Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

KR20210028222A - 항종양 면역 체크포인트 조절 길항제 - Google Patents

항종양 면역 체크포인트 조절 길항제 Download PDF

Info

Publication number
KR20210028222A
KR20210028222A KR1020217002981A KR20217002981A KR20210028222A KR 20210028222 A KR20210028222 A KR 20210028222A KR 1020217002981 A KR1020217002981 A KR 1020217002981A KR 20217002981 A KR20217002981 A KR 20217002981A KR 20210028222 A KR20210028222 A KR 20210028222A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
antibody
immunoglobulin
Prior art date
Application number
KR1020217002981A
Other languages
English (en)
Inventor
잭키 쉥
보 리유
마가레트 카로우
웨이 장
Original Assignee
젠선 바이오파마, 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 젠선 바이오파마, 인코포레이티드 filed Critical 젠선 바이오파마, 인코포레이티드
Publication of KR20210028222A publication Critical patent/KR20210028222A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2318/00—Antibody mimetics or scaffolds
    • C07K2318/10—Immunoglobulin or domain(s) thereof as scaffolds for inserted non-Ig peptide sequences, e.g. for vaccination purposes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/32—Fusion polypeptide fusions with soluble part of a cell surface receptor, "decoy receptors"

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

면역 체크포인트 조절제에 특이적으로 결합하는 항종양 길항제가 개시된다. 또한 항종양 길항제를 사용하여 증식성 장애를 치료하는 방법이 개시된다.

