ES2693745T3 - Gel de testosterona mejorado para su uso en el tratamiento del hipogonadismo - Google Patents

Abstract

Una formulación de gel de testosterona que comprende: i. de 1,50 a 1,70 % (p/p) de testosterona; ii. de 0,6 a 1,2 % (p/p) de miristato de isopropilo; iii. de 60 a 80 % (p/p) de un alcohol seleccionado del grupo que consiste en etanol e isopropanol; iv. una cantidad suficiente de un agente espesante para proporcionar a la composición una viscosidad superior a 9000 cps; y v. agua; para su uso en el tratamiento del hipogonadismo en un sujeto por administración percutánea.

Description

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DESCRIPCION

Gel de testosterona mejorado para su uso en el tratamiento del hipogonadismo Antecedentes de la invencion

La testosterona, el principal androgeno circulante en los hombres, es sintetizada a partir del colesterol. Los aproximadamente 500 millones de celulas de Leydig en los testmulos secretan mas del 95% de los 6-7 mg de testosterona producidos por dfa. Dos hormonas producidas por la glandula pituitaria, la hormona luteinizante (“LH”) y la hormona estimulante del folmulo ("FSH"), son necesarias para el desarrollo y mantenimiento de la funcion testicular y regulan negativamente la produccion de testosterona. La testosterona circulante se metaboliza a diversos 17- cetoesteroides a traves de dos vfas diferentes. La testosterona se puede metabolizar a dihidrotestosterona ("DHT") por la enzima 5a-reductasa o a estradiol ("E2") por un complejo de la enzima aromatasa.

La testosterona circula en la sangre con el 98% ligada a la protema. En los hombres, aproximadamente el 40% es a la globulina que se une a la hormona sexual con alta afinidad ("SHBG"). El restante 60% esta unido debilmente a la albumina. De este modo, un numero de mediciones para la testosterona estan disponibles de los laboratorios clmicos. El termino testosterona "libre" como se usa en este documento se refiere a la fraccion de testosterona en la sangre que no se une a protemas. El termino "testosterona total" o "testosterona", como se usa en este documento significa la testosterona libre mas testosterona ligada a protemas. El termino "testosterona biodisponible" tal como se utiliza en este documento se refiere a la testosterona no ligada a SHBG e incluye la testosterona debilmente unida a la albumina.

En la tabla siguiente del UCLA-Harbor Medical Center se resume el intervalo de las concentraciones hormonales en los hombres adultos normales:

Tabla 1: Niveles hormonales en los hombres normales

Hormona

Intervalo normal

Testosterona

298 a 1043 ng/dl

Testosterona libre

3,5 a 17,9 ng/dl

DHT

31 a 193 ng/dl

Relacion de DHT/ T

0,052 a 0,33

DHT + T

372 a 1349 ng/dl

SHBG

10,8 a 46,6 nmoles/l

FSH

1,0 a 6,9 mlU/ml

LH

1,0 a 8,1 mlU/ml

E2

17,1 a 46,1 pg/ml

Existe una variacion considerable en la semivida de la testosterona reportada en la literatura, vana de 10 a 100 minutos. Los investigadores estan de acuerdo, sin embargo, en que la testosterona circulante tiene una variacion diurna en hombres jovenes normales. Los niveles maximos se producen aproximadamente de 6:00-8:00 de la manana con niveles decrecientes a lo largo del dfa. Los perfiles caractensticos tienen un nivel de testosterona maximo de 720 ng/dl y un nivel mmimo de 430 ng/dl. La significacion fisiologica de este ciclo diurno, si existe, sin embargo, no esta clara.

El hipogonadismo en el hombre se origina a partir de una variedad de alteraciones patofisiologicas en las que la concentracion de testosterona esta disminuida por debajo del intervalo normal. La condicion hipogonadica a veces esta vinculada con una serie de cambios fisiologicos, tales como la disminucion del interes en el sexo, impotencia, reduccion de la masa corporal magra, disminucion de la densidad osea, disminucion del estado de animo, y disminucion de los niveles de energfa.

Los investigadores suelen clasificar el hipogonadismo en uno de tres tipos. El hipogonadismo primario incluye la insuficiencia testicular debido a la anorquia congenita o adquirida, smdrome XYY, smdrome de Noonan, hombres XX, digenesis gonadal, tumores de las celdas de Leydig, testmulos maldescentes, varicocela, smdrome de solo celdas de Sertoli, criptorquidia, torsion bilateral, smdrome de los testmulos desaparecidos, orquiectoirna, smdrome de Klinefelter, quimioterapia, dano toxico del alcohol o metales pesados, y enfermedad en general (insuficiencia renal, cirrosis hepatica, diabetes, miotoma distrofica). Los pacientes con hipogonadismo primario muestran un mecanismo de retroalimentacion intacto en el que las bajas concentraciones de testosterona en suero estan asociadas con niveles

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altos de concentraciones de FSH y de LH. Sin embargo, a causa de fallos testiculares u otros fallos, las altas concentraciones de LH no son eficaces en la estimulacion de la produccion de testosterona.

El hipogonadismo secundario implica una gonadotropina idiopatica o deficiencia de la liberacion de la hormona LH. Este tipo de hipogonadismo incluye el smdrome de Kallman, el smdrome de Prader- Labhart-Willi, el smdrome de Laurence-Moon-Biedl, la insuficiencia pituitaria / adenomas, smdrome de Pasqualini, la hemocromatosis, hiperprolactinemia, o lesiones pituitario-hipotalamicas causadas por tumores, traumatismo, radiacion, u obesidad. Dado que los pacientes con hipogonadismo secundario no demuestran una ruta de retroalimentacion intacta, las concentraciones de testosterona mas bajas no estan asociadas con mayores niveles de FSH o LH. Por lo tanto, estos hombres tienen bajos niveles de testosterona en suero, pero tienen gonadotropinas en niveles de intervalo normal a bajo.

El hipogonadismo puede estar relacionado con la edad. Los hombres experimentan una lenta pero continua disminucion de la testosterona serica promedio despues de aproximadamente 20 a 30 anos de edad. Los investigadores estiman que la disminucion es de aproximadamente 1-2% por ano. Los estudios cruzados en hombres han encontrado que el valor promedio de la testosterona a la edad de 80 anos es aproximadamente el 75% del valor de la de la edad de los 30 anos. Debido a que la concentracion serica de SHBG aumenta a medida que los hombres envejecen, la cafda de la testosterona biodisponible y libre es aun mayor que la cafda de la testosterona total. Los investigadores han estimado que aproximadamente el 50% de los hombres sanos entre las edades de 50 y 70 tienen niveles de testosterona biodisponible que estan por debajo del lfmite inferior normal. Ademas, a medida que los hombres envejecen, el ritmo circadiano de la concentracion de testosterona es a menudo silenciado, disminuido, o se pierde por completo. El principal problema con el envejecimiento parece estar dentro de la unidad hipotalamico- pituitaria. Por ejemplo, los investigadores han encontrado que con el envejecimiento, los niveles de LH no aumentan a pesar de los bajos niveles de testosterona. Independientemente de la causa, estas deficiencias de testosterona no tratadas en hombres mayores pueden conducir a una variedad de cambios fisiologicos, incluyendo disfuncion sexual, disminucion de la libido, perdida de masa muscular, disminucion de la densidad osea, depresion y disminucion de la funcion cognitiva. El resultado neto es el hipogonadismo geriatrico o lo que comunmente se conoce como “menopausia masculina”. Hoy en dfa, el hipogonadismo es la deficiencia hormonal mas comun en los hombres, afectando a 5 de cada 1.000 hombres. En la actualidad, se estima que solo un cinco por ciento de aproximadamente los cuatro a cinco millones de hombres americanos de todas las edades con hipogonadismo actualmente reciben terapia de reemplazo de testosterona.

El documento de patente de los Estados Unidos US2005/020552 describe una composicion de gel hidroalcoholica, Androgel, que comprende el 1% p/p de testosterona, el 0,7% p/p de miristato de isopropilo, el 69% p/p de etanol, carbopol 940 como agente gelificante y agua.

Compendio de la invencion

La presente invencion se refiere a una formulacion de gel de testoesterona hidroalcoholica transdermica mejorada que proporciona, entre otras cosas, un perfil farmacocinetico deseable de la hormona, para los usos definidos en las reivindicaciones.

Breve descripcion de los dibujos

La figura 1 es un diagrama de Pareto estandarizado que demuestra el efecto de los factores de prueba testosterona, miristato de isopropilo y alcohol etflico sobre la respuesta de la variable viscosidad.

La figura 2 es un diagrama de Pareto estandarizado que demuestra el efecto de los factores de prueba testosterona, miristato de isopropilo y alcohol etflico sobre el porcentaje permeado.

La figura 3 es un diagrama de Pareto estandarizado que demuestra el efecto de los factores de prueba testosterona, miristato de isopropilo y alcohol etflico sobre la relacion CAR.

La figura 4 es un grafico de superficie estimado de la respuesta, que ilustra la respuesta estimada (relacion CAR) para una combinacion dada de testosterona, y miristato de isopropilo con un contenido de alcohol (95% v/v) de 74,3% en peso.

La figura 5 es un diagrama de contorno que ilustra los contornos del grafico de superficie estimado de la respuesta en la figura 4.

La figura 6 es un grafico que muestra la cantidad acumulada de testosterona liberada en funcion del tiempo para diversas formulaciones de testosterona (F57 a F59) en comparacion con la formulacion de referencia (F56).

La figura 7 es un grafico que muestra las cantidades acumuladas de testosterona permeada en funcion del tiempo para la formulacion F57.

La figura 8 es un grafico que muestra las cantidades acumuladas de testosterona permeada en funcion del tiempo para la formulacion F58.

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La figura 9 es un grafico que muestra las cantidades acumuladas de testosterona permeada en funcion del tiempo para la formulacion F59.

La figura 10 es un grafico que muestra los perfiles concentracion-tiempo en suero promedio para la testosterona observados en el d^a 1.

La figura 11 es un grafico que muestra los perfiles concentracion-tiempo en suero promedio para la testosterona observados en el dfa 14.

Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion se refiere a una formulacion en gel de testosterona mejorada para su uso como se define en las reivindicaciones.

En una realizacion, la presente invencion se dirige a un gel hidroalcoholico para su uso en un metodo para la administracion percutanea de testosterona. El gel comprende testosterona (o un derivado de testosterona), uno o mas alcoholes inferiores, elegidos de etanol o isopropanol; miristato de isopropilo, usado como agente para aumento de la penetracion; un espesante; y agua. Ademas, la presente invencion puede incluir opcionalmente sales, emolientes, estabilizantes, antimicrobianos, fragancias y propelentes.

La presente invencion tambien incluye kits, metodos, combinaciones, y composiciones farmaceuticas para su uso en tratar, prevenir, revertir, detener o retardar la progresion del hipogonadismo u otros trastornos asociados a la testosterona baja en un individuo una vez que se vuelve clmicamente evidente o el tratamiento de los smtomas asociados o relacionados con el hipogonadismo o trastornos asociados con la testosterona baja. El individuo puede ya tener un diagnostico de hipogonadismo y/o bajos niveles de testosterona en el momento de la administracion o estar en riesgo de desarrollar hipogonadismo y/o baja testosterona. La invencion presente, preferentemente, es para uso en el tratamiento de sujetos adultos de mas de 18 anos de edad. Aun mas preferiblemente la presente invencion es para el uso en el tratamiento de sujetos adultos de mas de 21 anos de edad.

El termino "derivado" se refiere a un compuesto que se produce de otro compuesto de estructura similar por el reemplazamiento o sustitucion de un atomo, molecula o grupo por otro. Por ejemplo, un atomo de hidrogeno de un compuesto puede ser sustituido con alquilo, acilo, amino, etc., para producir un derivado de ese compuesto.

Tal como se usa en este documento, el termino "alcohol inferior", solo o en combinacion, significa un resto de alcohol de cadena lineal o cadena ramificada que contiene de uno a aproximadamente seis atomos de carbono. En una realizacion, el alcohol inferior contiene de uno a aproximadamente 4 atomos de carbono, y en otra realizacion, el alcohol inferior contiene de dos a aproximadamente 3 atomos de carbono. Ejemplos de tales restos de alcoholes incluyen metanol, etanol, etanol USP (es decir del 95% v/v), n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, sec- butanol, y terc-butanol.

Como se usa en este documento, el termino "etanol" se refiere a C2H5OH. Puede ser utilizado como alcohol deshidratado USP, alcohol USP, o en cualquier forma comun que incluye en combinacion con diversas cantidades de agua.

La composicion se usa en una "cantidad farmacologicamente eficaz". Esto significa que la concentracion del farmaco administrado es tal que en la composicion produce un nivel terapeutico del farmaco suministrado durante el periodo de tiempo en que el farmaco se va a utilizar. Este suministro depende de un numero de variables que incluyen el penodo de tiempo para el que la unidad de dosificacion individual se va a utilizar, la velocidad de flujo del farmaco desde la composicion, por ejemplo, la testosterona a partir del gel, area de la superficie del lugar de aplicacion, etc. Para la testosterona, por ejemplo, la cantidad de testosterona necesaria puede ser experimentalmente determinada basada en la velocidad del flujo de testosterona a traves de gel y a traves de la piel cuando se utiliza con y sin potenciadores.

