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KR20210096559A - 항IL-23p19 항체 및 이의 용도 - Google Patents

항IL-23p19 항체 및 이의 용도 Download PDF

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KR20210096559A
KR20210096559A KR1020207038029A KR20207038029A KR20210096559A KR 20210096559 A KR20210096559 A KR 20210096559A KR 1020207038029 A KR1020207038029 A KR 1020207038029A KR 20207038029 A KR20207038029 A KR 20207038029A KR 20210096559 A KR20210096559 A KR 20210096559A
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KR
South Korea
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antibody
antigen
amino acid
ser
binding fragment
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KR1020207038029A
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준지안 리우
민 우
리 리
슈아이시앙 조우
엔쿤 조우
Original Assignee
이노벤트 바이오로직스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드
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Abstract

본 발명은 IL-23p19에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 이의 항체 단편, 및 상기 항체 또는 항체 단편을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체 또는 이의 항체 단편을 코딩하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 숙주 세포, 및 관련 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 항체 및 항체 단편의 치료 및 진단 용도에 관한 것이다.

Description

항IL-23p19 항체 및 이의 용도
본 발명은 IL-23p19에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 이의 항체 단편, 및 상기 항체 또는 항체 단편을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체 또는 이의 항체 단편을 코딩하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 숙주 세포, 및 관련 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 항체 및 항체 단편의 치료 및 진단 용도에 관한 것이다.
배경기술
인터루킨-12(IL-12)는 대략적인 분자량을 따서 p35 및 p40으로 명명된 디술피드 결합 글리코실화 서브유닛 2개로 이루어진 분비형 이종이량체 사이토카인이다. IL-12의 p40 서브유닛은 p19라는 단리 단백질 서브유닛과 결합하여 새로운 사이토카인 인터루킨-23(IL-23)을 형성할 수 있다는 사실이 밝혀졌다(Oppman et al., 2000).
인터루킨-23(IL-23)은 IL-23에 특이적인 p19(IL-23p19) 및 IL-12와 공유되는 p40(IL-12p40)의 서브유닛 2개를 포함하는 이종이량체 사이토카인이다. p19 서브유닛은 IL-6, 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF) 및 IL-12의 p35 서브유닛과 구조적으로 관련되어 있다. IL-23은 서브유닛 2개, 즉 IL-23 수용체에 특이적인 IL-23R 및 IL-12 수용체와 공유되는 IL-12Rb1을 포함하는 이종이량체 수용체에 결합함으로써 신호 전달을 매개한다.
기존의 여러 연구에서 p40의 유전적 결함의 결과(p40 녹아웃 마우스; [p40KO 마우스])가 p35 결핍 마우스(예를 들어, p35KO 마우스)에서 관측되는 것보다 심각하다는 사실이 판명되었다. 상기 결과는 일반적으로 p40 녹아웃이 IL-12 발현은 물론 IL-23 발현도 차단한다고 해석할 수 있다(예를 들어, Oppmann et al. (2000) Immunity 13:715-725; Wiekowski et al. (2001) J. Immunol . 166:7563-7570; Parham et al. (2002) J. Immunol . 168:5699-708; Frucht (2002) Sci STKE 2002, E1-E3; Elkins et al. (2002) Infection Immunity 70:1936-1948 참조). 최근 연구에 따르면 IL-23p19 결핍 마우스에서 발생하거나 IL-23-특이적 항체 중화반응이 일으키는 IL-23 억제는 항IL-12p40 전략에 필적하는 이점을 제공할 수 있다(Cua et al., 2003; Murphy et al., 2003; Benson et al., 2004). 따라서 면역매개질환에서 IL-23 특이성이 증가하는 것은 분명한 사실이다. IL-23 중화는 IL-12 경로를 억제하지 않으므로 주요 숙주 면역 방어기제에 제한적으로만 영향을 미치면서 면역매개질환에 대한 효과적인 치료법을 제공하는 것이 가능하다. 이는 현재의 치료 선택지에 비해 현저하게 개선된 것이다.
따라서 본 발명은 신규 IL-23P19에 대한 당 업계의 필요성을 충족시키고자 기존 항체에 필적하거나 우수한 신규 IL-23p19 항체 개발에 초점을 맞추었다.
발명의 내용
본 발명은 IL-23p19에 결합하는 신규 항체 및 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항IL-23p19 항체는 하나 이상의 다음과 같은 특성을 가진다.
(i) IL-23p19에 높은 친화도로 결합하는 능력;
(ii) IL-23 신호 전달 경로 차단(예를 들어, 세포에 있어서 IL-23에 의한 IL-17 분비 유도를 차단함으로써 차단함); 및
(iii) IL-23 관련 질환 치료 또는 예방.
일부 실시양태에서, 본 발명은 서열 번호 9 또는 10으로 표시되는 3개의 중쇄 CDR(HCDR) 및/또는 서열 번호 11 또는 12로 표시되는 3개의 경쇄 CDR(LCDR)을 포함하는, IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산, 핵산을 포함하는 벡터, 및 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본 출원에 개시된 항체 또는 그의 단편의 제조 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체를 포함하는 면역접합체, 제약 조성물 및 조합 생성물을 제공한다.
본 발명은 본 출원에 개시된 항체를 이용하여 대상체의 IL-23 매개 신호 전달 경로를 차단하는 방법 및 IL-23 관련 질환, 예를 들어 면역계 질환(자가면역질환 또는 염증)을 예방 또는 치료하는 방법을 추가로 제공한다.
본 발명은 또한 샘플 내의 IL-23p19를 검출하는 방법에 관한다.
본 발명을 다음의 도면 및 특정 실시예에서 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 도면 및 특정 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안되며, 당업자가 용이하게 상도할 수 있는 변형은 본 발명의 사상 및 첨부된 청구범위의 보호 범위에 포함된다.
도 1은 마우스의 비장 림프구에서 인간화 항체 17D1 및 17D1-YTE가 IL-23 유도 IL-17 분비를 억제하는 것을 나타낸다.
도 2는 마우스의 우측 귀 평균 두께의 실험군별 경시적 변화를 나타낸다.
도 3은 마우스의 귀 부종억제율의 실험군별 경시적 변화를 나타낸다.
도 4는 마우스의 체중의 실험군별 경시적 변화를 나타낸다.
상세한 설명
I. 정의
본 발명을 상세히 기술하기에 앞서, 본 발명은 본 출원에 기술된 특정 방법, 프로토콜 및 시약에 한정되지 않으며, 이는 달라질 수 있음을 이해해야 한다. 또한, 본 출원에서 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 기술하기 위한 것이며 본 발명의 범위를 한정하지 않는다. 하기의 청구항만이 본 발명의 범위를 제한할 수 있다. 달리 정의되지 않는 한, 본 출원에서 쓰이는 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 가진다.
본 명세서를 설명하기 위해 용어를 다음과 같이 정의한다. 단수형은 복수형을 포함할 수 있으며, 이의 반대도 가능하다. 본 명세서에서 쓰이는 용어는 특정 실시예를 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위를 제한하기 위한 것이 아니다.
수치와 함께 사용되는 용어 "약"은 명시된 수치 미만의 하한 5% 및 명시된 수치 초과의 상한 5% 범위의 수치를 포함하는 것으로 간주한다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "및/또는"은 선택지 중 임의의 하나 또는 임의의 두 개 이상을 지칭하는 것으로 간주한다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "포함한다(comprise/include)"는 열거하는 요소, 정수(integer) 또는 단계를 포함하되, 그 외의 요소, 정수 또는 단계를 배제하지 않는다. 본 명세서에서 쓰이는 용어 "포함하다(comprise/include)"는, 달리 정의하지 않는 한 열거한 요소, 정수 또는 단계가 전체를 구성되는 상황 또한 포함한다. 예를 들어, 특정 서열의 항체 가변 영역을 "포함(comprise)"하면, 이는 특정 서열로 구성되는 항체 가변 영역도 포함하는 것이 된다.
IL-23의 p19 서브유닛("IL-23p19" 또는 "p19 서브유닛")은 189개의 아미노산을 가지는 폴리펩티드로, 21개 아미노산의 리더 서열(Oppmann et al., Immunity 13:715 (2000); 서열 번호 181번)과 업-업-다운-다운 토폴로지(up-up-down-down topology)를 가지는 4개의 패킹 알파 나선 A, B, C 및 D를 포함한다. 4개 나선은 폴리펩티드 루프 3개로 연결된다. A-B 및 C-D 루프는 평행 나선을 연결하기 때문에 상대적으로 길다. 짧은 B-C 루프는 B 및 C 나선을 역병렬로 연결한다. IL-23의 p19 서브유닛은 나선형 사이토카인의 IL-6 패밀리 구성원이다. 사이토카인의 패밀리 구성원은 보존 에피토프 3개를 통해 동족수용체에 결합한다(사이트 I, II, III; Bravo and Heath (2000) EMBO J., 19:2399-2411). p19 서브유닛은 사이토카인 수용체 서브유닛 3개와 상호작용하여 적합한 신호 전달 복합체를 형성한다. 세포에서 발현하면 p19 서브유닛은 먼저 p40 서브유닛과 복합체를 형성한다. p19 서브유닛은 p40 서브유닛을 IL-12와 공유한다. p19p40 복합체는 이종이량체 단백질로서 세포에서 분비되며, 이를 IL-23이라 한다. 한 실시양태에서, 본 출원에 개시된 IL-23p19는 인간(NCBI: AAG37232) 또는 필리핀원숭이(NCBI: AEY84629)에서 유래한다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "항IL-23p19 항체", "항IL-23p19", "IL-23p19 항체" 또는 "IL-23p19에 결합하는 항체"는 인간 또는 필리핀원숭이의 IL-23p19 서브유닛 또는 이의 단편에 충분한 친화도로 결합하여 인간 또는 필리핀원숭이의 IL-23p19 서브유닛을 표적으로 하는 진단제 및/또는 치료제로 작용할 수 있는 항체를 가리킨다. 한 실시양태에서, 항IL-23p19 항체는 예를 들어 방사선면역측정법(RIA), 생물학적 광학 간섭법 또는 MSD 측정법에 의해 측정할 경우, 인간 또는 필리핀원숭이의 IL-23p19 단백질에 대한 항체 결합의 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 또는 약 90% 이상 적게 비인간 또는 비필리핀원숭이의 IL-23p19 단백질에 결합한다.
"항체 단편"은 온전한 항체와 상이한 분자를 지칭하며, 이는 온전하지 않은 항체의 일부를 포함하고 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합한다. 항체 단편의 예로는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일쇄 가변 단편(예를 들어, scFv); 단일 도메인 항체; 2가 또는 이중특이성 항체 또는 이의 단편; 카멜리드 항체; 항체 단편으로부터 형성된 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체를 들 수 있으나 이에 한정되지는 않는다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "에피토프"는 항체 분자와 상호작용하는 항원(예를 들어, IL-23p19)의 모이어티를 가리킨다.
참조 항체로서 "동일하거나 중첩하는 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 분석에서 이의 항원에 대한 참조 항체 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상을 차단하는 항체, 또는 반대로 경쟁 분석에서 이의 항원에 대한 항체 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상을 차단하는 참조 항체를 가리킨다.
이의 항원에 결합하는 참조 항체와 경쟁하는 항체란 경쟁 분석에서 이의 항원에 대한 참조 항체 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%를 차단하는 항체를 가리킨다. 반대로 참조 항체는 경쟁 분석에서 이의 항원에 대한 항체 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상을 차단한다. 항체가 다른 항체와 경쟁하는지의 여부 판정에는 다양한 유형의 경쟁적 결합 분석, 예컨대 직접 또는 간접 고상 방사성면역측정법(RIA), 직접 또는 간접 고상 효소면역측정법(EIA) 및 샌드위치 경쟁 분석을 적용할 수 있다(예를 들어, Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9: 242-253 참조).
참조 항체와 이의 항원에 대한 결합을 억제(예를 들어, 경쟁적 억제)하는 항체는 이의 항원에 대한 참조 항체 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%를 억제하는 항체를 지칭한다. 반대로, 참조 항체는 이의 항원에 대한 항체 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상을 억제한다. 항원에 대한 항체 결합은 친화도(예를 들어, 평형 해리상수)로 측정할 수 있다. 친화도 측정법은 당업계에 공지되어 있다.
참조 항체와 동일하거나 유사한 결합 친화도 및/또는 특이도를 나타내는 항체는 참조 항체의 결합 친화도 및/또는 특이도의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%를 가질 수 있는 항체를 가리킨다. 이는 당 업계에서 주지의 결합 친화도 및/또는 특이도 판정법 중 임의의 방법으로 판정할 수 있다.
"상보성 결정 영역(complementarity determining region)" 또는 "CDR 영역" 또는 "CDR"은 항체 가변 영역 내의 서열에서 가변성이 매우 높은 부분으로, 구조적으로 정의된 루프(초가변 루프; hypervariable loop)를 형성하고/거나 항원 접촉 잔기(antigen-contacting residues)(항원 접촉부위; antigen contact site)를 포함한다. CDR은 주로 항원 에피토프에 대한 결합을 담당한다. 중쇄 및 경쇄의 CDR은 일반적으로 CDR1, CDR2, 및 CDR3으로 지칭하고, N-말단에서부터 순서대로 번호를 붙인다. 항체의 중쇄 가변 도메인에 위치한 CDR은 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3이라 지칭하고, 항체의 경쇄 가변 도메인에 위치한 CDR들은 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3이라 지칭한다. 경쇄 가변 영역 또는 중쇄 가변 영역의 특정 아미노산 서열에서, 특정한 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열에서 각 CDR의 정확한 아미노산 서열의 경계는, 항체의 3차원 구조와 CDR 루프의 토폴로지에 기반한 Chothia(Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883; Al-Lazikani et al., "Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins", Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997)), 항체 서열 가변성에 기반한 Kabat(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th edition, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)), AbM(University of Bath), Contact(University College London), 국제 ImMunoGeneTics 데이터베이스(IMGT)(World Wide Web의 imgt.cines.fr/), 다수의 결정 구조를 사용하는 친화도 전파 클러스터링에 기반한 North CDR 정의를 포함하는, 주지의 각종 항체 CDR 할당 시스템(CDR assignment system) 중 임의의 하나 또는 이들의 조합을 적용하여 판정할 수 있다.
예를 들어, 각종 CDR 판정 방식에 따르면, 각 CDR의 잔기는 다음과 같다.
Figure pct00001
또한 CDR은 기준 CDR 서열과 Kabat 넘버링 위치가 동일한지의 여부에 근거하여 판정할 수 있다(예를 들어, 본 발명의 예시적인 CDR 중 임의의 것).별도의 기재가 없는 한, 본 명세서에서 쓰이는 용어 "CDR" 또는 "CDR 서열"은 상기 기재된 임의의 방식에 의해 결정된 CDR 서열을 망라한다.
별도의 기재가 없는 한, 본 발명에서 항체 가변 영역(중쇄 가변 영역 잔기 및 경쇄 가변 영역 잔기를 포함)의 잔기 위치는 Kabat 넘버링 시스템을 따라 넘버링한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).
한 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체의 CDR 경계는, 예를 들어 표 1에 서열에 나타난 바와 같이 AbM 방식에 따라 결정한다.
할당 시스템이 상이하면 해당 시스템으로 얻은 항체의 가변 영역의 CDR 경계도 상이할 수 있다. 다시 말해, 서로 다른 할당 시스템에 의해 정의한 항체의 가변 영역의 CDR 서열은 상이하다. 따라서, 본 발명에서 정의하는 특정 CDR 서열을 가지는 항체를 정의할 때, 항체의 범위는 특정 CDR 서열을 포함하는 가변 영역 서열을 가지는 항체들을 망라하되, 상이한 프로토콜(예를 들어, 그 외의 할당 시스템 규칙 또는 이들을 조합한 것)을 적용한 결과 본 발명에서 정의하는 특정 CDR 경계와는 상이해진 CDR 경계를 가지는 항체도 포함하게 된다.
