Universidad de Chile Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacuticas Departamento de Ciencia y Tecnologa Farmacutica Laboratorios Bayer S.A.

CALIFICACIN DE EQUIPOS HPLC Y VALIDACIN DE METODOLOGAS ANALTICAS Validacin de metodologa Analtica de Aspirina 500mg

Unidad de Prctica Prolongada para optar al ttulo de Qumico-Farmacutico LVARO ANDR VSQUEZ ORTZ

Mara Teresa Andonaegui A Qumico Farmacutico Profesor Gua

Gustavo Parra N. Qumico Farmacutico Monitor de Prctica

Santiago Chile 2006

Dedicatoria No existen palabras capaces de retribuir el continuo e infinito amor, apoyo, comprensin y tiempo entregado por mi familia sin la cual, no me hubiese sido posible avanzar en este gran tablero que llamamos vida. Tengo el corazn hinchado de alegra, de dicha y serenidad ya que se que puedo contar incondicionalmente con ellos, es por esto que dedico este trabajo a ellos como una pequea forma de retribuirles. No quisiera dejar de lado a todas esas personas que han marcado con fuego mi alma, entregando su amor, amistad, consejos y buena voluntad.

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Agradecimientos Estoy profundamente agradecido a la profesora Mara Teresa Andonaegui su entrega de conocimientos, preocupacin y oportunidades otorgadas desinteresadamente, adems del tiempo, apoyo y afecto que me entrego cuando ms lo necesit. Agradezco a Laboratorios Bayer S.A. el recibirme y permitir llevar a cabo este trabajo, al Sr. Q.F. Gustavo Parra N. por la ayuda que me presto, sus conocimientos, apoyo y tiempo y al gran equipo que con el trabaja, gente distinta entre si, pero con el comn denominador de ser grandes y hermosas personas.

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Tabla de Contenido Portada Dedicatoria Agradecimientos Tabla de contenido ndice de Ilustraciones ndice de Anexos Resumen Introduccin Resea de la pasanta por Laboratorios Bayer Chile Actividades desarrolladas durante la Prctica Prolongada Objetivos Objetivo general Objetivo especfico para la Calificacin Objetivo especfico para la Validacin Metodologa Materiales y Mtodos para la calificacin Descripcin del rea Requisitos previos para la Calificacin Mtodo utilizado para calificar los equipos HPLC Materiales y Mtodos para la Validacin Requisitos previos para la Validacin Materiales y mtodos utilizados para la Validacin Protocolo para la calificacin de los HPLC Procedimiento para la calificacin de los HPLC Procedimiento de Calificacin de Instalacin Procedimiento de Calificacin Operacional Procedimiento de Calificacin de Funcionamiento Requisitos que deben cumplir los Equipos HPLC Protocolo de Validacin de la Metodologa Analtica Breve descripcin del proceso a validar i ii iii iv vi vii viii 1 7 7 8 8 8 10 11 12 12 12 12 13 13 13 14 16 16 19 22 25 26 26

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Tipo de Validacin Razn de la Validacin Responsables de la Validacin Revisin y aprobacin del Protocolo de Validacin Metodologa Anlisis a realizar Condiciones de anlisis Procedimiento de anlisis Criterios de aceptacin para la Validacin Pruebas de adecuacin visual del sistema Lmite de deteccin Linealidad Precisin Resultados y discusin para la Calificacin Conclusin de la calificacin Resultados y discusin para la Validacin Conclusin de la validacin Conclusiones final Bibliografa

26 26 27 27 28 28 29 29 30 30 30 30 30 31 39 40 47 48 49

ndice de ilustraciones Figura N1 C1 Cromatograma de la primera inyeccin de prueba (HPLC N3) C3 Resultados de la prueba HPLC N3 C4 Cromatograma Blanco (Aspirina) C5 Cromatograma Lmite de cuantificacin (AS) C6 Cromatograma del estndar (AAS) C7 Cromatograma Muestra (Aspirina 500mg) 1 37 38 40 41 42 43

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ndice de Anexos Glosario 50

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Resumen El presente trabajo trata de cmo se realiz la validacin de la metodologa analtica de contenido de dos medicamentos que actualmente se encuentran comercializados en el mercado nacional. Esta metodologa est validada y es utilizada actualmente en otra filial de Bayer S.A. por lo que se hizo necesario validarla con las condiciones de trabajo del Laboratorio de Control de Calidad de Bayer S.A. Chile. Para esto fue necesaria la calificacin de los equipos en que se realiz la validacin de las metodologas. Las calificaciones realizadas fueron: Calificacin de Instalacin (IQ), la Calificacin Operacional (OQ) y de la Calificacin Desempeo (PQ), las que se desarrollaron en los equipos de Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia (HPLC) en los cuales se realiz la validacin de la metodologa analtica. Esta validacin fue necesaria para garantizar que las metodologas de anlisis de los medicamento a validar, son aplicables al Laboratorio de Control de Calidad, adems fue imprescindible aplicar los criterios establecidos por este laboratorio (POSs), para la validacin del mtodo. Antes de dar comienzo a las calificaciones de los equipos, y posterior validacin de las metodologas analticas, se realiz una revisin de la documentacin, tanto de los equipos a calificar como de los materiales e instrumentos que tambin seran utilizados durante la calificacin y validacin, comprobndose que los instrumentos a utilizar se encontrasen calibrados y contasen con sus respectivos certificados y adems se verific que los estndares utilizados posean sus respectivos certificados de anlisis. Para comenzar la calificacin y posterior validacin fue necesario definir los puntos crticos a controlar tanto en los equipos como tambin los puntos crticos de la metodologa analtica, adems de determinar la factibilidad tcnica de los HPLC en su funcionamiento para la realizacin de la validacin. La validacin de la metodologa se acot a las especificaciones de identificacin y cuantificacin del principio activo que compone al medicamento y no al anlisis completo de las especificaciones que ste debe cumplir. Los resultados obtenidos junto con los registros de la calificacin del equipo, permiten aseverar que los equipos HPLC se encuentran calificados para la realizacin, en ellos, de pruebas de las metodologas analticas.

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Con los datos obtenidos al final de las validaciones de las metodologas analticas de los medicamentos que se realizaron, se puede concluir que los mtodos de anlisis de los medicamentos analizados son factibles de realizar en los equipos, y se encuentran validados debido a que cumplen con los criterios de aceptacin establecidos por el Laboratorio de Control de Calidad.

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Introduccin En esta primera dcada del siglo XXI, enormes avances en el bienestar humano coexisten con privaciones extremas. En la salud mundial somos testigos de los beneficios que estn aportando los nuevos medicamentos y tecnologas. La comunidad internacional cuenta con tecnologas y recursos econmicos suficientes para hacer frente a la mayora de los desafos sanitarios, pero hoy da muchos sistemas de salud nacionales son endebles, indiferentes a las necesidades, no equitativos e incluso inseguros. Lo que se necesita ahora es voluntad poltica para poner en marcha planes nacionales, junto con medidas de cooperacin internacional para coordinar recursos, aprovechar los conocimientos y desarrollar sistemas sanitarios robustos que traten y prevengan las enfermedades y promuevan la salud de la poblacin. Para superar los escollos que obstaculizan el logro de los objetivos nacionales y mundiales en materia de salud es fundamental formar trabajadores sanitarios competentes, motivados y bien respaldados. (1)

