JP6381093B2 - 卵アレルギーの抗原 - Google Patents
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Description
(1)(1A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、卵に対するアレルギーの抗原である、以下の(1A−a)〜(1A−e)のいずれかのタンパク質:
(1A−a)配列番号2において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1A−b)配列番号2で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1A−c)配列番号1において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1A−d)配列番号1で示される塩基配列と同一性が70%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(1A−e)配列番号1で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(1B)配列番号2〜11からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(2)(2A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、卵に対するアレルギーの抗原である、以下の(2A−a)〜(2A−e)のいずれかのタンパク質:
(2A−a)配列番号13において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2A−b)配列番号13で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2A−c)配列番号12において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2A−d)配列番号12で示される塩基配列と同一性が70%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(2A−e)配列番号12で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(2B)配列番号9〜11、13、14、及び16からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(3)(3A)ビテロゲニン−1(Vitellogenin-1)の中央部分若しくはリポビテリン−1(lipovitelin-1)のC末端部分を含むタンパク質、又はそれらの変異体であって、卵に対するアレルギーの抗原である、以下の(3A−a)〜(3A−e)のいずれかのタンパク質:
(3A−a)配列番号18において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質;
(3A−b)配列番号18で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(3A−c)配列番号17において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;
(3A−d)配列番号17で示される塩基配列と同一性が70%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(3A−e)配列番号17で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(3B)配列番号18〜45からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
を抗原として含む、前記診断キット。
(i)対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はIgE抗体が含まれる溶液である;
(ii)対象から得られた試料中のIgE抗体と当該抗原との結合を検出する;
(iii)対象のIgE抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が卵アレルギーであることの指標が提供される;
を含み、ここで当該抗原は、上記[1]において(1)〜(3)として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法。
(4)(4A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)を含むタンパク質又はその変異体であって、卵に対するアレルギーの抗原である、以下の(4A−a)〜(4A−e)のいずれかのタンパク質:
(4A−a)配列番号47において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4A−b)配列番号47で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4A−c)配列番号46において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4A−d)配列番号46で示される塩基配列と同一性が70%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(4A−e)配列番号46で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(4B)配列番号47〜57からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(5)(5A)ビテロゲニン−2プレカーサー(Vitellogenin-2 precursor)を含むタンパク質又はその変異体であって、卵に対するアレルギーの抗原である、以下の(5A−a)〜(5A−e)のいずれかのタンパク質:
(5A−a)配列番号59において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質;
(5A−b)配列番号59で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(5A−c)配列番号58において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;
(5A−d)配列番号58で示される塩基配列と同一性が70%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(5A−e)配列番号58で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(5B)配列番号59〜104からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(6)(6A)ビテロゲニン−2プレカーサー(Vitellogenin-2 precursor)又はその変異体であって、卵に対するアレルギーの抗原である、以下の(6A−a)〜(6A−e)のいずれかのタンパク質:
(6A−a)配列番号106において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質;
(6A−b)配列番号106で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(6A−c)配列番号105において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;
(6A−d)配列番号105で示される塩基配列と同一性が70%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(6A−e)配列番号105で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(6B)配列番号106〜150からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(7)(7A)アポリポプロテインBプレカーサー(Apolipoprotein B precursor)又はその変異体であって、卵に対するアレルギーの抗原である、以下の(7A−a)〜(7A−e)のいずれかのタンパク質:
