Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

EA039660B1 - Твердая форма производного бипиразола - Google Patents

Твердая форма производного бипиразола Download PDF

Info

Publication number
EA039660B1
EA039660B1 EA202090291A EA202090291A EA039660B1 EA 039660 B1 EA039660 B1 EA 039660B1 EA 202090291 A EA202090291 A EA 202090291A EA 202090291 A EA202090291 A EA 202090291A EA 039660 B1 EA039660 B1 EA 039660B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
mmol
cyanomethyl
azetidin
trifluoro
mixture
Prior art date
Application number
EA202090291A
Other languages
English (en)
Other versions
EA202090291A2 (ru
EA202090291A3 (ru
Inventor
Юнь-Лун Ли
Цзиньцун Чжо
Дин-Цюань Цянь
Сун Мей
Ганьфэн Цао
Юнчунь Пань
Цюнь Ли
Чжунцзян Цзя
Original Assignee
Инсайт Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Инсайт Корпорейшн filed Critical Инсайт Корпорейшн
Publication of EA202090291A2 publication Critical patent/EA202090291A2/ru
Publication of EA202090291A3 publication Critical patent/EA202090291A3/ru
Publication of EA039660B1 publication Critical patent/EA039660B1/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/395Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/395Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4151,2-Diazoles
    • A61K31/41551,2-Diazoles non condensed and containing further heterocyclic rings
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06Antiasthmatics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00Drugs for dermatological disorders
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18Antivirals for RNA viruses for HIV
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/20Antivirals for DNA viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/06Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к твердой форме фосфата 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1H,1'H-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (фосфат соединения 1), имеющего формулупричем твердая форма является кристаллической и имеет по меньшей мере два пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 6,80,2, 16,50,2, 20,70,2 и 23,60,2. Указанная твердая форма ингибирует активность янус-киназы (JAK) и подходит для лечения заболеваний, связанных с активностью JAK.