Description

항종양 면역 체크포인트 조절 길항제
본 출원은 2018년 6월 29일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제62/691,658호 및 2019년 3월 26일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제62/823,989호의 우선권을 주장하며, 이의 내용은 본원에 인용되어 본원에 명시적으로 포함된다.
기술분야
본 출원은 일반적으로 암 치료, 특히 종양형성 및 종양 면역과 관련된 경로를 조절할 수 있는 이중특이적 억제제에 관한 것이다.
숙주가 암세포를 제거하지 못하는 것은 여전히 큰 문제로 남아있다. 다양한 암의 치료를 위한 치료용 단클론 항체의 승인이 증가하고 있지만, 암의 성장 및 전이로의 진행의 기초가 되는 다양한 분자 경로를 고려할 때, 이러한 항체에 대한 내성의 출현이 자주 관찰된다. 면역계가 암 예방의 주요 메커니즘이지만, 암세포는 면역감시를 방해한다. 제한되지 않은 T-세포 활성으로 인한 부수적 손상을 방지하기 위한 T-세포 활성화를 제한하는 자연 제어 메커니즘이 확인되었다. 이러한 과정은 면역 반응을 회피하기 위해 종양 세포에 의해 악용되었다. 면역 효과기 세포, 특히 T 세포의 능력을 회복하여 암을 인식하고 제거하는 것이 면역요법의 주요 목적이다.
개선된 치료 결합 길항제 또는 항체 및 이러한 제제로 암 및 만성 바이러스 감염을 치료하는 방법에 대한 필요성이 존재한다.
본 출원의 일 양태는 면역 체크포인트 조절제에 특이적으로 결합하는 제1 표적화 도메인; TIGIT에 특이적으로 결합하는 scFv 형태의 제2 표적화 도메인; 및 제1 및 제2 표적화 도메인에 구조적으로 연결된 면역글로불린 스캐폴드를 포함하는 이중특이적 항종양 길항제에 관한 것으로서, 여기서 제1 표적화 도메인은 길항제의 N-말단 끝에 위치하고, 제2 표적화 도메인은 길항제의 C-말단 끝에 위치하고 링커를 통해 면역글로불린 스캐폴드에 연결된다. 일부 실시형태에서, 링커는 아미노산 서열 G4S의 4개 또는 6개 카피를 포함한다(각각 4x G4S 및 6xG4S).
일부 실시형태에서, 제1 표적화 도메인은 PD-1, PD-L1 또는 LAG-3에 특이적으로 결합한다.
본 출원의 또 다른 양태는 LAG-3에 대한 리간드의 결합을 억제하는 인간화된 항-LAG-3 항체에 관한 것이다.
본 출원의 또 다른 양태는 세포 증식성 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 유효량의 본 출원의 이중특이적 항종양 길항제 또는 항-LAG-3 항체를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함한다.
도 1은 특정 항-TIGIT mAb의 상보성 결정 영역(CDR) 서열을 보여준다. 항-TIGIT CDR 서열 옆에 있는 프레임워크 영역(FR) 서열이 도 39a에 SEQ ID NOS: 216-262로 열거되어 있다.
도 2a 내지 2c는 항-TIGIT 항체 가변 도메인 서열의 일부 실시형태를 보여준다.
도 3은 특정 항-PD-1 mAb의 CDR 서열을 나타낸다. 항-PD-1 CDR 서열 옆의 FR 서열은 도 39b에 SEQ ID NOS: 263-292로 열거되어 있다.
도 4a 내지 4b는 항-PD-1 항체 가변 도메인 서열의 일부 실시형태를 보여준다.
도 5는 특정 항-PD-L1 mAb의 CDR 서열을 보여준다. 항-PD-L1 CDR 서열 옆의 FR 서열은 도 39c에 SEQ ID NOS: 293-315로 열거되어 있다.
도 6a 내지 6c는 항-PD-L1 항체 가변 도메인 서열의 일부 실시형태를 보여준다.
도 7a 내지 7c는 예시적인 이중특이적 항종양 길항제, Bi-TPM-93(도 7a), Bi-TPM-94A(도 7b), 및 Bi-TPM-94B(도 7c)를 도시한다.
도 8은 도 7a 내지 7c에 도시된 이중특이적 길항제의 기능적 도메인의 배열을 요약한다.
도 9a 및 9b는 도 7a 내지 7c에 도시된 이중특이적 길항제에 해당하는 중쇄(HC) 및 경쇄(LC) 아미노산 서열을 나타낸다.
도 10은 Bi-TPM-94AIC50=0.15 nM)가 Bi-TPM-93(IC50=0.83 nM)에 비해 PD-1와 이의 리간드, PD-L1 간의 상호작용을 더 잘 차단함(을 보여주는 차단 분석을 도시한다.
도 11은 인간 배아 신장(HEK) 293 세포에서 일시적으로 발현된 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B의 비-환원 PAGE 분석을 보여준다.
도 12는 Bi-TPM-94B에서 링커 변형에 의해 제거된 Bi-TPM-93 및 Bi-TPM-94에서 종 이질성을 나타내는 크기-배제 초-고성능 액체 크로마토그래피(SE-UHPLC) 분석을 나타낸다.
도 13a는 PD-1에 대한 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B의 결합 친화도가 PD-1에 대한 벤치마크 항-PD-1 항체의 결합 친화도보다 더 강하다는 것을 보여준다. 도 13b는 TIGIT에 대한 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B의 결합 친화도가 TIGIT에 대한 벤치마크 항-TIGIT 항체의 결합 친화도보다 더 강하다는 것을 보여준다.
도 14a 및 14b는 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B가 리간드인 인간 PVR(CD155)(도 14a)로의 TIGIT 결합을 강력하게 차단하고 리간드인 PD-L1(도 14b)으로의 PD-1 결합을 차단함을 보여준다.
도 15는 huPD-1-Fc 코팅된 96 웰 플레이트를 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B의 연속 희석 샘플로 인큐베이션하고, 이어서 His-태그 huTIGIT 단백질과 인큐베이션하여 결합된 분자를 HRP-접합된 항-His 태그 Ab 및 TMB 기질을 사용하여 검출하는 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B에 의한 PD-1 및 TIGIT의 동시 결합을 입증하는 ELISA 분석의 결과를 보여준다.
도 16a 및 16b는 모 항-PD-1 및 항-TIGIT 항체 개별 또는 이의 조합 및 음성 대조군에 비해 Bi-TPM-94B를 사용한 인간 PBMC(공여자 287, 도 16a; 공여자 401, 도 16b)에서 IFN-γ 분비가 증가했음을 보여준다.
도 17a 및 17b는 Bi-TPM-94B가 공여자 287 PBMC(도 17a) 및 공여자 401 PBMC(도 17b)로부터의 1차 인간 T 세포의 증식을 모 항-PD-1 및 항-TIGIT 항체 개별 또는 이의 조합, 및 음성 대조군보다 더 크게 향상시킴을 보여준다.
도 18은 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B가 6 내지 10주령 암컷 CD1 마우스에 꼬리 정맥 주사 후 유사한 생체 내 반감기(T1/2)를 가짐을 보여주는 약동학 프로파일이다. 이중특이적 길항제는 주사 후 다양한 시간에 취한 혈청으로부터 회수하였고 ELISA로 분석하였다.
도 19a는 항-LAG-3 mAb 2L2A.1, 2L2A.6, 2L27B 및 3L1A에 해당하는 중쇄 CDR 서열을 보여준다. 도 19b는 항-LAG-3 mAbs 2L2A.1, 2L2A.6, 2L27B 및 3L1A에 해당하는 경쇄 CDR 서열을 보여준다. 항-LAG-3 CDR 서열 옆의 FR 서열이 도 39c에 SEQ ID NOS: 316-337로 열거되어 있다.
도 20은 항-LAG-3 mAb 2L2A.1, 2L2A.6, 2L27B 및 3L1A의 VH 및 VL 서열을 보여준다.
도 21a 및 21b는 LAG-3 결합을 차단하는 항-LAG-3 mAb의 능력을 확인하는 분석 결과를 보여준다.
도 22는 벤치마크(BM) 항-LAG-3 mAb인 항-LAG-3 mAb 2L2A.1과 키메라 2L2A 항체(SEQ ID NOS: 203 및 204)가 LAG-3-muFc와 이의 주요 리간드인 Raji 세포에서 발현되는 주요 조직적합성 복합체(MHC: major histocompatibility complex) 항원 간 상호작용을 차단하는 능력을 측정하는 세포-기반 차단 분석의 결과를 보여준다. 분석 데이터를 도시된 IC50 값(nm)을 계산하는데 사용하였다.
도 23a 및 23b는 결합 친화도 상수와 함께, 표면 플라즈몬 공명(SPR: surface plasmon resonance)에 의해 결정된 인간 LAG-3-His(도 23a) 또는 인간 LAG-3-mIgG2a(도 23b)에 결합하기 위한 항-LAG-3 2L2A.1 mAb의 친화도 분석을 보여준다.
도 24는 항-LAG-3 mAb 변이체, 2L2A.1 또는 벤치마크 항체(BM)의 LAG-3에 대한 결합을 나타내며, 이는 기준선과 최대 값 사이의 절반에서 반응을 생성하는 최대 유효 농도의 절반(EC50)을 포함한다.
도 25는 HEK293을 일시적으로 발현하는 인간화된 항-LAG-3 mAb 변이체 2L2A.1의 비-변성 폴리아크릴아미드 겔(PAGE) 분석을 보여준다. 양성 대조군은 HybPL1(1PL11　CDRg-VH:1PL25　CDRg-VL)이다.
도 26은 활성화된 인간 CD3+ T 세포에서 LAG-3 및 PD-1의 동시-발현을 보여주는 FACS 분석이다.
도 27a 및 27b는 IFN-γ 생산을 나타내며, 2개의 공여자(공여자 0105, 도 27a; 공여자 0817, 도 27b)로부터의 PBMC는 96웰 플레이트에서 스타필로코칼 엔테로톡신 B(SEB; 레인 2 내지 4)로 자극되었거나 SEB로 자극되지 않았다(레인 1). 자극 후, 공여자 PBMC를 다음과 함께 인큐베이션 하였다: 항체 없음(레인 1, 2), 항-LAG-3 벤치마크(BM) 항체(레인 3), 또는 항-LAG-3 mAb, 2L2A.1. 상기 분석의 결과는 2L2A.1가 항-LAG-3 벤치마크 항체보다 두 공여자 PBMC에서 IFN-γ 생산을 더 많이 유도함을 보여주었다.
도 28a 내지 28c는 SEB로 자극되었거나(레인 2 내지 4) SEB로 자극되지 않은(레인 1) 3개의 공여자 인간 PBMC(공여자 223, 도 28a; 공여자 224, 도 28b; 공여자 225, 도 28c)로부터 IFN-γ 생산이 증가되었음을 나타낸다. 또한, 공여자 PBMC를 다음과 함께 인큐베이션하였다: 항체 없음(레인 1, 2), 항-LAG-3 벤치마크(BM) 항체(레인 3) 또는 항-LAG-3 mAb 2L2A.1.
도 29a 내지 29c는 벤치마크 항-LAG-3 항체에 비해 항-LAG-3 mAb 2L2A.1이 공여자 223(도 29a), 공여자 224(도 29b) 및 공여자 225(도 29c)로부터의 1차 인간 T 세포의 증식을 더 많이 향상시킴을 보여준다.
도 30a 및 30b는 2개의 예시적인 이중특이적 항종양 길항제인, Bi-LT-1(도 30a) 및 Bi-LT-3(도 30b)을 도시한다.
도 31은 도 30a 및 30b에 도시된 이중특이적 길항제의 기능적 도메인의 배열을 요약한다.
도 32는 도 30a 및 30b에 도시된 이중특이적 길항제에 해당하는 중쇄(HC) 및 경쇄(LC) 아미노산 서열을 나타낸다.
도 33a 및 33b는 이중특이적 길항제인 LT-1 및 LT-3, 및 이중특이적 길항제인 Bi-TPM-94B 또는 항-LAG-3 벤치마크 mAb가 LAG-3-muFc와 이의 주요 리간드인 Raji 세포에서 발현되는 주요 조직적합성 복합체(MHC) 항원 사이의 상호작용을 차단하거나(도 33a) TIGIT와 이의 리간드인 인간 PVR(CD155) 사이의 상호작용을 차단하는(도 33b) 능력을 측정하는 세포-기반 차단 분석 결과를 보여준다. 분석 데이터를 도시된 IC50 값(nm)을 계산하는데 사용하였다.
도 34는 Bi-LT-1, Bi-LT-3 또는 모 항-LAG-3 mAb에 의한 LAG-3 및 TIGIT의 동시 결합을 입증하는 ELISA 분석 결과를 보여주며, 여기서 LAG-3-muFc 코팅된 96 웰 플레이트는 Bi-LT-1, Bi-LT-3 또는 모 항-LAG-3 mAb의 연속 희석된 샘플과 함께 인큐베이션하고, 이어서 His-태그 huTIGIT 단백질과 함께 인큐베이션하였으며, 이에 따라 결합된 분자를 HRP-접합된 항-His 태그 HRP 및 TMB 기질을 사용하여 검출하였다. 분석 데이터를 도시된 EC50 값(nm)을 계산하는데 사용하였다.
도 35a 내지 35d는 6 내지 10주령 암컷 CD1 마우스에 꼬리 정맥 주사 후 모 항-LAG-3 mAb(도 35a), 항-LAG-3 벤치마크 mAb(도 35b), Bi-LT-1(도 35c), 또는 Bi-LT-3(도 35d)에 해당하는 약동학 프로파일 및 생체 내 반감기(T1/2)를 도시한다. 주사 후 다양한 시간에 취한 혈청으로부터 항체 및 이중특이적 길항제를 회수하고 ELISA로 분석하였다. 모 항-LAG-3 mAb, Bi-LT-1 및 Bi-LT-3에 대한 T1/2는 5 내지 6일이었고, 항-LAG-3 BM mAb에 대한 T1/2는 2일(마우스 3) 또는 7일(마우스 4)이었다.
도 36a는 7일 후 4℃에서 균질성 및 우수한 안정성을 나타내는 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3의 크기 배제 크로마토그래피(SEC: size exclusion chromatography) 프로파일을 나타낸다. 도 36b는 0일 및 7일차에 이량체 종과 비교하여(Bi-LT-1의 경우 각각 98.4%, 98.3% 및 Bi-LT-3의 경우 각각 98.4%, 98.1%) 0일 및 7일차에 고분자량(HMW: high molecular weight) 종의 낮은 수준(Bi-LT-1의 경우 각각 1.3%, 1.5% 및 Bi-LT-3의 경우 각각 1.3%, 1.4%) 및 0일 및 7일차에 저분자량(LMW) 종(Bi-LT-1의 경우 각각 0.2%, 0.2% 및 Bi-LT-3의 경우 각각 0.3%, 0.5%)의 낮은 수준으로 반영되는 바와 같이, 단백질 A 정제된 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3의 종 균질성을 나타내는 크기-배제 초-고성능 액체 크로마토그래피(SE-UHPLC) 분석을 보여준다.
도 37a 및 37b는 SHP-77 세포(도 37a) 또는 H358 세포(도 37b)의 존재 하에 스타필로코칼 엔테로톡신 B(SEB; 레인 2 내지 8)로 자극되었거나 SEB로 자극되지 않고(레인 1), 이어서 다음과 함께 인큐베이션된 인간 PBMC로부터의 IFN-γ 생산을 보여준다: 항체 없음(레인 1, 2); 인간 IgG(레인 3); 모 항-TIGIT B21-35 mAb(레인 4); 모 항-LAG-3 2L2A.1 mAb(레인 5); 모 mAbs, 항-TIGIT B21-35 및 항-LAG-3 2L2A.1 mAb(레인 6); Bi-LT-1(레인 7); 및 Bi-LT-3(레인 8).
도 38은 SHP-77 세포(레인 2 내지 8) 및 인간 IgG 대조군(레인 3), 항-TIGIT mAb B21-35(레인 4),　항-LAG-3 mAb(레인 5), 항-TIGIT mAb 및 항-LAG-3 mAb의 조합(레인 6), Bi-LT-1(레인 7) 또는 Bi-LT-3(레인 8)의 존재 하에 SEB로 자극된 인간 PBMC로부터의 CD4 T 세포의 증식을 보여준다.
도 39a는 도 1의 항-TIGIT CDR에 해당하는 프레임워크 영역(FR)을 보여준다. 도 39b는 도 3의 항-PD-1 CDR에 해당하는 FR을 보여준다. 도 39c는 도 5의 항-PD-L1 CDR에 해당하는 FR을 보여주며 상기 FR은 도 19a 및 19b의 항-LAG-3 CDR에 해당한다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 개시된 방법 및 조성물이 속하는 당업계의 숙련자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원 및 첨부된 명세서에서 사용된 바와 같이, 단수 형태(a," "an," 및 "the")는 문맥에서 명백히 달리 지시하지 않는 한 복수의 참조를 포함한다는 점에 유의해야 한다. 따라서, 예컨대 "펩티드"에 대한 언급은 "하나 이상의" 펩티드들 또는 "복수의" 이러한 펩티드를 포함한다. 본 출원의 교시와 관련하여, 본 출원에 기술된 임의의 발행된 특허 또는 특허 출원 공보는 본원에 참조로 명시적으로 포함된다.
본원에 사용된 용어 "TIGIT"는 임의의 형태의 TIGIT 및 적어도 부분적으로 TIGIT의 활성을 보유하고 있는 이의 변이체를 지칭한다. 예컨대 인간 TIGIT에 대한 특정 지칭과 같이 다르게 지시되지 않는 한, TIGIT는 모든 포유류 종, 예컨대 인간, 개, 고양이, 말, 및 소의 천연 서열 TIGIT를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "PD-1"은 임의의 형태의 PD-1 및 적어도 부분적으로 PD-1의 활성을 보유하고 있는 이의 변이체를 지칭한다. 예컨대 인간 PD-1에 대한 특정 지칭과 같이 다르게 지시되지 않는 한, PD-1은 모든 포유류 종, 예컨대 인간, 개, 고양이, 말, 및 소의 천연 서열 PD-1을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "PD-L1"은 임의의 형태의 PD-L1 및 적어도 부분적으로 PD-L1의 활성을 보유하고 있는 이의 변이체를 지칭한다. 예컨대 인간 PD-L1에 대한 특정 지칭과 같이 다르게 지시되지 않는 한, PD-L1은 모든 포유류 종, 예컨대 인간, 개, 고양이, 말, 및 소의 천연 서열 PD-L1을 포함한다.
용어 "작용제"는 다른 분자의 생물학적 활성 또는 효과를 촉진(즉, 유도, 유발, 향상, 또는 증가)시키는 물질을 지칭한다. 용어 작용제는 항체와 같은 수용체에 결합하는 물질 및 이에 결합하지 않고 수용체 기능을 촉진하는 물질(예컨대 관련 단백질을 활성화 함으로써)을 포함한다.
용어 "길항제" 또는 "억제제"는 수용체 또는 리간드와 같이, 또 다른 분자의 생물학적 활성 또는 효과를 예방, 차단, 억제, 중화, 또는 감소시키는 물질을 지칭한다. 길항제는 단일특이적 항체 또는 이중특이적 항체일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 하나 이상의 면역글로불린 가변 영역을 통해 항원을 특이적으로 인식하고 결합하는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 복합체를 지칭한다. 항체는 전체 항체, 항원 결합 단편 또는 이의 단일 쇄일 수 있다. 용어 "항체"는 생화학적으로 구별될 수 있는 다양한 광범위한 부류의 폴리펩티드를 포함한다. 당업자는 중쇄가 알파, 델타, 엡실론, 감마, 및 mu, 또는 α, δ, ε, γ 및 μ)로 분류되고 이들 중 일부는 하위 부류(예컨대 γ1 내지 γ4)가 있음을 이해할 것이다. 각각 IgG, IgM, IgA IgG, 또는 IgE와 같은 항체의 "부류"를 결정하는 것은 이러한 사슬의 특성이다. 면역글로불린 하위부류(이소타입) 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등은 특징이 잘 나타나 있으며 기능적 전문화를 부여하는 것으로 공지되어 있다. 이러한 부류 및 이소타입 각각의 수정된 버전은 본 개시내용을 고려하여 당업자가 쉽게 식별할 수 있고, 따라서, 본 개시내용의 범주 이내에 있다. 모든 면역글로불린 부류는 본 개시내용의 범주 이내에 있으며, 다음의 논의는 일반적으로 면역글로불린 분자의 IgG 부류에 관한 것이다.
본 개시내용의 항체는 비제한적으로 다클론, 단클론, 다중특이적, 이중특이적, 인간, 인간화된, 영장류화된, 키메라 및 단일 쇄 항체를 포함한다. 본원에 개시된 항체는 조류 및 포유류를 포함하여 임의의 동물 기원으로부터 유래될 수 있다. 바람직하게는, 항체는 인간, 쥐, 랫트, 당나귀, 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 라마, 말, 또는 닭 항체이다. 일부 실시형태에서, 가변 영역은 기원이 콘드리크토이드일 수 있다(예컨대 상어 기원).
용어 "항체 단편" 및 "항원-결합 단편"은 항체의 일부, 예컨대 F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab, Fv, 단일-쇄 Fv(scFv), 단일-쇄 항체, 이황화-결합된 Fv(sdFv), VL 또는 VH 도메인을 포함하는 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해 생산된 단편, 및 항-이디오타입(항-Id) 항체를 지칭하는데 사용된다. 구조와 관계 없이, 항체 단편은 온전한 항체가 인식하는 것과 동일한 항원과 결합한다. 용어 "항체 단편"은 DART 및 디아바디를 포함한다. 용어 "항체 단편"은 또한 복합체를 형성하기 위해 특이적 항원에 결합함으로써 항체와 같이 작용하는 면역글로불린 가변 영역을 포함하는 임의의 합성 또는 유전적으로 조작된 단백질을 포함한다. "단일-쇄 단편 가변" 또는 "scFv"는 면역글로불린의 중쇄(VH) 및 경쇄(VL)의 가변 영역의 융합 단백질을 지칭한다. 일부 양태에서, 영역은 10개 내지 약 25개의 아미노산의 짧은 링커 펩티드와 연결된다. 링커는 유연성을 위해 글리신이 풍부할 수 있고, 용해도를 위해 세린 또는 트레오닌이 풍부할 수 있으며, VH의 N-말단이 VL의 C-말단에 연결될 수 있거나 그 반대일 수 있다. 이러한 단백질은 불변 영역을 제거하고 링커를 도입했음에도 불구하고 본래의 면역글로불린의 특이성을 유지한다. IgG와 관련하여, 표준 면역글로불린 분자는 분자량이 약 23,000 달톤의 2개의 동일한 경쇄 폴리펩티드, 및 분자량이 53,000 내지 70,000의 2개의 동일한 중쇄 폴리펩티드를 포함한다. 4개의 사슬은 전형적으로 "Y" 모양으로 이황화 결합에 의해 결합되어 있으며, 여기서 경쇄는 Y의 입구에서 시작하여 가변 영역을 통해 계속되는 중쇄를 브라켓으로 묶는다.
경쇄 및 중쇄 둘 모두 구조적 및 기능적 상동성 영역으로 나누어진다. 용어 "불변" 및 "가변"은 기능적으로 사용된다. 이와 관련하여, 경쇄(VL) 및 중쇄(VH) 부분 모두의 가변 도메인이 항원 인식 및 특이성을 결정함을 인지할 것이다. 반대로, 경쇄(CL) 및 중쇄(CH1, CH2 또는 CH3)의 불변 도메인은 분비, 태반 이동성, Fc 수용체 결합, 보체 결합 등과 같은 중요한 생물학적 특성을 부여한다. 관례적으로, 통상적인 항체에서 불변 영역 도메인의 번호는 이들이 항체의 항원-결합 부위 또는 아미노-말단으로부터 더 멀어짐에 따라 증가한다. 통상적인 항체에서, N-말단 부분은 가변영역이고 C-말단 부분은 불변 영역이고; CH3 및 CL 도메인은 실제로 각각 중쇄 및 경쇄의 카복시-말단을 포함한다.
전술한 바와 같이, 가변 영역은 항체가 항원 상의 에피토프를 선택적으로 인식하고 특이적으로 결합할 수 있도록 한다. 즉, 항체의 VL 도메인 및 VH 도메인, 또는 상보성 결정 영역(CDR)의 서브세트가 결합하여 3차원 항원-결합 부위를 정의하는 가변 영역을 형성한다. 이러한 4차 항체 구조는 Y의 각 팔 끝에 존재하는 항원-결합 부위를 형성한다. 보다 구체적으로, 항원-결합 부위는 VH 및 VL 사슬 각각에서 3개의 CDR에 의해 한정된다(즉 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3). 일부 예에서, 예컨대 특정 면역글로불린 분자는 낙타류 종에서 유래하거나 낙타류 면역글로불린을 기반으로 조작된다. 대안적으로, 면역글로불린 분자는 경쇄가 없이 중쇄로만 또는 중쇄가 없이 경쇄로만 구성될 수 있다.
자연 발생 항체에서, 각각의 항원-결합 도메인에 존재하는 6개의 CDR은 항체가 수성 환경에서 3차원 배열을 가정하기 때문에 항원-결합 도메인을 형성하도록 특이적으로 위치하는 아미노산의 짧은, 인접하지 않은 서열이다. "프레임워크" 영역으로 지칭되는 항원-결합 도메인의 나머지 아미노산은 분자간 가변성이 더 적다. 프레임워크 영역은 주로 β-시트 형태를 채택하고 CDR은 β-시트 구조를 연결하고 일부 경우 이의 일부를 형성하는 루프를 형성한다. 따라서, 프레임워크 영역은 사슬 간, 비-공유 상호작용에 의해 CDR을 올바른 배향으로 배치하는 스캐폴드를 형성하는 역할을 한다. 배치된 CDR에 의해 형성된 항원-결합 도메인은 면역반응성 항원 상의 에피토프에 상보적인 표면을 한정한다. 이러한 상보적인 표면은 동족 에피토프에 대한 항체의 비-공유 결합을 촉진한다. CDR 및 프레임워크 영역을 각각 포함하는 아미노산은 정확하게 한정되어 있기 때문에 당업자에 의해 임의의 주어진 중쇄 및 경쇄 가변 영역에 대해 쉽게 식별될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "VH1" 및 "VH2"는 2개의 상이한 결합 특이성에 상응하는 면역글로불린 중쇄 가변 도메인을 지칭한다. 마찬가지로, 용어 "VL1" 및 "VL2"는 2개의 상이한 결합 특이성에 상응하는 경쇄 가변 도메인을 지칭한다. 함께 사용되는 경우, VH1 및 VL1 영역은 공통 결합 특이성을 한정하고 VH2 및 VL2 도메인은 제2 결합 특이성을 한정한다는 점을 이해해야 한다.
본원에서 사용된 용어 "프레임워크 영역(FR)"은 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 각 가변 도메인은 전형적으로 해당 CDR 옆에 있는 4개의 FR을 갖는다. 예컨대, VH 도메인은 전형적으로 HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4의 형태에서 3개의 HCDR 옆에 있는 4개의 HFR: HFR1, HFR2, HFR3 및 HFR4를 갖는다. 유사하게, LH 도메인은 FR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4의 형태에서 3개의 LCDR 옆에 있는 4개의 LFR을 갖는다. 본원에 기술된 길항제에서 이용될 수 있는 예시적인 FR은 도 39a 내지 39c에 요약되어 있다.
경쇄는 카파 또는 람다(κ, λ)로 분류된다. 각각의 중쇄 부류는 카파 또는 람다 경쇄와 결합될 수 있다. 일반적으로, 경쇄와 중쇄는 서로 공유결합되고, 2개의 중쇄의 "꼬리" 부분은 면역글로불린이 하이브리도마, B 세포 또는 유전적으로 조작된 숙주 세포에 의해 생성될 때, 공유 이황화 결합 또는 비-공유 결합으로 서로 결합된다. 중쇄에서, 아미노산 서열은 Y 배열의 갈래 말단에 있는 N-말단에서 각 사슬의 하단에 있는 C-말단까지 이어진다.
본원에 사용된 용어 "경쇄 불변 영역" 또는 "CL"은 항체 경쇄로부터 유래된 아미노산 서열과 관련하여 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 바람직하게는, 경쇄 불변 영역은 적어도 하나의 불변 카파 도메인 또는 불변 람다 도메인을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "중쇄 불변 영역"은 면역글로불린 중쇄로부터 유래한 아미노산 서열을 포함한다. 중쇄 불변 영역을 포함하는 폴리펩티드는 CH1 도메인, 힌지(예컨대, 상부, 중간, 및/또는 하부 힌지 영역) 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 이의 변이체 또는 단편 중 적어도 하나를 포함한다. 예컨대, 본 개시내용에서 사용하기 위한 항원-결합 폴리펩티드는 CH1 도메인을 포함하는 폴리펩티드 사슬; CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 일부, 및 CH2 도메인을 포함하는 폴리펩티드 사슬; CH1 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩티드 사슬; CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 일부, 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩티드 사슬, 또는 CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 일부, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩티드 사슬을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 폴리펩티드는 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩티드 사슬을 포함한다. 또한, 본 개시내용에서 사용하기 위한 항체는 CH2 도메인의 적어도 일부가 없을 수 있다(예컨대, CH2 도메인의 전부 또는 일부). 중쇄 불변 영역은 자연 발생 면역글로불린 분자로부터 아미노산 서열이 변하도록 변형될 수 있음을 이해해야 한다. 예컨대, 본 출원의 발명자들은 CH3 도메인의 Fc 루프가 상당한 삽입(예컨대 100 aa 초과)을 허용하거나 수용할 수 있음을 발견하였다.
본원에 개시된 항체의 중쇄 불변 영역은 상이한 면역글로불린 분자로부터 유래될 수 있다. 예컨대, 폴리펩티드의 중쇄 불변 영역은 IgG1 분자로부터 유래된 CH1 도메인 및 IgG3 분자로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 중쇄 불변 영역은 부분적으로 IgG1 분자, 및 부분적으로 IgG3 분자로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 중쇄 부분은 부분적으로 IgG1 분자, 및 부분적으로 IgG4 분자로부터 유래된 키메라 힌지를 포함할 수 있다.
"경쇄-중쇄 쌍"은 경쇄의 CL 도메인과 중쇄의 CH1 도메인 사이에 이황화 결합을 통해 이량체를 형성할 수 있는 경쇄 및 중쇄의 집합을 지칭한다.
다양한 면역글로불린 부류의 불변 영역의 서브유닛 구조 및 3차원 형태가 잘 알려져 있다. 본원에 사용된 용어 "VH 도메인"은 면역글로불린 중쇄의 아미노 말단 가변 도메인을 포함하고 용어 "CH1 도메인"은 면역글로불린 중쇄의 제1(가장 아미노 말단) 불변 영역 도메인을 포함한다. CH1 도메인은 VH 도메인에 인접하고 면역글로불린 중쇄 분자의 힌지 영역에 대한 아미노 말단이다.
본원에서 사용된 용어 "CH2 도메인"은 통상적인 넘버링 방식을 사용하여 예컨대 약 잔기 244에서 잔기 360의 항체로 연장되는 중쇄 분자의 부분을 포함한다(잔기 244 내지 360, Kabat 넘버링 시스템; 및 잔기 231 내지 340, EU 넘버링 시스템). CH2 도메인은 다른 도메인과 쌍을 이루지 않는다는 점에서 고유하다. 오히려, 2개의 N-연결된 분지형 탄수화물 사슬이 온전한 천연 IgG 분자의 2개의 CH2 도메인 사이에 개재된다. CH3 도메인은 CH2 도메인에서 IgG 분자의 C-말단까지 확장되며 대략 108개의 잔기를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "힌지 영역"은 CH1 도메인을 CH2 도메인에 연결하는 중쇄 분자의 일부를 포함한다. 이러한 힌지 영역은 대략 25개의 잔기를 포함하며 유연하므로, 2개의 N-말단 항원-결합 영역이 독립적으로 이동할 수 있다. 힌지 영역은 상부, 중간, 및 하부 힌지 도메인의 3개의 개별적인 도메인으로 세분화될 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "이황화 결합"은 2개의 황 원자 사이에 형성된 공유 결합을 포함한다. 아미노산 시스테인은 제2 티올기와 이황화 결합 또는 다리를 형성할 수 있는 티올기를 포함한다. 대부분의 자연 발생 IgG 분자에서, CH1 및 CL 영역은 이황화 결합에 의해 연결되고 2개의 중쇄는 Kabat 넘버링 시스템(위치 226 또는 229, EU 넘버링 시스템)을 사용하여 239 및 242에 해당하는 위치에서 2개의 이황화 결합에 의해 연결된다.
본원에서 사용된 항체, 항체 단편 또는 항체 도메인의 "변이체"는 (1) 본래의 항체, 항체 단편 또는 항체 도메인과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열 동일성을 공유하고, (2) 본래의 항체, 항체 단편 또는 항체 도메인이 특이적으로 결합하는 것과 동일한 표적에 특이적으로 결합하는 항체, 항체 단편 또는 항체 도메인을 지칭한다. 서열 동일성의 척도가 "적어도 x% 동일한" 또는 "적어도 x% 동일성"이라는 문구의 형태로 제시되는 경우, 이러한 실시형태는 하한과 같거나 그 이상의 모든 정수 백분율을 포함한다는 것을 이해해야 한다. 또한, 본 출원에서 아미노산 서열이 제시되는 경우, 이는 추가적으로 그 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일성의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 개시하거나 포함하는 것으로 해석되어야 함을 이해해야 한다.
본원에서 사용된 문구 "인간화된 항체"는 비-인간 항체, 전형적으로 마우스 단클론 항체로부터 유래한 항체를 지칭한다. 대안적으로, 인간화된 항체는 모, 비-인간 항체의 항원 결합 특이성을 보유하거나 실질적으로 보유하는 키메라 항체로부터 유래될 수 있지만 인간에 투여될 때 모 항체와 비교하여 감소된 면역원성을 나타낸다.
본원에 사용된 어구 "키메라 항체"는 면역반응 영역 또는 부위가 제1 종으로부터 수득되거나 유래되고 불변 영역(본 개시내용에 따라 온전하거나, 부분적이거나 변형될 수 있음)은 제2 종으로부터 수득되는 항체를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 표적 결합 영역 또는 부위는 비-인간 공급원(예컨대 마우스 또는 영장류)에서 유래할 것이고 불변 영역은 인간이다.
본 출원의 다중특이적 항체의 범위 내에 포함되는 것은 비대칭 IgG-유사 항체(예컨대, 트리오맙/콰드로마(triomab/quadroma), Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인투-홀 항체(Genentech); Cross MAbs(Roche); 정전기적으로 일치하는 항체(AMGEN); LUZ-Y(Genentech); 가닥 교환 조작된 도메인(SEED) 바디(EMD Serono; biolonic, Merus); Fab-교환 항체(Genmab), 대칭 IgG-유사 항체(예컨대, 이중 표적화(DT)-Ig(GSK/Domantis); 투-인-원 항체(Genentech); 가교결합된 MAbs(Karmanos Cancer Center), mAb2(F-star); Cov X-바디(Cov X/Pfizer); 이중 가변 도메인(DVD)-Ig 융합(Abbott); IgG-유사 이중특이적 항체(Eli Lilly); Ts2Ab(Medimmune/AZ); BsAb(ZymoGenetics); HERCULES(Biogen Idec,TvAb, Roche); scFv/Fc 융합; SCORPION(Emergent BioSolutions/Trubion, ZymoGenetics/BMS); 이중 친화도 재표적화 기술(Fc-DART), MacroGenics; 이중 (scFv)2-Fabs(National Research Center for Antibody Medicine); F(ab)2 융합(Medarex/AMGEN); 이중-작용 또는 Bis-Fab(Genentech); 도크-앤-락(DNL, ImmunoMedics); Fab-Fv(UCB-Celltech); scFv- 및 디아바디-기반 항체(예컨대, 이중특이적 T 세포 참여자(BiTE, Micromet); 텐덤 디아바디(Tandab, Affimed); DART(MacroGenics); 단일-쇄 디아바디; TCR-유사 항체(AIT, Receptor Logics); 인간 혈청 알부민 scFv 융합(Merrimack); COMBODIES(Epigen Biotech); 및 IgG/non-IgG 융합(예컨대, 면역사이토카인(EMDSerono, Philogen, ImmunGene, ImmunoMedics)를 포함하여, 다양한 조성물 및 방법론이다.
"특이적으로 결합한다" 또는 "특이성을 갖는다"는 일반적으로 항체가 이의 항원-결합 도메인을 통해 에피토프에 결합하고, 결합이 항원-결합 도메인과 에피토프 사이에 약간의 상보성을 수반한다는 것을 의미한다. 이러한 정의에 따르면, 항체는 임의의 관련 없는 에피토프에 결합하는 것 보다 더 쉽게 이의 항원-결합 도메인을 통해 해당 에피토프에 결합할 때 에피토프에 "특이적으로 결합한다"고 일컬어 진다. 용어 "특이성"은 특정 항체가 특정 에피토프에 결합하는 상대적 친화도를 규정하기 위해 본원에서 사용된다. 예컨대, 항체 "A"는 항체 "B"보다 주어진 에피토프에 대해 더 높은 특이성을 갖는 것으로 간주될 수 있거나, 항체 "A"는 관련 에피토프 "D"에 대해 갖는 것보다 더 높은 특이성으로 에피토프 "C"에 결합한다고 간주될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항체 단편이 10-6 M 이하, 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M 이하, 또는 10-10 M 이하의 해리 상수(Kd)를 갖는 항원과 복합체를 형성하는 경우, 항체 또는 항체 단편은 항원에 "특이성을 갖는다".
본원에 사용된 어구 "키메라 항체"는 면역반응 영역 또는 부위가 제1 종으로부터 수득되거나 유래되고 불변 영역(본 개시내용에 따라 온전하거나, 부분적이거나 변형될 수 있음)은 제2 종으로부터 수득되는 항체를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 표적 결합 영역 또는 부위는 비-인간 공급원(예컨대 마우스 또는 영장류)에서 유래할 것이고 불변 영역은 인간이다.
용어 "길항제 항체"는 표적에 결합하여 그 표적의 생물학적 효과를 예방 또는 감소시키는 항체를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 용어는 표적, 예컨대 TIGIT에 결합하여 생물학적 기능을 수행하는 것을 방지하는 항체를 나타낼 수 있다.
본원에서 사용된 "항-PD-1 길항제 항체"는 PD-1 생물학적 활성 및/또는 PD-1에 의해 매개되는 다운스트림 사건을 억제할 수 있는 항체를 지칭한다. 항-PD-1 길항제 항체는 PD-1에 의해 매개되는 다운스트림 사건, 예컨대 PD-1 결합 및 다운스트림 신호전달, T 세포 증식 억제, T 세포 활성화 억제, IFN 분비 억제, IL-2 분비 억제, TNF 분비 억제, IL-10 유도, 및 항-종양 면역 반응 억제를 포함하여 PD-1 생물학적 활성을 차단, 길항, 억제 또는 감소(상당히 포함하는 임의의 정도까지)시키는 항체를 포함한다. 본 발명의 목적을 위해, 용어 "항-PD-1 길항제 항체"("길항제 PD-1 항체", "길항제 항-PD-1 항체" 또는 "PD-1 길항제 항체"와 상호교환적으로 지칭됨)는 이전에 확인된 모든 용어, 제목, 및 기능적 상태 및 특성을 포함하며 이에 의해 PD-1 자체, PD-1 생물학적 활성, 또는 생물학적 활성의 결과는 임의의 의미 있는 정도로 실질적으로 무효화, 감소, 또는 중화됨이 명백하게 이해될 것이다. 일부 실시형태에서, 항-PD-1 길항제 항체는 PD-1에 결합하여 항-종양 면역 반응을 상향조절한다.
본원에서 사용된 "항-PD-L1 길항제 항체"는 PD-L1생물학적 활성 및/또는 PD-L1에 의해 매개되는 다운스트림 사건을 억제할 수 있는 항체를 지칭한다. 항-PD-L1 길항제 항체는 PD-L1에 의해 매개되는 다운스트림 사건, 예컨대 PD-L1 결합 및 다운스트림 신호전달, T 세포 증식 억제, T 세포 활성화 억제, IFN 분비 억제, IL-2 분비 억제, TNF 분비 억제, IL-10 유도, 및 항-종양 면역 반응 억제를 포함하여 PD-L1 생물학적 활성을 차단, 길항, 억제 또는 감소(상당히 포함하는 임의의 정도까지)시키는 항체를 포함한다. 본 발명의 목적을 위해, 용어 "항-PD-L1 길항제 항체"("길항제 PD-L1 항체", "길항제 항-PD-L1 항체" 또는 "PD-L1 길항제 항체"와 상호교환적으로 지칭됨)는 이전에 확인된 모든 용어, 제목, 및 기능적 상태 및 특성을 포함하며 이에 의해 PD-L1 자체, PD-L1 생물학적 활성, 또는 생물학적 활성의 결과는 임의의 의미 있는 정도로 실질적으로 무효화, 감소, 또는 중화됨이 명백하게 이해될 것이다. 일부 실시형태에서, 항-PD-L1 길항제 항체는 PD-L1에 결합하여 항-종양 면역 반응을 상향조절한다.
어구 "면역 체크포인트 조절제"는 면역 체크포인트를 통한 신호전달을 억제하거나 자극하는 제제의 기능적 부류를 지칭한다. "면역 체크포인트 조절제"는 수용체 및 이의 관련된 리간드를 포함하며, 이는 그렇지 않으면 T-세포 활성화로 이어지는 신호전달 경로를 억제 또는 자극하는 수단을 함께 제공한다. 예시적인 면역 체크포인트 조절제는 비제한적으로 TIGIT 및 이의 CD155 리간드, PVR; PD-1 및 이의 리간드, PD-L1 및 PD-L2; CTLA-4 및 이의 리간드, B7-1 및 B7-2; TIM-3 및 이의 리간드, Galectin-9; LAG-3 및 이의 리간드, 간 동양혈관 내피 세포 렉틴((LSECtin: liver sinusoidal endothelial cell lectin) 및 Galectin-3 포함); CD122 및 이의 CD122R 리간드; CD70, B7H3, B 및 T 림프구 감쇠기(BTLA), 및 VISTA를 포함한다.
어구 "체크포인트 조절제 길항제", "면역 체크포인트 결합 길항제" 및 "면역 체크포인트 길항제"는 면역 체크포인트 조절제의 활성을 방해(또는 억제)하는 제제의 부류와 관련하여 본원에서 상호교환적으로 사용되어, 체크포인트 조절제 또는 이의 리간드에 대한 결합의 결과로서, 체크포인트 조절제 수용체를 통한 신호전달이 차단되거나 억제된다. 이러한 신호전달을 억제함으로써, 면역-억제가 역전되어 암세포에 대한 T 세포 면역이 재-확립되거나 향상될 수 있다. 면역 체크포인트 조절제 길항제는 분리된 형태로 또는 융합 단백질 또는 접합체의 일부로서 항체 단편, 펩티드 억제제, 우성 음성 펩티드 및 소분자 약물을 포함한다.
어구 "면역 체크포인트 결합 작용제" 및 "면역 체크포인트 작용제"는 면역 체크포인트 조절제의 활성을 자극하는 제제의 부류와 관련하여 본원에서 상호교환적으로 사용되어, 체크포인트 조절제 또는 이의 리간드에 대한 결합의 결과로서, 체크포인트 조절제 수용체를 통한 신호전달이 자극된다. 이러한 신호전달을 자극함으로써, 암세포에 대한 T 세포 면역이 재-확립되거나 향상된다. 예시적인 면역 체크포인트 조절제 작용제는 비제한적으로 종양 괴사 인자(TNF) 수용체 수퍼패밀의 구성원, 예컨대 CD27, CD40, OX40(CD 134), 글루코코르티코이드-유도 TNFR 패밀리-관련 단백질(GITR), 및 4-1BB(CD137) 및 이들의 리간드를 포함한다. 추가 체크포인트 조절 작용제는 CD28 및 ICOS를 포함하여 B7-CD28 수퍼패밀리에 속한다.
어구 "우성-음성 단백질" 또는 "우성-음성 펩티드"는 변형된 단백질 또는 펩티드가 이로부터 유래한 내인성 야생형 단백질의 기능을 간섭하도록 돌연변이 및/또는 결실에 의해 유전적으로 변형된 야생형 단백질로부터 유래한 단백질 또는 펩티드를 지칭한다.
어구 "소분자 약물"은 약학적으로 활성을 갖고 약 2 kDa 미만, 약 1 kDa 미만, 약 900Da 미만, 약 800Da 미만 또는 약 700Da 미만의 분자량을 갖는, 중합체가 아닌, 종종 유기 또는 유기 금속인 분자 개체를 지칭한다. 상기 용어는 단백질 또는 핵산 이외의 "약물"이라고 하는 대부분의 의약 화합물을 포함하지만, 작은 펩티드 또는 핵산 유사체가 소분자 약물로 간주될 수 있다. 예로는 화학요법 항암제 약물 및 효소 억제제를 포함한다. 소분자 약물은 합성으로, 반-합성으로(즉, 자연 발생 전구체 유래), 또는 생물학적으로 유래될 수 있다.
개별적인 도메인 사이에 하이픈이 있는(예컨대, CH2-CH3) 폴리펩티드 도메인 배열을 설명할 때, 열거된 도메인의 순서는 아미노산 말단에서 카복시 말단까지임을 이해해야 한다.
"특이적으로 결합한다" 또는 "특이성을 갖는다"는 일반적으로 항체가 이의 항원-결합 도메인을 통해 에피토프에 결합하고, 결합이 항원-결합 도메인과 에피토프 사이에 약간의 상보성을 수반한다는 것을 의미한다. 이러한 정의에 따르면, 항체는 임의의 관련 없는 에피토프에 결합하는 것 보다 더 쉽게 이의 항원-결합 도메인을 통해 해당 에피토프에 결합할 때 에피토프에 "특이적으로 결합한다"고 일컬어 진다. 용어 "특이성"은 특정 항체가 특정 에피토프에 결합하는 상대적 친화도를 규정하기 위해 본원에서 사용된다. 예컨대, 항체 "A"는 항체 "B"보다 주어진 에피토프에 대해 더 높은 특이성을 갖는 것으로 간주될 수 있거나, 항체 "A"는 관련 에피토프 "D"에 대해 갖는 것보다 더 높은 특이성으로 에피토프 "C"에 결합한다고 말할 수 있다.
용어 "면역접합체"는 억제 펩티드 또는 소분자 약물에 공유결합에 의해 융합된 항체를 지칭한다. 이러한 펩티드 또는 소분자 약물은 불변 중쇄의 C-말단에 또는 가변 경쇄 및/또는 중쇄의 N-말단에 연결될 수 있다.
"링커"는 안정적이고 공유적인 방식으로 펩티드 또는 소분자 약물 예컨대 메이탄시노이드를 항종양 길항제에 연결하는데 사용될 수 있다. 링커는 화합물 또는 항체가 활성 상태로 유지되는 조건에서 산-유도 절단, 광-유도 절단, 펩티다제-유도 절단, 에스터라제-유도 절단, 및 이황화 결합 절단에 민감하거나 실질적으로 저항할 수 있다. 적합한 링커가 당업계에 잘 알려져 있으며, 예컨대 이황화기, 티오에스터기, 산 불안정기, 광 불안정기, 펩티다제 불안정기 및 에스터라제 불안정기를 포함한다. 링커는 또한 본원에 기술되고 당업계에 공지된 하전된 링커, 및 이의 친수성 형태를 포함한다. 면역접합체는 항종양 길항제와 펩티드 및/또는 소분자 약물 사이에 유연한 3 내지 15개 아미노산 펩티드(또는 스페이서)를 추가로 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "면역글로불린 스캐폴드"는 항체 특이성의 추가, 항체 기능 향상 또는 항체 구조 및 안정성 지지를 포함하여 길항제의 기능을 지원하는데 원하는 특성을 나타내는 아미노산의 임의의 중합체를 지칭한다. 면역글로불린 스캐폴드는 면역글로불린 중쇄의 CH1, CH2, 및/또는 CH3 영역 및/또는 면역글로불린 경쇄의 CL 영역을 포함하여 하나 이상의 면역글로불린 불변 영역을 포함할 수 있다. 면역글로불린 스캐폴드는 스캐폴드 상에 공여자 폴리펩티드의 결합 특이성을 부여하기 위해 공여자 폴리펩티드의 결합 도메인에 그래프팅될 수 있다.
본원에서 사용된 어구 "다중특이적 억제제"는 결합 특이성이 상이한 적어도 2개의 표적화 도메인을 포함하는 분자를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 다중특이적 억제제는 스캐폴드 및 상이한 항원 또는 에피토프를 표적화하는 2개 이상의 면역글로불린 항원 결합 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 특정 실시형태에서, 다중특이적 억제제는 이중특이적 항체이다.
본원에서 사용된 어구 "이중특이적"은 상이한 결합 특이성을 가진 적어도 2개의 표적화 도메인을 포함하는 분자를 지칭한다. 각각의 표적화 도메인은 표적 분자에 특이적으로 결합하여 표적 분자에 결합 시 표적 분자의 생물학적 기능을 억제할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이중특이적 체크포인트 조절 길항제는 2개 이상의 펩티드를 가진 중합체 분자이다. 일부 실시형태에서, 표적화 도메인은 항원 결합 도메인 또는 항체의 CDR을 포함한다. 일부 실시형태에서, 이중특이적 억제제는 이중특이적 항체이다.
용어 "이중특이적 항체," 및 "이중특이적 길항제"는 2개의 상이한 항원(또는 에피토프)에 특이적으로 결합할 수 있는 항체에 대해 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 일부 실시형태에서, 이중특이적 항체는 이의 2개의 결합 팔(한 쌍의 HC/LC) 중 하나 상의 하나의 항원(또는 에피토프)에 결합하고, 이의 제2 팔(다른 쌍의 HC/LC) 상의 상이한 항원(또는 에피토프)에 결합하는 전장 항체이다. 이러한 실시형태에서, 이중특이적 항체는 (특이적 및 CDR 서열 둘 모두에서) 2개의 별개의 항원 결합 팔을 갖고, 결합하는 각 항원에 대해 1가이다.
다른 실시형태에서, 이중특이적 항체는 2개의 결합 팔(두 쌍의 HC/LC) 각각에서 2개의 상이한 항원(또는 에피토프)에 결합할 수 있는 전장 항체이다. 이러한 실시형태에서, 이중특이적 항체는 동일한 특이성 및 동일한 CDR 서열을 가진 2개의 동일한 항원 결합 팔을 갖고, 결합하는 각 항원에 대해 2가이다.
예시적인 이중특이적 항체는 비대칭 IgG-유사 항체(예컨대, 트리오맙/콰드로마, Trion Pharma/Fresenius Biotech); 노브-인투-홀 항체(Genentech); Cross MAbs(Roche); 정전기적으로 일치하는 항체(AMGEN); LUZ-Y(Genentech); 가닥 교환 조작된 도메인(SEED) 바디(EMD Serono; biolonic, Merus); Fab-교환 항체(Genmab), 대칭 IgG-유사 항체(예컨대 이중 표적화(DT)-Ig(GSK/Domantis); 투-인-원 항체(Genentech); 가교결합된 MAb(Karmanos Cancer Center), mAb2(F-star); Cov X-바디(Cov X/Pfizer); 이중 가변 도메인 (DVD)-Ig 융합(Abbott); IgG-유사 이중특이적 항체(Eli Lilly); Ts2Ab(Medimmune/AZ); BsAb(ZymoGenetics); HERCULES(Biogen Idec,TvAb, Roche); scFv/Fc 융합; SCORPION(Emergent BioSolutions/Trubion, ZymoGenetics/BMS); 이중 친화도 재표적화 기술(Fc-DART), MacroGenics; 이중 (scFv)2-Fabs(National Research Center for Antibody Medicine); F(ab)2 융합(Medarex/AMGEN); 이중-작용 또는 Bis-Fab(Genentech); 도크-앤-락(DNL, ImmunoMedics); Fab-Fv(UCB-Celltech); scFv- 및 디아바디-기반 항체(예컨대, 이중특이적 T 세포 참여자(BiTEs, Micromet); 텐덤 디아바디(Tandab, Affimed); DART(MacroGenics); 단일-쇄 디아바디; TCR-유사 항체(AIT, Receptor Logics); 인간 혈청 알부민 scFv 융합(Merrimack); COMBODIES(Epigen Biotech); 및 IgG/비-IgG 융합(예컨대, 면역사이토카인(EMDSerono, Philogen, ImmunGene, ImmunoMedics)을 포함할 수 있다.
용어 "치료하다" 및 "치료"는 세포 증식성 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 개선; 세포 증식성 장애의 하나 이상의 증상의 발병의 예방 또는 지연; 및/또는 세포 증식성 장애의 하나 이상의 증상의 중증도 또는 빈도의 감소를 지칭한다.
어구 "이를 필요로 하는 환자에게", "치료를 필요로 하는 환자에게", 또는 "치료를 필요로 하는 대상에게"는 세포 증식성 장애의 치료를 위해 본 개시내용의 항종양 길항제를 투여하는 것으로부터 이익을 얻을 수 있는 대상, 예컨대 포유류 대상을 포함한다.
용어 "치료 유효량", "약리학적 유효량", 및 "생리학적 유효량"은 혈류 또는 표적 조직에서 활성 길항제의 역치 수준을 제공하는데 필요한 항종양 길항제의 양을 의미하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 정확한 양은 수많은 인자, 예컨대 특정 활성제, 조성물의 성분 및 물리학적 특성, 의도된 환자 집단, 환자 고려사항 등에 따라 달라지며, 본원에 제공된 정보 또는 관련 문헌에서 다른 이용가능한 정보를 기반으로 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다.
이러한 문맥에서 사용된 용어 "개선하다", "증가하다" 또는 "감소하다"는 본원에 기술된 치료를 시작하기 전에 동일한 개체에서 측정한 것, 또는 본원에 기술된 치료의 부재 하의 대조군 개체(또는 다중 대조군 개체)에서 측정한 것과 같은 기준 측정치와 관련된 값 또는 파라미터를 나타낸다.
"대조군 개체"는 치료되는 개체와 거의 동일한 연령인(치료된 개체 및 대조군 개체(들)에서 질병 단계가 비교가능하도록 하기 위해), 치료되는 개체와 동일한 세포 증식성 장애를 앓고 있는 개체이다. 치료되는 개체("환자" 또는 "대상"으로도 지칭됨)는 세포 증식성 장애를 가진 태아, 유아, 아동, 청소년, 또는 성인 인간일 수 있다.
용어 "세포 증식성 장애"는 세포의 비정상적인 증식을 특징으로 하는 장애를 지칭한다. 증식성 장애는 세포 성장 속도에 대한 임의의 제한을 의미하지는 않지만, 단지 성장 및 세포 분열에 영향을 미치는 정상 대조군의 상실을 나타낸다. 따라서, 일부 실시형태에서, 증식성 장애의 세포는 정상 세포와 동일한 세포 분열 속도를 가질 수 있지만 이러한 성장을 제한하는 신호에는 반응하지 않는다. "세포 증식성 장애"의 범위 내에는 신생물, 암 또는 종양이 있다.
용어 "암" 또는 "종양"은 주변 조직을 침범하고/하거나 새로운 집락화 부위로 전이하는 능력을 가진 세포의 증식을 특징으로 하는 다양한 악성 신생물 중 임의의 하나를 지칭하며, 백혈병, 림프종, 암종, 흑색종, 육종, 생식 세포 종양 및 모세포종을 포함한다. 본 개시내용의 방법으로 치료하기 위한 예시적인 암은 뇌, 방광, 유방, 자궁경부, 대장, 두경부, 신장, 폐, 비소 세포 폐, 중피종, 난소, 전립선, 위 및 자궁의 암, 백혈병, 및 수모세포종을 포함한다.
용어 "백혈병"은 조혈 기관의 악성 질환을 지칭하며 일반적으로 혈액 및 골수에서 백혈구 및 이들의 전구체의 왜곡된 증식 및 발달을 특징으로 한다. 예시적인 백혈병은, 예컨대 급성 비림프구성 백혈병(acute nonlymphocytic leukemia), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia), 급성 과립구성 백혈병(acute granulocytic leukemia), 만성 과립구성 백혈병(chronic granulocytic leukemia), 급성 전골수성 백혈병(acute promyelocytic leukemia), 성체 T-세포 백혈병(adult T-cell leukemia), 무백혈성 백혈병(aleukemic leukemia), 백혈구성 백혈병(leukocythemic leukemia), 호염기성 백혈병(basophilic leukemia), 모 세포 백혈병(blast cell leukemia), 소 백혈병(bovine leukemia), 만성 골수성 백혈병(chronic myelocytic leukemia), 피부 백혈병(leukemia cutis), 배아 백혈병(embryonal leukemia), 호산구성 백혈병(eosinophilic leukemia), 그로스 백혈병(Gross' leukemia), 모상세포 백혈병(hairy-cell leukemia), 혈모세포성 백혈병(hemoblastic leukemia), 혈구아세포성 백혈병(hemocytoblastic leukemia), 조직구성 백혈병(histiocytic leukemia), 줄기세포 백혈병(stem cell leukemia), 급성 단구성 백혈병(acute monocytic leukemia), 백혈구 감소성 백혈병(leukopenic leukemia), 림프성 백혈병(lymphatic leukemia), 림프모구성 백혈병(lymphoblastic leukemia), 림프구성 백혈병(lymphocytic leukemia), 림프행성 백혈병(lymphogenous leukemia), 림프구양 백혈병(lymphoid leukemia), 림프육종 세포 백혈병(lymphosarcoma cell leukemia), 비만세포성 백혈병(mast cell leukemia), 거대핵세포성 백혈병(megakaryocytic leukemia), 소골수아구성 백혈병(micromyeloblastic leukemia), 단구성 백혈병(monocytic leukemia), 골수모세포성 백혈병(myeloblastic leukemia), 골수성 백혈병(myelocytic leukemia), 골수과립구성 백혈병(myeloid granulocytic leukemia), 골수단구성 백혈병(myelomonocytic leukemia), 네겔리 백혈병(Naegeli leukemia), 형질세포성 백혈병(plasma cell leukemia), 형질구성 백혈병(plasmacytic leukemia), 전골수성 백혈병(promyelocytic leukemia), 리이더세포 백혈병(Rieder cell leukemia), 쉴링 백혈병(Schilling's leukemia), 줄기세포 백혈병(stem cell leukemia), 아백혈성 백혈병(subleukemic leukemia), 및 미분화세포 백혈병(undifferentiated cell leukemia)을 포함한다.
용어 "암종"은 주위 조직에 침투하여 전이를 일으키는 경향이 있는 상피 세포의 악성 종양을 지칭한다. 예시적인 암종은, 예컨대 선방 암종(acinar carcinoma), 선포 암종(acinous carcinoma), 선양낭성 암종(adenocystic carcinoma), 선양낭성 암종(adenoid cystic carcinoma), 선암종(carcinoma adenomatosum), 부신피질 암종(carcinoma of adrenal cortex), 폐포성 암종(alveolar carcinoma), 폐포세포 암종(alveolar cell carcinoma), 기저세포 암종(basal cell carcinoma), 기저세포성 암종(carcinoma basocellulare), 기저세포모양 암종(basaloid carcinoma), 바닥편평세포 암종(basosquamous cell carcinoma), 기관지폐포 암종(bronchioalveolar carcinoma), 세기관지성 암종(bronchiolar carcinoma), 기관지원성 암종(bronchogenic carcinoma), 대뇌양 암종(cerebriform carcinoma), 담관세포성 암종(cholangiocellular carcinoma), 모막 암종(chorionic carcinoma), 콜로이드 암종(colloid carcinoma), 면포 암종(comedo carcinoma), 자궁체부 암종(corpus carcinoma), 상 암종(cribriform carcinoma), 흉부 갑옷 암종(carcinoma en cuirasse), 내피종 암종(carcinoma cutaneum), 원주상 암종(cylindrical carcinoma), 원통형 세포 암종(cylindrical cell carcinoma), 관 암종(duct carcinoma), 경성 암종(carcinoma durum), 배아 암종(embryonal carcinoma), 뇌질모양 암종(encephaloid carcinoma), 에피에노이드 암종(epiennoid carcinoma), 선양 상피 암종(carcinoma epitheliale adenoides), 외장성 암종(exophytic carcinoma), 전궤양 암종(carcinoma ex ulcere), 섬유구조 암종(carcinoma fibrosum), 섬유 암종(gelatiniform carcinoma), 젤리 유사 암종(gelatinous carcinoma), 거대세포 암종(giant cell carcinoma), 거대세포핵 암종(carcinoma gigantocellulare), 샘 암종(glandular carcinoma), 과립세포 암종(granulosa cell carcinoma), 모상 암종(hair-matrix carcinoma), 헤마토이드 암종(hematoid carcinoma), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma), 허슬세포 암종(Hurthle cell carcinoma), 유리질 암종(hyaline carcinoma), 하이페메프로이드 암종(hypemephroid carcinoma), 영아성 배아 암종(infantile embryonal carcinoma), 전암상태(carcinoma in situ), 표피내 암종(intraepidermal carcinoma), 상피내 암종(intraepithelial carcinoma), 크롬페처 암종(Krompecher's carcinoma), 쿨치츠키-세포 암종(Kulchitzky-cell carcinoma), 대세포 암종(large-cell carcinoma), 수정체 암종(lenticular carcinoma), 수정체성 암종(carcinoma lenticulare), 지방종성 암종(lipomatous carcinoma), 림프상피성 암종(lymphoepithelial carcinoma), 수질성 암종(carcinoma medullare), 수질 암종(medullary carcinoma), 멜라닌 암종(melanotic carcinoma), 연성 암종(carcinoma molle), 점액 암종(mucinous carcinoma), 뮤시파룸 암종(carcinoma muciparum), 점액세포 암종(carcinoma mucocellulare), 점액표피모양 암종(mucoepidermoid carcinoma), 점액 암종(carcinoma mucosum), 점액성 암종(mucous carcinoma), 점액종성 암종(carcinoma myxomatodes), 비인두 암종(naspharyngeal carcinoma), 귀리세포 암종(oat cell carcinoma), 화골성 암종(carcinoma ossificans), 유골 암종(osteoid carcinoma), 유두상 암종(papillary carcinoma), 문맥주위 암종(periportal carcinoma), 전-침습성 암종(preinvasive carcinoma), 가시세포 암종(prickle cell carcinoma), 풀타세우스 암종(pultaceous carcinoma), 신장세포 암종(renal cell carcinoma of kidney), 예비세포 암종(reserve cell carcinoma), 육종성 암종(carcinoma sarcomatodes), 슈나이더 암종(schneiderian carcinoma), 경성 암종(scirrhous carcinoma), 음낭 암종(carcinoma scroti), 반지세포 암종(signet-ring cell carcinoma), 단순 암종(carcinoma simplex), 소세포 암종(small-cell carcinoma), 솔라노이드 암종(solanoid carcinoma), 회전타원체세포 암종(spheroidal cell carcinoma), 방추세포 암종(spindle cell carcinoma), 해면양 암종(carcinoma spongiosum), 폐편평 암종(squamous carcinoma), 편평세포 암종(squamous cell carcinoma), 스트링 암종(string carcinoma), 모세혈관 확장성 암종(carcinoma telangiectaticum), 모세혈관 확장성 암종(carcinoma telangiectodes), 이행세포 암종(transitional cell carcinoma), 상피성 결절성 암종(carcinoma tuberosum), 결절성 암종(tuberous carcinoma), 사마귀모양 암종(verrucous carcinoma), 및 융모상 암종(carcinoma villosum)을 포함한다.
용어 "육종(sarcoma)"은 배아 결합 조직과 같은 물질로 구성된 종양을 의미하며 일반적으로 원섬유성 또는 균질 물질에 삽입되어 있는 박혀있는 밀집된 세포로 구성된다. 예시적인 육종은, 예를 들어, 연골육종(chondrosarcoma), 섬유육종(fibrosarcoma), 림프육종(lymphosarcoma), 흑색육종(melanosarcoma), 점액육종(myxosarcoma), 골육종(osteosarcoma), 아베메티스 육종(Abemethy's sarcoma), 지방육종(adipose sarcoma), 지방육종(liposarcoma), 포상연부 육종(alveolar soft part sarcoma), 법랑아 육종(ameloblastic sarcoma), 포도상 육종(botryoid sarcoma), 녹색종 육종(chloroma sarcoma), 융모막 육종(chorio carcinoma), 배아 육종(embryonal sarcoma), 윌름스 종양 육종(Wilns' tumor sarcoma), 자궁내막 육종(endometrial sarcoma), 간질성 육종(stromal sarcoma), 유잉 육종(Ewing's sarcoma), 근막 육종(fascial sarcoma), 섬유모세포 육종(fibroblastic sarcoma), 거대세포 육종(giant cell sarcoma), 과립구성 육종(granulocytic sarcoma), 호치킨 육종(Hodgkin's sarcoma), 특발성 다발 색소침착 출혈 육종(idiopathic multiple pigmented hemorrhagic sarcoma), B세포의 면역아세포 육종(immunoblastic sarcoma of B cells), 림프종(lymphomas(예를 들어, 비-호치킨 림프종(Non-Hodgkin Lymphoma)), T세포의 면역아세포 육종(immunoblastic sarcoma of T-cells), 얀센 육종(Jensen's sarcoma), 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 쿠퍼세포 육종(Kupffer cell sarcoma), 혈관육종(angiosarcoma), 백혈육종(leukosarcoma), 악성 간엽세포 육종(malignant mesenchymoma sarcoma), 방골성 육종(parosteal sarcoma), 망상내피 육종(reticulocytic sarcoma), 라우스 육종(Rous sarcoma), 혈청세포 육종(serocystic sarcoma), 활막 육종(synovial sarcoma), 및 혈관확장 육종(telangiectaltic sarcoma)을 포함한다.
용어 "흑색종(melanoma)"은 피부 및 다른 기관의 멜라닌 세포계(melanocytic system)에서 발생하는 종양을 지칭한다. 흑색종은, 예를 들어, 말단 흑자성 흑색종(acral-lentiginous melanoma), 무색소성 흑색종(amelanotic melanoma), 양성 소아 흑색종(benign juvenile melanoma), 클라우드만 흑색종(Cloudman's melanoma), S91 흑색종(S91 melanoma), 하딩-파세이 흑색종(Harding-Passey melanoma), 소아 흑색종(juvenile melanoma), 악성 흑자 흑색종(lentigo maligna melanoma), 악성 흑색종(malignant melanoma), 결절성 흑색종(nodular melanoma), 조갑하 흑색종(subungal melanoma), 및 표재 확장성 흑색종(superficial spreading melanoma)을 포함한다.
추가적인 암은, 예를 들어, 호치킨 병(Hodgkin's Disease), 다발성 골수종(multiple 골수종), 신경아세포종(neuroblastoma), 유방암, 난소암, 폐암, 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 원발성 혈소판증가증(primary thrombocytosis), 원발성 고분자글로불린혈증(primary macroglobulinemia), 소세포 폐 종양(small-cell lung tumor), 원발성 뇌종양(primary brain tumor), 위암, 대장암, 악성 췌장 인슐린종(malignant pancreatic insulinoma), 악성 유암종(malignant carcinoid), 전암성 피부 병변(premalignant skin lesion), 고환암, 갑상선암, 신경아세포종(neuroblastoma), 식도암, 비뇨생식관암(genitourinary tract cancer), 악성 고칼슘혈증(malignant hypercalcemia), 자궁경부암, 자궁내막암, 및 부신피질암을 포함한다.
I. 체크포인트 조절제 길항제
일 양태에서, 본 출원은 (1) 제1 면역 체크포인트 조절제에 특이적으로 결합하는 가변 도메인 영역을 함유하는 한 쌍의 팔 및 (2) 제2 면역 체크포인트 조절제에 특이적으로 결합하는 단일 쇄(scFv)를 가진 면역글로불린 스캐폴드를 포함하는 항종양 길항제를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 제1 면역 체크포인트 조절제 길항제, 및 scFv 형태의 제2 면역 체크포인트 조절제 길항제 둘 모두에 구조적으로 연결된 면역글로불린 스캐폴드를 포함하는 항종양 길항제를 제공한다.
두 양태 모두에서, 면역글로불린 스캐폴드는 하나 이상의 면역글로불린 불변 영역, 예컨대, IgG CH1, CH2, 및/또는 CH3을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서서, 면역글로불린 스캐폴드는 Fc(힌지-CH2-CH3)이다.
일부 실시형태에서, 항종양 길항제는 길항제의 N-말단 끝이 이에 구조적으로 연결된 제1 면역 체크포인트 조절제 길항제를 포함하는 면역글로불린 스캐폴드를 포함하며, 여기서 제1 면역 체크포인트 조절제 길항제는 PD-1, PD-L1, LAG-3, TIGIT에 특이적으로 결합하고, 제2 면역 체크포인트 조절제 길항제는 PD-1, PD-L1, LAG-3 또는 TIGIT에 특이적으로 결합하는 scFv로서 길항제의 C-말단 끝에 위치한다.
일부 실시형태에서, scFv는 중쇄 가변 영역을 경쇄 가변 영역에 연결하는 링커를 포함한다. 일 실시형태에서, 링커는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 카피의 아미노산 서열 G4S 사이를 포함하는 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 링커는 SEQ ID NOS: 188 내지 191 중 하나로 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 보다 특정한 실시형태에서, 링커는 SEQ ID NO: 191의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 항-TIGIT scFv는 SEQ ID NOS: 1 내지 25로부터 선택되는 하나 이상의 중쇄 CDR 및 SEQ ID NOS: 26 내지 47로부터 선택되는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-TIGIT scFv는 중쇄/경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 scFv는 SEQ ID NOS: 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 및 66으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 SEQ ID NOS: 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 및 67로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가진 LCVR에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%를 가진 경쇄 가변 영역(LCVR)을 포함한다.
보다 특정한 실시형태에서, 항-TIGIT scFv는 SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 HCVR 및 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 가진 LCVR에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%를 가진 LCVR을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-TIGIT scFv는 다음을 포함한다: (2) SEQ ID NO: 260의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR1, SEQ ID NO: 247의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR2, SEQ ID NO: 261의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR3, 및 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR4와 조합된 (1) SEQ ID NO: 23의 HCDR1, SEQ ID NO: 24의 HCDR2 및 SEQ ID NO: 25의 HCDR 3을 포함하는 HCVR; 그리고 추가로 (2) SEQ ID NO: 220의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR1, SEQ ID NO: 228의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR2, SEQ ID NO: 234의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR3, SEQ ID NO: 262의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR4와 조합된 (1) SEQ ID NO: 45의 LCDR1, SEQ ID NO: 46의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 47의 LCDR 3을 포함하는 면역글로불린 LCVR을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 제1 표적화 도메인은 항-PD-1 항체 유래의 하나 이상의 가변 영역을 포함하고, 제2 표적화 도메인은 전술된 바와 같은 항-TIGIT scFv를 포함한다.
일 실시형태에서, 항-PD-1 표적화 도메인은 SEQ ID NOS: 68 내지 81로부터 선택되는 하나 이상의 중쇄 CDR 및/또는 SEQ ID NOS: 82 내지 95로부터 선택되는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-PD-1 표적화 도메인은 다음을 포함한다: SEQ ID NOS: 96, 98, 100, 102, 104, 및 106으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 HCVR; SEQ ID NOS: 97, 99, 101, 103, 105, 및 107로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가진 LCVR에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 LCVR; 또는 둘 모두.
또 다른 실시형태에서, 항-PD-1 표적화 도메인은 다음을 포함한다: (2) SEQ ID NO: 283의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR1, SEQ ID NO: 277의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR2, SEQ ID NO: 288의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR3,SEQ ID NO: 274의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR4와 조합된 (1) SEQ ID NO: 79의 HCDR1, SEQ ID NO: 80의 HCDR2 및 SEQ ID NO: 81의 HCDR 3을 포함하는 HCVR; (2) SEQ ID NO: 289의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR1, SEQ ID NO: 290의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR2, SEQ ID NO: 291의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR3, 및 SEQ ID NO: 292의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR4와 조합된 (1) SEQ ID NO: 93의 LCDR1, SEQ ID NO: 94의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 95의 LCDR 3을 포함하는 면역글로불린 LCVR; 또는 둘 모두.
또 다른 실시형태에서, 항-PD-1 표적화 도메인은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 HCVR; SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 LCVR; 또는 둘 모두를 포함한다.
특정 실시형태에서, 이중특이적 항-PD-1/항-TIGIT 길항제는 SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 가진 HCVR 및 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 가진 LCVR을 포함하는 항-TIGIT scFv와 조합된 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 가진 HCVR 및/또는 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 가진 LCVR을 포함하는 제1 표적화 도메인을 포함한다.
