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KR20190082815A - 중화 항-tl1a 단일 클론 항체 - Google Patents

중화 항-tl1a 단일 클론 항체 Download PDF

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KR20190082815A
KR20190082815A KR1020197015021A KR20197015021A KR20190082815A KR 20190082815 A KR20190082815 A KR 20190082815A KR 1020197015021 A KR1020197015021 A KR 1020197015021A KR 20197015021 A KR20197015021 A KR 20197015021A KR 20190082815 A KR20190082815 A KR 20190082815A
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KR
South Korea
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antibody
seq
tl1a
ser
subject
Prior art date
Application number
KR1020197015021A
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Inventor
재닌 빌스보러
스테판 타건
브래들리 헨클
Original Assignee
세다르스-신나이 메디칼 센터
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Publication date
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Abstract

본원에서는 염증성 장 질환(IBD), 크론병(CD), 궤양성 대장염(UC) 및 의학적 불응성 궤양성 대장염(MR-UC)의 치료를 위한 방법 및 약학 조성물이 기술된다. 특히, 본 출원에서 IBD의 치료에 유용한 항-TL1A 항체가 개시된다.

Description

중화 항-TL1A 단일 클론 항체
상호 참조
본 출원은 2016년 10월 26일에 제출된 미국 가출원 제62/413,188호를 우선권으로 주장하며, 상기 가출원은 그 전체가 본원에 참고로 인용된다.
서열목록
본 출원은, ASCII 포맷으로 전자적으로 제출되고 그 전체가 본원에 참고로 인용된 서열목록을 포함한다. 상기 ASCII 사본은 2017년 10월 23일에 생성되었고, 52388-728_601_SL.txt로 명명되며, 크기가 33,920 바이트이다.
염증성 장 질환(IBD)은 위장관에서 염증성 병태를 유발하는 장 질환의 집합을 지칭한다. IBD의 주요 유형은 궤양성 대장염(UC) 및 크론병(CD)이다. 이들 질병은 만연하고 있으며, 전 세계적으로 UC로 진단된 사람은 약 18억 6천만명이고, 전 세계적으로 CD로 진단된 사람은 약 130만명이다. 불행하게도, IBD 환자에 가용인 치료법은 제한되어 있고, 새로운 치료제의 개발은 임상시험에서의 차선의 결과로 인해 방해받고 있다. 따라서, IBD를 치료하기 위한 신규한 치료제에 대한 필요성이 존재한다.
본 개시내용은 IBD의 치료에 유용한 항체를 제공한다. 한 관점에서, TL1A 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이 제공된다. 몇몇 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 6-8의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 14-16의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 22-24의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30-32의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 단일 클론 항체, 키메라 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 결합된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디, 다중 특이성 항체, 이중 특이적(dual specific) 항체, 항-유전자형 항체, 이중 특이성(bispecific) 항체, 또는 이들의 조합이다. 추가의 실시양태는 치료 유효량의 항체 또는 항원 결합 단편, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 추가의 실시양태는 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 치료 유효량의 항체 또는 항원 결합 단편을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시양태에서 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 의학적 불응성 궤양성 대장염, 또는 이들의 조합을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 대상체에게 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하기 이전에, 상기 대상체는 TL1A를 과발현한다. 몇몇 실시양태에서, 대상체는 염증성 장 질환과 관련된 위험 변이체를 포함한다.
다른 관점에서, 본 출원에서 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 30, 서열번호 31, 및 서열번호 32로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 상보성 결정 영역을 포함하는 폴리펩티드가 제공된다.
다른 관점에서, 본 출원에서 서열번호 6-8의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 14-16의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄를 포함하는 참조 항체와 동일한 인간 TL1A의 영역에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이 제공된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 참조 항체는 서열번호 5의 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 13의 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 단일 클론 항체, 키메라 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 결합된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디, 다중 특이성 항체, 이중 특이적 항체, 항-유전자형 항체, 이중 특이성 항체, 또는 이들의 조합이다. 추가의 실시양태는 치료 유효량의 항체 또는 항원 결합 단편 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 추가의 실시양태는 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법이 제공되는데, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료 유효량의 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 염증성 잘 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 의학적 불응성 궤양성 대장염, 또는 이들의 조합을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 대상체에게 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하기 이전에, 상기 대상체는 TL1A를 과발현한다. 몇몇 실시양태에서, 대상체는 염증성 장 질환과 관련된 위험 변이체를 포함한다.
다른 관점에서, 본 출원에서 서열번호 22-24의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 30-32의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 참조 항체와 동일한 인간 TL1A의 영역에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이 제공된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 참조 항체는 서열번호 21의 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 29의 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 단일 클론 항체, 키메라 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 결합된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디, 다중 특이성 항체, 이중 특이적 항체, 항-유전자형 항체, 이중 특이성 항체, 또는 이들의 조합이다. 추가의 실시양태는 치료 유효량의 항체 또는 항원 결합 단편 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 추가의 실시양태는 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법이 제공되는데, 상기 방법은 상기 대상체에게 치료 유효량의 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 염증성 잘 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 의학적 불응성 궤양성 대장염, 또는 이들의 조합을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 대상체에게 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하기 이전에, 상기 대상체는 TL1A를 과발현한다. 몇몇 실시양태에서, 대상체는 염증성 장 질환과 관련된 위험 변이체를 포함한다.
다른 관점에서, 본 출원에서 서열번호 7을 갖는 펩티드를 포함하는 조성물이 제공된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 조성물은 서열번호 6, 8, 및 14-16으로부터 선택되는 하나 이상의 펩티드를 추가로 포함한다. 추가의 실시양태는 염증성 장 질환을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 상기 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 관점에서, 본 출원에서 서열번호 23을 갖는 펩티드를 포함하는 조성물이 제공된다. 몇몇 실시양태에서, 상기 조성물은 서열번호 22, 24, 및 30-32로부터 선택되는 하나 이상의 펩티드를 추가로 포함한다. 추가의 실시양태는 염증성 장 질환을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 상기 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 관점에서, 본 출원에서는 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법이 제공되는데, 상기 방법은 유효량의 항-TL1A 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하나, 상기 대상체는 TNFSF15 유전자좌에서 하나 이상의 위험 변이체를 포함하고, 항-TL1A 항체는 서열번호 6-8의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 14-16의 상보성 결정 영역(CDR)을 보유하는 경쇄를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 단일 클론 항체, 키메라 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 결합된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디, 다중 특이성 항체, 이중 특이적 항체, 항-유전자형 항체, 이중 특이성 항체, 또는 이들의 조합이다. 몇몇 실시양태에서, 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 의학적 불응성 궤양성 대장염, 또는 이들의 조합을 포함한다.
다른 관점에서, 본 출원에서는 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법이 제공되는데, 상기 방법은 유효량의 항-TL1A 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하나, 상기 대상체는 TNFSF15 유전자좌에서 하나 이상의 위험 변이체를 포함하고, 항-TL1A 항체는 서열번호 22-24의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30-32의 상보성 결정 영역(CDR)을 보유하는 경쇄를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 단일 클론 항체, 키메라 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 결합된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디, 다중 특이성 항체, 이중 특이적 항체, 항-유전자형 항체, 이중 특이성 항체, 또는 이들의 조합이다. 몇몇 실시양태에서, 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 의학적 불응성 궤양성 대장염, 또는 이들의 조합을 포함한다.
다른 관점에서, 본 출원에서는 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법이 제공되는데, 상기 방법은 유효량의 항-TL1A 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하나, 상기 대상체는 TL1A를 과발현하고, 및 항-TL1A 항체는 서열번호 6-8의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 14-16의 상보성 결정 영역(CDR)을 보유하는 경쇄를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 단일 클론 항체, 키메라 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 결합된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디, 다중 특이성 항체, 이중 특이적 항체, 항-유전자형 항체, 이중 특이성 항체, 또는 이들의 조합이다. 몇몇 실시양태에서, 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 의학적 불응성 궤양성 대장염, 또는 이들의 조합을 포함한다.
다른 관점에서, 본 출원에서는 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법이 제공되는데, 상기 방법은 유효량의 항-TL1A 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하나, 상기 대상체는 TL1A를 과발현하고, 및 항-TL1A 항체는 서열번호 22-24의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30-32의 상보성 결정 영역(CDR)을 보유하는 경쇄를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 단일 클론 항체, 키메라 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, a Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 결합된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디, 다중 특이성 항체, 이중 특이적 항체, 항-유전자형 항체, 이중 특이성 항체, 또는 이들의 조합이다. 몇몇 실시양태에서, 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 의학적 불응성 궤양성 대장염, 또는 이들의 조합을 포함한다.
예시적인 실시양태가 참조 도면에서 예시된다. 본 출원에 개시된 실시양태 및 도면은 제한적이라기 보다는 예시적인 것으로 여겨질 수 있다.
도 1은 하이브리도마 684842-3(5C3D11) 유래의 총 RNA의 아가로즈 겔 전기영동을 나타낸다. DNA 마커인 마커 III는 M 레인에 나타내고, 684842-3의 총 RNA는 R 레인에 나타낸다.
도 2는 684842-3의 PCR 생성물의 아가로즈 겔 전기영동을 나타낸다. DNA 마커인 마커 III는 M 레인에 나타내고, 684842-3의 가변 중쇄(VH)는 1 레인에 나타내고, 684842-3의 가변 경쇄(VL)는 2 레인에 나타낸다.
도 3은 하이브리도마 684842-6(9E12E5) 유래의 총 RNA의 아가로즈 겔 전기영동을 나타낸다. DNA 마커인 마커 III는 M 레인에 나타내고, 684842-6의 총 RNA는 R 레인에 나타낸다.
도 4는 684842-6의 PCR 생성물의 아가로즈 겔 전기영동을 나타낸다. DNA 마커인 마커 III는 M 레인에 나타내고, 684842-6의 가변 중쇄(VH)는 1 레인에 나타내고, 684842-6의 가변 경쇄(VL)는 2 레인에 나타낸다.
도 5는 9E12E5(패널 A) 및 5C3D11(패널 B)에 의한 인간 TL1A 유도된 IFN-γ 생성의 억제를 나타낸다.
도 6은 뮤린 TL1A에 대한 5C3D11(패널 A) 및 9E12E5(패널 B)의 인식 능력을 나타낸다.
도 7은 형질감염되지 않은 HEK293 세포주와 비교하여 TL1A 발현 HEK293 세포주에 대한 5C3D11(패널 A) 및 9E12E5(패널 B) 항-TL1A 항체의 형광 염색을 나타내는 히스토그램 그래프이다.
종양 괴사 인자 유사 단백질 1A(TL1A)는 중증 대장염 및 크론병의 발생 및 중증도와 관련되어 있다. 또한, 전임상 및 인간 유전 관련 데이터는 TL1A는 크론병의 잠재적인 치료 타겟임을 제안한다. 본 발명은 TL1A에 대한 중화 항체를 기재하고, IBD의 치료를 위한 신규한 치료제를 제안한다.
본원에 인용된 모든 참고문헌은 전체적으로 기재된 바와 같이 전적으로 참고로 인용된다. 달리 언급하지 않으면, 본 출원에 사용된 기술적인 및 과학적인 용어는 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미이다. 문헌[참조: Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3 rd ed., Revised, J. Wiley & Sons(New York, NY 2006); 및 Sambrook 및 Russel, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 4 th ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press(Cold Spring Harbor, NY 2012)]은 통상의 기술자에게 본 출원에 사용된 다수의 용어에 대한 일반적인 지침을 제공한다. 항체를 어떻게 제조하는가에 대한 참고로서 문헌[참조: D. Lane, Antibodies: A Laboratory Manual 2 nd ed. (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor NY, 2013); Kohler 및 Milstein, (1976) Eur. J. Immunol. 6: 511; Queen et al. 미국 특허 5,585,089; 및 Riechmann et al., Nature 332: 323 (1988); 미국 특허 4,946,778; Bird, Science 242:423-42 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988); Ward et al., Nature 334:544-54 (1989); Tomlinson I. 및 Holliger P. (2000) Methods Enzymol, 326, 461-479; Holliger P. (2005) Nat. Biotechnol. Sep;23 (9):1126-36)]을 참고할 수 있다.
통상의 기술자는 본 출원에 기재된 실시양태를 실시하기 위해 사용될 수 있는, 본 출원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 다수의 방법 및 재료를 인식할 것이다. 실제로, 본 명세서는 기재된 방법 및 재료로 제한되지 않는다. 선택된 용어의 비제한적인 정의를 후술한다.
"IBD"는 염증성 장 질환을 의미하고, 제한 없이, 크론병, 궤양성 대장염 및 의학적 불응성 궤양성 대장염을 포함한다.
"CD", "UC", 및 "MR-UC"는 각각 크론병, 궤양성 대장염 및 의학적 불응성 궤양성 대장염을 의미한다.
"TL1A"은 TNF 유사 단백질 1A를 의미한다.
"TNFSF15"는 종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 멤버 15를 의미하고, 종종 TL1A와 상호 교환가능하다.
"SNP"는 단일 뉴클레오티드 다형성을 의미한다.
"위험 변이체" 및 "위험 대립유전자"는, 위험 변이체 또는 위험 대립유전자를 보유하지 않는 대상체에 대해, 그의 존재가 염증성 장 질환에 대한 민감성의 증가와 관련되는 대립유전자를 의미하는데, 이때 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 및 의학적 불응성 궤양성 대장염을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.
"보호성 변이체" 및 "보호성 대립유전자"는, 보호성 변이체 또는 보호성 대립유전자를 보유하지 않는 대상체에 대해, 그의 존재가 염증성 장 질환의 감소된 가능성과 관련되는 대립유전자를 의미하는데, 이때 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 및 의학적 불응성 궤양성 대장염을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 보호성 변이체는 염증성 장 질환으로 진단된 대상체에 비해 건강한 대상체에 더 빈번하게 존재한다.
특정의 특이적인 변이체 또는 대립유전자와 관련하여 사용된 바와 같이 "보호성" 및 "보호"는 CD, UC, 및 MR-UC를 포함하나 이들로 제한되지 않는 IBD에 대한 민감성의 감소를 의미한다.
특이적인 변이체 또는 대립유전자의 존재와 관련되어 사용된 바와 같이 "위험"은 CD, UC, 및 MR-UC를 포함하나 이들로 제한되지 않는 IBD에 대한 민감성의 증가를 의미한다.
"생물학적 샘플"은 핵산 및/또는 단백질 분자가 확인될 수 있는 임의의 생물학적 물질을 의미한다. 비제한적인 예로서, 상기 물질은 전혈, 혈장, 혈청, 타액, 구강 스왑, 및 임의의 다른 체액 또는 조직을 포함한다.
"IC"는 면역 복합체를 의미한다.
"PBMC"는 말초 혈액 단핵 세포를 의미한다.
"항-TL1A 치료법"은 TL1A에 대한 반응을 억제하고/하거나 TL1A 신호전달을 억제하는 임의의 제제를 의미하는데, TL1A 신호전달의 억제는 제한 없이 다양한 상류 및/또는 하류 분자 타겟에 대한 그의 수용체를 통한 TL1A 리간드로부터의 임의의 분자 신호전달 단계의 억제를 포함한다. 항-TL1A 치료법은 소분자; 핵산, 예를 들어 siRNA, shRNA, 및 miRNA; 핵산 유사체, 예를 들어 PNA, pc-PNA, 및 LNA; 압타머; 리보좀; 펩티드; 단백질; 아비머; 항체, 또는 이의 변이체 및 단편; 및/또는 이의 임의의 조합의 사용을 포함할 수 있다.
용어 "항체"는 면역글로불린 분자의 가변부 내의 적어도 하나의 항원 인식 부위를 통해 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 또는 이들의 조합과 같은 타겟을 인식하고, 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자를 의미한다. 본 출원에 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 온전한 폴리클로날 항체, 온전한 단일 클론 항체, 항체 단편(예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편), 단일 사슬 Fv(scFv) 돌연변이체, CDR 이식 항체, 다중특이적 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 및 항체의 항원 결정 부위를 포함하는 융합 단백질, 및 항체가 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 개질된 면역글로불린 분자를 포함한다. 항체는 임의의 5종류의 중요한 면역글로불린 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 또는 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마, 및 뮤로서 언급되는 그들의 중쇄 불변부의 아이덴티티에 기초하는, 이의 서브클래스(아이소타입)(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)일 수 있다. 상이한 클래스의 면역글로불린은 상이하고, 널리 알려진 서브유닛 구조 및 3차원 배치를 보유한다. 항체는 네이키드일 수 있거나, 또는 독소, 방사성 동위원소 등과 같은 다른 분자에 접합될 수도 있다.
용어 "항체 단편"은 항체의 항원 결정 가변부를 보유하는 항체의 일부분을 의미하는 "항원 결합 단편"을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 선형 항체, 단일쇄 항체, 및 항체 단편으로 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
용어 "단일 클론 항체"는 단일 항원결정기 또는 에피토프의 매우 특이적인 인식 및 결합에 관련된 균질한 항체 집단을 의미한다. 이는 상이한 항원결정기에 대해 유도된 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 폴리클로날 항체와 대조적이다.