Description

В настоящем изобретении предложена твердая форма фосфата 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил1Н,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5-дuфтор-N-[(1 S)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил] бензамида, которае модулирует активность янус-киназ (JAK) и подходит для применения для лечения заболеваний, связанных с активностью JAK, включая, например, воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, раковые заболевания и другие заболевания.
Уровень техники
Протеинкиназы (PK) регулируют разнообразные биологические процессы, включая клеточный рост, выживаемость, дифференциацию, формирование органов, морфогенез, неоваскуляризацию, восстановление ткани, а также регенерацию среди прочего. Протеинкиназы также играют особую роль в ряде заболеваний человека, включая раковые заболевания. Цитокины, низкомолекулярные полипептиды или гликопротеины регулируют многие сигнальные пути, участвующие в воспалительном ответе носителя на сепсис. Цитокины влияют на дифференцировку, пролиферацию и активацию клеток и могут модулировать провоспалительные и противовоспалительные ответы, для того чтобы позволить организму носителя соответствующим образом реагировать на патогены. Передача сигналов большого ряда цитокинов включает семейства янус-киназ (JAK) протеин-тирозинкиназ и преобразователи сигнала и активаторы транскрипции (STAT). Существует четыре известных JAK млекопитающих: JAK1 (янус-киназа-1), JAK2, JAK3 (также известная как янус-киназа лейкоцита, JAKL и L-JAK) и TYK2 (протеин-тирозинкиназа 2).
Стимулированные цитокинами иммунные и воспалительные ответы влияют на патогенез заболеваний. Такая патология как тяжелый комбинированный иммунодефицит (SCID) возникает в ответ на подавление иммунной системы, в то время как гиперактивный или неадекватный иммунный/воспалительный ответ влияет на патологию аутоиммунных заболеваний (например, астмы, системной красной волчанки, тиреоидита, миокардита) и таких болезней, как склеродермия и остеоартрит (Ortmann R.A., Cheng Т. и др. (2000) Arthritis Res 2(1):16-32).
Недостаточная экспрессия JAK ассоциирована со многими болезненными состояниями. Например, мыши JAK1 -/- рождаются с дефицитом веса, не берут грудь и умирают в перинатальном возрасте (Rodig S.J., Meraz M.A. и др. (1998) Cell 93(3): 373-83). Эмбрионы мышей JAK2 -/- являются анемичными и умирают примерно на 12,5 день после спаривания в связи с отсутствием окончательного эритропоэза.
Сигнальный путь JAK/STAT и, в частности, все четыре JAK, вероятно, играют роль в патогенезе астматического ответа, хронической обструктивной болезни легких, бронхита и других воспалительных заболеваний нижних дыхательных путей.
Многочисленные цитокины, которые передают сигналы посредством JAK, связывают с воспалительными заболеваниями/состояниями верхних дыхательных путей, например, поражающими нос и пазухи (например, ринит и синусит), являющимися как обычными аллергическими реакциями, так и нет. Путь JAK/STAT также вовлечен в воспалительные заболевания/состояния глаза и хронические аллергические реакции.
Активация JAK/STAT при раковых заболеваниях может происходить путем стимуляции цитокинов (например, IL-6 или ГМ-CSF) или путем ослабления эндогенных супрессоров JAK-сигналинга, таких как SOCS (супрессор сигналинга цитокинов) или PIAS (белок-ингибитор активированного STAT) (Boudny V. и Kovarik J., Neoplasm, 49:349-355, 2002). Активацию сигналинга STAT, также как и других путей, расположенных ниже JAK по каскаду регуляторных взаимодействий (например, Akt), соотносят с неблагоприятным прогнозом при многих типах раковых заболеваний (Bowman T. и др. Oncogene, 19:2474-2488, 2000). Повышенные уровни циркулирующих цитокинов, которые передают сигнал через JAK/STAT, играют решающую роль в кахексии и/или хронической усталости. Соответственно ингибирование JAK может быть полезным для пациентов с раковыми заболеваниями по причинам, которые выходят за пределы потенциальной противоопухолевой активности.
Тирозинкиназа JAK2 может быть полезной для пациентов с миелопролиферативными нарушениями, например истинной полицитемией (ИП), эссенциальной тромбоцитемией (ЭТ), миелоидной метаплазией с миелофиброзом (МММ) (Levin и др., Cancer Cell, v. 7, 2005:387-397). Ингибирование киназы JAK2V617F уменьшает пролиферацию гематопоэтических клеток, что наводит на мысль об использовании JAK2 в качестве потенциальной мишени для фармакологического ингибирования у пациентов с ИП, ЭТ и МММ.
Ингибирование JAK может помочь пациентам, страдающим от иммунных заболеваний кожи, таких как псориаз и увеличение чувствительности кожи. Считается, что сохранение псориаза как болезненного состояния зависит от ряда воспалительных цитокинов в дополнение к различным хемокинам и факторам роста (JCI, 113:1664-1675), многие из которых передают сигнал через JAK (Adv Pharmacol. 2000; 47:113-74).
Таким образом, существует постоянная потребность в новых или улучшенных агентах, которые ингибируют такие киназы, как JAK, для разработки новых и более эффективных фармацевтических средств, которые направлены на усиление или подавление иммунных и воспалительных сигнальных пу
- 1 039660 тей (таких как иммуносупрессивные агенты, использующиеся при трансплантации органов), а также агентов для профилактики и лечения аутоиммунных заболеваний, заболеваний, включающих гиперактивный воспалительный ответ (например, экземы), аллергии, раковых заболеваний (например, рака простаты, лейкоза, множественной миеломы) и некоторых иммунных ответов (например, кожной сыпи, или контактного дерматита, или диареи), вызванных другими терапевтическими средствами. Соединения согласно настоящему изобретению, также как и их композиции и способы, описанные в настоящей заявке, направлены на эти и другие потребности.
Краткое описание изобретения
В настоящем изобретении предложена среди прочего твердая форма фосфата 4-[3-(цианометил)-3(3',5'-диметил-1Н,1Ή-4,4'-бипирaзол-1-ил)aзетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1метилэтил]бензамида (фосфат соединения 1), имеющего формулу
где твердая форма является кристаллической, имеющей по меньшей мере два пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 6,8±0,2, 16,5±0,2, 20,7±0,2 и 23,6±0,2°.
Описание чертежей
На фиг. 1 показана XRPD (порошковая рентгеновская дифрактограмма), характерная для соли из примера 14.
На фиг. 2 показана XRPD, характерная для соли из примера 15.
На фиг. 3 показана XRPD, характерная для соли из примера 16.
На фиг. 4А показана DSC (дифференциальная сканирующая калориметрия) термограмма, характерная для соли из примера 17.
На фиг. 4В показаны данные TGA (термовесовой анализ), характерные для соли из примера 17.
На фиг. 4С показана XRPD, характерная для соли из примера 17.
На фиг. 5А показана DSC термограмма, характерная для соли из примера.
На фиг. 5В показаны данные TGA, характерные для соли из примера.
На фиг. 5С показана XRPD, характерная для соли из примера.
На фиг. 6 показана XRPD, характерная для соли из примера.
На фиг. 7А показана DSC термограмма, характерная для соли из примера.
На фиг. 7В показаны данные TGA, характерные для соли из примера.
На фиг. 7С показана XRPD, характерная для соли из примера.
На фиг. 8А показана DSC термограмма, характерная для соли из примера.
На фиг. 8В показана XRPD, характерная для соли из примера.
На фиг. 9 показана XRPD, характерная для соли из примера.
Подробное описание изобретения
В настоящем изобретении предложено, среди прочего, твердая форма фосфата 4-[3-(цианометил)-3(3',5'-диметил-1Н,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1метилэтил]бензамида (фосфат соединения 1), имеющего формулу
где твердая форма является кристаллической, имеющей по меньшей мере два пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 6,8±0,2, 16,5±0,2, 20,7±0,2 и 23,6±0,2°.
В некоторых вариантах реализации твердая форма представляет собой соль 4-[3-(цианометил)-3(3',5'-диметил-1Н,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1метилэтил]бензамида (соединение 1) и фосфорной кислоты со стехиометрическим соотношением 1:1.
В некоторых вариантах реализации указанная твердая форма имеет по меньшей мере три пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 6,8±0,2, 16,5±0,2, 20,7±0,2 и 23,6±0,2°.
В некоторых вариантах реализации указанная твердая форма дополнительно имеет по меньшей мере один пик XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 11,7±0,2, 13,5±0,2, 15,9±0,2, 18,4±0,2 и 19,8±0,2°.
В некоторых вариантах реализации указанная твердая форма дополнительно имеет по меньшей ме
- 2 039660 ре два пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 11,7±0,2, 13,5±0,2, 15,9±0,2, 18,4±0,2 и 19,8±0,2°.
В некоторых вариантах реализации указанная твердая форма дополнительно имеет по меньшей мере три пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 11,7±0,2, 13,5±0,2, 15,9±0,2, 18,4±0,2 и 19,8±0,2°.
В некоторых вариантах реализации указанная твердая форма дополнительно имеет по меньшей мере четыре пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 11,7±0,2, 13,5±0,2, 15,9±0,2, 18,4±0,2 и 19,8±0,2°.
В некоторых вариантах реализации указанная твердая форма имеет XRPD-профиль, показанный на фиг. 4С.
В некоторых вариантах реализации указанная твердая форма характеризуется DSC-термограммой, имеющей эндотермический пик при 228±3°С.
В некоторых вариантах реализации эндотермический пик имеет начало при 224±3°С.
В некоторых вариантах реализации указанная твердая форма имеет DSC-термограмму, показанную на фиг. 4А.
В некоторых вариантах реализации указанная твердая форма имеет DSC-термограмму, показанную на фиг. 4В.
В некоторых вариантах реализации указанная соль представляет собой соль 4-[3-(цианометил)-3(3',5'-диметил-1Н,1Ή-4,4'-биnирαзол-1-ил)αзетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1метилэтил]бензамида и фосфорной кислоты. В некоторых вариантах реализации указанная соль представляет собой соль 4-[3-(цианометил)-3-(3 ',5'-диметил- 1Н,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида и фосфорной кислоты со стехиометрическим соотношением 1:1. В некоторых вариантах реализации указанная соль является кристаллической. В некоторых вариантах реализации указанная соль по существу выделена. В некоторых вариантах реализации указанная соль представляет собой соль 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,1'Н-4,4'-бипиразол-1ил)aзетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензaмидa и хлористоводородной кислоты.
В некоторых вариантах реализации указанная соль 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,1Н-4,4'бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5-дифтор-N-[(1 S)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил] бензамида и фосфорной кислоты характеризуется при помощи DSC-термограммы, имеющей эндотермический пик при примерно 228°С. В некоторых вариантах реализации указанная соль фосфорной кислоты имеет DSCтермограмму, по существу представленную на фиг. 4А. В некоторых вариантах реализации указанная соль фосфорной кислоты имеет по меньшей мере один пик XRPD в единицах 2-тета, выбранный из примерно 6,8°, примерно 16,5°, примерно 19,8°, примерно 20,7° и примерно 23,6°. В некоторых вариантах реализации указанная соль фосфорной кислоты имеет по меньшей мере два пика XRPD в единицах 2тета, выбранных из примерно 6,8°, примерно 16,5°, примерно 19,8°, примерно 20,7° и примерно 23,6°. В некоторых вариантах реализации указанная соль фосфорной кислоты имеет по меньшей мере три пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из примерно 6,8°, примерно 16,5°, примерно 19,8°, примерно 20,7° и примерно 23,6°. В некоторых вариантах реализации указанная соль фосфорной кислоты имеет по меньшей мере четыре пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из примерно 6,8°, примерно 16,5°, примерно 19,8°, примерно 0,7° и примерно 23,6°. В некоторых вариантах реализации указанная соль фосфорной кислоты имеет XRPD-профиль, по существу показанный на фиг. 4С.
Различные кристаллические формы могут иметь различные кристаллические решетки (например, элементарные ячейки) и, как правило, в результате имеют различные физические свойства. Различные формы соли могут быть определены при помощи способов определения характеристик твердого вещества, таких как рентгеновская порошковая дифракция (XRPD). Другие способы определения характеристик, такие как дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC), термогравиметрический анализ (TGA), динамическая сорбция пара (DVS) и другие, помогают дополнительно идентифицировать форму, а также определить стабильность и состав растворителя/воды.
Паттерн отражения (пики) XRPD обычно считается характерным признаком конкретной кристаллической формы. Хорошо известно, что относительные интенсивности пиков XRPD могут сильно варьировать в зависимости от среди прочего методов подготовки образцов, распределения кристаллов по размерам, различных используемых фильтров, процедуры установки образца и конкретного использованного прибора. В некоторых случаях в зависимости от типа или настроек прибора могут наблюдаться новые пики или исчезать существующие пики. Используемый в настоящей заявке термин пик относится к отражению, имеющему относительную высоту/интенсивность, составляющую по меньшей мере примерно 4% интенсивности/высоты максимального пика. Кроме того, вариации прибора и другие факторы могут влиять на значения 2-тета. Таким образом, распределение пиков, такое как описано в настоящей заявке, может варьировать в пределах плюс или минус примерно 0,2° (2-тета) и предполагается, что термин по существу и примерно, используемый в контексте XRPD в данной заявке, охватывает приведенные выше вариации.
Таким образом, данные температуры в привязке к DSC, TGA или другим температурным экспериментам могут варьировать в пределах ±3°С в зависимости от прибора, конкретных настроек, подготовки образца и т.д. Соответственно кристаллические формы, представленные в настоящей заявке, имеют DSC
- 3 039660 термограмму, по существу показанную на любой из фигур, или понимают, что термин примерно включает такую вариацию.
В некоторых вариантах реализации указанные соли, описанные в настоящей заявке, по существу выделены. Под термином выделены по существу понимают, что соединение по меньшей мере частично или по существу отделено от среды, в которой его получили или обнаружили. Частично разделенная форма может включать, например, композицию, обогащенную солями, описанными в настоящей заявке. Разделенные по существу формы могут включать композиции, содержащие по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 97% или по меньшей мере примерно 99% по массе солей, описанных в настоящей заявке, или их солей. Способы выделения соединений и их солей широко известны в данной области техники.
Следует понимать, что определенные отличительные признаки изобретения, которые для большей ясности описаны в контексте отдельных вариантов реализации, также могут быть предложены в виде комбинации в одном варианте реализации (несмотря на это предполагается, что варианты реализации могут быть объединены, как если бы они были описаны в виде множественно зависимых форм). И наоборот различные отличительные признаки изобретения, которые для краткости описаны в контексте одного варианта реализации, также могут быть предложены по отдельности или в любой подходящей подкомбинации.
В некоторых вариантах реализации соединения согласно настоящему изобретению или их соли по существу выделены. Под выделены по существу понимают, что соединение по меньшей мере частично или по существу отделено от среды, в которой его получили или обнаружили. Частично разделенная форма может включать, например, композицию, обогащенную соединениями согласно настоящему изобретению. По существу разделенные формы могут включать композиции, содержащие по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 97% или по меньшей мере примерно 99% по массе соединений согласно настоящему изобретению или их солей. Способы выделения соединений и их солей широко известны в данной области техники.
Выражения температура окружающей среды и комнатная температура, используемые в настоящей заявке, являются общепринятыми в данной области техники и относятся в целом к температуре, например к температуре взаимодействия, примерно равной температуре в помещении, в котором проводят реакцию, например к температуре от примерно 20°С до примерно 30°С.
В настоящей заявке также предложен способ получения соли 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил1Н,1 Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5-дифтор-И-[(1 S)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил] бензамида и фосфорной кислоты, включающий взаимодействие 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-Ш,1Н-4,4'бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5-дифтор-И-[(1 S)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил] бензамида с фосфорной кислотой в компоненте-растворителе, содержащем метанол и изопропанол, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С с получением смеси, включающей соль 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'диметил-1Н,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1метилэтил]бензамида и фосфорной кислоты. В некоторых вариантах реализации указанный способ дополнительно включает добавление к указанной смести н-гептана при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С с образованием второй смеси. В некоторых вариантах реализации взаимодействие осуществляют при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С. В некоторых вариантах реализации взаимодействие осуществляют при температуре примерно 50°С.
В некоторых вариантах реализации в настоящей заявке дополнительно предложен способ получения соли 4-[3-(цианометил)-3-(3 ',5'-диметил- 1Н,1 Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5-дифтор-К [(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида и фосфорной кислоты, включающий (a) растворение соли 4-[3-(цианометил)-3-(3 ',5'-диметил- 1Н,1 Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] 2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида и фосфорной кислоты в метаноле при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С с образованием первой смеси;
(b) добавление н-гептана к первой смеси при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С с образованием второй смеси; и (c) охлаждение второй смеси с получением соли 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-Ш,1Н-4,4'бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5-дифтор-И-[(1 S)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил] бензамида и фосфорной кислоты.
В некоторых вариантах реализации указанный способ согласно предшествующему варианту реализации дополнительно включает дистилляцию по меньшей мере части метанола из первой смеси перед стадией (b). В некоторых вариантах реализации указанный способ согласно предшествующему варианту реализации дополнительно включает дистилляцию по меньшей мере части метанола и/или н-гептана из второй смеси перед стадией (с). В некоторых вариантах реализации стадии (а) и (b) проводят при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С. В некоторых вариантах реализации стадии (а) и (b) проводят при температуре примерно 50°С.
- 4 039660
Способы.
Твердая форма фосфата 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,1'Н-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида согласно настоящему изобретению является селективными ингибиторами JAK1. Селективный ингибитор JAK1 ингибирует активность предпочтительно JAK1 по сравнению с другими янус-киназами. Например, указанная твердая форма согласно настоящему изобретению предпочтительно ингибирует JAK1 по сравнению с одной или более из JAK2, JAK3 и TYK2. В некоторых вариантах реализации указанные твердые формы являются примерно в 10 раз более селективными по отношению к JAK1, чем к JAK2. В некоторых вариантах реализации указанные твердые формы являются примерно в 3 раза, примерно в 5 раз, примерно в 10 раз, примерно в 15 раз или примерно в 20 раз более селективными по отношению к JAK1, чем к JAK2, что вычислено путем измерения 1С50при 1 мМ АТР (например, см. пример А).
JAK1 играет главную роль в ряде сигнальных путей цитокинов и факторов роста, которые при нарушении регуляции могут способствовать или приводить к болезненным состояниям. Например, уровни IL-6 повышены при ревматоидном артрите - заболевании, при котором, как предполагается, это оказывает отрицательное воздействие (Fonesca J.E. и др., Autoimmunity Reviews, 8:538-42, 2009). Поскольку по меньшей мере часть сигналинга IL-6 осуществляется через JAK1, ожидается, что прямое или непрямое противодействие IL-6 посредством ингибирования JAK1 обеспечит положительный клинический результат (Guschin D.N. и др. Embo J. 14:1421, 1995; Smolen, J.S. и др., Lancet, 371:987, 2008). Кроме того, при некоторых раковых заболеваниях JAK1 мутирует, приводя к конститутивному нежелательному росту опухолевых клеток и их выживаемости (Mullighan C.G., Proc Natl Acad Sci USA, 106:9414-8, 2009; Flex Е. и др., J Exp Med, 205:751-8, 2008). При других аутоиммунных заболеваниях и раковых заболеваниях повышенные системные уровни воспалительных цитокинов, которые активируют JAK1, могут также влиять на заболевание и/или связанные с ним симптомы. Таким образом, пациентам с такими заболеваниями может помочь ингибирование JAK1. Селективные ингибиторы JAK1 могут быть эффективными, не вызывая ненужных и потенциально нежелательных эффектов от ингибирования других JAK-киназ.
Селективные ингибиторы JAK1 относительно других JAK-киназ могут иметь ряд терапевтических преимуществ по сравнению с менее селективными ингибиторами. Касательно селективности в отношении JAK2 сигналинг ряда важных цитокинов и факторов роста осуществляется через JAK2, включая, например, эритропоэтин (Еро) и тромбопоэтин (Tpo) (Parganas E. и др., Cell, 93:385-95, 1998). Еро представляет собой ключевой фактор роста при производстве красных кровяных клеток. Следовательно, недостаточность зависимого от Epo сигналинга может приводить к снижению числа красных кровяных клеток и анемии (Kaushansky K., NEJM, 354:2034-45, 2006). Тро, являющийся другим примером JAK2зависимого фактора роста, играет главную роль в контроле пролиферации и созревания мегакариоцитов клеток, из которых образуются тромбоциты (Kaushansky K., NEJM, 354:2034-45, 2006). Соответственно уменьшение сигналинга Тро уменьшит число мегакариоцитов (мегакариоцитопения) и снизит количество циркулирующих тромбоцитов (тромбоцитопения). Это может привести к нежелательному и/или неконтролируемому кровотечению. Снижение ингибирования других JAK, таких как JAK3 и TYK2, также может быть желательным, так как было показано, что люди, у которых отсутствует функциональная версия этих киназ, страдают от многочисленных заболеваний, таких как тяжелый комбинированный иммунодефицит или синдром гипериммунноглобулина Е (Minegishi Y. и др., Immunity, 25:745-55, 2006; Macchi P. и др., Nature, 377:65-8, 1995). Таким образом, ингибитор JAK1 с уменьшенной аффинностью к другим JAK будет иметь значительные преимущества перед менее селективным ингибитором в отношении уменьшения побочных эффектов, включающих подавление иммунитета, анемию и тромбоцитопению.
