TW202043471A - ＳＥＲＰＩＮＣ１ ｉＲＮＡ組成物及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本發明係有關一種包含iRNA劑(例如：雙股核糖核酸(dsRNA)劑)之醫藥組成物，及使用此等組成物為患有血友病(例如：帶有或沒有抑制抗體)之個體治療出血事件之方法。

Description

SERPINC1 iRNA組成物及其使用方法 相關申請案

本申請案主張2019年1月16日申請之美國臨時申請案案號：62/793,020之優先權，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。

本申請案係有關國際申請案案號PCT/US2018/041400，申請日為2018年7月10日；美國臨時專利申請案案號：62/530,518，申請日為2017年7月10日；美國臨時專利申請案案號：62/599,223，申請日為2017年12月15日；美國臨時專利申請案案號：62/614,111，申請日為2018年1月5日；及美國臨時專利申請案案號：62/673,424，申請日為2018年5月18日，上述各專利申請案之完整揭示內容係以引用之方式併入本文中。

本申請案亦有關美國專利申請案案號：15/371,300，申請日為2016年12月7日；國際申請案案號PCT/US2016/065245，申請日為2016年12月7日；美國臨時專利申請案案號：62/264,013，申請日為2015年12月7日；美國臨時專利申請案案號：62/315,228，申請日為2016年3月30日；美國臨時專利申請案案號：62/366,304，申請日為2016年7月25日；及美國臨時專利申請案案號：62/429,241，申請日為2016年12月2日。上述各專利申請案之完整揭示內容係以引用之方式併入本文中。

此外，本申請案係有關美國臨時專利申請案案號：61/992,057，申請日為2014年5月12日；美國臨時專利申請案案號：62/089,018，申請日為2014年12月8日；美國臨時專利申請案案號：62/102,281，申請日2015年1月12日；及國際申請案案號PCT/US2015/030337，申請日為2015年5月12日。上述各專利申請案之完整揭示內容係以引用之方式併入本文中。

本申請案亦有關美國臨時專利申請案案號：61/638,952，申請日為2012年4月26日；美國臨時專利申請案案號：61/669,249，申請日為2012年7月9日；美國臨時專利申請案案號：61/734,573，申請日為2012年12月7日；美國專利申請案案號：13/837,129，申請日為2013年3月15日；現在的美國專利案案號9,127,274，美國專利申請案案號：14/806,084(現為美國專利案案號9,376,680)，申請日為2015年7月22日；美國專利申請案案號：15/070,358，申請日為2016年3月15日；美國專利申請案案號：15/955,873，申請日為2018年4月18日；美國專利申請案案號：16/220,157，申請日為2018年12月14日；及國際申請案案號PCT/US2013/038218，申請日為2013年4月25日。本申請案亦有關國際申請案案號PCT/US2012/065601，申請日為2012年11月16日。上述各專利申請案之完整揭示內容係以引用之方式併入本文中。

序列表

本申請案包含之序列表已呈ASCII格式電子檔交付，其完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。該於2020年1月7日製作之ASCII複本名稱為117811_03020_SL.TXT，檔案大小為20,997位元組。

Serpinc1為絲胺酸蛋白酶抑制劑(serpin)超級家族之成員。Serpinc1為一種血漿蛋白酶抑制劑，其抑制凝血酶及凝血系統之其他活化絲胺酸蛋白酶，如：因子X、IX、XI、XII及VII，因此可調節血液凝結級聯反應。Serpinci之抗凝血活性會因肝素及其他會催化形成凝血酶：抗凝血酶(TAT)複合物之相關醣胺聚醣之存在而加強。

出血疾患不論先天或後天，均係血液凝結不當之病症。例如：血友病即為一種先天性遺傳出血疾患，其破壞身體控制血液凝結或凝血之能力。血友病A為涉及缺乏功能性凝結因子VIII之隱性X-相關性遺傳疾患，且佔血友病病例之80%。血友病B為涉及缺乏功能性凝結因子IX之隱性X-相關性遺傳疾患。其佔約20%血友病病例。血友病C為涉及缺乏功能性凝結因子XI之體染色體遺傳疾患。血友病C並非完全隱性，因為雜合性個體亦顯示增加出血。

雖然目前仍無法治癒血友病，但可以藉由定期輸注所缺乏之凝結因子(例如：血友病A之因子VIII)來控制。然而，有些血友病患者會對所接受之置換因子發展出抗體(抑制抗體)，因此對置換凝血因子產生頑抗性。因此，無法適當控制此等個體之出血。

最近已發展出一種一個月一次經皮下投予靶向抗凝血酶(AT)之研究用RNAi醫療劑，菲特西蘭(fitusiran)，供治療血友病A與B(帶有或沒有抑制抗體)，而且發明所屬技術領域中需要一種包含此等醫療劑之安定醫藥組成物，作為患有出血疾患，如：血友病之個體之替代療法。

本發明至少部份基於發現一種安定之醫藥組成物，其包含會抑制Serpinc1基因表現之雙股核糖核酸劑(dsRNA)劑，其相較於其他包含抑制Serpinc1基因表現之dsRNA劑之組成物，具有改善之安定性、效力、持續性、及容易投予。此等醫藥組成物適用於治療患有出血疾患，如：血友病之個體。

因此，本發明一項態樣提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其包含濃度約50mg/mL至約200mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約1mM至約10mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH適合皮下投予給個體，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈游離酸 型。

另一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其包含濃度約50mg/mL至約200mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約1mM至約10mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH適合皮下投予給個體，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’- GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈鹽型。

本發明一項態樣提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其包含濃度約50mg/mL至約200mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約1mM至約10mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH及滲透濃度適合皮下投予給個體，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈游離酸型。

另一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其包含濃度約50mg/mL至約200mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約1mM至約10mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH及滲透濃度適合皮下投予給個體，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈鹽型。

dsRNA之鹽型可呈鈉鹽型。

一項具體例中，該製劑中之實質上所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。另一項具體例中，該製劑中之所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。

醫藥組成物中之PBS濃度可為約2mM與約7mM之間；約3至約6mM之間；或約5mM。

醫藥組成物之pH可為約5.0至約8.0之間；約6.0至約8.0之間；6.5至約7.5之間；或約6.8至約7.2之間。

醫藥組成物之滲透濃度可為約50與約400mOsm/kg之間；約100與約400mOsm/kg之間；約240與約390mOsm/kg之間；或約290與約320mOsm/kg之間。

醫藥組成物中之dsRNA劑濃度可為約50mg/mL與約150mg/mL之間；約80mg/mL與約110mg/mL之間；或約100mg/mL。

一項具體例中，當組成物在約2℃至約8℃儲存時，可以安定約6個月至約36個月之間。另一項具體例中，當組成物在25℃及60%相對濕度(RH)下儲存時，可以安定約6個月至約36個月之間。再另一項具體例中，當組成物在約40℃及75%相對濕度(RH)下儲存時，可以安定約6個月。

另一項具體例中，當組成物在約2℃至約8℃儲存時，可以安定長達約36個月。另一項具體例中，當組成物在25℃及60%相對濕度(RH)下儲存時，可以安定長達約36個月。再另一項具體例中，當組成物在約40℃及75%相對濕度(RH)下儲存時，可以安定長達約6個月。

一項具體例中，組成物包含不低於(NLT)約95.0面積%之雙螺旋及不超過(NMT)約5面積%之雙螺旋總雜質，其係由非變性IPRP-HPLC純度所測定。

一項具體例中，組成物包含不低於(NLT)約85.0面積%之總單股，其係由變性AX-HPLC純度所測定。

一項具體例中，組成物包含不低於(NLT)約80.0面積%之總單股，其係由變性IPRP-HPLC純度所測定。

本發明亦提供包含本發明之醫藥組成物之小瓶與針筒。

小瓶可包括約0.5mL至約2.0ml之醫藥組成物；或約0.8ml之醫藥組成物。

本發明針筒可為1ml針筒；或3ml針筒。一項具體例中，針筒為1ml單次用針筒。

本發明針筒可包括29G針頭；或30G針頭。一項具體例中，針頭為29G針頭。

一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其包含濃度約100mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈游離酸型。

另一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈鹽型。

一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其包含濃度約100mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中醫藥組成物之滲透濃度為約300mOsm/kg，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及 由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈游離酸 型。

另一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中醫藥組成物之滲透濃度為約300mOsm/kg，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈鹽型。

一項具體例中，該鹽型為鈉鹽型。

一項具體例中，該製劑中之實質上所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。另一項具體例中，該製劑中之所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。

一項具體例中，當組成物在約2℃至約8℃儲存時，可以安定約6個月至約36個月之間。另一項具體例中，當組成物在25℃及60%相對濕度(RH)下儲存時，可以安定約6個月至約36個月之間。再另一項具體例中，當組成物在約40℃及75%相對濕度(RH)下儲存時，可以安定約6個月。

一項具體例中，當組成物在約2℃至約8℃下儲存時，可以安定長達約36個月。另一項具體例中，當組成物在25℃及60%相對濕度(RH)下儲存時，可以安定長達約36個月。再另一項具體例中，當組成物在約40℃及75%相對濕度(RH)下儲存時，可以安定長達6個月。

一項具體例中，組成物包含不低於(NLT)約95.0面積%之雙螺旋及不超過(NMT)約5面積%之雙螺旋總雜質，其係由非變性IPRP-HPLC純度所測定。

一項具體例中，組成物包含不低於(NLT)約85.0面積%之總單股，其係由變性AX-HPLC純度所測定。

一項具體例中，組成物包含不低於(NLT)約80.0面積%之總單股，其係由變性IPRP-HPLC純度所測定。

本發明亦提供一種包含上述醫藥組成物之小瓶。小瓶可包括約0.5mL至約2.0ml之醫藥組成物；或約0.8ml之醫藥組成物。

本發明進一步提供一種包含上述醫藥組成物之針筒。

本發明針筒可為1ml針筒；或3ml針筒。一項具體例中，針筒為1ml單次用針筒。

本發明針筒可包括29G針頭；或30G針頭。一項具體例中，針頭為29G針頭。

一項具體例中，針筒為預先填裝之針筒。

另一項態樣中，本發明提供一種包含約0.8ml之抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物之2ml小瓶，其中醫藥組成物包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中醫藥組成物之滲透濃度為約300mOsm/kg，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

其中dsRNA劑係呈鈉鹽型，及製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。

另一項態樣中，本發明提供一種包含29G針頭之1ml預先填裝之單次用針筒，其中針筒包含約0.8ml之抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其中醫藥組成物包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中醫藥組成物之滲透濃度為約300mOsm/kg，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

其中dsRNA劑係呈鈉鹽型，及製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。

另一項態樣中，本發明提供一種包含約0.8ml之抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物之2ml小瓶，其中醫藥組成物包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中醫藥組成物之滲透濃度為約300mOsm/kg，其中dsRNA劑具有如下結構：

其中Am、Gm、Cm、及Um為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；s為硫代磷酸酯鏈結；及其中L96為具有下列結構之配體及鏈結基：

其中dsRNA劑係呈鈉鹽型，及製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。

另一項態樣中，本發明提供一種包含29G針頭之1ml預先填裝之單次用針筒，其中針筒包含約0.8ml之抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其 中醫藥組成物包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中醫藥組成物之滲透濃度為約300mOsm/kg，其中dsRNA劑具有如下結構：

其中Am、Gm、Cm、及Um為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；s為硫代磷酸酯鏈結；及其中L96為具有下列結構之配體及鏈結基：

其中dsRNA劑係呈鈉鹽型，及製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。

另一項態樣中，本發明提供一種包含約0.8ml之抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物之2ml小瓶，其中醫藥組成物包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之 正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

其中dsRNA劑係呈鈉鹽型，及製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。

另一項態樣中，本發明提供一種包含29G針頭之1ml預先填裝之單次用針筒，其中針筒包含約0.8ml之抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其中醫藥組成物包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

其中dsRNA劑係呈鈉鹽型，及製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。

另一項態樣中，本發明提供一種包含約0.8ml之抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物之2ml小瓶，其中醫藥組成物包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中dsRNA劑具有如下結構：

其中Am、Gm、Cm、與Um為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；s為硫代磷酸酯鏈結；及其中L96為具有下列結構之配體及鏈結基：

其中dsRNA劑係呈鈉鹽型，及製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。

另一項態樣中，本發明提供一種包含29G針頭之1ml預先填裝之單次用針筒，其中針筒包含約0.8ml之抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其中醫藥組成物包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中dsRNA劑具有如下結構：

其中Am、Gm、Cm、與Um為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；s為硫代磷酸酯鏈結；及其中L96為具有下列結構之配體及鏈結基：

其中dsRNA劑係呈鈉鹽型，及製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包含鈉抗衡離子。

第1圖出示菲特西蘭藥品之代表性非變性離子對逆相高效液相層析法(IP RP-HPLC)層析圖譜。由於siRNA雙螺旋中硫代磷酸酯之不同立體異構物會部份解析，因此偶爾觀察到菲特西蘭雙螺旋波峰偶有一些裂峰。菲特西蘭波峰之質譜分析證實存在具有預期質量之兩個單股，在整個雙螺旋波峰中呈等比例。

第2圖出示菲特西蘭藥品之雙螺旋中單股之代表性變性陰離子交換高效液相層析法(AX-HPLC)層析圖譜。

第3圖出示菲特西蘭藥品之雙螺旋中單股之代表性變性離子對逆相高效液相層析法(IP RP-HPLC)層析圖型。

本發明提供一種醫藥組成物，其包含會引發RNA誘發靜默複合物(RISC)-介導裂解Serpinc1基因之RNA轉錄本之iRNA劑。本發明至少部份基於發現一種包含此等製劑之安定醫藥組成物，其相較於其他包含抑制Serpinc1基 因表現之dsRNA劑之組成物，具有改善之安定性、效力、持續性、及容易投予。此等醫藥組成物適用於抑制Serpinc1基因表現及/或治療患有可因抑制或降低Serpinc1基因表現而受益之疾患(例如：出血疾患，如：血友病)之個體。

下列詳細說明揭示如何製造及使用包含會抑制Serpinc1基因表現之iRNA之組成物，及供治療罹患可因抑制及/或降低此基因表現而受益之疾病與疾患之個體之組成物、用途及方法。

I.定義

為了更容易了解本發明，首先定義某些術語。此外應注意，不論何時出示之參數數值或數值範圍，其均指該等所出示數值之間之數值與範圍亦為本發明一部份。

本文所採用冠詞「一(a)」與「一(an)」係指該文法上主詞為一個(種)或超過一個(種)(亦即至少一個(種))。例如：「一個元素」係指一個元素或超過一個元素，例如：複數個元素。

本文所採用術語「約」係指在相關技藝典型之容許範圍內。例如：咸了解「約」可在平均值之約2個標準偏差範圍內。某些具體例中，約係指±10%。某些具體例中，約係指±5%。當「約」出現在一系列數字或範圍之前時，咸了解「約」可修飾該系列數字或範圍。

本文所採用術語「包括」意指片語「包括(但不限於)：」，並可與其交換使用。

本文所採用術語「或」意指「與/或」，並可與其交換使用，除非文中另有說明。

本文所採用術語「醫藥組成物」意指適用於治療個體(例如：人類個體)之疾病或疾患之組成物。

本文所採用術語「投予醫藥」意指傳遞包含如本文所說明dsRNA劑之組成物給個體，以供治療疾病或疾患。因此「適合投予醫藥」，如：「適合皮下投予」係說明可用於治療個體之疾病或疾患之包含dsRNA劑之組成物係經皮下投予醫藥組成物。醫藥組成物適合投予醫藥，例如：適合皮下投予。

本文所採用術語「滲透濃度」意指每公斤溶劑之溶質滲透莫耳數，其係以osmol/kg或Osm/kg表示。「滲透莫耳數」為說明造成化學溶液滲透壓之化合物莫耳數之量度單位。

本文所採用術語「Serpinc1」係指於細胞中表現之特定多肽。Serpinc1亦稱為serpin肽酶抑制劑，演化支C(抗凝血酶；AT)，成員1；抗凝血酶III； AT3；抗凝血酶；及肝素輔因子1。人類Serpinc1 mRNA轉錄本之序列可參見，例如：GenBank登錄號GI：254588059(NM__000488；SEQ ID NO：1)。恒河猴Serpinc1 mRNA之序列可參見，例如：GenBank登錄號GI：157167169(NM_001104583；SEQ ID NO：2)。小鼠Serpinc1 mRNA之序列可參見，例如：GenBank登錄號GI：237874216(NM_080844；SEQ ID NO：3)。大鼠Serpinc1 mRNA之序列可參見，例如：GenBank登錄號GI：58865629(NM_001012027；SEQ ID NO：4)。

