UNIVERSITE MARIEN NGOUABI

FACULTE DES SCIENCES ET

TECHNIQUES
DEPARTEMENTS DES LICENCES
Année : 2023-2024 PARCOURS : BIOLOGIE

DEUXIEME ANNEE DE BIOLOGIE

SEMESTRE 3

COMPTE RENDU
TRAVAUX PRATIQUES DE BIOCHIMIE

TITRE : ETUDE DES PROTEINES & DES GLUCIDES

GROUPE :

Mercredi, 06 Mars 2024

Sous –groupe :
Participants :
1- MOUPOUNDZA Leduc Dieuvèil
2- NGOMA Emilie Junelvie Fredyth
3- MOUHEMBE TSOUNGUI Claude

ANNEE ACADEMIQUE 2023-2024

1
 ETUDE DES PROTEINES ET DES GLUCIDES

A. GLUCIDES
I. Introduction :

Les glucides font parties d’un ensemble des composantes de la matière organique qui sont
nécessaires au bon fonctionnement de l’organisme.

Ce sont biomoléculaire généralement solubles dans l’eau, synthétisés par des végétaux ou
organismes autotrophes et ces derniers sont séparés en deux groupes : Oses ou sucres simples
ou monosaccharides et les osides ou sucre complexe.

Les glucides étant considérablement répandus dans les aliments, nous avons fait un dosage
quantitatif et un dosage qualitatif afin de prouver la présence des glucides dans le jus d’orange.

1. But de manipulation

Nous avons deux buts dans cette manipulation :

 Doser les glucides contenus dans le jus d’orange par la méthode quantitative
classique de Bertrand
 Mettre en évidence les glucides contenus dans le jus d’orange par la réaction
qualitative de Molish

II- DOSAGE QUANTITATIF: (Méthode de Bertrand).

1. But : déterminer la concentration en glucose de𝑋1 𝑒𝑡𝑋2 .
2. Principe : La méthode de Bertrand est basée sur la réaction d’oxydo-réduction entre les
fonctions aldéhydes ou cétones des glucides en présence de glucides en présence de la
liqueur de Fehling (Oxydant) a chaud.
3. Matériels et produits
a. Matériels
- Pipette
- Pro-pipette ou poires d’aspiration
- Tubes à essais
- Portoir
- Erlenmeyer
- Bécher
- Marqueur
- Réchaud

2
b- Produits

- Liqueur de Fehling
- Eau distillée
- Solution du glucose
- Solutions 𝑋1 𝑒𝑡𝑋2 .

4- Mode Opératoire

Pour commencer, nous nous sommes disposées de cinq (05) tubes à essais numérotés de 1 à
5, dont nous avons versé respectivement dans les cinq tubes des volumes allant de 2 à 10ml
de la solution mère de glucose de concentration connue C=0,5𝑔𝑙 −1 à l’aide d’une pipette. A
l’aide d’une autre pipette, nous avons versé respectivement dans les cinq tubes à essais la
solution d’eau distillée de volume allant de 8 à 10 ml de sort que nous ayons dans chaque
tube un volume final de 10ml et la solution se trouvant dans les tubes incolore. Par la suite,
nous nous sommes prédisposés de huit tubes à essais numérotés de 1 à 5, un témoin, 𝑋1 𝑒𝑡𝑋2 .
Nous avons préparée de nouveau 8 tubes que nous avons numérotée de façon distinct
1’,2’,3’,4’,5’, un tube témoins et X1 et X2. Nous avons prélevé à l’aide d’une pipette 6ml de la
solution précédemment préparée dans chaque ancien tube allant de 1 à 5 que nous avons
par la suite versé dans les nouveaux tubes allants de 1’ à 5’, nous avons mis 6ml d’eau
distillée dans le tube témoin, 6ml de solution de 𝑋1 𝑒𝑡𝑋2 que nous avons respectivement
transvasée dans les tubes marqués 𝑋1 𝑒𝑡𝑋2 . Nous avons ensuite prélevé 6ml de liqueur de
Fehling que nous avons versé dans tous les tubes à essais allant de 1’ à 𝑋2 et nos tubes ont
pris une coloration bleue.