При использовании фармацевтические средства твердой формы согласно настоящему изобретению можно вводить в форме фармацевтических композиций. Указанные композиции можно получать при помощи способов, хорошо известных в области фармацевтики, и можно вводить различными путями в зависимости от необходимости местного или системного лечения и области, для которой требуется лечение. Введение может быть местным (включая чрескожное, эпидермальное, внутриглазное или введение на слизистые мембраны, включая интраназальную, внутривагинальную и ректальную доставку), внутрилегочным (например, путем ингаляции или инсуфляции порошков или аэрозолей, включая использование небулайзера; внутритрахеальное или интраназальное введение), пероральным или парентеральным. Парентеральное введение включает внутривенное, внутриартериальное, подкожное, интраперитонеальное, внутримышечное или инъекцию или инфузию; или интракраниальное, например интратекальное или внутрижелудочковое, введение. Парентеральное введение может представлять собой введение одной дозы в форме болюса или, например, введение с использованием насоса для непрерывной инфузии. Фармацевтические композиции и составы для местного применения могут включать чрескожные пластыри, мази, лосьоны, кремы, гели, капли, суппозитории, спреи, жидкости и порошки. Применение традиционных фармацевтических носителей, водных, порошковых или масляных основ, загустителей и т.д. может быть необходимым или желательным.
Далее изобретение будет более подробно описано при помощи конкретных примеров. Следующие примеры приведены в целях иллюстрации и не ограничивают изобретение каким-либо образом. Специалистам в данной области техники будут очевидны различные некритические параметры, которые можно
- 5 039660 изменять или модифицировать для достижения по существу таких же результатов. Было обнаружено, что соединения, приведенные в примерах, являются ингибиторами JAK в соответствии с по меньшей мере одним анализом, описанным в настоящей заявке.
Примеры
Ниже приведены экспериментальные методики для соединений согласно настоящему изобретению. Очистка некоторых из полученных соединений была проведена при помощи ЖХ-МС со свободным доступом с использованием систем фракционирования с определением массовой концентрации Waters. Базовые настройки оборудования, протоколы и управляющее программное обеспечение для функционирования этих систем ранее были подробно описаны в литературе. См., например, Two-Pump At Column Dilution Configuration for Preparative LC-MS, K. Blom, J. Combi. Chem., 4, 295 (2002); Optimizing Preparative LC-MS Configurations and Methods for Parallel Synthesis Purification, K. Blom, R. Sparks, J. Doughty, G. Everlof, T. Haque, A. Combs, J. Combi. Chem., 5, 670 (2003); и Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization, K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Combi. Chem., 6, 874883 (2004). Разделенные соединения обычно подвергали жидкостной хроматографии с массспектрометрией (ЖХМС) для очистки при следующих условиях: прибор - Agilent 1100 series, LC/MSD; колонка - Waters Sunfire™ C18 5 мкм, 2,1x5,0 мм; буферы - подвижная фаза А: 0,025% ТФУ в воде и подвижная фаза В: 0,025% ТФУ в ацетонитриле, градиент от 2 до 80% за 3 мин с расходом 1,5 мл/мин.
Некоторые из полученных соединений были также разделены в препаративном масштабе при помощи высокопроизводительной обращенно-фазной жидкостной хроматографии (ОФ-ВЭЖХ) с детектором МС или флэш-хроматографии (силикагель), как показано в примерах. Типичные характеристики препаративной колонки для высокопроизводительной обращенно-фазной жидкостной хроматографии (ОФ-ВЭЖХ):
pH 2, очистки: Waters Sunfire™ C18 5 мкм, колонка 19x100 мм, элюирование подвижной фазой А: 0,1% ТФУ (трифторуксусная кислота) в воде и подвижной фазой В: ацетонитрил; скорость потока составляла 30 мл/мин, разделительный градиент был оптимизирован для каждого соединения с использованием протокола соединение-специфической оптимизации способа (Compound Specific Method Optimization protocol), описанного в литературе [См. Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization, K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)]; обычно с колонкой 30x100 мм использовали скорость потока 60 мл/мин;
pH 10, очистки: Waters XBrodge C18 5 мкм, колонка 19x100 мм, элюирование подвижной фазой А: 0,15% NH4OH в воде и подвижной фазой В: ацетонитрил, скорость потока составляла 30 мл/мин, разделительный градиент был оптимизирован для каждого соединения с использованием протокола соединение-специфической оптимизации способа, описанного в литературе [См. Preparative LCMS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization, K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Comb. Chem., 6, 874-883 (2004)]; обычно с колонкой 30x100 мм использовали скорость потока 60 мл/мин.
Некоторые из полученных соединений также анализировали при помощи дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC). Типичная конфигурация прибора для DSC: дифференциальный сканирующий калориметр фирмы ТА Instruments, модель Q200 с автосэмплером. Основные условия: 30-350°С при 10°С/мин; Т нулевой алюминиевый тигель с образцом и крышка; поток газообразного азота 50 мл/мин.
Некоторые из полученных соединений также анализировали при помощи термогравиметрического анализа (TGA). Типичная конфигурация прибора для TGA указана ниже.
Термогравиметрический анализатор ТА Instrument, модель Q500. Основные условия способа: нагрев от 20 до 600°С при 20°С/мин; продувка азотом, поток газа при 40 мл/мин достигается балансировкой потока продувки; продувка образца поток при 60 мл/мин; платиновый тигель с образцом.
Некоторые из полученных соединений также анализировали при помощи порошковой рентгеновской дифракции (XRPD). Типичная конфигурация прибора для XRPD: порошковый рентгеновский дифрактометр (XRPD) Rigaku MiniFlex. Общие экспериментальные методики: рентгеновское излучение меди при 1,054056 А с Kp фильтром, мощность рентгеновского излучения 30 кВ, 15 мА; порошок образца рассеивается на держателе для образца с нулевым фоном. Основные условия измерения: начальный угол - 3°; конечный угол - 45°; отбор образца - 0,02°; скорость сканирования - 2°/мин.
Пример 1. 5-[3-(Цианометил)-3-(3 '-метил- 1Н,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -N-[(1S)-2,2,2трифтор-1 -метилэтил]пиразин-2-карбоксамидтрифторацетат.
Стадия 1: трет-бутил-3-(цианометилен)азетидин-1-карбоксилат.
- 6 039660
К раствору 1,0 М трет-бутоксида калия в тетрагидрофуране (30,7 мл, 30,7 ммоль) при 0°С по каплям добавляли раствор диэтилцианометилфосфоната (5,20 мл, 32,2 ммоль) в тетрагидрофуране (39 мл). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры, а затем снова охлаждали до 0°С. К указанной реакционной смеси добавляли раствор трет-бутил-3-оксоазетидин-1-карбоксилата (5,0 г, 0,029 моль, производства Aldrich) в тетрагидрофуране (8 мл). Реакционную смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. После гашения водой указанную смесь экстрагировали этилацетатом (EtOAc). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над MgSO4 и упаривали при пониженном давлении. Неочищенную смесь очищали при помощи флэшхроматографии на колонках с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексанах (0-70%) с получением целевого продукта (5,40 г, 95%). ЖХМС вычисляли для Ci0Hi4N2O2Na (M+Na)+: m/z=217,1. Обнаружено: 217,1.
Стадия 2: трет-бутил-3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил-1Нпиразол-1 -ил] азетидин-1 -карбоксилат.
Смесь 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (0,990 г, 5,10 ммоль), третбутил-3-(цианометилен)азетидин-1-карбоксилата (1,00 г, 5,15 ммоль) и 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7ена (0,38 мл, 2,6 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) нагревали до 60°С в течение 2 ч. После охлаждения растворитель удаляли под пониженным давлением. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на колонках с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексанах (0-60%) с получением целевого продукта (1,68 г, 84,8%). ЖХМС вычисляли для C15H22BN4O4 (M-55)+: m/z. Обнаружено: 333,1.
Стадия 3: {3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1-ил]азетидин-3ил}ацетонитрила гидрохлорид.
4.0 н. HCl в 1,4-диоксане (2,0 мл) добавляли к раствору трет-бутил-3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-Ш-пиразол-1-ил]азетидин-1-карбоксилата (1,68 г, 4,33 ммоль) в метиленхлориде (10 мл). Указанную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем концентрировали при пониженном давлении с получением целевого продукта в виде соли HCl, которую непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очи стки. ЖХМС вычисляли для C14H22BN4O2 (М+1)+: m/z=289,2. Обнаружено: 289,1.
Стадия 4: 5-хлор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]пиразин-2-карбоксамид.
N,N-диизопропилэтиламин (1,3 мл, 7,5 ммоль) добавляли к смеси 5-хлорпиразин-2-карбоновой кислоты (0,40 г, 2,5 ммоль), гексафторфосфата N,N,N',N'-тетраметил-О-(7-αзабензотриазол-1-ил)уронuя (1,0 г, 2,8 ммоль) и (2S)-1,1,1-трифторпропан-2-амина (0,28 г, 2,5 ммоль) в метиленхлориде (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выделяли при помощи насыщенного водного NaHCO3 и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на колонке с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексанах (0-15%) с получением целевого продукта (0,47 г, 73%). ЖХМС вычисляли для C8H8ClF3N3O (M+1)+: m/z=254,0. Обнаружено: 253,9.
Стадия 5: 5-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1ил]азетидин-1 -ил} -N-[(1 S)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил]пиразин-2-карбоксамид.
- 7 039660
Смесь 5-хлор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]пиразин-2-карбоксамида (254 мг, 1,00 ммоль), HCl соли {3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрила (325 мг, 1,00 ммоль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламина (401 мкл, 2,30 ммоль) в 1,4-диоксане (5,0 мл) нагревали до 100°С в течение 2 ч. После охлаждения смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на колонках с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексане (градиент: 20-80%) с получением целевого продукта (0,49 г, 97%). ЖХМС вычисляли для C22H28BF3N7O3 (M+1)+: m/z=506,2. Обнаружено: 506,1.
Стадия 6: трет-бутил-4-бром-3-метил-1Н-пиразол-1-карбоксилат.
Смесь 4-бром-3-метил-1H-пиразола (0,2 г, 1 ммоль), ди-трет-бутилдикарбоната (0,30 г, 1,4 ммоль), 4-диметиламинопиридина (0,02 г, 0,1 ммоль) и триэтиламина (0,26 мл, 1,9 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали и очищали при помощи флэш-хроматографии на колонках с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексанах (0-15%) с получением целевого продукта (0,32 г). ЖХМС вычисляли для C5H6BrN2O2 (M-55)+: m/z=205,0. Обнаружено: 204,9.
Стадия 7: 5-[3-(цианометил)-3-(3'-метил- 1H,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил]-N-[(1S)-2,2,2трифтор-1 -метилэтил]пиразин-2-карбоксамида трифторацетат.
Смесь 5-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1ил]азетидин-1-ил}-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]пиразин-2-карбоксамида (27,0 мг, 0,0533 ммоль), трет-бутил-4-бром-3-метил-1Н-пиразол-1-карбоксилата (15 мг, 0,059 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (3,1 мг, 0,0027 ммоль) и карбоната натрия (17,0 мг, 0,160 ммоль) в 1,4диоксане (1,6 мл) и воде (0,8 мл) перемешивали в атмосфере азота при 100°С в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и очищали при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ (при pH 2) с получением целевого продукта в виде соли ТФУ. Ή ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 8,73 (d, J=1,4 Гц, 1Н), 8,18 (d, J=0,6 Гц, 1Н), 7,98 (d, J=1,4 Гц, 1Н), 7,91-7,79 (m, 2H), 4,84 (m, 1H), 4,81 (d, J=10,2 Гц, 2Н), 4,60 (d, J=10,2 Гц, 2H), 3,59 (s, 2H), 2,44 (s, 3H), 1,43 (d, J=7,1 Гц, 3Н) ppm. ЖХМС вычисляли для C20H21F3N9O (M+1)+: m/z=460,2. Обнаружено: 460,0.
Пример 2. 5-[3-(Цианометил)-3-(3'-метил- 1Н,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил]-Nизопропилпиразин-2-карбоксамида трифторацетат.
Стадия 1: 5-хлор-N-изопропилпиразин-2-карбоксамид.
N,N-диизопропилэтиламин (2,6 мл, 15 ммоль) добавляли к смеси 5-хлорпиразин-2-карбоновой кислоты (0,80 г, 5,0 ммоль), гексафторфосфата бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония (2,46 г, 5,56 ммоль) и 2-пропанамина (0,47 мл, 5,6 ммоль) в метиленхлориде (20 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь обрабатывали при помощи насыщенного водного NaHCO3 и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очищали при помощи флэш-хроматографии на колонках с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексанах (0-15%) с получением целевого продукта. ЖХМС вычисляли для C8H11QN3O (M+1)+: m/z=200,1. Обнаружено: 200,1.
Стадия 2: 5-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1ил]азетидин-1 -ил} -N-изопропилпиразин-2-карбоксамид.
Смесь 5-хлор-N-изопропилпиразин-2-карбоксамида (200 мг, 1,00 ммоль), HCl соли {3-[4-(4,4,5,5тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил]азетидин-3-ил}ацетонитрила (325 мг, 1,00 ммоль, пример 1, стадия 3) и N,N-диизопропилэтиламина (401 мкл, 2,30 ммоль) в 1,4-диоксане (5,0 мл) нагревали до 100°С в течение 2 ч. После охлаждения смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на колонках с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексане
- 8 039660 (градиент: 20-80%) с получением целевого продукта (0,26 г, 58%). ЖХМС вычисляли для C22H31BN7O3 (М+1)+: m/z=452,3. Обнаружено: 452,2.
Стадия 3: 5-[3-(цианометил)-3-(3'-метил- 1H,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил]-N-изопропилпиразин-2-карбоксамида трифторацетат.
Смесь трет-бутил-4-бром-3-метил-1Н-пиразол-1-карбоксилата (15,7 мг, 0,0600 ммоль), 5-{3(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил]азетидин-1-ил}-Nизопропилпиразин-2-карбоксамида (25,8 мг, 0,0571 ммоль), комплекса [1,1'бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(П) с дихлорметаном (1:1) (2,3 мг, 0,0028 ммоль) и фосфата калия (0,036 г, 0,17 ммоль) в диоксане (0,5 мл) и воде (0,2 мл) дегазировали и герметично закрывали. Указанную смесь нагревали до 110°С в течение 3 ч. После охлаждения смесь разбавляли метанолом, фильтровали и очищали при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ (при pH 2) с получением целевого продукта в виде соли ТФУ. ЖХМС вычисляли для C20H24N9O (M+1)+: m/z=406,2. Обнаружено: 406,1.
Пример 3. 4-[3-(Цианометил)-3-(3'-метил- 1Н,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил]-К-изопропилбензамида трифторацетат.
Стадия 1: этил-4-(3-гидроксиазетидин-1-ил)бензоат.
Смесь этил-4-фторбензоата (0,841 г, 5,00 ммоль, производства Aldrich), азетидин-3-олгидрохлорида (0,438 г, 4,00 ммоль, производства Aldrich) и карбоната калия (1,38 г, 9,98 ммоль) в диметилсульфоксиде (4 мл) нагревали до 180°С в течение 2 ч. После охлаждения указанную смесь разбавляли этилацетатом (50 мл), и промывали водой и солевым раствором. Органический слой сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на колонке с силикагелем, элюруя этилацетатом в гексане (0-50%) с получением целевого продукта (0,643, 72,6%). ЖХМС вычисляли для C12H16NO3 (M+1)+: m/z=222,1. Обнаружено: 222,1.
Стадия 2: 4-(3-гидроксиазетидин-1-ил)бензойная кислота.
Смесь 1-[4-(3-гидроксиазетидин-1-ил)фенил]-2-метоксиэтанона (1,33 г, 6,00 ммоль) и моногидрата гидроксида лития (504 мг, 12,0 ммоль) в воде (4 мл), метаноле (3 мл) и ТГФ (6 мл) перемешивали при 40°С в течение ночи. Указанную смесь нейтрализовали при помощи водного раствора 3 н. HCl (~4 мл) до pH примерно 7, экстрагировали при помощи этилацетата. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного неочищенного продукта (1,10 г, 94,9%), который напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХМС вычисляли для C10H12NO3 (M+1)+: m/z=194,1. Обнаружено: 194,1.
Стадия 3: 4-(3-гидроксиазетидин-1-ил)-N-изопропилбензамид.
Бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (4,64 г, 10,5 ммоль, производства Aldrich) добавляли к смеси 4-(3-гидроксиазетидин-1-ил)бензойной кислоты (1,93 г, 10,0 ммоль), 2-пропанамина (4,26 мл, 50,0 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (3,88 г, 30,0 ммоль) в дихлорметилене (10 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и разбавляли дихлорметаном. Смесь промывали водным NaHCO3 и солевым раствором, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на колонках с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексане (градиент: 0-50%) с получением целевого продукта (2,21 г, 94,3%). ЖХМС вычисляли для C13H19N2O2 (M+1)+: m/z=235,1. Обнаружено: 235,1.
Стадия 4: N-изопропил-4-(3-оксоазетидин-1-ил)бензамид.
К охлажденному (-78°С) раствору оксалилхлорида (1,05 мл, 12,4 ммоль) в дихлорметилене (20 мл) по каплям добавляли диметилсульфоксид (1,71 мл, 24,1 ммоль). Указанную смесь перемешивали 10 мин при -78°С. Затем добавляли суспензию 4-(3-гидроксиазетидин-1-ил)-Х-изопропилбензамида (1,72 г, 7,34 ммоль) в дихлорметилене (20 мл). Полученную смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч и затем добавляли триэтиламин (7,04 мл, 50,5 ммоль). Указанную смесь перемешивали дополнительные 1,5 ч при -78°С. Полученную смесь промывали водн. NaHCO3 и солевым раствором, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Осадки промывали эфиром и собирали путем фильтрации с получением целевого продукта (1,32 г, 77%), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХМС вычисляли для C13H17N2O2 (M+1)+: m/z=233,1. Обнаружено: 233,1.
Стадия 5: 4-[3-(цианометилен)азетидин-1 -ил] -N-изопропилбензамид.
К охлажденному (до -6-0°С) раствору 1,0 М трет-бутоксида калия в тетрагидрофуране (7,10 мл, 7,10 ммоль) добавляли по каплям раствор диэтилцианометилфосфоната (1,20 мл, 7,43 ммоль, производства Aldrich) в тетрагидрофуране (10 мл) в течение 10 мин периода и при от -6 до 0°С. Указанную смесь нагревали и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь вновь охлаждали до -6°С. Затем к указанной реакционной смеси добавляли раствор N-изопропил-4-(3-оксоазетидин
- 9 039660
1-ил)бензамида (1,30 г, 5,60 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) в течение периода 10 мин. На протяжении указанного времени температура указанной реакционной смеси составляла от -5 до 0°С. Реакционную смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой силикагеля и промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали и обрабатывали осадок эфиром. Сформировавшиеся осадки собирали при помощи фильтрации с получением 0,60 г целевого продукта. Маточную жидкость концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на колонках с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексане (градиент: 30-80%) с получением целевого продукта (0,21 г). Общий выход составлял 0,81 г (57%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 7,91 (d, J=7,8 Гц, 1Н), 7,74 (d, J=8,7 Гц, 2Н), 6,53 (d, J=8,7 Гц, 2Н), 5,88 (р, J=2,3 Гц, 1Н), 4,77-4,67 (m, 2Н), 4,62 (dt, J=5,1, 2,6 Гц, 2Н), 4,06 (m, 1Н), 1,12 (d, J=6,6 Гц, 6Н) ppm. ЖХМС вычисляли для C15H18N3O (M+1)+: m/z=256,1. Обнаружено: 256,1.
Стадия 6: 4-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1ил]азетидин-1-ил}-N-изопропилбензамид.
Смесь 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (2,98 г, 15,3 ммоль), 4-[3(цианометилен)азетидин-1-ил]-N-изопропилбензамида (4,00 г, 15,7 ммоль) и 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец7-ена (1,17 г, 7,68 ммоль) в изопропиловом спирте (10 мл) нагревали до 70°С в течение 1 ч. Смесь охлаждали до 35°С. К суспензии добавляли 30 мл метил-трет-бутилового эфира (МТВЕ) и перемешивали при комнатной температуре 1 ч. Сформировавшиеся осадки собирали при помощи фильтрации, промывали МТВЕ и высушивали при пониженном давлении с получением целевого продукта (6,2 г, 89,8%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,35 (s, 1Н), 7,90 (d, J=7,8 Гц, 1Н), 7,75 (s, 1H), 7,73 (d, J=8,7 Гц, 2Н), 6,52 (d, J=8,7 Гц, 2Н), 4,40 (d, J=8,6 Гц, 2Н), 4,20 (d, J=8,6 Гц, 2Н), 4,05 (m, 1H), 3,65 (s, 2H), 1,24 (s, 12H), 1,12 (d, J=6,6 Гц, 6Н) ppm. ЖХМС вычисляли для C24H33BN5O3 (М+1)+: m/z=450,3. Обнаружено: 450,3.
Стадия 7: 4-[3-(цианометил)-3-(3 '-метил- 1Н,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -N изопропилбензамида трифторацетат.
Смесь трет-бутил-4-бром-3-метил-1H-пиразол-1-карбоксилата (15,7 мг, 0,0600 ммоль), 4-{3(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1 H-пиразол-1 -ил] азетидин-1 -ил }-Nизопропилбензамида (25,7 мг, 0,0571 ммоль), фосфата калия (36,4 мг, 0,171 ммоль) и комплекса [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(П) с дихлорметаном (1:1) (2,33 мг, 0,00286 ммоль) в диоксане (0,5 мл) и воде (0,2 мл) дегазировали и герметично запечатывали. Указанную смесь нагревали до 110°С в течение 3 ч. После охлаждения смесь разбавляли метанолом, фильтровали и очищали при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ (при pH 2) с получением целевого продукта в виде соли ТФУ. ЖХМС вычисляли для C22H26N7O (M+1)+: m/z=404,2. Обнаружено: 404,1.
Пример 4. 4-[3-(Цианометил)-3-(3'-метил-1H,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил) азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида трифторацетат.
Стадия 1: 2,4,5-трифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамид.
К раствору 2,4,5-трифторбензойной кислоты (5,00 г, 28,4 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) добавляли N,N-диметилформамид (40 мкл) с последующим добавлением оксалилхлорида (3,60 мл, 42,6 ммоль). Через 90 мин удаляли летучие вещества при пониженном давлении. Осадок упаривали с ацетонитрилом (50 мл). Затем осадок растворяли в метиленхлориде (50 мл). Этот раствор добавляли по каплям в охлажденную (ледяная баня) смесь гидрохлорида (2S)-1,1,1-трифторпропан-2-амина (5,52 г, 36,9 ммоль) (производства Synquest, 98% ее) в толуоле (100 мл) и 0,5 М водном растворе гидроксида натрия (142 мл, 71,0 ммоль). После завершения добавления ледяную баню удаляли, и позволяли реакционной смеси нагреться до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Органический слой отделяли. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом (50 мл). Объединенные органические слои промывали 20% солевым раствором (75 мл) и водой (2x75 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного целевого продукта (6,49 г, 84%), который напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. 1Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ 9,01 (d, J=7,6 Гц, 1Н), 7,92-7,50 (m, 2H), 4,76 (m, 1Н), 1,31 (d, J=7,0 Гц, 3Н) ppm. ЖХМС вычисляли для C10H8F6NO (M+1)+: m/z=272,0. Обнаружено: 272,0.
Стадия 2: 2,5-дифтор-4-(3-гидроксиазетидин-1-ил)-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамид.
Смесь 2,4,5-трифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (6,39 г, 23,6 ммоль), азетидин-3олгидрохлорида (3,19 г, 28,3 ммоль) и 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена (8,81 мл, 58,9 ммоль) в ацетонитриле (25 мл) перемешивали при 80°С в течение 2 ч. Указанную реакционную смесь разбавляли EtOAc (75 мл) и промывали 1 н. HCl (50 мл), 1Н NaHCO3 (60 мл), 20% солевым раствором (50 мл) и водой (75 мл).
- 10 039660
Водные слои подвергали экстракции посредством EtOAc (100 мл). Органические слои объединяли, сушили над MgSO4, фильтровали при пониженном давлении с получением целевого продукта (7,59 г, 91,8%). 1H ЯМР (300 МГц, ДМСО^) δ 8,38 (dd, J=8,9, 1,9 Гц, 1Н), 7,27 (dd, J=12,8, 6,5 Гц, 1Н), 6,38 (dd, J=12,3, 7,5 Гц, 1Н), 5,71 (d, J=6,4 Гц, 1Н), 4,74 (dp, J=15,3, 7,6 Гц, 1H), 4,62-4,46 (m, 1H), 4,30-4,15 (m, 2H), 3,71 (m, 2H), 1,29 (d, J=7,1 Гц, 3Н) ppm. ЖХмС вычисляли для C13H14F5N2O2 (M+1)+: m/z=325,1. Обнаружено: 325,1.
Стадия 3: 2,5-дифтор-4-(3-оксоазетидин-1-ил)-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамид.
