DE69607443T2

DE69607443T2 - Zwischenprodukte und ihre Anwendung für die Herstellung von N,N'-überbrückten Bisindolylmaleimiden

Info

Publication number: DE69607443T2
Application number: DE69607443T
Authority: DE
Inventors: Margaret Mary Faul; Christine Ann Krumrich; Winneroski, Jr.
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1995-11-20
Filing date: 1996-11-18
Publication date: 2000-08-10
Anticipated expiration: 2016-11-19
Also published as: PL184728B1; EP0776899A1; HUP9901975A2; HUP9901975A3; ATE191219T1; DE69607443D1; GR3033729T3; AR004719A1; MX9803791A; DK0776899T3; NO310195B1; PT776899E; TR199800876T2; MY118946A; PE17998A1; YU61096A; CA2237401C; EA000639B1; WO1997019080A1; TW371661B

Description

Die ubiquitäre Art der Proteinkinase C Isoenzyme und ihre wichtigen Rollen in der Physiologie stellen Anreize dar, hochselektive PKC Inhibitoren herzustellen. Wenn fest steht, daß ein Zusammenhang zwischen bestimmten Isoenzymen mit Krankheitszuständen besteht, ist es naheliegend anzunehmen, daß hemmende Verbindungen, die für eine oder zwei Proteinkinase C Isoenzyme relativ zu den anderen PKC Isoenzymen und anderen Proteinkinasen selektiv sind, hochwertige therapeutische Mittel sind. Solche Verbindungen zeigen eine größere Wirksamkeit und eine geringere Toxizität aufgrund ihrer Spezifität.
Eine Klasse von PKC Isoenzym-selektiven N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimiden wurde in Heath et al., (EP 0 657 458 A) beschrieben und am 14. Juni 1995 veröffentlicht. Eine bevorzugte Verbindung in diesen N,N'- verbrückten Serien umfaßt eine Verbindung der Formel I:
worin R für Amino, Alkylamino oder Dialkylamino steht. Heath et al. beschreiben mehrere dieser aminosubstituierten N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimide, die folgendermaßen hergestellt werden:
Unglücklicherweise stellte sich die O-Mesylatfunktionalität, die zur Herstellung der aminosubstituierten N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimide verwendet wurde, als toxisch und als unerwünschte Verunreinigung bei der Herstellung der aminosubstituierten N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimide heraus. Es müssen teure Reinigungstechniken verwendet werden, um sicherzustellen, daß das O-Mesylatzwischenprodukt vom Endprodukt entfernt wird.
Die vorliegende Erfindung liefert ein Schlüsselzwischenprodukt bei der Synthese von aminosubstituierten N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimiden. Dieses neue Zwischenprodukt wird leicht zu aminosubstituierten N,N'- verbrückten Bisindolylmaleimiden umgewandelt, ohne über das O-Mesylatzwischenprodukt zu gehen. Das Zwischenprodukt ist also sehr viel reaktiver. Das Zwischenprodukt wird vorzugsweise zur Herstellung von aminosubstituierten N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimiden bei niedrigeren Temperaturen und einer kürzeren Reaktionszeit verwendet, was zu einer höheren Ausbeute mit weniger Nebenprodukten führt. Daher ist das Zwischenprodukt zur Herstellung von N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimiden mit hoher Ausbeute und ohne unerwünschte toxische Verunreinigungen brauchbar.
Zusätzlich sind die beanspruchten Verbindungen als Isoenzym-selektive PKC Inhibitoren brauchbar. Als solche sind die Verbindungen zur Behandlung von Zuständen brauchbar, die assoziiert sind mit Diabetes mellitus und dessen Komplikationen, Ischämie, Entzündung, Störungen des zentralen Nervensystems, cardiovaskulärer Erkrankung, dermatologischer Erkrankung und Krebs.
Die vorliegende Erfindung liefert eine Verbindung der Formel II
worin R&sub1; für Br, I oder O-Tosyl steht.
Die vorliegende Erfindung liefert ferner eine pharmazeutische Formulierung, die eine Verbindung der Formel II und ein oder mehrere pharmazeutisch annehmbare Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoffe enthält.
Ein weiterer Aspekt der Erfindung ist ein Verfahren zur Verwendung einer Verbindung der Formel II zur Herstellung von aminosubstituierten N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimiden der Formel I, das gekennzeichnet ist durch die Umsetzung einer Verbindung der Formel 1I mit einem Amin in einem unreaktiven, polaren Lösemittel.
Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung, wie sie hierin beschrieben und beansprucht ist, werden die folgenden Ausdrücke und Abkürzungen folgendermaßen definiert
Der Ausdruck "C&sub1;-C&sub4; Alkyl" steht für eine cyclische, gerade oder verzweigte Alkylgruppe mit ein bis vier Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, Cyclopropyl, n-Butyl, Isobutyl, sek-Butyl, t-Butyl und dergleichen.
Der Ausdruck "Aryl" steht für ein substituiertes oder unsubstituiertes Benzyl, Phenyl oder Naphthyl.
Der Ausdruck "Amin", wie er hierin verwendet wird, steht für -N(CF&sub3;)(CH&sub3;), -NH(CF&sub3;) oder -NR&sub3;R&sub4;, worin R&sub3; und R&sub4; unabhängig stehen für Wasserstoff, C&sub1;-C&sub4; Alkyl, Phenyl oder Benzyl oder unter Kombination mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gesättigten oder ungesättigten fünf oder sechsgliedrigen Ring bilden.
Wie oben erwähnt, liefert die Erfindung eine Verbindung der Formel II
worin R&sub1; für Br, I oder O-Tosyl steht.
Es ist ersichtlich, daß verschiedene stereoisomere Formen der Verbindungen der Formel II vorkommen können. Die bevorzugten Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind die der Formel IIa und IIb
Jedoch bilden Razemate und einzelne Enantiomere und Gemische hiervon einen Teil der vorliegenden Erfindung.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden am einfachsten aus einer Verbindung der folgenden Formel hergestellt:
Dieses hydroxysubstituierte N,N'-verbrückte Bisindolylmaleimid, nämlich die Verbindung der Formel III, wird durch Techniken hergestellt, die in Heath et al (EP 0 657 458 A) vom 14. Juni 1995 beschrieben sind, welche hiermit eingeführt ist.
Die beanspruchten Verbindungen werden folgendermaßen hergestellt
R&sub1; ist dasselbe, wie dies vorher definiert wurde. Vorzugsweise steht R&sub1; für Br oder I, am bevorzugtesten steht R&sub1; für Br. Die beanspruchten Tosylatverbindungen (p-Toluolsulfonylverbindungen) werden durch Umsetzung des Alkohols mit p-Toluolsulfonsäureanhydrid in Gegenwart einer Base, wie Pyridin in THF, Ether, Methylenchlorid oder einem anderen unreaktiven organischen Lösemittel hergestellt. Die Umsetzung wird im allgemeinen unter Stickstoff von Raumtemperatur bis zur Rückflußtemperatur des Reaktionsgemisches ausgeführt.
Die beanspruchten Halogenide werden durch die Umsetzung des Alkohols mit einer Bromid- oder Iodidquelle hergestellt. Die Bromid- oder Iodidquelle kann eine Vielzahl an Reagenzien sein, die in der Technik bekannt sind, einschließlich: HI, HBr, LiBr, CaBr&sub2;, PBr&sub3;, R&sub5;PBr&sub2;, N-Bromsuccirumid, CBr&sub4;, Allyl-Br, Benzyl-Br, SOEr&sub2;, worin R&sub5; für Phenyl, Phenyloxy, Alkyl oder Aryl steht. Der Fachmann erkennt, daß verschiedene Aktivierungsmittel zur Reaktion gegeben werden können, wie 1,1'-Carbonyldiimidazol. Die Umwandlung eines Hydroxyls (III) zu einem Halogenid (1I) kann durch Techniken ausgeführt werden, die in der Technik bekannt sind und in Richard C. Larock, A Guide to functional Group Preparations, VCH Verlag, Seiten 356-363 (1989) beschrieben sind, das hiermit eingeführt ist. Bevorzugte Bedingungen umfassen das Bromid oder Iodid in Gegenwart eines Phosphorhalogenidreagenzes, wie PX&sub3;, (Phenyl)&sub3;PX&sub2; oder (Phenoxy)&sub3;PX&sub2;, worin X für Brom oder Iod steht. Die Umsetzung wird geeigneterweise in THF, Acetonitril, Methylenchlorid oder anderen unreaktiven Lösemitteln ausgeführt, die in der Technik bekannt sind. DMF oder andere Lösemittel sind aufgrund der Bildung eines Vilsmeier-Typ-Reagenzes auch praktikabel, wie dies in J. Barluenga, Synthesis, Seiten 426 (1985) und G. Hodosi, Carbohydrate Research 230: 327-342 (1992) beschrieben ist.
Die Verbindungen der Formel II werden in die aminosubstituierten N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimide der Formel IV folgendermaßen umgewandelt:
worin R&sub1; für Br, I oder O-Tosyl steht und R&sub2; für -N(CF&sub3;)CH&sub3;, -NH(CF&sub3;) oder -NR&sub3;R&sub4; steht, worin R&sub3; und R&sub4; unabhängig für Wasserstoff C&sub1;-C&sub4; Alkyl, Phenyl oder Benzyl stehen oder unter Kombination mit dem Stickstoff, an den sie gebunden sind, einen gesättigten oder ungesättigten fünf oder sechsgliedrigen Ring bilden. Vorzugsweise steht R&sub2; für N(CH&sub3;).
Das Verfahren zur Verwendung einer Verbindung der Formel II zur Bildung einer Verbindung der Formel IV umfaßt die Umsetzung einer Verbindung II mit einem Amin der Formel HN(CF&sub3;)CH&sub3;, HNH(CF&sub3;) oder HNR&sub3;R&sub4;, worin R&sub3; und R&sub4; unabhängig stehen für Wasserstoff C&sub1;-C&sub4; Alkyl, Phenyl oder Benzyl oder unter Kombination mit dem Stickstoff an den sie gebunden sind, einen gesättigten oder ungesättigten fünf bis sechsgliedrigen Ring bilden, in einem unreaktiven, polaren aprotischen Lösemittel. Die Umsetzung wird vorzugsweise in einer Lösung mit DMF, THF : Wasser oder Dimethylacetamid bei Temperaturen von 0ºC bis zur Rückflußtemperatur des Reaktionsgemisches ausgeführt. Die Umsetzung ist gewöhnlich in etwa 1 bis 20 Stunden vollständig. Vorzugsweise wird die Umsetzung bei Raumtemperatur bis 50ºC ausgeführt. Die Verbindung IV kann mittels Standardtechniken aus dem Reaktionsgemisch gereinigt werden, wird aber vorzugsweise direkt aus dem Reaktionsgemisch kristallisiert.
Am unerwartetsten führt die Verwendung des beanspruchten Zwischenprodukts zur Herstellung eines aminosubstituierten N,N'-Bisindolylmaleimids zu einer höheren Ausbeute und vermeidet toxische Verureinigungen. Das beanspruchte Zwischenprodukt ist überraschenderweise reaktiver als das bekannte Mesylatzwischenprodukt. Die Reaktivität von verschiedenen Abgangsgruppen zu HN(CH&sub3;)&sub2; ist in Tabelle I gezeigt. Die relative Reaktivität, die in der Technik vorhergesagt wird, ist in Carey und Sundberg, Teil A, 3. Ausgabe, Seite 291 (1990) beschrieben.

