede comprender adicionalmente un segundo (o tercer) envase que comprende un tampon farmaceuticamente aceptable tal como agua bacteriostatica para inyeccion (BWFI) , solucion salina tamponada con fosfato, solucion de Ringer y solucion de dextrosa. Adicionalmente puede incluir otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario que incluyen otros tampones, diluyentes, filtros, agujas y jeringuillas.
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Ejemplo 1 - Preparacion de TioFab fago biotinilado
Se hizo reaccionar TioFab-fago (5 x 1012 particulas de fago) con 150 veces en exceso de biotina-PEO-maleimida ((+)-biotinil-3-maleimidopropionamidil-3,6-dioxaoctainediamina, Oda et al (2001) Nature Biotechnology 19: 379-382, Pierce Biotechnology, Inc.) durante 3 horas a temperatura ambiente. El exceso de biotina-PEO-maleimida fue retirado del fago conjugado con biotina mediante precipitaciones de PEG repetidas (3-4 veces). Se pueden usar otros reactivos de biotinilacion comercialmente disponibles con grupos electrofilos que son reactivos con los grupos tiol de la cisteina, incluyendo biotina-BMCC, PEO-yodoacetil biotina, yodoacetil-LC-biotina y biotina-HPDP (Pierce Biotechnology, Inc.), y W“-(3-malcimidilpropionil)biocitina (MPB, Molecular Probes, Eugene, OR). Otras fuentes comerciales para la biotinilacion, reactivos enlazadores bifuncionales y multifuncionales incluyen Molecular Probes, Eugene, OR y Sigma, St. Louis, MO.
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Ejemplo 2 - Ensayo PHESELECTOR
La albumina de suero bovino (BSA), el dominio extracelular de ErbB2 (HER2) y estreptavidina (100 ql de 2 qg/ml) se recubrieron por separado en placas de 96 pocillos Maxisorp. Despues de bloquear con Tween-20 0,5 % (en PBS), se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente hu4D5Fabv8-TioFab-Fago (2x1010 particulas de fago) biotinilado y no biotinilado seguido de incubacion con anticuerpo secundario marcado con peroxidasa de rabano (HRP) (proteina de la cubierta del fago anti-M13, anticuerpo anti-proteina pVIII). La Figura 8 ilustra el Ensayo PHESELECTOR mediante una representacion esquematica que representa la union de Fab o TioFab a HER2 (arriba) y TioFab biotinilado a estreptavidina (abajo).
Se llevo a cabo la reaccion con HRP estandar y la absorbancia se midio a 450 nm. La reactividad del tiol se midio mediante el calculo de la relacion entre la DO450 para estreptavidina/DO450 para HER2. Un valor de la reactividad del tiol de 1 indica biotinilacion completa del tiol de la cisteina. En el caso de las mediciones de union a proteinas Fab, se utilizo hu4D5Fabv8 (2-20 ng) seguido por incubacion con anticuerpos anti-Fab policlonales de cabra marcados con HRP.
Ejemplo 3a - Expresion y purification de TioFabs
Los TioFabs se expresaron despues de la induction de 34B8, una cepa de E. coli no supresora (Baca et al (1997) Journal of Biological Chemistry 272 (16):10678-84). El sedimento celular cosechado se resuspendio en PBS (solution salina tamponada con fosfato), la lisis total de celulas se llevo a cabo mediante el paso a traves de un microfluidizador y los TioFabs se purificaron por cromatografia de afinidad con proteina G SEPHAROSE™ (Amersham).
Los TioFabs L-V15C, L-V110C, H-A88C, y H-A121C se expresaron y se purificaron por cromatografia en columna de Proteina G-SEPHAROSE™. El Fab oligomerico estaba presente en las fracciones 26 a 30 y la mayoria de la forma monomerica estaba en las fracciones 31-34. Las fracciones que consisten en la forma monomerica se agruparon y se analizaron por SDS-PAGE junto con hu4D5Fabv8and de tipo silvestres y se analizaron en gel de SDS-PAGE en condiciones reductoras (con DTT o BME) y no reductoras (sin TDT o BME). Las fracciones de filtracion en gel de A121C-TioFab se analizaron en SDS-PAGE no reductora.
Los TioFabs se conjugaron con biotina-PEO-maleimida como se ha descrito anteriormente y los TioFab biotinilados se purificaron adicionalmente por cromatografia de filtracion en gel Superdex-200™ (Amersham), que elimino la biotina-PEO-maleimida libre y la fraction oligomerica de TioFabs. Se incubaron por separado hu4D5Fabv8 de tipo silvestre y hu4D5Fabv8 A121C-TioFab (en cantidad de 0,5 mg) y se incubaron por separado con un exceso de 100 veces molar de biotina-PEO-maleimida durante 3 horas a temperatura ambiente y se cargaron en una columna de filtracion en gel Superdex-200 para separar la biotina libre asi como los Fab oligomericos de la forma monomerica.
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Los fragmentos de la digestion enzimatica de TioFab hu4D5Fabv8 (A121C) biotinilado y hu4D5Fabv8 de tipo silvestre se analizaron mediante cromatografla llquida-espectrometrla de masas de ionizacion por electronebulizacion (LS-ESI-MS). La diferencia entre el la masa primaria 482.945 de hu4D5Fabv8 biotinilado (A121C) y la masa primaria 47.737,0 de hu4D5Fabv8 de tipo silvestre era 557,5 unidades de masa. Este fragmento indica la presencia de un unico resto de biotina-PEO-maleimida (C23H36N5O7S2). La Tabla 4 muestra la asignacion de los valores de fragmentacion que confirma la secuencia.
Tabla 4. Analisis LC-ESI-Espectrometrla de masas de TioFab hu4D5Fabv8 A121C biotinilado despues de la digestion con tripsina____________________________________________________________
Aminoacido
Fragmento b Fragmento y
A (alanina)
72
M (metionina)
203 2505
D (acido aspartico)
318 2374
Y (tirosina)
481 2259
W (triptofano)
667 2096
G (glicina)
724 1910
Q (glutamina)
852 1853
G (glicina)
909 1725
T (treonina)
1010 1668
L (leucina)
1123 1567
V (valina)
1222 1454
T (treonina)
1323 1355
V (valina)
1422 1254
S (serina)
1509 1155
S (serina)
1596 1068
C (cistelna) + biotina
2242 981
S (serina)
2329 335
T (treonina)
2430 248
K (lisina)
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Antes y despues de filtracion en gel Superdex-200, se llevaron a cabo analisis de gel SDS-PAGE, con y sin reduccion por TDT o BME, de ABP- hu4D5Fabv8-A121C, ABP-hu4D5Fabv8-V110C biotinilado, ABP-hu4D5Fabv8- (V110C-A88C) doble cis biotilinado y ABP-hu4D5Fabv8- (V110C-A121C) doble cis biotilinado.
El analisis de espectroscopla de masas (MS/MS) de hu4D5Fabv8- (V110C)-BMPEO-DM1 (despues de la purificacion por filtracion en gel Superdex-200): Fab+1 516 075, Fab 50515.5. Estos datos muestran 91,2 % de conjugacion. Analisis de MS/MS de hu4D5Fabv8-(V110C)-BMPEO-DM1 (reducido): LC 23447,2, 24537,3 LC+1, HC (Fab) 27072,5. Estos datos muestran que todos los DM1 esta en la cadena ligera del Fab.
Ejemplo 4 - Preparacion de ABP-hu4D5Fabv8-(V110C)-MC-MMAE mediante la conjugacion de ABP-hu4D5Fabv8- (V110C) y MC-MMAE
El reactivo enlazador del farmaco, maleimidocaproil-monometil auristatina E (MMAE), es decir MC-MMAE, disuelto en DMSO, se diluye en acetonitrilo y agua a una concentracion conocida y se anade a TioFab ABP-hu4D5Fabv8- (V110C) refrigerado en solucion salina tamponada con fosfato (PBS). Despues de aproximadamente una hora, se anade un exceso de maleimida para detener la reaccion e inactivar cualquier grupo tiol del anticuerpo sin reaccionar. La mezcla de reaccion se concentra por ultrafiltracion centrlfuga y ABP-hu4D5Fabv8-(V110C)-MC-MMAE se purifica y desala mediante elucion a traves de resina G25 en PBS, se filtra a traves de filtros de 0,2 pm en condiciones esteriles y se congela para su almacenamiento.
Ejemplo 5 - Preparacion de ABP-hu4D5Fabv8-(V110C)-MC-MMAF por conjugacion de ABP-hu4D5Fabv8-(V110C) y MC-MMAF
ABP-hu4D5Fabv8-(V110C)-MC-MMAF se prepara por conjugacion de Tio Fab ABP-hu4D5Fabv8-(V110C) y MC- MMAF siguiendo el procedimiento del Ejemplo 4.
Ejemplo 6 - Preparacion de ABP-A121C-TioFab-MC-val-cit-PAB-MMAE mediante la conjugacion de ABP-A121C- TioFab y MC-val-cit-PAB-MMAE
ABP-hu4D5Fabv8-(A121C)-MC-val-cit-PAB-MMAE se prepara mediante la conjugacion de ABP-hu4D5Fabv8- (A121C) y MC-val-cit-PAB-MMAE siguiendo el procedimiento del Ejemplo 4.
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Ejemplo 7 - Preparacion de ABP-A121C-TioFab-MC-val-cit-PAB-MMAF por coniuaacion de ABP-A121C-TioFab y MC-val-cit-PAB-MMAF
ABP-hu4D5Fabv8-(A121C)-MC-val-cit-PAB-MMAF se prepara mediante la conjugacion de ABP-hu4D5Fabv8- (A121C) y MC-val-cit-PAB-MMAF siguiendo el procedimiento del Ejemplo 4.
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Eiemplo 8 - Preparacion de TioFab hu4D5Fabv8-(V110C)-BMPEO-DM1
La cistelna libre del TioFab hu4D5Fabv8-(V110C) se modifico mediante el reactivo bis-maleimido BM(PEO)4 (Pierce Chemical), dejando un grupo maleimido sin reaccionar en la superficie del anticuerpo. Esto se logro mediante la disolucion de Bm(PEO)4 en una mezcla de etanol 50 %/agua a una concentracion de 10 mM y anadiendo un exceso molar de diez veces de BM(PEO)4 a una solucion que contiene hu4D5Fabv8-(V110C) TioFab en solucion salina tamponada con fosfato a una concentracion de aproximadamente 1,6 mg/ml (10 micromolar) y permitiendo que reaccione durante 1 hora. El exceso de BM(PEO)4 se elimino por filtracion en gel (columna HiTrap, Pharmacia) en citrato 30 mM, pH 6 con tampon de NaCl 150 mM. Se anadio un exceso molar de aproximadamente 10 veces de DM1 disuelto en dimetilacetamida (DMA) al intermedio hu4D5Fabv8- (V110C) TioFab-BMPEO. Tambien se puede emplear dimetilformamida (DMF) se puede emplear tambien para disolver el reactivo resto de farmaco. La mezcla de reaccion se dejo reaccionar durante la noche antes de la filtracion en gel o dialisis en PBS para eliminar el farmaco no reaccionado. La filtracion en gel en columnas S200 en PBS se utilizo para eliminar los agregados de alto peso molecular y proporcionar hu4D5Fabv8-(V110C) TioFab-BMPEO-DM1 purificado.
Siguiendo el mismo protocolo, se preparo hu4D5Fabv8 (A121C) TioFab-BMPEO-DM1.
Eiemplo 9 - Ensayo de proliferacion celular in vitro
La eficacia de los ADC se midio mediante un ensayo de proliferacion celular que emplea el protocolo siguiente (Ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter Glo, Promega Corp. Boletln Tecnico TB288; Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62: 5485-5488):
1. Una allcuota de 100 ql de cultivo celular que contiene aproximadamente 104 celulas (SKBR-3, BT474, MCF7 o MDA-MB-468) en medio se deposito en cada pocillo de una placa de paredes opacas de 96 pocillos.
2. Se prepararon pocillos de control que contienen el medio y sin celulas.
3. Se anadio ADC a los pocillos experimentales y se incubo durante 3-5 dlas.
4. Las placas se equilibraron a temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos.
5. Se anadio un volumen de reactivo CellTiter-Glo igual al volumen del medio de cultivo celular presente en cada pocillo.
6. El contenido se mezclo durante 2 minutos en un agitador orbital para inducir la lisis celular.
7. La placa se incubo a temperatura ambiente durante 10 minutos para estabilizar la senal de luminiscencia.
8. La luminiscencia se registro y se registro en los graficos como RLU = unidades relativas de luminiscencia.
Determinadas celulas se siembran a razon de 1.000-2.000/pocillo (llneas PC3) o 2.000-3.000/pocillo (OVCAR-3) en una placa de 96 pocillos, 50 ql/ pocillo. Despues de uno (PC3) o dos (OVCAR-3) dlas, se anaden ADC en volumenes de 50 ql hasta una concentracion final de 9.000, 3.000, 1.000, 333, 111, 37, 12,4, 4,1 o 1,4 ng/ml, donde los pocillos de control "sin ADC" solo recibieron medio. Las condiciones son por duplicado o triplicado. Despues de 3 (PC3) o 4-5 (OVCAR-3) dlas, se anaden 100 ql/pocillo de Cell TiterGlo II (ensayo basado en luciferasa; proliferacion medida por los niveles de ATP) y los recuentos celulares se determinan usando un luminometro. Los datos se representan como la media de la luminiscencia para cada conjunto de replicados, con barras del error de la desviacion estandar. El protocolo es una modificacion del Ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter Glo (Promega):
1. Sembrar 1.000 celulas/pocillo de PC3/MUC16, PC3/neo (en 50 ql/pocillo) de medios. Las celulas OVCAR3 deben colocarse en placas a razon de 2.000 celulas/pocillo (en 50 ql) de sus medios de comunicacion (recetas a continuacion). Permitir que las celulas se unan durante la noche.
2. El ADC se diluyo en serie 1:3 en los medios comenzando con una concentracion de trabajo de 18 qg/ml (esto
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da como resultado una concentration final de 9 |jg/ml). Se anaden 50 |jl de ADC diluido a los 50 |jl de celulas y los medios ya existentes en el pocillo.
3. Incubar 72-96 horas (el patron es de 72 horas, pero observar la concentracion de 0 jig/ml para detener el ensayo cuando las celulas muestran una confluencia del 85 al 95 %).
4. Anadir 100 pl/pocillo de reactivo Promega Cell Titer Glo, agitar 3 min. y leer en los medios del luminometro: PC3/neo y PC3/MUC16 cultivadas en 50/50/FBS 10 %/glutamina/250 pg/ml de G-3-4180VCAR cultivada en RFMI/FBS 20 %/glutamina.
Ejemplo 10 - Inhibition del crecimiento tumoral, eficacia in vivo en explantes de ratones transgenicos con niveles altos de expresion de HER2
Los animales adecuados para experimentos transgenicos se pueden obtener de fuentes comerciales estandar tales como Taconic (Germantown, N.Y.). Muchas razas son adecuadas, pero se prefieren los ratones hembra FVB debido a su mayor susceptibilidad a la formation de tumores. Se usaron machos FVB para el apareamiento y se utilizaron sementales CD.1 vasectomizados para estimular la seudogestacion. Los ratones vasectomizados se pueden obtener de cualquier proveedor comercial. Los fundadores fueron cruzados con ratones FVB o con ratones heterocigotos129/BL6 x FVB p53. Los ratones con la heterocigosidad en alelo p53 se utilizaron para aumentar potencialmente la formacion de tumores. Sin embargo, esto ha demostrado ser innecesario. Por lo tanto, algunos tumores F1 son de raza mixta. Los tumores fundadores son FVB solamente. Se obtuvieron seis fundadores con algunos tumores en desarrollo sin tener camadas.
Los animales que tienen tumores (aloinjerto propagado de ratones transgenicos Fo5 mmtv) fueron tratados con una dosis unica o multiple por inyeccion IV de ADC. El volumen del tumor se evaluo en diversos puntos temporales despues de la inyeccion.
Los tumores surgen facilmente en ratones transgenicos que expresan una forma mutacionalmente activada de neu, el homologo en rata de HER2, pero HER2 que se sobreexpresa en los canceres de mama humanos no esta mutada y la formacion de tumores es mucho menos robusta en los ratones transgenicos que en la HER2 no mutado sobreexpresada (Webster et al (1994) Semin. Cancer Biol 5: 69-76).
Para aumentar la formacion de tumores con HER2 no mutada, los ratones transgenicos se produjeron usando un plasmido de ADNc de HER2 en el que se elimino un ATG en direction 3' con el fin de evitar la initiation de la traduction en dichos codones ATG en direccion 3', lo que de otro modo reducirla la frecuencia de iniciacion de la traduction del autentico codon de iniciacion en direccion 5' de HER2 (por ejemplo, vease Child et al (1999) J. Biol. Chem. 274:24335-24341). Ademas, se anadio un intron quimerico al extremo 5', que tambien deberla aumentar el nivel de expresion como se ha descrito anteriormente (Neuberger y Williams (1988) Nucleic Acids Res. 16: 6713; Buchman y Berg (1988) Mol. Cell. Biol. 8: 4395; Brinster et al (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 85: 836). El intron quimerico se derivo de un vector Promega, vector de expresion de mamlfero Pci-neo (pb 890-1022). El extremo 3 ' del ADNc esta flanqueado por los exones 4 y 5 de la hormona del crecimiento humana y secuencias de poliadenilacion. Ademas, se utilizaron ratones FVB porque esta raza es mas susceptible al desarrollo de tumores. Se utilizo el promotor de MMTV-LTR para asegurar la expresion de HER2 especlfica de tejido en la glandula mamaria. Los animales fueron alimentados con la dieta AIN 76A con el fin de aumentar la susceptibilidad a la formacion de tumores (Rao et al (1997) Breast Cancer Res. and Treatment 45:149-158).
Ejemplo 11 - Reduccion/oxidacion de TioMabs para la conjugation
Los anticuerpos monoclonales modificados por ingenierla genetica con cistelna de longitud completa (TioMab) expresados en celulas CHO se redujeron con aproximadamente un exceso de 50 veces de TCEP (clorhidrato de tris(2-carboxietil) fosfina; Getz et al (1999) Anal. Biochem Vol 273: 73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA) durante 3 horas a 37 °C. El TioMab reducido (Figura 15) se diluyo y se cargo en una columna HiTrap S en acetato de sodio 10 mM, pH 5 y se eluyo con PBS que contenla cloruro de sodio 0,3 M. El TioMab eluido reducido se trato con sulfato de cobre acuoso (CuSO4) 200 nM a temperatura ambiente, durante la noche. La oxidation del aire ambiental tambien fue eficaz.
Ejemplo 12 - Conjugacion de TioMabs
Los TioMabs reoxidados del Ejemplo 11, incluyendo tio-trastuzumab (A121C), tio-2H9 (A121C) y tio-3A5 (A121C), se combinaron con un exceso de 10 veces de intermedio de farmaco-enlazador, BM(PEO)4-DM1, se mezclo y se dejo reposar durante aproximadamente una hora a temperatura ambiente para efectuar la conjugacion y formar los conjugados anticuerpo TioMab-farmaco, incluyendo tio-trastuzumab (A121C)-BMPEO-DM1, tio-2H9 (A121C)- BMPEO-DM1 y tio-3A5 (A121C)-BMPEO-DM1. La mezcla de conjugacion se filtro en gel o se cargo y se eluyo a traves de una columna HiTrap S para eliminar el exceso de intermedio de farmaco-enlazador y otras impurezas.
La presente invention no esta limitada en su alcance por las realizaciones especlficas divulgadas en los ejemplos que se pretenden como ilustraciones de unos pocos aspectos de la invencion y cualquier realization que sea funcionalmente equivalente esta dentro del alcance de esta invencion.

Claims (49)

  1. 5
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    15
    20
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    30
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    1. Un proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna, que comprende uno o mas aminoacidos cistelna libres que tienen un valor de reactividad del tiol en el intervalo de 0,6 a 1,0 y una secuencia en la cadena pesada seleccionada de las SEQ ID NOS: 10, 11, 13, 14, 31, 34, 37, 38 y 42:
    NSLRCEDTAV
    (SEQ ID NO:10)
    LVTVCSASTKGPS
    (SEQ ID NO:11)
    LVTVSSCSTKGPS
    (SEQ ID NO:13)
    LVTVSSACTKGPS
    (SEQ ID NO:14)
    HEDPEVKFNWYVDGCEVHNAKTKPR
    (SEQ ID NO:31)
    YKCKVCNKALP
    (SEQ ID NO:34)
    KGFYPCDIAVE
    (SEQ ID NO:37)
    PPVLDCDGSFF
    (SEQ ID NO:38)
    GQGTLVTVSACSTKGPSVFPL
    (SEQ ID NO:42)
    donde la cistelna en las SEQ ID NOS: 10, 11, 13, 14, 31, 34, 37, 38 y 42 es el aminoacido cistelna libre o una secuencia en la cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NOS: 17, 19, 20, 21, 22, 24, 25 y 27:
    SLSASCGDRVT
    (SEQ ID NO:17)
    EIKRTCAAPSV
    (SEQ ID NO:19)
    TCAAPCVFIFPP
    (SEQ ID NO:20)
    FIFPPCDEQLK
    (SEQ ID NO:21)
    DEQLKCGTASV
    (SEQ ID NO:22)
    WKVDNCLQSGN
    (SEQ ID NO:24)
    ALQSGCSQESV
    (SEQ ID NO:25)
    GLSSPCTKSFN
    (SEQ ID NO:27)
    donde la cistelna en las SEQ ID NOS: 17, 19, 20, 21, 22, 24, 25 y 27 es el aminoacido cistelna libre; en donde el proceso comprende sustituir uno o mas residuos de aminoacidos de un anticuerpo parental con el residuo de aminoacido cistelna libre, donde el anticuerpo parental se une selectivamente a un antlgeno y el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna se une selectivamente al mismo antlgeno que el anticuerpo parental; y en donde el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna es un anticuerpo humano, quimerico o humanizado.
  2. 2. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de la reivindicacion 1 preparado mediante un proceso que comprende:
    (i) mutagenizar una secuencia de acido nucleico que codifica el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna;
    (ii) expresar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna; y
    (iii) aislar y purificar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna.
  3. 3. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de la reivindicacion 2, que comprende ademas:
    (i) hacer reaccionar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna con un reactivo de afinidad que reacciona con tiol para generar un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna marcado por afinidad; y
    (ii) medir la union del anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna marcado por afinidad a un medio de captura.
  4. 4. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de la reivindicacion 3, en el que el reactivo de afinidad que reacciona con tiol comprende un resto biotina y un resto maleimida.
  5. 5. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de la reivindicacion 3, en el que el medio de captura comprende estreptavidina.
  6. 6. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo parental es una protelna de fusion que comprende el peptido de union a albumina (ABP) seleccionado de CDKTHTGGGSQRLMEDICLPRWGCLWEDDF (SEQ ID NO: 1), QRLMEDICLPRWGCLWEDDF (SEQ ID NO: 2), QRLIEDICLPRWGCLWEDDF (SEQ ID NO: 3), RLIEDICLPRWGCLWEDD (SEQ ID NO: 4) y DICLPRWGCLW (SEQ ID NO: 5).
  7. 7. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo parental se selecciona de un anticuerpo monoclonal, un
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    anticuerpo biespecifico y un fragmento de anticuerpo.
  8. 8. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de la reivindicacion 7, en el que el anticuerpo parental se selecciona de huMAb4D5-8 (trastuzumab), un anticuerpo anti-EphB2R y un anticuerpo anti-MUC16.
  9. 9. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de:
    SEQ ID NO:6:
    evqlvesggglvqpggslrlscaasgfnikdtyihwvrqapgkglewvariyptngytry
    ADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRCEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS
    ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYTPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
    GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
    PSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYXTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK, o
    SEQ ID NO:7:
    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTY1HWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRY
    ADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS
    CSTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
    GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
    PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN
    STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE
    MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
    QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGIC, o
    SEQ ID NO:8:
    DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPS RFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTCAAPSVFIFPP SDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLT LSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC, o
    SEQ ID NO:28:
    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWMHWVRQAPGKGLEWVGFINPSTGYTDY
    NQKFKDRFT1SADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRRPKIPRHANVFWGQGTLVTVSS
    CSTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
    GLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
    PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN
    STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE
    MTKNQVSLTCLVKGFYPSD1AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
    QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK,
    y SEQ ID NO:39:
    DVQLQESGPGLVNPSQSLSLTCTVTGYSITNDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYINYSGYTTY
    NPSLKSRISITRDTSKNQFFLHLNSVTTEDTATYYCARWDGGLTYWGQGTLVTVSACSTK
    GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS
    LSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVF
    LFPPKPKDTLM1SRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR
    WSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN
    QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN
    WSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK.
  10. 10. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el anticuerpo parental es un anticuerpo intacto seleccionado de IgA, IgD, IgE, IgG e IgM.
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  11. 11. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de la reivindicacion 10, en el que la IgG se selecciona de las subclases IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4.
  12. 12. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 o 10-11, en el que el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna o el anticuerpo parental se unen a uno o mas receptores (1)-(36):
    (1) BMPR1B (receptor de la protelna morfogenetica osea tipo IB);
    (2) E16 (LAT1, SLC7A5);
    (3) STEAP1 (antlgeno epitelial de seis dominios transmembrana de la prostata);
    (4) 0772P (CA125, MUC16);
    (5) MPF (MPF, MSLN, SmR, factor potenciador de megacariocitos, mesotelina);
    (6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, familia de vehlculos de soluto 34 (fosfato sodico), miembro 2, vehlculo de fosfato dependiente de sodio tipo II 3b);
    (7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforina 5b Hlog, dominio sema, siete repeticiones de trombospondina (tipo 1 y similar a tipo 1), dominio transmembrana (TM) y dominio citoplasmatico corto, (semaforina) 5B);
    (8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, ADNc de RIKEN 2700050C12, ADNc de RIKEN gen 2700050C12);
    (9) ETBR (receptor de endotelina tipo B);
    (10) MSG783 (RNF124, protelna hipotetica FLJ20315);
    (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gen asociado al cancer de prostata 1, protelna asociada al cancer de prostata 1, antlgeno epitelial de seis dominios transmembrana de la prostata 2, protelna de la prostata de seis dominios transmembrana);
    (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, canal cationico de potencial de receptor transitorio, subfamilia M, miembro 4);
    (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, factor de crecimiento derivado de teratocarcinoma);
    (14) CD21 (CR2 (Receptor del complemento 2) o C3DR (C3d/receptor del virus de Epstein Barr) o Hs.73792);
    (15) CD79b (CD79B, CD79p, IGb (inmunoglobulina beta asociada), B29);
    (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SpAp1A (protelna 1a de anclaje de fosfatasa que contiene el dominio SH2), SPAP1B, SPAP1C);
    (17) HER2;
    (18) NCA;
    (19) MDP;
    (20) IL20Ra;
    (21) Brevican;
    (22) EphB2R;
    (23) ASLG659;
    (24) PSCA;
    (25) GEDA;
    (26) BAFF-R (receptor del factor de activacion de linfocitos B, receptor BLyS 3, BR3);
    (27) CD22 (isoforma CD22-B del receptor de linfocitos B);
    (28) CD79a (CD79A, CD79a, inmunoglobulina alfa asociada, una protelna especlfica de linfocitos B que interacciona covalentemente con la Ig beta (CD79B) y forma un complejo sobre la superficie con moleculas de IgM, transduce una senal implicada en la diferenciacion de linfocitos B);
    (29) CXCR5 (receptor del linfoma de Burkitt 1, un receptor acoplado a la protelna G que se activa por la quimiocina CXCL13, interviene en la migracion de linfocitos y en la defensa humoral, desempena un papel en la infeccion por VIH-2 y quizas en el desarrollo del SIDA, linfoma, mieloma y leucemia);
    (30) HLA-DOB (Subunidad beta de la molecula MHC de clase II (antlgeno Ia) que une los peptidos y los presenta a los linfocitos T CD4+);
    (31) P2X5 (canal ionico activado por ligando del receptor purinergico P2X 5, canal ionico activado por ATP extracelular, puede estar implicado en la transmision sinaptica y la neurogenesis, cuya deficiencia puede contribuir a la fisiopatologla de la inestabilidad idiopatica del detrusor);
    (32) CD72 (antlgeno de diferenciacion de linfocitos B CD72, Lyb-2);
    (33) LY64 (antlgeno linfocitario 64 (RP105), protelna de membrana tipo I de la familia de protelnas con repeticiones ricas en leucina (LRR), regula la activacion de linfocitos B y la apoptosis, la perdida de funcion esta asociada a una mayor actividad en pacientes con lupus eritematoso sistemico);
    (34) FcRH1 (protelna de tipo receptor Fc 1, un supuesto receptor del dominio Fc de inmunoglobulina que contiene los dominios similares a Ig tipo C2 e ITAM, puede tener un papel en la diferenciacion de linfocitos B);
    (35) IRTA2 (receptor 2 de la superfamilia de inmunoglobulinas asociado con la translocacion, un supuesto inmunorreceptor con posibles papeles en el desarrollo de los linfocitos B y la linfomagenesis; en algunas neoplasias de linfocitos B se produce alteracion de la desregulacion del gen mediante translocacion); y
    (36) TENB2 (supuesto proteoglicano transmembrana, relacionado con familia EGF/heregulina de los factores de crecimiento y folistatina).
