CN103430845A - 一种草莓组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种草莓组织培养方法，包括消毒灭菌、初代培养、扩大繁殖培养、生根培养和驯化培养，以草莓匍匐茎尖为外植体，经过无菌接种于初代培养基上，得到丛生苗，转入扩大繁殖培养基中，再对扩大繁殖培养后的单株苗进行生根培养，得到生根苗，生根苗经过炼苗驯化得到再生植株。本发明的草莓组织培养方法通过采用组织培养方法，可以在短时间内获得大量的无菌苗，使草莓的繁殖更为容易，大大缩短了草莓的繁殖周期，加快了草莓的繁殖速度，从而可以快速扩大种植面积，另外本发明的方法打破了气候和土壤对草莓繁殖的限制，通过采用组织培养方法，有效的解决了播种繁殖慢和扦插成活率低的问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物组织培养方法，尤其涉及一种草莓组织培养方法。
背景技术
草莓为蔷薇科草莓属多年生常绿草本，具匍匐茎，株高一般不超过30厘米，其枝蔓翠绿，果实殷红，白花簇簇，既可观赏，果实又可食用，还可加工成草莓酱、草莓酒等。
草莓原产智利，现在世界各地广泛栽培，品种达2000多个。草莓爱光，喜潮湿，怕水渍，不耐旱，较耐寒，喜肥沃透气良好的砂壤土。春季气温上升到5度以上时，植株开始萌发，最适生长温度为20-26度。江苏地区，2月下旬萌发，4月上中旬开花，5月中下旬果实成熟。入秋，气温低于17度，且在10-12小时的短日照条件下花芽分化，冬季有短期休眠。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种草莓组织培养方法，该方法能够缩短草莓的繁殖周期，提高其发芽率和成活率。
发明内容：为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
一种草莓组织培养方法，包括如下步骤：
步骤1，消毒灭菌：
选取当年新生的草莓茎尖进行消毒灭菌处理；
步骤2，初代培养：取消毒后的草莓茎尖0.3～0.4mm接种到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+6.5g／L琼脂粉培养基上，培养基的PH值为5.5，将茎尖在温度25±2℃、光照强度1500～2000lux，每日光照12-14小时下，培养40-45天；
步骤3，扩大繁殖培养：将初代培养后的丛生苗每5--7株切成一块，接种到MS培养基+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L培养基上，培养基的PH值为5.8，在温度23～27℃，光照强度2000lux，每日光照12-14小时，培养30天后小苗分割形成单株苗，在转苗过程中，去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中随时清除愈伤组织，有利于新苗增殖和生长；
步骤4，生根培养：将扩大繁殖培养后的芽苗转移到生根培养基上培养，生根培养基为1/2MS＋IBA0.5mg/L＋NAA0.1mg/L+0.3%活性炭＋蔗糖20g/L，在温度为23～27℃，光照强度2000lux，每日光照12小时，培养20-25天后，将形成白色短根的芽苗进行驯化培养，从接种到生根苗长成，这期间的培养温度一般应稳定在25±2℃，每日光照12小时左右，光照强度为2000Lx，培养室温度为18～26℃；
步骤5，驯化培养：将生根培养后的芽苗移入珍珠岩、石英砂和蛭石按体积比1:1:2混合而成的驯化基质中进行培养，培养温度为15～20℃，湿度为80%，遮光率为50%，培养5～7天，一周后，可逐渐增强日光照射，采用喷雾状浇水，水量不宜过大，落干后再喷。
其中，步骤1中，所述消毒灭菌处理是指先将草莓茎尖浸入质量百分含量为75%的酒精，湿润1～2min后，再将草莓茎尖浸入质量百分含量为10%的次氯酸钠水溶液，浸泡10～15min。
其中，步骤2中，接种前，培养基采用1～1.1kg/cm2大气压热压消毒灭菌15～20分钟。
其中，步骤5中，驯化前，将装有生根芽苗的培养瓶从培养室中移置自然条件下，打开瓶盖透气，24小时后，从瓶中取出幼苗，清除干净根部及根颈处的培养基，再栽入苗圃或穴盘中进行驯化培养。
其中，步骤5中，驯化基质为经灭菌处理的腐熟锯木屑和腐叶土按任意比例的混合物或园土和煤渣按体积比2：1混合而成的混合物，驯化基质用清水冲洗干净，或用多菌灵或甲基托布津掺拌灭菌，用煤渣作基质时，再用0.2%冰乙酸中和使碱性降低。
有益效果：本发明的草莓组织培养方法通过采用组织培养方法，可以在短时间内获得大量的无菌苗，使草莓的繁殖更为容易，大大缩短了草莓的繁殖周期，加快了草莓的繁殖速度，从而可以快速扩大种植面积，另外本发明的方法打破了气候和土壤对草莓繁殖的限制，通过采用组织培养方法，有效的解决了播种繁殖慢和扦插成活率低的问题。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
一种草莓组织培养方法，包括如下步骤：
步骤1，消毒灭菌：
选取当年刚萌发出的匍匐茎尖，自来水冲洗后，在超净工作台上以质量百分含量为75%的酒精，湿润1～2min后，再转入质量百分含量为10%的次氯酸钠水溶液，浸泡10～15min后，再用预先准备好的无菌水冲洗4遍，沥干水后，将消毒后的茎尖接种到初代培养基上；
步骤2，初代培养：接种前，将培养基采用1～1.1kg/cm2大气压热压消毒灭菌15～20分钟，培养基消毒后，取消毒后的草莓茎尖0.3～0.4mm接种到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+6.5g／L琼脂粉培养基上，培养基的PH值为5.5，将茎尖在温度25±2℃、光照强度1500～2000lux，每日光照12-14小时下，培养40-45天；
步骤3，扩大繁殖培养：将初代培养后的丛生苗每5--7株切成一块，接种到MS培养基+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L培养基上，培养基的PH值为5.8，在温度23～27℃，光照强度2000lux，每日光照12-14小时，培养30天后小苗分割形成单株苗，在转苗过程中，去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中随时清除愈伤组织，有利于新苗增殖和生长；
步骤4，生根培养：将扩大繁殖培养后的芽苗转移到生根培养基上培养，生根培养基为1/2MS＋IBA0.5mg/L＋NAA0.1mg/L+0.3%活性炭＋蔗糖20g/L，在温度为23～27℃，光照强度2000lux，每日光照12小时，培养20-25天后，将形成白色短根的芽苗进行驯化培养，从接种到生根苗长成，这期间的培养温度一般应稳定在25±2℃，每日光照12小时左右，光照强度为2000Lx，培养室温度为18～26℃；
步骤5，驯化培养：驯化前，将装有生根芽苗的培养瓶从培养室中移置自然条件下，打开瓶盖透气，24小时后，从瓶中取出幼苗，清除干净根部及根颈处的培养基，再栽入苗圃或穴盘中进行驯化培养，驯化基质为珍珠岩、石英砂和蛭石按体积比1:1:2混合而成，培养温度为15～20℃，湿度为80%，遮光率为50%，培养5～7天，一周后，可逐渐增强日光照射，采用喷雾状浇水，水量不宜过大，落干后再喷。驯化基质用清水冲洗干净，或用多菌灵或甲基托布津掺拌灭菌。
实施例2
一种草莓组织培养方法，包括如下步骤：
步骤1，消毒灭菌：
选取当年刚萌发出的匍匐茎尖，自来水冲洗后，在超净工作台上以质量百分含量为75%的酒精，湿润1～2min后，再转入质量百分含量为10%的次氯酸钠水溶液，浸泡10～15min后，再用预先准备好的无菌水冲洗4遍，沥干水后，将消毒后的茎尖接种到初代培养基上；
步骤2，初代培养：接种前，将培养基采用1～1.1kg/cm2大气压热压消毒灭菌15～20分钟，培养基消毒后，取消毒后的草莓茎尖0.3～0.4mm接种到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+6.5g／L琼脂粉培养基上，培养基的PH值为5.5，将茎尖在温度25±2℃、光照强度1500～2000lux，每日光照12-14小时下，培养40-45天；
步骤3，扩大繁殖培养：将初代培养后的丛生苗每5--7株切成一块，接种到MS培养基+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L培养基上，培养基的PH值为5.8，在温度23～27℃，光照强度2000lux，每日光照12-14小时，培养30天后小苗分割形成单株苗，在转苗过程中，去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中随时清除愈伤组织，有利于新苗增殖和生长；
步骤4，生根培养：将扩大繁殖培养后的芽苗转移到生根培养基上培养，生根培养基为1/2MS＋IBA0.5mg/L＋NAA0.1mg/L+0.3%活性炭＋蔗糖20g/L，在温度为23～27℃，光照强度2000lux，每日光照12小时，培养20-25天后，将形成白色短根的芽苗进行驯化培养，从接种到生根苗长成，这期间的培养温度一般应稳定在25±2℃，每日光照12小时左右，光照强度为2000Lx，培养室温度为18～26℃；
步骤5，驯化培养：驯化前，将装有生根芽苗的培养瓶从培养室中移置自然条件下，打开瓶盖透气，24小时后，从瓶中取出幼苗，清除干净根部及根颈处的培养基，再栽入苗圃或穴盘中进行驯化培养，驯化基质为经灭菌处理的腐熟锯木屑和腐叶土按任意比例的混合物，培养温度为15～20℃，湿度为80%，遮光率为50%，培养5～7天，一周后，可逐渐增强日光照射，采用喷雾状浇水，水量不宜过大，落干后再喷。驯化基质用清水冲洗干净，或用多菌灵或甲基托布津掺拌灭菌。
实施例3
一种草莓组织培养方法，包括如下步骤：