Tabelle I: Umsetzungsraten mit HN(CH&sub3;)&sub2;

Gruppe Krel (Reaktionsgeschwindigkeit der Abgangsgruppen mit HN(CH&sub3;)&sub2;)
p-Toluolsulfonat 2,2 · 10&supmin;²
MsO&supmin; 5,5 · 10&supmin;³
Cl&supmin; 9,8 · 10&supmin;&sup4;
I&supmin; 2,0 · 10&supmin;¹
Br&supmin; 2,2 · 10&supmin;²
Die Daten in Tabelle I zeigen, daß Tosyl, Bromid und Iodid unerwartet reaktiv sind, insbesondere das Bromid und das Iodid, die 8x bis 36x reaktiver sind als das bekannte Mesylatzwischenprodukt. Diese erhöhte Reaktivität gegenüber MsO wird auch mit H&sub2;NCH&sub3; und H&sub2;N(Benzyl) beobachtet. Die Zunahme der Reaktivität führt zu einer niedrigeren Reaktionstemperatur und die Umsetzung ist in einer kürzeren Zeit vollständig. Die Verwendung des beanspruchten Zwischenprodukts führt auch zu weniger Verunreingungen im Produkt. Mittels des bekannten O-Mesylzwischenprodukts führt die zur Herstellung eines aminosubstituierten N,N'-Bisindolylmaleimids verwendete Reaktion zu einem Verunreinigungsgrad von 15 bis 30% aufgrund von Nebenprodukten, die durch die Umsetzung an der Maleimidcarbonylgruppe gebildet werden. Mittels des beanspruchten Zwischenprodukts beträgt der Verunreinigungsgrad weniger als 5%, was eine wesentliche Verbesserung darstellt.
Wie vorher erwähnt, wurde festgestellt, daß die zur Herstellung von aminosubstituierten N,N'-verbrückien Bisindolylmaleimiden verwendete O-Mesylatfunktionalität toxisch ist und eine unerwünschte Verunreinigung bei der Herstellung von aminosubstituierten N,N'-verbrückten Bisinolylmaleimiden darstellt. Es müssen teure Reinigungstechniken verwendet werden, um sicherzustellen, daß das O-Mesylatzwischenprodukt vom Endprodukt entfernt wird. Daher ist ein weiterer Vorteil der vorliegenden Zwischenprodukte und des Verfahrens zur Herstellung von aminosubstituierten N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimiden mittels der beanspruchten Zwischenprodukte die Vermeidung von schwierigen Reinigungsschritten zur Entfernung von toxischen Verunreinigungen.
Die bevorzugten Verbindungen, die mittels der beanspruchten Zwischenprodukte hergestellt werden, sind folgende: (S)-13-[(Dimethylamino)methyl]-10,11,14,15-tetrahydro-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]- pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion, insbesondere als Mesylatsalz, (S)-13-[(Monomethylamino)methyl]-10,11,14,15-tetrahydro-4,9: 16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion, (S)-13-[(Pyrrolidino) methyl]-10,11,14,15-tetrahydro-4,9: 16,21-dimetheno-1H,13Hdibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion-Monohydrochlorid und (S)-13- [Benzylaminomethyl]-10,11,14,15-tetrahydro-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H]- [1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion.
Die bevorzugten monosubstituierten Amine der Formel IV können direkt aus den beanspruchten Verbindungen hergestellt werden. Ein direktes Verfahren mit hoher Ausbeute zur Herstellung dieser Verbindungen ist mit dem Mesylatzwischenprodukt nicht möglich.
Die Verbindungen der Formel IV werden als freie Base hergestellt und vorzugsweise zu einem pharmazeutisch annehmbaren Salz durch in der Technik bekannte Verfahren hergestellt. Die bevorzugten Salze umfassen das Hydrochlorid- und Mesylatsalz.
Die folgenden Beispiele und Präparationen werden nur zur weiteren Erläuterung der Erfindung bereitgestellt. Der Schutzumfang der Erfindung besteht nicht nur aus den folgenden Beispielen. In den folgenden Beispielen und Präparationen werden Schmelzpunkt, Kernmagnetresonanzspektrum, Massenspektrum, Hochdruckflüssigchromatographie über Silicagel, N,N-Dimethylformamid, Tetrahydrofuran und Ethylacetat jeweils abgekürzt mit Smp., NMR, MS, HPLC, DMF, THF und EtOAc. Die Ausdrücke "NMR" und "MS" zeigen an, daß das Spektrum mit der gewünschen Struktur übereinstimmt.

