Bio224 TD

UNIVERSITE DE DOUALA DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE FACULTE DES SCIENCES
TRAVAUX DIRIGES DE BIO224

(Biochimie Analytique)
BC, BOA et BOV Niveau II
I- LES SOLUTIONS AQUEUSES ET LES SOLUTIONS TAMPONS
A- LES SOLUTION AQUEUSES
Exercice 1 Soit 1 l de solution contenant 12 g d’urée (NH2)2CO.
a- Quelle est la concentration molaire ?
b- Si la concentration pondérale d’une solution d’urée est de 24g/l ? Quelle est la
concentration molaire
Exercice 2 On mélange 500 cm3 d’une solution de glucose à 7 g/l à 2l d’eau. Quelle est la
concentration pondérale de la nouvelle solution ? Déterminer la concentration molaire
Exercice 3 Partant d’une solution mère 6 M de glucose, on se propose de préparer 2 litres
d’une solution 0,18 M par dilution. Combien doit-on prélever la solution ? Décrire la
préparation
Exercice 4 On dissout 10 g d’iodure de potassium KI (166g/mol) dans un litre d’eau (M =
18g/mol) ; calculer successivement : La molarité, le titre de la solution exprimée en %, la
molalité en mol/Kg, la fraction molaire de KI exprimée de KI exprimée en %
Exercice 5 Chez un adulte de 80 Kg, on injecte par voie intraveineuse à raison de 2,5 mg par
Kg de poids, une substance qui diffuse dans l’organisme entier (antipyrine).
Déterminer le volume injecté sachant qu’il s’agit d’une solution aqueuse à 5 % en masse
Exercice 6 Dans les réserves des produits d’un laboratoire, on retrouve une boite d’acide
chlorhydrique concentrée portant les indications suivantes : d = 1,18 ; 96% ; MM = 36,5.
1- Que signifie chaque indication ? Déterminer sa concentration en mol/l/
2- Décrire la préparation de 1000ml de HCl 2M à partir de cette solution stock
B- LES SOLUTIONS TAMPONS

Exercice 1 Décrire la préparation de 500 ml d’in tampon Tris-HCl 200 mM, pH 8,6
contenant du NaCl 2M et du CaCl2 2%. PM Tris = 121,1 PM(NaCl) = 58,5
Exercice 2 Décrire la préparation de 1000 ml d’une solution tampon phosphate 250 mM
pH7,2 à partir du NaH2PO4 et du K2H2PO4 PKa1 = 2,8 ; PKa2 = 6,8 Pka3 = 12,1
a- Par la méthode de calcul
b- Par la méthode de titration
LES METHODES EN BIOCHIMIE ANALYTIQUE
I- 1-Donner le principe et les applications des techniques suivantes : filtration, dialyse,
décantation
2- Schéma annoté de chaque technique
3- Enoncer la loi de l’osmose et la loi de diffusion
II- On se propose d’extraire et doser les protéines solubles contenues dans les graines fraîches
de haricot. Pour cela, les graines sont récoltées puis lavées à l’eau de robinet 3 fois puis à
l’eau distillée. Ces graines sont par la suite broyées à l’aide d’un mortier, d’une pincée du
sable de Fontainebleau et de 10ml de tampon acétate-NaOH 200 mM pH5. Le broyat obtenu
est centrifugé à 3500tr/min pendant 15 min à 30°C. Le surnageant a été utilisé pour le dosage
de protéines solubles. Le dosage des protéines s’est fait par spectrophotométrie après
coloration avec le réactif de Bradford par comparaison avec une courbe d’étalonnage, utilisant
l’albumine du sérum bovin (BSA) comme protéine standard. Les résultats suivants ont été
obtenus :
BSA (mg/ml) 0 2 4 6 8 1
DO 595nm 0 0,25 0,60 0,80 0,90 1,2
Après avoir dilué 10 fois le surnageant, on a obtenu une DO = 0,75
Questions
1- Citer les différentes méthodes utilisées et donner leur principe
2- Schématiser le protocole de cette manipulation
3- Citer 2 autres méthodes de dosage des protéines et le réactif utilisé
4- Décrire la préparation de 250 ml de la solution tampon utilisée
5- Donner la différence entre l’eau de robinet et l’eau distillée
6- Quelle précaution doit-on prendre avant toute centrifugation ? Que signifie
3500tr/min ? déterminer le nombre de tours réalisé par la centrifugeuse au bout de
15min.
7- Quelle loi a-t-on utilisée pour le dosage spectrophotométrie ? Enoncer la
8- Tracer la courbe DO en fonction de la concentration en BSA puis en déduire la
concentration des protéines (mg/ml) contenue dans le surnageant.

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