En una realizacion, la presente invencion se dirige a un gel hidroalcoholico para su uso en un metodo para la administracion percutanea de testosterona como se define en las reivindicaciones. El gel comprende uno o mas alcoholes inferiores, elegidos de etanol o isopropanol; miristato de isopropilo como agente potenciador de la penetracion; un espesante; y agua. En una realizacion, el gel comprende un agente espesante de polfmero anionico precursor neutralizado con un agente de liberacion de hidroxido, tal como, por ejemplo, hidroxido sodico. Adicionalmente, la presente invencion puede opcionalmente incluir sales, emolientes, estabilizantes, antimicrobianos, fragancias, y propelentes.

Incluido en los metodos y composiciones farmaceuticas de la presente invencion estan las formas isomeras y tautomeras de los compuestos descritos y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos. Sales ilustrativas farmaceuticamente aceptables se preparan a partir de los acidos formico, acetico, propionico, succmico, glicolico, gluconico, lactico, malico, tartarico, cftrico, ascorbico, glucuronico, maleico, fumarico, piruvico, aspartico, glutamico, benzoico, antramlico, mesflico, estearico, salidlico, p-hidroxibenzoico, fenilacetico, mandelico, embonico (pamoico), metanosulfonico, etanosulfonico, bencenosulfonico, pantotenico, toluensulfonico, 2-hidroxietanosulfonico, sulfamlico, ciclohexilaminosulfonico, algenico, b-hidroxibutrnco, galactarico y galacturonico.

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Los agentes espesantes (tambien conocidos como agentes gelificantes) adecuados para uso en la presente invencion incluyen poUmeros neutralizados anionicos tales como el acido poliacnlico. Los acidos poliacnlicos de carbomero son preferidos, especialmente los fabricados y vendidos por Noveon Inc. de Cleveland, Ohio bajo el nombre registrado Carbopol®. (Vease informacion en
http://www.noveon.com. incorporada aqu como referencia.) Particularmente preferidos son los Carbopol® Ultrez 10. 940. 941. 954. 980. 981. ETD 2001. EZ-2 y EZ-3. Los mas preferidos son Carbopol® 940 y Carbopol® 980. Otros polfmeros anionicos adecuados incluyen carboxipolimetilencelulosa y carboximetilcelulosa. Tambien son adecuados otros agentes espesantes polimericos conocidos tales como emulsionantes polimericos Pemulen®. y policarbofilos Noveon®. Otros agentes espesantes. potenciadores y adyuvantes en general se pueden encontrar en The Science and Practice of Pharmacy de Remington. Meade Publishing Co.. y Pharmacopea de los Estados Unidos/National Formulary. todos incorporados aqu como referencia.

En una realizacion. la formulacion es un gel que comprende testosterona; miristato de isopropilo como agente potenciador de la penetracion; un agente espesante. tal como un carbomero neutralizado; un alcohol inferior elegido de etanol o isopropanol; y agua.

En otra realizacion. la formulacion contiene un polfmero anionico precursor de un agente espesante tal como un carbomero que ha sido combinado con un neutralizante en una cantidad suficiente para formar un gel en el curso de formacion de la composicion.

En otra realizacion. la formulacion contiene un polimero anionico precursor de un agente espesante tal como un carbomero que se ha combinado con un neutralizante en una cantidad suficiente para formar un gel con una viscosidad mayor de 9000 cps medida por un viscosfmetro Brookfield RV DVII+ con un husillo igual a RV6. RPM (rotaciones por minuto) igual a 10. y la temperatura mantenida a 20° C.

En aun otra realizacion adicional. la formulacion contiene un polfmero anionico precursor de un agente espesante tal como un carbomero que se ha combinado con un neutralizador seleccionado del grupo que consiste en hidroxido de sodio. hidroxido de amonio. hidroxido de potasio. arginina. aminometilpropanol. tetrahidroxipropiletilendiamina. trietanolamina (“TEA"). trometamina. PEG-15 cocamina. diisopropanolamina. y triisopropanolamina o combinaciones de los mismos en una cantidad suficiente para neutralizar el precursor del agente espesante de polfmero anionico para formar un gel en el curso de formar la composicion. Agentes neutralizantes adecuados y su uso con agentes espesantes precursores de polfmeros anionicos seleccionados se describen en "Neutralizing Carbopol® and Pemulen® Polymers in Aqueous and Hydroalcoholic Systems." Panfleto comercial TDS-237 (Octubre de 1998) por Novean Inc. de Cleveland. Ohio. incorporado en este documento como referencia.

En todavfa una realizacion adicional. la formulacion contiene un polfmero anionico precursor de un agente espesante tal como un carbomero que se ha combinado con un neutralizador que es una solucion acuosa de hidroxido de sodio tal como hidroxido de sodio 0.1 N o hidroxido de sodio 1.5 N. o hidroxido de sodio 2.0 N o cualquier otra solucion acuosa de fuerza conveniente en una cantidad suficiente para formar un gel. En una realizacion. la composicion se preparo utilizando entre aproximadamente 1.0% y 10.0% de hidroxido de sodio 0.1 N. Por consiguiente pueden ser usadas las realizaciones que emplean cualquier porcentaje entre alrededor de 1.0% y alrededor de 10.0% de NaOH 0.1 N. tal como. por ejemplo. 1.0%. 2.0%. 3.0%. 4.0%. 5.0%. 6.0%. 7.0%. 8.0%. 9.0% o 10.0% NaOH 0.1 N.

En una realizacion la formulacion es un gel y se obtiene mediante la combinacion de las siguientes sustancias en porcentajes aproximados:

Tabla 2. Ingredientes combinados para producir formulaciones de testosterona (% p/p)

T

Alcohol Miristato Carbopol NaOH Agua

(Testoesterona)

(95% v/v) de isopropilo 980 0.1N purificada

1.20

73.5 1.00 1.0 7.00 16.3

1.40

73.5 1.00 1.0 7.00 16.1

1.60

73.5 1.00 1.0 7.00 15.9

En una realizacion. la composicion comprende aproximadamente 1.62% de testosterona.

La composicion comprende de aproximadamente 1.50% a aproximadamente 1.70% (p/p) de testosterona

En otra realizacion. la composicion ademas comprende de 0.6% a 1.2% (p/p) de miristato de isopropilo; de 60% a 80% (p/p) de un alcohol seleccionado del grupo que consiste en etanol e isopropanol; una cantidad suficiente de un agente espesante para proporcionar a la composicion una viscosidad en exceso de aproximadamente 9000 cps; y agua.

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En otra realizacion, la composicion comprende ademas de 0,6% a 1,2% (p/p) de miristato de isopropilo; de 67% a 74% (p/p) de un alcohol seleccionado del grupo que consiste en etanol e isopropanol; una cantidad suficiente de un agente espesante para proporcionar a la composicion una viscosidad en exceso de aproximadamente 9000 cps; y agua.

En otra realizacion, la viscosidad de la composicion de la presente invencion es de aproximadamente 13.000 cps a aproximadamente 33.000 cps. Por consiguiente, la viscosidad de la composicion de la presente invencion puede ser cualquier cantidad entre aproximadamente 13.000 cps y 33.000 cps, tales como, por ejemplo, 14.000, 15.000, 16.000,

17.000, 18.000, 19.000, 20.000, 21.000, 22.000, 23.000, 24.000, 25.000, 26.000, 27.000, 28.000, 29.000, 30.000,

31.000, 32.000 o 33.000 cps.

El gel se frota o coloca sobre un area de la piel del sujeto y se deja secar. El gel se seca rapidamente, es decir, dentro de aproximadamente 30 segundos a aproximadamente 3 minutos despues de la aplicacion. Ilustrativamente, el gel se frota en una zona de la piel, por ejemplo, en el muslo superior externo y/o cadera diariamente una vez. Despues de la aplicacion el sujeto se lava las manos. La aplicacion del gel origina un nivel creciente de testosterona que tiene un perfil farmacocinetico deseable y es eficaz para tratar o prevenir el hipogonadismo y/o la testosterona baja o los smtomas asociados, o relacionados con el hipogonadismo y/o la testosterona baja en el sujeto. La composicion es por lo tanto util para el tratamiento de un numero de alteraciones o enfermedades.

En una realizacion, la presente invencion emplea un paquete que tiene un revestimiento de polietileno compatible con los componentes de un gel de testosterona, como se describe a continuacion. El paquete puede contener una dosis unitaria o multiples dosis.

En otra realizacion, los metodos y composiciones emplean una composicion que se dispensa desde un recipiente de dosis multiple ngido (por ejemplo, con una bomba manual) que tiene un empaquetamiento de aluminio mas grande, por ejemplo, de la composicion en el interior del recipiente. Dichos empaquetamientos mas grandes tambien pueden comprenden un revestimiento de polietileno como anteriormente. En una realizacion, el recipiente de multiples dosis comprende una bomba sin aire que comprende una bolsa de aluminio con revestimiento de polietileno dentro de un recipiente cilmdrico con una bomba de mano insertada. En una realizacion, la bolsa forrada de lamina de polietileno consta de 44 g o 88 g de producto. En una realizacion, la bomba es capaz de dispensar una cantidad total de alrededor de 75 g de gel. En una realizacion, la bomba se ceba antes de su uso, tal como, por ejemplo, mediante la plena depresion de la bomba tres veces y se desecha el gel. En una realizacion, la bomba contiene producto suficiente para permitir el cebado y un numero fijo de dosis precisas. En una realizacion, cada depresion de la bomba completa proporciona 1,25 g de gel de testosterona. En esta realizacion, una dosis de 3,75 g de gel requerina 3 depresiones de la bomba. Una dosis de 5 g de gel requerina 4 depresiones de la bomba. Una dosis de 7,5 g de gel requerina 6 depresiones de la bomba. Una dosis de 10 g de gel requerina 8 depresiones y asf sucesivamente. Por supuesto, cada depresion de la bomba puede administrar cualquier cantidad de gel de testosterona adecuada para suministrar la dosis deseada. El tamano de la bolsa, la cantidad dispensada y el volumen dispensado por depresion no se limita a estas realizaciones y pueden ser modificados o ajustados para satisfacer las necesidades de la poblacion de pacientes.

Los metodos y composiciones de la presente invencion proporcionan opciones de tratamiento mejoradas para tratar, prevenir, revertir, parar o retardar la progresion del hipogonadismo u otro trastorno asociado con baja testosterona en un sujeto, por ejemplo, un hombre, en comparacion con los disponibles actualmente.

En una realizacion, la composicion farmaceutica de la presente invencion se administra una vez, dos veces, o tres veces al dfa o tantas veces como sean necesarias para conseguir el efecto terapeutico deseado. En otra realizacion, la composicion de la presente invencion se administra una vez, dos veces o tres veces al dfa en dfas alternos. En otra realizacion, la composicion de la presente invencion se administra una vez, dos veces, o tres veces al dfa sobre una base semanal, bisemanal o mensualmente.

En una realizacion, una dosis terapeuticamente eficaz esta entre alrededor de 1,0 g y 10,0 g, preferiblemente entre aproximadamente 1,25 g y 6,25 g.

Ademas de ser util para el tratamiento humano, la presente invencion es tambien util para el tratamiento veterinario de mairnferos, reptiles, aves, animales exoticos y animales de granja, incluyendo mairnferos roedores, y similares. En una realizacion, el mairnfero incluye un primate, por ejemplo, un ser humano, un mono, o un lemur, un caballo, un perro, un cerdo o un gato. En otra realizacion, el roedor incluye una rata, un raton, una ardilla o un conejillo de indias.

La composicion es capaz de liberar el esteroide despues de aplicar la composicion a la piel a una velocidad y duracion que envfa en una realizacion de la presente invencion al menos alrededor de 10 |jg por dfa del esteroide al suero de la sangre del sujeto.

En otra realizacion de la presente invencion, la composicion es capaz de liberar la testosterona despues de aplicar la composicion a la piel de un sujeto a una velocidad y duracion que logra una concentracion circulante en suero de testosterona mayor de alrededor de 300 ng por dl de suero.

En otra realizacion de la presente invencion, la composicion es capaz de liberar la testosterona despues de aplicar la composicion a la piel de un sujeto a una velocidad y duracion que logra una concentracion circulante en suero de

testosterona mayor de aproximadamente 300 ng por dl de suero durante un penodo de tiempo comenzando alrededor de 0,5 horas despues de la administracion y terminando alrededor de 24 horas despues de la administracion.

En otra realizacion de la presente invencion, la composicion es capaz de liberar la testosterona despues de aplicar la composicion a la piel de un sujeto a una velocidad y duracion que logra una concentracion circulante en suero de la 5 testosterona entre alrededor de 298 ng de testosterona por dl de suero a alrededor de 1043 ng de testosterona por dl de suero.

En otra realizacion de la presente invencion, despues de la administracion de la composicion, la concentracion serica de testosterona se mantiene entre aproximadamente 400 y 1050 ng de testosterona por dl de suero.