보다 특정한 실시형태에서, 이중특이적 항-PD-1/항-TIGIT 길항제의 scFv는 제2 표적화 도메인에서 중쇄 가변 영역을 경쇄 가변 영역에 연결하는 링커를 포함하며, 여기서 링커는 SEQ ID NO: 191의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 이중특이적 항-PD-1/항-TIGIT 길항제는 다음을 포함한다: SEQ ID NO: 160의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄; SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄; 또는 둘 모두.
또 다른 실시형태에서, 이중특이적 항-PD-1/항-TIGIT 길항제는 다음을 포함한다: SEQ ID NO: 162의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄; SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄; 또는 둘 모두.
또 다른 실시형태에서, 이중특이적 항-PD-1/항-TIGIT 길항제는 SEQ ID NO: 160의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄, 및 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 제1 표적화 도메인은 항-PD-L1 항체 유래의 하나 이상의 가변 영역을 포함하고, 제2 표적화 도메인은 전술된 바와 같은 항-TIGIT scFv를 포함한다.
일 실시형태에서, 항-PD-L1 표적화 도메인은 SEQ ID NOS: 108 내지 122로부터 선택되는 하나 이상의 중쇄 CDR 및/또는 SEQ ID NOS: 123 내지 138로부터 선택되는 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-PD-L1 표적화 도메인은 SEQ ID NOS: 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 및 153으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 HCVR 및/또는 SEQ ID NOS: 140, 142, 144, 146, 148, 152, 및 154로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 LCVR을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-PD-L1 표적화 도메인은 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 HCVR 및/또는 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 가진 LCVR에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 LCDR을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-PD-L1 표적화 도메인은 다음을 포함한다: (2) SEQ ID NO: 283의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR1, SEQ ID NO: 277의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR2, SEQ ID NO: 300의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR3, 및 SEQ ID NO: 274의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR4와 조합된 (1) SEQ ID NO: 111의 HCDR1, SEQ ID NO: 114의 HCDR2 및 SEQ ID NO: 115의 HCDR 3을 포함하는 면역글로불린 HCVR; (2) SEQ ID NO: 294의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR1, SEQ ID NO: 295의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR2, SEQ ID NO: 296의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR3, 및 SEQ ID NO: 276의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR4와 조합된 (1) SEQ ID NO: 123의 LCDR1, SEQ ID NO: 124의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 125의 LCDR 3을 포함하는 면역글로불린 LCVR; 또는 둘 모두.
특정 실시형태에서, 이중특이적 항-PD-L1/항-TIGIT 길항제는 다음을 포함하는 제1 표적화 도메인을 포함한다: SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 가진 HCVR과 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 가진 LCVR을 포함하는 항-TIGIT scFv 형태로 제2 표적화 도메인과 조합된 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 가진 HCVR 및/또는 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 가진 LCVR.
보다 특정한 실시형태에서, 이중특이적 항-PD-L1/항-TIGIT 길항제 중의 scFv는 항-TIGIT HCVR을 제2 표적화 도메인 중의 항-TIGIT LCVR에 결합시키는 링커를 포함하며, 여기서 링커는 SEQ ID NO: 191의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 제1 표적화 도메인은 항-LAG-3 항체로부터의 하나 이상의 가변 영역을 포함하고, 제2 표적화 도메인은 전술된 바와 같은 항-TIGIT scFv를 포함한다.
일 실시형태에서, 항-LAG-3 표적화 도메인은 SEQ ID NOS: 163 내지 171로부터 선택되는 하나 이상의 면역글로불린 중쇄 CDR 및/또는 SEQ ID NOS: 172 내지 178로부터 선택되는 하나 이상의 면역글로불린 경쇄 CDR을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-LAG-3 표적화 도메인은 SEQ ID NOS: 180, 182, 184, 및 186으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 HCVR 및/또는 SEQ ID NOS: 181, 183, 185, 및 187로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가진 LCVR과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 가진 LCVR을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-LAG-3 표적화 도메인은 다음을 포함한다: (2) SEQ ID NO: 316의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR1, SEQ ID NO: 317의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR2, SEQ ID NO: 318의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR3, 및 SEQ ID NO: 319의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 HFR4와 조합된 (1) SEQ ID NO: 163의 HCDR1, SEQ ID NO: 164의 HCDR2 및 SEQ ID NO: 165의 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 HCVR; (2) SEQ ID NO: 320의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR1, SEQ ID NO: 321의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR2, SEQ ID NO: 322의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR3, 및 SEQ ID NO: 323의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85% 또는 90% 동일성을 가진 LFR4와 조합된 (1) SEQ ID NO: 172의 LCDR1, SEQ ID NO: 173의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 174의 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 LCVR; 또는 둘 모두.
또 다른 실시형태에서, 항-LAG-3 표적화 도메인은 SEQ ID NO: 180의 아미노산 서열에 대해 90%, 95%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 HCVR 및/또는 SEQ ID NO: 181의 아미노산 서열에 대해 90%, 95%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 LCVR을 포함한다.
특정 실시형태에서, 이중특이적 항-LAG-3/항-TIGIT 길항제는 SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 가진 HCVR 및 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 가진 LCVR을 포함하는 항-TIGIT scFv와 조합된 SEQ ID NO: 180의 아미노산 서열을 가진 HCVR 및/또는 SEQ ID NO: 181의 아미노산 서열을 가진 LCVR을 포함하는 제1 표적화 도메인을 포함한다. 보다 특정한 실시형태에서, 이중특이적 항-LAG-3/항-TIGIT 길항제 중의 scFv는 항-TIGIT HCVR을 제2 표적화 도메인 중의 항-TIGIT LCVR에 결합하는 링커를 포함하며, 여기서 상기 링커는 SEQ ID NO: 189 또는 SEQ ID NO: 191의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 이중특이적 항-LAG-3/항-TIGIT 길항제는 SEQ ID NO: 192 또는 193의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄; SEQ ID NO: 181의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄, 또는 둘 모두를 포함한다.
항- LAG-3 항체 및 이의 항원 결합 단편
또 다른 양태에서, 본 출원은 LAG-3에 특이적으로 결합하는, 이의 항원-결합 부분을 포함하는 항체를 제공한다. 도 19a는 항-LAG-3 mAb 2L2A.1, 2L2A.6, 2L27B 및 3L1A에 상응하는 중쇄 CDR1, CD2 및 CDR3 서열을 나타낸다. 도 19b는 항-LAG-3 mAb 2L2A.1, 2L2A.6, 2L27B 및 3L1A에 상응하는 경쇄 CDR1, CD2 및 CDR3 서열을 나타낸다. 도 20은 항-LAG-3 mAbs 2L2A.1, 2L2A.6, 2L27B 및 3L1A의 VH 및 VL 서열을 나타낸다.
일 실시형태에서, 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 다음을 포함한다: SEQ ID NOS: 163, 166, 및 169로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCDR1 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가진 면역글로불린 중쇄 CDR1(HCDR1); SEQ ID NOS: 164, 167, 및 170으로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCDR2 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가진 면역글로불린 중쇄 CDR2(HCDR2) 서열; SEQ ID NOS: 165, 168, 및 171로 이루어진 군으로부터 선택되는 HCDR3 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가진 면역글로불린 중쇄 CDR3(HCDR3); SEQ ID NOS: 172, 175, 및 177로 이루어진 군으로부터 선택되는 LCDR1 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가진 면역글로불린 경쇄 CDR1(LCDR1); SEQ ID NOS: 173 및 178로 이루어진 군으로부터 선택되는 LCDR2 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가진 면역글로불린 경쇄 CDR2(LCDR2); 및 SEQ ID NOS: 174, 176 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 LCDR3 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 또는 적어도 90% 서열 동일성을 가진 면역글로불린 경쇄 CDR3(LCDR3).
또 다른 실시형태에서, 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 다음을 포함한다: SEQ ID NOS: 163, 166, 및 169로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역글로불린 HCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NOS: 164, 167, 및 170으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역글로불린 HCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NOS: 165, 168, 및 171로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역글로불린 HCDR3 아미노산 서열; SEQ ID NOS: 172, 175, 및 177로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역글로불린 LCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NOS: 173 및 178로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역글로불린 LCDR2 아미노산 서열; 및 SEQ ID NOS: 174, 176 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역글로불린 LCDR3 아미노산 서열.
또 다른 실시형태에서, 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 다음을 포함한다: SEQ ID NOS: 180, 182, 184, 및 186으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 가진 면역글로불린 HCVR; SEQ ID NOS: 181, 183, 185, 및 187로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가진 LCVR에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 가진 면역글로불린 LCVR; 또는 둘 모두.
또 다른 실시형태에서, 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 다음을 포함한다: SEQ ID NOS: 180, 182, 184, 및 186으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 HCVR; SEQ ID NOS: 181, 183, 185, 및 187로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 LCVR; 또는 둘 모두.
또 다른 실시형태에서, 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 다음을 포함한다: SEQ ID NO: 180의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 면역글로불린 중쇄 서열; SEQ ID NO:181의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 면역글로불린 경쇄 서열; 또는 둘 모두.
보다 특정한 실시형태에서, 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 다음을 포함한다: SEQ ID NO:180의 면역글로불린 중쇄 서열; SEQ ID NO:181의 면역글로불린 경쇄 서열; 또는 둘 모두.
또 다른 양태에서, 본 출원은 본원에 기술된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 임의의 이의 항원-결합 부분을 코딩하는 하나 이상의 핵산을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 본원에 기술된 항-LAG-3 항체 또는 임의의 이의 항원-결합 부분을 코딩하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 하나 이상의 발현 벡터를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 본원에 기술된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 임의의 항원-결합 부분을 코딩하는 하나 이상의 핵산 또는 하나 이상의 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 LAG-3에 특이적으로 결합하는 제1 표적화 도메인; 및 PD-1, PD-L1 또는 TIGIT에 특이적으로 결합하는 제2 표적화 도메인을 포함하는 이중특이적 항종양 길항제를 제공하며, 여기서, 제1 표적화 도메인은 임의의 전술된 LAG-3-결합 부분을 포함한다. 바람직하게는, 항-LAG-3 이중특이적 항종양 길항제는 하나 이상의 IgG 불변 영역, 예컨대, CH1, CH2, CH3, 및/또는 CL을 포함하는 면역글로불린 스캐폴드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 표적화 도메인은 N-말단 끝에 위치하고 제2 표적화 도메인은 C-말단 끝에 위치한다. 다른 실시형태에서, 제1 표적화 도메인은 C-말단 끝에 위치하고 제2 표적화 도메인은 N-말단 끝에 위치한다. 다른 실시형태에서, 제2 표적화 도메인은 예컨대, CH3 도메인의 루프 영역 내에 삽입된다.
일 실시형태에서, 이중특이적 항종양 길항제는 LAG-3에 특이적으로 결합하는 제1 표적화 도메인, 및 PD-1에 특이적으로 결합하는 제2 표적화 도메인을 포함하며, 여기서 제1 표적화 도메인은 전술한 임의의 항-LAG-3 결합 단편을 포함하고, 제2 표적화 도메인은 후술할 임의의 PD-1 결합 단편을 포함한다. 예컨대, 일 실시형태에서, 제1 표적화 도메인은 SEQ ID NO: 181의 아미노산 서열을 가진 LCVR과 조합된 SEQ ID NO: 180의 HCVR 아미노산 서열을 포함하며, 제2 표적화 도메인은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 가진 LCVR과 조합된 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 가진 HCVR을 포함한다. 대안적으로, 제2 도메인은 PD-1 ECD의 형태로 배열될 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 이중특이적 항종양 길항제는 LAG-3에 특이적으로 결합하는 제1 표적화 도메인 및 PD-L1에 특이적으로 결합하는 제2 표적화 도메인을 포함하며, 여기서 제1 표적화 도메인은 전술한 임의의 항-LAG-3 결합 단편을 포함하고, 제2 표적화 도메인은 후술할 임의의 PD-L1 결합 단편을 포함한다. 예컨대, 일 실시형태에서, 제1 표적화 도메인은 SEQ ID NO: 181의 아미노산 서열을 가진 LCVR과 조합된 SEQ ID NO: 180의 아미노산 서열을 가진 HCVR을 포함하며, 제2 표적화 도메인은 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 가진 LCVR과 조합된 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 가진 HCVR을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 이중특이적 항종양 길항제는 LAG-3에 특이적으로 결합하는 제1 표적화 도메인 및 TIGIT에 특이적으로 결합하는 제2 표적화 도메인을 포함하며, 여기서 제1 표적화 도메인은 전술한 임의의 항-LAG-3 결합 단편을 포함하고, 제2 표적화 도메인은 후술할 임의의 TIGIT 결합 단편을 포함한다. 예컨대, 일 실시형태에서, 제1 표적화 도메인은 SEQ ID NO: 181의 아미노산 서열을 가진 LCVR과 조합된 SEQ ID NO: 180의 아미노산 서열을 가진 HCVR을 포함하고, 제2 표적화 도메인은 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 가진 LCVR과 조합된 SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 가진 HCVR을 포함한다. 대안적으로, 제2 도메인은 TIGIT ECD 형태로 배열될 수 있다.
예시적인 면역글로불린 스캐폴드는 예컨대 SEQ ID NOS: 155 내지 157 및 205 내지 215로 제시된 완전한 CH1-CH2-CH3 분절, 또는 SEQ ID NOS: 195 내지 202 중 임의의 하나로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 Fc(힌지-CH2-CH3)를 포함한다.
항-TIGIT 항체 및 항-TIGIT 항체 단편
일부 실시형태에서, 체크포인트 조절제 길항제는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 도 1은 항-TIGIT mAb의 CDR 서열을 나타내는 반면, 도 2a 및 2b는 본 출원에서 사용하기 위한 일부 실시형태의 항-TIGIT 항체 가변 도메인 서열을 나타낸다.
일 실시형태에서, 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다음을 포함한다: (1) 3개의 상보성 결정 영역(HCDR): HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 HCVR, 여기서 HCDR1은 SEQ ID NOS: 1, 6, 11, 15, 17, 20 및 23으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 SEQ ID NOS: 2, 4, 7, 9, 12, 13, 16, 18, 21 및 24로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 SEQ ID NOS: 3, 5, 8, 10, 14, 19, 22 및 25로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는다; 및 (2) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열을 포함하는 면역글로불린 LCVR, 여기서 LCDR1은 SEQ ID NOS: 26, 29, 31, 33, 35, 39, 42 및 45로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, LCDR2는 SEQ ID NOS: 27, 30, 36, 37, 40, 43 및 46으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 SEQ ID NOS: 28, 32, 34, 38, 41, 44 및 47로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고; 여기서 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간 TIGIT에 특이적으로 결합한다.
또 다른 실시형태에서, 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원-결합 단편(들)은 다음을 포함한다: (1) SEQ ID NOS: 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 및 66으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 HCVR; 및 (2) SEQ ID NOS: 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 및 67로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 LCVR; 여기서 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간 TIGIT에 특이적으로 결합한다.
항-PD-1 항체 및 이의 항원-결합 단편
일부 실시형태에서, 체크포인트 조절제 길항제는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편(들)을 포함한다. 도 3은 항-PD-1 mAb의 CDR 서열을 나타내고 도 4a 내지 4c는 본 출원에서 사용하기 위한 일부 실시형태의 항-PD-1 항체 가변 도메인 서열을 나타낸다.
일 실시형태에서, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편(들)은 다음을 포함한다: (1) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 서열을 포함하는 면역글로불린 HCVR, 여기서, HCDR1은 SEQ ID NOS: 68, 71, 74, 76, 및 79로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 SEQ ID NOS: 69, 72, 77, 및 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 SEQ ID NOS: 70, 73, 75, 78, 및 81로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는다, 및 (2) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열을 포함하는 면역글로불린 LCVR, 여기서 LCDR1은 SEQ ID NOS: 82, 85, 88, 89, 90, 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, LCDR2는 SEQ ID NOS: 83, 86, 91, 및 94로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 SEQ ID NOS: 84, 87, 92, 및 95로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, 여기서 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간 PD-1에 특이적으로 결합한다.
일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편(들)은 다음을 포함한다: (1) SEQ ID NOS: 96, 98, 100, 102, 104, 및 106으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 HCVR; 및 (2) SEQ ID NOS: 97, 99, 101, 103, 105, 및 107로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 LCVR, 여기서 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간 PD-1에 특이적으로 결합한다.
항-PD-L1 항체 및 이의 항원-결합 단편
일부 실시형태에서, 체크포인트 조절제 길항제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편(들)을 포함한다. 도 5는 항-PD-L1 mAb의 CDR 서열을 나타내고 도 6a 내지 6c는 본 출원에서 사용하기 위한 일부 실시형태의 항-PD-L1 항체 가변 도메인 서열을 나타낸다.
일 실시형태에서, PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편(들)은 다음을 포함한다: (1) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 서열을 포함하는 면역글로불린 HCVR, 여기서 HCDR1은 SEQ ID NOS: 108, 111, 117, 및 120으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 SEQ ID NOS: 109, 112, 114, 116, 118, 및 121로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 SEQ ID NOS: 110, 113, 115, 119, 및 122로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는다; 및 (2) 면역글로불린 LCVR, 여기서 경쇄 가변 영역은 3개의 상보성 결정 영역(LCDR): LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다, 여기서 LCDR1은 SEQ ID NOS: 123, 126, 130, 133, 및 136으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, LCDR2는 SEQ ID NOS: 124, 127, 131, 134, 및 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 SEQ ID NOS: 125, 128, 129, 132, 135, 및 138로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖고, 여기서 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간 PD-L1에 특이적으로 결합한다.
일부 실시형태에서, PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편(들)은 다음을 포함한다: (1) SEQ ID NOS: 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 및 153으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 HCVR; 및 (2) SEQ ID NOS: 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152 및 154로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 LCVR, 여기서 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간 PD-L1에 특이적으로 결합한다.
II. 기타 실시형태
본원에 기술된 HCVR 및 LCVR은 면역 글로불린 스캐폴드에 연결될 수 있다. 일부 실시형태에서, 면역학적 스캐폴드는 IgG1, IgG2 또는 IgG4로 구성된다. 면역글로불린 스캐폴드는 CH1-CH2-CH3 영역을 포함할 수 있거나 자연-발생 Fc 영역 또는 비-자연 발생 또는 돌연변이된 Fc 영역, 예컨대, 효과기가 없는 또는 대부분 효과기가 없는 Fc(예컨대 인간 IgG2 또는 IgG4), 또는 대안적으로, 종양 환경에서 Treg 고갈을 향상키기 위해 하나 이상의 활성화 Fc 수용체(FcγRI, FcγRIIa 또는 FcγRIIIa)에 대한 향상된 결합을 가진 Fc를 포함할 수 있다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본원에 기술된 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-LAG-3, HCVR 및 LCVR은 전형적으로 항체의 하나 이상의 기능적 특성, 예컨대 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합, 및/또는 항원-의존적 세포 세포독성을 변경하기 위한 하나 이상의 변형을 포함하는 Fc에 연결될 수 있다.
일 실시형태에서, 본 출원에서 사용하기 위한 면역글로불린 스캐폴드는 SEQ ID NOS: 155 내지 157 및 205 내지 215로 제시된 아미노산 서열을 가진 CH1-CH2-CH3 영역을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 면역글로불린 스캐폴드는 SEQ ID NOS: 195 내지 202 중 임의의 하나로 제시된 아미노산 서열을 가진 것과 같이, Fc 수용체를 포함하거나 이로 실질적으로 구성된다.
또한, 본원에 기술된 항체는 화학적으로 변형될 수 있거나(예컨대, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있음) 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변경하기 위해, 이의 글리코실화를 변경하도록 변형될 수 있다. 보다 구체적으로, 특정 실시형태에서, 본 출원의 항체는 다음을 가진 Fc 변이체를 생성하기 위해 Fc 영역에 변형을 포함할 수 있다: (a) 증가 또는 감소된 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC: antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity); (b) 증가 또는 감소된 보체 매개 세포독성(CDC: complement mediated cytotoxicity), (c) C1q에 대한 증가 또는 감소된 친화도 및/또는 (d) 모 Fc에 비해 Fc 수용체에 대해 증가 또는 감소된 친화도. 이러한 Fc 영역 변이체는 Fc 영역의 적어도 하나의 아미노산 변형을 일반적으로 포함할 것이다. 아미노산 변형의 조합이 특히 바람직하다고 생각된다. 예컨대, 변이체 Fc 영역은 예컨대 본원에서 확인된 특이적 Fc 영역 위치의 2개, 3개, 4개, 5개 등의 치환을 포함할 수 있다.
효과기 기능이 완전히 회피되어야 하는 용도, 예컨대 항원 결합만으로 원하는 치료적 이익을 생성하기에 충분하고, 효과기 기능이 원치 않는 부작용을 유발하는 (또는 위험을 증가시키는) 경우, IgG4 항체를 사용하거나, Fc 영역이 없거나 이의 상당 부분이 없는 항체 또는 단편이 고안될 수 있거나, Fc는 글리코실화를 완전히 제거하기 위해 돌연변이될 수 있다(예컨대, N297A). 대안적으로, 인간 IgG2(CH1 도메인 및 힌지 영역)과 인간 IgG4(CH2 및 CH3 도메인)의 하이브리드 구축물은 효과기 기능이 없고, FcγRs(예 IgG2) 결합하여 보체(예 IgG4)를 활성화하는 능력이 없도록 생성될 수 있다. IgG4 불변 도메인을 사용하는 경우, 통상적으로 IgG1의 힌지 서열을 모방하여 IgG4 분자를 안정화하여 치료되는 환자에서 치료 항체와 내인성 IgG4 사이의 Fab-팔 교환을 감소시키는 치환 S228P를 포함하는 것이 바람직하다.
바람직한 실시형태에서, 제1 및 제2 표적화 도메인은 인간화된 면역글로불린 스캐폴드에 존재한다. 추가로, IgG 스캐폴드는 N297A 또는 K447A 아미노산 치환을 가질 수 있다.
특정 실시형태에서, 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-LAG-3, 또는 이의 단편은 이의 생물학적 반감기를 증가시키기 위해 변형될 수 있다. 예컨대 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합 친화도를 증가시키는 것을 포함하여 다양한 접근법이 사용될 수 있다. 일 실시형태에서, 항체는 미국특허 제5,869,046호 및 제6,121,022호에 기술된 바와 같이, IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2개의 루프로부터 취해진 구조(salvage) 수용체 결합 에피토프를 함유하도록 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경된다. Fc 영역의 잔기의 번호는 EU 색인 번호이다. 본원에 개시된 서열 변이체는 자연 발생 아미노산 대신 치환된 아미노산이 뒤따르는 잔기 수를 참조하여 제공되며, 선택적으로 그 위치에서 자연 발생 잔기가 선행한다. 여러 아미노산이 주어진 위치에 존재할 수 있는 경우, 예컨대 서열이 자연 발생 이소형 간에 상이하거나, 다수의 돌연변이가 해당 위치에서 치환될 수 있는 경우, 이들은 슬래시로 구분된다(예컨대, "X/Y/Z").
FcRn에 대한 결합을 증가시키고/시키거나 약동학 특성을 개선하는 예시적인 Fc 변이체는, 예컨대 259I, 308F, 428L, 428M, 434S, 434H, 434F, 434Y, 및 434M을 포함하여 위치 259, 308, 및 434에서의 치환을 포함한다. FcRn에 대한 Fc 결합을 증가시키는 다른 변이체는 다음을 포함한다: 250E, 250Q, 428L, 428F, 250Q/428L(문헌[Hinton et al., 2004, J. Biol. Chem. 279(8): 6213-6216], 문헌[Hinton et al. 2006 Journal of Immunology 176:346-356]), 256A, 272A, 305A, 307A, 31 IA, 312A, 378Q, 380A, 382A, 434A(문헌[Shields et al. (2001) J. Biol. Chem., 276(9):6591-6604]), 252F, 252Y, 252W, 254T, 256Q, 256E, 256D, 433R, 434F, 434Y, 252Y/254T/256E, 433K/434F/436H(문헌[Dall'Acqua et al. (2002) J. Immunol., 169:5171-5180], 문헌[Dall'Acqua et al. (2006) J. Biol. Chem., 281:23514-23524], 및 미국특허 제8,367,805호).
N434A 변이체(문헌[Yeung et al. (2009) J. Immunol. 182:7663])와 같이 IgG Fc에서 특정 보존된 잔기의 변형(1253, H310, Q311, H433, N434)은 FcRn 친화도를 증가시켜 순환 항체의 반감기를 증가시키는 방법으로 제안되었다(국제특허공개 제WO 98/023289호). M428L 및 N434S를 포함하는 조합 Fc 변이체는 FcRn 결합을 증가시키고 혈청 반감기를 5배까지 증가시키는 것으로 나타났다(문헌[Zalevsky et al. (2010) Nat. Biotechnol. 28:157]). T307A, E380A 및 N434A 변형을 포함하는 조합 Fc 변이체는 또한 IgG1 항체의 반감기를 연장한다(문헌[Petkova et al. (2006) Int. Immunol. 18:1759]). 또한, M252Y-M428L, M428L-N434H, M428L-N434F, M428L-N434Y, M428L-N434A, M428L-N434M, 및 M428L-N434S 변이체를 포함하는 조합 Fc 변이체가 또한 반감기를 연장하는 것으로 나타났다(미국특허 제2006/173170호). 또한, M252Y, S254T 및 T256E를 포함하는 조합 Fc 변이체가 반감기를 거의 4배로 증가시키는 것으로 보고되었다(문헌[Dall'Acqua et al. (2006) J. Biol. Chem. 281:23514]).
본 출원의 이중특이적 항종양 길항제는 IgG 백본으로 구축될 수 있다. 보다 구체적으로, 본 출원의 임의의 이중특이적 길항제는 IgG1 또는 IgG4 백본으로 구축될 수 있다. 표적이 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC)을 매개할 수 있는 항원 제시 세포 상에 존재하는 암 치료에는 IgG1 백본을 사용하는 것이 바람직하다. IgG4 백본을 사용하면 항원 결합 단독으로 원하는 치료적 이익을 생성하는데 충분한 항원을 표적화할 수 있다. IgG4-기반 길항제는 FcγR 결합 및 보체 활성화를 포함하여 예컨대 IgG1 항체와 관련된 바람직하지 않은 효과기 기능을 배제한다.
동종이량체 및 이종이량체
이중특이적 항체 제제를 효율적으로 생산하기 위한 과제 중 하나는 상이한 결합 특이성의 사슬을 동시-발현하는 경우 중쇄 및 경쇄의 미스페어링에 관한 것이다. 표 1은 상이한 결합 특이성의 중쇄 간의 미스페어링을 극복하기 위한 몇몇 아미노산 치환 선택사항을 열거하며, 이는 원하는 중쇄 간의 올바른 결합을 "강제"하거나 우선적으로 촉진한다. 중쇄 간의 미스페어링을 방지 또는 감소하기 위한 임의의 접근법이 본 개시내용에 따른 이중특이적 항종양 길항제를 제조하는데 사용될 수 있다.
"노브-인-홀"(KiH:knobs-into-hole) 접근법은 대부분의 상호작용이 발생하는 2개의 CH3 도메인 사이의 계면 수정에 의존한다. 전형적으로, 부피가 큰 잔기는 하나의 항체 중쇄의 CH3 도메인 상에 도입되어 열쇠와 유사하게 작용한다. 다른 중쇄에서, 이러한 부피가 큰 잔기를 수용할 수 있는 자물쇠를 모방하는 "홀"이 형성된다. 생성된 이종이량체 Fc-부분은 인공 이황화 가교에 의해 추가로 안정화될 수 있다.
대안적인 접근법은 이온 상호작용 또는 입체 상보성을 가진 하전된 잔기를 기반으로 한다. 이는 CH3 계면의 전하 극성을 변경하여 정전기적으로 일치하는 Fc 도메인의 동시-발현이 소수성 코어를 유지하면서 유리한 인력성 상호작용 및 이종이량체 형성을 지지하는 반면, 불리한 반발 전하 상호작용이 동종이량체화를 억제하는 것을 포함한다. 표 1을 참조한다. 표 1의 아미노산 넘버링은 Kabat 넘버링 체계를 따르며 본원에 기술된 항체의 중쇄 아미노산 서열에 적용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 면역학적 스캐폴드는 예컨대 류신 지퍼(LZ: leucine zipper) 도메인을 함유하는 또 다른 이량체 구조로 치환될 수 있다. 류신 지퍼는 단백질의 통상적인 3-차원 구조 모티프이며, 통상적으로 다양한 전사 인자에서 DNA-결합 도메인의 일부이다. 단일 LZ는 통상적으로 약 7-잔기 간격으로 4 내지 5 류신 잔기를 함유하며, 이는 한쪽 면을 따라 이어지는 소수성 영역과 함께 양친매성 알파 나선을 형성한다. 특성 실시형태에서, 이종이량체 단백질 스캐폴드는 c-fos 전사 인자로부터의 LZ와 관련된 c-jun 전사 인자로부터의 LZ를 포함한다. c-jun은 jun-jun 동종이량체를 형성하는 것으로 알려져 있고 c-fos는 동종이량체를 형성하지 않지만, jun-fos 이종이량체의 형성은 jun-jun 동종이량체보다 크게 선호된다.
류신 지퍼 도메인은 단백질 스캐폴드의 CH2-CH3 서열 대신에 통합될 수 있거나 이중특이적 항종양 길항제에서 2개의 중쇄의 카복시 말단 끝에 배치될 수 있다. 후자의 경우, 퓨린 절단 부위가 CH3의 카복시 말단 끝과 류신 지퍼의 아미노 말단 끝에 도입될 수 있다. 이는 적절한 포유류 세포 발현 시스템에서 이중특이적 항종양 길항제의 중쇄 및 경쇄를 동시-발현하는 경우 이종이량체화 단계 후 류신 지퍼의 퓨린-매개 절단을 촉진할 수 있다(문헌[Wranik et al., J. Biol. Chem., 287(5):43331-43339, 2012] 참조).
유형 HC1 HC2
노브-인투-홀 Y349C, T366S, L368A, Y407V S354C, T366W
이온성, 정전기적 S183E, E356K, E357K, D399K S183K, K370E, K409D, K439E
이온성, 정전기적 K392D, K409D E356K, D399K
HA-TF 치환 S364H, F405A Y349T, T394F
HF-TA 치환 S364H, T394F Y349T, F405A
류신 지퍼 이종이량체 인간 c-Jun 류신 지퍼 인간 c-fos 류신 지퍼
표 1의 아미노산 넘버링은 Kabat 넘버링 체계를 따르며 본원에 기술된 항체의 중쇄 아미노산 서열에 적용될 수 있다. 표 1에 기술된 돌연변이는 임의의 면역글로불린 IgG1 중쇄(공개된 것 또는 기타), 및 다른 면역글로불린 부류, 및 그 안의 하위부류(또는 이소타입)의 서열에 적용될 수 있다.
단일특이적, 이중특이적 항체의 중쇄 및 경쇄를 동시-발현하는 경우, 하나의 결합 특이성의 경쇄는 또한 상이한 결합 특이성의 중쇄와 미스페어링될 수 있다. 따라서, 특정 실시형태에서, 중쇄, 경쇄, 또는 둘 모두의 일부는 이들이 유래된 "야생형" 항체 사슬에 대해 변형되어 두 중쇄 불변 영역의 서로에 대한 미스페어링, 및 경쇄 불변 영역의 이들의 중쇄 대응 영역과의 미스페어링을 방지 또는 감소시킬 수 있다.
경쇄 미스페어링 문제는 다양한 방식으로 해결될 수 있다. 일부 실시형태에서, 입체적으로 상보적인 돌연변이 및/또는 이황화 가교가 2개의 VL/VH 계면에 포함될 수 있다. 다른 실시형태에서, 돌연변이는 이온성 또는 정전기적 상호작용에 기초하여 포함될 수 있다. 일부 실시형태에서, 경쇄 미스페어링은 중쇄의 CH1 도메인에서 S183E 돌연변이 및 경쇄의 CL 도메인에서 S176K 돌연변이가 있는 제1 팔을 사용함으로써 방지 또는 감소될 수 있다. 제2 팔은 중쇄의 CH1 도메인의 S183K 돌연변이 및 경쇄의 CL 도메인의 S176E 돌연변이를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에서, "CrossMab" 접근법이 사용되며, 여기서, 이중특이적 항종양 길항제(예컨대, Fab)의 하나의 팔은 그대로 두지만, 다른 결합 특이성을 포함하는 다른 팔에서는, 경쇄의 하나 이상의 도메인이 중쇄:경쇄 계면에서 중쇄의 하나 이상의 도메인과 교환된다.
상기 개시된 바와 같은 중쇄 및 경쇄의 미스페어링을 방지하기 위한 특정 돌연변이를 포함하는 방법, 면역글로불린 도메인 서열이 미국 특허 공개 제2014/0243505호, 제2013/0022601호에 추가로 기술되어 있다.
접합체
특정 실시형태에서, 본 출원의 항종양 길항제는 하나 이상의 펩티드 및/또는 소분자 약물에 화학적으로 접합된다. 펩티드 또는 소분자 약물은 동일하거나 다를 수 있다. 펩티드 또는 소분자 약물은 예컨대 감소된 SH기 및/또는 탄수화물 측쇄에 부착될 수 있다. 항체와 펩티드 또는 소분자 약물의 공유 또는 비공유 접합체를 제조하는 방법이 당업계에 공지되어 있으며 임의의 이러한 공지된 방법이 이용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 펩티드 또는 소분자 약물은 이황화 결합 형성을 통해 감소된 항체 성분의 힌지 영역에 부착된다. 대안적으로, 이러한 제제는 N-숙시닐 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP)와 같은 이종이작용성 가교결합제를 사용하여 부착될 수 있다. 이러한 접합을 위한 일반적인 기술이 당업계에 널리 공지되어 있다. 일부 실시형태에서, 펩티드 또는 소분자 약물은 항체의 Fc 영역에서 탄수화물 모이어티를 통해 접합된다. 탄수화물기는 티올기에 부착된 동일한 제제의 로딩을 증가시키기 위해 사용될 수 있거나, 탄수화물 모이어티는 다른 치료제 또는 진단제에 결합하기 위해 사용될 수 있다. 항체 탄수화물 모이어티를 통해 펩티드 억제제 또는 소분자 약물을 항체에 접합하는 방법이 당업자에게 널리 공지되어 있다. 예컨대, 일 실시형태에서, 상기 방법은 산화된 탄수화물 부분을 가진 항체 성분을 적어도 하나의 유리 아민 기능을 가진 담체 중합체와 반응시키는 것을 포함한다. 이러한 반응은 초기 Schiff 염기(이민) 결합을 초래하며, 이는 최종 접합체를 형성하기 위해 2차 아민으로 환원함으로써 안정화될 수 있다. 소분자 약물 및 펩티드를 항체에 접합하는 예시적인 방법이 미국 특허 출원 공개 제2014/0356385호에 기술되어 있다.
바람직하게는, 본 개시내용의 항종양 길항제는, 바람직한 시험관 내 및 생체 내 안정성(예컨대 반감기 단독 및 저장-수명 안정성), 원하는 표적 세포로의 효율적인 전달, 결합 상대에 대한 증가된 친화도, 바람직한 항체-의존적 세포-매개 세포독성 및 보체-의존적 세포독성, 및 감소된 신장 제거 및 배출을 포함하여, 항체의 특정 바람직한 특성 및 약동학 특성을 유지한다. 따라서, 항종양 길항제의 설계에서 크기 및 특정 불변 영역 효과기 기능의 필요성에 대한 세심한 주의가 고려될 수 있다.
이로부터 유래된 단일특이적, 이중특이적 항종양 길항제를 포함하는, 항-TIGIT, 항-PD-1 및 항-PD-L1 억제제는 크기가 50 kD 내지 300 kD, 50 kD 내지 250 kD, 60 kD 내지 250 kD, 80 kDa 내지 250 kD, 100 kD 내지 250 kD, 125 kD 내지 250 kD, 150 kD 내지 250 kD, 60 kD 내지 225 kD, 75 kD 내지 225 kD, 100 kD 내지 225 kD, 125 kD 내지 225 kD, 150 kD 내지 225 kD, 60 kD 내지 200 kD, 75 kD 내지 200 kD, 100 kD 내지 125 kD 내지 200 kD, 150 kD 내지 200 kD, 60 kD 내지 150 kD, 75 kD 내지 150 kD, 100 kD 내지 150 kD, 60 kD 내지 125 kD, 75 kD 내지 125 kD, 75 kD 내지 100 kD, 또는 상기 언급된 범위에 열거된 정수의 임의의 조합으로 포함되는 임의의 범위 또는 임의의 상기 언급된 범위 사이의 정수의 임의의 조합으로 구체화된 임의의 범위의 범위일 수 있다.
키트
본 출원은 본 출원의 임의의 하나 이상의 체크포인트 조절제 길항제 또는 항종양 길항제를 포함하는 키트를 추가로 제공한다. 일부 실시형태에서, 키트는 투여용 주사기 및 바늘을 포함하는 추가 성분, 및 검출용 2차 항체를 포함하는 시약, 및 이와 함께 병용 치료에 사용하기 위한 본원에 기술된 추가 인간 항체를 추가로 함유한다. 키트는 전형적으로 키트 내용물의 의도된 용도를 지시하는 표지 및/또는 지침서를 포함한다. 표지 및 지침서는 키트에 제공되거나 키트와 함께 제공되거나, 다른 방식으로 키트와 함께 수반되는 임의의 글, 또는 기록 자료를 포함할 수 있다.
III. 항종양 길항제의 사용 방법
본 출원의 항종양 길항제는 예컨대 면역 반응 및 암 치료, 감염 질환, 또는 자가면역 질환의 향상을 포함하는 다양한 시험관 내 및 생체 내 유용성을 갖는다.
특정 실시형태에서, 본 출원은 다음을 치료하는 방법을 제공한다: 세포 증식성 장애, 종양에서 조절 T 세포를 감소 또는 고갈시키는 방법; 미생물 감염 치료 방법; 또는 면역학적 장애 치료 방법, 여기서 상기 방법은 본 출원에 따른 유효량의 항종양 길항제를 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 출원의 항종양 길항제는 다양한 질환에서 면역을 향상시키기 위해 배양 중인 세포, 생체 내, 또는 생체 외, 또는 인간 대상에, 예컨대 생체 내에 투여된다. 따라서, 본원에 기술된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 대상에 투여하여 대상에서 면역 반응이 향상, 자극 또는 상향조절되는 것을 포함하는 대상에서 면역 반응을 변형시키는 방법이 본원에서 제공된다. 바람직한 대상은 면역 반응의 향상이 바람직한 인간 환자를 포함한다. 상기 방법은 면역 반응(예컨대, T-세포 매개 면역 반응)을 증가시킴으로써 치료될 수 있는 장애를 가진 인간 대상을 치료하는데 특히 적합하다. 상기 방법은 생체 내 암 또는 만성 감염의 치료에 특히 적합하다. 예컨대, 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 조성물은 관심 항원과 함께 투여될 수 있거나 항원이 항원-특이적 면역을 향상시키기 위해 치료될 대상(예컨대, 종양-보유 또는 바이러스-보유 대상)에 이미 존재할 수 있다. 항-TIGIT 항체가 또 다른 제제와 함께 투여되는 경우, 2개는 개별적으로 또는 동시에 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 전술된 방법에서 사용되는 체크포인트 조절제 길항제는 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 이의 단편, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시형태에서, 체크포인트 조절제 길항제는 단일특이적 또는 이중특이적 항체이다.
일부 실시형태에서, 체크포인트 조절제 길항제 또는 항종양 길항제는 항체 또는 항체 단편 형태이다. 일부 실시형태에서, 본원에 기술된 항체는 인간 또는 인간화된 항체이다.
또한, 항체 또는 이의 항체 단편과 인간 TIGIT, 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1 사이에 복합체 형성을 가능케 하는 조건 하에서 샘플, 및 대조군 샘플을 인간 TIGIT, 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는, 이의 인간 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉하는 단계를 포함하는, 샘플에서 인간 TIGIT, 인간 PD-1, 인간 PD-L1 또는 인간 LAG3의 존재를 검출 및/또는 측정하는 방법을 포함한다. 이어서 복합체 형성이 검출되며, 여기서 대조군 샘플과 비교된 샘플 간의 복합체 형성의 차이는 샘플 중의 인간 TIGIT 항원의 존재를 나타낸다.
항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 및 항-LAG-3 항체가 T 세포 반응, 예컨대 항원-특이적 T 세포 반응의 억제 또는 동시-억제를 차단하는 능력이 주어지면, 본원에는 항원-특이적 T 세포 반응, 예컨대 항-종양 T 세포 반응을 자극, 향상 또는 상향조절하기 위해 본원에 기술된 항체를 사용하는 시험관 내 및 생체 내 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, CD3 자극이 또한 제공되며(예컨대, 세포 발현 막 CD3와의 공동-인큐베이션에 의해), 이는 자극이 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체로 치료하는 동시에, 치료 전에 또는 치료 후에 제공될 수 있다. 예컨대, 본 출원은 T 세포를 본원에 기술된 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체, 및 선택적으로 CD3와 접촉시켜 예컨대 TIGIT, PD-1, PD-L1 또는 LAG-3 매개 억제 효과의 제거에 의해 항원-특이적 T 세포 반응이 향상되는 단계를 포함하는, 항원-특이적 T 세포 반응을 향상시키는 방법을 제공한다. 항원-특이적 T 세포 반응의 임의의 적합한 지표를 사용하여 항원-특이적 T 세포 반응을 측정할 수 있다. 이러한 적합한 지표의 비-제한적인 예는 항체의 존재 하에 T 세포 증식 증가 및/또는 항체의 존재 하에 사이토카인 생성 증가를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 항원-특이적 T 세포에 의한 인터류킨-2 및/또는 인터페론-.감마. 생성이 향상된다.
본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 또는 이중특이적 항종양 길항제를 대상에 투여하여 대상에서 면역 반응(예컨대 항원-특이적 T 세포 반응)을 향상시키는 것을 포함하는, 대상에서 면역 반응(예컨대 항원-특이적 T 세포 반응)을 향상시키는 방법이 추가로 포함된다. 바람직한 실시형태에서, 대상은 종양-보유 대상이고 종양에 대한 면역 반응이 향상된다. 종양은 고형 종양 또는 액상 종양, 예컨대 혈액악성종양일 수 있다. 특정 실시형태에서, 종양은 면역원성 종양이다. 다른 실시형태에서, 종양은 비-면역원성이다. 특정 실시형태에서, 종양은 PD-L1 양성이다. 다른 실시형태에서, 종양은 PD-L1 음성이다. 대상은 또한 바이러스-보유 대상일 수 있으며 여기서 바이러스에 대한 면역 반응은 본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 단일특이적 항종양 길항제 또는 이중특이적 항종양 길항제의 투여 결과 향상된다.
일 실시형태에서, 대상에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법은 본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제를 대상에 투여하여 대상에서 종양 성장을 억제하는 것을 포함한다. 또한, 본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제를 대상에 투여하여 대상에서 만성 바이러스 감염을 치료하는 것을 포함하는, 대상에서 만성 바이러스 감염을 치료하는 방법이 제공된다.
또한, 종양 미세환경에서 Treg 세포의 고갈을 자극하는 Fc를 포함하는 본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 또는 이중특이적 항종양 길항제의 치료 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함하는, 종양, 예컨대 암성 종양을 가진 대상의 종양 미세환경으로부터 Treg 세포를 고갈시키는 방법이 본원에 포함된다. Fc는, 예컨대 하나 이상의 활성화 Fc 수용체에 결합하거나 결합을 강화하는 것과 같은 효과기 기능 또는 향상된 효과기 기능을 가진 Fc일 수 있다.
바람직한 실시형태에서, Treg 고갈은 종양 미세환경에서 Teff의 상당한 고갈 또는 억제 없이, 그리고 종양 미세환경 밖에서 Teff 세포 및 Treg 세포의 상당한 고갈 또는 억제 없이 발생한다. 특정 실시형태에서, 대상은 예컨대 종양 미세환경에서 Teff 세포보다 Treg 세포에 대해 더 높은 수준의 TIGIT를 갖는다. 특정 실시형태에서, 항-TIGIT 항체 또는 길항제는 종양의 Tregs 및/또는 종양 침윤 림프구(TIL: tumor infiltrating lymphocyte)의 Tregs를 고갈할 수 있다. 예컨대, CT26 종양 모델에서, 마우스 IgG2a(효과기 기능을 나타냄)로 포맷화된 항-마우스 TIGIT 항체는 Treg 및 CD8+ T 세포 둘 모두를 부분적으로 고갈시키지만, CD4+ T 세포는 고갈시키지 않았다. 마우스 IgG1 D265A로 포맷화된 효과기가 없는 대응 항-TIGIT 항체는 T 세포를 고갈시키지 않았다.
Fc 효과기 기능 또는 효과기가 없는 항-TIGIT 항체를 사용할 지 여부를 고려할 때, 항-종양 면역 반응을 향상시킬 수 있는 Tregs의 고갈과 종양 세포를 실제로 사멸시키는데 필요한 일부 세포를 제거하는 CD8+ T 세포의 고갈 사이의 상충관계를 적절히 고려해야 한다. Tregs의 고갈이 항-종양 활성을 향상시킬 것으로 예상되지만, 최근 연구에 따르면 TIGIT+ Tregs 상의 TIGIT의 결찰(ligation)이 Teff 세포 증식의 Treg 세포-매개 억제를 촉진하는 것으로 입증되었으며(문헌[Joller et al. (2014) Immunity 40:569]), 이는 TIGIT 신호전달의 차단(예컨대, 본 발명의 길항제 항-TIGIT 항체를 사용하여)이 항-종양 활성을 또한 향상시킬 수 있음을 시사한다. 따라서, 효과기 기능이 없는 길항제 항-TIGIT 항체를 사용하는 것이 가장 효과적일 수 있으며, 이는 i) Tregs의 TIGIT 신호전달을 차단하여 이의 면역억제 활성을 감소시키고; ii) TIGIT의 억제 효과를 차단하는 동시에 이의 효과기-기능-매개 고갈을 회피하여 항-종양 CD8+ T 세포를 활성화하고; iii) DNAM이 그렇지 않으면 TIGIT에 의해 결합되었을 PVR(CD155, TIGIT 리간드)에 결합하도록 함으로써(그리고 직접적인 TIGIT-DNAM 상호작용을 감소시킴으로써) DNAM-매개 활성화를 향상시킨다(문헌[Johnston et al. (2014) Cancer Cell 26:923]). 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제의 사용에도 동일하게 적용될 수 있다.
특정 실시형태에서, 본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제가 보조 요법으로서 대상에게 제공된다. 본 출원에 따른 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제를 사용하여 암 환자를 치료하는 것은 현재 치료 표준에 비해 장기 지속 반응; 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 10년 이상의 장기 생존, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 10년 이상의 재발 없는 생존으로 이어질 수 있다. 특정 실시형태에서, 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제로 암 환자를 치료하는 것은, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 또는 10년 이상까지 암의 재발을 방지하거나 암 재발을 지연한다. 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 치료는 1차 또는 2차 치료 라인으로 사용될 수 있다.
특정 바람직한 실시형태에서, 대상은 세포 증식성 질환 또는 암을 갖는다. 항-TIGIT 항체에 의한 TIGIT를 통한 PVR/Nectin-2 신호전달의 차단은 환자에서 암성 세포에 대한 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 유사하게, 본원에 제공된 차단은 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-LAG-3 또는 이의 이중특이적 항종양 길항제를 대상에 투여하여 대상이 치료되는 단계를 포함하는, 예컨대 암성 종양의 성장이 억제 또는 감소되고/되거나 종양이 퇴행하는 단계를 포함하는, 암에 걸린 대상을 치료하는 방법이다. 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-LAG-3 또는 이의 이중특이적 항종양 길항제는 단독으로 사용되어 암성 종양의 성장을 억제할 수 있다. 대안적으로, 임의의 이러한 항종양 길항제는 또 다른 제제, 예컨대 기타 항암 표적, 면역원성 제제, 표준 암 치료, 또는 하기된 바와 같은 기타 항체와 함께 사용될 수 있다.
따라서, 치료 유효량의 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 길항제, 또는 이중특이적 항종양 길항제를 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서, 예컨대 종양 세포의 억제에 의해 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 바람직하게는, 항체는 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 HCVR 및 LCVR을 포함하는 인간 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체이거나, 이는 키메라, 인간화된, 또는 비-인간 항-hu TIGIT, 항-hu PD-1, 항-PD-L1 항체 또는 항-LAG-3 항체일 수 있거나, 예컨대 본원에 기술된 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체 중 적어도 하나와 동일한 에피토프에 대한 결합에 대해 경쟁하거나 이와 동일한 에피토프에 결합하는 키메라, 인간화된, 또는 비-인간 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체일 수 있다.
본 발명의 항체를 사용하여 성장이 억제될 수 있는 암에는 일반적으로 면역요법에 반응하는 암이 포함된다. 치료를 위한 암의 비-제한적인 예는 편평세포 암종(squamous cell carcinoma), 소-세포 폐암(small-cell lung cancer), 비소 세포 폐암(non-small cell lung cancer), 편평 비소 세포 폐암(NSCLC:non-small cell lung cancer), 비 NSCLC, 신경교종(glioma), 위장관암(gastrointestinal cancer), 신세포암(renal cancer)(예컨대 투명 세포 암종(clear cell carcinoma)), 난소암(ovarian cancer), 간암(liver cancer), 결장직장암(colorectal cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 신장암(kidney cancer)(예컨대, 신세포 암종(RCC: renal cell carcinoma)), 전립선암(예컨대 호르몬 불응성 전립선 선암종(hormone refractory prostate adenocarcinoma)), 갑상선암(thyroid cancer), 신경모세포종(neuroblastoma), 췌장암(pancreatic cancer), 교모세포종(glioblastoma)(교모세포종 다형성(glioblastoma multiforme)), 자궁경부암(cervical cancer), 위암(stomach cancer), 방광암(bladder cancer),간세포암(hepatoma), 유방암(breast cancer), 대장 암종(colon carcinoma), 및 두경부암(head and neck cancer)(또는 암종), 위암(gastric cancer), 생식 세포 종양(germ cell tumor), 소아 육종(pediatric sarcoma), 비부동 자연 살해(sinonasal natural killer), 흑색종(melanoma)(예컨대, 전이성 악성 흑색종, 예컨대 피부(cutaneous) 또는 안구 내(intraocular) 악성 흑색종), 골암(bone cancer), 피부암(skin cancer), 자궁암(uterine cancer), 항문 부위 암(cancer of the anal region), 고환암(testicular cancer), 난관 암종(carcinoma of the fallopian tubes), 자궁내막 암종(carcinoma of the endometrium), 자궁경부 암종(carcinoma of the cervix), 질 암종(carcinoma of the vagina), 외음부 암종(carcinoma of the vulva), 식도암(cancer of the esophagus), 소장암(cancer of the small intestine), 내분비계암(cancer of the endocrine system), 부갑상선암(cancer of the parathyroid gland), 부신암(cancer of the adrenal gland), 연조직 육종(sarcoma of soft tissue), 요도암(cancer of the urethra), 음경암(cancer of the penis), 소아 고형 종양(solid tumors of childhood), 요관암(cancer of the ureter), 신우 암종(carcinoma of the renal pelvis), 중추신경계 신생물(neoplasm of the central nervous system(CNS)), 원발성 CNS 림프종(primary CNS lymphoma), 종양 혈관신생(tumor angiogenesis), 척추 종양(spinal axis tumor), 뇌간 신경교종(brain stem glioma), 뇌하수체 선종(pituitary adenoma), 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 표피암(epidermoid cancer), 편평세포 암(squamous cell cancer), T-세포 림프종(T-cell lymphoma), 석면 유발된 암, 바이러스-관련 암(예컨대, 인간 유두종 바이러스(HPV: human papilloma virus)-관련 종양), 및 두 가지 주요 혈액 세포 계통, 즉 골수성 세포주(과립구, 적혈구, 혈소판, 대식세포, 및 비만 세포를 생성) 또는 림프구 세포주(B, T, NK 및 형질 세포를 생성) 중 하나로부터 유도된 혈액 악성 종양을 포함하는 환경-유도 암, 예컨대 모든 유형의 백혈병, 림프종, 및 골수종, 예컨대 급성, 만성, 림프구성 및/또는 골수성 백혈병, 예컨대 급성 백혈병(ALL: acute leukemia), 급성 골수성 백혈병(AML: acute myelogenous leukemia), 만성 림프구성 백혈병(CLL: chronic lymphocytic leukemia), 및 만성 골수성 백혈병(CML: chronic myelogenous leukemia), 미분화 AML(MO), 골수모구 백혈병(myeloblastic leukemia)(M1), 골수모구 백혈병(myeloblastic leukemia)(M2; 세포 성숙 수반), 전골수성 백혈병(promyelocytic leukemia)(M3 또는 M3 변이체 [M3V]), 골수단핵구 백혈병(myelomonocytic leukemia)(M4 또는 호산구 증가증을 수반하는 M4 변이체[M4E]), 단핵구 백혈병(monocytic leukemia)(M5), 적혈구백혈병(erythroleukemia)(M6), 거대핵모세포성 백혈병(megakaryoblastic leukemia)(M7), 단리된 과립구성 육종(isolated granulocytic sarcoma), 및 녹색종(chloroma); 림프종, 예컨대 호지킨 림프종(HL: Hodgkin's lymphoma), 비-호지킨 림프종(NEIL: non-Hodgkin's lymphoma), B-세포 림프종, T-세포 림프종, 림프형질세포 림프종(lymphoplasmacytoid lymphoma), 단세포성(monocytoid) B-세포 림프종, 점막-관련 림프구 조직(MALT: mucosa-associated lymphoid tissue) 림프종, 역형성(anaplastic)(예컨대, Ki 1+) 거대-세포 림프종, 성숙 T-세포 림프종/백혈병, 멘틀 세포 림프종(mantle cell lymphoma), 혈관 면역모세포(angio immunoblastic) T-세포 림프종, 혈관중심성(angiocentric) 림프종, 장내(intestinal) T-세포 림프종, 원발성 종격동(primary mediastinal) B-세포 림프종, 전구체(precursor) T-림프모구 림프종, T-림프모구; 및 림프종/백혈병(T-Lbly/T-ALL), 말초(peripheral) T-세포 림프종, 림프모구 림프종, 이식 후 림프증식성 장애(post-transplant lympho- proliferative disorder), 진성 조직구성 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, 원발성 삼출 림프종, 림프모구 림프종(LBL), 림프구 계통의 조혈모세포 종양(hematopoietic tumors of lymphoid lineage), 급성 림프모구 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종, 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 여포성 림프종, 미만성 조직구성 림프종(DHL), 면역모세포성 거대 세포 림프종, 전구 B-림프모구 림프종, 피부(cutaneous) T-세포 림프종(CTLC)(진균 곰팡이 또는 세자리 증후군(Sezary syndrome)으로도 지칭됨), 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia)을 수반하는 림프형질세포 림프종; 골수종, 예컨대 IgG 골수종, 경쇄 골수종, 비분비성 골수종, 무증상 골수종(smoldering myeloma)(무통성 골수종(indolent myeloma)으로도 지칭됨), 고립성 형질세포종(solitary plasmocytoma), 및 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 모발 세포(hairy cell) 림프종; 골수성 계통의 조혈모세포 종양(hematopoietic tumors of myeloid lineage), 섬유육종 및 횡문근 육종을 포함하는 중간엽 기원 종양; 정상피종(seminoma), 기형암종(teratocarcinoma), 성상세포종(astrocytoma), 신경초종(schwannomas)을 포함하는 중추 및 말초 신경 종양; 섬유육종, 횡문근 육종, 및 골육종을 포함하는 중간엽 기원 종양; 및 흑색종, 색소 피부 건조증(xeroderma pigmentosum), 각질 가시 세포종(keratoacanthoma), 정상피종(seminoma), 갑상선 여포암 및 기형암종을 포함하는 기타 종양, 림프구 계통의 조혈모세포 종양, 예컨대 비제한적으로 T-세포 장애 예컨대 소세포 및 대뇌상 세포 유형을 포함하는 T-전림프구성 백혈병(T-PLL)을 포함하는 T-세포 및 B-세포 종양; 바람직하게는 T-세포 유형의 거대 과립 림프구성 백혈병(LGL: large granular lymphocyte leukemia); a/d T-NHL 간비장 림프종; 말초/흉선-후(peripheral/post-thymic) T 세포 림프종(다형성 및 면역모세포 아형); 혈관중심성(비강) T-세포 림프종; 두경부암, 신세포암, 직장암, 갑상선암; 급성 골수성 림프종, 및 상기 암들의 임의의 조합을 포함한다. 본원에 기술된 방법은 또한 전이성 암, 불응성 암(예컨대 이전 면역요법, 예컨대 CTLA-4 차단 또는 PD-1 항체를 사용한 것에 대해 불응성인 암), 및 재발성 암의 치료에 사용될 수 있다.
항-TIGIT, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제는 단독으로, 또 다른 항종양 길항제와 병용하여, 또는 또 다른 항종양 길항제와 동시에 투여될 수 있다. 항-TIGIT, 항-PD-1 항체, 항-LAG-3 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제는 또한 면역원성 제제, 예컨대 암세포, 종양 백신, 정제된 종양 항원(재조합 단백질, 펩티드, 및 탄수화물 분자 포함), 암 백신 전략(문헌[He et al. (2004) J. Immunol. 173:4919-28])에서 면역 자극 사이토카인을 코딩하는 유전자로 형질감염된 세포, 또는 종양용해성 바이러스와 병용하여, 또는 이와 동시에 투여될 수 있다.
종양에 대한 백신 접종을 위한 다수의 실험적인 전략이 고안되었다. 이러한 전략 중 하나에서, 백신은 자가 또는 동종 종양 세포를 사용하여 제조된다. 이러한 세포 백신 중 일부는 종양 세포가 GM-CSF를 발현하도록 형질도입될 때 가장 효과적인 것으로 밝혀졌다. GM-CSF는 종양 백신 접종을 위한 항원 제시의 강력한 활성제인 것으로 밝혀졌다(문헌[Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 3539-43]). 암 백신은 전임상 모델에서 종양으로의 효과기 T-세포 침윤을 향상시키는 것으로 나타났다. 암 백신의 주요 유형은 펩티드 백신, 벡터-기반 항원 특이적 백신, 전-세포 백신, 및 수지상 세포 백신을 포함한다. 모든 백신-기반 요법은 전체 세포에서 환자에게 단일 또는 다중 항원 에피토프 또는 항원을 전달하고 종양-특이적 효과기 T 세포를 유도하도록 설계된다. 따라서, 백신-기반 요법은 T-세포 침윤을 종양으로 유도하는 가장 효율적인 방식일 수 있다.
다양한 종양에서 유전자 발현 및 대규모 유전자 발현 패턴에 대한 연구는 소위 종양 특이적 항원의 정의로 이어졌다(문헌[Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7]). 다수의 경우에, 이러한 종양 특이적 항원은 종양 및 종양이 발생한 세포에서 발현되는 분화 항원이며, 예컨대 멜라닌세포 항원 gp100, MAGE 항원, 및 Trp-2이다. 보다 중요한것은, 이러한 항원의 다수가 숙주에서 발견되는 종양 특이적 T 세포의 표적임을 보여줄 수 있다는 것이다.
TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제는 이러한 단백질에 대한 면역 반응을 생성하기 위해 종양에서 발현되는 재조합 단백질 및/또는 펩티드의 집합과 함께 사용될 수 있다. 이러한 단백질은 면역계에서 자가-항원으로 간주될 수 있으므로 이들에게 내성이 있다. 종양 항원은 염색체의 텔로미어 합성에 필요하고 인간 암의 85% 초과와 제한된 수의 체세포 조직에서만 발현되는 단백질 텔로머라제를 포함할 수 있다(문헌[Kim et al. (1994) Science 266: 2011-2013)]. 종양 항원은 또한 단백질 서열을 변경하거나 두 개의 관련되지 않은 서열(즉, 필라델피아 염색체에서의 bcr-abl) 사이에 융합 단백질을 생성하는 체세포 돌연변이 또는 B 세포 종양의 이디오타입으로 인해 암세포에서 발현되는 "신생-항원"일 수 있다.