Como es posible de apreciar en la Figura 1, un aumento de trabajadores de la salud est estrechamente relacionado con la sobrevida de la poblacin y si estos trabajadores se encuentran bien capacitados la pendiente es an mayor. La supervivencia de la poblacin en general sigue esta tendencia, si cuenta con una

poltica gubernamental, una autoridad sanitaria idnea, recursos y con profesionales sanitarios capaces de velar por la salud de la poblacin. En este contexto el profesional Qumico Farmacutico se encuentra suficientemente capacitado para atender y responder a las necesidades de la poblacin, la que cada da se encuentra ms vida de informacin y preocupada por la calidad de los medicamentos que consume. Una pregunta que parece lgica plantear respecto a la morbilidad, mortalidad y uso en general de los medicamentos es la siguiente: quin es el responsable del uso adecuado de los medicamentos? Tradicionalmente el mdico ha asumido la responsabilidad del tratamiento farmacolgico sus pacientes. Sin embargo, la evolucin de los sistemas sanitarios en todo el mundo y los diversos estilos de vida de los consumidores hacen que sea extremadamente difcil, si no imposible, que un mdico asuma por s solo esta tarea cada vez ms compleja. Evidentemente, los mdicos disponen cada vez de menos tiempo para dedicarlo a los pacientes, por lo que el tiempo necesario para afrontar los problemas de los medicamentos, reales o potenciales, se est reduciendo tambin (2). Es rol fundamental del Profesional Qumico Farmacutico el asumir la responsabilidad de todos los eventos relacionados con los medicamentos, desde su gnesis hasta que es administrado al paciente (y si no es as, hasta su destruccin) pasando por la produccin, almacenaje, distribucin, traslado y posterior venta del medicamento. Adems de la obligacin y del deber que tiene, que es el de complementar al mdico y ayudar en la orientacin a los pacientes, acerca del uso y/o consumo y cuidados que siempre deben tener los medicamentos. Segn donde se encuentre ejerciendo el Qumico Farmacutico con respecto a la produccin o elaboracin de un medicamento, se puede sealar como una de las diferencias ms notables en la preparacin de un medicamento en una farmacia y a nivel industrial, es que en la primera, todas las operaciones son llevadas a cabo o a lo menos controladas por un Qumico Farmacutico, mientras que a nivel industrial las operaciones son en su mayora llevadas a cabo por operarios bajo la supervisin de un profesional (3). Es por esto, que los Qumicos Farmacuticos tienen una gran responsabilidad frente a las Autoridades Sanitarias locales, pero ms importante que ello es la responsabilidad de velar por la buena calidad de los medicamentos.

El Qumico Farmacutico que ejerce en la industria farmacutica se ha mantenido y se mantiene en una posicin privilegiada, debido posiblemente al medio en que se desempea. Sus funciones se mantienen y experimentan pocos cambios con el tiempo, a pesar que en los ltimos aos la mayora de las grandes compaas farmacuticas transnacionales han cerrado sus plantas de produccin, dejando ms reducido el campo para el Qumico Farmacutico (4). A pesar de esto, la importancia y el valor del Qumico Farmacutico en los Laboratorios Farmacuticos internacionales, no podr ser sustituido ya que contina cumpliendo y ejerciendo labores de gran importancia en todos los aspectos que tienen relacin con la calidad de los medicamentos. Una pregunta muy importante que surge es: Quin asegura y como se asegura la calidad de los medicamentos? Aparentemente puede verse muy simple, pero en realidad presenta una complejidad tremenda responder el como a cabalidad, debido al gran nmero de aristas que tiene ligada intrnsecamente esta pregunta. Para responder l quien, debemos pensar en un profesional que tenga slidos conocimientos en medicamentos, y quien ms apto que el Qumico Farmacutico, por lo tanto es el, quien debe asegurar la calidad del medicamento, y no tan solo en una ocasin sino que en diferentes instancias y cada una independientes entre si, ya sea en el desarrollo de la formulacin, la produccin del medicamento, el Control de Calidad del medicamento, etc. Ahora, para responder el cmo se asegura la buena calidad de los medicamentos se debe conocer las Buenas Practicas de Manufactura (GMP siglas del ingles). Estas tienen sus orgenes en Estados Unidos (1962) con la finalidad de crear una ley de proteccin al consumidor, con esta nueva reforma todos los establecimientos farmacuticos deban registrarse ante la Food and Drug Administration (FDA), lo que permiti a esta agencia actualizar el registro de los fabricantes de medicamentos e inspeccionarlos cada dos aos. En 1963, la FDA public una reglamentacin que estableca requerimientos especficos para la elaboracin de medicamentos, primeras GMP, las que se divulgaron por todo el mundo, en un comienzo se tomaron como una recomendacin til de carcter prctico, sin fuerza ni efecto legal, slo interpretaba la responsabilidad del Qumico Farmacutico frente al medicamento (Cdigo de tica profesional). En el ao 1973 y

debido a demandas presentados por la FDA ante las cortes, a algunas farmacuticas, la Corte Suprema de Justicia de los Estados Unidos, fall a favor de la FDA. A partir de este fallo toda normativa adoptada por la FDA debera ser considerada con carcter y fuerza legal, por lo que todo medicamento que se fabricase fuera de estas normas sera considerado como un medicamento adulterado. Por lo tanto la FDA responsabiliz a los fabricantes de la calidad de sus productos y les exigi desarrollar procedimientos de manufactura y aseguramiento de la calidad para cada uno de ellos (3). Entonces, las Buenas Prcticas de Manufactura (GMP) son un amplio rango de conceptos de Aseguramiento de Calidad que cubren todos los temas que individual o colectivamente tienen influencia en la calidad de un producto. Es la suma de las actividades llevadas a cabo para asegurar que los productos medicinales y los dispositivos mdicos para uso humano y animal son de la calidad requerida para su uso propuesto. Dentro de las GMP se encuentra contemplado un captulo o elemento de calidad de calificacin y validacin. Este elemento de Calidad trata de los requerimientos GMP relativos a la calificacin de los equipos para la manufactura y control y utilitarios, as como de la validacin de mtodos analticos, procesos de manufactura, procesos de limpieza y sistemas computarizados (5). Con respecto a la calificacin se puede decir que se trata del establecimiento de evidencia documentada de las instalaciones, los sistemas utilitarios y otros equipamientos tcnicos incluidos los sistemas computarizados han sido correctamente encargados y que funcionan en forma confiable, dentro del rango especificado de operacin. La calificacin de los equipos da los elementos para la validacin de procesos. La calificacin consta de 4 procedimientos bsicos: Calificacin de Diseo (DQ) Se realiza slo a equipos nuevos Calificacin de Instalacin (IQ). Debe establecer por medio de evidencia objetiva, que todos los aspectos claves del equipo y los necesarios para la instalacin, se encuentran conformes con la especificacin aprobada y las recomendaciones dadas por el fabricante.

Calificacin de la Operacin (OQ). Debe demostrar que el equipo o la maquinaria involucrada en el proceso en el estudio, opera como se defini en el diseo y determinar los valores ptimos de operacin para cada una de sus variables de control.

Calificacin del Funcionamiento (PQ). Corresponde al desafo al sistema en condiciones operacionales y en la situacin ms desfavorable para demostrar su funcionamiento correcto y constante, con la aplicacin de las herramientas del diseo estadstico de experimentos y del control estadstico de procesos para la determinacin del ajuste ptimo de las variables de control. En otras palabras podemos decir que la calificacin de funcionamiento corresponde a la validacin del proceso realizado por el equipo (6).

Acabamos de de ver a grandes rasgos lo que es la calificacin y en que consta, ahora veremos aspectos generales de la validacin. La validacin es la accin documentada que demuestra que cualquier procedimiento, proceso o actividad conducir consistentemente a los resultados esperados. Esto incluye la calificacin de sistemas y equipamiento. Como parte de los programas de calidad o del plan de calidad o de la poltica de las empresas, se estn desarrollando o implementando nuevas metodologas y/o procesos enmarcado en las mejoras continuas, y para cumplir este fin es que todo nuevo mtodo debe validarse, para demostrar documentadamente su idoneidad. Si el mtodo no es nuevo y se utiliza rutinariamente, entonces no es necesario el iniciar una validacin desde cero, por lo que para estos casos se puede definir una validacin retrospectiva basada en datos acumulados de produccin, pruebas y de control, donde se pueden combinar nuevos criterios de validacin con la experiencia adquirida, o se puede desarrollar anlisis estadsticos de los registros arrojados por el mtodo durante el tiempo en que se ha utilizado. En contraposicin a este tipo de validacin se encuentra la validacin prospectiva que se desarrolla con un producto nuevo o producto hecho bajo un proceso de fabricacin revisado, donde las revisiones pueden afectar las caractersticas del producto. Por ltimo, se puede realizar la validacin concurrente que es utilizada cuando no hay datos disponibles del proceso y se lleva a cabo durante el proceso (7). 5