本文所採用術語「Serpinc1」亦指由Serpinc1基因之天然發生DNA序列變異(如：Serpinc1基因中之單一核苷酸多形性)於細胞中表現之特定多肽。已經判別出Serpinc1基因內許多SNP，且可參見，例如：NCBI dbSNP(參 見，例如：www.ncbi.nlm.nih.gov/snp)。Serpinc1基因內SNP之無限制實例可參見NCBI dbSNP登錄號rs677；rs5877；rs5878；rs5879；rs941988；rs941989；rs1799876；rs19637711；rs2008946；及rs2227586。

本文所採用「個體」為動物，如：哺乳動物，包括靈長類(如：人類)、非人類靈長類(例如：猴子與黑猩猩)、非靈長類(如：牛、豬、駱駝、大羊駝、馬、山羊、兔子、綿羊、倉鼠、天竺鼠、貓、狗、大鼠、小鼠、馬與鯨魚)、或鳥類(例如：鴨或鵝)。一項具體例中，該個體為人類，如：接受治療或評估如本文所說明可因降低Serpinc1表現而受益之疾病、疾患或病症之人類；處於罹患可因降低Serpinc1表現而受益之疾病、疾患或病症之風險之人類；罹患可因降低Serpinc1表現而受益之疾病、疾患或病症之人類；與/或正接受治療可因降低Serpinc1表現而受益之疾病、疾患或病症之人類。

本文所採用術語「抑制」可與「降低」、「靜默」、「下調」、「壓制」及其他類似術語交換使用，且包括任何抑制程度。

本文所採用片語「抑制Serpinc1表現」包括抑制任何Serpinc1基因(如，例如：小鼠Serpinc1基因、大鼠Serpinc1基因、猴Serpinc1基因、或人類Serpinc1基因)及編碼Serpinc1蛋白質之Serpinc1基因之變異體或突變體之表現。

「抑制Serpinc1基因表現」包括Serpinc1基因之任何抑制程度，例如：至少部份壓制Serpinc1基因表現，如：抑制至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約91%、至少 約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、或至少約99%。

Serpinc1基因之表現可依據與Serpinc1基因表現相關之任何變數程度來分析，例如：Serpinc1 mRNA含量、Serpinc1蛋白質含量、或例如：用於測定凝血酶形成潛力之凝血酶：抗凝血酶複合物含量、出血時間、凝血酶原時間(PT)、血小板計數、與/或活化部分凝血酶原時間(aPTT)。可由其中一或多種變數程度與對照組程度比較其絕對或相對下降程度，來分析抑制性。對照組程度可能為發明所屬技術領域中採用之任何型態之對照組程度，例如：投予前之基線值或由未處理或接受對照物(如，例如：僅使用緩衝劑之對照物或含無活性劑之對照物)處理之類似個體、細胞或樣本所測得之程度。

一項具體例中，對Serpinc1基因表現之至少部份壓制性可由從其中已轉錄Serpinc1基因且已接受處理以致抑制Serpinc1基因表現之第一細胞或細胞群中所單離或所檢測之Serpinc1 mRNA相對於實質上與該第一細胞或細胞群相同但未曾接受如此處理之第二細胞或細胞群(對照組細胞)之降低程度來分析。採用下列公式來表示抑制程度：

本文所採用片語「由細胞與RNAi劑(如：dsRNA)接觸」，包括依任何可能方式接觸細胞。細胞與RNAi劑之接觸法包括細胞於活體外與iRNA接觸或細胞於活體內與iRNA接觸。該接觸法可能直接或間接進行。因此例如：可能由執行該方法之個體讓RNAi劑與細胞進行物理性接觸，或者，可能讓RNAi劑處於容許或導致其隨後得以接觸細胞之狀態下。

細胞於活體外之接觸法可能為例如：由細胞與RNAi劑培養。細胞於活體內之接觸法可能為例如：注射RNAi劑至該細胞所在之組織內或附近，或注射RNAi劑至另一個區域，例如：血流或皮下空間，因此該製劑隨後即可到達希望接觸之細胞所在之組織位置。例如：RNAi劑可能包含及/或可能偶聯配體，例如：GalNAc3，其主導RNAi劑至所需部位，例如：肝臟。亦可能組合活體外與活體內接觸方法。例如：細胞亦可於活體外與RNAi劑接觸，隨後再移植入個體內。

II.本發明之醫藥組成物

本發明提供一種安定之醫藥組成物，其包含抑制Serpinc1基因表現之雙股核糖核酸(dsRNA)劑。本發明之醫藥組成物包括本文說明之dsRNA劑與磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，且適合皮下投予給個體。該包含dsRNA劑之醫藥組成物適用於治療與Serpinc1基因之表現或活性相關之疾病或疾患，例如：Serpinc1-相關疾病，例如：血友病。本發明之醫藥組成物可以投予足以抑制Serpinc1基因表現之劑量。

一項具體例中，本發明之醫藥組成物包括呈游離酸型之本發明dsRNA劑。另一項具體例中，本發明之醫藥組成物包括呈鈉鹽型之本發明dsRNA劑。某些具體例中，當本發明dsRNA劑呈鈉鹽型時，存在於製劑中之鈉離子係作為製劑中的實質上所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團之抗衡離子(以便維持電荷中性)。其中實質上所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯鏈結具有鈉抗衡離子之製劑中，包括不超過5、4、3、2、或1個沒有鈉抗衡離子之磷酸二酯與/或硫代磷酸酯鏈結。有些具體例中，當本發明dsRNA劑鈉鹽型時，存在於製劑中之鈉離子係作為製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團之抗衡離子。

本發明之醫藥組成物可包括dsRNA劑，其濃度約50mg/mL至約200mg/mL、約50mg/mL至約150mg/mL、約90mg/mL至約110mg/mL、約90mg/mL至約100mg/mL、或約80mg/mL至約110mg/mL，例如：約50mg/mL、55mg/mL、60mg/mL、65mg/mL、70mg/mL、75mg/mL、80mg/mL、85mg/mL、90mg/mL、95mg/mL、100mg/mL、105mg/mL、106mg/mL、110mg/mL、115mg/mL、120mg/mL、125mg/mL、130mg/mL、135mg/mL、140mg/mL、145mg/mL、150mg/mL、155mg/mL、160mg/mL、165mg/mL、170mg/mL、175mg/mL、180mg/mL、185mg/mL、190mg/mL、195mg/mL、或約200mg/mL。一項具體例中，本發明之醫藥組成物包括濃度約100mg/mL之dsRNA劑。上述範圍與數值之間之範圍與數值亦計畫成為本發明之一部份。此外，亦計畫包括使用任何上述數值作為上限與/或下限之組合之數值範圍。

本發明之醫藥組成物可包括PBS。一項具體例中，PBS包括氯化鈉及磷酸鈉，但不包括氯化鉀與/或磷酸鉀。另一項具體例中，PBS包括氯化鈉、磷酸鈉、及氯化鉀。再另一項具體例中，PBS包括氯化鈉、磷酸鈉、及磷酸鉀。一項具體例中，PBS包括氯化鈉、磷酸鈉、氯化鉀、及磷酸鉀。某些具體例中，例如：當PBS包括氯化鈉及磷酸鈉時，PBS濃度可為約1mM至約10mM；或約3mM至約6mM，例如：約1mM、1.5mM、2mM、2.5mM、3mM、3.5mM、4mM、4.5mM、5mM、6.5mM、7mM、7.5.mM、9mM、8.5mM、9mM、9.5mM、或約10mM PBS。本發明一項具體例中，本發明之醫藥組成物之PBS濃度為約5mM(例如：約0.64mM NaH₂PO₄、約4.36mM Na₂HPO₄、約85mM NaCl)。上述範圍與數值之間之範圍與數值亦計畫為本發明 之一部份。此外，亦計畫包括使用任何上述數值作為上限與/或下限之組合之數值範圍。

一項具體例中，本發明之醫藥組成物不含防腐劑。本發明另一項具體例中，本發明之醫藥組成物包括防腐劑。

適合皮下投予之本發明之醫藥組成物之pH可為約5.0至約8.0、約5.5至約8.0、約6.0至約8.0、約6.5至約8.0、約7.0至約8.0、約5.0至約7.5、約5.5至約7.5、約6.0至約7.5、約6.5至約7.5、約5.0至約7.2、約5.25至約7.2、約5.5至約7.2、約5.75至約7.2、約6.0至約7.2、約6.5至約7.2、或約6.8至約7.2之間。上述範圍與數值之間之範圍與數值亦計畫為本發明之一部份。

適合皮下投予之本發明之醫藥組成物之滲透濃度為如：不超過約400mOsm/kg，例如：50與400mOsm/kg之間、75與400mOsm/kg之間、100與400mOsm/kg之間、125與400mOsm/kg之間、150與400mOsm/kg之間、175與400mOsm/kg之間、200與400mOsm/kg之間、250與400mOsm/kg之間、300與400mOsm/kg之間、50與375mOsm/kg之間、75與375mOsm/kg之間、100與375mOsm/kg之間、125與375mOsm/kg之間、150與375mOsm/kg之間、175與375mOsm/kg之間、200與375mOsm/kg之間、250與375mOsm/kg之間、300與375mOsm/kg之間、50與350mOsm/kg之間、75與350mOsm/kg之間、100與350mOsm/kg之間、125與350mOsm/kg之間、150與350mOsm/kg之間、175與350mOsm/kg之間、200與350mOsm/kg之間、250與350mOsm/kg之間、50與325mOsm/kg之間、75與325mOsm/kg之間、100與325mOsm/kg之間、125與325mOsm/kg之間、150與325mOsm/kg之間、175與325mOsm/kg之間、200與325mOsm/kg之間、250與325mOsm/kg之間、300與325mOsm/kg之間、300與350 mOsm/kg之間、50與300mOsm/kg之間、75與300mOsm/kg之間、100與300mOsm/kg之間、125與300mOsm/kg之間、150與300mOsm/kg之間、175與300mOsm/kg之間、200與300mOsm/kg之間、250與300之間、50與250mOsm/kg之間、75與250mOsm/kg之間、100與250mOsm/kg之間、125與250mOsm/kg之間、150與250mOsm/kg之間、175與350mOsm/kg之間、200與250mOsm/kg之間，例如：約50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、295、300、305、310、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、或約400mOsm/kg。上述範圍與數值之間之範圍與數值亦計畫為本發明之一部份。此外，亦計畫包括使用任何上述數值作為上限與/或下限之組合之數值範圍。

本發明之醫藥組成物為物理上及化學上安定。

本文所採用術語「安定」係指此等醫藥組成物中之醫藥組成物與/或dsRNA劑基本上可以保留其物理安定性與/或化學安定性與/或生物活性。測定該等組成物及dsRNA劑之安定性之各種不同分析技術可以自相關技藝取得且說明於本文中。

若醫藥組成物(或此等組成物中之dsRNA劑)在目視檢測或UV檢測顏色與/或清澈度，或採用例如：HPLC分析法，例如：變性IP RP-HPLC、非變性IP RP-HPLC、與/或變性AX-HPLC分析法測定時，沒有顯示例如：雜質增加的現象時，則係「保留其物理安定性」。

若醫藥組成物中之dsRNA劑在指定時間下仍保留其生物活性，認定該dsRNA劑在化學上安定，則係「保留其化學安定性」。化學安定性之分析法可以採用例如：檢測與/或定量dsRNA雙螺旋之化學變化型式與/或正義股與/或反義股之化學變化型式。化學變化可能涉及大小變化與/或鈉含量變化，其可利用例如：雙螺旋滯留時間分析，及/或採用例如：非變性IP RP-HPLC定判定形成雙螺旋之單股之分子量，採用例如：熱UV光度計判定熔點溫度，及/或採用例如：火焰式原子吸收光譜法(火焰式AAS)/感應偶合電漿發射光譜法(ICP-OES)判定鈉含量(基於無水態)。

若組成物中之dsRNA劑針對其計畫目的具有生物活性時，則組成物中之dsRNA劑係「保留其生物活性」。例如：若組成物中之dsRNA劑之生物活性為製備該組成物時所具有生物活性的約30%、約20%、或約10%內(在分析誤差內)(例如：由活體外RT-PCR分析法測定)時，則其保留生物活性。

例如：有些具體例中，本發明組成物當儲存在約2℃至約8℃時，可以安定約6個月至約36個月之間。其他具體例中，本發明組成物當儲存在約25℃及60%相對濕度(RH)下時，可以安定約6個月至約36個月之間。再其他具體例中，本發明組成物當儲存在約40℃及75%相對濕度(RH)下時，可以安定約6個月。

有些具體例中，本發明組成物當儲存在約2℃至約8℃時，可以安定長達約36個月。其他具體例中，本發明組成物當儲存在約25℃及60%相對濕度(RH)下時，可以安定長達約36個月。再其他具體例中，本發明組成物當儲存在約40℃及75%相對濕度(RH)下時，可以安定長達6個月。

一項具體例中，本發明組成物包含不低於(NLT)約95.0面積%之雙螺旋及不超過(NMT)約5面積%之雙螺旋總雜質，其係由非變性IPRP-HPLC純度所測定。另一項具體例中，本發明之醫藥組成物包含不低於(NLT)約85.0面積%之總單股，其係由變性AX-HPLC純度所測定。又另一項具體例中，本發明之醫藥組成物包含不低於(NLT)約80.0面積%之總單股，其係由變性IPRP-HPLC純度所測定。

一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物。該醫藥組成物包括濃度約50mg/mL至約200mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約1mM至約10mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH及滲透濃度適合皮下投予給個體，其中dsRNA劑包含正義股及反義股，反義股包含與編碼Serpinc1之mRNA之互補區，其包含至少15個連續核苷酸，其與如下核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸：5’-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3’(SEQ ID NO：15)，其中正義股之實質上所有核苷酸及反義股之實質上所有核苷酸為經修飾核苷酸，其中正義股係接合已附接在3’-末端之配體，及其中dsRNA劑係呈游離酸型。

另一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物。醫藥組成物包括濃度約50mg/mL至約200mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約1mM至約10mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH及滲透濃度適合皮下投予給個體，其中dsRNA劑包含正義股及反義股，反義股包含與編碼Serpinc1之mRNA之互補區，其包含至少15個連續核苷酸，其與如下核苷酸序列之差異不超過3個核苷酸：5’-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3’(SEQ ID NO：15)，其中正義股之實 質上所有核苷酸及反義股之實質上所有核苷酸為經修飾核苷酸，其中正義股係接合已附接在3’-末端之配體，及其中dsRNA劑係呈鹽型。

一項具體例中，正義股之所有核苷酸及反義股之所有核苷酸為經修飾核苷酸。

一項具體例中，經修飾核苷酸係分別獨立選自下列各物組成之群中：2'-去氧-2'-氟修飾核苷酸、2'-去氧-修飾核苷酸、鎖核苷酸、去鹼基核苷酸、2’-胺基-修飾核苷酸、2’-烷基-修飾核苷酸、嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、及包含非天然鹼基之核苷酸。

互補區可為至少17個核苷酸之長度或19個核苷酸之長度。

一項具體例中，互補區之長度為19至21個核苷酸之間。另一項具體例中，互補區之長度為21至23個核苷酸之間。

一項具體例中，各股之長度不超過30個核苷酸。

雙股RNAi劑之至少一股可包含具有至少1個核苷酸之3’突出段或具有至少2個核苷酸，例如：2、3、4、5、6、7、9、10、11、12、13、14、或15個核苷酸之3’突出段。其他具體例中，RNAi劑之至少一股包含具有至少1個核苷酸之5’突出段。某些具體例中，至少一股包含具有至少2個核苷酸，例如：2、3、4、5、6、7、9、10、11、12、13、14、或15個核苷酸之5’突出段。再其他具體例中，RNAi劑之一股的3’與5’兩端包含具有至少1個核苷酸之突出段。

某些具體例中，配體為N-乙醯基半乳糖胺(GalNAc)。配體可為透過單價、二價、或三價分支鏈結基附接RNAi劑之一或多個GalNAc。配體可以接合在雙股RNAi劑正義股之3’端、雙股RNAi劑正義股之5’端、雙股RNAi劑反義股之3’端、或雙股RNAi劑反義股之5’端。

有些具體例中，雙股RNAi劑包含複數個，例如：2、3、4、5、或6個GalNAc，其分別獨立透過複數個單價鏈結基附接雙股RNAi劑之複數個核苷酸。

某些具體例中，配體為

一項具體例中，RNAi劑係經由鏈結基接合配體，及配體與鏈結基係接合RNAi劑，如下圖所示：

且其中X為O或S。

一項具體例中，X為O。

一項具體例中，互補區係由如下核苷酸序列組成：5’-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3’(SEQ ID NO：15)。