용어 "인간화 항체"는 특이적인 면역글로불린 사슬을 보유하는 비인간(예를 들어, 뮤린) 항체, 키메라 면역글로불린, 또는 최소 비인간(예를 들어, 뮤린) 서열을 함유하는 이의 단편의 형태를 의미한다. 예를 들어, 인간화 항체는 가변부 내에서 약 40% 미만의 비인간 서열을 포함한다. 몇몇 경우에서, 인간화 항체는 전장 항체 서열 내에서 약 20% 미만의 비인간 서열을 포함한다. 몇몇 경우에서, 인간화 항체는 상보성 결정 영역(CDR)이 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 보유하는 비인간 종(예를 들어, 마우스, 래트, 래빗, 햄스터)의 CDR 유래의 잔기로 치환된 인간 면역글로불린이다(Jones et al., 1986, Nature, 321:522-525; Riechmann et al., 1988, Nature, 332:323-327; Verhoeyen et al., 1988, Science, 239:1534-1536). 인간화 항체를 생성하기 위해 사용된 방법의 예는 미국 특허 5,225,539에 기재되어 있다.
용어 "인간 항체"는 인간에 의해 생성된 항체 또는 당해 기술분야에 공지된 임의의 기법으로 제조된, 인간에 의해 생성된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 항체를 의미한다. 인간 항체의 정의는 온전한 또는 전장 항체, 이의 단편, 및/또는 적어도 하나의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩티드, 예를 들어 인간 경쇄 및 인간 중쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함한다.
용어 "키메라 항체"는, 면역글로불린 분자의 서열이 2개 이상의 종으로부터 유도된 항체를 의미한다. 전형적으로, 경쇄 및 중쇄 둘 다의 가변부는 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 가진 포유동물(예를 들어, 마우스, 래트, 래빗 등)의 한 종으로부터 유도되는 한편, 불변부는 그 종 내에서 면역 반응의 유발을 피하는 다른 종(일반적으로 인간)으로부터 유도된 항체내의 서열과 상동성이다.
각각의 중쇄 및 경쇄는 상기 중쇄 또는 경쇄의 "가변부" 및 상기 중쇄 또는 경쇄의 "불변부"로 구성된다. 중쇄 및 경쇄 영역은 상보성 결정 영역(CDR)으로 언급되고, 프레임웍 영역(FR)으로 언급되는 보존 영역에 산재되는 초가변부로 추가로 구분될 수 있다. 따라서, 각각의 중쇄 및 경쇄 영역은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되는데, 이들은 하기 순서에 따라 N 말단으로부터 C 말단으로 정렬된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 이 구조는 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 알려져 있다.
본 출원에 사용된 바와 같이, 용어 "CDR"은 항체 가변 서열 내의 상보성 결정 영역을 의미하고, 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. CDR을 결정하기 위한 기법은 당해 기술분야에 공지되어 있다(예를 들어, Kabat et al. Sequence of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.; 및 Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948).
"보존적 아미노산 치환"은 하나의 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 보유하는 다른 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 보유하는 아미노산 잔기의 패밀리는 당해 기술분야에 정의되어 있고, 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 타이로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 루신, 이소루신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지된 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소루신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함한다. 예를 들어, 티로신의 페닐알라닌으로의 치환은 보존적 치환이다. 항원 결합을 제거하지 않는 뉴클레오티드 및 아미노산 보존적 치환을 확인하는 방법은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다(참조: 예를 들어, Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1 187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999); 및 Burks et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)).
단백질에 "특이적으로 결합하는" 항체는, 관련되지 않은 단백질을 포함하는 대안적인 물질보다 더 빈번하게, 더 신속하게, 더 큰 지속기간으로, 더 큰 친화도로, 또는 상기의 몇몇 조합으로 항체가 단백질에 반응하거나 연관되는 것을 의미한다. 상이한 종에서 상동성 단백질 사이의 서열 동일성 때문에, 특이적인 결합은 하나를 초과하는 종에서 TL11A와 같은 특정 단백질을 인식하는 항체를 포함할 수 있다. 항체는 특정 실시양태에서 항체 상의 동일한 항원 결합 부위에 의해 결합된 다중 타겟에 결합하거나, 또는 이중 특이성으로 및 상이한 특이성으로 적어도 2개의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 본 출원에서 상호 교환가능하게 사용되고, 임의 길이의 아미노산의 중합체를 의미한다. 중합체는 선형이거나 분지형일 수 있고, 변경된 아미노산을 포함할 수 있고, 비-아미노산이 개입될 수 있다. 또한, 상기 용어는 자연적으로 또는 개재에 의해 변형된, 예를 들어 이황화 결합 형성, 당화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예를 들어 다른 폴리펩티드, 예를 들어 표지화 성분과의 융합 및/또는 접합된 아미노산 중합체를 포함한다. 또한, 상기 정의 내에는 예를 들어, 하나 이상의 아미노산의 유사체(예를 들어, 비천연 아미노산 등)뿐만 아니라 당해 기술분야에 공지된 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드가 포함된다.
본 출원에서 상호 교환가능하게 사용된 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 임의 길이의 뉴클레오티드의 중합체를 의미하고, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 그들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라아제에 의해 중합체 내로 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 메틸화된 뉴클레오티드 및 그들의 유사체 또는 비뉴클레오티드 성분을 예로 들 수 있으나, 이들로 제한되지 않는 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드 구조의 변형은 중합체의 어셈블리 이전 또는 이후에 부여될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 중합 이후, 예를 들어 표지화 성분과의 접합에 의해 추가로 변형될 수 있다.
용어 "벡터"는 숙주 세포 내로 전달될 수 있고, 바람직하게는 숙주 세포 내에서 관심 있는 하나 이상의 유전자(들) 및/또는 서열(들)을 발현할 수 있는 구성체를 의미한다. 벡터의 예는 바이러스 벡터, 네이키드 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 플라스미드, 코스미드 또는 파지 벡터, 양이온 축합제와 결합된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 리포좀 내에 캡슐화된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 및 프로듀서 세포와 같은 특정 진핵세포를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
"단리된" 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포, 또는 조성물은 자연적으로 발견되지 않는 형태인 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포, 또는 조성물이다. 단리된 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포, 또는 조성물은 그들이 자연적으로 발견되는 형태로 더 이상 존재하지 않는 정도로 정제된 것을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 단리된 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포, 또는 조성물은 실질적으로 순수하다. 몇몇 경우에서, "실질적으로 순수한"은 적어도 50% 순수한(즉, 오염물이 없는), 적어도 90% 순수한, 적어도 95% 순수한, 적어도 98% 순수한, 또는 적어도 99% 순수한 물질을 의미한다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드의 컨텍스트에서 용어 "동일한" 또는 "동일성" 퍼센트는, 최대 상응도에 대해 비교 및 정렬되는 경우, 동일하거나, 또는 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산의 명시된 퍼센트를 보유하는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 의미한다. 동일성 퍼센트는 서열 비교 소프트웨어 또는 알고리즘, 또는 육안 검사에 의해 측정할 수 있다. 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 정렬을 획득하기 위해 사용될 수 있는 여러 가지 알고리즘 및 소프트웨어가 당해 기술분야에 공지되어 있다. 그러한 알고리즘/소프트웨어 프로그램은 NBLAST, XBLAST, 갭트(Gapped) BLAST, BLAST-2, WU-BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 또는 메가얼라인(DNASTAR)을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
"치료하는" 또는 "치료" 또는 "치료하기 위한" 또는 "경감하는" 또는 "경감하기 위한"과 같은 용어는 치료적 처리 및/또는 예방적(prophylactic 또는 preventative) 조치를 의미하는데, 이때 목적은 타겟으로 하는 병리학적 상태를 예방 또는 둔화(감소)시키거나, 병리학적 상태를 예방하거나, 양호한 전체적인 생존을 추구 또는 획득하거나, 또는 치료가 궁극적으로 성공하지 못하는 경우에도, 상기 상태를 발생시키는 대상체의 기회를 낮추는 것을 의미한다. 따라서, 치료가 필요한 대상체는 이미 질환을 갖는 대상체; 질환을 보유할 경향이 있는 대상체; 및 질환이 예방되어야 하는 대상체를 포함한다.
용어 "대상체"는 비인간 영장류, 설치류 및 가축과 게임 동물을 포함하나 이들로 제한되지 않는 임의의 동물(예를 들어, 포유동물)을 의미하고, 이들은 특정 치료의 수용자일 수 있다. 영장류는 침팬지, 시노몰로구스 원숭이, 스파이더 원숭이, 및 마카크, 예를 들어 레서스를 포함한다. 설치류는 마우스, 래트, 우드척, 페렛, 래빗 및 햄스터를 포함한다. 가축 및 게임 동물은 소, 말, 돼지, 사슴, 들소, 버팔로, 고양이 종, 예를 들어 집 고양이, 개 종, 예를 들어 개, 여우, 늑대, 조류 종, 예를 들어 닭, 에뮤, 타조, 및 어류, 예를 들어 송어, 메기 및 연어를 포함한다. 전형적으로, 용어 "대상체" 및 "환자"는 본 출원에서 인간 대상체에 관하여 상호 교환가능하게 사용된다. 다양한 실시양태에서, 대상체는 치료가 필요한 병태를 앓고 있거나 보유하는 것으로 이전에 진단되거나 또는 확인된 것일 수 있다. 여러 가지 다른 실시양태에서, 병태를 앓고 있거나 또는 보유하는 것으로 이전에 진단되거나 또는 확인된 대상체는 병태를 위한 치료를 받고 있거나 또는 받고 있지 않을 수 있다. 다른 실시양태에서, 또한 대상체는 병태를 보유하는 것으로 이전에 진단되지 않은 대상체(즉, 병태에 대한 하나 이상의 위험 인자를 나타내는 대상체)일 수 있다. 특정 병태에 대해 치료가 "필요한 대상체"는 그 병태를 보유하는 대상체, 그 병태를 보유하는 것으로 진단되거나, 또는 그 병태를 발생시킬 위험이 있는 대상체일 수 있다.
용어 "치료 유효량"은 대상체 또는 포유동물에서 질병 또는 질환을 "치료"하기에 효과적인 항체, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 유기 저분자, 또는 다른 약물의 양을 의미한다. 몇몇 경우에, 치료 유효량의 약물은 CD 및 UC/MR-UC 증상을 포함하는 IBD 증상의 중증도를 감소시킨다. 이들은 설사, 발열, 피로, 복통, 복부 경련, 궤양, 욕지기, 구토, 출혈, 혈변, 식욕 감퇴, 체중 손실 및 이들의 조합을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
한 관점에서, 본 발명은 2개의 중화 항-인간 TL1A 단일 클론 항체 및 5개의 중화 인간화 항-인간 TL1A 단일 클론 항체의 동정을 기재한다. 이들 항체는 시험관 내에서 TL1A의 활성을 중화하고, 가용성 및 막 결합 TL1A 둘 다를 인식한다.
TL1A(TNFSF15)는 주로 내피세포, 대식세포 및 수지상 세포(DC)에 의해 발현되는 TNF 패밀리 멤버이다. 그의 발현은 면역 복합체(IC) 및 사이토카인에 의해 유도된다. TL1A 수용체 DR3는 주로 T 세포 및 NKT 세포에 의해 발현된다. 시험관 내에서, TL1A는 인간 및 마우스 T 세포 증식 및 사이토카인 생성 둘 다를 증강시키는 것으로 확인되었다. 시험관 내에서, TL1A 트랜스제닉 마우스는 인간 크론병과 유사한 IBD 표현형을 발생한다. 또한, 재조합 TL1A 단백질의 치료는 mdr1-/- 마우스에서 대장염을 악화시킨다.
본 발명은 IBD, CD, UC 및 MR-UC를 치료하기 위해 유용한 중화 항-TL1A 단일 클론 항체를 제공한다. 몇몇 경우에서, 이들 항-TL1A 항체는 특이적인 염증성 잘 질환(IBD)을 치료하기 위해 사용된다. 또한, 관련된 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드, 항-TL1A 항체를 포함하는 조성물, 및 항-TL1A 항체를 제조하는 방법이 제공된다. 또한, 치료를 위해 신규한 항-TL1A 항체를 사용하는 방법도 제공된다.
항- TL1A 항체
다양한 실시양태는 가용성 TL1A에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 막 결합된 TL1A에 특이적으로 결합한다. TL1A 항체 "5C3D11"의 전장 아미노산(aa) 서열은 표 1에 나타낸 바와 같이 서열번호 5(중쇄) 및 서열번호 13(경쇄)을 포함한다. 다양한 실시양태에서, TL1A 항체는 서열번호 5 및 서열번호 13을 포함한다. 단량체성 TL1A 항체 서열번호 5 및 서열번호 13의 2개의 예를 포함한다. 다양한 실시양태에서, TL1A 항체는 표 1에 나타낸 바와 같이, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 14, 서열번호 15 및 서열번호 16을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, TL1A 항체는 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 14, 서열번호 15 및 서열번호 16의 적어도 하나 또는 임의의 조합을 포함한다.
TL1A 항체 "5C3D11"에 대한 전장 뉴클레오티드(nt) 서열은 서열번호 1(중쇄) 및 서열번호 9(경쇄)를 포함하는 핵산 서열에 의해 코딩된다. 다양한 실시양태에서, TL1A 항체는 표 1에 나타낸 바와 같이, 서열번호 1 및 서열번호 9를 포함하는 핵산 서열에 의해 코딩된다. 단량체성 TL1A 항체는 서열번호 1 및 서열번호 9를 포함하는 핵산 서열의 2개의 예에 의해 코딩된다. 다양한 실시양태에서, TL1A 항체는 표 1에 나타낸 바와 같이, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12를 포함하는 핵산 서열에 의해 코딩된다. 몇몇 실시양태에서, TL1A 항체는 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12를 포함하는 핵산 서열 중 적어도 하나 또는 이들의 조합에 의해 코딩된다.
TL1A 항체 "9E12E5"에 대한 전장 아미노산(aa) 서열은 표 1에 나타낸 바와 같이, 서열번호 21(중쇄) 및 서열번호 29(경쇄)를 포함한다. 다양한 실시양태에서, TL1A 항체는 서열번호 21 및 서열번호 29를 포함한다. 단량체성 TL1A 항체는 서열번호 21 및 서열번호 29의 2개의 예를 포함한다. 다양한 실시양태에서, TL1A 항체는 표 1에 나타낸 바와 같이, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 30, 서열번호 31 및 서열번호 32를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, TL1A 항체는 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 30, 서열번호 31 및 서열번호 32 중 적어도 하나 또는 임의의 조합을 포함한다.
TL1A 항체 "9E12E5"에 대한 전장 뉴클레오티드(nt) 서열은 표 1에 나타낸 바와 같이, 서열번호 17(TL1A 중쇄) 및 서열번호 25(TL1A 경쇄)를 포함하는 핵산 서열에 의해 코딩된다. 다양한 실시양태에서, TL1A 항체는 서열번호 17 및 서열번호 25를 포함하는 핵산 서열에 의해 코딩된다. 단량체성 TL1A 항체는 서열번호 17 및 서열번호 25를 포함하는 핵산 서열의 2개의 예에 의해 코딩된다. 다양한 실시양태에서, TL1A 항체는 표 1에 나타낸 바와 같이, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 26, 서열번호 27 및 서열번호 28을 포함하는 핵산 서열에 의해 코딩된다. 몇몇 실시양태에서, TL1A 항체는 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 26, 서열번호 27 및 서열번호 28을 포함하는 핵산 서열의 적어도 하나 또는 임의의 조합에 의해 코딩된다.
[표 1]
5C3D11 및 9E12E5에 대한 뉴클레오티드 및 아미노산 서열.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
다양한 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 TL1A의 동일한 영역에 특이적으로 결합하거나, 또는 서열번호 1에 의해 코딩된 중쇄 가변부 및 서열번호 9에 의해 코딩된 경쇄 가변부를 포함하는 항체가 특이적으로 결합하는 TL1A의 영역과 중첩되는 TL1A의 영역에 특이적으로 결합한다. 다양한 다른 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 TL1A의 동일한 영역에 특이적으로 결합하거나, 또는 서열번호 5의 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 13의 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 특이적으로 결합하는 TL1A의 영역과 중첩되는 TL1A의 영역에 특이적으로 결합한다. 다른 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 TL1A의 동일한 영역에 특이적으로 결합하거나, 또는 서열번호 17에 의해 코딩된 중쇄 가변부 및 서열번호 25에 의해 코딩된 경쇄 가변부를 포함하는 항체가 특이적으로 결합하는 TL1A의 영역과 중첩되는 TL1A의 영역에 특이적으로 결합한다. 특정의 다른 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 TL1A의 동일한 영역에 특이적으로 결합하거나, 또는 서열번호 21을 포함하는 중쇄 및 서열번호 29를 포함하는 경쇄를 포함하는 항체가 특이적으로 결합하는 TL1A의 영역과 중첩되는 TL1A의 영역에 특이적으로 결합한다.