En muchos casos un mtodo analtico es desarrollado y validado por un grupo de trabajo, tpicamente el Laboratorio de Desarrollo analtico y aplicado a otro grupo, como por ejemplo el Laboratorio de Control de Calidad. Para asegurar que el laboratorio de aplicacin sea capaz de entregar resultados confiables, es conveniente realizar una transferencia de validacin. En el caso de mtodos cromatogrficos, la transferencia de validacin consiste en la comparacin de resultados de las pruebas de adecuacin y de anlisis en paralelo de, a lo menos, dos muestras homogneas de concentraciones conocidas, dentro de un rango de aceptacin del producto o dentro del rango de aplicacin de la metodologa. Por otra parte, una revalidacin se hace necesaria con mtodos validados previamente, pero que deben volver a evaluarse por modificaciones, instrumentales, de la matriz que contiene la muestra o de la proporcin relativa del analito. Una vez que es desarrollado un mtodo de anlisis por HPLC, al igual que toda tcnica analtica, deber validarse, es decir, se debe documentar que cualquier procedimiento, proceso o actividad conducir consistentemente a los resultados esperados. En lo referente a los productos farmacuticos codificados en la USP, se consideran validados y el nico requerimiento es el cumplimiento del test de adecuacin indicado en cada monografa: en general se inyecta una sustancia definida y se verifica que la resolucin entre el pico del analito y dicha sustancia sea superior a cierto valor indicado; adems se mide y controla la precisin, asimetra del pico y eficiencia y se permite ajustar la fuerza de la fase mvil para cumplir con los requerimientos mnimos. Es importante destacar que la validez de estos mtodos es ampliamente discutible. Diferencia entre distintas formas farmacuticas, tipos y calidad de las materias primas empleadas por cada fabricante, hacen necesario validar la metodologa para cada producto en particular, elaborado o semielaborado. (6) Se debe tener bien en claro que tanto o ms importante que las normas en s, son los principios y valores ticos y morales de cada profesional como tambin de cada persona que est relacionada directa o indirectamente con los medicamentos para solo as, garantizar y asegurar la buena calidad de stos.

Resea de la pasanta por Laboratorios Bayer Chile Bayer Chile S.A. se encuentra constituido por diferentes divisiones, la divisin en la cual me desempe fue BayService, la cual se encuentra subdividida en: Laboratorio de Control de Calidad; Garanta de Calidad, Bodega BayService y Seccin Empaque. La gerente de esta divisin, junto con el Jefe de Control de Calidad y la Responsable de la Garanta de Calidad son los profesionales Qumicos Farmacuticos que laboran en esta divisin. El Laboratorio se encuentra inserto en una poltica de mejora continua, por lo que trabaja y cumple con polticas GMP. Estas polticas son dictadas por la casa matriz de Bayer en Alemania (Bayer AG). Durante el periodo de prctica prolongada realizado en el Laboratorio de Control de Calidad desarrolle las siguientes actividades: Descripcin de los 4 equipos HPLC con que cuenta el Laboratorio de Control de Calidad: esta actividad fue con el objeto de comprensin de los equipos tanto en sus caractersticas como en el funcionamiento de sus distintos mdulos, con la informacin recavada se actualizaron los datos que se mantenan, de los equipos. Autocapacitacin en los POS (Procedimientos Operativos Estndar) que se manejan en el Laboratorio (medidas de seguridad, y manejo de materiales y equipos): Manejo de los instrumentos y materiales utilizados en el Laboratorio. Manejo de los distintos equipos utilizados en el Laboratorio de Control de Calidad (Balanzas, Durmetro, Equipo Carl Fisher, Desintegrador, Equipo de Disolucin, Espectrofotmetro, HPLC de diferentes configuraciones). Aplicacin de Protocolos de anlisis de medicamentos: para el anlisis de los distintos medicamentos se debieron seguir los protocolos de anlisis de cada medicamento analizado respectivamente. Calificacin de dos equipos HPLC (N 2 y N3) Validacin de dos metodologas de anlisis de contenido (Aspirina y Avelox)

Es bueno mencionar la ayuda y apoyo que recib por parte del Jefe del Laboratorio de Control de Calidad y de las personas que con el trabajan que me permitieron insertarme dentro de este gran equipo de trabajo en el Laboratorio de Control de Calidad, facilitndome el aprendizaje del manejo de los equipos e instrumentos que son empleados, tambin me permitieron conocer los procedimientos y normas que rigen dentro de las instalaciones. Pero lo ms importante es que pude sentir la confianza entregada por todas estas personas para desempear las diferentes actividades desarrolladas durante el periodo de mi prctica.

Objetivos Objetivo General Cumplir con el objetivo de mejora continua y con los estndares tanto nacionales como internacionales en la aplicacin de normas GMP adems de proceder con el Plan de Calidad de Laboratorios Bayer S.A. lo que nos conduce a validar la metodologa analtica de identificacin y cuantificacin de Aspirina comprimido y Avelox comprimido, lo que permitir la utilizacin de estas metodologas en el Laboratorio de Control de Calidad de Bayer S.A.

Objetivos especficos para la calificacin Recopilar la documentacin pertinente a los Equipo HPLC Shimadzu Establecer un Protocolo de Calificacin de los equipos HPLC Shimadzu (HPLC N 2 y 3), que se encuentran actualmente emplazados y son utilizados por el Laboratorio de Control de Calidad. Verificar que los materiales e instrumentos a utilizar durante la calificacin sean adecuados para este efecto. Instrumentos calibrados y los estndares certificados. Realizar la calificacin operacional a los equipos HPLC. Realizar la calificacin funcional de los equipos HPLC. Obtener resultados que permitan la calificacin de los equipos HPLC N 2 y 3

Objetivos especficos para la validacin Contar con la documentacin pertinente a los Mtodos de Anlisis a validar, tanto de Aspirina 500mg comprimido y Avelox 400mg comprimido. Establecer un Protocolo de Validacin de las Metodologas Analticas a validar (Aspirina 500mg comprimido y Avelox 400mg comprimido), por el Laboratorio de Control de Calidad. Verificar que los materiales a utilizar durante la validacin sean adecuados para este efecto. Instrumentos se deben encontrar calibrados y los estndares a utilizar para la validacin deben contar con sus respectivos certificados de anlisis. Realizar la validacin de las dos Metodologas Analticas (Aspirina comprimido y Avelox comprimido). Obtener resultados adecuados que permitan la validacin de las Metodologas Analticas de Aspirina comprimido y Avelox comprimido.

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Metodologa: Antes de realizar cualquier actividad referente a la validacin del mtodo de anlisis se acordaron los puntos crticos a considerar (tanto como para la calificacin como para la validacin) con el Jefe de Control de Calidad, y en base a las normativas del Laboratorio como tambin a los POS existentes. Para poder realizar la validacin del Mtodo de Anlisis de Aspirina comprimido y Avelox comprimido, y teniendo en consideracin de que se realiza por HPLC fue necesario, calificar previamente el equipo HPLC en donde se llevaron a cabo estas validaciones, es as como tambin se realiz la calificacin de instalacin (IQ), la calificacin operacional (OQ) y la calificacin de funcionamiento (PQ) de los equipos HPLC que se emplearon para las validaciones. Es por este motivo que se expondrn los dos temas en este trabajo, el de calificacin de los equipos HPLC y seguido el de validacin del mtodo de anlisis. El tipo de Calificacin fue una calificacin de equipo en uso, debido a que se calificaron HPLC en funcionamiento. Por otra parte, el tipo de validacin que se realiz fue Concurrente, es decir se realiz durante el anlisis de rutina de uno o varios lotes de Aspirina 500mg comprimido o Avelox 400mg comprimido.

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Materiales y mtodos para la Calificacin Descripcin del rea El rea en donde se encuentran los equipos HPLC es la Sala de Instrumental, que se encuentra dentro del Laboratorio de Control de Calidad. El Laboratorio cuenta con acceso restringido y con temperatura controlada. Adems esta sala cuenta con aire acondicionado independiente. La temperatura y la humedad del Laboratorio son monitoreadas y registradas peridicamente. Requisitos previos a la Calificacin Contar con los manuales de la Operacin de los Equipos HPLC. Utilizacin de Instrumentos con certificados vigentes. Estndares con certificados de anlisis vigentes. Utilizacin de reactivos apropiados (calidad HPLC).