一項具體例中，雙股RNAi劑包含正義股，其包含如下核苷酸序列：5’-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3’(SEQ ID NO：16)，及反義股， 其包含如下核苷酸序列：5’-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3’(SEQ ID NO：15)。

一項具體例中，正義股包含5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：13)，及反義股包含5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：14)，其中a、c、g、及u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、C、G、或U；Af、Cf、Gf或Uf為2'-氟A、C、G或U；及s為硫代磷酸酯鏈結。

一項具體例中，正義股包含5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：13)，及反義股包含5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：14)，其中a、c、g、及u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、C、G、或U；Af、Cf、Gf或Uf為2'-氟A、C、G或U；及s為硫代磷酸酯鏈結；及其中正義股係經由鏈結基接合配體，及配體與鏈結基係接合RNAi劑，如下圖所示：

，其中X為O或S。

一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物。該醫藥組成物包括濃度約50mg/mL至約200mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約1mM至約10mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中 醫藥組成物之pH及滲透濃度適合皮下投予給個體，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈游離酸 型。

另一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物。該醫藥組成物包括濃度約50mg/mL至約200mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約1mM至約10mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH及滲透濃度適合皮下投予給個體，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈鹽型。

一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物。該組成物包括濃度約100mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，其中醫藥組成物之滲透濃度為約300mOsm/kg，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈游離酸 型。

另一項態樣中，本發明提供一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物。該醫藥組成物包括濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，其中醫藥組成物之pH為約6.8至約 7.2，其中醫藥組成物之滲透濃度為約300mOsm/kg，其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中配體與鏈結基具有下述結構式：

，其中dsRNA劑係呈鹽型。

本發明組成物可再包含醫藥組成物中常用且其發明所屬技術領域中已建立用量之其他輔助組份。因此例如：組成物可再包含其他可相容之醫藥活性材料，如，例如：止癢劑、收斂劑、局部麻醉藥或消炎劑，或可包含其他適用於物理性調配本發明組成物各種不同劑型之材料，如：染劑、調味劑、防腐劑、抗氧化劑、不透明劑、增稠劑與安定劑。然而，當添加此等材料時，不應不當干擾本發明組成物中組份之生物活性。調配物可經過殺菌，且若需要時，可與不會與調配物之核酸(群)出現不良交互作用之輔劑混合，例如：潤滑劑、防腐劑、安定劑、濕化劑、乳化劑、影響滲透壓之鹽類、緩衝劑、著色劑、調味劑與/或芳香物質，等等。

有些具體例中，如本發明所說明特徵之醫藥組成物包括(a)一或多種iRNA化合物及(b)一或多種其功能為非RNAi機轉且適用於治療溶血疾患之 製劑。此等製劑實例包括(但不限於)：消炎劑、抗脂肪變性劑、抗病毒劑與/或抗纖維化劑。此外，亦可使用其他常用於保護肝臟之物質(如：水飛薊(silymarin))，與本文說明之iRNA組合使用。其他適用於治療肝臟疾病之製劑包括替比夫定(telbivudine)、恩替卡韋(entecavir)與蛋白質酶抑制劑(如：特拉匹韋(telaprevir))，及其他揭示於例如：Tung等人之美國申請案公告案號2005/0148548、2004/0167116、與2003/0144217；及Hale等人之美國申請案公告案號2004/0127488者。

此等化合物之毒性與醫療效力可採用標準醫藥製程，於細胞培養物中或實驗動物中測定，例如：測定LD50(造成50%族群死亡時之劑量)與ED50(有效醫療50%族群時之劑量)。毒性與醫療效應之間之劑量比值即為醫療指數，以LD50/ED50比值表示。以醫療指數高之化合物較佳。

III.本發明之醫藥組成物所使用之iRNA

本發明組成物包括RNAi劑，其靶向Serpinc1基因，及在細胞中，如：在個體(例如：哺乳動物，如：患有Serpinc1-相關疾患(例如：出血疾患，例如：血友病)之人類)之細胞中抑制Serpinc1基因表現。

本文所採用「標靶序列」係指在Serpinc1基因轉錄期間所形成mRNA分子之核苷酸序列中之連續部份，包括作為主要轉錄產物之RNA處理產物之mRNA。一項具體例中，該序列之標靶部份之長度應為至少足以作為受質之長度，可在或接近Serpinc1基因轉錄期間所形成mRNA分子之核苷酸序列之一部份之位置接受iRNA所主導之裂解。

標靶序列之長度可能為約9至36個核苷酸，例如：約15至30個核苷酸之長度。例如：標靶序列之長度可為約15至30個核苷酸、15至29、15至 28、15至27、15至26、15至25、15至24、15至23、15至22、15至21、15至20、15至19、15至18、15至17、18至30、18至29、18至28、18至27、18至26、18至25、18至24、18至23、18至22、18至21、18至20、19至30、19至29、19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23、或21至22個核苷酸。上述範圍與長度之間之範圍與長度亦包括為本發明之一部份。

本文所採用術語「包含序列之股」係指包含核苷酸鏈之寡核苷酸，其係採用標準核苷酸命名法之序列說明。

「G」、「C」、「A」、「T」與「U」一般分別代表核苷酸，其分別包含鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸苷與尿嘧啶作為鹼基。然而，咸了解，術語「核糖核苷酸」或「核苷酸」亦指如下文中進一步說明之經修飾核苷酸，或替代之置換部份體(參見，例如：表1)。發明所屬技術領域中的技術人員咸了解，鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤與尿嘧啶可在不會實質上改變該包含帶有此等置換部份體之核苷酸之寡核苷酸鹼基配對性質下改用其他部份體置換。例如(但不限於)：包含肌苷作為其鹼基之核苷酸可與包含腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶之核苷酸形成鹼基對。因此，如本發明所說明特徵之dsRNA之核苷酸序列中，包含尿嘧啶、鳥嘌呤或腺嘌呤之核苷酸可被包含例如：肌苷之核苷酸置換。另一項實例中，寡核苷酸中之任何位置之腺嘌呤與胞嘧啶均可分別被鳥嘌呤與尿嘧啶置換，與標靶mRNA形成G-U搖擺鹼基對。包含此等置換部份體之序列適合如本發明所說明特徵之組成物與方法。

本所採用術語「iRNA」、「RNAi劑」、「iRNA劑」、「RNA干擾劑」可交換使用，其意指包含如本文術語所定義之RNA之製劑，其可藉由RNA誘發靜默複合物(RISC)途徑，介導靶向裂解RNA轉錄本。iRNA透過稱為RNA干擾(RNAi)之過程主導mRNA之序列專一性降解。iRNA調控(例如：抑制)Serpinc1於細胞(例如：個體，如：哺乳動物個體中之細胞)中之表現。

一項具體例中，本發明RNAi劑包括會與標靶RNA序列(例如：Serpinc1標靶mRNA序列)交互作用之單股RNA，以主導裂解標靶RNA。在不希望受到理論限制下，咸信進入細胞中之長雙股RNA會被稱為Dicer之第III型內切核酸酶分解成siRNA(Sharp等人(2001)Genes Dev.15：485)。Dicer係一種類似核糖核酸酶-III之酵素，可處理dsRNA形成19至23對鹼基之短干擾RNA，其特徵在於具有兩個鹼基之3'突出段(Bernstein等人(2001)Nature 409：363)。siRNA隨後進入RNA誘發靜默複合物(RISC)中，其中一或多種解螺旋酶解開siRNA雙螺旋，讓互補反義股可以指揮辨識標靶(Nykanen等人(2001)Cell 107：309)。當與適當標靶mRNA結合時，RISC內之一或多種內切核酸酶會裂解標靶，引發靜默(Elbashir等人(2001)Genes Dev.15：188)。因此一項態樣中，本發明係有關一種在細胞內產生之單股RNA(siRNA)，其促進形成RISC複合物，導致標靶基因(亦即Serpinc1基因)靜默。因此，本文所採用術語「siRNA」亦指上述RNAi。

另一項具體例中，RNAi劑可為進入細胞或生物體中來抑制標靶mRNA之單股siRNA。單股RNAi劑會結合RISC內切核酸酶Argonaute 2，其再裂解標靶mRNA。單股siRNA一般為15至30個核苷酸且經化學修飾。單股siRNA之設計與試驗說明於美國專利案案號8,101,348與Lima等人(2012)Cell 150：883-894，其完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。本文所說明之任何反 義核苷酸序列均可作為本文說明之單股siRNA使用或可採用Lima等人(2012)Cell 150：883-894說明之方法進行化學修飾。

另一項具體例中，本發明組成物、用途與方法所使用之「iRNA」係雙股RNA，本文中稱為「’雙股RNAi劑」、「雙股RNA(dsRNA)分子」、「dsRNA劑」或「dsRNA」。術語「dsRNA」係指核糖核酸分子之複合物，其具有雙螺旋結構，包含兩個反向平行且實質上互補之核酸股，具有相對於標靶RNA(亦即Serpinc1基因)之「正義」與「反義」取向。有些本發明具體例中，雙股RNA(dsRNA)透過轉錄後基因-靜默機轉(本文稱為RNA干擾或RNAi)啟動降解標靶RNA(例如：mRNA)。

通常，dsRNA分子之各股之大多數核苷酸為核糖核苷酸，但如同本文之詳細說明，各股或兩股亦可包括一個或多個非核糖核苷酸，例如：去氧核糖核苷酸與/或經修飾核苷酸。此外，本說明書所採用「RNAi劑」可能包括經化學修飾之核糖核苷酸；RNAi劑可能在多重核苷酸上包括實質修飾。

本文所採用術語「經修飾核苷酸」意指分別獨立具有經修飾糖部分基團、經修飾核苷酸之間鏈結、與/或經修飾核鹼基之核苷酸。因此，術語「經修飾核苷酸」包括在核苷酸之間鏈結、糖部份體或核鹼基上取代、加成、或排除例如：官能基或原子。適用於本發明製劑之修飾法包括本文所揭示或相關技藝已知之所有修飾型態。針對本說明書與申請專利範圍目的，「RNAi劑」包括用於siRNA型分子之任何此等修飾。

雙螺旋區之長度可為容許所需標靶RNA透過RISC途徑進行專一性降解之任何長度，且可能在約9至36對鹼基之長度範圍內，例如：約15-30對鹼基之長度，例如：約9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、 21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、或36對鹼基之長度，如：約15至30、15至29、15至28、15至27、15至26、15至25、15至24、15至23、15至22、15至21、15至20、15至19、15至18、15至17、18-30、18至29、18至28、18至27、18至26、18至25、18至24、18至23、18至22、18至21、18至20、19至30、19至29、19至28、19至27、19至至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23、或21至22對鹼基之長度。上述範圍與長度之間之範圍與長度亦包括為本發明之一部份。

形成雙螺旋結構之兩股可能為一個較大RNA分子之不同部份，或其可能為分開之RNA分子。若這兩股為一個較大RNA分子之一部份，且因此在形成該雙螺旋結構之其中一股之3’-端與另一股之5’-端之間利用未中斷之核苷酸鏈連接時，該連接之RNA鏈稱為「髮夾環」。髮夾環可包含至少一個未配對之核苷酸。有些具體例中，髮夾環可包含至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少20個、至少23或更多個未配對之核苷酸。

若dsRNA之兩個實質上互補股包含在分開之RNA分子上時，彼等分子不一定需要但可以共價連接。若這兩股在形成該雙螺旋結構之其中一股之3’-端與另一股之5’-端之間利用除了未中斷之核苷酸鏈以外之其他連接方式共價連接時，該連接結構稱為「鏈結基」。RNA股可能具有相同或不同數量之核苷酸。鹼基對之最高數量即為dsRNA中最短股之核苷酸數量減去雙螺旋中任何 突出段後之數量。除了雙螺旋結構外，RNAi亦可包含一個或多個核苷酸突出段。

一項具體例中，本發明RNAi劑為24-30個核苷酸之dsRNA，其會與標靶RNA序列(例如：Serpinc1標靶mRNA序列)交互作用，主導裂解標靶RNA。在不希望受到理論之限制下，進入細胞中之長的雙股RNA會被稱為Dicer之第III型內切核酸酶分解成siRNA(Sharp等人(2001)Genes Dev.15：485)。Dicer係類似核糖核酸酶-III之酵素，其處理dsRNA形成19至23對鹼基之短干擾型RNA，其特徵在於具有兩個鹼基之3'突出段(Bernstein等人(2001)Nature 409：363)。該等siRNA隨後再進入RNA誘發靜默複合物(RISC)中，其中一或多種解螺旋酶解開siRNA雙螺旋，讓該互補反義股可以指揮辨識標靶(Nykanen等人(2001)Cell 107：309)。當與適當標靶mRNA結合時，RISC內之一或多種內切核酸酶即裂解標靶而誘發靜默(Elbashir等人(2001)Genes Dev.15：188)。

本文所採用術語「核苷酸突出段」係指至少一個未配對之核苷酸從iRNA(例如：dsRNA)之雙螺旋結構中突出。例如：當dsRNA中一股之3'-端超出另一股5'-端，或反之亦然時，即有一個核苷酸突出段。dsRNA可包含具有至少一個核苷酸之突出段；或者，該突出段可包含至少兩個核苷酸、至少三個核苷酸、至少四個核苷酸、至少五個核苷酸或更多個。核苷酸突出段可包含或其組成可為核苷酸/核苷類似物，包括去氧核苷酸/核苷。該(等)突出段可位於正義股、反義股或其任何組合。此外，突出段之核苷酸(群)可出現在dsRNA之反義或正義股之5'-端、3'-端或兩端。

一項具體例中，dsRNA之反義股可在3’-端與/或5’-端具有含有1至10個核苷酸，例如：1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個核苷酸之突出 段。一項具體例中，dsRNA之正義股可在3’-端與/或5’-端具有含有1至10個核苷酸，例如：1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個核苷酸之突出段。另一項具體例中，突出段中一個或多個核苷酸被核苷硫代磷酸酯置換。

某些具體例中，正義股或反義股或兩股上之突出段可包括超過10個核苷酸之延伸長度，例如：10至30個核苷酸、10至25個核苷酸、10至20個核苷酸或10至15個核苷酸之長度。某些具體例中，延伸之突出段係在雙螺旋之正義股上。某些具體例中，延伸之突出段係在雙螺旋正義股3’端。某些具體例中，延伸之突出段係在雙螺旋正義股5’端。某些具體例中，延伸之突出段係在雙螺旋反義股上。某些具體例中，延伸之突出段係在雙螺旋反義股3’端。某些具體例中，延伸之突出段係在雙螺旋反義股5’端。某些具體例中，延伸之突出段中一或多個核苷酸被核苷硫代磷酸酯置換。

「鈍」或「鈍端」意指雙股RNAi劑之末端沒有未配對之核苷酸，亦即沒有核苷酸突出段。「鈍端」之RNAi劑為該dsRNA之整個長度均為雙股，亦即該分子之任一端均沒有核苷酸突出段。本發明RNAi劑包括在一端具有核苷酸突出段之RNAi劑(亦即，具有一個突出段與一個鈍端之製劑)之RNAi劑或兩端均具有核苷酸突出段之RNAi劑。

術語「反義股」或「引導股」係指iRNA(例如：dsRNA)之該股包括一個與標靶序列(例如：Serpinc1 mRNA)實質上互補之區。本文所採用術語「互補區」係指反義股上與序列(例如：標靶序列，例如：如本文定義之Serpinc1核苷酸序列)實質上互補之區。若當互補區未與標靶序列完全互補時，可能在分子內部或末端區發生錯配。通常，最能忍受之錯配係在末端區內，例如：iRNA之5’-與/或3’-末端之5、4、3、或2個核苷酸內。

本文所採用術語「正義股」或「過客股」係指該iRNA之股包括一個與如本文術語所定義反義股之區實質上互補之區。

本文所採用術語「裂解區」係指位在緊鄰裂解位點之區。裂解位點係在標靶上發生裂解之位點。有些具體例中，裂解區在裂解位點之任一端且緊鄰裂解位點上包含三個鹼基。有些具體例中，裂解區在裂解位點任一端且緊鄰裂解位點上包含兩個鹼基。有些具體例中，裂解位點明確位於與反義股之核苷酸10與11結合之位點，且裂解區包含核苷酸11、12與13。