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  13. 13. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo esta unido covalentemente a un marcador de captura, un marcador de deteccion o un soporte solido.
  14. 14. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de la reivindicacion 13, en el que el anticuerpo esta unido covalentemente a un marcador de deteccion que es un colorante fluorescente seleccionado de un tipo de fluorescelna, un tipo de rodamina, dansilo, Lissamina, una cianina, una ficoeritrina, rojo Texas y un analogo de los mismos.
  15. 15. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de la reivindicacion 13, en el que el anticuerpo esta unido covalentemente a un marcador de deteccion radionuclido seleccionado de 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At y 213Bi.
  16. 16. El proceso para producir un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna de la reivindicacion 13, en el que el anticuerpo esta unido covalentemente a un marcador de deteccion mediante un ligando quelante seleccionado de DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA y TETA.
  17. 17. Un compuesto conjugado anticuerpo-farmaco que comprende un anticuerpo (Ab) modificado por ingenierla genetica con cistelna, que comprende un aminoacido cistelna libre que tiene un valor de reactividad del tiol en el intervalo de 0,6 a 1,0 y un resto de farmaco (D) seleccionado de un maitansinoide, una auristatina, una dolastatina y una caliqueamicina, en donde el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna esta unido a traves de uno o mas aminoacidos de cistelna libres mediante un resto enlazador (L) a D; teniendo el compuesto la Formula I:
    Ab-(L-D)p I
    donde p es 1, 2, 3 o 4; y en donde el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna se prepara mediante un proceso que comprende sustituir uno o mas residuos de aminoacidos de un anticuerpo parental con el uno o mas aminoacidos cistelna libres, donde el anticuerpo parental se une selectivamente a un antlgeno y el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna se une selectivamente al mismo antlgeno que el anticuerpo parental, en donde el compuesto conjugado anticuerpo-farmaco comprende:
    una o mas secuencias en la cadena pesada seleccionadas de las SEQ ID NOS: 10, 11, 13;
    42:
    NSLRCEDTAV
    LVTVCSASTKGPS
    LVTVSSCSTKGPS
    LVTVSSACTKGPS
    HEDPEVKFNWYVDGCEVHNAKTKPR
    YKCKVCNKALP
    KGFYPCDIAVE
    PPVLDCDGSFF
    GQGTLVTVSACSTKGPSVFPL
    (SEQ ID NO: 10) (SEQ ID NO: 11) (SEQ ID NO: 13) (SEQ ID NO: 14) (SEQ ID NO: 31) (SEQ ID NO: 34) (SEQ ID NO: 37) (SEQ ID NO: 38) (SEQ ID NO: 42)
    14, 31, 34, 37, 38 y
    donde la cistelna en las SEQ ID NOS: 10, 11, 13, 14, 31, 34, 37, 38 y 42 es el aminoacido cistelna libre; o una o mas secuencias en la cadena ligera seleccionadas de las SEQ ID NOS: 17, 19, 20, 21, 22, 24, 25 y 27:
    SLSASCGDRVT
    EIKRTCAAPSV
    TCAAPCVFIFPP
    FIFPPCDEQLK
    DEQLKCGTASV
    WKVDNCLQSGN
    ALQSGCSQESV
    GLSSPCTKSFN
    (SEQ ID NO:17) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:20) (SEQ ID NO:21) (SEQ ID NO:22) (SEQ ID NO:24) (SEQ ID NO:25) (SEQ ID NO:27)
    donde la cistelna en las SEQ ID NOS: 17, 19, 20, 21, 22, 24, 25 y 27 es el aminoacido cistelna libre, y en donde el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna es un anticuerpo humano, quimerico o humanizado.
  18. 18. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna se prepara mediante un proceso que comprende:
    (a) sustituir uno o mas residuos de aminoacidos de un anticuerpo parental con cistelna y
    (b) determinar la reactividad del tiol del anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna haciendo reaccionar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna con un reactivo que reacciona con tiol;
    en donde el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna es mas reactivo que el anticuerpo parental
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    con el reactivo que reacciona con tiol.
  19. 19. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, que comprende ademas una secuencia de un peptido de union a albumina (ABP) seleccionada de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5.
  20. 20. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna se une a un receptor de ErbB seleccionado de EGFR, HER2, HER3 y HER4.
  21. 21. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna o el anticuerpo parental se une a uno o mas de los receptores (1)-(36):
    (1) BMPR1B (receptor de la protelna morfogenetica osea tipo 1B);
    (2) E16 (LAT1, SLC7A5);
    (3) STEAP1 (antlgeno epitelial de seis dominios transmembrana de la prostata);
    (4) 0772P (CA125, MUC16);
    (5) MPF (MPF, MSLN, SmR, factor potenciador de megacariocitos, mesotelina);
    (6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, familia de vehlculos de soluto 34 (fosfato sodico), miembro 2, vehlculo de fosfato dependiente de sodio tipo II 3b);
    (7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforina 5b Hlog, dominio sema, siete repeticiones de trombospondina (tipo 1 y similar a tipo 1), dominio transmembrana (TM) y dominio citoplasmatico corto, (semaforina) 5B);
    (8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, ADNc de RIKEN 2700050C12, ADNc de RIKEN gen 2700050C12);
    (9) ETBR (receptor de endotelina tipo B);
    (10) MSG783 (RNF124, protelna hipotetica FLJ20315);
    (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gen asociado al cancer de prostata 1, protelna asociada al cancer de prostata 1, antlgeno epitelial de seis dominios transmembrana de la prostata 2, protelna de la prostata de seis dominios transmembrana);
    (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, canal cationico de potencial de receptor transitorio, subfamilia M, miembro 4);
    (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, factor de crecimiento derivado de teratocarcinoma);
    (14) CD21 (CR2 (Receptor del complemento 2) o C3DR (C3d/receptor del virus de Epstein Barr) o Hs.73792);
    (15) CD79b (CD79B, CD79p, IGb (inmunoglobulina beta asociada), B29);
    (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SpAp1A (protelna 1a de anclaje de fosfatasa que contiene el dominio SH2), SPAP1B, SPAP1C);
    (17) HER2;
    (18) NCA;
    (19) MDP;
    (20) IL20Ra;
    (21) Brevican;
    (22) EphB2R;
    (23) ASLG659;
    (24) PSCA;
    (25) GEDA;
    (26) BAFF-R (receptor del factor de activacion de linfocitos B, receptor BLyS 3);
    (27) CD22 (isoforma CD22-B del receptor de linfocitos B);
    (28) CD79a (CD79A, CD79a, inmunoglobulina alfa asociada, una protelna especlfica de linfocitos B que interacciona covalentemente con la Ig beta (CD79B) y forma un complejo sobre la superficie con moleculas de IgM, transduce una senal implicada en la diferenciacion de linfocitos B);
    (29) CXCR5 (receptor del linfoma de Burkitt 1, un receptor acoplado a la protelna G que se activa por la quimiocina CXCL13, interviene en la migracion de linfocitos y en la defensa humoral, desempena un papel en la infeccion por VIH-2 y quizas en el desarrollo del SIDA, linfoma, mieloma y leucemia);
    (30) HLA-DOB (Subunidad beta de la molecula MHC de clase II (antlgeno Ia) que une los peptidos y los presenta a los linfocitos T CD4+);
    (31) P2X5 (canal ionico activado por ligando del receptor purinergico P2X 5, canal ionico activado por ATP extracelular, puede estar implicado en la transmision sinaptica y la neurogenesis, cuya deficiencia puede contribuir a la fisiopatologla de la inestabilidad idiopatica del detrusor);
    (32) CD72 (antlgeno de diferenciacion de linfocitos B CD72, Lyb-2);
    (33) LY64 (antlgeno linfocitario 64 (RP105), protelna de membrana tipo I de la familia de protelnas con repeticiones ricas en leucina (LRR), regula la activacion de linfocitos B y la apoptosis, la perdida de funcion esta asociada a una mayor actividad en pacientes con lupus eritematoso sistemico);
    (34) FcRH1 (protelna de tipo receptor Fc 1, un supuesto receptor del dominio Fc de inmunoglobulina que contiene los dominios ITAM y similares a Ig tipo C2, puede tener un papel en la diferenciacion de linfocitos B);
    (35) IRTA2 (receptor 2 de la superfamilia de inmunoglobulinas asociado a la translocacion, un supuesto inmunorreceptor con posibles papeles en el desarrollo de los linfocitos B y la linfomagenesis; en algunas
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    neoplasias de linfocitos B se produce alteracion de la regulacion del gen mediante translocacion) y
    (36) TENB2 (supuesto proteoglicano transmembrana, relacionado con familia EGF/heregulina de los factores de
    crecimiento y folistatina).
  22. 22. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que p es 1 o 2.
  23. 23. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que L tiene la formula:
    -Aa-Ww-Yy-
    donde:
    A es una unidad de estirador covalentemente unida a un tiol de la cistelna del anticuerpo (Ab) modificado por ingenierla genetica con cistelna; a es 0 o 1;
    cada W es independientemente una unidad de aminoacido; w es un numero entero que oscila de 0 a 12;
    Y es una unidad espaciadora covalentemente unida al resto de farmaco e y es 0, 1 o 2.
  24. 24. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 23 que tiene la formula:
    imagen1
    donde PAB es para-aminobencilcarbamollo y R17 es un radical divalente seleccionado de (CH2)r, carbociclilo C3-C8, O-(CH2)n, arileno, (CH2)r-arileno, -arileno-(cH2)r-, (CH2)r-(carbociclilo C3-C8), (carbociclilo C3-C8)-(CH2)r, heterociclilo C3-C8, (CH2)r-(heterocicliclo C3-C8), -(heterociclilo C3-C8)-(CH2)r-, -(CH2)rC(O)NRb-(CH2)r-, -(CH2CH2OV-,
    -(CH2CH2O)r-CH2-, -(CH2)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-, -(CH2)rC-(O)NRb(CH2CH2O)r-CH2-,
    -(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-, -(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-CH2- y -(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2)r-; donde Rb es H, alquilo C1-C6, fenilo o bencilo; y r es independientemente un numero entero que oscila de 1 a 10.
  25. 25. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 24, en el que Ww es valina-citrulina.
  26. 26. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 24, en el que R17 es (CH2)5 o (CH2)2.
  27. 27. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 24 que tiene la formula:
    imagen2
  28. 28. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 27, en el que R17 es (CH2)5 o (CH2)2.
    5
    10
    15
    20
    25
    imagen3
  29. 30. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que L esta formado por el reactivo enlazador SmCC o BMPEO.
  30. 31. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que el resto de farmaco D se selecciona de un inhibidor de la microtubulina, un inhibidor de la mitosis, un inhibidor de la topoisomerasa y un intercalador de ADN.
  31. 32. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que el resto de farmaco D se selecciona de un maitansinoide, una auristatina, una dolastatina y una caliqueamicina.
  32. 33. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que D es MMAE, que tiene la estructura:
    imagen4
    donde la llnea ondulada indica el sitio de union al enlazador L.
  33. 34. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que D es MMAF, que tiene la estructura:
    imagen5
    5
    10
    15
    20
    25
    imagen6
    o DM4, que tiene la estructura:
    imagen7
    donde la llnea ondulada indica el sitio de union al enlazador L.
  34. 36. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que el anticuerpo parental se selecciona de un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo biespeclfico y un fragmento de anticuerpo.
  35. 37. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que el anticuerpo parental se selecciona de huMAb4D5-8 (trastuzumab), un anticuerpo anti-ErbB2, un anticuerpo anti-EphB2R, un anticuerpo anti- CD22 y un anticuerpo anti-MUC16.
  36. 38. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, en el que el anticuerpo parental es un anticuerpo intacto seleccionado de IgA, IgD, IgE, IgG e IgM.
  37. 39. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 38, en el que la IgG se selecciona de las subclases: IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4.
  38. 40. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17 que tiene la estructura:
    imagen8
    en la que n es 0, 1 o 2 y Ab es un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna.
    5 41. El compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de la reivindicacion 17, seleccionado de las estructuras:
    10
    imagen9
    imagen10
    imagen11
    imagen12
    y
    15 en las que Val es valina y Cit es citrulina.
  39. 42. Una composicion farmaceutica que comprende el compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 41 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y un diluyente, un vehlculo o un excipiente farmaceuticamente aceptables.
    20
  40. 43. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 42 que comprende ademas una cantidad terapeuticamente eficaz de un agente quimioterapeutico adicional.
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
  41. 44. Uso del compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 41, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la preparacion de un medicamento para el tratamiento del cancer.
  42. 45. Un compuesto conjugado anticuerpo-farmaco de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 41, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en un metodo para el tratamiento del cancer.
  43. 46. Un metodo de cribado de anticuerpos modificados por ingenierla genetica con cistelna para la reactividad del tiol, que comprende:
    (a) introducir uno o mas aminoacidos de cistelna en un anticuerpo parental con el fin de generar un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna;
    (b) hacer reaccionar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna con un reactivo de afinidad que reacciona con tiol para generar un anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna marcado por afinidad, en donde el reactivo de afinidad que reacciona con tiol comprende un resto de biotina y
    (c) medir la union del anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna marcado por afinidad a un medio de captura, en donde el medio de captura comprende estreptavidina, comprendiendo el metodo ademas determinar la reactividad del tiol del anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna con el reactivo que reacciona con tiol.
  44. 47. El metodo de cribado de acuerdo con la reivindicacion 46, en el que la etapa (a) del proceso comprende:
    (i) la mutagenesis dirigida al sitio de un gen que codifica el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna en un plasmido bicatenario (ds) y
    (ii) expresar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna.
  45. 48. El metodo de cribado de acuerdo con la reivindicacion 47, que comprende ademas aislar y purificar el anticuerpo modificado por ingenierla genetica con cistelna expresado.
  46. 49. El metodo de cribado de acuerdo con la reivindicacion 46, en el que el reactivo que reacciona con tiol comprende un resto maleimida.
  47. 50. El metodo de cribado de acuerdo con la reivindicacion 46, en el que el anticuerpo parental es una protelna de fusion que comprende un peptido de union a albumina (ABP).
  48. 51. El metodo de cribado de acuerdo con la reivindicacion 50, en el que el ABP comprende una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5.
  49. 52. El metodo de cribado de acuerdo con la reivindicacion 46, en el que el anticuerpo parental es un fragmento de anticuerpo Fab.
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Families Citing this family (1238)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6136311A (en) 1996-05-06 2000-10-24 Cornell Research Foundation, Inc. Treatment and diagnosis of cancer
US6833438B1 (en) 1999-06-01 2004-12-21 Agensys, Inc. Serpentine transmembrane antigens expressed in human cancers and uses thereof
US20040141975A1 (en) 1998-06-01 2004-07-22 Raitano Arthur B. Nucleic acid and corresponding protein entitled 98P4B6 useful in treatment and detection of cancer
DE69941187D1 (de) 1998-06-01 2009-09-10 Agensys Inc Serpentintransmembranantigene exprimiert in menschlichem krebs und deren verwendungen
US20060052321A1 (en) 2002-04-05 2006-03-09 Raitano Arthur B Nucleic acid and corresponding protein entitled 98P4B6 useful in treatment and detection of cancer
US20030149531A1 (en) 2000-12-06 2003-08-07 Hubert Rene S. Serpentine transmembrane antigens expressed in human cancers and uses thereof
CA2385528C (en) 1999-10-01 2013-12-10 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US7097840B2 (en) * 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
ES2334494T5 (es) 2001-05-11 2013-05-29 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Proteínas de unión específicas y usos de las mismas
CA2459318C (en) 2001-09-06 2017-09-26 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled steap-1 useful in treatment and detection of cancer
US7494646B2 (en) 2001-09-06 2009-02-24 Agensys, Inc. Antibodies and molecules derived therefrom that bind to STEAP-1 proteins
US20110045005A1 (en) 2001-10-19 2011-02-24 Craig Crowley Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
US20070207142A1 (en) * 2002-05-08 2007-09-06 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
US20090068178A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
AU2003263964C1 (en) * 2002-07-31 2010-08-19 Seagen Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
US9701754B1 (en) 2002-10-23 2017-07-11 City Of Hope Covalent disulfide-linked diabodies and uses thereof
US20110042260A1 (en) * 2003-04-10 2011-02-24 Craig Crowley Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
JP5020636B2 (ja) 2003-11-06 2012-09-05 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド リガンドに結合体化可能なモノメチルバリン化合物
WO2005082023A2 (en) * 2004-02-23 2005-09-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
JP4942643B2 (ja) 2004-03-02 2012-05-30 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 部分的に付加された抗体およびそれらの結合体化方法
ES2443996T3 (es) 2004-04-22 2014-02-21 Agensys, Inc. Anticuerpos y moléculas derivadas de los mismos que se unen a proteínas STEAP-1
US20100111856A1 (en) * 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
CN102746404B (zh) 2004-11-12 2016-01-20 赞科股份有限公司 对FcRn的结合被改变的Fc变体
EP3505191A1 (en) 2004-11-12 2019-07-03 Seattle Genetics, Inc. Auristatins having an aminobenzoic acid unit at the n terminus
WO2006105062A2 (en) * 2005-03-29 2006-10-05 Verenium Corporation Altered antibody fc regions and uses thereof
USRE47223E1 (en) 2005-06-20 2019-02-05 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US8871720B2 (en) 2005-07-07 2014-10-28 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the C-terminus
JP5171621B2 (ja) 2005-07-07 2013-03-27 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド フェニルアラニン側鎖修飾をｃ末端に有するモノメチルバリン化合物
GB0514779D0 (en) 2005-07-19 2005-08-24 Celltech R&D Ltd Biological products
WO2008020827A2 (en) * 2005-08-01 2008-02-21 Biogen Idec Ma Inc. Altered polypeptides, immunoconjugates thereof, and methods related thereto
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
US7750116B1 (en) 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
US8940871B2 (en) 2006-03-20 2015-01-27 The Regents Of The University Of California Engineered anti-prostate stem cell antigen (PSCA) antibodies for cancer targeting
KR101454508B1 (ko) * 2006-05-30 2014-11-04 제넨테크, 인크. 항체 및 면역접합체 및 이들의 용도
GB0619291D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Ucb Sa Altered antibodies
AU2013202022B2 (en) * 2006-10-27 2015-06-11 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
SI2061814T1 (sl) * 2006-10-27 2012-09-28 Genentech Inc Protitelesa in imunokonjugati in njihove uporabe
ES2636089T3 (es) * 2006-10-27 2017-10-05 Genentech, Inc. Anticuerpos e inmunoconjugados y usos para los mismos
DK2099823T4 (da) 2006-12-01 2022-05-09 Seagen Inc Målbindingsmiddelvarianter og anvendelser deraf
EP2126127B1 (en) 2007-01-25 2016-09-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Use of anti-egfr antibodies in treatment of egfr mutant mediated disease
EP2468776A3 (en) 2007-02-09 2012-11-14 Genentech, Inc. Anti-Robo4 antibodies and uses therefor
AU2008227123B2 (en) 2007-03-15 2014-03-27 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Treatment method using EGFR antibodies and src inhibitors and related formulations
JP5394246B2 (ja) * 2007-03-30 2014-01-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体及びイムノコンジュゲートとこれらの使用方法
CN101687037B (zh) * 2007-05-08 2013-07-10 健泰科生物技术公司 半胱氨酸改造的抗muc16抗体和抗体药物偶联物
JP5687057B2 (ja) 2007-07-09 2015-03-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド ポリペプチドの組換え生産中におけるジスルフィド結合還元の防止
CN101801188A (zh) 2007-07-12 2010-08-11 特拉加拉医药品公司 治疗癌症、肿瘤和肿瘤相关性疾病的方法和组合物
SG10201509384PA (en) 2007-07-16 2015-12-30 Genentech Inc Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
JP2010533495A (ja) 2007-07-16 2010-10-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド ヒト化ＣＤ７９ｂ抗体およびイムノコンジュゲートならびにそれらの使用
KR20100058509A (ko) 2007-07-31 2010-06-03 메디뮨 엘엘씨 다중특이적 에피토프 결합 단백질 및 이의 용도
US9901567B2 (en) 2007-08-01 2018-02-27 Syntarga B.V. Substituted CC-1065 analogs and their conjugates
CN101835801B (zh) * 2007-08-08 2014-09-10 诺维信生物制药丹麦公司 转铁蛋白变体和偶联物
CA2696360C (en) 2007-08-14 2018-11-20 Ludwig Institute For Cancer Research Monoclonal antibody targeting the egfr receptor and uses thereof
US8865875B2 (en) 2007-08-22 2014-10-21 Medarex, L.L.C. Site-specific attachment of drugs or other agents to engineered antibodies with C-terminal extensions
CA2698343C (en) 2007-09-04 2018-06-12 The Regents Of The University Of California High affinity anti-prostate stem cell antigen (psca) antibodies for cancer targeting and detection
US10457719B2 (en) * 2007-09-18 2019-10-29 The Jackson Laboratory Antibodies and FC fusion protein modifications with enhanced persistence or pharmacokinetic stability in vivo and methods of use thereof
US7959861B2 (en) * 2007-09-19 2011-06-14 Stc.Unm Integrated affinity microcolumns and affinity capillary electrophoresis
US20120052061A1 (en) * 2007-09-24 2012-03-01 Tragara Pharmaceuticals Inc. Therapies for treating cancer using combinations of cox-2 inhibitors and anti-her2(erbb2) antibodies or combinations of cox-2 inhibitors and her2(erbb2) receptor tyrosine kinase inhibitors
CL2008002886A1 (es) 2007-09-26 2009-12-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Region constante de un anticuerpo humano; anticuerpo anti-receptor de interleucina-6 (il-6) y composicion farmaceutica que la comprende.
EP3714906A1 (en) * 2007-10-03 2020-09-30 Cornell University Treatment of proliferative disorders using radiolabelled antibodies to psma
PT2211904T (pt) 2007-10-19 2016-11-02 Seattle Genetics Inc Agentes de ligação a cd19 e seus usos
WO2009052249A1 (en) 2007-10-19 2009-04-23 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-tenb2 antibodies and antibody drug conjugates
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
ES2742268T3 (es) 2007-12-26 2020-02-13 Xencor Inc Variantes de Fc con unión alterada a FcRn
WO2009092011A1 (en) * 2008-01-18 2009-07-23 Medimmune, Llc Cysteine engineered antibodies for site-specific conjugation
CN101981055B (zh) * 2008-01-31 2016-03-09 健泰科生物技术公司 抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法
WO2009099741A1 (en) * 2008-02-01 2009-08-13 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
CA2716592C (en) 2008-03-18 2018-02-27 Genentech, Inc. Combinations of an anti-her2 antibody-drug conjugate and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2009117531A1 (en) 2008-03-18 2009-09-24 Seattle Genetics, Inc. Auristatin drug linker conjugates
AU2009243009B2 (en) * 2008-04-30 2014-09-11 Immunogen, Inc Potent conjugates and hydrophilic linkers
DK2281006T3 (da) * 2008-04-30 2017-11-06 Immunogen Inc Tværbindingsmidler og anvendelser deraf
AU2015202204A1 (en) * 2008-04-30 2015-05-14 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
DK2310412T3 (en) 2008-06-20 2018-05-28 Novartis Ag IMMUNOGLOBULINES WITH REDUCED AGGREGATION
PL2310970T3 (pl) 2008-06-20 2013-10-31 Novartis Ag Metody identyfikacji w białkach regionów wiązania makrocząsteczek i regionów podatności na agregację i zastosowanie tych metod
JP5438922B2 (ja) * 2008-06-25 2014-03-12 日東電工株式会社 核酸の製造方法
DE102008033871A1 (de) * 2008-06-26 2009-12-31 InBio Prof.Jürgen Büddefeld Dr.Peter Klauth Prof.Manfred Rietz GbR (vertretungsberechtigter Gesellschafter: Dr.Peter Klauth, 41189 Mönchengladbach) Abstandsgesteuerte Energietransfer-Farbstoffkomplexe
KR101678925B1 (ko) 2008-06-30 2016-11-24 에스바테크 - 어 노바티스 컴파니 엘엘씨 기능화 폴리펩티드
US8697074B2 (en) 2008-07-10 2014-04-15 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Methods and compositions for enhanced delivery of macromolecules
CN102159248B (zh) 2008-07-15 2013-09-11 健泰科生物技术公司 蒽环类衍生物缀合物、它们的制备方法以及它们作为抗肿瘤化合物的用途
US20100069616A1 (en) * 2008-08-06 2010-03-18 The Regents Of The University Of California Engineered antibody-nanoparticle conjugates
JP5726085B2 (ja) * 2008-11-20 2015-05-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 治療用タンパク質製剤
CA2749115C (en) * 2009-01-09 2022-06-21 Seattle Genetics, Inc. Weekly dosing regimens for anti-cd30 vc-pab-mmae antibody drug-conjugates
AU2010203353B2 (en) 2009-01-12 2016-06-16 Cytomx Therapeutics, Inc Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
WO2010092135A2 (en) 2009-02-11 2010-08-19 Novozymes Biopharma Uk Ltd. Albumin variants and conjugates
US9238878B2 (en) * 2009-02-17 2016-01-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
ES2712732T3 (es) * 2009-02-17 2019-05-14 Cornell Res Foundation Inc Métodos y kits para el diagnóstico de cáncer y la predicción de valor terapéutico
SG173812A1 (en) * 2009-02-27 2011-09-29 Genentech Inc Methods and compositions for protein labelling
LT2403878T (lt) 2009-03-05 2017-10-10 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Pilnai žmogaus specifiniai antikūnai, skirti cadm1
ES2572728T3 (es) 2009-03-20 2016-06-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos anti-HER biespecíficos
US8124740B2 (en) 2009-03-25 2012-02-28 Genentech, Inc. Anti- α5 β1 antibodies and uses thereof
US20100261185A1 (en) 2009-03-27 2010-10-14 Life Technologies Corporation Labeled enzyme compositions, methods and systems
TW201039846A (en) * 2009-04-01 2010-11-16 Genentech Inc Anti-FcRH5 antibodies and immunoconjugates and methods of use
RU2587621C2 (ru) * 2009-04-01 2016-06-20 Дженентек, Инк. АНТИТЕЛА К FcRH5, ИХ ИММУНОКОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
MX2011010159A (es) 2009-04-02 2011-10-17 Roche Glycart Ag Anticuerpos multiespecificos que comprenden anticuerpos de longitud completa y fragmentos fab de cadena sencilla.