Mtodo utilizado para calificar los equipos HPLC Para la calificacin del los Equipo HPLC N 2 y 3 se utiliz el anexo N1 (Protocolo de Calificacin HPLC). Este protocolo fue elaborado durante el periodo de prctica y describe el procedimiento a seguir para realizar la Calificacin de los equipos HPLC Shimadzu con que cuenta el Laboratorio, esto, como parte de la validacin y con el fin de verificar el funcionamiento del equipo HPLC. En el Protocolo de Calificacin, se describe el equipo, el tipo de calificacin, el motivo de la calificacin entre otros datos, y se encuentra aprobado por el Q.F. Jefe de Control de Calidad y por el Q.F. Responsable de Aseguramiento de Calidad del Laboratorio. Tambin se especifica en el Protocolo de Calificacin los procedimientos para realizar la calificacin de: Instalacin, Operacin y Funcionamiento del sistema HPLC. Adems se encuentra el registro de los datos obtenidos. Estos registros fueron ingresados por escrito al Plan de Calificacin y otros debieron ser recolectados de la informacin que entrega el equipo o los instrumentos utilizados.

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Materiales y mtodos para la Validacin: Requisitos previos a la Validacin Contar con los protocolos de anlisis de Aspirina 500mg comprimido y de Avelox comprimido. El equipo en donde se desarrollar la validacin debe estar previamente calificado. Los Instrumentos deben contar con certificados vigentes. Estndares con certificados de anlisis vigentes. Utilizacin de reactivos apropiados (calidad HPLC)

Mtodos utilizados para la validacin Para dar inicio a la validacin de las metodologas analticas se establecieron los procedimientos a seguir durante la validacin y se dispusieron las secuencias de inyecciones a realizar en el equipo. Para la validacin de la metodologa analtica de Aspirina 500mg comprimidos y de Avelox comprimido, se aplic la informacin entregada por la filial de Laboratorios Bayer S.A. (procedimiento 2.02.09 y 02.02-2 respectivamente, que se encuentran disponibles en el Laboratorio de Control a Calidad) y se tomaron en consideracin como puntos crticos de las metodologas de anlisis la cuantificacin e identificacin de los principios activos de los medicamentos a validar.

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Protocolo para la Calificacin de los HPLC Para una mejor comprensin se revisar la calificacin de un solo equipo HPLC debido a que los dos equipos son muy similares tanto en sus componentes como en su funcionamiento. A continuacin se muestra la informacin con que cuenta el Protocolo de Calificacin. Todas las firmas se encuentran en los documentos originales (Protocolo de Calificacin N QCCE001-01 y el Protocolo de Calificacin QCCE002-01). Estos documentos se encuentran en el Laboratorio de Control de Calidad). I.- Alcance Equipo / Modelo: Shimadzu / L10 N de Serie: Varios mdulos

Sector / Ubicacin: Laboratorio de Control de Calidad / Sala de Instrumental Tipo de Calificacin:

Calificacin Equipo Calificacin Ambiente

Motivo de la Calificacin:

Calificacin Programada Recalificacin

Observaciones: Se realizar la calificacin del Equipo HPLC N 2 en uso, con el objetivo de verificar que el equipo cumple con las especificaciones del fabricante por lo que es adecuado su uso para realizar anlisis de metodologas en el laboratorio de Control de Calidad. Plazo Previsto: 13 / 12 / 2005 16 / 12 / 2005

Fecha de Comienzo Programada: Fecha de Finalizacin Programada:

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II.- Plan de Accin: a) Personal Involucrado: Redaccin del Protocolo (Nombre y Cargo): lvaro Vsquez O. Alumno Q.F. en Prctica Ejecucin del Protocolo (Nombre y Cargo): lvaro Vsquez O. Alumno Q.F. en Prctica

Revisin y Aprobacin del Protocolo:

______________________________ Responsable Garanta de Calidad

_______________________________ Jefe Control de Calidad

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PROCEDIMIENTO PARA LA CALIFICACIN DE LOS HPLC

PROCEDIMIENTO DE CALIFICACIN DE INSTALACIN 1 Ubicacin del sistema 1.1 Objetivo Registrar en la planilla los datos del lugar donde se instal el sistema. 1.2 Procedimiento Registrar los siguientes datos en la planilla: a b c d e Nombre de la empresa Filial rea Jefe de rea Responsable de equipo : : : : :

Control ambiental del lugar de instalacin 2.1 Objetivo

Evaluar si el lugar donde se encuentra instalado el equipo cumple con los requerimientos medioambientales e infraestructura indicados por el fabricante, lo que evala si el equipo funciona segn las especificaciones descritas. 2.2 a b c d e f g Procedimiento Lugar de instalacin adecuado (libre de polvo, gases corrosivos y grandes campos magnticos) Mesn adecuado (dimensiones y estabilidad) T adecuada ( entre 5 y 35C) Humedad ambiente adecuada (entre 45 y 87%) Puesta a tierra adecuada Alimentacin elctrica adecuada (220V +-10%, 50 Hz) Lnea de tierra adecuada

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Descripcin del sistema 3.1 3.2 a b c Objetivo Procedimiento Registrar el modo de operacin y de mezclado del sistema HPLC Identificar el sistema computacional, registrando las caractersticas de ste. Identificar el software registrando nombre y versin. Describir las caractersticas del sistema HPLC

Identificacin de los mdulos del sistema 4.1 4.2 a Objetivo Procedimiento Identificar cada mdulo componente, registrando modelo y nmero de serie. Identificar los mdulos del sistema

Registro de documentacin 5.1 5.2 a Objetivo Procedimiento Registrar la documentacin existente tal como manuales de operacin y certificados de cumplimiento, as como el idioma y la ubicacin de la misma. Describir y registrar la documentacin recibida

Entrenamiento de los usuarios 6.1 Objetivo Evaluar si los usuarios del HPLC tienen los conocimientos bsicos de la operatoria del equipo 6.2 a b c d Procedimiento Registrar si los usuarios conocen: Rutina de encendido Operacin bsica de mdulos Operacin del sistema Mantenimiento bsico

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Calificacin de la instalacin 7.1 7.2 a b Objetivo Procedimiento Inspeccionar la apariencia externa del sistema y verificar que no presente signos de golpes, contaminacin y otras anormalidades. Encender el sistema y verificar que no se presentan problemas de comunicacin entre mdulos, ni aparecen mensajes de error. Verificar que el sistema se ha instalado de manera adecuada

Control de cambios y mantenimiento del sistema 8.1 8.2 Objetivo Procedimiento Registrar cambios de modulo o de software del sistema. Mantener un registro de los cambios realizados al sistema

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PROCEDIMIENTO CALIFICACIN OPERACIONAL 1 1.1 Condiciones generales Material requerido a b c d 1.2 Columna (ODS (C18) de 4.6mm DI y 25cm de largo u otra apropiada Fase Mvil: ACN/agua 70:30 grado HPLC Termmetro con indicacin de mxima y mnima (con sensor remoto) Cronmetro certificado Se recomienda que para realizar los ensayos la temperatura ambiente se encuentre entre 15 y 30C y que la fluctuacin de esta sea menor a 2C/hora. 1.3 Preparacin a b 2 2.1 2.2 Colocar agua como fase mvil en la bomba Purgar el sistema

Temperatura ambiente.

Configuracin del sistema Objetivo Identificar los mdulos del sistema HPLC Procedimiento Identificar cada mdulo, registrando en la planilla el modelo y el nmero de serie correspondiente.

3 3.1 3.2 A

Calificacin de Operacin Objetivo Comprobar que el sistema opera normalmente Procedimiento Funcionamiento de los indicadores luminosos a Encender los mdulos y verificar si durante el autodiagnstico encienden todos los indicadores luminosos de los mismos.

