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CN113209023A - 小龙虾头胸部来源磷脂为主要成分的脂质体及其制备方法 - Google Patents

小龙虾头胸部来源磷脂为主要成分的脂质体及其制备方法 Download PDF

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王睿
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张维农
赵秀举
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Abstract

本发明涉及小龙虾来源磷脂在制备脂质体中的应用;还涉及一种制备脂质体的方法,包括以下步骤:将小龙虾的头胸部破碎;加入第一溶剂,使用闪式提取器进行分散,然后去除所述第一溶剂,得到磷脂粗提物;使用含有第二溶剂的萃取剂从所述磷脂粗提物中萃取得到磷脂溶液;向所述磷脂溶液中加入胆固醇,然后去除所述第二溶剂;加入第三溶剂重悬,并经超声处理,得到所述脂质体。本发明通过利用小龙虾的头胸部提取磷脂来制备脂质体。所得到的脂质体含有丰富的多不饱和脂肪酸,因此天然具有抗氧化性和抗炎性。本发明的方法制备的脂质体具有良好的生物相容性,可用于静脉注射。通过本发明回收利用了小龙虾的头胸部,获得了高附加值产物。

Description

小龙虾头胸部来源磷脂为主要成分的脂质体及其制备方法
技术领域
本发明涉及靶向药物原料的制备,更特别地,涉及一种小龙虾头胸部来源磷脂为主要成分的脂质体及其制备方法。
背景技术
脂质体是由磷脂分子构成的单室或多室的囊泡,具有良好的渗透性和适应性,可用作靶向药物载体,将内容药物递送至病灶等靶向位置。构成脂质体的主要成分是磷脂和其他类脂化合物,脂质体的性质和粒径依其制备方法、所用材料以及组成的不同而差异很大。
小龙虾头胸部含有一定量的磷脂,尤其是以结合二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的磷脂酰胆碱(PC)为主,以小龙虾头胸部为原料制备脂质体可以使其加工副产物得到高值化的利用。但是,目前本领域中尚未查到有使用小龙虾加工副产物进行脂质体制备。
因此,需要开发一种从小龙虾头胸部提取磷脂并制备脂质体的方法。
发明内容
为解决以上问题,本发明提供了小龙虾头胸部在制备脂质体中的应用。
本发明还提供一种制备脂质体的方法,包括使用小龙虾的头胸部为原料制备脂质体主要成分的步骤。
在一个具体实施方案中,所述方法包括以下步骤:
S1:将小龙虾的头胸部破碎;
S2:加入第一溶剂,使用闪式提取器进行分散,然后去除所述第一溶剂,得到磷脂粗提物;
S3:使用含有第二溶剂的萃取剂从所述磷脂粗提物中萃取得到磷脂溶液;
S4:向所述磷脂溶液中加入胆固醇,然后去除所述第二溶剂;
S5:加入第三溶剂重悬,并经超声处理,得到所述脂质体。
在一个具体实施方案中,S2中,所述第一溶剂为70-100%的乙醇。
在一个优选实施方案中,S2中,在50-65℃下减压旋蒸去除所述第一溶剂。
在一个优选实施方案中,S3中,所述萃取剂为体积比为2:1的氯仿甲醇,所述第二溶剂为氯仿。
在一个优选实施方案中,S4中,磷脂与胆固醇的质量比为2:1。
在一个优选实施方案中,S5中,所述第三溶剂为pH 7.0的磷酸盐缓冲液。
本发明还提供一种小龙虾头胸部来源磷脂为主要成分的脂质体,通过上述方法制备得到。
本发明通过利用小龙虾的头胸部提取磷脂来制备脂质体。所得到的脂质体含有丰富的多不饱和脂肪酸EPA和DHA,因此天然具有抗氧化性和抗炎性。另一方面,本发明的方法制备的脂质体具有良好的生物相容性,可用于静脉注射。此外,通过本发明回收利用了小龙虾的头胸部,获得了高附加值产物。
附图说明
图1为本发明的方法制备的脂质体的粒径分布曲线图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
1、使用小龙虾提取脂质体
提取方法如下:取适量小龙虾头胸部组织,放入搅拌机中搅碎,加入浓度为70-100%的乙醇,用玻璃棒搅拌均匀,用闪式提取器快速分散2分钟,使料液之间充分接触,静置,检验抽滤得到萃取液,50-65℃减压旋蒸除去溶剂,得到小龙虾头胸部磷脂粗提物。采用氯仿-甲醇(2:1)萃取小龙虾头胸部磷脂粗提物中的脂质,得到纯度为45%的小龙虾头胸部磷脂,其中EPA含量(%)14.92±0.03,DHA含量(%)5.29±0.06,磷脂酰胆碱含量为42.7%。
向上述得到小龙虾头磷脂的氯仿溶液中加入胆固醇,收集在烧瓶中。在40℃减压下旋转蒸发成薄膜,用缓冲液重悬,以1000rpm的速度搅拌30min,然后加入5ml缓冲液,以700rpm搅拌20min,再加入10ml缓冲液,最终小龙虾磷脂的浓度为2mg/ml。多层囊泡超声作用30min,制备多层膜小泡(SUV)。脂质体悬浮液以8000×g离心10min,去除碎屑。取上清液,15000×g离心5min,用0.22μm的微孔滤器进行无菌过滤。
2、优化提取方法
为了得到高质量的小龙虾脂质体,我们对提取方法进行优化,重点优化了磷脂与胆固醇的量比,以及重悬脂质体的缓冲液。
经探索后,我们发现当磷脂与胆固醇的质量比为1.5-3:1,并且缓冲液为pH为6.3-7.8的磷酸盐缓冲液的情况下,能获得品质较好的脂质体。
在一个最优实施方案中,我们使用2:1的磷脂与胆固醇的质量比和pH为7.0的磷酸盐缓冲液进行脂质体提取,获得品质较好的脂质体。用动态光散射粒度分析仪测定脂质体的粒径分布,结果如图1所示,脂质体的平均为Z-Ave=143.7±3.8nm,聚合物分散指数PDI=0.256±0.007。体系稳定,平均粒径小于200nm,分散度较好。
经过进一步的实验证明,本发明的脂质体具有很好的生物相容性,可用于静脉注射。由于富含EPA/DHA,因此具有良好的抗氧化性和抗炎性的效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.小龙虾来源磷脂在制备脂质体中的应用。
2.一种制备脂质体的方法,其特征在于,包括使用小龙虾的头胸部为原料提取脂质体的步骤。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:将小龙虾的头胸部破碎;
S2:加入第一溶剂,使用闪式提取器进行分散,然后去除所述第一溶剂,得到磷脂粗提物;
S3:使用含有第二溶剂的萃取剂从所述磷脂粗提物中萃取得到磷脂溶液;
S4:向所述磷脂溶液中加入胆固醇,然后去除所述第二溶剂;
S5:加入第三溶剂重悬,并经超声处理,得到所述脂质体。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,S2中,所述第一溶剂为70-100%的乙醇。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,S2中,在50-65℃下减压旋蒸去除所述第一溶剂。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,S3中,所述萃取剂为体积比为2:1的氯仿甲醇,所述第二溶剂为氯仿。
7.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,S4中,磷脂与胆固醇的质量比为2:1。
8.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,S5中,所述第三溶剂为pH 7.0的磷酸盐缓冲液。
9.一种小龙虾头胸部磷脂来源的脂质体,其特征在于,通过权利要求2-8中任一项所述的方法制备得到。
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