CN102369214B (zh) * 2009-04-07 2019-04-12 罗氏格黎卡特股份公司 三价、双特异性抗体
SG10201810743WA (en) 2009-06-03 2018-12-28 Immunogen Inc Conjugation methods
KR101809506B1 (ko) * 2009-06-04 2017-12-15 노파르티스 아게 ＩｇＧ 콘쥬게이션을 위한 자리의 확인 방법
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
MX2012000121A (es) 2009-06-22 2012-03-07 Medimmune Llc Regiones fc modificadas para la conjugacion especifica del sitio.
EP2448966B1 (en) 2009-07-03 2018-11-14 Avipep Pty Ltd Immuno-conjugates and methods for producing them
DK2454284T3 (en) 2009-07-15 2018-07-02 Aimm Therapeutics Bv GRAM POSITIVE BACTERIA-SPECIFIC BINDING COMPOUNDS
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
ES2667258T3 (es) 2009-09-10 2018-05-10 Ucb Biopharma Sprl Anticuerpos multivalentes
AU2010296018B2 (en) 2009-09-16 2016-05-05 Genentech, Inc. Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof
KR20120080611A (ko) 2009-10-06 2012-07-17 이뮤노젠 아이엔씨 효능 있는 접합체 및 친수성 링커
GB0922434D0 (en) 2009-12-22 2010-02-03 Ucb Pharma Sa antibodies and fragments thereof
US8734798B2 (en) 2009-10-27 2014-05-27 Ucb Pharma S.A. Function modifying NAv 1.7 antibodies
GB0922435D0 (en) 2009-12-22 2010-02-03 Ucb Pharma Sa Method
US9234037B2 (en) 2009-10-27 2016-01-12 Ucb Biopharma Sprl Method to generate antibodies to ion channels
EP2493921B1 (en) 2009-10-30 2018-09-26 Albumedix Ltd Albumin variants
GB0920127D0 (en) * 2009-11-17 2009-12-30 Ucb Pharma Sa Antibodies
GB0920324D0 (en) 2009-11-19 2010-01-06 Ucb Pharma Sa Antibodies
AU2010325969B2 (en) 2009-12-02 2016-10-20 Imaginab, Inc. J591 minibodies and cys-diabodies for targeting human prostate specific membrane antigen
US20110165155A1 (en) * 2009-12-04 2011-07-07 Genentech, Inc. Methods of treating metastatic breast cancer with trastuzumab-mcc-dm1
US10584181B2 (en) 2009-12-04 2020-03-10 Genentech, Inc. Methods of making and using multispecific antibody panels and antibody analog panels
US8937159B2 (en) * 2009-12-16 2015-01-20 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-HER2 antibodies and their uses
WO2011075185A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Oligasis Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
CA2784610C (en) * 2009-12-23 2020-07-14 Avipep Pty Ltd Immuno-conjugates and methods for producing them
US20110159588A1 (en) 2009-12-30 2011-06-30 Kui Lin Methods for Modulating a PDGF-AA Mediated Biological Response
WO2011097627A1 (en) 2010-02-08 2011-08-11 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 161p2f10b proteins
CA2784211C (en) 2010-02-18 2019-12-24 Genentech, Inc. Neuregulin antagonists and use thereof in treating cancer
AU2011221226A1 (en) * 2010-02-23 2012-08-16 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
BR112012022044A2 (pt) 2010-03-24 2020-08-25 Genentech Inc ''anticorpo,imunoconjugado,formulação farmacêutica,uso do anticorpo,método de tratamento,anticorpo biespecifico isolado e célula hospedeira''.
GB201005064D0 (en) 2010-03-25 2010-05-12 Ucb Pharma Sa Biological products
TW201138821A (en) 2010-03-26 2011-11-16 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies
EP2554669B1 (en) 2010-03-26 2018-09-19 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Novel antibody having modification site introduced therein, and antibody fragment
ME02670B (me) 2010-03-26 2017-06-20 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antitela za MUC16 i metode za njihovu primenu
US8927695B2 (en) 2010-03-30 2015-01-06 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Protein-based assays for screening of the IgE-receptor interaction
CN102939304B (zh) 2010-04-09 2017-04-19 阿尔布麦狄克斯公司 白蛋白衍生物和变体
MX2012011900A (es) 2010-04-15 2013-03-21 Seattle Genetics Inc Conjugados de pirrolobenzodiazepina diana.
NZ602933A (en) 2010-04-15 2014-09-26 Seattle Genetics Inc Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
DK2528625T3 (da) 2010-04-15 2013-10-14 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepiner og konjugater deraf
LT3108886T (lt) 2010-04-21 2020-08-25 Syntarga B.V. Cc-1065 analogų ir bifunkcinių jungtukų konjugatai
US9040310B2 (en) * 2010-04-27 2015-05-26 Ventana Medical Systems, Inc. Antibody-nanoparticle conjugates and methods for making and using such conjugates
EP2566894A1 (en) 2010-05-06 2013-03-13 Novartis AG Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein - related protein 6 (lrp6) multivalent antibodies
ES2659406T3 (es) 2010-05-06 2018-03-15 Novartis Ag Composiciones y procedimientos de uso para anticuerpos terapéuticos contra la proteína 6 relacionada con las lipoproteínas de baja densidad (LRP6)
WO2011146568A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Genentech, Inc. Predicting response to a her inhibitor
CN102905718A (zh) 2010-05-25 2013-01-30 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 纯化多肽的方法
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
US9770515B2 (en) * 2010-06-01 2017-09-26 Advanced Proteome Therapeutics Inc. Crosslinking of proteins and other entities via conjugates of α-haloacetophenones, benzyl halides, quinones, and their derivatives
MX336109B (es) 2010-06-03 2016-01-08 Genentech Inc Formacion de imagenes inmuno-tep de anticuerpos e inmunoconjugados y usos de lo mismo.
US9000130B2 (en) * 2010-06-08 2015-04-07 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
CN103080136B (zh) 2010-06-18 2015-08-12 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗Axl抗体及使用方法
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
EP2591004A1 (en) 2010-07-09 2013-05-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-neuropilin antibodies and methods of use
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
CN103052649B (zh) 2010-07-29 2015-12-16 Xencor公司 具有修改的等电点的抗体
RU2013106216A (ru) 2010-08-03 2014-09-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биомаркеры хронической лимфоцитарной лейкемии
WO2012020006A2 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Roche Glycart Ag Anti-fap antibodies and methods of use
WO2012020038A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Roche Glycart Ag Anti-tenascin-c a2 antibodies and methods of use
CA2807278A1 (en) 2010-08-24 2012-03-01 F. Hoffmann - La Roche Ag Bispecific antibodies comprising a disulfide stabilized - fv fragment
KR101603001B1 (ko) 2010-08-25 2016-03-11 에프. 호프만-라 로슈 아게 Il-18r1에 대한 항체 및 그의 용도
CA2808236A1 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Genentech, Inc. Biomarkers and methods of treatment
TW201302793A (zh) 2010-09-03 2013-01-16 Glaxo Group Ltd 新穎之抗原結合蛋白
PH12017501461B1 (en) 2010-09-29 2024-04-12 Agensys Inc Antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
EP2621954A1 (en) 2010-10-01 2013-08-07 Oxford Biotherapeutics Ltd. Anti-rori antibodies
HUE039375T2 (hu) 2010-10-29 2018-12-28 Perseus Proteomics Inc Magas internalizálási kapacitású anti-CDH3 antitest
AU2011323316B2 (en) 2010-11-03 2016-02-25 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising new ansamitocin derivatives
CA2813411C (en) 2010-11-05 2016-08-02 Rinat Neuroscience Corporation Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase
WO2012058726A1 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Transbio Ltd Markers of endothelial progenitor cells and uses thereof
EP2638066A4 (en) * 2010-11-09 2015-06-03 Medimmune Llc ANTIBODY EQUIPMENT FOR HOMOGENEOUS CONJUGATION
PE20140238A1 (es) 2010-11-10 2014-03-07 Genentech Inc Metodos y composiciones para inmunoterapia para enfermedad neural
CN103313990B (zh) 2010-11-17 2016-07-20 基因泰克公司 丙氨酰美登醇抗体偶联物
US20130259806A1 (en) * 2010-12-09 2013-10-03 David Light Dimeric molecular complexes with free cysteine residues and conjugates thereof
NZ609493A (en) 2010-12-16 2015-11-27 Genentech Inc Diagnosis and treatments relating to th2 inhibition
EA201790664A1 (ru) 2010-12-20 2017-07-31 Дженентек, Инк. Антитела против мезотелина и иммуноконъюгаты
US20120195910A1 (en) 2010-12-22 2012-08-02 Genentech, Inc. Anti-pcsk9 antibodies and methods of use
JP5766296B2 (ja) 2010-12-23 2015-08-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ポリペプチド−ポリヌクレオチド複合体、およびエフェクター成分の標的化された送達におけるその使用
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
CN103415621A (zh) 2011-01-14 2013-11-27 雷德伍德生物科技股份有限公司 醛标记免疫球蛋白多肽及其使用方法
JP2014506883A (ja) * 2011-02-03 2014-03-20 インディ モレキュラー，インコーポレイテッド Ｐｓａ捕捉剤、組成物、方法及びその製造
JP6486003B2 (ja) 2011-02-10 2019-03-20 ルプレヒト−カールス−ウニヴェルジテート ハイデルベルクＲｕｐｒｅｃｈｔ−Ｋａｒｌｓ−Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｅｔ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ 肝臓特異的診断のための疎水性修飾ペプチド
KR20200140939A (ko) 2011-02-15 2020-12-16 이뮤노젠 아이엔씨 컨쥬게이트의 제조방법
JP5764677B2 (ja) 2011-02-28 2015-08-19 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗原結合タンパク質
AR085403A1 (es) 2011-02-28 2013-09-25 Hoffmann La Roche Proteinas monovalentes que se unen a antigenos
JP5926791B2 (ja) 2011-03-29 2016-05-25 ロシュ グリクアート アーゲー 抗体Ｆｃ変種
RU2013143358A (ru) 2011-04-07 2015-05-20 Дженентек, Инк. Анти-fgfr4 антитела и способы их применения
CN103534272B (zh) 2011-05-09 2016-05-11 株式会社英仙蛋白质科学 能够特异性识别转铁蛋白受体的抗体
CA2833212C (en) 2011-05-12 2020-06-09 Genentech, Inc. Multiple reaction monitoring lc-ms/ms method to detect therapeutic antibodies in animal samples using framework signature peptides
MX370233B (es) 2011-05-16 2019-12-06 Genentech Inc Antagonistas de fgfr1 y sus metodos de uso.
CA2837169C (en) 2011-05-24 2021-11-09 Zyngenia, Inc. Multispecific complexes comprising angiopoietin-2-binding peptide and their uses
SG10201605041VA (en) 2011-06-21 2016-08-30 Immunogen Inc Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof
MX2013014687A (es) 2011-06-30 2014-02-17 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpo anti-c-met.
WO2013022855A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering
BR112014003431A2 (pt) 2011-08-17 2017-06-13 Genentech Inc anticorpo, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, agente farmacêutico, uso do anticorpo, método de tratamento de um indivíduo que tem câncer e método de aumento de tempo para recorrência de tumor
US20130060011A1 (en) 2011-08-23 2013-03-07 Peter Bruenker Fc-free antibodies comprising two fab fragments and methods of use
CN103889452B (zh) 2011-08-23 2017-11-03 罗切格利卡特公司 对t细胞活化性抗原和肿瘤抗原特异性的双特异性抗体及使用方法
WO2013026832A1 (en) 2011-08-23 2013-02-28 Roche Glycart Ag Anti-mcsp antibodies
UY34317A (es) 2011-09-12 2013-02-28 Genzyme Corp Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß
WO2013040188A1 (en) * 2011-09-15 2013-03-21 Cytodyn, Inc. Anti-cd11a antibodies and uses thereof
CA2846083A1 (en) 2011-09-15 2013-03-21 Genentech, Inc. Methods of promoting differentiation
JP2014534949A (ja) 2011-09-19 2014-12-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃ−ｍｅｔアンタゴニストおよびｂ−ｒａｆアンタゴニストを含む組合せ処置
CA2849039C (en) 2011-09-20 2018-09-18 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates
US9663573B2 (en) 2011-10-05 2017-05-30 Genentech, Inc. Methods of treating liver conditions using Notch2 antagonists
WO2013055809A1 (en) 2011-10-10 2013-04-18 Xencor, Inc. A method for purifying antibodies
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
AU2012322932B2 (en) 2011-10-14 2016-11-10 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
WO2013055990A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
KR101891859B1 (ko) 2011-10-14 2018-08-24 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀
AR088322A1 (es) 2011-10-14 2014-05-28 Genentech Inc Anticuerpos anti-htra1 y metodos de uso
US9387259B2 (en) 2011-10-14 2016-07-12 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
HRP20151374T1 (hr) * 2011-10-14 2016-01-15 Medimmune Limited Pirolobenzodiazepini i njihovi konjugati
KR20140084164A (ko) 2011-10-15 2014-07-04 제넨테크, 인크. 암의 치료를 위한 scd1 길항제
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
SG11201401815XA (en) 2011-10-28 2014-05-29 Genentech Inc Therapeutic combinations and methods of treating melanoma
HUE043755T2 (hu) 2011-11-02 2019-09-30 Hoffmann La Roche Túlterheléses és elúciós kromatográfia
US9580509B2 (en) 2011-11-07 2017-02-28 Medimmune, Llc Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
HK1200842A1 (en) 2011-11-18 2015-08-14 Albumedix Ltd Proteins with improved half-life and other properties
RU2014124842A (ru) 2011-11-21 2015-12-27 Дженентек, Инк. Очистка анти-с-мет антител
SG11201402619VA (en) 2011-11-23 2014-10-30 Igenica Biotherapeutics Inc Anti-cd98 antibodies and methods of use thereof
AU2012348017A1 (en) * 2011-12-05 2014-07-03 Igenica Biotherapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods
WO2013083497A1 (en) 2011-12-06 2013-06-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
EP3539982B1 (en) * 2011-12-23 2025-02-19 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
AR089434A1 (es) 2011-12-23 2014-08-20 Genentech Inc Procedimiento para preparar formulaciones con alta concentracion de proteinas
US20130183294A1 (en) 2012-01-18 2013-07-18 Genentech, Inc. Methods of using fgf19 modulators
IN2014DN05885A (es) 2012-01-18 2015-06-05 Hoffmann La Roche
CA2862292C (en) * 2012-01-20 2019-10-08 Sea Lane Biotechnologies, Llc Binding molecule conjugates
KR20140127854A (ko) 2012-02-10 2014-11-04 제넨테크, 인크. 단일-쇄 항체 및 다른 이종다량체
CA2862316A1 (en) 2012-02-11 2013-08-15 Genentech, Inc. R-spondin translocations and methods using the same
PE20141791A1 (es) 2012-02-13 2014-11-19 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de enediino, conjugados de los mismos y sus usos y metodos
CN104125852B9 (zh) 2012-02-15 2017-05-17 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 基于Fc‑受体的亲和色谱
SI2817338T1 (sl) 2012-02-24 2017-11-30 Abbvie Stemcentrx Llc Modulatorji DLL3 in postopki uporabe
JP6067754B2 (ja) * 2012-02-24 2017-01-25 アルテオジェン インコーポレイテッドＡｌｔｅｏｇｅｎ Ｉｎｃ． システイン残基を含むモチーフが結合した修飾抗体、前記修飾抗体を含む修飾抗体−薬物複合体及びその製造方法
EP3539985A1 (en) 2012-02-24 2019-09-18 AbbVie Stemcentrx LLC Anti sez6 antibodies and methods of use
MX2014010278A (es) 2012-03-16 2015-03-05 Novozymes Biopharma Dk As Variantes de albumina.
CA2865082A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to her3 inhibitors
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
CN104220595A (zh) 2012-04-04 2014-12-17 株式会社英仙蛋白质科学 抗cdh3(p-钙粘着蛋白）抗体的药剂偶联物
US10385395B2 (en) 2012-04-11 2019-08-20 The Regents Of The University Of California Diagnostic tools for response to 6-thiopurine therapy
CN104470544B (zh) 2012-05-01 2018-01-12 基因泰克公司 抗pmel17抗体和免疫缀合物
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
CN104379168B (zh) 2012-05-15 2017-08-15 索伦托医疗有限公司 药物偶联物，偶联方法，及其用途
US20130309223A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
JP6192022B2 (ja) 2012-05-21 2017-09-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗Ｌｙ６Ｅ抗体及びイムノコンジュゲート並びに使用方法
CN104335047B (zh) 2012-05-23 2017-08-15 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 治疗剂的选择方法
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
EP2861624A1 (en) 2012-06-15 2015-04-22 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pcsk9 antibodies, formulations, dosing, and methods of use
RU2015100656A (ru) 2012-06-27 2016-08-20 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Способ получения конъюгатов fc-фрагмента антитела, включающих по меньшей мере одну связывающую группировку, которая специфически связывается с мишенью, и их применения
RU2639287C2 (ru) 2012-06-27 2017-12-20 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Способ отбора и получения высокоселективных и мультиспецифичных нацеливающих групп с заданными свойствами, включающих по меньшей мере две различные связывающие группировки, и их применения
HUE029435T2 (en) 2012-07-04 2017-02-28 Hoffmann La Roche Anti-theophylline antibodies and methods of their application
CN104411725B (zh) 2012-07-04 2018-09-28 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗生物素抗体及使用方法
ES2604012T3 (es) 2012-07-04 2017-03-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugados de antígeno-anticuerpo unidos covalentemente
CA3188124A1 (en) 2012-07-05 2014-01-09 Genentech, Inc. Expression and secretion system
HK1209042A1 (en) 2012-07-09 2016-03-24 基因泰克公司 Immunoconjugates comprising anti-cd79b antibodies
US20140030281A1 (en) 2012-07-09 2014-01-30 Genentech, Inc. Anti-cd22 antibodies and immunoconjugates
IN2014DN10510A (es) 2012-07-09 2015-08-21 Genentech Inc
TW201408697A (zh) 2012-07-09 2014-03-01 Genentech Inc 抗ｃｄ７９ｂ抗體及免疫結合物
SG11201408538PA (en) 2012-07-13 2015-02-27 Roche Glycart Ag Bispecific anti-vegf/anti-ang-2 antibodies and their use in the treatment of ocular vascular diseases
EP2874650A4 (en) 2012-07-19 2016-03-23 Redwood Bioscience Inc FOR CD22 SPECIFIC ANTIBODIES AND METHOD FOR USE THEREOF
WO2014022680A1 (en) 2012-08-02 2014-02-06 Genentech, Inc. Anti-etbr antibodies and immunoconjugates
CA2879665A1 (en) 2012-08-02 2014-02-06 Genentech, Inc. Anti-etbr antibodies and immunoconjugates
WO2014022817A2 (en) 2012-08-03 2014-02-06 Novartis Ag Methods to identify amino acid residues involved in macromolecular binding and uses therefor
HK1211208A1 (zh) 2012-08-22 2016-05-20 Immunogen, Inc. 細胞毒性苯並二氮呯衍生物
AR092219A1 (es) 2012-08-23 2015-04-08 Seattle Genetics Inc Conjugados anticuerpo-farmaco (adc) que se unen a proteinas 158p1d7
US9790268B2 (en) 2012-09-12 2017-10-17 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
US20150218220A1 (en) * 2012-09-12 2015-08-06 Brian Alan MENDELSOHN Amatoxin derivatives and cell-permeable conjugates thereof as inhibitors of rna polymerase
LT2900676T (lt) 2012-09-26 2019-03-25 Immunogen, Inc. Maitanzinolio acilinimo patobulintas būdas
US9777067B2 (en) 2012-09-27 2017-10-03 Massachusetts Institute Of Technology HER2- and VEGF-A-binding proteins with enhanced stability
KR20150064068A (ko) 2012-10-08 2015-06-10 로슈 글리카트 아게 2개의 Fab 단편을 포함하는 FC-부재 항체 및 이용 방법
WO2014059028A1 (en) 2012-10-09 2014-04-17 Igenica, Inc. Anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof
EA035405B1 (ru) 2012-10-12 2020-06-08 Медимьюн Лимитед Пирролбензодиазепины и их конъюгаты
BR112015008174B1 (pt) 2012-10-12 2022-12-27 Medimmune Limited Conjugados de pirrolobenzodiazepina-anticorpo, composição farmacêutica compreendendo ditos conjugados e usos dos mesmos para tratar doença proliferativa e cancêr
NZ745069A (en) 2012-10-12 2019-05-31 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
LT2906251T (lt) 2012-10-12 2017-12-11 Adc Therapeutics Sa Pirolobenzodiazepino-anti-cd22 antikūno konjugatai
KR101986404B1 (ko) 2012-10-12 2019-06-07 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 컨주게이트
JP6392764B2 (ja) 2012-10-12 2018-09-19 エイディーシー・セラピューティクス・エス・アーＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａ ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体
EP2906250B1 (en) 2012-10-12 2018-05-30 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP2906249B1 (en) 2012-10-12 2018-06-27 MedImmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
EP2914621B1 (en) 2012-11-05 2023-06-07 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
KR20150064205A (ko) 2012-11-08 2015-06-10 에프. 호프만-라 로슈 아게 Her3의 베타-헤어핀에 결합하는 her3 항원 결합 단백질
RS57696B1 (sr) 2012-11-08 2018-12-31 Univ Miyazaki Antitelo sposobno da specifično prepozna transferinski receptor
CN105452290A (zh) 2012-11-08 2016-03-30 诺维信生物制药丹麦公司 白蛋白变体
MX2015005860A (es) 2012-11-13 2015-08-10 Genentech Inc Anticuerpos de antihemaglutinina y metodo de uso.
RU2015122726A (ru) 2012-11-15 2017-01-10 Дженентек, Инк. ОПОСРЕДОВАННАЯ ИОННОЙ СИЛОЙ рН-ГРАДИЕНТНАЯ ИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
JP6475631B2 (ja) * 2012-11-19 2019-02-27 バリオファルム・アクチェンゲゼルシャフト Ｃｄ２０およびｃｄ９５に結合する組換え二重特異性抗体
WO2014084508A1 (ko) 2012-11-27 2014-06-05 (주)알테오젠 단백질과 Fc 도메인을 융합한 융합 단백질의 안정화용 조성물
US9353150B2 (en) 2012-12-04 2016-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment
MX342894B (es) 2012-12-13 2016-10-18 Immunomedics Inc Dosis de inmunoconjugados de anticuerpos y sn-38 para eficacia mejorada y toxicidad reducida.
EP2934602B1 (en) 2012-12-19 2019-02-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for radiohalogen protein labeling
KR20150119848A (ko) 2012-12-21 2015-10-26 바이오얼라이언스 씨.브이. 친수성 자기-희생 링커 및 그것의 포합체
BR112015014669B1 (pt) 2012-12-21 2023-09-26 Medimmune Limited Compostos pirrolobenzodiazepinas, conjugados compreendendo os mesmos e uso destes para tratar uma doença proliferativa
CN110627797A (zh) 2012-12-21 2019-12-31 麦迪穆有限责任公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
US9814784B2 (en) * 2013-01-03 2017-11-14 Celltrion, Inc. Antibody-linker-drug conjugate, preparation method therefor, and anticancer drug composition containing same
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
CA2898100C (en) 2013-01-14 2023-10-10 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
WO2014113510A1 (en) 2013-01-15 2014-07-24 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
WO2014113729A2 (en) 2013-01-18 2014-07-24 Foundation Mecicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
CN103933575B (zh) 2013-01-23 2017-09-29 上海新理念生物医药科技有限公司 一种三齿型连接子及其应用
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
DK2953976T3 (da) * 2013-02-08 2021-06-21 Novartis Ag Specifikke modificeringssteder i antistoffer til fremstilling af immunkonjugater
MX356698B (es) 2013-02-14 2018-06-11 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de tubulisina, metodos para obtenerlos y uso.
AU2014216959A1 (en) 2013-02-15 2015-10-01 Perseus Proteomics Inc. Anti-CDH3 humanized antibody, drug conjugate thereof, and use thereof
BR112015019909A2 (pt) 2013-02-22 2017-08-29 Abbvie Stemcentrx Llc Conjugados anticorpo-fármaco, composição farmacêutica, usos dos mesmos, e kit
KR20150118159A (ko) 2013-02-22 2015-10-21 에프. 호프만-라 로슈 아게 암의 치료 방법 및 약물 내성의 예방 방법
WO2014131715A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Anti-mcsp antibodies
JP6423804B2 (ja) * 2013-02-28 2018-11-14 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤を含む複合体
JP6494533B2 (ja) 2013-02-28 2019-04-03 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤及び細胞毒性剤としてのマイタンシノイドを含む複合体
US9925240B2 (en) 2013-03-06 2018-03-27 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
KR102330681B1 (ko) 2013-03-11 2021-11-24 젠자임 코포레이션 당조작을 통한 부위-특이적 항체-약물 접합
AU2014229529B2 (en) 2013-03-13 2018-02-15 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2014140174A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AU2014244245C1 (en) 2013-03-13 2018-04-19 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
CA2905070A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
US20140271634A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 The Regents Of The University Of California Combinations of a mek inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and methods of use
US9580486B2 (en) * 2013-03-14 2017-02-28 Amgen Inc. Interleukin-2 muteins for the expansion of T-regulatory cells
JP6436965B2 (ja) 2013-03-14 2018-12-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ４抗体及びイムノコンジュゲート
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
AU2014228172B2 (en) * 2013-03-15 2018-12-06 Abbvie Deutschland Gmbh & Co.Kg Anti-EGFR antibody drug conjugate formulations
IL284301B1 (en) 2013-03-15 2025-06-01 Xencor Inc Heterodimer proteins
CN105339001A (zh) 2013-03-15 2016-02-17 基因泰克公司 治疗癌症和预防癌症耐药性的方法
DK2970422T3 (en) 2013-03-15 2018-07-16 Hoffmann La Roche IL-22 POLYPEPTIDES AND IL-22 FC-FUSION PROTEINS AND METHODS OF USE
BR112015022119A2 (pt) * 2013-03-15 2017-08-29 Abbvie Biotherapeutics Inc Polipeptídeo, composto conjugado, composição farmacêutica, ácido nucleico, vetor, células hospedeiras procariótica e eucariótica, método de produção de um polipeptídeo, e, método de tratamento
WO2014150877A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Ac Immune S.A. Anti-tau antibodies and methods of use
US9260527B2 (en) 2013-03-15 2016-02-16 Sdix, Llc Anti-human CXCR4 antibodies and methods of making same
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
TW201511770A (zh) 2013-03-15 2015-04-01 Genentech Inc 診斷及治療肝癌之組合物及方法
DK2970486T3 (en) 2013-03-15 2018-08-06 Xencor Inc MODULATION OF T-CELLS WITH BISPECIFIC ANTIBODIES AND FC-FUSIONS
CN114717206A (zh) 2013-03-15 2022-07-08 Atyr 医药公司 组氨酰-trna合成酶-fc缀合物
US20140328849A1 (en) 2013-03-15 2014-11-06 Genentech, Inc. Anti-crth2 antibodies and methods of use
ES2761260T3 (es) 2013-03-15 2020-05-19 Hoffmann La Roche Biomarcadores y procedimientos de tratamiento de afecciones relacionadas con PD-1 y PD-L1
RU2015144026A (ru) * 2013-03-15 2017-04-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Антитела против cd25 и их применения
MX2015013163A (es) 2013-03-15 2016-04-04 Zyngenia Inc Complejos multiespecificos multivalente y monovalentes y sus usos.