Präparation 1

3-(2-[(Methylsulfonyl)oxy]ethoxy-4-(triphenylmethoxy)-1-butanolmethansulfonat

Tritylchlorid (175,2 g, 0,616 mol) wird in 500 ml CH&sub2;Cl&sub2; unter N&sub2; gelöst. Triethylamin (71,9 g, 100 ml, 0,710 mol) wird zugegeben und dann wird R,S-Glycidol (50,0 g, 0,648 mol) zugegeben und die Reaktionslösung wird auf sanften Rückfluß (42ºC) für 4 Stunden erhitzt. Die Reaktion wird auf Raumtemperatur abgekühlt und zweimal mit 250 ml einer wäßrigen gesättigten Ammoniumchloridlösung und dann 250 ml Kochsalzlösung extrahiert. Die wäßrigen Phasen werden mit 100 ml CH&sub2;Cl&sub2; rückextrahiert und die organische Phase wird getrocknet (MgSO&sub4;) und im Vakuum unter Bildung von Tritylglycidol als Öl eingedampft, das aus Ethanol unter Bildung von 104,4 g (54%) Tritylglycidol als Feststoff umkristallisiert wird.
Eine 1 M THF Lösung aus Vinylmagnesiumbromid (50 ml, 50 mmol, 2,0 Äqu.) wird unter N&sub2; auf -20ºC abgekühlt und es wird eine katalytische Menge Kupferiodid (0,24 g, 1,26 mmol, 0,05 Äqu.) zugegeben. Das entstehende Gemisch wird bei -20ºC für 5 Minuten gerührt und dann wird eine Lösung aus Tritylglycidol (7,91 g, 25,0 mmol) in 40 ml trockenem THF bei -20ºC tropfenweise über 15 Minuten zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird für 3 Stunden bei -20ºC gerührt und kann sich dann auf Raumtemperatur erwärmen und für 15 Minuten rühren. Die Reaktion wird durch Kühlen des Reaktionsgemisches auf -30ºC gestoppt und 125 ml einer wäßrigen gesättigten Ammoniumchloridlösung werden langsam zugegeben. Das entstehende Gemisch wird mit 200 ml Ethylacetat extrahiert. Die organische Phase wird dann mit einer wäßrigen Lösung aus 0,93 g (2,50 mmol, 0,1 Äqu.) Ethylendiamintetraessigsäure, als Dinatriumsalzdihydrat (EDTA) in 125 ml entionisiertem Wasser zur Entfernung aller Metalle extrahiert. Die wäßrigen Phasen werden mit 50 ml Ethylacetat rückextrahiert und die vereinigten organischen Phasen werden mit 100 ml Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO&sub4;) und im Vakuum unter Bildung eines Öls eingedampft, das mittels 1,2 l 3/1 Hexan / Ethylacetat durch Silica (76 g) filtriert wird. Das Filtrat wird im Vakuum unter Bildung von 9,07 g 1-O-(Triphenylmethoxy)-4-penten-2-ol als hellgelb gefärbtes Öl eingedampft (100%).
Eine 60% Suspension aus Natriumhydrid in Mineralöl (6,13 g, 0,153 mol, 1,5 Äqu.) wird durch Zugabe bei 45ºC zu 175 ml trockenem THF suspendiert. Das entstehende Gemisch wird bei Raumtempertaur für 1,5 Stunden gerührt und dann werden 17,7 ml (0,204 mol, 2,0 Äqu.) frisch destilliertes Allylbromid über eine Spritze zugegeben. Die Reaktion wird für 1 h auf 45ºC erhitzt. Die Reaktion kann durch DC oder HPLC verfolgt werden. Das Reaktionsgemisch wird auf 0ºC abgekühlt und 400 ml einer wäßrigen gesättigten Ammoniumchloridlösung werden langsam zugegeben, um den Basenüberschuß abzufangen. Das entstehende Gemisch wird mit 800 ml Ethylacetat extrahiert und die organische Phase wird mit 500 ml Wasser gewaschen. Die wäßrigen Phasen werden mit 100 ml Ethylacetat rückextrahiert und die vereinigten organischen Phasen werden mit 200 ml Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO&sub4;) und im Vakuum unter Bildung von 41,5 g (> 100%) 1,1',1"-[[[2-(2- Propenyloxy)-4-pentenyl]oxy]methylidin]tris[benzol] als gelbes Öl eingedampft.
1,1',1"-[[[2-(2-Propenyloxy)-4-pentenyl]oxy]methylidin]tris[benzol] (39,3 g, 0,102 mol) wird in einer Lösung aus 390 ml wasserfreiem Methylalkohol und 60 ml CH&sub2;Cl&sub2; gelöst und unter Durchblasen von N&sub2; durch die viskose Lösung auf-50ºC bis -40ºC gekühlt. Dann wird Ozon durch das Reaktionsgemisch bei -50ºC bis -40ºC für 80 Minuten geblasen bis die Reaktion eine blaßblaue Farbe annimmt. Das entstehende Reaktionsgemisch kann sich unter N&sub2; auf 0ºC erwärmen und dann wird eine Lösung aus Natriumborhydrid (23,15 g, 0,612 mol, 6 Äqu.) in 85 ml Ethanol / 85 ml Wasser langsam zugegeben, um die Reaktion zu stoppen, wobei die Reaktionstemperatur unter 10ºC gehalten wird. Die Reaktion wird für 30 Minuten in einem Eisbad gerührt und kann sich dann auf Raumtemperatur erwärmen und über Nacht rühren. Die Temperatur steigt beim Erwärmen auf 31ºC. Das Reaktionsgemisch wird mit 400 ml einer wäßrigen gesättigten Ammoniumchloridlösung verdünnt und mit 800 ml Ethylacetat extrahiert. Die organische Phase wird mit 400 ml Wasser gewaschen und die wäßrige Phase wird mit 150 nil Ethylacetat rückextrahiert. Die vereinigte organische Phase wird mit 200 ml Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO&sub4;) und im Vakuum unter Bildung eines trüben Öls eingedampft. Dieses Öl wird aus 2/1 Hexan 1 Ethylacetat in 3 Kristallisaten unter Bildung von 28,9 g 3-(2-Hydroxyethoxy)-4-(triphenylmethoxy)-1-butanol (72 %) umkristallisiert.
3-(2-Hydroxyethoxy)-4-(triphenylmethoxy)-1-butanol (14,0 g, 35,7 mmol) wird in 140 ml CH&sub2;Cl&sub2; gelöst, unter N&sub2; auf 0ºC gekühlt und Triethylamin (10,8 g, 14,9 ml, 0,107 mol, 3,0 Äqu.) wird zugegeben. Dann wird Methansulfonylchlorid (11,0 g, 7,46 ml, 96,4 mmol, 2,7 Äqu.) tropfenweise bei < 5ºC zugegeben. Das entstehende Reaktionsgemisch wird dann mit zusätzlichem CH&sub2;Cl&sub2; (300 ml) verdünnt und mit 200 ml Wasser und 200 ml einer wäßrigen gesättigten Ammoniumchloridlösung gewaschen. Die wäßrigen Phasen werden mit 50 ml CH&sub2;Cl&sub2; rückextrahiert und die vereinigte organische Phase wird mit 100 ml Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO&sub4;) und im Vakuum unter Bildung von 18,4 g (94%) 3-(2-[Methylsulfonyl)oxy]ethoxy]-4- triphenylmethoxy)-1-butanolmethansulfonat als weißer Feststoff eingedampft.

Präparation 2

(S)-Tritylglycidol

Tritylchlorid (2866 g, 10,3 mol) wird in 7 l CH&sub2;Cl&sub2; unter N&sub2; gelöst. Triethylamin (1189 g, 1638 ml, 11,8 mol) wird zugegeben und dann wird (R)-(+)-Glycidol (795,0 g, 10,6 mol) mittels 1 l CH&sub2;Cl&sub2; als Nachspülmittel zugegeben. Die Reaktionslösung wird für 3-4 Stunden auf einen sanften Rückfluß (42ºC) erhitzt. Die Reaktion wird auf Raumtemperatur abgekühlt und dann werden 3 l Kochsalzlösung zugegeben. Die organische Phase wird getrocknet (600 g Na&sub2;SO&sub4;) und im Vakuum unter Bitdung der Titelverbindung als Öl eingedampft, das aus Ethanol unter Bildung von 2354 g (70%) der Titelverbindung als Feststoff umkristallisiert wird.

