CN113621085A - 一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法及蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的应用 - Google Patents
一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法及蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113621085A CN113621085A CN202110775952.0A CN202110775952A CN113621085A CN 113621085 A CN113621085 A CN 113621085A CN 202110775952 A CN202110775952 A CN 202110775952A CN 113621085 A CN113621085 A CN 113621085A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dandelion root
- polysaccharide
- root polysaccharide
- dandelion
- supernatant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 235000005187 Taraxacum officinale ssp. officinale Nutrition 0.000 title claims abstract description 111
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 108
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 108
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 108
- 241000245665 Taraxacum Species 0.000 title claims abstract description 105
- 230000004048 modification Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 238000012986 modification Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 title claims abstract description 27
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 8
- MGWYLLDHLQLFAI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;sulfurochloridic acid Chemical compound CN(C)C=O.OS(Cl)(=O)=O MGWYLLDHLQLFAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 47
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 22
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 21
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 20
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 16
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 14
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 12
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 12
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 10
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloro-5,5-dimethylimidazolidine-2,4-dione Chemical compound CC1(C)N(Cl)C(=O)N(Cl)C1=O KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N chlorosulfonic acid Substances OS(Cl)(=O)=O XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 240000001949 Taraxacum officinale Species 0.000 claims description 6
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 5
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 4
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 claims 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000002699 waste material Substances 0.000 abstract description 7
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 abstract description 4