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
RU2019108429A (ru) 2013-04-29 2019-05-06 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Модифицированные асимметричные антитела, связывающие fc-рецептор, и способы их применения
PE20151807A1 (es) 2013-04-29 2015-12-02 Hoffmann La Roche Anticuerpos modificados de union a fcrn humano y metodo de utilizacion
CA2908653A1 (en) 2013-04-29 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases
JP6612214B2 (ja) 2013-05-20 2019-11-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体抗体及び使用方法
US9803002B2 (en) 2013-05-31 2017-10-31 Genentench, Inc. Anti-wall teichoic antibodies and conjugates
JP6506262B2 (ja) 2013-05-31 2019-04-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗細胞壁タイコ酸抗体及びコンジュゲート
HK1220982A1 (zh) 2013-05-31 2017-05-19 基因泰克公司 抗壁磷壁酸抗體和綴合物
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
WO2014197866A1 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Modified antibodies and related compounds, compositions, and methods of use
AR096687A1 (es) 2013-06-24 2016-01-27 Genentech Inc Anticuerpos anti-fcrh5
EP3018143B1 (en) * 2013-07-03 2019-05-29 Seoul National University R&DB Foundation Chicken antibody transformed into cysteine and site-specific conjugation using same
PL3019516T3 (pl) 2013-07-12 2019-04-30 Hoffmann La Roche Objaśnienie optymalizacji wprowadzania w chromatografii jonowymiennej
US10195289B2 (en) 2013-07-31 2019-02-05 Rinat Neuroscience Corp. Engineered polypeptide conjugates using transglutaminase
JP6510518B2 (ja) 2013-08-01 2019-05-08 アジェンシス，インコーポレイテッド Ｃｄ３７タンパク質に結合する抗体薬物結合体（ａｄｃ）
PE20160192A1 (es) 2013-08-12 2016-04-27 Genentech Inc Composiciones y metodo para tratar condiciones asociadas con el complemento
EA201690195A1 (ru) 2013-08-12 2016-05-31 Дженентек, Инк. Конъюгатные соединения антитело-лекарство на основе димера 1-(хлорметил)-2,3-дигидро-1h-бензо[e]индола и способы применения и лечения
CA3090644C (en) 2013-08-26 2023-02-07 Biontech Research And Development, Inc. Nucleic acids encoding human antibodies to sialyl-lewisa
WO2015031693A1 (en) * 2013-08-28 2015-03-05 Stem Centrx, Inc. Engineered anti-dll3 conjugates and methods of use
EP3038634A4 (en) 2013-08-28 2017-10-11 AbbVie Stemcentrx LLC Novel sez6 modulators and methods of use
EP3038644B1 (en) 2013-08-28 2021-04-07 AbbVie Stemcentrx LLC Site-specific antibody conjugation methods and compositions
US20150093800A1 (en) 2013-09-05 2015-04-02 Genentech, Inc. Method for chromatography reuse
JP6463361B2 (ja) 2013-09-08 2019-01-30 コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． 第ｖｉｉｉ因子両性イオンポリマーコンジュゲート
WO2015038884A2 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Genentech, Inc. Compositions and methods for detecting and quantifying host cell protein in cell lines and recombinant polypeptide products
JP2016537399A (ja) 2013-09-17 2016-12-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｌｇｒ５抗体を使用する方法
US10414818B2 (en) 2013-09-27 2019-09-17 Roche Diagnostics Operations, Inc. Thermus thermophilus SlyD FKBP domain specific antibodies
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CA2922912A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific domain exchanged common variable light chain antibodies
EP3055328A1 (en) 2013-10-11 2016-08-17 F. Hoffmann-La Roche AG Nsp4 inhibitors and methods of use
WO2015052535A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2015052534A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP6657075B2 (ja) 2013-10-11 2020-03-04 オックスフォード バイオセラピューティックス リミテッドＯｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｔｄ がん治療のためのｌｙ７５に対する複合抗体
RU2016114074A (ru) 2013-10-18 2017-11-23 Дженентек, Инк. Анти-rspo антитела и способы применения
JP6707445B2 (ja) 2013-10-21 2020-06-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗Ｌｙ６Ｅ抗体及び使用方法
MX2016005159A (es) 2013-10-23 2016-07-05 Genentech Inc Metodos de diagnostico y tratamiento de trastornos eosinofilicos.
SG11201603397QA (en) 2013-11-06 2016-05-30 Stemcentrx Inc Novel anti-claudin antibodies and methods of use
EP2873680A1 (en) * 2013-11-13 2015-05-20 F.Hoffmann-La Roche Ag Oligopeptide and methods for producing conjugates thereof
EP3783020A1 (en) 2013-11-21 2021-02-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use
JP2017500028A (ja) 2013-12-12 2017-01-05 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー 新規の抗ｄｐｅｐ３抗体および使用方法
AR098743A1 (es) 2013-12-13 2016-06-08 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd33
BR112016014126B1 (pt) 2013-12-16 2023-02-14 Medimmune Limited Composto não-peptídico, conjugados de anticorpo-fármaco do mesmo, uso dos ditos conjugados para o tratamento de câncer e composição farmacêutica que compreende os mesmos
JP6980384B2 (ja) 2013-12-16 2021-12-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド １−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール二量体抗体−薬物コンジュゲート化合物、並びに使用及び処置の方法
CA2928952A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
KR20170042495A (ko) 2013-12-16 2017-04-19 제넨테크, 인크. 펩티드모방체 화합물 및 그의 항체-약물 접합체
US9914769B2 (en) 2014-07-15 2018-03-13 Kymab Limited Precision medicine for cholesterol treatment
US8986694B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain
US8992927B1 (en) 2014-07-15 2015-03-31 Kymab Limited Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain
US9067998B1 (en) 2014-07-15 2015-06-30 Kymab Limited Targeting PD-1 variants for treatment of cancer
NZ721309A (en) 2013-12-17 2019-11-29 Genentech Inc Anti-cd3 antibodies and methods of use
US9045545B1 (en) 2014-07-15 2015-06-02 Kymab Limited Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer
CN105899533B (zh) 2013-12-20 2019-10-11 豪夫迈·罗氏有限公司 人源化的抗-Tau(pS422)抗体和使用方法
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
CN105873616B (zh) 2014-01-03 2020-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 共价连接的多肽毒素-抗体缀合物
JP6476194B2 (ja) 2014-01-03 2019-02-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 二重特異性抗ハプテン／抗血液脳関門受容体抗体、それらの複合体、及び血液脳関門シャトルとしてのそれらの使用
CA2930154A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked helicar-anti-helicar antibody conjugates and uses thereof
WO2015101588A1 (en) 2014-01-06 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent blood brain barrier shuttle modules
EP2891664A1 (en) * 2014-01-07 2015-07-08 Technische Universität München Novel methods for the stabilisation of immunoglobulin constant domains
MX368234B (es) 2014-01-10 2019-09-25 Synthon Biopharmaceuticals Bv Conjugados de anticuerpo-fármaco (adcs) que contienen duocarmicina para usarse en el tratamiento de cáncer endometrial.
JP2017503803A (ja) * 2014-01-10 2017-02-02 シャンハイ バーディー バイオテック インコーポレイテッド Ｅｇｆｒ発現腫瘍を処置するための化合物及び組成物
CN104861063A (zh) * 2014-01-10 2015-08-26 博笛生物科技有限公司 靶向her2阳性肿瘤的化合物和组合物
CN104861064A (zh) * 2014-01-10 2015-08-26 博笛生物科技有限公司 靶向表达egfr的肿瘤的化合物和组合物
HUE037250T2 (hu) 2014-01-10 2018-08-28 Synthon Biopharmaceuticals Bv Duokarmicin ADC-k (antitest-hatóanyag konjugátumok) húgyhólyagrák kezelésében történõ alkalmazásra
CN104861067A (zh) * 2014-01-10 2015-08-26 博笛生物科技有限公司 用于免疫疗法的化合物和组合物
EP3094647A1 (en) 2014-01-15 2016-11-23 F. Hoffmann-La Roche AG Fc-region variants with modified fcrn- and maintained protein a-binding properties
US10421796B2 (en) * 2014-01-21 2019-09-24 Gray D Shaw Variants of IgG Fc with limited amine groups
BR112016015693A2 (pt) 2014-01-24 2017-10-24 Genentech Inc método para tratar um câncer de próstata e anticorpo
AU2015213741B2 (en) 2014-02-08 2020-10-08 Genentech, Inc. Methods of treating Alzheimer's Disease
KR20230056800A (ko) 2014-02-08 2023-04-27 제넨테크, 인크. 알츠하이머 질환을 치료하는 방법
JP6713931B2 (ja) 2014-02-11 2020-06-24 シアトル ジェネティクス，インコーポレイティド タンパク質の選択的還元
PT3105253T (pt) 2014-02-12 2018-10-04 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-jagged1 e métodos de utilização
AU2015218633A1 (en) 2014-02-21 2016-09-01 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-DLL3 antibodies and drug conjugates for use in melanoma
CA2937556A1 (en) 2014-02-21 2015-08-27 Genentech, Inc. Anti-il-13/il-17 bispecific antibodies and uses thereof
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
CN104672330A (zh) * 2014-03-11 2015-06-03 南京任诺药业有限公司 用于构建放射性同位素偶联标记的ADC药物的改造抗体IgG1-CH-N267C
CN104788566A (zh) * 2014-03-11 2015-07-22 南京任诺药业有限公司 用于构建放射性同位素偶联标记的ADC药物的改造抗体IgG1-CH-V280C
AU2015229463A1 (en) * 2014-03-12 2016-09-15 Novartis Ag Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
CA2942685C (en) 2014-03-14 2023-09-05 Daniel J. Capon Hybrid immunoglobulin containing non-peptidyl linkage
PL3116999T3 (pl) 2014-03-14 2021-12-27 F.Hoffmann-La Roche Ag Sposoby i kompozycje do wydzielania polipeptydów heterologicznych
CN106471010A (zh) 2014-03-19 2017-03-01 建新公司 靶向模块的位点特异性糖工程化
MX2016012285A (es) 2014-03-24 2017-01-23 Genentech Inc Tratamiento de cáncer con antagonista de c-met y correlación de estos con la expresión de hgf.
PL3122781T3 (pl) 2014-03-28 2020-06-15 Xencor, Inc. Dwuswoiste przeciwciała, które wiążą się z CD38 i CD3
SI3126394T1 (sl) 2014-03-31 2020-01-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa proti OX40 in postopki uporabe
CN106132439A (zh) 2014-03-31 2016-11-16 豪夫迈·罗氏有限公司 包含抗血管发生剂和ox40结合激动剂的组合疗法
US10285955B2 (en) 2014-04-10 2019-05-14 Af Chemicals, Llc Affinity medicant conjugate
KR20160142885A (ko) 2014-04-10 2016-12-13 에이에프 케미칼스, 엘엘씨 친화성 약제 컨쥬게이트
US11135182B2 (en) 2014-04-10 2021-10-05 Af Chemicals, Llc Affinity medicant conjugates
EP3129055B1 (en) 2014-04-11 2020-07-01 MedImmune, LLC Bispecific her2 antibodies
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
JP6649895B2 (ja) 2014-04-18 2020-02-19 アクセルロン ファーマ， インコーポレイテッド 赤血球レベルを増加させ、そして鎌状赤血球症を処置するための方法
ES2783376T3 (es) 2014-04-25 2020-09-17 Rinat Neuroscience Corp Conjugados de anticuerpo-fármaco con alta carga de fármaco
PT3134124T (pt) 2014-04-25 2019-06-03 Pf Medicament Conjugado anticorpo-fármaco igf-1r e a sua utilização para o tratamento de cancro
RS59799B1 (sr) 2014-04-25 2020-02-28 Pf Medicament Konjugat antitelo - lek i njegova upotreba u lečenju kancera
HUE052223T2 (hu) 2014-04-25 2021-04-28 Pf Medicament IGF-1R ellenanyag és alkalmazása rák kezelésében célzóeszközként
CN106536561A (zh) 2014-05-01 2017-03-22 豪夫迈·罗氏有限公司 抗‑因子d抗体变体及其用途
CA2947238A1 (en) * 2014-05-22 2015-11-26 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Site-specific conjugation of linker drugs to antibodies and resulting adcs
BR112016027222A2 (pt) 2014-05-22 2018-01-30 Genentech Inc anticorpos isolados, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, métodos de tratamento de um indivíduo com um câncer, de inibição da proliferação de uma célula, de detecção de gpc3 humano e de detecção de um câncer
CN106661622B (zh) 2014-05-23 2020-08-21 豪夫迈·罗氏有限公司 Mit生物标志物和使用它们的方法
AU2015271685B2 (en) 2014-06-04 2021-02-18 Biontech Research And Development, Inc. Human monoclonal antibodies to ganglioside GD2
KR102557615B1 (ko) 2014-06-06 2023-07-20 레드우드 바이오사이언스 인코포레이티드 항-her2 항체-메이탄신 컨쥬게이트 및 이것의 사용 방법
WO2015191715A1 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Genentech, Inc. Anti-lgr5 antibodies and uses thereof
WO2015191986A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
BR122023023170A2 (pt) 2014-06-13 2024-02-20 Acceleron Pharma Inc. Uso de um antagonista de actrii no tratamento ou prevenção de úlcera cutânea associada com beta-talassemia
JP2017528418A (ja) 2014-06-20 2017-09-28 バイオアライアンス コマンディテール フェンノートシャップ 抗葉酸受容体アルファ（ｆｒａ）抗体−薬物コンジュゲート及びその使用方法
AR100978A1 (es) 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
RU2705299C2 (ru) 2014-06-26 2019-11-06 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела против 5-бром-2'-дезоксиуридина и способы применения
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
CN105440135A (zh) * 2014-09-01 2016-03-30 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物
KR20170029490A (ko) 2014-07-11 2017-03-15 제넨테크, 인크. 노치 경로 억제
MY188940A (en) 2014-07-11 2022-01-13 Ventana Med Syst Inc Anti-pd-l1 antibodies and diagnostic uses thereof
US9139648B1 (en) 2014-07-15 2015-09-22 Kymab Limited Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain
US20160060360A1 (en) 2014-07-24 2016-03-03 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
CN106999578B (zh) 2014-07-31 2022-03-04 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 针对epha4的人类单克隆抗体和其用途
KR102818922B1 (ko) 2014-08-28 2025-06-11 바이오아트라, 인코퍼레이티드 변형된 t 세포에 대한 조건부 활성 키메라 항원 수용체
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
EP3189057A1 (en) 2014-09-03 2017-07-12 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
PL3189056T3 (pl) 2014-09-03 2020-11-02 Immunogen, Inc. Cytotoksyczne pochodne benzodiazepinowe
TW201617368A (zh) 2014-09-05 2016-05-16 史坦森特瑞斯公司 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法
EP3193940A1 (en) 2014-09-10 2017-07-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3191134B1 (en) 2014-09-12 2019-11-20 Genentech, Inc. Anthracycline disulfide intermediates, antibody-drug conjugates and methods
AR101848A1 (es) 2014-09-12 2017-01-18 Genentech Inc Anticuerpos de anti-b7-h4 e inmunoconjugados
EP3191520B1 (en) 2014-09-12 2020-01-01 Genentech, Inc. Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
CN107108724A (zh) 2014-09-12 2017-08-29 豪夫迈·罗氏有限公司 半胱氨酸改造抗体和缀合物
DK3191135T3 (da) 2014-09-12 2020-10-12 Genentech Inc Anti-HER2-antistoffer og immunokonjugater
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
MX2017003523A (es) 2014-09-17 2017-11-08 Genentech Inc Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de anticuerpo-disulfuro de las mismas.
MX2017003472A (es) 2014-09-17 2017-10-31 Genentech Inc Inmunoconjugados que comprenden anticuerpos anti-her2.
DK3262071T3 (da) 2014-09-23 2020-06-15 Hoffmann La Roche Fremgangsmåde til anvendelse af anti-CD79b-immunkonjugater
SG11201702786RA (en) 2014-10-09 2017-05-30 Genzyme Corp Glycoengineered antibody drug conjugates
CN107250104B (zh) * 2014-10-16 2019-08-16 墨尔本大学 新型成像组合物及其用途
CN107074938A (zh) 2014-10-16 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 抗‑α‑突触核蛋白抗体和使用方法
US9821059B2 (en) 2014-10-17 2017-11-21 Alteogen Inc. Composition for stabilizing protein and pharmaceutical formulation comprising the same
KR102210104B1 (ko) 2014-10-17 2021-02-01 코디악 사이언시스 인코포레이티드 부티릴콜린에스테라제 양성이온성 중합체 컨쥬게이트
GB201419108D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Glythera Ltd Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates
KR101969121B1 (ko) * 2014-10-28 2019-04-15 에스케이텔레콤 주식회사 시스테인 조작된 항체
GB201419185D0 (en) * 2014-10-28 2014-12-10 Adc Biotechnology Ltd Method of synthesising ADCs using affinity resin
CA2966005C (en) 2014-10-31 2021-04-27 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-cs1 antibodies and antibody drug conjugates
CA2966507A1 (en) 2014-11-03 2016-05-12 Genentech, Inc. Methods and biomarkers for predicting efficacy and evaluation of an ox40 agonist treatment
CN106796235B (zh) 2014-11-03 2021-01-29 豪夫迈·罗氏有限公司 用于检测t细胞免疫子集的测定法及其使用方法
CA2960569A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 F. Hoffmann-Laroche Ag Fc-region variants with modified fcrn- and protein a-binding properties
HRP20191766T1 (hr) 2014-11-06 2019-12-27 F. Hoffmann - La Roche Ag Varijante fc regije s modificiranim vezanjem na neonatalni fc receptor (fcrn) i postupci primjene
WO2016073157A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-ang2 antibodies and methods of use thereof
US10077287B2 (en) 2014-11-10 2018-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Tubulysin analogs and methods of making and use
EP3217787B1 (en) 2014-11-10 2019-04-17 F.Hoffmann-La Roche Ag Animal model for nephropathy and agents for treating the same
WO2016077381A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
PL3489256T3 (pl) 2014-11-14 2021-08-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Cząsteczki wiążące antygen zawierające trimer liganda z rodziny TNF
JP6993228B2 (ja) 2014-11-19 2022-03-03 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体／抗ｂａｃｅ１多重特異性抗体および使用方法
EP3845565A3 (en) 2014-11-19 2021-09-08 Genentech, Inc. Antibodies against bace1 and use thereof for neural disease immunotherapy
WO2016081643A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
WO2016079597A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 Axon Neuroscience Se Humanized tau antibodies in alzheimer's disease
SI3789402T1 (sl) 2014-11-20 2022-10-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Kombinirano zdravljenje z bispecifičnimi molekulami, ki vežejo antigen in aktivirajo celice T, ter antagonisti za vezavo osi PD-1
KR20170101895A (ko) 2014-11-25 2017-09-06 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 접합체
SMT202100521T1 (it) 2014-11-26 2021-11-12 Xencor Inc Anticorpi eterodimerici che legano cd3 e cd20
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
PE20171103A1 (es) 2014-11-26 2017-08-07 Xencor Inc Anticuerpos heterodimericos que se unen a cd3 y cd38
MX2017007055A (es) 2014-12-03 2017-11-08 Genentech Inc Conjugados de anticuerpo rifamicina anti-staphylococcus aureus y usos de estos.
MA41119A (fr) 2014-12-03 2017-10-10 Acceleron Pharma Inc Méthodes de traitement de syndromes myélodysplasiques et d'anémie sidéroblastique
CN107249642A (zh) 2014-12-03 2017-10-13 豪夫迈·罗氏有限公司 抗金黄色葡萄球菌抗体利福霉素缀合物及其用途
ES2764111T3 (es) 2014-12-03 2020-06-02 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos
CN107206101B (zh) 2014-12-03 2021-06-25 基因泰克公司 季铵化合物及其抗体-药物缀合物
MX386587B (es) 2014-12-05 2025-03-19 Genentech Inc ANTICUERPOS ANTI-CD79b Y MÉTODOS DE USO.
SG10202008076RA (en) 2014-12-05 2020-09-29 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting fc receptor-like 5 and uses thereof
WO2016094566A2 (en) 2014-12-10 2016-06-16 Genentech, Inc. Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
MX2017005774A (es) 2014-12-19 2017-07-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos antimiostatina, polipeptidos que contienen regiones fc variantes, y metodos de uso.
AR103162A1 (es) 2014-12-19 2017-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos anti-c5 y métodos para su uso
EP3237449A2 (en) 2014-12-22 2017-11-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
BR112017014937A2 (pt) 2015-01-14 2018-03-13 Bristol-Myers Squibb Company dímeros de benzodiazepina ligados em ponte a heteroarileno, conjugados dos mesmos, e métodos de preparação e uso
CN107428833B (zh) 2015-01-16 2021-11-02 朱诺治疗学股份有限公司 Ror1特异性抗体和嵌合抗原受体
EP3247723A1 (en) 2015-01-22 2017-11-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A combination of two or more anti-c5 antibodies and methods of use
CN107108729A (zh) 2015-02-05 2017-08-29 中外制药株式会社 包含离子浓度依赖性的抗原结合结构域的抗体，fc区变体，il‑8‑结合抗体，及其应用
EP3259285A2 (en) 2015-02-16 2017-12-27 Lonza Ltd Cl and/or ch1 mutated antibodies for drug conjugation
MA41645A (fr) * 2015-03-04 2018-01-09 Abbvie Stemcentrx Llc Anticorps issus de génie génétique spécifiques au site et méthodes d'utilisation
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
EP3265557B1 (en) 2015-03-06 2019-10-16 F. Hoffmann-La Roche AG Ultrapurified dsba and dsbc and methods of making and using the same
JP6764873B2 (ja) 2015-03-09 2020-10-07 アジェンシス，インコーポレイテッド Ｆｌｔ３タンパク質に結合する抗体薬物複合体（ａｄｃ）
RS64955B1 (sr) 2015-03-09 2024-01-31 Heidelberg Pharma Res Gmbh Konjugati amatoksin-antitelo
CN107430117A (zh) 2015-03-16 2017-12-01 豪夫迈·罗氏有限公司 检测和定量IL‑13的方法和在诊断和治疗Th2相关疾病中的用途
CA2979976A1 (en) * 2015-03-17 2016-09-22 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-muc16 antibodies and uses thereof
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
EP3277314A4 (en) 2015-04-03 2018-08-29 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting afp peptide/mhc complexes and uses thereof
CA2981833A1 (en) 2015-04-06 2016-10-13 Acceleron Pharma Inc. Alk7:actriib heteromultimers and uses thereof
MA41919A (fr) 2015-04-06 2018-02-13 Acceleron Pharma Inc Hétéromultimères alk4:actriib et leurs utilisations
IL283764B2 (en) 2015-04-10 2024-01-01 Amgen Inc Interleukin-2 muteins for the expansion of t-regulatory cells
AU2016246134B2 (en) 2015-04-10 2022-04-21 Thomas Jefferson University Methods and compositions for treating cancers and enhancing therapeutic immunity by selectively reducing immunomodulatory M2 monocytes
GB201506389D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
WO2016166348A1 (en) 2015-04-17 2016-10-20 Elsalys Biotech Anti-tyro3 antibodies and uses thereof
CN113552350B (zh) * 2015-04-21 2024-10-11 基因泰克公司 用于前列腺癌分析的组合物和方法
HRP20211159T1 (hr) 2015-04-24 2021-10-29 F. Hoffmann - La Roche Ag Postupci identifikacije bakterija koje sadrže vezujuće polipeptide
KR102462811B1 (ko) 2015-04-27 2022-11-04 에이비온 주식회사 항체에 덴드론이 접합된 면역접합체 및 이의 용도
WO2016179003A1 (en) 2015-05-01 2016-11-10 Genentech, Inc. Masked anti-cd3 antibodies and methods of use
JP6963508B2 (ja) 2015-05-11 2021-11-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド ループス腎炎を治療する組成物及び方法
FI3294770T4 (fi) 2015-05-12 2024-05-24 Hoffmann La Roche Syöpään liittyviä terapeuttisia ja diagnostisia menetelmiä
MX392706B (es) 2015-05-28 2025-03-24 Genentech Inc Ensayo a base de células para detectar homodímeros anti-cd3.