종양 백신의 비-제한적인 예는 전이성 전립선 암에 대한 FDA-승인 종양 백신인 시풀루셀(sipuleucel)-T(Provenge®); 사이토카인 과립구성 대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF: granulocyte macrophage colony-stimulating factor)를 발현하도록 형질감염된 종양 세포, 예컨대 전체 세포 GM-CSF-분비 조사된, 동종 췌장암 백신(GVAX; Johns Hopkins); 유방암 항원, 뉴(neu), 레구메인(legumain), 및 β-카테닌에서 유래된 면역원성 펩티드로 구성된 다중-펩티드 백신, 이는 항-PD-1 항체와 병용투여될 때 유방-종양-보유 마우스의 백신-유도 무진행의 생존을 연장시켰음(문헌[Karyampudi L. et al. (2014) Cancer Res 74:2974-2985)]; 흑색종 항원의 펩티드, 예컨대 gp100, MAGE 항원, Trp-2, MARTI 및/또는 티로시나제의 펩티드를 포함한다, 또는. 다른 종양 백신은 인간 암과 관련된 바이러스의 단백질 예컨대 인간 유두종 바이러스(HPV: human papilloma viruses)(예컨대, Gardasil®, Gardasil 9®, 및 Cervarix®; B형 간염 바이러스(예컨대, Engerix-B 및 Recombivax HB); C형 간염 바이러스(HCV), 카포시 육종 관련 헤르페스 육종 바이러스(KSHV: Kaposi’s sarcoma associated herpes sarcoma virus)를 포함한다. TIGIT 억제와 함께 사용될 수 있는 종양 특이적 항원의 또 다른 형태는 종양 조직 자체에서 분리된 정제된 열 충격 단백질(HSP: heat shock proteins)이다. 이러한 열 충격 단백질은 종양 세포의 단백질의 단편을 함유하며 이러한 HSP는 종양 면역을 유도하기 위한 항원 제시 세포로의 전달에 매우 효율적이다. 탈리모진 라헤르파렙벡(Talimogene laherparepvec)(T-VEC, 또는 Imlygic®)은 수술로 제거할 수 없는 전이성 흑색종을 가진 일부 환자의 치료를 위한 FDA-승인 종양용해성 바이러스이다.
수지상 세포(DC: Dendritic cells)는 항원-특이적 반응을 프라이밍하는 데 사용될 수 있는 강력한 항원 제시 세포이다. DC는 생체 외에서 생산될 수 있으며 다양한 단백질 및 펩티드 항원과 종양 세포 추출물로 로딩될 수 있다(문헌[Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332]). DC는 또한 이러한 종양 항원을 발현하기 위해 유전적 수단에 의해 형질도입될 수 있다. DC는 또한 면역화 목적으로 종양 세포에 직접 융합되었다(문헌[Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336]). 백신 접종의 방법으로서, DC 면역화는 TIGIT 차단과 효과적으로 병용되어 보다 강력한 항-종양 반응을 활성화(촉발)할 수 있다.
TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제는 또한 표준 암 치료(예컨대, 수술, 방사선, 및 화학요법)와 병용될 수 있다. 특히, TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제는 화학요법 치료법과 효율적으로 병용될 수 있다. 이러한 경우, 투여되는 화학요법제의 용량을 줄이는 것이 가능할 수 있다(문헌[Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304]). 이러한 병용의 예는 흑색종 치료를 위한 데카르바진과 병용된 항종양 길항제이다. 이러한 병용의 또 다른 예는 흑색종 치료를 위한 인터류킨-2(IL-2)와 병용된 체크포인트 조절제 길항제 또는 항종양 길항제이다. 예컨대, 세포 사멸을 촉진하기 위한 TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제 및 화학요법의 병용에 대한 과학적 근거는 대부분의 화학요법 화합물의 세포독성 작용의 결과이며, 항원 제시 경로에서 종양 항원의 수치가 증가해야 한다. 세포 사멸을 통한 TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제와 상승작용을 일으킬 수 있는 다른 병용 요법은 방사선, 수술, 및 호르몬 결핍이다. 이러한 프로토콜 각각은 숙주에서 종양 항원의 공급원을 생성한다. 혈관신생 억제제가 또한 TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제와 병용될 수 있다. 혈관신생의 억제는 종양 세포 사멸로 이어지며, 이는 종양 항원을 숙주 항원 제시 경로로 공급할 수 있다.
본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 및 이중특이적 항종양 길항제는 또한 Fcα 또는 Fcγ 수용체-발현 효과기 세포를 종양 세포로 표적화하는 이중특이적 항체와 병용하여 사용될 수 있다(예컨대, 미국특허 제5,922,845호 및 제5,837,243호 참조). 이중특이적 항체는 2개의 개별적인 항원을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 예컨대 항-Fc 수용체/항종양 항원(예컨대, Her-2/neu) 이중특이적 항체는 대식세포를 종양 부위에 표적화하기 위해 사용되어 왔다. 이러한 표적화는 종양 특이적 반응을 보다 효율적으로 활성화할 수 있다. 이러한 반응의 T 세포 팔은 TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3의 억제에 의해 증가될 것이다. 대안적으로, 항원은 종양 항원 및 수지상 세포 특이적 세포 표면 마커와 결합하는 이중특이적 항체의 사용에 의해 DC에 직접적으로 전달될 수 있다.
종양은 매우 다양한 기작에 의해 숙주 면역 감시를 회피한다. 이러한 기작의 대부분은 종양에 의해 발현되는 면역억제 단백질의 불활성화에 의해 극복될 수 있다. 이는 특히 TGF-β, IL-10, 및 Fas 리간드를 포함한다. 이러한 개체 각각에 대한 항체는 면역억제제 효과를 상쇄시키고 숙주에 의한 종양 면역 반응을 선호하기 위해 본원에 기술된 항종양 길항제와 병용하여 사용될 수 있다.
숙주 면역 반응을 활성화하는 다른 항체는 본원에 기술된 항종양 길항제와 병용하여 사용될 수 있다. 이는 DC 기능 및 항원 제시를 활성화하는 수지상 세포의 표면 상의 분자를 포함한다. 항-CD40 항체는 T 세포 헬퍼 활성을 효과적으로 대체할 수 있으며(문헌[Ridge et al. (1998) Nature 393: 474-478]) 항-TIGIT 항체와 함께 사용될 수 있다. T 세포 공동 자극 분자에 대한 활성화 항체, 예컨대 OX-40(문헌[Weinberg et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169]), CD137/4-1BB(문헌[Melero et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997]), 및 ICOS(문헌[Hutloff et al. (1999) Nature 397: 262-266])가 또한 T 세포 활성화 수준을 증가시키기 위해 제공될 수 있다. 또한, 다른 면역 체크포인트 조절제의 억제제가 아래 추가로 기술되는 바와 같이, 본원에 기술된 다른 항종양 길항제와 함께 사용될 수 있다.
골수 이식은 현재 조혈 기원의 다양한 종양을 치료하기 위해 사용되고 있다. 이식편 대 숙주 질환이 본 치료의 결과이지만, TIGIT 억제는 이식편 대 종양 반응을 감소시킴으로써 공여자 이식된 종양 특이적 T 세포의 효과를 증가시키는데 사용될 수 있다.
항-TIGIT 항체의 존재 하에 암 또는 바이러스 감염에 대해 항원-특이적 T 세포를 자극하기 위해 항원 특이적 T 세포의 생체 외 활성화 및 확장 및 수용자들에게 이들 세포의 적응 전달은 적응적으로 전달된 T 세포의 빈도 및 활성을 증가시킬 수 있다.
또한 종양에 대한 항원-특이적 T 세포를 자극하기 위해 생체 외 활성화 및 항원 특이적 T 세포의 확장 및 이들 세포를 수용자들에게 적응 전달하는 것을 포함하는 몇몇 실험적 치료 프로토콜이 존재한다(문헌[Greenberg & Riddell (1999) Science 285: 546-51]). 이러한 방법은 CMV와 같은 감염원에 대한 T 세포 반응을 활성화하는 데에도 사용될 수 있다. 항-TIGIT 항체의 존재 하에 생체 외 활성화는 적응적으로 전달된 T 세포의 빈도와 활성화를 증가시킬 수 있다.
특정 실시형태에서, 본원에 기술된 항종양 길항제는 감염성 질환, 특히 만성 감염이 있는 대상에게 투여될 수 있다. 이러한 경우, 이의 암에 대한 적용과 유사하게, 항체-매개 TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제를 단독으로 사용하거나 백신과 병용하여 보조제로 사용하여 병원체, 독소, 및 자가-항원에 대한 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 이러한 치료적 접근법이 적용될 수 있는 예시적인 병원체는 비제한적으로 HIV, 간염(A, B, & C), 인플루엔자(Influenza), 헤르페스(Herpes), 지아르디아(Giardia), 말라리아(Malaria), 레이슈마니아(Leishmania), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 및 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)을 포함한다. TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제는 감염 과정에서 신규 또는 변경된 항원을 제시하는 HIV와 같은 제제에 의한 기존 감염에 특히 유용하다. 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제의 투여는 적절한 T 세포 반응을 유발하기 위해 이들 항원을 외래의 것(foreign)으로 인식할 수 있도록 한다.
본원에 기술된 방법에 의해 치료될 수 있는 감염을 유발하는 다른 병원성 바이러스는 HIV, 간염(A, B, 또는 C), 헤르페스바이러스 감염(예컨대, VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II, 및 CMV, 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr virus)), 및 아데노바이러스, 인플루엔자 바이러스, 플라비바이러스, 에코바이러스 라이노바이러스, 콕사키 바이러스, 코로나바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 볼거리 바이러스, 로타바이러스, 홍역 바이러스, 풍진 바이러스, 파보바이러스, 백시니아 바이러스, HTLV 바이러스, 뎅기 바이러스, 유두종바이러스, 연속종 바이러스, 폴리오바이러스, 공수병 바이러스, JC 바이러스, 아르보바이러스 뇌염 바이러스, 또는 이들의 조합에 의해 야기된 감염을 포함한다.
본원에 기술된 방법에 의해 치료될 수 있는 예시적인 병원성 박테리아 또는 이로부터 야기되는 질병은 클라미디아(Chlamydia), 리케차(Rickettsia), 마이코박테리아(Mycobacteria), 포도상구균(Staphylococci), 연쇄구균(Streptococci), 폐렴구균(Pneumonococci), 수막구균(Meningococci) 및 임균(Gonococci), 클레브시엘라(Klebsiella), 프로테우스(Proteus), 세라티아(Serratia), 슈도모나스(Pseudomonas), 레지오넬라(Legionella), 디프테리아(Diphtheria), 살모넬라(Salmonella), 바실리(Bacilli), 콜레라(Cholera), 렙토스피로시스 테타누스(Leptospirosis tetanus), 보툴리누스중독(botulism), 탄저병(anthrax), 전염병(plague), 및 라임병(Lyme disease)을 포함한다.
본원에 기술된 방법에 의해 치료될 수 있는 감염을 야기하는 예시적인 병원성 진균은 칸디다(Candida)(예컨대, 알비칸스(albicans), 크루세이(krusei), 글라브라타(glabrata), 트로피칼리스(tropicalis), 등), 크립토코쿠스 네오포만스(Cryptococcus neoformans), 아스퍼길러스(Aspergillus)(예컨대, 푸미가투스( fumigatus), 니게르(niger), 등), 털곰팡이(Mucorales)(예컨대, 뮤코르(mucor), 압시디아(absidia), 리조퍼스(rhizopus)), 스포로트릭스 센키(Sporothrix schenkii), 블라스토미세스 더마티티디스(Blastomyces dermatitidis), 파라콕시디오이디즈 브라질리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis), 콕시디오이데스 이미티스(Coccidioides immitis) 및 히스토플라스마 캡슐라툼(Histoplasma capsulatum)을 포함한다.
본원에 기술된 방법에 의해 치료될 수 있는 감염을 야기하는 예시적인 병원성 기생충은 이질 아메바(Entamoeba histolytica), 대장 섬모충(Balantidium coli), 파울러 자유아메바(Naegleriafowleri), 가시아메바 속(Acanthamoeba sp.), 편모충증 잠비아(Giardia Zambia), 크립토스포리듐 속(Cryptosporidium sp.), 폐포자충(Pneumocystis carinii), 삼일열 말라리아 원충(Plasmodium vivax), 바베스열원충증(Babesia microti), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), 크루즈 트리파노소마(Trypanosoma cruzi), 도너반리슈만편모충(Leishmania donovani), 톡소플라스마 곤디이(Toxoplasma gondii), 쥐모양선충(Nippostrongylus brasiliensis)을 포함한다.
상기 모든 방법에서, TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제는 다른 형태의 면역요법, 예컨대 사이토카인 치료(예컨대, 인터페론, GM-CSF, G-CSF, IL-2), 또는 종양 항원에 대한 향상된 제시를 제공하기 위해 2개의 상이한 결합 특이성을 사용하는 이중특이적 항체 요법과 병용될 수 있다.
본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체 및 이중특이적 항종양 길항제는 하나 이상의 임의의 이러한 항체와 관심 항원(예컨대, 백신)의 동시-투여에 의한 항원-특이적 면역 반응을 향상시키는데 사용될 수 있다. 따라서, 본원에서는 대상에게 다음을 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 항원에 대한 면역 반응을 향상시키는 방법이 제공된다: (i) 항원; 및 (ii) 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제, 또는 이들의 조합, 이에 따라 대상에서 항원에 대한 면역 반응이 향상된다. 예컨대, 항원은 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원, 또는 병원체 유래 항원일 수 있다. 이러한 항원의 비-제한적인 예는 상기 섹션에서 논의된 것들, 예컨대 상기 논의된 종양 항원(또는 종양 백신), 또는 바이러스 유래 항원, 상기된 박테리아 또는 다른 병원체를 포함한다.
특정 실시형태에서, 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, LAG-3 항체 또는 이중특이적 항종양 길항제가 결합하는 에피토프를 포함하는 펩티드 또는 융합 단백질은 항종양 길항제(들) 대신에, 또는 이에 더하여 백신으로서 사용될 수 있다.
생체 내 또는 시험관 내에서 본원에 기술된 항체 조성물(예컨대, 인간 단클론 항체, 다중-특이적 항체 또는 길항제 및 면역접합체)를 투여하는 적합한 경로가 당업계에 잘 알려져 있으며 당업자에 의해 선택될 수 있다. 예컨대, 항체 조성물은 주사(예컨대, 정맥 내 또는 피하)에 의해 투여될 수 있다. 사용되는 분자의 적합한 투여량은 대상의 연령 및 체중 및 항체 조성물의 농도 및/또는 제형에 따라 달라질 것이다.
병용 요법
또 다른 양태에서, 본 출원은 대상에서 항원-특이적 T 세포 반응을 향상시키기 위한 병용 요법을 제공한다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 제2 항체, 항체 단편, 길항제 또는 약물과 병용하여 T 세포를 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 이들의 항체 단편 또는 이중특이적 항종양 길항제와 접촉시켜 항원-특이적 T 세포 반응 또는 세포사멸 경로를 향상시키는 단계를 포함한다. 예컨대, 일부 실시형태에서, 제1 항체 또는 항체 단편은 TIGIT에 특이적으로 결합하고 제2 항체 또는 항체 단편은 PD-1, PD-L1 또는 LAG-3에 특이적으로 결합한다.
관련 양태에서, 이를 필요로 하는 대상의 종양에서 조절 T 세포를 감소 또는 고갈시키는 방법은 제2 항체, 항체 단편, 길항제 또는 약물과 병용하여 유효량의 항체 또는 항체 단편을 투여하여 대상에서 조절 T 세포의 수를 감소시키는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 대상은 본원에 기술된 세포 증식성 질환 또는 암을 앓고 있다.
다른 실시형태에서, 대상은 본원에 기술된 만성 바이러스 감염, 염증성 질환 또는 자가면역 질환을 앓고 있다.
2개의 별개의 신호전달을 T-세포에 제공하는 것은 항원-제시 세포(APC)에 의한 휴지 T 림프구의 림프구 활성화를 위해 널리 허용되는 모델이다. 이러한 모델은 또한 비-자기 및 면역 관용과의 자기 구별을 제공한다. 1차 신호, 또는 항원 특이적 신호는 주요 조직적합성-복합체(HMC: histocompatibility-complex)의 맥락에서 제시된 외래 항원 펩티드의 인식 이후 T-세포 수용체(TCR: T-cell receptor)를 통해 전달된다. 제2 또는 동시-자극 신호는 항원-제시 세포(APC)에서 발현되는 동시-자극 분자에 의해 T-세포로 전달된다. 이는 클론 확장, 사이토카인 분비 및 효과기 기능을 촉진하는 T-세포를 유도한다. 동시-자극이 없는 경우, T-세포는 항원 자극에 불응성이 되어 외래 또는 내인성 항원에 대한 내성 반응을 유발할 수 있다.
2-신호 모델에서, T-세포는 양성 동시-자극 및 음성 동시-억제 신호 둘 모두를 받는다. 이러한 양성 및 음성 신호의 조절은 면역 내성을 유지하고 자가면역을 예방하면서 숙주의 보호 면역 반응을 최대화하는데 중요하다. 음성 신호는 T-세포 내성 유도에 필요한 반면, 양성 신호는 T-세포 활성화를 촉진하는데 필요한 것으로 보인다. 동시-자극 및 동시-억제 둘 모두는 항원에 노출된 T 세포에 제공되며, 동시-자극과 동시-억제 사이의 상호작용은 면역 반응의 크기를 제어하는데 필수적이다. 또한, T 세포에 제공되는 신호는 감염 또는 면역 자극이 제거되거나, 악화되거나, 지속됨에 따라 변경되며, 이러한 변화는 반응하는 T 세포에 강력한 영향을 미치고 면역 반응을 재형성한다.
동시-자극 기작은 공동-자극 신호의 조작이 세포-기반 면역 반응을 향상시키거나 종결시키는 수단을 제공하는 것으로 밝혀졌기 때문에 치료적 관심사이다. 최근에, T 세포 기능장애 또는 무반응은 프로그램화된 사멸 1 폴리펩티드(PD-1) 및 이의 리간드인 PD-L1 및 PD-L2와 같은 면역 체크포인트 조절제의 유도 및 지속 발현과 동시에 발생할 수 있는 것으로 밝혀졌다. PD-L1은 다수의 암에서 과발현되며 종종 불량한 예후와 관련이 있다(문헌[Thompson R H et al., Cancer Res 2006, 66(7):3381]). 또한, 정상 조직에서의 T 림프구 및 말초 혈액 T 림프구와 대조적으로, 대부분의 종양 침윤 T 림프구는 PD-1을 우세하게 발현하며 이는 종양-반응성 T 세포에서 PD-1의 상향 조절이 손상된 항종양 면역 반응에 기여할 수 있음을 나타낸다(문헌[Blood 2009 114(8):1537]). 이는 PD-1 발현 T 세포와 상호작용하는 PD-L1 발현 종양 세포에 의해 매개되는 PD-L1 신호전달의 이용으로 인해 T 세포 활성화의 약화 및 면역 감시 회피를 초래할 수 있다. PD-L1/PD-1 상호작용의 억제는 암세포 및 종양의 CD8+ T 세포-매개 사멸을 포함하여 T 세포 면역을 향상시키는 수단을 제공한다. PD-L1의 결합 파트너 B7-1에 대한 결합을 억제함으로써 T 세포 면역에 대한 유사한 향상이 관찰되었다. 결과적으로, PD-1 및 기타 면역 체크포인트 조절제의 치료적 표적화는 관심이 집중되는 분야이다.
TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 신호전달의 억제를 종양 세포에서 탈조절된 다른 신호전달 경로와 병용하면 치료 효능을 향상시키기 위한 수단을 제공할 수 있다. 최근 몇 년 동안, 수용체와 이의 리간드 형태의 다수의 면역 체크포인트 조절제가 확인되었다. 동시-자극 또는 동시-억제 수용체에 결합하는 중요한 막-결합 리간드 패밀리 중 하나는 B7 패밀리이며, 이는 CTLA-4 및 이의 리간드, B7-1 및 B7-2; PD-1 및 이의 리간드, PD-L1(B7-H1) 및 PD-L2(B7-DC); B7-H2(ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5(VISTA), 및 B7-H6을 포함한다. 추가의 면역 체크포인트 길항제는 비제한적으로 TIM-3 및 이의 리간드, Galectin-9; 간 정현파 내피 세포 렉틴(LSECtin: liver sinusoidal endothelial cell lectin) 및 Galectin-3을 포함하는 LAG-3 및 이의 리간드; CD122 및 이의 CD122R 리간드; CD70, B7H3, B 및 T 림프구 감쇠제(BTLA: B and T lymphocyte attenuator), 및 VISTA를 포함한다(문헌[Le Mercier et al. (2015) Front. Immunol., (6), Article 418]). 또한, 다양한 임상 및 전임상 모델에서 다수의 체크포인트 조절제 길항제가 확인 및 시험되었고/거나 FDA의 승인을 받았다(문헌[Kyi et al., FEBS Letters, 588:368-376 (2014)]). 면역 체크포인트 차단으로도 공지된 억제 수용체 차단의 개념은 예컨대 FDA 승인된 PD-1 억제제인 니볼루맙 및 펨브롤리주맙, 및 전이성 흑색종에 대한 항-CTLA-4 항체인 이필리무맙에 의해 검증되었다.
면역 체크포인트 길항제는 면역 체크포인트 조절제의 활성을 조절하거나 방해하여, 체크포인트 조절제 또는 이의 리간드에 대한 결합의 결과로서, 체크포인트 조절제 수용체를 통한 신호전달이 차단되거나 억제되도록한다. 이러한 신호전달을 억제함으로써, 면역-억제가 역전되어 암세포에 대한 T 세포 면역이 재확립되거나 향상될 수 있다. 이와 대조적으로, (예컨대 동시자극 분자의) 면역 체크포인트 작용제는 면역 체크포인트 조절제의 활성을 자극하여, 체크포인트 조절제 또는 이의 리간드의 결합의 결과로서, 체크포인트 조절제 수용체를 통한 신호전달이 자극되도록 한다. 이러한 신호전달을 자극함으로써, 암세포에 대한 T 세포 면역이 재확립되거나 향상될 수 있다.
따라서, 일 실시형태에서, 대상에서 면역 반응을 자극하는 방법은 대상에게 본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 이들의 항체 단편(들)(예컨대, 항-TIGIT HCVR 및/LCVR) 또는 이중특이적 항종양 길항제를 상기 본원에 기술된 또 다른 면역 체크포인트 조절제와 병용하여 투여하여, 예컨대 종양 성장을 억제하거나 항-바이러스 반응을 자극하기 위해 대상에서 면역 반응이 자극되도록 하는 단계를 포함한다.
일 실시형태에서, 본 출원에 따른 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 이들의 항체 단편(들), 또는 이중특이적 항종양 길항제는 별도의 항체로서 또는 여러 생성물에 대한 결합 특이성을 포함하는 다중-특이적 항체로서 또 다른 면역 체크포인트 조절제와 병용하여 투여된다. 일반적으로, 본원에 기술된 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 또는 이중특이적 항종양 길항제는 (i) T 세포 활성화를 억제하는 IgSF 패밀리 단백질, B7 패밀리 또는 TNF 패밀리의 길항제, 또는 T 세포 활성화를 억제하는 사이토카인의 길항제(예컨대, IL-6, IL-10, TGF-β, VEGF, 또는 다른 면역억제성 사이토카인) 및/또는 (ii) 면역 반응을 자극하기 위한, IgSF 패밀리, B7 패밀리 또는 TNF 패밀리의 자극 수용체의 작용제 또는 T 세포 활성화를 자극하기 위한 사이토카인과의 면역 반응을 자극하기 위해 병용될 수 있다.
일 실시형태에서, 대상에게 항-TIGIT 항체 또는 이의 HCVR 및/또는 LCVR 단편이 항-PD-1 항체 또는 PD-1 길항제와 병용하여 투여된다. 또 다른 실시형태에서, 대상에게 항-TIGIT 항체 또는 이의 HCVR 및/또는 LCVR 단편이 항-PD-L1 항체 또는 PD-L1 길항제와 병용하여 투여된다. 또 다른 실시형태에서, 대상에게 항-TIGIT 항체 또는 이의 HCVR 및/또는 LCVR 단편이 항-CTLA-4 항체 또는 CTLA-4 길항제와 병용하여 투여된다.
특정 실시형태에서, 면역 체크포인트 조절제에 대한 리간드의 높은 발현을 나타내는 암에 걸린 대상만이 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 항체, 이들의 단편, 또는 본 출원의 임의의 이중특이적 길항제를 사용하는 병용 치료를 위해 선택된다. 예컨대, 일 실시형태에서, PVR(CD155) 및/또는 Nectin-2(CD112)의 높은 발현 및/또는 PD-L1의 낮은 발현을 나타내는 암에 걸린 대상이 항-TIGIT 항체, 이의 단편, 또는 본 출원의 TIGIT 길항제를 사용하는 단일 요법을 위해, 또는 PD-1 길항제 또는 다른 면역 체크포인트 조절제와의 병용 요법을 위해 선택될 수 있다.
항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체는 제2 항체, 항체 단편 또는 길항제와 별도로 투여될 수 있거나, TIGIT에 대한 적어도 하나의 결합 특이성 및 다른 표적화된 생성물에 대한 제2 결합 특이성을 포함하는 다중특이적 항체 또는 길항제가 투여될 수 있다. 또한, 본 출원에 따른 항-TIGIT, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체 또는 이중특이적 길항제는 하나 이상의 추가 제제, 예컨대, 항체, 길항제, 또는 약물과 함께 면역 반응 및/또는 세포 사멸을 자극하는데 유효량으로 동시-투여되어 대상에서 면역 반응 및/또는 세포 사멸을 더욱 강화, 자극 또는 상향조절할 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 단편(들)은 상이한 항종양 길항제를 사용하는 치료 후에 투여된다. 예컨대, 일 실시형태에서, 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체는 PD-1/PD-L1 길항제를 사용하는 치료가 실패한 후에, 불완전한 치료 반응을 야기한 후에, 또는 종양 재발 또는 악화(relapse)(또는 "PD-1 실패")가 있은 후에만 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 실패를 나타내는 암은 예컨대, PVR 및/또는 Nectin-2의 발현에 대해 스크리닝될 수 있으며 높은 발현 수준을 가진 암 만이 본 출원의 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체, 단편 또는 길항제로 치료된다.
일 실시형태에서, 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체 또는 이들의 단편(들)은 PD-1, PD-L1, PD-L2, TIGIT, 또는 LAG-3 길항제와 병용하여 투여된다.
다른 항-PD-1 항체는 비제한적으로 니볼루맙(BMS-936558, MDX-1106, OPDIVOTM), 인간화된 면역글로불린 G4(IgG4) mAb(Bristol-Myers Squibb); 펨브롤리주맙(MK-3475, 람브롤리주맙, KEYTRUDATM)(Merck); 피딜리주맙(CT-011)(Medivation); 및 AMP-224(Merck)를 포함한다. 항-PD-1 항체는 예컨대 ABCAM(AB137132), BIOLEGENDTM(EH12.2H7, RMP1-14) 및 AFFYMETRIX EBIOSCIENCE(J105, J116, MIH4)로부터 상업적으로 이용가능하다.
다른 항-PD-L1 항체는 완전 인간 IgG4 mAb인 아테졸리주맙(MPDL3280A, RG7446)(Genentech/Roche); 완전히 인간화된 IgG4 mAb인 BMS-936559(MDX-1105)(Bristol-Myers Squibb); 인간화된 IgG 항체인 MEDI4736(Medimmune/AstraZeneca); 및 완전 인간 IgG4 단클론 항체인 MSB0010718C(Merck, EMD Serono)를 포함한다.
본 방법에 따라 사용하기 위한 예시적인 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙, 트레빌리주맙 및 트레멜리무맙을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항종양 길항제는 면역 체크포인트 조절제의 우세한 음성 단백질이다. 특정 실시형태에서, 우세한 음성 단백질은 PD-L1, PD-L2, PD-1, B7-1, B7-2, B7H3, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, TIGIT, BTLA, VISTA, CD70 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 구성원으로부터 유래된 세포 외 도메인을 포함한다. 특히 특정한 실시형태에서, 이러한 세포 외 도메인은 현재 기술된 항체에서 면역글로불린 불변 영역 또는 Fc 수용체에 융합된다. 이러한 돌연변이체는 내인성 수용체와 결합하여 신호전달이 결핍된 복합체를 형성할 수 있다. 특정 실시형태에서, 세포 외 도메인은 면역글로불린 불변 영역 또는 Fc 단편과 융합되거나 올리고머 단백질 복합체의 단량체에 융합된다.
특정 실시형태에서, 우성 음성 PD-L1 길항제는 PD-1의 세포 외 도메인을 포함한다. 예시적인 우성 음성 단백질은 PD-L2의 세포 외 도메인과 인간 IgG의 Fc 영역을 포함하는 재조합 융합 단백질인 AMP-224(Glaxo Smith Kline 및 Amplimmune에 의해 공동 개발됨)이다. 또 다른 실시형태에서, 우성-음성 PD-L1 길항제는 PD-L1에 결합하는 이의 능력을 방지하는 PD-1에 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
예시적인 면역 체크포인트 조절제 작용제는 비제한적으로 종양 괴사 인자(TNF: tumor necrosis factor) 수용체 상과의 구성원, 예컨대 CD27, CD40, OX40, GITR 및 4-1BB (CD137) 및 이의 리간드, 또는 CD28 및 ICOS(CD278)를 포함하는 B7-CD28의 수퍼패밀리의 구성원을 포함한다. 추가 체크포인트 조절 작용제는 CD2, CDS, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18), CD30, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, CD83 리간드를 포함한다. 면역 체크포인트 작용제는 하나 이상의 동시자극 도메인을 포함하는 항체 또는 가용성 융합 단백질 작용제를 포함할 수 있다. 작용제 항체는 비제한적으로 항-CD40 mAb, 예컨대 CP-870,893, 루카투무맙, 및 다세투주맙; 항-CD137 mAb, 예컨대 BMS-663513 우렐루맙, 및 PF-05082566; 항-OX40 mAb; 항-GITR mAb, 예컨대 TRX518; 항-CD27 mAb, 예컨대 CDX-1127; 및 항-ICOS mAb를 포함한다.
예시적인 GITR 작용제는 예컨대 GITR 융합 단백질 및 항-GITR 항체(예컨대, 2가 항-GITR 항체) 예컨대, 미국특허 제6,111,090호 및 제8,586,023호; 유럽특허 제090505B1호, 미국특허 PCT 공개문헌 제WO 2010/003118호 및 제2011/090754호에 기술된 GITR 융합 단백질을 포함한다. 항-GITR 항체는 예컨대, 미국특허 제7,025,962호, 제7,618,632호, 제7,812,135호, 제8,388,967호, 및 제8,591,886호; 유럽특허 제1947183B1호 및 제 1866339호; PCT 공개문헌 제WO 2011/028683호, 제WO 2013/039954호, 제WO2005/007190호, 제WO 2007/133822호, 제WO2005/055808호, 제WO 99/40196호, 제WO 2001/03720호, 제WO99/20758호, 제WO2006/083289호, 제WO 2005/115451호, 제WO 2011/051726호에 기술되어 있다. 예시적인 항-GITR 항체는 TRX518이다.
동시-자극 또는 동시-억제 수용체에 결합하는 막 결합 리간드의 또 다른 패밀리는 동족 TNF 수용체 패밀리 구성원에 결합하는 분자의 TNF 패밀리이며, 이는 CD40 및 CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137/4-1BB, TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, 림포톡신 α/TNF γ, TNFR2, TNFα, LTβR, 림포톡신 α 1(32, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR(예컨대, 문헌[Tansey, M.G. et al. (2009) Drug Discovery Today, 14(23-24):1082-1088] 참조)을 포함한다.
면역체크포인트 작용제 또는 동시자극 분자는 효율적인 면역 반응을 필요로 하는 항원 수용체 또는 이들의 리간드 외의 세포 표면 분자를 포함하며, 비제한적으로 MHC 클래스 I 분자, MHC 클래스 II 분자, TNF 수용체 단백질, 면역글로불린-유사 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 신호전달 림프구성 활성화 분자(SLAM 단백질), 활성화 NK 세포 수용체, BTLA, Toll 리간드 수용체, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18), 4-1BB(CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS(CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM(LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80(KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8알파, CD8베타, IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1(CD226), SLAMF4(CD244, 2B4), CD84, CD96(Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9(CD229), CD160(BY55), PSGL1, CD100(SEMA4D), CD69, SLAMF6(NTB-A, Ly108), SLAM(SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME(SLAMF8), SELPLG(CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드를 포함한다.
일 양태에서, T 세포 반응은 본 발명의 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 mAb 및 (i) T 세포 활성화를 억제하는 단백질의 길항제(예컨대, 면역 체크포인트 억제제), 예컨대 CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, Galectin 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galectin-1, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD-1H, LAIR1, TIM-1, CD96 및 TIM-4, 및 (ii) T 세포 활성화를 자극하는 단백질의 작용제 예컨대 B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB(CD137), 4-1BBL, ICOS, CD40, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 및 CD28H 중 하나 이상과 병용하여 자극될 수 있다.
상기 단백질 중 하나를 조절하고 암 치료를 위해 본 출원의 항-TIGIT 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 및/또는 항-LAG-3 항체와 병용될 수 있는 예시적인 제제는 다음을 포함한다: YERVOYTM/이필리무맙 또는 트레멜리무맙(CTLA-4로), 갈릭시맙(B7.1로), OPDIVOTM/니볼루맙/BMS-936558(PD-1로), 피딜리주맙/CT-011(PD-1로), KEYTRUDATM/펨브롤리주맙/MK-3475(PD-1로), AMP224(B7-DC/PD-L2로), BMS-936559( B7-H1로), MPDL3280A(B7-H1로), MEDI-570(ICOS로), AMG557(B7H2로), MGA271(B7H3으로), IMP321(LAG-3으로), 우렐루맙/BMS-663513 및 PF-05082566(CD137/4-1BB로), CDX-1127(CD27로), MEDI-6383 및 MEDI-6469(OX40으로), RG-7888(OX40L로), 악타시셉트(TACI로), CP-870893(CD40으로), 루카투무맙(CD40으로), 다세투주맙(CD40으로), 및 무로모납-CD3(CD3으로).
암 치료를 위해 본원에 기술된 항종양 길항제와 병용될 수 있는 다른 분자는 NK 세포 상의 억제 수용체의 길항제 또는 NK 세포 상의 활성화 수용체의 작용제를 포함한다. 예컨대, 길항제 항-TIGIT, 항-PD-1, 및/또는 항-PD-L1 항체가 KIR(예컨대, 리릴루맙)의 길항제, CSF-1R 길항제, 예컨대 RG7155와 병용될 수 있다.
종양은 매우 다양한 기작에 의해 숙주 면역 감시를 회피한다. 이러한 기작의 대부분은 종양에 의해 발현되는 면역억제 단백질의 비활성화에 의해 극복될 수 있다. 이는 특히 TGF-β, IL-10, 및 Fas 리간드를 포함한다. 이러한 개체 각각에 대한 항체는 면역억제제의 효과를 상쇄시키고 숙주에 의한 종양 면역 반응을 선호하기 위해 본원에 기술된 항종양 길항제와 병용하여 사용될 수 있다.
숙주 면역 반응성을 활성화하는 다른 항체가 본원에 기술된 항종양 길항제와 병용하여 사용될 수 있다. 이는 DC 기능 및 항원 제시를 활성화하는 수지상 세포의 표면 상의 분자를 포함한다. 항-CD40 항체는 T 세포 헬퍼 활성을 효과적으로 대체할 수 있으며 본원에 기술된 항종양 길항제와 함께 사용될 수 있다. T 세포 동시자극 분자 예컨대 OX-40, CD137/4-1BB, 및 ICOS 에 대한 항체를 활성화하면 T 세포 활성 수준이 증가할 수도 있다.
특정 실시형태에서, 본원에 기술된 항종양 길항제는 하나 이상의 다른 치료제, 예컨대 항암제, 방사성 독성제 또는 면역억제제와 동시-투여될 수 있다. 이러한 동시-투여는 약물에 대한 내성 발달, 항체에 반응하지 않게 만드는 종양 세포의 항원성 변화, 및 독성으로 인한 문제를 해결할 수 있다(하나 이상의 제제를 더 적은 용량으로 투여함으로써).
본원에 기술된 항종양 길항제는 제제에 연결될 수 있거나(면역-복합체로서) 제제와 별도로 투여될 수 있다. 후자의 경우(별도 투여), 항체는 제제 전후 또는 동시에 투여될 수 있거나 다른 공지된 요법, 예컨대 항암 요법, 예컨대 방사선과 동시-투여될 수 있다. 본원에 기술된 항종양 길항제는 하나 이상의 항암제와 동시-투여되어 인간 암세포에서 세포독성 효과를 생성하기 위해 상이한 기작을 통해 상승적으로 작동하는 2개의 항암제를 제공할 수 있다.
본원에 기술된 항종양 길항제는 항암제, 예컨대 알킬화제; 안트라사이클린 항생제; 항-대사산물; 해독제; 인터페론; 다클론 또는 단클론 항체; EGFR 억제제; HER2 억제제; 히스톤 디아세틸라제 억제제; 호르몬; 유사분열 억제제; 포스파티딜이노시톨-3-키나제(PI3K: phosphatidylinositol-3-kinase) 억제제; Akt 억제제; 라파마이신(mTOR) 억제제의 포유류 표적; 프로테아좀 억제제; 폴리(ADP-리보스) 폴리머라제(PARP: poly(ADP-ribose) polymerase) 억제제; Ras/MAPK 경로 억제제; 중심체 탈클러스터링제; 다중-키나제 억제제; 세린/트레오닌 키나제 억제제; 티로신 키나제 억제제; VEGF/VEGFR 억제제; 탁산 또는 탁산 유도체, 아로마타제 억제제, 안트라사이클린, 미세소관 표적화 약물, 토포이소머라제 독소 약물, 분자 표적 또는 효소의 억제제(예컨대 키나제 또는 단백질 메틸트랜스퍼라제), 시티딘 유사체 또는 이들의 조합과 병용될 수 있다.
예시적인 알킬화제는 비제한적으로 사이클로포스파미드(Cytoxan; Neosar); 클로람부실(Leukeran); 멜파란(Alkeran); 카무스틴(BiCNU); 부설판(Busulfex); 로무스틴(CeeNU); 다카바진(DTIC-Dome); 옥살리플라틴(Eloxatin); 카무스틴(Gliadel); 이포스파미드(Ifex); 메클로레타민(Mustargen); 부설판(Myleran); 카보플라틴(Paraplatin); 시스플라틴(CDDP; Platinol); 테모졸로미드(Temodar); 티오테파(Thioplex); 벤다무스틴(Treanda); 또는 스트렙토조신(Zanosar)을 포함한다.
예시적인 안트라사이클린 항생제는 비제한적으로 독소루비신(Adriamycin); 독소루비신 리포좀(Doxil); 미톡산트론(Novantrone); 블레오마이신(Blenoxane); 다우노루비신(Cerubidine); 다우노루비신 리포좀(DaunoXome); 닥티노마이신(Cosmegen); 에피루비신(Ellence); 이다루비신(Idamycin); 플리카마이신(Mithracin); 미토마이신(Mutamycin); 펜토스타틴(Nipent); 또는 발루비신(Valstar)을 포함한다.
예시적인 항-대사산물은 비제한적으로 플루오로우라실(Adrucil); 카페시타빈(Xeloda); 히드록시우레아(Hydrea); 머캅토퓨린(Purinethol); 페메트렉시드(Alimta); 플루다라빈(Fludara); 넬라라빈(Arranon); 클라드리빈(Cladribine Novaplus); 클로파라빈(Clolar); 시타라빈(Cytosar-U); 데시타빈(Dacogen); 시타라빈 리포좀(DepoCyt); 히드록시우레아(Droxia); 프랄라트렉세이트(Folotyn); 플록수리딘(FUDR); 젬시타빈(Gemzar); 클라드리빈(Leustatin); 플루다라빈(Oforta); 메토트렉세이트(MTX; Rheumatrex); 메토트렉세이트(Trexall); 티오구아닌(Tabloid); TS-1 또는 씨타라빈(Tarabine PFS)을 포함한다.
예시적인 해독제는 비제한적으로 아미포스틴(Ethyol) 또는 메스나(Mesnex)를 포함한다.
예시적인 인터페론은 비제한적으로 인터페론 알파-2b(Intron A) 또는 인터페론 알파-2a(Roferon-A)를 포함한다.
예시적인 다클론 또는 단클론 항체는 비제한적으로 트라스투주맙(Herceptin); 오파투무맙(Arzerra); 베바시주맙(Avastin); 리툭시맙(Rituxan); 세툭시맙(Erbitux); 파니투무맙(Vectibix); 토시투모맙/요오딘131 토시투모맙(Bexxar); 알렘투주맙(Campath); 이브리투모맙(Zevalin; In-111; Y-90 Zevalin); 젬투주맙(Mylotarg); 에쿨리주맙(Soliris) 오데노수맙을 포함한다.
예시적인 EGFR 억제제는 비제한적으로 제피티닙(Iressa); 라파티닙(Tykerb); 세툭시맙(Erbitux); 에를로티닙(Tarceva); 파니투무맙(Vectibix); PKI-166; 카네르티닙(CI-1033); 마투주맙(Emd7200) 또는 EKB-569를 포함한다.
예시적인 HER2 억제제는 비제한적으로 트라스투주맙(Herceptin); 라파티닙(Tykerb) 또는 AC-480을 포함한다.
예시적인 히스톤 디아세틸라제 억제제는 비제한적으로 보리노스타트(Zolinza), 발프로산, 로미뎁신, 엔티노스타트 아벡시노스타트, 기비노스타트, 및 모세티노스타트를 포함한다.
예시적인 호르몬은 비제한적으로 타목시펜(Soltamox; Nolvadex); 랄록시펜(Evista); 메게스트롤(Megace); 류프롤라이드(Lupron; Lupron Depot; Eligard; Viadur); 풀베스트란트(Faslodex); 레트로졸(Femara); 트립토렐린(Trelstar LA; Trelstar Depot); 엑세메스탄(Aromasin); 고세렐린(Zoladex); 비칼루타미드(Casodex); 아나스트로졸(Arimidex); 플루옥시메스테론(Androxy; Halotestin); 메드록시프로게스테론(Provera; Depo-Provera); 에스트라무스틴(Emcyt); 플루타미드(Eulexin); 토레미펜(Fareston); 데가렐릭스(Firmagon); 닐루타미드(Nilandron); 아바렐릭스(Plenaxis); 또는 테스토락톤(Teslac)을 포함한다.
예시적인 유사분열 억제제는 비제한적으로 파클리탁셀(Taxol; Onxol; Abraxane); 도세탁셀(Taxotere); 빈크리스틴(Oncovin; Vincasar PFS); 빈블라스틴(Velban); 에토포시드(Toposar; Etopophos; VePesid); 테니포시드(Vumon); 익사베필론(Ixempra); 노코다졸; 에포틸론; 비노렐빈(Navelbine); 캄프토테신(CPT); 이리노테칸(Camptosar); 토포테칸(Hycamtin); 암사크린 또는 라멜라린 D(LAM-D)를 포함한다.
예시적인 포스파티딜-이노시톨-3 키나제(PI3K) 억제제는 PI3K의 비가역적 억제제인 워트만닌, 워트만닌의 유도체인 데메톡시비리딘, PI3K의 가역적 억제제인 LY294002; BKM120(Buparlisib); 이델라리십(PI3K 델타 억제제); 두벨리십(IPI-145, PI3K 델타 및 감마 억제제); 알파-특이적 PI3K 억제제인 아펠리십(BYL719); 경구 PI3K 델타 억제제인 TGR 1202(이전에는 RP5264로 알려짐); 및 우세한 PI3Kα,δ 이소형 억제제인 코판리십(BAY 80-6946)을 포함한다.
예시적인 Akt 억제제는 비제한적으로 밀테포신, AZD5363, GDC-0068, MK2206, 페리포신, RX-0201, PBI-05204, GSK2141795, 및 SR13668을 포함한다.
예시적인 MTOR 억제제는 비제한적으로 에베롤리무스(Afinitor) 또는 템시롤리무스(Torisel); 라파무네, 리다포롤리무스; 데포롤리무스(AP23573), AZD8055(AstraZeneca), OSI-027(OSI), INK-128, BEZ235, PI-103, Torin1, PP242, PP30, Ku-0063794, WAY-600, WYE-687, WYE-354, 및 CC-223을 포함한다.
예시적인 프로테아좀 억제제는 비제한적으로 보르테조밉(PS-341), 익사조밉(MLN 2238), MLN 9708, 델란조밉(CEP-18770), 카르필조밉(PR-171), YU101, 오프로조밉(ONX-0912), 마리조밉(NPI-0052), 및 디설피람을 포함한다.
예시적인 PARP 억제제는 비제한적으로 올라파립, 이니파립, 벨라파립, BMN-673, BSI-201, AG014699, ABT-888, GPI21016, MK4827, INO-1001, CEP-9722, PJ-34, Tiq-A, Phen, PF-01367338 및 이들의 조합을 포함한다.
예시적인 Ras/MAPK 경로 억제제는 비제한적으로 트라메티닙, 셀루메티닙, 코비메티닙, CI-1040, PD0325901, AS703026, RO4987655, RO5068760, AZD6244, GSK1120212, TAK-733, U0126, MEK162, 및 GDC-0973을 포함한다.
예시적인 중심체 탈클러스터링제는 비제한적으로 그리세오풀빈; 노스카핀, 노스카핀 유도체, 예컨대 브롬화 노스카핀(예컨대 9-브로모노스카핀), 환원된 브로모노스카핀(RBN), N-(3-브로모벤질) 노스카핀, 아미노노스카핀 및 이의 수용성 유도체; CW069; 페난트리덴-유래 폴리(ADP-리보스) 폴리머라제 억제제, PJ-34; N2-(3-피리딜메틸)-5-니트로-2-퓨라미드, N2-(2-티에닐메틸)-5-니트로-2-퓨라미드, 및 N2-벤질-5-니트로-2-퓨라미드를 포함한다.
예시적인 다중-키나제 억제제는 비제한적으로 레고라페닙; 소라페닙(Nexavar); 수니티닙(Sutent); BIBW 2992; E7080; Zd6474; PKC-412; 모테사닙; 또는 AP24534를 포함한다.
예시적인 세린/트레오닌 키나제 억제제는 비제한적으로 루복시스타우린; 에릴/에아수딜 히드로클로라이드; 플라보피리돌; 셀리시클립(CYC202; Roscovitrine); SNS-032(BMS-387032); Pkc412; 브리오스타틴; KAI-9803; SF1126; VX-680; Azd1152; Arry-142886(AZD-6244); SCIO-469; GW681323; CC-401; CEP-1347 또는 PD 332991을 포함한다.
예시적인 티로신 키나제 억제제는 비제한적으로 에를로티닙(Tarceva); 제피티닙(Iressa); 이마티닙(Gleevec); 소라페닙(Nexavar); 수니티닙(Sutent); 트라스투주맙(Herceptin); 베바시주맙(Avastin); 리툭시맙(Rituxan); 라파티닙(Tykerb); 세툭시맙(Erbitux); 파니투무맙(Vectibix); 에베롤리무스(Afinitor); 알렘투주맙(Campath); 젬투주맙(Mylotarg); 템시롤리무스(Torisel); 파조파닙(Votrient); 다사티닙(Sprycel); 닐로티닙(Tasigna); 바탈라닙(Ptk787; ZK222584); CEP-701; SU5614; MLN518; XL999; VX-322; Azd0530; BMS-354825; SKI-606 CP-690; AG-490; WHI-P154; WHI-P131; AC-220; 또는 AMG888을 포함한다.
예시적인 VEGF/VEGFR 억제제는 비제한적으로 베바시주맙(Avastin); 소라페닙(Nexavar); 수니티닙(Sutent); 라니비주맙; 페갑타닙; 또는 반데티닙을 포함한다.
예시적인 미세소관 표적화 약물은 비제한적으로 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 노코다졸, 에포틸론 및 나벨빈을 포함한다.
예시적인 토포이소머라제 독소 약물은 비제한적으로 테니포시드, 에토포시드, 아드리아마이신, 캄프토테신, 다우노루비신, 닥티노마이신, 미톡산트론, 암사크린, 에피루비신 및 이다루비신을 포함한다.
예시적인 탁산 또는 탁산 유도체는 비제한적으로 파클리탁셀 및 도세탁솔을 포함한다.
예시적인 일반적인 화학요법, 항-신생물, 항-증식제는 비제한적으로 알트레타민(Hexalen); 이소트레티노인(Accutane; Amnesteem; Claravis; Sotret); 트레티노인(Vesanoid); 아자시티딘(Vidaza); 보르테조밉(Velcade) 아스파라기나제(Elspar); 레바미솔(Ergamisol); 미토탄(Lysodren); 프로카바진(Matulane); 페가스파르가제(Oncaspar); 데닐류킨 디프티톡스(Ontak); 포피머(Photofrin); 알데스류킨(Proleukin); 레날리도미드(Revlimid); 벡사로텐(Targretin); 탈리도마이드(Thalomid); 템시롤리무스(Torisel); 삼산화 비소(Trisenox); 베르테포르핀(Visudyne); 미모신(Leucenol); (1 M 테가푸르-0.4 M 5-클로로-2,4-디히드록시피리미딘-1 M 포타슘 옥소네이트) 또는 로바스타틴을 포함한다.
특정 실시형태에서, TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제는 표준 암 치료(예컨대 수술, 방사선, 및 화학요법)와 병용된다. TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제는 화학요법 치료법과 효과적으로 병용될 수 있다. 이러한 경우, 투여되는 화학요법 제제의 용량을 감소시키는 것이 가능할 수 있다. 이러한 병용의 예는 흑색종 치료를 위한 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체와 데카르바진과의 병용이다. 이러한 병용의 또 다른 예는 흑색종 치료를 위한 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 또는 항-LAG-3 항체와 인터류킨-2(IL-2)의 병용이다. TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제 및 화학요법의 병용은 세포사멸을 향상시키고 세포독성 면역을 위한 종양 항원 제시를 증가시킬 수 있다고 여겨져 왔다. 다른 상승적 병용 요법은 방사선, 수술 또는 호르몬 박탈과 함께 사용되는 경우 세포 사멸을 통한 TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3 억제를 포함한다. 이러한 각각의 프로토콜은 숙주에서 종양 항원의 공급원을 생성한다.
특정 실시형태에서, 본원에 기술된 체크포인트 조절제 길항제는 다중-특이적 길항제에서 또는 종양 세포에 대한 Fcα 또는 Fcγ 수용체-발현 효과기 세포를 표적화하는 이중특이적 항체와 병용하여 사용될 수 있다(예컨대, 미국특허 제5,922,845호 및 제5,837,243호 참조). 이중특이적 항체를 사용하여 두 개의 개별적인 항원을 표적화할 수 있다. 예컨대, 항-Fc 수용체/항-종양 항원(예컨대, Her-2/neu) 이중특이적 항체는 대식세포를 암세포 또는 종양에 표적화하기 위해 사용되어 왔다. 이러한 표적화는 종양 특이적 반응을 보다 효율적으로 활성화할 수 있다. 이러한 반응의 T 세포 팔은 TIGIT, PD-1, PD-L1 및/또는 LAG-3의 억제에 의해 증가될 것이다. 대안적으로, 항원은 종양 항원 및 수지상 세포 특이적 세포 표면 마커에 결합하는 이중특이적 항체의 사용에 의해 DC에 직접적으로 전달될 수 있다.
IV. 체크포인트 조절제를 발현하기 위한 핵산 및 숙주 세포
또 다른 양태에서, 본 출원은 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 본 출원의 항종양 길항제를 코딩하는 핵산, 및 이러한 핵산을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 특히, 핵산은 본원에 기술된 임의의 항체, 길항제 또는 단편에 해당하는 하나 이상의 HCDR, LCDR, HCVR 및/또는 LCVR을 코딩한다.
따라서, 일 양태에서, 본 출원은 본원에 기술된 임의의 항종양 길항제, 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 코딩하는 하나 이상의 핵산을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 본원에 기술된 임의의 항종양 길항제, 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 코딩하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 하나 이상의 발현 벡터를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 본원에 기술된 임의의 항종양 길항제, 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 코딩하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 하나 이상의 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제공한다.
항원 결합 부위를 코딩하는 DNA(들)는 통상적인 절차를 사용하여(예컨대, 단클론 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 하이브리도마 세포에서 생성된 단클론 항체로부터 단리 및 서열화될 수 있다. 대안적으로, 관심 면역글로불린의 아미노산 서열은 직접적인 단백질 서열분석에 의해 결정될 수 있고, 적합한 코딩 뉴클레오티드 서열은 범용 코돈 표에 따라 설계될 수 있다. 다른 경우에, 불변 영역, 힌지 영역 등을 포함하는 항원 결합 부위 또는 다른 면역글로불린 서열의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 당업계에 널리 공지된 공개된 출처로부터 수득될 수 있다.
특정 단일특이적 또는 이중특이적 항종양 길항제를 코딩하는 발현 벡터는 시험관 내에서 배양된 본 개시내용의 항종양 길항제를 합성하는데 사용될 수 있거나 생체 내 또는 생체 외 항종양 길항제를 발현하기 위해 환자에게 직접적으로 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 "발현 벡터"는 항체 제조 목적으로 숙주 세포의 폴리뉴클레오티드(들)에서 발현하거나 치료제로서 직접 투여하기에 적합한 형태로 본 개시내용의 단일특이적 또는 이중특이적 항종양 길항제에 해당하는 하나 이상의 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 또는 비-바이러스 벡터를 지칭한다.
핵산 서열은 또 다른 핵산 서열에 "작동가능하게 연결"되며, 이때 전자는 후자와 기능적 관계에 놓인다. 예컨대, 전서열(presequence) 또는 신호 펩티드에 대한 DNA는 폴리펩티드의 분비에 참여하는 전단백질(preprotein)로서 발현되는 경우 폴리펩티드에 대한 DNA에 작동가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서는 그것이 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 코딩 서열에 작동가능하게 연결되거나; 리보솜 결합 부위는 번역을 용이하게 하도록 위치하는 경우 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"은 연결되는 DNA 서열이 연속적이며, 신호 펩티드의 경우, 연속적이며 판독 단계에 있다는 것을 의미한다. 그러나, 인핸서는 연속적일 필요는 없다. 연결은 편리한 제한 부위에서 라이게이션(ligation)에 의해 수행된다. 이러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커가 통상적인 관행에 따라 사용될 수 있다.
항종양 길항제를 발현하기 위한 핵산 서열은 전형적으로 성숙 단백질로부터 제거되는 아미노 말단 신호 펩티드 서열을 포함한다. 신호 펩티드 서열이 발현 수준에 영향을 미칠 수 있기 때문에, 폴리뉴클레오티드는 다양한 상이한 N-말단 신호 펩티드 서열 중 임의의 하나를 코딩할 수 있다. 발현 벡터의 설계는 형질전환될 숙주 세포의 선택, 원하는 단백질의 발현 수준 등과 같은 이러한 인자들에 따라 달라질 수 있음을 당업자는 인식할 것이다.
전술된 "조절 서열"은 하나 이상의 숙주 유기체에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 DNA 서열을 지칭한다. 용어 "조절 서열"은 프로모터, 인핸서 및 기타 발현 조절 요소(예컨대, 폴리아데닐화 신호)를 포함하도록 의도된다. 조절 서열은 많은 유형의 숙주 세포에서 뉴클레오티드 서열의 구성적 발현을 지시하는 것들 또는 특정 숙주 세포에서만 뉴클레오티드 서열의 발현을 지시하는 것들(예컨대, 조직-특이적 조절 서열)을 포함한다. 발현 벡터는 일반적으로 전사 종결을 위한 서열을 함유하고 있으며, mRNA 안정성에 긍정적인 영향을 미치는 하나 이상의 요소를 추가로 함유할 수 있다.
발현 벡터는 항종양 길항제의 발현을 지시하기 위한, 프로모터 및/또는 인핸서를 포함하는 하나 이상의 전사 조절 요소를 포함한다. 프로모터는 전사 시작 부위와 관련하여 비교적 고정된 위치로부터 전사를 개시하는 기능을 하는 DNA 서열을 포함한다. 프로모터는 RNA 폴리머라제와 전자 요소의 기본 상호작용에 필요한 중심 요소를 함유하며, 다른 상류 요소 및 반응 요소와 함께 작동할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "프로모터"는 이의 광의의 맥락에서 취해지고, 발달 및/또는 외부 자극, 및 조절 단백질 또는 핵산의 트랜스-작동에 반응하여 작동가능하게 연결된 유전자의 활성화 또는 억제를 조절하는 추가 TRE(transcriptional regulatory element)(즉, 상류 활성화 서열, 전사 요소 결합 부위, 인핸서, 및 침묵자(silencer))가 있거나 없는, 정확한 전사 개시를 위한 TATA 박스 또는 개시제 요소를 포함하여, 게놈 유전자 또는 그로부터의 키메라 TRE로부터의 전사 조절 요소(TRE)를 포함한다. 프로모터는 게놈 단편을 함유할 수 있거나 함께 조합된 하나 이상의 TRE의 키메라를 함유할 수 있다.
바람직한 프로모터는 관심 표적 세포에서 고수준 발현을 지시할 수 있는 것들이다. 프로모터는 구성적 프로모터(예컨대 HCMV, SV40, 신장 요소 1α (EF-1α)) 또는 특정 관심 세포 유형에서 우선적 발현을 나타내는 것들을 포함할 수 있다. 인핸서는 일반적으로 전사 시작 부위로부터 떨어져 기능하는 DNA 서열을 지칭하며 전사 단위에 대해 5' 또는 3'일 수 있다. 또한, 인핸서는 코딩 서열 내에뿐만 아니라 인트론 내에 있을 수 있다. 이들은 일반적으로 길이가 10 내지 300 bp 사이이고, 시스로 작동한다. 인핸서는 근처의 프로모터로부터의 전사를 증가 및/또는 조절하는 기능을 한다. 바람직한 인핸서는 항체 생산 세포에서 높은 고수준 발현을 지시하는 것들이다. 세포 또는 조직-특이적 전사 조절 요소(TRE: transcriptional regulatory element)를 발현 벡터에 통합하여 발현을 원하는 세포 유형으로 제한할 수 있다. Pol III 프로모터(H1 또는 U6)는 siRNA가 발현되는 shRNA를 발현하는데 특히 유용하다. 발현 벡터는 하나 이상의 세포 유형에서 항종양 길항제의 발현을 용이하게 하도록 고안될 수 있다.
특정 실시형태에서, 하나 이상의 발현 벡터는 항종양 길항제 및 Tie2 경로, VEGF 경로 또는 면역 체크포인트 조절제를 표적화하는 하나 이상의 siRNA 둘 모두를 발현하도록 조작될 수 있다.
siRNA는 mRNA의 서열-특이적 전사 후 유전자 침묵을 유도하도록 조작될 수 있는 이중-가닥 RNA이다. 합성적으로 생산된 siRNA는 효소 다이서(Dicer)에 의해 세포에서 정상적으로 처리되는 siRNA의 유형을 구조적으로 모방한다. 발현 벡터로부터 발현되는 경우, 발현 벡터는 세포 내부의 표적화된 siRNA로 처리되는 짧은 이중-가닥 헤어핀-유사 RNA(shRNA)를 전사하도록 조작된다. 합성 siRNA 및 shRNA는 잘 알려진 알고리즘을 사용하여 설계되고 기존의 DNA/RNA 합성기를 사용하여 합성될 수 있다.
항종양 길항제의 개별 사슬을 동시-발현하기 위해, 적합한 스플라이스 공여자 및 스플라이스 수용자 서열이 두 생성물 모두를 발현하기 위해 통합될 수 있다. 대안적으로, 내부 리보솜 결합 서열(IRES: internal ribosome binding sequence) 또는 2A 펩티드 서열은 하나의 프로모터로부터 다중 생성물을 발현하기 위해 사용될 수 있다. IRES는 mRNA의 5' 끝에 있을 필요가 없는 리보솜이 결합할 수 있는 구조를 제공한다. 따라서, 리보솜이 mRNA 내의 제2 개시 코돈에서 번역을 개시하도록 지시하여 하나 초과의 폴리펩티드가 단일 mRNA로부터 생성되도록 할 수 있다. 2A 펩티드는 2A 부위의 상류 및 하류에서 펩티드의 동시-번역 자가-절단을 매개하는 짧은 서열을 함유하여, 단일 전사체에서 두 개의 상이한 단백질을 등 몰량으로 생산할 수 있도록 한다. CHYSEL은 2A 펩티드의 비-제한적인 예이며, 이는 번역 진핵 리보솜이 mRNA로부터 분리되지 않고 합성되는 성장하는 폴리펩티드 사슬을 방출하도록 한다. 리보솜은 계속해서 번역하여 제2 폴리펩티드를 생성한다.
발현 벡터는 바이러스 벡터 또는 비-바이러스 벡터를 포함할 수 있다. 바이러스 벡터는 아데노-관련 바이러스(AAV: adeno-associated virus), 아데노바이러스, 헤르페스바이러스, 백시니아 바이러스, 폴리오바이러스, 폭스바이러스, 레트로바이러스(렌티바이러스, 예컨대 HIV-1 및 HIV-2 포함), 신드비스(Sindbis) 및 기타 RNA 바이러스, 알파바이러스, 아스트로바이러스, 코로나바이러스, 오르토믹소바이러스, 파포바바이러스, 파라믹소바이러스, 파르보바이러스, 피코르나바이러스, 토가바이러스 등으로부터 유래될 수 있다. 비-바이러스 벡터는 단순히 바이러스 유래 성분(예컨대, 캡시드 및/또는 외피)과 함께 포장되지 않은 "네이키드" 발현 벡터이다.
특정 경우에, 이러한 벡터는 바이러스 벡터 고유의 표적화 특성을 사용하여 특정 질병 또는 세포 집단을 표적화하도록 조작될 수 있거나 바이러스 벡터 내로 조작될 수 있다. 폴리뉴클레오티드의 전달 및 발현을 위해 특정 세포가 "표적화"될 수 있다. 따라서, 용어 "표적화"는, 이 경우, 특이적 세포로의 전달을 위한 캡시드, 외피 단백질, 항체 형태의 내인성 또는 이종성 결합제의 사용, 세포의 특정 부분집합(subset)으로의 발현을 제한하기 위한 조직-특이적 조절 요소의 사용, 또는 둘 모두의 사용에 기초할 수 있다.
일부 실시형태에서, 항체 사슬의 발현은 조직 특이적 또는 범용(ubiquitous) 프로모터와 같은 조절 요소의 제어 하에 있다. 일부 실시형태에서, CMV 프로모터, CMV-닭 베타-액틴 하이브리드(CAG) 프로모터, 조직 특이적 또는 종양-특이적 프로모터는 특정 항체 중쇄 또는 경쇄 또는 이로부터의 단일 쇄 유도체의 발현을 제어하기 위해서이다.
비-바이러스 발현 벡터는 네이키드 DNA를 직접 주입하거나 리포좀, 마이크로입자, 마이크로캡슐, 바이러스-유사 입자 또는 적혈구 고스트에 항종양 길항제-코딩 폴리뉴클레오티드를 캡슐화함으로써 비-바이러스 유전자 전달에 사용될 수 있다. 이러한 조성물은 화학적 접합에 의해 표적화 도메인에 추가로 연결되어 표적화된 전달 및/또는 핵산의 원하는 관심 세포로의 진입을 촉진할 수 있다. 또한, 플라스미드 벡터는 합성 유전자 전달 분자 예컨대 중합체 DNA-결합 양이온 예컨대 폴리리신, 프로타민, 및 알부민과 함께 인큐베이션될 수 있으며, 세포 표적화 리간드 예컨대 아시알루로소뮤코이드, 인슐린, 갈락토스, 락토스 또는 트랜스페린에 연결될 수 있다.
대안적으로, 네이키드 DNA가 사용될 수 있다. 네이키드 DNA의 흡수 효율은 압축 또는 생분해성 라텍스 비드를 사용하여 개선될 수 있다. 이러한 전달은 소수성을 증가시키기 위해 비드를 처리함으로써 추가로 개선될 수 있고, 이에 따라 엔도좀의 파괴 및 DNA의 세포질로의 방출을 촉진할 수 있다.
V. 단일특이적 또는 다중특이적 항체의 생산 방법
또 다른 양태에서, 핵산 또는 발현 벡터를 코딩하는 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 HCVR 및/또는 LCVR, 또는 본 출원의 단일특이적 또는 이중-특이적 항종양 길항제를 코딩하는 핵산/발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제공한다. 숙주 세포는 핵산 또는 발현 벡터를 코딩하는 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 HCVR 및/또는 LCVR 또는 본원에 기술된 임의의 다른 동시-투여된 항체 또는 길항제를 발현할 수 있는 임의의 박테리아 또는 진핵 세포일 수 있다.
또 다른 양태에서, 항종양 길항제를 생산하는 방법은 항체 또는 단편의 생산을 가능케 하는 조건 하에 핵산 또는 발현 벡터를 코딩하는 하나 이상의 항-TIGIT, 항-PD-1, 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 HCVR 및/또는 LCVR로 형질전환된 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 상기 세포로부터 항체를 정제하는 단계를 포함한다.
추가 양태에서, 본 출원은 항체의 하나 이상의 폴리펩티드 사슬을 코딩하는 하나 이상의 구조물을 일시적으로 또는 안정하게 발현하는 세포를 배양하는 단계; 및 배양된 세포로부터 항체를 정제하는 단계를 포함하는 항체 생산 방법을 제공한다. 기능적 항체를 생산할 수 있는 임의의 세포가 사용될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 항체-발현 세포는 진핵세포 또는 포유류 기원이며, 바람직하게는 인간 세포이다. 다양한 조직 세포 유형으로부터의 세포를 사용하여 항체를 발현할 수 있다. 다른 실시형태에서, 세포는 효모 세포, 곤충 세포 또는 박테리아 세포이다. 바람직하게는, 항체-생산 세포는 항체를 발현하는 벡터로 안정하게 형질전환된다.
항체 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 하나 이상의 발현 벡터는 임의의 통상적인 방법, 예컨대 네이키드 DNA 기술, 양이온 지질-매개 형질감염, 중합체-매개 형질감염, 펩티드-매개 형질감염, 바이러스-매개 형질감염, 물리적 또는 화학적 제제 또는 처리, 전기천공 등에 의해 세포 내로 도입될 수 있다. 또한, 항체를 발현하는 안정하게 형질전환된 클론의 선택을 용이하게 하는 선별 마커와 함께 항체를 발현하기 위한 하나 이상의 발현 벡터를 사용하여 세포를 형질감염시킬 수 있다. 이러한 세포에 의해 생성된 항체는 원심분리, 크로마토그래피 등과 같은 당업계에 공지된 기술에 따라 수집 및/또는 정제될 수 있다.
포유류 세포에 적합한 선별 마커의 예는 디히드로폴레이트 환원효소(DHFR: dihydrofolate reductase), 티미딘 키나제, 네오마이신, 네오마이신 유사체 G418, 히드로마이신, 및 퓨로마이신을 포함한다. 이러한 선별 마커가 포유류 숙주 세포로 성공적으로 전달될 때, 형질전환된 포유류 숙주 세포는 선택적 압력 하에 놓이면 생존할 수 있다. 선택 체제에는 널리 사용되는 두 가지 카테고리가 있다. 첫 번째 카테고리는 세포의 신진대사와 보충 배지와 독립적으로 성장할 수 있는 능력이 부족한 돌연변이 세포주의 사용에 기반한다. 두 가지 예는 CHO DHFR- 세포와 마우스 LTK- 세포이다. 이러한 세포는 티미딘 또는 히포크잔틴과 같은 영양소를 추가하지 않으면 성장할 수 있는 능력이 없다. 이러한 세포는 완전한 뉴클레오티드 합성 경로에 필요한 특정 유전자가 없기 때문에, 누락된 뉴클레오티드가 보충된 배지에 제공되지 않는 한 생존할 수 없다. 배지 보충에 대한 대안은 손상되지 않은 DHFR 또는 TK 유전자를 각각의 유전자가 없는 세포에 도입하여 성장 요구 사항을 변경하는 것이다. DHFR 또는 TK 유전자로 형질전환되지 않은 개별 세포는 보충되지 않은 배지에서 생존할 수 없을 것이다.
두 번째 카테고리는 임의의 세포 유형에서 사용되는 선택 계획을 지칭하는 우성 선택이며 돌연변이 세포주의 사용을 필요로 하지 않는다. 이러한 계획은 일반적으로 숙주 세포의 성장을 억제하기 위해 약물을 사용한다. 새로운 유전자를 가진 이러한 세포는 약물 내성을 전달하는 단백질을 발현하고 선택에서 살아남을 것이다. 이러한 우성 선택의 예는 네오마이신, 마이코페놀산, 또는 하이그로마이신 약물을 사용한다. 세 가지 예는 각각 적합한 약물 G418 또는 네오마이신(제네티신), xgpt(마이코페놀산) 또는 하이그로마이신에 대한 내성을 전달하기 위해 진핵 생물 제어 하에 박테리아 유전자를 사용한다. 다른 것들은 네오마이신 유사체 G418 및 퓨로마이신을 포함한다.
예시적인 항체-발현 세포는 인간 Jurkat, 인간 배아 신장(HEK) 293, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 마우스 WEHI 섬유육종 세포, 및 단세포 원생동물 종, 예컨대 레이슈마니아 타렌톨라에(Leishmania tarentolae)를 포함한다. 또한, c-myc 또는 기타 불멸화제로 불멸화된 1차 세포를 사용하여 안정적으로 형질전환된, 항체 생산 세포주가 생산될 수 있다.
일 실시형태에서, 세포주는 안정적으로 형질전환된 레이슈마니아 세포주, 예컨대 레이슈마니아 타렌톨라에를 포함한다. 레이슈마니아는 포유류-유형의 글리코실화 패턴을 나타내는 진핵세포 단백질의 높은 수준의 발현을 위해 강력하고, 빠르게 성장하는 단세포 숙주를 제공하는 것으로 알려져 있다. 상업적으로 이용가능한 레이슈마니아 진핵세포 발현 키트가 이용가능하다(Jena Bioscience GmbH, Jena, 독일).
일부 실시형태에서, 세포주는 적어도 1 mg, 적어도 2 mg, 적어도 5 mg, 적어도 10 mg, 적어도 20 mg, 적어도 50 mg, 적어도 100 mg, 적어도 200 mg, 적어도 300 mg, 적어도 400 mg, 또는 적어도 500 mg의 항체/배양 리터를 발현한다.
본 출원의 항체는 RPMI, DMEM, 및 AIM V®과 같은 임의의 적합한 배양 배지에서 배양 및 유지 후에 항체 발현 세포로부터 단리될 수 있다. 항체는 Protein-A 또는 Protein-G 면역친화도 정제의 사용을 포함하여, 통상적인 단백질 정제 방법론(예컨대, 친화도 정제, 크로마토그래피 등)을 사용하여 정제될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 이로부터의 단리를 위해 배양 상청액으로 분비되기 위해 조작된다.
VI. 약학 조성물 및 치료 방법
본 출원의 또 다른 양태는 세포 증식성 장애, 예컨대 암, 만성 감염, 또는 면역학적으로 손상된 질환 상태를 치료하기 위한 약학 조성물 및 방법에 관한 것이다. 일 실시형태에서, 약학 조성물은 본 출원의 하나 이상의 항종양 길항제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항종양 길항제(들)는 하나 이상의 체크포인트 조절제 길항제, 예컨대 항-T 세포 Ig 및 ITIM 도메인(TIGIT) 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제 및 LAG-3 억제제를 포함한다. 길항제(들)는 약학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화된다. 본 출원의 약학 조성물은 본원에 기술된 하나 이상의 상이한 항체, 하나 이상의 다중특이적 항체, 하나 이상의 면역접합체, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
전술된 바와 같이, 본원에 기술된 약학 조성물의 사용 방법은 이를 필요로 하는 대상에 본 개시내용에 따른 유효량의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
임의의 적합한 투여 경로 또는 모드가 항체 또는 길항제의 치료적으로 또는 예방적으로 유효한 용량으로 환자에게 제공하기 위해 사용될 수 있다. 예시적인 투여 경로 또는 모드는 비경구(예컨대 정맥 내, 동맥 내, 근육 내, 피하, 종양 내), 경구, 국소(비강, 경피, 피내 또는 안내), 점막(예컨대, 비강, 설하, 협측, 직장, 질), 흡입, 림프 내, 척추 내, 두개 내, 복강 내, 기관 내, 방광 내, 척수강 내, 장 내, 폐 내, 림프 내, 공동 내, 안와 내, 캡슐 내 및 경요도, 및 카테터 또는 스텐트에 의한 국소 전달을 포함한다.
본 개시내용에 따른 항체 또는 길항제를 포함하는 약학 조성물은 임의의 약학적으로 허용되는 담체(들) 또는 부형제(들)로 제형화될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "약학적으로 허용되는 담체"는 생리학적으로 적합한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 약학 조성물은 적합한 고체 또는 겔 상 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 예시적인 담체 또는 부형제는 비제한적으로 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트, 다양한 당, 전분, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 및 중합체 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 예시적인 약학적으로 허용되는 담체는 물, 염수, 포스페이트 완충된 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등, 및 이들의 조합 중 하나 이상을 포함한다. 다수의 경우에, 등장성 제제, 예컨대 당, 폴리알코올 예컨대 만니톨, 솔비톨, 또는 소듐 클로라이드를 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 약학적으로 허용되는 담체는 치료제의 저장 수명 또는 효과를 상승시키는 습윤제 또는 유화제, 보존제 또는 완충제와 같은 소량의 보조 물질을 추가로 포함할 수 있다.