Präparation 3

(S)-3-[2-[Methylsulfonyl)oxy]ethoxyl-4-(triphenylmethoxy)-1-butanolmethansulfonat

Eine 1 M THF Lösung aus Vinylmagnesiumbromid (5,76 l, 5,76 mol, 1,96 Äqu.) wird unter N&sub2; auf -20ºC abgekühlt und es wird eine katalytische Menge Kupferiodid (28,2 g, 0,148 mol, 0,05 Äqu) zugegeben. Das entstehende Gemisch wird bei -20ºC für 5 Minuten gerührt und dann wird eine Lösung aus (S)-Tritylglycidol (929,0 g, 2,94 mol) in 3,2 l trockenem THF bei -20ºC tropfenweise über 1,5 Stunden zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird für 1 Stunde bei -20ºC gerührt. Die Reaktion wird durch Kühlen des Reaktionsgemisches auf -30ºC gestoppt und 5 l einer wäßrigen gesättigten Ammoniumchloridlösung werden langsam zugegeben. Die organische Phase wird dann zweimal mit 1 l einer 10% G/V Lösung aus Ethylendiamintetraessigsäure als Dinatriumsalzdihydrat (EDTA) zur Entfernung aller Metalle extrahiert. Die organische Phase wird mit 2 l Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO&sub4;) und im Vakuum unter Bildung von 1061 g (96%) an (S)-1-O-(Triphenylmethyl)-4- hydroxypentanol als Öl eingedampft.
Eine 60% Suspension Natriumhydrid in Mineralöl (268,9 g, 6,72 mol, 1,5 Äqu.) wird unter N&sub2; in 2,8 l trockenem THF suspendiert und eine Lösung aus (S)-1-O-Triphenylmethyl-4-hydroxypentanol (1543 g, 4,48 mol) in 5,61 trockenem THF wird bei Raumtemperatur zugegeben. Das entstehende Gemisch wird bei Raumtemperatur für 1,5 Stunden gerührt und dann werden 770 ml (8,89 mol, 2,0 Äqu.) frisch destilliertes Allylbromid über 20 Minuten zugegeben. Die Reaktion wird für 1-2 h auf 45ºC erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird auf 15-20ºC abgekühlt und 2 l einer wäßrigen gesättigten Ammoniumchloridlösung werden langsam zugegeben, um den Basenüberschuß abzufangen. Das entstehende Gemisch wird mit 1 l Ethylacetat und 1 l Wasser verdünnt und die organische Phase wird isoliert. Die wäßrige Phase wird mit 500 ml Ethylacetat rückextrahiert und die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet (MgSO&sub4;) und im Vakuum unter Bildung von 1867 g (98%) (S)-1,1',1"-[[[2-(2- Propenyloxy)-4-pentenyl]oxy]methylidin]tris[benzol] als gelbes Öl eingedampft.
(S)-1,1',1"-[[[2-(2-Propenyloxy)-4-pentenyl]oxy]methylidin]tris[benzol] (1281 g, 3,33 mol) wird in einer Lösung aus 4 l wasserfreiem Methylalkohol und 3,6 l CH&sub2;Cl&sub2; gelöst und unter Durchblasen von N&sub2; durch die viskose Lösung auf -50º bis -40ºC gekühlt. Sudan III Indikator wird zur Reaktion gegeben und Ozon wird durch das Reaktionsgemisch bei -50ºC bis -35ºC für 13 Stunden geblasen bis die Reaktion von einer Pfrsichfarbe zu einer hellgrün 1 gelben Farbe wechselt. Das entstehende Reaktionsgemisch kann sich unter N&sub2; auf 0ºC erwärmen und dann wird über 40 Minuten eine Lösung aus Natriumborhydrid (754 g, 19,9 mol, 6 Äqu.) in 2,5 l Ethanol / 2,5 1 Wasser zugegeben, wobei die Reaktionstemperatur unter 30ºC gehalten wird. Die Reaktion kann dann über Nacht rühren. Die Reaktion kann durch HPLC verfolgt werden. Das Reaktionsgemisch wird auf 10-15ºC gekühlt und man gibt 4 l einer wäßrigen gesättigten Ammoniumchloridlösung bei < 20ºC langsam zu. Das abgestoppte Reaktionsgemisch wird dann filtriert und die Feststoffe werden mit 3 l CH&sub2;Cl&sub2; gewaschen. Die organische Phase wird isoliert und mit 3 l einer wäßrigen gesättigten Ammoniumchloridlösung gewaschen und die wäßrigen Phasen werden mit 1 l CH&sub2;Cl&sub2; rückextrahiert. Die vereinigte organische Phase wird getrocknet (MgSO&sub4;) und im Vakuum unter Bildung von 1361 g (> 100%) (S)-3-(2-Hydroxyethoxy)-4-(triphenylmethoxy)-1-butanol als Öl eingedampft.
(S)-3-(2-Hydroxyethoxy)-4-(triphenylmethoxy)-1-butanol (500 g, 1,27 mol) wird in 4,8 l CH&sub2;Cl&sub2; gelöst, unter N&sub2; auf 0ºC gekühlt und Triethylamin (386,4 g, 532 ml, 3,81 mol, 3,0 Äqu.) wird zugegeben. Dann wird Methansulfonylchlorid (396,3 g, 268 ml, 3,46 mol, 2,7 Äqu.) tropfenweise bei < 5ºC über 30 Minuten zugegeben. Das entstehende Reaktionsgemisch wird dann bei 0ºC bis 5ºC für 1-2 Stunden gerührt und mit HPLC verfolgt. Das Reaktionsgemisch wird mit zusätzlichem CH&sub2;Cl&sub2; verdünnt und zweimal mit 21 Wasser und 2 l einer wäßrigen gesättigten Ammoniumchloridlösung gewaschen. Die wäßrigen Phasen werden mit 1 l CH&sub2;Cl&sub2; rückextrahiert und die vereinigte organische Phase wird getrocknet (MgSO&sub4;) und im Vakuum unter Bildung eines Feststoffs eingedampft, der aus 1/l Heptan / Ethylacetat unter Bildung von 615 g (88%) (S)-3-(2- [Methylsulfonyl)oxy]ethoxy]-4-triphenylmethoxy)-1-butanolmethansulfonat in drei Kristallisaten als Feststoff umkristallisiert wird. NMR. MS.

Präparation 4

(S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[hydroxymethyl)]-4,9:16,21-dimetheno-1H-13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4- H],[1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion

2,3-Bis-(1H-indol-3-yl)-N-methylmaleimid (114,7 g, 0,336 mol) und (S)-3-[2-[(Methylsulfonyl)oxy]- ethoxy]-4-(triphenylmethoxy)-1-butanolmethansulfonat (220,0 g, 0,401 mol, 1,2 Äqu.) werden in 4,3 l DMF gelöst. Die Lösung der Reagenzien wird dann langsam über 70 Stunden (mit etwa 1 mllmin) zu einer 50ºC Aufschlammung Cäsiumcarbonat (437,8 g, 1,34 mol, 4,0 Äqu.) in 7 l DMF gegeben. Nach 70-72 Stunden wird die Reaktion abgekühlt und filtriert und das DMF wird im Vakuum unter Bildung eines Rückstands entfernt, der in 4,6 l CH&sub2;Cl&sub2; gelöst wird. Die organische Phase wird mit 1,15 l wäßriger 1 N HCl und dann mit 4,6 l Kochsalzlösung extrahiert. Die vereinigten wäßrigen Phasen werden mit 1,1 l CH&sub2;Cl&sub2; rückextrahiert. Die vereinigte organische Phase wird getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;) und filtriert. Das meiste Lösemittel wird im Vakuum entfernt und die entstehende Lösung wird durch 2 kg Silicagel mittels 4-5 Gallonen zusätzlichem CH&sub2;Cl&sub2; unter Entfernung der Hintergrundverunreinigung filtriert. Das Lösemittel wird im Vakuum entfernt und der entstehende purpur gefärbte Feststoff wird in 7 Volumina Acetonitril (basierend auf dem Gewicht des rohen (S)-10,11,14,15-Tetrahydro-2- methyl-13-[(triphenylmethoxy)methyl]-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]- oxadiazacyclohexadecin-1,3-(2H)-dion) behandelt, um 150,2 g (57%) an (S)-10,11,14,15-Tetrahydro-2-methyl- 13-[(triphenylmethoxy)methyl]-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4- H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3-(2H)-dion nach dem Trocknen (89% rein gemäß HPLC gegen Standard) zu erhalten.
(S)-10,11,14,15-Tetrahydro-2-methyl-13-[(triphenylmethoxy)methyl]-4,9: 16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3-(2H)-dion (32,7 g, 46,9 mmol) wird in 1,61 Ethanol und 1,6 l wäßriger 10 N KOH suspendiert. Das entstehende Gemisch wird für 19 Stunden bis zu einem sanften Rückfluß (78ºC) erhitzt. Die meisten Feststoffe lösen sich bei Erreichen des Rückflusses auf. Die Reaktionslösung wird auf 10ºC bis 15ºC abgekühlt und wäßrige 10 N HCl (1,2 l) wird langsam bei < 15ºC zugegeben, um die Aciditat auf pH = 1 einzustellen. Bei der Ansäuerung bildet sich eine rote Aufschlämmung. Das Reaktionsgemisch wird mit 500 ml CH&sub2;Cl&sub2; verdünnt und für 20 Minuten gerührt und unter Entfernung der meisten Salze filtriert. Die Salze werden mit zusätzlichem CH&sub2;Cl&sub2; (1,5 l) gewaschen und das Filtrat wird zweimal mit 1 l Wasser extrahiert. Die vereinigten wäßrigen Phasen werden mit 1 l CH&sub2;Cl&sub2; rückextrahiert und die organische Phase wird getrocknet (MgSO&sub4;). Das Lösemittel wird im Vakuum unter Bildung von 36,0 g (> 100%) (S)-10,11,14,15- Tetrahydro-13-[(triphenylmethoxy)methyl]-4,9:16,21-dimetheno-13H-dibenzo[E,K]furo[3,4-H]- [1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3-dion als purpurfarbener Feststoff entfernt (80% rein gemäß HPLC Fläche).
(S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[(triphenylmethoxy)methyl]-4,9:16,21-dimetheno-13H-dibenzo[E,K]furo- [3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3-dion (36,0 g, etwa 46,9 mmol) wird in 320 ml trockenem DMF unter N&sub2; gelöst und wird mit einer vorgemischten Lösung aus 1,1,1,3,3,3-Hexamethyldisilazan (99 ml, 75,7 g, 0,469 mol, 10 Äqu.) und Methanol (9,5 ml, 7,51 g, 0,235 mol, 5 Äqu.) behandelt. Die entstehende Lösung wird für 7 Stunden auf 45ºC erhitzt. Die Reaktion kann über HPLC verfolgt werden. Das meiste DMF wird im Vakuum entfernt und der entstehende Rückstand wird in 200 ml Ethylacetat extrahiert und mit 200 ml Wasser und zweimal mit 100 ml einer wäßrigen 5% LiCl Lösung gewaschen. Die wäßrigen Phasen werden mit 100 ml Ethylacetat rückextrahiert. Die vereinigte organische Phase wird mit 200 ml einer gesättigten wäßrigen Ammoniumchloridlösung gewaschen. Die vereinigte organische Phase wird getrocknet (MgSO&sub4;) und im Vakuum unter Bildung von 35,9 g (> 100%) des rohen (S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[(triphenylmethoxy)methyl]-4,9:16,21-dimetheno- 1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dions als purpurfarbener Feststoff eingedampft.
(S) -10,11,14,15-Tetrahydro-13-[(triphenylmethoxy)methyl]-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]- pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion (34,0 g, etwa 46,8 mmol) wird in 350 ml CH&sub2;Cl&sub2; gelöst und unter N&sub2; auf -25ºC gekühlt. Wasserfreies HCl Gas wird für etwa 1-2 Minuten bei < 0ºC in die Reaktionslösung geblasen. Die entstehende Aufschlämmung kann sich auf Raumtemperatur erwärmen und für 1 Stunde rühren. Die Reaktion kann durch HPLC verfolgt werden. Die Aufschlämmung wird filtriert und die Feststoffe werden mit 200 ml CH&sub2;Cl&sub2; gewaschen. Der Feststoff wird in einem Vakuumofen bei 50ºC unter Bildung von 18,6 g (90%) (S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[hydroxymethyl]-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4- H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion als purpurfarbener Feststoff getrocknet (93% rein gemäß HPLC Fläche).

Beispiel 1

(S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[brom(methyl)]-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H]- [1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(214)-dion

Brom (2,0 Äqu.) und Pyridin (0,1 Äqu.) werden in Methylenchlorid (10 Volumina) gegeben und die Lösung wird auf -5ºC abgekühlt. Das Bromid wird mit Triphenylphosphit (2,0 Äqu.) titriert. Die Lösung ändert sich von gelb zu klar, wenn das gesamte Brom verbraucht ist. In einen zweiten Reaktor wird (S)-10,11,14,15- Tetrahydro-13-[hydroxy(methyl)]-4,9: 16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion (1,0 Äqu.) in Methylenchlorid (10 Volumina) gegeben. Die Aufschlämmung wird auf -5ºC abgekühlt. Die Triphenylphosphitdibromidlösung wird dann zur Pyrrolidonaufschlämmung gegeben und die Reaktion kann sich auf Raumtemperatur erwärmen und für 12-16 Stunden rühren bis sie vollständig ist (< 0,4 % Verbindung III gemäß HPLC). Die Aufschlämmung wird unter Vakuum bei Raumtemperatur über 2 Stunden konzentriert, dann mit 1 Volumen entionisiertem Wasser gestoppt und für 15 Minuten gerührt. Toluol (40 Volumina) wird in die Reaktionsaufschlämmung gegeben, um das Produkt zu fällen. Nach dem Rühren bei 10ºC für 1 Stunde wird das Produkt durch Filtration isoliert und zweimal mit Toluol (5 Volumina), entionisiertem Wasser (5 Volumina) und einem letzten Waschschritt mit 5 Volumina Toluol gewaschen. Das Titelbromid wird in einem Vakuumtrockner bei 50ºC getrocknet. Ausbeuten 85-90% (Verunreinigungen 1-2%).
Um die Menge an Verunreinigungen weiter zu verringern, wird das Produkt in einem Lösemittelsystem erneut aufgeschlämmt, wie Aceton : Wasser, Methanol : Wasser, Isopropanol : Wasser oder Ethylacetat. Vorzugsweise wird das Produkt in THF : Wasser in einem Verhältnis von 1 : 1 bis 5 : 1 (THF : Wasser) erneut aufgeschlämmt.