추가의 실시양태는 5C3D11 및/또는 9E12E5의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및/또는 12개의 CDR을 포함하는 TL1A에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하나, 이들로 제한되지 않는 폴리펩티드를 제공한다(참조: 표 1, 및 하기 실시예 1 및 2의 표 2 및 3). 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 5C3D11의 중쇄 CDR(서열번호 6, 7, 및 8) 및/또는 9E12E5의 중쇄 CDR(서열번호 22, 23, 및 24), 5C3D11의 경쇄 CDR(서열번호 14, 15, 및 16) 및/또는 9E12E5의 경쇄 CDR(서열번호 30, 31, 및 32), 또는 이들의 조합을 포함한다. 특정의 다른 실시양태에서, 중쇄 CDR(들)은 중쇄 가변부 내에 함유되고/되거나 경쇄 CDR(들)은 경쇄 가변부 내에 함유된다. 몇몇 실시양태에서, 본 출원에 기재된 개개의 경쇄 또는 중쇄뿐만 아니라 경쇄 및 중쇄 둘 다를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, 항체)를 포함하는 폴리펩티드가 제공된다. 몇몇 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 5C3D11의 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 다른 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 9E12E5의 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-TL1A 항체 내의 각각의 CDR은 CDR당 4개 이하(즉, 0, 1, 2, 3, 또는 4개)의 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 항-TL1A 항체 또는 단편은 TL1A에 대해 적어도 약 1E-7, 1E-8, 1E-9, 1E-10, 또는 1E-11의 결합 친화도를 보유한다. 몇몇 경우에서, 결합 친화도는 약 1E-9 내지 약 1E-11이다. 예를 들어, 몇몇 경우에서 결합 친화도는 약 7.90E-11이다. 다양한 실시양태에서, 항-TL1A 항체 또는 단편은 TL1A에 대해 약 7.90E-9 내지 약 7.90E-10의 결합 친화도를 보유한다. 다양한 실시양태에서, 항-TL1A 항체 또는 단편은 TL1A에 대해 약 7.90E-10 내지 약 7.90E-12의 결합 친화도를 보유한다. 다양한 실시양태에서, 항-TL1A 항체 또는 단편은 TL1A에 대해 약 7.90E-12 내지 약 7.90E-13의 결합 친화도를 보유한다.
다양한 실시양태에서, 항-TL1A 항체 또는 단편은 TL1A에 대해 약 5.20E-11의 결합 친화도를 보유한다. 다양한 실시양태에서, 항-TL1A 항체 또는 단편은 TL1A에 대해 약 5.20E-9 내지 약 5.20E-10의 결합 친화도를 보유한다. 다양한 실시양태에서, 항-TL1A 항체 또는 단편은 TL1A에 대해 약 5.20E-10 내지 5.20E-12의 결합 친화도를 보유한다. 다양한 실시양태에서, 항-TL1A 항체 또는 단편은 TL1A에 대해 약 5.20E-12 내지 5.20E-13의 결합 친화도를 보유한다.
다양한 실시양태는 참조 항체와 TL1A 단백질의 동일한 영역에 결합하는 항-TL1A 항체 또는 이의 일부분, 예를 들어 본 출원에 기재된 항-TL1A 항체를 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 참조 항체는 서열번호 6-8의 중쇄 CDR 및 서열번호 14-16의 경쇄 CDR을 포함한다. 몇몇 경우에서, 참조 항체는 서열번호 5의 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 13의 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 참조 항체는 서열번호 22-24의 중쇄 CDR 및 서열번호 30-32의 경쇄 CDR을 포함한다. 몇몇 경우에서, 참조 항체는 서열번호 21의 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 29의 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 경우에서, 참조 항체는 5C3D11이다. 몇몇 경우에서, 참조 항체는 9E12E5이다.
항-TL1A 항체(즉, 테스트 항체)가 본 출원에 기재된 항체와 TL1A 단백질의 동일한 영역 또는 이의 일부분에 결합하는지 여부를 결정하기 위한 비제한적인 방법이 본 출원에 기재된다. 예시적인 실시양태는 경쟁 분석을 포함한다. 예를 들어, 상기 방법은 테스트 항체가 참조 항체 및 TL1A 단백질 또는 이의 일부분과 경쟁할 수 있는지 여부를 결정하는 것, 또는 참조 항체가 테스트 항체 및 TL1A 단백질 또는 이의 일부분 사이의 결합과 경쟁하는지 여부를 결정하는 것을 포함한다. 예시적인 방법은 항-TL1A 항체가 TL1A 및 다른 항-TL1A 항체 사이의 결합과 경쟁할 수 있는지 여부를 평가하기 위한 표면 플라즈몬 공명의 이용을 포함한다. 몇몇 경우에서, 표면 플라즈몬 공명은 경쟁 분석에서 이용된다. 비제한적인 방법은 실시예 9 및 실시예 10에 기재된다.
항체 생성 방법
다양한 실시양태는 폴리펩티드 또는 뉴클레오티드 서열을 이용하여 생성된 항체를 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 단일 클론 항체이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 항체 단편이다. 예를 들어, 항체는 Fab이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 키메라 항체이다.
본 출원에 기재된 항체는 당해 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 특이적인 결합에 대해 분석될 수 있다. 사용될 수 있는 면역분석은 비아코어 분석, FACS 분석, 면역형광, 면역세포화학, 웨스턴 블랏, 방사선면역분석, ELISA, "샌드위치" 면역분석, 면역침전분석, 침전 반응, 겔 확산 침전 반응, 면역확산분석, 응집분석, 보체-고정 분석, 면역방사계측 분석, 형광 면역분석, 및 단백질 A 면역분석과 같은 기법을 이용하는 경쟁적 및 비경쟁적 분석 시스템을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다. 이러한 분석은 일상적인 것이며, 당해 기술분야에 잘 알려져 있다(참조: 예를 들어, Ausubel et al., eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York).
다양한 실시양태에서, 항체는 DR3 및 TR6/DcR3과 같은 TL1A 수용체의 길항물질인데, 이들로 제한되는 것은 아니다. 특정 실시양태에서, 항체는 결합된 TL1A 수용체의 하나 이상의 활성의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 적어도 약 90%, 또는 약 100%를 억제한다.
다양한 실시양태에서, 단일 클론 항체는 하이브리도마법과 같으나 이들로 제한되지 않는 당해 기술분야에 공지된 방법을 이용하여 제조되는데, 이때 숙주 동물은 상기한 바와 같이, 면역화 항원에 특이적으로 결합할 항체의 림프구에 의한 생성을 유발하기 위해 면역화된다(Kohler 및 Milstein (1975) Nature 256:495). 하이브리도마는 선택된 항원에 대해 특이적으로 유도된 단일 클론 항체를 생성한다. 단일 클론 항체는, 시험관내 또는 생체 내에서 번식되는 경우, 당해 기술분야에서 공지된 기법에 의해 배양 배지 또는 복수 유체로부터 정제된다.
몇몇 실시양태에서, 단일 클론 항체는 미국 특허 4,816,567에 기재된 바와 같은 재조합 DNA 방법을 이용하여 제조된다. 단일 클론 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 성숙 B-세포 또는 하이브리도마 세포로부터 단리된다. 이어서, 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드는 적합한 발현 벡터 내로 클로닝되고, 발현 벡터는, 숙주 세포(예를 들어, 이. 콜라이 세포, 시미안 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 골수종 세포)내로 형질감염되는 경우, 단일 클론 항체를 생성한다. 또한, 단일 클론 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드(들)는 대안적인 항체를 생성하는 재조합 DNA 기술을 이용하는 다수의 상이한 방식으로 변형될 수 있다.
다양한 실시양태에서, "키메라 항체", 즉 상이한 부분이 상이한 동물 종으로부터 유래하는 분자, 예를 들어 뮤린 단일 클론 항체로부터 유래하는 가변부 및 인간 면역글로불린 불변부를 보유하는 것(예를 들어, 인간화 항체)이 생성될 수 있다. 키메라 항체는 당해 기술분야에 공지된 다양한 기법을 이용하여 생성될 수 있다(참조: Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 81:851-855 (1984); Neuberger et al., Nature 312:604-608 (1984); Takeda et al., Nature 314:452-454 (1985)).
몇몇 실시양태에서, 항-TL1A 단일 클론 항체는, 인간 대상체에게 투여되는 경우, 항원성 및 HAMA(인간 항-마우스 항체) 반응을 감소시키는 인간화 항체이다. 인간화 항체는 당해 기술분야에 공지된 여러 가지 기법을 이용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 항체는 (1) 출발 항체 경쇄 및 중쇄 가변 도메인의 뉴클레오티드 및 예상되는 아미노산 서열을 결정함으로써; (2) 인간화 항체를 디자인함으로써, 즉 인간화 공정 중 어떤 항체 프레임웍 영역이 사용될 것인지 결정함으로써; (3) 실질적인 인간화 방법/기법에 의해; 및 (4) 형질감염 및 인간화 항체의 발현에 의해 인간화된다(참조: 예를 들어, 미국 특허 5,585,089; 6,835,823; 6,824,989). 다양한 실시양태에서, 인간화 항체는 인간에서 치료를 위한 기능적인 활성을 유지하면서, 잠재 면역원성을 감소시키기 위해 추가로 최적화될 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 인간화 항-TL1A 항체는 서열번호 35-39 중 임의의 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 인간화 항-TL1A 항체는 서열번호 40-44 중 임의의 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 경우에서, 인간화 항-TL1A 항체는 서열번호 35를 보유하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 40을 보유하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 경우에서, 인간화 항-TL1A 항체는 서열번호 36을 보유하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 41을 보유하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 경우에서, 인간화 항-TL1A 항체는 서열번호 37을 보유하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 42를 보유하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 경우에서, 인간화 항-TL1A 항체는 서열번호 38을 보유하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 43을 보유하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 몇몇 경우에서, 인간화 항-TL1A 항체는 서열번호 39를 보유하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 44를 보유하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당해 기술분야에 공지된 여러 가지 기법을 이용하여 직접 제조될 수 있다. 타겟 항원에 대해 유도된 항체를 생성하는 면역화된 개인으로부터 단리되거나 시험관 내에서 면역화된 불멸화된 인간 B 림프구가 생성될 수 있다(참조: 예를 들어, Cole et al., Monoclonal antibodies and Cancer treatment, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., 1991, J. Immunol., 147 (1): 86-95; 및 미국 특허 5,750,373). 인간 항체는 파지 라이브러리로부터 선택될 수 있다. 항체 파지 라이브러리의 생성 및 이용을 위한 기법은 미국 특허 5,969,108, 6,172,197, 5,885,793, 6,521,404; 6,544,731; 6,555,313; 6,582,915; 6,593,081; 6,300,064; 6,653,068; 6,706,484; 및 7,264,963; 및 문헌(참조: Rothe et al., 2007, J. Mol. Bio., doi:10.1016/j.jmb.2007.12.018)에 기재되어 있다.
또한, 인간화 항체는 면역화 시 내인성 면역글로불린 생성의 부재 하에서 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생성할 수 있는 인간 면역글로불린 유전자좌를 함유하는 트랜스제닉 마우스에서 제조될 수 있다. 이러한 접근법은 미국 특허 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016에 기재되어 있다. 또한, 인간화 항체는 예를 들어 래빗 및 마우스와 같은 큰 동물에서 친화성-숙성된 인간-유사 폴리클로날 항체의 생성을 가능하게 하는 신규한 유전공학 접근법에 의해 획득될 수 있다(참조: 예를 들어, 미국 특허 6,632,976).
완전 인간화 항체는 먼저 비인간, 예를 들어 설치류 유래 CDR을 함유하는 가변부 아미노산 서열을 인간 유래 프레임웍 서열 내에 포함되도록 디자인함으로써 생성될 수 있다. 비인간 CDR은 소정의 특이성을 제공한다. 따라서, 몇몇 경우에서, 이들 잔기는 본질적으로 변화되지 않는 재성형된 가변부의 디자인에 포함된다. 몇몇 경우에서, 따라서 변형은 최소한으로 제한되어야 하고, 항체의 특이성 및 친화성에서의 변화는 면밀히 검토되어야 한다. 한편, 이론적으로 프레임웍 잔기는 임의의 인간 가변부로부터 유래할 수 있다. 허용 가능하거나 또는 심지어 개선된 친화성을 나타내는 재성형 항체를 생성하기 위해, 재성형된 가변부를 생성하고 및 항체 친화성을 유지하기에 균등하게 적합한 인간 프레임웍 서열이 선택되어야 한다. 인간 프레임웍은 배선 유래의 것이거나, 또는 비배선(예를 들어, 돌연변이되거나 친화성 숙성된) 서열로부터 유래할 수 있다. 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 알려진 유전공학 기법, 예를 들어 이들로 제한되는 것은 아니지만, 인간 항체의 라이브러리의 파지 디스플레이, 트랜스제닉 마우스, 인간-인간 하이브리도마, 하이브리드 하이브리도마, B 세포 불멸화 및 클로닝, 단일-세포 RT-PCR 또는 HuRAb 기술을 이용하여 인간 프레임웍 및 비인간 CDR을 함유하는 하이브리드 DNA 서열을 가진 인간화 항체를 생성할 수 있다. "인간화 항체"를 획득하기 위한 방법은 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 알려져 있다(예를 들어, 미국 특허 5,861,155, 미국 특허 6,479,284, 미국 특허 6,407,213, 미국 특허 5,624,821, US2003166871, US20020078757, Queen et al., Proc. Natl. Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989) 및 Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)).
키메라, 인간화 및 인간 항체는 전형적으로 재조합 발현에 의해 생성된다. 재조합 폴리뉴클레오티드 구성체는 전형적으로 자연적으로 결합되거나 또는 이종성인 프로모터 영역을 포함하는, 항체 사슬의 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 발현 조절 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 특히 이들 인간화 항체의 아미노산 서열 변이체가 항체의 결합 친화성 또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 경우, 상기 변이체를 생성하는 것이 바람직할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 단편은 IBD를 치료 및/또는 경감하기 위해 사용된다. 여러 가지 기법이 항체 단편의 생성을 위해 공지되어 있다. 일반적으로, 이들 단편은 온전한 항체의 단백질 분해에 의해 유도된다 (예를 들어 Morimoto et al., 1993, Journal of Biochemical 및 Biophysical Methods 24:107-117; Brennan et al., 1985, Science, 229:81). Fab, Fv, 및 scFv 항체 단편은 이. 콜라이 또는 다른 숙주 세포에서 발현되고, 이들로부터 분비되어 이들 단편의 대량 생산을 가능하게 한다. 항체 단편의 생성을 위한 다른 기법은 통상의 기술자에게 자명할 것이다.
본 발명에 따라, TL1A에 특이적인 단일쇄 항체의 생성을 위한 기법들이 채용될 수 있다(참조: 예를 들어, 미국 특허 4,946,778). 또한, TL1A, 또는 이의 유도체, 단편, 유사체 또는 상동체에 대한 소정의 특이성을 보유하는 단일 클론 Fab 단편의 신속하고 효과적인 확인을 가능하게 하는 Fab 발현 라이브러리의 구성을 위한 방법들이 채용될 수 있다(참조: 예를 들어, Huse, et al., Science 246:1275-1281 (1989)). (a) 항체 분자의 펩신 분해에 의해 생성된 F(ab')2 단편; (b) F(ab')2 단편의 이황화 결합을 환원시킴으로써 생성된 Fab 단편, (c) 파파인 및 환원제로 항체 분자를 처리함으로써 생성된 Fab 단편, 및 (d) Fv 단편을 포함하나, 이들로 제한되지 않는, 당해 기술분야의 기법에 의해 생성된 항체 단편이 생성될 수 있다.
또한, 본 출원에서, TL1A와 항체의 결합을 제공하는 임의 유형의 가변부를 포함하는 변형된 항체가 제공된다. 당해 기술분야의 통상의 기술자는 변형된 항체는 적어도 하나 이상의 불변부 도메인의 분획이 결실되거나 또는 변경되어 TL1A를 감소시키는 것과 같은 소정의 생화학적 특성을 제공하는 항체(예를 들어, 전장 항체 또는 이의 면역반응성 단편)를 포함하는 것을 이해할 것이다. 특정 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 둘 다 내의 가변부는 하나 이상의 CDR의 적어도 부분적인 치환 및 필요에 따라 부분적인 프레임웍 영역 치환 및 서열 변화에 의해 변경된다. 몇몇 실시양태에서, 치환된 CDR은 동일한 클래스의 항체로부터, 상이한 클래스의 항체로부터, 예를 들어 상이한 종의 항체로부터, 및/또는 이들의 조합으로부터 유도될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 변형된 항체의 불변부는 인간 불변부를 포함할 것이다. 본 발명과 양립하는 불변부에 대한 변형은 하나 이상의 도메인 내에서 하나 이상의 아미노산의 부가, 결실 또는 치환을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 출원에 기재된 바와 같이 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 발현은 원핵세포 또는 진핵세포에서 발생할 수 있다. 적합한 숙주는 박테리아 또는 진핵 숙주, 예를 들어 효모, 곤충, 진균, 조류 및 포유류 세포를 포함하고, 포유류, 곤충, 조류 또는 효모 기원의 숙주 세포, 또는 생체 내에서, 또는 인 시튜로 이용된다. 포유류 세포 또는 조직은 인간, 영장류, 햄스터, 래빗, 설치류, 소, 돼지, 양, 말, 염소, 개 또는 고양이 기원의 것일 수 있으나, 다른 포유류 세포도 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 본 출원에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 숙주 내로 형질감염될 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 발현 벡터는 본 출원에 기재된 키메라, 인간화, 또는 복합 인간 항체의 생성을 위해 수용체 세포주 내로 형질감염된다. 다양한 실시양태에서, 섬유아세포 기원, 예를 들어 Vero(ATCC CRL 81) 또는 CHO-K1(ATCC CRL 61) 세포, HeLa 세포 및 L 세포를 포함하나, 이들로 제한되지 않는 포유류 세포가 항체 단백질의 생성을 위한 숙주로서 유용할 수 있다. 폴리펩티드를 발현하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 진핵세포는 COS 7 세포를 포함하는 COS 세포; 293-6E 세포를 포함하는 293 세포; CHO-S 및 DG44 세포를 포함하는 COS 세포; PER.C6TM 세포(Crucell); 및 NSO 세포를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 몇몇 실시양태에서, 특정 진핵 숙주 세포는 중쇄 및/또는 경쇄에 대한 소정의 번역 후 변형을 수행하는 그의 능력에 기초하여 선택된다.