항종양 길항제는 비경구 투여에 적합한 약학 조성물에 혼입될 수 있다. 적합한 완충제는 비제한적으로 소듐 숙시네이트, 소듐 시트레이트, 소듐 포스페이트 또는 포타슘 포스페이트를 포함한다. 소듐 클로라이드는 0 내지 300 mM(액상 투여 형태의 경우 선택적으로 150 mM)의 농도에서 용액의 독성을 변경하기 위해 사용될 수 있다. 동결건조된 투여 형태에는 바람직하게는 0 내지 10% 수크로스(선택적으로 0.5 내지 1.0%)의 동결보호제가 포함될 수 있다. 다른 적합한 동결보호제는 트레할로스 및 락토스를 포함한다. 동결건조된 투여 형태에는 주로 1 내지 10% 만니톨(선택적으로 2 내지 4%)의 증량제가 포함될 수 있다. 안정화제가 액상 및 동결건조된 투여 형태 둘 모두에서 주로 1 내지 50 mM L-메티오닌(선택적으로 5 내지 10 mM)으로 사용될 수 있다. 다른 적합한 증량제는 글리신, 아르기닌을 포함하며, 0 내지 0.05% 폴리솔베이트-80(선택적으로 0.005 내지 0.01%)으로서 포함될 수 잇다. 추가의 계면활성제는 비제한적으로 폴리솔베이트 20 및 BRIJ 계면활성제를 포함한다.
치료용 항종양 길항제 제제는 동결건조되고 바람직하게는 진공 하에 멸균 분말로 저장될 수 있으며, 이어서 주사 전에 정균수(예컨대 벤질 알코올 보존제 함유) 또는 멸균수 중에서 재구성될 수 있다. 약학 조성물은 주사, 예컨대 볼루스 주사 또는 연속 주입에 의한 비경구 투여용으로 제형화될 수 있다.
약학 조성물 중의 치료제는 "치료적 유효량" 또는 "예방적 유효량"으로 제형화될 수 있다. "치료적 유효량"은 원하는 치료적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 재조합 벡터의 치료적 유효량은 치료할 병태, 병태의 중증도 및 과정, 투여 방식, 항체 또는 제제가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 특정 제제(들)의 생체이용률, 개체에서 원하는 반응을 발휘하기 위한 항종양 길항제의 능력, 이전의 치료, 연령, 환자의 체중 및 성별, 환자의 임상적 이력 및 항체에 대한 반응, 사용되는 항종양 길항제의 유형, 주치의 판단 등에 따라 달라질 수 있다. 치료적 유효량은 또한 재조합 벡터의 독성 또는 해로운 효과가 치료학적으로 유익한 효과보다 더 중요한 것이다. "예방적 유효량"은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다.
바람직하게는, 항종양 길항제의 폴리펩티드 도메인은 투여되는 치료제에 대한 염증 반응을 감소시키기 위해 투여되는 동일한 숙주로부터 유래된다.
항종양 길항제는 한번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 적절하게 환자에 투여되고 진단 이후 언제든지 환자에게 투여될 수 있다. 항종양 길항제는 단독 치료로서 또는 문제의 병태를 치료하는데 유용한 다른 약물 또는 요법과 함께 투여될 수 있다.
일반적인 제안으로서, 항종양 길항제의 치료적 유효량 또는 예방적 유효량은 하나 이상의 투여에 의해 약 1 ng/kg 체중/일 내지 약 100 mg/kg 체중/일의 범위로 투여될 것이다. 특정 실시형태에서, 각각의 항종양 길항제는 약 1 ng/kg 체중/일 내지 약 10 mg/kg 체중/일, 약 1 ng/kg 체중/일 내지 약 1 mg/kg 체중/일, 약 1 ng/kg 체중/일 내지 약 100 μg/kg 체중/일, 약 1 ng/kg 체중/일 내지 약 10 μg/kg 체중/일, 약 1 ng/kg 체중/일 내지 약 1 μg/kg 체중/일, 약 1 ng/kg 체중/일 내지 약 100 ng/kg 체중/일, 약 1 ng/kg 체중/일 내지 약 10 ng/kg 체중/일, 약 10 ng/kg 체중/일 내지 약 100 mg/kg 체중/일, 약 10 ng/kg 체중/일 내지 약 10 mg/kg 체중/일, 약 10 ng/kg 체중/일 내지 약 1 mg/kg 체중/일, 약 10 ng/kg 체중/일 내지 약 100 μg/kg 체중/일, 약 10 ng/kg 체중/일 내지 약 10 μg/kg 체중/일, 약 10 ng/kg 체중/일 내지 약 1 μg/kg 체중/일, 10 ng/kg 체중/일 내지 약 100 ng/kg 체중/일, 약 100 ng/kg 체중/일 내지 약 100 mg/kg 체중/일, 약 100 ng/kg 체중/일 내지 약 10 mg/kg 체중/일, 약 100 ng/kg 체중/일 내지 약 1 mg/kg 체중/일, 약 100 ng/kg 체중/일 내지 약 100 μg/kg 체중/일, 약 100 ng/kg 체중/일 내지 약 10 μg/kg 체중/일, 약 100 ng/kg 체중/일 내지 약 1 μg/kg 체중/일, 약 1 μg/kg 체중/일 내지 약 100 mg/kg 체중/일, 약 1 μg /kg 체중/일 내지 약 10 mg/kg 체중/일, 약 1 μg /kg 체중/일 내지 약 1 mg/kg 체중/일, 약 1 μg /kg 체중/일 내지 약 100 μg/kg 체중/일, 약 1 μg /kg 체중/일 내지 약 10 μg/kg 체중/일, 약 10 μg/kg 체중/일 내지 약 100 mg/kg 체중/일, 약 10 μg /kg 체중/일 내지 약 10 mg/kg 체중/일, 약 10 μg /kg 체중/일 내지 약 1 mg/kg 체중/일, 약 10 μg /kg 체중/일 내지 약 100 μg/kg 체중/일, 약 100 μg/kg 체중/일 내지 약 100 mg/kg 체중/일, 약 100 μg /kg 체중/일 내지 약 10 mg/kg 체중/일, 약 100 μg /kg 체중/일 내지 약 1 mg/kg 체중/일, 약 1 mg/kg 체중/일 내지 약 100 mg/kg 체중/일, 약 1 mg/kg 체중/일 내지 약 10 mg/kg 체중/일, 약 10 mg/kg 체중/일 내지 약 100 mg/kg 체중/일의 범위로 투여된다.
다른 실시형태에서, 항종양 길항제는 3일 마다 500 μg 내지 20 g, 또는 3일 마다 25 mg/kg 체중의 용량으로 투여된다.
다른 실시형태에서, 각각의 항종양 길항제는 개체 투여 당 약 10 ng 내지 약 100 ng, 개체 투여 당 약 10 ng 내지 약 1 μg, 개체 투여 당 약 10 ng 내지 약 10 μg, 개체 투여 당 약 10 ng 내지 약 100 μg, 개체 투여 당 약 10 ng 내지 약 1 mg, 개체 투여 당 약 10 ng 내지 약 10 mg, 개체 투여 당 약 10 ng 내지 약 100 mg, 주사 당 약 10 ng 내지 약 1000 mg, 개체 투여 당 약 10 ng 내지 약 10,000 mg, 개체 투여 당 약 100 ng 내지 약 1 μg, 개체 투여 당 약 100 ng 내지 약 10 μg, 개체 투여 당 약 100 ng 내지 약 100 μg, 개체 투여 당 약 100 ng 내지 약 1 mg, 개체 투여 당 약 100 ng 내지 약 10 mg, 개체 투여 당 약 100 ng 내지 약 100 mg, 주사 당 약 100 ng 내지 약 1,000 mg, 개체 투여 당 약 100 ng 내지 약 10,000 mg, 개체 투여 당 약 1 μg 내지 약 10 μg, 개체 투여 당 약 1 μg 내지 약 100 μg, 개체 투여 당 약 1 μg 내지 약 1 mg, 개체 투여 당 약 1 μg 내지 약 10 mg, 개체 투여 당 약 1 μg 내지 약 100 mg, 주사 당 약 1 μg 내지 약 1,000 mg, 개체 투여 당 약 1 μg 내지 약 10,000 mg, 개체 투여 당 약 10 μg 내지 약 100 μg, 개체 투여 당 약 10 μg 내지 약 1 mg, 개체 투여 당 약 10 μg 내지 약 10 mg, 개체 투여 당 약 10 μg 내지 약 100 mg, 주사 당 약 10 μg 내지 약 1,000 mg, 개체 투여 당 약 10 μg 내지 약 10,000 mg, 개체 투여 당 약 100 μg 내지 약 1 mg, 개체 투여 당 약 100 μg 내지 약 10 mg, 개체 투여 당 약 100 μg 내지 약 100 mg, 주사 당 약 100 μg 내지 약 1,000 mg, 개체 투여 당 약 100 μg 내지 약 10,000 mg, 개체 투여 당 약 1 mg 내지 약 10 mg, 개체 투여 당 약 1 mg 내지 약 100 mg, 주사 당 약 1 mg 내지 약 1,000 mg, 개체 투여 당 약 1 mg 내지 약 10,000 mg, 개체 투여 당 약 10 mg 내지 약 100 mg, 주사 당 약 10 mg 내지 약 1,000 mg, 개체 투여 당 약 10 mg 내지 약 10,000 mg, 주사 당 약 100 mg 내지 약 1,000 mg, 개체 투여 당 약 100 mg 내지 약 10,000 mg 및 개체 투여 당 약 1,000 mg 내지 약 10,000 mg의 범위로 투여된다. 항종양 길항제는 매일, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일 마다, 또는 1, 2, 3 또는 4주 마다 투여될 수 있다.
다른 특정 실시형태에서, 항종양 길항제의 양은 약 0.0006 mg/일, 0.001 mg/일, 0.003 mg/일, 0.006 mg/일, 0.01 mg/일, 0.03 mg/일, 0.06 mg/일, 0.1 mg/일, 0.3 mg/일, 0.6 mg/일, 1 mg/일, 3 mg/일, 6 mg/일, 10 mg/일, 30 mg/일, 60 mg/일, 100 mg/일, 300 mg/일, 600 mg/일, 1,000 mg/일, 2,000 mg/일, 5,000 mg/일 또는 10,000 mg/일의 용량으로 투여될 수 있다. 예상한 바와 같이, 용량은 환자의 상태, 체격, 연령 및 상태에 따라 달라질 것이다.
특정 실시형태에서, 항종양 길항제에 대한 코딩 서열은 세포 증식성 장애를 가진 환자에서 유효량의 항종양 길항제를 발현하기 위해 적합한 발현 벡터(예컨대, 바이러스 또는 비-바이러스 벡터) 내로 통합된다. 예컨대, 하나 이상의 재조합 μg (rAAV) 바이러스의 투여를 포함하는 특정 실시형태에서, 약학 조성물은 적어도 kg 당 1010, 적어도 1011, 적어도 1012, 적어도 1013, 또는 적어도 1014 게놈 카피(GC: genome copy) 또는 재조합 바이러스 입자, 또는 이들의 임의의 범위를 포함하는 양으로 rAAV를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 약학 조성물은 유효량의 재조합 바이러스, 예컨대 rAAV를 대상 당 적어도 1010, 적어도 1011, 적어도 1012, 적어도 1013, 적어도 1014, 적어도 1015 게놈 카피 또는 재조합 바이러스 입자 게놈 카피 또는 임의의 이들의 범위를 포함하는 양으로 포함한다.
투여량은 임의의 특정 세포 증식성 장애에 적합한 여러 분야에서 허용되는 동물 모델에서 시험될 수 있다.
전달 방법은 또한 사멸된 바이러스에 연결되거나 연결되지 않은 다가양이온성 축합된 DNA, 리간드 연결된 DNA, 리포좀, 진핵세포 전달 비히클 세포, 광중합된 히드로겔 물질의 침착, 휴대용 유전자 전달 입자 총의 사용, 이온화 방사선, 핵산 전하 중화 또는 세포 막과의 융합, 입자 매개된 유전자 전달 등의 사용을 포함할 수 있다.
본 발명은 제한하는 것으로 해석되어서는 안되는 하기 실시예에 의해 추가로 설명된다. 본 출원 전체에 걸쳐 인용된 모든 참고문헌, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용과 도면 및 표는 참조로서 본원에 포함된다.
실시예
실시예 1: 단클론 항체의 생산
본 출원의 단클론 항체(mAb)를 당업계에 잘 알려진 기술을 사용하여 생성하고 스크리닝하였으며, 예컨대, 문헌[Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York]을 참조한다. 항원 특이적 하이브리도마 mAb를 당업계에 잘 알려진 기술을 사용하여 클로닝하고, 서열분석하고 조작하였으며, 예컨대 문헌[Lo. B.K.C Methods in Molecular BiologyTM. Volume 248 2004. Antibody Engineering]을 참조한다.
도 1은 항-TIGIT mAb의 CDR 서열을 나타낸다. 도 2a 내지 2b는 항-TIGIT 항체 가변 도메인 서열의 다양한 실시형태를 나타낸다. 도 3은 항-PD-1 mAb의 CDR 서열을 나타낸다. 도 4a 내지 4c는 항-PD-1 항체 가변 도메인 서열의 다양한 실시형태를 나타낸다. 도 5는 항-PD-L1 mAb의 CDR 서열을 나타낸다. 도 6a 내지 6c는 항-PD-L1 항체 가변 도메인 서열의 다양한 실시형태를 나타낸다.
실시예 2: 항-TIGIT scFv를 사용한 이중특이적 항-PD-1 항체의 설계
도 7a 내지 7c는 3개의 예시적인 이중특이적 항종양 길항제인, Bi-TPM-93(도 7a), Bi-TPM-94A(도 7b), 및 Bi-TPM-94B(도 7c)를 나타낸다. 이러한 길항제는 3xG4S 링커(도 7a, 7b) 또는 6xG4S 링커(도 7c)에 의해 분리된 항-TIGIT mAb T-10/B21로부터의 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 있는 항-TIGIT scFv와 함께 항-PD-1(PD-01) 항체 백본(도 7a) 또는 항-PD-1(PD-06/2P17) 항체 백본(도 7a, 7b)을 함유한다.
도 8은 도 7a 내지 7c에 도시된 이중특이적 항체에 존재하는 기능적 도메인 서열을 나타낸다.
도 9a 내지 9b는 도 7a 내지 7c에 도시된 이중특이적 항체에 해당하는 예시적인 중쇄(HC) 및 경쇄(LC) 서열을 나타낸다.
실시예 3: 이중특이적 항-PD-1/항-TIGIT 항체의 발현 및 기능적 특성화
Bi-TPM-93 및 Bi-TPM-94A의 PD-1 차단 능력을 평가하기 위해, 이중특이적 mAb의 연속 희석물을 인간 PD-1 형질감염된 CHOK1 세포 및 7 μg/ml FITC 표지된 인간 PD-L1-Fc 단백질과 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션 하고, 세척하고, 분석 전에 iQue intellicyt 시스템으로 고정하여 PD-1 IC50 분석을 수행하였다. 도 10의 이러한 분석 결과는 PD-06/2P17 유래의 VH 및 VL 서열을 함유하는 Bi-TPM-94(IC50=0.15 nM)가 PD-1과 이의 리간드 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하며, PD-01 유래의 VH 및 VL 서열을 함유하는 Bi-TPM-93(IC50=0.83 nM)보다 더 우수함을 나타낸다.
도 11은 인간 배아 신장(HEK) 293 세포에서 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B 둘 모두의 강력한 일시적인 발현을 입증하는 비환원 PAGE 분석을 나타낸다.
Bi-TPM93, Bi-TPM-94A, 및 Bi-TPM-94B에 해당하는 길항제 종의 균질성 정도를 평가하기 위해, 샘플을 정제하고 크기-배제 초-고성능 액체 크로마토그래피(SE-UHPLC) 분석을 하였다. 샘플 정제를 다음과 같이 수행하였다. 먼저, 수확된 세포 배양액(HCCF: harvested cell culture fluid)을 0.2 μm 여과에 적용한 후 Hitrap Protein A HP 크로마토그래피(GE Healthcare)를 사용하여 1 mL/분으로 친화도 정제를 수행하였다. 친화도 정제 후, Sepax Proteomix® SCX-NP5 컬럼을 사용하여 0.8 mL/분의 구배 용리로 양이온 교환(CEX: cation exchange) 크로마토그래피에 적용하였다. 응집물의 양(고분자량, HMW), 이량체, 및 저분자량(LMW) 단편을 Tosoh TSKgel UP-G3000SWXL 컬럼을 사용하여 SE-UPLC에 의해 결정하였다.
상기 분석의 결과(도 12)는 Bi-TPM-94B에서 링커 변형, 즉, 링커의 길이를 3xG4S에서 6xG4S로 증가시키는 것에 의해 제거되는 Bi-TPM 93 및 Bi-TPM-94A의 종이질성의 수준을 나타낸다.
Bi-TPM-94A, Bi-TPM-94B, 및 모 항-PD-1 벤치마크(BM) mAb에 의해 His 태그가 부착된 인간 PD-1으로의 결합에 대한 결합 친화도 및 동력학을 평가하기 위해, 생체 층 간섭 측정법을 Octet RED96 시스템(ForteBio)을 사용하여 수행하였다. 간단하게, 20 nM의 이중특이적 길항제를 항-인간 IgG 포획 바이오센서에 로딩하였다. 분석물(His 태그가 부착된 인간 PD-1 단백질 또는 His 태그가 부착된 인간 TIGIT 단백질)의 결합을 His 태그가 부착된 PD-1 또는 His 태그가 부착된 TIGIT의 연속 희석물을 함유하는 웰에 바이오센서를 배치하여 5분 동안 관찰하였다. 바이오센서를 동력학 완충액으로만 옮기고 10분 동안 간섭계 신호를 모니터링한 후 해리를 측정하였다. 관찰된 온오프 속도(Ka 및 Kd)를 적어도 5개의 시험된 농도를 포함하는 1:1 결합 글로벌 피트 모델을 사용하여 피팅한 후, 평형 결합 상수 KD를 계산하였다.
도 13a의 이러한 분석 결과는 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B의 PD-1에 대한 결합 친화도가 벤치마크 항-PD-1 항체의 PD-1에 대한 결합 친화도보다 더 강함을 나타낸다. 마찬가지로, 도 13b는 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94A의 TIGIT로의 결합 친화도가 벤치마크 항-TIGIT 항체의 TIGIT로의 결합 친화도보다 더 강함을 나타낸다.
TIGIT 및 1 ug/ml 비오티닐화된 PVR-muFc를 안정하게 발현하는 CHO 세포를 사용하는 차단 분석을 사용하여 TIGIT의 이의 PVR 리간드 TIGIT로의 결합을 차단하는 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B 능력을 비교하였다. 간단하게, 세포를 비오티닐화된 PVR-Fc 및 Bi-TPM 분자와 인큐베이션한 후, 세척하고 결합한 PVR-muFc를 iQue Intellicyt 시스템을 사용하여 PE 스트렙타비딘으로 검출하였다. 도 14a는 두 분자 모두 TIGIT 및 PVR의 결합을 유사하게 차단함을 보여준다. 유사하게, 두 분자 모두 PD-1의 이의 PD-L1 리간드로의 결합을 차단할 수 있다(도 14b). 이러한 분석의 결과는 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B가 상응하는 항-TIGIT 및 항-PD-1 벤치마크(BM) 항체보다 약간 더 우수한 IC50 값을 나타냄을 추가로 밝혀냈다.
Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B가 PD-1 및 TIGIT에 동시에 결합할 수 있는지 확인하기 위해, huPD-1-Fc-코팅된(5 μg/ml) 96 웰 ELISA 플레이트를 PBS 중의 1% BSA로 차단하고 항-PD-1/항-TIGIT 이중특이적 항체의 연속 희석물과 함께 2시간 동안 인큐베이션한 후, His-태그가 부착된 huTIGIT 단백질을 첨가하고 2시간 동안 인큐베이션 하였다. 세척 후, HRP 접합된 항-His 태그 Ab 및 TMB 기질을 검출제로서 첨가하고 Perkin Elmer 다중모드 플레이트 판독기로 정량화하였다. 도 15의 이러한 분석 결과는 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B에 의한 PD-1 및 TIGIT의 동시 결합을 보여준다.
IFN-γ 생산을 유도하는 Bi-TPM-94B의 능력을 평가하기 위해, CMV 항원 반응성에 대해 스크리닝된 공여자, 즉 공여자 287(도 16a) 및 공여자 401(도 16b) 유래의 250,000개의 인간 PBMC를 0.1 μg/ml의 CMV-감염된 세포 용해물(레인 2 내지 7)로 자극하여 CMV 반응성 T 세포를 자극하거나 CMV-감염된 세포 용해물(레인 1)로 자극하지 않았다. Shp-77 세포를 PBMC와 함께 공동배양하여 면역 기능 억제 환경을 제공하고 인간 IgG(레인 3), 모 항-TIGIT mAb B21-35(레인 4), 모 항-PD-1 mAb 2P17(레인 5), 모 항-PD-1 mAb 2P17과 조합된 모 항-TIGIT mAb B21-35(레인 6), 또는 Bi-TPM-94B(레인 7)와 함께 추가로 인큐베이션 하였다. 5일 후에, 세포 배양 상청액을 ELISA에 의해 IFN-γ 생성에 대해 조사하였다.
도 16a 및 16b의 이러한 분석 결과는 단일특이적 모 mAb 또는 단일특이적 모 항-PD-1와 항-TIGIT 항체의 조합, 및 음성 대조군에 비해 Bi-TPM-94B를 가진 인간 PBMC(공여자 287, 도 16a; 공여자 401, 도 16b)로부터 증가된 IFN-γ 분비를 나타냈다.
T 세포 증식을 유도하는 Bi-TPM-94B의 능력을 평가하기 위해, 공여자 287(도 17a) 및 공여자 401(도 17b)로부터의 250,000개의 인간 PBMC를 0.1 μg/ml의 CMV-감염된 세포 용해물로 2일 동안 자극하여 CMV 반응성 T 세포를 자극한 다음 카복시플루오레세인 숙신이미딜 에스터(CFSE: carboxyfluorescein succinimidyl ester)로 표지하였다. CFSE-표지된 PBMC를 이어서 Shp-77 세포와 공동-배양하여 면역 기능 억제 환경을 제공하고 인간 IgG(레인 1), 모 항-TIGIT mAb B21-35(레인 2), 모 항-PD-1 mAb 2P17(레인 3), 모 항-PD-1 mAb 2P17과 조합된 모 항-TIGIT mAb B21-35(레인 4), 또는 Bi-TPM-94B(레인 5)와 함께 추가로 인큐베이션 하였다. 5일 후에, CD3+ T 세포 상의 CSFE 신호를 iQue intellicyt 시스템으로 분석하고 CFSE 신호 손실을 기반으로 증식 지수를 계산하였다.
도 17a 내지 도 17b의 이러한 분석 결과는 모 항-PD-1 및 항-TIGIT 항체의 개별 또는 이들의 조합, 및 음성 대조군보다 더 큰 정도로 Bi-TPM-94B가 공여자 287 PBMC(도 17a) 및 공여자 401 PBMC(도 17b)로부터의 1차 인간 T 세포의 증식을 향상시키는 것으로 나타났다.
생체 내 Bi-TPM-94A 및 Bi-TPM-94B의 약동학 특성을 평가하기 위해, 약동학 프로파일을 생성하였다. 간단하게, 10 mg/kg의 Bi-TMP-94A 또는 Bi-TPM-94B를 6 내지 10 주령의 암컷 CD1 마우스(n=2 마우스)의 미정맥(tail vein) 내로 정맥 내 주입하였다. 주사 후 3분, 3시간, 1일, 3일, 7일 및 10일차에 혈청을 수확하였다. 혈청에서 항체를 검출하기 위해, 96웰 ELISA 플레이트를 5 μg/ml 염소 항-인간 IgG(Fc 특이적) F(ab')2 단편(Sigma, #SAB3701274)으로 코팅한 다음 PBS 중의 5% 우유로 차단하였다. 차단 단계 후, 마우스 혈청 및 정제된 Bi-TPM-94A 또는 Bi-TPM-94B 분자 둘 모두를(표준으로서) 5% 우유에 연속적으로 희석한 다음, 플레이트에 첨가하고 2시간 동안 인큐베이션 하였다. 인큐베이션 후, 웰을 세척한 다음 Peroxidase AffiniPure Mouse Anti-Human IgG Fcγ Fragment Specific(Jackson ImmunoResearch #209-035-098) 및 TMB-ELISA Substrate Solution(Thermo Scientific #34029)과 함께 인큐베이션하고 Perkin Elmer 다중모드 플레이트 판독기를 사용하여 OD650 신호에 의해 정량화하였다.
도 18의 이러한 분석 결과는 이중특이적 길항제 Bi-TPM-94A 및 Bi-TMP-94B 의 반감기(T1/2)가 7 내지 10일임을 보여주었다. 따라서, Bi-TPM-94A 및 B 분자는 Bi-TPM-93, 및 Bi-TPM-94B에 비해 더 높은 친화도 결합의 개선된 특성을 가지며, 항-TIGIT scfv에서 연장된 G4S 링커를 사용하면 균질성 측면에서 Bi-TPM-93 및 Bi-TPM-94A에 비해 추가로 개선된다.
실시예 4: 항-LAG-3 단클론 항체의 확인 및 기능적 특성
또 다른 양태에서, 본 출원은 인간 면역 체크포인트 조절제인 LAG-3에 특이적으로 결합하는 단클론 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 스크리닝 및 특성화에 관한 것이다. 도 19a는 단리된 항-LAG-3 mAb 2L2A.1, 2L2A.6, 2L27B 및 3L1A에 해당하는 중쇄 CDR1, CD2 및 CDR3 서열을 나타낸다. 도 19b는 항-LAG-3 mAb 2L2A.1, 2L2A.6, 2L27B 및 3L1A에 해당하는 경쇄 CDR1, CD2 및 CDR3 서열을 나타낸다. 도 20은 항-LAG-3 mAb 2L2A.1, 2L2A.6, 2L27B 및 3L1A의 VH 및 VL 서열을 나타낸다.
차단 분석을 수행하여 mAb 2L2A 및 2L27B(도 21a) 및 2L37A 및 3L1A(도 21b)가 인간 LAG-3과 이의 주요 리간드인 Raji 세포에서 발현되는 주요 조직적합성 복합체 II(MHC II) 항원 사이의 상호작용을 차단함을 보여주었다. 간단하게, mAb 2L2A 및 2L27B(도 21a) 및 2L37A 및 3L1A(도 21b)의 2배의 연속 희석물을 제조하였다. 연속 희석물 및 인간 LAG-3-huFc를 30분 동안 실온에서 인큐베이션 한 다음 Raji 세포를 첨가하고 얼음 상에서 30분 동안 추가로 인큐베이션 하였다. 이어서, Raji 세포를 세척하고 Raji 세포 상의 LAG-3-huFc 결합을 항-인간 IgG PE를 사용하여 검출하였다. iQue Intellicyt 시스템을 사용하여 분석 전에 세포를 고정하였다. 도 21a 및 21b의 이러한 분석의 결과는 마우스 항-LAG-3 mAb가 LAG-3과 이의 주요 리간드인 주요 조직적합성 복합체 II(MHC II) 항원 사이의 상호작용을 항-LAG-3 벤치마크(BM) mAb의 상호작용에 필적할만한 정도로 차단하는 능력을 확인한다.
항-LAG-3 항체, 특히 인간화된 항-LAG-3 변이체, 2L2A.1, 항-LAG-3 벤치마크(BM) 항체(BMS-986016, Bristol-Myers Squibb), 및 인간 Ig에 마우스 2L2A CDR을 포함하는 키메라 2L2A 항체에 의한 LAG-3의 MHC II에 대한 결합 억제를 반영하는 IC50 값을 계산하기 위해 전술된 차단 분석을 추가로 사용하였다.
도 22의 이러한 분석의 결과는 수득된 보다 낮은 IC50 값에 반영되는 바와 같이 인간화된 항-LAG-3 mAb 2L2A.1이 BM mAb 및 인간 Ig에 마우스 2L2A CDR을 포함하는 키메라 2L2A 항체보다 더 우수한 차단제임을 나타낸다.
항-LAG-3 mAb 2L2A.1에 의해 His 태그가 부착된 인간 LAG-3에 대한 결합 친화도 및 결합 동력학을 평가하기 위해, 상응하는 결합 친화도 상수와 함께, 본질적으로 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 결정된 도 13a 및 13b를 참조하여 상기 실시예 3에서 전술된 바와 같이, Octet RED96 시스템(ForteBio)을 사용하여 생물-층 간섭측정을 수행하였다. 도 23a는 인간화된 2L2A.1 항체의 His-태그가 부착된 인간 LAG-3에 대한 결합 친화도를 나타낸다. 도 23b는 인간화된 2L2A.1 항체의 마우스 IgG2a가 융합된 인간 LAG-3(huLAG-3-mIgG2a)에 대한 결합을 위한 결합 친화도 상수를 나타낸다.
2L2A.1의 인간 LAG-3에 결합하는 능력을 추가로 평가하기 위해, 2L2A.1 또는 LAG-3 벤치마크(BM) 항체의 연속 희석물을 인간 LAG-3을 발현하는 CHO-K1 세포(20,000 세포/웰)에 첨가하였다. 혼합물을 4℃에서 20분 동안 인큐베이션 한 후, 3회 세척하고, 2차 항체인 PE 표지된 F(ab')2-염소 항-인간 IgG Fc(Thermo Scientific #H10104)를 사용하여 4℃에서 20분 동안 인큐베이션하여 염색하였다. 세포를 세척하고 7AAD 용액에 재현탁하고 iQue Intellicyt 시스템을 사용하여 분석하기 전에 10% 중성 완충된 포르말린 용액에서 15분 동안 고정하였다. 인간 LAG-3 결합에 대해 기준선과 최대 반응 사이의 중간에 반응을 생성하는 최대 유효 농도의 절반(EC50)을 반영하는 상응하는 EC50 값을 또한 결정하였다. 도 24에 도시된 바와 같이, 결과는 2L2A.1이 BM 항체보다 인간 LAG-3에 대한 친화도가 더 높다는 것을 보여준다.
도 25는 대조군(ctrl) 항체와 비교하여 일시적으로 발현된 인간 배아 신장(HEK) 293 세포에서 인간화된 항-LAG-3 mAb 변이체 2L2A.1의 강력한 발현을 입증하는 비-변성 폴리아크릴아미드 겔(PAGE) 분석을 나타낸다.
LAG-3 및 PD-1이 활성화된 인간 CD3+ T 세포에서 동시발현되는지 여부를 평가하기 위해, 항-인간 CD3/CD28로 활성화된 공여자 PBMC 상에서 FACS 분석을 수행하였다. 도 26의 이러한 분석 결과는 스타필로코칼 엔테로톡신 B(SEB)로 활성화된 인간 PBMC에 의한 LAG-3 및 PD-1의 동시-발현을 확인했다.
IFN-γ 생산을 유도하는 2L2A.1의 능력을 평가하기 위해, 2개의 공여자, 즉, 공여자 0105(도 27a) 및 공여자 0817(도 27b)로부터의 100,000개의 인간 PBMC를 96-웰 ELISA 플레이트 상에 플레이팅 하였다. PBMC를 자극하지 않거나(레인 1) 0.5 μg/ml의 스타필로코칼 엔테로톡신 B(SEB; 레인 2 내지 4)로 자극하였다. 자극된 세포에 벤치마크(BM) 항-LAG-3 mAb(레인 3), 2L2A.1 mAb(레인 4), 또는 이소타입-매칭된 대조군 항체(레인 2)를 첨가하고 37℃에서 5일 동안 인큐베이션 하였다. 이어서 세포 배양 상청액을 ELISA에 의해 IFN-γ 생산에 대해 조사하였다. 도 27a 및 27b의 결과는 항-LAG-3 BM에 비해 2L2A.1을 가진 두 인간 공여자 PBMC에서 IFN-γ 분비가 증가했음을 나타낸다.
유사한 분석을 수행하였고, 3개의 추가 공여자 PBMC인 공여자 223(도 28a), 공여자 224(도 28b), 및 공여자 225(도 28c)를 사용하여 PBMC의 증식도 평가하였다. 도 28a 및 28b의 결과는 항-LAG-3 BM에 비해 2L2A.1을 가진 인간 공여자 PBMC로부터 증가된 IFN-γ 분비를 추가로 입증하였다. 증식을 평가하기 위하여, 3개의 공여자 PBMC를 CSFE로 표지하고, 100 ng/ml SEB로 자극하고, 벤치마크(BM) 항-LAG-3 mAb(레인 3), 2L2A.1 mAb(레인 4), 또는 이소타입-매칭된 대조군 항체(레인 2)를 추가하였다. PBMC 혼합물을 37℃에서 5일 동안 인큐베이션하고 CD4 T 세포 상의 CFSE 신호의 손실을 FACS로 정량화하여 증식 지수(Proliferation Index)를 생성하였다. 도 29a 및 29b에 도시된 결과는 벤치마크(BM) 항-LAG-3 mAb에 비해 2L2A.1가 더 많은 1차 T 세포 증식을 유도할 수 있음을 입증한다.
실시예 5: 이중특이적 항-LAG-3/항-TIGIT scFv 길항제의 설계 및 기능적 특성화
실시예 1에 기술된 이중특이적 항-PD-1/항-TIGIT scFv의 설계 및 특성화에 기초하여, 이러한 설계의 제조가능성 및 기능성의 이점이 유사한 이중특이적 항-LAG-3/항-TIGIT scFv 설계로 확장될 수 있는지 여부를 평가하는 것은 흥미로웠다. 도 30a 및 30b는 2개의 예시적인 이중특이적 항종양 길항제인 연장된 scfv 링커 4xG4S를 가진 Bi-LT-1(도 30a) 및 연장된 scfv 링커 6xG4S를 가진 Bi-LT-3(도 30b)을 도시한다. 도 31은 도 30a 및 30b에 도시된 이중특이적 길항제의 기능적 도메인의 배열을 요약한다. 도 32는 도 30a 및 30b에 도시된 이중특이적 길항제에 해당하는 중쇄(HC) 및 경쇄(LC) 아미노산 서열을 나타낸다.
이중특이적 항종양 길항제인 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3의 TIGIT와 이의 리간드인 인간 PVR(CD155) 사이의 상호작용을 차단하는 능력, 및 LAG-3와 이의 주요 리간드인 주요 조직적합성 복합체 II(MHC II) 항원 사이의 상호작용을 추가적으로 차단하는 능력을 평가하기 위해, 세포-기반 차단 분석을 다음과 같이 수행하였다.
간단하게, Bi-LT-1 및 Bi-LT-3이 TIGIT와 이의 리간드인 인간 PVR(CD155) 사이의 상호작용을 차단함을 보여주기 위해, 세포-기반 차단 분석을 수행하였으며 여기서 Bi-LT-1, Bi-LT-3, 또는 Bi-TPM-94B(상기 실시예 1에 기술된 것)의 연속 희석물을 인간 TIGIT-형질감염된 CHOK1 세포 및 CD155/PVR-마우스 IgG2a와 함께 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션 하였다. CHOK1 세포 상의 CD155/PVR-마우스 IgG2a 결합을 항-마우스 IgG PE로 검출하였다. 분석 전에 세포를 iQue intellicyt 시스템을 사용하여 고정하였다. 이러한 분석의 결과를 도 33a에 나타냈으며 연장된 scfv 링커를 가진 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3이 TIGIT에 대한 이들의 생물활성을 유지함을 입증하였다.
이중특이적 항종양 길항제인 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3이 LAG-3과 이의 주요 리간드인 주요 조직적합성 복합체 II(MHC II) 항원 사이의 상호작용을 또한 차단할 수 있음을 보여주기 위하여, 세포-기반 차단 분석을 수행하였으며 여기서 Bi-LT-1, Bi-LT-3, 또는 항-LAG-3 벤치마크(BM) 항체의 연속 희석물을 LAG-3-마우스 IgG2a와 함께 실온에서 30분 동안 인큐베이션하고, Raji 세포에 첨가하고, 얼음 상에서 30분 동안 추가로 인큐베이션 하였다. Raji 세포를 이어서 세척하고, Raji 세포 상의 LAG-3-마우스 IgG2a 결합을 항-마우스 IgG PE로 검출하였다. 세포를 분석 전에 iQue intellicyt 시스템으로 고정하였다. 이러한 분석의 결과를 도 33b에 도시하였으며 이는 Bi-LT-1 및 Bi-LT-1이 벤치마크 항-LAG3 항체와 유사한 LAG-3에 대한 생물활성을 유지함을 나타낸다. 분석 데이터를 추가로 도시된 IC50 값(nm)을 계산하는데 사용하였으며, 이는 항-LAG-3 벤치마크(BM) 항체에 대한 IC50 값과 유사하였다. 종합하면, 도 33a 및 33b의 결과는 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3이 TIGIT 및 LAG-3 둘 모두에 대한 이들의 생물활성을 유지함을 입증한다.
Bi-LT-1 및 Bi-LT-3이 LAG-3 및 TIGIT 둘 모두에 동시에 결합할 수 있는지 여부를 알아보기 위해, 5 μg/ml LAG-3-mIgG를 4℃에서 밤새 ELISA 플레이트에 코팅한 후 LT-1, LT-3 또는 모 LAG-3 mAb의 연속 희석물을 첨가하기 전에 차단하였다. 실온에서 1시간 인큐베이션 후, 플레이트를 세척하고 500ng/ml His 태그가 부착된 HuTIGIT를 첨가하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 플레이트가 결합된 His 태그가 부착된 HuTIGIT를 항-His 태그 HRP 및 TMB 기질을 사용하여 검출하였다. 도 34의 이러한 분석의 이러한 결과는 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3이 LAG-3 및 TIGIT 둘 모두에 동시에 결합할 수 있음을 입증한다.
도 35a 내지 35d는 6 내지 10주령의 암컷 CD1 마우스에 미정맥 주입 후 모 항-LAG-3 mAb(도 35a), 항-LAG-3 벤치마크 mAb(도 35b), Bi-LT-1(도 35c), 또는 Bi-LT-3(도 35d)에 해당하는 약동학 프로파일 및 생체 내 반감기(T1/2)를 도시한다. 항체 및 이중특이적 길항제를 주사 후 다양한 시간에 취한 혈청으로부터 회수하고 ELISA에 의해 분석하였다. 결과는 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3 둘 모두가 항-LAG3 모 항체 및 벤치마크 항체에 비해 유사한 약동학을 가지며, 5 내지 6일의 반감기(T1/2)를 가짐을 나타낸다.
단백질 A 정제된 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3의 종 균질성 및 안정성을 평가하기 위해, Bi-LT-1 및 Bi-LT-3의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 프로파일을 전술된 바와 같이 생성하였다. 도 36a의 이러한 분석 결과는 4℃에서 7일 후 종 균질성 및 우수한 안정성을 생성하는 연장된 scfv 링커 둘 모두와 일치한다. 도 36b는 전술된 바와 같이 수행한 크기-배제 초-고성능 액체 크로마토그래피(SE-UHPLC) 분석을 나타낸다. 이러한 분석의 결과는 0일차 및 7일차의 이량체 종(Bi-LT-1의 경우 각각 98.4%, 98.3%, 및 Bi-LT-3의 경우 각각 98.4%, 98.1%)과 비교하여, 0일차 및 7일차의 고분자량(HMW) 종(Bi-LT-1의 경우 각각 1.3%, 1.5%, 및 Bi-LT-3의 경우 각각 1.3%, 1.4%) 및 0일차 및 7일차의 저분자량(LMW) 종(Bi-LT-1의 경우 각각 0.2%, 02% 및 Bi-LT-3의 경우 각각 0.3%, 0.5%)의 낮은 수준으로 반영되는 바와 같이, 도 36a에서 관찰된 종 균질성과 일치한다.
IFN-γ 생산을 유도하는 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3의 능력을 평가하기 위해, 인간 PBMC를 SHP-77 세포(도 37a) 또는 H358 세포(도 37b)의 존재 하에 100 ng/ml SEB로 자극하여 면역 억제 신호를 제공하였다. 이어서 인간 IgG 대조군(레인 3), 항-TIGIT mAb(B21-35) 단독(레인 4), 항-LAG-3 mAb 단독(레인 5), 항-TIGIT mAb 및 항-LAG-3 mAb의 조합(레인 6), Bi-LT-1(레인 7), 또는 Bi-LT-3(레인 8)을 첨가하여 T 세포 기능을 구조하였다(도 37a, 37b). 4일 후에, 세포 배양 상청액을 수집하고 ELISA에 의해 IFN-γ 수준을 조사하였다. 도 37a 및 37b의 이러한 분석 결과는 LT-1 및 LT-3이 모 TIGIT 및 LAG-3 항체의 조합보다 더 강력함을 나타낸다.
도 38은 CD4 T 세포의 증식을 유도하는 Bi-LT-1 및 Bi-LT-3의 능력의 평가를 나타낸다. 인간 PMBC를 CSFE로 표지한 다음 SHP-77 세포의 존재 하에 100ng/ml SEB로 자극하여 면역 억제 신호를 제공하였다. 128nM 인간 IgG 대조군(레인 3), 항-TIGIT mAb B21-35(레인 4),　항-LAG-3 mAb(레인 5), 항-TIGIT mAb 및 항-LAG-3 mAb의 조합(레인 6), Bi-LT-1(레인 7) 또는 Bi-LT-3(레인 8)을 사용하여 T 세포 기능을 구조하였다. 5일 후에, CD4 T 세포 상의 CFSE 신호의 손실을 FACS로 정량화하여 증식 지수를 결정하였다. 모 항체 및 2개의 모 항체의 조합에 대한 IFNγ의 증가된 자극과 유사하게, Bi-LT-1 및 Bi-LT-3 둘 모두는 인간 CD4 T 세포의 증식을 자극하는 능력이 증가하였다.
상기 설명은 당업자에게 본 발명을 실시하는 방법을 교시하기 위한 목적이며, 명세서를 읽었을 때 당업자에게 명백하게 될 모든 명백한 수정 및 변형을 상세히 설명하려는 것은 아니다. 그러나, 이러한 모든 명백한 수정 및 변형은 다음의 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다. 청구범위는 문맥이 특히 반대를 나타내지 않는 한, 의도된 목적을 충족시키는데 효과적인 임의의 순서로 청구된 구성요소 및 단계를 포함하도록 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> GENSUN BIOPHARMA INC. <120> ANTITUMOR IMMUNE CHECKPOINT REGULATOR ANTAGONISTS <130> 2022-003 PCT3 (130781) <150> US 62/691,658 <151> 2018-06-29 <150> US 62/823,989 <151> 2019-03-26 <160> 337 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 Ser Asp Tyr Ala Trp Asn 1 5 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Gly Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 Arg Met Ile Gly Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 1 5 10 15 Ser <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 Arg Gln Ile Gly Leu Gly Phe Thr Tyr 1 5 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 Asp His Thr Ile His 1 5 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 7 Tyr Phe Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 8 Gly Met Leu Arg Trp Phe Ala Asp 1 5 <210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 9 Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Ser Lys Tyr Asn Val Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 10 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 10 Gly Met Leu Arg Trp Phe Ala Tyr 1 5 <210> 11 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 11 Asp Gln Ala Ile His 1 5 <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 12 Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Thr Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 13 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 13 Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 14 Arg Gln Val Gly Leu Gly Phe Ala Tyr 1 5 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 15 Ser Asp Ser Ala Trp Asn 1 5 <210> 16 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 16 Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Arg Ser 1 5 10 15 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 17 Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 <210> 18 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 18 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 19 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 19 Ala Pro Pro Tyr Gly Tyr Asp Val Arg Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 20 Thr Phe Ala Met Gly Val Gly 1 5 <210> 21 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 21 His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 22 Met Asp Tyr Ser Tyr Phe Ala Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 23 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 24 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 24 Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Gln Met Phe Gln Gly 1 5 10 15 <210> 25 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 25 Asp Arg Glu Glu Gln Trp Pro Val Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 26 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val Val Ala 1 5 10 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 27 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 28 Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 29 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 29 Lys Ala Ser Gln Asp Leu Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 30 Ser Ser Ser Tyr Arg Tyr Thr 1 5 <210> 31 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 31 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Thr Val Ala 1 5 10 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 32 Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 33 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 33 Lys Ala Ser Gln Asp Val Phe Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 34 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 34 Gln Gln His Tyr Ser Ile Pro Leu Thr 1 5 <210> 35 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 35 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 36 Ser Ala Ser Tyr His Tyr Thr 1 5 <210> 37 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 37 Ser Ala Ser Tyr Arg Phe Thr 1 5 <210> 38 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 38 Gln His His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 39 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 39 Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 40 Lys Val Ser Asp Arg Phe Ser 1 5 <210> 41 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 41 Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 42 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 42 Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn 1 5 10 <210> 43 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 43 Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro 1 5 <210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 44 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val 1 5 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 45 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Arg Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 46 Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser 1 5 <210> 47 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 47 Gln Gln Ser Tyr Ile Ile Pro Pro Thr 1 5 <210> 48 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 48 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Gly Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Met Ile Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 49 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 49 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val 20 25 30 Val Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Gln 85 90 95 Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 100 105 110 Ile Lys Arg 115 <210> 50 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 50 Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Ser Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Gln Ile Gly Leu Gly Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 51 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 51 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gln Asp Leu Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ser Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Gln 85 90 95 Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Glu Gly Thr Lys Leu Glu 100 105 110 Ile Lys <210> 52 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 52 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Phe Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gly Met Leu Arg Trp Phe Ala Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Ile Thr Val Ser Val Ala 115 <210> 53 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 53 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Thr 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 54 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 54 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Ser Lys Tyr Asn Val Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gly Met Leu Arg Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 55 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 55 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Phe Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ile Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 56 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 56 Glu Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Ala Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Thr Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Met Leu Arg Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 57 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 58 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 58 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Gln Val Gly Leu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 59 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 59 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr His Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 60 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 60 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Ser Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Arg Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Arg Gln Val Gly Leu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 61 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 61 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Phe Thr Gly Ala Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Phe Lys 100 105 <210> 62 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 62 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Pro Pro Tyr Gly Tyr Asp Val Arg Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 63 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 63 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Val Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asp Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 64 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 64 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Phe 20 25 30 Ala Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ala 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Met Asp Tyr Ser Tyr Phe Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 65 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 65 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Leu Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Trp Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 66 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 66 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Gln Met Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Glu Glu Gln Trp Pro Val Gly Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 67 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 67 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Arg Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Ile Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Arg 100 105 <210> 68 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 68 Asn Phe Leu Met Ser 1 5 <210> 69 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 69 Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 70 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 70 Arg Thr Thr Tyr Ser Met Asp Tyr 1 5 <210> 71 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 71 Asn Ser Tyr Leu Tyr 1 5 <210> 72 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 72 Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Thr <210> 73 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 73 Arg Asp Tyr Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Ser 1 5 10 <210> 74 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 74 Asn Ser Tyr Ile Tyr 1 5 <210> 75 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 75 Arg Arg Asp Tyr Arg Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Ser 1 5 10 <210> 76 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 76 Thr Tyr Tyr Ile Tyr 1 5 <210> 77 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 77 Gly Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ile <210> 78 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 78 Arg Tyr His Gly Tyr Asp Gly Gly Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 79 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 79 Ser Tyr Tyr Ile His 1 5 <210> 80 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 80 Trp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ser Lys Tyr Asn Glu Asn Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 81 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 81 Ser Glu Thr Tyr Asp Tyr Gly Asp Tyr 1 5 <210> 82 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 82 Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 83 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 83 Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp 1 5 <210> 84 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 84 Gln Gln Phe Tyr Ser Ile Pro Trp Thr 1 5 <210> 85 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 85 Arg Ala Ser Ser Thr Leu Tyr Ser Asn Tyr Leu His 1 5 10 <210> 86 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 86 Arg Ala Ser Phe Leu Ala Ser 1 5 <210> 87 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 87 Gln Gln Gly Ser Ser Ile Pro Leu Thr 1 5 <210> 88 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 88 Ser Ala Ser Ser Ser Leu Tyr Ser Ser Tyr Leu His 1 5 10 <210> 89 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 89 Arg Ala Ser Ser Ser Leu Tyr Ser Asn Tyr Leu His 1 5 10 <210> 90 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 90 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Phe Ser Tyr Ile His 1 5 10 15 <210> 91 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 91 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 92 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 92 Gln His Thr Trp Glu Leu Pro Asn Thr 1 5 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 93 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 94 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 94 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser 1 5 <210> 95 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 95 Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 96 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 96 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Arg Thr Thr Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 97 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 97 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Ile Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 98 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 98 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Thr Thr Ser Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Arg Asp Tyr Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 99 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 99 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Ser Thr Leu Tyr Ser Asn 20 25 30 Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Arg Ala Ser Phe Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ser Ile Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 100 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 100 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30 Tyr Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ser Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 101 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 101 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Leu Tyr Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Arg Ala Ser Phe Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ser Ile Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Asp Leu Lys 100 105 <210> 102 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 102 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30 Tyr Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ser Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 103 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 103 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Leu Tyr Ser Asn 20 25 30 Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Arg Ala Ser Phe Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ser Ile Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 104 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 104 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Tyr Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ile Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Tyr His Gly Tyr Asp Gly Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 105 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 105 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Phe Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln His Thr Trp 85 90 95 Glu Leu Pro Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 106 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 106 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ser Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Glu Thr Tyr Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 107 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 107 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 108 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 108 Asn Tyr Trp Met His 1 5 <210> 109 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 109 Met Ile His Pro Asn Thr Asn Asn Tyr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 110 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 110 Ser Asp Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 111 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 111 Ser Tyr Trp Met His 1 5 <210> 112 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 112 Met Ile His Pro Asn Val Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 113 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 113 Ser Arg Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 114 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 114 Met Ile His Pro Asn Ser Gly Gly Asn Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 115 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 115 Ser Trp Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 116 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 116 Met Ile His Pro Thr Gly Val Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 117 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 117 Ser Asp Tyr Ala Trp Asn 1 5 <210> 118 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 118 Tyr Ile Ser Asp Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 119 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 119 Ser Phe Leu Arg Leu Arg Ser Tyr Phe Asp His 1 5 10 <210> 120 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 120 Ser Tyr Gly Ile Asn 1 5 <210> 121 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 121 Cys Ile Tyr Ile Gly Asn Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 122 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 122 Ala Tyr Tyr Gly Ser Arg Val Asp Tyr 1 5 <210> 123 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 123 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 124 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 124 Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 125 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 125 Gln Gln Gly Tyr Thr Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 126 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 126 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 127 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 127 Tyr Thr Ser Arg Leu Gln Ser 1 5 <210> 128 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 128 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 129 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 129 Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 130 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 130 Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Val Ala Val Ala 1 5 10 <210> 131 