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 abstract description 2
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 abstract description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 2
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010007247 Carbuncle Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000012844 infrared spectroscopy analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
- A61K36/288—Taraxacum (dandelion)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法及蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的应用，多糖硫酸化修饰产物中多糖含量较未修饰前含量提高60％。本发明通过多组试验选出最优提取工艺，采用水提醇沉法得到粗多糖，Sevag法脱蛋白，然后采用DEAE Sepharose Fast Flow进行分离，葡聚糖凝胶纯化，制得纯度高的蒲公英根多糖，再采用氯磺酸‑二甲基甲酰胺法修饰得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。本发明充分利用废弃的蒲公英根部资源，变废为宝，得到具有免疫调节活性的蒲公英根多糖及其硫酸化修饰产物，实现蒲公英药用资源的可持续化应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物多糖，具体涉及一种具有免疫调节活性的蒲公英根多糖及其硫酸化修饰产物的制备方法及蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的应用。
背景技术
蒲公英是菊科属多年生的草本植物，广泛分布于我国各个地域，且种类繁多，产量大。其药用价值早就载入各种医学古典中，关于蒲公英的记载最早见于《唐本草》：“味甘，平，无毒。主妇人乳痈肿。”，《本草纲目》中记载蒲公英主治妇人乳痈肿，解食毒，散滞气，化热毒，消恶肿、结核、丁肿。蒲公英根、茎、叶均具有较高的药用价值，并且蒲公英的化学成分复杂，其中多糖类占干重达到30％～50％，而多糖含量最高的部分则为蒲公英的根部，但蒲公英在采收过程中其根部多被丢弃，造成资源的极大浪费。
多糖是由单糖分子通过糖苷键结合而成的，广泛存在于植物动物和微生物中，具有提高机体免疫力，降血糖、抗菌、增强免疫力、抗肿瘤、护肝、延缓衰老等药理活性，但由于多糖的活性直接受结构影响，水溶性差、活性低等，因此，对天然多糖进行结构修饰，可显著提高其生物活性。硫酸化修饰是通过引入聚阴离子硫酸根使得多糖类分子空间构象发生改变，进而导致活性产生较大变化，硫酸化多糖不仅硫酸化多糖不仅具有抗凝血及免疫增强的作用，还具有降血脂，降血糖等作用，延长药物作用时间，增强药效降低药物毒副作用等。
目前，国内外对蒲公英根多糖研究主要集中在其化学成分分析上，对其活性研究较少。因此，利用硫酸化修饰技术改变蒲公英根多糖结构，增强其免疫活性，对蒲公英根部资源高效利用，变废为宝具有重大意义。
发明内容
为解决上述背景技术中提出的问题。本发明提供了一种具有提高免疫活性的蒲公英根多糖及其硫酸化修饰产物的制备方法，通过优选方法制备得到蒲公英根粗多糖，然后利用硫酸化修饰技术改变蒲公英根多糖结构，得到具有免疫调节活性的蒲公英根多糖硫酸化修饰产物，实现蒲公英根部资源高效利用，变废为宝，实现蒲公英药用资源的可持续化应用。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物，蒲公英根多糖硫酸化修饰产物中多糖含量较未修饰前含量提高60％。
作为优选方案，以上所述的蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将原料蒲公英根进行粉碎，后置于提取罐中，加入其10-30倍体积的水，沸水提取3-5小时，重复2-3次。将上清液通过滤网除杂，适当浓缩，采用Sevag试剂离心除蛋白，离心，取上清液，加入2-4倍体积的无水乙醇，搅拌均匀，沉淀过夜。用布氏漏斗和滤纸进行抽滤，得到沉淀物。将沉淀物重新用蒸馏水溶解，50-60℃水浴挥去乙醇，用冷冻干燥机进行冻干，得蒲公英根粗多糖；
(2)蒲公英根粗多糖的分离
称取步骤(1)制备得到的蒲公英根粗多糖，加蒸馏水溶解，8000-12000rpm转速离心，取上清液上样，用流速为10-20ml/min的蒸馏水进行洗脱。再用0.0、0.2、0.5、1.0mol/LNaCl溶液梯度洗脱。并采用苯酚硫酸法进行追踪检测多糖含量，分别收集不同的洗脱峰，减压浓缩，2000-4000Da透析袋透析，冷冻干燥，获得蒲公英根多糖；
(3)蒲公英根多糖的硫酸化修饰
取步骤(2)制备得到的蒲公英根多糖，采用氯磺酸-二甲基甲酰胺法进行修饰：准确称取蒲公英根多糖，加入吡啶，在冰浴条件下加入2mL氯磺酸溶液，室温下搅拌10-20min，待混合溶剂逐渐融化变成淡黄色澄清液体，再加入3mL甲酰胺，加热至全部溶解。冰浴至0℃，加入到硫酸衍生化试剂中搅拌溶解，于冰浴中反应1-2h至常温，用NaOH，调节pH＝7～8，透析2天，取透析液，浓缩，冻干，得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。
作为优选方案，以上所述的蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法，步骤(3)准确称取蒲公英根多糖100mg，加入1mL吡啶，在冰浴条件下加入2mL氯磺酸溶液，室温下搅拌10-20min，待混合溶剂逐渐融化变成淡黄色澄清液体，再加入3mL甲酰胺，加热至全部溶解。冰浴至0℃，加入到硫酸衍生化试剂中搅拌溶解，于冰浴中反应1-2h至常温，用NaOH，调节pH＝7～8，透析2天，取透析液，浓缩，冻干，得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。