К раствору 2,5-дифтор-4-(3-гидрокисазетидин-1-ил)-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (7,57 г, 23,3 ммоль) в метиленхлориде (93 мл) добавляли диацетат йодбензола (9,40 г, 29,2 ммоль) и свободный радикал 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси (1,82 г, 11,7 ммоль) (TEMPO) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Указанную смесь разбавляли EtOAc (100 мл), промывали 0,5 н. NaHCO3 (2x80 мл), 20% солевым раствором (100 мл) и водой (100 мл). Водные слои экстрагировали этилацетатом (75 мл). Органические экстракты объединяли, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Осадок очищали при помощи флэш-хроматографии на колонках с силикагелем, элюируя от 0 к 5% этилацетата в метиленхлориде с получением неочищенного продукта, который перекристаллизовывали из МТВЕ (50 мл) и гептана (100 мл) с получением целевого продукта (5,44 г, 72%) в виде бесцветного твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6) δ 8,52 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,36 (dd, J=12,5, 6,5 Гц, 1Н), 6,63 (dd, J=12,1, 7,6 Гц, 1H), 4,90 (d, J=2,1 Гц, 4H), 4,86-4,68 (m, 1H), 1,31 (d, J=7,1 Гц, 3Н) ppm. ЖХМС вычисляли для C13H12F5N2O2 (M+1)+: m/z=323,1. Обнаружено: з2з,О.
Стадия 4: 4-[3-(цианометилен)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1метилэтил]бензамид.
Диэтилцианометилфосфонат (1,95 мл, 11,8 ммоль) по каплям добавляли к охлажденному (ледяная баня) раствору 1,0 М трет-бутоксида калия в ТГФ (11,8 мл, 11,8 ммоль), который разбавляли тетрагидрофураном (12 мл). Баню удаляли и нагревали реакционную смесь до комнатной температуры и перемешивали в течение 90 мин. Раствор реакционной смеси вновь охлаждали при помощи ледяной бани. Затем полученный выше раствор добавляли в течение 12 мин к охлажденному (ледяная баня) раствору 2,5-дифтор-4-(3-оксоазетидин-1-ил)-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (4,00 г, 12,4 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Ледяную баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем гасили добавлением 20% солевого раствора (75 мл) и этилацетата (75 мл). Органический слой отделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (50 мл). Объединенные органические слои сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на колонках с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексанах (0-30%) с получением целевого продукта (2,6 г). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 8,59-8,37 (m, 1H), 7,33 (dd, J=12,5, 6,4 Гц, 1Н), 6,59 (dd, J=12,0, 7,4 Гц, 1Н), 5,88 (m, 1Н), 4,94-4,75 (m, 4Н), 4,76 (m, 1Н), 1,31 (d, J=7,1 Гц, 3Н) ppm. ЖХМС вычисляли для C15H13F5N3O (M+1)+: m/z=346,1. Обнаружено: 346,1.
Стадия 5: 4-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1ил]азетидин-1-ил}-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамид.
Смесь 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (1,00 г, 5,15 ммоль), 4-[3(цианометилен)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (1,78 г, 5,15 ммоль) и 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена (0,31 мл, 2,1 ммоль) в ацетонитриле (20,2 мл) нагревали до 50°С в течение ночи. После охлаждения растворитель удаляли под пониженным давлением. Полученный осадок использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХМС вычисляли для C24H28BF5N5O3 (М+1)+: m/z=540,2. Обнаружено: 540,1.
Стадия 6: 4-[3-(цианометил)-3-(3 '-метил- 1Н,1 Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5-дифтор-N[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида трифторацетат.
Смесь 4-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил] азетидин-1-ил}-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (28,8 мг, 0,0533 ммоль), третбутил-4-бром-5-метил-1H-пиразол-1-карбоксилата (15 мг, 0,059 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (3,1 мг, 0,0027 ммоль) и карбоната натрия (17,0 мг, 0,160 ммоль) в 1,4диоксане (1,6 мл) и воде (0,8 мл) перемешивали в атмосфере азота в течение ночи при 100°С. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ (при pH 2) с получением целевого продукта в виде соли ТФУ. ЖХМС вычисляли для C22H21F5N7O (M+1)+: m/z=494,2. Обнаружено: 494,0.
Пример 5. 4-[3-(1H,1Ή-4,4'-Бипиразол-1-ил)-3-(цианометил)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-
2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида трифторацетат.
- 11 039660
Указанное соединение получали при помощи способов, аналогичных тем, что описаны в примере 4, стадия 6, начиная с 4-бром-1H-пиразола и 4-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2диоксаборолан-2-ил)-1 H-пиразол-1 -ил]азетидин-1 -ил} -2,5-дифтор-N-[( 1 S)-2,2,2-трифтор-1 метилэтил]бензамида. ЖХМС вычисляли для C21H19F5N7O (M+1)+: m/z=480,2. Обнаружено: 480,0.
Пример 6. 5-[3-(Цианометил)-3-(3,3'-диметил-1H,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-Nизопропилпиразин-2-карбоксамида трифторацетат.
--\
ΗΝ-Ν
Стадия 1: трет-бутил-3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил-1Нпиразол-1-ил]азетидин-1-карбоксилат.
Смесь 3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-πиразола (1,06 г, 5,10 ммоль), трет-бутил-3-(цианометилен)азетидин-1-карбоксилата (1,00 г, 5,15 ммоль) и 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец7-ена (0,38 мл, 2,6 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) нагревали до 60°С в течение 2 ч. После охлаждения растворитель удаляли под пониженным давлением. Осадок очищали при помощи флэш-хроматографии на колонке с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексанах (0-60%) с получением целевого продукта. ЖХМС вычисляли для C16H24BN4O4 (M-55)+: m/z=347,2. Обнаружено: 347,1.
Стадия 2: {3-[3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1-ил]азетидин3-ил}ацетонитрила гидрохлорид 4,0 н. HCl в диоксане (3 мл) добавляли к раствору трет-бутил-3(цианометил)-3-[3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил]азетидин-1карбоксилата в метиленхлориде (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта в виде HCl соли. ЖХМС вычисляли для C15H24BN4O2 (M+1)+: m/z=303,2. Обнаружено: 303,1.
Стадия 3: 5-{3-(цианометил)-3-[3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Нпиразол-1 -ил] азетидин-1 -ил} -N-изоπроπилπиразин-2 -карбоксамид.
Смесь HCl соли {3-[3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1ил]азетидин-3-ил}ацетонитрила (0,43 г, 1,3 ммоль), 5-хлор-N-изоnропилnиразин-2-карбоксамида (0,24 г, 1,2 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (0,63 мл, 3,6 ммоль) в трет-бутиловом спирте (12 мл, 120 ммоль) нагревали при 100°С в течение 4 ч. После охлаждения растворитель удаляли под пониженным давлением. Осадок очищали при помощи флэш-хроматографии на колонке с силикагелем, элюируя этилацетатом в гексанах (0-60%) с получением целевого продукта. ЖХМС вычисляли для С23НззВ^Оз (M+1)+: m/z=466,3. Обнаружено: 466,2.
Стадия 4: 5-[3 -(цианометил)-3 -(3,3'-диметил- 1H,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -Nизопропилпиразин-2-карбоксамида трифторацетат.
Указанное соединение получали при помощи способов, аналогичных тем, что описаны в примере 4, стадия 6, начиная с 4-бром-3-метил-1Н-пиразола и 5-{3-(цианометил)-3-[3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-πиразол-1-ил]азетидин-1-ил}-N-изопроπилпиразин-2-карбоксамида. ЖХМС вычисляли для C21H26N9O (M+1)+: m/z=420,2. Обнаружено: 420,1.
Пример 7. 4-[3-(Цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,ГН-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамид.
Смесь 4-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразол-1ил]азетидин-1-ил}-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (329 мг, 0,610 ммоль, пример 4, стадия 5), 4-бром-3,5-диметил-1Н-пиразола (206 мг, 1,18 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (110 мг, 0,098 ммоль) и карбоната натрия (320 мг, 3,0 ммоль) в
- 12 039660
1,4- диоксане (10 мл)/вода (5 мл) продували азотом и перемешивали при 110°С в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc, промывали водой и солевым раствором, концентрировали. Осадок сначала очищали при помощи силикагеля (элюирование 0-100% EtOAc/гексанами и затем 10% метанола/дихлорметана), и затем при помощи преп. ЖХМС (колонка XBridge C18, элюирование градиентом ацетонитрил/вода, содержащим 0,1% гидроксид аммония, при скорости потока 60 мл/мин) с получением целевого продукта (30 мг, 9,7%). 1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d,) δ 12,17 (1Н, s), 8,45 (1Н, d, J=8,0 Гц), 8,10 (1Н, s), 7,70 (1Н, s), 7,34 (1Н, m), 6,61 (1Н, s), 4,77 (1Н, m), 4,62 (2Н, d, J=9,0 Гц), 4,39 (1Н, d, J=9, 0 Гц), 3,64 (2Н, s), 2,22 (6Н, s), 1,31 (6Н, d, J=7,0 Гц) ppm. ЖХМС вычисляли для C23H23F5N7O (М+Н)+: m/z=508,2. Обнаружено: 508,0.
Пример 8. 5-[3 -(Цианометил)-3 -(3 ',5'-диметил- 1H,1 Ή-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -Nизопропилпиразин-2-карбоксамид.
HN-N
Смесь 5-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1ил]азетидин-1-ил}-N-изопропилпиразин-2-карбоксамида (256 мг, 0,567 ммоль, пример 2, стадия 2), 4бром-3,5-диметил-1H-пиразола (119 мг, 0,681 ммоль), дициклогексил(2',4',6-триизопропилбифенил-2ил)фосфин-(2'-аминобифенил-2-ил)(хлор)палладия (1:1) (67 мг, 0,085 ммоль) и карбоната цезия (550 мг, 1,7 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл)/воде (1 мл) три раза продували азотом. Смесь нагревали до 53°С в течение 2 ч. Смесь разбавляли EtOAc, промывали солевым раствором, концентрировали. Полученный остаток сначала очищали при помощи силикагеля (элюирование 0-100% EtOAc/гексанов и затем 10% метанолом/дихлорметаном) и затем при помощи преп. ЖХМС (колонка XBridge C18, элюирование градиентом ацетонитрил/вода, содержащим 0,1% гидроксид аммония, со скоростью потока 60 мл/мин) с получением целевого продукта (0,1 г, 40%). 1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ 8,64 (1Н, d, J=1,5 Гц), 8,12(1Н, s), 8,06 (1Н, d, J=8,0 Гц), 7,96 (1Н, d, J=1,0 Гц), 7,71 (1Н, s), 4,72 (2Н, d, J=9,5 Гц), 4,49 (1Н, d, J=9,5 Гц), 4,08 (1Н, m), 3,68 (2Н, s), 2,22 (6Н, s), 1,16 (6Н, d, J=6,5 Гц) ppm. ЖХМС вычисляли для C21H26N9O (M+H)+: m/z=420,2. Обнаружено: 420,0.
Пример 9. 5-[3-(Цианометил)-3-(3',5'-диметил-1H,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-N-[(1S)2,2,2-трифтор-1 -метилэтил]пиразин-2-карбоксамида трифторацетат.
HN-N
Стадия 1: [3-(3',5'-диметил-1Н,ГН-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-3-ил]ацетонитрила гидрохлорид.
Смесь трет-бутил-3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1ил]азетидин-1-карбоксилата (381 мг, 0,981 ммоль, пример 1, стадия 2), 4-бром-3,5-диметил-1H-пиразола (206 мг, 1,18 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (110 мг, 0,098 ммоль) и карбоната натрия (310 мг, 2,9 ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл) и воде (5 мл) продували N2 и перемешивали при 110°С в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтровали, разбавляли EtOAc, затем промывали водой. Органический слой концентрировали и очищали на силикагеле (элюирование 0-100% EtOAc/гексаны, затем 0-10% МеОН/ дихлорметан) с получением трет-бутил-3 -(цианометил)-3 -(3',5'-диметил- 1H,1 Ή-4,4'-бипиразол-1 ил)азетидин-1-карбоксилата (90 мг, 26%). ЖХМС вычисляли для C18H25N6O2 (M+H)+: m/z=357,2. Обнаружено: 357,2. Указанное промежуточное соединение обрабатывали 4,0 М хлористым водородом в диоксане (1,2 мл, 4,9 ммоль) в метиленхлориде (1 мл) при к.т. в течение 2 ч. Смесь концентрировали досуха с получением целевого продукта. ЖХМС вычисляли для C13H17N6 (M+H)+: m/z=257,1. Обнаружено: 257,1.
Стадия 2: 5-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-N-[(1S)2,2,2-трифтор-1 -метилэтил]пиразин-2-карбоксамида трифторацетат.
Смесь [3-(3',5'-диметил-1H,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-3-ил]ацетонитрила гидрохлорида (13 мг, 0,039 ммоль), 5-хлор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]пиразина-2-карбоксамида (11 мг, 0,043 ммоль, пример 1, стадия 4) и N,N-диизопропилэтиламина (28 мкл, 0,16 ммоль) в трет-бутиловом спирте (1 мл) нагревали до 100°С в течение 2 ч. После охлаждения смесь разбавляли МеОН и очищали при помощи преп. ЖХМС (при pH 2) с получением целевого продукта в виде соли ТФУ (4,1 мг, 22%). ЖХМС вычисляли для C21H23F3N9O (M+H)+: m/z=474,2. Обнаружено: 474,0.
Пример 10. 5-[3 -(Цианометил)-3-(3 -метил- 1H,1 Ή-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -Nизопропилпиразин-2-карбоксамида трифторацетат.
- 13 039660
HN-N
Стадия 1: трет-бутил-4-бром-1Н-пиразол-1-карбоксилат.
Указанное соединение получали при помощи способов, аналогичных тем, что описаны в примере 1, стадия 6, начиная с 4-бром-1Н-пиразола. ЖХМС вычисляли для C4H4BrN2O2 (М-55)+: m/z=191,0. Обнаружено: 190,9.
Стадия 2: 5-[3-(цианометил)-3-(3-метил-1H, 1 Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-Nизопропилпиразин-2-карбоксамида трифторацетат.
Указанное соединение получали в виде соли ТФУ при помощи способов, аналогичных тем, что описаны в примере 4, стадия 6, начиная с трет-бутил-4-бром-1H-пиразол-1-карбоксилата и 5-{3(цианометил)-3-[3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил]азетидин-1ил}-N-изопропилпиразин-2-карбоксамида. ЖХМС вычисляли для C20H24N9O (M+1)+: m z=406,2. Обнаружено: 406,1.
Пример 11. 5-[3-(Цианометил)-3-(3'-этил-1H,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-N-[(1S)-2,2,2трифтор-1-метилэтил]пиразин-2-карбоксамида трифторацетат.
HN-N
Указанное соединение получали в виде соли ТФУ при помощи способов, аналогичных тем, что описаны в примере 4, стадия 6, начиная с 5-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2ил)-1 Н-пиразол-1 -ил]азетидин-1-ил} -N-[(1 S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]пиразин-2-карбоксамида (пример 1, стадия 5) и 4-бром-3-этил-1Н-пиразола. ЖХМС вычисляли для C21H23F3N9O (M+1)+: m z=474,2. Обнаружено: 474,0.
Пример 12. 4-{3-(Цианометил)-3-[3'-(гидроксиметил)-1H,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил]азетидин-1-ил}2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида трифторацетат.
Стадия 1: (4-бром-1Н-пиразол-5-ил)метанол.
Тетрагидроборат натрия (0,13 г, 3,4 ммоль) добавляли к раствору 4-бром-1H-пиразол-5карбальдегида (0,30 г, 1,7 ммоль, производства Maybridge) в тетрагидрофуране (5 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили с помощью насыщенного водного NaHCO3 и экстрагировали этилацетатом (3x20 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного неочищенного продукта, который напрямую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХМС вычисляли для C4H6BrN2O (M+1)+: m/z=177,0. Обнаружено: 176,9.
Стадия 2: 4-{3-(цианометил)-3-[3'-(гидроксиметил)-1H,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил]азетидин-1-ил}-2,5дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида трифторацетат.
Указанное соединение получали в виде соли ТФУ при помощи способов, аналогичных тем, что описаны в примере 4, стадия 6, начиная с 4-{3-(цианометил)-3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил]азетидин-1-ил}-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1метилэтил]бензамида и (4-бром-1H-пиразол-3-ил)метанола. ЖХМС вычисляли для C22H21F5N7O2 (M+1)+: m/z=510,2. Обнаружено: 510,0.
Пример 13. 4-{3-(Цианометил)-3-[3-(гидроксиметил)-3'-метил-1H,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил]азетидин1-ил} -2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамид.
- 14 039660
Стадия 1: этил-4-бром-1-{3-(цианометил)-1-[2,5-дифтор-4-({[(1S)-2,2,2-трифтор-1метилэтил] амино} карбонил)фенил] азетидин-3 -ил} -1 Н-пиразол-3 -карбоксилат.
В пробирку для микроволнового реактора добавляли изопропиловый спирт (10 мл), этил 4-бромШ-пиразол-3-карбоксилат (производства ChemBridge) (788 мг, 3,60 ммоль), 1,8диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (48,9 мкл, 0,327 ммоль) и 4-[3-(цианометилен) азетидин-1-ил]-2,5-дифторN-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамид (пример 4, стадия 4, 1,13 г, 3,27 ммоль).
Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры, растворитель удаляли в вакууме. Осадок очищали при помощи флэш-хроматографии на колонках с силикагелем (элюирование 0-35% этилацетатом в гексанах) с получением целевого продукта в виде белой пены. 1H ЯМР (500 МГц, ДМСО) δ 8,61 (s, 1Н), 8,47 (d, J=8,7 Гц, 1Н), 7,34 (dd, J=12,5 и 6,3 Гц, 1Н), 6,62 (dd, J=11,9 и 7,3 Гц, 1Н), 4,76 (dt, J=15,5 и 7,8 Гц, 1Н), 4,61 (d, J=9,2 Гц, 2Н), 4,39 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 4,32 (q, J=7,1 Гц, 2Н), 3,68 (s, 2H), 1,31 (m, 6Н) ppm. ЖХМС вычисляли для C21H20BrF5N5O3 (M+H)+: m/z=564,1. Обнаружено: 563,8.
Стадия 2: этил-1-{3-(цианометил)-1-[2,5-дифтор-4-({[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]амино}карбонил)фенил]азетидин-3-ил}-3'-метил-1Н,1Н-4,4'-бипиразол-3-карбоксилат.
В пробирку для микроволнового реактора помещали трет-бутиловый спирт (1,2 мл) и воду (1,2 мл), фторид цезия (683 мг, 4,50 ммоль), этил-4-бром-1-{3-(цианометил)-1-[2,5-дифтор-4-({[(1S)-2,2,2трифтор-1 -метилэтил] амино} карбонил)фенил] азетидин-3-ил} -1 H-пиразол-3-карбоксилат (725 мг, 1,28 ммоль) и 3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол (401 мг, 1,93 ммоль), затем добавляли Pd-127 (49 мг, 0,064 ммоль) (производства Johnson Mathew). Реакционную смесь нагревали до 85°С в течение 48 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем разбавляли водой и этилацетатом. Полученный водный слой экстрагировали этилацетатом. Органический слой высушивали над Na2SO4 и концентрировали. Полученный осадок очищали при помощи флэшхроматографии (элюирование 30-100% этилацетатом в гексанах) с получением целевого продукта в виде масла. ЖХМС вычисляли для C25H25F5N7O3 (M+H)+: m/z=566,2. Обнаружено: 566,0.
Стадия 3: 4-{3 -(цианометил)-3-[3-(гидроксиметил)-3 '-метил- 1Н,1 Н-4,4'-бипиразол-1 -ил] азетидин-1 ил}-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамид.
К раствору этил-1 - {3-(цианометил)-1 -[2,5-дифтор-4-( {[(1S)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил]амино}карбонил)фенил]азетидин-3-ил}-3'-метил-1Н,1'Н-4,4'-бипиразол-3-карбоксилата (35 мг, 0,062 ммоль) в ТГФ (0,5 мл) добавляли 2,0 М тетрагидроборат лития в ТГФ (0,12 мл, 0,25 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию медленно гасили водой. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Органический слой концентрировали. Полученный осадок очищали при помощи преп. ЖХМС (колонка XBridge C18, элюировали с градиентом ацетонитрил/вода, содержащим 0,1% гидроксида аммония, при скорости потока 60 мл/мин) с получением целевого продукта. 1H ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 7,79-7,68 (m, 2H), 7,61 (s, 1H), 6,65 (m, 1H), 6,20 (m, 1H), 4,99-4,89 (m, 1H), 4,68 (s, 2H), 4,60 (d, J=8,5 Гц, 2H), 4,45 (dd, J=8,9 и 2,0 Гц, 2H), 3,38 (s, 2H), 2,34 (s, 3Н), 1,41 (d, J=7,0 Гц, 3Н). ЖХМС вычисляли для C23H23F5N7O2 (M+H)+: m/z=52 4,2. Обнаружено: 52 4,0.
Пример 14. Соль 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,ГН-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида и фосфорной кислоты (методика 1).
К 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,ГН-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-К[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамиду (24,8 мг, 0,0489 ммоль) добавляли этанол (0,3 мл) и полученную смесь перемешивали до образования прозрачного раствора. Добавляли фосфорную кислоту в изопропаноле (0,064 мл, 1 М, 0,064 ммоль, 1,3 экв.) и полученную смесь перемешивали 2 мин с получением суспензии. Указанную суспензию затем перемешивали при комнатной температуре непрерывно в течение ночи. Указанную смесь фильтровали и осадок на фильтре промывали метил-трет-бутиловым эфиром (МТВЕ). Указанный осадок на фильтре сушили на воздухе с получением указанной титульной соли (26,3 мг, 88,9%). Дифрактограмму рентгеновской порошковой дифракции (XRPD) определяли для соли фосфорной кислоты; она показана на фиг. 1. Перечень пиков 2-тета приведен в табл. 1 ниже.
- 15 039660
Таблица 1
2-Тета Высота Н%
6, 848 841 64,7
8,225 135 10,4
11,778 214 16,5
12,854 378 29, 1
13,577 543 41,7
14,741 157 12,1
15,967 589 45,3
16,557 1061 81, 6
17,425 216 16, 6
18,021 299 23
19,907 1139 87, 6
20,791 1300 100
21,267 248 19, 1
22,556 168 12,9
23,77 949 73
24,667 716 55, 1
25,698 913 70,2
26, 159 434 33,4
27,392 140 10,8
28,647 199 15,3
29,667 251 19,3
30,411 333 25, 6
31,213 141 10,9
32,115 84 6, 5
32,893 170 13,1
33,572 109 8,4
34,449 108 8,3
35, 264 82 6, 3
35,741 78 6
36,709 170 13,1
37,381 103 7,9
38,828 63 4,9
39,443 117 9
40,559 88 6, 8
41,227 88 6, 8
43,396 61 4,7
44,1 90 6, 9
Пример 15. Соль 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,ГН-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5 дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида и фосфорной кислоты (методика 2).
К 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N[(18)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамиду (24,6 мг, 0,0485 ммоль) добавляли этанол (0,3 мл) и полученную смесь перемешивали до образования прозрачного раствора. Добавляли фосфорную кислоту в изопропаноле (0,063 мл, 1 М, 0,063 ммоль, 1,3 экв.) и полученную смесь перемешивали в течение 2 ч с получением суспензии, которую затем непрерывно перемешивали в течение ночи. Указанную смесь фильтровали и осадок на фильтре промывали метил-трет-бутиловым эфиром. Указанный осадок на фильтре сушили на воздухе с получением указанной титульной соли (26,27 мг, 89,5%). Дифрактограмма XRPD определена для соли фосфорной кислоты и показана на фиг. 2. Перечень пиков 2-тета приведен в табл. 2 ниже.
- 16 039660
Таблица 2
2-Тета Высота Н%
6, 884 499 54,1
8,305 90 9, 7
11,868 165 17,9
12,945 302 32,8
13,685 411 44, 6
14,831 125 13, 6
16,116 368 40
16,656 818 88,8
17,528 184 19, 9
18,135 278 30,1
20,003 845 91,7
20,898 921 100
21,335 178 19,3
22,409 139 15, 1
22,701 135 14, 6
23,894 711 77,2
24,796 535 58,1
25,821 778 84,4
26,266 245 26, 6
27,483 122 13,2
28,742 160 17,4
29, 761 208 22, 6
30,539 237 25,7
31,331 111 12
32,176 55 5, 9
33,026 134 14,5
33,714 88 9, 5
34,542 69 7,5
35,263 60 6, 5
35,829 48 5, 3
36,838 108 11,8
37,369 64 7
38,956 53 5, 8
39,631 89 9, 7
40,7 75 8,2
41,298 71 7,7
43,504 54 5, 9
44,228 76 8,3
Пример 16. Соль 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,ГН-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5 дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида и фосфорной кислоты (методика 3).
К 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамиду (98,93 мг, 0,195 ммоль) добавляли изопропанол (1,23 мл) и полученную смесь перемешивали до образования прозрачного раствора. Добавляли фосфорную кислоту в изопропаноле (0,273 мл, 1 М, 0,273 ммоль, 1,4 экв.) и полученную смесь перемешивали 1 ч при 70°С с получением суспензии. Полученную суспензию охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Указанную смесь фильтровали и осадок на фильтре промывали метил-трет-бутиловым эфиром. Указанный осадок на фильтре сушили на воздухе с получением указанной титульной соли
- 17 039660 (109,1 мг, 92,4%). Дифрактограмма XRPD определена для соли фосфорной кислоты и показана на фиг. 3.
Перечень пиков 2-тета приведен в табл. 3 ниже.
Таблица 3
2-Тета Высота Н%
6, 856 1268 100
8,237 133 10,5
11,765 209 16, 5
12,859 343 27
13,596 472 37,2
14,74 127 10
15,931 403 31,8
16,569 912 72
17,425 177 13, 9
17,964 80 6, 3
18,495 117 9, 2
19,926 876 69
20,783 865 68,2
21,274 197 15, 6
22,561 152 12
23,727 634 50
24,637 370 29, 2
25,706 443 35
26, 157 290 22,9
27,597 117 9, 3
28,627 120 9, 5
29,682 151 11,9
30,389 186 14, 6
31,186 103 8,1
32,128 55 4,3
32,872 98 7,7