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 131 Trp Ala Ser Thr Arg His Ile 1 5 <210> 132 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 132 Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 133 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 133 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala 1 5 10 <210> 134 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 134 Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro 1 5 <210> 135 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 135 Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Tyr Thr 1 5 <210> 136 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 136 Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His 1 5 <210> 137 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 137 Cys Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly 1 5 <210> 138 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 138 Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 139 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 139 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Met Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile His Pro Asn Thr Asn Asn Tyr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ser Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asp Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 140 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 140 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Tyr Thr Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 141 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 141 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile His Pro Asn Val Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Met Thr Arg Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 142 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 142 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 143 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 143 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Gly Asn Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Trp Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 144 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 144 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 145 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 145 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile His Pro Thr Gly Val Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asp Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 146 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 146 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 147 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 147 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Asp Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Asn Ser Phe Leu Arg Leu Arg Ser Tyr Phe Asp His Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 148 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 148 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Val Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 149 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 149 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Cys Ile Tyr Ile Gly Asn Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ala Tyr Tyr Gly Ser Arg Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 150 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 150 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr 20 25 30 Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 151 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 151 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Cys Ile Tyr Ile Gly Asn Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ala Tyr Tyr Gly Ser Arg Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 152 <211> 104 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 152 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His Trp 20 25 30 Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Lys Cys Ala 35 40 45 Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe 65 70 75 80 Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr Thr Phe Gly 85 90 95 Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 <210> 153 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 153 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile His Pro Asn Ser Gly Gly Asn Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Trp Tyr Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 154 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 154 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Tyr Thr Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 155 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 155 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 156 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 156 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 157 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 157 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala 325 330 <210> 158 <211> 698 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 158 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Arg Thr Thr Tyr Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 260 265 270 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285 Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 305 310 315 320 Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 325 330 335 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln 340 345 350 Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 370 375 380 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 385 390 395 400 Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu 405 410 415 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly 435 440 445 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu 450 455 460 Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 465 470 475 480 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 485 490 495 Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr 500 505 510 Ser Tyr Ala Gln Met Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr 515 520 525 Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp 530 535 540 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Glu Glu Gln Trp Pro Val 545 550 555 560 Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 565 570 575 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp 580 585 590 Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 595 600 605 Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Arg Tyr Leu 610 615 620 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 625 630 635 640 Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 645 650 655 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 660 665 670 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Ile Pro Pro Thr 675 680 685 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 690 695 <210> 159 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 159 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Asp Ala Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Ile Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 160 <211> 698 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 160 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ser Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Glu Thr Tyr Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 260 265 270 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285 Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 305 310 315 320 Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 325 330 335 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln 340 345 350 Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 370 375 380 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 385 390 395 400 Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu 405 410 415 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly 435 440 445 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu 450 455 460 Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 465 470 475 480 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 485 490 495 Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr 500 505 510 Ser Tyr Ala Gln Met Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr 515 520 525 Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp 530 535 540 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Glu Glu Gln Trp Pro Val 545 550 555 560 Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 565 570 575 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp 580 585 590 Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 595 600 605 Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Arg Tyr Leu 610 615 620 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 625 630 635 640 Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 645 650 655 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 660 665 670 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Ile Pro Pro Thr 675 680 685 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 690 695 <210> 161 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 161 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 162 <211> 713 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 162 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ser Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Glu Thr Tyr Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 260 265 270 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285 Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 305 310 315 320 Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 325 330 335 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln 340 345 350 Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 370 375 380 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 385 390 395 400 Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu 405 410 415 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly 435 440 445 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu 450 455 460 Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 465 470 475 480 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 485 490 495 Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr 500 505 510 Ser Tyr Ala Gln Met Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr 515 520 525 Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp 530 535 540 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Glu Glu Gln Trp Pro Val 545 550 555 560 Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 565 570 575 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 580 585 590 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile 595 600 605 Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg 610 615 620 Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Arg Tyr Leu Asn 625 630 635 640 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser 645 650 655 Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 660 665 670 Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp 675 680 685 Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Ile Pro Pro Thr Phe 690 695 700 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 705 710 <210> 163 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 163 Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 <210> 164 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 164 Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 165 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 165 Asp Asp Gly Tyr Tyr Val His Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 166 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 166 His Tyr Tyr Met Asn 1 5 <210> 167 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 167 Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 168 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 168 Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Val Glu His 1 5 10 <210> 169 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 169 Thr Ala Tyr Thr Ile His 1 5 <210> 170 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 170 Trp Leu Tyr Pro Gly Asn Asp Asn Ile Met Tyr Asn Glu Asn Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 171 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 171 His Glu Asp Trp Gly Pro Leu Asp Tyr 1 5 <210> 172 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 172 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Arg Leu Thr 1 5 10 <210> 173 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 173 Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser 1 5 <210> 174 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 174 Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 175 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 175 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ser Arg Leu Asn 1 5 10 <210> 176 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 176 Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Pro Thr 1 5 <210> 177 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 177 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser 1 5 <210> 178 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 178 Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 179 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 179 Gln Gln Ser Asn Gly Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 180 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 180 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Val His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 181 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 181 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Arg 20 25 30 Leu Thr Trp Leu Gln Gln Glu Pro Glu Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 182 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 182 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Val His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 183 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 183 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Arg 20 25 30 Leu Thr Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 184 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 184 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Val Glu His Phe Asp Tyr Trp Asp Asp 100 105 110 Gly Tyr Tyr Val Glu His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 115 120 125 Thr Val Ser Ser 130 <210> 185 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 185 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Ser Arg 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 186 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 186 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Leu Tyr Pro Gly Asn Asp Asn Ile Met Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Glu Asp Trp Gly Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 187 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 187 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Gly Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 188 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 188 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 189 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 189 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 190 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 190 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 <210> 191 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 191 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 30 <210> 192 <211> 706 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 192 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Val His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser 450 455 460 Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys 465 470 475 480 Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln 485 490 495 Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly 500 505 510 Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Gln Met Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr 515 520 525 Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg 530 535 540 Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Glu Glu Gln 545 550 555 560 Trp Pro Val Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 565 570 575 Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 580 585 590 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser 595 600 605 Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala 610 615 620 Ser Gln Ser Ile Arg Arg Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 625 630 635 640 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly 645 650 655 Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 660 665 670 Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln 675 680 685 Gln Ser Tyr Ile Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 690 695 700 Ile Lys 705 <210> 193 <211> 716 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 193 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Val His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser 450 455 460 Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys 465 470 475 480 Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln 485 490 495 Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly 500 505 510 Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Gln Met Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr 515 520 525 Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg 530 535 540 Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Glu Glu Gln 545 550 555 560 Trp Pro Val Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 565 570 575 Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 580 585 590 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 595 600 605 Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 610 615 620 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Arg 625 630 635 640 Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 645 650 655 Ile Tyr Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 660 665 670 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 675 680 685 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ile Ile Pro 690 695 700 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 705 710 715 <210> 194 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 194 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Arg 20 25 30 Leu Thr Trp Leu Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 195 <211> 227 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 195 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Lys 225 <210> 196 <211> 227 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 196 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Lys 225 <210> 197 <211> 225 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 197 Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro 1 5 10 15 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 20 25 30 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp 35 40 45 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 50 55 60 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 65 70 75 80 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 85 90 95 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys 100 105 110 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 115 120 125 Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 130 135 140 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 145 150 155 160 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 165 170 175 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys 180 185 190 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 195 200 205 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 210 215 220 Lys 225 <210> 198 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 198 Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 199 <211> 226 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 199 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly 225 <210> 200 <211> 226 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 200 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly 225 <210> 201 <211> 224 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 201 Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro 1 5 10 15 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 20 25 30 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp 35 40 45 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 50 55 60 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 65 70 75 80 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 85 90 95 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys 100 105 110 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 115 120 125 Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 130 135 140 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 145 150 155 160 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 165 170 175 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys 180 185 190 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 195 200 205 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 210 215 220 <210> 202 <211> 231 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 202 Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 225 230 <210> 203 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 203 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Met Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Cys Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Val His Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 204 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 204 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Arg 20 25 30 Leu Thr Trp Leu Gln Gln Glu Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Asn Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Val Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 205 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 205 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 206 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 206 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 207 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 207 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 208 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 208 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 209 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 209 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 210 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 210 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 211 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 211 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325 <210> 212 <211> 325 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 212 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 213 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 213 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala 325 330 <210> 214 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 214 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala 325 330 <210> 215 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 215 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Ala 325 <210> 216 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 216 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr 20 25 30 <210> 217 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 217 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 218 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 218 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 219 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 219 Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 220 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 220 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 221 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 221 Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 222 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 222 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro 35 <210> 223 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 223 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 224 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 224 Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr 20 25 30 <210> 225 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 225 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Ser Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 226 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 226 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 1 5 10 <210> 227 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 227 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Pro Cys 20 <210> 228 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 228 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 229 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 229 Phe Gly Glu Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 230 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 230 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 231 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 231 Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 232 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 232 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr 20 25 30 <210> 233 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 233 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Ile Thr Val Ser Val Ala 1 5 10 <210> 234 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 234 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 235 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 235 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 1 5 10 <210> 236 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 236 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 237 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 237 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 238 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 238 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 239 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 239 Glu Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 240 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 240 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 241 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 241 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser 20 25 30 <210> 242 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 242 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr 20 25 30 <210> 243 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 243 Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg 20 25 30 <210> 244 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 244 Gly Ala Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 245 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 245 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Phe Lys 1 5 10 <210> 246 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 246 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 247 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 247 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 248 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 248 Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 249 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 249 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 250 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 250 Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Val Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 251 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 251 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 252 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 252 Phe Gly Arg Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 253 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 253 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser 20 25 30 <210> 254 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 254 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 255 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 255 Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr 1 5 10 15 Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 256 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 256 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys 20 <210> 257 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 257 Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Leu Phe Arg Gly Leu Ile Gly 1 5 10 15 <210> 258 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 258 Trp Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Phe Cys 20 25 30 <210> 259 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 259 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 1 5 10 <210> 260 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 260 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 261 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 261 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 262 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 262 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 263 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 263 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 264 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 264 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 <210> 265 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 265 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 20 25 30 <210> 266 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 266 Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 267 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 267 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 268 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 268 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 269 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 269 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 270 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 270 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 271 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 271 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 272 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 272 Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 273 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 273 Arg Thr Thr Ser Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys Thr Arg 20 25 30 <210> 274 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 274 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 275 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 275 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys 20 <210> 276 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 276 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 277 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 277 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 278 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 278 Arg Val Thr Ser Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys Ala 20 25 30 <210> 279 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 279 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 280 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 280 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 281 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 281 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Asp Leu Lys 1 5 10 <210> 282 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 282 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 283 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 283 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 284 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 284 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 285 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 285 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys 20 <210> 286 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 286 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 287 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 287 Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 288 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 288 Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 20 25 30 <210> 289 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 289 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 290 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 290 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 291 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 291 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 292 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 292 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 293 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 293 Trp Met Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 294 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 294 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys 20 <210> 295 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 295 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Lys 1 5 10 15 <210> 296 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 296 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys 20 25 30 <210> 297 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 297 Lys Ala Thr Met Thr Arg Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 298 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 298 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys 20 25 30 <210> 299 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 299 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 300 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 300 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 301 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 301 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 302 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 302 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr 20 25 30 <210> 303 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 303 Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 304 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 304 Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln 1 5 10 15 Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Asn 20 25 30 <210> 305 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 305 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys 20 <210> 306 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 306 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe 1 5 10 15 <210> 307 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 307 Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 308 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 308 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met Gly Trp 1 5 10 15 <210> 309 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 309 Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 310 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 310 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Phe Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 311 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 311 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile His 1 5 10 15 <210> 312 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 312 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr 1 5 10 15 Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 313 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 313 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Val Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 314 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 314 Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Lys 1 5 10 15 <210> 315 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 315 Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu 1 5 10 15 Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 316 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 316 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr 20 25 30 <210> 317 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 317 Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 318 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 318 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg 20 25 30 <210> 319 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 319 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 320 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 320 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 321 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 321 Trp Leu Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 322 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 322 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 323 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 323 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 324 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 324 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 325 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 325 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 326 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 326 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 327 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 327 Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 328 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 328 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 329 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 329 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Leu 1 5 10 15 <210> 330 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 330 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 20 25 30 <210> 331 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 331 Phe Asp Tyr Trp Asp Asp Gly Tyr Tyr Val Glu His Phe Asp Tyr Trp 1 5 10 15 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 20 25 <210> 332 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 332 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 333 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 333 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 20 25 <210> 334 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 334 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 335 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 335 Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 1 5 10 15 Ile Tyr <210> 336 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 336 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 337 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 337 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10