(7A−a)配列番号152において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質;
(7A−b)配列番号152で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(7A−c)配列番号151において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;
(7A−d)配列番号151で示される塩基配列と同一性が70%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(7A−e)配列番号151で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(7B)配列番号152〜235からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(8)(8A)アポリポプロテインBプレカーサー(Apolipoprotein B precursor)又はその変異体であって、卵に対するアレルギーの抗原である、以下の(8A−a)〜(8A−e)のいずれかのタンパク質:
(8A−a)配列番号237において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質;
(8A−b)配列番号237で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(8A−c)配列番号236において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;
(8A−d)配列番号236で示される塩基配列と同一性が70%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(8A−e)配列番号236で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(8B)配列番号237〜249からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(9)(9A)アポリポプロテインBプレカーサー(Apolipoprotein B precursor)又はその変異体であって、卵に対するアレルギーの抗原である、以下の(9A−a)〜(9A−e)のいずれかのタンパク質:
(9A−a)配列番号251において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質;
(9A−b)配列番号251で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(9A−c)配列番号250において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;
(9A−d)配列番号250で示される塩基配列と同一性が70%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(9A−e)配列番号250で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(9B)配列番号251〜260からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(10)(10A)ビテロゲニン−2プレカーサー(Vitellogenin-2 precursor)又はその変異体であって、卵に対するアレルギーの抗原である、以下の(10A−a)〜(10A−e)のいずれかのタンパク質:
(10A−a)配列番号262において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質;
(10A−b)配列番号262で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(10A−c)配列番号261において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;
(10A−d)配列番号261で示される塩基配列と同一性が70%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(10A−e)配列番号261で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(10B)配列番号262〜271からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
を抗原として含む、前記診断キット。
(i)対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はIgE抗体が含まれる溶液である;
(ii)対象から得られた試料中のIgE抗体と当該抗原との結合を検出する;
(iii)対象のIgE抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が卵アレルギーであることの指標が提供される;
を含み、ここで当該抗原は、上記[9]において(4)〜(10)として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法。
卵に含まれるタンパク質について、上記の手法を利用して卵に対するアレルギーの抗原の特定を行った。具体的には、生の鶏卵を卵黄と卵白とに分け、それぞれに含まれる卵タンパク質を下記の条件で2次元電気泳動に供した。
(1)スポット1の抗原
スポット1について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号3〜11のアミノ酸配列が検出された。
(1A−a)配列番号2において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
(1A−b)配列番号2で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
(1A−c)配列番号1において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(1A−d)配列番号1で示される塩基配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(1A−e)配列番号1で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(1B)配列番号2〜11からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号2、4、及び9〜11からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号3〜11のいずれかで示されるアミノ酸配列は、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
スポット2について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号9〜11、14、16のアミノ酸配列が検出された。
(2A−a)配列番号13において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
(2A−b)配列番号13で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
(2A−c)配列番号12において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(2A−d)配列番号12で示される塩基配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(2A−e)配列番号12で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(2B)配列番号9〜11、13、14、および16からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号9〜11、13、および16からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号9〜11、13、14、16のいずれかで示されるアミノ酸配列は、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
スポット3について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号19〜45のアミノ酸配列が検出された。
(3A−a)配列番号18において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
(3A−b)配列番号18で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
(3A−c)配列番号17において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(3A−d)配列番号17で示される塩基配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(3A−e)配列番号17で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(3B)配列番号18〜45からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号18、19、22〜31、33〜35、37、39、40、42、43および45からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号18〜45のいずれかで示されるアミノ酸配列は、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
スポット4について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号48〜57のアミノ酸配列が検出された。
(4A−a)配列番号47において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
(4A−b)配列番号47で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
(4A−c)配列番号46において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(4A−d)配列番号46で示される塩基配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(4A−e)配列番号46で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(4B)配列番号47〜57からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号47、50、51、53、および54からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号47〜57のいずれかで示されるアミノ酸配列は、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
スポット5および6について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号60〜104のアミノ酸配列が検出された。
(5A−a)配列番号59において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
(5A−b)配列番号59で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
(5A−c)配列番号58において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(5A−d)配列番号58で示される塩基配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(5A−e)配列番号58で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(5B)配列番号59〜104からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号59、60、63、65、68、69、71、73、75〜79、81、83〜88、91〜94、96〜99、および101〜103からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号59〜104のいずれかで示されるアミノ酸配列は、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
スポット7について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号107〜150のアミノ酸配列が検出された。
(6A−a)配列番号106において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
(6A−b)配列番号106で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
(6A−c)配列番号105において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(6A−d)配列番号105で示される塩基配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(6A−e)配列番号105で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(6B)配列番号106〜150からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、44種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号106、108、110、111、113、114、116、117、120〜124、126〜131、133、134、136〜138、140〜143、145〜147および149からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、31種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号106〜150のいずれかで示されるアミノ酸配列は、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
スポット8について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号153〜235のアミノ酸配列が検出された。
(7A−a)配列番号152において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
(7A−b)配列番号152で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
(7A−c)配列番号151において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(7A−d)配列番号151で示される塩基配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(7A−e)配列番号151で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(7B)配列番号152〜235からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、83種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号152、154、157〜160、163、164、167〜172、174、175、177、178、180、182〜185、187、189、190、192、194〜196、198〜200、203〜207、209、211、212、214〜216、220〜229、231および232からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号152〜235のいずれかで示されるアミノ酸配列は、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
スポット9について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号238〜249のアミノ酸配列が検出された。
(8A−a)配列番号237において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
(8A−b)配列番号237で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
(8A−c)配列番号236において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(8A−d)配列番号236で示される塩基配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(8A−e)配列番号236で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(8B)配列番号237〜249からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号237〜239、241、242、244、および246〜249からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号237〜249のいずれかで示されるアミノ酸配列は、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
スポット10について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号252〜260のアミノ酸配列が検出された。
(9A−a)配列番号251において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
(9A−b)配列番号251で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
(9A−c)配列番号250において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(9A−d)配列番号250で示される塩基配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(9A−e)配列番号250で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(9B)配列番号251〜260からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号251〜254、256、257および260からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号251〜260のいずれかで示されるアミノ酸配列は、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
スポット11について質量分析による配列同定を行った結果、配列番号263〜271のアミノ酸配列が検出された。
(10A−a)配列番号262において1又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
(10A−b)配列番号262で示されるアミノ酸配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
(10A−c)配列番号261において1又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(10A−d)配列番号261で示される塩基配列と同一性が70%以上、好ましくは75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、99%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(10A−e)配列番号261で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
(10B)配列番号262〜271からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9種またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号262〜265、268および269からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも2、3、4、5種またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号262〜271のいずれかで示されるアミノ酸配列は、1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
A群:ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン
B群:アスパラギン酸、グルタミン酸
C群:アスパラギン、グルタミン
D群:リジン、アルギニン、
E群:セリン、スレオニン
F群:フェニルアラニン、チロシン
非保存的置換の場合は、上記種類のうち、ある1つのメンバーと他の種類のメンバーとを交換することができる。例えば、不用意な糖鎖修飾を排除するために上記のB、D、E群のアミノ酸をそれ以外の群のアミノ酸に置換してもよい。または、3次構造でタンパク質中に折りたたまれることを防ぐためにシステインを欠失させるか、他のアミノ酸に置換してもよい。あるいは、親水性/疎水性のバランスが保たれるように、または合成を容易にするために親水度を上げるように、アミノ酸に関する疎水性/親水性の指標であるアミノ酸のハイドロパシー指数(J. Kyte 及びR. Doolittle, J. Mol. Biol., Vol.157, p.105-132, 1982)を考慮して、アミノ酸を置換してもよい。
本発明は、対象の卵アレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程:
(i)対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はIgE抗体が含まれる溶液である;
(ii)対象から得られた試料中のIgE抗体と当該抗原との結合を検出する;
(iii)対象のIgE抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が卵アレルギーであることの指標が提供される;
を含み、ここで当該抗原は上記(1)〜(3)、(4)〜(10)の抗原として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法を提供する。
(A)1次元目の等電点電気泳動ゲルとして、ゲル長が5〜10cmの範囲内であって、ゲルのpH範囲が3〜10であり、泳動方向に対するゲルのpH勾配が、pH5までのゲル長をa、pH5〜7のゲル長をb、pH7以上のゲル長をcとした場合において、「a<b]及び「b>c」の関係を満たす;
(B)(A)の場合であって、ゲルの全長を1とした場合、aが0.15〜0.3の範囲内、bが0.4〜0.7の範囲内、cが0.15〜0.3の範囲内である;
(C)1次元目の等電点電気泳動において、検体を含むゲル1本につき100V〜600Vの範囲内の値の定電圧の印加による定電圧工程を行い、泳動30分あたりの泳動変化幅が5μAの範囲内となった後に前記定電圧から電圧を上昇させる電圧上昇行程を始める;
(D)(C)の場合に、電圧上昇工程の最終電圧を3000V〜6000Vの範囲内とする;
(E)1次元目の等電点電気泳動ゲルの長手方向のゲル長が5〜10cmであって、2次元目電気泳動ゲルの泳動方向基端部のゲル濃度を3〜6%とする;および