온전한 이종성 단백질을 분비할 수 있는 다수의 적합한 숙주 세포주는 당해 기술분야에서 개발되어 왔으며, CHO 세포주, 여러 가지 COS 세포주, HeLa 세포, L 세포 및 다수의 골수종 세포주를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.
본 출원에 개시된 바와 같은 키메라, 인간화, 또는 복합 인간 항체 구성체, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 보유하는 발현 벡터는 여러 가지 적합한 방법 중 세포성 숙주의 유형에 따른 임의의 방법에 의해 적절한 숙주 세포 내로 도입될 수 있는데, 상기 방법으로는 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 같은 형질전환, 형질감염, 리포펙션, 접합, 전기천공, 직접 미세주입 및 입자총법을 들 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다. 이들 세포를 위한 발현 벡터는 발현 조절 서열, 예를 들어 복제 부위 원점, 프로모터, 인핸서 및 필요한 프로세싱 정보 부위, 예를 들어 리보좀 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위, 및 전사 종결자 서열을 포함할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 또한 효모는 본 출원에 기재된 펩티드의 항체 분자의 생성을 위한 숙주로서 이용될 수 있다. 다양한 다른 실시양태에서, 또한 박테리아 균주는 본 출원에 기재된 펩티드의 항체 분자의 생성을 위한 숙주로서 이용될 수 있다. 박테리아 균주의 예는 이. 콜라이, 바실러스 종, 엔테로박테리아, 및 여러 가지 슈도모나스 종을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
몇몇 실시양태에서, 본 출원에 기재된 바와 같은, 하나 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 임의의 적합한 방법에 따라 폴리펩티드를 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자로 형질감염되거나, 또는 조작된(트랜스제닉) 동물의 생체 내에서 생성될 수 있다. 트랜스제닉 동물의 생성의 경우, 트랜스유전자는 수정된 난모세포 내로 미세주입되거나, 또는 배아 줄기세포의 게놈 내로 통합될 수 있고, 및 그러한 세포의 핵은 탈핵된 난모세포 내로 전달될 수 있다. 일단 발현되면, 항체는 HPLC 정제, 컬럼 크로마토그래피, 겔 전기영동 등을 포함하는, 당해 기술분야의 표준 절차에 따라 정제될 수 있다(참조: 일반적으로, Scopes, Protein Purification(Springer-Verlag, NY, 1982)).
숙주 내에서 일단 발현되면, 본 발명의 전체 항체, 항체-단편(예를 들어, 개개의 경쇄 및 중쇄), 또는 다른 면역글로불린 형태는 공지된 기법, 예를 들어 면역흡착 또는 면역 친화성 크로마토그래피, 크로마토그래피법, 예를 들어 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피), 암모늄 설페이트 침전, 겔 전기영동, 또는 이들의 임의의 조합에 의해 회수 및 정제할 수 있다(참조: 일반적으로, Scopes, PROTEIN PURIF. (Springer-Verlag, NY, 1982)). 적어도 약 90% 내지 95% 균질성의 실질적으로 순수한 면역글로불린이 이로우며, 특히 약학적 용도를 위해서는 98% 내지 99% 또는 그 이상의 균질성이 이롭다. 일단 부분적으로 또는 원하는 정도의 균질성으로 정제되면, 이어서 인간화 또한 복합 인간 항체는 치료적으로 사용되거나, 분석 절차, 면역형광 염색 등을 개발 및 수행하는데 사용될 수 있다(참조: 일반적으로, Vols. I & II Immunol. Meth. (Lefkovits & Pernis, eds., Acad. Press, NY, 1979 및 1981)).
다양한 실시양태는 본 출원에 기재된 항-TL1A 항체 또는 단편을 코딩하는 핵산을 포함하는 유전자 구성체를 제공한다. 항체의 유전자 구성체는 코딩된 항-TL1A 항체 또는 단편의 발현을 위해 적합할 수 있는 발현 카세트의 형태일 수 있다. 유전자 구성체는 벡터 내로 통합되거나 통합되지 않고 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 유전자 구성체는 리포좀 또는 바이러스 입자 내에 통합될 수 있다. 대안적으로, 정제된 핵산 분자는 당해 기술분야에 공지된 방법에 의해 숙주 세포 내로 직접 삽입될 수 있다. 유전자 구성체는 형질감염, 주입, 전기천공, 세포 융합, 프로토플라스트 융합, 미세주입 또는 입자총에 의해 숙주 대상체의 세포 내로 직접 도입될 수 있다.
다양한 실시양태는 본 출원에 제공된 항체의 유전적 구성체를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. 재조합 벡터는 플라스미드, 코스미드 또는 파지일 수 있다. 재조합 벡터는 다른 기능적 요소, 예를 들어 유전자 발현을 개시하는 적합한 프로모터를 포함할 수 있다.
다양한 실시양태는 본 출원에 기재된 유전적 구성체 및/또는 재조합 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드
다양한 실시양태는 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 30, 서열번호 31; 및 서열번호 32로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 상보성 결정 영역을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 다양한 실시양태에서, 폴리펩티드는 이들 상보성 결정 영역 중 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개를 포함한다.
다양한 실시양태에서, 항체는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 이용하여 생성된다.
폴리펩티드는 TL1A에 대한 항체 또는 이의 단편을 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 합성 폴리펩티드일 수 있다. 특별히 언급하는 경우, 폴리펩티드는 천연 폴리펩티드일 수 있다. 몇몇 아미노산 서열은 단백질의 구조 또는 기능의 중요한 영향을 미치지 않으면서 변경될 수 있다. 따라서, TL1A 단백질에 대한 항체 또는 이의 단편의 영역을 포함하거나 또는 실질적인 활성을 나타내는 폴리펩티드의 변이체가 추가로 제공된다. 그러한 변형은 결실, 삽입, 전위, 반복, 및 유형 치환을 포함한다.
본 출원에 기재된 단리된 폴리펩티드는 당해 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 생성될 수 있다. 그러한 방법은 직접적인 단백질 합성으로부터 적합한 형질전환된 숙주에서 단리된 폴리펩티드를 코딩하거나 이들 서열을 발현하는 DNA 서열을 구성하는 것까지의 범위이다. 몇몇 실시양태에서, DNA 서열은 관심 있는 야생형 단백질을 코딩하는 DNA 서열을 단리하거나 합성하는 재조합 기술을 이용하여 구성된다.
또한, 다양한 숙주 시스템이 재조합 단백질을 발현하기 위해 유익하게 사용된다. 적합한 포유류 숙주 세포주의 예는 원숭이 신장 세포인 COS-7, 및 예를 들어, L 세포, C127, 3T3, 중국 햄스터 난소 세포(CHO), HeLa 및 BHK 세포주를 포함하는 적합한 벡터를 발현할 수 있는 다른 세포주를 포함한다. 포유류 발현 벡터는 복제 원점, 적합한 프로모터 및 발현하고자 하는 유전자에 연결된 인핸서, 및 다른 5' 또는 3' 인접 비전사 서열, 및 5' 또는 3' 비번역 서열, 예를 들어 필요한 리보좀 결합 부위, 폴리아데닐화 부위, 스플라이스 도너 및 억셉터 부위, 및 전사 종결 서열과 같은 비전사 요소를 포함할 수 있다.
형질전환된 숙주에 의해 생성된 단백질은 임의의 적합한 방법에 따라 정제될 수 있다. 그러한 표준 방법은 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환, 친화성 및 크기 칼럼 크로마토그래피), 원심분리, 차등 용해도, 또는 단백질 정제를 위한 임의의 다른 표준 기법을 포함한다. 헥사히스티딘(서열번호 45), 말토오스 결합 도메인, 인플루엔자 코트 서열 및 글루타치온-S-트랜스퍼라아제와 같은 친화성 태그가 단백질에 부착되어 적합한 친화성 컬럼에 통과시킴으로써 용이한 정제를 가능하게 한다. 또한, 단리된 단백질은 단백질분해, 핵자기 공명 및 x-선 결정법과 같은 기법을 이용하여 물리적으로 특성 규명될 수 있다. 박테리아 배양에서 생성된 재조합 단백질은 단리될 수 있다. 또한, 항체 및 다른 단백질을 정제하기 위한, 당해 기술분야에 공지된 방법은, 예를 들어 미국 특허 공보 2008/0177048 및 2009/0187005에 기재된 것을 포함한다.
통상의 기술자는, 코딩된 서열 내의 단일 아미노산 또는 적은 비율의 아미노산이 변경된, 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질 서열에 대한 개별적인 치환, 결실 또는 추가는, 변경이 어떤 아미노산을 화학적으로 유사한 아미노산으로 치환하고 타겟 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 유지하는 "보존적으로 변경된 변이체"라는 것을 인식할 것이다. 그러한 보존적으로 변경된 변이체는 개시 내용과 일치하는 대립유전자, 종간 상동체 및 다형 변이체에 추가되는 것 및 이를 배제하지 않는 것이다.
주어진 아미노산은 유사한 생리화학적 특성을 갖는 잔기로 대체될 수 있는데, 예를 들어 하나의 지방족 잔기는 다른 지방족 잔기로 치환(예를 들어, He, Val, Leu, 또는 Ala는 다른 것으로), 또는 하나의 극성 잔기는 다른 극성 잔기로 치환(예를 들어, Lys와 Arg 사이; Glu와 Asp 사이; 또는 Gln과 Asn 사이)될 수 있다. 다른 그러한 보존적 치환, 예를 들어 유사한 소수성 특성을 보유하는 전체 영역의 치환은 잘 알려져 있다. 보존적 아미노산 치환을 포함하는 폴리펩티드는 본 출원에 기재된 분석법 중 임의의 하나로 테스트하여 원하는 활성, 예를 들어 항원 결합 활성 및 천연 또는 참조 폴리펩티드의 특이성이 유지되고 있는지 확인할 수 있다.
특정한 보존적 치환은, 예를 들어 하기를 포함한다; Ala가 Gly로 또는 Ser로; Arg가 Lys로; Asn이 Gin으로 또는 His로; Asp가 Glu로; Cys가 Ser로; Gln이 Asn으로; Glu가 Asp로; Gly가 Ala으로 또는 Pro로; His가 Asn으로 또는 Gin으로; lie가 Leu로 또는 Val로; Leu가 lie로 또는 Val로; Lys가 Arg로, Gin으로 또는 Glu로; Met가 Leu로, Tyr로 또는 lie로; Phe가 Met로, Leu로 또는 Tyr로; Ser이 Thr로; Thr이 Ser로; Trp가 Tyr로; Tyr이 Trp로; 및/또는 Phe가 Val로, lie로 또는 Leu로.
몇몇 실시양태에서, 본 출원에 기재된 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편은 본 출원에 기재된 서열의 변이체, 예를 들어 항체 폴리펩티드의 보존적 치환 변이체일 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 변이체는 보존적으로 변경된 변이체이다. 폴리펩티드와 관련하여 본 출원에 언급되는 바와 같은 "변이체"는 천연 또는 참조 폴리펩티드에 실질적으로 상동성인 폴리펩티드이지만, 천연 또는 참조 폴리펩티드의 아미노산 서열과는 상이한 아미노산 서열을 보유하는데, 그 이유는 하나 또는 다수의 결실, 삽입 또는 치환 때문이다. 변이체 폴리펩티드 코딩 DNA 서열은, 천연 또는 참조 DNA 서열과 비교하는 경우, 하나 이상의 첨가, 결실, 또는 치환을 포함하는 서열을 포함하나, 활성, 예를 들어 관련성 있는 타겟 폴리펩티드에 대한 항원 특이적 결합 활성을 유지하는 변이체 단백질 또는 이의 단편을 코딩한다.
천연 아미노산 서열의 변경은 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다수의 기법 중 임의의 기법에 의해 수행될 수 있다. 돌연변이는 특정 유전자좌에 도입되거나, 또는 올리고뉴클레오티드-지정 부위-특이적 돌연변이유발 절차에 의해 도입될 수 있다. 그러한 변경을 수행하기 위한 기법은 매우 잘 확립되어 있고, 예를 들어 Walder et al. (Gene 42: 133, 1986); Bauer et al. (Gene 37:73, 1985); Craik (BioTechniques, January 1985, 12-19); Smith et al. (Genetic Engineering: Principles and Methods, Plenum Press, 1981); 및 미국 특허 4,518,584 및 4,737,462에 개시된 방법이 포함된다.
특정 실시양태에서, TL1A에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드 또는 이의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 예를 들어, TL1A에 대한 항체 또는 그러한 항체의 단편을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 폴리뉴클레오티드는 RNA 형태 또는 DNA 형태일 수 있다. DNA는 cDNA, 게놈 DNA, 및 합성 DNA를 포함하고; 및 이중 가닥 또는 단일 가닥일 수 있고, 및 단일 가닥인 경우, 코딩 스트랜드 또는 비코딩(안티센스) 스트랜드일 수 있다. 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 단리된다. 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 실질적으로 순수하다.
추가로, 서열번호 1, 9, 17, 25 및 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 또한, 본 출원에서, 예를 들어, 단편, 유사체, 및 유도체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 변이체가 제공된다.
항체의 아미노산 서열 변이체를 코딩하는 핵산 분자는 당해 기술분야에 공지된 다양한 방법에 의해 제조된다. 이들 방법은 항체의 조기 제조된 변이체 또는 비변이체 버전의 올리고뉴클레오티드-매개된(또는 위치 지정된) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및 카세트 돌연변이유발을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다. 본 출원에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 항체, 부분 또는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 연결을 위한 평활 말단 또는 스태거드 말단 단부 및 제한 효소 분해를 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아닌 종래 기법에 따라 벡터 DNA와 재조합될 수 있다. 그러한 조작을 위한 기법은, 예를 들어 문헌(참조: Maniatis et al., Molecular Cloning, Lab. Manual (Cold Spring Harbor Lab. Press, NY, 1982 및 1989))에 개시되어 있고, 및 단일 클론 항체 분자 또는 항원 결합 영역을 코드하는 핵산 서열을 구성하기 위해 사용될 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 출원에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산은 벡터에 의해 포함된다. 본 출원에 기재된 몇몇 관점에서, 본 출원에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산 또는 이의 임의의 모듈은 벡터에 작동 가능하게 연결된다. 본 출원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 숙주 세포에의 전달을 위해, 또는 상이한 숙주 세포들 사이의 전달을 위해 디자인된 핵산 구성체를 의미한다. 본 출원에 기재된 바와 같이, 벡터는 바이러스 벡터 또는 비바이러스 벡터일 수 있다. 용어 "벡터"는 적합한 조절 요소와 연결되는 경우 복제할 수 있고, 및 세포로 유전자 서열을 전달할 수 있는 임의의 유전적 요소를 포함한다. 벡터는 클로닝 벡터, 발현 벡터, 플라스미드, 파지, 트랜스포존, 코스미드, 염색체, 바이러스, 비리온 등을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "발현 벡터"는 벡터 상에서 전사 조절 서열에 연결된 서열로부터 폴리펩티드 또는 RNA의 발현을 유도하는 벡터를 의미한다. 용어 "발현"은 RNA 및 단백질의 생성 및 필요에 따라 단백질을 생성하는 것에 관련된 세포 과정을 의미하는데, 이는 전사, 전사체 프로세싱, 번역 및 단백질 폴딩, 변형 및 프로세싱을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다. "발현 생성물"은 유전자로부터 전사된 RNA, 및 유전자로부터 전사된 mRNA의 번역에 의해 획득된 폴리펩티드를 포함한다. 용어 "유전자"는 적합한 조절 서열에 작동 가능하게 연결되는 경우 시험관 내에서 또는 생체 내에서 RNA로 전사되는 핵산 서열(RNA)을 의미한다. 유전자는 코딩 영역 이전 및 이후의 영역, 예를 들어 5' 비번역(5' UTR) 또는 "리더" 서열 및 3' UTR 또는 "트레일러" 서열, 뿐만 아니라 개개의 절편(엑손) 사이의 개재 서열(인트론)을 포함하거나, 또는 포함하지 않을 수 있다.
본 출원에 사용된 바와 같이, 용어 "바이러스 벡터"는 바이러스 원점의 적어도 하나의 요소를 포함하고, 및 바이러스 벡터 입자 내로 패키징될 수 있는 능력을 보유하는 핵산 벡터 구성체를 의미한다. 바이러스 벡터는 비필수적인 바이러스 유전자 대신에 본 출원에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산을 함유할 수 있다. 벡터 및/또는 입자는 시험관내 또는 생체내의 세포로 임의의 핵산을 전달하기 위한 목적으로 위해 사용될 수 있다. 여러 가지 형태의 바이러스 벡터가 당해 기술분야에 공지되어 있다.
"재조합 벡터"의 경우, 벡터는 이종성 핵산 서열 또는 생체 내에서 발현할 수 있는 "트랜스유전자"를 포함하는 의미이다.
특정 실시양태에서, 본 출원에 기재된 TL1A에 대한 항체 또는 이의 단편을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 및 몇몇 실시양태에서, 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 보유하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
참조 뉴클레오티드 서열에 적어도 예를 들어 95% "동일한" 뉴클레오티드 서열을 보유하는 폴리뉴클레오티드의 경우, 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열이 참조 서열과 동일한 것을 의도하는데, 폴리뉴클레오티드 서열이 참조 뉴클레오티드 서열의 각각의 100개의 뉴클레오티드당 5개 이하의 점 돌연변이를 포함할 수 있다. 참조 서열의 이들 돌연변이는 참조 뉴클레오티드 서열의 아미노- 또는 카르복시-말단 위치에서 발생할 수 있거나, 또는 참조 서열 내의 뉴클레오티드 사이에 개별적으로 위치된 이들 말단 위치 사이의 임의의 위치, 또는 참조 서열 내의 하나 이상의 인접한 기 내에서 발생할 수 있다.
폴리뉴클레오티드 변이체는 코딩 영역, 비코딩 영역, 또는 둘 다에서 변경을 함유할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는 침묵 치환, 부가, 또는 결실을 생성하지만, 코딩된 폴리펩티드의 특성 또는 활성을 변경시키지 않는 변경을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 뉴클레오티드 변이체는 유전 암호의 축퇴성에 기인하는 침묵 치환에 이해 생성된다. 폴리뉴클레오티드 변이체는 다양한 이유, 예를 들어 특정 숙주에 대해 코돈 발현을 최적화하기 위해(인간 mRNA의 변이 코돈 이. 콜라이와 같은 박테리아 숙주에 의해 선호되는 것) 생성될 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 유전자는 소정의 서열을 생성하도록 융합된다. 각각의 융합된 유전자는 조립되거나, 또는 수용체 내로 형질감염되는, 발현 벡터 내에서 어셈블링되거나, 또는 발현 벡터 내로 삽입된다. 형질감염된 수용체 세포는 통합된 유전자의 발현을 가능하게 하고, 발현된 면역글로불린 사슬 또는 온전한 항체 또는 단편은 배양으로부터 회수된다. 몇몇 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 융합된 유전자는 향후 수용체 세포를 동시 형질감염시키기 위해 사용되는 별개의 발현 벡터 내에서 어셈블링된다.
약학 조성물, 투여 및 투여량
제공된 항-TL1A 항체는 IBD의 치료와 같은 치료 방법을 포함하나, 이로 제한하지 않는 여러 가지 적용 분야에서 유용하다. 사용 방법은 시험관내, 생체외, 또는 생체내 방법일 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 TL1A 수용체의 길항물질이다.
특정 실시양태에서, 항-TL1A 항체 또는 TL1A 수용체 길항물질로 치료되는 질병은 IBD, CD, UC 및/또는 MR-UC이다.
다양한 실시양태에서, 약학 조성물은 임의의 투여 루트에 의한 전달을 위해 제형화된다. "투여 경로"는 에어로졸, 코, 눈, 경점막, 경피 또는 비경구를 포함하나, 이들로 제한되지 않는 당해 기술분야에 공지된 임의의 투여 경로를 의미할 수 있다.
"경피" 투여는 국소 크림 또는 연고 또는 경피 패치에 의해 수행될 수 있다.
"비경구"는 일반적으로 주사와 관련된 투여 경로이며, 안와내, 주입, 동맥내, 피막내, 심장내, 피부내, 근육내, 복강내, 폐내, 척추내, 흉골내, 척추강내, 정맥내, 지주막하, 피막하, 피하, 경점막, 또는 기관경유를 포함한다. 비경구 경로에 의해, 조성물은 주입 또는 주사를 위한 용액 또는 현탁액의 형태이거나, 또는 동결건조된 분말의 형태일 수 있다.
장관 경로에 의해, 약학 조성물은 정제, 겔 캡슐, 당의정, 시럽, 현탁액, 용액, 분말, 과립, 에멀젼, 미소구 또는 나노구 또는 조절 방출을 가능하게 하는 지질 소낭 또는 폴리머 소낭의 형태일 수 있다.
국소 경로에 의해, 약학 조성물은 피부 및 점막을 치료하기 위해 제형화되고, 연고, 크림, 밀크, 살브, 분말, 함침 패드, 용액, 겔, 스프레이, 로션 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 또한, 이들은 미소구 또는 나노구 또는 조절 방출을 가능하게 하는 지질 소낭 또는 폴리머 소낭 또는 폴리머 패치 및 하이드로겔의 형태일 수 있다. 이들 국소 경로 조성물은 임상 적응증에 따라 무수 형태 또는 수성 형태일 수 있다.
눈 경로에 의해, 이들은 안약 형태일 수 있다.
다양한 실시양태에서, 제제는 주사에 의해 또는 시간 경과에 따른 점진적인 주입에 의해 정맥 내로 투여될 수 있다. 투여 경로를 위한 적절한 제제가 준비되는 경우, 예를 들어 본 출원에 기재된 방법에 유용한 제제 및 조성물은 정맥내, 비강내, 흡입에 의해, 복강 내로, 근육 내로, 피하로, 공동 내로 투여될 수 있고, 필요에 따라 연동 수단에 의해 전달되거나, 또는 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 수단에 의해 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 출원에 사용되는 화합물은 경구, 정맥내 또는 근육 내로 IBD, CD, UC 및/또는 MR-UC를 보유하는 환자에게 투여될 수 있다.
또한, 약학 조성물은 임의의 약학적으로 허용 가능한 담체를 함유할 수 있다. "약학적으로 허용 가능한 담체"는 신체 내의 하나의 조직, 장기 또는 부분으로부터 신체 내의 다른 조직, 장기 또는 부분으로 관심 있는 화합물을 운반하거나 또는 수송하는 것에 관련된 약학적으로 허용 가능한 물질, 조성물, 또는 비히클을 의미한다. 예를 들어, 담체는 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매, 또는 캡슐화 물질, 또는 이들의 조합일 수 있다. 담체의 각각의 성분은 제제의 다른 성분들과 양립할 수 있어야 하므로, "약학적으로 허용 가능"하여야 한다. 또한, 담체의 각각의 성분은, 그들이 접촉할 수 있는 임의의 조직 또는 장기와의 접촉하여 사용하기에 적합하여야 하는데, 이는 담체의 각각의 성분이 독성, 자극, 알레르기 반응, 면역원성, 또는 그의 치료적 이점보다 과도하게 더 큰 임의의 다른 합병증의 위험을 보유하지 않아야 함을 의미한다.
다양한 실시양태에서, 치료 유효량의 항-TL1A 항체와 함께 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다. "약학적으로 허용 가능한 부형제"는 일반적으로 안전하고, 비독성이고, 및 바람직한 약학 조성물의 제조에 유용한 부형제를 의미하고, 수의학적 용도뿐만 아니라 인간 약제용을 위해 적합한 부형제를 포함한다. 활성 성분은 약학적으로 허용 가능하고, 활성 성분과 양립할 수 있는 부형제와 본 출원에 기재된 치료 방법에 사용하기에 적합한 양으로 혼합될 수 있다. 그러한 부형제는 고체, 액체, 반고체, 또는 에어로졸 조성물의 경우, 기체일 수 있다. 적합한 부형제는 예를 들어 전분, 글루코오스, 락토오스, 수크로오스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카겔, 나트륨 스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 건조된 스킴 밀크, 물, 염수, 덱스트로오스, 프로필렌글리콜, 글리세롤, 에탄올, 만니톨, 폴리소르베이트 등 및 이들의 조합이다. 또한, 필요에 따라, 조성물은 소량의 보조 물질, 예를 들어 습윤제 또는 유화제, pH 완충제 등의 활성 성분의 유효성을 증강시키거나 유지하는 물질을 함유할 수 있다. 본 출원에 기재된 바와 같은 치료 조성물은 약학적으로 허용 가능한 염을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염은 무기산, 예를 들어 염산 또는 인산, 유기산, 예를 들어 아세트산, 타르타르산 또는 만델산을 이용하여 형성된 산 부가염, 무기 염기, 예를 들어 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘 또는 수산화철(III)로부터 형성된 염, 및 유기 염기, 예를 들어 이소프로필아민, 트리메틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 형성된 염을 포함한다. 액체 조성물은 물 이외에 및 물을 제외하고 액체 상, 예를 들어 글리세린, 식물성 오일, 예를 들어 목화씨 오일, 및 물-오일 에멀젼을 함유할 수 있다. 생리적으로 용인할 수 있는 담체는 당해 기술분야에 널리 알려져 있다. 특정 질환 또는 병태의 치료에 효과적일 사용된 활성제(즉, 항체 또는 이의 단편)의 양은 질환 또는 병태의 특성에 따라 달라질 것이고, 및 표준 임상 기법을 이용하여 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다.
또한, 약학 조성물은 경구 투여를 위해 캡슐화되거나, 정제화되거나, 또는 에멀젼 또는 시럽으로 제조될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 고체 또는 액체 담체는 조성물을 증강 도는 안정화시키기 위해, 또는 조성물의 제조를 용이하게 하기 위해 추가될 수 있다. 액체 담체는 시럽, 땅콩유, 올리브유, 글리세린, 염수, 알코올 및 물을 포함한다. 고체 담체는 전분, 락토오스, 황산칼슘, 2수화물, 백토, 마그네슘 스테아레이트 또는 스테아르산, 탈크, 펙틴, 아카시아, 한천 또는 젤라틴을 포함한다. 또한, 담체는 지연 방출 물질, 예를 들어 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트를 단독 또는 왁스와 함께 포함할 수 있다.
약학 제제는 정제화된 형태를 위한 밀링, 혼합, 과립화 및 필요에 따라 압축; 또는 경질 젤라틴 캡슐 형태를 위한 밀링, 혼합 및 충전을 포함하는 약학 분야의 통상적인 기법에 따라 제조된다. 액체 담체가 사용되는 경우, 제제는 시럽, 엘릭시르, 에멀젼 또는 수성 또는 비수성 현탁액의 형태일 수 있다. 그러한 액체 제제는 직접 입으로 투여되거나, 또는 연질 젤라틴 캡슐 내로 충전될 수 있다.
약학 조성물은 치료 유효량으로 전달될 수 있다. 정확한 치료 유효량은, 조성물의 양이 대상 대상체에서 치료 효과의 관점에서 가장 효과적인 결과를 산출할 조성물의 양이다. 이 양은 여러 가지 인자에 따라 달라질 것인데, 상기 인자는 치료 화합물의 특성(활성, 약물동력학, 약력학, 및 생체이용률을 포함), 대상체의 생리적 상태(나이, 성별, 질병 유형 및 단계, 일반적인 신체 상태, 주어진 투여량에 대한 반응성, 및 약물의 유형을 포함), 제제 내의 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 담체들의 속성, 및 투여 경로를 포함하는데, 이들로 제한되는 것은 아니다. 임상 및 약리학 분야의 통상의 기술자는 일상적인 실험을 통해, 예를 들어 화합물의 투여에 대한 대상체의 반응을 모니터링하고 그에 따라 투여량을 조정함으로써 치료 유효량을 결정할 수 있을 것이다. 추가적인 지침은 문헌(참조: Remington : The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro ed. 20th edition, Williams & Wilkins PA, USA) (2000))을 참조할 수 있다.
효과적인 항-TL1A 항체의 전형적인 투여량은 시험관내 반응에 의해 또는 동물 모델에서의 반응에 의해 통상의 기술자에게 지시된 바와 같을 수 있다. 그러한 투여량은 전형적으로 관련 있는 생물학적 활성을 상실하지 않는 농도 또는 양의 10배 이하까지 감소될 수 있다. 따라서, 실질적인 투여량은 의사의 판단, 환자의 상태, 및 예를 들어 관련성 있는 일차 배양된 세포 또는 조직 배양된 조직 샘플, 예를 들어 얻어진 생물학적 샘플, 또는 적절한 동물 모델에서 관찰된 반응에 기초한 치료 방법의 유효성에 따라 달라질 것이다.
질병 치료의 경우, 항체의 적합한 투여량은 치료하려는 질병의 유형, 질병의 중증도 및 진행, 질병의 반응성, 어던 항체가 치료 또는 예방적 목적을 위해 투여되는지 여부, 이전 치료, 및 환자의 병력에 따라 달라진다. 또한, 투여량은 임의의 합병증이 나타나는 경우 개별적인 의사에 의해 및 치료 의사의 재량으로 조정될 수 있다. 투여 의사는 최적 투여량, 투여 방법 및 반복률을 결정할 수 있다. TL1A 항체는 1회 투여되거나, 또는 수일로부터 수개월, 또는 치료가 효과적이거나, 또는 질병 상태의 감소가 달성될 때까지(예를 들어, IBD의 치료 또는 경감) 계속되는 일련의 치료에 걸쳐 투여될 수 있다. 치료의 지속 기간은 대상체의 임상적인 진행 및 치료에 대한 반응성에 따라 달라질 것이다. 특정 실시양태에서, 투여량은 체중 1 kg당 0.01 ㎍ 내지 100 mg이고, 및 1일, 1주, 1개월, 또는 1년에 1회 이상 투여될 수 있다. 전신 투여의 경우, 대상체에게 예를 들어 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 2.5 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 40 mg/kg, 50 mg/kg, 또는 그 이상과 같은 치료량이 투여될 수 있다.
치료 방법
다양한 실시양태는 염증성 장 질환(IBD)을 치료하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 본 출원에 기재된 항-TL1A 항체를 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 대상체는 하나 이상의 위험 변이체를 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 출원에서, 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환(IBD)을 치료하는 방법이 제공되는데, 상기 방법은 치료 유효량의 TL1A에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는데, 이때 항체 또는 항원 결합 단편은 (a) 서열번호 5를 포함하는 중쇄 및 서열번호 13을 포함하는 경쇄; (b) 서열번호 21을 포함하는 중쇄 및 서열번호 29를 포함하는 경쇄; (c) 서열번호 6-8의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 14-16의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR); (d) 서열번호 22-24의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 30-32의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR); (e) 서열번호 5 및/또는 21의 중쇄; (f) 서열번호 13 및/또는 29의 경쇄; (g) 서열번호 6-8 및/또는 서열번호 22-24의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR); (h) 서열번호 14-16 및/또는 서열번호 30-32의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR); 및 (i) 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, 염증성 장 질환(IBD)은 크론병, 궤양성 대장염, 및 또는 의학적 불응성 궤양성 대장염이다.
다양한 실시양태에서, 항체는 단일 클론 항체이다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 인간 항체이다. 다양한 실시양태에서, 항체는 인간화 항체이다. 다양한 실시양태에서, 항체는 중화 항체이다.
다양한 다른 실시양태에서, 대상체는 증가된 TL1A 발현을 보유하도록 결정된다. 몇몇 실시양태에서, 치료 유효량의 항-TL1A 항체의 투여는 치료된 대상체에서 TL1A의 감소를 초래한다.
다양한 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (a) 서열번호 5를 포함하는 중쇄 및 서열번호 13을 포함하는 경쇄; (b) 서열번호 6-8의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 14-16의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR); (c) 서열번호 5의 중쇄; (d) 서열번호 13의 경쇄; (e) 서열번호 6-8의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR); (f) 서열번호 14-16의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR); 및 (g) 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
다양한 다른 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (a) 서열번호 21을 포함하는 중쇄 및 서열번호 29를 포함하는 경쇄; (b) 서열번호 22-24의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 30-32의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR); (c) 서열번호 21의 중쇄; (d) 서열번호 29의 경쇄; (e) 서열번호 22-24의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR); (f) 서열번호 30-32의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR); 및 (g) 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 1, 서열번호 9, 서열번호 17, 서열번호 25 및 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 서열을 보유하는 핵산에 의해 코딩된다.
다양한 다른 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (a) 서열번호 2-4의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 10-12의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR); (b) 서열번호 18-20의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 26-28의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR); (c) 서열번호 1 및/또는 17의 중쇄; (d) 서열번호 9 및/또는 25의 경쇄; (e) 서열번호 2-4 및/또는 서열번호 18-20의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR); (f) 서열번호 10-12 및/또는 서열번호 26-28의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR); 및 (g) 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 서열을 보유하는 핵산에 의해 코딩된다.
다양한 관점에서, 항-TL1A 항체는 치료를 위해 대상체에게 투여된다. 다양한 다른 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 일련의 치료를 위해 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 항-TL1A 항체 및 제2 IBD 치료는 임의의 순서 또는 동시에 투여될 수 있다. 선택된 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 이전에 제2 IBD 치료를 받고 있는 환자에게 투여될 것이다. 특정의 다른 실시양태에서, 항-TL1A 항체 및 제2 IBD 치료는 실질적으로 동시에 또는 함께 투여될 것이다. 예를 들어, 대상체는 제2 IBD 치료를 이용하는 치료 과정을 수행하면서 항-TL1A 항체가 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 제2 IBD 치료를 이용하는 치료의 1년 이내에 투여될 것이다. 특정의 대안적인 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 제2 IBD 치료를 이용하는 임의의 치료의 10, 8, 6, 4, 또는 2개월 이내에 투여될 것이다. 특정의 다른 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 제2 IBD 치료를 이용하는 임의의 치료의 4, 3, 2, 또는 1주 이내에 투여될 것이다. 몇몇 실시양태에서, 항-TL1A 항체는 제2 IBD 치료를 이용하는 임의의 치료의 5, 4, 3, 2, 또는 1일 이내에 투여될 것이다. 또한, 추가로 2개의 치료는 대략 시간 또는 분 이내에(즉, 동시에) 대상체에게 투여될 수 있는 것으로 이해될 것이다.
다른 IBD 치료는 1) 항-염증제(예를 들어, 설파살라진 아줄피딘, 5-아미노살리실레이트, 메살라민, 아사콜, 리알다, 로와사, 카나사, 발살라지드 콜라잘 및 올살라진, 디펜툼과 같은 것이나, 이들로 제한되지 않는 아미노살리실레이트); 2) 코르티코스테로이드(예를 들어, 프레드니손 및 히드로코티손); 3) 면역계 억제제(예를 들어, 아자티오프린, 아자산, 이무란, 머캅토퓨린, 퓨리네톨, 퓨릭산, 시클로스포린, 젠그라프, 네오랄 및 산티뮨, 인플릭시맙, 레니케이드, 아달리무맙, 휴미라, 골리무맙, 및 심포니, 종양 괴사 인자(TNF)-알파 억제제(예를 들어, 인플릭시맙), 메토트렉세이트, 류마트렉스, 나탈리주맙, 타이스브리, 베돌리주맙, 엔티비오, 우스테키누맙 및 스텔라라; 4) 항생제(예를 들어, 메트로니다졸, 플라질, 시프로플록사신, 시프로); 5) 항-설사약(예를 들어, 섬유 보충제-메타무실 또는 시트루셀) 또는 로페라미드; 6) 진통제(예를 들어, 타이레놀, 이부프로펜, 나프록센 나트륨 및 디클로페낙 나트륨); 및 7) 수술(예를 들어, 결장의 제거, 부분적인 소화관 제거, 결장 절제, 대장 절제 및/또는 협착성형술)을 포함하나, 이들로 제한되는 것은 아니다. 몇몇 실시양태에서, 이들 IBD 치료는 항-TL1A 항체와 병용하여 투여될 수 있다. 항체를 이용하는 치료는 IBD 치료의 투여 이전에, 동시에 또는 이후에 수행할 수 있다. 병용 투여는 단일 약학 제제 또는 별개의 제제로 동시 투여, 또는 순서대로 투여되나 일반적으로 일정 시간 내에 투여되어 모든 활성 제제가 그들의 생물학적 활성을 동시에 나타낼 수 있도록 하는 연속 투여를 포함할 수 있다. 또한, 그러한 IBD 치료를 위한 임의의 투여 스케줄이 전문의의 결정에 의해 사용될 수도 있다.
몇몇 실시양태에서, 제2 IBD 치료는 항체를 포함한다. 따라서, 치료는 본 출원의 항체와, 종양 괴사 인자(TNF)-알파(이들로 제한되지 않음)와 같은 추가의 IBD-관련 항원에 대한 다른 항체의 병용 투여를 포함할 수 있다. 병용 투여는 병용 투여는 단일 약학 제제 또는 별개의 제제로 동시 투여, 또는 순서대로 투여되나 일반적으로 일정 시간 내에 투여되어 모든 활성 제제가 그들의 생물학적 활성을 동시에 나타낼 수 있도록 하는 연속 투여를 포함할 수 있다.
키트
IBD(예를 들어, CD, UC 및/또는 MR-UC)를 치료하기 위한 키트가 추가로 제공된다. 키트는 본 출원에 기재된 방법을 수행하기 위해 사용될 수 있는 본 출원에 기재된 항체를 포함한다. 키트는 항-TL1A 항체를 투여함으로써 IBD, CD, UC 및/또는 MR-UC 환자에게 치료를 제공하는 본 발명의 방법을 실시하기 위해 유용하다. 키트는 본 발명의 조성물 중 적어도 하나를 포함하는 재료 또는 성분의 집합이다. 따라서, 몇몇 실시양태에서, 키트는 상기한 바와 같이 IBD, CD, UC 및/또는 MR-UC의 치료를 위한 항-TL1A 항체를 포함하는 조성물을 함유한다. 다른 실시양태에서, 키트는, 모든 컨트롤, 분석 수행을 위한 지시, 및 분석 및 결과 제시를 위해 필요한 임의의 소프트웨어를 포함하는. TL1A에 대한 검출 분석을 수행하기에 필요하고/하거나 충분한 모든 성분을 함유한다.
본 발명의 키트 내에 구성된 성분들의 정확한 속성은 그의 의도된 목적에 따라 달라진다. 예를 들어, 몇몇 실시양태는 IBD, CD, UC 및/또는 MR-UC를 치료하기 위한 목적으로 구성된다. 한 실시양태에서, 키트는 특히 포유류 대상체의 목적을 위해 구성된다. 다른 실시양태에서, 키트는 특히 인간 대상체를 치료하기 위한 목적으로 구성된다. 추가의 실시양태에서, 키트는 수의학적 용도, 예를 들어 농경용 가축, 가축, 및 실험용 동물을 포함하나 이들로 제한되지 않는 대상체의 치료를 위해 구성된다.
키트 내에 사용설명서가 포함될 수 있다. "사용설명서"는 전형적으로 IBD, CD, UC 및/또는 MR-UC를 치료 또는 경감하기 위한 것과 같은 소정의 결과를 나타내는 키트의 성분을 이용함에 있어서 사용되어야 하는 기법을 기재하는 가시적인 표현을 포함한다. 경우에 따라, 또한 키트는 다른 유용한 성분, 예를 들어 희석제, 완충제, 약학적으로 허용 가능한 담체, 주사기, 카테터, 어플리케이터, 피펫팅 또는 측정 도구, 붕대용 재료 또는 다른 유용한 용품을 함유하는데, 이는 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 인식될 것이다.
키트 내에 조립된 재료 또는 성분은, 그의 작동성 및 유용성을 보존하는 임의의 편리하고 적합한 방식으로 저장되어 의사에게 제공될 수 있다. 예를 들어, 성분은 용해, 탈수 또는 동결건조된 형태일 수 있고; 이들은 실온, 냉장 온도 또는 냉동 온도에서 제공될 수 있다. 성분은 전형적으로 적합한 포장재(들) 내에 함유된다. 본 출원에 사용된 바와 같이, 문구 "포장재"는 본 발명의 조성물 등과 같은, 키트의 내용물을 하우징하기 위해 사용된 하나 이상의 물리적인 구조체를 의미한다. 포장재는 바람직하게는 멸균되고, 오염물이 없는 환경을 제공하기 위해 널리 알려진 방법에 의해 구성된다. 키트에 사용된 포장재는 치료의 투여 및 유전자 발현 분석에서 통상적으로 사용되는 것들이다. 본 출원에 사용된 바와 같이, 용어 "포장"은 개개의 키트 성분을 유지할 수 있는 적합한 고형 매트릭스 또는 재료, 예를 들어 유리, 플라스틱, 종이, 호일 등을 의미한다. 따라서, 예를 들어 포장은 항-TL1A 항체 및/또는 TL1A에 대한 프라이머 및 프로브를 함유하는 본 발명의 조성물의 적합한 양을 함유하기 위해 사용된 유리 바이알 또는 미리 충전된 주사기일 수 있다. 포장재는 일반적으로 키트의 내용물과 목적 및/또는 그의 성분을 표시한 외부 라벨을 보유한다.
실시예
후술하는 실시예는 본 출원에 기재된 실시양태의 예시이고, 기재된 실시양태의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 특정 물질을 언급함에 있어서, 이는 예시를 목적으로 한 것이며, 제한하려는 의도는 없다. 당해 기술분야의 통상의 기술자는 창의적인 능력을 실시하지 않으면서, 또한 개시된 범위를 벗어나지 않으면서 균등한 수단 또는 반응물을 개발할 수 있다.
실시예 1
면역원의 생성 및 하이브리도마 생성을 위한 면역화 프로토콜
점 돌연변이 C66S(전장 단백질의 선도 메티오닌으로부터 카운트한 바와 같이)를 보유하고, 및 선도 57개의 아미노산이 결여되어 있는 재조합 TL1A 단백질은 이. 콜라이에서 발현되었다. 재조합 TL1A 서열은 서열번호 33에 의해 나타낸다.
Figure pct00004
TL1A 발현 HEK293 세포주는 전장 TL1A 단백질에 대한 서열을 함유하는 렌티 바이러스 구성체를 이용하는 형질도입에 의해 생성되었다. 이 세포주는 단백질의 막 결합형 또는 분비형 둘 다를 발현한다(각각 유동 세포분석법 및 ELISA 기반 방법에 의해 확인된 바와 같이). HEK293 세포주에 의해 발현된 TL1A의 서열은 서열번호 34에 의해 나타낸다.
Figure pct00005
마우스는 재조합 단백질 및 TL1A 발현 세포주 둘 다를 이용하는 다수 라운드의 면역화에 의해 면역화되었다. 이 방법은 1차 면역화 또는 두 라운드의 부스터를 포함한다. 두 그룹의 동물은 면역화되고, 그룹 간에 일차 및 부스터 면역원을 스와핑하였다: 그룹 1: 재조합 TL1A 단백질을 이용하는 1차 면역화 및 TL1A 발현 세포주를 이용하는 부스트; 및 그룹 2: TL1A 발현 세포주를 이용하는 1차 면역화 및 재조합 TL1A 단백질을 이용하는 부스트. 마우스로부터 제거된 B 세포는 5C3D11 및 9E12E5 항체를 발현하는 하이브리도마를 생성하기 위해 골수종 세포와 융합되었다.
하이브리도마 5C3D11의 단일 클론 항체 서열결정
총 RNA는 동결 하이브리도마 세포로부터 추출하고, 및 cDNA는 RNA로부터 합성되었다. 이어서, PCR이 수행되어 항체의 가변부(중쇄 및 경쇄)를 증폭하고, 이어서 별도로 표준 클로닝 벡터 내로 클로닝되고, 서열결정되었다.
재료 및 방법
사용된 재료는 하이브리도마 세포, TRIzol® 시약(Ambion, 카탈로그 번호: 15596-026), 및 PrimeScriptTM 1st 스트랜드 cDNA 합성 키트(Takara, 카탈로그 번호: 6110A)를 포함한다.
총 RNA 추출 및 역전사 폴리머라아제 연쇄 반응(RT- PCR )
총 RNA는 TRIzol® 시약의 테크니컬 매뉴얼에 따라 하이브리도마 세포로부터 단리되었다. 총 RNA는 아가로즈 겔 전기영동으로 분석되었다.
총 RNA는 PrimeScriptTM 1st 스트랜드 cDNA 합성 키트의 테크니컬 매뉴얼에 따라 아이소토프-특이적인 항-센스 프라이머 또는 유니버셜 프라이머를 이용하여 cDNA로 역전사되었다. VH 및 VL의 항체 단편은 GenScript의 RACE의 표준 운용 절차에 따라 증폭되었다.
항체 유전자의 클로닝 , 스크리닝 및 서열결정
증폭된 항체 단편은 표준 분자 클로닝 절차를 이용하여 표준 클로닝 벡터 내로 별도로 클로닝되었다.
콜로니 PCR 스크리닝은 정확한 크기의 인서트를 보유하는 클론을 확인하기 위해 수행되었다. 정확한 크기의 인서트를 보유하는 5개 이상의 단일 콜로니는 각각의 항체 단편에 대해 서열결정되었다.
결과 및 분석
샘플의 단리된 총 RNA는, 도 1에 나타낸 바와 같이, 1.5% 아가로즈/GelRedTM 겔 상에서 DNA 마커인 마커 III(TIANGEN, 카탈로그 번호 : MD103) 옆에서 런닝되었다.
각각의 샘플의 PCR 생성물 4 ㎕는, 도 2 에 나타낸 바와 같이, 1.5% 아가로즈/GelRedTM 겔 상에서 DNA 마커인 마커 III(TIANGEN, 카탈로그 번호 : MD103) 옆에서 런닝되었다. PCR 생성물은 정제되고, 추가 사용 때까지 -20℃에 저장되었다.
서열결정 결과 및 분석
정확한 VH 및 VL 인서트 크기를 보유하는 5개의 단일 콜로니는 서열결정이 의뢰되었다. 5개의 상이한 클론의 VH 및 VL 유전자는 거의 동일한 것으로 확인되었다. 중쇄, 경쇄 및 CDR 영역에 대한 DNA 및 아미노산 서열은 서열번호 1-16(참조: 표 2)에 나타내고, 이는 항-TL1A 항체 5C3D11에 상응한다.
[표 2]
5C3D11에 대한 뉴클레오티드 및 아미노산 서열
Figure pct00006
Figure pct00007
하이브리도마 9E12E5의 단일 클론 항체 서열결정
총 RNA는 동결 하이브리도마 세포로부터 추출되고, 하이브리도마 세포 및 cDNA는 RNA로부터 합성되었다. 이어서, PCR이 수행되어 항체의 가변부(중쇄 및 경쇄)가 증폭되고, 이어서 별도로 표준 클로닝 벡터 내로 클로닝되고, 서열결정되었다.
재료 및 방법
사용된 재료는 하이브리도마 세포; TRIzol® 시약(Ambion, 카탈로그 번호: 15596-026); 및 PrimeScriptTM 1st 스트랜드 cDNA 합성 키트(Takara, 카탈로그 번호: 6110A)를 포함한다.
총 RNA 추출 및 역전사 폴리머라아제 연쇄 반응(RT- PCR )
총 RNA는 TRIzol® 시약의 테크니컬 매뉴얼에 따라 하이브리도마 세포로부터 단리되었다. 총 RNA는 아가로즈 겔 전기영동으로 분석되었다.
총 RNA는 PrimeScriptTM 1st 스트랜드 cDNA 합성 키트의 테크니컬 매뉴얼에 따라 아이소토프-특이적인 항-센스 프라이머 또는 유니버셜 프라이머를 이용하여 cDNA로 역전사되었다. VH 및 VL의 항체 단편은 GenScript의 RACE의 표준 운용 절차에 따라 증폭되었다.
항체 유전자의 클로닝 , 스크리닝 및 서열결정
증폭된 항체 단편은 표준 분자 클로닝 절차를 이용하여 표준 클로닝 벡터 내로 별도로 클로닝되었다.
콜로니 PCR 스크리닝은 정확한 크기의 인서트를 보유하는 클론을 확인하기 위해 수행되었다. 정확한 크기의 인서트를 보유하는 5개 이상의 단일 콜로니는 각각의 항체 단편에 대해 서열결정되었다.
결과 및 분석
샘플의 단리된 총 RNA는, 도 3에 나타낸 바와 같이, 1.5% 아가로즈/GelRedTM 겔 상에서 DNA 마커인 마커 III(TIANGEN, 카탈로그 번호 : MD103) 옆에서 런닝되었다.
각각의 샘플의 PCR 생성물 4 ㎕는, 도 4에 나타낸 바와 같이, 1.5% 아가로즈/GelRedTM 겔 상에서 DNA 마커인 마커 III(TIANGEN, 카탈로그 번호 : MD103) 옆에서 런닝시켰다. PCR 생성물은 정제되고, 추가 사용 때까지 -20℃에 저장되었다.
서열결정 결과 및 분석
정확한 VH 및 VL 인서트 크기를 보유하는 5개의 단일 콜로니는 서열결정이 의뢰되었다. 5개의 상이한 클론의 VH 및 VL 유전자는 거의 동일한 것으로 확인되었다. 중쇄, 경쇄 및 CDR 영역에 대한 DNA 및 아미노산 서열은 서열번호 17-32(참조: 표 3)에 나타내고, 이는 항-TL1A 항체 9E12E5에 상응한다.
[표 3]
9E12E5에 대한 뉴클레오티드 및 아미노산 서열
Figure pct00008
Figure pct00009
실시예 2
중쇄 가변부(표 4) 및 경쇄 가변부(표 5)에 대한 BLASTP 2.2.32+를 이용하는 2개의 항체 서열의 정렬 비교.
[표 4]
중쇄 가변부의 BLAST 분석
Figure pct00010
[표 5]
경쇄 가변부의 BLAST 분석
Figure pct00011
실시예 3
항-인간 TL1A 단일 클론 항체 9E12E5 및 5C3D11은 시험관 내에서 인간 TL1A의 활성을 중화한다. IFN-γ 생성에 대한 TL1A 항체의 효과가 평가되었고, TL1A 항체 둘 다는 도 5에 나타낸 바와 같이 TL1A 유도된 IFN-η 생성의 억제를 입증한다. MSD 플레이트는 뮤린 TL1A로 코팅되었고, 여러 가지 농도의 5C3D11 또는 9E12E5와 함께 항온처리되어, 도 6에 나타낸 바와 같이, 뮤린 TL1A를 인식할 수 있는 상기 항체들의 능력에 대해 평가되었다. 인간 TL1A는 양성 대조군으로서 포함되었다. 5C3D11은 농도 의존적인 방식으로 뮤린 TL1A를 인식한다. 5C3D11 및 9E12E5 항체 둘 다의 결합 프로필은 TL1A 형질감염된 HEK293 세포주를 이용하여 평가되었고, 및 형질전환되지 않은 부계 HEK293 세포주와 비교되었다. TL1A 발현 HEK293 세포 내의 항-TL1A 항체의 형광 염색은 도 7에 나타낸 바와 같이 형질전환되지 않은 부계 HEK293 세포와 비교되었다. 항-TL1A 항체에 대한 결합 친화도는 표 6에 도시된 해리 상수로 비아코아(Biacore)에 의해 측정되었다.
[표 6]
항-TL1A 항체에 대한 결합 친화도 값
Figure pct00012
실시예 4
대장염의 동물 모델에서 항-TL1A 항체의 효능이 평가된다.
항-TL1A 항체는 디- 또는 트리-니트로벤젠설폰산(D/TNBS) 또는 옥사졸론의 직장내 투여에 의해 유도된 급성 대장염, 및 음용수 중 DSS의 투여 또는 CD45RBhi T 세포의 전달에 의해 유도된 만성 대장염의 설치류 모델에서 테스트된다. DNBS 및 옥사졸론은 국소화된 궤양 및 염증을 유도한다. DSS 투여는 부식성 장애 및 염증 침윤을 특징으로 하는 장관의 강한 일반화된 염증을 유도한다. 이들 모든 모델의 증상은 설사, 잠혈, 체중 감소 및 경우에 따라 직장탈출을 포함한다.
예방 모델에서, 항체 치료는 대장염 유도 화합물의 투여 개시 시에 시작한다. 치료 모델에서, 항체 치료는 유도를 개시하고 며칠 후에 시작한다. 중량, 대변 일관성 및 잠혈에 대한 영향뿐만 아니라 상피 보전 및 염증 침윤의 정도에 대한 현미경 영향이 결정된다. 매일 임상 스코어링은 질병 활성 지수(DAI) 스코어를 부여하는 잠혈의 존재 및 대변 일관성에 기초하여 수행된다.
실시예 5
1상 임상 시험은 크론병을 보유하는 대상체에서 항-TL1A 항체의 안전성, 용인성, 약물동력학 및 약력학을 평가하기 위해 수행된다.
단일 상승 투여량(SAD) 암(arm): 각 군 내의 대상체(대상체는 위험 변이체의 존재 또는 부재에 기초하여 그룹화된다)에게는 단일 투여량의 항체 또는 플라시보가 투여된다. 예시적은 투여량은 1, 3, 10, 30, 100, 300, 600 및 800 mg의 항체이다. 안전성 모니터링 및 PK 평가는 선결 시간 동안 수행된다. PK 데이터의 평가에 기초하고, 및 항체가 잘 용인되는 것으로 간주되는 경우, 동일한 그룹 또는 건강한 대상체의 그룹 내에서 투여량을 증가시킨다. 투여량 증가는, 미리 정의된 최대 노출에 이르지 않거나 또는 용인할 수 없는 부작용이 명백해지지 않는 경우, 최대 투여량이 얻어질 때까지 계속한다.
다중 상승 투여량(MAD) 암: 각 군 내의 대상체(대상체는 위험 변이체의 존재 또는 부재에 기초하여 그룹화된다)에게는 단일 투여량의 항체 또는 플라시보가 투여된다. 투여량 레벨 및 투여 간격은 SAD 데이터로부터 안전하다고 예상되는 것으로 선택된다. 투여량 레벨 및 투여 빈도는 적절한 안전성 파라미터가 모니터링될 수 있는 며칠 동안 정상 상태에서 유지되는 전신 순환 내의 치료적 약물 레벨을 달성하기 위해 선택된다. 샘플은 수집되고 PK 프로필을 결정하기 위해 분석된다.
포함 기준: 임신 가능성이 없는 연령 18세 및 55세 사이의 건강한 대상체. 건강은 상세한 병력, 혈압과 맥박수 측정, 12 유도 심전도 및 임상검사를 포함하는 전체 신체검사에 의해 확인된 임상적으로 관련성이 있는 이상이 없는 것으로 정의된다. 임신 가능성이 없는 여성 대상체는 후술하는 조건 중 적어도 하나를 충족하여야 한다: (1) 선택적인 병리적인 또는 생리적인 원인 없이 적어도 12개월의 연속되는 기간 동안 규칙적인 월경의 중단; 및 폐경기 여성에 대한 실험실 참조 범위 내의 혈청 여포 자극 호르몬(FSH) 레벨을 보유하는 것으로 정의되는, 획득된 폐경 상태; (2) 문서로 기록된 자궁절제술 및/또는 양측 난소난관절제술을 받음; (3) 의학적으로 확인된 난소기능장애를 보유함. 모든 다른 여성 대상체(난관 결찰이 있는 여성 및 문서로 기록된 자궁절제술, 양측 난소난관절제술 및/또는 난소기능장애를 보유하지 않는 여성을 포함)는 임신 가능성이 있는 것으로 간주될 것이다. 7.5 내지 30.5 kg/m2의 체질량지수(BMI); 및 >50 kg(110 lb)의 총 체중. 대상체(또는 법률 대리인)가 연구의 모든 적합한 관점에 대한 정보가 제공되었음을 나타내는, 개인적으로 서명하고 일자가 기록된 동의서의 증거.
건강한 대상체의 2개의 그룹이 선택된다: 위험 변이체의 존재가 크론병에 대한 감수성의 증가와 관련되는 위험 변이체를 보유하는 대상체, 및 위험 변이체가 결여된 대상체.
제외 기준: 임상적으로 유의미한 혈액, 신장, 내분비, 폐, 위장, 심혈관, 간, 정신의학, 신경학, 또는 알레르기성 질병(약물 알레르기를 포함하지만, 투여 시 치료되지 않은, 증상이 없는, 계절성 알레르기는 제외됨)의 증거 또는 병력. 후술하는 혈청학적 테스트 중 임의의 것에 대한 병력 또는 현재의 양성 결과를 가진 대상체: B형 간염 표면 항원(HBsAg), B형 간염 코어 항체(HBcAb), 항-C형 간염 항체(HCV Ab) 또는 인간 면역결핍 바이러스(HIV). 치료 약물에 대한 알레르기 반응 또는 과민증 반응의 병력이 있는 대상체. 30일(또는 로컬 요건에 의해 결정된 바와 같이, 어느 것이나 더 긴 쪽) 또는 연구 약물의 제1 투여 이전의 생물의약품에 대해 5회의 반감기 또는 180일 내 임상시험 약물로 치료. 임신한 여성; 수유중인 여성; 및 임신 가능성이 있는 여성.
1차 결과 측정치: 투여량 제한의 정도 또는 불내성 치료 관련 유해 사상(AE)[타임 프레임:　12주]. 치료 신생 AE(TEAE)의 정도, 중증도 및 인과관계 및 치료 신생 유해 사상에 기인하는 탈락[타임 프레임:　12주]. 비정상의 실험실 탐측의 정도 및 크기[타임 프레임:　12주]. 비정상 및 생명 징후, 혈압(BP) 및 심전도(ECG) 파라미터에서 임상적으로 관련된 변화[타임 프레임:　12주].
2차 결과 측정치:
단일 상승 투여량: 관찰된 최대 혈장 농도(Cmax)[타임 프레임:　12주]. 단일 상승 투여량: 관찰된 최대 혈장 농도에 이르는 시간(Tmax)[타임 프레임:　12주]. 단일 상승 투여량: 0일에서 14일까지의 혈장 농도-시간 프로필 아래 면적(AUC14일)[타임 프레임:　12주]. 단일 상승 투여량: 0시간으로부터 무한 시간으로 외삽된 혈장 농도-시간 프로필 아래 면적(AUCinf)[타임 프레임:　12주]. 단일 상승 투여량: 0시간으로부터 최종의 정량화할 수 있는 농도의 시간까지의 혈장 농도-시간 프로필 아래 면적(AUClast)[타임 프레임:　12주]. 단일 상승 투여량: 투여량 정규화된 최대 혈장 농도(Cmax[dn])[타임 프레임:　12주]. 단일 상승 투여량: 0시간으로부터 무한 시간으로 외삽된 혈장 농도-시간 프로필 아래 투여량 정규화된 면적(AUCinf[dn])[타임 프레임:　12주]. 단일 상승 투여량: 0시간으로부터 최종의 정량화할 수 있는 농도의 시간까지의 혈장 농도-시간 프로필 아래의 투여량 정규화된 면적(AUClast[dn])[타임 프레임:　12주]. 단일 상승 투여량: 혈장 붕괴 반감기(t1/2)[타임 프레임:　12주]. 혈장 붕괴 반감기는 혈장 농도가 1/2로 감소되는 동안 측정된 시간이다. 단일 상승 투여량: 평균 체류 시간(MRT)[타임 프레임:　12주]. 단일 상승 투여량: 정상 상태에서 분배의 부피(Vss)[타임 프레임:　6주]. 분배의 부피는 약물의 총량이 균일하게 분배되어 약물의 원하는 혈중 농도를 생성하는데 필요한 이론적인 부피로 정의된다. 정상 상태에서 분배의 부피(Vss)는 정상 상태에서 분배의 겉보기 부피이다. 단일 상승 투여량: 전신 클리어런스(CL)[타임 프레임:　6주]. CL은 약물이 신체로부터 제거되는 속도의 정량적인 측정치이다.
다중 상승 투여량 제1 투여량: 관찰된 최대 혈장 농도(Cmax)[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 제1 투여량: 관찰된 최대 혈장 농도에 이르는 시간(Tmax)[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 제1 투여량: 0시간으로부터 τ 시간까지의 혈장 농도-시간 프로필 아래 면적, τ=2주의 투여 간격(AUCτ)[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 제1 투여량: 투여량 정규화된 최대 혈장 농도(Cmax[dn])[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 제1 투여량: 0시간으로부터 τ 시간까지의 혈장 농도-시간 프로필 아래 투여량 정규화된 면적, τ=2주의 투여 간격(AUCτ[dn])[타임 프레임:　12주]. 혈장 붕괴 반감기(t1/2)[타임 프레임:　12주]. 혈장 붕괴 반감기는 혈장 농도가 1/2로 감소되는 동안 측정된 시간이다. 다중 상승 투여량 제1 투여량: 평균 체류 시간(MRT)[타임 프레임:　12주]. 분배의 겉보기 부피(Vz/F)[타임 프레임:　12주]. 분배의 부피는 약물의 총량이 균일하게 분배되어 약물의 원하는 혈중 농도를 생성하는데 필요한 이론적인 부피로 정의된다. 경구 투여 후 분배의 겉보기 부피(Vz/F)는 흡수된 분획에 의해 영향받는다. 다중 상승 투여량 제1 투여량: 정상 상태에서 분배의 부피(Vss)[타임 프레임:　12주]. 분배의 부피는 약물의 총량이 균일하게 분배되어 약물의 원하는 혈중 농도를 생성하는데 필요한 이론적인 부피로 정의된다. 정상 상태에서 분배의 부피(Vss)는 정상 상태에서 분배의 겉보기 부피이다. 다중 상승 투여량 제1 투여량: 겉보기 경구 클리어런스(CL/F)[타임 프레임:　12주]. 약물의 클리어런스는 약물이 대사되거나 또는 정상적인 생물학적 과정에 의해 제거되는 속도의 측정치이다. 경구 투여 후 얻어진 클리어런스(겉보기 경구 클리어런스)는 흡수된 투여량의 분획에 의해 영향을 받는다. 클리어런스는 집단 약물동력학(PK) 모델링으로부터 추산된다. 약물 클리어런스는 약물이 혈액으로부터 제거되는 속도의 정량적인 측정치이다. 다중 상승 투여량 제1 투여량: 전신 클리어런스(CL)[타임 프레임:　12주]. CL은 약물이 신체로부터 제거되는 속도의 정량적인 측정치이다.
다중 상승 투여량 다중 투여량: 관찰된 최대 혈장 농도(Cmax)[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 관찰된 최대 혈장 농도에 이르는 시간(Tmax)[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 0시간으로부터 τ 시간까지의 혈장 농도-시간 프로필 아래 면적, τ=2주의 투여 간격(AUCτ)[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 투여량 정규화된 최대 혈장 농도(Cmax[dn])[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 0시간으로부터 τ 시간까지의 혈장 농도-시간 프로필 아래 투여량 정규화된 면적, τ=2주의 투여 간격(AUCτ[dn])[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 혈장 붕괴 반감기(t1/2)[타임 프레임:　12주]. 혈장 붕괴 반감기는 혈장 농도가 1/2로 감소되는 동안 측정된 시간이다. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 분배의 겉보기 부피(Vz/F)[타임 프레임:　12주]. 분배의 부피는 약물의 총량이 균일하게 분배되어 약물의 원하는 혈중 농도를 생성하는데 필요한 이론적인 부피로 정의된다. 경구 투여 후 분배의 겉보기 부피(Vz/F)는 흡수된 분획에 의해 영향을 받는다. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 정상 상태에서 분배의 부피(Vss)[타임 프레임:　12주]. 분배의 부피는 약물의 총량이 균일하게 분배되어 약물의 원하는 혈중 농도를 생성하는데 필요한 이론적인 부피로 정의된다. 정상 상태에서 분배의 부피(Vss)는 정상 상태에서 분배의 겉보기 부피이다.
다중 상승 투여량 다중 투여량: 겉보기 경구 클리어런스(CL/F)[　타임 프레임:　12주]. 약물의 클리어런스는 약물이 대사되거나 또는 정상적인 생물학적 과정에 의해 제거되는 속도의 측정치이다. 경구 투여 후 얻어진 클리어런스(겉보기 경구 클리어런스)는 흡수된 투여량의 분획에 의해 영향을 받는다. 클리어런스는 집단 약물동력학(PK) 모델링으로부터 추산된다. 약물 클리어런스는 약물이 혈액으로부터 제거되는 속도의 정량적인 측정치이다. 다중 상승 투여량 제1 투여량: 전신 클리어런스(CL)[타임 프레임:　12주]. CL은 약물이 신체로부터 제거되는 속도의 정량적인 측정치이다. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 관찰된 최소 혈장 트로프 농도(Cmin)[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 정상 상태에서 평균 농도(Cav)[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 관찰된 축적률(Rac)[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 다중 투여량: 최고(피크) 대 최저(트로프) 변동(PTF)[타임 프레임:　12주]. 다중 상승 투여량 추가 파라미터: 상응하는 정맥내 투여량에서 피하 투여에 대한 생물학적 이용가능성(F)의 추산[타임 프레임:　12주]. 단일 상승 투여량 및 다중 상승 투여량에 대한 면역원성: 항-약물 항체(ADA)의 개발[타임 프레임:　12주].
실시예 6
1b상 오픈 라벨 임상시험은 크론병과 관련된 위험 변이체를 보유하는 환자에 대한 본 출원의 항-TL1A 항체의 영향을 평가하기 위해 수행된다.
암(arm): 존재하는 것이 크론병에 대한 민감성의 증가와 관련된 위험 변이체에 대해 양성인 10명의 환자에게 항체가 투여된다. 위험 변이체에 대해 음성인 5-10명의 환자에게 항체가 투여된다. 환자는 실시간으로 모니터링된다. 중앙 통제(central ready)의 내시경술 및 생체 검사가 이용되는데, 치료 시점 및 종말점은 판독자가 모르게 한다.
포함 기준: 대상체의 2개의 그룹이 선택된다: 존재하는 것이 크론병에 대한 민감성의 증가와 관련된 위험 변이체를 보유하는 대상체, 및 위험 변이체가 결여된 대상체.
1차 결과 측정치: 크론병의 단순 내시경 스코어(SESCD), 크론병 활성 지수(CDAI), 및 환자 보고 결과(PRO). 위험 변이체 양성 그룹이 베이스라인으로부터 50% 감소를 나타내는 경우, 2a상 임상시험이 수행된다.
포함 기준: PRO 진입 기준: 2 이상의 복통 스코어 및/또는 4 이상의 대변 빈도 스코어. 1차 결과는 0 또는 1의 통증 스코어 및 3 또는 그 미만의 대변 빈도 스코어일 것이고, 베이스라인으로부터 악화되지 않을 것이다. 내시경술 진입 기준: 스코어 4 및 결장이 포함되는 경우 스코어 6에서 SESCD 회장만 진입. 1차 내시경 결과는 평균 SESCD의 40-50% 델타이다.
실시예 7
2a상 임상시험은 크론병과 관련된 위험 변이체를 보유하는 환자에 대한 본 출원의 항-TL1A 항체의 영향을 평가하기 위해 수행된다.
암(arm): 암(항체 및 플라시보 암)당 40명의 환자는 12주 동안 항체 또는 플라시보로 치료된다. 각 그룹으로부터 20명의 환자가 1차 결과에서 플라시보 그룹과 치료된 그룹 사이에서 40-50% 델타(SESCD, CDAI, 및 PRO에서 베이스라인으로부터 50% 감소)를 찾기 위해 가장 높은 투여량으로 치료된 후, 중간 분석이 수행된다.
1차 결과 측정치: 크론병의 단순 내시경 스코어(SESCD), 크론병 활성 지수(CDAI), 및 환자 보고 결과(PRO).
포함 조건: PRO 진입 기준: 2 이상의 복통 스코어 및/또는 4 이상의 대변 빈도 스코어. 1차 결과는 0 또는 1의 통증 스코어 및 3 또는 그 미만의 대변 빈도 스코어일 것이고, 베이스라인으로부터 악화되지 않을 것이다. 내시경술 진입 기준: 스코어 4 및 결장이 포함되는 경우 스코어 6에서 SESCD 회장만 진입. 1차 내시경 결과는 평균 SESCD의 40-50% 델타이다.
실시예 8
인간화 항-TL1A 항체가 생성되었다. 개략적으로, 5C3D11의 CDR 및 인간 생식선 항체 유래의 프레임웍 영역을 포함하는 항체의 라이브러리가 생성되었다. 라이브러리는 파지 디스플레이를 이용하여 스크리닝하여 인간 TL1A(hTL1A) 항원에 대한 친화성을 보유하는 항체를 확인하였다. 60개의 클론은 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 이용하여 친화성 랭킹되었다. 5개의 항체는 친화성 데이터 및 프레임웍 서열의 평가에 기초하여 선택되었다: AS12816, AS12819, AS12823, AS12824, 및 AS12825. 선택된 클론에 대한 서열은 표 7(VH) 및 표 8(VL)에 나타낸다. 5개의 선택된 클론에 대한 친화성 데이터는 표 9에 나타낸다. 5개의 선택된 클론 중 4개(AS12816, AS12819, AS12823, 및 AS12824)는 다중-사이클 친화성 측정치에 대해 선택되었는데, 상응하는 데이터는 표 10에 나타낸다.
[표 7]
인간화 항-TL1A 클론: 중쇄 서열.
Figure pct00013
[표 8]
인간화 항-TL1A 클론: 경쇄 서열.
Figure pct00014
[표 9]
인간화 항-TL1A 클론: 경쇄 돌연변이.
Figure pct00015
Figure pct00016
[표 10]
SPR을 이용하는 hTL1A와 인간화 항체 사이의 다중-사이클 친화도 측정치.
Figure pct00017
실시예 9
표면 플라즈몬 공명(SPR)을 이용하는 결합 경쟁 분석은 테스트 항-TL1A 항체가 본 출원에 기재된 임의의 항-TL1A 항체와 같이 TL1A 상의 동일한 영역에 결합하는지 여부를 평가하기 위해 수행된다. 본 실시예에서, 참조 항체는 서열번호 6-8의 중쇄 CDR 및 서열번호 14-16의 경쇄 CDR을 포함한다.
참조 항체는 비아코아 2000 또는 3000 장비를 이용하여 카르복시메틸화된 덱스트란 센서 칩 표면(CMS) 상에 커플링되는 아민에 의해 직접 고정화된다. 8.1 mM Na2HPO4, 1.47 mM KF2PO4, pH 7.2, 237 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 3.4 mM EDTA 및 0.01% 트윈 20(PBS-NET) 내에 10 mM로 희석된 재조합 가용성 인간 TL1A 또는 뮤린 TL1A는 적어도 100 반응 단위(RU)의 고정화된 항체 상에서 결합 레벨을 달성하기 위해 10 RI/분의 유속으로 약 1분 동안 주사된다. 이어서, 참조 항체는 TL1A 상에서 모든 가능한 결합 부위를 포화시키기 위해 5분 동안 30 nM로 주사된다. 이어서, PBS-NET 내의 테스트 항체 또는 대조군으로서 PBS-NET 단독은 5분 동안 30 nM로 주사된다. 테스트 항체가 제1 항체로 포화된 TL1A에 결합하는 경우, 이는 테스트 항체가 참조 항체와 비교하여 TL1A 상의 비경쟁 영역에 결합하는 것을 나타낸다. 테스트 항체가 포화된 TL1A에 결합하지 않는 경우, 이는 2개의 항체가 동일한 영역에 결합하거나, 또는 TL1A에 대한 결합을 경쟁하는 것을 나타낸다. 이 전략은 고정화된 테스트 항체 및 테스트 항체가 TL1A와 결합된 후에 주사된 참조 항체를 이용하여 반복될 수 있다. 각각의 사이클은 반복될 수 있다. 각각의 사이클의 말미에, 고정화된 항체 표면은 3M MgCl2의 30초 펄스에 의해 또는 0.1% TFA에 의해, 이어서 PBS-NET의 2회의 연속적인 펄스에 의해 재생된다. 모든 주사는 10 Hz의 수집율로 25℃에서 수행된다. 모든 센서그램은 대조 표면 및 완충액 주사 둘 다를 이용하여 이중으로 참조된다.
실시예 10
SPR을 이용하는 다른 결합 경쟁 분석은 테스트 항-TL1A 항체가 본 출원에 기재된 임의의 항-TL1A 항체와 같이 TL1A 상의 동일한 영역에 결합하는지 여부를 평가하기 위해 수행된다. 본 실시예에서, 참조 항체는 서열번호 6-8의 중쇄 CDR 및 서열번호 14-16의 경쇄 CDR을 포함한다.
참조 항체는 어레이를 가로질러 3개 또는 4개의 상이한 밀도로 커플링된 아민에 의해 SPR 칩에 고정화된다. TL1A 단백질은 경쟁 결합 실험 중 주사를 위한 적절한 농도 및 동역학 파라미터를 추산하기 위해 일련의 증가하는 농도로 주사된다.일단 결합 실험을 위한 최적 항원 농도가 결정되면, 재현 조건(전형적으로 간단한 낮은 pH 주사)은 결합 분석의 사이클 사이에서 재현을 위한 최적 조건을 확립하기 위해 평가된다.
결합은 프리-믹스(Pre-Mix) 접근법을 이용하여 수행되는데, 이때 적당한 농도의 TL1A가 어레이 상에 그 자체로 또는 포화 항체 농도(예를 들어, 30-50 ㎍/mL)로 테스트 항체에 미리 복합체화되어 주사된다. 분석은, 테스트 항체가 고정화되고, 참조 항체가 TL1A에 미리 복합체화되도록 수행할 수 있다. 고정화된 항체와는 독특한 영역에 결합하는 클론은 신호의 증가를 제공하지만, 경쟁적 클론은 항원 결합 신호를 감소시킬 것이다. 경쟁 분석은 모든 클론이 리간드 및 분석물 둘 다로서 테스트될 때까지 진행된다.
다양한 실시양태가 상세한 설명에 상술된다. 이들 설명은 상기 실시양태를 직접적으로 기재하지만, 통상의 기술자는 본 출원에 나타낸 및 기재된 특정 실시양태에 대한 변형 및/또는 변경을 인식할 수 있는 것으로 이해된다. 본 출원의 설명의 범위 내에 포함되는 임의의 그러한 변형 또는 변경은 본 출원에 포함되는 것으로 의도된다. 달리 구체적으로 언급하지 않으면, 명세서 및 특허청구범위의 단어 및 구는 적용 가능한 기술분야(들)의 통상의 기술자에게 일상적이고 익숙한 의미라는 것이 본 발명자들의 의도이다.
본 출원의 출원 시에 출원인에게 공지된 다양한 실시양태의 전술한 설명은 예시 및 설명의 목적으로 제시되고 의도된 것이다. 본 설명은 완전하도록 의도된 것도 아니며 개시된 정확한 형태로 제한하려는 의도도 아니며, 다수의 변형 및 변경이 상기 교시의 관점에서 가능하다. 기재된 실시양태는 원리 및 실질적인 적용을 설명하기 위한 것이고, 통상의 기술자는 경우에 따라 고려된 구체적인 용도에 적합하도록 다수의 변형을 동반하는 다양한 실시양태를 이용할 수 있다. 따라서, 본 출원은 개시된 특정 실시양태로 제한되지 않는다.
특정 실시양태를 개시하고 기재하였지만, 본 출원의 교시에 기초하여 상기 교시 및 그의 더 넓은 관점을 벗어나지 않는 변화 및 변경이 이루어질 수 있음은 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이고, 따라서 첨부된 특허청구의 범위는 그러한 모든 변화 및 변경을 그 범위 내에 포함하고, 이는 본 개시의 진정한 정신 및 범위 내에 있다. 본원 출원에서 일반적으로 사용된 용어는 "개방형" 용어로 의도된 것이다(예를 들어, 용어 "포함하는"은 "포함하지만 이들로 제한되지 않는"으로 해석되어야 하고, 용어 "보유하는"은 "적어도 보유하는"으로, 용어 "포함하다"는 "포함하지만 이들로 제한되지 않는" 등으로 해석되어야 한다.).
SEQUENCE LISTING <110> CEDARS-SINAI MEDICAL CENTER <120> NEUTRALIZING ANTI-TL1A MONOCLONAL ANTIBODIES <130> 52388-728.601 <140> <141> <150> 62/413,188 <151> 2016-10-26 <160> 49 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 405 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 1 atgaaatgca gctgggttat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60 gttcagctgc agcagtctgg ggcagaactt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc 120 tgcacagctt ctggcttcga cattcaagac acctatatgc actgggtgaa gcagaggcct 180 gaacagggcc tggagtggat tggaaggatt gatcctgcga gtggacatac taaatatgac 240 ccgaagttcc aggtcaaggc cactataaca acggacacat cctccaacac agcctacctg 300 cagctcagca gcctgacatc tgaggacact gccgtctatt actgttctag atcggggggc 360 ctacctgatg tctggggcgc agggaccacg gtcaccgtct cctca 405 <210> 2 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2 gacacctata tgcac 15 <210> 3 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 3 aggattgatc ctgcgagtgg acatactaaa tatgacccga agttccaggt c 51 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 4 tcggggggcc tacctgatgt c 21 <210> 5 <211> 135 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 5 Met Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly 1 5 10 15 Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Ile 35 40 45 Gln Asp Thr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Ser Gly His Thr Lys Tyr Asp 65 70 75 80 Pro Lys Phe Gln Val Lys Ala Thr Ile Thr Thr Asp Thr Ser Ser Asn 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ser Arg Ser 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tggagtccct 240 gatcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagagtggag 300 gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagtg gtaacccacg gacgttcggt 360 ggaggcacca agctggaaat caaa 384 <210> 10 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 10 agggccagct caagtgtaag ttacatgtac 30 <210> 11 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 11 gccacatcca acctggcttc t 21 <210> 12 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 12 cagcagtgga gtggtaaccc acggacg 27 <210> 13 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 13 Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser 1 5 10 15 Val Ile Met Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Pro Gly 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 17 atgggatgga gctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtga ctgcaggtgt ccactcccag 60 gttcacctgc agcagtctgg acctgaactg gtaaagcctg gggcttcagt gaagttgtcc 120 tgcaaggctt ctggctacac cttcacaaag tatgatataa actgggtgag gcagaggcct 180 gaacagggac ttgagtggat tggatggatt tttcctggag atggtagaac tgactacaat 240 gagaagttca agggtaaggc cacactgact acagacaaat cctccagcac agcctacatg 300 gaggtcagca ggctgacatc tgaggactct gctgtctatt tctgtgcaag atatggcccc 360 gctatggact actggggtca aggaacctca gtcaccgtcg cctca 405 <210> 18 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 18 aagtatgata taaac 15 <210> 19 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 19 tggatttttc ctggagatgg tagaactgac tacaatgaga agttcaaggg t 51 <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 20 tatggccccg ctatggacta 20 <210> 21 <211> 135 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 21 Met Gly Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val His Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Lys Tyr Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Arg Thr Asp Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Val Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110 Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Gly Pro Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 115 120 125 Thr Ser Val Thr Val Ala Ser 130 135 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 22 Lys Tyr Asp Ile Asn 1 5 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 23 Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Arg Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 24 Tyr Gly Pro Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 25 <211> 393 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 25 atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60 gttttgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120 tcttgcagat ctagtcagac cattgtacat agtaatggag acacctattt agactggttc 180 ctgcagaaac caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240 ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc 300 agagtggagg ctgaggatct gggagtttat tactgctttc aaggttcaca tgttccgtac 360 acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa 393 <210> 26 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 26 agatctagtc agaccattgt acatagtaat ggagacacct atttagac 48 <210> 27 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 27 aaagtttcca accgattttc t 21 <210> 28 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 28 tttcaaggtt cacatgttcc gtacacg 27 <210> 29 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 29 Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala 1 5 10 15 Ser Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val 20 25 30 Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Ile 35 40 45 Val His Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Leu Asp Trp Phe Leu Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys 100 105 110 Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys 130 <210> 30 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 30 Arg Ser Ser Gln Thr Ile Val His Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 32 Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr 1 5 <210> 33 <211> 194 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 33 Gln Leu Arg Ala Gln Gly Glu Ala Ser Val Gln Phe Gln Ala Leu Lys 1 5 10 15 Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr 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<213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 44 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Asn Pro Arg Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 45 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 6xHis tag <400> 45 His His His His His His 1 5 <210> 46 <211> 135 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 46 Met Gly Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val His Leu Gln Gln Ser 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Tyr Asp 65 70 75 80 Pro Lys Phe Gln Val Lys Ala Thr Ile Thr Thr Asp Thr Ser Ser Asn 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ser Arg Ser Gly Gly Leu Pro Asp Val Trp Gly Ala Gly 115 120 125 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 48 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 48 Ser Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val 1 5 10 15 Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Ile 20 25 30 Val His Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Leu Asp Trp Phe Leu Gln Lys Pro 35 40 45 Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70 75 80 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 100 105 110 Glu Ile Lys 115 <210> 49 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 49 Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala 1 5 10 15 Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val 20 25 30 Ser Tyr Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro 35 40 45 Trp Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val 65 70 75 80 Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Asn 85 90 95 Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105

Claims (30)

  1. 서열번호 6-8의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 14-16의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄를 포함하는, TL1A 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편.
  2. 서열번호 22-24의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30-32의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄를 포함하는, TL1A 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 단일 클론 항체, 키메라 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 결합된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디, 다중 특이성 항체, 이중 특이적(dual specific) 항체, 항-유전자형 항체, 이중 특이성(bispecific) 항체, 또는 이들의 조합인 항체 또는 항원 결합 단편.
  4. 치료 유효량의 제1항 또는 제2항의 항체 또는 항원 결합 단편, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  5. 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 치료 유효량의 제1항 또는 제2항의 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 의학적 불응성 궤양성 대장염, 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 방법.
  7. 제5항에 있어서, 대상체에게 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하기 이전에, 대상체는 TL1A를 과발현하는 것인 방법.
  8. 제5항에 있어서, 대상체는 염증성 장 질환과 관련된 위험 변이체를 포함하는 것인 방법.
  9. 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 30, 서열번호 31 및 서열번호 32로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 상보성 결정 영역을 포함하는 폴리펩티드.
  10. 서열번호 6-8의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 14-16의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 참조 항체와 동일한 인간 TL1A의 영역에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편.
  11. 제10항에 있어서, 참조 항체는 서열번호 5의 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 13의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  12. 서열번호 22-24의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 30-32의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 참조 항체와 동일한 인간 TL1A의 영역에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편.
  13. 제12항에 있어서, 참조 항체는 서열번호 21의 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 29의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  14. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 클론 항체, 키메라 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 결합된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디, 다중 특이성 항체, 이중 특이적 항체, 항-유전자형 항체, 이중 특이성 항체, 또는 이들의 조합인 항체 또는 항원 결합 단편.
  15. 치료 유효량의 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  16. 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 치료 유효량의 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 의학적 불응성 궤양성 대장염, 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 방법.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, 대상체에게 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하기 이전에, 대상체는 TL1A를 과발현하는 것인 방법.
  19. 제16항 또는 제17항에 있어서, 대상체는 염증성 장 질환과 관련된 위험 변이체를 포함하는 것인 방법.
  20. 서열번호 7을 갖는 펩티드를 포함하는 조성물.
  21. 제20항에 있어서, 서열번호 6, 8 및 14-16으로부터 선택된 하나 이상의 펩티드를 추가로 포함하는 조성물.
  22. 서열번호 23을 갖는 펩티드를 포함하는 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 서열번호 22, 24 및 30-32로부터 선택된 하나 이상의 펩티드를 추가로 포함하는 조성물.
  24. 염증성 장 질환을 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항의 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  25. 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 항-TL1A 항체를 투여하는 것을 포함하며, 대상체는 TNFSF15 유전자좌에서 하나 이상의 위험 변이체를 포함하고, 항-TL1A 항체는 서열번호 6-8의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 14-16의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인, 염증성 장 질환의 치료 방법.
  26. 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 항-TL1A 항체를 투여하는 것을 포함하며, 대상체는 TNFSF15 유전자좌에서 하나 이상의 위험 변이체를 포함하고, 항-TL1A 항체는 서열번호 22-24의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30-32의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인, 염증성 장 질환의 치료 방법.
  27. 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 항-TL1A 항체를 투여하는 것을 포함하며, 대상체는 TL1A를 과발현하고, 항-TL1A 항체는 서열번호 6-8의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 14-16의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인, 염증성 장 질환의 치료 방법.
  28. 염증성 장 질환의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 항-TL1A 항체를 투여하는 것을 포함하며, 대상체는 TL1A를 과발현하고, 항-TL1A 항체는 서열번호 22-24의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30-32의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인, 염증성 장 질환의 치료 방법.
  29. 제25항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TL1A 항체는 단일 클론 항체, 키메라 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 이황화 결합된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 디아바디, 다중 특이성 항체, 이중 특이적 항체, 항-유전자형 항체, 이중 특이성 항체, 또는 이들의 조합인 방법.
  30. 제25항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 장 질환은 크론병, 궤양성 대장염, 의학적 불응성 궤양성 대장염, 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 방법.
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