Nous avons mis dans une marmite contenant de l’eau bouillante sur un réchaud.
Apres on a laissé bouillir pendant 10 minutes puis on a ressorti et on a mis les
tubes dans un portoir. Après quelque minutes nous avons constaté un précipité
rouge brique dans le tube 1’, 2’, 3’ ,4’, 5’, 𝑋1 𝑒𝑡𝑐 proportionnellement aux
concentrations qui varient de manière croissante notamment 𝑋1 est plus concentré
que 𝑋2 et notre tube témoin avait gardé sa couleur bleue.

3
Représentation des cinq tubes à essais et leurs concentrations
 Tableau N°1 :
Tubes 1 2 3 4 5
Solution mère 2mL 4Ml 6mL 8mL 10mL
0 ,5g /l
Eau distillée 8mL 6mL 4mL 2mL 0mL
Concentration 0 ,1g/l 0,2g /l 0,3g/l 0,4g/l 0,5g/l

 Tableaux N°2

Lecture de la densité optique à l’aide du spectrophotomètre

Tubes 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ T 𝑋1 𝑋2
6mL 6mL 6mL 6mL 6mL 6mL de 6mL de 6mL
de 1 de 2 de 3 de 4 de 5 l’eau 𝑋2 de
distillée 𝑋2
L.F 6mL 6mL 6mL 6mL 6mL 6mL 6mL 6mL
D.O 0 ,28 0,37 0,48 0,53 0,62 0 0,7 0,28

Courbe de concentration des glucides en

fonction de la densité optique
D.O

0,7 y = 0,84x + 0,204

0,6 R² = 0,9893
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
Concentration

D.O Linéaire (D.O)

4
Interprétation de la courbe
Cette courbe traduit la variation de la densité optique (D.O) en fonction de la concentration
des glucides de chaque tube.
 Calcul des concentrations 𝑿𝟏 𝒆𝒕𝑿𝟐 .
D’après l’équation de 𝑦 = 0,084𝑥 + 0,204 avec y= D.O ; X=[𝑥]

𝐷.𝑂−0,204
D.O=0,084 [𝑋] + 0,204 => [𝑋] 0,084

- CONCENTRATION DE 𝑿𝟏

0,7−0,204
[X1 ]
0,084
D’où [𝑋] = 5,90g/l

- Concentration de 𝑿𝟐

0,28−0,204
[𝑋2 ] =
0,084
D’où [𝑋2 ] = 0,90g/l

- Tableau final

Tubes 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ T 𝑋1 𝑋2
D.O 0,28 0,37 0,48 0,53 0,62 0 0,7 0,28
Concentration 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0 5,90 0,90

III- DOSAGE QUALITATIF : Réaction de Molish

1. But de la manipulation
Mettre en évidence les glucides contenus dans les jus d’orange par la réaction qualitatif de
Molish.
2. Principe
La réaction chimique permet de mettre en évidence les glucides en présence du réactif de
Molish et de l’acide sulfurique (H2SO4).
3. Matériels et Produits

a- Matériels
- Tubes à essais
- Pipettes
- Portoir
- Bécher

5
 b- Produits
- Solution d’amidon
- Solution de saccharose
- Solution de glucose
- Eau distillé
- Réactif de Molish
- Acide sulfurique
- Acide chloridrique
- Lugol
4. Mode Opératoire
Pour cette manipulation, nous avons pris 5 tubes à essais disposé dans un portoir de façon.
Ensuite, nous avons transvasé 2mL d’eau distillée dans le tube 1 ; 2mL de glucose dans le
tube 2 ; 2mL de mannose dans le tube 3 ; 2mL de saccharose dans le tube 4 et 2mL d’amidon
dans le tube 5.Puis nous avons ajouté 2mL du réactif de Molish suivi de quatre gouttes
d’acide sulfurique (H2SO4) concentré et 2 gouttes de lugol dans chaque tube. Enfin nous
avons constaté qu’il ya formation d’un anneau brun dans des tubes et rien dans le tube
contenant de l’eau distillée.