33,483 72 5, 7
34,435 87 6, 8
35,257 42 3,3
35,742 56 4,4
36,667 95 7,5
37,413 84 6, 7
39,574 56 4,4
41,182 60 4,8
44,124 64 5
Пример 17. Соль 4-[3 -(цианометил)-3 -(3 ',5'-диметил- 1Н,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида и фосфорной кислоты (методика 4).
Стадия 1: соль 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1H,1Ή-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида и фосфорной кислоты (неочищенная).
К прозрачному раствору 4-[3-(цианометил)-3 -(3 ',5'-диметил- 1Н,1 Ή-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (405,0 г, 798,1 ммоль) в метаноле (520,0 мл) и изопропаноле (2550,0 мл) при 50°С добавляли водный раствор 85% фосфорной кислоты (119,65 г, 1037,8 ммоль) в изопропаноле (120,0 мл) в течение 18 мин с образованием суспензии. Полученную суспензию перемешивали при 50°С в течение 1 ч. Затем к суспензии добавляли н-гептан (4050,0 мл) в течение 40 мин при поддержании внутренней температуры суспензии между 46 и 53°С. После добавления н-гептана суспензию постепенно охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение 19 ч при комнатной температуре. Твердое вещество собирали путем фильтрации, промывали смесью изопро
- 18 039660 панола и н-гептана (3:10 по объему, 2x700 мл) и затем н-гептаном (3x550 мл) и высушивали под вакуумом при комнатной температуре в с получением неочищенной соли 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил1Н,1 'Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5 -дифтор-N -[(1 S)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил] бензамида и фосфорной кислоты (434,6 г, выход 89,9%).
Стадия 2: соль 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил- 1Н,1 Н-4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил]-2,5дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензaмидa и фосфорной кислоты (очищенная).
В круглодонную колбу вместимостью 22 л, оснащенную подвесным перемешивающим механизмом и термопарой, покрытой тефлоном, добавляли соль 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,1Н-4,4'бипиразол-1-ил)азетидин-1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамидα и фосфорной кислоты со стадии 1 (958,3 г, 1583 ммоль) и метанол (MeOH, 9583,0 мл) при комнатной температуре. Полученную суспензию нагревали до 50°С с получением прозрачного, светло-оранжевого раствора. Раствор дополнительно фильтровали, переносили обратно в колбу 22 л и нагревали до кипения для отгонки метанола (4793 г, 6090 мл) в течение 70 мин. Затем в колбу добавляли изопропанол (7700 мл) в течение 30 мин при поддержании температуры раствора между 50 и 65°С. После завершения добавления изопропанола по порциям добавляли н-гептан (14400 мл) при сохранении осторожной дистилляции смеси растворителей (MeOH, IPA и н-гептан) в течение 2,5 ч. В общей сложности дистиллировали 10818 г (15000 мл) смеси растворителей. Полученную суспензию постепенно охлаждали до комнатной температуры и затем перемешивали в течение 17 ч при комнатной температуре. Твердое вещество собирали путем фильтрации, промывали смесью изопропанола и н-гептана (1:5 по объему, 3000 мл) с последующей промывкой н-гептаном (3x4000 мл) и сушили под вакуумом при комнатной температуре с получением титульного соединения в виде кристаллического порошка грязно-белого цвета (925,7 г, выход 96,6%).
При помощи XRPD подтвердили, что указанная соль фосфорной кислоты является 1: 1 солью по показателям 1H ЯМР, и показали степень кристалличности. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 9,35 (br. s, 4Н), 8,50 (d, J=8,9 Гц, 1Н), 8,11 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,34 (dd, J=12,5, 6,4 Гц, 1Н), 6,61 (dd, J=12,0, 7,4 Гц, 1Н), 4,86-4,69 (m, 1Н), 4,61 (d, J=8,9 Гц, 2Н), 4,38 (d, J=8,9 Гц, 2Н), 3,64 (s, 2H), 2,21 (s, 6H), 1,30 (d, J=7,1 Гц, 3Н); 13С ЯМР (100 МГц, ДМСО-d6) δ 162,8, 156,7 (d, JCF=246,5 Гц), 146,9 (d, JCF=236,1 Гц), 141,6 (dd, Jcf=13,0, 11,7 Гц), 140,3, 138,3, 125,8 (q, Jcf=281,8 Гц), 125,6, 117,2, 116,4 (dd, Jcf=22,3, 4,6 Гц), 115,1, 111,3 (dd, Jcf=15,7, 5,8 Гц), 107,7, 102,0 (dd, Jcf=29,5, 4,5 Гц), 62,3, 57,7, 57,7, 45,8 (q, Jcf=30,5 Гц), 27,0, 13,3 (d, Jcf=1,7 Гц), 11,7. C23H22F5N7O (вычисляли MW 507,46). ЖХМС: (EI) m/e 508,1 (M++H). DSC демонстрирует острый пик плавления на примерно 227,62°С (начало на 224,45°С), как показано на фиг. 4А. Титульное соединение демонстрирует потерю массы на 0,129% вплоть до 200°С, как показано на фиг. 4В. Дифрактограмма XRPD определена для соли фосфорной кислоты и показана на фиг. 4С. Перечень пиков 2-тета приведен в табл. 4 ниже.
Таблица 4
2-Тета Высота Н%
6, 805 8160 100
7,278 56 0,7
8,164 230 2,8
11,065 68 0, 8
11,685 1060 13
12,798 260 3,2
13,512 920 11,3
14,667 110 1,3
15,923 686 8,4
16,49 2186 26, 8
17,022 236 2,9
17,292 111 1,4
17,991 137 1,7
18,448 703 8, 6
19,827 1407 17,2
20,677 2119 26
21,236 199 2,4
22,079 275 3,4
22,421 406 5
- 19 039660
23,592 2119 26
24,635 424 5, 2
25,317 296 3, 6
25, 64 674 8,3
26,161 363 4,5
27,284 94 1,2
27,989 198 2,4
28,628 118 1,4
29, 63 135 1,7
30,419 455 5, 6
32,099 60 0, 7
32,832 148 1, 8
33,346 166 2
34,436 447 5, 5
35,711 117 1,4
36,719 295 3, 6
37,349 135 1,7
38,802 53 0, 6
39,585 108 1,3
40,565 64 0, 8
41,224 260 3,2
42,44 68 0, 8
Пример А. Анализ JAK-киназы in vitro.
Соединения, описанные в настоящей заявке, проверяли на активность ингибирования JAK-мишеней в соответствии со следующим анализом in vitro, описанным в Park и др., Analytical Biochemistry 1999, 269, 94-104. Каталические домены JAK1 (а.к. 837-1142), JAK2 (а.к. 828-1132) и JAK3 (а.к. 781-1124) человека с His-тэгом на N-конце экспрессировали в клетках насекомых с использованием бакуловируса и очищали. Каталитическую активность JAK1, JAK2 или JAK3 анализировали путем измерения фосфорилирования биотинилированного пептида. Фосфорилированный пептид выявляли при помощи гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF). IC50 соединений измеряли для каждой киназы в 40 мкл реакционных смесях, которые содержали фермент, АТФ и 500 нМ пептида в 50 мМ Трис (pH 7,8) буфера с 100 мМ NaCl, 5 мМ DTT и 0,1 мг/мл (0,01%) BSA. Для измерений 1 мМ ХС50 использовали концентрацию АТФ в реакционных смесях, равную 1 мМ. Реакции проводили при комнатной температуре в течение 1 ч и затем останавливали при помощи 20 мкл 45 мМ EDTA, 300 нМ SA-APC, 6 нМ Eu-Py20 в буфере для анализа (Perkin Elmer, Бостон, Массачусетс). Связывание с антителами, помеченными европием, проводили в течение 40 мин и сигнал HTRF измеряли на считывателе со слитыми пластинами (Fusion plate reader, Perkin Elmer, Бостон, Массачусетс). См. табл. 5 для данных, относящихся к соединениям из примеров.
Таблица 5
Данные IC50 для , анализа ферментов JAK (при , 1 мМ АТФ)
Пример № JAK1 1С50 (нМ) * JAK2 1С50 (нМ) * JAK2/ JAK1
1 + + + + + >10
2 + + + >10
- 20 039660
>300 нМ до 1000 нМ (++);
>1000 нМ (+++);
>700 нМ (++++).
Пример В. Анализы клеток.
Линии раковых клеток, зависящих от цитокинов и, следовательно, передачи сигнала по пути JAK/STAT, для роста можно высевать при плотности покрытия 6000 клеток на лунку (формат 96-луночного планшета) в RPMI 1640, 10% FBS и 1 нГ/мл подходящего цитокина. Соединения можно добавить к указанным клеткам в ДМСО/среде (конечная концентрация 0,2% ДМСО) и инкубировать в течение 72 ч при 37°С, 5% СО2. Влияние соединения на жизнеспособность клеток оценивают при помощи люминесцентного анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo (Promega) с последующим количественным анализом при помощи TopCount (Perkin Elmer, Бостон, Массачусетс). Потенциальные побочные эффекты соединений измеряют параллельно с использованием клеточной линии без JAK с тем же аналитическим считыванием. Все эксперименты, как правило, выполняют в двух повторностях.
Вышеуказанные клеточные линии также можно использовать для изучения влияния соединений на фосфорилирование JAK-киназ или потенциальных расположенных ниже по каскаду субстратов, таких как белки STAT, Akt, Shp2 или Erk. Эти эксперименты можно проводить после цитокинового голодания в течение ночи и следующей за ним краткой предварительной инкубации с соединением (2 ч или меньше) и стимулирования цитокинами в течение примерно 1 ч или менее. Затем белки экстрагируют из клеток и анализируют при помощи способов, хорошо известных специалисту в данной области, включая Вестерн-блоттинг или ELISA с использованием антител, которые могут различать фосфорилированный и общий белок. В этих экспериментах, чтобы исследовать активность соединений в отношении биологии выживания опухолевых клеток или медиаторов воспалительного заболевания, можно использовать нормальные или раковые клетки. Например, в отношении медиаторов воспалительного заболевания, для того чтобы стимулировать активацию JAK, приводящую к фосфорилированию STAT-белка(ов) и, возможно, изменению транскрипционных профилей (оценка при помощи микрочипов или технологии количественной ПЦР) или производства и/или секреции белков, таких как IL-17, можно использовать такие цитокины, как IL-6, IL-12, IL-23 или IFN. Способность соединений ингибировать эффекты, опосредованные данными цитокинами, можно измерить с использованием стандартных методов, известных специалистам в данной области техники.
Соединения, описанные в настоящей заявке, также можно проверять на клеточных моделях, предназначенных для оценки их действия и активности в отношении мутантных JAK, например мутации JAK2V617F, обнаруживаемой при миелоидных пролиферативных нарушениях. В этих экспериментах часто используют зависимые от цитокинов гематологические клеточные линии (например, BaF/3), в которые эктопически экспрессируют дикие или мутантные формы JAK-киназ (James C. и др., Nature 434:1144-1148; Staerk, J. и др., JBC 280:41893-41899). Конечные точки включают влияние соединений на выживаемость клеток, пролиферацию и фосфорилированные белки JAK, STAT, Akt или Erk.
Некоторые соединения, описанные в настоящей заявке, можно оценивать с точки зрения их активности в отношении ингибирования пролиферации Т-клеток. Таким анализом можно считать анализ пролиферации, стимулируемой вторичными цитокинами (т.е. JAK), a также упрощенный анализ иммунного подавления или ингибирования иммунной активации. Ниже приводится краткое описание того, как можно проводить подобные эксперименты. Мононуклеары периферической крови (РВМС) получают из образцов цельной крови человека при помощи способа разделения Ficoll Hypaque, a T-клетки (фракция 2000) можно получить из РВМС при помощи элютрации. Свежевыделенные Т-клетки человека можно поддерживать в культуральной среде (RPMI 1640, дополненная 10% эмбриональной бычьей сывороткой,
- 21 039660
100 ед. акт./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина) при плотности 2х106 клеток/мл при 37°С до 2 дней. Для анализа клеточной пролиферации, стимулированной IL-2, Т-клетки сначала обрабатывали фитогемагглютинином (РНА) в конечной концентрации 10 мкг/мл в течение 72 ч. После одной промывки PBS клетки помещали в 96-луночный планшет при плотности 6000 клеток/лунку и обрабатывали соединениями при различных концентрациях в культуральной среде в присутствии 100 ед. акт/мл IL-2 человека (ProSpec-Tany TechnoGene; Реховот, Израиль). Планшеты инкубировали при 37°С в течение 72 ч и индекс пролиферации измеряли при помощи реагентов CellTiter-Glo Luminescent в соответствии с протоколом производителя (Promega; Мэдисон, Висконсин).
Пример С. Противоопухолевая эффективность in vivo.
Соединения, описанные в настоящей заявке, можно оценивать на модели ксенотрансплантата опухоли человека на мышах с нарушенным иммунитетом. Например, опухолеобразующий вариант клеточной линии плазмоцитомы INA-6 можно использовать для подкожной прививки мышам SCID (Burger R. и др., Hematol J. 2:42-53, 2001). Животных, имеющих опухоли, затем можно случайно разделить на группы, получающие лекарственное средство или получающие плацебо, и можно вводить различные дозы соединений через любое количество обычных путей введения, включая пероральное введение, интраперитонеальное введение или непрерывную инфузию с помощью имплантируемых насосов. Рост опухоли с течением времени отслеживают при помощи циркуля. Кроме того, образцы опухолей можно собирать для анализа, как описано выше (пример В), в любой момент времени после начала лечения, чтобы оценить воздействие соединения на активность JAK и сигнальных путей, расположенных ниже по каскаду. Кроме того, селективность соединения(ий) можно оценивать при помощи ксенотрансплантатов моделей опухолей, обусловленных другими киназами (например, Bcr-Abl), например модели опухоли K562.
Пример D. Кожная реакция гиперчувствительности замедленного типа на мышах.
Соединения, описанные в настоящей заявке, также можно тестировать на предмет их эффективности (ингибирования JAK-мишеней) на модели реакции гиперчувствительности замедленного типа, обусловленной Т-клетками. Ответ гиперчувствительности замедленного типа (DTH) на контакт с кожей у мышей считается действительной моделью клинического контактного дерматита и других опосредованных Т-лимфоцитами иммунных заболеваний кожи, таких как псориаз (Immunol Today. 1998 Jan; 19(1):37-44). DTH мыши разделяет несколько характеристик с псориазом, в том числе иммунный инфильтрат, сопровождающийся увеличением количества воспалительных цитокинов и гиперпролиферацией кератиноцитов. Кроме того, многие классы агентов, которые являются эффективными в клинической практике лечения псориаза, также являются эффективными ингибиторами DTH-ответа у мышей (Agents Actions. 1993 Jan; 38(1-2):116-21).
На 0 и 1 день мышей Balb/c сенсибилизируют путем местного применения антигена 2,4, динитрофторбензола (DNFB) в очищенный от шерсти живот. На 5-й день измеряют толщину ушей при помощи инженерного микрометра. Это измерение записывают и используют в качестве исходного уровня. Оба уха животных затем иммунизируют путем местного применения DNFB в общем количестве 20 мкл (10 мкл на внутреннюю ушную раковину и 10 мкл на наружную ушную раковину) в концентрации 0,2%. Через 24-72 ч после иммунизации уши снова измеряют. Обработка тестируемыми соединениями приводится в течение фаз сенсибилизации и иммунизации (от 1 до 7 дня) или до и во время фазы иммунизации (обычно в дневное время с дня 4 до дня 7). Тестируемые соединения (в различных концентрациях) вводят либо системно, либо местно (местное применение при обработке ушей). На эффективность тестируемых соединений указывает уменьшение отека уха по сравнению с ситуацией без лечения. Соединения, вызывающие уменьшение на 20% и более, считали эффективными. В некоторых экспериментах мышей иммунизировали, но не сенсибилизировали (отрицательный контроль).
Ингибирующий эффект (ингибирование активации путей JAK-STAT) в тестовых соединениях можно подтвердить при помощи иммунногистохимического анализа. Активация пути (путей) JAK-STAT приводит к образованию и перемещению функциональных транскрипционных факторов. Кроме того, миграция иммунных клеток и увеличение пролиферации кератиноцитов должны также обеспечить уникальные изменения профиля экспрессии в ухе, которые могут быть исследованы и количественно оценены. Срезы фиксированных формалином и заключенных в парафин ушей (собраны после фазы иммунизации в модели DTH) подвергают иммуногистохимическому анализу с использованием антитела, которое специфически взаимодействует с фосфорилированным STAT3 (клон 58Е12, Cell Signaling Technologies). Уши мышей обрабатывали тестируемыми соединениями, плацебо или дексаметазоном (клинически эффективное средство для лечения псориаза) или в модели DTH для сравнения без обработки. Тестируемые соединения и дексаметазон могут приводить к сходным качественным и количественным изменениям в транскрипции, и тестируемые соединения и дексаметазон могут уменьшать количество инфильтрующих клеток. Системное и местное введение тестируемых соединений может приводить к ингибирующим эффектам, т.е. снижению числа инфильтрующих клеток и ингибированию изменений в транскрипции.
Пример Е. Противовоспалительная активность in vivo.
Соединения, описанные в настоящей заявке, могут быть оценены на моделях грызунов или не грызунов, предназначенных для репликации одиночного или комплексного воспалительного ответа. Например, модели артрита на грызунах можно использовать для оценки терапевтического потенциала соеди
- 22 039660 нений в профилактических или терапевтических дозировках. Эти модели включают, без ограничения, индуцированный коллагеном артрит мышей или крыс, индуцированный адъювантом артрит крыс и артрит, индуцированный антителами против коллагена. Аутоиммунные заболевания, включая, без ограничения, множественный склероз, сахарный диабет типа I, увеоретинит, тиреоидит, тяжелую миастению, иммуноглобулиновые нефропатии, миокардит, сенсибилизацию дыхательных путей (астма), волчанку или колит, также могут быть использованы для оценки терапевтического потенциала соединений, описанных в настоящей заявке. Эти модели хорошо зарекомендовали себя в научном сообществе и известны специалистам в данной области техники (Current Protocols in Immunology, v. 3, Coligan, J.E. и др., Wiley Press.; Methods in Molecular Biology, v. 225, Inflammation Protocols., Winyard P.G. и Willoughby D.A., Humana Press, 2003.).
Пример F. Модели на животных для лечения синдрома сухого глаза, увеитов и конъюнктивитов.
Агенты можно оценивать на одной или нескольких доклинических моделях сухого глаза, известных специалистам в данной области техники, включая, без ограничения, модель конканавалина А (ConA) на слезной железе кролика, модель скополамина на мыши (подкожная или трансдермальная), модель Botulinumn на слезной железе мыши или любой из ряда спонтанных аутоиммунных моделей на грызунах, которые приводят к дисфункции глазной железы (например, NOD-SCID, MRL/lpr или NZB/NZW) (Barabino и др., Experimental Eye Research, 2004, 79, 613-621; и Schrader и др., Developmental Opthalmology, Karger, 2008, 41, 298-312, содержание каждой из которых включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки). Конечные точки этих моделей могут включать гистопатологию глазных желез и глаз (роговицы и т.д.) и, возможно, классический тест Ширмера или его модифицированные варианты (Barabino и др.), с помощью которых измеряют выработку слезы. Активность может быть определена при помощи дозирования через множественные пути введения (например, системные или местные), которое можно начать перед или после появления измеряемых проявлений заболевания.
Агенты можно оценивать на одной или нескольких доклинических моделях увеитов, известных специалистам в данной области техники. К ним относятся, без ограничения, модели экспериментальных аутоиммунных увеитов (EAU) и индуцированных эндотоксином увеитов (EIU). Эксперименты EAU можно проводить на кроликах, крысах или мышах, и эти эксперименты могут включать пассивную или активную иммунизацию. Например, любой из ряда антигенов сетчатки можно использовать для сенсибилизирования животных к соответствующему иммуногену, после чего глаза животных можно иммунизировать тем же антигеном. Модель EIU является более острой и включает местное или системное введение липополисахаридов в сублетальных дозах. Конечные точки для обеих моделей EIU и ЕАС могут включать изучение глазного дна и среди прочего гистопатологию. Эти модели рассматриваются Smith и др. (Immunology and Cell Biology, 1998, 76, 497-512, содержание которой включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки). Активность определяют при помощи дозирования через разные пути введения (например, системные или местные), которое можно начать перед или после появления измеряемых проявлений заболевания. Некоторые модели, перечисленные выше, могут также развивать склерит/эписклерит, хориоидит, циклит или ирит и, следовательно, полезны при изучении потенциальной активности соединений для терапевтического лечения этих заболеваний.
Агенты можно также оценивать в одной или нескольких доклинических моделях коньюнктивитов, известных специалистам в данной области техники. Указанные модели включают, без ограничения, модели на грызунах с использованием морской свинки, крысы или мыши. Модели на морской свинке включают модели, при которых используют активную или пассивную иммунизацию и/или иммунные протоколы иммунизации антигенами, такими как овальбумин или амброзия (рассмотрено в Groneberg, D.A. и др., Allergy, 2003, 58, 1101-1113, содержание которой включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки). Модели на крысах и мышах в целом сходны с моделями на морской свинке (также рассмотрено Groneberg). Активность может быть определена при помощи дозирования через множественные пути введения (например, системные или местные), которое можно начать перед или после появления измеряемых проявлений заболевания. Конечные точки для таких исследований могут включать в себя, например, гистологический, иммунологический, биохимический или молекулярный анализ глазных тканей, например, конъюнктивы.
Пример G. Защита кости in vivo.
Соединения можно оценивать в различных доклинических моделях остеопении, остеопороза или резорбции кости, известных специалистам в данной области техники. Например, грызунов после овариэктомии можно использовать для оценки способности соединений влиять на признаки и маркеры ремоделирования и/или плотности кости (Jee W.S.S. и Yao W., J Musculoskel. Nueron. Interact., 2001, 1(3), 193-207, содержание которой включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки). Кроме того, плотность и архитектуру костной ткани можно оценивать у контрольных или получающих соединение грызунов на моделях остеопении, вызванной терапией (например, глюкокортикоидами) (Yao и др. Arthritis and Rheumatism, 2008, 58(6), 3485-3497; и id. 58(11), 1674-1686, содержание которых включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки). Кроме того, воздействие соединений на резорбцию и плотность кости может быть оценено на моделях артрита на грызунах, описанных выше (пример Е). Конечные точки для всех этих моделей могут отличаться, но часто включают в себя гистоло
- 23 039660 гические и радиологические оценки, а также иммунногистологию и соответствующие биохимические маркеры костного ремоделирования.
Пример Н. Модель на трансгенных мышах S100A9.
Ранее было показано, что трансгенные мыши S100A9 обнаруживают накопление MDSC в костном мозге, что сопровождается развитием прогрессивной мультилинейной цитопении и цитологической дисплазии, аналогичной МДС. Кроме того, раннее принудительное созревание MDSC, вызванное либо полностью трансретиноевой кислотой, либо прерывание CD33 сигналинга активного иммунорецептора тирозинзависимой активации, основанного на мотиве (ITAM-основанная) адаптерного белка (DAP 12), позволяло сохранить гематологический фенотип и обеспечивало смягчение заболевания. Эта система может быть полезной для оценки влияния на ингибирование JAK1 при МДС-подобном заболевании в доклинической модели. J. Clin. Invest., 123 (11):4595-4611 (2013), Соответственно селективный ингибитор JAK1 дозируется через желудочный зонд. Способность соединений уменьшать цитопении и цитологическую дисплазию наблюдали на трансгенных мышах S100A9.
Специалистам в данной области техники после изучения приведенного выше описания будут понятны различные модификации изобретения помимо тех, которые описаны в настоящей заявке. Предполагается, что указанные модификации также входят в объем прилагаемой формулы изобретения. Содержание каждого документа, приведенного в настоящей заявке, включая все патенты, патентные заявки и публикации, полностью включено в настоящую заявку посредством ссылок.