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Funcionamiento del controlador del sistema a Observar si durante el autodiagnstico realizado anteriormente (punto A), el controlador del sistema arroja algn mensaje de falla en la memoria: [ROM Failure], [RAM Failure]. Ingresar mediante el teclado del controlador los siguientes valores para cada modulo del sistema: c d Flow Wave Oven T = 1.0 mL/min = 237 nm = 40C

Activar el sistema y observar que los valores ingresados hayan sido transmitidos a los correspondientes mdulos. No deben aparecer mensajes de falla en la pantalla del controlador y los valores de los parmetros deben ser transmitidos satisfactoriamente a los correspondientes mdulos.

Exactitud del caudal a b c d Fijar el caudal de la bomba A en 1,0 mL/min. Pesar un matraz aforado vaco con tapa, en la balanza analtica calibrada. Recoger en el matraz el volumen dispensado por la bomba en 3 min, midiendo el lapso de tiempo con un cronmetro certificado. Pesar el matraz aforado. Calcular el caudal bombeado por minuto, dividiendo el peso obtenido por 3 y teniendo en cuenta la densidad del agua a la temperatura de la medicin. (Ver tabla 1). La diferencia entre el caudal obtenido y el fijado debe ser menor o igual que +-0,030 mL/min. (+-3,0%).

Exactitud y estabilidad de la temperatura del horno de columnas a b c d e f Colocar el sensor del termmetro dentro del horno en la proximidad del sensor de temperatura del mismo. Fijar la temperatura del horno a 50C y activarlo. Permitir que alcance la condicin "Ready" Presionar la tecla [VP] hasta visualizar [Validation] y luego la tecla [Func] hasta encontrar la funcin [Temperature Test]. Presionar la tecla [Enter] y permitir que se ejecute el programa. Registrar el mensaje indicado por el instrumento.

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g h

Presionar la tecla [Enter], ingresar el valor de la temperatura indicada por el termmetro y presionar la tecla [Enter]. Los mensajes indicados por el instrumento deben ser : "Stability Good" y "Accuracy Good".

Control de la longitud de onda y de la intensidad de la lmpara. Detector UVVisible de longitud de onda variable. a b c d e f Fijar la longitud de onda en 237 nm Fijar el valor 1 para la funcin [Lamp]. Visualizar la funcin [REFEN] y registrar en la planilla el valor indicado. Visualizar la funcin [WaveCheck] y presionar la tecla [Enter]. Registrar el mensaje entregado por el instrumento. El mensaje debe ser : "Check Good" La intensidad de la lmpara de Deuterio [REFEN] debe ser mayor a 800.

Funcionamiento del inyector. a Para inyector automtico solamente: presionar la tecla [VP] para entrar a las funciones de autocalibracin y seleccionar "Validation". Presionar la tecla [Func] hasta localizar el chequeo de memoria. Ejecutar el chequeo de memoria (ROM y RAM). Ejecutar el chequeo de autodiagnstico para los sensores de posicin. Registrar los mensajes obtenidos Al finalizar el chequeo de autodiagnstico de sensores de posicin, deber observarse el mensaje "CHECK GOOD".

b c d e

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PROCEDIMIENTO DE CALIFICACION DE FUNCIONAMIENTO 1 Condiciones Generales 1.1 Materiales Requeridos a Solucin de calibracin para equipos HPLC: (solucin G) Mezcla de Nitrometano, Antraceno, Pireno y Perileno disueltos en metanol, provista por Bayer Leverkusen (Block D207).

1.2

Condiciones Ambientales Se recomienda que para realizar los ensayos, la temperatura ambiente se encuentre entre 15 y 30C y que la fluctuacin sea menor a 2C/hr

1.3

Configuracin de los equipos HPLC HPLC N 2 Shimadzu / LC10A - 10AVP Modelo LC10 AT VP SPD-10AV VP SCL-10A VP DGU-14A FCV-10AL VP SIL-10AD VP FCV-10AH Nmero de Serie C20973604094 C21003600695 LP C21014216556 LP C20973604094 C21084104147 C21054271145 US C20434101896 C20544001959 CTO-10AS VP C21044264138 SS

Nmero de equipo Marca / Modelo Mdulo Bomba Isocratica Detector Modulo de Control Desgasificador Sistema de Gradiente Cuaternaria Autoinyector Vlvula Conmutadora de Columna Option Box L Horno Para Columna Computador Monitor Impresora Software

Compaq LASERJET 1100 LC SOLUTION Version: 1,11SP1

235CP28KB625 USGB000398 L50574200191

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Nmero de equipo Marca / Modelo Mdulo BOMBA ISOCRATICA A BOMBA ISOCRATICA B DETECTOR MODULO DE CONTROL DESGASIFICADOR AUTOINYECTOR SAMPLER COOLER ELU-SAVE HORNO PARA COLUMNAS COMPUTADOR MONITOR IMPRESORA SOFTWARE 2 2.1 Procedimiento Objetivo

HPLC N 3 Shimadzu / LC10 6A - T VP Modelo LC-10ATVP LC-10AS SPD-10A SCL-10AVP DGU-12A SIL-10A SAMPLE COOLER S Nmero de Serie C20973604109LP C20312901346KG C20332901493 C21014216541LP C20913602874TK C2036367208KG C20472502885 72.28.423 CTO-10AVP HP Compaq DELL N828FI HP LASERJET 1100 LC SOLUTION C21023601899 KL MXJ452053M 22794B190V69 USBB004182 L50574200216

Definir criterios, frecuencia y controles que son necesarios realizar para demostrar el correcto funcionamiento de los equipos HPLC. 2.2 Frecuencia Cada vez que sea necesario evaluar el funcionamiento del equipo. 2.3 Procedimiento 2.3.1 Los controles que se realizaran al equipo HPLC son pre-requisito para los anlisis cuantitativos y cualitativos de rutina. A continuacin se detallan los controles que se realizaran en este procedimiento: 2.3.2 Despus de cada mantencin o trabajo de reparacin de los equipos, proceder a realizar algunas pruebas para evaluar el estado final del equipo, segn se seala a continuacin: 2.3.3 En caso de realizarse otro tipo de reparacin o cambio, consultar al Jefe de Laboratorio para coordinar las medidas a seguir.

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2.3.4 Si alguna de las pruebas antes mencionada no cumple con las especificaciones, el sistema HPLC no debe ser usado para realizar anlisis y se debe informar al Jefe de Laboratorio para tomar las medidas correctivas pertinentes.

2.3.5 Sistema HPLC: Fase Mvil Columna Longitud de onda Temperatura Volumen de inyeccin Solucin de prueba G : metanol HPLC : Lichrospher 100 RP 18, 125 x 4mm, 5m (la columna debe utilizarse solo para este anlisis. : 250nm : 30C : 10L de solucin de prueba G. : Mezcla de Nitrometano, Antraceno, Pireno y Perileno disueltos en metanol.

Las condiciones cromatogrficas pueden modificarse de acuerdo a las posibilidades tcnicas del equipo. Cromatografiar y registrar 10 inyecciones de la misma solucin G. Evaluar los siguientes parmetros: tiempos de retencin, reas de los picos y reas relativas de los picos.

Estos procedimientos de Calificacin fueron los que se utilizaron para los dos HPLC N2 y N3 que fueron calificados.

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Requisitos que deben cumplir los Equipos HPLC: Constancia de flujo a tiempo largo: se determina a travs del clculo del Coeficiente de Variacin (CV) de los tiempos de retencin de los componentes de la mezcla, despus de mltiples inyecciones. Ver frmula en anexo adjunto. Constancia de flujo a tiempo corto: es el CV de las reas de porcentajes de reas estandarizadas con mltiples inyecciones de la mezcla G. Ver frmula en anexo adjunto. Exactitud de flujo: Programar la velocidad del flujo de la bomba a 1.0 mL/min y dejar bombear 10 mL. Recibir en un matraz volumtrico el volumen de fase mvil a la salida del detector y medir con un cronometro el tiempo empleado en llegar a los 10mL. Calcular el % de desviacin empleando la siguiente formula:

Promedio de los 4 valores de CV :<0.5%

Promedio de los 4 valores :< 1.5%

% Desviacin =
Limite: Desviacin <10%

| 600 xseg tiempo( seg ) x100 | 600 xseg

Reproducibilidad del Inyector: La reproducibilidad debe ser calculada estadsticamente a partir de los CV de la reproducibilidad total y de la prueba de consistencia de flujo a tiempo corto. Ver frmula en anexo adjunto. Exactitud de longitud de onda: Comparar la media de los valores de rea estandarizadas de cada componente con la figura para la mezcla G. Calcular a partir de la frmula sealada en el anexo adjunto. Ruido de la seal base: calculada a partir del software Reproducibilidad Total: Las reas de los picos dependen del volumen de inyeccin, longitud de onda e integracin de los parmetros usados para la evaluacin de la reproducibilidad total. Ver formula en anexo adjunto.