本发明通过实验研究表明，经过硫酸化修饰得到的蒲公英根多糖产物具有显著的降低小鼠溃疡性结肠炎炎症反应的作用，可用于制备免疫调节的保健食品或药品中。
本发明所述的蒲公英根多糖硫酸化修饰产物在制备具有免疫调节的保健食品或药品中的应用，可将蒲公英根多糖硫酸化修饰产物与配料制成胶囊、颗粒、片剂及包埋剂等。
有效效果：本发明提供的具有免疫调节活性的蒲公英根多糖及其硫酸化修饰产物和现有技术相比具有优点：
本发明通过多组试验选出最优提取工艺，采用水提醇沉法得到粗多糖，Sevag法脱蛋白，然后采用DEAE Sepharose Fast Flow进行分离，葡聚糖凝胶纯化，制得纯度高的蒲公英根多糖，再采用氯磺酸-二甲基甲酰胺法修饰得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。本发明充分利用废弃的蒲公英根部资源，变废为宝，得到具有免疫调节活性的蒲公英根多糖及其硫酸化修饰产物，实现蒲公英药用资源的可持续化应用。
附图说明
图1为蒲公英根粗多糖的红外光谱图；
图2为蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的红外光谱图；
图3为蒲公英根多糖硫酸化修饰前后红外光谱对比图。
图中，将附图向左旋转90°后，纵轴为透过率(％)，横轴为波数(cm-1)。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将原料蒲公英根进行粉碎，后置于提取罐中，加入其10倍体积的水，沸水提取3小时，重复2次。将上清液通过滤网除杂，适当浓缩，采用Sevag试剂离心除蛋白，离心，取上清液，加入2倍体积的无水乙醇，搅拌均匀，沉淀过夜。用布氏漏斗和滤纸进行抽滤，得到沉淀物。将沉淀物重新用蒸馏水溶解，50℃水浴挥去乙醇，用冷冻干燥机进行冻干，得蒲公英根粗多糖；
(2)蒲公英根粗多糖的分离
称取步骤(1)制备得到的蒲公英根粗多糖，加蒸馏水溶解，8000rpm转速离心，取上清液上样，用流速为10ml/min的蒸馏水进行洗脱。再用0.0、0.2、0.5、1.0mol/LNaCl溶液梯度洗脱。并采用苯酚硫酸法进行追踪检测多糖含量，分别收集不同的洗脱峰，减压浓缩，2000Da透析袋透析，冷冻干燥，获得蒲公英根多糖；
(3)蒲公英根多糖的硫酸化修饰
取步骤(2)制备得到的蒲公英根多糖，采用氯磺酸-二甲基甲酰胺法进行修饰：准确称取蒲公英根多糖100mg，加入1mL吡啶，在冰浴条件下加入2mL氯磺酸溶液，室温下搅拌10min，待混合溶剂逐渐融化变成淡黄色澄清液体，再加入3mL甲酰胺，加热至全部溶解。冰浴至0℃，加入到硫酸衍生化试剂中搅拌溶解，于冰浴中反应1h至常温，用NaOH，调节pH＝7，透析2天，取透析液，浓缩，冻干，得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。
实施例2
(1)将原料蒲公英根进行粉碎，后置于提取罐中，加入其10-30倍体积的水，沸水提取5小时，重复3次。将上清液通过滤网除杂，适当浓缩，采用Sevag试剂离心除蛋白，离心，取上清液，加入4倍体积的无水乙醇，搅拌均匀，沉淀过夜。用布氏漏斗和滤纸进行抽滤，得到沉淀物。将沉淀物重新用蒸馏水溶解，60℃水浴挥去乙醇，用冷冻干燥机进行冻干，得蒲公英根粗多糖；
(2)蒲公英根粗多糖的分离
称取步骤(1)制备得到的蒲公英根粗多糖，加蒸馏水溶解，12000rpm转速离心，取上清液上样，用流速为20ml/min的蒸馏水进行洗脱。再用0.0、0.2、0.5、1.0mol/LNaCl溶液梯度洗脱。并采用苯酚硫酸法进行追踪检测多糖含量，分别收集不同的洗脱峰，减压浓缩，4000Da透析袋透析，冷冻干燥，获得蒲公英根多糖；
(3)蒲公英根多糖的硫酸化修饰
取步骤(2)制备得到的蒲公英根多糖，采用氯磺酸-二甲基甲酰胺法进行修饰：准确称取蒲公英根多糖100mg，加入1mL吡啶，在冰浴条件下加入2mL氯磺酸溶液，室温下搅拌20min，待混合溶剂逐渐融化变成淡黄色澄清液体，再加入3mL甲酰胺，加热至全部溶解。冰浴至0℃，加入到硫酸衍生化试剂中搅拌溶解，于冰浴中反应2h至常温，用NaOH，调节pH＝8，透析2天，取透析液，浓缩，冻干，得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。
(4)红外光谱分析
取经过干燥的蒲公英根粗多糖和蒲公英根多糖硫酸化修饰产物样品各1mg，与100mg经干燥的溴化钾粉末于玛瑙研钵研磨均匀；分别压成薄片，分别在红外光谱仪上测定4000-400cm-1的红外光谱。如图1、图2和图3所示，蒲公英根粗多糖在1240cm-1左右的吸收峰是S＝O伸缩振动，硫酸化之后明显增强，蒲公英根粗多糖在808cm-1左右的吸收峰是C－O－S的拉伸振动，硫酸化后明显增强，说明硫酸化成功。
Claims (4)
1.一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物，其特征在于，蒲公英根多糖硫酸化修饰产物中多糖含量较未修饰前含量提高60％；
蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法包括以下步骤：
(1)将原料蒲公英根进行粉碎，后置于提取罐中，加入水进行沸水提取，将上清液经除杂浓缩后采用Sevag试剂离心除蛋白，离心，取上清液，加入无水乙醇混合均匀后沉淀过夜，然后进行抽滤后得到沉淀物，将沉淀物重新用蒸馏水溶解，水浴挥去乙醇，冷冻干燥后得蒲公英根粗多糖；
(2)蒲公英根粗多糖的分离
取步骤(1)制备得到的蒲公英根粗多糖，加蒸馏水溶解，离心后取上清液上样，用蒸馏水进行洗脱，再用不同浓度NaCl溶液梯度洗脱，并采用苯酚硫酸法进行追踪检测多糖含量，分别收集不同的洗脱峰，减压浓缩，透析袋透析，冷冻干燥，获得蒲公英根多糖；
(3)蒲公英根多糖的硫酸化修饰
