CN105061631A - 一种蒲公英多糖的提取方法及其应用 - Google Patents
一种蒲公英多糖的提取方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种蒲公英多糖的提取方法及其应用，提取方法简单，提取率为8.58%，纯度为86.3%，用环己酮沉淀蛋白，去除提取液中的蛋白质，去除率高，能够明显提高多糖提取液的纯度，而且使用量少，节约成本；将蒲公英粉碎后过筛，提高粉碎度，细胞的破碎程度高，提高提取率；用热水代替乙醇进行回流提取，减少提取液中的脂肪含量，提高多糖的纯度，降低成本；利用DEAE-52纤维素层析柱和SephadexG-100凝胶层析柱对粗多糖进行分离纯化，减少纯化过程中对多糖的浪费，提高提取率；蒲公英多糖可作为抗氧化活性成分用于制备保健食品或药品，抗氧化作用明显，安全，无副作用，具有很大的市场价值和广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种蒲公英多糖的提取方法及其应用。
背景技术
蒲公英，性平、味甘、微苦。可清热解毒，消肿散结。有显著的催乳作用，治疗乳腺炎十分有效。无论煎汁口服，还是捣泥外敷，皆有效验。此外，蒲公英还有利尿、缓泻、退黄疸、利胆、助消化，增食欲，治疗胃及十二指肠溃疡，还可防治各种肿瘤。它具有丰富的维生素A、C及矿物质，对消化不良、便秘都有改善的作用。另外叶子还有改善湿疹、舒缓皮肤炎、关节不适的净血功效，根则具有消炎作用，可以治疗胆结石、风湿，花朵煎成药汁可以去除雀斑，可说是非常有用的一种香药草。蒲公英植物体中含有蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖等多种健康营养成分，有利尿、缓泻、退黄疸、利胆等功效。蒲公英同时含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、微量元素及维生素等，有丰富的营养价值，可生吃、炒食、做汤，是药食兼用的植物。蒲公英属植物富含甾醇、棕榈酸和多糖，多糖是重要的信息分子，具有抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗辐射、抗突变、降血糖、增强免疫等多方面的作用。
发明内容
为了弥补已有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种蒲公英多糖的提取方法及其应用。
一种蒲公英多糖的提取方法，其具体步骤为：
（1）将全草蒲公英洗净，晾干，45℃烘干，粉碎，过60~100目筛；
（2）取干粉100g，按料液比1:8~12，加入去离子水，95~100℃水浴，回流4~5次，每次1小时，过滤，得提取液；
（3）向提取液中缓慢加入环己酮，边加入边搅拌，至加入量为提取液体积的8~12%，1000转/分钟，磁力搅拌20~30分钟，静置140~160分钟，10000转/分钟，离心10分钟，取上清，40~45℃真空旋转蒸发至原体积的1/3，收集环己酮，重复使用；
（4）向3）得到的上清中加入无水乙醇，边加入边搅拌，至乙醇体积占总体积的85%，置于4℃冰箱中，静置过夜，8000转/分钟，离心15分钟，取沉淀；
（5）向4）得到的沉淀中加入3~4倍量的去离子水，真空旋转浓缩至无乙醇，得粗多糖溶液；
（6）将粗多糖溶液倒入7000道尔顿的透析袋中，将透析袋置于装满去离子水的烧杯中，4℃透析36~48小时，更换烧杯中的去离子水3~4次，透析袋可以重复使用；
（7）将透析后的粗多糖溶液以0.5ml/min的速率上样于DEAE-52纤维素层析柱，依次用1mol/L的NaCl溶液及去离子水洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集各部位多糖洗脱液，DPPH法测定各部位多糖的抗氧化活性，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥；
（8）将经DEAE-52纤维素层析柱初步分离纯化的各部位多糖用去离子水配制成5mg/ml的溶液，吸取2ml上样于SephadexG-100凝胶层析柱，用去离子水进行洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线，合并糖峰洗脱液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥，得纯化蒲公英多糖。
优选地，所述步骤1）将蒲公英粉碎后过80目筛。
优选地，所述步骤2）蒸馏水回流的料液比1:12，100℃水浴，回流5次。
本发明所述的一种蒲公英多糖的应用，是以所述蒲公英多糖作为抗氧化活性成分用于制备保健食品或药品。
本发明的优点是：
1、本发明提供的一种蒲公英多糖的提取方法及其应用，提取方法简单，提取率为8.58%，纯度为86.3%，用环己酮沉淀蛋白，去除提取液中的蛋白质，去除率高，能够明显提高多糖提取液的纯度，而且使用量少，节约成本；