Beispiel 2

(S)-13-[(Dimethylamino)methyl]-10,11,14,15-tetrahydro-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4- H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion

Zu einer Lösung aus (S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[brom(methyl)]-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H- dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion (1,0 Äqu.) in N,N-Dimethylformamid (17 Volumina) wird Dimethylamin (10,73 kg, 12 Äqu.) gegeben. Das Reaktionsgefäß wird verschlossen und für 9 Stunden auf 45ºC erhitzt. Die Reaktion wird dann auf Raumtemperatur abgekühlt und für 12-16 Stunden gerührt. NaOH (12 N, 1,1 Äqu.) wird unter Bildung der freien Base zur Reaktion gegeben. Die Lösung wird für weitere 2 Stunden gerührt. Nach der Entfernung des N,N-Dimethylformamids in Vakuum auf 5-7 Volumina wird MeOH (30 Volumina) mit 60ºC während 1 Stunde zur Reaktion gegeben, die ebenfalls 60ºC hat. Die Reaktion wird dann auf Raumtemperatur abgekühlt und über Nacht gerührt, dann weiter auf 0-10ºC abgekühlt. Das Produkt wird durch Filtration isoliert und mit MeOH (3 Volumina) gewaschen. Das Material wird in einem Vakuumtrockner bei 50ºC auf ein konstantes Gewicht getrocknet. Die Ausbeuten betragen 85-92%. Andere Lösemittel, die in dieser Umsetzung verwendet wurden, sind THF/Wasser und Dimethylacetamid, wobei die Umsetzung aufgrund der geringen Löslichkeit des Ausgangsmaterials und der Produkte in einem polaren aprotischen Lösemittel ausgeführt werden sollte. Es wurden andere Basen untersucht (siehe später), um das HBr Salz in situ freizusetzen, aber die effektivsten Basen waren 6 N NaOH, 12 N NaOH und K&sub2;CO&sub3;.

Beispiel 3

(S)-10,11,14,15-Tetrahydro- 13-[iod(methyl)]-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H]- [1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion
(S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[methansulfonyloxy]-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H- dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion (1,0 g, 1,94 mmol) wird in 20 ml trockenem N,N-Dimethylformamid (20 Volumina) aufgenommen. Zur Lösung wird Natriumiodid (3,0 g, 19,4 mmol, 10,0 Äqu.) gegeben und die Reaktion wird gerührt und für 36 Stunden auf 50ºC erhitzt. Bei der Abkühlung der Reaktion auf Umgebungstemperatur wird das Produkt durch die Zugabe von Wasser (50 ml, 50 Volumina) isoliert. Das Produkt fällt als purpurner Feststoff aus, der aus 5 : 1 THF : H&sub2;O unter Bildung von 0,87 g (81%) der Titelverbindung umkristallisiert wird.

Beispiel 4

(S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[p-toluolsulfonyloxy(methyl)]-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H- dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion

(S)-10,11,14,15-Tetrahydro-13-[hydroxymethyl)]-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4- H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion (1,0 g, 2,27 mmol) wird in 20 ml Dichlormethan (20 Volumina) aufgenommen. Zur Lösung wird Toluolsulfonsäureanhydrid (2,22 g, 6,80 mmol, 3,0 Äqu.) und Pyridin (0,72 g, 9,08 mmol, 4,0 Äqu.) gegeben und die Reaktion wird gerührt und für 2 Stunden auf Rückfluß bei 42ºC erhitzt. Die Reaktion wird auf Umgebungstemperatur abgekühlt und mit 40 ml Dichlormethan verdünnt. Die organische Phase wird mit 50 ml 1 N Chlorwasserstoffsäure und 50 ml Kochsalzlösung gewaschen. Die wäßrigen Phasen werden mit 30 ml Dichlormethan rückextrahiert und die vereinigten organischen Phasen werden einem Lösemittelwechsel von Methylenchlorid zu Ethanol unterzogen. Das Produkt fällt als purpurner Feststoff aus und wird unter Bildung von 1,25 g (93% Ausbeute) der Titelverbindung filtriert.

Beispiel 5

(S)-13-[(Monomethylamino)methyl]-10,11,14,15-tetrahydro-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H- dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H][1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion

Methylamin (37,1 g, 1,19 mol, 20 Äqu.) wird in 600 ml N,N-Dimethylacetamid gelöst, wobei die Temperatur unter 23ºC gehalten wird. Zur Lösung wird die Verbindung von Beispiel 1 (30 g, 0,0595 mol) gegeben. Die Reaktion wird bei Umgebungstemperatur für 24 Stunden in einem verschlossenen Behälter gerührt. Triethylamin (8,3 ml, 0,0595 mol, 1 Äqu.) wird zum Abfangen des bei der Umsetzung gebildeten HBr zugegeben und die Reaktion wird für weitere 30 Minuten gerührt und dann auf 4ºC abgekühlt und Wasser (450 ml) wird langsam zugegeben, wobei die Reaktionstemperatur unter 25ºC gehalten wird. Nach der Zugabe von Wasser entwickelt sich eine Aufschlämmung die 1 Stunde gerührt wird und mittels 200 ml zusätzlichem Wasser zum Waschen des filtrierten Feststoffs filtriert wird. Der Feststoff wird in einem Vakuumofen bei 50ºC unter Bildung von 25,03 g (93%) der Titelverbindung getrocknet.

Beispiel 6

(S)-13-[(Pyrrolidino)methyl-10,11,14,15-tetrahydro-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H]- [1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dionmonohydrochlorid

Die Verbindung von Beispiel 1 (1,0 g, 1,0 Äqu) wird in 5 ml N,N-Dimethylacetamid aufgenommen und man gibt Pyrrolidin (1,6 ml, 10 Äqu.) zu. Die Reaktion wird für 9 Stunden auf 45ºC erhitzt und dann auf Raumtemperatur abgekühlt. Zur roten Aufschlämmung werden 12 N NaOH (0,17 ml, 1,0 Äqu.) gegeben und das Gemisch wird bei Raumtemperatur für 2 Stunden unter Bildung einer roten Lösung gerührt. Das Lösemittel wird im Vakuum entfernt und das Öl wird mit Methylenchlorid (100 ml) verdünnt und mit gesättigtem Ammoniumchlorid (100 ml) und 5% LiCl Lösung (2 · 100 ml) gewaschen. Die Entfernung des Methylenchlorids im Vakuum ergibt ein Öl, aus dem die Titelverbindung als roter Feststoff nach der Zugabe von Methyl-t-butylether ausfällt. Der Feststoff wird durch Filtration isoliert und im Vakuumofen bei 50ºC über Nacht unter Bildung von 0,8 g (81%) Produkt getrocknet.

Beispiel 7

(S)-13-[Benzylaminomethyl]-10,11,14,15-tetrahydro-4,9:16,21-dimetheno-1H,13H-dibenzo[E,K]pyrrolo[3,4-H]- [1,4,13]oxadiazacyclohexadecin-1,3(2H)-dion