Valor medio de 4 valores de CV<1.5%

Valor medio correspondiente a 4 diferencias absolutas < 4%. Mxima diferencia AU: <5x10-4 Volts.

Valor medio de 4 valores CV:<2.0%

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Protocolo para la validacin de las metodologas analticas En esta seccin se describir la validacin de Aspirina solamente, ya que las dos metodologas de anlisis que se validaron, tienen mucho en comn, adems se expondr as con el fin de simplificar la comprensin de la validacin. El Protocolo completo de Validacin de ambas metodologas se encuentra en el Laboratorio de Control de Calidad (Protocolo de validacin N: VCCM001-01 Avelox y Protocolo de validacin N: VCCM002-01 Aspirina). Las firmas se encuentran en los documentos originales. Breve descripcin del proceso a validar: Se validar el mtodo de anlisis de contenido e impurezas de Aspirina 0.5g comprimido, el cual se basa en la cuantificacin de cido Acetilsaliclico (AAS) y de cido Saliclico (AS), segn el mtodo de anlisis 2.02-09. Tipo de Validacin: Alcance: Validacin de Proceso Validacin de Mtodo Analtico Re-Validacin de Proceso Re-Validacin de Mtodo Analtico Tipo: Concurrente Prospectiva Retrospectiva Razn de la Validacin: Se realiza la siguiente validacin con el fin de utilizar el mtodo de anlisis de Aspirina 2.02-09 en el Laboratorio de Control de Calidad, la principal caracterstica de este mtodo es el anlisis de contenido, que se hace de manera anhidra, lo que permite una mayor flexibilidad en el manejo de las muestras.

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Responsable de: Redaccin del Protocolo (Nombre y Cargo): lvaro Vsquez O. Alumno Q.F. en Prctica Ejecucin del Protocolo (Nombre y Cargo): lvaro Vsquez O. Alumno Q.F. en Prctica Revisin y Aprobacin del Protocolo: ______________________________ Q.F. Responsable Garanta de Calidad _______________________________ Q.F. Jefe Control de Calidad

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Metodologa Anlisis a Realizar Metodologa analtica Anlisis de Contenido: Para la identificacin y cuantificacin del AAS la metodologa es la siguiente: Longitud de onda: Reactivos: xxxnm Reactivo 1 Agua Reactivo 2 Reactivo 3 Reactivo 4 Equipos: Cromatgrafo lquido de alta presin con registrador e integrador. Bao de ultrasonido. Columna metlica de acero. Largo xxcm., dimetro interno xxmm. Relleno con LiChrospher 100 RP xx.xum. Solvente: Mezclar xx volmenes de Reactivo 1 con x volumen de Reactivo 4. Solucin de comparacin AAS (St A): Pesar con Exactitud alrededor de xx mg de AAS en un matraz de xx mL. Disolver y llevar a volumen con solvente. Solucin de comparacin Ac. Saliclico (AS): Pesar con exactitud alrededor de xxmg de AS en un matraz de xxmL. Disolver y llevar a Volumen con solucin St A. Diluir xxmL de la solucin anterior a xxmL con solucin St A. Solucin de prueba: Determinacin de AS: Moler xx tabletas. Pesar con exactitud alrededor de xx mg en un matraz de xx mL.

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Adicionar xx mL de solvente. Llevar a volumen con solvente y filtrar por membrana. Determinacin de AAS: Diluir xx mL de la solucin anterior a xx mL con solvente. Alternativamente se pueden elegir otros pesos y diluciones, mientras bajo las condiciones utilizadas en la determinacin HPLC se cumpla con las exigencias del test de aptitud del sistema en todos sus puntos. Condiciones de anlisis: Condiciones HPLC: Las condiciones indicadas son orientativas y pueden ser adecuadas a las posibilidades tcnicas del cromatgrafo y a las caractersticas de la columna para optimizar la separacin. Fase mvil: Flujo: Temperatura del horno: Deteccin: Vol. de inyeccin: Disolver xx g de Reactivo 2 en xx mL de Agua. Adicionar xx mL de Reactivo 1 y ajustar el pH a xx 0.05 xx ml / minuto. xx C. UV xxnm. xx L.

Procedimientos de anlisis: Cromatografiar solucin de prueba y comparacin en las condiciones indicadas. Los cromatogramas de solucin de prueba y comparacin deben coincidir en los tiempos de retencin: Ac. Saliclico Ac. Acetil Saliclico = 8,0 min. = 10,9 min.

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Criterios de Aceptacin para la Validacin Pruebas de Adecuacin visual del sistema: comparar cromatogramas de los estndares con los de las muestras. Criterio de aceptacin: El tiempo de retencin de las muestras debe encontrarse dentro de un 20% en relacin a los tiempos indicados en el mtodo de anlisis. Todos los picos deben estar separados como se indica en el mtodo de anlisis. Lmite de Deteccin: Analizar un mximo de un 50% del lmite de liberacin de los productos de descomposicin, inyectando un blanco previamente para eliminar el carry-over del sistema de inyeccin. Criterio de aceptacin: Los picos deben ser detectables Linealidad: Se deber determinar con la preparacin de soluciones estndar al 50%, 100% y 150% de la concentracin de la sustancia activa, la funcin de calibracin es obtenida por regresin lineal. Criterio de aceptacin: Intercepto al eje no se debe desviar del origen ms de un 3% El coeficiente de correlacin r debe ser al menos de 0,99 Coeficiente de variacin de los factores respuesta (CVf) < 5 % Precisin: se encuentra determinada por 6 inyecciones de un mismo estndar al 100%. El coeficiente de variacin es calculado segn el pico principal. Criterio de aceptacin: Coeficiente de Variacin del estndar 1,5% Coeficiente de Variacin de la muestra 2,0%

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Resultados y Discusin Resultados y Discusin de la Calificacin del HPLC N2

REGISTRO DE CALIFICACION DE INSTALACION 1 Filial rea o Sector Pas / Ciudad Comuna Direccin Jefe de Control de Calidad Usuario del equipo Ubicacin del sistema : : : : : : : : BAYER S.A. Chile Laboratorio Control de Calidad Chile / Santiago San Joaqun Carlos Fernndez 260 Gustavo Parra N. Analistas del laboratorio

Empresa

Control ambiental del lugar de instalacin Criterio de Aceptacin Corresponde No Corresponde No Aplica

Lugar de instalacin adecuado Mesn adecuado Temp. ambiente adecuada Humedad ambiente adecuada Alimentacin elctrica Puesta a tierra adecuada

Libre de polvo y gases corrosivos Dimensiones estabilidad Entre 5 y 35C; con dif. de T<2 C/hr Entre 45 y 87% HR 220V 10%, 50 Hz Tensin entre neutro y tierra < a 5V

X X X X X X

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Descripcin del sistema a Modo de operacin Isocrtico G. Binario G. Ternario G. Cuaternario X

Modo de mezclado Alta Presin Baja Presin X No Aplica

Identificacin de los mdulos del sistema Nmero de equipo Marca / Modelo Mdulo Bomba Isocrtica Detector Modulo de Control Desgasificador Sistema de Gradiente Cuaternaria Autoinyector Vlvula Conmutadora de Columna Option Box L Horno Para Columna Computador Monitor Impresora Software Compaq LASERJET 1100 LC SOLUTION Version: 1,11SP1 235CP28KB625 USGB000398 L50574200191 CTO-10AS VP HPLC N 2 Shimadzu / LC10A 10 ATVP Modelo LC10 AT VP SPD-10AV VP SCL-10A VP DGU-14A FCV-10AL VP SIL-10AD VP FCV-10AH Nmero de Serie C20973604094 C21003600695 LP C21014216556 LP C20973604094 C21084104147 C21054271145 US C20434101896 C20544001959 C21044264138 SS