2、将蒲公英粉碎后过筛，提高粉碎度，细胞的破碎程度高，提高提取率；用热水代替乙醇进行回流提取，减少提取液中的脂肪含量，提高多糖的纯度，减少后续纯化过程，降低成本；
3、利用DEAE-52纤维素层析柱和SephadexG-100凝胶层析柱对粗多糖进行分离纯化，不使用有机溶剂，减少纯化过程中对多糖的浪费，提高提取率，有利于分管收集，测定不同部位的糖含量及抗氧化活性；
4、蒲公英多糖可作为抗氧化活性成分用于制备保健食品或药品，抗氧化作用明显，安全，无副作用，具有很大的市场价值和广阔的应用前景。
附图说明
图1为本发明所述的DEAE-52纤维素层析柱洗脱曲线图；
图2为本发明所述的SephadexG-100凝胶层析柱各收集峰的抗氧化活性图；
图3为本发明所述的SephadexG-100凝胶层析柱洗脱曲线图；
图4为本发明所述的SephadexG-100凝胶层析柱洗脱曲线图；
图5为本发明所述的SephadexG-100凝胶层析柱洗脱曲线图；
图6为本发明所述的SephadexG-100凝胶层析柱洗脱曲线图；
图7为本发明所述的SephadexG-100凝胶层析柱洗脱曲线图；
图8为本发明所述的SephadexG-100凝胶层析柱洗脱曲线图。
具体实施方式
下面用具体实施例说明本发明。
实施例1
一种蒲公英多糖的提取方法，其具体步骤为：
（1）将全草蒲公英洗净，晾干，45℃烘干，粉碎，过80目筛；
（2）取干粉100g，按料液比1:12，加入去离子水，100℃水浴，回流5次，每次1小时，过滤，得提取液；
（3）向提取液中缓慢加入环己酮，边加入边搅拌，至加入量为提取液体积的12%，1000转/分钟，磁力搅拌20分钟，静置160分钟，10000转/分钟，离心10分钟，取上清，45℃真空旋转蒸发至原体积的1/3，收集环己酮，重复使用；
（4）向3）得到的上清中加入无水乙醇，边加入边搅拌，至乙醇体积占总体积的85%，置于4℃冰箱中，静置过夜，8000转/分钟，离心15分钟，取沉淀；
（5）向4）得到的沉淀中加入3倍量的去离子水，真空旋转浓缩至无乙醇，得粗多糖溶液；
（6）将粗多糖溶液倒入7000道尔顿的透析袋中，将透析袋置于装满去离子水的烧杯中，4℃透析48小时，更换烧杯中的去离子水4次，透析袋可以重复使用；
（7）将透析后的粗多糖溶液以0.5ml/min的速率上样于DEAE-52纤维素层析柱，依次用1mol/L的NaCl溶液及去离子水洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线（见图1），根据洗脱曲线收集各部位多糖洗脱液，DPPH法测定各部位多糖的抗氧化活性（见图2），旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥；
（8）将经DEAE-52纤维素层析柱初步分离纯化的各部位多糖用去离子水配制成5mg/ml的溶液，吸取2ml上样于SephadexG-100凝胶层析柱，用去离子水进行洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量（见图3~8），绘制洗脱曲线，合并糖峰洗脱液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥，得纯化蒲公英多糖，提取率为全草质量的8.58%，纯度为86.3%。
本发明所述的一种蒲公英多糖的应用，是以所述蒲公英多糖作为抗氧化活性成分用于制备保健食品或药品。
实施例2
一种蒲公英多糖的提取方法，其具体步骤为：
（1）将全草蒲公英洗净，晾干，45℃烘干，粉碎，过60目筛；
（2）取干粉100g，按料液比1:8，加入去离子水，100℃水浴，回流5次，每次1小时，过滤，得提取液；
（3）向提取液中缓慢加入环己酮，边加入边搅拌，至加入量为提取液体积的10%，1000转/分钟，磁力搅拌30分钟，静置140分钟，10000转/分钟，离心10分钟，取上清，43℃真空旋转蒸发至原体积的1/3，收集环己酮，重复使用；
（4）向3）得到的上清中加入无水乙醇，边加入边搅拌，至乙醇体积占总体积的85%，置于4℃冰箱中，静置过夜，8000转/分钟，离心15分钟，取沉淀；
（5）向4）得到的沉淀中加入3倍量的去离子水，真空旋转浓缩至无乙醇，得粗多糖溶液；
（6）将粗多糖溶液倒入7000道尔顿的透析袋中，将透析袋置于装满去离子水的烧杯中，4℃透析40小时，更换烧杯中的去离子水4次，透析袋可以重复使用；
（7）将透析后的粗多糖溶液以0.5ml/min的速率上样于DEAE-52纤维素层析柱，依次用1mol/L的NaCl溶液及去离子水洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集各部位多糖洗脱液，DPPH法测定各部位多糖的抗氧化活性，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥；
（8）将经DEAE-52纤维素层析柱初步分离纯化的各部位多糖用去离子水配制成5mg/ml的溶液，吸取2ml上样于SephadexG-100凝胶层析柱，用去离子水进行洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线，合并糖峰洗脱液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥，得纯化蒲公英多糖，提取率为全草质量的7.35%，纯度为84.2%。
