CN111165351A - 一种猫乳快速繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种猫乳快速繁殖的方法，主要通过外植体的选择及消毒、继代增殖培养、生根培养以及炼苗移栽的步骤，特别是在灭菌和继代过程中，采用的合适的灭菌时间，改变激素浓度比例达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高的优良效果。
Description
技术领域
本发明涉及猫乳类植物的繁殖方法，特别是一种猫乳的快速繁殖方法。
背景技术
猫乳属鼠李科猫乳属植物，又名鼠矢枣、长叶绿柴、山黄、七里头，在我国广泛分布，主要生长于山坡，山谷灌丛中。为落叶灌木或小乔木，为药用植物，具有补脾益肾，疗疮之功效。在山东威海地区，猫乳叶片可用于制茶，春季采摘幼嫩叶片后进行炒制而成的猫乳茶汤色金黄，入口绵香，久泡不变色，同时该茶还具有补脾强肾的功效。目前猫乳茶已经作为一种威海特有的天然野生茶开始引起饮茶爱好者的注意。
猫乳植株为多年生灌木，生长缓慢，短期内要形成大规模的生产困难较大，同时由于是近期挖掘的野生资源，目前市场上根本无种苗供应。而且种子繁殖可能会引起优良性状变异。
发明内容
本发明的目的在于提供一种通过组织培养对猫乳植物进行快速繁殖，为大规模种植提供坚实基础的猫乳快速繁殖的方法。
本发明的技术解决方案是：
一种猫乳快速繁殖的方法，其特征在于：包括：
（1）外植体的选择及消毒：于4-5月选晴朗天气直接在山间取猫乳植株上幼嫩茎段做为外植体，先用自来水冲洗表面浸泡3h，用洗衣粉水浸泡80min，再用自来水冲洗到基本无泡沫，冲洗干净后用剪刀剪去叶片后，放进超净台上的三角瓶中，首先用70 %的酒精溶液浸泡30 sec，无菌水冲洗4-6次，再用0.1%的HgCl2浸泡10-12 min，最后用无菌水冲洗6-8次每次3-5 min；
（2）接种培养：取将步骤（1）所述的外植体，在超净台内切成3-4cm的带节小段，下部斜切，茎段插入到接种培养基中，每瓶只接一段，培养温度为25±1℃，16 h/d的光周期，光照强度 600 Lx左右，培养30天茎上腋芽开始长出幼嫩小芽长，所述接种培养基为MS＋6-BA2.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/L+蔗糖30g/L，pH5.5-6.0；
（3）继代培养：将不污染的带有新营养芽的外植体转入第一继代培养基中使芽增殖，所述第一继代培养基是MS+6-BA 4.0mg/L＋NAA 0.2mg/L +蔗糖30g/L，继代5-7次左右，转入第二继代培养基或不添加任何激素的空白培养基中继代一次。然后重新继代，按照第一代培养基MS+6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L +蔗糖30 g/L。每5-7次重新循环；每一块外植体经过5-7次继代后均可一分为二但不超过3次；
（4）生根培养：将继代培养得到的小芽直接转入生根培养基中，培养温度为23±1℃，12h/d的光周期，光照强度 600 Lx，所述生根培养基为1/2 MS+ NAA 0.3 mg\L+蔗糖20g/LpH6.2，20天生根，当根生长到3 cm出瓶，根生长过长或生根时间过长都会影响移栽成活；
（5）炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4 d，然后解开封口膜，炼苗6d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26℃，前7d湿度控制在70%，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50%。
步骤（4）中所述小芽直径小于0.5mm；所述较大的芽直径0.5mm以上。
步骤（5）所述的基质为蛭石与黑土1:1混合。
本发明的有益效果是：
（1）本发明以带节茎段作为外植体，发明人经过大量长期实践操作，发现只有茎段作为外植体才能保持猫乳的特性；在除春季以外的其它月份，由于猫乳植株生长进入成熟，内生菌多，极易污染，如何防止外植体污染是以后繁殖的关键步骤，因此，发明人利用4月刚出的嫩芽，在瓶中培养一段时间再进行消毒，大大降低了外植体污染的概率。
（2）猫乳腋芽发育的相关研究未见报道，发明人采用适时调整培养基中的激素浓度促进腋芽发育，并根据当前生长程度适当调整激素浓度或改用同效激素。
本发明培养过程速度快，再生频率较高，变异率较低，周期相对较短，能较好地保持茶树的遗传稳定性。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1是本发明诱导产生的丛生芽照片。
具体实施方式
下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
实施例1：
猫乳快速繁殖的方法，包括：
（1）外植体的选择及消毒：于4-5月选晴朗天气直接在山间取猫乳植株上幼嫩茎段做为外植体，先用自来水冲洗表面浸泡3h，用洗衣粉水浸泡80min，再用自来水冲洗到基本无泡沫，冲洗干净后用剪刀剪去叶片后，放进超净台上的三角瓶中，首先用70 %的酒精溶液浸泡30 sec，无菌水冲洗4-6次，再用0.1%的HgCl2浸泡10-12 min，最后用无菌水冲洗6-8次每次3-5 min。
（2）接种培养：取将步骤（1）所述的外植体，在超净台内切成3-4cm的带节小段，下部斜切，茎段插入到接种培养基中，每瓶只接一段，培养温度为25±1℃，16 h/d的光周期，光照强度 600 Lx左右，培养30天茎上腋芽开始长出幼嫩小芽长，所述接种培养基为MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/L+蔗糖30g/L（pH5.5-6.0）；
（3）继代培养：将不污染的带有新营养芽的外植体转入第一继代培养基中使芽增殖，所述第一继代培养基是MS+6-BA 4.0mg/L＋NAA 0.2mg/L +蔗糖30g/L，继代5-7次左右，转入第二继代培养基或不添加任何激素的空白培养基中继代一次。然后重新继代，按照第一代培养基MS+6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L +蔗糖30 g/L。每5-7次重新循环。每一块外植体经过5-7次继代后均可一分为二但不超过3次。
（4）生根培养：将继代培养得到的小芽直接转入生根培养基中，培养温度为23±1℃，12 h/d的光周期，光照强度 600 Lx左右，所述生根培养基为1/2 MS+ NAA 0.3 mg\L+蔗糖20g/L （pH6.2），20天左右生根，当根生长到3 cm左右出瓶，根生长过长或生根时间过长都会影响移栽成活；
（5）炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4 d，然后解开封口膜，炼苗6d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26℃，前7d湿度控制在70%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50%。
实施例2：
茶树快速繁殖的方法，包括：
差异表现在0.1%的HgCl2处理时间的差异，浸泡8 min，其它同实施例1。
实施例2：
茶树快速繁殖的方法，包括：
差异表现在0.1%的HgCl2处理时间的差异，浸泡15 min，其它同实施例1。
实施例1和实施例2相比，茎段培养一段时间后，茎段内生菌造成的污染率大大减少；实施例1和实施例3相比，茎段的存活率大大增加。
表1 不同0.1%HgCl2灭菌时间对茎段培养的影响
| 0.1%HgCl<sub>2</sub>灭菌时间（min） | 外植体茎段总数（瓶） | 内生菌污染数（瓶） | 存活率（%） |
| 6-8 | 50 | 42 | 0.5% |
| 10-12 | 50 | 6 | 85% |
| 15 | 50 | 1 | 10% |
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。
Claims (3)
1.一种猫乳快速繁殖的方法，其特征在于：包括：
（1）外植体的选择及消毒：于4-5月选晴朗天气直接在山间取猫乳植株上幼嫩茎段做为外植体，先用自来水冲洗表面浸泡3h，用洗衣粉水浸泡80min，再用自来水冲洗到基本无泡沫，冲洗干净后用剪刀剪去叶片后，放进超净台上的三角瓶中，首先用70 %的酒精溶液浸泡30 sec，无菌水冲洗4-6次，再用0.1%的HgCl2浸泡10-12 min，最后用无菌水冲洗6-8次每次3-5 min；
（2）接种培养：取将步骤（1）所述的外植体，在超净台内切成3-4cm的带节小段，下部斜切，茎段插入到接种培养基中，每瓶只接一段，培养温度为25±1℃，16 h/d的光周期，光照强度 600 Lx左右，培养30天茎上腋芽开始长出幼嫩小芽长，所述接种培养基为MS＋6-BA2.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/L+蔗糖30g/L，pH5.5-6.0；
（3）继代培养：将不污染的带有新营养芽的外植体转入第一继代培养基中使芽增殖，所述第一继代培养基是MS+6-BA 4.0mg/L＋NAA 0.2mg/L +蔗糖30g/L，继代5-7次左右，转入第二继代培养基或不添加任何激素的空白培养基中继代一次；然后重新继代，按照第一代培养基MS+6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L +蔗糖30 g/L；每5-7次重新循环；每一块外植体经过5-7次继代后均可一分为二但不超过3次；
（4）生根培养：将继代培养得到的小芽直接转入生根培养基中，培养温度为23±1℃，12h/d的光周期，光照强度 600 Lx，所述生根培养基为1/2 MS+ NAA 0.3 mg\L+蔗糖20g/LpH6.2，20天生根，当根生长到3 cm出瓶，根生长过长或生根时间过长都会影响移栽成活；
（5）炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4 d，然后解开封口膜，炼苗6d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26℃，前7d湿度控制在70%，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50%。
2.根据权利要求1所述的猫乳快速繁殖的方法，其特征在于：步骤（4）中所述小芽直径小于0.5mm；所述较大的芽直径0.5mm以上。
3.根据权利要求1或2所述的猫乳快速繁殖的方法，其特征在于：步骤（5）所述的基质为蛭石与黑土1:1混合。
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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