PL3303632T5 (pl) 2015-05-29 2023-07-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Terapeutyczne i diagnostyczne sposoby stosowane w nowotworze
WO2016196343A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Genentech, Inc. Humanized anti-ebola virus glycoprotein antibodies and methods of use
CN106267225B (zh) 2015-05-29 2020-03-06 上海新理念生物医药科技有限公司 三马来酰亚胺型连接子及其应用
EP3302552A1 (en) 2015-06-02 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Compositions and methods for using anti-il-34 antibodies to treat neurological diseases
WO2016193497A1 (en) 2015-06-04 2016-12-08 Ospedale San Raffaele Srl Inhibitor of igfbp3/tmem219 axis and diabetes
EA201792669A1 (ru) 2015-06-04 2018-06-29 Оспедале Сан Раффаэле Срл Igfbp3 и его применение
TW202428606A (zh) 2015-06-05 2024-07-16 美商建南德克公司 抗－ｔａｕ抗體及使用方法
KR20180025888A (ko) 2015-06-08 2018-03-09 제넨테크, 인크. 항-ox40 항체 및 pd-1 축 결합 길항제를 사용하여 암을 치료하는 방법
WO2016200836A1 (en) 2015-06-08 2016-12-15 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies
AR104987A1 (es) 2015-06-15 2017-08-30 Genentech Inc Inmunoconjugados anticuerpo-fármaco unidos por enlazadores no peptídicos
US10501545B2 (en) 2015-06-16 2019-12-10 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and methods of use
FI3310814T3 (fi) 2015-06-16 2023-09-21 Hoffmann La Roche HUMANISOITUJA JA AFFINITEETTIKYPSIÄ FcRH5-VASTA-AINEITA JA KÄYTTÖMENETELMIÄ
WO2016204966A1 (en) 2015-06-16 2016-12-22 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
CN107787331B (zh) 2015-06-17 2022-01-11 豪夫迈·罗氏有限公司 抗her2抗体和使用方法
KR102718129B1 (ko) 2015-06-19 2024-10-17 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 cys80 접합된 면역글로불린
EP3313877B1 (en) 2015-06-24 2020-06-03 H. Hoffnabb-La Roche Ag Humanized anti-tau(ps422) antibodies and methods of use
AU2016282334B2 (en) 2015-06-24 2022-07-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-transferrin receptor antibodies with tailored affinity
CN107531788B (zh) 2015-06-24 2022-06-21 豪夫迈·罗氏有限公司 对her2和血脑屏障受体特异性的三特异性抗体及使用方法
CA2989936A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Genentech, Inc. Type ii anti-cd20 antibody for use in organ transplantation
WO2017004025A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Immunogen, Inc. Conjugates of cysteine engineered antibodies
EP3978525A1 (en) 2015-06-29 2022-04-06 Ventana Medical Systems, Inc. Materials and methods for performing histochemical assays for human pro-epiregulin and amphiregulin
JP6759326B2 (ja) 2015-07-12 2020-09-23 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 細胞結合分子の共役のための架橋連結体
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
CN116327952A (zh) 2015-08-04 2023-06-27 阿塞勒隆制药公司 用于治疗骨髓增生性病症的方法
RU2765242C2 (ru) 2015-08-07 2022-01-27 Имаджинаб, Инк. Антигенсвязывающие конструкции против молекул-мишеней
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
JP6889149B2 (ja) 2015-08-13 2021-06-18 アムジエン・インコーポレーテツド 抗原結合タンパク質の荷電深層ろ過
CN106467575B (zh) * 2015-08-18 2020-07-31 四川百利药业有限责任公司 半胱氨酸改造的抗体-毒素偶联物
US10906990B2 (en) 2015-08-19 2021-02-02 Riken Antibody with non-natural amino acid introduced therein
WO2017029407A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Albumedix A/S Albumin variants and conjugates
GB201514928D0 (en) 2015-08-21 2015-10-07 King S College London PDD compounds
EP3341415B1 (en) 2015-08-28 2021-03-24 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-hypusine antibodies and uses thereof
CA2999369C (en) 2015-09-22 2023-11-07 Spring Bioscience Corporation Anti-ox40 antibodies and diagnostic uses thereof
TWI748962B (zh) 2015-09-23 2021-12-11 美商建南德克公司 抗ｖｅｇｆ抗體之最佳化變異體
EP3352791B1 (en) 2015-09-24 2019-10-30 AbVitro LLC Hiv antibody compositions and methods of use
KR20230125094A (ko) 2015-09-25 2023-08-28 제넨테크, 인크. 항-tigit 항체 및 이의 이용 방법
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
CR20180163A (es) 2015-10-02 2018-05-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos específicos para un receptor de tnf coestimulador
LT3356404T (lt) 2015-10-02 2021-11-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Pd1 antikūnai ir jų naudojimo metodai
CN114057885A (zh) 2015-10-02 2022-02-18 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗人cd20/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
KR102431342B1 (ko) 2015-10-02 2022-08-10 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd1 및 tim3에 특이적인 이중특이성 항체
CR20180171A (es) 2015-10-07 2018-05-03 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos con tetravalencia para un receptor de fnt coestimulador
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
BR112018008311A2 (pt) 2015-10-26 2018-10-30 Pf Medicament composição para o tratamento do câncer expressando igf-1r
US9669106B2 (en) 2015-10-26 2017-06-06 Pierre Fabre Medicament Conjugate of monomethyl auristatin F and trastuzumab and its use for the treatment of cancer
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
MA44334A (fr) 2015-10-29 2018-09-05 Novartis Ag Conjugués d'anticorps comprenant un agoniste du récepteur de type toll
KR20240163189A (ko) 2015-10-29 2024-11-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-변이체 fc-부위 항체 및 사용 방법
JP2018534930A (ja) 2015-10-30 2018-11-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｄ因子抗体及びコンジュゲート
HK1257425A1 (zh) 2015-10-30 2019-10-18 豪夫迈‧罗氏有限公司 測量因子d活性和因子d抑制劑效力的方法
WO2017075259A1 (en) 2015-10-30 2017-05-04 Genentech, Inc. Anti-factor d antibody formulations
JP2018536650A (ja) 2015-10-30 2018-12-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｄ因子抗体変異体コンジュゲート及びその使用
NZ741780A (en) 2015-10-30 2019-11-29 Genentech Inc Anti-htra1 antibodies and methods of use thereof
US11123430B2 (en) 2015-11-04 2021-09-21 Acceleron Pharma Inc. Methods for increasing red blood cell levels and treating ineffective erythropoiesis
CN108602884B (zh) 2015-11-08 2024-06-25 豪夫迈·罗氏有限公司 筛选多特异性抗体的方法
AU2016354009B2 (en) 2015-11-09 2021-05-20 R.P. Scherer Technologies, Llc Anti-CD22 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
WO2017091706A1 (en) 2015-11-23 2017-06-01 Acceleron Pharma Inc. Methods for treating eye disorders
HUE055482T2 (hu) 2015-11-24 2021-11-29 Byondis Bv 5T4 elleni ellenanyagok és ellenanyag-drog konjugátumok
US10195209B2 (en) 2015-11-30 2019-02-05 Abbvie Inc. Anti-huLRRC15 antibody drug conjugates and methods for their use
EP3383909B1 (en) 2015-11-30 2020-06-17 AbbVie Inc. Anti-human lrrc15 antibody drug conjugates and methods for their use
CA2949032A1 (en) 2015-11-30 2017-05-30 Pfizer Inc. Site specific her2 antibody drug conjugates
MY197441A (en) 2015-12-04 2023-06-19 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies targeting fc receptor-like 5 and method of use
KR20180085800A (ko) 2015-12-07 2018-07-27 젠코어 인코포레이티드 Cd3 및 psma에 결합하는 이종이합체성 항체
SG11201610782YA (en) 2015-12-18 2017-07-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-c5 antibodies and methods of use
CN108473562B (zh) 2015-12-18 2022-06-17 中外制药株式会社 抗-肌肉生长抑制因子抗体、包含变体fc区的多肽及使用方法
KR20180089433A (ko) 2015-12-21 2018-08-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 부위-특이적 접합을 위한 변이체 항체
CA3010056A1 (en) 2015-12-30 2017-07-06 Kodiak Sciences Inc. Antibodies and conjugates thereof
IL260289B (en) 2016-01-08 2022-08-01 Bioalliance Cv Tetravalent anti-psgl-1 antibodies and uses thereof
US11583593B2 (en) * 2016-01-14 2023-02-21 Synthis Therapeutics, Inc. Antibody-ALK5 inhibitor conjugates and their uses
BR112018014762A2 (pt) 2016-01-20 2018-12-26 Genentech Inc método de tratamento da doença de alzheimer (da) precoce
JP7438662B2 (ja) 2016-01-25 2024-02-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｔ細胞依存性二重特異的抗体をアッセイするための方法
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US20190031743A1 (en) 2016-01-29 2019-01-31 Achaogen, Inc. Screening methods for identifying antibodies that bind cell surface epitopes
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
SG11201809830WA (en) 2016-02-12 2018-12-28 Synthon Biopharmaceuticals Bv Selective reduction of cysteine-engineered antibodies
US20190194338A1 (en) 2016-02-17 2019-06-27 Seattle Genetics, Inc. Bcma antibodies and use of same to treat cancer and immunological disorders
KR20180115743A (ko) * 2016-02-26 2018-10-23 지앙수 헨그루이 메디슨 컴퍼니 리미티드 신규 독소, 및 이의 중간체를 제조하는 방법
KR102500659B1 (ko) 2016-02-29 2023-02-16 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
CN108883198B (zh) 2016-03-02 2022-08-09 卫材研究发展管理有限公司 基于艾日布林的抗体-药物偶联物和使用方法
WO2017151947A1 (en) * 2016-03-02 2017-09-08 George Robert Pettit 4-azapodophylotoxins compounds
JP6705904B2 (ja) 2016-03-04 2020-06-03 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体−リファマイシン複合体の製造プロセス
AU2017238172B2 (en) 2016-03-21 2024-06-27 Marengo Therapeutics, Inc. Multispecific and multifunctional molecules and uses thereof
EP3433621A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 H. Hoffnabb-La Roche Ag Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
CN109069657B (zh) 2016-04-06 2022-04-12 阿特根公司 包含修饰抗体的抗体-药物缀合物
WO2017176007A1 (ko) * 2016-04-06 2017-10-12 (주)알테오젠 변형항체를 포함하는 항체-약물 접합체
EP3865511A1 (en) 2016-04-14 2021-08-18 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-rspo3 antibodies and methods of use
KR102693176B1 (ko) 2016-04-15 2024-08-12 베크만 컬터, 인코포레이티드 광활성 거대분자 및 그의 용도
EP3443350B1 (en) 2016-04-15 2020-12-09 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods for monitoring and treating cancer
EP3443120A2 (en) 2016-04-15 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods for monitoring and treating cancer
CA3021098A1 (en) 2016-04-21 2017-10-26 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-bmpr1b antibodies and methods of use
CA3019398A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
BR112018069890A2 (pt) 2016-05-02 2019-02-05 Hoffmann La Roche polipeptídio de fusão que se liga de forma específica a um alvo, polipeptídio de fusão dimérico, ácido nucleico isolado, par de ácidos nucleicos isolados, célula hospedeira, método para produzir um polipeptídio de fusão, imunoconjugado, formulação farmacêutica, polipeptídio de fusão e uso do polipeptídio de fusão
AR108377A1 (es) 2016-05-06 2018-08-15 Medimmune Llc Proteínas de unión biespecíficas y sus usos
JP7285076B2 (ja) 2016-05-11 2023-06-01 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｔｎｆファミリーリガンドトリマーとテネイシン結合部分とを含む抗原結合分子
WO2017197045A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Movassaghi Mohammad Convergent and enantioselective total synthesis of communesin analogs
EP3243836A1 (en) 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
JP7089483B2 (ja) 2016-05-11 2022-06-22 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 修飾された抗テネイシン抗体及び使用方法
PT3455261T (pt) 2016-05-13 2022-11-11 Bioatla Llc Anticorpos anti-ror2, fragmentos de anticorpo, seus imunoconjugados e suas utilizações
EP3243832A1 (en) 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
BR112018073574A2 (pt) 2016-05-17 2019-03-19 Abbvie Biotherapeutics Inc. conjugados de anticorpo-fármaco anti-cmet e métodos para a sua utilização
EP3458101B1 (en) 2016-05-20 2020-12-30 H. Hoffnabb-La Roche Ag Protac antibody conjugates and methods of use
US20170370906A1 (en) 2016-05-27 2017-12-28 Genentech, Inc. Bioanalytical analysis of site-specific antibody drug conjugates
CN109476648B (zh) 2016-06-06 2022-09-13 豪夫迈·罗氏有限公司 司维司群抗体-药物缀合物和使用方法
AU2017285218B2 (en) 2016-06-14 2024-08-22 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
BR112018075516A2 (pt) 2016-06-17 2019-10-01 Genentech Inc purificação de anticorpos multiespecíficos
TWI760396B (zh) 2016-06-17 2022-04-11 日商中外製藥股份有限公司 抗肌抑素抗體及使用方法
EP3471753A1 (en) 2016-06-20 2019-04-24 Kymab Limited Anti-pd-l1 and il-2 cytokines
EP3475298A1 (en) 2016-06-24 2019-05-01 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
CN109715663B (zh) 2016-06-28 2022-11-25 Xencor股份有限公司 结合生长抑素受体2的异源二聚抗体
CN115317603A (zh) 2016-07-07 2022-11-11 小利兰·斯坦福大学托管委员会 抗体佐剂缀合物
EP3482205A1 (en) 2016-07-08 2019-05-15 H. Hoffnabb-La Roche Ag Use of human epididymis protein 4 (he4) for assessing responsiveness of muc 16-positive cancer treatment
CA3030859C (en) 2016-07-15 2024-04-23 Acceleron Pharma Inc. Compositions and methods for treating pulmonary hypertension
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
US20180050085A1 (en) 2016-07-27 2018-02-22 Acceleron Pharma Inc. Methods and compositions for treating myelofibrosis
CN110088133B (zh) 2016-07-29 2023-12-08 朱诺治疗学股份有限公司 抗独特型抗体及相关方法
WO2018027204A1 (en) 2016-08-05 2018-02-08 Genentech, Inc. Multivalent and multiepitopic anitibodies having agonistic activity and methods of use
TWI831965B (zh) 2016-08-05 2024-02-11 日商中外製藥股份有限公司 Il-8相關疾病之治療用或預防用組成物
JP7093767B2 (ja) 2016-08-11 2022-06-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート
KR102617148B1 (ko) 2016-08-15 2023-12-26 제넨테크, 인크. 비이온성 계면활성제 및 폴리펩티드를 포함하는 조성물에서 비이온성 계면활성제를 정량화하기 위한 크로마토그래피 방법
JP7023933B2 (ja) 2016-08-19 2022-02-22 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー セコ－シクロプロパピロロインドール化合物、その抗体－薬物コンジュゲート、ならびに製造および使用方法
EP3504155B1 (en) 2016-08-25 2023-03-08 Roche Diagnostics GmbH Multifunctionalized silicon nanoparticles and uses thereof in electrochemiluminescence based detection methods
UY37376A (es) * 2016-08-26 2018-03-23 Amgen Inc Construcciones de arni para inhibir expresión de asgr1 y métodos para su uso
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
EP3515932B1 (en) 2016-09-19 2023-11-22 F. Hoffmann-La Roche AG Complement factor based affinity chromatography
HUE063135T2 (hu) 2016-09-23 2023-12-28 Hoffmann La Roche IL-13 antagonisták alkalmazásai atópiás dermatitis kezelésére
MA46354A (fr) 2016-10-03 2019-08-07 Juno Therapeutics Inc Molécules se liant spécifiquement au vph
CN110198743B (zh) 2016-10-05 2023-07-18 艾科赛扬制药股份有限公司 用于治疗肾脏疾病的组合物和方法
JP7050770B2 (ja) 2016-10-05 2022-04-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗体薬物コンジュゲートの調製方法
EP3523451A1 (en) 2016-10-06 2019-08-14 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
CN107789630A (zh) * 2016-10-08 2018-03-13 四川百利药业有限责任公司 半胱氨酸改造的抗体‑毒素偶联物及其制备方法
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
KR20240038176A (ko) 2016-10-14 2024-03-22 젠코어 인코포레이티드 IL15/IL15Rα 이종이량체 Fc-융합 단백질
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
US20200140565A1 (en) 2016-10-20 2020-05-07 I-Mab Novel cd47 monoclonal antibodies and uses thereof
US10398783B2 (en) 2016-10-20 2019-09-03 Bristol-Myers Squibb Company Antiproliferative compounds and conjugates made therefrom
JP2019535250A (ja) 2016-10-29 2019-12-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｍｉｃ抗体及び使用方法
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
WO2018085769A1 (en) * 2016-11-07 2018-05-11 Seattle Genetics, Inc. Distribution of engineered-cysteine caps
CA3042442C (en) 2016-11-14 2024-01-02 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Conjugation linkers, cell binding molecule-drug conjugates containing the linkers, methods of making and uses of such conjugates with the linkers
KR20240029119A (ko) 2016-11-15 2024-03-05 제넨테크, 인크. 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체에 의한 치료를 위한 투약
TW201829463A (zh) 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
EP3468991A1 (en) 2016-11-21 2019-04-17 cureab GmbH Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
KR20230133935A (ko) 2016-11-23 2023-09-19 이뮤노젠 아이엔씨 벤조다이아제핀 유도체의 선택적인 설폰화
CN110234661B (zh) 2016-12-01 2024-03-29 瑞泽恩制药公司 用于免疫pet成像的放射性标记的抗-pd-l1抗体
MX2019006330A (es) 2016-12-07 2019-09-26 Genentech Inc Anticuerpos anti-tau y metodos de uso.
ES3021263T3 (en) 2016-12-07 2025-05-26 Genentech Inc Anti-tau antibodies and methods of use
EP3551663A1 (en) 2016-12-12 2019-10-16 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-pd-l1 antibodies and antiandrogens
WO2018112108A1 (en) 2016-12-13 2018-06-21 Bolt Biotherapeutics, Inc. Antibody adjuvant conjugates
CA3039430A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with targeted 4-1bb (cd137) agonists
AU2017384126B2 (en) 2016-12-20 2025-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies and 4-1BB (CD137) agonists
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
AU2018206138A1 (en) 2017-01-03 2019-07-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising anti-4-1BB clone 20H4.9
EP3568468A4 (en) 2017-01-12 2020-12-30 Eureka Therapeutics, Inc. RECOMBINATION PRODUCTS TARGETING PEPTIDE HISTONE H3 / MHC COMPLEXES AND THEIR USES
BR112019016373B1 (pt) 2017-02-08 2022-01-25 Medimmune Limited Conjugado anticorpo-fármaco que se liga ao axl, composição e composição farmacêutica que compreende o mesmo e uso terapêutico do dito conjugado
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
NZ754811A (en) 2017-02-08 2023-06-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2018147960A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Imaginab, Inc. Extension sequences for diabodies
PE20191548A1 (es) 2017-02-10 2019-10-24 Genentech Inc Anticuerpos contra triptasa, composiciones de estos y usos de estos
US20200291089A1 (en) 2017-02-16 2020-09-17 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules comprising a trimeric ligand and uses thereof
KR102697394B1 (ko) 2017-02-28 2024-08-20 씨젠 인크. 컨쥬게이션을 위한 시스테인 변이된 항체
AU2018228873A1 (en) 2017-03-01 2019-08-29 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
GB201703876D0 (en) 2017-03-10 2017-04-26 Berlin-Chemie Ag Pharmaceutical combinations
TWI839327B (zh) 2017-03-22 2024-04-21 美商建南德克公司 用於治療眼部病症之最佳化之抗體組合物
TWI848907B (zh) 2017-03-28 2024-07-21 美商建南德克公司 治療神經退化性疾病之方法
CN110382542B (zh) 2017-03-29 2023-06-09 豪夫迈·罗氏有限公司 针对共刺激性tnf受体的双特异性抗原结合分子
EP3601345A1 (en) 2017-03-29 2020-02-05 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
CA3053357A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Immunoconjugates of an anti-pd-1 antibody with a mutant il-2 or with il-15
AU2018247767B2 (en) 2017-04-03 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to STEAP-1
KR102364599B1 (ko) 2017-04-04 2022-02-21 에프. 호프만-라 로슈 아게 Cd40 및 fap에 특이적으로 결합할 수 있는 새로운 이중특이적 항원 결합 분자
FI3606955T3 (fi) 2017-04-05 2025-01-08 Hoffmann La Roche Pd1:een ja lag3:een spesifisesti sitoutuvia bispesifisiä vasta-aineita
TW201836647A (zh) 2017-04-06 2018-10-16 美商艾伯維有限公司 抗－ｐｒｌｒ抗體藥物軛合物（ａｄｃ）及其用途
AU2018250695A1 (en) 2017-04-14 2019-11-07 Kodiak Sciences Inc. Complement factor D antagonist antibodies and conjugates thereof
MX2019012192A (es) 2017-04-14 2020-01-21 Genentech Inc Métodos de diagnóstico y terapéuticos para el cáncer.
EP3609540B1 (en) 2017-04-14 2023-01-11 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugate synthesis method
EP3612537B1 (en) 2017-04-18 2022-07-13 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
ES2994451T3 (en) 2017-04-20 2025-01-24 Atyr Pharma Inc Compositions for treating lung inflammation
NZ756730A (en) 2017-04-20 2025-05-02 Medimmune Ltd Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
WO2018195243A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives and conjugates thereof
CN110536691A (zh) 2017-04-21 2019-12-03 豪夫迈·罗氏有限公司 Klk5拮抗剂治疗疾病的用途
KR102663596B1 (ko) 2017-04-26 2024-05-10 유레카 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 글리피칸 3을 특이적으로 인식하는 구축물 및 그의 용도
BR112019022515A2 (pt) 2017-04-27 2020-06-16 Tesaro, Inc. Agentes de anticorpo direcionados contra o gene 3 de ativação linfocitária (lag-3) e usos dos mesmos
EP3619191A4 (en) 2017-05-05 2020-12-16 Fusion Pharmaceuticals Inc. PHARMACOKINETIC ENHANCEMENTS OF BIFUNCTIONAL CHELATES AND THEIR USES
US10093741B1 (en) 2017-05-05 2018-10-09 Fusion Pharmaceuticals Inc. IGF-1R monoclonal antibodies and uses thereof
IL270457B2 (en) 2017-05-05 2024-11-01 Fusion Pharmaceuticals Inc Igf-1r monoclonal antibodies and uses thereof
JP7265788B2 (ja) * 2017-05-09 2023-04-27 シアノ バイオテック ゲーエムベーハー 修飾ミクロシスチンおよびノジュラリン
CN117683836A (zh) 2017-05-09 2024-03-12 辛利斯生物制药有限责任公司 用于修饰微囊藻毒素和节球藻毒素的方法
US11116835B2 (en) 2017-05-10 2021-09-14 Fred Hutchinson Cancer Research Center Epstein Barr virus antibodies, vaccines, and uses of the same
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
CN111010867B (zh) 2017-05-30 2023-05-12 俄克拉何马大学董事会 抗双皮层蛋白样激酶1抗体及其使用方法
US20210246227A1 (en) 2017-05-31 2021-08-12 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules that bind to myeloproliferative leukemia (mpl) protein and uses thereof
WO2018227018A1 (en) * 2017-06-07 2018-12-13 Silverback Therapeutics, Inc. Antibody conjugates of immune-modulatory compounds and uses thereof
WO2018229222A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Adc Therapeutics Sa Dosage regimes for the administration of an anti-cd19 adc
WO2018232088A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Eli Lilly And Company Engineered antibody compounds and conjugates thereof
CA3067603A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric fc fusion proteins containing il-15/il-15ra and antigen binding domains
AU2018304458B2 (en) 2017-07-21 2021-12-09 Foundation Medicine, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
US10487084B2 (en) 2017-08-16 2019-11-26 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a heterobiaryl moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10494370B2 (en) 2017-08-16 2019-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a pyridine or pyrazine moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
WO2019036433A2 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Bristol-Myers Squibb Company ANTIBODIES IN THE FORM OF PRODRUGS, PRODRUGS BASED THEREON, THEIR METHODS OF USE AND PREPARATION
US10508115B2 (en) 2017-08-16 2019-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having heteroatom-linked aromatic moieties, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10457681B2 (en) 2017-08-16 2019-10-29 Bristol_Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a tricyclic moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
US10472361B2 (en) 2017-08-16 2019-11-12 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a benzotriazole moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US11649250B2 (en) 2017-08-18 2023-05-16 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
IL273387B2 (en) 2017-09-20 2023-10-01 Ph Pharma Co Ltd Thailanstatin analogs
TWI826393B (zh) 2017-09-22 2023-12-21 美商免疫遺傳股份有限公司 使用陽離子交換層析法分離三輕鏈抗體
BR112020005675A2 (pt) 2017-09-22 2020-10-20 WuXi Biologics Ireland Limited novos complexos de polipeptideo cd3/cd19 biespecíficos
WO2019065795A1 (ja) 2017-09-29 2019-04-04 中外製薬株式会社 血液凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）補因子機能代替活性を有する多重特異性抗原結合分子および当該分子を有効成分として含有する薬学的製剤
US11364303B2 (en) 2017-09-29 2022-06-21 Pfizer Inc. Cysteine engineered antibody drug conjugates
WO2019070541A1 (en) 2017-10-03 2019-04-11 Juno Therapeutics, Inc. HPV-SPECIFIC BINDING MOLECULES
WO2019068756A1 (en) 2017-10-03 2019-04-11 Merck Patent Gmbh MODIFIED CYSTEINE MOLECULES BINDING TO ANTIGEN
JP2020536967A (ja) 2017-10-12 2020-12-17 イミュノウェイク インコーポレイテッド Ｖｅｇｆｒ−抗体軽鎖融合タンパク質
US11707522B2 (en) 2017-10-13 2023-07-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Human antibodies to Tn antigen
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
AU2018354189A1 (en) 2017-10-24 2020-04-23 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for the depletion of CD117+ cells
JP2021500902A (ja) 2017-11-01 2021-01-14 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 新規ｔｎｆファミリーリガンド三量体含有抗原結合分子
TW201930353A (zh) 2017-11-01 2019-08-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用經靶向之ox40促效劑的組合療法
SG11202002903XA (en) 2017-11-01 2020-04-29 Hoffmann La Roche Bispecific 2+1 contorsbodies
US11623961B2 (en) 2017-11-01 2023-04-11 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for B-cell maturation antigen
JP7430137B2 (ja) 2017-11-02 2024-02-09 オックスフォード バイオセラピューティクス リミテッド 抗体および使用方法
CN107789631B (zh) * 2017-11-03 2021-03-16 合肥瀚科迈博生物技术有限公司 抗人ErbB2双表位抗体-药物偶联物及其应用
KR20200075860A (ko) 2017-11-06 2020-06-26 제넨테크, 인크. 암의 진단 및 치료 방법
JP2021502100A (ja) 2017-11-08 2021-01-28 ゼンコア インコーポレイテッド 新規抗ｐｄ−１配列を用いた二重特異性および単一特異性抗体
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
EP3710066B1 (en) 2017-11-14 2022-06-08 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
CA3082310A1 (en) 2017-11-29 2019-06-06 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the depletion of cd5+ cells
MA51184A (fr) 2017-12-15 2020-10-21 Juno Therapeutics Inc Molécules de liaison à l'anti-cct5 et procédés d'utilisation associés
SG11202005732XA (en) 2017-12-19 2020-07-29 Xencor Inc Engineered il-2 fc fusion proteins
JP6933778B2 (ja) 2017-12-21 2021-09-08 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｈｌａ−ａ２／ｗｔ１に結合する抗体
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
TW201929907A (zh) 2017-12-22 2019-08-01 美商建南德克公司 Pilra結合劑用於治療疾病之用途
CA3078849A1 (en) 2017-12-28 2019-07-04 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Antibodies and variants thereof against pd-l1
US11793885B2 (en) 2017-12-28 2023-10-24 Immunogen, Inc. Substituted benzo[5,6][1,4]diazepino[1,2-a]indoles for the treatment of proliferative disorders
CN117050184A (zh) 2017-12-28 2023-11-14 南京传奇生物科技有限公司 针对tigit的单域抗体和其变体
EP3731865A1 (en) 2017-12-29 2020-11-04 F. Hoffmann-La Roche AG Method for improving vegf-receptor blocking selectivity of an anti-vegf antibody
CA3087537A1 (en) 2018-01-04 2019-07-11 Jan-willem THEUNISSEN Anti-tissue factor antibodies, antibody-drug conjugates, and related methods
EA202091650A1 (ru) 2018-01-05 2020-12-02 Ас Иммьюн Са Неправильно свернутые tdp-43-связывающие молекулы
US12247060B2 (en) 2018-01-09 2025-03-11 Marengo Therapeutics, Inc. Calreticulin binding constructs and engineered T cells for the treatment of diseases
TWI802633B (zh) 2018-01-15 2023-05-21 大陸商南京傳奇生物科技有限公司 針對pd-1之單域抗體及其變異體
TWI835772B (zh) 2018-01-26 2024-03-21 美商建南德克公司 Il-22fc融合蛋白及使用方法
HRP20221448T1 (hr) 2018-01-26 2023-01-20 F. Hoffmann - La Roche Ag Il-22 fc pripravci i postupci njihove primjene
WO2019157308A1 (en) 2018-02-08 2019-08-15 Genentech, Inc. Bispecific antigen-binding molecules and methods of use
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
CA3090538A1 (en) 2018-02-09 2019-08-15 Acceleron Pharma, Inc. Methods for treating heterotopic ossification
BR112020016172A2 (pt) 2018-02-09 2020-12-15 Genentech, Inc. Métodos de tratamento, métodos para determinar, métodos para selecionar uma terapia, métodos para avaliar uma resposta e monitorar a resposta, kits para identificar um paciente, agentes selecionados, agentes para uso, uso de um agente selecionado e uso de um antagonista
US11591399B2 (en) 2018-02-14 2023-02-28 Abba Therapeutics Ag Anti-human PD-L2 antibodies
KR20200123118A (ko) 2018-02-21 2020-10-28 제넨테크, 인크. IL-22 Fc 융합 단백질로 치료를 위한 투약
WO2019165434A1 (en) 2018-02-26 2019-08-29 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
SG11202008242XA (en) 2018-03-02 2020-09-29 Kodiak Sciences Inc Il-6 antibodies and fusion constructs and conjugates thereof
EP3533460A1 (en) 2018-03-02 2019-09-04 Diaccurate Therapeutic anti-spla2-gib antibodies and the uses thereof
EP3762426A2 (en) 2018-03-06 2021-01-13 Imcare Biotech, LLC Serine protease inhibitor kazal (spik) compositions and methods
CN119074915A (zh) 2018-03-13 2024-12-06 豪夫迈·罗氏有限公司 4-1bb激动剂与抗cd20抗体的治疗剂组合
TWI841551B (zh) 2018-03-13 2024-05-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 使用靶向4-1bb (cd137)之促效劑的組合療法
WO2019173911A1 (en) 2018-03-13 2019-09-19 Zymeworks Inc. Anti-her2 biparatopic antibody-drug conjugates and methods of use
US20210009711A1 (en) 2018-03-14 2021-01-14 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules and uses thereof
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
WO2019178362A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
WO2019174617A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. Anti-claudin 18.2 antibodies
MX2020009296A (es) 2018-03-15 2020-11-13 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos anti-virus del dengue que tienen reactividad cruzada con el virus zika y metodos de uso.