除非另有說明，否則當本文採用術語「互補」說明第一核苷酸序列與第二核苷酸序列之關係時，係指包含該第一核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸在發明所屬技術領域中的技術人員咸了解之某些條件下，與包含第二核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸雜交並形成雙螺旋結構之能力。此等條件可為例如：嚴苛條件，其中嚴苛條件包括：400mM NaCl、40mM PIPES pH 6.4、1mM EDTA，50℃或70℃12至16小時，然後洗滌(參見，例如：Molecular Cloning：A Laboratory manual，Sambrook等人(1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press)。可採用其他條件，如：生物體內部可能遇到之生理上相關條件。發明所屬技術領域中的技術人員均可依據最終雜交核苷酸之用途，決定最適合測試兩個序列之互補性之條件。

iRNA(例如：本文說明之dsRNA)內之互補序列包括包含第一核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸與包含第二核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸沿著其中一或兩個核苷酸序列之整個長度之鹼基配對。此等序列在本文中可稱為其彼此「完全互補」。然而，若第一序列相對於本文第二序列稱為「實質上互補」時，則該等兩個序列可能完全互補，或當具有至多30對鹼基之雙螺旋在 雜交時，其可能形成一或多對，但通常不會有超過5、4、3或2對錯配鹼基，同時在與其最終用途(例如：經由RISC途徑抑制基因表現)最相關之條件下仍保留雜交能力。然而，若兩個寡核苷酸之設計在於雜交時形成一個或多個單股突出段時，則此等突出段不應在決定互補性時視為錯配。例如：包含一個長度為21個核苷酸之寡核苷酸與另一個長度為23個核苷酸之寡核苷酸之dsRNA中，較長的寡核苷酸包含一個與該較短寡核苷酸完全互補之21個核苷酸之序列在本發明所說明目的下，仍可稱為「完全互補」。

本文所採用「互補」序列亦可包括非華生-克里克(non-Watson-Crick)鹼基對及/或由非天然與經修飾核苷酸形成之鹼基對，或完全由其組成，只要符合上述雜交能力之要求即可。此等非華生-克里克鹼基對包括(但不限於)：G：U搖擺或胡斯坦(Hoogstein)鹼基配對。

本文中有關dsRNA之正義股與反義股之間或iRNA劑之反義股與標靶序列之間之鹼基配對之內容所採用之術語「互補」、「完全互補」與「實質上互補」可由其用途之內容中了解。

本文所採用與信使RNA(mRNA)之「至少一部份實質上互補」之聚核苷酸係指該聚核苷酸與所需mRNA(例如：編碼Serpinc1之mRNA)之連續部份實質上互補。例如：若該序列係與編碼Serpinc1之mRNA之非中斷部份實質上互補時，則該聚核苷酸係與至少一部份Serpinc1 mRNA互補。

因此有些具體例中，本文所揭示反義股聚核苷酸係與標靶Serpinc1序列完全互補。其他具體例中，本文所揭示反義股聚核苷酸係與標靶Serpinc1序列實質上互補，且所包含之連續核苷酸序列之完整長度係與核苷酸序列SEQ ID NO：1之同等區或SEQ ID NO：1之片段至少約80%互補，如：約 85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約%91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、或約99%互補。

一項具體例中，本發明RNAi劑包括與反義聚核苷酸實質上互補之正義股，該反義股再與標靶Serpinc1序列互補，且其中該正義股聚核苷酸所包含之連續核苷酸序列之完整長度係與核苷酸序列SEQ ID NO：5之同等區或任一SEQ ID NO：5之片段至少約80%互補，如：約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約%91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、或約99%互補。

可於活體內抑制標靶基因(亦即Serpinc1基因)表現之合適dsRNA劑包括化學修飾。本發明某些態樣中，本發明iRNA之實質上所有核苷酸均經修飾。本發明其他具體例中，本發明iRNA之所有核苷酸均經修飾。本發明iRNA中「實質上所有核苷酸均經修飾」係大部份但不一定全部經修飾，且可包括不超過5、4、3、2、或1個未修飾核苷酸。

本發明方法所使用之iRNA劑通常包括RNA股(反義股)，其具有一區長度約30個或更少個核苷酸，例如：15至30、15至29、15至28、15至27、15至26、15至25、15至24、15至23、15至22、15至21、15至20、15至19、15至18、15至17、18至30、18至29、18至28、18至27、18至26、18至25、18至24、18至23、18至22、18至21、18至20、19至30、19至29、19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23、或21至22 個核苷酸之長度，該區域係實質上與Serpinc1基因之mRNA轉錄本之至少一部份互補。

其他具體例中，本發明雙股RNAi劑之一股或兩股之長度為至多66個核苷酸，例如：36至66、26至36、25至36、31至60、22至43、27至53個核苷酸之長度，具有一區至少19個連續核苷酸，其係與Serpinc1基因之mRNA轉錄本之至少一部份實質上互補。有些具體例中，正義股與反義股形成18-30個連續核苷酸之雙螺旋。

有些具體例中，用於本發明方法之iRNA劑包括長度至長66個核苷酸之RNA股(反義股)，例如：36至66、26至36、25至36、31至60、22至43、27至53個核苷酸之長度，具有一區至少19個連續核苷酸，其係與Serpinc1基因之mRNA轉錄本之至少一部份實質上互補。有些具體例中，此等具有較長反義股之iRNA劑可包括長度為20-60個核苷酸之第二RNA股(正義股)，其中正義股與反義股形成18-30個連續核苷酸之雙螺旋。

RNAi劑包含正義股及反義股。RNAi劑之各股之長度可在12至30個核苷酸之範圍內。例如：各股可在14至30個核苷酸之間之長度、17至30個核苷酸之間之長度、19至30個核苷酸之間之長度、25至30個核苷酸之間之長度、27至30個核苷酸之間之長度、17至23個核苷酸之間之長度、17至21個核苷酸之間之長度、17至19個核苷酸之間之長度、19至25個核苷酸之間之長度、19至23個核苷酸之間之長度、19至21個核苷酸之間之長度、21至25個核苷酸之長度、或21至23個核苷酸之長度。

正義股及反義股通常形成雙螺旋雙股RNA(「dsRNA」)，本文亦稱為「RNAi劑」。RNAi劑之雙螺旋區之長度可為12至30對核苷酸。例如：雙 螺旋區可為14至30對核苷酸之間之長度、17至30對核苷酸之間之長度、27至30對核苷酸之間之長度、17至23對核苷酸之間之長度、17至21對核苷酸之間之長度、17至19對核苷酸之間之長度、19至25對核苷酸之間之長度、19至23對核苷酸之間之長度、19至21對核苷酸之間之長度、21至25對核苷酸之長度、或21-23對核苷酸之長度。另一項實例中，雙螺旋區之長度可選自：15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、及27個核苷酸。

一項具體例中，RNAi劑可在其中一股或兩股之3’-端、5’-端、或兩端包含一個或多個突出段區與/或封端基團。該突出段之長度可為1至6個核苷酸，例如：2至6個核苷酸之長度、1至5個核苷酸之長度、2至5個核苷酸之長度、1至4個核苷酸之長度、2至4個核苷酸之長度、1至3個核苷酸之長度、2至3個核苷酸之長度、或1至2個核苷酸之長度。該突出段係由其中一股之長度超過另一股所造成，或由相同長度之兩股交錯造成。該突出段可與標靶mRNA形成錯配或其可與所靶向之基因序列互補或可為另一個序列。第一與第二股亦可以例如：利用外加鹼基連結形成髮夾型，或利用其他非鹼基鏈結基連結。

一項具體例中，RNAi劑之突出段區之核苷酸可彼此分別獨立為經修飾或未經修飾之核苷酸，包括(但不限於)：2’-糖修飾，如：2-F、2’-O甲基、胸苷(T)、2`-O-甲氧基乙基-5-甲基尿苷(Teo)、2`-O-甲氧基乙基腺苷(Aeo)、2`-O-甲氧基乙基-5-甲基胞苷(m5Ceo)，及其任何組合。例如：TT可為任一股上任一末端之突出段序列。突出段可與標靶mRNA形成錯配，或其可與所靶向之基因序列互補或可為另一個序列。

RNAi劑之正義股、反義股或兩股之5’-或3’-突出段可經過磷酸化。有些具體例中，突出段區(群)包含兩個核苷酸，其在這兩個核苷酸之間具 有硫代磷酸酯，其中這兩個核苷酸可相同或不同。一項具體例中，突出段存在於正義股、反義股或兩股之3’-端。一項具體例中，此3’-突出段存在於反義股上。一項具體例中，此3’-突出段存在於正義股上。

RNAi劑可能僅包含單一突出段，其可強化RNAi之干擾活性，不會影響其整體安定性。例如：單股突出段可能位於正義股之3'末端，或者在反義股之3'末端。RNAi亦可能在反義股之5’-端(或正義股之3’-端)具有鈍端，或反之亦然。通常RNAi之反義股在3’-端具有核苷酸突出段，且5’-端為鈍端。在不希望受到理論限制下，反義股5’-端之不對稱鈍端與反義股3’-端之突出段有利於引導該股進入RISC過程。

任何如本發明所說明特徵之核酸均可採用發明所屬技術領域中確立之習知方法合成與/或修飾，如：彼等說明於「Beaucage,S.L.等人(編輯),John Wiley & Sons,Inc.,New York,NY,USA」，其揭示內容已以引用之方式併入本文中。修飾法包括例如：末端修飾，例如：5’-端修飾(磷酸化、接合、反向鏈結)或3’-端修飾(接合、DNA核苷酸、反向鏈結，等等)；鹼基修飾，例如：使用安定化鹼基、失穩化鹼基、或會與對象之擴張區之鹼基配對之鹼基置換；排除鹼基(去鹼基核苷酸)、或接合鹼基；糖修飾(例如：位於2’-位置或4’-位置上)或置換糖；與/或骨架修飾，包括修飾或置換磷酸二酯鏈結。適用於本文所說明具體例之iRNA化合物之明確實例包括(但不限於)：包含經修飾骨架或沒有天然核苷之間鏈結之RNA。具有經修飾骨架之RNA特別包括彼等骨架中沒有磷原子者。針對本說明書之目的及發明所屬技術領域中有時候提及者，其核苷之間骨架中沒有磷原子之經修飾RNA亦可視為寡核苷。有些具體例中，經修飾之iRNA將在其核苷之間骨架中具有一個磷原子。

經修飾之RNA骨架包括例如：硫代磷酸酯、對掌性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、胺基烷基磷酸三酯、膦酸之甲基酯與其他烷基酯(包括膦酸3'-伸烷基酯與對掌性膦酸酯)、次膦酸酯、胺基磷酸酯(包括3'-胺基胺基磷酸酯與胺基烷基胺基磷酸酯)、硫羰基胺基磷酸酯、硫羰基烷基膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯、及具有正常3'-5'鏈結之硼代磷酸酯、其等之2'-5'-連接類似物、及彼等具有反向極性者，其中相鄰之成對核苷單位係依3'-5'鏈結5'-3'或2'-5'鏈結5'-2'。亦包括各種不同鹽類、混合鹽類與游離酸型。

教示上述含磷鏈結製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：美國專利案案號3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,195；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,316；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；5,625,050；6,028,188；6,124,445；6,160,109；6,169,170；6,172,209；6,239,265；6,277,603；6,326,199；6,346,614；6,444,423；6,531,590；6,534,639；6,608,035；6,683,167；6,858,715；6,867,294；6,878,805；7,015,315；7,041,816；7,273,933；7,321,029；及US Pat RE39464，其等完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

其中不包括磷原子之經修飾RNA骨架所具有之骨架係由短鏈烷基或環烷基核苷之間鏈結、混合雜原子、及烷基或環烷基核苷之間鏈結、或一個或多個短鏈雜原子或雜環核苷之間鏈結形成。此等包括彼等具有嗎啉基鏈結(一部份從核苷之糖部份形成)；矽氧烷骨架；硫醚、亞碸與碸骨架；甲醯乙醯基(formacetyl)與硫甲醯乙醯基骨架；亞甲基甲醯乙醯基與硫甲醯乙醯基骨架； 含烯烴骨架；胺磺酸根骨架；亞甲基亞胺基及亞甲基肼基骨架；磺酸根與磺醯胺骨架；醯胺骨架；及其他具有混合N、O、S與CH₂組份者。

教示上述寡核苷製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：美國專利案案號5,034,506；5,166,315；5,185,444；5,214,134；5,216,141；5,235,033；5,64,562；5,264,564；5,405,938；5,434,257；5,466,677；5,470,967；5,489,677；5,541,307；5,561,225；5,596,086；5,602,240；5,608,046；5,610,289；5,618,704；5,623,070；5,663,312；5,633,360；5,677,437；及5,677,439，其等完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

其他具體例中，希望包括合適RNA擬似物用於iRNA，其中核苷酸單位之糖與核苷之間鏈結(亦即，骨架)二者均被新穎基團置換。該等鹼基單位維持與適當核酸標靶化合物雜交。其中一種寡聚化合物為RNA擬似物，已顯示具有優異之雜交性質，稱為肽核酸(PNA)。PNA化合物中，RNA之糖骨架被包含醯胺之骨架(特定言之胺基乙基甘胺酸骨架)置換。核鹼基則保留並直接或間接結合骨架之醯胺部份之氮雜態氮原子。教示PNA化合物製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：美國專利案案號5,539,082；5,714,331；及5,719,262，其等完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。適用於本發明iRNA之其他PNA化合物說明於例如：Nielsen等人，Science,1991,254,1497-1500。

如本發明所說明特徵之某些具體例包括具有硫代磷酸酯骨架之RNA與具有雜原子骨架之寡核苷，特定言之上述美國專利案案號5,489,677之--CH₂--NH--CH₂-、--CH₂--N(CH₃)--O--CH₂--[稱為亞甲基(甲基亞胺基)或MMI骨架]、--CH₂--O--N(CH₃)--CH₂--、--CH₂--N(CH₃)--N(CH₃)--CH₂--及--N(CH₃)--CH₂--CH₂--[其中天然磷酸二酯骨架係由--O--P--O--CH₂--代表]，與上述美國專利案案 號5,602,240之醯胺骨架。有些具體例中，如本文所說明特徵之RNA具有上述美國專利案案號5,034,506之嗎啉基骨架結構。

經修飾RNA亦可包含一個或多個經取代之糖部份體。如本文所說明特徵之該等iRNA(例如：dsRNA)可在2'-位置包括下列其中一項：OH；F；O-、S-、或N-烷基；O-、S-、或N-烯基；O-、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中該烷基、烯基與炔基可為經取代或未經取代之C₁至C₁₀烷基或C₂至C₁₀烯基與炔基。合適修飾實例包括O[(CH₂)_nO]_mCH₃、O(CH₂)._nOCH₃、O(CH₂)_nNH₂、O(CH₂)_nCH₃、O(CH₂)_nONH₂、及O(CH₂)_nON[(CH₂)_nCH₃)]₂，其中n與m為1至約10。其他具體例中，dsRNA在2'-位置包括下列其中一項：C₁至C₁₀低碳數烷基、經取代之低碳數烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH₃、OCN、Cl、Br、CN、CF₃、OCF₃、SOCH₃、SO₂CH₃、ONO₂、NO₂、N₃、NH₂、雜環烷基、雜環烷芳基、胺基烷基胺基、聚烷基胺基、經取代之矽烷基、RNA裂解基團、報導子基團、嵌入劑、改善iRNA之藥物動力學性質之基團、或改善iRNA之藥效學性質之基團、及具有類似性質之取代基。有些具體例中，該修飾包括2'-甲氧基乙氧基(2'-O--CH₂CH₂OCH₃，亦稱為2'-O-(2-甲氧基乙基)或2'-MOE)(martin等人，Helv.Chim.Acta,1995,78：486-504)，亦即烷氧-烷氧基。另一種修飾實例為2'-二甲基胺基氧乙氧基，亦即O(CH₂)₂ON(CH₃)₂基團(亦稱為2'-DMAOE，其說明於下文實例中)與2'-二甲基胺基乙氧基乙氧基(發明所屬技術領域中亦稱為2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基或2'-DMAEOE)，亦即2'-O--CH₂--O--CH₂--N(CH₂)₂。