取步骤(2)制备得到的蒲公英根多糖，采用氯磺酸-二甲基甲酰胺法进行修饰：准确称取蒲公英根多糖，加入吡啶，在冰浴条件下加入氯磺酸溶液，室温下搅拌，待混合溶剂逐渐融化变成淡黄色澄清液体，再加入甲酰胺，加热至全部溶解，冰浴至0℃，加入到硫酸衍生化试剂中搅拌溶解，于冰浴中反应至常温，用NaOH调节pH＝7～8，经透析后取透析液，浓缩，冻干，得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。
2.权利要求1所述的蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法，其特征在于，蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法包括以下步骤：
(1)将原料蒲公英根进行粉碎，后置于提取罐中，加入其10-30倍体积的水，沸水提取3-5小时，重复2-3次，将上清液通过滤网除杂，适当浓缩，采用Sevag试剂离心除蛋白，离心，取上清液，加入2-4倍体积的无水乙醇，搅拌均匀，沉淀过夜，用布氏漏斗和滤纸进行抽滤，得到沉淀物，将沉淀物重新用蒸馏水溶解，50-60℃水浴挥去乙醇，用冷冻干燥机进行冻干，得蒲公英根粗多糖；
(2)蒲公英根粗多糖的分离
称取步骤(1)制备得到的蒲公英根粗多糖，加蒸馏水溶解，8000-12000rpm转速离心，取上清液上样，用流速为10-20ml/min的蒸馏水进行洗脱，再用0.0、0.2、0.5、1.0mol/LNaCl溶液梯度洗脱，并采用苯酚硫酸法进行追踪检测多糖含量，分别收集不同的洗脱峰，减压浓缩，2000-4000Da透析袋透析，冷冻干燥，获得蒲公英根多糖；
(3)蒲公英根多糖的硫酸化修饰
取步骤(2)制备得到的蒲公英根多糖，采用氯磺酸-二甲基甲酰胺法进行修饰：准确称取蒲公英根多糖，加入吡啶，在冰浴条件下加入氯磺酸溶液，室温下搅拌10-20min，待混合溶剂逐渐融化变成淡黄色澄清液体，再加入甲酰胺，加热至全部溶解，冰浴至0℃，加入到硫酸衍生化试剂中搅拌溶解，于冰浴中反应1-2h至常温，用NaOH，调节pH＝7～8，透析2天，取透析液，浓缩，冻干，得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。
3.根据权利要求2所述的蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法，其特征在于，步骤(3)准确称取蒲公英根多糖100mg，加入1mL吡啶，在冰浴条件下加入2mL氯磺酸溶液，室温下搅拌10-20min，待混合溶剂逐渐融化变成淡黄色澄清液体，再加入3mL甲酰胺，加热至全部溶解，冰浴至0℃，加入到硫酸衍生化试剂中搅拌溶解，于冰浴中反应1-2h至常温，用NaOH，调节pH＝7～8，透析2天，取透析液，浓缩，冻干，得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。
4.权利要求1-3任一项所述的蒲公英根多糖硫酸化修饰产物应用于调节免疫力的保健食品或药品中。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110775952.0A CN113621085A (zh) | 2021-07-08 | 2021-07-08 | 一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法及蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110775952.0A CN113621085A (zh) | 2021-07-08 | 2021-07-08 | 一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法及蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113621085A true CN113621085A (zh) | 2021-11-09 |
Family
ID=78379385
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110775952.0A Pending CN113621085A (zh) | 2021-07-08 | 2021-07-08 | 一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法及蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113621085A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114349877A (zh) * | 2022-01-12 | 2022-04-15 | 常熟理工学院 | 一种硫酸化慈姑多糖及其制备方法与用途 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101948549A (zh) * | 2010-10-14 | 2011-01-19 | 郑州后羿制药有限公司 | 一种绞股蓝多糖的硫酸化修饰方法 |
| CN102653568A (zh) * | 2012-05-28 | 2012-09-05 | 上海中医药大学 | 一种蒲公英均一多糖及其制备方法和用途 |
| CN102659958A (zh) * | 2012-05-28 | 2012-09-12 | 上海中医药大学 | 一种蒲公英多糖提取物及其制备方法和用途 |
| CN103833869A (zh) * | 2014-02-26 | 2014-06-04 | 上海中医药大学 | 一种木香硫酸化多糖及其制备方法和用途 |
| CN105061631A (zh) * | 2015-09-29 | 2015-11-18 | 张建华 | 一种蒲公英多糖的提取方法及其应用 |
| CN107915785A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-04-17 | 湖北回盛生物科技有限公司 | 一种提高贞芪多糖免疫活性的修饰方法 |