Claims (30)

  1. 항종양 길항제로서,
    PD-1, PD-L1 또는 LAG-3에 특이적으로 결합하는 제1 표적화 도메인; 및
    TIGIT에 특이적으로 결합하는 scFv를 포함하는 제2 표적화 도메인을 포함하는 항종양 길항제.
  2. 제1항에 있어서, scFv가
    SEQ ID NOS: 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 및 66으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 중쇄 가변 영역(HCVR); 및/또는
    SEQ ID NOS: 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 및 67로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 경쇄 가변 영역(LCVR), 또는 둘 모두를 포함하는 항종양 길항제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, scFv가
    SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 HCVR; 및/또는
    SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 포함하는 면역글로불린 LCVR을 포함하는 항종양 길항제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, scFv가
    SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 HCVR; 및/또는
    SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 LCVR을 포함하는 항종양 길항제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노 말단 및 카복시 말단을 가진 면역글로불린 스캐폴드를 포함하는 항종양 길항제.
  6. 제5항에 있어서, 제1 표적화 도메인이 면역글로불린 스캐폴드의 아미노 말단에 연결되고 제2 표적화 도메인이 펩티드 링커를 통해 면역글로불린 스캐폴드의 카복시 말단에 연결되는 항종양 길항제.
  7. 제6항에 있어서, 펩티드 링커가 SEQ ID NOS: 188 내지 191로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 항종양 길항제.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 펩티드 링커가 SEQ ID NO: 191의 아미노산 서열을 포함하는 항종양 길항제.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표적화 도메인이 PD-1에 특이적으로 결합하는 항종양 길항제.
  10. 제9항에 있어서, 제1 표적화 도메인이
    (1) 3개의 상보성 결정 영역(HCDR): HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 HCVR,
    여기서, HCDR1은 SEQ ID NOS: 68, 71, 74, 76 및 79로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    HCDR2는 SEQ ID NOS: 69, 72, 77 및 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    HCDR3이 SEQ ID NOS: 70, 73, 75, 78 및 81로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함함; 및
    (2) 3개의 상보성 결정 영역(LCDR): LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 LCVR,
    여기서, LCDR1은 SEQ ID NOS: 82, 85, 88, 89, 90 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR2는 SEQ ID NOS: 83, 86, 91 및 94로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR3은 SEQ ID NOS: 84, 87, 92 및 95로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함함,
    을 포함하는 항종양 길항제.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 제1 표적화 도메인이
    SEQ ID NOS: 96, 98, 100, 102, 104, 및 106으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 HCVR; 및/또는
    SEQ ID NOS: 97, 99, 101, 103, 105, 및 107로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 LCVR을 포함하는 항종양 길항제.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표적화 도메인이
    SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 HCVR; 및/또는
    SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 LCVR을 포함하는 항종양 길항제.
  13. 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    SEQ ID NO: 160 또는 SEQ ID NO: 162의 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 중쇄, 및/또는 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 경쇄를 포함하는 항종양 길항제.
  14. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표적화 도메인이 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항종양 길항제.
  15. 제14항에 있어서, 제1 표적화 도메인이
    (1) 3개의 상보성 결정 영역(HCDR): HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 HCVR,
    여기서 HCDR1은 SEQ ID NOS: 108, 111, 117 및 120으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    HCDR2는 SEQ ID NOS: 109, 112, 114, 116, 118, 121 및 125로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    HCDR3은 SEQ ID NOS: 110, 113, 115, 119 및 122로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함함; 및
    (2) 3개의 상보성 결정 영역(LCDR): LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 LCVR,
    여기서 LCDR1은 SEQ ID NOS: 123, 126, 130, 133 및 136으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR2는 SEQ ID NOS: 126, 127, 131, 134 및 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR3은 SEQ ID NOS: 125, 128, 129, 132, 135 및 138로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함함,
    을 포함하는 항종양 길항제.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 제1 표적화 도메인이
    SEQ ID NOS: 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151 및 153으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 HCVR;
    SEQ ID NOS: 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152 및 154로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 LCVR;
    또는 둘 모두를 포함하는 항종양 길항제.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표적화 도메인이
    SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 HCVR;
    SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 LCVR; 또는 둘 모두를 포함하는 항종양 길항제.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    SEQ ID NO: 339 내지 341로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 중쇄; 및/또는
    SEQ ID NO: 338의 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 경쇄를 포함하는 항종양 길항제.
  19. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표적화 도메인이 LAG-3에 특이적으로 결합하는 항종양 길항제.
  20. 제19항에 있어서, 제1 표적화 도메인이
    (1) 3개의 상보성 결정 영역(HCDR): HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 HCVR,
    여기서 HCDR1은 SEQ ID NOS: 163, 166 및 169로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    HCDR2는 SEQ ID NOS: 164, 167 및 170으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    HCDR3은 SEQ ID NOS: 165, 168 및 171로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함함; 및
    (2) 3개의 상보성 결정 영역(LCDR): LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 LCVR,
    여기서, LCDR1은 SEQ ID NOS: 172, 175 및 177로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR2는 SEQ ID NOS: 173 및 178로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR3은 SEQ ID NOS: 174, 176 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함함,
    을 포함하는 항종양 길항제.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, 제1 표적화 도메인이
    SEQ ID NOS: 180, 182, 184, 및 186으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 HCVR; 및/또는
    SEQ ID NOS: 181, 183, 185, 및 187로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 LCVR을 포함하는 항종양 길항제.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표적화 도메인이
    SEQ ID NO: 180의 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 HCVR; 및/또는
    SEQ ID NO: 181의 아미노산 서열을 가진 면역글로불린 LCVR을 포함하는 항종양 길항제.
  23. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 표적화 도메인이
    SEQ ID NO: 192 또는 SEQ ID NO: 193의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄; 및/또는
    SEQ ID NO: 194의 아미노 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄를 포함하는 항종양 길항제.
  24. 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서,
    (1) 3개의 상보성 결정 영역(HCDR): HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 HCVR,
    여기서 HCDR1은 SEQ ID NOS: 163, 166, 및 169로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    HCDR2는 SEQ ID NOS: 164, 167, 및 170으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    HCDR3은 SEQ ID NOS: 165, 168, 및 171로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함함;
    (2) 3개의 상보성 결정 영역(LCDR): LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 LCVR,
    여기서 LCDR1은 SEQ ID NOS: 172, 175, 및 177로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR2는 SEQ ID NOS: 173 및 178로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR13은 SEQ ID NOS: 174, 176 및 179로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함함,
    을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로서, 인간 LAG-3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  25. 제24항에 있어서,
    SEQ ID NOS: 180, 182, 184, 및 186으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 HCVR; 및/또는
    SEQ ID NOS: 181, 183, 185, 및 187로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 가진 면역글로불린 LCVR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  26. 제24항 또는 제25항에 있어서,
    SEQ ID NO: 180의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 HCVR; 및/또는
    SEQ ID NO: 181의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 LCVR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 항종양 길항제, 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 코딩하는 하나 이상의 핵산.
  28. 제27항의 하나 이상의 핵산을 포함하는 하나 이상의 발현 벡터.
  29. 제28항의 하나 이상의 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  30. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항의 유효량의 항종양 길항제를 이를 필요로 하는 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 세포 증식성 장애를 치료하는 방법.
KR1020217002981A 2018-06-29 2019-06-28 항종양 면역 체크포인트 조절 길항제 KR20210028222A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862691658P 2018-06-29 2018-06-29
US62/691,658 2018-06-29
US201962823989P 2019-03-26 2019-03-26
US62/823,989 2019-03-26
PCT/US2019/039994 WO2020006516A1 (en) 2018-06-29 2019-06-28 Antitumor immune checkpoint regulator antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210028222A true KR20210028222A (ko) 2021-03-11