本发明所述的一种蒲公英多糖的应用，是以所述蒲公英多糖作为抗氧化活性成分用于制备保健食品或药品。
实施例3
一种蒲公英多糖的提取方法，其具体步骤为：
（1）将全草蒲公英洗净，晾干，45℃烘干，粉碎，过100目筛；
（2）取干粉100g，按料液比1:10，加入去离子水，95℃水浴，回流4次，每次1小时，过滤，得提取液；
（3）向提取液中缓慢加入环己酮，边加入边搅拌，至加入量为提取液体积的8%，1000转/分钟，磁力搅拌20分钟，静置140分钟，10000转/分钟，离心10分钟，取上清，40℃真空旋转蒸发至原体积的1/3，收集环己酮，重复使用；
（4）向3）得到的上清中加入无水乙醇，边加入边搅拌，至乙醇体积占总体积的85%，置于4℃冰箱中，静置过夜，8000转/分钟，离心15分钟，取沉淀；
（5）向4）得到的沉淀中加入3~4倍量的去离子水，真空旋转浓缩至无乙醇，得粗多糖溶液；
（6）将粗多糖溶液倒入7000道尔顿的透析袋中，将透析袋置于装满去离子水的烧杯中，4℃透析48小时，更换烧杯中的去离子水3次，透析袋可以重复使用；
（7）将透析后的粗多糖溶液以0.5ml/min的速率上样于DEAE-52纤维素层析柱，依次用1mol/L的NaCl溶液及去离子水洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集各部位多糖洗脱液，DPPH法测定各部位多糖的抗氧化活性，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥；
（8）将经DEAE-52纤维素层析柱初步分离纯化的各部位多糖用去离子水配制成5mg/ml的溶液，吸取2ml上样于SephadexG-100凝胶层析柱，用去离子水进行洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线，合并糖峰洗脱液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥，得纯化蒲公英多糖，提取率为全草质量的8.85%，纯度为81.5%。
本发明所述的一种蒲公英多糖的应用，是以所述蒲公英多糖作为抗氧化活性成分用于制备保健食品或药品。
Claims (4)
1.一种蒲公英多糖的提取方法，其特征在于，其具体步骤为：
（1）将全草蒲公英洗净，晾干，45℃烘干，粉碎，过60~100目筛；
（2）取蒲公英干粉100g，按料液比1:8~12，加入去离子水，95~100℃水浴，回流4~5次，每次1小时，过滤，得提取液；
（3）向提取液中缓慢加入环己酮，边加入边搅拌，至加入量为提取液体积的8~12%，1000转/分钟，磁力搅拌20~30分钟，静置140~160分钟，10000转/分钟，离心10分钟，取上清，40~45℃真空旋转蒸发至原体积的1/3，收集环己酮，重复使用；
（4）向3）得到的上清中加入无水乙醇，边加入边搅拌，至乙醇体积占总体积的85%，置于4℃冰箱中，静置过夜，8000转/分钟，离心15分钟，取沉淀；
（5）向4）得到的沉淀中加入3~4倍量的去离子水，真空旋转浓缩至无乙醇，得粗多糖溶液；
（6）将粗多糖溶液倒入7000道尔顿的透析袋中，将透析袋置于装满去离子水的烧杯中，4℃透析36~48小时，更换烧杯中的去离子水3~4次，透析袋可以重复使用；
（7）将透析后的粗多糖溶液以0.5ml/min的速率上样于DEAE-52纤维素层析柱，依次用1mol/L的NaCl溶液及去离子水洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集各部位多糖洗脱液，DPPH法测定各部位多糖的抗氧化活性，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥；
（8）将经DEAE-52纤维素层析柱初步分离纯化的各部位多糖用去离子水配制成5mg/ml的溶液，吸取2ml上样于SephadexG-100凝胶层析柱，用去离子水进行洗脱，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量，绘制洗脱曲线，合并糖峰洗脱液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥，得纯化蒲公英多糖。
2.如权利要求1所述的一种蒲公英多糖的提取方法，其特征在于，优选地，所述步骤1）将蒲公英粉碎后过80目筛。
3.如权利要求1所述的一种蒲公英多糖的提取方法，其特征在于，优选地，所述步骤2）蒸馏水回流的料液比1:12，100℃水浴，回流5次。
4.如权利要求1所述的一种蒲公英多糖的应用，其特征在于，以所述蒲公英多糖作为抗氧化活性成分用于制备保健食品或药品。
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