La formation des anneaux dans ces tubes prouve qu’il ya présence des glucides dans ces tubes et
absence de l’anneau dans le tube contenant de l’eau distillée prouve que le tube ne contient pas
de glucides.
Conclusion
En sommes, les deux dosages nous ont permis de mettre en évidence la présence des
glucides dans les différentes solutions qui ont servi à cette manipulation. En effet, notre
échantillon de jus d’orange en présence de liqueur de Fehling après avoir été chauffé à virer de
la coloration bleue à la coloration rouge brique ce qui se traduit par la présence de glucides, et
celle de Molish nous a permis déduit la présence des sucres par apparition d’un anneau dans le
tube à essai.

6
 B- ETUDE DES PROTEINES

1. Introduction
Fabriquée en grande quantité dans l’organisme, les protéines sont des molécules les plus
complexes et les plus variée de l’organisme vivant. Essentiellement trouvée dans toute
sorte d’aliments, elles jouent un rôle structural et cutané mais aussi dans de nombreux
comme la réponse immunitaire ou encore la digestion enzymatique.

I- DOSAGE QUANTITATIF : Méthode de Biuret

1- But de la manipulation
Le but de la manipulation est de mettre en évidence la présence des protéines dans le
blanc d’œuf et de déterminer la concentration dans les tubes 𝑋1 𝑒𝑡𝑋2 .
2- Principe
Les substituants ayant au moins deux liaisons peptidique donnent en milieu alcalin en présence
de sulfate de cuivre une coloration bleu-violet, la coloration est proportionnelle à la
concentration en protéine.
3- Matériels et produits
a- Matériels
- Tubes à essai
- Pipette
- Erlenmeyer
- Becher
- Marqueur
- Portoir
- Pro-pipette

b- Produits
- Eau physiologique
- Solution mère de blanc l’œuf
- Liqueur de Fehling

4- Mode Opératoire
Premièrement avant de commencer notre manipulation, nous avons pris un portoir dans
lequel nous avons mis huit (08) tubes à essai numérote de 1 à 5, un tube noté témoin (T) et deux
autres tubes restant nous avons noté 𝑋1 𝑒𝑡𝑋2 . Ensuite à l’aide d’une pro-pipette nous avons
pipeté de façon croissante la solution mère (blanc d’œuf) 0,2mL dans le premier tube, 0,4mL
dans le deuxième tube, 0,6mL dans le troisième tube, 0,8mL dans le quatrième tube, 1mL dans
cinquième tube et nous avons 1mL de la solution 𝑋1 𝑒𝑡𝑋2 on commençant par 𝑋2 à 𝑋1 . Ensuite
nous avons pipette de façon croissante la solution d’eau physiologique 0,8mL dans le premier
tube, 0,6Ml dans le deuxième tube, 0,4mL dans le troisième tube, 0,2mL dans le quatrième tube,
0mL dans le cinquième tube et 1mL dans le tube témoin sort que nous ayons dans chaque tube

7
un volume final de 1mL. Puis nous avons versé dans tous les huit (08) 4mL de réactif de Biuret,
nous avons constaté que les solutions se trouvant dans les tubes 1 à 5 ont pris la coloration
bleue violacé et nous mis le portoir contenant les tubes dans un milieu alcalin pendant
30minutes à la température ambiante.

5- Tableau des résultats

 Tableau N°1
Tubes 1 2 3 4 5 T
Solution mère 0,2mL 0,4mL 0,6mL 0,8mL 1mL 0mL
10g /l
Eau 0,8mL 0,6mL 0,4mL 0,2mL 0mL 1mL
physiologique
concentration 2 4 6 8 10 0

 Tableau N°2
Tubes 1 2 3 4 5 T 𝑋1 𝑋1
Solution mère 0,2mL 0,4mL 0,6mL 0,8mL 1mL 0mL 1mol de 1mol de
10g/l 𝑋1 𝑋1
Eau 0,8mL 0,6mL 0,4mL 0,2mL 0mL 1mL
physiologique
concentration 2 4 6 8 10 0 ? ?
Réactif de 4 4 4 4 4 4 4 4
Biuret
D .O 0,057 0,317 0,389 0,403 0,553 0 0,083 0,054