其他修飾包括2'-甲氧基(2'-OCH₃)、2'-胺基丙氧基(2'-OCH₂CH₂CH₂NH₂)與2'-氟(2'-F)。亦可在iRNA之RNA上其他位置進行類似修 飾，特定言之在3'末端核苷酸上糖之3'位置或在2'-5'連接dsRNA與5'末端核苷酸之5'位置。iRNA亦可改具有糖擬似物(如環丁基部份體)替代呋喃戊糖基糖。教示此等經修飾糖結構製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：美國專利案案號4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,658,873；5,670,633；及5,700,920，其中某些專利案已成為本申請案共同擁有。其等完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。

iRNA亦包括核鹼基(發明所屬技術領域中通常簡稱「鹼基」)修飾或取代。本文所採用「未經修飾」或「天然」核鹼基包括嘌呤鹼基腺嘌呤(A)與鳥嘌呤(G)，及嘧啶鹼基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)與尿嘧啶(U)。經修飾之核鹼基包括其他合成性與天然核鹼基，如：去氧-胸腺嘧啶(dT)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥基甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、腺嘌呤與鳥嘌呤之6-甲基與其他烷基衍生物、腺嘌呤與鳥嘌呤之2-丙基與其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶與2-硫胞嘧啶、5-鹵尿嘧啶與胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶與胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶與胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羥基與其他8-經取代之腺嘌呤與鳥嘌呤、5-鹵基(特定言之5-溴)、5-三氟甲基與其他5-經取代之尿嘧啶與胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤與7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤與8-氮雜腺嘌呤、7-去氮雜鳥嘌呤與7-去氮雜腺嘌呤與3-去氮雜鳥嘌呤與3-去氮雜腺嘌呤。其他核鹼基包括彼等揭示於美國專利案案號3,687,808，彼等揭示於Modified Nucleosides in Biochemistry,Biotechnology and Medicine,Herdewijn.P編輯，Wiley-VCH， 2008；彼等揭示於The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering，p.858-859,Kroschwitz,J.L.編輯，John Wiley & Sons,1990；彼等揭示於Englisch等人之Angewandte Chemie，國際版，1991,30,613；及彼等揭示於Sanghvi,Y S之dsRNA Research and Applications，第15章，p.289-302,Crooke,S.T.與Lebleu,B.編輯，CRC Press，1993。其中某些核鹼基特別適用於提高如本發明所說明特徵之寡聚化合物之結合親和性。此等包括5-經取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶、及N-2、N-6與O-6經取代之嘌呤，包括2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶與5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶取代已顯示可使核酸雙螺旋安定性提高0.6-1.2℃(Sanghvi,Y.S.、Crooke,S.T.與Lebleu,B.編輯之dsRNA Research and Applications，CRC Press，Boca Raton，1993，pp.276-278)，且成為鹼基取代法之實例，甚至更特別當與2'-O-甲氧基乙基糖修飾組合時。

教示上述某些經修飾之核鹼基及其他經修飾之核鹼基製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：上述美國專利案案號3,687,808、4,845,205；5,130,30；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121,5,596,091；5,614,617；5,681,941；5,750,692；6,015,886；6,147,200；6,166,197；6,222,025；6,235,887；6,380,368；6,528,640；6,639,062；6,617,438；7,045,610；7,427,672；及7,495,088，其等完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

iRNA之RNA亦可經修飾，以包括一個或多個雙環糖部份體。「雙環糖」為經兩個原子之橋基修飾之呋喃糖基環。「雙環糖苷」(「BNA」)為具有糖部份體之核苷，該糖部份體包含由糖環之兩個碳原子連接之橋基，藉 以形成雙環系。某些具體例中，該橋基連接糖環之4'-碳與2'-碳。因此，有些具體例中，本發明製劑可包括iRNA之RNA亦可經修飾，以包括一個或多個鎖核酸(LNA)。鎖核酸為具有經修飾核糖部份體之核苷酸，其中該核糖部份體額外包含連接2'與4'碳之橋基。換言之，LNA為一種包含雙環糖部份體(其包含4'-CH2-O-2'-橋基)之核苷酸。此結構有效地「封鎖」3'-內接結構構形內之核糖。添加鎖核酸至siRNA中時，已顯示可以提高血清中siRNA安定性，並降低脫靶效應(Elmen,J.等人(2005)Nucleic Acids Research 33(1)：439-447；Mook,OR.等人(2007)Mol Canc Ther 6(3)：833-843；Grunweller,A.等人(2003)Nucleic Acids Research 31(12)：3185-3193)。

用於本發明聚核苷酸之雙環核苷實例包括(但不限於)：在4'與2'核糖基環原子之間包含橋基之核苷。某些具體例中，本發明反義聚核苷酸劑包括一個或多個包含一個4'至2'橋基之雙環核苷。此等4'至2'橋連雙環核苷實例包括(但不限於)：4'-(CH2)-O-2'(LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3)-O-2'(亦稱為「限定構象乙基」或「cEt」)及4'-CH(CH2OCH3)-O-2'(及其類似物；參見，例如：美國專利案案7,399,845)；4'-C(CH3)(CH3)-O-2'(及其類似物；參見，例如：美國專利案案8,278,283)；4'-CH2--N(OCH3)-2'(及其類似物；參見，例如：美國專利案案8,278,425)；4'-CH2-O--N(CH3)-2'(參見，例如：美國專利公告案案號2004/0171570)；4'-CH2-N(R)-O-2'，其中R為H、C1-C12烷基、或保護基(參見，例如：美國專利案案號7,427,672)；4'-CH2-C(H)(CH3)-2'(參見，例如：Chattopadhyaya等人J.Org.Chem.,2009,74,118-134)；及4'-CH2-C(=CH2)-2'(及其類似物；參見， 例如：美國專利案案8,278,426)。上述各文獻之完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

其他教示鎖核酸核苷酸製法之代表性美國專利案及美國專利公告案包括(但不限於)下列：美國專利案案號6,268,490；6,525,191；6,670,461；6,770,748；6,794,499；6,998,484；7,053,207；7,034,133；7,084,125；7,399,845；7,427,672；7,569,686；7,741,457；8,022,193；8,030,467；8,278,425；8,278,426；8,278,283；US 2008/0039618；及US 2009/0012281，其等完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

上述任何雙環核苷可製成具有一或多種立體化學糖組態，包括例如：α-L-呋喃核糖及β-D-呋喃核糖(參見WO 99/14226)。

iRNA之RNA亦可經修飾，以包括一個或多個限定構象乙基核苷酸。本文所採用「限定構象乙基核苷酸」或「cEt」為一種包含雙環糖部份體(其含有4'-CH(CH3)-O-2'橋基)之鎖核酸。一項具體例中，該限定構象乙基核苷酸係呈S構形，本文稱為「S-cEt」。

本發明iRNA亦可包括一個或多個「限制構形核苷酸」(「CRN」)。CRN係核苷酸類似物，其具有連接核糖之C2’與C4’碳或核糖之C3與-C5'碳之鏈結基。CRN鎖住核糖環成為安定之構形，並提高其與mRNA之雜交親合性。該鏈結基之長度足以讓氧置於最適合安定性與親和性之位置，因此較少核糖環折皺。

教示上述某些CRN之製法之代表性公開文獻包括(但不限於)：美國專利公告案案號2013/0190383；及PCT公告案WO 2013/036868，上述各文獻之完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

本發明iRNA之一個或多個核苷酸亦可包括經羥甲基取代之核苷酸。「經羥甲基取代之核苷酸」為無環2’-3’-開環(seco)-核苷酸，亦稱為「非鎖核酸」(「UNA」)修飾。

教示UNA製法之代表性美國公告案包括(但不限於)：美國專利案案號8,314,227；及美國專利公告案案號2013/0096289；2013/0011922；及2011/0313020，上述各文獻之完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

RNA分子末端之可能安定化修飾法包括：N-(乙醯基胺基己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6-NHAc)、N-(己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6)、N-(乙醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-NHAc)、胸苷-2'-O-去氧胸苷(醚)、N-(胺基己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6-胺基)、2-廿二碳烷醯基-尿苷-3''-磷酸酯、反轉鹼基dT(idT)，等等。此修飾法之揭示內容可參見PCT公告案案號WO 2011/005861。

本發明某些態樣中，本發明雙股RNAi劑包括依例如：美國臨時申請案案號61/561,710(申請日2011年11月18日)或PCT/US2012/065691(申請日2012年11月16日)之揭示內容進行化學修飾之製劑，其等完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

本發明雙股RNA(dsRNA)劑可視需要接合一或多個配體。配體可以附接正義股、反義股或兩股之3’-端、5’-端或兩端。例如：配體可以接合正義股。較佳具體例中，配體係接合在正義股之3’-端。

一項具體例中，配體為碳水化合物接合物，如：單糖。一項具體例中，配體為N-乙醯基半乳糖胺(GalNAc)GalNAc或GalNAc衍生物。本發明某些具體例中，GalNAc或GalNAc衍生物係利用單價鏈結基附接本發明iRNA劑。有些具體例中，GalNAc或GalNAc衍生物係利用二價鏈結基附接本發明 iRNA劑。本發明又其他具體例中，GalNAc或GalNAc衍生物係利用三價鏈結基附接本發明iRNA劑。合適配體揭示於例如：美國專利申請案案號15/371,300及美國專利公告案案號2009/0239814，有關合適配體之完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。。

有些具體例中，配體(例如：GalNAc配體)係附接RNAi劑之3'端。一項具體例中，RNAi劑係經由鏈結基接合配體，例如：GalNAc配體，如下圖所示：

其中X為O或S。一項具體例中，X為O。

教示RNNA接合物製法之代表性美國專利案包括(但不限於)：美國專利案案號4,828,979；4,948,882；5,218,105；5,525,465；5,541,313；5,545,730；5,552,538；5,578,717, 5,580,731；5,591,584；5,109,124；5,118,802；5,138,045；5,414,077；5,486,603；5,512,439；5,578,718；5,608,046；4,587,044；4,605,735；4,667,025；4,762,779；4,789,737；4,824,941；4,835,263；4,876,335；4,904,582；4,958,013；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,245,022；5,254,469；5,258,506；5,262,536；5,272,250；5,292,873；5,317,098；5,371,241, 5,391,723；5,416,203, 5,451,463；5,510,475；5,512,667；5,514,785；5,565,552；5,567,810；5,574,142；5,585,481；5,587,371；5,595,726；5,597,696；5,599,923；5,599,928及5,688,941；6,294,664；6,320,017；6,576,752；6,783,931；6,900,297；7,037,646；8,106,022，其等完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

上述化合物不一定所有位置均經一致修飾，事實上可在單一化合物中或甚至在iRNA中之單一核苷上引進超過一個上述修飾。本發明亦包括呈嵌合化合物之iRNA化合物。

本發明內容中，「嵌合性」iRNA化合物或「嵌合體」為包含兩個或更多個化學上獨立區之iRNA化合物，較佳為dsRNA，該各區分別由至少一個單體單位組成，亦即以dsRNA化合物為例，為由核苷酸組成。此等iRNA通常包含至少一個區，其中RNA係經修飾，以致提高iRNA對抗核酸酶降解之抗性，提高細胞吸收性，及/或提高對標靶核酸之結合親和性。iRNA之額外一區可作為可以裂解RNA：DNA或RNA：RNA雜交體之酵素之受質。例如：RNase H為細胞內切核酸酶，其裂解RNA：DNA雙螺旋之RNA股。因此活化RNase H會裂解RNA標靶，藉以大幅加強iRNA抑制基因表現之效力。結果，當採用嵌合性dsRNA時，經常可以採用較短之iRNA得到類似硫代磷酸酯去氧dsRNA與相同標靶區雜交後得到之結果。RNA標靶之裂解作用照例可採用凝膠電泳分析法檢測，且若必要時，可聯合採用發明所屬技術領域中已知之核酸雜交技術。

某些例子中，iRNA之RNA可經過非配體基團修飾。許多種非配體分子已與iRNA接合，以加強iRNA之活性、細胞分佈性或細胞吸收性，且進行此等接合法之程序可從科學文獻中取得。此等非配體部份體包括脂質部份 體，如：膽固醇(Kubo,T.等人，Biochem.Biophys.Res.Comm.,2007,365(1)：54-61；Letsinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1989,86：6553)、膽酸(Manoharan等人，Biorg.Med. Chem.Let.,1994,4：1053)、硫醚，例如：己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人，Ann.N.Y. Acad.Sci.,1992,660：306；Manoharan等人，Biorg.Med.Chem.Let.,1993,3：2765)、硫膽固醇(Oberhauser等人，Nucl.Acids Res.,1992,20：533)、脂系鏈，例如：十二碳烷二醇或十一碳烷基(Saison-Behmoaras等人，EMBO J,1991,10：1111；Kabanov等人，FEBS Lett.,1990,259：327；Svinarchuk等人，Biochimie,1993,75：49)、磷脂，例如：二-十六碳烷-消旋性-甘油或1,2-二-O-十六碳烷基-消旋性-甘油基-3-H-膦酸三乙基銨鹽(Manoharan等人，Tetrahedron Lett.,1995,36：3651；Shea等人，Nucl.Acids Res.,1990,18：3777)、多元胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人，Nuclosides & Nuclotides,1995,14：969)、或金剛烷乙酸(Manoharan等人，Tetrahedron Lett.,1995,36：3651)、棕櫚基部份體(Mishra等人，Biochim.Biophys.Acta,1995,1264：229)、或十八碳烷基胺或己基胺基-羰基-氧膽固醇部份體(Crooke等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.,1996,277：923)。教示此等RNA接合物製法之代表性美國專利案已如上述。典型接合法程序涉及合成在序列之一個或多個位置帶有胺基鏈結基之RNA。該胺基再採用適當偶聯或活化試劑，與準備接合之分子反應。該接合反應可在RNA仍結合在固態擔體上時進行或可在裂解RNA後，在溶液相中進行。採用HPLC法純化RNA接合物，通常產生純接合物。

V.本發明之醫藥組成物之用途

本發明之醫藥組成物適用於醫療性及預防性處理患有可因降低Serpinc1表現而受益之疾患，如：出血疾患，例如：血友病(例如：血友病A、血友病B、或血友病C)之個體。

本文所採用術語「治療」或「處理」係指下列有利或所需結果，包括(但不限於)：減輕或緩和一或多種症狀、降低出血程度、安定(亦即不惡化)出血狀態、緩和或減緩出血(不論可檢測或不可檢測)、或解除出血。「治療」亦可意指比沒有接受治療時之預期存活性延長其存活。本發明方法中，治療包括依需要治療及控制出血事件、手術前後之出血處理、及例行性預防以降低出血事件頻率。

在個體或疾病標記物或症狀中之Serpinc1含量之相關內容中使用之術語「降低」意指在統計上顯著降低此等含量。其可降低例如：至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或更多，且較佳係降至未罹患此等疾患之個體之正常範圍內之可接受程度。

本文所採用「防止」或「預防」當用在可因降低Sertpinc1基因表現而受益之疾病、疾患或其病症時，意指可以降低個體發展出與此等疾病疾患、或病症有關之症狀(例如，如：出血之症狀)之可能性。例如：當具有一個或多個出血之危險因子之個體未出現出血或所出現之出血嚴重性比具有相同危險因子但未接受如本文所說明治療法之個體減輕時，即係降低發展出出血之可能性。未發展出疾病、疾患或病症，或減輕所發展出與此等疾病、疾患或病症有關之症狀(例如：針對該疾病或疾患之臨床上可接受指標減輕至少約10%)、 或延遲出現後來的症狀(例如：延遲數天、數週、數個月或數年)時，即視為有效預防。

可因降低及/或抑制Serpinc1基因表現而受益之個體為彼等罹患出血疾患，例如：先天性出血疾患或如本文所說明後天性出血疾患之個體。一項具體例中，該罹患先天性出血疾患之個體患有血友病，例如：血友病A、B、或C。一項具體例中，該罹患先天性出血疾患(例如：血友病)之個體為帶抑制抗體之個體(對置換凝血因子變得頑抗之個體)。一項具體例中，該帶抑制抗體之個體罹患血友病A。另一項具體例中，該帶抑制抗體之個體罹患血友病B。又另一項具體例中，該帶抑制抗體之個體罹患血友病C。可因降低及/或抑制Serpinc1基因表現而受益之個體之治療法包括醫療性(例如：依需要，例如：該個體在出血中(自發性出血或因創傷所致之出血)且無法凝血)及預防性(例如：該個體未出血及/或計畫接受手術)處理。

本文所採用術語「出血疾患」為造成血液凝結不良及/或過度出血之疾病或疾患。出血疾患可為先天性疾患，如：血友病或溫韋伯氏疾病(von Willebrand’s disease)，或與如下相關之後天性疾患，例如：散播性血管內凝血、與懷孕相關之子癲症、維生素K缺乏、自體免疫疾患、發炎性腸部疾病、潰瘍性結腸炎、皮膚疾患(例如：乾蘚、天皰瘡)、呼吸疾病(例如：氣喘、慢性阻塞性肺病)、過敏性藥物反應(例如：醫藥所造成，如：阿斯匹林、肝素、及苄丙酮香豆素(warfarin))、糖尿病、急性B型肝炎感染、急性C型肝炎感染、惡性或實體腫瘤(例如：前列腺、肺、大腸、胰臟、胃、膽管、頭與頸、子宮頸、乳房、黑色素瘤、腎臟、及/或血液性惡病質)。一項具體例中，該先天性出血疾患為血友病，例如：血友病A、B、或C。一項具體例中，罹患先天性出血疾 患(例如：血友病)之個體已經對置換凝血療法發展出抑制抗體，例如：同種異體抗體抑制抗體，本文中稱為「帶抑制抗體之個體」。一項具體例中，該帶抑制抗體之個體罹患血友病A。另一項具體例中，該帶抑制抗體之個體罹患血友病B。又另一項具體例中，該帶抑制抗體之個體罹患血友病C。