En otra realizacion de la presente invencion, despues de la administracion de la composicion, la concentracion serica 10 de testosterona se mantiene entre alrededor de 200 y 1800 ng de testosterona por dl de suero.

En otra realizacion de la presente invencion, despues de la administracion de la composicion, la Cmax obtenida es de entre aproximadamente 300 y 5000 ng/dl.

En otra realizacion de la presente invencion, se proporciona la composicion a un sujeto para la administracion diaria de aproximadamente una dosis de 1,25 g, aproximadamente 3,75 g, tal como, por ejemplo, aproximadamente 1,25 g, 15 o aproximadamente 2,50 g, o aproximadamente 3,75 g. Cualquier otra dosis adecuada puede tambien ser administrada.

En todavfa otra realizacion de la presente invencion, el sujeto que necesita tratamiento tiene un nivel de testosterona en suero antes de la primera aplicacion (pretratamiento) de la composicion de la presente invencion de menos de aproximadamente 300 ng/dl.

20 En otra realizacion de la presente invencion, despues de al menos de aproximadamente 30 dfas de administracion diaria de la composicion de la presente invencion, la concentracion de testosterona en suero en un sujeto es al menos de aproximadamente 300 ng/dl a aproximadamente 1050 ng/dl, tal como, por ejemplo, de aproximadamente 300 ng/dl a aproximadamente 400 ng/dl, aproximadamente 300 ng/ dl a aproximadamente 500 ng/dl, de aproximadamente 500 ng/dl a aproximadamente 700 ng/dl, aproximadamente 700 ng/dl a aproximadamente 900 ng/dl, de aproximadamente 25 400 ng/dl a aproximadamente 500 ng/dl, de aproximadamente 500 ng/dl a aproximadamente 600 ng/dl, de

aproximadamente 600 ng/dl a aproximadamente 700 ng/dl, de aproximadamente 700 ng/dl a aproximadamente 800 ng/dl, de aproximadamente 800 ng/dl a aproximadamente 900 ng/dl, de aproximadamente 900 ng/dl a aproximadamente 1000 ng/dl, de aproximadamente 1000 ng/dl a aproximadamente 1100 ng/dl, de aproximadamente 400 ng/dl a aproximadamente 1050 ng/dl, de aproximadamente 500 ng/dl a aproximadamente 1050 ng/dl, de 30 aproximadamente 600 ng/dl a aproximadamente 1050 ng/dl, o de aproximadamente 700 ng/dl a aproximadamente 1050 ng/dl.

En todavfa otra realizacion de la presente invencion, despues de la administracion diariamente de la composicion de la presente invencion, la concentracion de la testosterona total en un sujeto es mayor de alrededor de 300 ng/dl. En una realizacion, la concentracion total de testosterona serica en el sujeto es mayor de aproximadamente 400 ng/dl, 35 aproximadamente 500 ng/dl, aproximadamente 600 ng/dl o aproximadamente 700 ng/dl. En una realizacion, la concentracion de testosterona total se mide despues de 24 horas de la administracion. En una realizacion, la concentracion de testosterona total se mide despues de mas de 2 dfas de la administracion diaria, tal como por ejemplo, despues de 10 dfas, 14 dfas, 20 dfas o 30 dfas.

En otra realizacion de los metodos, kits, combinaciones y composiciones de la presente invencion, la composicion de 40 la presente invencion se administra una vez, dos veces o tres veces al dfa a un sujeto durante al menos aproximadamente 7 dfas. En una realizacion, la composicion se administra una vez al dfa.

Ejemplo 1: Desarrollo de gel(es) de testosterona mejorado(s)

Introduccion

Con el fin de desarrollar una formulacion de gel de testosterona nueva, se llevaron a cabo una serie de estudios 45 exploratorios para preparar y probar las formulaciones de gel que conteman diferentes niveles de testosterona, miristato de isopropilo y alcohol etflico. Estudios preliminares habfan demostrado que la viscosidad del gel se podfa incrementar aumentando ligeramente las concentraciones de los agentes de gelificacion y de los agentes de neutralizacion. Se utilizo un programa estadfstico para generar un diseno para estudiar el efecto de los 3 ingredientes, testosterona, alcohol etflico y miristato de isopropilo en la viscosidad y la permeacion in vitro de la testosterona a partir 50 de geles hidroalcoholicos. Estudios de permeacion in vitro se llevaron a cabo utilizando celdas de difusion Franz. La concentracion de testosterona presente en las muestras del receptor se analizo mediante la tecnica de HPLC o contador de centelleo beta (para la tecnica de marcado radiactivo). Basado en los resultados de estos estudios se prepararon tres formulaciones optimizadas y se ensayaron en cuanto a la permeacion de la piel utilizando el metodo de HPLC. Las tres formulaciones optimizadas mostraron significativa mejora de la viscosidad y permeacion de la piel 55 in vitro comparada con la formulacion comercializada actualmente (gel de testosterona al 1%).

Objetivos

La presente exposicion resume los estudios realizados para desarrollar formulacion(es) de gel de testosterona con viscosidad mejorada, volumen de aplicacion reducido, y penetracion cutanea mejorada in vitro en comparacion con la formulacion comercializada actualmente (gel de testosterona al 1%), y para potencialmente reducir el volumen de 5 aplicacion del gel

Procedimiento

a. Diseno estadfstico

El diseno estadfstico fue creado (Statgraphics Plus 5.1) para estudiar el efecto de 3 ingredientes, testosterona, alcohol etflico y miristato de isopropilo sobre la viscosidad y la permeacion in vitro de testosterona a partir de geles 10 hidroalcoholicos. La concentracion de otros dos ingredientes Carbopol 980 y solucion de hidroxido de sodio 0,1 N se mantuvieron constantes. A continuacion se resume el diseno:

Clase de diseno: Superficie de Respuesta

Nombre del diseno: diseno Box-Behnken

Numero de factores experimentales: 3 (todos continuos)

15 Numero de bloques: 1; Numero de ejecuciones: 15 (al azar)

Grados de libertad del error: 5

Factores

Bajo (%) Alto (%)

Testoesterona

1,33 2,0

Miristato de isopropilo

0,5 1,0

Alcohol (95% v/v)

72,5 76,1

El siguiente cuadro resume los ingredientes de las formulaciones de prueba segun se crearon por el diseno estadfstico. Estas formulaciones fueron preparadas para tamano de 1 kg y empaquetado en recipientes de vidrio para las pruebas 20 analfticas y las pruebas de permeacion de la piel

Tabla 3. Ingredientes combinados para producir formulaciones de prueba y formulaciones de control (% p/p)

N° de F (Formulacion)

T (Testosterona) Alcohol (95% v/v) Miristato de isopropilo Carbopol 980 NaOH 0,1 N Agua purificada

41

1,665 74,3 0,75 1,0 7,00 15,3

42

1,665 72,5 0,50 1,0 7,00 17,3

43

1,665 76,1 0,50 1,0 7,00 13,7

44

2,000 74,3 0,50 1,0 7,00 15,2

45

1,330 74,3 0,50 1,0 7,00 15,9

46

1,330 76,1 0,75 1,0 7,00 13,8

47

2,000 74,3 1,00 1,0 7,00 14,7

48

1,665 74,3 0,75 1,0 7,00 15,3

49

1,330 74,3 1,00 1,0 7,00 15,4

50

2,000 72,5 0,75 1,0 7,00 16,8

51

1,665 76,1 1,00 1,0 7,00 13,2

52

2,000 76,1 0,75 1,0 7,00 13,2

5

10

15

20

25

30

53

1,665 72,5 1,00 1,0 7,00 16,8

54

1,330 72,5 0,75 1,0 7,00 17,4

55

1,665 74,3 0,75 1,0 7,00 15,3

56(control)

1,000 72,5 0,50 0,9 4,75 20,4

b. Pruebas analfticas

Todas las formulaciones de ensayo y muestras de control se analizaron por atributos ffsicos (apariencia, pH y viscosidad) y atributos qmmicos (ensayos para la testosterona, miristato de isopropilo y alcohol).

c. Estudios de permeacion de la piel in vitro

La permeacion de la testosterona fue estudiada cuantitativamente con piel humana colocada sobre celdas de difusion de Franz. La piel se monto horizontalmente entre la mitad donante y la mitad receptora. El area de la superficie de la piel expuesta a la formulacion en la camara donante fue de 0,64 cm2, y el volumen de la receptora fue 5,0 ml. La temperatura se mantuvo a 37° C con la ayuda de una camisa de agua de circulacion doble que rodeaba la parte inferior de la celda. La camara donadora estaba abierta en la parte superior.

Metodo de radiomarcaje

Las formulaciones de ensayo fueron mezcladas con 14C testosterona marcada. La formulacion marcada (radiomarcada) (5-15 mg de gel que contema (0,125-0,250 jCi) se aplico sobre la superficie de la epidermis gravimetricamente. Muestras periodicas (0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 y 24 h) se tomaron de la celda receptora para medir la radioactividad / cantidad de farmaco permeado a traves de la piel. Ademas tambien se determino la cantidad de marcado/farmaco remanente en la piel en las muestras de piel. Mas detalles de estos experimentos y los resultados se presentan en el Ejemplo 2.

Metodo de HPLC

La formulacion (300 mg ± 5%, que contema 3000 jg del farmaco basada en gel al 1 %) se aplico sobre la superficie de la epidermis gravimetricamente. Se recogieron aftcuotas periodicamente (0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 y 24 h) y se reemplazaron con tampon fresco. Mas tarde las aftcuotas se analizaron en cuanto al contenido de testosterona. Mas detalles de estos experimentos y resultados se presentan en el Ejemplo 3.

d. Analisis de Datos

Ademas de los datos reportados en los correspondientes ejemplos, los datos de ambos metodos radiomarcaje y HPLC se analizaron posteriormente mediante el programa estadfstico (Statgraphics Plus 5.1). El programa Statgraphics tambien se utilizo para predecir los niveles optimos de los diferentes factores que podnan proporcionar la maxima respuesta.

Resultados y Discusion.

Datos Analfticos

Todas las formulaciones de prueba eran transparentes y teman un pH entre 5,68-5,82. El contenido de testosterona, miristato de isopropilo y alcohol estaban cerca del objetivo. La siguiente tabla resume los resultados analfticos del ensayo despues de 1 mes de almacenamiento a 40° c/75% de HR.

Tabla 4. Resultados analfticos de las formulaciones de prueba y formulacion de control*

N° de F (Formulacion)

Apariencia pH Viscosidad (cps) Ensayo-T (%) Ensayo-Alcohol (95%v/v) Ensayo IPM (%)

41

Gel transparente 5,79 23567 1,69 73,8 0,67

42

Gel transparente 5,76 26900 1,66 71,8 0,45

43

Gel transparente 5,82 23000 1,69 75,5 0,44

44

Gel transparente 5,75 26700 2,00 74,1 0,44

45

Gel transparente 5,76 25467 1,32 73,7 0,44

46

Gel transparente 5,69 30233 1,40 74,5 0,74

47

Gel transparente 5,78 24733 2,02 73,3 0,92

48

Gel transparente 5,79 24767 1,66 74,3 0,68

49

Gel transparente 5,76 24300 1,33 73,8 0,93

50

Gel transparente 5,72 26133 2,02 71,7 0,68

51

Gel transparente 5,82 20700 1,75 75,4 0,93

52

Gel transparente 5,83 19733 2,00 75,5 0,68

53

Gel transparente 5,72 26033 1,68 71,7 0,95

54

Gel transparente 5,69 28267 1,34 71,9 0,69

55

Gel transparente 5,77 23233 1,67 74,0 0,68

56 (control)

Gel transparente 5,59 22033 1,01 72,4 0,44

*Resultados del ensayo despues de 1 mes de almacenaje a 40° C/75% HR T=testosterona, IPM=miristato de isopropilo

Como uno de los objetivos de este estudio es aumentar la viscosidad del gel, se realizo un analisis estadfstico para evaluar el efecto de los factores de prueba, testosterona, miristato de isopropilo y alcohol etflico en la respuesta de la 5 variable de viscosidad. A continuacion se presenta un resumen del analisis:

Tabla 5. ANOVA para la viscosidad

Analisis de varianza para la viscosidad

Fuente

Suma de cuadrados Df Promedio de cuadrado Relacion F Valor de P

A:T

9,41613E6 1 9,41613E6 1,58 0,2488

B:IPM

3,16945E6 1 3,16945E6 0,53 0,4892

C:EtOH

1,94337E7 1 1,94337E7 3,27 0,1137

AA

1,43962E6 1 1,43962E6 0,24 0,6379

AB

3,37413E6 1 3,37413E6 0,57 0,4760

AC

3,50601E7 1 3,50601E7 5,89 0,0456

BB

1,00605E6 1 1,00605E6 0,17 0,6933

BC

1,95303E6 1 1,95303E6 0,33 0,5847

CC

286812,0 1 286812,0 0,05 0,8325

Error total

4,16608E7 7 5,95155E6

Total (corr.) 1,17733E8 16

10 Con referencia ahora a la figura 1, donde en el grafico A representa la testosterona, B representa el miristato de isopropilo, C representa EtOH, y las letras conjuntas representan una combinacion de factores, es evidente que la combinacion de alcohol y testosterona (es decir, AC) tiene un efecto negativo significativo en la viscosidad. Esta observacion es consistente con estudios anteriores con alcohol; para maximizar la viscosidad el nivel de alcohol debena estar en el nivel mas bajo posible.

15 Datos de permeacion: tecnica de radiomarcaje

Se emplearon en este estudio muestras de piel de dos donantes. Para minimizar la variabilidad entre pieles, los datos de permeacion, y % de marcado permeado (%LP), de las formulaciones de ensayo se normalizaron con la formulacion de control probada con la piel del donante correspondiente. Se realizo un analisis estadfstico adicional de la relacion

10

de %LP (prueba/control, relacion %LP) para obtener tendencias y concentraciones optimas de testosterona, miristato de isopropilo y alcohol etflico. A continuacion se presenta el resumen del analisis:

Tabla 6. Tabla de datos del radiomarcaje utilizados para el analisis estadfstico*

N° de F (Formulacion)

Donante T IPM Alcohol (95%v/v) %LP Relacion %LP

41

8127 1,665 0,75 74,3 4,86 0,83

42

8127 1,665 0,50 72,5 3,45 0,59

43

8127 1,665 0,50 76,1 2,7 0,46

44

8127 2,000 0,50 74,3 3,8 0,65

45

8300 1,330 0,50 74,3 3,51 0,46

46

8300 1,330 0,75 76,1 6,37 0,84

47

8300 2,000 1,00 74,3 3,57 0,47

48

8300 1,665 0,75 74,3 5,38 0,71

49

8300 1,330 1,00 74,3 9,47 1,25

50

8300 2,000 0,75 72,5 5,69 0,75

51

8300 1,665 1,00 76,1 6,73 0,89

52

8300 2,000 0,75 76,1 2,22 0,29

53

8300 1,665 1,00 72,5 4,61 0,61

54

8300 1,330 0,75 72,5 4,33 0,57

55

8300 1,665 0,75 74,3 4,33 0,57

56(control)

8127 1,000 0,50 72,5 5,87 1,00

56(control)

8300 1,000 0,50 72,5 7,56 1,00

*Datos del %LP del Ejemplo 2. Relacion %LP calculada a partir de valores %LP.

5 T = testosterona, IPM = miristato de isopropilo, LP = marcado permeado

Tabla 7. ANOVA para la Relacion de % de marcado permeado (relacion %LP)

Analisis de varianza para la viscosidad

Fuente Suma de cuadrados Df Promedio de cuadrados Relacion F Valor P

A:T

0,213314 1 0,213314 7,19 0,0315

B:IPM

0,107294 1 0,107294 3,62 0,0990

C:EtOH

0,00430679 1 0,00430679 0,15 0,7145

AA

0,119589 1 0,119589 4,03 0,0847

AB

0,131132 1 0,131132 4,42 0,0736

AC

0,0554353 1 0,0554353 1,87 0,2140

BB

0,00724917 1 0,00724917 0,24 0,6363

BC

0,0800686 1 0,0800686 2,70 0,1445

CC

0,00941549 1 0,00941549 0,32 0,5908

Error total

0,207716 7 0,0296737

Total (corr.) 0,947084 16

El diagrama de Pareto en la figura 2 muestra que el nivel de testosterona tiene un efecto negativo significativo, y el nivel de miristato de isopropilo tiene un efecto positivo sobre el % del marcado permeado (no estadfsticamente significativo). El analisis anterior sugiere que el maximo nivel de testosterona en la formulacion de gel debena ser 5 inferior al nivel mas alto estudiado. Este analisis tambien sugiere que el nivel maximo de miristato de isopropilo en la formulacion del gel debena estar cerca del nivel mas alto estudiado.

Datos de permeacion: tecnica de HPLC

Las mismas muestras de piel (dos donantes) utilizadas en el estudio de radiomarcaje se utilizaron en este estudio. Para minimizar la variabilidad entre pieles, los datos de permeacion (flujo o cantidad acumulada liberada, CAR) de las 10 formulaciones de prueba se normalizaron con la formulacion de control probada con la piel del donante correspondiente. Se llevo a cabo un analisis estadfstico adicional sobre la relacion de CAR (prueba/control, relacion CAR) para obtener tendencias y concentraciones optimas de testosterona, miristato de isopropilo y alcohol etflico. A continuacion se presenta el resumen del analisis:

Tabla 8. Tabla de datos HPLC usados en el analisis estadfstico*

Numero de F (Formulacion)

Donante T IPM Alcohol (95%v/v) CAR Relacion CAR

41

8127 1,665 0,75 74,3 189,81 1,02

42

8127 1,665 0,50 72,5 188,21 1,01

43

8127 1,665 0,50 76,1 50,11 0,27

44

8127 2,000 0,50 74,3 151,95 0,82

45

8300 1,330 0,50 74,3 74,13 0,69

46

8300 1,330 0,75 76,1 117,87 1,09

47

8300 2,000 1,00 74,3 114,61 1,06

48

8300 1,665 0,75 74,3 208,82 1,94

49

8127 1,330 1,00 74,3 298,76 1,61

50

8127 2,000 0,75 72,5 94,71 0,51

51

8127 1,665 1,00 76,1 254,57 1,37

52

8127 2,000 0,75 76,1 113,93 0,61

5

10

15

20

25

53

8127 1,665 1,00 72,5 326,46 1,76

54

8127 1,330 0,75 72,5 200,45 1,08

55

8127 1,665 0,75 74,3 240,61 1,30

56(control)

8127 1,000 0,50 72,5 185,71 1,00

56 (control)

8300 1,000 0,50 72,5 107,79 1,00

* T = Testosterona, IPM= miristato de isopropilo, CAR = cantidad acumulada liberada

Tabla 9. ANOVA para la relacion de la cantidad acumulada liberada (relacion CAR) Analisis de varianza para la Viscosidad

A:T

0,452519 1 0,452519 3,27 0,1135

B:IPM

1,01713 1 1,01713 7,35 0,0302

C:EtOH

0,18431 1 0,18431 1,33 0,2864

AA

0,164241 1 0,164241 1,19 0,3120

AB

0,0291287 1 0,0291287 0,21 0,6603

AC

0,0600202 1 0,0600202 0,43 0,5312

BB

0,000234383 1 0,000234383 0,00 0,9683

BC

0,0737582 1 0,0737582 0,53 0,4891

CC

0,200542 1 0,200542 1,45 0,2678

Error total

0,968701 7 0,138386

Total (corr.) 3,03859 16

Los resultados de la Tabla 8 se sometieron a un analisis de regresion y genero el algoritmo siguiente:

Relacion CAR = 5,1239 - 0,4403*T + 1,5781*IPM - 0,0607*EtOH

donde T es la cantidad de testosterona % (p/p), IPM es la cantidad de miristato de isopropilo % (p/p), y EtOH es la cantidad (p/p) de alcohol 95% v/v

En una realizacion de la invencion, los valores de T, IPM y EtOH se seleccionan dentro de los intervalos dados a continuacion de tal manera que el algoritmo dado anteriormente da un valor de relacion CAR mayor que 1, preferiblemente mayor que 1,1, o mas preferiblemente mayor que 2. Los intervalos son: entre 1,0 y 2,0% (p/p) de testosterona, preferiblemente entre 1,15 y 1,8% (p/p) de testosterona; entre 0,2% y 2,0% (p/p) de miristato de isopropilo, preferiblemente entre 0,6 y 1,2% (p/p) de miristato de isopropilo, y entre aproximadamente 60,0% y 80% (p/p) de alcohol al 95% v/v, preferiblemente entre aproximadamente 72,5% y 76,1% (p/p) de alcohol al 95% v/v.

Haciendo ahora referencia a la grafica de Pareto en la figura 3, el analisis estadfstico claramente muestra que el nivel de miristato de isopropilo tiene un efecto positivo significativo y el nivel de testosterona tiene un efecto negativo (no estadfsticamente significativo) en la relacion CAR. La figura. 3 sugiere que el nivel maximo de testosterona en la formulacion de gel debena ser inferior al mas alto nivel estudiado. Este analisis tambien sugiere que el nivel maximo de miristato de isopropilo en la formulacion de gel debena ser cercano al nivel mas alto estudiado. Los resultados de permeacion del metodo HPLC son cualitativamente consistentes con los resultados del metodo de radiomarcaje.

Optimizacion de la respuesta

Los resultados de permeacion del metodo HPLC son cualitativamente similares a los del metodo de radiomarcaje. Por conveniencia, los datos del estudio HPLC se utilizaron para predecir (optimizacion estadfstica) los niveles optimos de testosterona, miristato de isopropilo y alcohol para una respuesta dada. El programa estadfstico produjo la siguiente combinacion de niveles de los factores que maximiza la relacion de la cantidad acumulada liberada (relacion CAR).

Tabla 10. Niveles de los factores optimizados para la cantidad acumulada liberada (Relacion CAR)

Objetivo: maximizar la relacion

CAR Valor optimo = 1,81748

Factor

Bajo Alto Optimo

T

1,0 2,0 1,28995

IPM

0,5 1,0 1,0

EtOH

72,5 76,1 73,7366

Las figuras: 4 y 5 ilustran la respuesta estimada (relacion CAR) para una determinada combinacion de testosterona y miristato de isopropilo en un nivel de alcohol al 95% v/v de 74,3% (p/p).

a. Seleccion de la formulacion

5 Basado en los graficos de superficie de respuesta y los niveles optimos de los factores predichos, las siguientes 3 formulaciones fueron seleccionadas para estudios de permeacion adicionales. Una vez mas por conveniencia estas 3 formulaciones se ensayaron por el metodo de HPLC solamente.

Tabla 11. Ingredientes combinados para producir formulaciones seleccionadas y formulaciones de control (% p/p)

Numero de F

T Alcohol Miristato de Carbopol NaOH Agua purificada

(Formulacion)

(Testosterona) (95% v/v) isopropilo 980 0,1 N

57

1,20 73,5 1,00 1,0 7,00 16,3

58

1,40 73,5 1,00 1,0 7,00 16,1

59

1,60 73,5 1,00 1,0 7,00 15,9

56 (control)

1,00 72,5 0,50 0,9 4,75 20,4

10 La siguiente tabla resume los resultados de los ensayos analfticos iniciales (despues de la preparacion) para las formulaciones seleccionadas.

Tabla 12. Resultados analfticos de las pruebas analfticas para formulaciones seleccionadas y formulacion de control

N° de F (Formulacion)

Apariencia pH Viscosidad (cps) Ensayo T (%) Ensayo alcohol (95% v/v) Ensayo IPM (%)

57

Gel transparente 5,66 24500 1,21 73,1 0,94

58

Gel transparente 5,71 25533 1,42 72,7 0,94

59

Gel transparente 5,68 24800 1,61 73,3 0,94

56 (control)

Gel transparente 5,57 20267 1,02 71,8 0,43

En la siguiente tabla y en la figura. 6 se resume los datos de permeacion de las 3 formulaciones seleccionadas (los 15 puntos de los datos para la figura 6 y la tabla se obtuvieron a partir del Ejemplo 4, Tablas 17-20).

Tabla 13. Datos de-HPLC utilizado para el analisis estadfstico*

Tiempo

F56 (1% gel) F57 (1,2% gel) F58 (1,4% gel) F59 (1,6% gel)

(hr)

CAR SD CAR SD CAR SD CAR SD

0

0

0

0,0 0 0,0 0,00 0,0

0

1

0 0 0,5 0,7 0,0 0,00 0,0 0

5

10

15

20

25

30

35

40

2

0 0 1,3 0,5 1,3 1,2 0,5 0,3

4

0,40 0,1 4,3 1,3 4,0 1,0 2,9 1,3

6

1,52 0,3 14,2 4,5 11,0 2,7 13,8 4,6

8

6,96 1,5 38,0 11,5 35,9 11,0 43,5 10,8

10

18,35 3,4 57,0 17,9 65,4 14,3 64,5 10,4

22

48,20 12,5 119,2 51,0 129,1 11,8 137,5 30,6

24

50,76 12,3 129,7 50,4 137,0 13,9 156,3 36,4

*Puntos de los datos obtenidos del ejemplo 4, tablas 17-20

Todas las 3 formulaciones seleccionadas mostraron permeacion significativamente mejor (2-3x la cantidad acumulada liberada) que el control. Estos resultados apoyan aun mas las observaciones de la seleccion del cribado inicial de las formulaciones y formaron la base para la seleccion de las formulaciones finales.

Conclusiones

El programa estadfstico se utilizo para disenar los experimentos basado en 3 factores claves o sea, la testosterona, miristato de isopropilo y alcohol etilico. El programa tambien se utilizo para analizar los datos analfticos y los datos de permeacion de la piel in vitro, e identificar las tendencias y los niveles optimos de cada uno de los factores para maximizar la respuesta (permeacion).

Las tres formulaciones seleccionadas de gel de testosterona tienen mayor viscosidad (~4.000 cps) que la formulacion de control.

Fue observada una permeacion in vitro mejorada de testosterona (2-3 veces mas que el control) a traves de la piel humana con dermatoma con las tres formulaciones de gel de testosterona seleccionadas.

Ejemplo 2: absorcion percutanea in vitro de formulaciones experimentales de testosterona en gel a traves de piel humana por el metodo de radiomarcaje

Materiales

Las formulaciones fueron preparadas y suministrado por Solvay Pharmaceuticals. La testosterona (14C) se adquirio de American radiolabeled Chemicals Inc, (St Louis, MO). Todos los otros productos qmmicos y reactivos fueron adquiridos de proveedores aprobados y fueron de la mayor calidad y pureza disponible.

Metodos

Descripcion del aparato de celda de difusion transdermica

El aparato de celda de difusion transdermica usado en este estudio (PermeGear, Bethlehem, PA) posee hasta 9 celdas de difusion en serie y el fluido receptor es agitado por la perla magnetica a 600 rpm. Se estudio la absorcion percutanea in vitro cuantitativamente con la piel humana colocada en la celda de difusion de Franz. La piel se monto horizontalmente entre las mitades del donante y el receptor de la celda de difusion. El area de superficie de la piel expuesta a la formulacion en la camara del donante fue de 0,64 cm2, y el volumen de las celdas del receptor fue 5,0 ml.

El compartimento del receptor se lleno con solucion salina tamponada de fosfato pH 7,4 (PBS) y propilenglicol (1:1) y sulfato de gentamicina (50 pg/ml). Una camisa doble de circulacion de agua (37° C) rodea la celda receptora para tener la temperatura de la piel mantenida a nivel fisiologico. La camara donante estaba abierta hacia el medio ambiente externo exponiendo asf la superficie de la piel al aire del laboratorio. La humedad relativa (RH) de la zona experimental (alrededor de la configuracion de la celda de difusion) se controlo para cada experimento y asf se encontro que estaba en el intervalo de 35 a 45% para todos los experimentos.

Estudio de permeacion de la piel

La piel humana (region del muslo) con dermatoma de 0,3 mm de espesor se obtuvo a partir de un banco de tejidos (US Tissue and Cell, Salt Lake City, Utah) a partir de cadaveres. La piel se recogio dentro de las 8 horas de la muerte del donante y se congelo en 10% p/v de glicerol en solucion salina normal. La piel se almaceno a -80° C hasta su uso. La piel de dos donantes diferentes se utilizo en los experimentos. Cada experimento se llevo a cabo con cada formulacion por lo menos 6 veces utilizando la piel de un donante. Los datos de permeacion de la piel de las formulaciones se compararon con los de permeacion del gel comercializado al 1% (en 6 repeticiones) probado sobre

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

la piel del mismo donante que las formulaciones de ensayo y todos los datos se normalizaron para la formulacion de referencia (comercializada).

Testosterona radiomarcada (14C, actividad espedfica 50-60 mCi/mmol) fue utilizada para este proposito. Esta fue suministrada por America Radiolabeled Chemicals y es 99,5% pura, como se comprobo por HPLC.

Los geles radioactivos se prepararon para ser aplicados de 0,125 a 0,250 pCi en una cantidad minima del gel que se extiende en 0,64 cm1 2 del area de difusion de la celda de Franz (0,64 cm2). La cantidad minima fue de al menos 5,0 a 15,0 mg. Una cantidad apropiada de testosterona radiactiva (12,5 pCi, por 125 pl de etanol) se evaporo en un matraz de fondo redondo hasta que el disolvente se evaporo completamente a sequedad. A este matraz, se anadieron 500 mg de la formulacion de gel fna y se agito con vortex durante 5 minutos y se dejo equilibrar durante la noche (12 a 16 h). Este gel se agito con vortex nuevamente durante 30 minutos para obtener geles homogeneos. La homogeneidad de la radioactividad de la formulacion se determino por el nivel de contaje de 9 muestras exactamente pesadas (~5 mg) (estandares).

La piel congelada se descongelo a temperatura ambiente, manteniendo la piel a temperatura ambiente durante aproximadamente de 30 a 45 minutos. Esta fue lavada a continuacion con agua para eliminar el glicerol. La piel se puso entonces en PBS pH 7,4 y se agito suavemente con un agitador (100 rpm) durante 20 min para eliminar los restos de glicerol. La piel lavada se monto en las celdas aproximadamente 30 minutos antes de la aplicacion de las formulaciones. La formulacion (5 a 15 mg) se aplico sobre la superficie de la epidermis gravimetricamente usando una jeringa (para cada determinacion se dispenso suficiente gel para cubrir la superficie de prueba y el peso del gel dispensado se determino). Muestras periodicas se tomaron de la celda del receptor para medir la cantidad de farmaco transportado a traves de la piel (1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 y 24 horas).

Procedimientos de lavado:

Al final de la prueba (24 horas), el farmaco residual que quedaba en la superficie de la piel se retiro por lavado de la superficie con 200 pl de diferentes disolventes de acuerdo con el siguiente protocolo:

1er lavado: Cetavlon™ alcoholico (10/90 v/v)

2° lavado: agua

3° lavado: Cetavlon™ alcoholico (10/90 v/v)

4° lavado: agua 5° lavado: agua.

El area de aplicacion fue despues frotada con un palillo de algodon lana (Q-tip). Los lavados, el palillo de algodon y la celda del donante se recogieron con 20 ml de etanol y se permitio la extraccion de toda la radiactividad en el etanol. El area expuesta se recogio mediante un punzon de biopsia. Para tener en cuenta la difusion lateral, porciones laterales de piel se recogieron y se conto la radiactividad para dar cuenta del balance de masa para los experimentos.

La piel de la zona de difusion activa, asf como la piel lateral fueron cortadas en trozos con una tijera de diseccion de puntas agudas (Sigma) y digeridas para la extraccion de la radiactividad, con 3 ml de Soluene 350™ (Packard) durante la noche.

La radiactividad contenida en las muestras obtenidas como se describio anteriormente se midio en su totalidad o en partes alfcuotas pesadas utilizando un contador beta de lfquido de centelleo equipado con software dedicado.

La evaluacion se realizo para los estandares (0,5 ml/5ml picofluor40TM) para el fluido receptor (1,0 ml/10 ml Picofluor 40™) y para una parte alfcuota exactamente pesada de la solucion etanolica que contema los disolventes de lavado (0,5 ml/5 ml Picofluor 40TM).

Para la epidermis y dermis, despues de la digestion, 15 ml de Hionic Fluor30TM (Packard) fueron anadidos. El ruido de fondo de la cuenta se deduce automaticamente de la tasa del contaje de cada muestra en cuentas por minuto (dpm).

Analisis de datos:

Los resultados se expresaron en cantidades o porcentajes de la testosterona aplicada, que se encontraba en los diferentes compartimentos. Las cantidades aplicadas de testosterona se determinaron a partir de los niveles de contaje de los patrones diluidos. Cada resultado representa el valor medio de 6 determinaciones experimentales y se asocio con su error estandar de la media:

1. La cantidad de testosterona y el % de la dosis absorbida en el fluido del receptor para cada tiempo se calcularon como sigue:

% = (Qt/Qi) x 100 16

5

10

15

20

25

30

35

donde Qt representa la cantidad absorbido a tiempo t, y Qi, la cantidad aplicada a tiempo 0,

2. La cantidad total y el % correspondiente de la dosis absorbida como funcion del tiempo (valores acumulados),

3. El flujo medio de testosterona permeado se calculo a partir de la pendiente de la porcion lineal del grafico de Q frente al tiempo y se expreso como pCi/cm2/h

4. La cantidad y el % de la dosis administrada, que se encontro en la piel y en los disolventes de lavado.

La validez de la prueba se comprobo balanceando la radiactividad que se encontro en las diferentes muestras (este resumen debena estar comprendido, para cada prueba, entre el 90% y 110% de la dosis. aplicada).

Resultados y conclusiones

La Tabla 14 muestra que las formulaciones F45, F47, F52, F53, F54 y F55 son permeables a una cantidad significativamente menor de testosterona que la F56 (P < 0,001). Para las formulaciones F41, 42, 43, 44, 46, 48, 50, y 51 las cantidades permeadas parecen ser mas bajas que para F56. Sin embargo, la diferencia entre estas formulaciones y F56 no fue estadfsticamente significativa (P > 0,05). Sin embargo F49 tuvo una permeacion mayor que F56 pero la diferencia entre estas dos formulaciones no fue estadfsticamente significativa (P > 0,05). Los datos del balance de masa indican diferentes niveles de retencion de la piel de testosterona. Ademas, estos datos demuestran tambien que el balance de masa total esta de 90 a 110% de la cantidad inicial de 14C testosterona aplicada (Tabla 14).

El flujo de las formulaciones F41, F42, 46, F49 y F50, si bien parecfa ser superior al de F56, no produjo diferencias que fueran estadfsticamente significativas (P > 0,05). El flujo de todas las otras formulaciones, aunque pareciera ser menor que el de control, no produjo diferencias con respecto a F56 que fueran estadfsticamente significativas excepto para F45 (P > 0,05).

De este estudio, queda claro que la velocidad y el grado de permeacion a la testosterona a traves de la piel humana de todas las formulaciones de ensayo fueron menores (o similares en algunos casos) a los de la formulacion de referencia y ninguna de las formulaciones de ensayo demostro una permeacion significativamente mas alta que la formulacion de referencia (F56).

Estudios de las limitaciones para el flujo: los estudios realizados aqrn se basan en una cinetica de dosis definida donde el paso limitante de la tasa es la cantidad de gel utilizada. Debido a nuestro uso de una dosis definida, se obtuvo un perfil no lineal de permeacion con la mayona de las formulaciones que hizo diffcil calcular el flujo de equilibrio. De cualquier manera, se utilizaron puntos de tiempo de 2-10 horas para calcular los valores de flujo lo que es una suposicion de un valor lineal de la progresion de flujo, aunque en la realidad, el equilibrio no se logro en estos experimentos. De ah que los valores de AUC sean una representacion mejor para comparar las formulaciones que los valores de flujo.

Tabla 14: Estudios de balance de masa DONANTE 8127

F41 F42 F43 F44 F56

Prome- dio D.E. Prome- dio D.E. Promedio D.E. Promedio D.E. Promedio D.E.

% en lavado

72,84 19,88 82,63 12,27 95,46 8,71 92,22 3,68 92,01 13,45

% piel lateral

1,15 2,14 0,27 0,18 0,31 0,41 0,36 0,29 0,59 0,40

% piel control

10,57 4,50 6,38 5,27 4,18 1,14 5,80 2,28 3,52 2,39

% permeado

4,86 1,53 3,45 0,43 2,70 0,70 3,80 2,05 5,87 5,05

% total

89,42 92,73 102,65 102,18 101,99

DONANTE 8300

F45 F46 F47 F48 F56

Prome- dio D.E. Prome- dio D.E. Prome- dio D.E. Promedio D.E. Promedio D.E.

% en lavado

95,41 5,29 86,91 3,16 87,98 13,59 79,68 7,41 86,08 3,67

% piel lateral

0,24 0,14 0,42 0,17 0,14 0,08 0,25 0,10 0,21 0,09

% piel control

4,09 2,05 4,67 1,84 2,29 0,84 4,88 2,76 4,07 1,59

% per- meado

3,51 1,65 6,37 3,98 3,57 1,25 5,38 3,81 7,56 1,78

% total

103,25 98,37 93,98 90,19 97,92

DONANTE 8300

F49 F50 F51 F52 F56

Prome dio D.E. Prome dio D.E. Promedio D.E. Promedio D.E. Promedio D.E.

% en lavado

79,64 5,61 88,34 2,30 91,04 8,28 95,51 4,07 86,08 3,67

% piel lateral

0,41 0,24 0,29 0,25 0,54 0,59 0,23 0,21 0,21 0,09

% piel control

8,29 2,69 5,70 2,12 6,58 1,92 2,67 0,84 4,07 1,59

% per- meado

9,47 2,14 5,69 1,72 6,73 2,28 2,22 0,40 7,56 1,78

% total

97,82 100,01 104,89 100,64 97,92

DONANTE 8300

F53 F54 F55 F56

Promedio D.E. Promedio D.E. Promedio D.E. Promedio D.E.

% en lavado

85,33 4,58 87,39 4,37 90,02 2,64 86,08 3,67

% piel lateral

0,20 0,08 0,35 0,33 0,09 0,05 0,21 0,09

% piel control

9,14 2,93 5,88 3,69 4,37 3,29 4,07 1,59

% per- meado

4,61 0,62 4,33 0,68 4,33 0,68 7,56 1,78

% total

99,28 97,95 98,81 97,92

5

Ejemplo 3: absorcion percutanea in vitro de formulaciones experimental de gel de testosterona a traves de la piel humana medida por el metodo de HPLC

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Metodos

Piel humana: piel humana congelada fue suministrada por U.S. Tissue and Cell (Cincinnati, OH). La piel fue enviada con hielo seco y una vez recibida, almacenada a -80° C hasta su uso. El espesor medio de la piel con dermatoma fue de 540 pm. Cada experimento se llevo a cabo en replicas de seis (n = 6) usando el mismo donante para cada formulacion dada. Ademas, cada donante fue probado en cuanto a la permeacion del gel al 1% comercializado (F56) por triplicado y todos los datos se normalizaron a esta medicion.

Formulaciones: las formulaciones se prepararon y suministraron por Solvay Pharmaceuticals. Las formulaciones fueron ciegas excepto la formula del producto comercializado/de control (F56).

Estudios de transporte: se estudio la absorcion percutanea in vitro cuantitativamente con la piel humana colocada en la celda de difusion de Franz. La piel se monto horizontalmente entre la mitad donante y receptora. El area de la superficie de la piel expuesta a la formulacion en la camara donante fue de 0,64 cm2, y el volumen de receptor fue 5,0 ml. La temperatura se mantuvo a 37° C con la ayuda de una camisa de agua de circulacion doble que rodeaba la parte inferior de la celda. Esto permitio que la temperatura de la piel se mantuviera a nivel fisiologico. La camara de donante estaba abierta en la parte superior.

El compartimento receptor se relleno con fluido receptor que consistio en solucion salina tamponada con fosfato a pH 7,4 (PBS) y propilenglicol (1:1). La piel se monto en las celdas aproximadamente 30 minutos antes de la aplicacion de las formulaciones. Se aplico la formulacion (300 mg ± 5% que contema 3000 pg del farmaco en base a un gel al 1%) sobre la superficie de la epidermis gravimetricamente. Muestras de 0,3 ml se recogieron periodicamente (0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 y 24 horas) y se reemplazaron con tampon fresco.

Ensayo: las muestras se analizaron para el contenido de testosterona usando un ensayo de HPLC. Las condiciones / detalles fueron como sigue:

Fase movil: acetonitrilo : agua (50 : 50)

Columna: C18, 3 pm, 150 mm Phenomenex (Nucleosil).

Volumen de inyeccion: 30 pl

Velocidad de flujo: 1 ml/min

Deteccion UV: 239 nm

Resultados

Haciendo referencia a la tabla 15, los resultados se expresan como las cantidades acumuladas de testosterona permeada en funcion del tiempo para las diferentes formulaciones. La tabla muestra la cantidad acumulada permeada con relacion a la formula de producto de control / comercializado usando el mismo donante de la piel humana. El flujo medio de testosterona permeado se calculo a partir de la pendiente de la porcion lineal de la CAR (cantidad acumulada liberada) frente al grafico del tiempo y se expresa como pg/cm2/h. Los resultados se expresan como la relacion del flujo de la formulacion de prueba y la formulacion de control (prueba / control). La cantidad acumulada de farmaco permeada a traves de la piel por centfmetro cuadrado de area se comparo tambien con la de la formulacion comercializada y se expreso como una relacion (prueba / control). Por lo tanto, cada formulacion se comparo con la formula del producto comercializado en cuanto a su permeacion acumulada y el valor de flujo y los resultados se compilan en la tabla 15. La comparacion de cada formulacion a la formula del producto comercializado se evaluo en cuanto a su significacion estadfstica usando ANOVA. El promedio de las diferencias con p < 0,05 fueron considerados estadfsticamente significativos. Los datos brutos para cada formulacion en relacion a la formula del producto comercializado muestran la relacion de flujo y la relacion de CAR, asf como las conclusiones estadfsticas.

Conclusiones

Se observo permeacion de la testosterona a traves de piel humana con dermatoma con todas las formulaciones y la permeacion vario desde 1 hasta 7% con las diversas formulaciones.

Con referencia de nuevo a la tabla 15, se muestra que se observo una permeacion mejorada con respecto a la formulacion del producto comercializado tal como se determina mediante una comparacion de la cantidad acumulada de farmaco permeado despues de 24 horas y/o el flujo a niveles estadfsticamente significativos para las formulaciones F 48, F 49 y F 53.

Tabla 15:

Formulacion

Donante Flujo (pg/cm2/h) Cantidad acumulada relativa (CAR) (pg) Desviacion estandar relativa ((ED/Prome dio)* 100) Rela- cion de flujo Rela- cion CAR ^Estadfsticamente mejor que formulacion comercializada?

Relacion de flujo

Relacion CAR

F41(n=4)

8127 13,03 189,81 11,87 0,65 1,02 No No

F42(n=5)

8127 10,944 188,21 55,52 0,54 1,01 No No

F43(n=6)

8127 3,44 50,11 23,91 0,17 0,27 No No

F44(n=6)

8127 10,57 151,95 22,05 0,53 0,82 No No

F45(n=6)

8300 5,95 74,13 29,00 0,47 0,69 No No

F46(n=6)

8300 11,16 117,87 22,60 0,88 1,09 No No

F47(n=6)

8300 10,85 114,61 22,57 0,86 1,06 No No

F48(n=6)

8300 20,53 208,82 39,5 1,62 1,94 Si Si

F49(n=6)

8127 20,34 298,76 18,70 1,01 1,61 No Si

F50(n=6)

8127 6,78 94,71 28,76 0,34 0,51 No No

F51(n=6)

8127 21,37 254,57 29,68 1,06 1,37 No No

F52(n=4)

8127 8,18 113,93 40,08 0,41 0,61 No No

F53(n=6)

8127 24,04 326,46 28,49 1,19 1,76 No Si

F54(n=6)

8127 14,75 200,45 37,80 0,73 1,08 No No

F55(n=4)

8127 16,67 240,61 27,58 0,83 1,30 No No

F56(n=3)

8127 20,13 185,71 23,15 NA NA NA NA

F56(n=3)

8300 12,69 107,79 7,00 NA NA NA NA

Ejemplo 4: absorcion percutanea in vitro de tres formulaciones de gel de testosterona a traves de la piel humana medida por el metodo de HPLC

Metodos

5 Piel humana: piel humana congelada fue suministrada por U.S. Tissue and Cell (Cincinnati, OH). La piel fue enviada con hielo seco y una vez recibida, almacenada a -80° C hasta su uso. El espesor medio de la piel con dermatoma fue de aproximadamente 700 pm. Cada experimento se llevo a cabo en replicas de seis (n = 6) usando el mismo donante para cada formulacion dada. La permeacion de la formulacion de gel de testosterona comercializada (1%, F56) tambien se llevo a cabo en replicas de seis (n = 6) y todos los datos se normalizaron a esta medicion.

10 Formulaciones: las formulaciones se prepararon y suministraron por Solvay Pharmaceuticals. Las formulaciones fueron ciegas excepto la formula del producto comercializado/de control (F56).

Estudios de transporte: se estudio la absorcion percutanea in vitro cuantitativamente con la piel humana colocada en la celda de difusion de Franz. La piel se monto horizontalmente entre la mitad donante y receptora. El area de la superficie de la piel expuesta a la formulacion en la camara donante fue de 0,64 cm2, y el volumen de receptor fue 5,0 15 ml. La temperatura se mantuvo a 37° C con la ayuda de una camisa de agua de circulacion doble que rodeaba la parte inferior de la celda. Esto permitio que la temperatura de la piel se mantuviera a nivel fisiologico. La camara de donante estaba abierta en la parte superior.

El compartimento receptor se relleno con fluido receptor que consistio en solucion salina tamponada con fosfato a pH 7,4 (PBS) y propilenglicol (1:1). La piel se monto en las celdas aproximadamente 30 minutos antes de la aplicacion de 20 las formulaciones. Se aplico la formulacion (300 mg ± 5% que contema 3000 pg del farmaco en base a un gel al 1%)

5

10

15

20

25

30

35

40

sobre la superficie de la epidermis gravimetricamente. Muestras de 0,3 ml se recogieron periodicamente (0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 22 y 24 horas) y se reemplazaron con tampon fresco.

Ensayo: las muestras se analizaron para el contenido de testosterona usando un ensayo de HPLC. Las condiciones / detalles fueron como sigue:

Fase movil: acetonitrilo : agua (50 : 50)

Columna: C18, 3 pm, 150 mm Phenomenex (Nucleosil).

Volumen de inyeccion: 30 pl

Velocidad de flujo: 1 ml/min

Deteccion UV: 239 nm

Resultados

Haciendo referencia a las figuras 7-9 y las tabla 17-20, los resultados se expresaron como las cantidades acumuladas de testosterona permeada en funcion del tiempo para las diferentes formulaciones. Cada tabla muestra la cantidad acumulada permeada con relacion a la formula de producto de control / comercializado usando el mismo donante de la piel humana. El flujo medio de testosterona permeado se calculo a partir de la pendiente de la porcion lineal de la CAR (cantidad acumulada liberada) frente al grafico del tiempo y se expresa como pg/cm2/h. Los resultados se expresan como la relacion del flujo de la formulacion de prueba y la formulacion de control (prueba / control). La cantidad acumulada de farmaco permeada a traves de la piel por centimetro cuadrado de area se comparo tambien con la de la formulacion comercializada y se expreso como una relacion (prueba / control). Por lo tanto, cada formulacion se comparo con la formula del producto comercializado en cuanto a su permeacion acumulada y el valor de flujo y los resultados se compilan en la tabla 16. La comparacion de cada formulacion a la formula del producto comercializado se evaluo en cuanto a su significacion estadfstica usando ANOVA. El promedio de las diferencias con p < 0,05 fueron consideradas estadfsticamente significativas.

Conclusiones

Se observo permeacion de la testosterona a traves de la piel humana con dermatoma con las tres formulaciones y la permeacion fue aproximadamente 3% (CAR).

Se observo mejor permeacion comparado con la formulacion del producto comercializado como se determino por una comparacion de la cantidad acumulada de farmaco permeada despues de 24 horas y/o el flujo para todas las formulaciones de prueba F57, F58 y F59 a niveles estadfsticamente significativos.

Segun esto, utilizando las ensenanzas de la divulgacion presente, puede prepararse un gel hidroalcoholico que comprende testosterona, miristato de isopropilo, etanol, agua y una cantidad suficiente de un agente espesante que de al gel una viscosidad por encima de aproximadamente 9.000 cps tal que cuando se aplica a piel humana montada en una celda de Frantz en una cantidad de aproximadamente 300 mg, despues de 24 horas la relacion de flujo es mayor de 1, o preferiblemente mayor de 1,5 donde la relacion de flujo es la relacion de flujo de la testosterona expresada en una cantidad por unidad de area y por unidad de tiempo que permea la piel cuando se prueba la gel de esta manera versus el flujo de la testosterona que permea a traves de la piel cuando un gel de viscosidad similar que comprende 1% en peso de testosterona, 0,5% en peso de miristato de isopropilo y 72,5% en peso de alcohol de 95% v/v se prueba de esta manera. El gel hidroalcoholico tiene entre 1,15 y 1,8% (p/p) de testosterona; entre 0,6 y 1,2% (p/p) de miristato de isopropilo, y entre 72,0 y 78,0% (p/p) de alcohol de 95% v/v.

Tabla 16: resumen de los datos de permeacion de la testosterona a traves de la piel a las 24 horas de las formulaciones de prueba (F57, F58 y F59) y de control (F56)

Formulacion

Donante Flujo (pg/cm2/h) Cantidad acumulada relativa (CAR, pg) Desviacion estandar relativa ((ED/Prome- dio)* 100) Rela- cion de flujo Rela- cion CAR ^Estadfsticamente mejor que formulacion comercializada?

Relacion de flujo

Relacion CAR

Control F56 (n=6)

8126 4,20 50,76 26,08

F57(n=6)

8126 10,69 129,66 41,77 2,55 2,55 Si Si

F58(n=6)

8126 8,70 136,98 10,88 2,07 2,70 Si Si

F59(n=6)

8126 12,67 156,32 15,25 3,02 3,08 Si Si

Tabla 17: datos de permeacion de la testosterona a traves de la piel de la formulacion de control (F56)

Tiempo (h)

Control (cuentas de area) Conc. (pg/ml) Conc. X Dil Conc.* 0,3 Total (5 ml) Acum. (pg) Acum. cm2 DE Flujo (pg/cm2/h)

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

1,00

0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

2,00

0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

4,00

4137,83 0,05 0,05 0,02 0,25 0,25 0,40 0,10 0,20

6,00

15522,67 0,19 0,19 0,06 0,96 0,97 1,52 0,30 0,56

8,00

71183,00 0,88 0,88 0,26 4,38 4,46 6,96 1,49 2,72

10,00

185241,67 2,28 2,28 0,68 11,41 11,74 18,35 3,37 5,69

22,00

484302,17 5,97 5,97 1,79 29,83 30,85 48,20 12,49 2,49

24,00

481870,50 5,94 5,94 1,78 29,68 32,49 50,76 12,29 1,28

Tabla 18: datos de permeacion de la testosterona a traves de la piel de la formulacion de prueba -F57

Tiempo (h)

F57 (cuentas de area) Conc. (pg/ml) Conc. X Dil Conc.* 0,3 Total (5 ml) Acum. (pg) Acum. cm2 DE Flujo (pg/cm2/h)

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

1,00

5171,20 0,06 0,06 0,02 0,31 0,31 0,48 0,73 0,48

2,00

13574,00 0,16 0,16 0,05 0,81 0,83 1,30 0,53 0,82

4,00

45117,33 0,54 0,54 0,16 2,71 2,77 4,33 1,29 1,52

6,00

147837,67 1,77 1,77 0,53 8,87 9,10 14,21 4,45 4,94

8,00

393201,67 4,72 4,72 1,42 23,58 24,35 38,04 11,49 11,91

10,00

571442,33 6,86 6,86 2,06 34,28 36,45 56,96 17,86 9,46

22,00

1201173,50 14,41 14,41 4,32 72,05 76,28 119,19 50,99 5,19

24,00

1240824,00 14,89 14,89 4,47 74,43 82,98 129,66 50,45 5,24

Tabla 19: datos de permeacion de la testosterona a traves de la piel de la formulacion de prueba -F58

Tiempo (h)

F58 (cuentas de area) Conc. (pg/ml) Conc. X Dil Conc.* 0,3 Total (5 ml) Acum. (pg) Acum. cm2 DE Flujo (pg/cm2/h)

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

1,00

0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

2,00

13377,80 0,16 0,16 0,05 0,80 0,80 1,25 1,23 1,25

4,00

41996,33 0,50 0,50 0,15 2,52 2,57 4,01 1,03 1,38

6,00

114316,00 1,37 1,37 0,41 6,86 7,06 11,03 2,71 3,51

8,00

372728,67 4,47 4,47 1,34 22,36 22,97 35,89 10,99 12,43

10,00

665420,00 7,98 7,98 2,39 39,91 41,86 65,41 14,32 14,76

22,00

1304913,50 15,65 15,65 4,70 78,27 82,62 129,09 11,80 5,31

24,00

1123168,83 15,72 15,72 4,72 78,62 87,67 136,98 13,89 3,95

Tabla 20: datos de permeacion de la testosterona a traves de la piel de la formulacion de prueba -F59

Tiempo (h)

F59 (cuentas de area) Conc. (pg/ml) Conc. X Dil Conc.* 0,3 Total (5 ml) Acum. (pg) Acum- cm2 DE Flujo (pg/cm2/h)

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

1,00

0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

2,00

5610,17 0,07 0,07 0,02 0,35 0,35 0,54 0,25 0,54

4,00

30049,67 0,37 0,37 0,11 1,86 1,88 2,94 1,34 1,20

6,00

140427,33 1,74 1,74 0,52 8,69 8,82 13,79 4,64 5,42

8,00

439193,83 5,44 5,44 1,63 27,18 27,83 43,49 10,80 14,85

10,00

629849,83 7,80 7,80 2,34 38,98 41,26 64,47 10,42 10,49

22,00

1346943,00 16,67 16,67 5,00 83,36 87,98 137,47 30,64 6,08

24,00

1461065,83 18,08 18,08 5,43 90,42 100,05 156,32 36,38 9,43

Ejemplo 5: farmacocinetica de dosis unicas y multiples de testosterona tras la administracion de gel 5 hidroalcoholico al 1,62% a dosis de 1,25, 2,50, 3,75, 5,00, y 6,25 g en varones hipogonadales

Obietivos

Determinar la farmacocinetica de dosis unicas y multiples de testosterona tras la administracion de gel de testosterona al 1,62% a dosis de 1,25 g (20,3 mg), 2,50 g (40,5 mg), 3,75 g (60,8 mg), 5,00 g (81,0 mg), y 6,25 g (101,3 mg).

Evaluar la proporcionalidad de la dosis y acumulacion de testosterona en el intervalo de dosis de 1,25 g (20,3 mg) a 10 6,25 g (101,1 mg) de gel de testosterona al 1,62%.

Metodos

5

10

15

20

25

30

Formulaciones: las formulaciones se prepararon y suministraron por Solvay Pharmaceuticals. Las formulaciones fueron ciegas a excepcion de la formula del producto de control / comercializado.

Diseno: Un solo centro, abierto, aleatorizado, unica y multiples dosis, de grupos paralelos en pacientes varones con hipogonadismo. Los sujetos fueron elegidos aleatoriamente para uno de los cinco grupos de tratamiento. Cada grupo se compondna de 12 sujetos, para un total de 60 sujetos.

Los sujetos que aceptaron participar en este estudio y que cumplfan con el criterio de inclusion / exclusion fueron elegidos aleatoriamente a uno de los siguientes grupos de tratamiento:

Tabla 21: grupos de Tratamiento

Grupo de Tratamiento

Dosis del gel (g) Dosis de testosterona (mg)

A

1,25 20,3

B

2,50 40,5

C

3,75 60,8

D

5,00 81,0

E

6,25 101,3

Cada sujeto recibio dosis unicas (dfa 1) y multiples (dfas 2-14) de gel de testosterona al 1,62% durante un penodo de tratamiento de 14 dfas. El farmaco de estudio se aplico por via topica una vez al dfa por la manana. La duracion total del estudio fue de 17 dfas, no incluyendo el periodo de evaluacion. Los sujetos estuvieron confinados en la clmica durante todo el periodo de estudio de 17 dfas. La siguiente tabla muestra los ingredientes combinados para producir la formulacion del estudio utilizada.

Tabla 22: ingredientes combinados para producir la formulacion del estudio (% p/p)

Componente

Funcion % p/p

Testosterona

Ingrediente farmaceutico activo 1,62

Alcohol (95% v/v)*

Potenciador de la absorcion 73,5

Miristato de isopropilo

Potenciador de la absorcion 1,00

Carbopol 980

Precursor de agente espesante 1,00

Hidroxido sodico 0,1 N

Neutralizador 7,00

Agua purificada

Disolvente 15,9

* Equivalente a aproximadamente 68,1% de alcohol absoluto en la formulacion.

Sujetos: cincuenta y seis (56) hombres con hipogonadismo.

Criterio principal para la inclusion: sujetos varones de 18-75 anos de edad, inclusive; testosterona total serica < 300 ng/dl en el cribado como se mida por el laboratorio clmico del lugar; y sujetos con un mdice de masa corporal (BMI) de 20-35 kg /m2, inclusive.

Procedimientos y Evaluaciones

Administracion de la dosis: el gel de testosterona al 1,62% se aplico topicamente una vez todos los dfas en la manana en los dfas 1-14. El sitio de aplicacion era o bien el area del hombro / brazo superior o el abdomen. El farmaco en estudio se aplico en incrementos de 1,25 g hasta que se alcanzo la dosis total objetivo usando el area de superficie maxima posible.

Veinte (20) minutos antes de la hora espedfica de aplicacion de la dosis, los sujetos se ducharon y se lavaron el lugar de aplicacion con jabon y agua. No se les permitio permanecer en la ducha durante mas de 10 minutos. El area designada para aplicacion del gel se seco a fondo.

El personal del lugar directamente involucrado con los procedimientos de dosificacion llevaba guantes mientras que manipulaba el gel del estudio. Se utilizo un par de guantes nuevos para cada sujeto. Cada dosis de gel incremental

5

10

15

20

25

de 1,25 g +/ - 0,02 g se peso en una hoja de papel de pesar en una balanza. Inmediatamente despues de la medicion de la cantidad apropiada de gel, el papel de pesar con la dosis de gel medida fue extendido directamente en el sitio de aplicacion designado del sujeto por el personal del estudio. El sujeto entonces se froto el producto en la piel del lugar de aplicacion designado con la mano. Este proceso se repitio hasta que el objetivo de dosis total (1,25 g a 6,25 g) se alcanzo.

Muestreo farmacocinetico: se obtuvieron muestras de sangre (10 ml cada una) de cada sujeto para la determinacion de la testosterona total, dihidrotestosterona, y estradiol en los tiempos siguientes:

• Dfa -1: antes de la dosis, 0,5, 1,2, 4, 6, 8, 10, 12, y 16 horas con respecto al tiempo proyectado de la aplicacion de gel en los dfas siguientes del estudio;

• Dfa 1: antes de la dosis, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, y 16 horas despues de la dosis;

• Dfas 2-13: antes de la dosis;

• Dfa 14: antes de la dosis, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, y 24 horas despues de la dosis.

Bioanalisis: se determinaron las concentraciones sericas de testosterona total, dihidrotestosterona y estradiol utilizando metodologfa validada de LC-MS/MS.

Criterios de evaluacion

Seguridad: signos vitales, ECG, reconocimiento medico, determinaciones de laboratorio clmico, (incluyendo la medicion del PSA), DRE e IPSS, testosterona de seguridad y mediciones del hematocrito.

Farmacocinetica: en este informe preliminar, se elaboraron los parametros farmacocineticos (AUC (O-24), Cmax, Cmedia, Cmin, fluctuacion de pico a valle, Tmin y Tmax) derivados tanto de las concentraciones sericas de testosterona observadas como de las ajustadas por la lmea de base.

Metodos estadfsticos: se elaboro la estadfstica descriptiva (n, promedio, DE, CV, mediana, promedio geometrico, mmimo, maximo) y las representaciones graficas.

Tabla 23: datos demograficos de los sujetos (promedio (intervalo))

Grupo de tratamiento

N Edad (anos) BMI (kg/m2)

A (1,25 g)

11 50 (27-69) 30,4 (25,6-33,6)

B (2,50 g)

11 50 (31-66) 31,0 (25,9-36,1)

C (3,75 g)

11 52 (38-65) 29,3 (21,8-35,3)

D (5,00 g)

12 55 (37-68) 29,6 (22,6-34,0)

E (6,25 g)

11 48 (27-68) 30,2 (27,3-32,7)

Todos los grupos

56 51 (27-69) 30,1 (21,8-36,1)

Tabla 24: etnicidad de los sujetos (N (%))

Grupo de tratamiento

N Blancos no hispanicos o latinos Blancos hispanicos o latinos Negros Asiaticos

A

11 5 5 0 1

B

11 5 6 0 0

C

11 5 5 1 0

D

12 5 7 0 0

E

11 2 9 0 0

Todos los grupos

56 22 (39,3%) 32 (57,1%) 1 (1,8%) 1 (1,8%)

5

10

15

20

25

30

Cribado de los valores de testosterona basales

Todos los sujetos en la evaluacion tuvieron concentraciones de testosterona < 300 ng/dl, confirmando el estado hipo gonadal de todos los sujetos antes de la exposicion al farmaco del estudio. El laboratorio clmico local utilizo metodolog^a de quimioluminiscencia para estas evaluaciones. El promedio de cribado de concentraciones sericas totales de lmea de base de testosterona vario desde 215 hasta 232 ng/dl para los cinco grupos individuales de dosis. La tabla 25 proporciona el promedio inicial de cribado (intervalo) por grupo de tratamiento.

Tabla 25: valores promedio de testosterona de lmea de base en el cribado

Grupo de tratamiento

N Promedio de testosterona de lmea de base (ng/dl) Intervalo

A

11 215 73-286

B

11 231 132-293

C

11 230 93-295

D

12 232 132-293

E

11 225 158-282

Todos

56 227 23-295

Datos de la concentracion de testosterona frente al tiempo

El promedio de los perfiles de concentracion - tiempo de testosterona observados en el dfa 1 y el dfa 14 se proporcionan en las figuras 10 y 11, respectivamente.

Haciendo referencia a la figura 10, en el dfa 1, se produjo un aumento continuo en las concentraciones de testosterona en todos los tratamientos durante aproximadamente 8 horas despues de la dosis. Las concentraciones de testosterona despues permanecieron consistentes durante el resto del intervalo de dosificacion de 24 horas. Basado en los perfiles del promedio de concentracion-tiempo, todos los tratamientos proporcionaron una exposicion a la testosterona suficiente para aumentar las concentraciones por encima del lfmite inferior del intervalo eugonadal (> 300 ng/dl) despues de una dosis unica en el dfa 1.

Se observaron concentraciones de testosterona consistentes a lo largo de la mayona de los perfiles de concentracion- tiempo de 24 horas despues de la dosificacion multiple con gel de testosterona al 1,62%. La excepcion a esto fue el tratamiento D, de 5,00 g, en donde se observo un pico significativo a las 6 horas despues de la dosis. Este incremento en el perfil medio fue debido a los resultados en un sujeto que habfa reportado una concentracion de testosterona de 4980 ng/dl a las 6 horas despues de la dosis.

Haciendo referencia ahora a la figura 11, los perfiles de promedios en el dfa 14 demostraron que las concentraciones de testosterona se mantuvieron por encima del lfmite inferior del intervalo eugonadal (> 300 ng/dl) en el intervalo de dosis de 24 horas para las cinco dosis. Se observo un aumento en la exposicion a la testosterona con el aumento de la dosis en el intervalo de 1,25 g a 6,25 g, con la excepcion del pico segundo del perfil en el tratamiento D, 5,00 g.

Resultados farmacocineticos de la testosterona

Los resultados farmacocineticos de la testosterona observada y la testosterona ajustada por la lmea de base se proporcionan en la tabla 26 a continuacion despues de que los sujetos recibieran una dosis unica de gel de testosterona al 1,62% en el dfa 1.

Tabla 26: parametros farmacocineticos de dosis unica para el gel de testosterona al 1,62% en el dfa 1

Parametro Grupo de Dosis de Dosis de Promedio aritmetico (DE)

tratamiento gel (g) testosterona

(mg)

N Observado N Ajustado por lmea de base

AUC(0-24)

A 1,25 20,3 11 7376 (1465) 11 1934 (1005)

(ng*h/dl)

B 2,50 40,5 11 9112 (3354) 9 3168 (1845)

C 3,75 60,8 11 8719 (2831) 10 3330 (1875)

D 5,00 81 12 11933 (3188) 12 5329 (3296)

E 6,25 101,3 11 11137 (3024) 11 5573 (2602)

Cmedia

A 1,25 20,3 11 307 (61) 11 81 (42)

(ng/dl)

B 2,50 40,5 11 380 (140) 9 132 (77)

C 3,75 60,8 11 363 (118) 10 139 (78)

D 5,00 81 12 497 (133) 12 222 (137)

E 6,25 101,3 11 464 (265) 11 232 (108)

Cmax

A 1,25 20,3 11 387 (80) 11 159 (57)

(ng/dl)

B 2,50 40,5 11 479 (161) 9 234 (102)

C 3,75 60,8 11 533 (211) 10 305 (178)

D 5,00 81 12 698 (231) 12 424 (200)

E 6,25 101,3 11 657 (215) 11 424 (210)

Tmax[a]

A 1,25 20,3 11 12 (4-24) 11 12 (4-24)

(h)

B 2,50 40,5 11 12 (4-24) 9 16 (8-24)

C 3,75 60,8 11 16 (8-24) 10 16 (8-24)

D 5,00 81 12 12 (2-24) 12 12 (6-24)

E 6,25 101,3 11 12 (8-24) 11 12 (8-24)

[a] mediana (intervalo)

El promedio de Cmedia observado en el dfa 1 estuvo en el intervalo eugonadal de 300 -1000 ng/dl en todos los niveles de dosis. Los promedios de AUC y Cmedia generalmente aumentaron en el intervalo de dosis de 1,25 g a 6,25 g, con valores similares para los tratamientos B y C, y los tratamientos D y E, respectivamente. El promedio de Cmax aumento 5 con la dosis de 1,25 g a 5,00 g, luego se estabilizo. El promedio de Tmax para todos los grupos, a excepcion del de 5,00 g, fue de 12 horas y vario de 2 a 24 horas.

Los valores observados de Cmax en el dfa 1 para 1,25 g, 2,50 g, y 3,75 g se mantuvieron por debajo del lfmite superior del intervalo eugonadal (< 1000 ng/dl). En el tratamiento D, 5,00 g, un sujeto tuvo un valor de Cmax de 1070 ng/dl. En el tratamiento E, 6,25 g, un sujeto tuvo un valor de Cmax de 1020 ng/dl. Todos los otros valores de Cmax en el dfa 1 10 fueron <1000 ng/dl en los grupos de tratamiento D y E.

Los promedios de los valores de los parametros AUC y Cmedia ajustados por la lmea de base aumentaron con la dosis en los cinco niveles de tratamiento. El promedio de Cmedia ajustado por la lmea de base significa que las concentraciones de testosterona endogenas aumentaron de 81 a 232 ng/dl en el intervalo de dosis de 1,25 g a 6,25 g despues de administrar una dosis unica de gel de testosterona al 1,62%.

15 Los resultados farmacocineticos despues de dosis multiples de la testosterona observada y la testosterona ajustada por la lmea de base se proporcionan en la tabla 27 a continuacion para el gel de testosterona al 1,62% en el dfa 14.

Tabla 27: parametros farmacocineticos de dosis multiple para el gel de testosterona al 1,62% en el dfa 14

Parametro

Grupo de tratamiento Dosis de gel (g) Dosis de testosterona (mg) N Promedio aritmetico (DE) Observado N Ajustado por lmea de base

AUC(0-24)

A 1,25 20,3 11 7731 (2914) 9 3149 (2909)

(ng*h/dl)

B 2,50 40,5 11 9232 (4146) 11 3174 (2628)

C 3,75 60,8 11 11132 (2950) 11 5346 (3834)

D 5,00 81 8 16115 (11345) 8 9646 (12002)

E 6,25 101,3 10 15250 (4123) 10 10005 (4474)

Cmedia

A 1,25 20,3 11 322 (121) 9 131 (121)

(ng/dl)

B 2,50 40,5 11 385 (173) 11 132 (110)

C 3,75 60,8 11 464 (123) 11 223 (160)

D 5,00 81 8 671 (473) 8 402 (500)

E 6,25 101,3 9 634 (182) 9 413 (197)

Cmax

A 1,25 20,3 11 464 (158) 9 293 (170)

(ng/dl)

B 2,50 40,5 11 506 (195) 11 266 (119)

C 3,75 60,8 11 750 (221) 11 523(241)

D 5,00 81 8 1422 (1450) 8 1145 (1466)

E 6,25 101,3 10 1179 (520) 10 965 (527)

T max[a]

A 1,25 20,3 11 8 (0-16) 9 4 (0,5-16)

(h)

B 2,50 40,5 11 4 (0-16) 11 8 (0,5-24)

C 3,75 60,8 11 8 (1-12) 11 1 (1-12)

D 5,00 81 8 1,5 (0,5-24) 8 1,5 (0,5-24)

E 6,25 101,3 10 6 (0,5-24) 10 6 (0,5-24)

Cmin

A 1,25 20,3 11 209 (91) 9 46 (77)

(ng/dl)

B 2,50 40,5 11 263 (138) 11 29 (70)

C 3,75 60,8 11 310 (106) 11 89 (152)

D 5,00 81 8 414 (184) 8 154 (203)

E 6,25 101,3 10 351 (43) 10 102 (74)

Fluctuacion

A 1,25 20,3 11 81 (20) 9 271 (166)

B 2,50 40,5 11 66 (18) 11 262 (188)

5

10

15

20

25

30

35

C

3,75 60,8 11 97 (43) 11 252 (149)

D

5,00 81 8 129 (66) 8 355 (306)

E

6,25 101,3 9 117 (52) 9 201 (69)

[a] mediana (intervalo)

Los valores observados de los parametros AUC, Cmed y Cmax aumentaron en el d^a 14 a traves del intervalo de dosis de 1,25 g a 5,00 g, con una nivelacion aparente con la dosis de 6,25 g. En el nivel de dosis de 5 g, un sujeto (N° 25791) en el dfa 14 tema valores de Cmax y Cmedia de 4980 ng/dl y 1801 ng/dl, respectivamente. Estos valores fueron aproximadamente 4 veces mas altos que los de los otros sujetos en este mismo grupo de tratamiento. La causa de las concentraciones elevadas en este sujeto es desconocida. Cuando los valores de este sujeto se retiran de la media del grupo presentado en la tabla anterior, los parametros farmacocineticos para el grupo de dosis 5,00 g se reducen de 1422, a 914 ng/dl para Cmaxy 671 a 510 ng/dl para Cmedia, respectivamente. Usando estos valores medios revisados, se observa una tendencia de valores de Cmedia y Cmax a aumentar en el rango de dosis entero de 1,25 g a 6,25 g.

El promedio de los valores de Cmin observados se mantuvo por encima del lfmite inferior del intervalo eugonadal (> 300 ng/dl) con dosis multiples en los niveles de dosis de 3,75 g, 5,00 g, y 6,25 g. El promedio de los valores de Cmedia observados para todos los niveles de dosis vario desde 322 hasta 671 ng/dl y estuvo en el intervalo de testosterona eugonadal de 300 a 1000 ng/dl.

Los valores de Cmax observados el dfa 14 para el nivel de dosis de 1,25 g se mantuvieron por debajo del lfmite superior del intervalo eugonadal (<1000 ng/dl). En los demas grupos de dosis, un total de 12 sujetos tuvieron valores observados de Cmax superiores a 1000ng/dl. En el nivel de dosis de 2,50, un sujeto tuvo un valor de Cmax de 1010 ng/dl. Al nivel de dosis de 3,75, un sujeto tuvo un valor de Cmax de 1070 ng/dl. En el nivel de dosis de 5,00 g, cuatro sujetos tuvieron valores de Cmax > 1000 ng/dl que fueron desde 1050 hasta 4980 ng/dl. En el nivel de dosis de 6,25, seis sujetos tuvieron valores de Cmax > 1000 ng/dl que fueron desde 1110 hasta 2080 ng/dl. Estas observaciones se basan en los resultados bioanalfticos del ensayo lC-MS/MS. Estos valores no se identificaron durante la prueba de seguridad antes de la dosis de testosterona que se llevo a cabo en el centro clmico.

El promedio de los valores de Cmedia ajustados por la lmea de base aumento con la dosis en todo el intervalo de dosis. El promedio de Cmedia ajustado por la lmea de base indica que las concentraciones de testosterona endogena aumentaron de 131 a 413 ng/dl en el intervalo de 1,25 a 6,25 g de dosis despues de catorce dfas de la administracion de multiples dosis de gel de testosterona al 1,62%.

Conclusiones

Basados en la revision preliminar de datos de eventos adversos, seguridad de la testosterona y medidas de hematocrito de laboratorio, y evaluacion del lugar de aplicacion, el gel de testosterona al 1,62% fue seguro y bien tolerado a niveles de dosis que oscilaron desde 1,25 hasta 6,25 g de gel (20,3 a 101,1 mg de testosterona). Tras la administracion de dosis unicas y multiples de gel de testosterona al 1,62% a niveles de dosis que van de 1,25 g a 6,25 g (20,3 a 101,1 mg de testosterona), se obtienen Cmedia valores promedio en el intervalo eugonadal de 300 -1000 ng/dl.

En los niveles mas altos de dosis de 5,00 g y 6,25 g (81,0 y 101,3 mg de testosterona, respectivamente) se observo una mayor incidencia de valores de Cmax que excedfan el lfmite superior de la normalidad para los hombres eugonadales. Control apropiado en la Fase 3 de desarrollo clmico esta indicado.

Claims (9)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   REIVINDICACIONES

   1. Una formulacion de gel de testosterona que comprende:

   1. de 1,50 a 1,70 % (p/p) de testosterona;

   ii. de 0,6 a 1,2 % (p/p) de miristato de isopropilo;

   iii. de 60 a 80 % (p/p) de un alcohol seleccionado del grupo que consiste en etanol e isopropanol;

   iv. una cantidad suficiente de un agente espesante para proporcionar a la composicion una viscosidad superior a 9000 cps; y

   v. agua;

   para su uso en el tratamiento del hipogonadismo en un sujeto por administracion percutanea.
2. 2. La formulacion de gel de testosterona para el uso segun la reivindicacion 1, en donde dicha formulacion comprende:

   i. de 1,50 % a 1,70 % (p/p) de testosterona;

   ii. de 0,6 % a 1,2 % (p/p) de miristato de isopropilo;

   iii. de 67 % a 74 % (p/p) de un alcohol seleccionado del grupo que consiste en etanol e isopropanol;

   iv. una cantidad suficiente de un agente espesante para proporcionar a la composicion una viscosidad superior a 9000 cps; y

   v. agua.
3. 3. La formulacion de gel de testosterona para el uso segun la reivindicacion 1 o 2, donde la composicion se puede obtener combinando:

   i. 1,62 % (p/p) de testosterona;

   ii. 1,00 % (p/p) de miristato de isopropilo;

   iii. 73,5 % (p/p) de alcohol (95% v/v)*

   iv. 1,00 % (p/p) de carbopol® 980;

   v. 7,00 % (p/p) de hidroxido sodico 0,1 N; y

   vi. 15,9% (p/p) de agua purificada

   *equivalente a aproximadamente 68,1% de alcohol absoluto en la formulacion.
4. 4. La formulacion de gel de testosterona para el uso segun la reivindicacion 1 o 2, donde la composicion comprende aproximadamente 1,62 % (p/p) de testosterona.
5. 5. La formulacion de gel de testosterona para el uso segun la reivindicacion 1 o 2, donde el agente espesante es un carbomero neutralizado.
6. 6. La formulacion de gel de testosterona para el uso segun la reivindicacion 1 o 2, donde la composicion tiene una viscosidad de 13.000 cps a 33.000 cps.
7. 7. La formulacion de gel de testosterona para el uso segun una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el sujeto tiene una concentracion de testosterona en el suero antes del tratamiento inferior a 300 ng/dl.
8. 8. La formulacion de gel de testosterona para el uso segun una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde una dosis terapeuticamente eficaz de la composicion se administra una, dos o tres veces al dfa durante al menos aproximadamente 7 dfas.

   5
9. 9. Un metodo para obtener una formulacion de gel de testosterona combinando:

   i. 1,62 % (p/p) de testosterona;

   ii. 1,00 % (p/p) de miristato de isopropilo;

   iii. 73,5 % (p/p) de alcohol (95% v/v)*

   10 iv. 1,00 % (p/p) carbopol® 980;

   v. 7,00 % (p/p) de hidroxido sodico 0,1 N; y

   vi. 15,9% (p/p) de agua purificada

   *equivalente a aproximadamente 68,1% de alcohol absoluto en la formulacion.