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Registro de documentacin Documentacin Recibida LC-10ATVP FCV-10 ALVP DGU-14 A CTO-10ASVP SIL-10 A SCL10 AVP SPD 10 AVP/10 AVVP Drain Tube Kit Ingles Ingles Ingles Ingles Ingles Ingles Ingles Ingles Idioma

Entrenamiento de los usuarios Criterio de Aceptacin Rutina de encendido Operacin bsica de los mdulos Operacin del sistema Mantenimiento bsico Recomendaciones de seguridad No Corresponde Corresponde X X Se Debe Conocer X X X No Aplica

Calificacin de instalacin Criterio de Aceptacin Corresponde X No Corresponde No Aplica

Signos de golpes, contaminacin u otras anormalidades Conexin del cromatgrafo al suministro elctrico Instalacin de accesorios Encendido

Inexistentes

Adecuada Adecuada Correcto

X X X

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REGISTRO DE CALIFICACION DE OPERACIN 1 Condiciones Generales 1.1 Fecha de iniciacin Fecha Da 15 1.2 Condiciones ambientales T Ambiente (C) 21 2 Ubicacin del sistema Empresa Sector Responsable del sector Usuarios del equipo 3 Configuracin del sistema Numero de equipo Marca / Modelo Mdulo Bomba Isocrtica Detector Modulo de Control Desgasificador Sistema de Gradiente Cuaternaria Autoinyector Vlvula Conmutadora de Columna HPLC N 2 Shimadzu / LC10A - 10AVP Modelo LC10 AT VP SPD-10AV VP SCL-10A VP DGU-14A FCV-10AL VP SIL-10AD VP FCV-10AH Nmero de Serie C20973604094 C21003600695 LP C21014216556 LP C20973604094 C21084104147 C21054271145 US C20434101896 : Bayer S.A. Chile : Laboratorio Control de Calidad / Sala de Instrumental : Gustavo Parra N. : Analistas del Laboratorios H.R.% 51 Mes 12 Ao 2005

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Continuacin: Mdulo Option Box L Horno Para Columna Computador Monitor Impresora Software 4 Calificacin de operacin A MODULO Bomba A Bomba B Inyector automtico Detector Controlador del sistema Horno X X X X Funcionamiento de los indicadores luminosos Corresponde X X No Corresponde No Aplica Compaq LASERJET 1100 LC SOLUTION Version: 1,11SP1 235CP28KB625 USGB000398 L50574200191 CTO-10AS VP Modelo Nmero de Serie C20544001959 C21044264138 SS

Funcionamiento del controlador del Sistema Corresponde No Corresponde No Aplica

Mensajes de falla (ausencia) Transferencia de parmetros

X X

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Exactitud del caudal Caudal medido: 2,995 mL/min Modelo N de Serie 51045344 16506808 51267748 0,997536 g/mL

Cronmetro certificado utilizado Balanza analtica utilizada Termmetro cerificado utilizado Temperatura del agua y densidad

VWR 62379-460 LA 2305 VWR 23609-206 23 C

Exactitud y estabilidad de la temperatura del horno de columna Criterio de Aceptacin Corresponde X X Modelo: N de Serie: VWR 23609 206 51267748 No Corresponde No Aplica

Estabilidad Exactitud

"Stability Good" "Accuracy Good"

Termmetro certificado utilizado:

E Control de la exactitud de longitud de onda y de la intensidad de la lmpara. Detector UV-Visible de longitud de onda variable. Corresponde Mensaje Intensidad a 237nm [REFEN]: _807__ Check good X X No Corresponde No Aplica

Funcionamiento del inyector Criterio de Aceptacin Corresponde X X No Corresponde No Aplica

Mensaje indicador luminoso

CHECK GOOD Enciende

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REGISTRO DE FUNCIONAMIENTO

Corresponden a los resultados entregados por los equipos Los registros obtenidos de la calificacin de funcionamiento del equipo son los siguientes: C1. Cromatograma de la primera inyeccin de la prueba del HPLC N 3

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C3. Resultados de la prueba del HPLC N 3

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Conclusiones de la calificacin Los resultados obtenidos de la calificacin de instalacin de los equipos cumplen con los parmetros establecidos. Los resultados obtenidos por la calificacin operacional cumplen. Los resultados obtenidos por la calificacin de funcionamiento cumplen. Se tienen registros de todos los pasos realizados durante el proceso de calificacin, y de los certificados de los instrumentos y materiales utilizados. Por lo tanto y en vista de toda la documentacin y registros obtenidos podemos concluir que el equipo se encuentra apto para realizar validaciones y analisis.

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Resultados de la validacin: C4. Cromatograma del Blanco

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C5. Cromatograma Lmite de cuantificacin:

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C6. Cromatograma estndar

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C7. Cromatograma muestra:

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Discusin de la validacin de aspirina Lmite de Deteccin: como se puede apreciar en el cromatograma C4 la cantidad de cido Saliclico es detectada por el sistema. Prueba de adecuacin visual del sistema: al comparar los cromatogramas obtenidos con los presentados en el mtodo de anlisis se puede apreciar su correspondencia. Linealidad: Curva de calibracin para cido acetilsaliclico en Aspirina
% Conc. Std 50 50 50 100 100 100 100 100 100 150 150 150 rea 395396 395632 392979 808743 806288 807244 811475 812737 807244 1177011 1172210 1174468

Variable X 1 Curva de regresin ajustada y = 7949,1x

rea

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Estadsticas de la regresin Coeficiente de 0,999000406 correlacin mltiple Coeficiente de 0,998001811 determinacin R^2 R^2 ajustado 0,997801992 Error tpico 13515,55488 Observaciones 12 ANLISIS DE VARIANZA Grados de libertad Regresin Residuos Total 1 10 11 Suma de Promedio de cuadrados los cuadrados 9,12352E+11 9,12352E+11 1826702237 182670223,7 9,14179E+11 F 4994,53 Valor crtico de F 7,84596E-15

Factor de respuesta:
Concentracin mg/mL Respuesta 395396 395632 392979 808743 806288 807244 811475 812737 807244 1177011 1172210 1174468 promedio desviacin std CV% factor de respuesta Factor de respuesta 1556677,2 1557606,3 1547161,4 1561279,9 1556540,5 1558386,1 1566554,1 1568990,3 1558386,1 1552785,0 1546451,2 1549430,1 1556687,3 7005,6 0,450

0,254 0,254 0,254 0,518 0,518 0,518 0,518 0,518 0,518 0,758 0,758 0,758

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Precisin: Precisin del estndar Muestra 1 2 3 4 5 6 Promedio: C.V.: rea 793272 795384 797403 795704 797334 801623 796787 0,35 Mximo 1,5%

Precisin de la muestra Muestra 1 2 3 4 5 6 Promedio: C.V.: rea 800225 786916 798947 814435 796516 796444 798914 1,12 Mximo 2,0%

Cumple con los criterios de aceptacin de la precisin tanto como para la muestra como para el estndar.

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Conclusiones de la Validacin Tras la realizacin de las calificaciones y una vez habiendo obtenido los resultados se puede concluir que la metodologa analtica empleada por la filial de Laboratorios Bayer S.A. es perfectamente aplicable al Laboratorio de Control de Calidad. Adems esta nueva metodologa (Aspirina 500mg), permitir realizar el anlisis sin el apremio del tiempo por ser anhidra (descomposicin rpida de la muestra en agua) y permite optimizar el tiempo ya que permite una libertad mayor al analista, (agregar un lote al anlisis, reanalizar las muestras, tirar una secuencia completa nuevamente, etc.) Por lo tanto se establece que: Los equipos cumplen con las calificaciones a las que fueron sometidos. El mtodo de anlisis de Aspirina 500mg es factible de aplicar en el Laboratorio de Control de Calidad de BayService. Este mtodo se aplicar en adelante para analizar muestras de AAS 500mg que requieran de identificacin y de cuantificacin.