一項具體例中，出血疾患為罕見出血疾患(RBD)。RBD可能為後天RBD或遺傳性RBD。遺傳性RBD包括與缺少凝結因子纖維蛋白原、FII、FV、組合FV與FVIII、FVII、FX、FXI、FXIII、及先天性缺少維生素K-相關因子(VKCFD)有關之疾患。其等通常出現體染色體隱性病症，但有些例子中，如：FXI及異常纖維蛋白原血症，可能為體染色體顯性。出現RBD的大多數族群中，純合子或雙重雜合子發生率從FVII缺陷之500,000分之一變化至凝血酶原與FXIII缺陷之2百萬至3百萬分之一。

RBD實例包括纖維蛋白原血症(纖維蛋白原；因子I缺陷)；低纖維蛋白原血症(纖維蛋白原；因子I缺陷)；異常纖維蛋白原血症(纖維蛋白原；因子I缺陷)；低異常纖維蛋白原血症(纖維蛋白原；因子I缺陷)；低凝血酶原血症(凝血酶原；因子II缺陷)；凝血酶原缺陷(凝血酶原；因子II缺陷)；血栓形成傾向(凝血酶原；因子II缺陷)；先天性抗凝血酶III缺陷(促凝血酶原激酶；因子III；組織因子)；副血友病(促凝血球蛋白原；因子V；易變因子)；奧倫氏症(Owren’s disease)(促凝血球蛋白原；因子V；易變因子)；活化蛋白質C抗性(促凝血球蛋白原；因子V；易變因子)；亞歷山大症(Alexander’s disease)(安定因子前轉化素；因子VII)；先天性前轉化素/因子VII缺陷(安定因子前轉化素；因子VII)；Stuart-Prower缺陷(Stuart-Prower因子；因子X)；先天性因子XIIIa/b缺陷 (為纖維蛋白安定因子；因子XIII)；遺傳性因子XIII缺陷(纖維蛋白安定因子；因子XIII)；及纖維蛋白安定因子缺陷(纖維蛋白安定因子；因子XIII)。

本文所採用「醫療有效量」意指所包括RNAi劑用量當投予罹患出血疾患及出血中之個體時，足以治療疾病，例如：減輕、緩解或維持現有疾病或疾病之一或多種症狀。「醫療有效量」可能隨RNAi劑、該製劑之投予法、該疾病及其嚴重程度、及病史、年齡、體重、家庭病史、基因組態、可能進行之過去或併行之任何治療、及接受治療之個體之其他個人特徵而異。

本文所採用「預防有效量」意指所包括iRNA用量當投予罹患出血疾患但未在出血中之個體，例如：罹患出血疾患且計畫接受手術之個體時，足以預防或緩解疾病或疾病之一或多種症狀。疾病之緩解包括減慢疾病過程或降低後來發展之疾病之嚴重性。「預防有效量」可能隨iRNA、該製劑之投予法、該疾病之嚴重程度、及病史、年齡、體重、家庭病史、基因組態、可能進行之過去或併行之任何治療、及接受治療之患者之其他個別特徵而異。

「醫療有效量」或「預防有效量」亦包括RNAi劑可以在適用於任何治療之合理效益/風險比值下產生某些所需局部或全身性效應時之量。本發明方法所採用iRNA可能投予足以產生適用於此等治療之合理效益/風險比值之量。

「置換因子之建議醫療有效量」及「繞徑藥劑之建議醫療有效量」分別指在患有出血的個體中足以產生凝血酶及解除出血及/或足以達到由世界血友病聯盟(World Federation Of Hemophilia)所提供血漿因子高峰量時之置換因子或繞徑藥劑劑量(參見，例如：Srivastava等人「Guidelines for the Management of Hemophilia」,Hemophilia 2012年7月6日電子書； DOI：10.1111/j.1365-2516.2012.02909.x；ADVATE(抗血友病因子(重組體))產品插頁；11/2016；及BeneFIX(凝結因子IX(重組體)產品插頁；11/2011)。上述各文獻之完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

例如：針對輕度出血之個體之置換因子或繞徑藥劑之建議劑量為足以使血漿因子VIII高峰量達到約10-40IU/dL時之劑量；針對中度出血之個體之置換因子或繞徑藥劑之建議劑量為足以使血漿因子VIII高峰量達到約30-60IU/dL時之劑量；針對重度出血之個體之置換因子或繞徑藥劑之建議劑量為足以使血漿因子VIII高峰量達到約60至100IU/dL時之劑量；針對手術前後之個體之置換因子或繞徑藥劑之建議劑量為足以使血漿因子VIII高峰量達到約30-60IU/dL時之劑量(參見，例如：ADVATE(抗血友病因子(重組體))產品插頁之表1與2；11/2016)。

針對輕度出血之個體之置換因子或繞徑藥劑之建議劑量為足以使血漿因子IX高峰量達到約10-30IU/dL時之劑量；針對中度出血之個體之置換因子或繞徑藥劑之建議劑量為足以使血漿因子IX高峰量達到約25-50IU/dL時之劑量；針對重度出血之個體之置換因子或繞徑藥劑之建議劑量為足以使血漿因子IX高峰量達到約50至100IU/dL時之劑量。

本發明之醫藥組成物之方法與用途通常包括對罹患Serpinc1-相關疾病(例如：出血疾患，例如：血友病(例如：血友病A、血友病B、或血友病C)之個體投予本發明之醫藥組成物。本發明有些態樣中，該方法進一步包括對該個體投予額外醫療劑。

因此，一項態樣中，本發明提供一種為患有可因降低Serpinc1表現而受益之疾患(例如：出血疾患，例如：血友病)之個體預防至少一種症狀之 方法。該方法包括對個體，例如：人類投予包含預防有效劑量，例如：固定劑量約25mg至約100mg，例如：固定劑量約80mg之本發明iRNA劑(例如：dsRNA)之本發明之醫藥組成物，藉以為患有可因降低Serpinc1表現而受益之疾患之個體預防至少一種症狀。

另一項態樣中，本發明提供一種治療患有可因降低Serpinc1表現而受益之疾患(例如：出血疾患，例如：血友病)之個體，其包括對個體(例如：人類)投予包含醫療有效量，例如：固定劑量約25mg至約100mg，例如：固定劑量約80mg之靶向Serpinc1基因之iRNA劑之本發明之醫藥組成物或包含靶向Serpinc1基因之iRNA劑之醫藥組成物，藉以治療患有可因降低Serpinc1表現而受益之疾患之個體。

某些具體例中，本發明醫療與預防方法包括對個體投予醫藥組成物，其包含例如：可使個體之Serpinc1活性降低約75%或更多之用量之本發明iRNA劑，及醫療有效量之置換因子或繞徑藥劑，其用量係低於例如：世界血友病聯盟(World Federation Of Hemophilia)(參見，例如：Srivastava等人「Guidelines for the Management of Hemophilia」,Hemophilia 2012年7月6日電子書；DOI：10.1111/j.1365-2516.2012.02909.x)及/或食品及藥物管理局(Food and Drug Administration)((參見，例如：ADVATE(抗血友病因子(重組體))產品插頁；11/2016；BeneFIX(凝結因子IX(重組體)產品插頁；11/2011)建議之置換因子或繞徑藥劑醫療有效量(例如：足以產生凝血酶及解除出血(形成血塊)之用量)。上述各文獻之完整揭示內容已分別以引用之方式併入本文中。

合適置換因子包括因子VIII，例如：Advate、Eloctate、Haemate、Helixate、Immunate、Octanate、Recombinate、及Refacto，或因子 IX，例如：Aimafix、Benefix、Immunine、與Refacto。適用於本發明方法之繞徑藥劑包括活化凝血酶原濃縮複合物(aPCC)，例如：FEIBA及Prothromplex，及重組體因子VIIa(rFVIIa)，例如：NovoSeven。

置換因子可能為因子VIII，及在本發明方法中投予個體置換因子之醫療有效量為足以使血漿因子VIII高峰量達到約10-100IU/dL時之劑量，例如：約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、或約100IU/dL。

例如：投予個體因子VIII置換因子之醫療有效量可為低於約200IU/kg、或低於約190IU/kg、或低於約180IU/kg、或低於約170IU/kg、或低於約160IU/kg、或低於約150IU/kg、或低於約140IU/kg、或低於約130IU/kg、或低於約120IU/kg、或低於約110IU/kg、或低於約100IU/kg、或低於約90IU/kg、或低於約80IU/kg、或低於約70IU/kg、或低於約60IU/kg、或低於約50IU/kg、或低於約40IU/kg、或低於約30IU/kg、或低於約20IU/kg、或低於約10IU/kg。一項具體例中，投予個體因子VIII之醫療有效量比置換因子之建議有效量低約1.5倍至約5倍，如：劑量為約5至約20IU/kg或約10至約20IU/kg，例如：5、10、15、或20IU/kg。一項具體例中，出血事件為中度出血事件。另一項具體例中，出血事件為重度出血事件。

置換因子可為因子IX，及在本發明方法中投予個體置換因子之醫療有效量為足以使血漿因子IX高峰量達到約10-100IU/dL時之劑量，例如：約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、或約100IU/dL。

例如：因子IX置換因子之醫療有效量可為低於約200IU/kg、或低於約190IU/kg、或低於約180IU/kg、或低於約170IU/kg、或低於約160IU/kg、或低於約150IU/kg、或低於約140IU/kg、或低於約130IU/kg、或低於約120IU/kg、或低於約110IU/kg、或低於約100IU/kg、或低於約90IU/kg、或低於約80IU/kg、或低於約70IU/kg、或低於約60IU/kg、或低於約50IU/kg、或低於約40IU/kg、或低於約30IU/kg、或低於約20IU/kg、或低於約10IU/kg。一項具體例中，投予個體因子IX之醫療有效量比置換因子之建議有效量低約2倍至6倍，例如：劑量為約10至約30IU/kg或約20至約30IU/kg，如：約10、15、20、25、或30IU/kg。一項具體例中，出血事件為中度出血事件。另一項具體例中，出血事件為重度出血事件。

繞徑藥劑可為aPCC，及在本發明方法中投予個體繞徑藥劑之醫療有效量為足以產生凝血酶及解除出血時之劑量。

例如：繞徑藥劑aPCC之醫療有效量可為低於約100U/kg、或低於約90U/kg、或低於約80U/kg、或低於約70U/kg、或低於約60U/kg、或低於約50U/kg、或低於約40U/kg、或低於約30U/kg、或低於約20U/kg、或低於約10U/kg。一項具體例中，投予個體之PCC之醫療有效量比置換因子之建議有效量低約2倍至約3倍。例如：劑量為約30至約50U/kg，如：約30、35、40、45、或50U/kg。一項具體例中，出血事件為中度出血事件。另一項具體例中，出血事件為重度出血事件。

繞徑藥劑可為rFVIIa，及在本發明方法中投予個體繞徑藥劑之醫療有效量為足以產生凝血酶及解除出血時之劑量。

例如：繞徑藥劑rFVIIa之醫療有效量低於約120μg/kg、或低於約110μg/kg、或低於約100μg/kg、或低於約90μg/kg、或低於約80μg/kg、或低於約70μg/kg、或低於約60μg/kg、或低於約50μg/kg、或低於約40μg/kg、或低於約30μg/kg、或低於約20μg/kg。一項具體例中，投予個體rFVIIa之醫療有效量比置換因子之建議有效量低約2倍，例如：劑量為約45μg/kg。一項具體例中，出血事件為中度出血事件。另一項具體例中，出血事件為重度出血事件。

有些具體例中，包含dsRNA劑之醫藥組成物係依固定劑量投予個體。「固定劑量」(例如：以mg計之劑量)意指所有個體，不論任何特定個體相關因素，如：體重，僅採用一種劑量之iRNA劑。一項特定具體例中。本發明iRNA劑之固定劑量係依據預定體重或年齡決定。

有些具體例中，所投予包含iRNA劑之醫藥組成物之固定劑量為約25mg至約100mg之間，例如：約25mg至約95mg之間、約25mg至約90mg之間、約25mg至約85mg之間、約25mg至約80mg之間、約25mg至約75mg之間、約25mg至約70mg之間、約25mg至約65mg之間、約25mg至約60mg之間、約25mg至約50mg之間、約50mg至約100mg之間、約50mg至約95mg之間、約50mg至約90mg之間、約50mg至約85mg之間、約50mg至約80mg之間、約30mg至約100mg之間、約30mg至約90mg之間、約30mg至約80mg之間、約40mg至約100mg之間、約40mg至約90mg之間、約40mg至約80mg之間、約60mg至約100mg之間、約60mg至約90mg之間、約25mg至約55mg之間、約30mg至約95mg之間、約30mg至約85mg之間、約30mg至約75mg之間、約30mg至約65mg之間、約30mg至約55mg之間、約40mg至約95mg之 間、約40mg至約85mg之間、約40mg至約75mg之間、約40mg至約65mg之間、約40mg至約55mg之間、或約45mg至約95mg之間。

有些具體例中，包含iRNA劑之醫藥組成物係投予固定劑量約25mg、約30mg、約35mg、約40mg、約45mg、約50mg、約55mg、約60mg、約65mg、約70mg、約75mg、約80mg、約85mg、約90mg、約95mg、或約100mg。

一項具體例中，RNAi劑係投予個體固定劑量約100mg。

一項具體例中，投予個體之RNAi劑劑量使Serpinc1活性降低約75%或更多。

包含iRNA劑之醫藥組成物可投予個體一個或多個劑量。

包含iRNA之醫藥組成物可以投予個體約一個月一次、約每5週一次、約每6週一次、約每2個月一次、或每一季一次。

有些具體例中，醫藥組成物之單一劑量可以為長效性，因此可以在間隔不超過1、2、3、4、5、6、7、或8週才投予後續劑量。本發明有些具體例中，一個月一次投予單一劑量之本發明之醫藥組成物。一項具體例中，RNAi劑之固定劑量適合一個月一次投予個體，如：一個月一次固定劑量為80mg。

本發明之方法及用途包括投予本文所說明之組成物，藉以降低標靶Serpinc1基因之表現，如：為期約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、 63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、或約80天。一項具體例中，標靶Serpinc1基因之表現可長期降低，例如：至少約7天或更久，例如：約一週、兩週、三週、約四週、約5週、或約6週、約2個月、約一季、或更久。

可採用發明所屬技術領域中已知之任何方法分析基因表現之降低程度。例如可採用發明所屬技術領域中的技術人員已知之例如：北方墨點法、qRT-PCR等例行方法之一，測定Serpinc1之mRNA表現量，採用發明所屬技術領域中的技術人員已知之如：西方墨點法、免疫技術等例行方法之一，測定Serpinc1之蛋白質含量，及/或測定Serpinc1之生物活性，如：影響與細胞血液凝結機轉有關(或在活體內與血液凝結本身有關)之一或多種分子，來決定Serpinc1表現之降低程度。一項具體例中，使用例如：全血之ROTEM®血栓彈性分析，測定凝血酶形成時間、血塊形成時間與/或凝血時間，以分析Serpinc1表現。

根據本發明方法及用途投予dsRNA可能降低罹患Serpinc1-相關疾病之患者之此等疾病或疾患之嚴重性、癥兆、症狀與/或標記物。本文中「降低」意指在統計學上顯著降低此等含量。該降低量可為例如：至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或約100%。

治療或預防疾病之效力之評估法可為例如：測定疾病演進、疾病消退、症狀嚴重性、出血頻率、疼痛減輕、生活品質、需要維持治療效果時之醫藥劑量、適合該所治療疾病或預防目標之疾病標記物或任何其他可測量之參數值。發明所屬技術領域中的技術人員均有能力藉由測定其中任一種參數或 任何參數組合，來追蹤治療或預防之效力。例如：可能藉由例如：定期追蹤凝血酶：抗凝血酶含量，來評估出血疾患之治療效力。由後來之讀數與原始之讀數比較，即可指示醫師該治療是否有效。發明所屬技術領域中的技術人員均有能力藉由測定其中任一種參數或任何參數組合，來追蹤治療或預防之效力。在投予靶向Serpinc1之iRNA或其醫藥組成物之相關內容中，「有效對抗」出血疾患係指依臨床上適當方式投予時，可以讓至少統計上顯著比例之患者得到有利效應，如：改善症狀、治癒、減輕疾病、延長壽命、改善生活品質或熟悉治療出血疾患與相關病因之醫師通常認定為正向之其他效應。

當一或多種疾病狀態之參數出現統計上顯著改善時，或不會再惡化或發展出原本預期之症狀時，即證實該治療或預防效果。例如：疾病之可測定參數之有利變化為至少10%，較佳為至少20%、30%、40%、50%或更高，表示為有效之治療。針對特定iRNA藥物或該藥物之調配物之效力亦可採用發明所屬技術領域中已知針對該疾病之實驗動物模式來判斷。當採用實驗動物模式時，當觀察到標記物或症狀在統計學上顯著下降時，即證實有治療效力。

或者，可由熟悉此相關診斷技術者依據臨床上可接受之疾病嚴重性量表決定疾病嚴重性之降低程度，來測定其效力。採用適當量表測定之任何正向變化結果(例如：減輕疾病嚴重性)均代表使用本文所說明iRNA或iRNA調配物之適當治療。

本發明進一步提供一種使用iRNA或其醫藥組成物之方法及用途，例如：用於治療可因降低及/或抑制Serpinc1表現而受益之個體，例如：罹患出血疾患之個體，其係與其他醫藥及/或其他醫療方法組合，例如：與已知醫藥及/或已知醫療方法(如，例如：彼等目前用於治療此等疾患之方法)組合。

例如：某些具體例中，靶向Serpinc1之iRNA係與例如：適用於治療本文所說明出血疾患之製劑組合。例如：適用於治療可因降低Serpinc1表現而受益之個體(例如：罹患出血疾患之個體)之其他醫療劑及醫療方法包括新鮮冷凍血漿(FFP)；重組FVIIa；重組FIX；FXI濃縮劑；含病毒滅活之vWF之FVIII濃縮劑；去敏化療法，其可包括大劑量之FVIII或FIX，及類固醇或靜脈注射免疫球蛋白(IVIG)與環磷醯胺；血漿分離術組合免疫抑制及輸注FVIII或FIX，採用或不採用抗纖維蛋白溶解療法；誘發免疫耐受性(ITI)，採用或不採用免疫抑制療法(例如：環磷醯胺、潑尼松(prednisone)、與/或抗-CD20)；去胺增壓素(desmopressin)乙酸鹽[DDAVP]；抗纖維蛋白溶酶劑，如：胺基己酸及傳明酸(tranexamic acid)；活化凝血酶原複合物濃縮劑(PCC)；抗血友病劑；皮質類固醇；免疫抑制劑；及雌激素。

iRNA與額外醫療劑及/或治療法可同時投予及/或在相同組合中投予，例如：非經腸式，或該外加醫療劑可做為分開組成物之一部份投予或在分開時間投予及/或採用發明所屬技術領域中已知或本文說明之另一種方法投予。

VI.本發明之容器

本發明亦提供包含本發明之醫藥組成物之容器，如：小瓶、針筒、自動注射筆、或無針頭之投予裝置。

一項具體例中，本發明組成物可利用例如：預先填裝之針筒或自動注射裝置自我投予。

一項具體例中，包含本發明之醫藥組成物之容器為小瓶。小瓶可包括約0.5mL至約2.0ml之醫藥組成物。一項具體例中，小瓶包含約0.8ml之 醫藥組成物。一項具體例中，小瓶為包含單一劑量醫藥組成物之2R小瓶(亦即2ml注射小瓶)。一項具體例中，2R小瓶包含約0.80ml(例如：約0.96至約1.05mL)之包含單一80mg劑量之組成物之本發明之醫藥組成物。

一項具體例中，本發明容器包含針筒，如：預先填裝之針筒。一項具體例中，預先填裝之針筒包括防止尖銳針頭傷害之安全性設計(neddle sharp injury prevention safety feature(PFS-S))。合適針筒可為1ml針筒或3ml針筒，且包括29G針頭或30G針頭。一項具體例中，針筒為具有29G或30G針頭之單次用3ml玻璃針筒。一項具體例中，預先填裝之針筒包含約0.80ml(例如：約0.84ml，或0.8至0.84ml)之包含單一80mg劑量之組成物之本發明之醫藥組成物。

本發明預先填裝之針筒實例可包括針筒，如：BD Neopak，裝備29G X 1/2”針頭；硬式針套(RNS)；活塞，如：BD 4023活塞，具有FluroTec塗層；安全系統，如：BD UltraSafelm Plus；活塞桿，如：BD UltraSafe' Passive Plunger Rod；及指抓防滑凸緣，如：BD UltraSaferm Passive Add-on Finger。

VII.本發明套組

本發明亦提供包含醫藥組成物之套組。此等套組包括一或多個小瓶或一或多個預先填裝之針筒，其包含本發明之醫藥組成物及使用說明書，例如：說明預防或醫療有效量之RNAi劑(群)之投予法之說明書。套組可視需要進一步包含投予RNAi劑之方式(例如：注射裝置)，或測定Serpinc1之抑制性之方式(例如：測定Serpinc1 mRNA、Serpinc1蛋白質、與/或Serpinc1活性之抑制性之方式)。此等測定Serpinc1之抑制性之方式可包含從個體得到樣本(如，例如： 血漿樣本)之方式。本發明套組可視需要進一步包含測定醫療有效量或預防有效量之方式。

除非另有說明，否則本文中所有技術與科學術語均如熟悉本發明所屬相關技術者咸了解之相同定義。雖然可在操作或試驗如本發明所說明特徵之iRNA與方法時使用類似或等同如本文所說明之彼等方法與材料，但下文仍將說明合適之方法與材料。本文所述及所有公開文獻、專利申請案、專利案、及其他參考文獻之完整揭示內容已以引用之方式併入本文中。此外，該等材料、方法、及實例僅供舉例說明，並未加以限制。

本發明利用下列不應構成限制之實例說明。本申請案全文所摘錄之所有參考文獻、申請案與公開專利申請案均已以引用之方式併人本文中。

實例

實例1：菲特西蘭(Fitusiran)藥品

菲特西蘭藥品(Fitusiran)為在5mM磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)中包含100mg/mL菲特西蘭(等同106mg/mL菲特西蘭鈉)之皮下投予用無菌溶液。該藥品係呈0.8mL溶液含在2R第I型玻璃小瓶中，加裝塗佈鐵弗龍之丁基橡膠瓶塞的商品供應。該藥品不含防腐劑，且計畫供單次使用。

菲特西蘭藥品組成物綜合說明於表2。

Pharmacopeia)；Ph.Eur.=歐洲藥典(European Pharmacopeia)；USP=美國藥典(United States Pharmacopeia)；q.s.=補充到足量

如下示菲特西蘭之化學結構係採用出示磷酸酯骨架之放大結構式代表。涉及形成鹼基對之鹼基係以虛線連接。L96(包含GalNAc之配體)及接合配體至正義股3’-端之鏈結基之結構式亦示於下文中。菲特西蘭雙螺旋(AD-57213)之雙螺旋與兩個單股(AD-116858，正義股；A-116861，反義股)之分子式與質量亦提供於下表中。

Af,cf,Gf,Uf=2'-F-核糖核苷

Am,cm,Gm,Um=2'-OMe-核糖核苷

實例2：菲特西蘭調配物發展

菲特西蘭調配物係設計用於皮下投予。設計用於皮下投予之調配物不應太酸或太鹼，以避免提高刺激性及化學不相容性的風險。基於張力、pH、與黏度的考量，調配物的設計係儘可能接近生理性。菲特西蘭藥品在100mg/mL下之水溶液pH在5.0至6.8之間變化。鈉抗衡離子與陰離子性磷酸二酯之存在造成某些量的滲透濃度，其係隨水溶液濃度而定。標靶調配物在100mg/mL藥物物質下，抗衡離子產生約118mOsm/kg溶液。為了維持藥品之等滲性與緩衝能力，取藥物物質溶於5mM磷酸鹽緩衝生理食鹽水(0.64mM NaH2PO4、4.36mM Na2HPO4、84mM NaCl)。

上述藥品調配物具有下列物理化學性質：pH約6.8至約7.2；滲透濃度約300mOsm/kg；及密度約1.038g/mL。

菲特西蘭藥品製法包括由所需量粉末化(凍乾)菲特西蘭藥物物質溶於5mM磷酸鹽緩衝生理食鹽水，及使用氫氧化鈉或磷酸調整pH至約7.0，然後經過無菌過濾及填裝。

早期發展(包括非臨床與第1/2期臨床試驗)所採用之藥品係以100mg/mL(菲特西蘭鈉)溶液供應，每小瓶標稱0.5mL。第3期試驗所使用及計畫用 於商品之藥品係以100mg/mL(菲特西蘭游離酸，等同106mg/mL菲特西蘭鈉)供應，每小瓶標稱0.8mL。下表綜合說明菲特西蘭藥品調配物之差異。

實例3：菲特西蘭藥品之解析性分析

進行菲特西蘭藥品之各種不同解析性評估，以證實該藥品在物理上及化學上安定。

外觀

在黑白背景及漫射光均勻照明下，目視檢查菲特西蘭藥品的顏色、均質性、與粒狀物。

採用相同目視試驗，在不同批次之間進行菲特西蘭藥品的外觀試驗，其結果符合「透明、無色至淺黃色溶液，基本上沒有顆粒」的規格。

由雙螺旋之滯留時間判定

採用非變性IP RP-HPLC分析菲特西蘭藥品與菲特西蘭參考標準物，並由樣本之雙螺旋滯留時間與參考標準物比較。目前製造之所有菲特西蘭藥品批次均符合「滯留時間與參考標準物一致」的規格，證實其為黏合的siRNA雙螺旋。

菲特西蘭藥品之UV分析法

採用UV吸光法測定菲特西蘭藥品中菲特西蘭之分析(mg/mL)。由藥品在0.9%生理食鹽水中之合適稀釋液，採用UV光度計，在260nm下，測定吸光度。

C=(A×F×M)/(ε×b)，

其中A為測定之吸光度，F為稀釋因數，b為比色管之光徑(1cm)，ε為雙螺旋參考標準物之莫耳吸光度，M為分子量，及C為濃度(mg/mL)。考量雙螺旋純度，指定藥品之菲特西蘭分析結果係經過其純度因數校正(乘以(非變性IP-RP HPLC面積-%)/100)。

菲特西蘭藥品(mg/mL)之分析係由UV光度計測定，並校正非變性IP RP-HPLC方法所得到之雙螺旋純度，結果係依據H-型(游離酸)雙螺旋濃度表示。所有結果均在90至110mg/mL(以游離酸型測定)之規格限值內，平均分析值為101.5mg/mL，及標準偏差為3.4%。結果顯示所有測試之菲特西蘭批量之分析值之間均有良好的可比較性。

菲特西蘭藥品之pH

菲特西蘭藥品之pH係直接測定。比較菲特西蘭藥品批量之pH結果，觀察到pH為7.1，標準偏差為0.0。所有結果均符合目前菲特西蘭藥品的pH 6.0-8.0規格。分析菲特西蘭藥品批次之pH數據顯示，菲特西蘭批量之間有高度的可比較性。

菲特西蘭藥品之滲透濃度

菲特西蘭藥品之滲透濃度係依據凝固點下降原理。滲透濃度以mOsm/kg值表示。由於調配物具有來自磷酸鈉緩衝劑與菲特西蘭雙螺旋之固定鹽濃度，因此觀察到之滲透濃度值僅顯示狹窄範圍。菲特西蘭藥品批次之滲透濃度結果在297-310(mOsm/kg)範圍內，平均值304mOsm/kg及標準偏差5.3%。所有菲特西蘭藥品滲透濃度結果均在240-390mOsm/kg之規格內。

菲特西蘭藥品中之粒狀物質

採用不透光法分析每個容器中菲特西蘭藥品之不可目視(sub-visible)粒狀物質數量，結果係以每個容器的粒子(

10μm及

25μm)總數表示。菲特西蘭藥品中

10μm之粒子，觀察到的範圍為約29-588個粒子(

10μm)，平均約188個粒子，及標準偏差268.2%。所有結果均在每個容器菲特西蘭藥品為NMT 6,000之規格內。

25μm之粒子觀察到之範圍為約0-46個粒子，平均約13個粒子，及標準偏差22.4%。所有結果均在每個容器菲特西蘭藥品為NMT 600之規格內。

菲特西蘭藥品之容器體積

包含菲特西蘭藥品之容器體積係採用設定在不低於(NLT)0.8mL之規格限值測定。不同菲特西蘭藥品批量觀察到之容器體積顯示菲特西蘭藥品批次之間具有良好的可比較性程度，標準偏差為0.0。

菲特西蘭藥品批次之細菌內毒素與無菌性

所有批次之菲特西蘭藥品均符合細菌內毒素之微生物安全性試驗標準(不超過(NMT)100個內毒素單位(EU)/mL)，證實適當控制菲特西蘭藥品製程及其微生物安全性型態。

非變性離子對逆相高效液相層析法(IP RP-HPLC)之雙螺旋純度

非變性IP RP-HPLC從任何殘留之單股中解析雙螺旋。採用此方法測定雙螺旋之面積百分比純度。由滯留時間判別之菲特西蘭藥品之藥物物質與雙螺旋參考標準物一致。

採用與質譜(ESI-MS)串聯之非變性IPRP HPLC方法判別藥品中之組成單股，正義股與反義股。從殘留之單股中解析雙螺旋波峰，採用此方法測定雙螺旋純度。菲特西蘭藥品之代表性IP RP層析圖譜示於第1圖。

固定相：Waters XBridge C8 2.1×50管柱，2.5μm粒度。

移動相A：95mM 1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(HFIP)、16mM三乙胺(TEA)、5μM乙二胺四乙酸(EDTA)，含於水中。

移動相B：100%甲醇，含5μM EDTA

流速：0.25mL/min.

管柱溫度：15℃

梯度：

檢測：針對700至2700Da，260nm UV及陰離子模式MS

樣本製備：樣本係於1X PBS中製成濃度~0.1mg/mL(針對單股中間物)及0.2mg/mL(針對雙螺旋藥物物質(菲特西蘭))。

注射體積為20μL。

檢測限值：採用層析軟體進行積分及報告所有

至0.05面積%之波峰。

純度計算：採用層析軟體計算主要雙螺旋波峰之面積%，並以雙螺旋純度報告。亦報告殘留單股及其他雜質之面積%。

判別：採用層析軟體，由液相層析質譜(LC-MS)之雙螺旋波峰經過解卷積測得之分子量確立存在於相同雙螺旋波峰下之組成單股，正義股與反義股。

菲特西蘭藥品經過非變性IP RP-HPLC之非變性型態證實藥品呈其雙螺旋型式存在。由雙螺旋純度指示菲特西蘭藥品中黏合雙螺旋siRNA之百分比。本試驗所包括之藥品批次中，雙螺旋純度值在約98.9-99.5面積%範圍內。數據分析得到平均(n=4)純度約99.2%，標準偏差約0.3%，並顯示此報告中所比較的所有菲特西蘭藥品批次之雙螺旋純度值彼此一致且類似。

非變性離子對逆相高效液相層析法(IP RP-HPLC)測定之總雜質

由非變性IP RP-HPLC測定之非雙螺旋(非黏合)雜質係以所有

0.050面積%之(非雙螺旋)波峰總和報告。本試驗包括的所有菲特西蘭藥品批次觀察到由非變性IP RP-HPLC測定之總雜質結果在2%以內，均符合NMT 10.0面積%之規格。由非變性IP RP-HPLC測定之總雜質之平均值(n=4)在0.85%之內，標準偏差0.3%。總言之，結果顯示本報告中所檢視之菲特西蘭藥品批量在明確(單股)及不明確的兩種雜質均具有極類似型態。

變性陰離子交換高效液相層析法(AX-HPLC)測定之純度

為了測定藥品中單股純度，進行變性AX-HPLC分析。

由於硫代磷酸酯的非對映異構物而出現反義股多重波峰。菲特西蘭藥品之代表性AX-HPLC層析圖譜示於第2圖。

固定相：Dionex DNA Pac PA200管柱，4 x 250mm

移動相A：20mM磷酸鈉，10% ACN，pH 11

移動相B：20mM磷酸鈉，1M NaBr，10% ACN，pH 11

梯度：

檢測限值：採用層析軟體進行積分，及報告所有

0.05面積%之波峰

純度計算：由層析軟體計算各主要波峰(正義股及反義股)之面積%，且以正義股與反義股之面積%總和報告純度。以超過0.050面積%之雜質之面積%總和報告總雜質。

判別：由試驗樣本的滯留時間與對應參考標準物比較，證實單股判別性。

由菲特西蘭雙螺旋經過AX-HPLC變性，形成組成份正義與反義單股。採用此方法證實單股之面積百分比純度分析。

變性AX-HPLC方法測定構成菲特西蘭雙螺旋之個別單股之純度。單股面積百分比總和代表菲特西蘭藥品之變性純度。本試驗中，菲特西蘭批量的正義股與反義股之面積%總和分析得到平均值(n=4)為94.2面積%，標準 偏差0.8%。來自代表性菲特西蘭藥品批次的所有結果符合NLT 85.0面積%的規格，並顯示菲特西蘭藥品的整體相當類似的純度結果。

由變性陰離子交換高效液相層析法(AX-HPLC)測定總雜質

由所有NLT 0.050面積%雜質總和之數據分析得到平均值(n=4)5.6%，標準偏差0.7%。結果顯示本報告中所包括菲特西蘭批次的總雜質數值一致而且相當類似。

由變性離子對逆相高效液相層析法(IP RP-HPLC)測定之純度

由菲特西蘭雙螺旋經過IP RP-HPLC變性，形成組成之正義與反義單股。採用本方法測定單股之面積百分比純度。

變性IP RP-HPLC方法係與AX-HPLC分別獨立，並測定藥品中構成菲特西蘭雙螺旋之個別單股的純度。單股面積百分比總和代表菲特西蘭藥品之變性IP RP-HPLC純度。

亦進行變性IP RP-HPLC分析法來決定藥品中單股純度。

固定相：Waters XBridge C18(OST或XP)2.1×50管柱，2.5μm粒度。

移動相A：550mM 1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(HFIP)、13mM三甲基胺(TEA)、與5M乙二胺四乙酸(EDTA)之90：10水：甲醇溶液。

移動相B：100%甲醇

流速：0.40mL/min.