Die Verbindung von Beispiel 1 wird in 20 Volumina N,N-Dimethylacetamid aufgenommen und Benzylamin (6,0 Äqu.) wird in einer Portion zugegeben. Die Reaktion wird gerührt und für 24 Stunden auf 80ºC in einem geschlossenen Behälter erhitzt. Die Reaktion wird auf Umgebungstemperatur abgekühlt und Triethylamin (1 Äqu.) wird zum Abfangen des HBr zugegeben und die Reaktion wird für weitere 30 Minuten gerührt. Ethylacetat wird zugegeben und die organische Phase wird mit einer gesättigten Lösung Natriumchlorid gewaschen. Die Lösung wird einem Lösemittelwechsel von Ethylacetat zu Ethanol unterzogen, wobei eine rote Aufschlämmung entsteht, die unter Bildung der Titelverbindung als roter Feststoff in einer Ausbeute von 79% filtriert wird. Beispiel 8 Kinetische Untersuchung
X = I (Verbindung A)
X = Br (Verbindung B)
X = Cl (Verbindung C)
X = OMs (Verbindung D)
X = OTs (Verbindung E)
R = NHCH&sub3; (Verbindung F)
R = N(CH&sub3;)&sub2; (Verbindung G)
R = NHBr (Verbindung H)
Eine 2 mol/l Lösung aus Dimethylamin in N,N-Dimethylacetamid (DMA) wird zur Verwendung in den Kinetikuntersuchungen hergestellt. Die Verbindungen A (0,25 g, 0,45 mmol), B (0,229 g, 0,45 mmol), C (0,209 g, 0,45 mmol), D (0,236 g, 0,45 mmol) und E (0,271 g, 0,45 mmol) werden jeweils in DMA gelöst (etwa 20 ml/g, 4- 6 ml) und eine 2 mol/l Lösung aus Dimethylamin in DMA (4,5 ml, 9,0 mmol, 20 Äqu.) wird zu jeder Reaktion gegeben. Die Reaktionslösungen werden verschlossen, bei 23ºC gerührt und mit HPLC Analyse über die Zeit verfolgt. Eine 4,6 mm · 25 cm Zorbax SB-CN Säule wird mit einer isokratischen mobilen Phase aus 50/50 THF/0,1% Trifluoressigsäure gepuffertem Wasser bei 1 mg/min und einer UV Detektoreinstellung auf 233 nm verwendet (Rt Verbindung A = 10,4 min. Rt Verbindung B = 9,3 min. Rt Verbindung C = 9,0 min. Rt Verbindung D = 6,2 min. Rt Verbindung E = 10,6 min). Die Umsetzungskonzentrationen werden aus einem Ansprechfaktor bestimmt, der für jede Verbindung aus der Geradengleichung einer Dreipunktkalibrierungskurve erhalten wurde (Konzentrationen 0,1 mg/ml, 0,05 mg/ml und 0,025 mg/ml gegenüber den jeweiligen Ansprechflächen). Die Umsetzungsproben (0,1 ml) werden in einem Volumenmeßkolben vor der HPLC Analyse auf 25 ml verdünnt und die Konzentrationen (mg/ml) werden in molare Konzentrationen umgerechnet (mmol/ml). Der natürliche Logarithmus der Dimethylaminkonzentration dividiert durch die Konzentrationen der Verbindungen A, B, C, D oder E wird gegen die Zeit aufgetragen. Die Steigung der aus jedem Plot erhaltenen Gerade wird durch die Diüerenz der anfänglichen Aminkonzentration minus der anfänglichen Verbindungskonzentrationen geteilt, um die Geschwindigkeitskonstanten zweiter Ordnung zu erhalten (Einheiten in 1 · (mol/l)&supmin;¹ · h&supmin;¹). Die Ergebnisse sind in der Tabelle I gezeigt.

Beispiel 9

Konkurrenzgeschwindigkeitsuntersuchungen von Mesylat gegenüber Bromid mit Dimethylamin, Methylamin und Benzylamin

Eine 2 mol/l Lösung aus Methylamin und Dimethylamin in N,N-Dimethylacetamid (DMA) wird zur Verwendung in den Kinetikuntersuchungen hergestellt. Die Verbindungen D (1,03 g, 1,98 mmol) und B (1,00 g, 1,98 mmol) werden in N,N-Dimethylacetamid vereinigt (20 ml/g für Methylamin- und Dimethylaminumsetzungen und 36 ml/g für Benzylaminumsetzungen) und eine 2 mol/l Lösung aus Methylamin in DMA (19,8 ml, 39,7 mmol, 20 Äqu.) oder eine 2 mol/l Lösung Dimethylamin in DMA (19,8 ml, 39,7 mmol, 20 Äqu.) oder Benzylamin (4,25 g, 39,7 mmol, 20 Äqu.) wird zugegeben. Die Reaktionslösungen werden verschlossen, bei 23ºC gerührt und zur HPLC Analyse werden Proben entnommen. Es wird eine 4,6 mm · 25 cm Zorbax SB-CN Säule mit einer isokratischen mobilen Phase aus 45/55 THF/0,1% Trifluoressigsäure gepuffertem Wasser mit 1 ml/min und einer UV Detektoreinstellung von 233 nm verwendet (Rt Verbindung D = 11,4 min. Rt Verbindung B = 19,9 min). Die Umsetzungskonzentrationen werden aus einem Ansprechfaktor bestimmt, der für die Verbindungen B und D aus der Geradengleichung einer Dreipunktkalibrierungskurve erhalten wurde (Konzentrationen 0,1 mg/ml, 0,05 mg/ml und 0,025 mg/ml gegenüber den jeweiligen Ansprechflächen). Die Umsetzungsproben (0,1 ml) werden in einem Volumenmeßkolben vor der HPLC Analyse auf 25 ml verdünnt und die Konzentrationen (mg/ml) werden in molare Konzentrationen umgerechnet (mmol/ml). Der natürliche Logarithmus der Aminkonzentrationen dividiert durch die Konzentrationen der Verbindungen wird gegen die Zeit aufgetragen. Die Steigung der aus jedem Plot erhaltenen Gerade wird durch die Differenz der anfänglichen Aminkonzentration minus der anfänglichen Verbindungskonzentrationen geteilt, um die Geschwindigkeitskonstanten zweiter Ordnung zu erhalten (Einheiten in 1 · (mol/l)&supmin;¹ · h&supmin;¹). Die Methylamino- und Benzylaminoderivate werden direkt aus dem beanspruchten Bromidzwischenprodukt in hoher Ausbeute hergestellt. Das Mesylatzwischenprodukt ist nicht in der Lage, das Methylamino- und Benzylaminoderivat direkt in hoher Ausbeute herzustellen.
Wie vorher erwähnt, sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zusätzlich als selektive Proteinkinase G Inhibitoren aktiv. Die Aktivität wird im Calciumcalmodulin-abhängigen Proteinkinasetest, Caseinproteinkinase II Test, cAMP-abhängigen Proteinkinasetest der katalytischen Untereinheit und im Protein-Tyrosinkinasetest bestimmt, wie dies in Heath et al., EP-0 657 458 vom 14. Juni 1995 beschrieben ist, das hiermit eingeführt ist. Die beanspruchten Verbindungen sind in diesen Tests aktiv und Isoenzym-selektiv mit einem HK&sub5;&sub0; Wert von weniger als 10 uM.
Verbindungen mit dieser gezeigten pharmakologischen Aktivität sind bei der Behandlung von Zuständen brauchbar, bei denen sich gezeigt hat, daß die Proteinkinase C eine Rolle bei der Pathologie spielt. In der Technik bekannte Zustände sind unter anderem: Diabetes mellitus und dessen Komplikationen (insbesondere mikrovaskuläre diabetische Komplikationen, Retinopathie, Nephropathie und Neuropathie), Ischämie, Entzündung, Störungen des zentralen Nervensystems, kardiovaskuläre Erkrankung, Alzheimersche Erkrankung, dermatologische Erkrankung und Krebs.
Die Verbindungen der Formel II werden vorzugsweise vor der Verabreichung formuliert. Daher ist eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung eine pharmazeutische Formulierung, die eine Verbindung der Formel II und einen oder mehrere pharmazeutisch annehmbare Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoffe enthält.
Die vorliegenden pharmazeutischen Formulierungen werden durch gut bekannte Verfahren und mit leicht verfügbaren Inhaltsstoffen hergestellt. Bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen wird der Wirkstoff gewöhnlich mit einem Träger gemischt oder mit einem Träger verdünnt oder in einem Träger eingeschlossen, der in Form einer Kapsel, eines Sachets, eines Papiers oder eines anderen Behälters vorliegen kann. Wenn der Träger als Verdünnungsmittel dient, kann dies ein festes, halbfestes oder flüssiges Material sein, das als Vehikel, Hilfsstoff oder Medium für den Wirkstoff dient. Daher können die Zusammensetzungen vorliegen in Form von Tabletten, Pillen, Pulvern, Lonzetten, Sachets, Cachets, Elixieren, Suspensionen, Emulsionen, Lösungen, Sirupen, Aerosolen (als Feststoff oder in einem flüssigen Medium), Weich- und Hartgelatinekapseln, Zäpfchen, sterilen injizierbaren Lösungen und sterilen verpackten Pulvern.
Einige Beispiele für geeignete Träger, Hilfsstoffe und Verdünnungsmittel sind unter anderem Lactose, Glucose, Saccharose, Sorbit, Mannit, Stärkearten, Akaziengummi, Calciumphosphat, Alginate, Tragacanth, Gelatine, Calciumsilicat, mikrokristalline Cellulose, Polyvinylpyrrolidon, Cellulose, Wasser, Sirup, Methylcellulose, Methyl- und Propylhydroxybenzoate, Talkum, Magnesiumstearat und Mineralöl. Die Formulierungen können zusätzlich Gleitmittel, Netzmittel, Emulgier- und Suspendiermittel, Konservierungsstoffe, Süßstoffe oder Geschmacksstoffe enthalten. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können so formuliert werden, daß sie eine schnelle, anhaltende oder verzögerte Freisetzung des Wirkstoffs nach der Verabreichung an den Patienten bereitstellen.
Eine pharmazeutisch wirksame Menge der Verbindung stellt eine Menge dar, die zur Hemmung der PKC Aktivität bei Säugern fähig ist. Eine typische Tagesdosis enthält etwa 0,01 mg/kg bis etwa 20 mg/kg Wirkstoff. Bevorzugte Dosen betragen etwa 0,01 bis etwa 10 mg/kg. Die Zusammensetzungen werden vorzugsweise in einer Einheitsdosierungsform formuliert, wobei jede Dosierung etwa 1 bis etwa 500 mg, gewöhnlicher etwa 5 bis etwa 300 mg des Wirkstoffs enthält. Es ist jedoch verständlich, daß die verabreichte therapeutische Dosis von einem Arzt in Anbetracht der relevanten Umstände bestimmt wird, einschließlich des zu behandelnden Zustands, der Wahl der verabreichten Verbindung und des gewählten Verabreichungswegs und daher sollen die oben angegebenen Dosierungsbereiche den Schutzumfang der Erfindung in keiner Weise beschränken. Der Ausdruck "Einheitsdosierungsform" bezieht sich auf physikalisch getrennte Einheiten, die als einmalige Dosierungen für den Menschen oder andere Säuger geeignet sind, wobei jede Einheit eine vorbestimmte Menge an Wirkstoff, die zur Bildung des gewünschten therapeutischen Effekts berechnet wurde, zusammen mit einem geeigneten pharmazeutischen Träger enthält.
Die folgenden Formulierungsbeispiele sind nur erläuternd und sollen den Schutzumfang der Erfindung in keiner Weise beschränken.