WO2019179420A1 (en) 2018-03-20 2019-09-26 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Novel anti-tim-3 antibodies
US11661452B2 (en) 2018-03-20 2023-05-30 WuXi Biologics Ireland Limited Anti-lag-3 antibody polypeptide
SG11202008098TA (en) 2018-03-28 2020-10-29 Axon Neuroscience Se Antibody-based methods of detecting and treating alzheimer's disease
EP3775184A1 (en) 2018-03-29 2021-02-17 F. Hoffmann-La Roche AG Modulating lactogenic activity in mammalian cells
WO2019191630A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Abbvie Inc. Selective reduction of antibodies
US11958903B2 (en) 2018-03-30 2024-04-16 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies against LAG-3 and uses thereof
CA3096052A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
MX2020010460A (es) 2018-04-05 2021-01-29 Juno Therapeutics Inc Receptores de células t, y células diseñadas que expresan los mismos.
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP7418346B2 (ja) 2018-04-13 2024-01-19 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ４－１ＢＢＬを含むＨｅｒ２標的化抗原結合分子
US11505595B2 (en) 2018-04-18 2022-11-22 Xencor, Inc. TIM-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15RA Fc-fusion proteins and TIM-3 antigen binding domains
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
CN112867734A (zh) 2018-04-18 2021-05-28 Xencor股份有限公司 包含IL-15/IL-15Ra Fc融合蛋白和PD-1抗原结合结构域的靶向PD-1的异源二聚体融合蛋白及其用途
AR114789A1 (es) 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
US11485741B2 (en) 2018-04-24 2022-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic toll-like receptor 7 (TLR7) agonists
CN110464842B (zh) 2018-05-11 2022-10-14 信达生物制药(苏州)有限公司 包含抗pcsk9抗体的制剂及其用途
WO2019227490A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
CA3102230A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and uses thereof for treating disease or condition
CN119405833A (zh) 2018-06-01 2025-02-11 卫材R&D管理有限公司 剪接调节抗体-药物缀合物及其使用方法
SG11202010579XA (en) 2018-06-01 2020-12-30 Novartis Ag Binding molecules against bcma and uses thereof
WO2019235426A1 (ja) 2018-06-04 2019-12-12 中外製薬株式会社 細胞質内での半減期が変化した抗原結合分子
TWI851577B (zh) 2018-06-07 2024-08-11 美商思進公司 喜樹鹼結合物
GB201809746D0 (en) 2018-06-14 2018-08-01 Berlin Chemie Ag Pharmaceutical combinations
WO2019242505A1 (zh) 2018-06-17 2019-12-26 上海健信生物医药科技有限公司 靶向cldn18.2的抗体、双特异性抗体、adc和car及其应用
US11993661B2 (en) 2018-06-18 2024-05-28 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting prostate-specific membrane antigen (PSMA) and uses thereof
WO2019243825A1 (en) 2018-06-21 2019-12-26 Curadev Pharma Limited Small molecule modulators of human sting, conjugates and therapeutic applications
MX2021000163A (es) 2018-07-02 2021-05-27 Amgen Inc Proteina de union al antigeno anti-steap1.
CN112955465A (zh) 2018-07-03 2021-06-11 马伦戈治疗公司 抗tcr抗体分子及其用途
JP2021528988A (ja) 2018-07-04 2021-10-28 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 新規の二重特異性アゴニスト４−１ｂｂ抗原結合分子
TWI841577B (zh) 2018-07-20 2024-05-11 美商表面腫瘤學公司 抗ｃｄ１１２ｒ組合物及方法
CN112739340B (zh) 2018-07-23 2025-05-13 海德堡医药研究有限责任公司 抗cd5抗体药物缀合物(adc)在同种异体细胞疗法中的用途
US11857638B2 (en) 2018-07-27 2024-01-02 Promega Corporation Quinone-containing conjugates
AU2019315226A1 (en) 2018-08-03 2021-03-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule containing two antigen-binding domains that are linked to each other
US11554120B2 (en) 2018-08-03 2023-01-17 Bristol-Myers Squibb Company 1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (TLR7) agonists and methods and uses therefor
CR20210127A (es) 2018-08-10 2021-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molécula de unión al antigeno anti grupo de diferenciación 137 (cd137) y su uso
TW202021618A (zh) 2018-08-17 2020-06-16 美商２３與我有限公司 抗ｉｌ１ｒａｐ抗體及其使用方法
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
KR102353086B1 (ko) * 2018-09-07 2022-01-20 아주대학교산학협력단 신규 면역독소 제조방법
CN112673022B (zh) 2018-09-10 2024-07-09 南京传奇生物科技有限公司 针对cd33的单结构域抗体及其构建体
WO2020061060A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
JP2022511396A (ja) 2018-10-01 2022-01-31 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｃｄ４０への三価結合を伴う二重特異性抗原結合分子
MA53806A (fr) 2018-10-01 2022-01-05 Hoffmann La Roche Molécules bispécifiques de liaison à l'antigène comprenant un clone anti-fap 212
EP3632929A1 (en) 2018-10-02 2020-04-08 Ospedale San Raffaele S.r.l. Antibodies and uses thereof
JP7612571B2 (ja) 2018-10-03 2025-01-14 ゼンコア インコーポレイテッド Ｉｌ－１２ヘテロ二量体ｆｃ－融合タンパク質
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
WO2020081767A1 (en) 2018-10-18 2020-04-23 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for sarcomatoid kidney cancer
CA3115136A1 (en) 2018-10-19 2020-04-23 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
AU2019361281A1 (en) 2018-10-19 2021-04-29 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
KR20210084546A (ko) 2018-10-29 2021-07-07 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 펩티드 함유 링커를 갖는 시스테인 조작된 항체-약물 접합체
WO2020092533A2 (en) 2018-10-30 2020-05-07 Immunogen, Inc. Methods of treatment using anti-cd123 immunoconjugates
MX2021005751A (es) 2018-11-16 2021-10-01 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticuerpos contra mucina 16 y métodos de uso de los mismos.
KR20210096559A (ko) 2018-11-27 2021-08-05 이노벤트 바이오로직스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드 항IL-23p19 항체 및 이의 용도
IL283522B2 (en) 2018-12-03 2025-03-01 Agensys Inc Pharmaceutical compositions containing anti-191P4D12 antibody drug conjugates and methods of using them
KR20210100656A (ko) 2018-12-05 2021-08-17 제넨테크, 인크. 암 면역요법을 위한 진단 방법 및 조성물
CA3119798A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Genentech, Inc. Combination therapy of diffuse large b-cell lymphoma comprising an anti-cd79b immunoconjugates, an alkylating agent and an anti-cd20 antibody
WO2020123275A1 (en) 2018-12-10 2020-06-18 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
EP3667323B1 (en) 2018-12-11 2024-11-13 AF Chemical LLC Methods, compositions and devices for treating cancer with illudofulvenes
PE20211473A1 (es) 2018-12-13 2021-08-05 Eisai Randd Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo-farmaco de herboxidieno y metodos de uso
US11584825B2 (en) 2018-12-14 2023-02-21 Beckman Coulter, Inc. Polymer dye modification and applications
CN113227131B (zh) 2018-12-20 2025-03-04 豪夫迈·罗氏有限公司 经修饰的抗体Fc及其使用方法
AR117327A1 (es) 2018-12-20 2021-07-28 23Andme Inc Anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
WO2020127873A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody that binds to vegf and il-1beta and methods of use
PE20211295A1 (es) 2018-12-21 2021-07-20 23Andme Inc Anticuerpos anti il-36 y procedimientos de uso de estos
JP2022514343A (ja) 2018-12-21 2022-02-10 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 腫瘍標的化アゴニストｃｄ２８抗原結合分子
TW202030204A (zh) 2018-12-21 2020-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 靶向腫瘤之超促效cd28抗原結合分子
JP7061733B2 (ja) 2018-12-21 2022-04-28 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｃｄ３に結合する抗体
MA54545A (fr) 2018-12-21 2021-10-27 Regeneron Pharma Analogues de rifamycine et conjugués anticorps-médicament de ceux-ci
CN113272327A (zh) 2018-12-30 2021-08-17 豪夫迈·罗氏有限公司 抗兔cd19抗体及其使用方法
KR20210118881A (ko) 2019-01-22 2021-10-01 제넨테크, 인크. 면역글로불린 a 항체 및 생산과 이용의 방법
WO2020151572A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Anti-pd-l1 diabodies and the use thereof
EP3915581A4 (en) 2019-01-24 2023-03-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha NOVEL CANCER ANTIGENS AND ANTIBODIES OF THESE ANTIGENS
MA54863A (fr) 2019-01-29 2021-12-08 Juno Therapeutics Inc Anticorps et récepteurs antigéniques chimériques spécifiques du récepteur orphelin-1 de type récepteur à tyrosine kinase (ror1)
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
EP3693063A1 (en) 2019-02-06 2020-08-12 Diaccurate Methods and compositions for treating cancer
US11478553B2 (en) 2019-02-15 2022-10-25 Wuxi Biologies Ireland Limited Process for preparing antibody-drug conjugates with improved homogeneity
US12109273B2 (en) 2019-02-15 2024-10-08 Wuxi Xdc Singapore Private Limited Process for preparing antibody-drug conjugates with improved homogeneity
CN114127112A (zh) 2019-02-21 2022-03-01 马伦戈治疗公司 与t细胞结合的多功能分子及其治疗自身免疫性病症的用途
CA3131014A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 Andreas Loew Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
WO2020172605A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 Elstar Therapeutics, Inc. Antibody molecules that bind to nkp30 and uses thereof
AU2020224154B2 (en) 2019-02-21 2025-05-08 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
CA3130754A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof
JP2022521773A (ja) 2019-02-27 2022-04-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体と抗ｃｄ２０抗体又は抗ｃｄ３８抗体とによる処置のための投薬
BR112021016955A2 (pt) 2019-03-01 2021-11-23 Xencor Inc Composição, composição de ácido nucleico, composição de vetor de expressão, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de produção de um domínio de ligação de membro de família 3 de pirofosfatase/fosfodiesterase de ectonucleotídeo e de tratamento de um câncer, anticorpo anti-enpp3, e, anticorpo heterodimérico
WO2020185535A1 (en) 2019-03-08 2020-09-17 Genentech, Inc. Methods for detecting and quantifying membrane-associated proteins on extracellular vesicles
CN111675762B (zh) * 2019-03-11 2023-12-01 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种含半胱氨酸的抗体、药物偶联物及其应用
KR20210141555A (ko) 2019-03-14 2021-11-23 제넨테크, 인크. Her2xcd3 이중특이적 항체 및 항-her2 mab를 병용한 암의 치료
BR112021018260A2 (pt) 2019-03-15 2021-11-23 Medimmune Ltd Dímeros de azetidobenzodiazepina e conjugados compreendendo-os para uso no tratamento de câncer
CA3133802A1 (en) 2019-03-21 2020-09-24 Immunogen, Inc. Methods of preparing cell-binding agent-drug conjugates
PT3946464T (pt) 2019-03-29 2022-11-16 Medimmune Ltd Compostos e seus conjugados
CA3136491A1 (en) 2019-04-10 2020-10-15 Nankai University Anti-cd40 antibodies and uses thereof
WO2020208049A1 (en) 2019-04-12 2020-10-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising lipocalin muteins
CA3134522A1 (en) 2019-04-19 2020-10-22 Genentech, Inc. Anti-mertk antibodies and their methods of use
CA3137373A1 (en) 2019-04-24 2020-10-29 Heidelberg Pharma Research Gmbh Amatoxin antibody-drug conjugates and uses thereof
TW202108178A (zh) 2019-05-14 2021-03-01 美商建南德克公司 使用抗CD79b免疫結合物治療濾泡性淋巴瘤之方法
BR112021023229A2 (pt) 2019-05-20 2022-05-31 Servier Lab Conjugados anticorpo-fármaco inibidores de mcl-1 e métodos de uso
US20220315648A1 (en) 2019-05-23 2022-10-06 Ac Immune Sa Anti-TDP-43 Binding Molecules and Uses Thereof
WO2020247054A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
AR119264A1 (es) 2019-06-05 2021-12-09 Genentech Inc Método para reutilización de cromatografía
GB201908128D0 (en) 2019-06-07 2019-07-24 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
MX2021015221A (es) 2019-06-13 2022-03-17 Bolt Biotherapeutics Inc Compuestos de aminobenzazepina, inmunoconjugados y usos de estos.
MX2021015888A (es) 2019-06-26 2022-03-22 Hoffmann La Roche Fusión de un anticuerpo que se une a cea y 4-1bbl.
CN114531878A (zh) 2019-06-27 2022-05-24 豪夫迈·罗氏有限公司 新颖icos抗体及包含它们的肿瘤靶向抗原结合分子
KR20220029725A (ko) 2019-06-29 2022-03-08 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 세포-결합 분자-튜불리신 유도체 접합체 및 이의 제조 방법
MX2021015501A (es) 2019-07-03 2022-04-20 Oxford Biotherapeutics Ltd Anticuerpos y metodos de uso.
EP3996816A1 (en) 2019-07-08 2022-05-18 Imcare Biotech, LLC Anti-serine protease inhibitor kazal (spik) antibodies, immunoconjugates, and methods of use
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
CA3147890A1 (en) * 2019-07-19 2021-01-28 Immunesensor Therapeutics, Inc. Antibody-sting agonist conjugates and their use in immunotherapy
WO2021014415A2 (en) 2019-07-25 2021-01-28 Curadev Pharma Pvt. Ltd. Small molecule inhibitors of acetyl coenzyme a synthetase short chain 2 (acss2)
EP4004045A1 (en) 2019-07-31 2022-06-01 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies binding to gprc5d
EP4003526A2 (en) 2019-07-31 2022-06-01 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies binding to gprc5d
EP4007773A1 (en) 2019-08-06 2022-06-08 Aprinoia Therapeutics Limited Antibodies that bind to pathological tau species and uses thereof
US20210040174A1 (en) * 2019-08-08 2021-02-11 Navrogen, Inc. Composition and Use of Humoral Immune Suppressor Antagonists for the Treatment of Humoral Immune Suppressed Diseases
US20230211007A1 (en) * 2019-08-19 2023-07-06 Shenyang Pharmaceutical University Antibody mutant and application thereof
EP3786180A1 (en) 2019-08-27 2021-03-03 Diaccurate Antibodies and the uses thereof
EP4025254A1 (en) 2019-09-03 2022-07-13 Bolt Biotherapeutics, Inc. Aminoquinoline compounds, immunoconjugates, and uses thereof
JP2022547574A (ja) 2019-09-11 2022-11-14 インケア バイオテック， エルエルシー 抗セリンプロテアーゼインヒビターｋａｚａｌ（ｓｐｉｋ）抗体のエピトープ
AU2020345913A1 (en) 2019-09-12 2022-02-24 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
US12312414B2 (en) 2019-09-18 2025-05-27 Genentech, Inc. Anti-KLK7 antibodies, anti-KLK5 antibodies, multispecific anti-KLK5/KLK7 antibodies, and methods of use
AU2020348393A1 (en) 2019-09-20 2022-02-24 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
WO2021062085A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
CN114746119A (zh) 2019-09-27 2022-07-12 詹森生物科技公司 抗-ceacam抗体及其用途
KR20220077131A (ko) 2019-09-30 2022-06-08 볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드 아마이드-연결된 아미노벤즈아제핀 면역접합체 및 이의 용도
EP4017542A1 (en) 2019-10-04 2022-06-29 Tae Life Sciences Antibody compositions comprising fc mutations and site-specific conjugation properties
US11912784B2 (en) 2019-10-10 2024-02-27 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
PE20221039A1 (es) 2019-10-18 2022-06-17 Genentech Inc METODOS PARA USAR INMUNOCONJUGADOS ANTI-CD79b PARA TRATAR LINFOMA DIFUSO DE LINFOCITOS B GRANDES
KR102235549B1 (ko) * 2019-10-22 2021-04-02 주식회사 바이오맥스 항체-약물 복합체 형성을 위한 이관능성 링커와 시스테인이 태그된 스파이태그/캐쳐를 이용한 고효율 접합 키트
US20240123081A1 (en) 2019-10-25 2024-04-18 Medimmune, Llc Branched moiety for use in conjugates
MX2022004875A (es) 2019-10-25 2022-06-17 Bolt Biotherapeutics Inc Inmunoconjugados de tienoazepina, inmunoconjugados y usos de estos.
EP4055388A1 (en) 2019-11-06 2022-09-14 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers
MX2022005903A (es) 2019-11-15 2022-12-13 Seagen Inc Métodos para tratar el cáncer de mama her2 positivo con tucatinib en combinación con un conjugado fármaco-anticuerpo anti-her2.
EP4058476A1 (en) 2019-11-15 2022-09-21 Enthera S.r.l. Tmem219 antibodies and therapeutic uses thereof
JP2023503105A (ja) 2019-11-21 2023-01-26 エンテラ・エッセ・エッレ・エッレ Ｉｇｆｂｐ３抗体及びその治療的使用
US11591295B2 (en) 2019-11-25 2023-02-28 Af Chemicals Llc Affinity illudofulvene conjugates
CN118465272A (zh) 2019-12-04 2024-08-09 珠海泰诺麦博制药股份有限公司 抗人巨细胞病毒抗体及其用途
EP4069734A1 (en) 2019-12-04 2022-10-12 AC Immune SA Novel molecules for therapy and diagnosis
CN115335399A (zh) 2019-12-06 2022-11-11 朱诺治疗学股份有限公司 针对gprc5d靶结合结构域的抗独特型抗体以及相关组合物和方法
EP4069741A1 (en) 2019-12-06 2022-10-12 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to bcma-targeted binding domains and related compositions and methods
CN114867494B9 (zh) 2019-12-13 2024-01-12 基因泰克公司 抗ly6g6d抗体及使用方法
CN110922476A (zh) * 2019-12-16 2020-03-27 蓝怡科技集团股份有限公司 一种生物素偶联抗体及其制备方法和应用
US20220372162A1 (en) 2019-12-18 2022-11-24 TeneoFour, Inc. Pct/us2020/066088
CN114828965A (zh) 2019-12-18 2022-07-29 豪夫迈·罗氏有限公司 与hla-a2/mage-a4结合的抗体
BR112022012546A2 (pt) 2019-12-23 2022-09-06 Eisai R&D Man Co Ltd Método para produzir conjugado anticorpo-fármaco à base de eribulina
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
PE20221585A1 (es) 2019-12-27 2022-10-06 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti antigeno-4 asociado al linfocito t citotoxico (ctla-4) y uso del mismo
EP4085077A4 (en) 2019-12-31 2024-01-17 Beijing QL Biopharmaceutical Co., Ltd. FUSION PROTEINS FROM GLP-1 AND GDF15 AND CONJUGATES THEREOF
EP4084821A4 (en) 2020-01-03 2024-04-24 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to cd33 and uses thereof
JP2023509760A (ja) 2020-01-08 2023-03-09 シンシス セラピューティクス，インコーポレイテッド Ａｌｋ５阻害剤複合体およびその使用
EP4087866A1 (en) 2020-01-09 2022-11-16 F. Hoffmann-La Roche AG New 4-1bbl trimer-containing antigen binding molecules
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
CN113728013B (zh) 2020-01-11 2022-06-14 北京质肽生物医药科技有限公司 Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物
TW202140076A (zh) 2020-01-22 2021-11-01 英商梅迪繆思有限公司 化合物及其軛合物
KR20220130749A (ko) 2020-01-22 2022-09-27 메디뮨 리미티드 화합물 및 이의 접합체
JP2023511376A (ja) * 2020-01-23 2023-03-17 アダジーン アーゲー Ｆｃ変異を有するヘテロダイマータンパク質
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
TW202144395A (zh) 2020-02-12 2021-12-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
EP3868396A1 (en) 2020-02-20 2021-08-25 Enthera S.R.L. Inhibitors and uses thereof
US11179473B2 (en) 2020-02-21 2021-11-23 Silverback Therapeutics, Inc. Nectin-4 antibody conjugates and uses thereof
CA3169910A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-cd137 constructs, multispecific antibody and uses thereof
JP2023516945A (ja) 2020-02-28 2023-04-21 上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司 抗ｃｄ１３７コンストラクト及びその使用
PH12022552234A1 (en) 2020-02-28 2024-04-22 Genzyme Corp Modified binding polypeptides for optimized drug conjugation
WO2021178896A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses
AU2021236302A1 (en) 2020-03-12 2022-10-20 Immune-Onc Therapeutics, Inc. Novel anti-LILRB4 antibodies and derivative products
TW202144410A (zh) 2020-03-13 2021-12-01 美商建南德克公司 抗介白素－３３抗體及其用途
PH12022552326A1 (en) 2020-03-19 2023-11-29 Genentech Inc Isoform-selective anti-tgf-beta antibodies and methods of use
US11365239B2 (en) 2020-03-20 2022-06-21 Tsb Therapeutics (Beijing) Co., Ltd. Anti-SARS-COV-2 antibodies and uses thereof
TW202144419A (zh) 2020-03-24 2021-12-01 美商建南德克公司 Ｔｉｅ２結合劑及其使用方法
US12098365B2 (en) 2020-03-26 2024-09-24 Genentech, Inc. Modified mammalian cells
EP4126940A1 (en) 2020-03-30 2023-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf and pdgf-b and methods of use
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
EP4127724A1 (en) 2020-04-03 2023-02-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
JP2023523011A (ja) 2020-04-24 2023-06-01 マレンゴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド Ｔ細胞関連のがん細胞に結合する多機能性分子およびその使用
TW202206111A (zh) 2020-04-24 2022-02-16 美商建南德克公司 使用抗ｃｄ７９ｂ免疫結合物之方法
WO2021222167A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Genentech, Inc. Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy
CN115996756A (zh) 2020-05-08 2023-04-21 博尔特生物治疗药物有限公司 弹性蛋白酶底物肽连接子免疫缀合物及其用途
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
WO2021239666A1 (en) 2020-05-26 2021-12-02 Diaccurate Therapeutic methods
CN113993900B (zh) 2020-05-27 2023-08-04 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别神经生长因子的抗体及其用途
PE20230460A1 (es) 2020-05-29 2023-03-10 23Andme Inc Anticuerpos anti-cd200r1 y metodos de uso de estos
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
KR20230037532A (ko) 2020-06-02 2023-03-16 다이내믹큐어 바이오테크놀로지 엘엘씨 항-cd93 구축물 및 그의 용도
CA3184645A1 (en) 2020-06-05 2021-12-09 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-bcma antibody-drug conjugates and methods of use
AU2021288916A1 (en) 2020-06-08 2022-11-24 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-HBV antibodies and methods of use
CN115698719A (zh) 2020-06-12 2023-02-03 基因泰克公司 用于癌症免疫疗法的方法和组合物
WO2021257124A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
AR122656A1 (es) 2020-06-19 2022-09-28 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 / folr1
WO2021255155A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cd19
AU2021291407A1 (en) 2020-06-19 2022-09-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to CD3
WO2021255146A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cea
WO2021259880A1 (en) 2020-06-22 2021-12-30 Almirall, S.A. Anti-il-36 antibodies and methods of use thereof
CN115734972A (zh) 2020-06-22 2023-03-03 信达生物制药(苏州)有限公司 抗cd73抗体及其用途
AU2021295549A1 (en) 2020-06-23 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic CD28 antigen binding molecules targeting Her2
MX2022016453A (es) 2020-06-24 2023-02-01 Genentech Inc Lineas celulares resistentes a la apoptosis.
JP2023531067A (ja) 2020-06-25 2023-07-20 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃｄ３／抗ｃｄ２８二重特異性抗原結合分子
AU2021300362A1 (en) 2020-07-01 2023-02-23 ARS Pharmaceuticals, Inc. Anti-ASGR1 antibody conjugates and uses thereof
CN115812149A (zh) 2020-07-13 2023-03-17 基因泰克公司 用于预测多肽免疫原性的基于细胞的方法
IL299799A (en) 2020-07-17 2023-03-01 Genentech Inc Anti-NOTCH2 antibodies and methods of use
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
US20230322935A1 (en) 2020-07-29 2023-10-12 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
GB202011993D0 (en) 2020-07-31 2020-09-16 Adc Therapeutics Sa ANTI-IL 13Ra2 antibodies
CN116568824A (zh) 2020-08-03 2023-08-08 基因泰克公司 淋巴瘤的诊断和治疗方法
EP4192868A1 (en) 2020-08-05 2023-06-14 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to ror1-targeted binding domains and related compositions and methods
WO2022031948A1 (en) 2020-08-07 2022-02-10 Genentech, Inc. T cell-based methods for predicting polypeptide immunogenicity
CA3186059A1 (en) 2020-08-13 2022-02-17 Romas Kudirka Pyrazoloazepine immunoconjugates, and uses thereof
AR123254A1 (es) 2020-08-14 2022-11-16 Ac Immune Sa Moléculas de unión anti-tdp-43 humanizadas y usos de las mismas
KR102607909B1 (ko) 2020-08-19 2023-12-01 젠코어 인코포레이티드 항-cd28 조성물
JP2023539645A (ja) 2020-08-26 2023-09-15 マレンゴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド Ｎｋｐ３０に結合する抗体分子およびその使用
WO2022046920A2 (en) 2020-08-26 2022-03-03 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
CN116761818A (zh) 2020-08-26 2023-09-15 马伦戈治疗公司 检测trbc1或trbc2的方法
WO2022043517A2 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Cureab Gmbh Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
WO2022047222A2 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Genentech, Inc. Crispr/cas9 multiplex knockout of host cell proteins
CA3193163A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody that binds to vegf-a and ang2 and methods of use
MX2023002940A (es) 2020-09-11 2023-04-11 Medimmune Ltd Moleculas de union a b7-h4 terapeuticas.