管柱溫度：80℃

梯度：

檢測：260nm UV及陰離子模式MS，700至2700Da

樣本製備：樣本係於1X PBS中製成濃度~0.1mg/mL(單股中間物)及0.2mg/mL(雙螺旋藥物物質(菲特西蘭))。

注射體積：25μL

檢測限值：採用層析軟體進行積分，及報告所有

至0.05面積%之波峰。

純度計算：採用層析軟體計算主要雙螺旋波峰之面積%，並以雙螺旋純度報告。亦報告殘留單股及其他雜質之面積%。

菲特西蘭藥品之代表性變性IP RP-HPLC層析圖型示於第3圖。

本試驗中，菲特西蘭批量的正義股與反義股之面積%總和分析得到平均值(n=4)為88.7面積%，標準偏差1.4%。菲特西蘭藥品批量的所有結果均符合NLT 80.0面積%的規格，並顯示菲特西蘭藥品批量的相當類似的純度結果，均在分析變異範圍內。

由變性離子對逆相高效液相層析法(IP RP-HPLC)測定之總雜質

由所有NLT 0.050面積%之雜質總和之數據分析得到平均值(n=4)為11.0%，標準偏差1.5%。結果顯示本報告中包括的所有菲特西蘭批次的總雜質數值一致而且類似。

實例4：容器封裝系統及菲特西蘭藥品之可相容性

選擇菲特西蘭藥品之容器封裝系統來保護無菌產品免於微生物污染。小瓶經過

300℃乾燥加熱

5分鐘，進行殺菌及排除熱原。丁基橡膠瓶塞在121至125℃高壓釜中

60分鐘。丁基橡膠瓶塞經過高壓釜的驗證循環進行蒸氣殺菌。所有組份均為供非經腸式產品用之標準項目。採用儲存在相同容器封裝系統中之藥品進行菲特西蘭藥品安定性試驗。

調配菲特西蘭供皮下注射。依據估算的計算劑量，採用1mL或3mL針筒投予。取這兩種針筒，其中一種使用聚碳酸酯構成材料，第二種使用聚丙烯構成材料，測試其等與菲特西蘭之相容性。抽出填裝在小瓶中的100mg/mL藥品至針筒中。由一組已填裝的針筒在25℃培養8h，另一組已填裝的針筒在2-8℃培養48h，均與對照組一起培養。培養後，測試藥品，利用AX-HPLC分析純度，並與小瓶裝的藥品比較。在標示及純度上，對照組藥品與在兩種針筒中培養的藥品之間沒有差異，表示菲特西蘭與計畫的注射裝置具有相容性，如下表3所示。

縮寫：AX-HPLC=陰離子交換高效液相層析法；NA=不適用；小瓶中之對照組=計畫用於臨床試驗之小瓶中之菲特西蘭藥品。

1進行本試驗時，分析值係以菲特西蘭鈉表示。

亦分析使用較高G值針頭(較細針頭)進行抽取及推送未稀釋之藥品，針筒之構成材料係與表3所示者相同。分析兩種針筒及兩種推送速率。結果示於表4，並證實當使用29或30G針頭時，菲特西蘭藥品仍保持完整。

實例5：菲特西蘭藥品之儲存安定性分析

在2至8℃的建議儲存條件下及在一或多種加速條件下，收集菲特西蘭藥品之儲存安定性數據。安定性試驗係依據國際協調會議關於人用藥品註冊技術要求指導文件(International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use(ICH)Guideline)Q1A(R2)設計，樣本係儲存在與用於儲存臨床材料時相同的封裝容器中(亦即2mL USP第I型玻璃小瓶，加裝鐵弗龍表面的丁基酵橡膠瓶塞)。所收集的安定性數據示於表5。

縮寫：AX-HPLC=陰離子交換HPLC；IPRP-HPLC=離子對逆向HPLC

採用下列分析製程分析菲特西蘭藥品安定性傾向：目視外觀、利用UV光度計分析、pH、滲透濃度、由非變性IPRP-HPLC測定雙螺旋純度、及由兩種獨立方法測定單股純度：變性AX HPLC測定之純度及變性IPRP-HPLC測定之純度。

為了進一步闡明藥品之熱安定性，包括數項安定性試驗：於25℃/60%RH長期分析藥品，及在40℃/75%RH進行6個月加速老化試驗。收集其他數據(亦即在25℃/60%RH超過6個月，及在40℃/75%RH收集的所有數據)，以便分析藥品在ICH第II區氣候條件下長期儲存的適宜性。

三批代表性菲特西蘭藥品(P02314、P02715、與P07916)之儲存安定性數據提供於表6至14，並綜合說明如下。已在2至8℃之建議儲存條件，收集菲特西蘭藥品長達36個月的安定性數據。在2至8℃儲存期間，已判別任何參數均沒有顯著變化，表示此條件適合藥品的長期儲存。此外，在25℃/60%RH儲存期間，或甚至在40℃/75%RH儲存期間，均沒有觀察到顯著變化。基於此點，及在ICH第II區氣候條件(亦即25℃/60%RH)下分析藥品長期儲存的適宜性，認為在2-8℃儲存的菲特西蘭藥品之貨架壽命為36個月，並由從最後更新的時間所收集的其他數據進一步證實。

<110> 美商健贊公司(Genzyme corporation)

<120> SERPINC1 iRNA組成物及其使用方法

<130> 117811-03020

<140>

<141>

<150> 62/793,020

<151> 2019-01-16

<160> 16

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1599

<212> DNA

<213> 智人

<400> 1

<210> 2

<211> 1545

<212> DNA

<213> 普通獼猴

<400> 2

<210> 3

<211> 2171

<212> DNA

<213> 小鼠

<400> 3

<210> 4

<211> 1561

<212> DNA

<213> 褐家鼠

<400> 4

<210> 5

<211> 1599

<212> DNA

<213> 智人

<400> 5

<210> 6

<211> 1545

<212> DNA

<213> 普通獼猴

<400> 6

<210> 7

<211> 2171

<212> DNA

<213> 小鼠

<400> 7

<210> 8

<211> 1561

<212> DNA

<213> 褐家鼠

<400> 8

<210> 9

<211> 16

<212> PRT

<213> 未知

<220>

<221> 來源

<223> /註=〞未知的描述：RFGF肽〞

<400> 9

<210> 10

<211> 11

<212> PRT

<213> 未知

<220>

<221> 來源

<223> /註=〞未知的描述：RFGF類似物肽〞

<400> 10

<210> 11

<211> 13

<212> PRT

<213> 人類免疫缺乏病毒

<400> 11

<210> 12

<211> 16

<212> PRT

<213> 果蠅

<400> 12

<210> 13

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註=〞人工序列的描述：合成寡核苷酸〞

<400> 13

<210> 14

<211> 23

<212> RNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註=〞人工序列的描述：合成寡核苷酸〞

<400> 14

<210> 15

<211> 23

<212> RNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註=〞人工序列的描述：合成寡核苷酸〞

<400> 15

<210> 16

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註=〞人工序列的描述：合成寡核苷酸〞

<400> 16

無，皆為實驗數據。

Claims (55)

1. 一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，包括濃度約50mg/mL至約200mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約1mM至約10mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，

   其中該醫藥組成物之pH及滲透濃度適合皮下投予給個體，

   其中該dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，

   其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及

   其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中該配體與該鏈結基具有下述結構式：

   

   ，其中該dsRNA劑係呈 游離酸型。
2. 一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，包括濃度約50mg/mL至約200mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑，及濃度約1mM至約10mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，

   其中該醫藥組成物之pH及滲透濃度適合皮下投予給個體，

   其中dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，

   其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及

   其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中該配體與該鏈結基具有下述結構式：

   

   ，其中該dsRNA劑係呈 鹽型。
3. 如申請專利範圍第2項所述之醫藥組成物，其中該鹽型為鈉鹽型。
4. 如申請專利範圍第3項所述之醫藥組成物，其中該製劑中實質上所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包括鈉抗衡離子。
5. 如申請專利範圍第3項所述之醫藥組成物，其中該製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包括鈉抗衡離子。
6. 如申請專利範圍第1至4項中任一項所述之醫藥組成物，其中PBS之濃度為約2mM與約7mM之間。
7. 如申請專利範圍第6項所述之醫藥組成物，其中PBS之該濃度為約3至約6mM。
8. 如申請專利範圍第7項所述之醫藥組成物，其中PBS之該濃度為約5mM。
9. 如申請專利範圍第1至8項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物之pH為約5.0至約8.0之間。
10. 如申請專利範圍第9項所述之醫藥組成物，其中該組成物之pH為約6.0至約8.0之間。
11. 如申請專利範圍第10項所述之醫藥組成物，其中該組成物之pH為約6.5至約7.5之間。
12. 如申請專利範圍第11項所述之醫藥組成物，其中該組成物之pH為約6.8至約7.2之間。
13. 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物之滲透濃度為約50與約400mOsm/kg之間。
14. 如申請專利範圍第13項所述之醫藥組成物，其中該組成物之該滲透濃度為約100與約400mOsm/kg之間。
15. 如申請專利範圍第14項所述之醫藥組成物，其中該組成物之該滲透濃度為約240與約390mOsm/kg之間。
16. 如申請專利範圍第15項所述之醫藥組成物，其中該組成物之該滲透濃度為約290與約320mOsm/kg之間。
17. 如申請專利範圍第1至16項中任一項所述之醫藥組成物，其中該醫藥組成物中之該dsRNA劑之濃度為約50mg/mL與約150mg/mL之間。
18. 如申請專利範圍第17項所述之醫藥組成物，其中該醫藥組成物中之該dsRNA劑之該濃度為約80mg/mL與約110mg/mL之間。
19. 如申請專利範圍第18項所述之醫藥組成物，其中該醫藥組成物中之該dsRNA劑之該濃度為約100mg/mL。
20. 如申請專利範圍第1至19項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物當儲存在約2℃至約8℃時，可安定長達約36個月。
21. 如申請專利範圍第1至19項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物當儲存在約25℃及60%相對濕度(RH)時，可安定長達約36個月。
22. 如申請專利範圍第1至19項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物當儲存在約40℃及75%相對濕度(RH)時，可安定長達約6個月。
23. 如申請專利範圍第1至22項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物包括由非變性IPRP-HPLC純度所測定之不低於(NLT)約90.5面積%之雙螺旋及不超過(NMT)約5面積%之單股。
24. 如申請專利範圍第1至22項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物包括由變性AX-HPLC純度所測定之不低於(NLT)約85.0面積%之總單股。
25. 如申請專利範圍第1至22項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物包括由變性IPRP-HPLC純度所測定之不低於(NLT)約80.0面積%之總單股。
26. 一種小瓶，包括如申請專利範圍第1至25項中任一項所述之醫藥組成物。
27. 如申請專利範圍第26項所述之小瓶，其中該小瓶包括約0.5mL至約2.0ml之該醫藥組成物。
28. 如申請專利範圍第27項所述之小瓶，其中小瓶包含約0.8ml之醫藥組成物。
29. 一種針筒，包括如申請專利範圍第1至25項中任一項所述之醫藥組成物。
30. 如申請專利範圍第29項所述之針筒，其中該針筒為1ml針筒。
31. 如申請專利範圍第29項所述之針筒，其中該針筒為3ml針筒。
32. 如申請專利範圍第29至31項中任一項所述之針筒，其中該針筒包含29G針頭。
33. 如申請專利範圍第29至31項中任一項所述之針筒，其中該針筒包含30G針頭。
34. 一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，包括濃度約100mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，

    其中該醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，

    其中該醫藥組成物之滲透濃度為約300mOsm/kg，

    其中該dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷 酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，

    其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及

    其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中該配體與該鏈結基具有下述結構式：

    

    ，其中dsRNA劑係呈游 離酸型。
35. 一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，包括濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，

    其中該醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，

    其中該醫藥組成物之滲透濃度為約300mOsm/kg，

    其中該dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，

    其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及

    其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中該配體與該鏈結基具有下述結構式：

    

    ，其中該dsRNA劑係呈 鹽型。
36. 如申請專利範圍第35項所述之醫藥組成物，其中該鹽型為鈉鹽型。
37. 如申請專利範圍第36項所述之醫藥組成物，其中製劑中實質上所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包括鈉抗衡離子。
38. 如申請專利範圍第36項所述之醫藥組成物，其中製劑中所有磷酸二酯與/或硫代磷酸酯基團包括鈉抗衡離子。
39. 一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，包括濃度約100mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，

    其中該醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，

    其中該dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，

    其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及

    其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中該配體與該鏈結基具有下述結構式：

    

    ，其中該dsRNA劑係呈 游離酸型。
40. 一種抑制Serpinc1基因表現之醫藥組成物，其包含濃度約106mg/mL之雙股核糖核酸(dsRNA)劑及濃度約5mM之磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)，

    其中該醫藥組成物之pH為約6.8至約7.2，

    其中該dsRNA劑具有由如下核苷酸序列組成之正義股：5’-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3’(SEQ ID NO：941)及由如下核苷酸序列組成之反義股：5’-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3’(SEQ ID NO：960)，

    其中a、g、c、與u為2'-O-甲基(2'-OMe)A、G、C、與U；Af、Gf、Cf、與Uf為2'-氟A、G、C、U；及s為硫代磷酸酯鏈結，及

    其中配體經由鏈結基接合至正義股之3’端，及其中該配體與該鏈結基具有下述結構式：

    

    ，其中該dsRNA劑係呈 鹽型。
41. 如申請專利範圍第34至40項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物當儲存在約2℃至約8℃時，可安定長達約36個月。
42. 如申請專利範圍第34至40項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物當儲存在約25℃及60%相對濕度(RH)時，可安定長達約36個月。
43. 如申請專利範圍第34至40項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物當儲存在約40℃及75%相對濕度(RH)時，可安定長達約6個月。
44. 如申請專利範圍第34至40項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物包括由非變性IPRP-HPLC純度所測定之不低於(NLT)約95.0面積%之雙螺旋，及不超過(NMT)約5面積%之單股。
45. 如申請專利範圍第34至44項中任一項所述之醫藥組成物，其中組成物包括由變性AX-HPLC純度所測定之不低於(NLT)約85.0面積%之總單股，其係。
46. 如申請專利範圍第34至44項中任一項所述之醫藥組成物，其中該組成物包括由變性IPRP-HPLC純度所測定之不低於(NLT)約80.0面積%之總單股。
47. 一種小瓶，包括如申請專利範圍第34至46項中任一項所述之醫藥組成物。
48. 如申請專利範圍第47項所述之小瓶，其中該小瓶包括約0.5mL至約2.0ml之該醫藥組成物。
49. 如申請專利範圍第48項所述之小瓶，其中該小瓶包含約0.8ml之該醫藥組成物。
50. 一種針筒，包括如申請專利範圍第34至46項中任一項所述之醫藥組成物。
51. 如申請專利範圍第50項所述之針筒，其中該針筒為1ml針筒。
52. 如申請專利範圍第50項所述之針筒，其中該針筒為3ml針筒。
53. 如申請專利範圍第50至52項中任一項所述之針筒，其中該針筒包括29G針頭。
54. 如申請專利範圍第50至52項中任一項所述之針筒，其中該針筒包括30G針頭。
55. 如申請專利範圍第50至52項中任一項所述之針筒，其中該針筒為預先填裝之針筒。

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