Formulierung 1

Es werden Hartgelatinekapseln hergestellt, die die folgenden Bestandteile enthalten:
Menge (mg/Kapsel)
Wirkstoff 5
Stärke, getrocknet 185
Magnesiumstearat 10
Gesamt 200 mg
Die obigen Bestandteile werden gemischt und in Hartgelatinekapseln in 200 mg Portionen gefüllt.

Formulierung 2

Es wird mittels der folgenden Bestandteile eine Tablette hergestellt:
Menge (mg/Tablette)
Wirkstoff 20
Mikrokristalline Cellulose 400
Kolloidales Siliciumdioxid 10
Stearinsäure 5
Gesamt 435 mg
Die Komponenten werden gemischt und unter Bildung von Tabletten gepreßt, die jeweils 435 mg wiegen.

Formulierung 3

Tabletten, die jeweils 10 mg Wirkstoff enthalten, werden folgendermaßen hergestellt.
Menge (mg/Tablette)
Wirkstoff 10 mg
Stärke 45 mg
Mikrokristalline Cellulose 35 mg
Polyvinylpyrrolidon (als 10% Lösung in Wasser) 4 mg
Natriumcarboxymethylstärke 4,5 mg
Magnesiumstearat 0,5 mg
Talkum 1 mg
Gesamt 100 mg
Der Wirkstoff, die Stärke und die Cellulose werden durch ein Nr. 45 Mesh US Sieb gegeben und gründlich gemischt. Die Polyvinylpyrrolidonlösung wird mit den entstehenden Pulvern gemischt, die dann durch ein Nr. 14 Mesh US Sieb gegeben werden. Die so hergestellten Granula werden bei 50ºC getrocknet und durch ein Nr. 18 Mesh US Sieb gegeben. Die Natriumcarboxymethylstärke, das Magnesiumstearat und das Talkum, die vorher durch ein Nr. 60 Mesh US Sieb gegeben wurden, werden dann zu den Granula gegeben, die nach dem Mischen in einer Tablettenmaschine unter Bildung von Tabletten gepreßt werden, die jeweils 100 mg wiegen.

Formulierung 4

Kapseln, die jeweils 40 mg Arzneimittel enthalten, werden folgendermaßen hergestellt:
Menge (mg/Kapsel)
Wirkstoff 40 mg
Stärke 59 mg
Mikrokristalline Cellulose 59 mg
Magnesiumstearat 2 mg
Gesamt 200 mg
Der Wirkstoff, die Cellulose, die Stärke und das Magnesiumstearat werden gemischt, durch ein Nr. 45 Mesh US Sieb gegeben und in Portionen von 200 mg in Hartgelatinekapseln gefüllt.
Die Prinzipien, bevorzugten Ausführungsformen und Durchführungsarten der vorliegenden Erfindung wurden in der vorangehenden Beschreibung beschrieben. Die Erfindung, die hierin geschützt werden soll, soll jedoch nicht durch die im einzelnen beschriebenen Formen beschränkt werden, da sie als erläuternd und nicht als beschränkend gesehen werden sollen. Variationen und Veränderungen können durch den Fachmann vorgenommen werden, ohne sich vom Schutzumfang der Erfindung zu entfernen.

Claims

1. Verbindung der Formel

worin R&sub1; für Br, I oder O-Tosyl steht.

2. Verbindung nach Anspruch 1 der Formel

3. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, worin R&sub1; für Br oder I steht.

4. Pharmazeutische Formulierung, die eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 und einen oder mehrere pharmazeutisch annehmbare Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoffe enthält.

5. Verfahren zur Herstellung eines N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimids der Formel

worin R&sub2; für -N(CF&sub3;)CH&sub3;, -NH(CF&sub3;) oder -NR&sub3;R&sub4; steht, worin R&sub3; und R&sub4; unabhängig für Wasserstoff, C&sub1;-C&sub4; Alkyl, Phenyl oder Benzyl stehen oder unter Kombination mit dem Stickstoff, an den sie gebunden sind, einen gesättigten oder ungesättigten fünf oder sechsgliedrigen Ring bilden,

dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 mit einem Amin in einem unreaktiven, polaren Lösemittel umgesetzt wird.

6. Verfahren nach Anspruch 5, worin die Verbindung folgende ist

und R&sub1; für Br oder I steht.

7. Verfahren nach Anspruch 6, worin das Amin HN(CH&sub3;)&sub2; oder H&sub2;N(CH&sub3;) ist.

8. Verfahren zur Herstellung eines N,N'-verbrückten Bisindolylmaleimids der Formel (V)

dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der Formel

worin R&sub1; für Br oder I steht,

mit HN(CH&sub3;)&sub2; in einem unreaktiven, polaren Lösemittel umgesetzt wird.

9. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der Formel

zu einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 umgewandelt wird.

10. Verfahren nach Anspruch 9, worin das Verfahren in Gegenwart von PX&sub3;, (Phenyl)&sub3;PX&sub2; oder (Phenoxy)&sub3;PX&sub2; ausgeführt wird, worin X für Brom oder Iod steht.

11. Verfahren nach Anspruch 10, worin das Verfahren in Gegenwart von (Phenoxy)&sub3;PBr&sub2; ausgeführt wird.

12. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (V)

gekennzeichnet durch

(a) Umsetzung einer Verbindung der Formel (IIIa)

mit PX&sub3;, (Phenyl)&sub3;PX&sub2; oder (Phenoxy)&sub3;PX&sub2;, worin X für Brom oder Iod steht, unter Bildung einer Verbindung der Formel (IIa)

worin R&sub1; für Br oder I steht und

(b) Umsetzung einer Verbindung der Formel (IIa) mit HN(CH&sub3;)&sub2; in einem unreaktiven, polaren Lösemittel.

13. Verfahren nach Anspruch 12, worin R&sub1; für Br steht.

14. Verfahren nach Anspruch 13, das ferner durch die Umsetzung der Verbindung der Formel (V) mit CH&sub3;SO&sub3;H gekennzeichnet ist.