8
 Courbe de concentration des protéines en
D.O
fonction de la densité
0,6 y = 0,0539x + 0,0204
R² = 0,8785
0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0
0 2 4 6 8 10 12
Concentration

 Interprétation de la courbe
Cette courbe traduit la variation de la densité optique (D.O) en fonction de la
concentration des protéines dans chaque tube.
6- Calcul des concentrations par rapport à la courbe
D’après l’équation de y=0,0539𝑥 + 0,0204 ; avec y=D.O : X=[𝑥]
𝑫.𝑶−𝟎,𝟎𝟐𝟎𝟒
D.O= 0,0539[𝑋]+ 0,0204 => [𝑿] =
𝟎,𝟎𝟓𝟑𝟗

- Calcul de 𝑿𝟏
𝟎,𝟎𝟖𝟑−𝟎,𝑶𝟐𝟎𝟒
[𝑿𝟏] =
𝟎,𝟎𝟓𝟑𝟗
D’où [𝑿𝟏] = 𝟏, 𝟎𝟔𝟏𝒈/𝒍

- Calcul de 𝑿𝟐
𝟎,𝟎𝟓𝟒−𝟎,𝟎𝟐𝟎𝟒
[𝑿𝟐] =
𝟎,𝟎𝟓𝟑𝟗
D’où [𝑿𝟐] = 𝟎, 𝟔𝟐𝟑𝒈/𝒍

- Tableau final

Tubes 1 2 3 4 5 T 𝑋1 𝑋2
Concentration 2 4 6 8 10 0 1,061 0,623
D.O 0,057 0,317 0,389 0,403 0,553 0 0083 0,054

9
II- DOSAGE QUALITATIF
1- But : Mettre en évidence la présence des protéines.

2- Principe : Consiste à réaliser une réaction caractéristique des protéines

en milieu alcalin à chaud qui donne une coloration rouge en présence du
sulfate de cuivre.
3- Matériels et produits :

a-Matériels

-Tubes à essais
-Pipettes
-Portoirs
-Becher

b-produits
- Amidon
- Blanc d’œuf
- Solution de soude
- Sulfate de cuivre
- Ovalbumine

4- Mode opératoire
Pour commencer, nous avons pris trois(03) tubes à essais numéroté de 1 à 2
et un tube témoin T. nous avons versé 1 ml de solution mère de blanc d’œuf
et d’amidon respectivement dans les trois tubes. Apres nous avons versé 1ml
de solution de soude à 30 % dans tous les tubes, nous les avons chauffé à
l’aide du bec bunsen nos trois tubes jusqu’à floculation, après floculation nous
avons constatés que la solution contenue dans les tubes 1 et 2 qui étaient
auparavant incolore ont pris une coloration jaune pale mais la solution du
tube témoin est resté incolore (intact).

10
Apres avoir laissé reposer pendant quelque temps nos solutions jusqu’à refroidir, nous
avons alors ajouté 2 à 3gouttes de solution de sulfate de cuivre. Enfin nous avons ainsi
constatés que nos solutions contenu dans les tubes 1 et 2 qui était jaune pâle après
refroidissement ont formées des anneaux furfural de coloration rouge violacé a la
surface de la solution par contre notre témoin T reste incolore.

5. Conclusion :
En définitif, ces deux dosages nous ont permis de mettre en évidence la
présence des protéines dans le blanc d’œuf et l’albumine. Dans le dosage
quantitatif (méthode de Biuret) nous avons obtenus de quantité croissante des
protéines en fonction de la concentration en milieu alcalin. Nous pouvant ainsi dire qu’il
ya présence des protéines dans le blanc d’œuf, puis le second dosage (Dosage qualitatif)
nous avons mis en évidence la présence des protéines par l’apparition de la coloration
rouge violacée dans le tube contenant l’albumine et le blanc d’œuf. Cependant l’étude
contenant l’amidon ne présente aucune coloration car celle-ci ne contient pas des
protéines.

11