(F)(E)の場合に、2次元目電気泳動ゲルの泳動方向先端側の部分のゲル濃度が、泳動方向基端部のゲル濃度よりも高く設定する;
からなる群より選択される少なくとも一つを満たす条件で2次元電気泳動を行うことができる。
(i)対象から得られた試料を抗原に接触させる;
(ii)対象から得られた試料中のIgE抗体と当該抗原との結合を検出する;
(iii)対象のIgE抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が卵に対するアレルギーであると判断する;
ことを含み、ここで当該抗原は上記(1)〜(3)、(4)〜(10)の抗原として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法を提供する。ここにおいて(i)および(ii)の各工程は、卵に対するアレルギーを診断するための指標を提供する方法の各工程について説明したとおりに行われる。
本発明は、上記(1)〜(3)、(4)〜(10)の抗原の少なくとも一つを含む医薬組成物を提供する。
本発明は、上記(1)〜(3)、(4)〜(10)の抗原の少なくとも一つに対する抗体を含むテスターを提供する。
・作製したIgE抗体を含むテスターを食品・食材等から得られた試料に接触させて、例えばELISA法等を用いて当該IgE抗体と試料中の抗原との結合を検出し、当該IgE抗体と抗原との結合が検出された場合に、対象食品・食材等に当該抗原が残留していると判断する方法。
・ろ紙などに食品・食材をしみこませ、そこに含まれる抗原を検出するように、抗体溶液を反応させる方法。
本発明は、上記(1)〜(3)、(4)〜(10)の抗原の少なくとも一つが除去又は低減されていることを特徴とする卵、卵加工品または当該卵を産む若しくは当該卵から生まれた鳥を提供する。
本発明は、抗原が除去または低減されている卵加工品の製造方法であって、当該加工品の製造過程で抗原が除去又は低減されていることを確認するステップを有する、ここで当該抗原は上記(1)〜(3)、(4)〜(10)の抗原の少なくとも一つである、前記製造方法を提供する。
下記の二次元電気泳動方法を使用して、卵に含まれるタンパク質を調べた。
生の鶏卵を、卵白と卵黄に分けた。
30mM Tris
2M チオ尿素
7M 尿素
4%(w/v) CHAPS:
3−[(3−コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ]プロパンスルホナート
適量の希塩酸
蒸留水を加えて全体を100mLに調整した。pHは8.5であった。
その後、タンパク質重量として25μgずつを混合して抽出液を得た。卵黄に可溶化剤として界面活性剤バッファー(Mammalian Lysis Buffer (MCLI), SIGMA社)を添加して、タンパク質を抽出した。
得られた検体の一部(タンパク質重量として50μg)を、1次元目等電点電気泳動用ゲルの膨潤用緩衝液であるDeStreak Rehydration Solution(GE社製)150μlに溶解し、1次元目等電点電気泳動用の検体溶液(膨潤用検体溶液)とした。DeStreak Rehydration Solutionの組成は以下の通りである。
7M チオ尿素
2M 尿素
4%(w/v) CHAPS
0.5%(v/v) IPGバッファー;GE社製
適量のBPB(ブロモフェノールブルー)
1次元目等電点電気泳動用ゲル(GE社製:IPGゲルImmobiline Drystrip (pH3-10NL))を前記した1次元目等電点電気泳動用の検体溶液(膨張用検体溶液)140μlに浸漬し、一晩室温にて浸透させた。
上記の1次元目の等電点電気泳動を行った後、等電点電気泳動機器からゲルを取り外し、還元剤を含む平衡化緩衝液に当該ゲルを浸漬して、15分・室温にて振とうした。上記還元剤を含む平衡化緩衝液の組成は以下の通りである。
100mM Tris−HCl(pH8.0)
6M 尿素
30%(v/v) グリセロール
2%(w/v) SDS
1%(w/v) DTT
100mM Tris−HCl(pH8.0)
6M 尿素
30%(v/v) グリセロール
2%(w/v) SDS
2.5%(w/v) ヨードアセトアミド
本実施例においては、電気泳動機器としてlife technologies社製のXCell SureLock Mini-Cellを使用した。2次元目泳動用ゲルはlife technologies社製NuPAGE 4-12% Bis-Tris Gelsを使用した。また、以下の組成の泳動用緩衝液を調製し、使用した。
50mM MOPS
50mM Tris塩基
0.1%(w/v) SDS
1mM EDTA
SYPRO Ruby(life technologies社製)を用いてゲルの蛍光染色を行った。
上記一連の処理を施した2次元目泳動用ゲルをTyphoon9400(GE社製)を使用した蛍光イメージのスキャンに供した。卵黄に含まれるタンパク質について、2次元電気泳動の結果を図1に示す(卵白についての結果は示さない)。ゲルの写真の左側には、分子量マーカーのバンドが見られ、バンドの位置が特定の分子量(KDa)を示す。
イムノブロットでの抗原確認は、実施例1に記載した手順を「2次元目のSDS−PAGE」まで行った後、以下の「メンブレンへの転写」「イムノブロット」「解析」の操作を行うことにより行った。
メンブレンへの転写は、以下の転写装置及び転写用緩衝液を用いて行った。
転写装置:XCell SureLock Mini-Cell およびXCell IIブロットモジュール(life technologies社製)
転写用緩衝液: NuPAGEトランスファーバッファー(×20)(life technologies社製)をmilliQ水で20倍希釈して使用した。
(2)スポンジ、ろ紙、2次元目のSDS−PAGEが終わったゲル、親水化処理済みPVDF膜、ろ紙、スポンジの順でセットし、転写装置中、30V定電圧で1時間通電した。
メンブレンのイムノブロットを、1次抗体として卵に対するアレルギーを有する患者(患者1)の血清または非卵アレルギー被験者の血清を用いて行った。この卵アレルギーの患者は、鶏卵による食物依存性運動誘発アナフィラキシー(FDEIA)と診断された患者である。なお、この患者は、プリックテストでは、生卵、ゆで卵、および温泉卵ともに陰性を示し、特異的IgE抗体検査でも、卵白、卵黄、オボムコイドについて陰性を示した。
(1)転写したメンブレンを5%スキムミルク/PBST溶液(非イオン界面活性剤Tween 20を0.1%含むPBSバッファー)中、室温で1時間振とうした。
(2)1次抗体として、5%血清/5%スキムミルク/PBST溶液中、室温で1時間静置した。
(3)PBST溶液で洗浄した(5分×3回)。
(4)2次抗体として抗ヒトIgE−HRP(セイヨウワサビペルオキシダーゼ)を5%スキムミルク/PBST溶液で5000倍に希釈した溶液中、室温で1時間静置した。
(5)PBST溶液で洗浄した(5分×3回)。
(6)Pierce Western Blotting Substrate Plus(Thermo社製)で、5分間静置した。
上記一連の処理を施したメンブレンをTyphoon9500(GE社製)を使用した蛍光イメージのスキャンに供した。
スポット1:分子量20〜40kDa、pI4.0〜10.0
スポット2:分子量30〜60kDa、pI5.0〜10.0
スポット3:分子量35〜60kDa、pI5.0〜10.0
実施例2の3つのスポットを生じる抗原について、質量分析によるアミノ酸配列の同定を行った。
(1)生の鶏卵の卵黄について、実施例1及び2の手順に従ってタンパク質抽出、2次元電気泳動及びメンブレン転写を行い、0.008%Direct blue/40%エタノール・10%酢酸で振とうにより染色した。
(2)その後、40%エタノール・10%酢酸で5分間の処理を3回行って脱色し、水で5分間洗浄後、風乾した。
(3)目的のスポットをきれいなカッター刃で切り取り、遠心チューブに入れた。50μLのメタノールでメンブレン親水処理後、100μLの水で2回洗浄後遠心除去し、20μLの20mM NH4HCO3・50%アセトニトリルを加えた。
(4)1pmol/μLリシルエンドペプチダーゼ(WAKO)1μLを加え、37℃で60分間静置した後、溶液を新しい遠心チューブに回収した。20μLの20mM NH4HCO3・70%アセトニトリルをメンブレンに加え、室温にて10分間浸し、さらに回収した。0.1%ギ酸、4%アセトニトリル10μLで溶解し、チューブに移した。
(5)回収した溶液を減圧乾燥した後、A液(0.1%ギ酸、4%アセトニトリル溶液)15μlで溶解し、質量分析(ESI-TOF6600, AB Sciex社製)を行った。
(6)質量分析計から得られた質量データに基づくタンパク質の同定は、NCBIまたはUniProtをサーチすることで行った。
各スポットについて、質量分析を行ったところ、以下のアミノ酸配列が検出された。
スポット1:配列番号3〜11で示されるアミノ酸配列
スポット2:配列番号9〜11、14、16で示されるアミノ酸配列
スポット3:配列番号19〜45で示されるアミノ酸配列
スポット1:ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)(アミノ酸配列:NCBIアクセッション番号XP_015146355、それをコードする塩基配列:GenBankアクセッション番号XM_015290869.1)のC末端部分(アミノ酸配列:配列番号2、それをコードする塩基配列:配列番号1)
スポット2:ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)(アミノ酸配列:NCBIアクセッション番号XP_015146355、それをコードする塩基配列:GenBankアクセッション番号XM_015290869.1)のC末端部分(アミノ酸配列:配列番号13、それをコードする塩基配列:配列番号12)
スポット3:ビテロゲニン−1(Vitellogenin-1)(アミノ酸配列:UniProtアクセッション番号P87498、それをコードする塩基配列:ENA(EMBL)アクセッション番号 D89547.1)の中央部分または、リポビテリン−1(Lipovitelin-1)のC末端部分(アミノ酸配列:配列番号18、それをコードする塩基配列:配列番号17)
実施例2と同様に、別の卵アレルギー患者3名(患者2、患者3、患者4)の血清を用いてイムノブロットでの抗原確認を行った。生の卵黄に含まれるタンパク質について卵アレルギー患者の血清を用いたイムノブロット(患者2について図4、患者3について図5、患者4について図6)において、非卵アレルギー被験者の血清を用いた場合とは異なり、かつ公知の鶏卵アレルゲンタンパク質とは異なるスポットが検出された。具体的には、患者2についてスポット4〜8が、患者3についてスポット9および10が、患者4についてスポット11が検出された。
スポット4:分子量20〜50kDa、pI3.0〜8.0
スポット5、6:分子量80〜260kDa、pI1.0〜8.0
スポット7:分子量110〜300kDa、pI3.0〜8.0
スポット8:分子量160〜550kDa、pI3.0〜8.0
スポット9:分子量20〜50kDa、pI7.0〜11.0
スポット10:分子量20〜50kDa、pI7.0〜11.0
スポット11:分子量15〜40kDa、pI6.0〜11.0
実施例4のスポット4〜11を生じる抗原について、質量分析によるアミノ酸配列の同定を、実施例3と同様に行った。
スポット4:配列番号48〜57で示されるアミノ酸配列
スポット5、6:配列番号60〜104で示されるアミノ酸配列
スポット7:配列番号107〜150で示されるアミノ酸配列
スポット8:配列番号153〜235で示されるアミノ酸配列
スポット9:配列番号238〜249で示されるアミノ酸配列
スポット10:配列番号252〜260で示されるアミノ酸配列
スポット11:配列番号263〜271で示されるアミノ酸配列
スポット4:ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)(アミノ酸配列:NCBIアクセッション番号XP_015146355、それをコードする塩基配列:GenBankアクセッション番号XM_015290869.1)(アミノ酸配列:配列番号47、それをコードする塩基配列:配列番号46)
スポット5、6:ビテロゲニン−2 プレカーサー(Vitellogenin-2 precursor)(アミノ酸配列:NCBIアクセッション番号NP_001026447.1、それをコードする塩基配列:GenBankアクセッション番号NM_001031276.1)(アミノ酸配列:配列番号59、それをコードする塩基配列:配列番号58)
スポット7:ビテロゲニン−2 プレカーサー(Vitellogenin-2 precursor)(アミノ酸配列:NCBIアクセッション番号NP_001026447.1、それをコードする塩基配列:GenBankアクセッション番号NM_001031276.1)(アミノ酸配列:配列番号106、それをコードする塩基配列:配列番号105)
スポット8:アポリポプロテイン B プレカーサー(Apolipoprotein B precursor)(アミノ酸配列:NCBIアクセッション番号NP_001038098.1、それをコードする塩基配列:GenBankアクセッション番号NM_001044633.1)(アミノ酸配列:配列番号152、それをコードする塩基配列:配列番号151)
スポット9:アポリポプロテイン B プレカーサー(Apolipoprotein B precursor)(アミノ酸配列:NCBIアクセッション番号NP_001038098.1、それをコードする塩基配列:GenBankアクセッション番号NM_001044633.1)(アミノ酸配列:配列番号237、それをコードする塩基配列:配列番号236)
スポット10:アポリポプロテイン B プレカーサー(Apolipoprotein B precursor)(アミノ酸配列:NCBIアクセッション番号NP_001038098.1、それをコードする塩基配列:GenBankアクセッション番号NM_001044633.1)(アミノ酸配列:配列番号251、それをコードする塩基配列:配列番号250)
スポット11:ビテロゲニン−2 プレカーサー(Vitellogenin-2 precursor)(アミノ酸配列:NCBIアクセッション番号NP_001026447.1、それをコードする塩基配列:GenBankアクセッション番号NM_001031276.1)(アミノ酸配列:配列番号262、それをコードする塩基配列:配列番号261)
Claims (9)
- 鶏卵アレルギーの診断キットであって、以下(1)、(2)又は(4)のタンパク質の少なくとも一つ:
(1)(1A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(1A−b)配列番号2で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1A−d)配列番号1で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(1A−e)配列番号1で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(1B)配列番号2〜11からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(2)(2A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下ののいずれかのタンパク質:
(2A−b)配列番号13で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2A−d)配列番号12で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(2A−e)配列番号12で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(2B)配列番号9〜11、13、14、及び16からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(4)(4A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(4A−b)配列番号47で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4A−d)配列番号46で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(4A−e)配列番号46で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(4B)配列番号47〜57からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質
を抗原として含む、前記診断キット。 - 鶏卵アレルギーの診断用組成物であって、以下(1)、(2)又は(4)のタンパク質の少なくとも一つ:
(1)(1A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(1A−b)配列番号2で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1A−d)配列番号1で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(1A−e)配列番号1で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(1B)配列番号2〜11からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(2)(2A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下ののいずれかのタンパク質:
(2A−b)配列番号13で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2A−d)配列番号12で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(2A−e)配列番号12で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(2B)配列番号9〜11、13、14、及び16からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(4)(4A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(4A−b)配列番号47で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4A−d)配列番号46で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(4A−e)配列番号46で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(4B)配列番号47〜57からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質
を抗原として含む、前記診断用組成物。 - 対象の鶏卵アレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程:
(i)対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はIgE抗体が含まれる溶液である;
(ii)対象から得られた試料中のIgE抗体と当該抗原との結合を検出する;
(iii)対象のIgE抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が鶏卵アレルギーであることの指標が提供される;
を含み、ここで当該抗原は、以下(1)、(2)又は(4):
(1)(1A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(1A−b)配列番号2で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1A−d)配列番号1で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(1A−e)配列番号1で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(1B)配列番号2〜11からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(2)(2A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下ののいずれかのタンパク質:
(2A−b)配列番号13で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2A−d)配列番号12で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(2A−e)配列番号12で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(2B)配列番号9〜11、13、14、及び16からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(4)(4A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(4A−b)配列番号47で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4A−d)配列番号46で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(4A−e)配列番号46で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(4B)配列番号47〜57からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質
として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法。 - 抗原を含有しないまたは含有量の少ない鶏卵加工品であって、当該抗原は以下(1)、(2)又は(4):
(1)(1A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(1A−b)配列番号2で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1A−d)配列番号1で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(1A−e)配列番号1で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(1B)配列番号2〜11からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(2)(2A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下ののいずれかのタンパク質:
(2A−b)配列番号13で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2A−d)配列番号12で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(2A−e)配列番号12で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(2B)配列番号9〜11、13、14、及び16からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(4)(4A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(4A−b)配列番号47で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4A−d)配列番号46で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(4A−e)配列番号46で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(4B)配列番号47〜57からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質
として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記鶏卵加工品。 - 以下(1)、(2)又は(4):
(1)(1A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(1A−b)配列番号2で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1A−d)配列番号1で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(1A−e)配列番号1で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(1B)配列番号2〜11からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(2)(2A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下ののいずれかのタンパク質:
(2A−b)配列番号13で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2A−d)配列番号12で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(2A−e)配列番号12で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(2B)配列番号9〜11、13、14、及び16からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(4)(4A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(4A−b)配列番号47で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4A−d)配列番号46で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(4A−e)配列番号46で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(4B)配列番号47〜57からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質
として特定されるタンパク質の少なくとも一つと結合する抗体を含むことを特徴とする、対象物における鶏卵抗原の有無を判定するためのテスター。 - 配列番号1、12、又は46で示される塩基配列の少なくとも1つと相補的な塩基配列を有するプライマーを含むことを特徴とする、対象物における鶏卵に対するアレルギーの抗原の有無を判定するためのテスター。
- 抗原を含有しないまたは含有量の少ない鶏卵加工品の製造方法であって、当該加工品の製造過程で抗原を含有しないまたは含有量の少ないことを確認するステップを有する、ここで当該抗原は、以下(1)、(2)又は(4):
(1)(1A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(1A−b)配列番号2で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1A−d)配列番号1で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(1A−e)配列番号1で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(1B)配列番号2〜11からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(2)(2A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下ののいずれかのタンパク質:
(2A−b)配列番号13で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2A−d)配列番号12で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(2A−e)配列番号12で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(2B)配列番号9〜11、13、14、及び16からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(4)(4A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(4A−b)配列番号47で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4A−d)配列番号46で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(4A−e)配列番号46で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(4B)配列番号47〜57からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質
として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記製造方法。 - 鶏卵由来の抗原であって、以下(1)、(2)又は(4):
(1)(1A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(1A−b)配列番号2で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1A−d)配列番号1で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(1A−e)配列番号1で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(1B)配列番号2〜11からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(2)(2A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)のC末端部分を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下ののいずれかのタンパク質:
(2A−b)配列番号13で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2A−d)配列番号12で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(2A−e)配列番号12で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(2B)配列番号9〜11、13、14、及び16からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質;
(4)(4A)ビテロゲニン−3(Vitellogenin-3)を含むタンパク質又はその変異体であって、鶏卵に対するアレルギーの抗原である、以下のいずれかのタンパク質:
(4A−b)配列番号47で示されるアミノ酸配列と同一性が90%以上のアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4A−d)配列番号46で示される塩基配列と同一性が90%以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;もしくは
(4A−e)配列番号46で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質;又は
(4B)配列番号47〜57からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質
として特定されるタンパク質の少なくとも一つであり、そして鶏卵に対するアレルギーの原因となる、前記抗原。 - 請求項8の抗原を含む組成物。
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