| CN110003351A (zh) * | 2019-04-08 | 2019-07-12 | 南昌大学 | 一种硫酸化凉粉草多糖及其制备方法 |
-
2021
- 2021-07-08 CN CN202110775952.0A patent/CN113621085A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101948549A (zh) * | 2010-10-14 | 2011-01-19 | 郑州后羿制药有限公司 | 一种绞股蓝多糖的硫酸化修饰方法 |
| CN102653568A (zh) * | 2012-05-28 | 2012-09-05 | 上海中医药大学 | 一种蒲公英均一多糖及其制备方法和用途 |
| CN102659958A (zh) * | 2012-05-28 | 2012-09-12 | 上海中医药大学 | 一种蒲公英多糖提取物及其制备方法和用途 |
| CN103833869A (zh) * | 2014-02-26 | 2014-06-04 | 上海中医药大学 | 一种木香硫酸化多糖及其制备方法和用途 |
| CN105061631A (zh) * | 2015-09-29 | 2015-11-18 | 张建华 | 一种蒲公英多糖的提取方法及其应用 |
| CN107915785A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-04-17 | 湖北回盛生物科技有限公司 | 一种提高贞芪多糖免疫活性的修饰方法 |
| CN110003351A (zh) * | 2019-04-08 | 2019-07-12 | 南昌大学 | 一种硫酸化凉粉草多糖及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| MIAOMIAO CHEN ET AL.: "Structure analysis of a heteropolysaccharide from Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz. and anticomplementary activity of its sulfated derivatives", 《CARBOHYDRATE POLYMERS》 * |
| 付学鹏等: "蒲公英不同器官多糖含量测定及抗氧化性研究", 《食品研究与开发》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114349877A (zh) * | 2022-01-12 | 2022-04-15 | 常熟理工学院 | 一种硫酸化慈姑多糖及其制备方法与用途 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108727509B (zh) | 一种毛竹笋壳阿拉伯半乳聚糖及其制备和用途 | |
| CN109651532B (zh) | 一种铁皮石斛葡甘聚糖 | |
| CN105859906A (zh) | 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖乙酰化修饰产物及其制备方法 | |
| CN108265092B (zh) | 一种具有优良抗氧化活性的香菇寡糖及制备方法 | |
| CN110606900B (zh) | 一种具有抗氧化作用的木枣多糖的分离纯化方法 | |
| CN113621085A (zh) | 一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法及蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的应用 | |
| CN110882285A (zh) | 桑黄中活性物质的高效制备方法 | |
| CN110922499B (zh) | 一种富硒化绣球菌多糖及其制备方法和应用 | |
| CN110218262B (zh) | 褐藻来源的富含葡萄糖醛酸的低硫酸化杂聚糖在制备治疗2型糖尿病药物中的应用 | |
| CN114316077A (zh) | 一种海参多糖的制备方法与应用 | |
| CN115894735B (zh) | 一种老鹰茶酸性多糖及其提取纯化方法和抗癌应用 | |
| CN116589604A (zh) | 一种高纯度人参多糖的制备方法 | |
| CN103275237A (zh) | 一种茄枝多糖的制备方法及其应用 | |
| CN111925458A (zh) | 一种桑黄多糖的高效制备方法 | |
| CN111248440A (zh) | 一种功能性茉莉花低聚糖口服液及其应用 | |
| CN111004335A (zh) | 一种从白芨根茎中提取得到的白芨低聚糖及其制备方法 | |
| CN102885847B (zh) | 油茶饼粕多糖的用途 | |
| CN106923350B (zh) | 一种用玉米须制备水溶性膳食纤维的方法 | |
| CN113087813B (zh) | 一种茶麸的提取工艺 | |
| CN110713551B (zh) | 一种多糖、硫酸化多糖和在美白淡斑化妆品中的应用 | |
| CN110841004B (zh) | 一种从叠鞘石斛中热回流低温提取叠鞘石斛提取物的工艺 | |
| CN108948223B (zh) | 桃金娘多糖p1及其分离方法和在制备降血脂药物中的应用 | |
| CN107936133B (zh) | 一种月见草叶多糖及其制备方法 | |
| CN112159484A (zh) | 一种抗凝血流苏子多糖及其提取分离方法和应用 | |
| CN111171112A (zh) | 一种苦瓜籽蛋白的酶解提取方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20211109 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |