Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

CN103169708B - 用2,4‑嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法 - Google Patents

用2,4‑嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103169708B
CN103169708B CN201310060555.0A CN201310060555A CN103169708B CN 103169708 B CN103169708 B CN 103169708B CN 201310060555 A CN201310060555 A CN 201310060555A CN 103169708 B CN103169708 B CN 103169708B
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
cell
alkyl
group
purposes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
CN201310060555.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103169708A (zh
Inventor
R·辛格
A·阿加德
D·G·帕颜
J·克罗格
H·凯姆
C·赛尔维恩
H·李
S·伯汉米迪帕提
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Rigel Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Rigel Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=31721742&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN103169708(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Rigel Pharmaceuticals Inc filed Critical Rigel Pharmaceuticals Inc
Publication of CN103169708A publication Critical patent/CN103169708A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103169708B publication Critical patent/CN103169708B/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/06—Antimigraine agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
    • C07D407/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)

Abstract

本发明提供以2,4‑嘧啶二胺类化合物治疗和预防自体免疫性疾病，以及治疗、预防与改善与此类疾病相关的症状的方法。可以用此类化合物治疗或者预防的自体免疫性疾病的具体离子包括类风湿性关节炎与/或其相关症状、周身性红斑狼疮与/或其相关症状、以及多发性硬化症与/或其相关症状。

Description

用2,4-嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法
本申请是国际申请号为PCT/US2003/024087、国际申请日为2003年7月29日、进入中国国家阶段的申请号为CN03821120.3、发明名称为“用2,4-嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法”的中国专利申请的分案申请。
相关申请案的交互参考
本申请案依照美国法典35篇119(e)条规定要求获得以下申请案之权益，即：申请于2002年7月29日之序号为60/399,673的申请案、申请于2003年1月31日之序号为60/443,949的申请案和申请于2003年3月6日之序号为60/452,339的申请案。
发明所属之技术领域
本发明从总体看讨论的是2,4-嘧啶二胺化合物,包含该化合物之医药成份，中间体、制造该化合物之合成方法、在各种情况下使用该化合物与成份的方法，例如用其治疗或者预防自体免疫性疾病和/或与其相关症状的方法。
发明之背景
Fc受体的交联，例如IgE(FcεRI)的高亲和力受体和/或IgG(FcγRI)的高亲和力受体在肥大细胞、嗜碱细胞和其它免疫细胞中激活一个信号级联，该项级联导致产生许多不利事件的化学介质之释放。例如，该交联导致第I类(立即)过敏性超敏反应的预形成介质(例如组织胺)经由去颗粒作用从小粒中的储存位置释放。它也导致其它介质(包括白三烯素，前列腺素和血小板激活因子〔PAFs〕)的合成和释放，这些介质在发炎反应中扮演重要角色。在Fc受体交联时被合成和释放的额外介质包括细胞因子和一氧化氮。
通过Fc受体(例如FcεRI与/或FcγRI)交联而激活的信号级联包含大量细胞蛋白质。其最重要的细胞内信号传播剂为酪氨酸激脢。而且，参与跟FcεRI与/或FcγRI受体交联相关的信号转导路径及其它信号转导级联的重要酪氨酸激脢为Syk激脢(参看Valent等人，2002，Intl.J.Hematol.75(4)：257-362的综述)。
FcεRI及FcγRI受体交联所释放的介质是造成许多不利事件的原因，或者在其中扮演重要角色，因此能对造成此类释放的信号级联起抑制作用的化合物将是非常需要的。而且，由于Syk激脢在这些和其它受体信号级联中扮演关键角色，对Syk激脢能起抑制作用的化合物同样也是人们所渴望得到的。
发明概述
一方面，本发明提供新颖的2,4-嘧啶二胺化合物，该类化合物，正如以下更详细的讨论所示，具有众多的生物活性。该类化合物通常包含具有下列结构及编号惯例的2,4-嘧啶二胺“核心”：
本发明的化合物在C2氮(N2)位置被取代，形成二级胺，还可在以下位置之一处或多处被进一步取代，这些位置是：C4氮(N4)位置，C5位置与/或C6位置。当在N4位置被取代时，取代基形成二级胺。在N2的取代基，以及在另一个位置的任意取代基，其特性和物理与化学性质范围可以很广泛。例如，(各)取代基可为支链烷基、直链烷基或环烷基；支链杂烷基、直链杂烷基或环杂烷基；单环或多环芳基；单环或多环杂芳基；或这些基团之组合。这些取代基团可被进一步取代，其更详细描述如下文所述。
N2与/或N4取代基可直接连接至其每个氮原子，或者可经由连接体与其各个氮原子隔开，连接体可以相同或者不同。连接体性质可以有很大差异，可包括可用于间隔分子一部分与另一部分的原子或基团的几乎任何组合。例如，连接体可为非环烃桥(如饱和或不饱和伸烷基〔alkyleno〕，例如伸甲基、伸乙基、伸乙烯基、伸丙基、伸丙〔1〕基、伸丁基、伸丁〔1〕烯基、伸丁〔2〕烯基、伸丁〔1,3〕二烯基及类似物质)，单环或多环烃桥(例如：〔1,2〕伸苯基、〔2,3〕伸萘基及类似物质)，简单非环杂原子或杂烷二基桥(例如：-O-、-S-、-S-O-、-NH-、-PH-、-C(O)-、-C(O)NH-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)NH-、 -S(O)2NH-、-O-CH2-、-CH2-O-CH2-、-O-CH=CH-CH2-及类似物质)，单环或多环杂芳基桥(例如：〔3,4〕伸呋喃基、伸吡啶基、伸噻吩基、伸哌啶基、伸哌嗪基、伸吡嗪啶基、伸吡咯啶基及类似物质)或该类桥之组合。
在N2、N4、C5与/或C6位置的取代基，以及亦可选择的连接体，可被一或多个相同或不同的取代基进一步取代。这些取代基团的性质可以有很大差异。适当取代基团的非限制性实例包括支链烷基、直链烷基或环烷基、单环或多环芳基、支链杂烷基、直链杂烷基或环杂烷基、单环或多环杂芳基、卤基、支链卤烷基、直链卤烷基或环卤烷基、羟基、桥氧基、硫酮基、支链烷氧基、直链烷氧基或环烷氧基、支链卤烷氧基、直链卤烷氧基或环卤烷氧基、三氟甲氧基、单环或多环芳氧基、单环或多环杂芳氧基、醚、醇、硫化物、硫醚、硫基(硫醇)、亚胺、偶氮基、叠氮化物、胺(一级、二级和三级)、腈(任何异构体)、氰酸盐(任何异构体)、硫氰酸盐(任何异构体)、亚硝基、硝基、偶氮基、亚砜(sulfoxides)、磺酰基、磺酸、硫酰胺、磺酰胺、磺酰胺酯、醛、酮、羧酸、酯、酰胺、脒、甲脒(formadines)、氨基酸、乙炔、胺基甲酸酯、内酯、内酰胺、糖苷、葡萄糖酰(gluconurides)、砜、缩酮、缩醛、酮缩硫醇、肟、草胺酸、草胺酸酯等、和这些基团的组合。具有反应官能性之取代基可经保护或未经保护，如业内人所共知的那样。
在一项说明实例中，本发明之2,4-嘧啶二胺化合物为根据结构式(I)之化合物：
包括其盐、水合物、溶剂合物及N-氧化物，其中：
L1和L2可各选自一个直接键和一个连接体；
R2选自以下基团，即：亦可被一或多个相同或不同的R8基取代之(C1-C6)烷基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C3-C8)环烷基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之环己基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之3-8员环杂烷基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C5-C15)芳基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之苯基和亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之5-15员环杂芳基；
R4选自以下基团，即：氢、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C1-C6)烷基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C3-C8)环烷基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之环己基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之3-8员环杂烷基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C5-C15)芳基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之苯基和亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之5-15员环杂芳基；
R5选自以下基团，即：R6、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C1-C6)烷基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C1-C4)链烷基(alkanyl)、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C2-C4)烯基和亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C2-C4)炔基；
每个R6各选自以下基团，即：氢、负电性基、-ORd、-SRd、(C1-C3)卤烷氧基、(C1-C3)全卤烷氧基、-NRcRc、卤素、(C1-C3)卤烷基、(C1-C3)全卤烷基、-CF3、-CH2CF3、-CF2CF3、-CN、-NC、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、-N3、-S(O)Rd、-S(O)2Rd、-S(O)2ORd、-S(O)NRcRc；-S(O)2NRcRc、-OS(O)Rd、-OS(O)2Rd、-OS(O)2ORd、-OS(O)NRcRc、-OS(O)2NRcRc、-C(O)Rd、-C(O)ORd、-C(O)NRcRc、-C(NH)NRcRc、-OC(O)Rd-SC(O)Rd,-OC(O)ORd,-SC(O)ORd,-OC(O)NRcRc,-SC(O)NRcRc,-OC(NH)NRcRc、-SC(NH)NRc、-[NHC(O)]nRd、-[NHC(O)]nORd、-[NHC(O)]nNRcRc和-[NHC(NH)]nNRcRc、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C5-C10)芳基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之苯基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之(C6-C16)芳烷基、亦可被一个或多个相同或不同的R8基取代之5-10员环杂芳基和亦可被一或多个相同或不同的R8基取代之6-16员环杂芳烷基；
R8选自以下基团，即：Ra、Rb、被一个或多个相同或不同的Ra或Rb取代之Ra、被一个或多个相同或不同的Ra或Rb取代之-ORa、-B(ORa)2、-B(NRcRc)2、-(CH2)m-Rb、-(CHRa)m-Rb、-O-(CH2)m-Rb、-S-(CH2)m-Rb、-O-CHRaRb、-O-CRa(Rb)2、-O-(CHRa)m-Rb、-O-(CH2)m-CH[(CH2)mRb]Rb、-S-(CHRa)m-Rb、-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-O-(CH2)m-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-S-(CH2)m-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-O-(CHRa)m-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-S-(CHRa)m-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-NH-(CH2)m-Rb、-NH-(CHRa)m-Rb、-NH[(CH2)mRb]、-N[(CH2)mRb]2、-NH-C(O)-NH-(CH2)m-Rb、-NH-C(O)-(CH2)m-CHRbRb和-NH-(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)m-Rb；
每个Ra均各选自以下基团，即：氢、(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、环己基、(C4-C11)环烷基烷基、(C5-C10)芳基、苯基、(C6-C16)芳烷基、苯甲基、2-6员杂烷基、3-8员环杂烷基、吗啉基(morpholinyl)、哌嗪基(piperazinyl)、高哌嗪基、哌啶基、4-11员环杂烷基烷基、5-10员环杂芳基和6-16员环杂芳烷基；
每个Rb均各选自以下适当基团之一，即：=O、-ORd、(C1-C3)卤烷氧基、-OCF3、=S、-SRd、=NRd、=NORd、-NRcRc、卤素、-CF3、-CN、-NC、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、=N2、-N3、-S(O)Rd、-S(O)2Rd、-S(O)2ORd、-S(O)NRcRc、-S(O)2NRcRc、-OS(O)Rd、-OS(O)2Rd、-OS(O)2ORd、-OS(O)2NRcRc、-C(O)Rd、-C(O)ORd、-C(O)NRcRc、-C(NH)NRcRc、-C(NRa)NRcRc、-C(NOH)Ra、-C(NOH)NRcRc、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)NRcRc、-OC(NH)NRcRc、-OC(NRa)NRcRc、-[NHC(O)]nRd、-[NRaC(O)]nRd、-[NHC(O)]nORd、-[NRaC(O)]nORd、-[NHC(O)]nNRcRc、-[NRaC(O)]nNRcRc、-[NHC(NH)]nNRcRc和-[NRaC(NRa)]nNRcRc；
每个Rc可各为一种保护基，或者由Ra，或者作为另一种选择的Rc，各自与所连接的氮原子一起形成5至8员环杂烷基或杂芳基，并亦可包括一个或多个相同或不同的额外杂原子，并可被一个或多个相同或不同的Ra或适当的Rb基取代；
每个Rd可各为一种保护基或Ra；
每个m可各为1至3的整数；以及
每个n各为一个0至3的整数。
另一方面，本发明提供2,4-嘧啶二胺化合物之药物前体。此类药物前体在其作为药物前体存在时就可具备活性，或者在生理条件下或者其它使用条件下转化为活性药物形态之前可以保持其不具备活性状态。在本发明的药物前体中，2,4-嘧啶二胺化合物的一个或多个官能团团包含于前体部份之中，该部份在使用条件下(在典型情况下通过水解、脢裂解或一些其它裂解机制)使分子裂解而产生官能团团。例如，一级或二级胺基可包含于酰胺前体之中，在使用条件下，该酰胺前体裂解，产生一级或二级胺基。因此，本发明的药物前体包括特殊类型之保护基团，称为“保护基团”，此保护基团屏蔽一个或多个2,4-嘧啶二胺化合物之官能团团，并在使用条件下裂解产生具备活性的2,4-嘧啶二胺药物化合物。2,4-嘧啶二胺化合物中可通过保护基团屏蔽而包含在前体部份之中的官能团团包括(但不限于)：胺类(一级和二级)、羟基类、硫基类(硫醇类)、羧基类、羰基类、酚类、儿茶酚类、二醇类、炔类、磷酸盐类等。适合于屏蔽此类官能团团，产生可在所要求条件下裂解的药物前体的保护基团在医药界乃是人所共知的。所有的这些保护基团(单个基团或者其组合)可包括在本发明的药物前体之中。可包括在本发明药物前体之中，产生一级或二级胺基的前体部份之具体实例包括(但不限于)酰胺类、胺基甲酸酯类、亚胺类、尿素类、苯膦基类、磷酰基类和次磺酰基类。可包含在本发明的药物前体中，产生硫基的前体部份之具体实例包括(但不限于)硫醚类，例如S-甲基衍生物(单硫基、二硫基、氧硫基、胺硫基缩醛)、硅烷基硫醚类、硫酯类、硫代碳酸酯类、硫代胺基甲酸酯类、不对称二硫化物等。可包含在本发明的药物前体中，能裂解产生羟基的前体部份之特殊实例包括(但不限于)磺酸酯类、酯类和碳酸酯类。可包含在本发明的药物前体中，能产生羧基的前体部份之特殊实例包括(但不限于)酯类(包括硅烷基酯类、草胺酸酯类和硫酯类)、酰胺类和酰肼(hydrazides)类。
在一项具体实施例中，本发明的药物前体为结构式(I)所示的化合物，其中Rc和Rd的保护基为保护基团。
以取代基置换结构式(I)所示2,4-嘧啶二胺中N2和N4位置的氢，将对化合物的活性产生不利影响。然而，熟谙本行业务者应当知晓，这些氮原子可以包含在前体部份之中，使其在使用条件下裂解产生根据结构式(I)所示之2,4-嘧啶二胺。因此，在另一项具体实施例中，本发明的药物前体为结构式(II)所示之化合物：
包括其盐、水合物、溶剂合物及N-氧化物，其中：
R2、R4、R5、R6、L1和L2如前面结构式(I)所定义；而
R2b和R4b分别各为保护基团。
另一方面，本发明提供一种包含本发明的一种或多种化合物与/或药物前体的医药成份以及一种适当的载体、赋形剂或者稀释剂。载体、赋形剂或稀释剂的确切性质将取决于该项成份的既定用途，其范围可涵盖从适合于兽医用途或兽医用途可接受到适合于人类用途或人类用途可接受的范围。
在还有一个方面，本发明提供可用于合成本发明之2,4-嘧啶二胺化合物和药物前体之中间体。在一个具体实施例中，中间体为结构式(III)所示的4-嘧啶胺类：
包括其盐、水合物、溶剂合物及N-氧化物，其中R4、R5、R6和L2如先前结构式(I)所定义；LG为像诸如–S(O)2Me、-SMe或卤基(例如，F、Cl、Br、I)等的离去基；而R4c为氢或保护基团。
在另一项具体实施例中，中间体为结构式(IV)所示之2-嘧啶胺类：
包括其盐、水合物、溶剂合物及N-氧化物，其中R2、R5、R6和L1如先前结构式(I)所定义；LG为像诸如–S(O)2Me、-SMe或卤基(例如：F、Cl、Br、I)的离去基，而R2c为氢或保护基团。
在还有一项具体实施例中，中间体为下述结构式(V)所示之4-胺基-或4-羟基-2-嘧啶胺类：
包括其盐、水合物、溶剂合物及N-氧化物，其中R2、R5、R6和L11如先前结构式(I)所定义，R7为胺基或羟基，而R2c为氢或保护基团。
在另一项具体实施例中，中间体为下述结构式(VI)所示之为N4-取代之胞嘧啶：
包括其盐、水合物、溶剂合物及N-氧化物，其中R4、R5、R6和L2如先前结构式(I)所定义，而R4c为氢或保护基团。
在还有一个方面，本发明提供一种合成本发明之2,4-嘧啶二胺化合物和药物前体的方法。在一项具体实施例中，该方法包括使一种令结构式(III)所示之4-嘧啶胺与一种分子式为HR2cN-L1-R2之胺反应(式中L1、R2和R2c如先前结构式(IV)所定义)以产生一种如结构式(I)所示之2,4-嘧啶二胺或一种如结构式(II)所示之药物前体。
在另一项具体实施例中，该方法包括令一种如结构式(IV)所示之2-嘧啶胺与一种分子式为R4-L2-NHR4c之胺反应(式中L4、R4和R4c如先前结构式(III)所定义)以产生一种如结构式(I)所示之2,4-嘧啶二胺，或一种如结构式(II)所示之药物前体。
在还有一项具体实施例中，该方法包括令一种如结构式(V)所示之4-胺基-2-嘧啶胺(其中R7为胺基)与一种分子式为R4-L2-NHR4c之胺反应(式中L2、R4和R4c如结构式(III)所定义)以产生一种如结构式(I)所示之2,4-嘧啶二胺，或一种如结构式(II)所示之药物前体。也可令4-胺基-2-嘧啶胺与分子式为R4-L2-LG之化合物反应，式中R4和L2如先前结构式(I)所定义，LG为离去基。
在还有另一项具体实施例中，该方法包括卤化一种结构式(V)所示之4-羟基-2-嘧啶胺(R7为羟基)以产生一种如结构式(IV)所示之2-嘧啶胺，并按如上所述，令此嘧啶胺与适当的胺反应。
在还有一项具体实施例中，该方法包括卤化一种如结构式(VI)所示的为N4-取代之胞嘧啶，以产生一种如结构式(III)所示之4-嘧啶胺，并按上所述，令此嘧啶胺与一种适当的胺反应。
本发明的2,4-嘧啶二胺化合物为免疫细胞(例如肥大、嗜碱、嗜中性白血球与/或嗜伊红血球细胞)去颗粒作用的有效抑制剂。因此，在另一方面，本发明提供调节(尤其是抑制)该类细胞去颗粒作用的方法。该方法通常包括令去颗粒细胞与数量达到能有效调节或抑制细胞去颗粒作用的本发明之2,4-嘧啶二胺化合物或药物前体，或其可接受的盐、水合物、溶剂合物、N-氧化物与/或其成份接触。该方法可作为一种治疗方法实施于活体外或活体内，以治疗或预防以细胞去颗粒作用为其特征、由其引起或与其相关的疾病。
虽然无意受任何操作理论之约束，然而生物化学数据确认2,4-嘧啶二胺化合物是通过(至少是部份通过)阻断或抑制IgE(“FcεRI”)与/或IgG(“FcγRI”)的高亲和力Fc受体交联所激活的信号转导级联发挥其去颗粒作用抑制效果的。2,4-嘧啶二胺化合物确实是由FcεRI介导和由FcγRI介导的去颗粒作用的有效抑制剂。因此，2,4-嘧啶化合物可用于抑制任何显示此种FcεRI与/或FcγRI受体的细胞类型(包括但不限于巨噬细胞、肥大、嗜碱、嗜中性白血球与/或嗜伊红血球细胞)中的Fc受体信号级联。
此类方法也允许调节(尤其是抑制)因激活此类Fc受体信号级联而产生的下游过程。这种下游过程包括(但不限于)FcεRI介导与/或FcγRI介导之去颗粒作用、细胞因子制造与/或脂质介质(例如白三烯素和前列腺素)的制造与/或释放。该方法通常是让表现出Fc受体(如以上所讨论细胞类型之一)信号级联的细胞接触一定数量的能有效调节或抑制Fc受体信号级联与/或由此信号级联激活作用所造成下游过程的本发明所述之2,4-嘧啶二胺化合物或者药物前体，或可接受的盐、水合物、溶剂合物、N-氧化物与/或成份。此方法可实施于活体外或活体内，作为一种治疗方法用以治疗或者预防以Fc受体信号级联为特征、由其所引起或者与其相关的疾病，例如去颗粒化时具有颗粒特异性化学介质的释放、细胞因子的释放与/或合成、与/或脂质介质(例如白三烯素和前列腺素)的释放与/或合成而造成之疾病。
在还有一个方面，本发明为以激活Fc受体信号级联(例如FcεRI与/或FcγRI信号级联)所造成的化学介质释放为特征、由该种化学介质释放所引起、或者与该种化学介质释放相关连的疾病提供治疗与/或预防的方法。该类方法可由兽医实施于动物身上，或者使用于人类身上。此类方法通常包括对动物实验对象或者人类受试者给予一定剂量本发明的2,4-嘧啶二胺化合物或药物前体，或其可接受的盐、水合物、溶剂合物、N-氧化物与/或其成份，以治疗或者预防疾病。如上述讨论所述，某些免疫细胞中的FcεRI或FcγRI受体信号级联的激活，导致多种化学物质的释放与/或合成，而这些化学物质是许多疾病的药理介质。任何一种此类疾病均可按本发明的方法治疗或者预防。
例如，在肥大细胞和嗜碱细胞中，FcεRI或FcγRI信号级联的激活经由去颗粒过程导致特应性与/或I型过敏感性反应预形成介质(例如，组织胺、类胰蛋白脢等蛋白脢类等)的立即(即在受体激活1-3分钟内之)释放。该特应性与/或I型过敏性反应包括(但不限于)对环境和其它过敏原(例如，花粉、昆虫与/或动物的毒液、食物、药物、对比色染料等)的过敏性反应、类过敏反应、枯草热、过敏性结膜炎、过敏性鼻炎、过敏性哮喘，特应性皮肤炎、湿疹、荨麻疹、黏膜病变、组织病变和某些胃肠疾病。
在去颗粒作用引起的预形成介质的立即释放之后，一系列其它化学介质随即释放与/或合成，其中包括血小板激活因子(PAF)、前列腺素和白三烯素(例如，LTC4)，以及TNFα、IL-4、IL-5、IL-6、IL-13等细胞因子的重新合成和释放。这两个过程中的第一个过程在受体激活之后大约3-30分钟发生；第二个过程在受体激活之后大约30分钟至7 小时发生。这些“后阶段”介质被认为是造成以上所列特应性与/或I型过敏反应中慢性症状的部份原因，此外它们还是导致炎症和炎性疾病(例如骨性关节炎、炎性肠症候群、溃疡性结肠炎、克隆氏病、自发炎性肠疾病、肠过敏综合症、结肠痉挛等)，轻度结疤(例如，硬皮病、纤维增殖、瘢瘤、手术后疤痕、肺纤维化、血管痉挛、偏头痛、再灌流(reperfusion)损伤和后心肌梗塞)以及干燥复症或干燥症候群的化学介质。所有的这些疾病可按本发明的方法进行治疗或者预防。
可按本发明的方法治疗或者预防的其它疾病包括与嗜碱细胞与/或肥大细胞病理有关的疾病。此类疾病的实例包括(但不限于)皮肤病如硬皮病，心脏病如后心肌梗塞，肺脏病如肺肌变化或改造和慢性阻塞性肺病(COPD)，以及肠道疾病如炎性肠症候群(结肠痉挛)。
本发明的2,4-嘧啶二胺化合物也是酪氨酸激脢Syk激脢的有效抑制剂。因此，在还有一个方面，本发明提供调节(尤其是抑制)Syk激脢活性的方法。该方法通常包括令Syk激脢或包含Syk激脢的细胞与一定剂量的本发明2,4-嘧啶二胺化合物或药物前体、或者其可接受的盐、水合物、溶剂合物、N-氧化物与/或其成份接触，以有效调节或抑制Syk激脢的活性。在一个具体实施例中，Syk激脢为一种隔离或重组Syk激脢。在另一具体实施例中，Syk激脢为由细胞(例如肥大细胞或嗜碱细胞)表现的内源或重组Syk激脢。该方法可实施于活体外或活体内，作为治疗方法治疗或预防以Syk激脢活性为特征、由其所引起或与其相关的疾病。
虽然无意受到任何具体操作理论之约束，但咸信本发明的2,4-嘧啶二胺化合物抑制细胞的去颗粒作用与/或其它化学介质的释放，主要是通过对Syk激脢进行抑制来实现，而Syk激脢则通过FcεRI的γ链同型二聚体激活(参看，例如，图2)。此γ链同型二聚体为其它的Fc受体(包括FcγRI、FcγRIII和FcαRI)共享。对于所有这些受体，细胞内信号的转导由共享的γ链同型二聚体介导。此类受体的结合与集聚造成酪氨酸激脢(例如Syk激脢)的募集与激活。由于这些共同信号活动，本文所述2,4-嘧啶二胺化合物可用来调节(尤其是抑制)具有此链同型二聚体的Fc受体(例如FcεRI、FcγRI、FcγRIII和FcαRI)的信号级联，以及此类受体所诱导的细胞反应。
目前已知Syk激脢在其它信号级联中扮演重要角色。例如，Syk激脢为B细胞受体(BCR)信号的效应物(Turner等人，2000年，《今日免疫学〔Immunology Today〕》杂志，21：148-154)及为中性白血球中整合蛋白(integrin)β(1)，β(2)和β(3)生成信号的关键成份(Mocsai等人，2002年，《免疫》杂志，16：547-558)。由于本文所述的各种2,4-嘧啶二胺化合物为Syk激脢之有力抑制剂，因此可以用来调节(尤其是抑制)由Syk扮演角色的任何信号级联，例如诸如Fc受体，BCR和整合蛋白信号级联，以及此类信号级联所诱导的细胞反应。正如业内众所周知的那样，何种特定细胞反应可以被调节或者被抑制，部份取决于具体的细胞类型和受体信号级联。可以由各种2,4-嘧啶二胺化合物调节或者抑制的细胞反应的非局限性实例包括：呼吸器官的破裂、细胞黏附、细胞去颗粒作用、细胞传布、细胞迁移、吞噬作用(例如、在巨噬细胞中)、钙离子流出(例如、肥大、嗜碱、嗜中性白血球、嗜伊红血球和B细胞)、血小板凝集和细胞成熟(例如，在B细胞中)。
因此，在另一方面，本发明对Syk扮演某种角色的信号转导级联提供调节方法，尤其是抑制方法。此种方法通常包括令Syk依赖受体或表现出Syk依赖受体的细胞与一定量的本发明2,4-嘧啶二胺化合物或药物前体，或者其可接受的盐、水合物、溶剂合物、N-氧化物与/或其成份接触，所用剂量应能有效调节或者抑制信号转导级联。此类方法也可用来调节(尤其是抑制)下游过程，或者由特定Syk依赖信号转导级联之激活而诱导的细胞反应。此方法可以来调节任何信号转导级联，即便我们尚未知晓Syk激脢在其中是否扮演一个角色，或者在后来才发现它在其中扮演的角色。该方法可实施于活体外或活体内，作为一种治疗方法，治疗或者预防以Syk依赖信号转导级联激活为特征、由其所引起或与其相关的疾病。此类疾病的非限制实例包括此前所讨论的实例。
细胞学与动物试验数据也已确认，本发明的2,4-嘧啶二胺化合物亦可用于治疗或者预防自体免疫性疾病与/或此类疾病的症状。所采用的方法通常为授予患有自体免疫性疾病的患者或者有发生自体免疫性疾病风险的患者一定剂量本发明的2,4-嘧啶二胺化合物或者药物前体、或者其可接受的盐、水合物、溶剂合物、N-氧化物与/或其成份，其剂量应能有效治疗或者预防自体免疫性疾病与/或其相关症状。可以用2,4-嘧啶二胺化合物治疗或者预防的自体免疫性疾病包括﹕通常由非变应性超敏反应相关的各种疾病（II性、III型与/或IV型超敏反应）与/或那些由单核细胞中的FcγR信号级联激活所介导（至少是部份介导）的疾病。此类自体免疫性疾病包括（但不限于）那些往往被称之为单器官或者单细胞类型自体免疫性疾病的疾病，以及那些通常被称之为全身性自体免疫疾病的疾病。往往被称之为单器官或者单细胞型自体免疫疾病的非限制性举例包括﹕桥本氏甲状腺炎、自体免疫性溶血性贫血、恶性贫血的自体免疫性萎缩性胃炎、自体免疫性脑脊髓炎、自体免疫性睪丸炎、Goodpasture氏综合征（即肾小球性肾炎咯血综合征）、自体免疫性血小板减少、交感性眼炎、重症肌无力、Graves氏病（即突眼性甲状腺肿）、原发性胆汁性肝硬变、慢性活动性肝炎、溃疡性结肠炎和膜性肾小球病变。往往被称之为全身性自体免疫疾病的非限制性举例包括﹕周身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、Sjogren氏综合征（即泪腺涎腺萎缩综合征、口眼干燥综合征）、Reiter氏综合征（一种病因尚未阐明的三联症，包括尿道炎、结膜炎及关节炎）、多发性肌炎-皮肌炎、全身性硬皮病、结节性多动脉炎、多发性硬化和大疱性类天疱疮。
插图的简要描述
图1所示为说明过敏原如何诱导IgE形成，以及随后如何从肥大细胞释放预成介质和其它化学介质的卡通示意图；
图2所示为说明FcεR1信号转导级联如何导致肥大细胞与/或嗜碱细胞去颗粒作用的卡通示意图；
图3所示为说明选择抑制上游FcεRI介导去颗粒作用化合物和同时抑制FcεRI介导去颗粒作用和艾诺霉素(ionomycin)诱导去颗粒作用化合物的假想作用点卡通示意图；
图4为说明某些2,4-嘧啶二胺化合物、二甲亚砜(DMSO，用作对照组)和艾诺霉素(ionomycin)对CHMC细胞中之Ca2+通量影响的图表；
图5的图表显示化合物R921218和R926495抑制作用的实时性；
图6的图表显示冲洗的化合物R921218和R921302抑制活动的影响；
图7提供的数据显示不同浓度的化合物R921218(A)和R921219(B)在激活BMMC细胞内IgE受体信号转导级联中对Syk激脢下游的各种蛋白质磷酸化的抑制情况；
图8提供的数据显示内源脢解物(LAT)和肽脢解物在化合物R921212(X),R921219(Y)和R921304(Z)浓度不断上升情况下，Syk激脢磷酸化抑制对剂量的反应；
图9提供的数据表明化合物R921219(A)对Syk激脢的抑制能与三磷酸腺苷竞争；
图10提供的数据显示不同浓度的化合物和R9218218(B)在激活CHMC细胞的FcεRI信号转导级联中对Syk激脢(而并非LYN激脢)下游的磷酸化的抑制作用；也显示在已知LYN激脢抑制剂(PP2)存在下，对LYN激脢(而并非Syk激脢)下游的蛋白质磷酸化的抑制作用；
图11A-D提供数据，显示在BMMC细胞的FcεRI信号转导级联中，对Syk激脢下游蛋白质磷酸化的抑制作用;
图12的图表显示化合物R921302在小白鼠胶原抗体诱导关节炎(“CAIA”)模型中的效力；
图13的图表显示在CAIA模型中与其它药剂和对照药剂相比的化合物R921302的效力；
图14的图表显示在大鼠胶原诱导关节炎(“CIA”)模型中，化合物R921302的效力；
图15的图表说明化合物R921302抑制小白鼠实验自体免疫性脑脊髓炎(“EAE”)和多发性硬化症临床模型的效力；
图16的图表说明说明化合物R921302对在开始之日以150μgPLP139-151/200μgMTB(CFA)治疗的SJL小白鼠的效力。
较佳具体实施例之详细说明
6.1定义
使用于本文中时，以下术语拟具有以下含义：
“烷基(Alkyl)”其本身或作为另一个取代基的一部份，系指具有所述数目之碳原子(即C1-C6表示1至6个碳原子)的饱和或不饱和的支链、直链或环单价烃基，是从母烷、烯或炔的一个碳原子移除一个氢原子而得。典型的烷基包括(但不限于)甲基；乙基类例如乙基、乙烯基、乙炔基；丙基类例如丙-1-基、丙-2-基、环丙-1-基、丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基、环丙-1-烯-1-基；环丙-2-烯-1-基、丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等；丁基类例如丁-1-基、丁-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、环丁-1-基、丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1,3-二烯-1-基、丁-1,3-二烯-2-基、环丁-1-烯-1-基、环丁-1-烯-3-基、环丁-1,3-二烯-1-基、丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等；及类似物。在意欲表达特定饱和度的情形中，使用如下定义之“链烷基”，“烯基”与/或“炔基”术语。在一较佳具体实施例中，烷基为(C1-C6)烷基。
“链烷基(Alkanyl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指饱和之支链、直链或环烷基，系从母烷的一个碳原子移除一个氢原子而得。典型的烷基包括(但不限于)甲基；乙基；丙基类例如丙-1-基、丙-2-基(异丙基)、环丙-1-基等；丁基类例如丁-1-基、丁-2-基(二级-丁基)、2-甲基-丙-1-基(异丁基)、2-甲基-丙-2-基(三级-丁基)、环丁-1-基等；和相似物。在一个较佳具体实施例中，链烷基为(C1-C6)链烷基。
“烯基(Alkenyl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指具有至少一个碳-碳双键之不饱和支链、直链或环烷基，系从母烯的一个碳原子移除一个氢原子而得。此类基团的一个或若干个双键可按顺式或反式构形。典型的烯基包括(但不限于)乙烯基；丙烯基类例如丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基、丙-2-烯-2-基、环丙-1-烯-1-基；环丙-2-烯-1-基；丁烯基类例如丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1,3-二烯-1-基、丁-1,3-二烯-2-基、环丁-1-烯-1-基、环丁-1-烯-3-基、环丁-1,3-二烯-1-基等；及类似物。在一个较佳具体实施例中，烯基为(C2-C6)烯基。.
“炔基(Alkynyl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指具有至少一个碳-碳三键之不饱和之支链、直链或环烷基，系从母炔的一个碳原子移除一个氢原子而得。典型的炔基包括(但不限于)乙炔基；丙炔基类例如丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等；丁炔基类例如丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等；和相似物。在一个较佳具体实施例中，炔基为(C2-C6)炔基。
“烷二基(Alkyldiyl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指具有所述数目之碳原子(即C1-C6表示1至6个碳原子)的饱和或不饱和支链、直链或环二价烃基，系从母烷、烯或炔的两个不同的碳原子各移除一个氢原子，或从母烷、母烯或母炔的一个碳原子移除两个氢原子而得。两个单价基中心或二价基中心的每个价，可与相同或不同的原子形成键。典型的烷二基包括(但不限于)甲二基、乙二基类例如乙-1,1-二基、乙-l,2-二基、乙烯-1,1-二基、乙烯-l,2-二基；丙二基类例如丙-1,1-二基、丙-l,2-二基、丙-2,2-二基、丙-1,3-二基、环丙-1,1-二基、环丙-l,2-二基、丙-1-烯-1,1-二基、丙-1-烯-l,2-二基、丙-2-烯-1,2-二基、丙-1-烯-1,3-二基、环丙-1-烯-1,2-二基、环丙-2-烯-l,2-二基、环丙-2-烯-1,1-二基、丙-1-炔-1,3-二基、等等；丁二基类例如丁-1,1-二基、丁-1,2-二基、丁-1,3-二基、丁-l,4-二基、丁-2,2-二基、2-甲基-丙-1,1-二基、2-甲基-丙-1,2-二基、环丁-1,1-二基；环丁-1,2-二基、环丁-1,3-二基、丁-1-烯-1,1-二基、丁-1-烯-1,2-二基、丁-1-烯-1,3-二基、丁-1-烯-1,4-二基、2-甲基-丙-1-烯-1,1-二基、2-亚甲基(methanylidene)-丙-1,1-二基、丁-1,3-二烯-1,1-二基、丁-1,3-二烯-1,2-二基、丁-1,3-二烯-1,3-二基、丁-1,3-二烯-1,4-二基、环丁-1-烯-1,2-二基、环丁-1-烯-1,3-二基、环丁-2-烯-1,2-二基、环丁-1,3-二烯-1,2-二基、环丁-1,3-二烯-1,3-二基、丁-1-炔-1,3-二基、丁-1-炔-1,4-二基、丁-1,3-二炔-1,4-二基等；及类似物。在希冀特定的饱和度的情况学，使用术语“烷二基(alkanyidiyl)”、“烯二基”与/或“炔二基”。其中在特别希冀两个价在同一个碳原子上时，使用术语“亚烷基”。在较佳具体实施例中，烷二基为(C1-C6)烷二基。同样较佳的是饱和非环烷二基，其基团中心在终端碳，例如，甲二基(伸甲基)；乙-1,2-二基(伸乙基)；丙-1,3-二基(伸丙基)；丁-1,4-二基(伸丁基)；和相似物(也称为伸烷基类，定义见下)。
“伸烷基(Alkyleno)”本身或作为另一取代基的一部份，系指具有二个终端单价基中心的直链饱和或不饱和烷二基，系从直链母烷、母烯或母炔的两个终端碳原子各移除一个氢原子而得。在特定伸烷基中，如果存在双键或三键，则其位置在方括号中显示。典型的伸烷基包括(但不限于)伸甲基；伸乙基类如伸乙基，伸乙烯基，伸乙炔基；伸丙基类如伸丙基，伸丙〔1〕基，伸丙〔1,2〕二烯基，伸丙[〔1〕炔基等等；伸丁基类如伸丁基、伸丁〔1〕烯基、伸丁〔2〕烯基、伸丁〔1,3〕二烯基、伸丁〔1〕炔基、伸丁〔2〕炔基、伸丁〔l,3〕二炔基等及类似物。在希冀特定饱和度的情况下，采用术语伸烷基(alkano)、伸烯基(alkeno)与/或伸炔基(alkyno)。在较佳具体实施例中、伸烷基为(C1-C6)或(C1-C3)伸烷基。同样较佳的实例也为直链饱和伸烷基，例如，伸甲基、伸乙基、伸丙基、伸丁基和相似物。
“杂烷基(Heteroalkyl)”、“杂烷基(Heteroalkanyl)”、“杂烯基 (Heteroalkenyl)”、“杂炔基(Heteroalkynyl)”、“杂烷二基(Heteroalkyldiyl)”和“杂伸烷 基(Heteroalkyleno)”本身或作为另一取代基的一部份，系指烷基、链烷基、烯基、炔基、烷二基和伸烷基中的一个或若干个碳原子各自独立被相同或不同杂原子或杂原子基取代。可取代碳原子的典型杂原子与/或杂原子基包括(但不限于)-O-、-S-、-S-O-、-NR’-、-PH-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)NR’-,-S(O)2NR’-和相似物，包括其组合，其中R’分别为氢或(C1-C6)烷基。
“环烷基(Cycloalkyl)”及“环杂烷基(Heterocycloalkyl)”本身或作为另一取代基的一部份，分别系指“烷基”或“杂烷基”之环状变体。就杂烷基而言，一个杂原子可占据连接至分子其余部分的位置。典型的环烷基包括(但不限于)环丙基；环丁基类如环丁基和环丁烯基；环戊基类如环戊基和环戊烯基；环己基类如环己基和环己烯基；和相似物。典型的环杂烷基包括(但不限于)四氢呋喃基(如四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基等等)、哌啶基(如哌啶-1-基、哌啶-2-基等等)、吗啉基(如吗啉-3-基、吗啉-4-基)、哌嗪基(如哌嗪-1-基、哌嗪-2-基等等)及类似物。
“非环杂原子桥联(Acyclic Heteroatomic Bridge)”系指二价桥联，其中主链原子仅为杂原子与/或杂原子基。典型的非环杂原子桥联包括(但不限于)-O-、-S-、-S-O-、-NR’-、-PH-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)NR’-、-S(O)2NR’-和相似物，包括其组合，其中R’各为氢或(C1-C6)烷基。
“母芳族环系统(Parent Aromatic Ring System)”系指具有共轭π电子系统之不饱和环或多环环系统。详而言之，包含在“母芳族环系统”定义中的是一个或若干个环为芳族环，而且一个或若干个环为饱和或不饱和环的稠合环系统，例如诸如芴(fluorene)、氢茚(indane)、茚(indene)、萉(phenalene)、四氢萘(tetrahydro-naphthalene)等等。典型的母芳族环系统包括(但不限于)醋蒽烯(aceanthrylene)、苊(acenaphthylene)、乙酰亚菲(acephenanthrylene)、蒽(anthracene)、薁(azulene)、苯、〔艹屈〕(chrysene)、蔻(coronene)、荧蒽(fluoranthene)、芴(fluorene)、己呻(hexacene)、己芬(hexaphene)、己荵(hexalene)、茚呻(indacene)、s-茚呻、氢茚(indane)、茚(indene)、萘、辛呻(octacene)、辛芬(octaphene)、辛荵(octalene)、卵烯(ovalene)、戊-2,4-二烯、戊呻(pentacene)、戊荵(pentalene)、戊芬(pentaphene)、苝(perylene)、萉(phenalene)、菲(phenanthrene)、苉(picene)、pleiadene、芘(pyrene)、皮蒽(pyranthrene)、玉红呻(rubicene)、四氢萘、联三苯、联三萘及类似物，以及其各种氢异构体。
“芳基(Aryl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指具有所述数目之碳原子(即C5-C15表示5至15个碳原子)的单价芳族烃基团，系从母芳环系统的一个碳原子移除一个氢原子而得。典型的芳基包括(但不限于)衍生自以下化合物的基团，即：醋蒽烯(aceanthrylene)、苊(acenaphthylene)、乙酰亚菲(acephenanthrylene)、蒽(anthracene)、薁(azulene)、苯、〔艹屈〕(chrysene)、蔻(coronene)、荧蒽(fluoranthene)、芴(fluorene)、己呻(hexacene)、己芬(hexaphene)、六荵(hexalene)、as-茚呻(as-indacene)、s-茚呻(s-indacene)、氢茚(indane)、茚(indene)、萘、辛呻(octacene)、辛芬(octaphene)、辛荵(octalene)、卵烯(ovalene)、戊-2,4-二烯、戊呻(pentacene)、戊荵(pentalene)、戊芬(pentaphene)、苝(perylene)、萉(phenalene)、菲(phenanthrene)、苉(picene)、pleiadene、芘(pyrene)、皮蒽(pyranthrene)、玉红呻(rubicene)、联三苯、联三萘及类似物，以及其各种氢异构体。在一个较佳具体实施例中，芳基为(C5-C15)芳基，更理想为(C5-C10)。特别理想的芳基类为环戊二烯基、苯基及萘基。
“芳基芳基(Arylaryl)”本身或作为另一取代基的一部份系指从环系统的一个碳原子移除一个氢原子而得的单价芳族烃基，其中两个或多个相同或不同的母芳环系统以单键直接连在一起，该直接连接环的数目比原有母芳环系统的环的数目减少一个。典型的芳基芳基包括(但不限于)联苯基、联三苯基、苯基-萘基、联萘基、联苯基-萘基，和相似物。在叙述芳基芳基中的碳原子数目之处，此类数目系指原有各母芳族环之碳原子。例如，(C5-C15)芳基芳基为其中各芳族环包含从5到15个碳的芳基芳基，例如，联苯基、联三苯基、联萘基，苯基萘基等。各芳基芳基的母芳族环系统最好各为(C5-C15)芳族，若为为(C5-C10)芳族更好。其中所有的母芳环系统也最好是相同的芳基芳基，例如，联苯基、联三苯基、联萘基、联三萘基等。
“联芳基(Biaryl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指具有两个以单键直接连接的相同母芳族系统形成的芳基芳基。典型的联芳基包括(但不限于)联苯基、联萘基、联蒽基和相似物。此类芳环系统最好是(C5-C15)芳环，是(C5-C10)芳环更好。特别理想的联芳基为联苯基。
“芳烷基(Arylalkyl)”本身或作为另一取代基的y一部份，系指非环烷基中一个键接到碳原子(典型的情况为终端或sp3碳原子)上的氢原子为芳基取代。典型的芳烷基包括(但不限于)苯甲基、2-苯乙-1-基、2-苯乙烯-1-基、萘甲基、2-萘乙-1-基、2-萘乙烯-1-基、萘并苯甲基、2-萘并苯乙基-1-基及类似物。在希冀表达具体的烷基部份的情况下，使用术语芳烷基，芳烯基与/或芳炔基。在较佳具体实施例中，芳烷基为(C6-C21)芳烷基，例如芳烷基之烷基、烯基或炔基部分为(C1-C6)，而芳基部分为(C5-C15)。在尤其理想的具体实施例中，芳烷基为(C6-C13)，例如芳烷基之烷基、烯基或炔基部分为(C1-C3)，而芳基部分为(C5-C10)。
“母杂芳环系统(Parent Heteroaromatic Ring System)”系指其中一个或若干个碳原子各自被相同或不同的杂原子或杂原子基团取代的母芳环系统。取代碳原子的典型杂原子或杂原子基团包括(但不限于)：N、NH、P、O、S、S(O)、S(O)2、Si,等。特别包括在“母杂芳环系”定义中的为其中有一个或若干个环为芳族环以及一个或若干个环为饱和或不饱和环的稠环系统，例如诸如苯并二恶烷、苯并呋喃、色满(chromane，即苯并二氢呋喃)、色烯(chromene，即苯并吡喃)、吲哚(indole)、吲哚满(indoline，即二氢吲哚)、呫吨(xanthene)等等。也包括在“母杂芳环系统”定义中者为包括共同取代基的此类己知环，例如诸如苯并吡喃酮(benzopyrone)和1-甲基-1,2,3,4-四唑。从“母杂芳环系统”定义中需要特别排除在外的是与环聚亚烷基二醇(例如环聚乙烯二醇)稠合的苯基。典型的母杂芳族环系包括(但不限于)吖啶(acridine)、苯并咪唑(benzimidazole)、苯并异恶唑(benzisoxazole)、苯并二恶烷(benzodioxan)、苯并二恶茂(benzodioxole)、苯并呋喃、苯并吡喃酮(benzopyrone)、苯并噻二唑(benzothiadiazole)、苯并噻唑(benzothiazole)、苯并三唑(benzotriazole)、苯并恶嗪(benzoxaxine)、苯并恶唑(benzoxazole)、苯并恶唑啉(benzoxazoline)、咔唑(carbazole)、β-咔啉(β-carboline)、色满(chromane)、色烯(chromene)、啈啉(cinnoline)、呋喃(furan)、咪唑(imidazole)、吲唑(indazole)、吲哚(indole)、吲哚啉(indoline)、吲嗪(indolizine)、异苯并呋喃(isobenzofuran)、异色烯(isochromene)、异吲哚(isoindole)、异吲哚啉(isoindoline)、异喹啉(isoquinoline)、异噻唑(isothiazole)、异恶唑(isoxazole)、萘啶(naphthyridine)、恶二唑(oxadiazole)、恶唑(oxazole)、伯啶(perimidine)、啡啶(phenanthridine)、啡咯啉(phenanthroline)、啡嗪(phenazine)、呔嗪(phthalazine)、喋啶(pteridine)、嘌呤(purine)、吡喃(pyran)、吡嗪(pyrazine)、吡唑(pyrazole)、哒嗪(pyridazine)、吡啶(pyridine)、嘧啶(pyrimidine)、吡咯(pyrrole)、吡咯嗪(pyrrolizine)、喹唑啉(quinazoline)、喹啉(quinoline)、喹嗪(quinolizine)、喹喔啉(quinoxaline)、四唑、噻二唑(thiadiazole)、噻唑(thiazole)、噻吩(thiophene)、三唑(triazole)、呫吨(xznthene)、以及类似物。
“杂芳基(Heteroaryl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指具有所述数目环原子的单价杂芳基(例如“5-14员”表示从5到14个环原子)，该基团系从母杂芳基环系统的一个原子移除一个氢原子而得。典型的杂芳基包括(但不限于)衍生自以下物质之基团：吖啶(acridine)、苯并咪唑(benzimidazole)、苯并异恶唑(benzisoxazole)、苯并二恶烷(benzodioxan)、苯并二恶茂(benzodioxole)、苯并呋喃、苯并吡喃酮(benzopyrone)、苯并噻二唑(benzothiadiazole)、苯并噻唑(benzothiazole)、苯并三唑(benzotriazole)、苯并恶嗪(benzoxaxine)、苯并恶唑(benzoxazole)、苯并恶唑啉(benzoxazoline)、咔唑(carbazole)、β-咔啉(β-carboline)、色满(chromane)、色烯(chromene)、啈啉(cinnoline)、呋喃(furan)、咪唑(imidazole)、吲唑(indazole)、吲哚(indole)、吲哚啉(indoline)、吲嗪(indolizine)、异苯并呋喃(isobenzofuran)、异色烯(isochromene)、异吲哚(isoindole)、异吲哚啉(isoindoline)、异喹啉(isoquinoline)、异噻唑(isothiazole)、异恶唑(isoxazole)、萘啶(naphthyridine)、恶二唑(oxadiazole)、恶唑(oxazole)、伯啶(perimidine)、啡啶(phenanthridine)、啡咯啉(phenanthroline)、啡嗪(phenazine)、呔嗪(phthalazine)、喋啶(pteridine)、嘌呤(purine)、吡喃(pyran)、吡嗪(pyrazine)、吡唑(pyrazole)、哒嗪(pyridazine)、吡啶(pyridine)、嘧啶(pyrimidine)、吡咯(pyrrole)、吡咯嗪(pyrrolizine)、喹唑啉(quinazoline)、喹啉(quinoline)、喹嗪(quinolizine)、喹喔啉(quinoxaline)、四唑、噻二唑(thiadiazole)、噻唑(thiazole)、噻吩(thiophene)、三唑(triazole)、呫吨(xznthene)、以及类似物,以及其各种氢基(hydro)异构体。在较佳具体实施例中，杂芳基为5-14员环杂芳基，而以5-10员杂芳基最为理想。
“杂芳基-杂芳基(Heteroaryl-Heteroaryl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指从环系统的一个碳原子移除一个氢原子而得的单价杂芳基，其中两个或若干个相同或不同的母杂芳环系统以一个单一键直接连接在一起，该直接环连接的环数比原有的母杂芳环系统的环数少一个。典型的杂芳基-杂芳基包括(但不限于)：联吡啶基，三吡啶基，吡啶基嘌呤基，联嘌呤基等等。在叙述碳原子数目时，此数目系指原有各母杂芳环系统的原子数。例如，5-15员环杂芳基-杂芳基指其中每个母杂芳环系统均含有5至15个原子之杂芳基-杂芳基，例如联吡啶基，三嘌呤基等等。最好是每个母杂芳环系统均各为5-15员杂芳族，如为5-10员杂芳族则更好。其中所有母杂芳环系统均为相同之杂芳基-杂芳基当然也很好。
“联杂芳基(Biheteroaryl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指具有两个相同的母杂芳环系统以单键直接连接的杂芳基-杂芳基。典型的联杂芳基包括(但不限于)联吡啶基、联嘌呤基、联喹啉基(biquinolinyl)等等。此类杂芳环系统最好是5-15员杂芳族环，是5-10员杂芳族环更好。
“杂芳烷基(Heteroarylalkyl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指非环烷基中的一个与碳原子(典型的是终端碳原子或sp3碳原子)连接的氢原子为杂芳基所置换。在希冀表示具体的烷基部分的情况下，使用杂芳烷基，杂芳烯基与/或杂芳炔基的术语。在较好的具体实施例中，杂芳烷基为6-21员杂芳烷基，例如杂芳烷基的烷基、烯基或炔基部分为(C1-C6)烷基，其杂芳基部分为5-15-员杂芳基。在更好的具体实施例中，杂芳烷基为6-13员杂芳烷基，例如其烷基、烯基或炔基部分为(C1-C3)烷基，而其杂芳基部分为5-10员的杂芳基。
“卤素(Halogen或Halo)”本身或作为其它取代基的一部份，除非另有说明，否则系指氟基、氯基、溴基和碘基。
“卤烷基(Haloalkyl)”本身或作为另一取代基的一部份，系指一个或若干个氢原子为卤基所置换的烷基。因此，术语“卤烷基”应包括单卤烷基类、二卤烷基类、三卤烷基类等直到全卤烷基类。例如“(C1-C2)卤烷基”这个词组应包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、1-氟乙基、1,1-二氟乙基、1,2-二氟乙基、1,1,1-三氟乙基、全氟乙基、等等。
以上所定义的基团可包括产生其它人所共认取代基的业内通用的字头与/或字尾。例如“烷基氧基(alkyloxy)”或“烷氧基(alkoxy)”系指一种分子式式为-OR”的基团，“烷基胺(alkylamine)”系指一种分子式为-NHR”的基团，而“二烷基胺(dialkylamine)”系指一种分子式为-NR”R”的基团，式中的R”均为烷基。又例如“卤烷氧基 (haloalkoxy)”或“卤烷基氧基(haloalkylxy)”系指一种分子式为–OR’”之基，式中R’”为卤烷基。
“保护基团”系指连接到分子中的反应官能团团时能屏蔽、减弱或防止官能团团反应性的原子团。在典型的情况下，保护基团如有需要可在合成过程中选择性的除去。保护基团的实例可参看Greene and Wuts,Protective Groups in Organic Chemistry,3rdEd.,1999,John Wiley&Sons,NY和Harrison et al.,Compendium of Synthetic OrganicMethods,Vols.1-8,1971-1996,John Wiley&Sons,NY。代表性胺基保护基团包括(但不限于)甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苯甲基、苯甲氧羰基(“CBZ”)、特丁氧羰基(“Boc”)、三甲基甲硅烷基(“TMS”)、2-三甲基甲硅烷基-乙烷磺酰基(“TES”)、三苯甲基和被取代之三苯甲基、烯丙氧羰基、9-芴基甲氧羰基(“FMOC”)、硝基蔾芦氧羰基(“NVOC”)和相似物。代表性羟基保护基团包括(但不限于)羟基被酰化或烷基化的基团，例如苯甲基和三苯甲基醚以及烷基醚、四氢吡喃醚，三烷甲硅烷基醚(例如TMS或TIPPS基)和烯丙醚。
“药物前体(Prodrug)”系指需要在使用状况下(例如在体内)转化方能释放活性2,4-嘧啶二胺药物的活性2,4-嘧啶二胺化合物(药物)。药物前体在转化成活性药物之前时常(但并不一定)不具备药理活性的。在典型情况下，药物前体通过屏蔽2,4-嘧啶二胺药物中的一个官能团而获得，该官能团据信乃是在指定的使用状况下与保护基团(progroup，其定义见下文)作用，促成相关部份转化(例如裂解)生成具备活性的2,4-嘧啶二胺药物所部份必需的。前体部份的裂解可自发进行(例如通过水解)，或者通过其它介质(例如脢、光、酸或碱)催化或诱导，或者改变某个物理或环境参数(例如改变温度)，或者将其置于该无力或环境参数之下。上述介质在使用条件下可以是内源的，例如投予药物前体的细胞内所存在的脢或者胃内的酸性条件，也可以从外源提供。
适合于屏蔽具备活性的2,4-嘧啶二胺化合物中的官能团以产生药物前体范围甚广的保护基团在本行业内是众所周知的。例如羟基官能团可被屏蔽成磺酸酯、酯或碳酸酯前体部份，该前体部份可在活体内水解提供羟基。胺官能团可屏蔽为酰胺、胺基甲酸酯、亚胺、尿素、苯膦基(phosphenyl)、膦酰基(phosphoryl)或次磺酰基(sulfenyl)前体部份，该前体部份可在活体内水解提供胺基。羧基可屏蔽为酯(包括硅烷基酯和硫酯类)、酰胺或酰基肼前体部份，并可在活体被水解提供羧基。适当保护基团的其它实例及其具体前体部份对熟谙本门技术者是显而易见的。
“保护基团(Progroup)”系指用于屏蔽具备活性的2,4-嘧啶二胺药物以形成前体部份时可将药物转化为药物前体的保护基团。在典型情况下，保护基团通过在指定的使用条件下可以裂解的键连接到药物的官能团之上。因此，保护基团为能在特定使用条件下裂解释放出官能团的前体部份的那一部分。作为具体实例，分子式为-NH-C(O)CH3的酰胺前体部份包括保护基团–C(O)CH3。
“Fc受体(Fc Receptor)”系指与免疫球蛋白的Fc部分(包含特异恒定区)结合的细胞表面分子家族的一个成员。每个Fc受体结合一个特殊类型的免疫球蛋白。例如Fcα受体(“FcαR”)结合IgA，FcεR结合IgE，FcγR结合IgG。
FcαR家族包括在IgA/IgM上皮传送的聚合Ig受体、骨髓特异受体RcαRI(也称为CD89)、Fcα/μR和至少二个交替IgA受体(最近综述参见Monteiro&van de Winkel，2003，Annu.Rev.Immunol.，见提前发表的电子版)。FcαRI表现于中性白血球、嗜伊红血球、单核细胞/巨噬细胞、树枝状细胞和星状(kupfer)细胞上。FcαRI包括一个α-链和在细胞质区具有激活主题(ITAM)和磷酸化Syk激脢的FcRγ同型二聚体。
FcεR家族包括两种类型，称为FcεRI和FcεRII(也称为CD23)。FcεRI为存在于肥大、嗜碱和嗜伊红血球细胞之中，将单体IgE锚定至细胞表面的高亲和力受体(以大约1010M-1之亲和力结合IgE)。FcεRI具有一个α-链、一个β-链和一个上述的γ-链同型二聚体。FcεRII为表现于单核吞噬细胞、B淋巴球、嗜伊红血球和血小板上的低亲和力受体。FcεRII包含一个单一多肽链，而不包括γ-链同型二聚体。
FcγR家族包括三种类型，称为FcγRI(也称为CD64)、FcY RII(也称为CD32)和FcYRIII(也称为CD16)。FcY RI为一种存在于肥大、嗜碱、单核、嗜中性白血球、嗜伊红血球、树枝状细胞和吞噬细胞之中并将单体IgG锚定至细胞表面的高亲和力受体(以大约108M-1之亲和力结合IgG1)。FcY R包括一个α-链和由FcαRI和FcεRI共享的γ-链二聚物。
FcγRII为表现于中性白血球、单核细胞、嗜伊红血球、血小板和B淋巴球上的低亲和力受体。FcγRII包括一个α-链，而不包括上述γ-链同型二聚体。
FcγRIII为表现于NK、嗜伊红血球、巨噬细胞、嗜中性白血球和肥大细胞上的低亲和力〔受体〕(以5x105M-1的亲和力结合IgG1)。它包括一个α-链和由FcαRI、FcεRI和FcγRI共享的γ-链同型二聚体。
熟谙本行技艺者应能看出以上各种Fc受体的次单元结构和结合性质以及表现它们的细胞类型并未完全定性。上述讨论只反映有关这些受体目前的技艺状态(参见例如Immunobiology:The Immune System in Health&Disease,5thEdition,Janeway et al.,Eds, 2001,ISBN0-8153-3642-x,Figure9.30at pp.371)，而无意限制本文所述化合物所能调节的无数受体信号级联。
“Fc受体介导之去颗粒作用(Fc Receptor-Mediated Degranulation)”或“Fc受体 诱导之去颗粒作用(Fc Receptor-Induced Degranulation)”系指由Fc受体的交联引发的Fc受体信号转导级联所导致的去颗粒作用。
“IgE诱导之去颗粒作用(IgE-Induced Degranulation)”或“FcεRI介导之去颗粒 作用(FcεRI-Mediated Degranulation)”系指由以FcεR1结合的IgE交联所引发的IgE受体信号转导级联所导致的去颗粒作用。交联可由IgE特异性过敏原或其它多价结合介质(例如抗IgE抗体)诱导。参看图2，在肥大与/或嗜碱细胞中，导致去颗粒作用的FcεRI信号级联可分成两个阶段：上游和下游。上游阶段包括所有钙离子动员之前的过程(图2中的“Ca2+”；也参见图3)。下游阶段包括钙离子动员和其所有下游过程。抑制由FcεRI介导去颗粒作用的化合物可作用于FcεRI介导信号转导级联之上的任何点。能选择性抑制上游FcεRI介导去颗粒作用的化合物作用于钙离子动员诱导点上游的FcεRI信号级联部分，对该部份起抑制作用。在以细胞为主的化验中，选择性抑制上游FcεRI介导去颗粒作用的化合物能抑制由IgE特异性过敏元或结合介质(例如抗IgE抗体)激活或激发的肥大细胞或嗜碱细胞等细胞的去颗粒作用，但对绕过FcεRI信号路径的去颗粒介质(例如钙离子载体艾诺霉素〔ionomycin〕和A23187)所激活或激发的细胞去颗粒作用却并无明显抑制作用。
“IgG诱导之去颗粒作用(IgG-Induced Degranulation)”或“FcγRI介导之去颗粒 作用(FcεRI-Mediated Degranulation)”系指由以FcγRI结合的IgG交联所引发的FcγRI信号转导级联所导致的去颗粒作用。交联可由IgE特异性过敏原或另一个多价结合介质(例如抗IgE抗体或片段抗体)诱导。像FcεRI信号级联一样，在肥大与嗜碱细胞中，FcγRI信号转导级联也导致去颗粒作用，并可分为同样的两个阶段：上游和下游。与FcεRI介导的去颗粒作用相似，选择性抑制上游FcγRI介导去颗粒作用的化合物作用于钙离子动员诱导点的上游处。在以细胞为主的化验中，选择性抑制上游FcγRI介导去颗粒作用的化合物能抑制由IgG特异性过敏元或结合介质(例如抗IgG抗体或片段)激活或激发的肥大细胞或嗜碱细胞等细胞的去颗粒作用，但对绕过FcγRI信号路径的去颗粒介质(例如钙离子载体艾诺霉素〔ionomycin〕和A23187)所激活或激发的细胞去颗粒作用却并无明显抑制作用。
“离子载体诱导之去颗粒作用(Ionophore-Induced Degranulation)”或“离子载 体介导之去颗粒作用(Ionophore-Mediated Degranulation)”系指接触钙离子载体(如诸如艾诺霉素或A23187等)时发生的细胞(例如肥大细胞或嗜碱细胞)去颗粒作用。
“Syk激脢(Syk Kinsase)”系指表现于B-细胞和其它造血细胞中的众所周知的72kDa非受体(细胞质)脾蛋白酪氨酸激脢。Syk激脢包括二个前后纵排之键结合至磷酸化免疫受体酪氨酸基激活主题(“ITAMs”)的一致Src-同源2(SH2)区、“连接体”区和催化区(Syk激脢的结构和功能之综述请参看：Sada et al.,2001,J.Biochem.〔Tokyo〕130:177-186;也请参看：Turner et al.,2000,Immunology Today21:148-154)。Syk激脢已广泛研究作为B-细胞受体(BCR)信号之效应物(Turner et al.,2000,同上)。Syk激脢对于调节自免疫受体导出的重要路径的多种蛋白质的酪氨酸磷酸化起着关键作用，例如Ca2+的动员和有丝分裂原激活的蛋白质激脢(MARK)级联(参看例如图二)和去颗粒作用。Syk激脢在嗜中性白血球中的整合蛋白信号发送中也扮演重要角色(参见例如Mocsai et al.2002,Immunity16:547-558)。
就使用于本文范围而言，Syk激脢包括确认属于Syk家族的、来自任何动物物种的激脢，包括(但不限于)人类、类人猿、牛、猪和啮齿类等的激脢。具体包括在内的有异构重整体(isoform)、接合变体、等位基因变体、突变体，包括自然存在者和人为制造者。该Syk激脢的氨基酸排序是人所共知的，可以从基因库(GENBANK)调阅。mRNA对人Syk激脢的不同异构重整体编码的具体实例可以用以下所列的登录索引号从基因库调阅，即：gi|21361552|ref|NM_003177.2|、gi|496899|emb|Z29630.1|HSSYKPTK[496899]和
gi|15030258|gb|BC011399.1|BC011399[15030258]，以上登录索引号摘录于此仅供参考。
其它家族的酪氨酸激脢可具有与Syk三维结构相似的活性部位或结合部位，熟谙此门技艺者应能体会这一点的价值。由于这个结构相似性，可以期望本文称为“Syk仿真物质”的激脢对已被Syk磷酸化基质的磷酸化起催化作用。因此，人们将会逐渐认识此类Syk仿真物、Syk仿真物扮演角色的信号转导级联、由Syk仿真物产生之生物反应、依赖Syk仿真的信号级联等，均可以本文所述的2,4-嘧啶二胺化合物调节，尤其是抑制。
“Syk依赖信号级联(Syk-Dependent Signaling Cascade)”系指Syk激脢在其中扮演一个角色的信号转导级联。该Syk-依赖信号级联的非限制实例包括：FcαRI，FcεRI，FcγRI，FcγRIII，BCR和整合蛋白信号级联。
“自体免疫性疾病(Autoimmune Disease)”指通常与非过敏性超敏反应(II型、III型与/或IV型超敏反应)相联系的疾病，此类超敏反应往往由患者本人对一种或若干种内源与/或外源免疫源物质的体液与/或细胞介导免疫反应所引发。此项自体免疫性疾病和与过敏性超敏反应(I型或IgE介导)相关的疾病是迥然不同的。
6.22,4-嘧啶二胺化合物
本发明的化合物通常为结构式(I)所示的2,4-嘧啶二胺化合物：
包括其盐、水合物、溶剂合物及N-氧化物，其中：
L1和L2各自独立选自由一个直接键和一个连接基构成的基团；
R2系选自亦可被一个或若干个相同或不同的R8取代的(C1-C6)烷基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之(C3-C8)环烷基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之环己基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之3-8员环杂烷基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之(C5-C15)芳基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之苯基和亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之5-15员环杂芳基；
R4系选自氢、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之(C1-C6)烷基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之(C3-C8)环烷基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之环己基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之3-8员环杂烷基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之(C5-C15)芳基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之苯基和亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之5-15员环杂芳基；
R5系选自R6、亦可被一个或若干个相同或不同的R8取代之(C1-C6)烷基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之(C1-C4)链烷基(alkanyl)、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之(C2-C4)烯基和亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之(C2-C4)炔基；
R6各自独立选自氢、负电性基、-ORd、-SRd、(C1-C3)卤烷氧基、(C1-C3)全卤烷氧基、-NRcRc、卤素、(C1-C3)卤烷基,(C1-C3)全卤烷基、-CF3、-CH2CF3、-CF2CF3、-CN、-NC、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、-N3、-S(O)Rd、-S(O)2Rd、-S(O)2ORd、-S(O)NRcRc、-S(O)2NRcRc、-OS(O)Rd、-OS(O)2Rd、-OS(O)2ORd、-OS(O)NRcRc、-OS(O)2NRcRc、-C(O)Rd、-C(O)ORd、-C(O)NRcRc、-C(NH)NRcRc、-OC(O)Rd、-SC(O)Rd、-OC(O)ORd、-SC(O)ORd、-OC(O)NRcRc、-SC(O)NRcRc、-OC(NH)NRcRc、-SC(NH)NRcRc、-[NHC(O)]nRd、-[NHC(O)]nORd、-[NHC(O)]nNRcRc和-[NHC(NH)]nNRcRc,、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之(C5-C10)芳基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之苯基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之(C6-C16)芳烷基、亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之5-10员杂芳基和亦可被一个或若干个相同或不同的R8基取代之6-16员杂芳烷基；
R8系选自Ra、Rb、被一个或若干个相同或不同的Ra或Rb取代的Ra、被一个或若干个相同或不同的Ra或Rb取代的-ORa、-B(ORa)2、-B(NRcRc)2、-(CH2)m-Rb、-(CHRa)m-Rb、-O-(CH2)m-Rb、-S-(CH2)m-Rb、-O-CHRaRb、-O-CRa(Rb)2、-O-(CHRa)m-Rb、-O-(CH2)m-CH[(CH2)mRb]Rb、-S-(CHRa)m-Rb、-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-O-(CH2)m-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-S-(CH2)m-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-O-(CHRa)m-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-S-(CHRa)m-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-NH-(CH2)m-Rb、-NH-(CHRa)m-Rb、-NH[(CH2)mRb]、-N[(CH2)mRb]2、-NH-C(O)-NH-(CH2)m-Rb、-NH-C(O)-(CH2)m-CHRbRb和-NH-(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)m-Rb；
Ra各独立选自氢、(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、环己基、(C4-C11)环烷基烷基、(C5-C10)芳基、苯基、(C6-C16)芳烷基、苯甲基、2-6员杂烷基、3-8员环杂烷基、吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基、4-11员环杂烷基烷基、5-10员杂芳基和6-16员环杂芳烷基；
Rb各独立选自以下之适当基：=O、-ORd、(C1-C3)卤烷氧基、-OCF3、=S、-SRd、=NRd、=NORd、-NRcRc、卤素、-CF3、-CN、-NC、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、=N2、-N3、-S(O)Rd、-S(O)2Rd、-S(O)2ORd、-S(O)NRcRc、-S(O)2NRcRc、-OS(O)Rd、-OS(O)2Rd、-OS(O)2ORd、-OS(O)2NRcRc、-C(O)Rd、-C(O)ORd、-C(O)NRcRc、-C(NH)NRcRc、-C(NRa)NRcRc、-C(NOH)Ra、-C(NOH)NRcRc、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)NRcRc、-OC(NH)NRcRc、-OC(NRa)NRcRc、-[NHC(O)]nRd、 -[NRaC(O)]nRd、-[NHC(O)]nORd、-[NRaC(O)]nORd、-[NHC(O)]nNRcRc、-[NRaC(O)]nNRcRc、-[NHC(NH)]nNRcRc和-[NRaC(NRa)]nNRcRc；
Rc各独立为Ra，或亦可为，Rc各自与其所连接的氮原子一起形成5-8员环杂烷基或杂芳基，该环杂烷基或杂芳基亦可包括一个或若干个相同或不同的额外杂原子并亦可被一个或若干个相同或不同的Ra或适当Rb基取代；
Rd各独立为Ra;
m各独立为1至3的整数；以及
n各独立为0至3的整数。
在结构式(I)之化合物中，L1和L2各自独立表示一个直接键或连接基。因此，熟悉该技术者应了解，取代基R2与/或R4可直接链接至其各自的氮原子或亦可通过连接基与其各自的氮原子隔开。采用何种连接基并非关键所在，典型的适当连接基包括(但不限于)(C1-C6)烷二基、(C1-C6)伸烷基和(C1-C6)杂烷二基，它们亦可各被一个或若干个相同或不同的R8基取代，其中R8如先前结构式(I)所定义。在一具体实施例中，L1和L2各自独立选自一个直接键、亦可被一个或若干个相同或不同的Ra、适当Rb或R9基取代之(C1-C3)烷二基、和亦可被一个或若干个相同或不同的Ra、适当Rb或R9基取代之1-3员杂烷二基，其中R9选自(C1-C3)烷基、-ORa、-C(O)ORa、亦可被一个或若干个相同或不同的卤素取代之(C5-C10)芳基、其亦可被一个或若干个相同或不同的卤素取代之苯基、亦可被一个或若干个相同或不同的卤素取代之5-10员杂芳基、和亦可被一个或若干个相同或不同的卤素取代之6员环杂芳基；Ra和Rb如先前结构式(I)所定义。可用以取代L1和L2的具体R9基包括-ORa、-C(O)ORa、苯基、卤苯基和4-卤苯基，其中Ra如先前结构式(I)所定义。
在另一具体实施例中，L1和L2各自独立选自伸甲基，伸乙基和伸丙基，它们亦可被R9基单取代，其中R9的定义如前所述。
在所有上述具体实施例中，可包括在R9基中的具体Ra基选自氢、(C1-C6)烷基、苯基和苯甲基。
在还有一个具体实施例中，L1和L2各为直接键，以使本发明的2,4-嘧啶二胺化合物为结构式(Ia)所示的化合物：
包括其盐、水合物、溶剂合物及N-氧化物，其中R2、R4、R5和R6如先前结构式(I)所定义。本发明的2,4-嘧啶二胺化合物的其它具体实施例的描述详见下文。
在结构式(I)和(Ia)之化合物的第一个具体实施例中，R2、R4、R5、R6、L1和L2分别如先前结构式(I)和(Ia)所定义，其先决条件为R2不为3,4,5-三甲氧基苯基、3,4,5-三(C1-C6)烷氧基苯基或者
其中R21、R22和R23分别如美国专利第6,235,746号(其内容以引文方式纳入此)之R1、R2和R3所定义。在第一个实施例的具体实施例中，R21为氢、卤基、亦可被一个或若干个相同或不同的R25基取代之直链或支链(C1-C6)烷基、羟基、亦可被一个或若干个相同或不同的苯基或R25基取代之(C1-C6)烷氧基、硫醇(-SH)、亦可被一个或若干个相同或不同的苯基或R25基取代之(C1-C6)烷硫基、胺基(-NH2)、-NHR26或-NR26R26；R22和R23各自独立为亦可被一个或若干个相同或不同的R25基取代之(C1-C6)直链或支链烷基；R25系选自卤基、羟基、(C1-C6)烷氧基、硫醇、(C1-C6)烷硫基、(C1-C6)烷基胺基和(C1-C6)二烷基胺基；R26各自独立为亦可被一个或若干个相同或不同的苯基或R25基取代之(C1-C6)烷基或-C(O)R27，其中R27为亦可被一个或若干个相同或不同的苯基或R25基取代之(C1-C6)烷基。
在第一个实施例的另一个具体实施例中，R21为亦可被一个或若干个相同或不同的卤基取代之甲氧基与/或R22和R23各自独立为亦可被一个或若干个相同或不同的卤基取代之甲基或乙基。
在结构式(I)和(Ia)化合物的第二个实施例中，R2、R4、R5和L2分别如先前描述的结构式(I)和(Ia)所定义，L1为直接键，R6为氢，其先决条件为R2不为3,4,5-三甲氧基苯基、3,4,5-三(C1-C6)烷氧基苯基或
其中R21,R22和R23如上述第一个实施例的定义相仿。
在第三个实施例中，结构式(I)和(Ia)的2,4-嘧啶二胺化合物排除一个或若干个下列化合物：
N2,N4-双(4-乙氧基苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R070790)；
N2,N4-双(2-甲氧基苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R081166)；
N2,N4-双(4-甲氧基苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R088814)；
N2,N4-双(2-氯苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R088815)；
N2,N4-双苯基-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R091880)；
N2,N4-双(3-甲基苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R092788)；
N2,N4-双(3-氯苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R067962)；
N2,N4-双(2,5-二甲基苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R067963)；
N2,N4-双(3,4-二甲基苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R067964)；
N2,N4-双(4-氯苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R0707153)；
N2,N4-双(2,4-二甲基苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R070791)；
N2,N4-双(3-溴苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺(R008958)；
N2,N4-双(苯基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺；
N2,N4-双(吗啉基)-5-氟基-2,4-嘧啶二胺;和
N2,N4-双〔(3-氯基-4-甲氧基苯基)〕-5-氟基-2,4-嘧啶二胺。
在第四个实施例中，结构式(I)和(Ia)之化合物排除以下结构式(Ib)的化合物：
其中R24为(C1-C6)烷基；R21、R22与R23如前述第一个具体实施例之定义相仿。
在第五个实施例中，结构式(I)和(Ia)的化合物排除美国专利第6,235,746号(其内容以引文方式纳入本文中)实例1-141中所述之化合物。
在第六个实施例中，结构式(I)和(Ia)之化合物排除此美国专利第6,235,746号中分子式(1)或分子式(Ia)(参看例如第1栏第48行至第7栏第49行和第8栏第9-36行所披露之内容，该项内容以引文方式纳入本文中)所定义之化合物。
在第七个实施例中，结构式(I)和(Ia)的化合物排除其中R5为氰基或-C(O)NHR，当R2为被取代之苯基时，其中R为氢或(C1-C6)烷基；R4为被取代或未被取代之(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、3-8员环杂烷基或5-15员杂芳基；R6为氢的化合物。
在第八个实施例中，结构式(I)和(Ia)的化合物排除由WO02/04429的分子式(I)和(X)所定义化合物或任何披露于WO02/04429(其披露内容以引文方式纳入本文中)中之化合物。
在第九个结构式(I)和(Ia)化合物的实施例中，如当R5为氰基或-–C(O)NHR，其中R为氢或(C1-C6)烷基；R6为氢，则R2为被取代之苯基以外之基团。
在第十个实施例中，结构式(I)和(Ia)的化合物排除R2与R4各自分别为被取代或未被取代之吡咯或吲哚环(该类环通过其环氮原子连接到分子的其余部分)的化合物。
在第十一个实施例中，结构式(I)和(Ia)的化合物排除由美国专利第4,983,608号的式(I)和(IV)所定义的化合物，或任何披露于美国专利第4,983,608号(其披露内容以引文方式纳入本文中)中的化合物。
熟谙此项技术者应能体会结构式(I)和(Ia)的化合物中，R2和R4可相同或不同，且可广泛改变这点的重要性。当R2与/或R4为任意取代的环时(例如任意取代的环烷基、环杂烷基、芳基和杂芳基)该环可通过任何可利用的碳或杂原子连接到分子的其余部分。任意取代基可连接到任何可利用的碳与/或杂原子。
在第十二个结构式(I)和(Ia)化合物的实施例中，R2与/或R4为任意被取代的苯基或任意被取代之(C5-C15)芳基，但其先决条件为：(1)当R6为氢时，R2不是3,4,5-三甲氧基苯基或3,4,5-三(C1-C6)烷氧基苯基；(2)当R2为3,4,5-三取代苯基时，则3-位和4-位的取代基不同时是甲氧基或(C1-C6)烷氧基；或(3)当R6是氢和R4是(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、3-8员环杂烷基或5-15员杂芳基时，R5是除氰基以外的基团。或者R2的先决条件亦可按第一个和第二个实施例所描述的先决条件。任意取代之芳基或苯基可通过任何可利用之碳原子连接到分子的其余部分。任意取代之苯基的具体实例包括被相同或不同的R8基任意单取代、双取代或三取代的苯基，其中R8如前述结构式(I)所定义，并取决于前面所述的先决条件。当苯基为单取代基时，R8取代基可位于邻位，间位或对位位置。在位于邻位、间位或对位位置时，R8最好选自(C1-C10)烷基、(C1-C10)支链烷基、亦可被一个或若干个相同或不同的Rb基所取代之-O-C(O)ORa,、-O-(CH2)m-C(O)ORa、-C(O)ORa、-O-(CH2)m-NRcRc、-O-C(O)NRcRc、-O-(CH2)m-C(O)NRcRc、-O-C(NH)NRcRc、-O-(CH2)m-C(NH)NRcRc和 -NH-(CH2)m-NRcRc，其中m、Ra和Rc如先前结构式(I)所定义。在这些化合物的义工实施例中，-NRcRc是亦可包括一个或若干个相同或不同额外杂原子的5-6员杂芳基。此类5-6员杂芳基的具体实例包括(但不限于)恶二唑基、三唑基、噻唑基、恶唑基、四唑基和异恶唑基。
在这些化合物的另一实施例中，-NRcRc为5-6员饱和环杂烷基环，该环亦可包括一个或若干个相同或不同的杂原子。该环杂烷基的具体实例包括(但不限于)吡咯啶基、吡唑啶基、咪唑啶基、哌啶基、哌嗪基和吗啉基。
在这些化合物之还有一个实施例中，Ra各自独立为(C1-C6)烷基与/或-NRcRc各自为-NHRa，其中Ra为(C1-C6)烷基。在一个具体实施例中，R8为-O-CH2-C(O)NHCH3。
在另一个具体实施例中，R8为-OH。
当苯基为双取代苯基或三取代苯基时，R8取代基可位于任何位置的组合。例如，R8取代基可位于2,3-、2,4-、2,5-、2,6-、3,4-、3,5-、2,3,4-、2,3,5-、2,3,6-、2,4,5-、2,4,6-、2,5,6-或3,4,5-位置。在一个包括双取代苯基化合物的实施例中，取代基位于3,4位之外的位置。在另一个实施例中，它们位于3,4位。在一个包括三取代苯基化合物的实施例中，取代基位于3,4,5以外的位置，或者亦可不让两个取代基同时位于3,4位之上。在另一个实施例中，取代基位于3,4,5位之上。
此种双取代苯基和三取代苯基中，R8取代基的具体实例包括上述各种邻位、间位和对位取代苯基相关的R8取代基。
在另一个具体实例中，可用于取代此种双取代苯基和三取代苯基的该R8取代基包括(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、甲氧基、卤基、氯基、(C1-C6)全卤烷基、-CF3、(C1-C6)全卤烷氧基和-OCF3。在较好的实施例中，该R8取代基位于3,4或3,5位。较好的双取代苯基环的具体实例包括3-氯基-4-甲氧基-苯基、3-甲氧基-4-氯苯基、3-氯基-4-三氟甲氧基苯基、3-三氟甲氧基4-氯基-苯基、3,4-二氯基-苯基、3,4-二甲氧基苯基和3,5-二甲氧基苯基，其先决条件为：(1)如R4为上述定义的苯基之一，R5和R6各为氢时，则R2不为3,4,5-三(C1-C6)烷氧基苯基或3,4,5-三甲氧基苯基；(2)如R2为3,4-二甲氧基苯基R5和R6各为氢时，则R4不为3-(C1-C6)烷氧基苯基、3-甲氧基苯基、3,4-二-(C1-C6)烷氧基苯基或3,4-二甲氧基苯基；(3)当R4为3-氯基-4-甲氧基苯基、R5为卤基或氟基，且R6亦可为氢时，则R2不为3-氯基-4-(C1-C6)烷氧基苯基或3-氯基-4-甲氧基苯基；或(4)如R4为3,4-二氯苯基，R5为氢、(C1-C6)烷基、甲基、卤基或氯基，且R6亦可为氢时，则R2并非在对位位置为(C1-C6)烷氧基单取代的苯基，上述(C1-C6) 烷氧基亦可被一个或若干个相同或者不同的Rb、-OH或-NRcRc基所取代，其中Rb和Rc与前面结构式(I)的描述相仿；与/或(5)R2与/或R4并非3,4,5-三(C1-C6)烷氧基苯基或3,4,5-三甲氧基苯基，特别是在R5和R6各为氢时。
在包括三取代苯基化合物的另一个实施例中，三取代苯基具有以下结构式：
其中：R31为甲基或(C1-C6)烷基；R32为氢、甲基或(C1-C6)烷基；R33为卤基。
在第十三个结构式(I)和(Ia)化合物的实施例中，R2与/或R4为亦可被取代的杂芳基。与此第十三个实施例相符的典型杂芳基包含5到15个(更典型的情况是5到11个)环原子，并包括一、二、三或四个选自N、NH、O、S、S(O)和S(O)2的相同或不同的杂原子或杂原子基。亦可被取代的杂芳基可通过任何可利用的碳原子或杂原子分别连接(但在典型的情况下通过碳原子连接)到其各个C2或C4氮原子或连接基L1或L2之上。此类任意取代基可相同或者不同，并可连接到任何可利用的碳原子或杂原子。在这些化合物的一个实施例中，R5为除溴基、氮基、三氟基甲基、氰基或–C(O)NHR以外的基，其中R为氢或(C1-C6)烷基。在这些化合物之另一实施例中，当R2和R4各为被取代或未被取代的吡咯或吲哚时，则该环通过环碳原子连接至分子的其余部分。在包括亦可被取代的杂芳基化合物之另一实施例中，该杂芳基是未被取代或被一个到四个相同或不同的R8基取代的杂芳基，其中R8如先前结构式(I)所定义。此类亦可被取代的杂芳基的具体实例包括(但不限于)下列杂芳基：
其中：
p是一至三的整数；
每个各自代表一个单键或者双键；
R35是氢或者R8,其中R8如上述结构式(I)所定义；
X选自包括CH、N和N-O的基团；
每个Y各自选自包括O、S和NH的基团；
每个Y1各自选自包括O、S、SO、SO2、SONR36、NH和NR37的基团；
每个Y2各自选自包括CH、CH2、O、S、N、NH和NR37的基团；
R36是氢或烷基；
R37选自包括氢和一个保护基的基团，最好是氢和或者一个选自以下各基的基团，即：Ra、Rb-CRaRb-O-C(O)R8、-CRaRb-O-PO(OR8)2、-CH2-O-PO(OR8)2、-CH2-PO(OR8)2、-C(O)-CRaRb-N(CH3)2、-CRaRb-O-C(O)-CRaRb-N(CH3)2、-C(O)R8,-C(O)CF3和-C(O)-NR8-C(O)R8；
A选自包括O、NH和NR38的基团；
R38选自包括烷基与芳基的基团；
R9、R10、R11和R12各自相互独立，分别选自包括烷基、烷氧基、卤基、卤烷氧基、胺烷基和羟烷基的基团，或者R9和R10与/或R11和R12一起形成一种缩酮；
每个Z各选自羟基、烷氧基、芳氧基、酯、胺基甲酸酯和磺酰基；
Q选自包括-OH、OR8、-NRcRc、-NHR39-C(O)R8、-NHR39-C(O)OR8、-NR39-CHR40-Rb、-NR39-(CH2)m-Rb和-NR39-C(O)-CHR40-NRcRc的基团；
R39和R40各自相互独立，选自包括氢、烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基和NHR8的基团；以及
Ra、Rb和Rc如先前结构式(I)所定义。Q的较佳Rb取代基选自自-C(O)OR8、-O-C(O)R8、-O-P(O)(OR8)2和-P(O)(OR8)2基团。
在上述杂芳基的一个实施例以及其它根据本发明此实施例的5-15员杂芳基中，R8各独立选自包括Rd、-NRcRc、-(CH2)m-NRcRc、-C(O)NRcRc、-(CH2)m-C(O)NRcRc、-C(O)ORd、-(CH2)m-C(O)ORdand-(CH2)m-ORd的基团，其中m、Rc和Rd如先前结构式(I)所定义。
在一个具体实施例中，Rd与/或Rc选自包括Ra和亦可被一个或若干个相同或不同的羟基、胺基或羧基取代的(C3-C8)环烷基的基团。
在上述杂芳基的又一具体实施例中，各R35为一个氢原子、一个(C1-C6)碳链(包括甲基、乙基、异丙基)、一个环烷基(包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基)、一个其中x=1-8、-CH2CONHMe、-CH2CH2NHMe、-CH2CH2CONHMe、-CH2CH2CH2NHMe或者-CH2CH2CH2OCH3。
在上述杂芳基的又一个具体实施例中，芳族环的连接位置在5位或6位。应理解的是R2或R4均可利用在本描述全过程中所述及的杂芳基。
在第十四个结构式(I)和(Ia)化合物的实施例中，R2和R4各自分别为亦可被取代的苯基、芳基或杂芳基，其先决条件为：(1)如L1为直接键及R6(亦可包括R5)为氢时，则R2为除3,4,5-三甲氧基苯基或3,4,5-三(C1-C6)烷氧基苯基以外的基团；(2)如L1和L2各为直接键，R6为氢，R5为卤基时，则R2和R4不得各自同时为3,4,5-三甲氧基苯基或3,4,5-三(C1-C6)烷氧基苯基；(3)如R4为3-甲氧基苯基或3-(C1-C6)烷氧基苯基，R2为3,4,5-三取代苯基时，则位于3位和4位的取代基不得同时为甲氧基或(C1-C6)烷氧基；(4)如R2为被取代苯基，R6为氢时，则R5为除氰基或C(O)NHR 以外的基团，其中R为氢或(C1-C6)烷基；与/或(5)如R2和R4各自独立为被取代或未被取代的吡咯或吲哚时，则吡咯或吲哚通过环碳原子连接到分子的其余部份。或者R2亦可采用第一个或第二个实施例所述的先决条件。
在这个本发明的第十四个实施例中，R2和R4取代基可以相同或者不同。具体的亦可被取代苯基、芳基与/或杂芳基包括以上第十二个和第十三个实施例中所列举的此类基团。
在第十五个结构式(I)和(Ia)化合物的实施例(包括上述第一至第十四个实施例)中，R6为氢，R5为负电性基。熟谙此项技艺者练应能看出，负电性基是对电子具有较大吸引力，能将其吸引到本身之上的原子或原子基团。符合第十四个实施例要求的负电性基的具体实例包括(但不限于)-CN、-NC、-NO2、卤基、溴基、氯基、氟基、(C1-C3)卤烷基、(C1-C3)全卤烷基、(C1-C3)氟烷基、(C1-C3)全氟烷基、-CF3、(C1-C3)卤烷氧基、(C1-C3)全卤烷氧基、(C1-C3)氟烷氧基、(C1-C3)全氟烷氧基、-OCF3、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)CF3和-C(O)OCF3。在一个具体实施例中，负电性基为含卤素负电性基，例如-OCF3、-CF3、溴基、氯基或氟基。在另一个具体实施例中，R5为氟基，其前提是其化合物并非第三实施例所述的任何化合物。
在第十六个实施例中，结构式(I)和(Ia)的化合物为以下结构式(Ib)的化合物：
以及其盐、水合物、溶剂合物和N-氧化物，其中R11、R12、R13和R14各自独立选自包括氢、羟基、(C1-C6)烷氧基和-NRcRc的基团；R5、R6和Rc如先前结构式(I)所定义，其先决条件为如R13、R5和R6各为氢，则R11和R12不得同时为甲氧基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤烷氧基。
在第十七个实施例中，结构式(I)和(Ia)的化合物为以下结构式(Ic)的化合物：
以及其盐、水合物、溶剂合物和N-氧化物，其中：
R4选自包括5-10员杂芳基和3-羟苯基的基团；
R5为F或-CF3；
R8为–O(CH2)m-Rb,其中m和Rb如先前结构式(I)所描述。在一个具体实施例中，R8是-O-CH2-C(O)NH-CH3与/或R4第十三个实施例所述的杂芳基。
在第十八个实施例中，结构式(I)和(Ia)的化合物包括任何选自表一的化合物，此类化合物能抑制Fc受体信号转导级联、Syk激脢活性、Syk激脢依赖受体信号转导级联或活体外检定所观察到的细胞去颗粒作用，亦可规定其先决条件为该化合物不得为上述第三个实施例与/或其它实施例所排除的化合物。在一项具体实施例中，此类化合物经活体外去颗粒作用检定(例如实例部份所描述的去颗粒作用检定方法之一)，具有约20μM或小于20μM的IC50。
在第十九个实施例中，结构式(I)和(Ia)的化合物包括选自表一的任何化合物，根据活体外检定(例如在实例部份所描述的检定方法之一)测定，该类化合物可抑制
FcγR1或FcεR1受体级联，具有约20μM或小于20μM的IC50，亦可规定其先决条件是该类化合物不得为上述第三个实施例与/或其它实施例所排除的化合物。
在第二十个实施例中，结构式(Ia)的化合物为其中的R2选自包括：
基团的化合物；
其中R4、R8、Ra、Rb、Rc、Rd如以上所描述，R5为氟原子；R6为氢原子，每个R21各为一个卤原子或亦可为一个或若干个相同或者不同的卤素基团取代的烷基，R22和R23彼此独立，分别为一个氢原子、亦可为一个或若干个相同或者不同的卤素基团取代的甲基，每个m分别为1至3的整数，每个n分别为0至3的整数。
在第二十一个实施例中，结构式(Ia)的化合物为其中的R4是的化合物，式中的R9和R10如以上所定义，并进一步各独立包括一个氢原子，R2是为一个或若干个相同的R8基或者基所取代的苯基，后者中的R35如以上所定义。在一个特殊方面，当R2为苯基时，一个或若干个R8选自一个卤素和环上烷氧基。在一个方面，苯基为以一个或若干个相同的R8基置换的双取代或者三取代苯基。
在第二十二个实施例中，结构式(Ia)的化合物其中为其中的R4是而R2是为一个或若干个R8基团所取代的苯基的化合物。在一个特定方面，一个或若干个R8选自一个卤素和一个烷氧基。在一个方面，苯基是为一个或若干个相同的R8基所双取代或三取代的苯基。
在第二十三个实施例中，结构式(Ia)的化合物为其中的R4是为一个或若干个相同的R8基所取代的苯基，其中的R2是其中的R35如以上所定义的化合物。在特殊的实施例中，R4苯基是由相同的或者不同的卤素原子所双取代或者三取代的苯基。在另一个实施例中，R4是由一个卤素原子单取代的苯基。在一个方面，R35是羟烷基。在某些方面，羟烷基可进一步官能化为酯基、甲氨酸酯(carbamate)等。
在第二十四个实施例中，结构式(Ia)的化合物为其中的R4是基团，式中的R35如以上所定义，R2是由一个或若干个R8基取代的苯基的化合物。在一个特定方面，R35是一个氢原子或者一个烷基。在另一个方面，R2是由相同或者不同的R8基(特别是卤素原子)所置换的双取代或三取代苯基。
在第二十五个实施例中，结构式(Ia)的化合物为其中的R4是基团，式中的R35如以上所定义，R2是基团，式中的R9和R10如以上所定义，且进一步各包括一个氢原子的化合物。在一个方面，R35是一个氢原子或者一个烷基(例如甲基)，R9和R10是烷基基团(例如甲基基团)。
在第二十六个实施例中，结构式(Ia)的化合物为其中的R4由相同或者不同的R8基团置换的双取代苯基，R2是基团，式中的R35如以上所定义的化合物。在某些方面，苯基由一个卤素原子或者一个烷氧基(例如甲基)所置换。在某些实施例中，R35是一个氢原子、一个烷基(例如甲基)、或一个羟烷基。在某些方面，羟烷基可进一步官能化为酯基、甲氨酯基(carbamate)等。
在第二十七个实施例中，结构式(Ia)的化合物为其中的R4是 式中的R8和Rc如以上所定义，R2是是由一个或若干个相同的R8基团置换的双取代或者三取代苯基的化合物。在一个特定方面，Rc是一个氢原子或者一个烷基。在另一个方面，R2苯基由相同的或者不同的R8基团(尤其是卤素原子或者基团)双取代或者三取代。
在第二十八个实施例中，结构式(Ia)的化合物为其中的R4是式中的Y1、Y2和每个R35分别如以上所定义，R2是基团，式中R35如以上所定义的化合物。在第二十八个实施例中就R4而言，Y1是氧，Y2是NH，一个或若干个R35或者R4部份是烷基(尤其是甲基)。在第二十八个实施例的某些方面，R4部份的两个R35形成一个偕二烷基部份，尤其是与NH相邻的、表示为的偕二甲基部份。在第二十八个实施例的某些部份，就R2而言，R35是一个氢原子或者一个烷基(尤其是甲基)。
在第二十九个实施例中，结构式(Ia)的化合物为其中的R4是式中的R9和R10如以上所定义，或者是一个苯基的化合物。在一个方面，苯基由一个或若干个相同的R8基所双取代或者三取代。苯基尤其可为一个或若干个卤素原子所双取代或者三取代，该卤素原子可以相同，也可以不同。R2在第二十九个实施例中是基团，式中的R35如以上所定义。在第二十九个实施例的一个方面，R2的R35并非甲基。在第二十九个实施例的还有一个方面，R2是或者基团。
在适用于第一个直到第二十九个实施例的第三十个实施例中，R5是卤素原子，例如氟，R6是氢原子。
同样也具体描述的是上述第一个直到第三十个实施例的组合。
熟谙该项技术者应能体会本文所述2,4-嘧啶二胺化合物可包括由保护基团屏蔽而产生药物前体的官能团这点的重要价值。此类药物前体在转化成活性药物形式之前通常(但并不一定)不具备药理活性。的确，许多在下述表一中描述的活性2,4-嘧啶二胺化合物包括在使用条件下可水解或以其它方式裂解的前体部份。例如，酯基当暴露在胃的酸性条件下时，一般因酸催化水解而产生母羧酸；或在暴露在肠道或血液的碱性条件下时，发生碱催化水解。因此，当对患者口服投药时，包括酯部分的2,4-嘧啶二胺可视为是对应羧酸的药物前体，不管其酯形式是否具有药理活性。在表一中，许多本发明的含酯2,4-嘧啶二胺在它们的酯(“药物前体”)形式时是具有活性的。
在本发明的药物前体中，任何可利用的官能部分均可用保护基团屏蔽，得出药物前体。2,4-嘧啶二胺化合物内可以用保护基团屏蔽，将其包含在前体部份内的包括(但不限于)胺类(一级和二级)、羟基类、硫基类(硫醇)、羧基类等。无数适合于屏蔽此类官能团以得出在所要求的使用条件下裂解的保护基团在本行业中业已众所周知。所有的这些保护基团(单个基团或者其组合)均可包括在本发明的药物前体中。
在一项说明性实施例中，本发明的药物前体为结构式(I)的化合物中的Rc和Rd除了原先定义的选择之外，还可以是保护基团。
结构式(I)的2,4-嘧啶二胺中连接到N2和N4的氢如果用取代基置换，将会对化合物活性产生不利影响。然而，正如熟谙此艺者所知，这些氮可包含在前体部份中，在使用条件下裂解产生结构式(I)的2,4-嘧啶二胺。因此，在另一实施例中，本发明的药物前体为一项结构式(II)所示的化合物：
包括其盐、水合物、溶剂合物及N-氧化物，其中：
R2、R4、R5、R6、L1和L2如先前结构式(I)所定义；及
R2b和R4b各自独立为保护基团。本发明此实施例的保护基团的具体实例包括(但不限于)(C1-C6)烷基、-C(O)CH3、-C(O)NHR36和–S(O)2R36,其中R36为(C1-C6)烷基、(C5-C15)芳基和(C3-C8)环烷基。
在结构式(II)的药物前体中，各种取代基可如上述第一个到第二十个实施例所述的式(I)和(Ia)的化合物，或此类实施例的组合。
熟谙此项技术者应懂得本发明的许多化合物和药物前体，以及本文所具体描述与/或举例说明的各种化合物种类可呈现互变异构性、构形异构性、几何异构性及光学异构性的重要意义。例如，本发明化合物和药物前体可包括一个或若干个掌性中心与/或双键，因此可存在立体异构体，例如双键异构体(即几何异构体)、对映异构体和非对映异构体和其混合物(例如消旋混合物)。作为另一个实例，本发明化合物和药物前体可存在若干种互变异构形式，包括烯醇式、酮式和两者的混合物。由于规格说明书和专利申请范围内的各种化合物名称、公式和化合物图标只能显示其中一个可能的互变异构体、构形异构体、光学异构体或几何异构体，故应了解本发明包括具有本文所述的一种或多种功能及其各种异构形式组合的化合物或药物前体的任何互变异构形式、构形异构形式、光学异构形式与/或几何异构形式以及上述各种异构形式的组合。在2,4-嘧啶二胺核心结构的有限旋转中，出现阻转异构体(atrop isomers)也是可能的，并且也具体包括在本发明化合物的范围之内。
而且，熟谙此艺者也应懂得当所列的可能取代基中包括由于化合价或其它原因不能用来置换特定基团的取代基时，该列表的用意应在上下文中理解为只包括适合于置换该特定基团的取代基。例如，熟谙此艺者应懂得虽然Rb的全部所列选择均可用来置换烷基，但某些选择(例如=O)却不能用来置换苯基。应将其理解为此处的用意指只包括可使用的取代基对组合。
本发明化合物与/或药物前体可以通过其化学结构或者化学名称识别。当化学结构与化学名称冲突时，特定化合物的识别以化学结构为准。
取决于各种取代基的性质，本发明的2,4-嘧啶二胺化合物和药物前体可制备为盐的形式。此类盐包括适合于医药用途的盐(“医药上可接受的盐”)，适合于兽医用途的盐等等。此类盐可衍生自酸或碱，如本行业人所共知的那样。
在一个实施例中，盐为医药上可接受的盐。通常，医药上可接受的盐为大体上保留母化合物的一个或若干个所希冀药理活性且适合于投药于人类的盐。医药上可接受的盐包括与无机酸或有机酸所形成的酸加成盐。适合于制备医药上可接受的酸加成盐的无机酸包括(仅为举例说明而非限制)氢卤酸(例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸等)、硫酸、硝酸、磷酸等。适合于制备医药上可接受的酸加成盐的有机酸包括(仅为举例说明而非限制)乙酸、三氟乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、草酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、顺-丁烯二酸、反-丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、棕榈酸、苯甲酸、3-(4-羟苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、烷磺酸(例如甲烷磺酸、乙烷磺酸、1,2-乙烷-二磺酸，2-羟乙烷磺酸等)、芳磺酸(例如，苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸)、环芳磺酸(例如樟脑磺酸等)、4-甲基双环〔2.2.2〕-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、榖氨酸、羟萘酸、水杨酸、硬脂酸、己二烯二酸等。
医药上可接受的盐也包括在酸性质子存在于母化合物时，以金属离子(例如，碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)、铵离子置换所形成的盐，或者与有机碱(例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基还原葡萄糖胺、吗啉、哌啶、二甲胺、二乙胺等)形成的配位物。
本发明的2,4-嘧啶二胺化合物以及其盐也可制备为水合物、溶剂合物和N-氧化物形式，如本行业中人所共知的那样。
6.3合成方法
本发明的化合物和药物前体可以采用市场供应的起始原料与/或以常规合成方法制备的起始原料通过多种不同合成路径合成。适合于合成本发明的2,4-嘧啶二胺化合物和药物前体的恰当方法举例已见于美国专利第5,958,935号，所披露内容将以引文方式纳入本文中。描述本发明的许多化合物和药物前体以及其中间体合成的具体实例将在实例部份提供。所有结构式(I)、(Ia)和(II)的化合物都可通过对这些方法作常规变动进行制备。
可用以合成本发明之2,4-嘧啶二胺化合物的各种合成路径举例将在一项流程(I)-(XI)中进行描述。在流程(I)-(XI)中，相似数目的化合物具有相似的结构。对这些方法可在常规变动，以适合于合成结构式(II)的药物前体。
在一个作为举例的实施例中，化合物可如以下流程(I)所举例说明的方法从被取代或未被取代的尿嘧啶或硫尿嘧啶进行合成：
流程(I)
在流程(I)中，R2、R4、R5、R6、L1和L2如先前结构式(I)所定义，X为卤素(例如，F、Cl、Br或I)，Y和Y’各自独立为选自包括O和S的基团。在流程(I)中，在标准条件下用标准卤化剂POX3(或其它标准卤化剂)使尿嘧啶或硫尿嘧啶2在2位和4位被二卤化而产生2,4-双卤嘧啶4。取决于嘧啶4上的R5取代基，C4位置的卤化物比C2位置的卤化物的反应性更倾向于亲核剂。这个反应性差异可用来合成结构式(I)的2,4-嘧啶二胺，首先令2,4-双卤嘧啶4与1当量的胺10反应，产生4N-取代-2-卤基-4-嘧啶胺8，接着与胺6反应产生结构式(I)的2,4-嘧啶二胺。2N,4N-双(取代)-2,4-嘧啶二胺12和14可以分别通过令2,4-双卤嘧啶4与过量的6或10反应而获得。
在大多数情况下，C4卤化物反应性较倾向于亲核剂，如流程中所示。然而，熟谙该项技艺者应能看出，R5取代基是哪一个取代基可以改变此反应性的性质。例如，当R5为三氟甲基时，获得4N-取代-4-嘧啶胺8和相应的2N-取代-2-嘧啶胺的50:50混合物。不管R5取代基为何种取代基，反应部位的选择性可通过调节溶剂和其它合成绦件(例如温度)加以控制，如本行业中众所周知的那样。
反应混合物以微波加热时，流程(I)中所描述反应的速度可以加快。以这种方式加热时，可使用以下条件：在史密斯反应器(Personal Chemistry)中于封闭管内(20巴压力下)在乙醇中加热到175°C，保持5-20分钟。
尿嘧啶或硫尿嘧啶2的起始物质可购自从商业来源或以有机化学标准技术制备。可作为起始物质使用于流程(I)的市售尿嘧啶和硫尿嘧啶包括(仅作举例说明而并不限于)：尿嘧啶(Aldrich#13,078-8;CAS Registry66-22-8)；2-硫基-尿嘧啶(Aldrich#11,558-4；CAS Registry141-90-2)、2,4-二硫尿嘧啶(Aldrich#15,846-1；CAS Registry2001-93-6)、5-乙酰尿嘧啶(Chem.Sources Int’l2000；CAS Registry6214-65-9)、5-叠氮基尿嘧啶、5-胺基尿嘧啶(Aldrich#85,528-6；CAS Registry932-52-5)、5-溴尿嘧啶(Aldrich#85,247-3；CAS Registry51-20-7)、5-(反式-2-溴乙烯基)-尿嘧啶(Aldrich#45,744-2；CASRegistry69304-49-0)、5-(反式-2-氯乙烯基)-尿嘧啶(CAS Registry81751-48-2)、5-(反式-2-羧乙烯基)-尿嘧啶、尿嘧啶-5-羧酸(2,4-二羟基嘧啶-5-羧酸水合物；Aldrich#27,770-3；CAS Registry23945-44-0)、5-氯尿嘧啶(Aldrich#22,458-8；CAS Registry1820-81-1)、5-氰基尿嘧啶(Chem.Sources Int’l2000；CAS Registry4425-56-3)、5-乙基尿嘧啶(Aldrich#23,044-8；CAS Registry4212-49-1)、5-乙烯基尿嘧啶(CAS Registry37107-81-6)、5-氟尿嘧啶(Aldrich#85,847-1；CAS Registry51-21-8)、5-碘尿嘧啶(Aldrich#85,785-8；CAS Registry696-07-1)、5-甲基尿嘧啶(胸腺嘧啶；Aldrich#13,199-7；CASRegistry65-71-4)、5-硝基尿嘧啶(Aldrich#85,276-7；CAS Registry611-08-5)、尿嘧啶-5-胺基磺酸(Chem.Sources Int’l2000；CAS Registry5435-16-5)、5-(三氟甲基)-尿嘧啶(Aldrich#22,327-1；CAS Registry54-20-6)、5-(2,2,2-三氟乙基)-尿嘧啶(CASRegistry155143-31-6)、5-(五氟乙基)-尿嘧啶(CAS Registry60007-38-3)、6-胺基尿嘧啶(Aldrich#A5060-6；CAS Registry873-83-6)、尿嘧啶-6-羧酸(乳清酸；Aldrich#0-840-2；CAS Registry50887-69-9)、6-甲基尿嘧啶(Aldrich#D11,520-7；CASRegistry626-48-2)、尿嘧啶-5-胺基-6-羧酸(5-胺基乳清酸；Aldrich#19,121-3；CASRegistry#7164-43-4)、6-胺基-5-亚硝基尿嘧啶(6-胺基-2,4-二羟基-5-亚硝基嘧啶；Aldrich#27,689-8；CASRegistry5442-24-0)、尿嘧啶-5-氟基-6-羧酸(5-氟乳清酸；Aldrich#42,513-3；CASRegistry00000-00-0)和尿嘧啶-5-硝基-6-羧酸(5-硝基乳清酸；Aldrich #18,528-0；CASRegistry600779-49-9)。其它的5-、6-和5,6-取代的尿嘧啶和硫尿嘧啶可购自加拿大艾伯塔省埃德蒙顿的General Intermediates of Canada,Inc.,Edmonton,Alberta,CA(网址为：www.generalintermediates.com)与/或法国的Interchim(网址为：www.interchim.com)，或者用标准的技术制备。无数课本参考书目提及适当的合成方法，请参看下文叙述。
胺6和10可购自商业来源，亦可用标准技术合成。例如，适当的胺可使用标准化学方法从硝基先质合成。具体反应实例详见实例部份。也请参看Vogel，1989，PracticalOrganic Chemistry，Addison Wesley Long-man,Ltd.and John Wiley&Sons，Inc。
熟谙此项技艺者应能认识到在某些场合下，胺6和10与/或尿嘧啶或硫尿嘧啶2上的取代基R5与/或R6可能包含需要在合成中加以保护的官能团。所应使用的保护基团的确切类别取决于所保护官能团的类别，对于熟谙此项技艺者这是显而易见的。选择适当保护基团的原则及其连接及移除的合成策略，可参看例如Greene&Wuts,Protective Groups inOrganic Synthesis〔有机合成中的保护基团〕,3d Edition,John Wiley&Sons,Inc.,NewYork(1999)和和其中所引用的参考资料(以下引用时略作“Greene＆Wuts”)。
以下的流程(Ia)将举例说明一个用5-氟尿嘧啶(Aldrich#32,937-1)作为起始物质的流程(I)的具体实施例：
流程(Ia)
在流程(Ia)中，R2、R4、L1和L2如先前流程(I)所定义。根据流程(Ia)，5-氟尿嘧啶3与POCl3卤化，得出2,4-二氯基-5-氟嘧啶5，然后与过量胺6或10反应分别产生N2，N4-双取代的5-氟基-2,4-嘧啶二胺11或13。不对称的2N,4N-双取代-5-氟基-2,4-嘧啶二胺9可通过令2,4-二氯基-5-氟嘧啶5与一个当量的胺10反应(以得出2-氯基-N4-取代-5-氟基-4-嘧啶胺7)然后与一个或若干个当量的胺6反应而获得。
在另一个实施例举例中，本发明的2,4-嘧啶二胺化合物可按以下的流程(IIa)和(IIb)所举例说明，从被取代或未被取代的胞嘧啶合成：
流程(IIa)
流程(IIb)
在流程(IIa)和(IIb)中，R2、R4、R5、R6、L1、L2和X如先前流程(I)所定义，PG表示保护基团。参看流程(IIa)，胞嘧啶20的C4环外胺先以适当的保护基团PG保护，以得出N4-保护的胞嘧啶22。关于可使用于这一场合的保护基团的具体指导，参见Vorbrüggen and Ruh-Pohlenz,2001,Handbook of Nucleoside Synthesis〔核苷酸合成手册〕，John Wiley&Sons,NY,pp.1-631(“Vorbrüggen”)。经保护的胞嘧啶22在标准条件下用标准卤化剂在C2位卤化，得出2-氯基-4N-保护-4-嘧啶胺24。与胺6反应后，接着对C4环外胺去保护，并与胺10的反应，得出结构式(I)的2,4-嘧啶二胺。
或者按流程(IIb)的方案，令胞嘧啶20与胺10或经保护的胺21反应，分别得出N4-取代的胞嘧啶23或27。这些被取代的胞嘧啶可如前述卤化、去保护(在N4-被取代胞嘧啶27的场合下)，并与胺6反应，得出结构式(I)的2,4-嘧啶二胺。
可作为起始物质使用于流程(IIa)和(IIb)的现成市售胞嘧啶包括(但不限于)胞嘧啶(Aldrich#14,201-8;CAS Registry71-30-7)、N4-乙酰胞嘧啶(Aldrich#37,791-0;CASRegistry14631-20-0)、5-氟胞嘧啶(Aldrich#27,159-4;CAS Registry2022-85-7)和5-(三氟甲基)-胞嘧啶。其它可作为流程(IIa)的起始物质使用的适当胞嘧啶可购自加拿大艾伯塔省埃德蒙顿的General Intermediates of Canada,Inc.,Edmonton,Alberta,CA(www.generalintermediates.com)与/或法国的Interchim,France(www.interchim.com)，或可使用标准技术制备。无数课本参考书目提及适当的合成方法，请参看下文叙述。
在还有一项实施例的举例中，本发明的2,4-嘧啶二胺化合物可按流程(III)中的举例说明，从被取代或未被取代的2-胺基-4-嘧啶醇合成，如下所示：
流程(III)
在流程(III)中，R2、R4、R5、R6、L1、L2和X如先前流程(I)所定义，Z在以下流程IV中将详细讨论的离去基。在流程(III)中，2-胺基-4-嘧啶醇30与胺6(或亦可与经保护的胺21)反应，得出N2-取代-4-嘧啶醇32，然后如先前所述卤化，得出N2-取代-4-卤基-2-嘧啶胺34。亦可去保护(例如如果在第一个步骤中使用经保护的胺21)，接着与胺10的反应提供结构式(I)的2,4-嘧啶二胺。或者嘧啶醇30亦可与酰化剂31反应。
可作为流程(III)的起始物质使用的适当市售2-胺基-4-嘧啶醇30包括(但不限于)2-胺基-6-氯基-4-嘧啶醇水合物(Aldrich#A4702-8;CAS Registry00000-00-0)和2-胺基-6-羟基-4-嘧啶醇(Aldrich#A5040-1;CAS Registry56-09-7)。其它可作为流程(III)的起始物质使用的2-胺基-4-嘧啶醇30可获自加拿大艾伯塔省埃德蒙顿的GeneralIntermediates of Canada,Inc.,Edmonton,Alberta,CA(www.generalintermediates.com)与/或法国的 Interchim,France(www.interchim.com)，或可使用标准技术制备。无数课本参考书目提及适当的合成方法，请参看下文叙述。
或者本发明的2,4-嘧啶二胺化合物亦可按流程(IV)的举例说明，从被取代或未被取代的4-胺基-2-嘧啶醇制备，如下所示：
流程(IV)
在流程(IV)中，R2、R4、R5、R6、L1和L2如先前流程(I)所定义，Z表示离去基。在流程(IV)中，4-胺基-2-嘧啶醇40的C2-羟基倾向于亲核剂的程度高于C4-胺基，致使与胺6反应，得出N2-取代-2,4-嘧啶二胺42。随后与化合物44(该化合物包括一种良好离去基Z)或胺10反应，得出结构式(I)的2,4-嘧啶二胺。化合物44实际上可包括任何可被N2-取代-2,4-嘧啶二胺42的C4-胺置换的离去基。适合的离去基Z包括(但不限于)卤素、甲烷磺酰氧基(甲磺酰氧基；“OMs”)，三氟甲烷磺酰氧基(“OTf”)和对甲苯磺酰氧基(甲苯磺酰氧基；“OTs”)，苯磺酰氧基(“苯磺酸盐〔besylate〕”)和间硝基苯磺酰氧基(“nosylate”)。其它适合的离去基对于熟谙该项技术者是显而易见的。
被取代的4-胺基-2-嘧啶醇起始物质可在市场上获得或用标准技术合成。无数教示适当合成方法的教科书参考提供于下文中。
在还有一项实施例的举例中，本发明的2,4-嘧啶二胺化合物可按流程(V)举例说明，从2-氯基-4-胺基嘧啶或2-胺基-4-氯基嘧啶制备，如以下流程(V)所示：
流程(V)
在流程(V)中，R2、R4、R5、R6、L1、L2和X如流程(I)所定义，Z如流程(IV)所定义。在流程(V)中，2-胺基-4-氯嘧啶50与胺基10反应，得出4N-取代-2-嘧啶胺52，接着与化合物31或胺6反应，得出结构式(I)的2,4-嘧啶二胺。或者2-氯基-4-胺基-嘧啶54亦可与化合物44反应，接着与胺6反应，得出结构式(I)的化合物。
触动适合作为流程(V)起始物质使用的嘧啶50和54为市售商品，包括(作为举例而并不限于)2-胺基-4,6-二氯嘧啶(Aldrich#A4860-1;CAS Registry56-05-3)、2-胺基-4-氯基-6-甲氧基-嘧啶(Aldrich#51,864-6;CAS Registry5734-64-5)、2-胺基-4-氯基-6-甲基嘧啶(Aldrich#12,288-2;CAS Registry5600-21-5)和2-胺基-4-氯基-6-甲硫基嘧啶(Aldrich#A4600-5;CAS Registry1005-38-5)。其它嘧啶起始物质可获自加拿大艾伯塔省埃德蒙顿的General Intermediates of Canada,Inc.,Edmonton,Alberta,CA(www.generalintermediates.com)与/或Interchim,France(www.interchim.com),或可使用标准技术制备。无数课本参考书目提及适当的合成方法，请参看下文叙述。
或者4-氯基-2-嘧啶胺类50亦可按流程(Va)所示进行制备：
流程(Va)
在流程(Va)中，R5和R6如先前结构式(I)所定义。在流程(Va)中，二羰基53与胍反应，得出2-嘧啶胺51。与过酸(如m-氯过苯甲酸，三氟过乙酸或尿素过氧化氢错合物)反应，得出N-氧化物55，然后卤化，以得出4-氯基-2-嘧啶胺50。相应的4-卤基-2-嘧啶胺类可通过使用适当卤化剂获得。
在另外还有一项实施例举例中，本发明的2,4-嘧啶二胺化合物可按流程(V)的举例说明，从2-氯基-4-胺基嘧啶或2-胺基-4-氯基嘧啶制备，如以下流程(V)所示：
流程(VI)
在流程(VI)中，R2、R4、R5、R6、L1、L2和X如先前流程(I)所定义，上标PG表示流程(IIb)中所讨论的保护基团。在流程(VI)中，尿苷60具有C4反应中心，能与胺10或经保护的胺21反应，分别得出N4-取代的胞苷62或64。N4-取代的62或64的酸催化去保护作用(当“PG”表示酸不稳定保护基团时)得出N4-取代的胞嘧啶28，然后可在C2位被卤化，并与胺6反应，得出结构式(I)的2,4-嘧啶二胺。
胞苷也能以相似方法用作起始物质，如以下流程(VII)举例说明所示：
流程(VII)
在流程(VI)中，R2、R4、R5、R6、L1、L2和X如先前流程(I)所定义，上标PG表示流程(IIb)中所讨论的保护基团。在流程(VI)中，，像尿苷60一样，胞苷70具有一个C4反应中心，能与胺10或经保护的胺21反应，分别得出N4-取代的胞苷62或64。这些胞苷62和64然后按先前流程(VI)所述方式处理，得出结构式(I)的2,4-嘧啶二胺。
虽然流程(VI)和(VII)以核糖基核苷举例，熟谙本技术人士应明了相应的2’-去氧核糖核苷和2’,3’-双去氧核糖核苷，以及包括糖或除核糖的外的糖类似物的核苷也同样可以使用。
许多可在流程(VI)和(VII)中用作起始物质的尿苷和胞苷在本项技术中已是人所共知的，包括(仅作举例，并不限于)5-三氟甲基-2’-去氧胞苷(Chem.Sources#ABCRF07669；CAS Registry66,384-66-5)、5-溴尿苷(Chem.Sources Int’l2000；CAS Registry 957-75-5)、5-碘基-2’-去氧尿苷(Aldrich#1-775-6；CAS Registry54-42-2)；5-氟尿苷(Aldrich#32,937-1；CAS Registry316-46-1)、5-碘尿苷(Aldrich#85,259-7；CAS Registry1024-99-3)；5-(三氟甲基)尿苷(Chem.Sources Int’l2000；CAS Registry70-00-8)；5-三氟甲基-2’-去氧尿苷(Chem.Sources Int’l2000；CAS Registry70-00-8)。另外可在流程(VI)和(VII)中用作起始物质的尿苷和胞苷可获自加拿大艾伯塔省埃德蒙顿的GeneralIntermediates of Canada，Inc.，Edmonton，Alberta，CA(www.generalintermediates.com)与/或Interchim,France(www.interchim.com),或可使用标准技术制备。无数课本参考书目提及适当的合成方法，请参看下文叙述。
本发明的2,4-嘧啶二胺化合物也可按流程(VIII)和(IX)举例说明，从被取代的嘧啶(例如氯基-取代的嘧啶)合成，如下所示：
流程(VIII)
流程(IX)
在流程(VIII)和(IX)中，R2、R4、L1、L2和Ra如先前结构式(I)所定义，“Ar”表示芳基。在流程(VIII)中，2,4,6-三氯嘧啶80(Aldrich#T5,620-0；CAS#3764-01-0)与胺6反应，得出三种化合物的混合物，即：被取代的嘧啶单胺、二胺和三胺81、82和83，此混合物可用高效液相层析法(HPLC)或其常规技术分离和单离。单胺和二胺81和82可进一步与胺6与/或10反应，分别得出N2,N4,N6-三取代-2,4,6-嘧啶三胺84和85。
N2,N4-双-取代-2,4-嘧啶二胺可在类似于流程(VIII)的方法中通过将2,4-二氯基-5-甲基嘧啶或2,4-二氯基-嘧啶用作起始物质而制备。在此例子中，并未获得对应于化合物81的单取代嘧啶胺，而是该反应继续进行，直接得出N2,N4-双-取代-2,4-嘧啶二胺。
在流程(IX)中，2,4,5,6-四氯嘧啶90(Aldrich#24,671-9；CAS#1780-40-1)与为过量胺6反应，得出三种化合物的混合物，即：91,92和93，该混合物可用高效液相层析法(HPLC)或其它常规技术分离和单离。如举例所述，N2,N4-双-取代-5,6,-二氯基-2,4-嘧啶二胺92可在C6卤化物处与例如亲核剂94进一步反应，得出化合物95。或者化合物92亦可通过铃木反应转化成N2,N4-双-取代-5-氯基-6-芳基-2,4-嘧啶二胺97。2,4-嘧啶二胺95通过与Bn3SnH反应转化为2,4-嘧啶二胺99。
熟谙本项技术人士应能看出，通过上述举例所描述方法或通过其它已知方法合成的本发明的2,4-嘧啶二胺，可用作合成本发明中其它2,4-嘧啶二胺化合物的起始物质与/或中间体。以下流程(X)所示是一个具体实例：
流程(X)
在流程(X)中，R4、R5、R6、L2和Ra如先前结构式(I)所定义。每个Ra’各独立为一个Ra，并和举例说明的Ra可以相同或者不同。就流程(X)而言，羧酸或酯100可通过与胺102反应，转化为酰胺104。在胺102中，Ra′与酸或酯100的Ra相同或者不同。碳酸酯106同样可转化成胺基甲酸酯108。
第二个具体实例如以下流程(XI)所示：
流程(XI)
在流程(XI)中，R4、R5、R6、L2和Rc如先前结构式(I)所定义。就流程(XI)而言，酰胺110或116通过与硼烷甲硫错合物112的硼烷还原反应可分别转化为胺114或118。其它从2,4-嘧啶二胺起始物质合成2,4-嘧啶二胺化合物的适当反应对于熟谙本门技术人士是显而易见的。
虽然上述合成流程许多并未说明保护基团的使用，但熟谙该项技艺者应能看出在某些情况下，取代基R2、R4、R5、R6、L1与/或L2可能包括需要保护的官能团。所使用的保护基团的确切类别(尤其是)取决于所保护官能团的类别和在特定合成流程中所用的反应条件，对熟谙该项技艺者来说，这乃是显而易见的。选择适当保护基团的原则及其连接及移除的化学原理，可参看例如上述Greene&Wuts。
结构式(II)的药物前体可通过对以上所描述方法进行必要常规修改而制备之。或者此类药物前体亦可通过令已有适当保护的结构式(I)的2,4-嘧啶二胺与适当的保护基团反应制备。进行该类反应和对产品进行去保护，以得出结构式(II)药物前体的条件为众所周知的。
无数笼统介绍合成嘧啶胺的有用方法以及流程(I)-(IX)所描述的起始物质的合成方法的参考资料在本行业中是人所共知的。就具体指导而言，我们向读者推荐以下资料：Brown,D.J.，“The Pyrimidines〔嘧啶〕”,in The Chemistry of Heterocyclic Compounds〔杂环化合物化学〕,Volume16(Weissberger,A.,Ed.),1962,Interscience Publishers,(ADivision of John Wiley&Sons),New York(“Brown I”)、Brown,D.J.,“ThePyrimidines”,in The Chemistry of Heterocyclic Compounds,Volume16，SupplementI(Weissberger,A.and Taylor,E.C.,Ed.)，1970,Wiley-Interscience,(A Division ofJohn Wiley&Sons),New York(“Brown II”)、Brown,D.J.,“The Pyrimidines”,in TheChemistry of Heterocyclic Compounds,Volume16，SupplementII(Weissberger,A.andTaylor,E.C.,Ed.),1985,An Interscience Publication(John Wiley&Sons),New York(“Brown III”)、Brown,D.J.,“The Pyrimidines”in The Chemistry of HeterocyclicCompounds,Volume52(Weissberger,A.and Taylor,E.C.,Ed.),1994,John Wiley&Sons,Inc.,New York,pp.1-1509(“Brown IV”)、Kenner,G.W.and Todd,A.,in HeterocyclicCompounds〔杂环化合物〕，Volume6，(Elderfield,R.C.,Ed.),1957,John Wiley,New York,Chapter7(pyrimidines〔嘧啶〕)、Paquette,L.A.,Principles of Modern HeterocyclicChemistry〔现代杂环化学原理〕,1968,W.A.Benjamin,Inc.,New York,pp.1–401(uracilsynthesis〔尿嘧啶合成〕pp.313,315;pyrimidine synthesis〔嘧啶合成〕pp.313-316;amino pyrimidine synthesis〔胺基嘧啶合成〕pp.315)、Joule,J.A.,Mills,K.and Smith,G.F.,Heterocyclic Chemistry〔杂环化学〕,3rd Edition,1995,Chapman and Hall,London,UK,pp.1–516、Vorbrüggen,H.and Ruh-Pohlenz,C.,Handbook of NucleosideSynthesis〔核苷合成手册〕,John Wiley&Sons,New York,2001,pp.1-631(protection ofpyrimidines by acylation〔嘧啶的酰化保护〕pp.90-91;silylation of pyrimidines〔嘧啶的硅烷化保护〕pp.91-93)、Joule,J.A.,Mills,K.and Smith,G.F.,HeterocyclicChemistry〔杂环化学〕，4thEdition,2000,Blackwell Science,Ltd,Oxford,UK,pp.1-589、以及Comprehensive Organic Synthesis〔有机合成大全〕,Volumes1-9(Trost,B.M.andFleming,I.,Ed.),1991,Pergamon Press,Oxford,UK。
6.4Fc受体信号级联的抑制作用
本发明的活性2,4-嘧啶二胺化合物对导致(尤其是)细胞去颗粒作用的Fc受体信号级联具有抑制作用。作为具体实例，该化合物抑制导致免疫细胞(如嗜中性白血球、嗜伊红血球、肥大细胞及嗜碱细胞)去颗粒作用的FcεRI与/或FcγRI信号级联。肥大和嗜碱细胞两者均在过敏原诱导的疾病(包括如过敏性鼻炎和哮喘)中扮演主要角色。在图一中，一旦接触过敏原(尤其是花粉或寄生虫)中时，过敏原特异性IgE抗体系通过IL-4(或IL-13)和其它信使激活的B细胞合成，转为IgE类特异性抗体合成。这些过敏原特异性IgE结合到高亲和力FcεRI上。与抗原一结合后，与FcεR1结合的IgE产生交联，并激活IgE受体信号转导路径，从而导致细胞去颗粒作用以及随后一系列化学介质的释放与/或合成，此类化学介质包括：组织胺、蛋白脢类(如类胰蛋白脢和胃促胰脢)、白三烯素(如LTC4)等脂质介质、血小板激活因子(PAF)和前列腺素类(如PGD2)和一系列细胞因子(包括TNF-α、IL-4、IL-13、IL-5、IL-6、IL-8、GMCSF、VEGF和TGF-β)。这些来自肥大细胞与/或嗜碱细胞的介质的释放与/或合成是过敏原所诱导的早期与晚期反应的根源，并与导致持续发炎状态的下游事件直接相关。
通过去颗粒作用导致预形成介质的释放以及其它化学介质的释放与/或合成的FcεRI信号转导路径中的分子事件是众所周知的，其说明参考图二。就图二而言，FcεRI是由IgE-结合的α-亚单元、β亚单元，和两个γ亚单元(γ同型二聚体)构成的杂四聚体受体。通过多价结合介质(包括如IgE特异性过敏原或抗IgE抗体或片段)的FcεRI结合IgE的交联诱导Src相关激脢Lyn的迅速结合和激活。Lyn在细胞内β和γ亚单元上磷酸化免疫受体酪氨酸基的激活主题(ITAMS)，从而导致募集更多的Lyn到β亚单元和更多的Syk激脢到γ同型二聚体。这些与受体相关的激脢通过分子内和分子间磷酸化作用激活，并磷酸化路径上的其它成份(例如Btk激脢、LAT和磷脂脢C-γPLC-γ)。激活的PLC-γ引发导致蛋白质激脢C激活作用和Ca2+运动(两者均为去颗粒作用所必需)的路径。FcεRI交联也激活三种主要类型的有丝分裂原激活蛋白质(MAP)激脢，即：ERK1/2，JNK1/2和p38。这些路径的激活在促炎介质(例如TNF-α和IL-6)以及脂质介质白三烯素CA(LTC4)的转录调节中是很重要的。
虽然并未说明，但相据信FcγRI信号级联与FcεRI信号联级联共享某些共同要素。重要的是，像FcεRI一样、FcγRI包括已磷酸化并吸引Syk的γ同型二聚体，也像FcεRI一样，FcγRI信号级联的激活作用导致(尤其是)去颗粒作用。共享γ同型二聚体并可由活性2,4-嘧啶二胺化合物调节的其它Fc受体包括(但不限于)FcαRI和FcγRIII。
本发明2,4-嘧啶二胺化合物抑制Fc受体信号级联的能力可在活体外检定中简单的测定或者确认。确认对FcεRI介导去颗粒作用抑制作用的适当检定在实例部份介绍。在一项典型检定中，具有进行FcεRI介导的去颗粒作用能力的细胞(例如肥大或嗜碱细胞)先在IL-4、干细胞因子(SCF)、IL-6和IgE存在下生长以增加FcεRI表现，并暴露于本发明的2,4-嘧啶二胺试验化合物中，且以抗IgE抗体(或者是IgE特异性过敏原亦可)刺激。培育后，由FcεRI信号级联激活而释放与/或合成的化学介质或其它化学媒介的数量可用标准技术定量并与对照组细胞(即刺激但并未暴露于试验化合物中的细胞)释放的介质或媒介的数量相比较。凡所测得介质或媒介数量与对照组相比减少50%的测试化合物浓度，称为测试化合物的IC50。用于检定的肥大细胞或嗜碱细胞的来源，部份取决于化合物的预期用途，对于熟谙该项技术者这是是显而易见的。例如，如果化合物用于治疗或预防人类的特定疾病，肥大细胞或嗜碱细胞的方便来源是可作为特定疾病可接受的或已知的临床模型的人或其它动物。因此，取决于其特定用途，肥大或嗜碱细胞可取自广泛的动物来源(范围从例如低等哺乳动物如小白鼠和大鼠到狗、羊和一般用于临床试验的其它哺乳动物，直到高等哺乳动物例如猴子、黑猩猩和猿到人)。适合于进行活体外检定的细胞的具体例子包括(但不限于)啮齿动物或人类嗜碱细胞、大鼠嗜碱白血病细胞株，原鼠肥大细胞(例如衍生自骨髓的鼠肥大细胞“BMMC”)和单离自脊椎血液(“CHMC”)或其它组织例如肺的原人类肥大细胞。单离及培养这些细胞类型的方法为人所共知的或者提供在本文实例部份(参看例如：Demo et al.,1999,Cytometry36(4):340-348和同时待批的序号为10/053,355，申请日期为2001年11月8日的专利申请案，其披露内容以引文方式纳入在本文中)。当然，其它在FcεRI信号级联激活时起去颗粒作用的其它类型免疫细胞也可以使用，包括例如嗜伊红血球。
正如熟谙此艺者所应能看出的那样，量化的介质或媒介并非关键。唯一的要求只是它必须是Fc受体信号级联引发或者激活所释放与/或合成的介质或媒介。例如就图一而言，FcεRI信号级联在肥大与/或嗜碱细胞中的激活作用导致很多的下游事件。例如，FcεRI信号级联的激活通过去颗粒作用导致一系列预形成化学介质和媒介的即刻释放(即在受体激活之后1-3分钟之内)。因此，在一个实施例中，被量化的介质或媒介可对颗粒具有特异性(即存在于颗粒中，但通常不存在于细胞的细胞质中)。可被量化以判断与/ 或确认本发明的2,4-嘧啶二胺化合物活性的颗粒特异性介质或媒介的例子包括(但不限于)颗粒特异性脢(例如己糖胺脢和类胰蛋白脢)及颗粒特异性成份(例如组织胺和血清素)。量化此类因子的检定为众所周知的，而且往往是在市场公开销售的。例如，类胰蛋白脢与/或己糖胺脢释放可通过培养有可裂解基质(此基质一旦裂解发出萤光)的细胞，然后采用传统技术测得所得萤光量而对其进行量化。此种可裂解萤光基质为市面销售的。例如萤光激能基质Z-Gly-Pro-Arg-AMC(Z＝苯甲氧羰基；AMC＝7-胺基-4-甲基熏草；BIOMOL ResearchLaboratories,Inc.,Plymouth Meeting,PA19462,，目录号P-142)和Z-Ala-Lys-Arg-AMC(Enzyme Systems Products,a division of ICN Biomedicals,Inc.,Livermore,CA94550,，目录号AMC-246)可用来量化所释放的类胰蛋白脢的数量。萤光激能基质4-甲基伞花基-N-乙酰基-β-D-胺基葡糖苷(Sigma,St.Louis,MO,目录号69585)可用来量化所释放己糖胺脢的数量。组织胺释放可用市售脢联免疫吸附检定(ELISA)，例如Immunotech组织胺脢联免疫吸附检定#IM2015(Beckman-Coulter,Inc.)进行量化。量化类胰蛋白脢、己糖胺脢和组织胺释放的具体方法将在实例部份介绍。这些检定的任何一种均可用来判断或者确认本发明的2,4-嘧啶二胺化合物的活性。
仍就图一而言，去颗粒作用仅仅是FcεRI信号级联所引发的若干个反应之中的的一个而已。除此之外，此信号路径的激活导致细胞因子和化学激素(chemokines)(例如IL-4,IL-5、IL-6、TNF-α、IL-13和MIP1-α)的重新合成和释放，以及白三烯素(如LTC4)等脂质介质、血小板激活因子(PAF)和前列腺素的释放。因此，本发明的2,4-嘧啶二胺化合物亦可通过量化一个或若干个激活细胞所释放与/或所合成的介质来对其活性进行评估。
与以上所讨论的颗粒特异性成份不同的是，这些“晚期”介质在FcεRI信号级联的激活之后并不即刻释放。因此，当对这些晚期介质进行量化时，应该小心保证激活细胞培养基必须培养足够长的时间，以保证完成所打算量化的介质的合成(如果有需要)和释放所需的时间。通常，PAF和脂质介质(例如白三烯素C4)在FcεRI激活的后3-30分钟释放。细胞因子和其它晚期介质在FcεRI激活的后约4-8小时释放。适合于具体介质的培养时间对于熟谙该项技术者是显而易见的。具体指导和检定将在实例部份介绍。
所释放的特定晚期介质的量可用任何标准技术量化。在一个实施例中，该量可用脢联免疫吸附检定(ELISA)测定。适合于量化所释放的TNFα、IL-4、IL-5、IL-6与/或IL-13量的脢联免疫吸附检定(ELISA)用检测盒可获自例如Biosource International,Inc.,Camarillo,CA93012(参见以下目录号：KHC3011、KHC0042、KHC0052、KHC0061和KHC0132)。适合于量化细胞所释放的白三烯素C4(LTC4)释放量的ELISA检测盒可获自Cayman ChemicalCo.,Ann Arbor,MI48108(参看例如目录号520211)。
在典型情况下，如在活体外化验测量，就FcεRI介导去颗粒作用与/或介质释放而言，本发明的活性2,4-嘧啶二胺化合物将显现约20μM或低于此值的IC50，如以上所描述或者实例部份的活体外检定之一所示。当然，熟谙此艺者应懂得显示较低IC50(例如10μM、1μM、100nM、10nM、1nM或者甚至更低的数量级)的化合物是特别有用的。
熟谙此艺者也应懂得以上所讨论的各种介质可诱导不同的副作用，或者对相同的副作用显示不同的效应等级。例如，脂质介质LTC4为强有力的血管收缩剂，所诱导的血管紧缩效应比组织胺约高1000倍以上。作为另一个实例，除介导特应性或I型超敏反应之外，细胞因子也能引起组织改造和细胞增殖。因此，虽然抑制先前讨论任何一种化学介质的释放与/或合成的化合物是有用的，但熟谙此艺者将懂得抑制上述若干种乃至全部介质的释放与/或合成的化合物的特别用途，因为此类化合物可以改善或完全避免多种乃至所有由此类特定介质介质所诱导的副作用。例如，抑制所有的三种类型介质(颗粒特异性介质、脂类介质和细胞因子介质)对治疗或预防即发性I型超敏反应和与其相关的慢性症状。
本发明化合物抑制一种以上类型介质(如颗粒特异性介质或晚期介质)释放的能力可用上述各种活体外检定(或其它相当的活体外检定)通过测定代表每种类型介质的相应IC50界定。凡能抑制一种以上类型介质释放的本发明化合物，将典型地显示每种所检验介质类型的小于20μM左右的IC50。例如，一个就组织胺释放(IC50 组织胺)而言显示1μM的IC50，而就白三熄素LTC4合成与/或释放(IC50 LTC4)而言显示1nM的IC50的化合物抑制即发性(颗粒特异性)和晚期介质释放。作为另一个具体实例，显示10μM的IC50类胰蛋白脢、1μM的IC50 LTC4和1μM的IC50 IL-4的化合物抑制即发性(颗粒特异性)介质、脂类介质和细胞因子介质的释放。虽然上述具体实例只用了每个类型中一个代表性介质的IC50，但熟谙此艺者将懂得将有可能获得多数乃至全部的包含一个或若干个类型介质的IC50。就某个特定化合物和某些特定用途而言，需要确定IC50数据的介质数量和类别对熟谙此技艺者应该是显而易见的。
只要作一些常规变动，就可利用相似的检定来确认对其他Fc受体(例如FcαRI、FcγRI与/或FcγRIII)引发的信号转导级联的抑制作用。例如，化合物抑制FcγRI信号转导的能力可用与以上描述的检定相仿的检定确认，但要用IgG和IgG特异性过敏原或抗体培养细胞以激活FcγRI信号级联，而不是用IgE和IgE特异性过敏原或抗体。确认其它Fc受体(例如包含γ同型二聚体的Fc受体)的抑制作用所需的合适的细胞类型、激活媒介和需要量化的媒介对熟谙此技艺者应该是显而易见的。
一类特别有用的化合物是能以大体相仿的IC50抑制即刻型颗粒特异性介质和晚期介质两者的释放的各种2,4-嘧啶二胺化合物。大体相仿指各个介质类型的IC50彼此的差距在10倍范围之内。另一类特别有用的化合物是能以大体相仿的IC50抑制即刻型颗粒特异性介质、脂质介质和细胞因子介质释放的2,4-嘧啶二胺化合物。在一个具体实施例中，此类化合物以大体相仿的IC50抑制一些介质的释放，即：组织胺、类胰蛋白脢、己糖胺脢、IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、TNFα和LTC4。此类化合物对(尤其是)改善或完全防止与特应性或即刻性I型超敏反应相关的早期和晚期反应特别有用。
如果同一个化合物能具备抑制全部所需类型介质释放的能力，那当然是再理想不过的了。然而，我们也能找到结果相同的化合物之混合物。例如，抑制颗粒特异性介质释放的第一个化合物可与抑制细胞因子介质的释放与/或合成的第二个化合物结合使用。
除上述FcεRI或FcγRI去颗粒作用路径外，肥大细胞与/或嗜碱细胞的去颗粒作用还可由其它媒介诱导。例如艾诺霉素(一种绕过细胞早期FcεRI或FcγRI信号转导机制的钙离子载体)直接诱导触发去颗粒作用的钙运转。再就图二而言，激活的PLCγ引发导致(尤其是)钙离子调动与随后的去颗粒作用的路径。如所说明的那样，此Ca2+动员在FcεRI信号转导路径中很晚触发。如上所述以及如图三所示，艾诺霉素直接诱导导致去颗粒作用的Ca2+动员和Ca2+运转。其它以此方式诱导去颗粒作用的离子载体包括A23187。诱导颗粒作用的离子载体(例如艾诺霉素)绕过FcεRI与/或FcγRI信号级联早期阶段的能力可作为对通过阻断或抑制如上所述的早期FcεRI或FcγRI信号级联专门发挥其去颗粒与抑制活动的本发明活性化合物进行辨认与判断的计数屏使用。专门抑制FcεRI与/或FcγRI介导去颗粒作用的化合物不仅抑制去颗粒作用和随后组织胺、类胰蛋白脢和其它颗粒内容物的迅速释放，而且还抑制引起TNFα、IL-4、IL-13和脂质介质 (如LTC4)释放的催炎激活路径。因此，能专门抑制此种早期FcεRI与/或FcγRI介导的去颗粒作用的化合物不但阻断或抑制急性特应性或I型超敏反应，且阻断或抑制涉及多种炎症介质的晚期反应。
专门抑制早期FcεRI与/或FcγRI介导去颗粒作用的本发明化合物为抑制FcεRI与/或FcγRI介导去颗粒作用(例如就颗粒特异性介质的释放而言，具有小于20μM左右的IC50，而就IgE或IgG结合媒介激发的细胞而言，为活体外检定中测定的成份)的化合物，但不显著抑制离子载体诱导的去颗粒作用。在一个实施例中，如果在活体外检定中所显示的离子载体诱导的去颗粒作用的IC50大于20μM左右，则此类化合物即被认为并不明显抑制离子载体诱导的去颗粒作用。当然，显示更高离子载体诱导去颗粒作用的IC50，或根本不抑制离子载体诱导去颗粒作用活性化合物是特别有用的。在另一个实施例中，如果根据活体外检定测定，其所显示的FcεRI与/或FcγRI介导的去颗粒作用和离子载体诱导的去颗粒作用两者的IC50差大于10倍，该化合物即被认为是不显著抑制离子载体诱导的去颗粒作用。适合于测定离子载体诱导的去颗粒作用的IC50的检定方法包括任何前述去颗粒作用的检定方法，但需要作以下修改，即：要以艾诺霉素或A23187(A.G.Scientific,San Diego,CA出品)等去颗粒作用诱导钙离子载体激发或活化细胞，而不是抗IgE抗体或一种IgE特异性过敏原。评估本发明的特定2,4-嘧啶二胺化合物抑制离子载体诱导去颗粒作用的能力的特定检定方法将在实例部份提供。
熟谙此艺者应能看出，对FcεRI介导去颗粒作用呈现高度选择性的化合物具有特殊用途，因为此类化合物选择瞄准FcεRI级联且不干扰其它的去颗粒作用机制。对FcγRI介导去颗粒作用呈现高度选择性的化合物同样也具有特殊用途，因为此类化合物选择瞄准FcγRI级联，而不干扰其它去颗粒作用机制。呈现高度选择性的化合物对FcεRI或FcγRI介导去颗粒作用的选择性比离子载体诱导去颗粒作用(例如艾诺霉素诱导去颗粒作用)高10倍以上。