상이한 특이성(즉, 상이한 항원에 대한 상이한 결합 부위)을 가지는 항체는 (동일한 할당 시스템 하에서) 상이한 CDR을 가지게 된다. 다만 CDR이 항체에 따라 달라진다 해도, CDR 내의 일부 아미노산 위치만이 항원 결합과 직접 관련된다. 최소 중첩 영역은 Kabat, Chothia, AbM, Contact, 및 North 방식 중 적어도 2개를 사용하여 판정할 수 있으며, 그에 따라 항원 결합을 위한 "최소 결합 유닛"을 파악하게 된다. 최소 결합 유닛은 CDR의 일부일 수 있다. 잔류 CDR 서열(rest CDR sequences)의 잔기는 항체의 구조 및 단백질 접힘(protein folding)을 통해 판정할 수 있으며, 이는 당업자에게 주지의 사실이다. 따라서, 본 출원에 기재된 CDR의 임의의 변형 또한 본 발명에서 고려의 대상이 될 것이다. 예를 들어, CDR의 임의의 변형에서, 최소 결합 유닛의 아미노산 잔기는 변하지 않지만, Kabat 또는 Chothia에서 정의된 그 외의 CDR 잔기는 보존성(conservative) 아미노산 잔기로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "IL-23 관련 병태" 또는 "IL-23 관련 질환"은 IL-23 활성으로 유도되고 IL-23이 일반적인 관점에서 비정상적으로 발현되는 병태를 가리킨다. IL-23 관련 병태는 면역계 질환, 예를 들어 자가면역질환 및 염증질환을 포함한다. 해당 질환은 류마티스 관절염(RA), 전신 홍반성 낭창(SLE), 경피증, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증, 건선, 건선성 관절염, 염증성 장질환(예를 들어, 궤양성 대장염 및 크론병), 염증, 천식, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 및 강직성 척추염을 포함하되 이에 한정되지는 않는다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "면역계 질환"은 면역계 장애에 관련된 질환을 포함한다. 본 명세서에서 쓰이는 용어 "자가면역질환"은 자기 항원에 대한 신체의 면역 반응으로 인해 스스로의 조직에 손상을 입히는 질환을 가리킨다. 본 명세서에서 쓰이는 용어 "염증질환"은 병리가, 예를 들어 면역계 세포의 수, 이동 또는 생존력 변화에 전체적 또는 부분적으로 기여하는 병태를 가리킨다. 면역계 세포의 예로는 T세포, B세포, 단핵구 또는 대식세포, 항원 제시 세포(APC), 수지상 세포, 미세아교세포, NK 세포, NKT 세포, 호중구, 호산구, 비만 세포, 또는 면역학과 특히 관련된 그 외의 모든 세포(예를 들어, 사이토카인 생산 내피세포 또는 상피세포)를 들 수 있다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "치료제"는 IL-23 관련 질환의 예방 또는 치료에 효과적인 모든 물질을 망라하며, 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 기타 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제(면역억제제 또는 소염제)를 포함한다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제 또는 예방하고/거나 세포 사멸 또는 파괴를 야기하는 물질을 가리킨다.
"화학요법제"는 면역계 질환 치료에 유용한 화학적 화합물을 포함하며, 알킬화제, 대사길항물질, 천연물, 항생물질, 효소, 기타 약제, 호르몬 및 길항제, 항에스트로겐, 항안드로겐, 및 비스테로이드성 항안드로겐 등을 포함하되 이에 한정되지는 않는다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "소분자 약물"은 생물학적 과정을 조절할 수 있는 저분자량 유기화합물을 가리킨다. "소분자"는 분자량이 10kD 미만, 일반적으로 2kD 미만, 바람직하게는 1kD 미만인 분자로 정의할 수 있다. 소분자는 무기분자, 유기분자, 무기성분을 포함하는 유기분자, 방사성 원자를 포함하는 분자, 합성 분자, 펩티드 모방체, 및 항체 모방체를 포함하되 이에 한정되지는 않는다. 치료제의 측면에서 볼 때, 소분자는 세포에 잘 침투하고 분해에 덜 민감하며 대분자에 비해 면역 반응을 유도할 가능성이 낮다. 소분자 약물, 예컨대 항체 및 사이토카인의 펩티드 모방체, 소분자 독소에 관한 설명은, 예를 들어 Casset et al. (2003), Biochem . Biophys. Res. Commun ., 307:198-205; Muyldermans (2001), J. Biotechnol ., 74:277-302; Li (2000), Nat. Biotechnol ., 18:1251-1256; Apostolopoulos et al. (2002), Curr . Med . Chem ., 9:411-420; Monfardini et al. (2002), Curr . Pharm . Des., 8:2185-2199; Domingues et al. (1999), Nat. Struct . Biol ., 6:652-656; Sato and Sone (2003), Biochem . J., 371:603-608; 미국특허 제 6,326,482호를 참조할 수 있다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "면역조절제"는 면역 반응을 억제 또는 조절하는 천연 또는 합성 활성제 또는 약물을 가리킨다. 면역 반응은 체액 반응 또는 세포 반응일 수 있다. 면역조절제는 면역억제제 또는 소염제를 포함한다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "면역억제제", "면역억제약물" 또는 "면역억제약"은 면역계의 활동을 억제 또는 예방하고자 면역억제요법에서 사용하는 치료제를 가리킨다. 상기 치료제는 이식 장기 및 조직(예를 들어, 골수, 심장, 신장, 간)의 거부 반응을 예방하고/거나 면역질환 또는 자가면역에 기원할 가능성이 높은 질환(예를 들어, 류마티스 관절염, 중증 근무력증, 전신 홍반성 낭창, 궤양성 대장염, 다발성 경화증)을 치료하기 위해 임상적으로 쓰인다. 면역억제제는 글루코코르티코이드 세포증식억제제, 항체(생물학적 반응조절제 또는 DMARD 포함), 이뮤노필린에 작용하는 약물, 아울러 증식성질환 치료에 쓰이는 주지의 화학요법제를 포함하는 그 외 약물 등 4가지로 분류할 수 있다. 특히 다발성 경화증의 경우, 본 출원에 개시된 항체는 코팍손이라 하는 신규 미엘린 결합 단백질 유사 치료제와 조합하여 투여할 수 있다.
"소염제" 또는 "소염약"은 스테로이드성 또는 비스테로이드성 치료제를 가리킨다. 스테로이드 또는 코르티코스테로이드는 부신에서 자연적으로 생성되는 호르몬인 코르티솔과 유사한 약물이다. 스테로이드는 주로 전신 혈관염(혈관 염증) 및 근염(근육 염증)과 같은 특정 염증 병태의 치료에 쓰인다. 스테로이드는 류마티스 관절염(측면 관절에서 발생하는 만성 염증성 관절염), 전신 홍반성 낭창(비정상적인 면역 체계 기능으로 인한 전신 질환), 및 쇼그렌 증후군(안구 건조증 및 구강 건조증을 유발하는 만성 질환)과 같은 염증 병태를 선택적으로 치료하는 데도 쓰일 수 있다.
비스테로이드성 소염제는 일반적으로 NSAID라 약칭하며, 진통제, 해열제 및 소염 효과가 있는 약물로, 통증, 발열, 및 염증을 완화한다. 본 명세서에서 쓰이는 용어 "비스테로이드"는 (기타 다양한 효과 중에서) 유사한 에이코사노이드 억제 및 소염 효과를 가지는 약물을 스테로이드와 구별하기 위한 용어이다. 일반적으로 NSAID는 류마티스 관절염, 골관절염, 염증성 관절병증(예를 들어, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 라이터 증후군), 급성통풍, 생리통, 전이성 뼈통증, 두통 및 편두통, 수술 후 통증, 염증 및 조직 손상으로 인한 경도 내지는 중등도의 통증, 발열, 및 신산통과 같은 병태의 증상을 완화하는 데 쓰인다. NSAID은 살리실산, 아릴알칸산, 2-아릴프로피온산, N-아릴안트라닐산(페남산), 옥시캄, 콕시브 및 N-술폰아닐리드를 포함한다.
본 명세서에 기재된 바와 같이 TNF(종양괴사인자)는 바람직하게는 주로 단핵구 및 대식세포에 의해 분비되며 말초 CD4+ 및 CD8+ T 림프구에 의해 생성되는 것으로 알려진 다발성 동종삼량체 사이토카인 TNFα를 포함한다. TNFα는 가용형과 막관통형으로 발현된다(막결합 전구체형은 메탈로프로테이나아제 TNFα 전환 효소(TACE)에 의해 단백질 분해되어 가용성 동종삼량체로 절단된다). TNFα는 면역 세포 조절에 기여하며, 전신성 염증, 특히 급성기에 중요한 것으로 여겨진다. 과잉 TNFα는 RA, CD 및 건선을 포함하는 각종 자가면역질환과 연관이 있다.
본 명세서에서 "IL-17", 예컨대 IL-17A 및 IL-17F는 염증에 관여하는 사이토카인을 가리킨다. IL-17A는 활막 섬유 아세포, 단핵구 및 대식세포에서 염증과 Th17 세포 생산을 촉진하는 IL-1β, TNF-α, IL-6 및 IL-23과 같은 염증성 사이토 카인의 생산을 유도한다. IL-17A는 또한 대량의 케모카인(CXCL-1, CXCL-2, CXCL-5, CXCL-8, CCL-2, 및 CCL-20 포함)을 유도하여 T세포, B세포, 단핵구 및 호중구를 동원한다(Lundy, S.K., Arthritis Res. Ther ., 9:202(2007) 참조). IL-17F 및 IL-17A는 가장 큰 상동성(55%)을 공유하며, 양쪽 모두 전염증성 사이토카인이다. IL-17A 및 IL-17F는 모두 Th17 세포에 의해 생산되는 반면, 그 외의 IL-17 패밀리 구성원인 IL-17B, IL-17C 및 IL-17D는 비T세포 공급원에서 생산된다. IL-17A 및 IL-17F는 IL-17A 동종이량체 및 IL-17F 동종이량체, 또는 IL-17A/F 이종이량체의 형태로 존재한다(Liang, S.C., et al., J. Immunol ., 179:7791-7799(2007) 참조). IL-17A는 류마티스 관절염의 경우 혈청과 활액에서 증가하며, 활막의 T세포가 풍부한 영역에 존재한다(Shahrara, S., Arthritis Res. Ther ., 10:R93(2005) 참조). IL-17A는 또한 뼈와 연골 손상을 유발할 수 있다. IL-17을 효과적으로 차단하려면 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체 및 IL-17A/F 이종이량체를 중화해야 한다.
"기능성 Fc 영역"은 자연 서열의 Fc 영역의 "이펙터 기능"을 가진다. "이펙터 기능"의 예로는 C1q 결합, CDC, Fc 수용체 결합, ADCC, 식세포작용, 세포 표면 수용체(예를 들어, B세포 수용체 또는 BCR) 하향 조절 등을 들 수 있다. 상기의 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 도메인)과 회합하는 것을 필요로 하며, 본 출원에 개시된 다양한 분석법을 사용하여 평가할 수 있다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위한 것이다. 상기 용어는 천연 서열의 Fc-영역 및 변이체 Fc-영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카르보닐 말단까지 연장된다. 단 Fc 영역의 C-말단 리신(Lys447)은 존재해도 좋고 존재하지 않아도 좋다. 별도의 기재가 없는 한, Fc 영역 또는 불변 영역 내의 아미노산 잔기의 넘버링은 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991에 기재되어 있는 EU 넘버링 시스템, 또는 EU 인덱스를 따른다.
"IgG 형태의 항체"는 IgG 형태에 속하는 항체의 중쇄 불변 영역을 가리킨다. 동일한 유형의 항체의 중쇄 불변 영역은 동일하고, 상이한 유형의 항체의 중쇄 불변 영역은 상이하다. 예를 들어, IgG1 형태의 항체는 IgG1의 Ig 도메인에 해당하는 중쇄 불변 영역의 Ig 도메인을 가리킨다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "유효량"은 한 차례 또는 여러 차례 환자에게 투여한 후, 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에게서 예상된 효과를 생성하는 본 발명의 항체, 단편 또는 접합체 또는 조성물의 양 또는 용량을 가리킨다. 유효량은 종(예를 들어, 포유류): 크기, 연령, 전반적인 건강 상태; 관련 특정 질환; 질환의 정도 또는 중증도; 개별 환자에서의 반응; 투여되는 특정 항체; 투여 경로; 투여 제제의 생체이용률 특성; 선택한 투여계획; 임의의 조합 요법의 용도와 같은 다양한 요인을 고려함으로써 당업자에 해당하는 주치의가 용이하게 결정할 수 있다.
"치료학적으로 유효한 양"은 원하는 기간 동안 필요한 투여량으로 원하는 치료 결과를 달성하기에 효과적인 양을 가리킨다. 항체 또는 항체 단편, 또는 그 접합체 또는 조성물의 치료학적으로 유효한 양은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 체중 및 개체에서 원하는 반응을 유도하는 항체 또는 항체부분의 능력과 같은 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 또한 치료학적으로 유효한 양은 항체 또는 항체 단편, 또는 이의 접합체 또는 조성물의 임의적 독성 또는 바람직하지 않은 효과가 유익한 치료 효과보다 못한 양을 말한다. "치료학적으로 유효한 양"은 치료를 받지 않은 대상체에 비하여 측정가능한 파라미터(예를 들어, 부종률)를 바람직하게는 적어도 약 20%, 보다 바람직하게는 적어도 약 40%, 보다 더 바람직하게는 적어도 약 50%, 60% 또는 70%, 보다 더욱 바람직하게는 적어도 약 80% 또는 90% 억제한다. 측정가능한 파라미터(예를 들어, 부종률)를 억제하는 화합물의 능력은 인간 자가면역질환 또는 염증에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템으로 평가할 수 있다.
"예방학적으로 유효한 양"은 원하는 기간 동안 필요한 투여량으로 원하는 예방 효과를 달성하기에 효과적인 양을 가리킨다. 예방학적으로 유효한 양은 질환의 이전 또는 초기 단계에 대상체에게 투여되기 때문에, 일반적으로 예방학적으로 유효한 양은 치료학적으로 유효한 양보다 적다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호 호환이 가능하며, 외인성 핵산을 도입한 세포를 가리키는 한편 해당 세포의 자손을 포함한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환 세포"를 포함하며, 이는 계대 횟수에 상관없이 1차로 형질전환한 세포 및 이로부터 유래한 자손을 포함한다. 세대는 모 세포와 핵산 함량이 완전히 동일하지 않을 수 있지만, 돌연변이를 포함할 수 있다. 본 출원은 최초로 형질전환한 세포로부터 선별 또는 선택한 것과 동일한 기능 또는 생물활성을 가지는 돌연변이 세대를 포함한다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생성되거나 인간 항체 라이브러리 또는 그 외의 인간 항체 코딩 서열을 이용하는 비인간 공급원으로부터 유래한 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 가지는 항체를 가리킨다. 인간 항체의 상기 정의에 따라 비인간 항원 결합 잔기를 함유하는 인간화 항체는 명시적으로 배제된다.
"인간화" 항체는 비인간 CDR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 가리킨다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체는 적어도 1개, 일반적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 전부 포함하며, CDR 전부, 또는 실질적으로 전부가 비인간 항체의 CDR에 상응하고, FR 전부, 또는 실질적으로 전부가 인간 항체의 FR에 상응한다. 인간화 항체는 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 선택적으로 포함해도 좋다. 항체(예를 들어, 비인간 항체)의 "인간화 형태"는 인간화 항체를 가리킨다.
"면역접합체"는 세포독성제 또는 표지를 포함하되 이에 한정되지 않는 1종 이상의 다른 물질에 접합한 항체이다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "표지"는 폴리뉴클레오티드 프로브 또는 항체와 같은 작용제에 직접 또는 간접적으로 접합 또는 융합되어 접합 또는 융합된 작용제의 검출을 용이하게 하는 화합물 또는 조성물을 가리킨다. 표지 자체가 검출가능한 것이거나(예를 들어, 방사성 동위원소 표지 또는 형광 표지), 또는 효소 표지의 경우 검출가능 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변화에 대한 촉매로 작용할 수 있다. 상기 용어는 검출가능한 물질을 프로브 또는 항체에 결합(즉 물리적 연결)시킴으로써 프로브 또는 항체를 직접 표지하는 것과, 직접 표지되는 다른 시약과 반응시킴으로써 프로브 또는 항체를 간접적으로 표지하는 것을 포함한다. 간접 표지의 예로는 형광 표지된 2차 항체를 사용한 1차 항체의 검출, 형광 표지된 스트렙타비딘으로 검출가능한 바이오티닐화 DNA 프로브의 말단 표지를 들 수 있다.
"개체" 또는 "대상체"는 포유류를 포함한다. 포유류는 가축(예를 들어, 소, 염소, 고양이, 개, 및 말), 영장류(예를 들어, 인간 및 원숭이를 포함하는 인간 이외의 영장류), 토끼류, 및 설치류(예를 들어, 마우스, 래트)를 포함하되 이에 한정되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 개체 또는 대상체는 인간이다.
"단리"된 항체는 해당 항체의 천연 환경의 성분으로부터 분리된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 예를 들어 전기영동(예를 들어, SDS-PAGE, 등전 집속(IEF) 및 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에서 95% 또는 99% 이상의 순도로 정제된다. 항체 순도를 평가하는 방법에 관해서는, 예를 들어, Flatman et al., J. Chromatogr., B848:79-87 (2007)을 참조할 수 있다.
"항IL-23p19 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 단리 핵산"은 단일 벡터 또는 개별 벡터 내의 핵산 분자 및 숙주 세포 내의 하나 이상의 위치에 존재하는 핵산 분자를 포함하는 항체 중쇄 또는 경쇄(또는 이의 단편)를 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자를 가리킨다.
서열간 서열 동일성은 다음과 같이 산출한다.
2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산 서열의 동일성 백분율을 결정하기 위해, 최적의 비교를 목적으로 서열들을 정렬한다(예를 들어, 최적의 정렬을 위해 갭을 제 1 및 제 2 아미노산 서열, 또는 핵산 중 하나 또는 둘 모두에 도입할 수 있다). 한 바람직한 실시양태에서, 비교를 목적으로, 정렬 기준 서열의 길이를 기준 서열의 길이의 30% 이상, 바람직하게는 40% 이상, 보다 바람직하게는 50% 또는 60% 이상, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%, 80%, 90% 또는 100% 이상이 된다. 이어서, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에서의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드가 제 1 서열 내의 위치에 상응하는 제 2 서열 내의 위치를 점유할 경우, 분자는 이 위치에서 동일하다.
수학 알고리즘을 사용하여 서열을 비교하고 양측 서열 사이의 동일성 백분율을 계산할 수 있다. 한 바람직한 실시양태에서, 2개의 아미노산 서열 사이의 동일성 백분율은 Blossom 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스와 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램에 통합된 Needlema-Wunsch 알고리즘((1970) J. Mol. Biol., 48:444-453; http://www.gcg.com에서 확인 가능)으로 판정한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 2개의 뉴클레오티드 산 서열 사이의 동일성 백분율은 NWSgapdna.CMP 매트릭스와, 40, 50, 60, 70 또는 80의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램(http://www.gcg.com에서 확인 가능)으로 판정한다. 특히 바람직한 파라미터 세트(및 별도의 기재가 없는 한 사용해야 하는 파라미터 세트)는 갭 페널티 12, 갭 연장 페널티 4, 프레임시프트 갭 페널티 5를 가지는 Blossom 62 스코어링 매트릭스이다.
또한, 2개의 아미노산 서열 또는 뉴클레오티드 서열 사이의 동일성 백분율은 정렬 프로그램(버전 2.0)((1989) CABIOS, 4:11-17)에 통합된 E. Meyers 및 W. Miller 알고리즘을 사용하여 PAM120 가중잉여표, 갭 길이 페널티 12, 갭 페널티 4로 판정한다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본 출원에 기재된 핵산 서열 및 단백질 서열은 예를 들어 그 외의 패밀리 구성원 서열 또는 관련 서열을 확인할 목적으로 공개 데이터베이스에서 검색할 때 "질의 서열"로도 이용할 수 있다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "제약 부형제"는 활성물질과 함께 투여되는 희석제, 보조제(예를 들어, 프로인트 보조제(완전 및 불완전)) 부형제 또는 안정화제 등을 가리킨다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "제약 조성물"은 함유한 활성 성분의 생물 활성이 효과적으로 발휘되는 형태로 존재하고, 조성물이 투여되는 대상체에 허용되지 않는 독성을 가지는 추가 성분을 함유하지 않는 조성물을 가리킨다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "조합 생성물"은 고정 조합, 비고정 조합, 또는 용량 단위 형태의 조합 투여용 부분을 포함하는 키트를 가리키며, 여기서 2종 이상의 치료제는 동시에, 또는 일정한 시간 간격을 두고 개별적으로 투여 가능하다. 시간 간격은 조합 구성물이 시너지 효과와 같은 협업 효과를 나타낼 수 있는 정도의 간격으로 설정한다. 본 명세서에서 쓰이는 용어 "고정 조합"은 본 출원에 개시된 항체 및 조합 구성물(예를 들어, 면역억제제 또는 소염제 등 면역조절제와 같은 기타 치료제)을 단일 개체 또는 단일 용량의 형태로 환자에게 동시에 투여함을 의미한다. 본 명세서에서 쓰이는 용어 "비고정 조합"은 본 출원에 개시된 항체 및 조합 구성물(예를 들어, 면역억제제 또는 소염제 등 면역조절제와 같은 기타 치료제)을 별개의 개체로서 특정한 시간 제한 없이 동시에, 병렬로 또는 순차적으로 환자에게 투여하는 것을 의미하며, 상기 투여를 통해 환자에게 치료적으로 유효한 수준의 화합물 2종을 제공하게 된다. 후자는 칵테일 요법, 예를 들어 3종 이상의 치료제 투여에도 적용 가능하다. 한 바람직한 실시양태에서, 약물 조합은 비고정 조합이다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "조합 요법"은 본 개시에 기재된 바와 같이 IL-23 관련 질환을 치료하기 위한 2종 이상의 치료제 또는 치료 양식(예를 들어, 방사선 요법 또는 수술)의 투여/적용을 가리킨다. 상기 투여는 이들 치료제를, 예를 들어 고정된 비율로 활성 성분을 함유하는 단일 캡슐의 형태로, 실질적으로 동시에 투여하는 동시투여를 포함한다. 혹은, 상기 투여는 여러 개 혹은 별개의 용기(예를 들어, 정제, 캡슐, 분말 및 액체)에 투입한 각 활성 성분의 동시 투여를 포함한다. 분말 및/또는 액체는 투여 전에 재구성하거나 원하는 투여량으로 희석시킬 수 있다. 또한 상기 투여는 대체적으로 동시에, 또는 상이한 시간에 순차적으로 각 유형의 치료제를 사용하는 것을 포함한다. 어떠한 경우에도 치료계획은 본 출원에 기재된 장애 또는 증상의 치료에 있어서 약물 조합의 유용한 효과를 제공할 것이다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "치료"("치료하다" 또는 "치료하는")는 기존의 증상, 장애, 병태 또는 질환의 진행 또는 중증도를 지연, 저해, 저지, 완화, 중단, 감소, 역전시키는 것을 가리킨다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "예방"("예방하다" 또는 "예방하는")은 질환, 장애, 혹은 특정 질환/장애의 증상의 발병 또는 진행을 억제하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역계 질환(자가면역질환 또는 염증)의 가족력이 있는 대상체는 예방 요법의 후보가 된다. 일반적으로, 면역계 질환(자가면역질환 또는 염증)의 관점에서, 용어 "예방"은 특히 면역계 질환(자가면역질환 또는 염증)을 발병할 위험이 있는 대상체에게 면역계 질환(자가면역질환 또는 염증)의 병태 또는 증상이 시작하기 전에 약물을 투여하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 쓰이는 용어 "벡터"는 연결되어 있는 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 가리킨다. 상기 용어는 자가 복제 핵산 구조로서 작용하는 벡터와 숙주 세포에 도입되었을 때 게놈에 결합하는 벡터를 포함한다. 일부 벡터는 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 해당 벡터는 본 출원에서 "발현 벡터"로 지칭된다.
"대상체/환자 샘플"은 환자 또는 대상체로부터 수득한 세포 또는 체액을 가리킨다. 조직 또는 세포 샘플의 공급원은, 예를 들어 신선하고, 동결되고/거나 보존된 장기 또는 조직 샘플, 생검 샘플 혹은 천자 샘플에서 얻은 고체 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 성분; 뇌척수액, 양수, 복막액, 또는 간질액 등의 체액; 및 임신 또는 발달 기간 중 임의의 시점에서 대상체로부터 얻은 세포이다. 조직 샘플은 조직과 자연적으로 혼합되지 않는 화합물, 예컨대 보존제, 항응고제, 완충제, 고정제, 영양소, 항생제 등을 포함할 수 있다.
II. 항체
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체 또는 이의 단편은 Il-23p19(예를 들어, 인간 IL-23의 인간 IL-23p19 또는 필리핀원숭이 IL-23의 필리핀원숭이 IL-23p19)에 높은 친화도로 결합하며, 예를 들어 약 10nM 미만, 바람직하게는 약 5nM, 4nM 또는 3nM 미만, 보다 바람직하게는 2nM, 1.9nM, 1.8nM, 1.79nM, 1.78nM, 1.77nM, 1.76nM, 1.75nM, 1.74nM, 1.73nM, 1.72nM, 1.71nM, 1.7nM, 1.69nM, 1.68nM, 1.67nM, 1.66nM, 1.65nM, 1.64nM, 1.63nM, 1.62nM, 1.61nM, 1.6nM, 1.55nM, 1.5nM, 1.45nM, 1.4nM, 1.35nM, 1.3nM, 1.25nM, 1.2nM, 1.15nM, 1.1nM, 1.05nM, 1nM, 0.95nM, 0.9nM, 0.85nM, 0.8nM, 0.75nM, 0.7nM, 0.69nM, 0.68nM, 0.67nM, 0.66nM, 0.65nM, 0.64nM, 0.63nM, 0.62nM, 0.61nM, 0.6nM, 0.59nM, 0.58nM, 0.57nM, 0.56nM, 0.55nM, 0.54nM, 0.53nM, 0.52nM, 0.51nM, 0.5nM, 0.49nM, 0.48nM, 0.47nM, 0.46nM, 0.45nM, 0.44nM, 0.43nM, 0.42nM, 0.41nM, 0.4nM, 0.39nM, 0.38nM 또는 0.37nM의 평형 해리상수(KD)로 IL-23p19에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체는 0.1nM~3nM, 바람직하게는 0.2nM~2nM, 0.2nM~1.9nM, 0.2nM~1.8nM, 0.3nM~2nM, 0.3nM~1.9nM, 0.3nM~1.8nM, 0.4nM~2nM, 0.4nM~1.9nM, 0.4nM~1.8nM, 0.5nM~2nM, 0.5nM~1.9nM, 0.5nM~1.8nM, 0.6nM~2nM, 0.6nM~1.9nM, 0.6nM~1.8nM의 KD로 IL-23p19에 결합한다. 일부 실시양태에서, IL-23p19는 인간 IL-23p19이다. 일부 실시양태에서, IL-23p19는 필리핀원숭이의 IL-23p19이다. 일부 실시양태에서, 항체 결합 친화도는 생물학적 광학 간섭법(예를 들어, 포테바이오 친화도 검정)을 사용하여 판정한다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편은 IL-23p19 분자에 대한 결합을 통해 세포(예를 들어, 비장세포)에서 IL-17의 분비를 억제하며, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편의 세포 내 IL-17 분비 억제율은, 예를 들어 최대 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편(선택적으로 치료 방식 및/또는 면역 조절제 등의 기타 치료제와 조합 가능)은 IL-23 관련 질환, 예를 들어 면역계 질환(예를 들어, 자가면역질환 또는 염증)을 예방 또는 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 자가면역질환은 예를 들어 건선, 크론병, 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 또는 건선성 관절염 등이 있다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 기재된 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하며, 여기서 VH는 다음을 포함한다.
(i) 서열 번호 9 또는 10으로 표시되는 VH 내 상보성 결정 영역(CDR) 3개, 또는
(ii) (i)의 서열에 관련하여, CDR 3개에 있어서 1개 이상이며 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 보다 바람직하게는 보존적 치환)을 포함하는 서열.
일부 실시양태에서, 본 출원에 기재된 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 VL은 다음을 포함한다.
(i) 서열 번호 11 또는 12로 표시되는 VL 내 상보성 결정 영역(CDR) 3개; 또는
(ii) (i)의 서열에 관련하여, CDR 3개에 있어서 1개 이상이며 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 보다 바람직하게는 보존적 치환)을 포함하는 서열.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL을 포함하며,
(a) 상기 VH는
(i) 서열 번호 9 또는 10으로 표시되는 VH 내 상보성 결정 영역(CDR) 3개, 또는
(ii) (i)의 서열에 관련하여, CDR 3개에 있어서 1개 이상이며 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 보다 바람직하게는 보존적 치환)을 포함하는 서열을 포함하고; 및/또는,
(b) 상기 VL은
(i) 서열 번호 11 또는 12로 표시되는 VL 내 상보성 결정 영역(CDR) 3개; 또는
(ii) (i)의 서열에 관련하여, CDR 3개에 있어서 1개 이상이며 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 보다 바람직하게는 보존적 치환)을 포함하는 서열.
바람직한 실시양태에서, VH는 서열 번호 9 및 10으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 실시양태에서, VL은 서열 번호 11 및 12로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(i) 서열 번호 9 또는 10으로 표시되는 중쇄 가변 영역(HCDR)의 상보성 결정 영역 3개, 및 서열 번호 11 또는 12로 표시되는 경쇄 가변 영역(LCDR)의 상보성 결정 영역 3개를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역(VH) 및/또는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며,
(i) 상기 VH는 상보성 결정 영역(CDR) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, HCDR1은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 상기 HCDR1은 서열 번호 1의 아미노산 서열에 비교하여 1개, 2개 또는 3개의 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 HCDR2는 서열 번호 2, 3 및 23으로부터 선택되는 아미노산을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 HCDR2는 서열 번호 2, 3 및 23으로부터 선택되는 아미노산 서열에 비교하여 1개, 2개 또는 3개의 변형(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 HCDR3은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 HCDR3은 서열 번호 4의 아미노산 서열에 비교하여 1개, 2개 또는 3개의 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하며,
및/또는
(ii) 상기 VL은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 상기 LCDR1은 서열 번호 5의 아미노산 서열에 비교하여 1개, 2개 또는 3개의 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 LCDR2는 서열 번호 6의 아미노산을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 LCDR2는 서열 번호 6의 아미노산 서열에 비교하여 1개, 2개 또는 3개의 변형(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 LCDR3은 서열 번호 7, 8 및 24로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 LCDR3은 서열 번호 7, 8 및 24로부터 선택되는 의 아미노산 서열에 비교하여 1개, 2개 또는 3개의 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며,
(a) 상기 VH는
(i) 표 A에 나타난 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 조합; 또는
(ii) (i)의 HCDR 조합의 변이체로서, CDR 3개에 있어서 1개 이상이며 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 보다 바람직하게는 보존적 치환)을 포함하는 변이체를 포함하고;
및/또는
(b) 상기 VL은
(i) 표 A에 나타난 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 조합; 또는
(ii) (i)의 LCDR 조합의 변이체로서, CDR 3개에 있어서 1개 이상이며 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 보다 바람직하게는 보존적 치환)을 포함하는 변이체를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, VH는 상보성 결정 영역(CDR) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, VL은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3의 조합을 하기 표(표 A)에 정리하였다.
표 A: 본 출원에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3의 조합 예시
Figure pct00002
일부 실시양태에서, 본 발명의 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며,
(a) 중쇄 가변 영역 VH는
(i) 서열 번호 9 및 10으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고;
(ii) 서열 번호 9 및 10으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는
(iii) 서열 번호 9 및 10으로부터 선택된 아미노산 서열에 비교하여 1개 이상(바람직하게는 10개 이하, 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하며, 바람직하게는, 아미노산 변경은 CDR에 존재하지 않고;
및/또는
(b) 경쇄 가변 영역 VL은
(i) 서열 번호 11 및 12으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고;
(ii) 서열 번호 11 및 12로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는
(Iii) 서열 번호 11 및 12로부터 선택된 아미노산 서열에 비교하여 1개 이상(바람직하게는 10개 이하, 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하며, 바람직하게는, 아미노산 변경은 CDR에 존재하지 않는다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 항체 또는 이의 항원 결합된 단편에서의 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 Vl의 조합을 하기 표(표 B)에 정리하였다.
표 B: 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서의 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL의 조합 예시
Figure pct00003
일부 실시양태에서, 본 출원에 기재된 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 및/또는 경쇄를 포함하고,
(a) 상기 중쇄는
(i) 서열 번호 13, 14 및 15로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고;
(ii) 서열 번호 13, 14 및 15로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(iii) 서열 번호 13, 14 및 15로부터 선택된 아미노산 서열에 비교하여 1개 이상(바람직하게는 20개 또는 10개 이하, 및 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 보다 바람직하게는 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하며, 바람직하게는 아미노산 변경은 중쇄의 CDR에서 발생하지 않고, 보다 바람직하게는 아미노산 변경이 중쇄 가변 영역에서 발생하지 않으며;
및/또는
(b) 상기 경쇄는
(i) 서열 번호 16 및 17로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고;
(ii) 서열 번호 16 및 17로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는
(iii) 서열 번호 16 및 17로부터 선택된 아미노산 서열에 비교하여 1개 이상(바람직하게는 20개 또는 10개 이하, 및 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 보다 바람직하게는 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하며, 바람직하게는 아미노산 변경은 경쇄의 CDR에서 발생하지 않고, 보다 바람직하게는 아미노산 변경이 경쇄 가변 영역에서 발생하지 않는다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서의 중쇄 및 경쇄의 조합을 하기 표(표 C)에 정리하였다.
표 C: 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서의 중쇄 및 경쇄의 조합 예시
Figure pct00004
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체 또는 이의 단편의 중쇄 및/또는 경쇄는 신호 펩티드 서열, 예컨대 METDTLLLWVLLLWVPGSTG(서열 번호 25)를 추가로 포함한다. 본 발명의 한 실시양태에서, 본 출원에 기재된 아미노산 변형은 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 포함한다. 바람직하게는, 본 출원에 기재된 아미노산 변형은 아미노산 치환이며, 바람직하게는 보존적 치환이다.
바람직한 실시양태에서, 본 출원에 기재된 아미노산 변형은 CDR 이외의 영역(예를 들어, FR)에서 일어난다. 보다 바람직하게는, 본 출원에 기재된 아미노산 변화는 중쇄 가변 영역 외부의 영역 및/또는 경쇄 가변 영역 외부의 영역에서 일어난다.
일부 실시양태에서, 치환은 보존적 치환이다. 보존적 치환은 동일한 부류의 그 외 아미노산에 의한 아미노산의 치환을 가리키며, 예를 들어, 또 다른 산성 아미노산에 의해 산성 아미노산을 치환하거나, 또 다른 염기성 아미노산으로 염기성 아미노산을 치환하거나, 또 다른 중성 아미노산으로 중성 아미노산을 치환하는 것을 의미한다. 예시적인 치환을 하기 표 D에 정리하였다.
표 D
Figure pct00005
Figure pct00006
특정 실시양태에서, 치환은 항체의 CDR에서 발생한다. 일반적으로, 수득한 변이체는 모항체에 비하여 특정한 생물학적 특성(예를 들어, 친화도 증가)이 변형(예를 들어, 개선)되거나, 및/또는 모항체로부터 실질적으로 그대로 유지되는 특정 생물학적 특성을 지니게 된다. 예시적인 치환변이체로는 친화성 성숙항체를 들 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가 또는 감소시키도록 변경된다. 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성 또는 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 항체에 대하여 글리코실화 부위를 부가 또는 결실시킬 수 있다. 항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 그에 부착된 탄수화물도 변경될 수 있다. 일부 응용에서, 원치 않는 글리코실화 부위를 제거하는 수식이 유용할 수 있다. 예를 들어 푸코스 모듈을 제거하여 항체 의존성 세포독성(ADCC)을 강화하는 것이 가능하다(Shield et al., (2002) JBC277:26733 참조). 그 외 응용에서, 갈락토실화 수식으로 보체 의존성 세포독성(CDC)을 변형할 수 있다.
특정 실시양태에서, 1개 이상의 아미노산 변형을 본 출원에 개시된 항체의 Fc 영역 내로 도입함으로써, 예를 들어, 암 또는 세포 증식성 질환의 치료에 있어서 항체의 효능이 증강되도록 Fc 영역의 변이체를 생성할 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형(예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다. Fc 변이체의 예로는, 미국특허 제 7,332,581호, 미국특허 제 6,737,056호, 미국특허 제 6,737,056호, 국제공개특허 제 2004/056312호, Shields, et al., J. Biol . Chem. 9(2):6591-6604(2001), 미국특허 제 6,194,551호, WO 99/51642, Idusogie, et al., J. Immunol. 164:4178-4184(2000), 미국특허 제 7,371,826호, Duncan & Winter, Nature 322:738-40(1988), 미국특허 제 5,648,260호, 미국특허 제 5,624,821호, 국제공개특허 제 94/29351호를 참조할 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 생체 내 반감기를 연장하기 위해 본 출원에 개시된 항체의 Fc 영역에 치환 돌연변이(M252Y/S254T/T256E)를 도입하여 인간 FcRn에 대한 결합 능력을 향상시킨다.
특정 실시양태에서, 시스테인 조작으로 수식한 항체, 예컨대 "술포MAb"를 생성할 필요가 생길 수 있으며, 여기에서 항체의 하나 이상의 잔기는 시스테인 잔기로 치환된다. 시스테인 수식 항체는 예를 들어 미국특허 제 7,521,541호에 기재된 방식으로 제조할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체는 당 업계에 주지이며 용이하게 입수 가능한 그 외 비단백질 부분을 함유하도록 추가로 수식할 수 있다. 항체 유도체화에 적합한 부분은 수용성 중합체를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 수용성 중합체의 예로는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜 공중합체, 카르복시메틸 셀룰로오스, 글루칸, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐피롤리돈, 폴리-1,3-디옥산, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(호모중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 글루칸 또는 폴리(n-비닐피롤리돈) 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸렌화된 폴리올(예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알코올 및 이들의 혼합물을 들 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음 특성 중 하나 이상을 가진다.
(i) 본 출원에 개시된 항체(예를 들어, 표 3에 열거된 항체 중 임의의 것)와 비교하여 IL-23p19에 대해 동일하거나 유사한 결합 친화도 및/또는 특이도를 나타내는 것;
(ii) 본 출원에 개시된 항체(예를 들어, 표 3에 열거된 항체 중 임의의 것)의 IL-23p19에 대한 결합을 억제(예를 들어, 경쟁적으로 억제)하는 것;
(iii) 본 출원에 개시된 항체(예를 들어, 표 3에 열거된 항체 중 임의의 것)와 동일하거나 중첩하는 에피토프에 결합하는 것;
(iv) IL-23p19에 대한 결합에 관하여 본 출원에 개시된 항체(예를 들어, 표 3에 열거된 항체들 중 임의의 것)과 경쟁하는 것; 및
(v) 본 출원에 개시된 항체(예를 들어, 표 3에 열거된 항체 중 임의의 것)의 생물학적 특성을 하나 이상 가지는 것.
일부 실시양태에서, 항IL-23p19 항체는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 형태의 항체이다.
일부 실시양태에서, 항IL-23p19 항체는 단일클론 항체이다.
일부 실시양태에서, 항IL-23p19 항체는 인간화 항체이다. Almagro 및 Fransson에 의해 요약된 바와 같이, 항체를 인간화하는 각종 방법은 당업자에게 주지이며, 해당 내용은 본 출원에 원용되어 있다(Almagro J.C& Fransson J (2008) Frontiers in Bioscience 13:1619-1633).
일부 실시양태에서, 항IL-23p19 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당 업계에서 주지의 다양한 기술로 제조할 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 van Dijk and van de Winkel, Curr . Opin . Pharmacol 5:368-74(2001) and Lonberg, Curr . Opin . Immunol 20:450-459(2008)에 기재된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 항IL-23p19 항체는 키메라 항체이다.
일부 실시양태에서, 항IL-23p19 항체의 프레임워크 서열의 적어도 일부는 인간 컨센서스 프레임워크 서열이다. 한 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체는 그 항체 단편을 포함하고, 바람직하게는, Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, 단일쇄 항체(scFv 또는 (Fab')2), 단일 도메인 항체, 디아바디(dAb) 및 선형 항체로부터 선택된 항체 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IL-23p19 항체 분자는 이중특이성 또는 다중특이성 항체 분자의 형태이다. 한 실시양태에서, 이중특이성 항체 분자는 IL-23p19에 대한 제 1 결합 특이도와, TNF(예를 들어, TNFα) 또는 IL-17(예를 들어, IL-17A 또는 IL-17F)에 대한 제 2 결합 특이도를 가진다. 한 실시양태에서, 이중특이성 항체 분자는 IL-23p19 및 TNF 또는 IL-17에 결합한다. 다중특이성 항체 분자는 상기 분자에 대한 결합 특이도를 임의로 조합해도 좋다.
II. 본 발명의 핵산 및 이를 포함하는 숙주 세포
한 양태에서, 본 발명은 상기 항IL-23p19 항체 또는 이의 단편 중 어느 하나를 코딩하는 핵산을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 한 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 효모 세포, 포유류 세포(예를 들어, CHO 세포 또는 293 세포), 및 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조에 적합한 다른 세포로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 원핵생물이다.
한 양태에서, 본 발명은 본 출원에 기재된 상기 항IL-23p19 항체 또는 이의 단편 중 어느 하나를 코딩하는 핵산을 제공한다. 핵산은 항체의 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산, 또는 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 것이 가능하다. 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산 서열의 예시로는 서열 번호 18, 19 및 20으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 가지는 아미노산 서열, 또는 서열 번호 18, 19 및 20으로부터 선택된 아미노산 서열을 들 수 있다. 항체의 경쇄를 코딩하는 핵산 서열의 예시로는 서열 번호 21 및 22로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 가지는 아미노산 서열, 또는 서열 번호 21 및 22로부터 선택된 아미노산 서열을 들 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 핵산을 함유하는 하나 이상의 벡터를 제공한다. 한 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터, 예컨대 진핵 발현 벡터이다. 벡터는 바이러스, 플라스미드, 코스미드, 람다 파지 또는 효모 인공 염색체(YAC)를 포함하되 이에 한정되지는 않는다. 한 실시양태에서 벡터는 pTT5 벡터이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 항체를 코딩하는 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본 출원에 기재된 원핵세포 또는 진핵세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않을 때, 박테리아에서 생성이 가능하다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드 발현은 예를 들어, 미국 특허 제 5,648,237호, 제 5,789,199호 및 제 5,840,523호에 기재되어 있고, 또한 대장균(E. coli)에서의 항체 단편 발현을 기술하는 Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003) pg. 245-254에도 기재되어 있다. 발현 후, 항체를 가용성 분획의 박테리아 세포 페이스트로부터 단리하고 추가로 정제할 수 있다.
한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 효모 세포, 포유류 세포, 혹은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조에 적합한 그 외 세포로부터 선택된다. 예를 들어, 진핵 미생물, 예컨대 사상 진균 또는 효모는 항체를 코딩하는 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 예를 들어, 글리코실화 경로는 "인간화"된 진균 및 효모 균주는 부분적 또는 전체적으로 인간 글리코실화 패턴을 가지는 항체를 생산할 수 있다(Gerngross, Nat. Biotech., 22:1409-1414 (2004) 및 Li et al., Nat. Biotech., 24:210-215 (2006) 참조). 글리코실화 항체 발현에 적합한 숙주 세포는 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터도 유래한다. 척추동물 세포는 숙주로 사용해도 좋다. 예를 들어, 현탁액 성장에 적합하도록 조작한 포유류 세포주를 사용할 수 있다. 유용한 포유류 숙주 세포주의 그 외 예시로는 SV40으로 형질전환한 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7), 인간 배아 신장 세포주(293HEK 또는 293F 또는 293 세포, 예를 들어, Graham et al., J. Gen Virol., 36:59 (1977)) 등이 꼽힌다. 그 밖의 유용한 포유류 숙주 세포주로는 DHFR-CHO 세포(Urlaub et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77: 216 (1980))와 CHO-S 세포 등을 포함하는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포; Y0, NS0 및 Sp2/0과 같은 골수종 세포주를 들 수 있다. 항체 생산에 적합한 특정 포유류 숙주 세포주에 관해서는, 예를 들어, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pg. 255-268 (2003)을 참조할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 항IL-23p19 항체 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)을 제조하는 방법을 제공하며, 해당 방법은 숙주 세포를 항체 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)을 코딩하는 핵산의 발현에 적합한 조건에서 배양하는 단계를 포함하고, 상기 항체 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)을 단리하는 단계를 선택적으로 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 숙주 세포로부터 상기 항IL-23p19 항체 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)을 단리하는 단계를 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 항IL-23p19 항체를 제조하는 방법을 제공하며, 해당 방법은 상기와 같이 항체 발현에 적합한 조건 하에서 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하고, 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양물)로부터 항체를 단리하는 단계를 선택적으로 포함한다. 항IL-23p19 항체의 재조합 생성을 목적으로, 항체(예를 들어, 상기에 기재된 항체)를 코딩하는 핵산을 단리하고, 숙주 세포에서의 추가적 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입한다. 상기 핵산을 통상적인 절차를 적용하여 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브의 사용) 용이하게 단리하고 시퀀싱할 수 있다.
III. 특성화
본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체는 해당 업계에서 주지의 다양한 분석법을 통해 물리적/화학적 특성 및/또는 생물 활성을 확인, 스크리닝 또는 특성화할 수 있다. 한 양태에서, 본 출원에 개시된 항체의 항원 결합 활성은, 예를 들어, ELISA, 웨스턴 블로팅 등 주지의 방법으로 분석한다. IL-23p19 결합은 당 업계에서 주지의 방법으로 판정할 수 있으며, 방법의 예시를 본 출원에 기재한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 광학 간섭법(예를 들어, 포테바이오 친화도 검정) 또는 MSD를 적용한다.
또 다른 양태에서, 임의의 항IL-23p19 항체와 IL-23p19 결합에 있어서 경쟁하는 본 출원에 개시된 항체는 경쟁적 결합 분석으로 특성화할 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 경쟁적 항체는 본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체 중 임의의 것과 동일하거나 중첩하는 에피토프(예를 들어, 선형 또는 입체배좌 에피토프)에 결합한다. 항체에 결합하는 에피토프를 배치하는 상세한 방법의 예시는 Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)에 기재되어 있다.
또한 본 발명은 생물활성을 가지는 항IL-23p19 항체를 확인하기 위한 분석법을 제공한다. 생물활성은, 예를 들어 IL-23p19에 대한 결합(예를 들어, 인간 및/또는 필리핀원숭이 IL-23p19에 대한 결합), IL-23에 의한 IL-17 분비 유도 억제, IL-23 신호 전달 경호 차단 등을 포함한다. 본 발명은 생체내 및/또는 시험관내에서 상기의 생물활성을 가지는 항체를 추가로 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체는 상기의 생물활성을 특징으로 한다.
상기에 기재된 임의의 시험관내 분석에서 사용하기 위한 세포는 IL-23p19을 자연적으로 발현하거나 IL-23p19을 발현하도록 조작된 세포를 포함한다. 상기 세포는 또한, IL-23p19를 발현하는 세포 및 IL-23p19를 정상적으로는 발현하지는 않고 IL-23p19을 코딩하는 핵산으로 트랜스펙션된 세포를 포함한다.
상기의 분석법 중 임의의 분석법은 항IL-23p19 항체 대신에, 또는 그에 더하여 본 출원에 개시된 면역접합체를 사용함으로써 실시할 수 있다.
또한, 상기의 분석법 중 임의의 분석법은 항IL-23p19 항체 및 기타 활성제를 사용하여 실시할 수 있다.
IV. 면역접합체
일부 실시양태에서, 본 발명은 본 출원에서 제공하는 임의의 항IL-23p19 항체 및 추가 물질을 포함하는 면역접합체를 제공하며, 상기 추가 물질은 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 기타 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제(예를 들어, 면역억제제 또는 소염제)를 포함하는 치료제이다. 한 실시양태에서, 세포독성제 등의 추가물질은 세포에 유해한 임의의 약제를 포함한다. 면역접합체 형성에 적합한 세포독성제의 예는 당 업계에서 주지의 사실이다. 예를 들어, 세포독성제는 방사성 동위 원소; 성장 억제제; 뉴클레아제 등의 효소 및 그 단편; 항생제; 소분자 독소 등의 독소; 또는 박테리아, 곰팡이, 식물 혹은 동물에서 유래한 효소 활성 독소(그 단편 및/또는 변이체 포함)를 포함하되 이에 한정되지는 않는다. 본 출원에 개시된 항체로 면역접합체를 형성하는 그 외의 사례는 미국특허 제 61642032호를 참조한다.
일부 실시양태에서, 면역접합체는 IL-23 관련 질환, 예를 들어 면역계 질환(예를 들어, 자가면역질환 또는 염증)의 예방 또는 치료에 쓰인다. 일부 실시양태에서, 자가면역질환은 예를 들어 건선, 크론병, 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 또는 건선성 관절염 등이 있다.
V. 제약 조성물 및 제약 제제
일부 실시양태에서, 본 발명은 본 출원에 기재된 항IL-23p19 항체 중 임의의 것, 또는 이의 단편(바람직하게는 이의 항원 결합 단편), 또는 이의 면역접합체를 포함하는 조성물을 제공하며, 바람직하게는 조성물은 제약 조성물이다. 한 실시양태에서, 조성물은 제약 부형제를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물, 예를 들어 제약 조성물은, 본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체 또는 이의 단편, 또는 그 면역접합체, 및 1종 이상의 추가 치료제의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 IL-23 관련 질환, 예를 들어 면역계 질환(예를 들어, 자가면역질환 또는 염증)의 예방 또는 치료에 쓰인다. 일부 실시양태에서, 자가면역질환은 예를 들어 건선, 크론병, 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 건선성 관절염 등이 있다.
또한 본 발명은 항IL-23p19 항체 또는 그 면역접합체를 포함하는 조성물(제약 조성물 또는 제약 제제 포함), 또는 항IL-23p19 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물(제약 조성물 또는 제약 제제 포함)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물은 IL-23p19에 결합하는 하나 이상의 항체 또는 이의 단편, 혹은 하나 이상의 항IL-23p19 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 하나 이상의 폴뉴클레오티드를 포함한다. 상기 조성물은 완충제를 포함하는 당 업계에서 주지의 제약 담체, 부형제 등과 같은 적합한 제약 보조제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 적용 가능한 제약 담체는 멸균 액체, 예를 들면 물 및 오일(석유, 동물, 식물 또는 합성으로부터 유래한 것을 포함. 예를 들어, 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등)이어도 좋다. 제약 조성물이 정맥 내로 투여되는 경우에는 물이 바람직한 담체이다. 식염수, 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액은 특히 주사 가능한 용액에 쓰이는 액체 담체로 채택할 수 있다. 적합한 제약 부형제는 전분, 글루코오스, 락토오스, 수크로오스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카겔, 스테아린산나트륨, 모노스테아린산글리세롤, 활석, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 부형제의 사용 및 적용에 관해서는, Handbook of Pharmaceutical Excipients, the fifth edition, R. C. Rowe, P. J. Seskey and S. C. Owen, Pharmaceutical Press, London, Chicago를 참조한다. 조성물은, 필요한 경우, 소량의 습윤제, 유화제, 또는 pH 완충제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 환제, 캡슐, 분말, 서방 제제와 같은 형태를 취할 수 있다. 경구 제제는 표준 담체, 예를 들어, 제약 등급 만니톨, 락토스, 전분, 스테아린산마그네슘 및 사카린을 포함할 수 있다.
본 출원에 기재된 항IL-23p19 항체를 포함하며, 바람직하게는 동결건조 제제 또는 수용액의 형태인 제약 제제는 희망 순도의 본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체를 임의의 제약 부형제 1종 이상과 혼합하여 제조할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed. (1980)).
동결 건조된 항체 제제의 예시는 미국특허 제 6,267,958호에 기재되어 있다. 수성 항체 제제는 미국특허 제 6,171,586호 및 국제공개특허 제 2006/044908호에 기재되어 있는 물질을 망라하며, 후자는 히스티딘 아세테이트 완충액을 포함한다.
본 출원에 개시된 제약 조성물 또는 제제는 치료 대상인 특정 징후에 필요한 하나 이상의 다른 활성 성분, 바람직하게는 서로에게 불리한 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 가지는 활성 성분을 추가로 포함할 수 있다. 활성 성분들은 의도하는 목적에 효과적인 양으로 적절하게 배합된다. 활성 성분의 예로는 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 기타 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제 등을 들 수 있다.
서방형 제제를 제조하는 것이 가능하다. 서방형 제제의 적합한 예에는 항체를 함유하는 고형 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스가 포함된다. 매트릭스는 성형품의 형태로, 예컨대 필름 또는 마이크로캡슐을 가리킨다.
본 발명의 항체를 포함하는 제약 제제/제약 조성물의 그 외 성분에 관해서는, WO2008103473A1, WO2007076524A2 또는 WO2008103432A1 등에 개시된 성분을 참조할 수 있다.
VI. 조합 생성물
일부 실시양태에서, 본 발명은 또한 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 그 면역접합체, 및 1종 이상의 추가 치료제(예를 들어, 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 기타 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제 등)를 포함하는 조합 생성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 면역조절제는, 예를 들어 면역억제제 또는 소염제이다. 일부 실시양태에서, 그 외 항체는 예를 들어 항TNF 항체 또는 항IL-17 항체이다.
조합 생성물에서 본 발명의 항체와 함께 쓰일 수 있는 적합한 추가 치료제에 관해서는, WO2008103473A1, WO2007076524A2 또는 WO2008103432A1 등에 개시된 치료제를 참조할 수 있다.
일부 실시양태에서, 조합 생성물은 IL-23 관련 질환, 예를 들어 면역계 질환(예를 들어, 자가면역질환 또는 염증)의 예방 또는 치료에 쓰인다. 일부 실시양태에서, 자가면역질환은 예를 들어 건선, 크론병, 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 또는 건선성 관절염 등이 있다.
VII. 용도
한 양태에서, 본 발명은 대상체의 IL-23 관련 질병을 치료하는 방법으로서, 본 출원에 기재된 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 그 면역접합체, 그 제약 조성물 또는 그 조합 생성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
대상체는 포유류, 예를 들어 영장류이며, 바람직하게는 고등 영장류, 예를 들어 인간(예를 들어, 본 출원에 기재된 질환이 있거나 발병할 위험이 있는 환자)일 수 있다. 한 실시양태에서, 대상체는 본 출원에 기재된 질환(예를 들어, 본 출원에 기재된 IL-23 관련 질병, 예를 들어 면역계 질환, 즉 자가면역질환 또는 염증)이 있거나 발병할 위험이 있다. 특정 실시양태에서, 대상체는 기타 요법, 예를 들어 소염제 또는 면역억제 요법 및/또는 방사선 요법을 받고 있거나 받은 적이 있다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 기재된 IL-23 관련 질병은 면역계 질환(예를 들어, 자가면역질환 또는 염증)을 포함한다. 해당 질환은, 건선, 크론병, 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 건선성 관절염 등을 포함하되 이에 한정되지는 않는다.
한 실시양태에서, 면역계 질환은 상승 수준의 IL-23p19를 발현하는 질환이다.
그 외 양태에서, 본 발명은 본 출원에 기재된 관련 질환 또는 병태를 치료하는 의약의 생산 또는 제조에 있어서의 본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체 또는 이의 단편의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 출원의 항체 또는 항체 단편, 면역접합체, 조성물, 또는 생성물은 병태의 개시 및/또는 병태와 관련된 증상을 지연시킨다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 예방 또는 치료 방법은 하나 이상의 추가 요법, 예를 들어 치료 양식 및/또는 그 외 치료제와 병행하여 본 출원에 개시된 항체 분자, 제약 조성물 또는 면역접합체를 대상체 또는 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 치료 양식은 수술, 방사선 요법(예를 들어, 방사선 조사 영역을 설정한 3차원 등각 방사선 요법을 수반하는 외조사요법), 부분조사(예를 들어, 사전에 선택한 표적 또는 기관에 대한 조사), 집중 조사 등을 포함한다.
일부 실시양태에서, 치료제는 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 기타 항체, 소분자 약물, 및 면역조절제로부터 선택된다.
그 외 항체의 예시는 항TNF 항체 또는 항IL-17 항체, 예를 들어 항TNFα 항체, 항IL-17A 항체 또는 항IL-17F 항체를 포함하되 이에 한정되지는 않는다.
면역조절제의 예로는 면역억제제 또는 소염제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 기재된 항체 조합물은 개별적으로 (예를 들어, 별도의 항체로서) 또는 결합하여 (예를 들어, 이중특이성 또는 삼중특이성 항체 분자로서) 투여할 수 있다.
항IL-23p19 항체 또는 이의 단편과 병용 가능한 치료법 또는 치료제에 관해서는, WO2008103473A1, WO2007076524A2 또는 WO2008103432A1을 참조한다.
상기 조합 요법은 동시투여(예를 들어, 2종 이상의 치료제가 동일한 제제 또는 별도의 제제에 포함됨) 및 별도의 투여를 포함한다. 여기서 본 발명의 항체는 그 외 치료제 및/또는 약제를 투여하기 전에, 동시에 및/또는 투여한 후에 투여할 수 있다. 한 실시양태에서, 항IL-23p19 항체의 투여 및 추가 요법의 적용은 약 1개월 이내, 약 1주, 2주 또는 3주 이내, 또는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일 또는 6일 이내의 간격을 둔다.
항IL-23p19 항체를 포함하는 제약 조성물의 치료학적으로 유효한 양은 치료의 배경과 목적에 따라 달라질 것이다. 당업자는 치료에 필요한 적절한 투여량 수준이 부분적으로 송달 분자, 용도 적응성, 투여경로, 환자의 체중, 체표면적 또는 기관 크기 및/또는 상태(연령 및 일반적인 건강 상태) 등의 요인에 따라서 변한다는 사실을 이해할 것이다. 일부 실시양태에서, 임상의는 투여량을 적절하게 설정하고 투여경로를 변경하여 최상의 전체적인 반응을 이끌어낼 수 있다.
투여 빈도는 제제에 쓰인 특정 항IL-23p19 항체의 약동학적 특성에 따라 달라진다. 일반적으로 조성물은 원하는 효능을 이끌어내는 투여량까지 계속해서 투여한다. 따라서, 본 발명의 항체는 특정 기간에 걸쳐 단일 용량으로, 또는 2회 이상의 용량(동일하거나 상이한 양의 원하는 분자를 함유할 수 있음)으로, 혹은 이식 장치나 카테터를 통한 연속 주입으로 투여할 수 있다. 적절한 용량-반응 데이터를 사용하여 적절한 투여량을 결정할 수 있다. 특정 실시양태에서, 기간을 연장하여 항체를 환자에게 투여할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체를 매주, 격주, 매월, 격월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월마다 투여한다.
제약 조성물의 투여경로는 주지의 방법에 따르며, 예를 들어, 경구, 정맥내, 복강내, 뇌내(실질내), 심 실내, 근육내, 안구내, 동맥내, 문맥내 또는 병변내 경로로 투여하거나, 지속 방출 시스템 또는 이식 장치를 통해 투여할 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물을 볼루스 주입, 연속 주입 또는 이식 장치에 의해 투여할 수 있다.
또한 조성물을 이식한 막, 스펀지, 혹은 원하는 분자를 흡수하거나 캡슐화하는 그 밖의 적절한 물질을 통해 국소적으로 투여할 수도 있다. 특정 실시양태에서, 이식 장치를 사용하는 경우, 해당 장치를 임의의 적합한 조직 또는 기관에 이식할 수 있으며, 원하는 분자를 확산, 서방성 볼루스 또는 연속 투여를 통해 송달할 수 있다.
항IL-23p19 항체를 대신하여, 또는 이에 더하여 본 발명의 면역접합체를 사용함으로써 임의의 치료법을 실시하는 것이 가능하다.
VIII. 진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물
특정 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 임의의 것을 생물학적 샘플에서 IL-23p19의 존재를 검출하는 데 사용할 수 있다. 본 명세서에서 쓰이는 용어 "검출"은 정량적 및 정성적 검출을 포함하고, 검출의 예시로는 면역조직화학 기술, 면역세포화학 기술, 유세포 분석법(예를 들어, FACS), 항체 분자와 복합체화한 자기 비드, ELISA 및 PCR(예를 들어, RT-PCR)을 들어도 좋다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈청, 또는 생물학적 공급원의 기타 체액 샘플이다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 면역계 질환(예를 들어, 자가면역질환 또는 염증)과 관련된 병변에서 추출한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 진단 또는 검출용 항IL-23p19 항체를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 생물학적 샘플에서 IL-23p19의 존재를 검출하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 생물학적 샘플 중의 IL-23p19 단백질의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-23p19은 인간 Il-23p19 또는 필리핀원숭이 IL-23p19이다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 항IL-23p19 항체를 IL-23p19에 결합시키는 조건 하에 생물학적 샘플을 본 출원에 개시된 항IL-23p19 항체와 접촉시키는 단계와, 항IL-23p19 항체 및 Il-23p19의 복합체 형성 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 복합체의 형성은 IL-23p19가 존재함을 나타낸다. 상기 방법은 시험관내 또는 생체내 방법이어도 좋다. 한 실시양태에서, 항IL-23p19 항체는 항IL-23p19 항체로 치료하기에 적합한 대상체를 선별하는 데 쓰이며, 예를 들어 IL-23p19는 선별용 바이오마커이다.
한 실시양태에서, 개시된 항체는 IL-23 관련 질환(예를 들어, 자가면역질환 또는 염증) 진단에 쓰일 수 있으며, 예를 들어 대상체에서 본 출원에 기재된 질환(IL-23 관련 질환, 예를 들어 면역계 질환(자가면역질환 또는 염증))의 반응 또는 진행, 진단 및/또는 병기분류를 평가(예를 들어, 모니터링)하는 데 쓰인다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 표지된 항IL-23p19 항체를 제공한다. 표지는 직접적으로 검출되는 표지 또는 부분(moiety)(예를 들어, 형광 표지, 발색단 표지, 전자밀도 표지, 화학발광 표지 및 방사성 표지)은 물론, 효소 또는 배위자와 같이, 예를 들어 효소 반응 또는 분자 상호작용에 의해 간접적으로 검출되는 부분(moiety)을 포함하되 이에 한정되지는 않는다. 표지의 예시로는, 32P, 14C, 125I, 3H 및 131I의 방사성 동위 원소, 형광단(예를 들어, 희토류 킬레이트 또는 플루오레세인) 및 이의 유도체, 로다민 및 이의 유도체, 단실, 움벨리페론, 루시페라아제(예를 들어, 개똥벌레 루시페라아제 및 박테리아 루시페라아제(미국특허 제 4,737,456호)), 플루오레세인, 2,3-디히드로프탈라진디온, 양고추냉이 퍼옥시다제(HR), 알칼리성 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 글루코아밀라아제, 리소자임, 탄수화물 옥시다아제(예를 들어, 글루코오스 옥시다아제, 갈락토오스 옥시다아제 및 글루코오스-6-포스페이트 데히드로게나아제), 헤테로시클릭 옥시다아제(예를 들어, 요산분해효소 및 크산틴 옥시다아제), 염료 전구체를 과산화수소로 산화시키는 효소(예를 들어, HR, 락토퍼옥시다제, 또는 마이크로퍼옥시다제 등), 비오틴/아비딘, 스핀 표지, 파지 표지, 안정적인 자유 라디칼 등을 들 수 있으나 이에 한정되지는 않는다.
본 출원이 제공하는 발명의 일부 실시양태에서, 샘플은 항IL-23p19 항체로 치료하기 전에 수득한다. 일부 실시양태에서, 샘플은 IL-23 관련 질환, 예를 들어 면역계 질환(예를 들어, 자가면역질환 또는 염증)에 대한 의약으로 치료하기에 앞서 수득한다. 일부 실시양태에서, 샘플은 포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 샘플이다. 일부 실시양태에서, 샘플은 생검(예를 들어, 코어 생검) 표본, 외과용 표본(예를 들어, 외과용 절제술로 얻은 표분) 또는 미세바늘흡인물이다.
일부 실시양태에서, IL-23p19는 치료 전에, 예를 들어 초기 치료 전에 또는 특정 치료 이후 어느 정도의 간격을 두었다가 치료를 개시하기 전에 검출한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 IL-23 관련 질환, 예를 들어 면역계 질환(예를 들어, 자가 면역 질환 또는 염증)을 치료하는 방법을 제공하며, 해당 방법은 대상체(예를 들어, 샘플, 예컨대 대상체의 샘플)에서 IL-23p19의 존재를 검출하여 IL-23p19값을 결정하는 단계; IL-23p19 값을 기준값과 비교하는 단계; 항 IL-23p19 항체(예를 들어, 본 출원에 기재된 항IL-23p19 항체)의 치료학적으로 유효한 양을 대상체에게 투여하고, IL-23p19 값이 기준 값보다 클 경우 하나 이상의 그 외 요법과 선택적으로 병용하여, L-23 관련 질환, 예를 들어 면역계 질환(예를 들어, 자가 면역 질환 또는 염증)을 치료하는 단계를 포함한다.
IX. 본 발명의 예시적 항IL - 23p19 항체
표 1: 본 발명의 예시적 항체의 CDR의 아미노산 서열(AbM 방식으로 판정)
Figure pct00007
표 2: 본 발명의 예시적 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
Figure pct00008
표 3: 본 발명의 예시적 항체의 중쇄(HC) 및 경쇄(LC)의 아미노산 서열
Figure pct00009
본 발명의 각종 양태 및 실시양태를 도면(도면의 상세한 설명) 및 본 발명의 상세한 설명에 기술하고, 다음의 실시예를 통해 설명한다. 본 발명의 실시예에서 본 출원 전문에 걸쳐 기재한 일부 또는 전체 특징을 다양하게 조합할 수 있다. 하기 실시예는 본 발명을 추가로 예시한다. 단 실시예는 한정이 아니라 예시에 지나지 않으며, 당업자는 다양한 변형을 가할 수 있음을 이해해야 한다.
실시예
실시예 1. 하이브리도마 세포의 제조
본 실험에는 하이브리도마 기술을 채택하였다. 마우스를 마우스 IL-12p40/인간 IL-23p19 융합 단백질로 면역화하였다. 이어서 마우스의 비장세포를 수득하고 골수종 세포와 융합시켜 표적 항체를 발현 가능한 하이브리도마 세포를 얻었다.
하이브리도마 융합
표 4: 실험동물 및 면역학적 정보
Figure pct00010
마우스 IL-12p40/인간 IL-23p19 융합 단백질, 필리핀원숭이 IL23 단백질, 및 인간 IL23 단백질의 제조
인간 IL23p19에만 결합하는 항체를 선별하기 위해 마우스 IL-12p40/인간 IL-23p19 융합 단백질을, 마우스 IL12 p40(NCBI: P43432, Met23-Ser335) 및 인간 IL-23p19(NCBI: AAG37232, Ala21-Pro189)를 링커(GSGSSRGGSGSGGSGGGGSKL)로 연결하고 His 태그(HHHHHH)는 C 말단에 연결하는 방식으로 설계하였다.
필리핀원숭이 IL23 단백질의 설계: 필리핀원숭이 IL12p40(NCBI: AEY84628, Ile23-Ser328) 및 필리핀원숭이 IL23p19(NCBI: AEY84629, Ala21-Pro189)를 링커(GSGSSRGGSGSGGSGGGGSKL) 로 연결하고 His tag(HHHHHH)를 C 말단에 연결하였다.
인간 IL23 단백질의 설계: 인간 IL12p40(NCBI: P29460, Ile23-Ser328) 및 인간 IL23p19(NCBI: AAG37232, Ala21-Pro189)를 링커(GSGSSRGGSGSGGSGGGGSKL)로 연결하고 His tag(HHHHHH)를 C 말단에 연결하였다.
단백질은 일과성 트랙스펙션 키트 ExpiFectamine™ 293(Theomo, A14524)의 절차에 따라 Expi293 세포(Thermo, A14527)에 의해 다량으로 발현되었다. 상청액을 회수하고 HisTrap Excel(GE, 17-3712-06)의 프리로드 컬럼에서 최종순도 >90% 이상으로 정제하였다.
참조 항체 구셀쿠맙(Gmab)의 제조
참조 항체 구셀쿠맙 서열은 WHO INN 웹사이트(Jassen사의 구셀쿠밥guselkumab, 이하 Gmab로 칭함. 아미노산 서열에 대해서는 미국특허 제 20160237151호를 참조)를 참조하였다. 항체는 일과성 트랙스펙션 키트 ExpiFectamine™ 293(Theomo, A14524)의 절차에 따라 Expi293 세포(Thermo, A14527)에 의해 다량으로 발현되었다. 상청액을 수집하고 HiTrap MabSelect SuRe(GE, 11003495)를 사용하여 순도 >95%로 정제하였다.
전기천공 준비: 접시를 70% 에탄올에 완전히 담그고 울트라 클린 벤치에서 건조하여 사용하였다.
비장 세포 단리: 마우스를 경추탈구로 안락사시킨 후 75% 알코올로 5분 동안 멸균하고, 그 즉시 왼쪽 옆누운자세로 울트라 클린 벤치의 마우스 해부 플레이트에 재치하고 7번 바늘로 사지를 고정하였다. 복강을 무균 개방한 후 비장을 채취하고 기저 공동(하기의 표 5에 따라 제조)로 세척한 다음, 주변의 결합 조직을 조심스럽게 제거하였다. 이어서 비장을 기저배지를 포함하는 다른 접시로 옮겼다. 비장을 팔꿈치 바늘(elbow needle)로 누르고 작은 바늘로 천공한 다음, 겸자로 눌러서 비장을 완전히 추출하여 비장세포 현탁액을 제조하였다. 70-μM 세포 스트레이너로 여과한 후, 세포 현탁액을 기저배지 30mL로 1회 세척하고 1200rpm에서 6분 동안 원심분리를 실시했다.
표 5:
Figure pct00011
적혈구 용해: 상청액을 버리고 세포를 RBC 용해 완충액(GIBCO) 10mL에 재현탁하였다. 이어서 RBC 용해 완충액 20mL를 첨가하였다. 현탁액을 5분간 방치한 후 1100rmp에서 6분간 원심분리를 실시하였다. 상청액을 폐기하고 세포를 기저배지 10mL에 재현탁시켰다. 그 다음으로, 기저배지 30mL를 첨가하고 세포를 1100rmp에서 6분간 원심분리하였다. 상청액을 폐기한 후 세포를 기저배지 20mL에 재현탁시키고 계수하였다.
전기천공: SP2/0 세포(마우스 골수종 세포)(ATCC)를 기저배지 20mL에 재현탁하고 계수하였다. SP2/0 세포와 RBC가 용해된 비장세포를 1:2 내지 1:1의 비율로 혼합하고, 1000rpm에서 6분간 원심 분리를 실시하였다. 상청액을 폐기한 다음 혼합 세포를 융합 완충액(BTXpress) 10mL에 재현탁시켰다. 이어서 융합 완충액 15mL을 첨가하고, 상청액을 폐기하고, 혼합물을 1000rpm에서 5분간 원심분리하였다. 상기 단계를 반복하였다. 세포를 적절한 용적의 융합 완충액에 재현탁하고 혼합 세포 밀도를 1 Х 107개/mL로 조정하였다. 전기천공장치의 설정을 다음의 표 6에 기재하였다. 전기천공을 위해 상기 세포 현탁액 2mL를 각 접시에 첨가하였다.
표 6: 전기천공장치의 설정
Figure pct00012
융합 후 플레이팅: 세포를 5분간 실온에서 접시에 방치하였다. 세포를 원심분리 튜브로 옮기고 선택 배지(하기의 표 7에 따라 제조)를 사용하여 1~2 Х 104개/mL로 희석하였다. 상기 제조한 세포 현탁액 100μL를 96웰 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 융합으로부터 7일이 경과한 후에 선택배지를 교체하였다. 배양으로부터 10일이 경과한 후(또는 세포 성장에 따라 그 이상의 기간이 경과한 후), 하이브리도마 세포를 ELISA로 선별하여 IL-23p19에 특이적으로 결합하고 IL-12p40에 결합하지 않는 항체를 발현시켰다.
표 7: 선택배지
Figure pct00013
양성 하이브리도마 세포 서브클로닝
서브클로닝: 상기의 기저배지 200μL를 96웰 플레이트의 2~8열의 각 웰에 첨가하였다. 양성 웰의 융합 세포 300μL를 약 1 Х 105개/mL의 밀도로 첫 번째 줄의 각 웰에 첨가하였다. 멀티채널 피펫을 이용하여 1열의 세포 현탁액 100μL를 2열로 옮겼다. 2열에서 혼합한 후 100μL를 다시 다음 줄로 옮겼다. 마지막 줄에서 혼합물 300μL를 얻을 때까지 상기의 단계를 반복하였다. 15분 동안 방치한 후 세포를 현미경 밑에 재치하고 계수하였다. 세포 약 100개를 포함하는 대응 용량을 기저배지 20mL에 첨가하고, 각 웰에서 200μL로 혼합 및 플레이팅을 실시하였다. 1주일이 지난 후에 세포를 현미경 밑에 재치하고 계수하였다. 양성 웰 선별을 위해 단일클론 웰을 표시하였다.
세포 냉동보존: 세포의 상태를 모니터링하였다. 생존율 90% 이상으로 왕성하게 증식하는 세포를 1000rpm에서 5분간 원심분리하고 상청액을 폐기하였다. 세포를 동결보호제(FBS(Hyclone) 45.5%, RPMI-1640(Hyclone) 44.5%, DMSO 10%)에 재현탁하여 최종농도를 1Х107개/mL로 조정하고, 냉동 보존 튜브에 분취하여 프로그래밍한 냉동용기에 넣고 -80℃에서 냉동 보존하였다.
실시예 2. 하이브리도마 세포 선별
본 실험은 항IL-23p19 항체가 마우스 비장 림프구에서 IL-17 분비를 유도하는 IL-23을 억제하도록 기능적으로 설계하였다. 하이브리도마 세포를 선별하여 마우스 비장 림프구에서 IL-23 유도 IL-17 분비를 억제하는 항IL-23p19 항체를 발현시켰다.
마우스 비장 림프구의 단리
Blank Bal b/c 마우스(베이징 바이탈 리버 실험동물기술유한회사)를 경추탈구로 안락사시키고, 마우스의 비장을 채취하여 깨끗한 PBS 완충액에 담갔다. 비장을 적절한 양의 PBS 완충액을 포함하는 접시에서 세포 스트레이너로 옮겼다. 청결한 주사기를 이용해 조직을 분쇄하여 세포막 내부의 세포를 분리하고, 세포 스트레이너를 통과시킨 후 접시의 완충액에 세포를 현탁시켰다. PBS 함유 마우스 비장 림프구를 채취하여 400g에서 10분간 원심분리하였다. 상청액을 폐기하고 적혈구 용해 완충액(ACK 용해 완충액(GIBCO)) 5mL를 첨가하여 세포를 재현탁하였다. 2분간 용해한 후, 세포를 400g에서 10분간 원심분리하였다. 세포를 PBS 30mL로 1회 세척하고 400g에서 원심분리를 한 후 상청액을 폐기하였다. 완전배지(10% FBS 함유 RPMI-1640 배지) 5mL를 첨가하여 세포 현탁액을 제조하였다.
플레이팅
상기에서 얻은 세포 현탁액 10μL에서 세포를 계수하고, 완전배지로 세포를 4 Х 106개/mL의 농도로 희석하였다. 이어서 세포를 96웰 플레이트에 1웰당 100μL의 양만큼 옮겼다. 총 세포개수는 1웰당 4 Х 105개였다.
IL-23 또는 IL-23과 하이브리도마 상청액 혼합물로 유도한 마우스 비장세포에서의 IL-17 분비
완전배지로 IL-23(R&D Systems, 카탈로그 번호 1290-IL-500/CF)을 120ng/mL로 희석하였다. IL-23 120μL를 실시예 1에서 얻은 하이브리도마 세포 배양물 상청액 120μL와 혼합하고, 37℃에서 30분 동안 배양하였다. 30분 후, 혼합물 100μL을 마우스 비장 림프구로 코팅했던 96웰 플레이트에 플레이팅한 마우스 비장 림프구에 첨가한 다음, 잘 혼합하여 37℃에서 4일간 배양하였다. IL-23 120μL와 완전배지(10% FBS 함유 RPMI-1640 배지) 120μL의 혼합물을 음성대조군으로 사용하였다.
IL-17 함량 측정 및 하이브리도마 상청액 억제율 산출
본 발명에서 IL-17 함량은 마우스 IL-17 DuoSet ELISA 키트(R&D Systems, 카탈로그 번호 DY421)로 검출되었으며, 하이브리도마 상청액의 억제율 산출식은 다음과 같다.
억제율(%) = (IL-17음성대조군 -IL-17테스트 샘플) / IL-17음성대조군Х100%
상기 기능적 실험으로 참조 항체보다 우수한 활성을 가지는 하이브리도마 세포를 발견하였다. 클론 번호는 17D1이었다. 결과를 하기의 표 8에 정리하였다.
표 8:
Figure pct00014
실시예 3. 키메라 항체의 제조
분자 바이오테크놀로지를 이용하여 실시예 1의 하이브리도마 세포로 생산한 항IL-23p19 항체의 항체 서열을 얻고, 이를 이용해 인간-마우스 키메라 항체를 구축하였다.
하이브리도마 시퀀싱
RNA 추출: 새로 배양한 17D1 클론의 세포 약 5 Х 10 6 개를 300g에서 5분간 원심분리하고, 상청액을 폐기하였다. 침전물에 LY 완충액(Biomiga) 500μL(사용 전 1mL당 베타메르캅토에탄올 20μL를 첨가)을 첨가하고 투명해질 때까지 흔들었다. 혼합물을 원심분리튜브로 옮기고 13000rpm에서 2분간 원심분리를 실시하였다. 통과(flow-through) 분획을 채취하였다. 100% 에탄올을 1/2의 비율로 통과 분획에 첨가하고, 유체가 투명해질 때까지 거꾸로 들고 다섯 번 섞어주었다. 투명한 용액을 RNA 채취튜브에 첨가하고 1분간 13000rpm에서 원심분리한 다음 상청액을 폐기하였다. RB(Recovery Buffer)(Takara) 500μL를 첨가하고 혼합물을 13000rpm에서 30초간 원심분리한 다음, RNA 세척 완충액(Biomiga) 500μL를 첨가하고 30초간 추가로 원심분리를 실시하였다(사용하기 전에 적절한 양의 에탄올을 첨가하였다). 상기 절차를 반복한 다음 추가 원심분리 및 증발로 에탄올을 완전히 제거하였다. 채취 컬럼(PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit)에 DEPC 처리수 30μL로 전처리를 실시하고, 혼합물을 12000g에서 2분간 원심분리한 다음 용출액을 채취하였다. RNA 농도를 측정하였다.
PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit(Takara)를 이용하여 역전사를 실시하여 cDNA를 얻었다. 단계는 다음과 같다(시약은 해당 키트에 포함).
제조반응계 I을 하기의 표 9에 정리하였다.
표 9:
Figure pct00015
65℃에서 5분간 배양한 후 반응계를 얼음에서 급속하게 냉각하였다. 반응계 I을 총 20μL의 양으로 다음의 역전사계(표 10)에 첨가하였다.
표 10: 역전사계
Figure pct00016
서서히 혼합한 후, 60분간 42℃ → 5분간 95℃의 조건 하에서 역전사를 유도하였다. 혼합물을 얼음에서 냉각하고 cDNA를 채취하였다.
cDNA를 Mighty TA 클로닝 키트(Takara)를 이용하여 T 벡터에 연결하였다.