Claims (11)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Твердая форма фосфата 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,ГН-4,4'-бипиразол-1-ил)азетидин1-ил]-2,5-дифтор-N-[(1S)-2,2,2-трифтор-1-метилэтил]бензамида (фосфат соединения 1), имеющего формулу
    где твердая форма является кристаллической, имеющей по меньшей мере два пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 6,8±0,2, 16,5±0,2, 20,7±0,2 и 23,6±0,2°.
  2. 2. Твердая форма по п.1, представляющая собой соль 4-[3-(цианометил)-3-(3',5'-диметил-1Н,ГН4,4'-бипиразол-1 -ил)азетидин-1 -ил] -2,5-дифтор-N -[(1 S)-2,2,2-трифтор-1 -метилэтил]бензамида (соединение 1) и фосфорной кислоты со стехиометрическим соотношением 1:1.
  3. 3. Твердая форма по п.1 или 2, имеющая по меньшей мере три пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 6,8±0,2, 16,5±0,2, 20,7±0,2 и 23,6±0,2°.
  4. 4. Твердая форма по любому из пп.1-3, дополнительно имеющая по меньшей мере один пик XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 11,7±0,2, 13,5±0,2, 15,9±0,2, 18,4±0,2 и 19,8±0,2°.
  5. 5. Твердая форма по любому из пп.1-3, дополнительно имеющая по меньшей мере два пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 11,7±0,2, 13,5±0,2, 15,9±0,2, 18,4±0,2 и 19,8±0,2°.
  6. 6. Твердая форма по любому из пп.1-3, дополнительно имеющая по меньшей мере три пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 11,7±0,2, 13,5±0,2, 15,9±0,2, 18,4±0,2 и 19,8±0,2°.
  7. 7. Твердая форма по любому из пп.1-3, дополнительно имеющая по меньшей мере четыре пика XRPD в единицах 2-тета, выбранных из 11,7±0,2, 13,5±0,2, 15,9±0,2, 18,4±0,2 и 19,8±0,2°.
  8. 8. Твердая форма по любому из пп.1-7, имеющая XRPD-профиль, показанный на фигуре 4С.
  9. 9. Твердая форма по п.1, характеризующаяся DSC-термограммой, имеющей эндотермический пик при 228±3°С.
  10. 10. Твердая форма по п.9, где эндотермический пик имеет начало при 224±3°С.
  11. 11. Твердая форма по п.1, имеющая DSC-термограмму, показанную на фиг. 4А.
EA202090291A 2013-05-17 2014-05-16 Твердая форма производного бипиразола EA039660B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361824683P 2013-05-17 2013-05-17