Family

ID=68985227

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217002981A KR20210028222A (ko) 2018-06-29 2019-06-28 항종양 면역 체크포인트 조절 길항제

Country Status (9)

Country Link
US (8) US11001635B2 (ko)
EP (3) EP3813864A4 (ko)
JP (3) JP2021532170A (ko)
KR (1) KR20210028222A (ko)
CN (2) CN113056285A (ko)
AU (1) AU2019293047A1 (ko)
BR (1) BR112020026862A2 (ko)
CA (1) CA3105101A1 (ko)
WO (3) WO2020006511A1 (ko)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
IL290457B1 (en) 2015-12-30 2024-10-01 Kodiak Sciences Inc Antibodies and their conjugates
WO2018128939A1 (en) * 2017-01-05 2018-07-12 Gensun Biopharma Inc. Checkpoint regulator antagonists
KR20200140817A (ko) 2018-03-02 2020-12-16 코디악 사이언시스 인코포레이티드 Il-6 항체 그리고 이의 융합 작제물 및 접합체
KR20210028222A (ko) * 2018-06-29 2021-03-11 젠선 바이오파마, 인코포레이티드 항종양 면역 체크포인트 조절 길항제
TWI760751B (zh) * 2019-05-29 2022-04-11 美商美國禮來大藥廠 Tigit及pd-1/tigit-結合分子
US10851157B2 (en) * 2019-07-01 2020-12-01 Gensun Biopharma, Inc. Antagonists targeting the TGF-β pathway
CA3157509A1 (en) 2019-10-10 2021-04-15 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
CN114616251B (zh) 2019-10-21 2024-05-24 南京维立志博生物科技有限公司 靶向PD-1和TGFβ的重组蛋白
WO2021084124A1 (en) 2019-11-01 2021-05-06 Ares Trading S.A. COMBINED INHIBITION OF PD-1, TGFβ AND ATM TOGETHER WITH RADIOTHERAPY FOR THE TREATMENT OF CANCER
EP4054633A1 (en) 2019-11-05 2022-09-14 Merck Patent GmbH Combined inhibition of pd-1, tgfb and tigit for the treatment of cancer
KR20220131261A (ko) * 2020-01-10 2022-09-27 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항tigit항체, 이를 포함하는 다중 특이적 항체 및 그 사용 방법
TW202136315A (zh) * 2020-03-20 2021-10-01 大陸商榮昌生物製藥（煙臺）股份有限公司 一種雙特異性融合蛋白及其應用
CA3175490A1 (en) 2020-04-14 2021-10-21 Glaxosmithkline Intellectual Property Limited Combination treatment for cancer based upon an icos antibody and a pd-l1 antibody tgf-beta-receptor fusion protein
WO2021209458A1 (en) 2020-04-14 2021-10-21 Ares Trading S.A. Combination treatment of cancer
KR20230003178A (ko) * 2020-04-29 2023-01-05 치아타이 티안큉 파마수티컬 그룹 주식회사 PD-1 및 TGF-β에 대한 이중 기능성 단백질
TW202216778A (zh) 2020-07-15 2022-05-01 美商安進公司 Ｔｉｇｉｔ及ｃｄ１１２ｒ阻斷
EP4200332A1 (en) 2020-08-19 2023-06-28 Xencor, Inc. Anti-cd28 and/or anti-b7h3 compositions
WO2022059800A1 (en) * 2020-09-15 2022-03-24 Santen Pharmaceutical Co., Ltd. Bispecific binding molecules against vegf and ang2
US20230372319A1 (en) 2020-11-02 2023-11-23 Ares Trading S.A. Combination Treatment of Cancer
JP2023553257A (ja) 2020-11-02 2023-12-21 アレス トレーディング ソシエテ アノニム がんの組み合わせ治療
CN114539415B (zh) * 2020-11-24 2024-02-02 普米斯生物技术(珠海)有限公司 一种抗PD-L1/VEGF/TGF-β多特异性抗体及其用途
WO2022132932A1 (en) * 2020-12-15 2022-06-23 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method of enhancing immune response and cancer immunotherapy by targeting the cd58:cd2 axis
CN116917334A (zh) * 2021-02-22 2023-10-20 浙江道尔生物科技有限公司 一种具有抗癌活性的多结构域融合蛋白
CN112940134B (zh) * 2021-05-11 2021-09-03 正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司 针对PD-1和TGF-β的双功能蛋白
US20220389120A1 (en) * 2021-06-03 2022-12-08 Gensun Biopharma Inc. Multispecific antagonists
WO2022258622A1 (en) 2021-06-07 2022-12-15 Ares Trading S.A. Combination treatment of cancer
TW202315893A (zh) * 2021-06-09 2023-04-16 香港商岸邁生物科技（香港）有限公司 Ｏｘ４０和／或ｐｄ—ｌ１的抗體和雙特異性結合蛋白
CA3226397A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Ignacio Moraga GONZALEZ Therapeutic muteins
CN113773401B (zh) * 2021-09-15 2023-06-20 宜明昂科生物医药技术（上海）股份有限公司 靶向cd47和pd-l1的重组融合蛋白及其制备和用途
CN117858903A (zh) * 2021-09-15 2024-04-09 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种含抗pvrig/tigit双特异性抗体的药物组合物
JP2024539164A (ja) * 2021-10-21 2024-10-28 杭州阿諾生物医薬科技有限公司 融合ポリペプチドの一種とその使用
EP4455164A1 (en) * 2021-12-24 2024-10-30 Bio-Thera Solutions, Ltd. ANTI-FRalpha ANTIBODY, AND ANTIBODY-DRUG CONJUGATE AND USE THEREOF
WO2023137395A1 (en) * 2022-01-13 2023-07-20 Ingenia Therapeutics Inc. Vegf and tie2-binding fusion protein and uses thereof
CN116836281A (zh) * 2022-03-25 2023-10-03 英诺湖医药(杭州)有限公司 B7h3抗体及包含其的双功能抗体
WO2024017281A1 (zh) * 2022-07-20 2024-01-25 明慧医药（杭州）有限公司 多特异性抗体及其用途
WO2024041477A1 (zh) * 2022-08-22 2024-02-29 浙江道尔生物科技有限公司 多结构域融合蛋白的用途
WO2024218509A1 (en) * 2023-04-19 2024-10-24 Centessa Pharmaceuticals (Uk) Limited Activatable bispecific anti-cd28 and anti pd-l1 proteins and uses thereof

Family Cites Families (95)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3030025A (en) 1962-04-17 Thermostatic gas valve
GB2116183B (en) 1982-03-03 1985-06-05 Genentech Inc Human antithrombin iii dna sequences therefore expression vehicles and cloning vectors containing such sequences and cell cultures transformed thereby a process for expressing human antithrombin iii and pharmaceutical compositions comprising it
US20030206899A1 (en) 1991-03-29 2003-11-06 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
US6582959B2 (en) 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US7067637B1 (en) 1992-02-12 2006-06-27 Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Von Pharmaka Mbh Antibody or antibody fragments specific for a protein of the TGF-β family
US6448077B1 (en) 1994-02-10 2002-09-10 Imclone Systems, Inc. Chimeric and humanized monoclonal antibodies specific to VEGF receptors
US5861499A (en) 1994-02-10 1999-01-19 Imclone Systems Incorporated Nucleic acid molecules encoding the variable or hypervariable region of a monoclonal antibody that binds to an extracellular domain
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
DK0920505T3 (da) 1996-08-16 2008-09-08 Schering Corp Pattedyrcelleoverfladeantigener og tilhörende reagenser
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US20070059302A1 (en) 1997-04-07 2007-03-15 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US6884879B1 (en) 1997-04-07 2005-04-26 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
SI1325932T1 (ko) 1997-04-07 2005-08-31 Genentech Inc
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
WO1999020758A1 (en) 1997-10-21 1999-04-29 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor receptor-like proteins tr11, tr11sv1, and tr11sv2
JP2002502607A (ja) 1998-02-09 2002-01-29 ジェネンテク・インコーポレイテッド 新規な腫瘍壊死因子レセプター相同体及びそれをコードする核酸
US6376653B1 (en) 1998-09-28 2002-04-23 Smithkline Beecham Plc Tie2 antagonist antibodies
US6703020B1 (en) 1999-04-28 2004-03-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibody conjugate methods for selectively inhibiting VEGF
AU6085700A (en) 1999-07-12 2001-01-30 Genentech Inc. Promotion or inhibition of angiogenesis and cardiovascularization by tumor necrosis factor ligand/receptor homologs
JP2001206899A (ja) 1999-11-18 2001-07-31 Japan Tobacco Inc ＴＧＦ−βＩＩ型受容体に対するヒトモノクローナル抗体及びその医薬用途
US6528959B2 (en) 2000-07-19 2003-03-04 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Driving force control system for front-and-rear wheel drive vehicles
AU2001296494A1 (en) * 2000-10-02 2002-04-15 Arizeke Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the transport of biologically active agents across cellular barriers
US7138370B2 (en) 2001-10-11 2006-11-21 Amgen Inc. Specific binding agents of human angiopoietin-2
US7658924B2 (en) 2001-10-11 2010-02-09 Amgen Inc. Angiopoietin-2 specific binding agents
US7521053B2 (en) 2001-10-11 2009-04-21 Amgen Inc. Angiopoietin-2 specific binding agents
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
ES2362931T3 (es) 2002-03-04 2011-07-15 Imclone Llc Anticuerpos humanos específicos contra kdr y usos de los mismos.
AU2004205684A1 (en) 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
RU2369636C2 (ru) 2003-05-23 2009-10-10 Уайт Лиганд gitr и связанные с лигандом gitr молекулы и антитела и варианты их применения
JP2007525466A (ja) 2003-05-30 2007-09-06 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗ｖｅｇｆ抗体での治療
EP1660126A1 (en) 2003-07-11 2006-05-31 Schering Corporation Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer
US7758859B2 (en) 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
US7182135B2 (en) 2003-11-14 2007-02-27 Halliburton Energy Services, Inc. Plug systems and methods for using plugs in subterranean formations
JP2007518399A (ja) 2003-12-02 2007-07-12 ジェンザイム コーポレイション 肺癌を診断および治療する組成物並びに方法
EP1740615B1 (en) 2004-03-31 2014-11-05 Genentech, Inc. Humanized anti-tgf-beta antibodies
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
WO2006083289A2 (en) 2004-06-04 2006-08-10 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
US20060009360A1 (en) 2004-06-25 2006-01-12 Robert Pifer New adjuvant composition
MX2007000216A (es) * 2004-07-08 2007-03-15 Amgen Inc Peptidos terapeuticos.
WO2006053301A2 (en) 2004-11-12 2006-05-18 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to fcrn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
PT2343320T (pt) 2005-03-25 2018-01-23 Gitr Inc Anticorpos anti-gitr e as suas utilizações
PL1874818T3 (pl) 2005-04-22 2011-09-30 Lilly Co Eli Przeciwciała swoiste wobec TGF-beta 1
WO2006117910A1 (ja) 2005-04-28 2006-11-09 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. 抗血小板膜糖蛋白質ⅵモノクローナル抗体
US8475798B2 (en) 2005-06-16 2013-07-02 Inhibitex, Inc. Monoclonal antibodies recognizing a coagulase-negative staphylococcal protein
ATE545657T1 (de) 2005-12-23 2012-03-15 Lilly Co Eli Tgf-beta antikörper
WO2007133822A1 (en) 2006-01-19 2007-11-22 Genzyme Corporation Gitr antibodies for the treatment of cancer
DK2175884T3 (en) 2007-07-12 2016-09-26 Gitr Inc Combination USING GITR BINDING MOLECULES
US8574577B2 (en) 2008-01-03 2013-11-05 The Scripps Research Institute VEGF antibodies comprising modular recognition domains
JO2913B1 (en) 2008-02-20 2015-09-15 امجين إنك, Antibodies directed towards angiopoietin-1 and angiopoietin-2 proteins and their uses
NZ590667A (en) 2008-07-02 2013-01-25 Emergent Product Dev Seattle Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
JPWO2010030002A1 (ja) 2008-09-12 2012-02-02 国立大学法人三重大学 外来性ｇｉｔｒリガンド発現細胞
US8268314B2 (en) * 2008-10-08 2012-09-18 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies
SG175077A1 (en) 2009-04-07 2011-11-28 Roche Glycart Ag Trivalent, bispecific antibodies
RU2595409C2 (ru) 2009-09-03 2016-08-27 Мерк Шарп И Доум Корп., Анти-gitr-антитела
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
KR20120125611A (ko) 2009-12-29 2012-11-16 이머전트 프로덕트 디벨롭먼트 시애틀, 엘엘씨 이종이량체 결합 단백질 및 이의 용도
ES2638521T5 (es) * 2010-03-05 2021-03-02 Univ Johns Hopkins Composiciones y métodos para anticuerpos y proteínas de fusión inmunomoduladores dirigidos contra dianas
US9527925B2 (en) 2011-04-01 2016-12-27 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bispecific binding molecules binding to VEGF and ANG2
CN103874709B (zh) 2011-08-19 2016-12-21 瑞泽恩制药公司 抗tie2抗体及其用途
US20130108641A1 (en) 2011-09-14 2013-05-02 Sanofi Anti-gitr antibodies
WO2013092998A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Innate Pharma Enzymatic conjugation of antibodies
NZ628584A (en) 2012-03-30 2016-04-29 Boehringer Ingelheim Int Ang2-binding molecules
KR101704893B1 (ko) 2012-06-15 2017-02-08 화이자 인코포레이티드 Gdf-8에 대한 개선된 길항물질 항체 및 그의 용도
EP2906295A4 (en) 2012-10-15 2016-06-01 Oncomed Pharm Inc METHODS OF TREATING OCULAR DISEASES
JP6571527B2 (ja) 2012-11-21 2019-09-04 ウーハン ワイゼットワイ バイオファルマ カンパニー リミテッドＷｕｈａｎ Ｙｚｙ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 二重特異性抗体
US20140308285A1 (en) 2013-03-15 2014-10-16 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
US20160137717A1 (en) * 2013-06-20 2016-05-19 Gabriela Burian Use of a vegf antagonist in treating choroidal neovascularisation
DK3021869T3 (da) 2013-07-16 2020-09-21 Hoffmann La Roche Fremgangsmåder til behandling af cancer ved anvendelse af PD-1-aksebindende antagonister og TIGIT-hæmmere
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
WO2015118175A2 (en) 2014-02-10 2015-08-13 Merck Patent Gmbh TARGETED TGFβ INHIBITION
KR102349370B1 (ko) * 2014-05-26 2022-01-10 삼성전자주식회사 인간화 또는 친화도 성숙된 항 앤지오포이에틴-2 항체 및 그의 용도
TWI790593B (zh) 2014-08-19 2023-01-21 美商默沙東有限責任公司 抗tigit抗體
WO2016073282A1 (en) * 2014-11-06 2016-05-12 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors
CA2971732A1 (en) * 2014-12-23 2016-06-30 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to tigit
CN107466446B (zh) 2015-04-10 2021-02-12 Lg 电子株式会社 在无线通信系统中报告信道状态信息的方法及其设备
EP3932428A1 (en) * 2015-05-21 2022-01-05 Harpoon Therapeutics, Inc. Trispecific binding proteins and methods of use
TWI715587B (zh) * 2015-05-28 2021-01-11 美商安可美德藥物股份有限公司 Ｔｉｇｉｔ結合劑和彼之用途
CN105111314B (zh) * 2015-08-13 2019-01-08 成都百世博生物技术有限公司 一种新型融合蛋白、药物组合物及其制备方法和用途
CA2996996A1 (en) * 2015-08-31 2017-03-09 National Research Council Of Canada Tgf-.beta.-receptor ectodomain fusion molecules and uses thereof
RU2744959C2 (ru) 2016-03-23 2021-03-17 Мэбспейс Байосайнсиз (Сучжоу) Ко., Лтд Новые анти-pd-l1 антитела
CN109069638B (zh) * 2016-03-24 2022-03-29 璟尚生物制药公司 用于癌症治疗的三特异性抑制剂
US10787518B2 (en) * 2016-06-14 2020-09-29 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
RU2769282C2 (ru) * 2016-06-20 2022-03-30 Кимаб Лимитед Анти-PD-L1 и IL-2 цитокины
WO2018128939A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Gensun Biopharma Inc. Checkpoint regulator antagonists
KR20210028222A (ko) * 2018-06-29 2021-03-11 젠선 바이오파마, 인코포레이티드 항종양 면역 체크포인트 조절 길항제
US10851157B2 (en) * 2019-07-01 2020-12-01 Gensun Biopharma, Inc. Antagonists targeting the TGF-β pathway
WO2022063114A1 (zh) * 2020-09-23 2022-03-31 海正生物制药有限公司 Tgfbr2-ecd突变体及包含其的融合蛋白与应用
US20220389120A1 (en) * 2021-06-03 2022-12-08 Gensun Biopharma Inc. Multispecific antagonists

Also Published As

Publication number Publication date
US11667716B2 (en) 2023-06-06
US20200181272A1 (en) 2020-06-11
EP3814381A4 (en) 2022-08-10
EP3813864A4 (en) 2022-07-20
US20210009696A1 (en) 2021-01-14
US11518813B2 (en) 2022-12-06
CA3105101A1 (en) 2020-01-02
US11945873B2 (en) 2024-04-02
WO2020006511A1 (en) 2020-01-02
US20200002417A1 (en) 2020-01-02
WO2020006516A1 (en) 2020-01-02
US20200277388A1 (en) 2020-09-03
US20200002426A1 (en) 2020-01-02
EP3813880A4 (en) 2022-07-13
US11851493B2 (en) 2023-12-26
US11001635B2 (en) 2021-05-11
US10647773B2 (en) 2020-05-12
US20210246214A1 (en) 2021-08-12
US10597453B2 (en) 2020-03-24
US20230331857A1 (en) 2023-10-19
EP3813880A1 (en) 2021-05-05
CN112638401A (zh) 2021-04-09
JP2021529557A (ja) 2021-11-04
US20200002439A1 (en) 2020-01-02
WO2020006509A1 (en) 2020-01-02
EP3814381A1 (en) 2021-05-05
CN113056285A (zh) 2021-06-29
JP2021532170A (ja) 2021-11-25
JP2021529556A (ja) 2021-11-04
CN112739717A (zh) 2021-04-30
AU2019293047A1 (en) 2021-01-28
EP3813864A1 (en) 2021-05-05
BR112020026862A2 (pt) 2021-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11667716B2 (en) Bispecific antagonist comprising a LAG-3 binding domain
US11517623B2 (en) Anti-PD-1 antibodies, antigen-binding portions thereof and checkpoint regulator antogonists comprising the same
US12018073B2 (en) Antagonists targeting the TGF-β pathway
CN114340735B (zh) 突变的TGFβ1-RII胞外域和免疫球蛋白支架组成的抗肿瘤拮抗剂
CN112638401B (zh) 抗肿瘤拮抗剂
EA045974B1 (ru) Противоопухолевые антагонисты регуляторов иммунных контрольных точек