TW202227496A (zh) 2020-09-14 2022-07-16 瑞士商伊克諾斯科學公司 結合至ｉｌ１ｒａｐ之抗體及其用途
WO2022061214A1 (en) 2020-09-21 2022-03-24 Genentech, Inc. Purification of multispecific antibodies
CN115925994B (zh) 2020-09-30 2023-09-22 北京质肽生物医药科技有限公司 多肽缀合物和使用方法
IL301547A (en) 2020-10-05 2023-05-01 Genentech Inc Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2022079297A1 (en) 2020-10-16 2022-04-21 Ac Immune Sa Antibodies binding to alpha-synuclein for therapy and diagnosis
AU2021366287A1 (en) 2020-10-20 2023-04-13 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to Gremlin-1 and uses thereof
TW202233671A (zh) 2020-10-20 2022-09-01 美商建南德克公司 Ｐｅｇ結合抗ｍｅｒｔｋ抗體及其使用方法
JP2023545566A (ja) 2020-10-20 2023-10-30 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｄ－１軸結合アンタゴニストとｌｒｒｋ２阻害剤との併用療法
US20230390426A1 (en) 2020-10-22 2023-12-07 Nihon Medi-Physics Co., Ltd. Method for producing radioactive zirconium complex
MX2023005130A (es) 2020-11-04 2023-05-25 Genentech Inc Dosis subcutanea de anticuerpos biespecificos anti-cd20/anti-cd3.
TW202432189A (zh) 2020-11-04 2024-08-16 美商建南德克公司 以抗 cd20/抗 cd3 雙特異性抗體和抗 cd79b 抗體藥物結合物治療的給藥方法
MX2023005132A (es) 2020-11-04 2023-05-25 Genentech Inc Dosificacion para el tratamiento con anticuerpos biespecificos anti-cd20/anti-cd3.
WO2022101458A1 (en) 2020-11-16 2022-05-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with fap-targeted cd40 agonists
CA3202759A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Novartis Ag Mcl-1 inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use
IL303491A (en) 2020-12-11 2023-08-01 Bolt Biotherapeutics Inc Anti-pd-l1 immunoconjugates, and uses thereof
US20220195066A1 (en) 2020-12-11 2022-06-23 Bolt Biotherapeutics, Inc. Anti-cea immunoconjugates, and uses thereof
WO2022125891A2 (en) 2020-12-11 2022-06-16 Bolt Biotherapeutics, Inc. Anti-cea immunoconjugates, and uses thereof
WO2022125904A1 (en) 2020-12-11 2022-06-16 Bolt Biotherapeutics, Inc. Anti-her2 immunoconjugates, and uses thereof
JP2023552791A (ja) 2020-12-11 2023-12-19 ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド 抗ｈｅｒ２免疫複合体、及びその使用
CA3204702A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hla-g antibodies and use thereof
WO2022135467A1 (zh) 2020-12-23 2022-06-30 信达生物制药(苏州)有限公司 抗b7-h3抗体及其用途
WO2022140797A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Immunowake Inc. Immunocytokines and uses thereof
AU2022206061A1 (en) 2021-01-06 2023-07-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and a cd20 t cell bispecific antibody
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CA3206395A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Hassan JUMAA-WEINACHT Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
WO2022169872A1 (en) 2021-02-03 2022-08-11 Genentech, Inc. Multispecific binding protein degrader platform and methods of use
CA3204418A1 (en) 2021-02-16 2022-08-25 Glykos Finland Oy Linker-payloads and conjugates thereof
GB202102396D0 (en) 2021-02-19 2021-04-07 Adc Therapeutics Sa Molecular adjuvant
EP4046996A1 (en) 2021-02-19 2022-08-24 Universität Bielefeld Cryptophycin compounds and conjugates thereof
US12030888B2 (en) 2021-02-24 2024-07-09 Massachusetts Institute Of Technology Himastatin derivatives, and processes of preparation thereof, and uses thereof
JP2024509191A (ja) 2021-03-05 2024-02-29 ダイナミキュア バイオテクノロジー エルエルシー 抗ｖｉｓｔａ構築物およびその使用
WO2022187591A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses
WO2022192403A1 (en) 2021-03-09 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
US20240392004A1 (en) 2021-03-10 2024-11-28 Immunowake Inc. Immunomodulatory molecules and uses thereof
US11859012B2 (en) 2021-03-10 2024-01-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and GPC3
AR125074A1 (es) 2021-03-12 2023-06-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-klk7, anticuerpos anti-klk5, anticuerpos multiespecíficos anti-klk5 / klk7 y métodos de uso
BR112023018621A2 (pt) 2021-03-15 2023-10-24 Hoffmann La Roche Métodos para tratar nefrite lúpica, esgotar células b periféricas, kits para tratar nefrite lúpica e anticorpos anti-cd20 tipo ii
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
TW202300648A (zh) 2021-03-25 2023-01-01 美商當康生物科技有限公司 抗-igfbp7構築體及其用途
KR20230163450A (ko) 2021-03-26 2023-11-30 볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드 2-아미노-4-카복사마이드-벤즈아제핀 면역접합체 및 이의 용도
WO2022204536A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Bolt Biotherapeutics, Inc. 2-amino-4-carboxamide-benzazepine immunoconjugates, and uses thereof
AU2022255506A1 (en) 2021-04-08 2023-11-09 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules binding to tcr and uses thereof
WO2022217022A1 (en) 2021-04-10 2022-10-13 Profoundbio Us Co. Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
GB202105187D0 (en) 2021-04-12 2021-05-26 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
JP2024514222A (ja) 2021-04-19 2024-03-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 改変された哺乳動物細胞
TW202308699A (zh) 2021-04-23 2023-03-01 美商普方生物製藥美國公司 Ｃｄ７０結合劑、其結合物及其使用方法
TW202309085A (zh) 2021-04-26 2023-03-01 大陸商軒竹生物科技股份有限公司 雙特異性抗體結合物
JP2024520901A (ja) 2021-05-12 2024-05-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド びまん性大細胞型ｂ細胞リンパ腫を治療するための抗ｃｄ７９ｂイムノコンジュゲートを使用する方法
CN117396510A (zh) 2021-05-14 2024-01-12 基因泰克公司 Trem2的激动剂
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
EP4341385A1 (en) 2021-05-21 2024-03-27 Genentech, Inc. Modified cells for the production of a recombinant product of interest
AU2022282609A1 (en) 2021-05-26 2023-11-30 Oxford Biotherapeutics Ltd Pharmaceutical combination comprising an anti-cd205 antibody and an immune checkpoint inhibitor
WO2022255778A1 (ko) * 2021-06-01 2022-12-08 주식회사 에즈큐리스 Ｉｌ-33 단백질 저해용 화합물의 스크리닝 방법 및 상기 화합물을 포함하는 알러지성 질환 치료용 약학조성물
AR126009A1 (es) 2021-06-02 2023-08-30 Hoffmann La Roche Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam
CN117480184A (zh) 2021-06-04 2024-01-30 中外制药株式会社 抗ddr2抗体及其用途
AU2022289684A1 (en) 2021-06-09 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination of a particular braf inhibitor (paradox breaker) and a pd-1 axis binding antagonist for use in the treatment of cancer
EP4355785A1 (en) 2021-06-17 2024-04-24 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
WO2022271987A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 TeneoFour, Inc. Anti-cd38 antibodies and epitopes of same
TWI879694B (zh) 2021-06-25 2025-04-01 日商中外製藥股份有限公司 抗ctla-4抗體的用途
IL309115A (en) 2021-06-25 2024-02-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-CTLA-4 antibodies
KR20240027761A (ko) 2021-06-28 2024-03-04 비온디스 비.브이. 인항원을 포함하는 접합체 및 요법에서의 이의 용도
TW202317633A (zh) 2021-07-08 2023-05-01 美商舒泰神（加州）生物科技有限公司 特異性識別ｔｎｆｒ２的抗體及其用途
WO2023288182A1 (en) 2021-07-12 2023-01-19 Genentech, Inc. Structures for reducing antibody-lipase binding
EP4371572A1 (en) 2021-07-14 2024-05-22 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibody that specifically recognizes cd40 and application thereof
EP4370553A1 (en) 2021-07-14 2024-05-22 Genentech, Inc. Anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use
JP2024524614A (ja) 2021-07-14 2024-07-05 ライシア セラピューティクス， インコーポレイテッド Ａｓｇｐｒ細胞表面受容体結合化合物及びコンジュゲート
EP4370156A1 (en) 2021-07-14 2024-05-22 Lycia Therapeutics, Inc. M6pr cell surface receptor binding compounds and conjugates
EP4373859A1 (en) 2021-07-22 2024-05-29 F. Hoffmann-La Roche AG Heterodimeric fc domain antibodies
JP2024526880A (ja) 2021-07-22 2024-07-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド 脳標的化組成物及びその使用方法
WO2023011338A1 (zh) 2021-08-02 2023-02-09 信达生物制药(苏州)有限公司 抗CD79b×CD3双特异性抗体及其用途
JP2024528217A (ja) 2021-08-03 2024-07-26 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗体および使用方法
KR20240107093A (ko) 2021-08-05 2024-07-08 고 테라퓨틱스, 인크. 항-글리코-muc4 항체 및 그의 용도
US20240336697A1 (en) 2021-08-07 2024-10-10 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
WO2023019239A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
WO2023021055A1 (en) 2021-08-19 2023-02-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent anti-variant fc-region antibodies and methods of use
KR20240049296A (ko) 2021-08-27 2024-04-16 제넨테크, 인크. 타우 병증을 치료하는 방법
WO2023034750A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Genentech, Inc. Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
EP4395810A1 (en) 2021-09-03 2024-07-10 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cmet antibodies and their uses
EP4396232A1 (en) 2021-09-03 2024-07-10 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-lamp1 antibodies and their uses
CN115975030B (zh) * 2021-09-30 2023-09-26 杭州邦顺制药有限公司 抗cd39抗体-药物偶联物及其用途
WO2023056403A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists
KR20240082388A (ko) 2021-10-08 2024-06-10 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 프리필드 시린지 제제의 조제 방법
US20250000995A1 (en) 2021-10-29 2025-01-02 Bolt Biotherapeutics, Inc. Tlr agonist immunoconjugates with cysteine-mutant antibodies, and uses thereof
KR20240095442A (ko) 2021-11-03 2024-06-25 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 항체의 특이적 접합
WO2023081818A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 American Diagnostics & Therapy, Llc (Adxrx) Monoclonal antibodies against carcinoembryonic antigens, and their uses
MX2024005712A (es) 2021-11-10 2024-05-24 Astrazeneca Ab Moleculas de anticuerpo y conjugados.
EP4430072A1 (en) 2021-11-10 2024-09-18 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
EP4180061A1 (en) 2021-11-10 2023-05-17 Nerviano Medical Sciences S.r.l. Anthracycline derivative linker reagents, antibody-drug conjugates and methods
CA3236006A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating systemic lupus erythematosus (sle) with mosunetuzumab
CR20240231A (es) 2021-11-16 2024-07-09 Ac Immune Sa Moléculas novedosas para terapias y diagnósticos
US20250073346A1 (en) 2021-11-18 2025-03-06 Oxford Bio Therapeutics Ltd Pharmaceutical combinations
US20250090680A1 (en) 2021-11-19 2025-03-20 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2023088966A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Adc Therapeutics Sa Anti-psma conjugates
US20230285580A1 (en) 2021-11-19 2023-09-14 Adc Therapeutics Sa Anti-il-13ralpha2 conjugates
EP4445911A1 (en) 2021-12-06 2024-10-16 Beijing SoloBio Genetechnology Co., Ltd. Bispecific antibody that specifically binds to klebsiella pneumoniae o2 and o1 antigens, and composition
AR127887A1 (es) 2021-12-10 2024-03-06 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y plap
AU2022411573A1 (en) 2021-12-17 2024-06-27 Shanghai Henlius Biologics Co., Ltd. Anti-ox40 antibodies and methods of use
WO2023109900A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-ox40 antibodies, multispecific antibodies and methods of use
CR20240246A (es) 2021-12-20 2024-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecificos que los comprenden
EP4460330A1 (en) 2022-01-06 2024-11-13 Virtuoso Binco, Inc. Conjugates, compositions and methods of use
TW202340251A (zh) 2022-01-19 2023-10-16 美商建南德克公司 抗ｎｏｔｃｈ２抗體及結合物及其使用方法
JP2025507569A (ja) 2022-02-16 2025-03-21 エイシー イミューン ソシエテ アノニム ヒト化抗ｔｄｐ－４３結合分子およびその使用
TW202348252A (zh) 2022-02-16 2023-12-16 英商梅迪繆思有限公司 用治療性結合分子治療癌症的組合療法
EP4230222A1 (en) 2022-02-17 2023-08-23 Oxsonics Limited Combination therapy with an anti-axl antibody-pbd conjugate and nanocups
JP2025508739A (ja) 2022-02-18 2025-04-10 ラクテン・メディカル，インコーポレイテッド 抗プログラム細胞死リガンド１（ｐｄ－ｌ１）抗体分子、それをコードするポリヌクレオチド、および使用方法
WO2023160982A1 (en) 2022-02-28 2023-08-31 Adc Therapeutics Sa Dosage regimen
WO2023169896A1 (en) 2022-03-09 2023-09-14 Astrazeneca Ab BINDING MOLECULES AGAINST FRα
JP2025509187A (ja) 2022-03-11 2025-04-11 アストラゼネカ・アクチエボラーグ 抗ＦＲα抗体薬物コンジュゲート療法のためのスコアリング方法
EP4499708A1 (en) 2022-03-25 2025-02-05 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-msln antibodies and methods of use
WO2023186756A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon gamma variants and antigen binding molecules comprising these
KR20240169042A (ko) 2022-04-01 2024-12-02 제넨테크, 인크. 항-fcrh5/항-cd3 이중특이성 항체로 치료하기 위한 투약법
IL315191A (en) 2022-04-01 2024-10-01 Genentech Inc History of hydroxypropyl methylcellulose for stabilizing polypeptides
CN119156231A (zh) 2022-04-07 2024-12-17 海德堡医药研究有限责任公司 提高鹅膏蕈毒素-抗体缀合物的治疗指数的方法
IL316153A (en) 2022-04-08 2024-12-01 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules
EP4508087A1 (en) 2022-04-13 2025-02-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
AU2023258146A1 (en) 2022-04-20 2024-09-05 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof
KR20250006932A (ko) 2022-05-03 2025-01-13 제넨테크, 인크. 항-Ly6E 항체, 면역접합체 및 이들의 용도
EP4524158A1 (en) 2022-05-09 2025-03-19 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibody that specifically recognizes gdf15 and use thereof
EP4522653A1 (en) 2022-05-11 2025-03-19 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
US20250136717A1 (en) 2022-05-16 2025-05-01 Byondis B.V. Novel masked antibodies
WO2023221936A1 (zh) 2022-05-17 2023-11-23 苏州创胜医药集团有限公司 双功能蛋白质及其制剂和用途
IL317102A (en) 2022-05-20 2025-01-01 Novartis Ag EPHA2 BCL-XL inhibitor antibody-drug conjugates and methods of using them
CN119562832A (zh) 2022-05-20 2025-03-04 诺华股份有限公司 Met bcl-xl抑制剂抗体-药物缀合物及其使用方法
IL317449A (en) 2022-06-07 2025-02-01 Genentech Inc Method for determining the efficacy of a lung cancer treatment comprising an anti-PD-L1 antagonist and an anti-TIGIT antibody-antagonist
EP4536701A2 (en) 2022-06-08 2025-04-16 Institute for Research in Biomedicine (IRB) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
KR20250029133A (ko) 2022-06-27 2025-03-04 아스트라제네카 아베 암 치료를 위한 표피성장인자 수용체 티로신 키나제 억제제를 포함하는 조합물
AU2023305619A1 (en) 2022-07-13 2025-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4558226A1 (en) 2022-07-19 2025-05-28 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing b- and t-lymphocyte attenuator (btla) and uses thereof
AU2023309556A1 (en) 2022-07-19 2025-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
IL317637A (en) 2022-07-22 2025-02-01 Genentech Inc Anti-STEAP1 antigen binding molecules and their uses
TW202413646A (zh) 2022-07-22 2024-04-01 美商萊爾免疫藥物股份有限公司 免疫細胞療法
TW202417034A (zh) 2022-08-19 2024-05-01 大陸商億一生物醫藥開發（上海）有限公司 包含ｇ—ｃｓｆ之調配物及其用途
TW202423979A (zh) 2022-08-22 2024-06-16 美商雅博得樂醫療公司 Dll3結合分子及其用途
AU2023329484A1 (en) 2022-08-26 2025-02-20 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3)
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
CN120077071A (zh) 2022-09-07 2025-05-30 当康生物技术有限责任公司 抗vista构建体及其用途
WO2024052685A1 (en) 2022-09-09 2024-03-14 MyricX Pharma Limited Cytotoxic imidazo[1,2-a]pyridine compounds and their use in therapy
WO2024067344A1 (zh) 2022-09-27 2024-04-04 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别light的抗体及其应用
WO2024077239A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies
WO2024083021A1 (zh) 2022-10-20 2024-04-25 北京三诺佳邑生物技术有限责任公司 特异性结合TRAIL或FasL的抗体组合以及双特异性抗体
IL320355A (en) 2022-10-25 2025-06-01 Genentech Inc Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma
CN120187759A (zh) 2022-11-01 2025-06-20 海德堡医药研究有限责任公司 抗gucy2c抗体及其用途
AU2023375342A1 (en) 2022-11-08 2025-04-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
WO2024102948A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 Celgene Corporation Fc receptor-homolog 5 (fcrh5) specific binding molecules and bispecific t-cell engaging antibodies including same and related methods
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
US20240190978A1 (en) 2022-11-15 2024-06-13 CSBioAsset LLC Compositions and methods for immunomodulatory bifunctional fusion molecules
TW202435917A (zh) 2022-11-17 2024-09-16 美商西雅圖遺傳學公司 Ceacam5抗體-藥物接合物及其使用方法
CN120202411A (zh) 2022-11-18 2025-06-24 基因泰克公司 使用质量标签进行基于ia-lc-ms/ms的测定的信号放大和多重化
AR131163A1 (es) 2022-11-25 2025-02-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Métodos para producir proteínas
WO2024121632A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Crispr Therapeutics Ag Use of anti-cd117 antibody drug conjugate (adc)
WO2024129756A1 (en) 2022-12-13 2024-06-20 Seagen Inc. Site-specific engineered cysteine antibody drug conjugates
WO2024127332A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Pheon Therapeutics Ltd Cytotoxic compounds
WO2024137619A1 (en) 2022-12-20 2024-06-27 Bolt Biotherapeutics, Inc. Anti-claudin, bis-benzimid azole sting agonist immunoconjugates, and uses thereof
WO2024133374A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Byondis B.V. Novel linker drugs comprising phosphoantigens, novel conjugates and their use in therapy
TW202432187A (zh) 2022-12-23 2024-08-16 美商建南德克公司 小腦蛋白降解劑結合物及其用途
CN115947830B (zh) * 2022-12-27 2023-09-12 优洛生物(上海)有限公司 一种经改造的抗体、其制备方法及其用途
US20240360229A1 (en) 2023-01-18 2024-10-31 Genentech, Inc. Multispecific antibodies and uses thereof
WO2024155750A1 (en) 2023-01-18 2024-07-25 Lycia Therapeutics, Inc. Lysosomal targeting bifunctional molecules for degradation of autoantibodies
WO2024155746A1 (en) 2023-01-18 2024-07-25 Lycia Therapeutics, Inc. Cycling lysosomal targeting antibody conjugates
WO2024155748A1 (en) 2023-01-18 2024-07-25 Lycia Therapeutics, Inc. M6pr binding compounds and conjugates
WO2024155747A2 (en) 2023-01-18 2024-07-25 Lycia Therapeutics, Inc. Asgpr binding compounds and conjugates
WO2024156672A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to csf1r and cd3
EP4410314A1 (en) 2023-02-02 2024-08-07 ADC Therapeutics SA Combination therapy comprising anti-cd22 antibody-drug conjugate and irak1 inhibitor
WO2024173387A1 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Bolt Biotherapeutics, Inc. Aza-benzazepine immunoconjugates, and uses thereof
TW202448517A (zh) 2023-02-16 2024-12-16 瑞典商阿斯特捷利康公司 用治療性結合分子治療癌症的組合療法
WO2024182569A2 (en) 2023-02-28 2024-09-06 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-psma antibodies, conjugates, and methods of use
WO2024186626A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Bolt Biotherapeutics, Inc. Aza-bicyclic sting agonist immunoconjugates, and uses thereof
WO2024184494A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
EP4428159A1 (en) 2023-03-10 2024-09-11 Istituto Romagnolo per lo Studio dei Tumori "Dino Amadori" - IRST S.r.l. Melanoma targeting human antibodies and therapeutic uses thereof
WO2024189481A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Novartis Ag Panras inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use thereof
EP4428158A1 (en) 2023-03-10 2024-09-11 Istituto Romagnolo per lo Studio dei Tumori "Dino Amadori" - IRST S.r.l. Lung cancer targeting human antibodies and therapeutic uses thereof
WO2024191785A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Genentech, Inc. Fusions with proteases and uses thereof
WO2024188965A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and an hla-g t cell bispecific antibody
WO2024189048A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 Heidelberg Pharma Research Gmbh Subcutaneously administered antibody-drug conjugates for use in cancer treatment
TW202446789A (zh) 2023-03-31 2024-12-01 美商建南德克公司 抗αｖβ８整合素抗體及使用方法
WO2024220546A2 (en) 2023-04-17 2024-10-24 Peak Bio, Inc. Antibodies and antibody-drug conjugates and methods of use and synthetic processes and intermediates
TW202506194A (zh) 2023-04-28 2025-02-16 英商梅迪繆思有限公司 用於治療癌症的ｂ７－ｈ４治療性結合分子
WO2024233341A1 (en) 2023-05-05 2024-11-14 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024231320A1 (en) 2023-05-08 2024-11-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Targeted interferon alpha fusion proteins and methods of use
WO2024233646A1 (en) 2023-05-10 2024-11-14 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
TW202509065A (zh) 2023-05-16 2025-03-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 經ｐｄ－１調節之ｉｌ－２免疫結合物及其用途
TW202502811A (zh) 2023-06-01 2025-01-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 與ｂｃｍａ特異性結合之免疫刺激性抗原結合分子
WO2024246083A1 (en) 2023-06-01 2024-12-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies targeting bcma and cd28
TW202504641A (zh) 2023-06-08 2025-02-01 美商建南德克公司 用於淋巴瘤之診斷及治療方法的巨噬細胞特徵
WO2024258967A1 (en) 2023-06-13 2024-12-19 Synthis Therapeutics, Inc. Anti-cd5 antibodies and their uses
TW202504637A (zh) 2023-06-13 2025-02-01 美商艾德森特克斯治療股份有限公司 與結合至nectin-4蛋白之抗體及抗體藥物結合物(adc)相關之方法及組合物
WO2024261013A1 (en) 2023-06-21 2024-12-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with fap-targeted lymphotoxin beta receptor agonists
WO2024263845A1 (en) 2023-06-22 2024-12-26 Genentech, Inc. Treatment of multiple myeloma
TW202502809A (zh) 2023-06-22 2025-01-16 美商建南德克公司 抗體及其用途
WO2025010424A1 (en) 2023-07-06 2025-01-09 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies against staphylococcus antigens and methods of using the same
WO2025021838A1 (en) 2023-07-26 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2025034806A1 (en) 2023-08-08 2025-02-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Single-domain antibodies and variants thereof against fibroblast activation protein
WO2025032070A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-a-beta protein antibodies, methods and uses thereof
WO2025032071A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
WO2025032069A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
WO2025035040A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Lycia Therapeutics, Inc. Lysosomal targeting bifunctional molecules for degradation of muscle-specific kinase autoantibodies
WO2025038492A1 (en) 2023-08-11 2025-02-20 Abalytics Oncology, Inc. Anti-ctla-4 antibodies and related binding molecules and methods and uses thereof
WO2025045251A2 (en) 2023-09-03 2025-03-06 Kira Pharmaceuticals (Us) Llc Multispecific constructs comprising anti-factor d moiety
TW202513593A (zh) * 2023-09-08 2025-04-01 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 半胱胺酸改造的抗體和免疫綴合物
WO2025064521A1 (en) 2023-09-18 2025-03-27 Profoundbio Us Co. Ultrafiltration / diafiltration purification methods
WO2025068207A1 (en) 2023-09-25 2025-04-03 F. Hoffmann-La Roche Ag ANTIBODY THAT BINDS TO C3bBb
WO2025072406A1 (en) 2023-09-26 2025-04-03 Profoundbio Us Co. Ptk7 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
EP4537907A1 (en) 2023-10-10 2025-04-16 Enthera S.r.l. Cd248 inhibitors and uses thereof
WO2025083067A1 (en) 2023-10-17 2025-04-24 Adc Therapeutics Sa Anti-claudin-6 conjugates
WO2025083064A1 (en) 2023-10-17 2025-04-24 Adc Therapeutics Sa Anti-asct2 conjugates
WO2025083061A1 (en) 2023-10-17 2025-04-24 Adc Therapeutics Sa Anti-napi2b conjugates
EP4548936A1 (en) 2023-10-30 2025-05-07 BioNTech SE Antibody-drug conjugates having a tailor-made drug-to-antibody ratio
WO2025099120A1 (en) 2023-11-09 2025-05-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies with conditional activity
WO2025106474A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for treating cancer with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2025111402A1 (en) 2023-11-21 2025-05-30 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Anti-amyloid beta antibodies and related compositions and methods thereof
WO2025111431A1 (en) 2023-11-22 2025-05-30 Les Laboratoires Servier Anti-cd7 antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2025111450A1 (en) 2023-11-22 2025-05-30 Les Laboratoires Servier Anti-cd74 antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2025109097A2 (en) 2023-11-24 2025-05-30 Heidelberg Pharma Research Gmbh Novel nicotinamide phosphoribosyltransferase inhibitors and uses thereof
EP4566631A1 (en) 2023-12-06 2025-06-11 Heidelberg Pharma Research GmbH New antibody drug conjugate as well as methods of production and uses thereof
WO2025120040A1 (en) 2023-12-06 2025-06-12 Adc Therapeutics Sa Anti-psma antibody drug conjugates comprising exatecan
WO2025125386A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that bind to folr1 and methods of use
WO2025137344A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies targeting il-18 receptor beta (il-18rβ) and related methods
WO2025132503A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to ceacam5
WO2025134068A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 Ac Immune Sa Antibody drug conjugates targeting proteinopathies, and uses thereof
WO2025133042A2 (en) 2023-12-22 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Activatable fusion proteins and methods of use
GB202407700D0 (en) 2024-05-30 2024-07-17 Francis Crick Institute Ltd F-actin binding agents

Family Cites Families (351)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
CU22545A1 (es) 1994-11-18 1999-03-31 Centro Inmunologia Molecular Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5342606A (en) 1984-10-18 1994-08-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Polyazamacrocyclic compounds for complexation of metal ions
US5316757A (en) 1984-10-18 1994-05-31 Board Of Regents, The University Of Texas System Synthesis of polyazamacrocycles with more than one type of side-chain chelating groups
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
US5091178A (en) 1986-02-21 1992-02-25 Oncogen Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5079233A (en) 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US5677425A (en) * 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
GB8720833D0 (en) * 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
JP3040121B2 (ja) 1988-01-12 2000-05-08 ジェネンテク，インコーポレイテッド 増殖因子レセプターの機能を阻害することにより腫瘍細胞を処置する方法
US5262530A (en) 1988-12-21 1993-11-16 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5047524A (en) 1988-12-21 1991-09-10 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
WO1991002536A1 (en) 1989-08-23 1991-03-07 Scripps Clinic And Research Foundation Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
CA2066428C (en) 1989-09-08 2000-11-28 Bert Vogelstein Structural alterations of the egf receptor gene in human gliomas
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5183884A (en) 1989-12-01 1993-02-02 United States Of America Dna segment encoding a gene for a receptor related to the epidermal growth factor receptor
JPH053790A (ja) 1990-04-19 1993-01-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd デヒドロペプチダーゼ−ｉ
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
WO1992007574A1 (en) 1990-10-25 1992-05-14 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on b cells
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
CA2407304A1 (en) 1991-03-29 1992-10-15 Genentech, Inc. Human pf4a receptors and their use
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
FI941572A7 (fi) 1991-10-07 1994-05-27 Oncologix Inc Anti-erbB-2-monoklonaalisten vasta-aineiden yhdistelmä ja käyttömenete lmä
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
US5976551A (en) 1991-11-15 1999-11-02 Institut Pasteur And Institut Nationale De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and method of using the determinant
JPH07501451A (ja) 1991-11-25 1995-02-16 エンゾン・インコーポレイテッド 多価抗原結合タンパク質
US5480990A (en) 1991-12-10 1996-01-02 The Dow Chemical Company Bicyclopolyazamacrocyclocarboxylic acid complexes for use as contrast agents
US5428139A (en) 1991-12-10 1995-06-27 The Dow Chemical Company Bicyclopolyazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as radiopharmaceuticals
US5739294A (en) 1991-12-10 1998-04-14 The Dow Chemical Company Bicyclopol yazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as contrast agents
EP0625200B1 (en) 1992-02-06 2005-05-11 Chiron Corporation Biosynthetic binding protein for cancer marker
AU4025193A (en) 1992-04-08 1993-11-18 Cetus Oncology Corporation Humanized C-erbB-2 specific antibodies
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
US5844556A (en) 1992-07-17 1998-12-01 Kabushiki Kaisha Komatsu Seisakusho Intelligent graphic operation panel and highlighting contol method
AU4924893A (en) * 1992-09-16 1994-04-12 Galagen, Inc. Antibody treatment of (helicobacter pylori)
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
DK0669836T3 (da) 1992-11-13 1996-10-14 Idec Pharma Corp Terapeutisk anvendelse af kimære og radioaktivt mærkede antistoffer og humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantigen til behandling af B-cellelymfom
CA2103323A1 (en) 1992-11-24 1994-05-25 Gregory D. Plowman Her4 human receptor tyrosine kinase
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
DE69326937T2 (de) 1993-03-24 2000-12-28 Berlex Biosciences, Richmond Kombination von Antihormonale und bindende Moleküle zur Krebsbehandlung
US5462725A (en) 1993-05-06 1995-10-31 The Dow Chemical Company 2-pyridylmethylenepolyazamacrocyclophosphonic acids, complexes and derivatives thereof, for use as contrast agents
US5385893A (en) 1993-05-06 1995-01-31 The Dow Chemical Company Tricyclopolyazamacrocyclophosphonic acids, complexes and derivatives thereof, for use as contrast agents
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
CA2173150C (en) 1993-10-01 2004-11-30 Kyoichi Sakakibara Novel peptide derivatives
DK0659439T3 (da) 1993-12-24 2002-01-14 Merck Patent Gmbh Immunkonjugater
PT699237E (pt) 1994-03-17 2003-07-31 Merck Patent Gmbh Fvs de cadeia anti-egfr e anticorpos anti-egfr
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
WO1996003397A1 (en) 1994-07-21 1996-02-08 Akzo Nobel N.V. Cyclic ketone peroxide formulations
US5804396A (en) 1994-10-12 1998-09-08 Sugen, Inc. Assay for agents active in proliferative disorders
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
US7166470B2 (en) 1994-10-18 2007-01-23 Symyx Technologies, Inc. Formation of combinatorial arrays of materials using solution-based methodologies
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
EP2163546B1 (en) 1995-03-30 2016-06-01 Pfizer Products Inc. Quinazoline derivatives
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
GB9508538D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
GB9508565D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quiazoline derivative
JPH11507535A (ja) 1995-06-07 1999-07-06 イムクローン システムズ インコーポレイテッド 腫瘍の成長を抑制する抗体および抗体フラグメント類
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
SI2275119T1 (sl) 1995-07-27 2013-12-31 Genentech, Inc. Stabilna izotonična liofilizirana proteinska formulacija
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
WO1997011177A1 (en) * 1995-09-18 1997-03-27 Intracel Corporation Neutralizing monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus
US5834456A (en) 1996-02-23 1998-11-10 The Dow Chemical Company Polyazamacrocyclofluoromonoalkylphosphonic acids, and their complexes, for use as contrast agents
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
DE69736806T3 (de) 1996-03-27 2015-10-08 Genentech, Inc. ErbB3 ANTIKÖRPER
EE05289B1 (et) 1996-04-12 2010-04-15 Warner-Lambert Company Türosiinkinaaside pöördumatud inhibiitorid, farmatseutiline kompositsioon, kasutamine
KR20000011101A (ko) 1996-05-17 2000-02-25 둘락 노먼 씨. 사람 b-세포 항원, 관련 시제
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
ATE268340T1 (de) 1997-03-10 2004-06-15 Univ California Prostata stammzell-antigen (psca)
UA73073C2 (uk) 1997-04-03 2005-06-15 Уайт Холдінгз Корпорейшн Заміщені 3-ціанохіноліни, спосіб їх одержання та фармацевтична композиція
US5994071A (en) 1997-04-04 1999-11-30 Albany Medical College Assessment of prostate cancer
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
WO1998051805A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
US6753165B1 (en) * 1999-01-14 2004-06-22 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for making proteins containing free cysteine residues
ZA986729B (en) 1997-07-29 1999-02-02 Warner Lambert Co Irreversible inhibitors of tyrosine kinases
ZA986732B (en) 1997-07-29 1999-02-02 Warner Lambert Co Irreversible inhibitiors of tyrosine kinases
TW436485B (en) 1997-08-01 2001-05-28 American Cyanamid Co Substituted quinazoline derivatives
US6248564B1 (en) * 1997-08-29 2001-06-19 Harvard University Mutant MHC class I molecules
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
ATE373712T1 (de) * 1997-10-03 2007-10-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Natürlicher menschlicher antikörper
WO1999019488A1 (en) 1997-10-15 1999-04-22 Children's Medical Center Corporation Novel human egf receptors and use thereof
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
US7005504B2 (en) * 1998-01-22 2006-02-28 Genentech, Inc. Antibody fragment-peg conjugates
ES2313779T3 (es) 1998-03-13 2009-03-01 The Burnham Institute Moleculas que migran a diversos organos o tejidos seleccionados.