步骤1，消毒灭菌：
选取当年刚萌发出的匍匐茎尖，自来水冲洗后，在超净工作台上以质量百分含量为75%的酒精，湿润1～2min后，再转入质量百分含量为10%的次氯酸钠水溶液，浸泡10～15min后，再用预先准备好的无菌水冲洗4遍，沥干水后，将消毒后的茎尖接种到初代培养基上；
步骤2，初代培养：接种前，将培养基采用1～1.1kg/cm2大气压热压消毒灭菌15～20分钟，培养基消毒后，取消毒后的草莓茎尖0.3～0.4mm接种到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+6.5g／L琼脂粉培养基上，培养基的PH值为5.5，将茎尖在温度25±2℃、光照强度1500～2000lux，每日光照12-14小时下，培养40-45天；
步骤3，扩大繁殖培养：将初代培养后的丛生苗每5--7株切成一块，接种到MS培养基+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L培养基上，培养基的PH值为5.8，在温度23～27℃，光照强度2000lux，每日光照12-14小时，培养30天后小苗分割形成单株苗，在转苗过程中，去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中随时清除愈伤组织，有利于新苗增殖和生长；
步骤4，生根培养：将扩大繁殖培养后的芽苗转移到生根培养基上培养，生根培养基为1/2MS＋IBA0.5mg/L＋NAA0.1mg/L+0.3%活性炭＋蔗糖20g/L，在温度为23～27℃，光照强度2000lux，每日光照12小时，培养20-25天后，将形成白色短根的芽苗进行驯化培养，从接种到生根苗长成，这期间的培养温度一般应稳定在25±2℃，每日光照12小时左右，光照强度为2000Lx，培养室温度为18～26℃；
步骤5，驯化培养：驯化前，将装有生根芽苗的培养瓶从培养室中移置自然条件下，打开瓶盖透气，24小时后，从瓶中取出幼苗，清除干净根部及根颈处的培养基，再栽入苗圃或穴盘中进行驯化培养，驯化基质为园土和煤渣按体积比2：1混合而成的混合物，再加入质量百分含量为0.2%冰乙酸，驯化培养的温度为15～20℃，湿度为80%，遮光率为50%，培养5～7天，一周后，可逐渐增强日光照射，采用喷雾状浇水，水量不宜过大，落干后再喷。驯化基质用清水冲洗干净，或用多菌灵或甲基托布津掺拌灭菌。
Claims (5)
1.一种草莓组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1，消毒灭菌：
选取当年新生的草莓茎尖进行消毒灭菌处理；
步骤2，初代培养：取消毒后的草莓茎尖0.3～0.4mm接种到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+6.5g/L琼脂粉培养基上，培养基的PH值为5.5，温度25±2℃、光照强度1500～2000lux，每日光照12-14小时，培养40-45天；
步骤3，扩大繁殖培养：将初代培养后的丛生苗每5--7株切成一块，接种到MS培养基+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L培养基上，培养基的PH值为5.8，在温度23～27℃，光照强度2000lux，每日光照12-14小时，培养30天后小苗分割形成单株苗；
步骤4，生根培养：将扩大繁殖培养后的芽苗转移到生根培养基上培养，生根培养基为1/2MS＋IBA0.5mg/L＋NAA0.1mg/L+0.3%活性炭＋蔗糖20g/L，在温度为23～27℃，光照强度2000lux，每日光照12小时，培养20-25天后，将形成白色短根的芽苗进行驯化培养；
步骤5，驯化培养：将生根培养后的芽苗移入珍珠岩、石英砂和蛭石按体积比1:1:2混合而成的驯化基质中进行培养，培养温度为15～20℃，湿度为80%，遮光率为50%，培养5～7天。
2.根据权利要求1所述的草莓组织培养方法，其特征在于：步骤1中，所述消毒灭菌处理是指先将草莓茎尖浸入质量百分含量为75%的酒精，湿润1～2min后，再将草莓茎尖浸入质量百分含量为10%的次氯酸钠水溶液，浸泡10～15min。
3.根据权利要求1所述的草莓组织培养方法，其特征在于：步骤2中，接种前，培养基采用1～1.1kg/cm2大气压热压消毒灭菌15～20分钟。
4.根据权利要求1所述的草莓组织培养方法，其特征在于：步骤5中，驯化前，将装有生根芽苗的培养瓶从培养室中移置自然条件下，打开瓶盖透气，24小时后，从瓶中取出幼苗，清除干净根部及根颈处的培养基，再栽入苗圃或穴盘中进行驯化培养。
5.根据权利要求1所述的草莓组织培养方法，其特征在于：步骤5中，驯化基质为经灭菌处理的腐熟锯木屑和腐叶土按任意比例的混合物或园土和煤渣按体积比2：1混合而成的混合物。
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20131211 |