중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 PCR을 통해 개별적으로 증폭하였다. PCR 반응계를 다음의 표 11에 기재하였다.
표 11:
Figure pct00017
PCR 반응 조건을 표 12에 정리하였다.
표 12:
Figure pct00018
pMD20-T 벡터(Takara) 0.5μL 및 Ligation Mighty Mix(Takara) 5μL를 상기 PCR 반응에서 얻은 PCR 생성물 4.5μL에 첨가하였다. 혼합물을 부드럽게 혼합하고 37℃에서 2시간 동안 배양하여 결찰 생성물을 얻었다.
세포의 형질전환:
TOP10 컴피턴트 세포(Tiangen Biotech(베이징)주식회사)를 -80℃에서 채취하여 얼음에서 해동하였다. 상기에서 얻은 결찰 생성물 5μL를 해동시킨 TOP10 컴피턴트 세포에 첨가하였다. 혼합물을 잘 혼합한 후 얼음에서 30분간 배양하였다. 42℃에서 90초간 열 충격을 가한 다음, 수득한 혼합물을 2분간 얼음에서 급속도로 냉각시켰다. LB 배지(Sangon Biotech(상하이)주식회사) 900μL를 EP 튜브에 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 쉐이커에서 220rpm, 37℃로 인큐베이션하였다. 세포를 3000g에서 2분간 원심분리하였다. 상청액 800μL를 폐기하고, 암피실린 플레이트 코팅을 위해 세포를 남은 배지에 재현탁하였다. 세포를 37℃에서 하룻밤 동안 배양하고 시퀀싱을 위해 클론을 분리하였다.
키메라 항체의 구축
실시예 1의 하이브리도마에서 생성한 항IL-23p19 항체의 서열화한 VH 및 VL 영역을 PCR로 증폭시켰다. 정방향 및 역방향 프라이머의 서열을 표 13 및 14에 기재하였다.
표 13. 마우스 항IL-23p19 항체의 중쇄 가변 영역(VH)용 프라이머(프라이머 혼합물 1)
Figure pct00019
성분을 상기의 비율로 혼합한 후, 결과적으로 얻은 프라이머 혼합물 1을 이후의 VH PCR 증폭에 사용하였다.표 14. 마우스 항IL-23p19 항체의 경쇄 가변 영역(VL)용 프라이머(프라이머 혼합물 2)
Figure pct00020
성분을 상기의 비율로 혼합한 후, 결과적으로 얻은 프라이머 혼합물 2를 이후의 VL PCR 증폭에 사용하였다.
PCR계를 표 15에 정리하였다.
표 15:
Figure pct00021
겔을 절단하여 PCR 증폭 생성물을 회수하였다.
상동재조합:
상동재조합계를 하기의 표 16에 정리하였다.
표 16:
Figure pct00022
37℃에서 30분간 배양하여 재조합 생성물을 얻었다. TOP10 컴피턴트 세포를 재조합 생성물로 형질전환하였다. 단일클론은 시퀀싱을 위해 분리하였다. 삽입 방향이 바른 플라스미드를 함유하는 클론을 양성 클론으로 선택하고 보존하였다. 본 출원에 개시된 예시적 키메라 항체(17D1 키메라 항체)의 CDR, 경쇄 및 중쇄 가변 영역, 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열, 상응 핵산 서열을 본 출원의 표 1~3 및 서열 목록 섹션에 열거하였다.
실시예 4. 키메라 항체의 인간화
실시예 3에서 얻은 키메라 항체를 인간화하였다. 인간화는 다음의 단계를 통해 실시하였다.
1) CDR 루프 구조를 판정;
2) 중쇄 및 경쇄의 각 V/J 영역에 가장 가까운 상동서열을 인간 생식계열 서열 데이터베이스에서 검색;
3) 중쇄 및 경쇄에서의 가장 높은 매칭 및 최소량의 복귀돌연변이에 대해 인간 생식선을 선별;
4) 인간 항체의 프레임워크에 키메라 항체의 CDR을 구축;
5) 서열 및 구조적 특징에 근거하여 프레임워크에서 CDR 기능을 유지하는 아미노산의 위치를 결정;
6) 동정한 중요 위치에 복귀돌연변이(입력 아미노산에 대해 복귀)에 추가; 및
7) 위험부위에서 아미노산을 최적화.
본 출원에 개시된 예시적 키메라 항체(17D1 인간화 항체)의 CDR, 경쇄 및 중쇄 가변 영역, 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열, 상응 핵산 서열을 본 출원의 표 1~3 및 서열 목록 섹션에 열거하였다.
실시예 5. 항체의 발현 및 정제
본 발명의 인간화 항체를 CHO-S 세포에서 발현시켜 정제하였다.
제조업체의 지침에 따라 Freedom® CHO-S® 키트(Invitrogen)를 이용하여 항체 발현 CHO-S 세포를 제조하였다. 먼저 17D1 인간화 항체 분자의 중쇄 및 경쇄의 DNA 서열을 동일한 pCHO1.0 플라스미드에 삽입하였다. 중쇄는 경쇄의 상류측에 위치하였다. 구축한 pCHO1.0 플라스미드를 화학적 트랜스펙션 및 전기 트랜스펙션으로 CHO 세포(Life Technology)에 옮기고, 포테바이오로 항체수율을 측정하여 트랜스펙션 48시간 후의 트랜스펙션 효율을 판정하였다. 트랜스펙션 세포에 2사이클의 가압여과를 가해 항체 발현이 높은 세포 풀을 얻었다. 이어서 세포를 확장하여 대량의 항체를 발현시키고, 세포 상청액을 채취한 다음 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 이용해 >95%의 순도로 정제하였다.
YTE 항체의 제조
생체내 반감기를 연장하기 위해, 위치특이적 돌연변이(M252Y/S254T/T256E)를 17D1 인간화 항체 Fc 세그먼트의 3곳에 도입하여 인간 FcRn에 대한 결합 능력을 향상시켰다. 17D1 인간화 항체 제조 시와 마찬가지로, Freedom® CHO-S® 키트(Invitrogen)를 이용하여 항체 발현 CHO-S 세포를 제조하였다. 트랜스펙션 세포에 2사이클의 가압여과를 가해 항체 발현이 높은 세포 풀을 얻었다. 이어서 세포를 확장하여 대량의 항체를 발현시키고, 세포 상청액을 채취한 다음 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 이용해 >95%의 순도로 정제하였다. 수득한 항체를 17D1-YTE라 명명하였다.
실시예 6. 인간화 항체의 친화도 분석
본 발명의 상기 17D1 인간화 항체 및 17D1-YTE의 인간 IL-23p19에 대한 결합의 평형 해리상수(KD)를 생물학적 광학 간섭법(포테바이오)으로 측정하였다.
포테바이오 친화도 검정을 선행 기술에 따라 실시하였다(Estep, P, et al., High throughput solution based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning. MAbs, 2013.5(2): p. 270-8). 센서를 30분간 분석 완충액 내에서 오프라인으로 평형화하고, 이어서 60초간 온라인으로 평형화하여 기준선을 설정하였다. 상기에 기재한 바와 같이 수득한 정제 항체를 포테바이오 친화도 검정을 위해 AHQ 센서(포테바이오)에 온라인으로 로딩하였다. 이어서, 항체를 로딩한 센서를 5분간 XX 항원 100nM에 노출시킨 후, 센서를 분석 완충액 5분간 해리시키고, 해리 속도를 측정하였다. 1:1 결합 모델을 사용하여 동역학 분석을 실시하였다.
상기 분석에 따라, 본 발명의 상기 17D1 인간화 항체, 17D1-YTE 및 참조 항체 Gmab의 인간 IL-23(실시예 1에 기재된 바와 같이 수득, 100mM)에 대한 친화도를 하기 표 17에 기재하였다.
표 17: 인간 IL-23에 대한 항체의 친화도
Figure pct00023
상기 표 17의 결과로부터, 본 발명의 상기 17D1 인간화 항체 및 17D1-YTE는 매우 높은 친화성을 보인다는 사실을 알 수 있다. 17D1은 참조 항체 Gmab와 유사한 친화도를, 17D1-YTE는 참조 항체 Gmab보다 높은 친화도를 나타내었다.
인간 인터루킨 단백질 인간 IL-12(ACRO Biosystems, Cat# IL2-H4210) 또는 동일 패밀리의 인간 IL-12p40(ACRO Biosystems, Cat# NK2-H52H7)에 대한 상기 17D1 인간화 항체 및 17D1-YTE의 결합의 평행 해리상수(KD)는 생물학적 광학 간섭법(포테바이오)으로 측정하였다(표 18).
표 18: 그 외 인간 항원에 대한 항체의 친화도
Figure pct00024
상기 표 18의 결과에 따르면, 17D1 인간화 항체와 17D1-YTE 항체는 어느 쪽에 인간 IL-12, 인간 IL-12p40에 결합하지 않았다.
필리핀원숭이 IL-23(실시예 1에 기재된 바와 같이 수득, 100mM)에 대한 본 발명의 상기 17D1 인간화 항체 및 17D1-YTE의 결합의 평형 해리상수(KD)를 생물학적 광학 간섭법(포테바이오)으로 측정하였다(표 19).
표 19. 필리핀원숭이 IL-23에 대한 17D1-YTE의 친화도
Figure pct00025
상기 도면 및 표로부터, 본 발명의 상기 17D1 인간화 항체 및 17D1-YTE는 매우 높은 친화성을 나타내며, 17D1-YTE의 친화도는 기준항체 Gmab와 유사함을 알 수 있었다.인간 FcRn에 대한 후보 항체의 포테바이오 친화도 검정
해당 분석에서, 포테바이오 Octet RED96 시스템을 이용하여17D1 인간화 항체 및 17D1-YTE와 인간 FcRn(Acro, 카탈로그 번호 FCM-H5286)의 결합에 대한 운동 상수(KD)를 검출하였다. 결과를 표 20에 정리하였다. 인간 FcRn에 대한 17D1-YTE의 친화도는 17D1 인간화 항체 및 참조 항체 Gmab의 3배였다.
먼저, 상기와 같이 제조한 17D1 인간화 항체, 17D1-YTE, 및 Gmab(구셀쿠맙)을 비오틴으로 표지하였다. 항체와 비오틴의 몰비는 1:3으로 조정하였다. 탈염 컬럼으로 비오틴을 제거한 다음, 표지된 샘플을 재측정하고 추후 사용을 위해 보관하였다.
적절한 양의 SA 센서(포테바이오, 카탈로그 번호 18-5019)를 분석 완충액에 30분 동안 담갔다. 비오틴화 17D1 인간화 항체, 17D1-YTE, 및 Gmab를 100nM으로 희석하고 인간 FcRn(Acro, 카탈로그 번호 FCM-H5286)을 5가지 농도(5μg/mL, 2.5μg/mL, 1.25μg/mL, 0.625μg/mL, 0.3125μg/mL)로 연속해서 2배 희석하였다. 먼저 센서를 120초간 분석 완충액으로 평형화하였다. 이어서 비오틴화 항체를 SA 센서에 100초간 고정시켜 로딩하고, 센서를 고정화한 후 120초간 추가로 평형화하였다. 기준선이 안정화시킨 후 연속 희석한 FcRns를 동일한 항체 고정 수준으로 센서에 결합하였다. 결합하고 100초 후, 센서를 120초간 분석 완충액에서 평형화하여 결합 및 해리를 측정하였다. 실험 데이터는 1:1 모델을 사용하여 분석하였다. 친화도 데이터를 표 20에 정리하였다.
표 20. 17D1-YTE의 인간 FcRn에 대한 친화도
Figure pct00026
실시예 7. 인간화 항체의 활성 특성
상기에서 수득한 17D1 인간화 항체 및 17D1-YTE의 활성을 판정하고 마우스 비장 림프구에서의 IL-23 유도 IL-17 분비를 억제할 수 있도록 기능성 실험을 설계하였다. 분석법은 실시예 2와 동일하되, 17D1 인간화 항체 및 17D1-YTE의 4μg/mL PBS 용액을 사용하였다. Gmab을 기준으로 삼았다. 결과를 도 1에 나타내었다.
상기 분석에서 17D1 인간화 항체 및 17D1-YTE는 마우스 비장 림프구에서 IL-17 분비를 유도하는 IL-23을 억제하였는데, 이는 참조 항체와 유사하였다.
실시예 8. 동물에서의 약력학적 특성
본 실험에서는 C57BL/6 숫놈 마우스를 이용하여 본 출원에 개시된 IL-23 항체의 예방적 소염 효과를 판정하였다.
C57BL/6 숫놈 마우스: C57Bl/6 숫놈 마우스(42~62일)를 베이징 바이탈 리버 실험동물기술유한회사에서 구입하였다. 마우스 48마리는 모두 SPF 등급으로, 인증 번호는 11400700260631이다. 도착한 후 실험 개시 전까지 7일간의 적응기간을 두었다.
투여: 총 48마리의 마우스를 각 실험군당 6마리씩 8개의 실험군으로 무작위 배정하였다(단, h-IgG+ PBS 실험군의 숫놈 한 마리가 구타를 당해 심각한 부상을 입어 실험군에서 제외되었다). 항체의 PBS 용액을 h-IgG 5mg/kg; 17D1 인간화 항체(이하 17D1) 1mg/kg; 17D1 5mg/kg; 17D1-YTE 1mg/ kg; 17D1-YTE 5mg/kg; Gmab 1mg/kg; Gmab 5mg/kg의 용량으로 하루 전에 복강내 주사로 투여하였다. 다음 날부터 9일간, PBS를 제 1 실험군(h-IgG-5mg/kg)의 오른쪽 귀에 피하 주사하고, IL-23 항원(PBS 내)(실시예 1에 기재된 바와 같이 수득한 인간 IL-23 단백질)을 나머지 실험군의 오른쪽 귀에 마우스당 1μg씩 피하 주사하였다. 투여량 및 투여경로를 표 21에 정리하였다. 마우스 오른쪽 귀 두께와 체중을 9일 동안 1~2일마다 모니터링하였다. 마우스 오른쪽 귀 두께를 버니어 캘리퍼스로 측정하였다(도 2). 마우스의 체중을 전자저울을 이용하여 측정하였다.
표 21. 실험 설계
Figure pct00027
표 22. 약물 정보
Figure pct00028
귀 부종억제율을 도 3에 나타내었다. 오른쪽 귀에 IL-23 항원을 7일간 피하 주사로 투여한 결과, 17D1 1mg/kg, 17D1 5mg/kg, 17D1-YTE 1mg/kg, 17D1-YTE 5mg/kg, Gmab 1mg/kg, Gmab 5mg/kg은 모두 귀 부종억제에 바람직한 영향을 미쳤다. H-IgG와 비교했을 때, 17D1 1mg/kg, 17D1 5mg/kg, 17D1-YTE 1mg/kg, 17D1-YTE 5mg/kg, Gmab 1mg/kg, Gmab 5mg/kg의 부종억제율은 각각 71%, 54%, 67%, 86%, 74%, 및 88%였다. 한편, 마우스의 체중을 모니터링하였다. 도 4에 도시된 바와 같이. 마우스의 체중에는 유의한 차이가 없었다. 따라서 본 연구의 IL-23 항체는 상당한 예방적 소염 효과를 보인다.
표 23. 7일째의 귀 부종억제율(%)
Figure pct00029
TGI% = 100% * (대조군의 귀 두께 -치료군의 귀 두께)/(대조군의 귀 두께 -대조군의 투여 전 귀 두께)대조군의 투여 전 귀 두께는 0.298mm였다.
SEQUENCE LISTING <110> Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. <120> ANTI-IL-23p19 ANTIBODY AND USE THEREOF <130> IPA201539-CN <160> 25 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 antibody HCDR1 <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Leu Met His 1 5 10 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 chimeric antibody HCDR2 <400> 2 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn 1 5 10 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 humanized antibody or 17D1-YTE antibody HCDR2 <400> 3 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Glu Gly Thr Asn 1 5 10 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 antibody HCDR3 <400> 4 Asn Trp Asp Leu Pro Tyr 1 5 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 antibody LCDR1 <400> 5 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His 1 5 10 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 antibody LCDR2 <400> 6 Tyr Ala Ser Gln Ser Met Ser 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 chimeric antibody LCDR3 <400> 7 Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 humanized antibody or 17D1-YTE antibody HCDR3 <400> 8 Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 9 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 chimeric antibody VH <400> 9 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Val Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Trp Asp Leu Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ala 115 <210> 10 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 humanized antibody or 17D1-YTE antibody VH <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Leu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Glu Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Trp Asp Leu Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 chimeric antibody VL <400> 11 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 12 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 humanized antibody or 17D1-YTE antibody VL <400> 12 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Met Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 13 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 chimeric antibody HC <400> 13 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Val Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Trp Asp Leu Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 14 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1 humanized antibody HC <400> 14 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Leu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Glu Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Trp Asp Leu Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 15 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1-YTE antibody HC <400> 15 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Leu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Glu Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Trp Asp Leu Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 16 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1-chimeric antibody LC <400> 16 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 17 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 17D1-humanized antibody or 17D1-YTE antibody LC <400> 17 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Met Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 18 <211> 1339 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 17D1 chimeric antibody HC DNA <400> 18 gaggttcagc tgcagcagtc tgtacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaaga cttctggata cacattcact agttatctta tgcactgggt gaagcagaag 120 cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg tactaactac 180 aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagaaactgg 300 gacctccctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgcaggcct ccaccaaagg 360 ccccagcgtc ttccccctgg ctcctagctc caaatccacc agcggcggca ccgctgctct 420 gggctgcctg gtgaaagatt acttccccga gcctgtgacc gtgtcctgga acagcggcgc 480 tctgacaagc ggcgtgcaca cctttcccgc tgtcctccaa tcctccggac tgtactccct 540 gagctccgtg gtgaccgtgc ccagctcctc cctcggaacc cagacataca tctgcaacgt 600 gaaccacaag ccttccaaca ccaaggtgga caagaaggtg gagcctaagt cctgcgacaa 660 aacccacacc tgtccccctt gtcctgctcc cgagctcctg ggaggacctt ccgtgttcct 720 cttccctccc aaacccaagg acaccctgat gattagcagg acacccgagg tgacctgtgt 780 ggtggtggat gtgagccatg aggaccccga ggtgaagttt aactggtacg tggacggcgt 840 cgaggtgcac aacgctaaga ccaaacccag ggaggagcag tacaactcca cataccgggt 900 cgtgagcgtg ctgaccgtcc tgcaccagga ttggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa 960 ggtgagcaac aaggccctgc ccgcccccat cgagaagacc atcagcaagg ccaaaggaca 1020 gcctcgggag ccccaggttt atactctccc ccccagccgg gacgaactga ccaagaatca 1080 ggtgtccctc acctgcctcg tgaagggctt ttaccccagc gacattgccg tggagtggga 1140 gagcaatgga cagcccgaaa acaactacaa gaccacaccc cccgtcctgg actccgatgg 1200 cagcttcttc ctgtacagca agctgaccgt ggacaagagc aggtggcagc agggcaacgt 1260 gtttagctgc agcgtcatgc acgaggctct ccacaaccac tacacccaga agtccctgag 1320 cctgagcccc ggaaagtga 1339 <210> 19 <211> 1335 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 17D1 humanized antibody HC DNA <400> 19 caggtgcagc tggtgcagtc cggagctgag gtcaagaaac ccggcgcctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcta cacattcacc agctatctga tgcactgggt caggcaggcc 120 cctggacaag gcctggagtg gatgggctac atcaaccctt acaacgaggg cacaaactac 180 gcccagaagt tccagggcag ggtgaccatg acccgggaca cctccatctc caccgcctat 240 atggagctct ccaggctgag gagcgatgac accgccgtgt attactgtgc caggaactgg 300 gacctgccct actggggaca gggcacactc gtgaccgtga gcagcgcttc caccaagggc 360 cctagcgtct ttcccctggc cccttccagc aagagcacca gcggaggcac cgctgctctc 420 ggctgtctcg tgaaggacta cttccccgag cctgtgaccg tgtcctggaa cagcggcgct 480 ctgacaagcg gcgtgcatac cttccccgcc gtgctgcagt cctccggact gtacagcctg 540 agctccgtgg tgacagtgcc tagcagcagc ctgggcaccc agacctacat ctgcaacgtc 600 aaccacaaac cctccaacac caaggtggac aagaaggtgg agcctaagtc ctgcgataag 660 acccacacct gccctccctg ccctgctcct gaactgctgg gcggaccttc cgtgttcctg 720 ttccccccca aacccaagga taccctgatg atctcccgga cccccgaggt gacatgcgtg 780 gtcgtcgacg tgtcccacga ggaccctgag gtgaagttca actggtacgt ggatggcgtg 840 gaggtgcaca acgccaagac aaagcccagg gaggagcagt acaactccac ctaccgggtg 900 gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggat tggctgaacg gcaaggaata taagtgcaag 960 gtgtccaaca aagccctgcc cgcccccatc gaaaagacaa tctccaaggc caagggccag 1020 cctcgggaac ctcaggtgta taccctgccc ccctcccggg acgagctgac aaaaaaccag 1080 gtgtccctca cctgtctggt gaagggcttc tacccctccg atatcgctgt cgagtgggag 1140 tccaacggcc agcccgagaa caattataaa accacccccc ctgtgctgga ttccgacggc 1200 tccttcttcc tctactccaa gctgaccgtg gacaaatccc ggtggcagca gggaaacgtc 1260 ttctcctgct ccgtcatgca tgaggctctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 1320 ctgagccccg gatga 1335 <210> 20 <211> 1335 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 17D1-YTE antibody HC DNA <400> 20 caggtgcagc tggtgcagtc cggagctgag gtcaagaaac ccggcgcctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcta cacattcacc agctatctga tgcactgggt caggcaggcc 120 cctggacaag gcctggagtg gatgggctac atcaaccctt acaacgaggg cacaaactac 180 gcccagaagt tccagggcag ggtgaccatg acccgggaca cctccatctc caccgcctat 240 atggagctct ccaggctgag gagcgatgac accgccgtgt attactgtgc caggaactgg 300 gacctgccct actggggaca gggcacactc gtgaccgtga gcagcgcttc caccaagggc 360 cctagcgtct ttcccctggc cccttccagc aagagcacca gcggaggcac cgctgctctc 420 ggctgtctcg tgaaggacta cttccccgag cctgtgaccg tgtcctggaa cagcggcgct 480 ctgacaagcg gcgtgcatac cttccccgcc gtgctgcagt cctccggact gtacagcctg 540 agctccgtgg tgacagtgcc tagcagcagc ctgggcaccc agacctacat ctgcaacgtc 600 aaccacaaac cctccaacac caaggtggac aagaaggtgg agcctaagtc ctgcgataag 660 acccacacct gccctccctg ccctgctcct gaactgctgg gcggaccttc cgtgttcctg 720 ttccccccca aacccaagga taccctgtac atcacccggg agcccgaggt gacatgcgtg 780 gtcgtcgacg tgtcccacga ggaccctgag gtgaagttca actggtacgt ggatggcgtg 840 gaggtgcaca acgccaagac aaagcccagg gaggagcagt acaactccac ctaccgggtg 900 gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggat tggctgaacg gcaaggaata taagtgcaag 960 gtgtccaaca aagccctgcc cgcccccatc gaaaagacaa tctccaaggc caagggccag 1020 cctcgggaac ctcaggtgta taccctgccc ccctcccggg acgagctgac aaaaaaccag 1080 gtgtccctca cctgtctggt gaagggcttc tacccctccg atatcgctgt cgagtgggag 1140 tccaacggcc agcccgagaa caattataaa accacccccc ctgtgctgga ttccgacggc 1200 tccttcttcc tctactccaa gctgaccgtg gacaaatccc ggtggcagca gggaaacgtc 1260 ttctcctgct ccgtcatgca tgaggctctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 1320 ctgagccccg gatga 1335 <210> 21 <211> 646 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 17D1 chimeric antibody LC DNA <400> 21 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gactacttac actggtatca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatgtctgg gatcccctcc 180 aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240 gaagatgttg gagtgtatta ttgtcaaaat ggtcacagtt ttccgttcac gttcggtgct 300 gggaccaagc tggagctgaa accggaccgt ggccgcccct tccgtgttca tctttccccc 360 ctccgacgag cagctgaagt ccggaaccgc cagcgtggtg tgcctcctga acaactttta 420 cccccgggag gccaaggtgc agtggaaggt ggacaacgcc ctgcaaagcg gcaactccca 480 ggaatccgtc accgagcagg attccaagga ttccacctac agcctgtcct ccaccctgac 540 actgtccaag gccgactacg agaagcacaa ggtgtacgcc tgcgaggtga cacaccaggg 600 cctgagcagc cccgtgacca agtccttcaa ccggggcgag tgttga 646 <210> 22 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 17D1 humanized antibody or 17D1-YTE antibody LC DNA <400> 22 gacatccaga tgacccagag ccccagctcc ctgagcgctt ccgtcggaga tagggtgacc 60 atcacctgca gggcttccca gtccatcagc gactacctgc actggtacca gcaaaagcct 120 ggcaaggccc ccaagctgct catcaaatac gcctcccagt ccatgagcgg cgtgcctagc 180 aggttttccg gcagcggctc cggctccgac tttaccctga ccatctcctc cctgcagccc 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag ggccactcct tccccttcac cttcggccag 300 ggcaccaagc tcgagatcaa gaggaccgtg gccgccccct ccgtgttcat cttccccccc 360 tccgatgagc agctgaaatc cggaaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 cctcgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caacagccag 480 gagtccgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctact ccctgtccag caccctcaca 540 ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac acaccaggga 600 ctgagctccc ccgtgaccaa gagcttcaat aggggcgagt gctga 645 <210> 23 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Antibody HCDR2, wherein Xaa can be any amino acid, preferably D or E <400> 23 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Xaa Gly Thr Asn 1 5 10 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Antibody LCDR3, wherein Xaa can be any amino acid, preferably Q or N <400> 24 Gln Xaa Gly His Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 25 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Signal peptide sequence <400> 25 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly 20

Claims (23)

  1. 서열 번호 9 또는 10으로 표시되는 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(HCDR), 및 서열 번호 11 또는 12로 표시되는 경쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함하는, IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3) 및 경쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하며,
    HCDR1은 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 2, 3 또는 23에 기재된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 4에 기재된 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR1은 서열 번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 7, 8 또는 24에 기재된 아미노산 서열을 포함하는, IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,
    상기 항체가 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하고,
    상기 중쇄 가변 영역이,
    (i) 표 B에 열거된 항체들 중 임의의 항체의 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 또는
    (ii) 표 A에 나타난 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3의 조합을 포함하는 것이며; 및/또는
    상기 경쇄 가변 영역이,
    (i) 표 B에 열거된 항체들 중 임의의 항체의 VL에 포함된 3개의 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3); 또는
    (ii) 표 A에 나타난 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3의 조합을 포함하는 것인, IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역을 포함하고,
    상기 중쇄 가변 영역은 서열 번호 9 및 10으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이며; 및/또는
    상기 경쇄 가변 영역은 서열 번호 11 및 12로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제1항 또는 제3항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역은 서열 번호 9 또는 10으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열 번호 11 또는 12로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 제1항 또는 제5항에 있어서,
    (a) 상기 중쇄는
    (i) 서열 번호 13, 14 및 15로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%의 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것; 또는
    (ii) 서열 번호 13, 14 및 15로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것; 및/또는
    (b) 상기 경쇄는
    (i) 서열 번호 16 및 17로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%의 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것; 또는
    (ii) 서열 번호 16 및 17로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 특징 중 하나 이상을 갖는, IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (i) IL-23p19에 결합할 때 kD가 1.75nM 이하;
    (ii) 표 3에 열거된 항체들 중 임의의 것과 비교하여 IL-23p19에 대해 동일하거나 유사한 결합 친화도 및/또는 특이도를 나타내는 것;
    (iii) 표 3에 열거된 항체들 중 임의의 것의 IL-23p19에 대한 결합을 억제(예를 들어, 경쟁적으로 억제)하는 것;
    (iv) 표 3에 열거된 항체들 중 임의의 것과 동일하거나 중첩하는 에피토프에 결합하는 것;
    (v) IL-23p19에 대한 결합에 관하여 표 3에 열거된 항체들 중 임의의 것과 경쟁하는 것; 및/또는
    (vi) 표 3에 열거된 항체들 중 어느 하나의 하나 이상의 생물학적 특성을 보유하는 것.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 형태인 항체이거나 이의 항원 결합 단편인, IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체인, IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간화 항체, 인간 항체 또는 키메라 항체인, IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, 단일쇄 항체(scFv 또는 (Fab')2), 단일 도메인 항체, 디아바디(dAb) 및 선형 항체로부터 선택된 항체 단편인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 이중특이성 또는 삼중특이성 항체 분자이며, 바람직하게는, Il-23p19 및 TNFα, IL-17A, 또는 IL-17F에 결합하는 이중특이성 항체인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는, 단리 핵산.
  14. 제13항에 기재된 핵산을 포함하는 벡터로서, 바람직하게는, 상기 벡터는 발현 벡터인, 벡터.
  15. 제13항에 기재된 핵산 또는 제14항에 기재된 벡터를 포함하는 숙주 세포로서, 상기 숙주 세포는 바람직하게는 원핵세포 또는 진핵세포이며, 보다 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 효모 세포, 포유류 세포(예를 들어, 293 세포, 또는 CHO-S 세포와 같은 CHO 세포), 혹은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조에 적합한 그 외 세포로부터 선택되는, 숙주 세포.
  16. IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는 방법으로서,
    제15항에 기재된 숙주 세포를 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산의 발현에 적합한 조건에서 배양하는 단계를 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 단리하는 단계를 선택적으로 포함하며, 상기 숙주 세포로부터 상기 IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 단리하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  17. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 추가 물질, 예컨대 세포독성제를 포함하는, 면역접합체.
  18. 제약 조성물로서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 혹은 제17항에 기재된 면역접합체를 포함하고, 선택적으로 1종 이상의 추가 치료제, 예를 들어, 면역조절제(면역억제제 또는 소염제), 및 선택적으로 제약 부형제를 포함하는, 제약 조성물.
  19. 조합 생성물로서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 혹은 제17항에 기재된 면역접합체를 포함하고, 선택적으로 1종 이상의 추가 치료제, 예를 들어, 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 기타 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제(면역억제제 또는 소염제)를 포함하는, 조합 생성물.
  20. 대상체에 있어서 ADCC를 매개하거나, 이펙터(effector) T세포 또는 NF-카파B 신호 전달 경로를 활성화하거나, 또는 조절 T세포(예를 들어, Treg 세포)를 제거하는 방법으로서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제17항에 기재된 면역접합체, 제18항에 기재된 제약 조성물, 혹은 제19항에 기재된 조합 생성물의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  21. 대상체의 IL-23 관련 질환을 예방 또는 치료하는 방법으로서,
    제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제17항에 기재된 면역접합체, 제18항에 기재된 제약 조성물, 혹은 제19항에 기재된 조합 생성물의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 IL-23 관련 질환은 바람직하게는 면역계 질환, 예컨대 자가면역질환 또는 염증이며, 또한 상기 질환은 바람직하게는 염증성 장질환(예를 들어, 궤양성 대장염 또는 크론병), 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 전신 홍반성 낭창, 경피증, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증, 염증, 천식, 특발성 혈소판 감소성 자반증 또는 건선성 관절염인, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 대상체에게 하나 이상의 조합요법, 예컨대 치료 양식(modalities) 및/또는 추가 치료제를 적용하는 단계를 추가로 포함하고, 바람직하게는, 상기 치료 양식은 수술 및/또는 방사선 요법을 포함하며, 상기 추가 치료제는 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 기타 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제(면역억제제 또는 소염제)로부터 선택되는, 방법.
  23. 샘플에서 IL-23p19를 검출하는 방법으로서,
    (a) 상기 샘플을 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 기재된 IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
    (b) 상기 IL-23p19에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 IL-23p19에 의해 형성된 복합체를 검출하는 단계를 포함하고, 선택적으로, 상기 IL-23p19에 결합하는 항체는 검출가능하게 표지되는, 방법.
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