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA202090291A2 EA202090291A2 (ru) 2020-05-31
EA202090291A3 EA202090291A3 (ru) 2020-06-30
EA039660B1 true EA039660B1 (ru) 2022-02-24

Family

ID=50983151

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA202090291A EA039660B1 (ru) 2013-05-17 2014-05-16 Твердая форма производного бипиразола
EA201592199A EA036448B1 (ru) 2013-05-17 2014-05-16 Производные бипиразола в качестве ингибиторов jak

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201592199A EA036448B1 (ru) 2013-05-17 2014-05-16 Производные бипиразола в качестве ингибиторов jak

Country Status (35)

Country Link
US (7) US9382231B2 (ru)
EP (5) EP3527263B1 (ru)
JP (5) JP6415543B2 (ru)
KR (3) KR102341908B1 (ru)
CN (2) CN105452239B (ru)
AR (2) AR096330A1 (ru)
AU (5) AU2014265279B2 (ru)
BR (1) BR112015028501B8 (ru)
CA (1) CA2911536C (ru)
CL (1) CL2015003355A1 (ru)
CR (2) CR20190156A (ru)
CY (3) CY1119105T1 (ru)
DK (3) DK3231801T3 (ru)
EA (2) EA039660B1 (ru)
ES (4) ES2960731T3 (ru)
FI (1) FI3786162T3 (ru)
HK (2) HK1221466A1 (ru)
HR (4) HRP20231048T1 (ru)
HU (4) HUE063817T2 (ru)
IL (4) IL242453B (ru)
LT (4) LT3231801T (ru)
ME (2) ME02763B (ru)
MX (2) MX2020004506A (ru)
MY (1) MY174788A (ru)
PE (2) PE20200527A1 (ru)
PH (2) PH12015502563A1 (ru)
PL (4) PL3231801T3 (ru)
PT (4) PT3231801T (ru)
RS (4) RS61482B1 (ru)
SG (2) SG11201509180WA (ru)
SI (4) SI2997023T1 (ru)
TR (1) TR201905814T4 (ru)
TW (4) TWI664176B (ru)
UA (1) UA117830C2 (ru)
WO (1) WO2014186706A1 (ru)

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX346183B (es) 2005-12-13 2017-03-10 Incyte Holdings Corp Pirrolo[2,3-b]piridinas y pirrolo[2,3-b]pirimidinas heteroarilo-sustituidas como inhibidores de cinasas janus.
HUE029236T2 (en) 2007-06-13 2017-02-28 Incyte Holdings Corp (R) -3- (4- (7H-Pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-4-yl) -1H-pyrazol-1-yl) -3-cyclopentylpropanenitrile Crystalline salts of Janus kinase inhibitor
JP5775070B2 (ja) 2009-05-22 2015-09-09 インサイト・コーポレイションIncyte Corporation ヤヌスキナーゼ阻害剤としてのピラゾール−4−イル−ピロロ[2,3−d]ピリミジンおよびピロール−3−イル−ピロロ[2,3−d]ピリミジンのN−(ヘテロ)アリール−ピロリジン誘導体
PT2432472T (pt) 2009-05-22 2019-12-09 Incyte Holdings Corp 3-[4-(7h-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1h-pirazol-1-il]octano- ou heptano-nitrilo como inibidores de jak
EP2448938B9 (en) 2009-06-29 2015-06-10 Incyte Corporation Pyrimidinones as pi3k inhibitors
TW201113285A (en) 2009-09-01 2011-04-16 Incyte Corp Heterocyclic derivatives of pyrazol-4-yl-pyrrolo[2,3-d]pyrimidines as janus kinase inhibitors
ES2982015T3 (es) 2010-03-10 2024-10-14 Incyte Holdings Corp Derivados de piperidin-4-IL azetidina como inhibidores de JAK1
TWI499421B (zh) 2010-05-21 2015-09-11 Incyte Corp Jak抑制劑的局部製劑
CN103415515B (zh) 2010-11-19 2015-08-26 因塞特公司 作为jak抑制剂的环丁基取代的吡咯并吡啶和吡咯并嘧啶衍生物
EP3660016A1 (en) 2010-12-20 2020-06-03 Incyte Holdings Corporation N-(1-(substituted-phenyl)ethyl)-9h-purin-6-amines as pi3k inhibitors
PE20140832A1 (es) 2011-06-20 2014-07-14 Incyte Corp Derivados de azetidinil fenil, piridil o pirazinil carboxamida como inhibidores de jak
TW201313721A (zh) 2011-08-18 2013-04-01 Incyte Corp 作為jak抑制劑之環己基氮雜環丁烷衍生物
AU2012301721B2 (en) 2011-09-02 2017-08-10 Incyte Holdings Corporation Heterocyclylamines as PI3K inhibitors
UA111854C2 (uk) 2011-09-07 2016-06-24 Інсайт Холдінгс Корпорейшн Способи і проміжні сполуки для отримання інгібіторів jak
AR090548A1 (es) 2012-04-02 2014-11-19 Incyte Corp Azaheterociclobencilaminas biciclicas como inhibidores de pi3k
TW201406761A (zh) 2012-05-18 2014-02-16 Incyte Corp 做爲jak抑制劑之哌啶基環丁基取代之吡咯并吡啶及吡咯并嘧啶衍生物
UA117572C2 (uk) 2012-11-01 2018-08-27 Інсайт Холдинґс Корпорейшн Трициклічні конденсовані похідні тіофену як інгібітори jak
AU2013344780B2 (en) 2012-11-15 2018-03-01 Incyte Holdings Corporation Sustained-release dosage forms of ruxolitinib
KR102366356B1 (ko) 2013-03-06 2022-02-23 인사이트 홀딩스 코포레이션 Jak 저해제를 제조하기 위한 방법 및 중간생성물
RS61482B1 (sr) 2013-05-17 2021-03-31 Incyte Corp Derivati bipirazola kao inhibitori jak
HUE049345T2 (hu) 2013-08-07 2020-09-28 Incyte Corp Nyújtott hatóanyag-leadású dózisformák JAK1 inhibitorhoz
SG10201807952PA (en) * 2014-02-28 2018-10-30 Incyte Corp Jak1 inhibitors for the treatment of myelodysplastic syndromes
MX2016013182A (es) 2014-04-08 2017-04-27 Incyte Corp Tratamiento de neoplasias malignas de linfocitos b mediante una combinacion de inhibidores de janus cinasa (jak) y fosfatidilinositol 3 cinasa (pi3k).
CN106687462A (zh) 2014-04-30 2017-05-17 因赛特公司 Jak1抑制剂的制备方法以及其新形式
US9498467B2 (en) 2014-05-30 2016-11-22 Incyte Corporation Treatment of chronic neutrophilic leukemia (CNL) and atypical chronic myeloid leukemia (aCML) by inhibitors of JAK1
WO2015191677A1 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Incyte Corporation Bicyclic heteroarylaminoalkyl phenyl derivatives as pi3k inhibitors
US9421199B2 (en) 2014-06-24 2016-08-23 Sydnexis, Inc. Ophthalmic composition
WO2016172712A2 (en) 2015-04-23 2016-10-27 Sydnexis, Inc. Ophthalmic composition
US11382909B2 (en) 2014-09-05 2022-07-12 Sydnexis, Inc. Ophthalmic composition
WO2016130501A1 (en) 2015-02-09 2016-08-18 Incyte Corporation Aza-heteroaryl compounds as pi3k-gamma inhibitors
PL3831833T3 (pl) 2015-02-27 2023-03-20 Incyte Holdings Corporation Sposoby wytwarzania inhibitora pi3k
US9732097B2 (en) 2015-05-11 2017-08-15 Incyte Corporation Process for the synthesis of a phosphoinositide 3-kinase inhibitor
US9988401B2 (en) 2015-05-11 2018-06-05 Incyte Corporation Crystalline forms of a PI3K inhibitor
CN107847432A (zh) 2015-05-29 2018-03-27 西德奈克西斯公司 D2o稳定化的药物制剂
HRP20220599T1 (hr) 2015-11-06 2022-06-24 Incyte Corporation Heterociklički spojevi kao inhibitori pi3k-gama
EP3792256B1 (en) 2016-01-05 2024-10-23 Incyte Corporation Pyridine compounds as pi3k-gamma inhibitors
AR108875A1 (es) 2016-06-24 2018-10-03 Incyte Corp COMPUESTOS HETEROCÍCLICOS COMO INHIBIDORES DE PI3K-g
CN107759623B (zh) * 2016-08-23 2020-08-14 苏州旺山旺水生物医药有限公司 Jak抑制剂的中间体及其制备方法
JP7050761B2 (ja) * 2016-09-06 2022-04-08 エフ.ホフマン-ラ ロシュ アーゲー 8-(アゼチジン-1-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリジニル化合物、組成物及びその使用方法
PT3697789T (pt) 2017-10-18 2021-12-31 Incyte Corp Derivados de imidazol condensados substituídos por grupos hidróxi terciários como inibidores de pi3kgama
AR113922A1 (es) 2017-12-08 2020-07-01 Incyte Corp Terapia de combinación de dosis baja para el tratamiento de neoplasias mieloproliferativas
IL276302B2 (en) 2018-01-30 2023-11-01 Incyte Corp Procedures for preparing [1-(3-fluoro-2-(trifluoromethyl(isonicotinyl}piperidine-4-one)
SG11202007805SA (en) * 2018-02-16 2020-09-29 Incyte Corp Jak1 pathway inhibitors for the treatment of cytokine-related disorders
JP7565798B2 (ja) 2018-03-30 2024-10-11 インサイト・コーポレイション 炎症性皮膚疾患のバイオマーカー
SI3773593T1 (sl) * 2018-03-30 2024-08-30 Incyte Corporation Zdravljenje hidradenitisa suppurative z zaviralci jak
MA52208A (fr) 2018-04-13 2021-02-17 Incyte Corp Biomarqueurs pour une maladie du greffon contre l'hôte
CN108484468A (zh) * 2018-05-11 2018-09-04 南京大学 芳基氮杂环丁烷类化合物的制备方法
CR20210165A (es) 2018-09-05 2021-10-01 Incyte Corp Formas cristalinas de un inhibidor de fosfoinositida 3-quinasa (pi3k) campo técnico
MA54077A (fr) 2018-10-31 2021-09-15 Incyte Corp Polythérapie pour le traitement de maladies hématologiques
US11596632B2 (en) 2018-12-19 2023-03-07 Incyte Corporation JAK1 pathway inhibitors for the treatment of gastrointestinal disease
EP3934651A1 (en) 2019-03-05 2022-01-12 Incyte Corporation Jak1 pathway inhibitors for the treatment of chronic lung allograft dysfunction
JP2022526301A (ja) 2019-03-19 2022-05-24 インサイト・コーポレイション 尋常性白斑のバイオマーカー
CN114364798A (zh) 2019-03-21 2022-04-15 欧恩科斯欧公司 用于治疗癌症的Dbait分子与激酶抑制剂的组合
CA3157499A1 (en) 2019-10-10 2021-04-15 Incyte Corporation Biomarkers for graft-versus-host disease
WO2021072098A1 (en) 2019-10-10 2021-04-15 Incyte Corporation Biomarkers for graft-versus-host disease
US11992490B2 (en) 2019-10-16 2024-05-28 Incyte Corporation Use of JAK1 inhibitors for the treatment of cutaneous lupus erythematosus and Lichen planus (LP)
JP7518900B2 (ja) * 2019-10-16 2024-07-18 インサイト・コーポレイション 皮膚エリテマトーデス及び扁平苔癬(lp)の治療のためのjak1阻害剤の使用
WO2021089791A1 (en) 2019-11-08 2021-05-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of cancers that have acquired resistance to kinase inhibitors
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
PE20231102A1 (es) 2020-06-02 2023-07-19 Incyte Corp Procesos para preparar un inhibidor de jak1
US11833155B2 (en) 2020-06-03 2023-12-05 Incyte Corporation Combination therapy for treatment of myeloproliferative neoplasms
CN117043152A (zh) 2020-08-18 2023-11-10 因赛特公司 用于制备jak1抑制剂的方法和中间体
US11905292B2 (en) 2020-08-18 2024-02-20 Incyte Corporation Process and intermediates for preparing a JAK inhibitor
CN112159394B (zh) * 2020-10-09 2021-10-22 嘉兴特科罗生物科技有限公司 一种作为jak激酶抑制剂的小分子化合物及其用途
TW202237125A (zh) 2020-12-04 2022-10-01 美商英塞特公司 用於治療皮膚疾病之jak抑制劑與維生素d類似物
AU2021396231A1 (en) * 2020-12-08 2023-06-22 Incyte Corporation Jak1 pathway inhibitors for the treatment of vitiligo
CN114099514A (zh) * 2020-12-29 2022-03-01 上海岸阔医药科技有限公司 预防或治疗egfr功能异常相关的副作用的方法
EP4274578A1 (en) 2021-01-11 2023-11-15 Incyte Corporation Combination therapy comprising jak pathway inhibitor and rock inhibitor
EP4333840A1 (en) 2021-05-03 2024-03-13 Incyte Corporation Jak1 pathway inhibitors for the treatment of prurigo nodularis
CN118317946A (zh) 2021-07-12 2024-07-09 因赛特公司 用于制备巴瑞替尼的方法和中间体
TW202419088A (zh) 2022-08-05 2024-05-16 美商英塞特公司 使用jak抑制劑之蕁麻疹治療
US20240307353A1 (en) 2023-03-16 2024-09-19 Incyte Corporation Jak1 pathway inhibitors for the treatment of asthma
CN117186078A (zh) * 2023-11-06 2023-12-08 药康众拓(北京)医药科技有限公司 氘代氮杂环丁烷类jak抑制剂药物及用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090233903A1 (en) * 2008-03-11 2009-09-17 Incyte Corporation Azetidine and cyclobutane derivatives as jak inhibitors
US20110059951A1 (en) * 2009-09-01 2011-03-10 Rodgers James D HETEROCYCLIC DERIVATIVES OF PYRAZOL-4-YL-PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINES AS JANUS KINASE INHIBITORS
WO2012177606A1 (en) * 2011-06-20 2012-12-27 Incyte Corporation Azetidinyl phenyl, pyridyl or pyrazinyl carboxamide derivatives as jak inhibitors

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS60106847U (ja) 1983-12-27 1985-07-20 富士重工業株式会社 室外後写鏡
JP2650681B2 (ja) 1987-07-10 1997-09-03 株式会社ブリヂストン 空気ばね
US5521184A (en) 1992-04-03 1996-05-28 Ciba-Geigy Corporation Pyrimidine derivatives and processes for the preparation thereof
ATE459616T1 (de) 1998-08-11 2010-03-15 Novartis Ag Isochinoline derivate mit angiogenesis-hemmender wirkung
US6133031A (en) 1999-08-19 2000-10-17 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense inhibition of focal adhesion kinase expression
GB9905075D0 (en) 1999-03-06 1999-04-28 Zeneca Ltd Chemical compounds
GB0004890D0 (en) 2000-03-01 2000-04-19 Astrazeneca Uk Ltd Chemical compounds
ATE273695T1 (de) 2000-06-28 2004-09-15 Smithkline Beecham Plc Nassvermahlung
MXPA04002243A (es) 2001-09-19 2004-06-29 Aventis Pharma Sa Compuestos quimicos.
KR20090087139A (ko) 2001-10-30 2009-08-14 노파르티스 아게 Flt3 수용체 티로신 키나아제 활성의 억제제로서의 스타우로스포린 유도체
AR037647A1 (es) 2002-05-29 2004-12-01 Novartis Ag Derivados de diarilurea utiles para el tratamiento de enfermedades dependientes de la cinasa de proteina
GB0215676D0 (en) 2002-07-05 2002-08-14 Novartis Ag Organic compounds
AR042052A1 (es) 2002-11-15 2005-06-08 Vertex Pharma Diaminotriazoles utiles como inhibidores de proteinquinasas
UA80767C2 (en) 2002-12-20 2007-10-25 Pfizer Prod Inc Pyrimidine derivatives for the treatment of abnormal cell growth
GB0305929D0 (en) 2003-03-14 2003-04-23 Novartis Ag Organic compounds
PE20050952A1 (es) 2003-09-24 2005-12-19 Novartis Ag Derivados de isoquinolina como inhibidores de b-raf
MX2007006204A (es) 2004-11-24 2007-06-20 Novartis Ag Combinaciones que comprenden inhibidores de jak y cuando menos uno de entre inhibidores de bcr-abl, flt-3, fak o raf cinasa.
MX346183B (es) 2005-12-13 2017-03-10 Incyte Holdings Corp Pirrolo[2,3-b]piridinas y pirrolo[2,3-b]pirimidinas heteroarilo-sustituidas como inhibidores de cinasas janus.
CL2008001709A1 (es) 2007-06-13 2008-11-03 Incyte Corp Compuestos derivados de pirrolo [2,3-b]pirimidina, moduladores de quinasas jak; composicion farmaceutica; y uso en el tratamiento de enfermedades tales como cancer, psoriasis, artritis reumatoide, entre otras.
HUE029236T2 (en) 2007-06-13 2017-02-28 Incyte Holdings Corp (R) -3- (4- (7H-Pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-4-yl) -1H-pyrazol-1-yl) -3-cyclopentylpropanenitrile Crystalline salts of Janus kinase inhibitor
KR101580482B1 (ko) * 2007-11-16 2015-12-28 인사이트 홀딩스 코포레이션 야누스 키나제 억제제로서의 4-피라졸릴-n-아릴피리미딘-2-아민 및 4-피라졸릴-n-헤테로아릴피리미딘-2-아민
CL2009001884A1 (es) 2008-10-02 2010-05-14 Incyte Holdings Corp Uso de 3-ciclopentil-3-[4-(7h-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1h-pirazol-1-il)propanonitrilo, inhibidor de janus quinasa, y uso de una composición que lo comprende para el tratamiento del ojo seco.
JOP20190230A1 (ar) 2009-01-15 2017-06-16 Incyte Corp طرق لاصلاح مثبطات انزيم jak و المركبات الوسيطة المتعلقة به
PT2432472T (pt) 2009-05-22 2019-12-09 Incyte Holdings Corp 3-[4-(7h-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1h-pirazol-1-il]octano- ou heptano-nitrilo como inibidores de jak
JP5775070B2 (ja) * 2009-05-22 2015-09-09 インサイト・コーポレイションIncyte Corporation ヤヌスキナーゼ阻害剤としてのピラゾール−4−イル−ピロロ[2,3−d]ピリミジンおよびピロール−3−イル−ピロロ[2,3−d]ピリミジンのN−(ヘテロ)アリール−ピロリジン誘導体
PL2486041T3 (pl) 2009-10-09 2014-01-31 Incyte Holdings Corp Pochodne hydroksylowe, keto i glukuronidowe 3-(4-(7H-pirolo[2,3-d]pirymidyn-4-ylo)-1H-pirazol-1-ilo)-3-cyklopentylopropanonitrylu
AU2011217961B2 (en) 2010-02-18 2016-05-05 Incyte Holdings Corporation Cyclobutane and methylcyclobutane derivatives as Janus kinase inhibitors
ES2982015T3 (es) 2010-03-10 2024-10-14 Incyte Holdings Corp Derivados de piperidin-4-IL azetidina como inhibidores de JAK1
EP2558468B1 (en) * 2010-04-14 2015-04-01 Array Biopharma, Inc. 5, 7-substituted-imidazo [1,2-c] pyrimidines as inhibitors of jak kinases
TWI499421B (zh) 2010-05-21 2015-09-11 Incyte Corp Jak抑制劑的局部製劑
EP2640725B1 (en) 2010-11-19 2015-01-07 Incyte Corporation Heterocyclic-substituted pyrrolopyridines and pyrrolopyrimidines as jak inhibitors
CN103415515B (zh) * 2010-11-19 2015-08-26 因塞特公司 作为jak抑制剂的环丁基取代的吡咯并吡啶和吡咯并嘧啶衍生物
WO2012076063A1 (en) * 2010-12-10 2012-06-14 Rottapharm S.P.A. Pyridine amide derivatives as ep4 receptor antagonists
EP2678686B1 (en) 2011-02-24 2017-10-11 Massachusetts Institute of Technology ALTERNATIVELY SPLICED mRNA ISOFORMS AS PROGNOSTIC INDICATORS FOR METASTATIC CANCER
TW201313721A (zh) 2011-08-18 2013-04-01 Incyte Corp 作為jak抑制劑之環己基氮雜環丁烷衍生物
UA111854C2 (uk) 2011-09-07 2016-06-24 Інсайт Холдінгс Корпорейшн Способи і проміжні сполуки для отримання інгібіторів jak
ES2640911T3 (es) 2011-09-22 2017-11-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Cicloalquilnitrilpirazolcarboxamidas como inhibidores de la quinasa Janus
TW201406761A (zh) * 2012-05-18 2014-02-16 Incyte Corp 做爲jak抑制劑之哌啶基環丁基取代之吡咯并吡啶及吡咯并嘧啶衍生物
UA117572C2 (uk) 2012-11-01 2018-08-27 Інсайт Холдинґс Корпорейшн Трициклічні конденсовані похідні тіофену як інгібітори jak
AU2013344780B2 (en) 2012-11-15 2018-03-01 Incyte Holdings Corporation Sustained-release dosage forms of ruxolitinib
KR102366356B1 (ko) 2013-03-06 2022-02-23 인사이트 홀딩스 코포레이션 Jak 저해제를 제조하기 위한 방법 및 중간생성물
US9371282B2 (en) 2013-05-17 2016-06-21 Centrexion Therapeutics Corporation Somatostatin receptor subtype 4 (SSTR4) agonists
JO3603B1 (ar) 2013-05-17 2020-07-05 Janssen Sciences Ireland Uc مشتقات سلفامويل بيرولاميد واستخدامها كادوية لمعالجة التهاب الكبد نوع بي
EP2803668A1 (en) 2013-05-17 2014-11-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Novel (cyano-dimethyl-methyl)-isoxazoles and -[1,3,4]thiadiazoles
RS61482B1 (sr) * 2013-05-17 2021-03-31 Incyte Corp Derivati bipirazola kao inhibitori jak
EA201592126A1 (ru) 2013-05-17 2016-05-31 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг 6-мостиковые гетероарилдигидропиримидины для лечения и профилактики заражения вирусом гепатита b
HUE049345T2 (hu) 2013-08-07 2020-09-28 Incyte Corp Nyújtott hatóanyag-leadású dózisformák JAK1 inhibitorhoz
SG10201807952PA (en) 2014-02-28 2018-10-30 Incyte Corp Jak1 inhibitors for the treatment of myelodysplastic syndromes
CN106687462A (zh) 2014-04-30 2017-05-17 因赛特公司 Jak1抑制剂的制备方法以及其新形式
US9498467B2 (en) 2014-05-30 2016-11-22 Incyte Corporation Treatment of chronic neutrophilic leukemia (CNL) and atypical chronic myeloid leukemia (aCML) by inhibitors of JAK1
MA41185B1 (fr) 2014-12-16 2019-12-31 Novartis Ag Composés d'acide isoxazole hydroxamique comme inhibiteurs de lpxc
PE20231102A1 (es) 2020-06-02 2023-07-19 Incyte Corp Procesos para preparar un inhibidor de jak1
TW202237125A (zh) 2020-12-04 2022-10-01 美商英塞特公司 用於治療皮膚疾病之jak抑制劑與維生素d類似物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090233903A1 (en) * 2008-03-11 2009-09-17 Incyte Corporation Azetidine and cyclobutane derivatives as jak inhibitors
US20110059951A1 (en) * 2009-09-01 2011-03-10 Rodgers James D HETEROCYCLIC DERIVATIVES OF PYRAZOL-4-YL-PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINES AS JANUS KINASE INHIBITORS
WO2012177606A1 (en) * 2011-06-20 2012-12-27 Incyte Corporation Azetidinyl phenyl, pyridyl or pyrazinyl carboxamide derivatives as jak inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
PE20160126A1 (es) 2016-02-24
HK1245769B (zh) 2020-02-07
KR20240063187A (ko) 2024-05-10
LT2997023T (lt) 2017-06-26
DK3231801T3 (en) 2019-04-15
AR096330A1 (es) 2015-12-23
MX2015015738A (es) 2016-03-16
KR20160019905A (ko) 2016-02-22
AU2018223058A1 (en) 2018-09-20
TWI664176B (zh) 2019-07-01
WO2014186706A1 (en) 2014-11-20
DK3527263T3 (da) 2021-01-25
US20200010456A1 (en) 2020-01-09
US20180312492A1 (en) 2018-11-01
HRP20170795T1 (hr) 2017-08-25
MY174788A (en) 2020-05-14
EP4275756A3 (en) 2024-02-07
AU2021202685B2 (en) 2022-11-17
AU2020202000B2 (en) 2021-03-11
KR20210120120A (ko) 2021-10-06
KR102442747B1 (ko) 2022-09-14
ES2626793T3 (es) 2017-07-26
CY1123756T1 (el) 2022-05-27
TW201940479A (zh) 2019-10-16
ME02763B (me) 2018-01-20
US20210238168A1 (en) 2021-08-05
CY1121763T1 (el) 2020-07-31
LT3527263T (lt) 2021-05-10
AU2022263454A1 (en) 2022-12-08
RS58743B1 (sr) 2019-06-28
HRP20210119T1 (hr) 2021-03-05
HK1221466A1 (zh) 2017-06-02
CL2015003355A1 (es) 2016-05-27
IL282644B (en) 2021-10-31
LT3231801T (lt) 2019-08-12
PL3527263T3 (pl) 2021-05-17
PT3527263T (pt) 2021-02-01
SI3786162T1 (sl) 2024-02-29
JP7126741B2 (ja) 2022-08-29
AU2020202000A1 (en) 2020-04-09
US9382231B2 (en) 2016-07-05
US11905275B2 (en) 2024-02-20
IL287313B (en) 2022-03-01
EP3231801B1 (en) 2019-02-13
EP3527263B1 (en) 2020-10-28
CN107698569A (zh) 2018-02-16
HRP20190713T1 (hr) 2019-06-14
EP2997023B1 (en) 2017-03-22
HUE043573T2 (hu) 2019-08-28
PL2997023T3 (pl) 2017-08-31
JP2021008493A (ja) 2021-01-28
KR102341908B1 (ko) 2021-12-23
PH12018502125A1 (en) 2019-03-25
NZ713999A (en) 2020-11-27
TWI719401B (zh) 2021-02-21
PH12015502563B1 (en) 2016-02-22
AU2014265279A1 (en) 2015-11-26
EP3527263A1 (en) 2019-08-21
US20230159501A1 (en) 2023-05-25
PT2997023T (pt) 2017-05-31
CA2911536A1 (en) 2014-11-20
US11001571B2 (en) 2021-05-11
PL3786162T3 (pl) 2024-04-08
IL287313A (en) 2021-12-01
US20160289215A1 (en) 2016-10-06
TW202432140A (zh) 2024-08-16
JP2024105557A (ja) 2024-08-06
IL264409A (en) 2019-02-28
NZ753636A (en) 2020-11-27
HUE063817T2 (hu) 2024-01-28
MX2020004506A (es) 2021-08-09
ES2960731T3 (es) 2024-03-06
RS56012B1 (sr) 2017-09-29
EA202090291A2 (ru) 2020-05-31
EP2997023A1 (en) 2016-03-23
ME03355B (me) 2019-10-20
BR112015028501B1 (pt) 2022-11-01
JP2022163162A (ja) 2022-10-25
TR201905814T4 (tr) 2019-05-21
US20140343030A1 (en) 2014-11-20
TW201512191A (zh) 2015-04-01
SI3527263T1 (sl) 2021-05-31
LT3786162T (lt) 2023-11-27
PL3231801T3 (pl) 2019-07-31
CR20150633A (es) 2016-04-05
EP3231801A1 (en) 2017-10-18
JP6775560B2 (ja) 2020-10-28
EP3786162A1 (en) 2021-03-03
NZ753638A (en) 2020-11-27
CY1119105T1 (el) 2018-02-14
EA201592199A1 (ru) 2016-05-31
HUE053122T2 (hu) 2021-06-28
RS61482B1 (sr) 2021-03-31
BR112015028501B8 (pt) 2023-01-24
HUE033587T2 (hu) 2017-12-28
AU2014265279B2 (en) 2018-09-27
CA2911536C (en) 2021-07-20
AU2022263454B2 (en) 2024-01-18
DK3786162T3 (da) 2023-10-09
EP3786162B1 (en) 2023-08-09
ES2845210T3 (es) 2021-07-26
JP2019011364A (ja) 2019-01-24
SG11201509180WA (en) 2015-12-30
CN105452239B (zh) 2017-11-21
NZ753639A (en) 2020-11-27
KR102663357B1 (ko) 2024-05-14
JP6415543B2 (ja) 2018-10-31
SI3231801T1 (sl) 2019-05-31
KR20220127371A (ko) 2022-09-19
PH12015502563A1 (en) 2016-02-22
EA202090291A3 (ru) 2020-06-30
NZ753637A (en) 2020-11-27
BR112015028501A2 (pt) 2017-07-25
IL282644A (en) 2021-06-30
EP4275756A2 (en) 2023-11-15
SG10201709469SA (en) 2017-12-28
AU2018223058B2 (en) 2020-01-02
RS64591B1 (sr) 2023-10-31
AR118120A2 (es) 2021-09-22
PE20200527A1 (es) 2020-03-09
IL242453B (en) 2019-11-28
IL264409B (en) 2021-05-31
FI3786162T3 (fi) 2023-10-02
CR20190156A (es) 2019-05-16
US20240150327A1 (en) 2024-05-09
US11591318B2 (en) 2023-02-28
EA036448B1 (ru) 2020-11-11
UA117830C2 (uk) 2018-10-10
PT3231801T (pt) 2019-05-24
EP2997023B9 (en) 2018-06-13
CN107698569B (zh) 2020-11-27
CN105452239A (zh) 2016-03-30
TW202116320A (zh) 2021-05-01
JP2016519147A (ja) 2016-06-30
US10435392B2 (en) 2019-10-08
AU2021202685A1 (en) 2021-05-27
US9926301B2 (en) 2018-03-27
PT3786162T (pt) 2023-10-20
SI2997023T1 (sl) 2017-07-31
ES2720073T3 (es) 2019-07-17
HRP20231048T1 (hr) 2023-12-22
TWI840646B (zh) 2024-05-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA039660B1 (ru) Твердая форма производного бипиразола
WO2011028685A1 (en) Heterocyclic derivatives of pyrazol-4-yl-pyrrolo[2,3-d]pyrimidines as janus kinase inhibitors
KR102729910B1 (ko) Jak 저해제로서 비피라졸 유도체
NZ753639B2 (en) Bipyrazole derivatives as jak inhibitors
NZ753636B2 (en) Bipyrazole derivatives as jak inhibitors
NZ753638B2 (en) Bipyrazole derivatives as jak inhibitors