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DE19820190A1 (de) 1998-04-28 1999-11-04 Metagen Gesellschaft Fuer Genomforschung Mbh Menschliche Nukleinsäuresequenzen aus Pankreas-Tumor
CA2685270C (en) 1998-05-13 2014-07-29 Pharmexa Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
WO2000020579A1 (en) 1998-10-02 2000-04-13 Mcmaster University Spliced form of erbb-2/neu oncogene
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
HK1041009B (en) 1998-12-30 2009-05-08 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Characterization of SOC/CRAC calcium channel protein family
NZ513062A (en) 1999-01-29 2003-10-31 Smithkline Beecham HER-2/neu fusion proteins
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
US7232889B2 (en) 1999-03-08 2007-06-19 Genentech, Inc. PRO300 antibodies
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
US7304126B2 (en) 1999-05-11 2007-12-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7049410B2 (en) 1999-05-14 2006-05-23 Majumdar Adhip P N Antibodies to a novel EGF-receptor related protein (ERRP)
WO2000069909A1 (en) 1999-05-14 2000-11-23 The United States Of America Through The Department Of Veterans Affairs Isolation and characterization of epidermal growth factor related protein
WO2000075655A1 (fr) 1999-06-03 2000-12-14 Takeda Chemical Industries, Ltd. Procede de criblage avec cd100
JP4780633B2 (ja) 1999-06-25 2011-09-28 イムノゲン インコーポレーティッド 抗−ＥｒｂＢ抗体−メイタンシノイド複合体を用いた治療方法
CZ299702B6 (cs) 1999-06-25 2008-10-22 Genentech Inc. Protilátka, imunokonjugát, izolovaná nukleová kyselina, vektor, hostitelská bunka, zpusob výroby protilátky a farmaceutický prostredek ji obsahující
US20030119113A1 (en) 1999-07-20 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
EP1208202A2 (en) 1999-09-01 2002-05-29 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
CA2385528C (en) 1999-10-01 2013-12-10 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
DK1226177T3 (da) 1999-10-29 2008-10-06 Genentech Inc Antistofsammensætninger mod anti-prostata stamcelle-antigen (PSCA) og anvendelser deraf
US6372907B1 (en) 1999-11-03 2002-04-16 Apptera Corporation Water-soluble rhodamine dye peptide conjugates
ES2568625T3 (es) 1999-11-29 2016-05-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Aislamiento de cinco genes novedosos que codifican nuevos melanomas de tipo receptor de Fc implicados en la patogénesis del linfoma/melanoma
EP1248800A2 (en) 1999-11-30 2002-10-16 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
EP1239866A4 (en) 1999-12-10 2005-02-09 Epimmune Inc INDUCTION OF HER2 / NEU CELLULAR IMMUNE RESPONSES USING PEPTIDE AND NUCLEIC ACID-CONTAINING COMPOSITIONS
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
DK1616575T3 (da) 1999-12-23 2012-09-10 Zymogenetics Inc Fremgangsmåde til behandling af inflammation
DE60040240D1 (de) 1999-12-23 2008-10-23 Zymogenetics Inc Löslicher interleukin-20 rezeptor
US20040001827A1 (en) 2002-06-28 2004-01-01 Dennis Mark S. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
DK1240337T3 (da) 1999-12-24 2007-01-02 Genentech Inc Fremgangsmåder og præparater til forlængelse af elimeneringshalveringstider af bioaktive forbindelser
US7297333B2 (en) 2000-01-20 2007-11-20 Genentech, Inc. Anti-PRO10268 antibodies
EP1252294A2 (en) 2000-01-21 2002-10-30 Corixa Corporation Compounds and methods for prevention and treatment of her-2/neu associated malignancies
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
AU2001243142A1 (en) 2000-02-03 2001-08-14 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20030104562A1 (en) 2000-02-11 2003-06-05 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20020142377A1 (en) 2000-02-22 2002-10-03 Glucksmann Maria Alexandra 18607, a novel human calcium channel
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
WO2001066689A2 (en) 2000-03-07 2001-09-13 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7097840B2 (en) * 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
CA2403637A1 (en) 2000-03-24 2001-10-04 Fahri Saatcioglu Novel prostate-specific or testis-specific nucleic acid molecules, polypeptides, and diagnostic and therapeutic methods
AU2001250412A1 (en) 2000-03-31 2001-10-08 Ipf Pharmaceuticals Gmbh Diagnostic and medicament for analysing the cell surface proteome of tumour and inflammatory cells and for treating tumorous and inflammatory diseases, preferably using specific chemokine receptor analysis and the chemokine receptor-ligand interaction
US7279294B2 (en) 2000-04-03 2007-10-09 The United States Of America As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services, Nih Tumor markers in ovarian cancer
EP1301594A2 (en) 2000-04-07 2003-04-16 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, consstitutively activated known g protein-coupled receptors
WO2001088133A2 (en) 2000-05-18 2001-11-22 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
AU2001274888A1 (en) 2000-05-19 2001-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
US20020051990A1 (en) 2000-06-09 2002-05-02 Eric Ople Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
WO2001098351A2 (en) 2000-06-16 2001-12-27 Incyte Genomics, Inc. G-protein coupled receptors
WO2002002587A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
EP1294885A2 (en) 2000-06-30 2003-03-26 Amgen, Inc. B7-like molecules and uses thereof
JP2004528003A (ja) 2000-06-30 2004-09-16 インサイト・ゲノミックス・インコーポレイテッド 細胞外マトリクスおよび細胞接着分子
WO2002006339A2 (en) 2000-07-03 2002-01-24 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2002010187A1 (en) 2000-07-27 2002-02-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h3 and b7-h4, novel immunoregulatory molecules
US7205108B2 (en) 2000-07-28 2007-04-17 Ulrich Wissenbach Trp8, Trp9 and Trp10, novel markers for cancer
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
US20020193329A1 (en) 2000-08-14 2002-12-19 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of Her-2/neu-associated malignancies
AU2001283360A1 (en) 2000-08-14 2002-02-25 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
EP1445318A2 (en) 2000-08-24 2004-08-11 Genetech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
US20020119148A1 (en) 2000-09-01 2002-08-29 Gerritsen Mary E. ErbB4 antagonists
WO2002022660A2 (en) 2000-09-11 2002-03-21 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
AR030612A1 (es) 2000-09-12 2003-08-27 Smithkline Beecham Corp Procedimiento e intermedios
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
US7491797B2 (en) 2000-09-15 2009-02-17 Genentech, Inc. PRO6308 polypeptide
ES2267814T3 (es) 2000-09-15 2007-03-16 Zymogenetics, Inc. Metodo para tratar la inflamacion.
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
AU2001292724B2 (en) 2000-09-18 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. CRIPTO mutant and uses thereof
JP2005506033A (ja) 2000-10-13 2005-03-03 イーオーエス バイオテクノロジー インコーポレイテッド 前立腺癌の診断法、前立腺癌モジュレータースクリーニングの組成物及び方法
AU2002230659A1 (en) 2000-11-07 2002-05-21 Zymogenetics Inc. Human tumor necrosis factor receptor
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
AU2002243495A1 (en) 2001-01-12 2002-07-24 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119126A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119119A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
AU2002245317A1 (en) 2001-01-24 2002-08-06 Protein Design Labs Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
WO2002060317A2 (en) 2001-01-30 2002-08-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
WO2002064780A1 (en) 2001-02-12 2002-08-22 Bionomics Limited Dna sequences for human tumour suppressor genes
WO2002071928A2 (en) 2001-03-14 2002-09-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
WO2002078524A2 (en) 2001-03-28 2002-10-10 Zycos Inc. Translational profiling
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
CA2443617C (en) 2001-04-17 2013-12-10 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Repeat sequences of the ca125 gene and their use for diagnostic and therapeutic interventions
EP1463928A2 (en) 2001-04-18 2004-10-06 Protein Design Labs Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
GEP20074091B (en) 2001-04-26 2007-04-25 Biogen Idec Inc Cripto blocking antibodies and uses thereof
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
CA2446788A1 (en) 2001-05-09 2002-11-14 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
WO2002092836A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, ca125, and uses thereof
JP2004535182A (ja) 2001-05-24 2004-11-25 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド Ｔａｃｉ−免疫グロブリン融合タンパク質
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US7157558B2 (en) 2001-06-01 2007-01-02 Genentech, Inc. Polypeptide encoded by a polynucleotide overexpresses in tumors
JP2005518185A (ja) 2001-06-04 2005-06-23 キュラジェン コーポレイション 新規タンパク質およびそれをコード化する核酸
AU2002314901A1 (en) 2001-06-04 2002-12-16 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
JP2005505257A (ja) 2001-06-05 2005-02-24 エクセリクシス・インコーポレイテッド ｐ５３経路のモディファイヤーとしてのＩＧｓおよび使用方法
AU2002320264B2 (en) 2001-06-05 2008-05-01 Exelixis, Inc. GFATs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
US7125663B2 (en) 2001-06-13 2006-10-24 Millenium Pharmaceuticals, Inc. Genes, compositions, kits and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
WO2002102235A2 (en) 2001-06-18 2002-12-27 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
AU2002322280A1 (en) 2001-06-21 2003-01-21 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
US20030108958A1 (en) 2001-06-28 2003-06-12 Rene De Waal Malefyt Biological activity of AK155
AU2002314433A1 (en) 2001-07-02 2003-01-21 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
US7446185B2 (en) 2001-07-18 2008-11-04 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
WO2003009814A2 (en) 2001-07-25 2003-02-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of prostate cancer
US20050070689A1 (en) 2001-08-03 2005-03-31 Genentech, Inc. Taci and br3 polypeptides and uses thereof
WO2003016475A2 (en) 2001-08-14 2003-02-27 The General Hospital Corporation Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
AU2002313559A1 (en) 2001-08-23 2003-03-10 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
US6902930B2 (en) 2001-08-29 2005-06-07 Vanderbilt University Human Mob-5 (IL-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US20040235068A1 (en) * 2001-09-05 2004-11-25 Levinson Arthur D. Methods for the identification of polypeptide antigens associated with disorders involving aberrant cell proliferation and compositions useful for the treatment of such disorders
CA2459318C (en) 2001-09-06 2017-09-26 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled steap-1 useful in treatment and detection of cancer
WO2003025138A2 (en) 2001-09-17 2003-03-27 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer compositions and methods of screening for modulators of cancer
IL160933A0 (en) 2001-09-18 2004-08-31 Proteologics Inc Methods and compositions for treating ?cap associated diseases
NZ531674A (en) 2001-09-18 2009-03-31 Genentech Inc Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
WO2003025148A2 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
WO2003026493A2 (en) 2001-09-28 2003-04-03 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in cd72
AU2002362454A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Origene Technologies, Inc. Regulated breast cancer genes
WO2003029277A2 (en) 2001-10-03 2003-04-10 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Modulators of lymphocyte activation and migration
WO2004016225A2 (en) 2002-08-19 2004-02-26 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
CA2842429A1 (en) 2001-10-19 2003-05-01 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disorders
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
WO2003035846A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 National Jewish Medical And Research Center Structure of tall-1 and its cognate receptor
KR20110032003A (ko) 2001-10-31 2011-03-29 알콘, 인코퍼레이티드 뼈 형태발생 단백질(ｂｍｐ), ｂｍｐ 수용체 및 ｂｍｐ 결합 단백질 및 녹내장 진단 및 치료에서 그의 용도
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
JP2005511627A (ja) 2001-11-20 2005-04-28 シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド 抗ｃｄ３０抗体を使用する免疫学的疾患の治療
US7344843B2 (en) 2001-11-29 2008-03-18 Serono Genetics Institute S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
AU2002349784A1 (en) 2001-12-03 2003-06-17 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
AU2002366951A1 (en) 2001-12-10 2003-07-09 Nuvelo,Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7935338B2 (en) * 2001-12-11 2011-05-03 University Of Massachusetts Antibodies to treat cancer
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
CA2469833C (en) * 2001-12-21 2008-05-20 Idexx Laboratories, Inc. Canine immunoglobulin variable domains, caninized antibodies, and methods for making and using them
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
ATE482719T1 (de) 2002-02-21 2010-10-15 Univ Duke Behandlungsverfahren unter verwendung von anti- cd22-antikörpern
EP1575480A4 (en) 2002-02-22 2008-08-06 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASES RELATED TO THE IMMUNE SYSTEM
AU2003213606A1 (en) 2002-03-01 2003-10-13 Exelixis, Inc. MP53s AS MODIFIERS OF THE p53 PATHWAY AND METHODS OF USE
WO2003104399A2 (en) 2002-06-07 2003-12-18 Avalon Pharmaceuticals, Inc Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20050287147A1 (en) 2002-05-15 2005-12-29 Reinhard Ebner Cancer-linked gene as target for chemotherapy
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
WO2004000997A2 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
AU2003228345B2 (en) 2002-03-21 2009-02-05 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Identification of kinase inhibitors
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
JP2005520566A (ja) 2002-03-22 2005-07-14 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド Ｃｒｉｐｔｏ特異的抗体
CA2480404A1 (en) 2002-03-25 2003-10-30 Uab Research Foundation Fc receptor homolog, reagents, and uses thereof
AU2003222103A1 (en) 2002-03-28 2003-10-13 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
NZ535762A (en) 2002-04-05 2009-04-30 Agensys Inc Nucleic acid and corresponding protein entitled 98P4B6 (STEAP 2) useful in treatment and detection of cancer
US20040101874A1 (en) 2002-04-12 2004-05-27 Mitokor Inc. Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
EP2011886A3 (en) 2002-04-16 2009-02-11 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20030224467A1 (en) 2002-04-17 2003-12-04 Osborne C. Kent AIB1 as a prognostic marker and predictor of resistance to endocrine therapy
WO2003093444A2 (en) 2002-05-03 2003-11-13 Incyte Corporation Transporters and ion channels
US20030224454A1 (en) 2002-05-30 2003-12-04 Ryseck Rolf Peter Human solute carrier family 7, member 11 (hSLC7A11)
AU2003239969A1 (en) 2002-06-04 2003-12-19 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
AU2003242633A1 (en) 2002-06-06 2003-12-22 Molecular Engines Laboratories Dudulin genes, non-human animal model: uses in human hematological disease
DE60336227D1 (de) 2002-06-06 2011-04-14 Oncotherapy Science Inc Gene und proteine mit bezug zu menschlichem kolonkrebs
WO2003105758A2 (en) 2002-06-12 2003-12-24 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
AU2003247576A1 (en) 2002-06-18 2003-12-31 Archemix Corp. Aptamer-toxin molecules and methods for using same
MXPA04012725A (es) 2002-06-20 2005-09-30 Snaptrack Inc Reduccion de interferencia cruzada en un receptor de gps y sistema de comunicacion combinado.
US7304149B2 (en) 2002-06-20 2007-12-04 Washington University In St. Louis BTLA nucleic acids
AU2003278161A1 (en) 2002-06-21 2004-01-06 Johns Hopkins University School Of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
GB0216081D0 (en) * 2002-07-11 2002-08-21 Imp College Innovations Ltd Methods of making biological materials and uses thereof
AU2003281515A1 (en) 2002-07-19 2004-02-09 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
EP1551877A4 (en) 2002-07-25 2006-01-18 Genentech Inc TACI ANTIBODIES AND THEIR USE
US20050180972A1 (en) 2002-07-31 2005-08-18 Wahl Alan F. Anti-CD20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
WO2004015426A1 (en) 2002-08-06 2004-02-19 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
JP2006500364A (ja) 2002-08-16 2006-01-05 イムノージェン インコーポレーテッド 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
AU2003278725A1 (en) 2002-08-27 2004-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotide predictor set for identifying protein tyrosine kinase modulators
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
EP1545610A4 (en) 2002-09-06 2006-11-08 Mannkind Corp EPITOPE SEQUENCES
EP1581648A2 (en) 2002-09-09 2005-10-05 Nura, Inc. G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
AU2003278002A1 (en) 2002-10-03 2004-04-23 Mcgill Univeristy Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
AU2003288918A1 (en) 2002-10-04 2004-05-04 Van Andel Research Institute Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
NZ538996A (en) * 2002-10-31 2008-04-30 Genentech Inc Methods and compositions for increasing antibody production
EP1581169A4 (en) 2002-11-08 2008-09-17 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASES RELATED TO NATURAL K CELLS
CA2503621A1 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosing dysplasia
JP2006507322A (ja) 2002-11-14 2006-03-02 シンタルガ・ビーブイ 多重自己脱離放出スペーサーとして構築されたプロドラッグ
JP2006516189A (ja) 2002-11-15 2006-06-29 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ アーカンソー Ｃａ１２５遺伝子、および診断および治療のためのその使用
PT1569685E (pt) 2002-11-15 2012-11-02 Univ Colorado Regents Recetor do complemento 2 direcionado a moduladores do complemento
WO2004046342A2 (en) 2002-11-20 2004-06-03 Biogen Idec Inc. Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of carcinomas
ATE542423T1 (de) 2002-11-21 2012-02-15 Univ Utah Res Found Purinerge geruchsmodulation
AU2003298786A1 (en) 2002-11-26 2004-06-18 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
CA2508519A1 (en) 2002-12-02 2004-06-17 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Se Cretary Of The Department Of Health And Human Services Recombinant immunotoxin and use in treating tumors
US20070154886A1 (en) 2002-12-06 2007-07-05 Macina Roberto A Composition, splice variants and methods relating to ovarian specific genes and proteins
US20040157278A1 (en) 2002-12-13 2004-08-12 Bayer Corporation Detection methods using TIMP 1
WO2004058171A2 (en) 2002-12-20 2004-07-15 Protein Design Labs, Inc. Antibodies against gpr64 and uses thereof
WO2004058309A1 (en) 2002-12-23 2004-07-15 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
EP1597558A2 (en) 2003-01-08 2005-11-23 Bristol-Myers Squibb Company Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
US20050181375A1 (en) 2003-01-10 2005-08-18 Natasha Aziz Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer
WO2004065577A2 (en) 2003-01-14 2004-08-05 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotides and polypeptides associated with the nf-kb pathway
WO2004065576A2 (en) 2003-01-15 2004-08-05 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of urological disorder using differential expressed polypeptides
CA2513113A1 (en) * 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
CA2516128A1 (en) 2003-02-14 2004-09-02 Sagres Discovery, Inc. Therapeutic targets in cancer
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
JP5020636B2 (ja) 2003-11-06 2012-09-05 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド リガンドに結合体化可能なモノメチルバリン化合物

Also Published As

Publication number Publication date
HK1100423A1 (zh) 2007-09-21
HUE030079T2 (en) 2017-04-28
US7855275B2 (en) 2010-12-21
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RU2007115040A (ru) 2008-10-27
US7521541B2 (en) 2009-04-21
AU2005286607B2 (en) 2011-01-27
US20100003766A1 (en) 2010-01-07
NZ553500A (en) 2009-11-27
CA2580141C (en) 2013-12-10
DK1791565T3 (en) 2016-08-01
US20090175865A1 (en) 2009-07-09
JP4948413B2 (ja) 2012-06-06
EP1791565A2 (en) 2007-06-06
KR20070054682A (ko) 2007-05-29
TR201808537T4 (tr) 2018-07-23
NZ580115A (en) 2010-10-29
CN101065151A (zh) 2007-10-31
US20180000962A1 (en) 2018-01-04
WO2006034488A2 (en) 2006-03-30
EP3088004A1 (en) 2016-11-02
EP3088004B1 (en) 2018-03-28
PL1791565T3 (pl) 2016-10-31
US20110137017A1 (en) 2011-06-09
US20150017188A1 (en) 2015-01-15
AU2005286607A1 (en) 2006-03-30
CN104447992A (zh) 2015-03-25
KR101270829B1 (ko) 2013-06-07
ES2669510T3 (es) 2018-05-28
IL181584A0 (en) 2007-07-04
RU2412947C2 (ru) 2011-02-27
JP2011162565A (ja) 2011-08-25
WO2006034488A3 (en) 2006-09-28
CN101065151B (zh) 2014-12-10
EP1791565B1 (en) 2016-04-20
US20070092940A1 (en) 2007-04-26
BRPI0516284A (pt) 2008-09-02
JP2008516896A (ja) 2008-05-22
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