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Conclusin General Este trabajo permiti la calificacin de equipos HPLC y la posterior Validacin de las metodologas analticas de Aspirina 500mg y Avelox 400mg. Todos los resultados obtenidos en la validacin de los mtodos de anlisis tanto de Aspirina 500mg como de Avelox 400mg permiten asegurar que son confiables, ya que cumplen los criterios de validacin establecidos por Bayer S.A. Adems ambos mtodos pueden ser utilizados en el Laboratorio de Control de la Calidad en sus anlisis de rutina.

Conclusin Personal El mundo cambia constantemente y en muchos aspectos cambia muy rpido por lo que es nuestro deber de profesionales preocupados por la salud de la poblacin como el de personas comunes, el mantenernos constantemente actualizados e interiorizados de las modificaciones que se van suscitando en las reas que nos competen. La vida es una constante capacitacin y debemos estar abiertos a los cambios que puedan venir, tratando de tomarlos eficientemente con el fin de poderlos aplicar en nuestra vida, creando y/o optimizando y/o mejorando continuamente los procesos que realizamos a diario, para poder entregar lo mejor de cada uno por el bienestar general.

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Bibliografa 1. OMS Colaboremos por la salud, informe sobre la salud del mundo, OMS 2006. 2. Robert J. Cipolle, Linda M. Strand, Meter C. Morley El Ejercicio de la Atencin Farmacutica. McGRAW-HILL Interamericana 1 ed 1998. 3. Pharmakon ao 2000 Historia, desarrollo y puesta en marcha de las buenas prcticas de Manufactura QF Edith Ramrez Cox. 4. Gonzles-Martn, G. Fundamentos de Farmacia Clnica y Atencin Farmacutica. Ediciones Universidad Catlica de Chile, 1 ed. 2004. 5. Bayer AG Manual del Sistema de Calidad Seccin: Buenas Prcticas de Manufactura (GMP) Introduccin 1 ed 2005. 6. Oscar Alberto Quattrocchi, Sara Ins Abelaria de Andrizzi, Ral Felipe Laba, Introduccin a la HPLC Aplicacin y Prctica. Artes Grficas y Farro S.A. 1992. 7. Arlene M. Badillo Validacin de Procesos Diplomado de Buenas Practicas de Manufactura 2005. 8. Rosala Alzate de Saldarriaga Protocolo de Validacin Diplomado de Buenas Practicas de Manufactura 2005. 9. Protocolo de Calificacin Q CC E 002-01: Referencia la calificacin del HPLC N2, instrumento que se encuentra calificado para este efecto. 10. OT 34/03 Prueba de adecuacin del sistema en cromatografa liquida de alta resolucin. 11. OT 29/02 Estructura de la secuencia en rutina de anlisis HPLC y medidas a seguir en caso de desviaciones. 12. Serie de Informes Tcnicos de la OMS, Comit de expertos de la OMS en especificaciones para las preparaciones Farmacuticas, Informe 32, 1992. 13. Reglamento del Sistema Nacional de Control de Productos Farmacuticos. Dto. N1876 de 1995. Vnculos de inters: 14. http://pharmacos.eudra.org/ 15. http://www.fda.gov/opacom/laws/fdcact/fdctoc.htm 16. http://www.fda.gov/ 17. http://www.access.gpo.gov/nara/cfr/cfr-table-search.html 49

Anexo 1 Glosario Aseguramiento de Calidad: Es un amplio rango de conceptos que cubren todas las actividades que individual o colectivamente influyen en la calidad de un producto. La suma total de las actividades llevadas a cabo para asegurar que los productos medicinales y dispositivos mdicos de uso humano y animal son de la calidad requerida para lo que fueron destinados. Buenas Prcticas de Manufactura: Estndares mnimos para los mtodos que van a ser usados y las instalaciones o controles que van a ser usados, la manufactura, el proceso, el empaque o el mantenimiento de un producto medicinal para asegurar que dicha droga satisface los requerimientos de la ley en materia de seguridad y tiene la identidad y la concentracin y cumple con su calidad y `pureza propuestas o que referencian poseer. Calibracin: Es el conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones especficas, la relacin entre los valores indicados por el instrumento o sistema de medicin (especialmente de peso), registro y control, o los valores representados por la medida de un material y su valor conocido correspondiente a un estndar de referencia. Los lmites de aceptacin de los resultados de las mediciones deben estar establecidos. Calificacin: Es el proceso de establecimiento de evidencia documentada de la que las instalaciones, los sistemas utilitarios y otros equipamientos tcnicos incluidos los sistemas computarizados han sido correctamente encargados y que funcionan en forma confiable, dentro del rango especificado de operacin. Control de Calidad: Es una parte de las GMP que conciernen al muestreo, especificaciones y anlisis y con la organizacin, documentacin y procedimientos de liberacin que aseguran que los anlisis que se estn llevando a cabo son necesarios y relevantes y que los materiales no son liberados para su uso, tampoco para la venta o suministro antes de que la calidad sea juzgada como satisfactoria. El control de calidad no est confinado a las operaciones de laboratorio, pero debe estar involucrado en todas las decisiones concernientes a la calidad del producto.

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Criterio de Aceptacin: Las especificaciones que son utilizadas para tomar una decisin para aceptar o rechazar un lote o batch de producto o aceptar una pieza de equipamiento que ha sido calificada. Crtico: Un material, etapa de proceso o condicin del proceso, requerimiento para anlisis u otro parmetro relevante se considera crtico cuando no existen no conformidades con un criterio predeterminado que influencie directamente sobre los atributos de calidad de un API o producto con droga de una manera perjudicial. Especificacin: Descripcin detallada de la calidad o de los atributos crticos que debe cumplir un material. Especificidad de un test analtico: Es la habilidad para calcular inequvocamente un analito en presencia de de otros componentes que se espera que est presente. Tpicamente podran incluirse las impurezas, estereoismeros, productos de degradacin, matriz, etc. La escasez de la especificidad de un procedimiento analtico individual puede ser compensada por otros procedimientos analticos que lo soporten. Esta definicin implica lo siguiente: Identificacin: para asegurar la identidad del analito Anlisis de pureza: para asegurar que todos los procedimientos analticos que se llevan a cabo permiten una exacta declaracin del contenido de impureza de un analito, por ej. Anlisis de sustancias relacionadas, metales pesados, contenido de solventes residuales, etc. Valoracin: (contenido o potencia): proveer un resultado exacto que permite una declaracin exacta del contenido o potencia de un analito en la muestra. Exactitud: La exactitud de un procedimiento analtico expresa lo ms cercano a un acuerdo entre el valor que es aceptado no como un valor verdadero convencional o un valor de referencia aceptado y el valor encontrado. Lmite de cuantificacin: Es la cantidad ms pequea de analito en una muestra que puede ser determinado en forma cuantitativa con precisin y exactitud. Este lmite es un parmetro del ensayo cuantitativo para bajos niveles de compuestos en muestras matrices y es usado particularmente para la determinacin de impurezas y/o productos de degradacin.

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Lmite de deteccin: Es La cantidad mnima de de analito en una muestra que puede ser detectado pero no necesariamente cuantificado como un valor exacto. Linealidad: La linealidad de un procedimiento analtico es su capacidad (dentro de un rango dado) para obtener resultados de anlisis que son directamente proporcionales a la concentracin (cantidad) de un analito en la muestra. Procedimiento Operativo Estndar (POS): Procedimiento escrito autorizado que da las instrucciones para llevar a cabo operaciones no necesariamente especificas de un producto dado, material o procedimiento pero de una naturaleza ms bien general. Repetibilidad: Expresa la precisin bajo las mismas condiciones de operacin a travs de un corto intervalo de tiempo. Tambin significa una precisin entre ensayos. Estndar de referencia Primario: Una sustancia que ha sido reconocida por un conjunto extensivos de anlisis, para ser un autentico material de alta pureza. Este estndar puede ser obtenido a travs de una fuente reconocida o preparado por medio de una sntesis independiente o por una purificacin sucesiva de un material existente de produccin. Estndar de referencia Secundario: Sustancia de pureza y calidad establecida que ha sido comparada con un estndar de referencia primario, es utilizada como estndar de referencia para anlisis de rutina en el laboratorio. Validacin: Accin documentada que demuestra que cualquier procedimiento, proceso o actividad conducir consistentemente a los resultados esperados. Esto incluye la calificacin de sistemas y equipamiento.

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