生物化学和其它数据确认本文所述的2,4-嘧啶二胺化合物为Syk激脢活性的强有力的抑制剂。例如，在使用单离的Syk激脢实验中，在二十四个所测试的2,4-嘧啶二胺化合物中，除两个以外全部抑制肽基质的Syk激脢催化磷酸化作用，其IC50居于亚微克分子范围。其余化合物在亚微克分子范围抑制磷酸化作用。此外，在采用肥大细胞的活体外检定中，十六个化合物全部抑制Syk激脢基质(例如，PLC-γ1、LAT)和Syk激脢下游的蛋白质(例如JNK、p38、Erk1/2和PKB，在试验时)的磷酸化作用，而不是在级联中居于Syk激脢上游的蛋白质(例如Lyn)。Lyn基质的磷酸化作用不为所测试的2,4-嘧啶二胺化合物抑制。而且，就以下化合物而言，我们观察到它们在生化检定中对Syk激脢活性的抑制作用(IC50在3到1650nM范围之内)和它们在肥大细胞中对FcεR1介导去颗粒作用的抑制作用(IC50在30到1850nM范围之内)两者之间存在高度相关关系：R950373、R950368、R921302、R945371、R945370、R945369、R945365、R921304、R945144、R945140、R945071、R940358、R940353、R940352、R940351、R940350、R940347、R940343、R940338、R940323、R940290、R940277、R940276、R940275、R940269、R940255、R935393、R935372、R935366、R935310、R935309、R935307、R935304、R935302、R935293、R935237、R935198、R935196、R935194、R935193、R935191、R935190、R935138、R927050、R926968、R926956、R926931、R926891、R926839、R926834、R926816、R926813、R926791、R926782、R926780、R926757、R926753、R926745、R926715、R926508、R926505、R926502、R926501、R926500、R921218、R921147、R920410、R909268、R921219、R908712、R908702。
因此，本发明之2,4-嘧啶二胺化合物的活性也可由Syk激脢活性的生化或细胞检定中确认。让我们再看以下图二，在肥大细胞与/或嗜碱细胞的FcεRI信号级联中，Syk激脢对LAT和PLC-γ1磷酸化，导致(尤其是)去颗粒作用。这些活性均可用以确认本发明之2,4-嘧啶二胺化合物的活性。在一个实施例中，通过令单离的Syk激脢或其活性片段在Syk激脢基质(例如己知在信号级联中为Syk磷酸化的合成肽或蛋白质)存在下与2,4-嘧啶二胺化合物接触，评估Syk激脢是否对基质磷酸化对活性进行确认。或者检定亦可由表现Syk激脢的细胞进行。此类细胞可以内源方式表现Syk激脢，也可以通过加工，令其表现重组Syk激脢。这些细胞亦可表现Syk激脢基质。适合于进行这种确认检定的细胞，以及加工适用细胞的方法对于熟谙该项技术者是显而易见的。适合于确认2,4-嘧啶二胺化合物活性的生化和细胞检定的具体例子将在实例部份介绍。
通常说来，作为Syk激脢抑制剂的化合物将呈现与Syk激脢活性相关的IC50，例如Syk激脢对合成基质或内源基质进行磷酸化的能力，在活体外检定或细胞检定中居于约20μM或20μM以下的范围。熟谙此艺者应懂得显示低IC50值(例如在10μM、1μM、100nM、10nM、1nM乃至更低的范围)的化合物具有特别有用的价值。
6.5用途与成份
如以上讨论所述，本发明的活性化合物对Fc受体(尤其是包括γ同型二聚体的Fc受体)的信号级联(例如FcεRI与/或FcγRI信号级联)起抑制作用，通过去颗粒作用或其它过程导致(尤其是)细胞中的化学介质的释放与/或合成。也如以上讨论所述，活性化合物也是强有力的Syk激脢抑制剂。由于这些活性，本发明的活性化合物可用于各种活体外、活体内和离体(ex vivo)情况下，调节或抑制Syk激脢、Syk激脢在其中扮演角色的信号级联、Fc受体信号级联、和由此类信号级联所导致的生物反应。例如，在一个实施例中，化合物可用来在活体外或活体内以及在几乎任何呈现Syk激脢的细胞类型中抑制Syk激脢。他们也可用来调节Syk激脢在其中扮演角色的信号转导级联。此种Syk依赖信号转导级联包括(但不限于)FcεRI、FcγRI、FcγRIII、BCR和整合蛋白信号转导级联。化合物也可用于活体外或活体内，以调节与(尤其是)抑制此种Syk依赖信号转导级联导致的细胞或生物反应。此类细胞或生物反应包括(但不限于)呼吸器官破裂、细胞黏附、细胞去颗粒作用、细胞传布、细胞迁移、细胞集聚、吞噬作用、细胞因子合成和释放、细胞成熟和Ca2+运转。重要的是，化合物作为一种治疗手段，在活体内抑制Syk激脢，以治疗或预防由Syk激脢活动完全或部份介导的疾病。可以用此类化合物治疗或预防的Syk激脢介导疾病的非限制性例子将在下文更详细讨论。
在另一个实施例中，活性化合物可作为一种治疗手段，调节或抑制Fc受体信号级联与/或FcεRI与/或FcγRI介导的去颗粒作用，以治疗或预防以此类Fc受体信号级联或去颗粒作用化学介质的释放或合成为特征、所引起与/或与其相关的疾病。此类治疗可在兽医场合下投药到动物身上，也可投药到人类。以由此类化学介质释放、合成或去颗粒作用为特征、由其所引起或与其相关，因此可用该活性化合物治疗或预防的疾病包括(仅作为举例，而并非限制)特应性或过敏性超敏或过敏性反应，过敏症(如过敏性结膜炎、过敏性鼻炎、特应性哮喘、特应性皮炎和食物过敏)、低度瘢痕(如硬皮病、增殖性纤维变性、瘢痕瘤、手术后瘢痕、肺纤维化、血管痉挛、偏头痛、再灌流损伤和后心肌梗塞)、与组织破坏有关的疾病(如慢性阻塞性肺病〔COPD〕、心脏支气管炎〔cardiobronchitis〕和后心肌梗塞)、与组织发炎有关的疾病(如肠过敏症候群、痉挛性结肠和炎性肠疾病)、发炎和结疤。
除了治疗以上所述无数疾病之外，细胞学与动物试验数据确认本文所描述的2,4-嘧啶二胺化合物还可用于治疗或预防自体免疫性疾病，以及与此类疾病相联系的各种症状。可以用2,4-嘧啶二胺化合物治疗或者预防的自体免疫性疾病通常包括由于对内源与/或外源免疫源或抗原的体液与/或细胞介导反应所造成组织损伤带来的疾病。此类疾病往往称为非过敏性(即II型、III型与/或IV型)超敏反应引起的疾病。
如上所述，I型超敏反应通常是在接触特定外源抗原之后肥大细胞与/或嗜碱细胞释放具有药理活性物质(如组织胺)所造成。如上所述，此类I型反应在许多疾病中扮演角色，包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎等。
II型超敏反应(又称细胞毒性反应、细胞补体依赖性溶解反应、细胞诱导超敏反应)是免疫球蛋白与细胞或组织的抗原部份或者与已经和细胞或组织紧密结合的抗原或半抗原反应的结果。通常与II型超敏反应相联系的疾病包括(但不限于)自体免疫性溶血性贫血、胎儿幼红细胞增多症(胎儿溶血症)和Goodpasture氏病(肾小球性肾炎咯血综合征)。
III型超敏反应(又称毒性复合物质超敏、可溶复合物质超敏或免疫复合物质超敏反应)是可溶性循环抗原-免疫球蛋白复合物质在血管内或组织内沉积所造成，并在免疫复合物质沉积部位伴随有急性炎症反应。标准型III型反应疾病的非限制性例子包括：Arthus氏反应(局部过敏坏死反应)、类风湿性关节炎、血清病、周身性红斑狼疮、某些类型的肾小球性肾炎、多发性硬化和大疱性类天疱疮。
IV型超敏反应(往往称为细胞性、细胞介导性、迟发性或者结核菌素型超敏反应)是由于接触一个特定的抗原而致敏的T-淋巴细胞所引起。被列举为IV型反应疾病的非限定性举例包括：接触皮炎和同种异体移植物排斥。
与以上任何非过敏性超敏反应相联系的自体免疫性疾病均可用本发明的2,4-嘧啶二胺治疗或者预防。这些方法由其适合于用来治疗或预防以单一器官或者单一细胞类型为特征的自体免疫性疾病，包括(但不限于)桥本氏甲状腺炎、自体免疫性溶血性贫血、恶性贫血的自体免疫性萎缩性胃炎、自体免疫性脑脊髓炎、自体免疫性睪丸炎、Goodpasture氏综合征(即肾小球性肾炎咯血综合征)、自体免疫性血小板减少、交感性眼炎、重症肌无力、Graves氏病(即突眼性甲状腺肿)、原发性胆汁性肝硬变、慢性活动性肝炎、溃疡性结肠炎和膜性肾小球病变，以及往往被称之为全身性自体免疫疾病，包括(但不限于)周身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、Sjogren氏综合征(即泪腺涎腺萎缩综合征、口眼干燥综合征)、Reiter氏综合征(一种病因尚未阐明的三联症，包括尿道炎、结膜炎及关节炎)、多发性肌炎-皮肌炎、全身性硬皮病、结节性多动脉炎、多发性硬化和大疱性类天疱疮。
熟谙此项技艺者将会懂得以上所列自体免疫性疾病有许多伴随有严重的症状，若能缓解这些症状，即便不能根治造成这些症状的自体免疫性疾病，也仍然具有重大的治疗价值。这些症状及其潜在的疾病状况许多是单核细胞FcγR信号级联激活的后果。由于本发明所述2,4-嘧啶二胺是单核细胞和其它细胞中此种FcγR信号强有力的抑制剂，这些方法将会在治疗与/或预防以上所列自体免疫性疾病的无数不良症状方面得到应用。
作为一个具体实例，类风湿性关节炎(RA)在典型情况下造成肿胀、疼痛以及全身所累及关节僵直与压痛。类风湿性关节炎的特征是滑膜慢性发炎，内中填满了密集的淋巴细胞。滑膜在正常情况下是一层细胞厚薄，如今变为填满细胞，形成淋巴样组织形式，其中包括树状突细胞、T-细胞、B-细胞、NK细胞、吞噬细胞和血浆细胞簇。这一过程以及无数免疫病理机制(包括抗原-免疫球蛋白复合体的形成)最终导致关节完整性的破坏，造成畸形、永久性功能丧失与/或关节及其周围骨质侵蚀。以上所述方法可用于治疗或者改善类风湿性关节炎的一种、若干种乃至所有这些症状。因此，就类风湿性关节炎而言，当能取得减轻或者改善通常与类风湿性关节炎相联系的任何症状时，即可认为上述方法具有治疗效果(其普遍定义将在下面进一步讨论)，不管治疗是否同时达到了治疗潜在的类风湿性关节炎本身与/或降低了类风湿因子(“RF”)的循环量。
作为另一个具体实例，周身性红斑狼疮(“SLE”)的典型症状为：发烧、关节疼痛(关节痛)、关节炎、浆膜炎(胸膜炎或心包炎)。就周身性红斑狼疮而言，当能取得减轻或者改善通常与周身性红斑狼疮相联系的任何症状时，即可认为上述方法具有治疗效果，不管治疗是否同时达到了治疗潜在的周身性红斑狼疮本身的目的。
作为另一个具体实例，多发性硬化症(“MS”)的各项症状使患者致残，包括：干扰其视觉敏锐度、引起重影、干扰走路用手等手脚运动功能、造成大小便失禁、痉挛抽搐以及感觉迟钝(触觉、痛感、对温度敏感性)。就多发性硬化症而言，当能改善或者减缓上述任何一项或者多项致残症状进程时，即可认为上述方法具有治疗效果，不管治疗是否同时达到了治疗潜在的多发性硬化症本身的目的。
在用于治疗或预防此类疾病时，活性化合物以单一形式，一种或若干种活性化合物混合形式或与其它可用于治疗此类疾病与/或与疾病有关的症状的药物混合或组合的形式投药。活性化合物也可以与可用于治疗其它疾病或病的药剂例如类固醇、膜稳定剂、5LO抑制剂、白三烯素合成和受体抑制剂、IgE同形转变或IgE合成抑制剂，IgG同形转变或IgG合成，β-促动剂，类胰蛋白脢抑制剂、阿斯匹林、COX抑制剂、氨甲蝶呤(methotrexate)、抗肿瘤坏死因子药物(anti-TNF drugs)、retuxin、PD4抑制剂、p38抑制剂、PDE4抑制剂和抗组胺剂(以上所列仅为一些例子)混合或组合投药，。活性化合物可以药物前体本身的形式或包含活性化合物或药物前体的复方药物形式投药。
包括本发明的活性化合物(或其药物前体)的医药成份可通过常规的混合、溶解、制粒、糖衣片(dragee)制造研磨、乳化、包胶、夹带或冷冻脱水方法制造。此类成份可按常规方式使用一种或多种生理上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或助剂调配，以有助于将有效成份加工制备成为可作为药物使用的制剂。
如前所述，活性化合物或药物前体可以其本身，或者以其水合物、溶剂合物、N-氧化物或医药上可接受的盐的形式作为药物成份调配。在典型情况下，此类盐比相应的游离酸和碱更易溶解于水溶液中，但也可制备溶解度低于相应游离酸和碱的盐。
本发明的药物成份可适用于几乎任何投药形式，包括如局部、眼滴、口服、口腔含化、全身、鼻内、注射、经皮、直肠内、阴道内等，或适合于吸入或吹入法投药的形式。
就局部投药而言，(各)活性化合物或药物前体可调配成溶液、凝胶、软膏、霜剂、悬浮液等，正如业内众所周知的那样。
全身投药配方包括设计为注射给药的配方，例如皮下、静脉内、肌肉内、鞘内或腹膜内注射给药者，以及设计为经皮，经黏膜口含或经肺投药者。
适合注射的制剂包括(各)活性化合物在水或油媒液中的无菌悬浮液、溶液或乳液。成份中亦可包含调配剂，例如悬浮、稳定与/或分散剂。注射剂的包装形式可以是单剂量形式(例如安瓿)，亦可采用多剂量容器形式，并可包含防腐剂。
或者注射剂亦可以粉末形式提供，并在使用前以适当载体(包括但不限于无菌无热原水、缓冲液、葡萄糖溶液等)重新溶解之。为此目的，(各)活性化合物可用任何业内人所共知的技术干燥(例如低压冷冻干燥)，并在使用前再溶解。
对于经黏膜投药制剂，配方中可采用适合穿透欲渗透屏障的适当渗透剂。此类渗透剂是业内人所共知的。
就口服给药而言，药物成份可以常规的方法制备为诸如锭剂、片剂或者胶囊形式，制备中可采用可接受的赋形剂，例如黏合剂(如：预胶凝玉米淀粉、聚乙烯吡咯啶酮或羟丙基甲基纤维素)、填充剂(如：乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)、润滑剂((如：硬脂酸镁、滑石或硅石)、崩散剂(如：马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)或湿润剂(如：硫酸月桂酯钠)。此类片剂外面按业内人所共知的方法包上糖衣、薄膜或者肠溶衣。特别适合于口服投药的化合物包括化合物R940350、R935372、R935193、R927050和R935391。
口服给药的液态制剂可制成诸如酏剂、溶液、糖浆或悬浮液的形式，也可制成干燥产品，令患者在服药前以水或其它适当溶媒调配后服用。此类液态制剂可通过常规方法制备，并可采用医药上可接受的添加剂，例如悬浮剂(如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)、乳化剂(如卵磷脂或金合欢胶)、非水性溶媒(如，杏仁油、油性酯、乙醇、cremophore〔BASF公司出品的增溶剂系列〕或分馏菜油等)和防腐剂(如甲基或丙基对羟基苯甲酸酯或山梨酸)。此类制剂也可包含适当量的缓冲盐、防腐剂、矫味剂、着色剂及甜味剂。
口服给药的制剂可被适当调配，使其有控制地释放活性化合物或药物前体，正如众所周知的那样。
就口腔内含服给药而言，此类成份可按常规方法配制成为片剂或者糖锭的形式。
就经直肠与经阴道的给药路径而言，(各)活性化合物可调配成溶液(用于保留灌肠)以及含有可可豆脂或其它甘油酯等常规栓剂基质的栓剂或者软膏。
就鼻内给药或通过吸入或吹入法给药而言，(各)活性化合物或药物前体可以用适当的喷雾剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、碳氟化合物，二氧化碳或其它适当的气体)从加压包装或喷雾器内以气溶胶喷雾形式方便地递送。就加压气溶胶喷雾而言，剂量单位可通过提供规定量的计量阀计算。用于吸入器或吹入器中的胶囊和药筒(如由明胶制成的胶囊和药筒)可调配成包含化合物和乳糖或淀粉等适当粉末基质的粉末混合物。
适合于用市售鼻内喷雾装置进行鼻内投药的水性悬浮液配方的一个具体例子包括以下成分：活性化合物或药物前体(0.5-20毫克/毫升)、苯扎氯铵(benzalkoniumchloride,0.1-0.2毫克/毫升)、聚山梨酯80(0.5-5毫克/毫升)、羧甲基维维素钠或微晶纤维素(1-15毫克/毫升)、苯乙醇(1-4毫克/毫升)和葡萄糖(20-50毫克/毫升)。最后悬浮液的pH值可调节至从约pH5到pH7的范围，典型的pH值约为5.5。
适合于以吸入方式对本发明化合物(尤其是化合物R921218)投药的水性悬浮液的具体实例包含1-20毫克/毫升化合物或药物前体、0.1-1％(体积/体积)聚山梨酯8050mM柠檬酸盐及0.9％氯化钠。
用于滴眼时，(各)活性化合物或药物前体可调制成适合于滴眼的溶液、乳液、悬浮液等。各种适合于对化合物进行眼内投药的介质在业内是众所周知的。一些具体的、非限制性例子可参看美国专利第6,261,547号、美国专利第6,197,934号、美国专利第6,056,950号、美国专利第5,800,807号、美国专利第5,776,445号、美国专利第5,698,219号、美国专利第5,521,222号、美国专利第5,403,841号、美国专利第5,077,033号、美国专利第4,882,150号和美国专利第4,738,851号。
就延效投药而言，(各)活性化合物或药物前体可调制供植入或肌内注射投药的缓释(depot)制剂。活性成份可与适当的聚合物质或疏水物质(如：作为可接受的油剂或乳剂)或离子交换树脂或者微溶性衍生物(如微溶性盐)一起配制。或者亦可采用制作成为贴片或者圆形胶布的经皮投药系统缓慢释放活性化合物，供经皮渗透吸收。为此目的，渗透增强剂可用以帮助(各)活性化合物的经皮渗透。适当经皮吸收贴片的描述可参看如美国专利第5,407,713号、美国专利第5,352,456号、美国专利第5,332,213号、美国专利第5,336,168号、美国专利第5,290,561号、美国专利第5,254,346号、美国专利第5,164,189号、美国专利第5,163,899号、美国专利第5,088,977号、美国专利第5,087,240号、美国专利第5,008,110号和美国专利第4,921,475号。
此外亦可使用其它的药物递送系统。脂质体和乳液是可用于递送(各)活性化合物或药物前体的众所周知的例子。也可使用某些有机溶剂，例如二甲亚砜(DMSO)，但往往要付出具有较大毒性的代价。
此类药物成份(在需要时)可以包装为包含一次或多次剂量有效成份的包装或者调剂盒形式。包装可包括诸如金属箔或塑料薄膜，例如泡罩包装。包装或调剂盒上可附有服用方法说明。
6.6有效剂量
本发明的(各)活性化合物或药物前体，或其成份，通常使用于达到所意欲达到结果的有效量，例如有效治疗或预防所要治疗的具体疾病的所需剂量。(各)化合物可用于治疗性给药以达到预期治疗效果，或预防性给药以达到预防效果。治疗效果指根治或改善拟治疗的潜在疾病与/或根治或改善与潜在疾病相关的一种或若干种症状，从而使病人报告说在感觉上或病情上有所改善，虽然病人仍然罹患该项潜在疾病。例如，将一项化合物投药至罹患过敏的病人，不仅是在潜在过敏反应得到根治或改善时，而且是在病人自觉接触过敏原之后的与过敏相关的症状严重程度减轻或者持续时间缩短，均应视为取得治疗效果。作为另一实例，就治疗哮喘而言，若在哮喘发作后呼吸状况有所改善，或者哮喘发作频率减少，严重程度减轻，均应视为取得治疗效果。治疗效果也包括制止或者减缓疾病的进展，不管症状是否有所改善。
就预防性给药而言，可向有罹患上述疾病之一的患者投予本化合物。例如，如果患者对某项具体药物是否过敏情况不明的话，在投予药物之前可先投予本化合物，以避免或改善对该项药物可能出现的过敏反应。或者亦可用作预防性投药，以避免已诊断患有潜在疾病的患者的症状发作。例如可在预期接触过敏原之前，向过敏患者投予本化合物。化合物也可向反复接触能引起上述疾病之一的过敏原的健康个人进行预防性投药，以预防疾病的发作。例如可向反复接触已知能引起过敏反应的过敏原(如：乳胶)的健康人投予本化合物，以免该这位个人出现过敏症状。化合物亦可在参与能触发哮喘发作的活动之前，事先向哮喘病患者投予本化合物，以完全避免哮喘病的发作，或者减轻其严重程度。
化合物给药的剂量取决于多种因素，包括如拟治疗的具体疾病、给药的方式、是用于预防剂还是治疗，拟治疗疾病的严重程度、病人的年龄和体重、特定活性化合物的生物利用度等等。决定采用何种有效剂量完全在熟谙此项技术者的能力范围之内。
有效剂量最初可从活体外检定进行评估。例如，使用于动物的初步剂量可调配成使该活性化合物的循环血液或血清浓度达到该化合物的IC50或以上，如活体外检定(例如活体外CHMC检定或BMMC检定，以及其它的在实例部份所述的活体外检定)所示。参照特定化合物的生物利用度计算达到此种循环血液或者血清浓度所需的剂量完全在熟谙此项技术者的能力范围之内。作为指南，读者可参看：Goodman and Gilman’sThe PharmaceuticalBasis of Therapeutics〔治疗的药理基础〕一书中的Fingl&Woodbury,“GeneralPrinciples〔通则〕”一章(Chapter1,pp.1-46,最新版,Pagamonon Press)以及其中所列的参考文献。
初步剂量也可根据活体内数据(例如动物模型)进行评估。可用于试验化合物治疗或预防上述各种疾病的药效的动物模型在业内为人所共知的。关于超敏或过敏反应的适当动物模型的描述可参看：Foster，1995，Allergy50(21Suppl)：6-9，discussion34-38、Tumaset al，2001，J.Allergy Clin.Immunol.107(6)：1025-1033。过敏性鼻炎的适当动物模型描述可参看：Szelenyi et al，2000，Arzneimittelforschung50(11)：1037-42；Kawaguchi〔川口〕et al，1994，Clin.Exp.Allergy24(3)：238-244和Sugimoto〔杉本〕et al，2000，Immunopharmacology48(1)：1-7。过敏性结膜炎适的当动物模型描述可参看Carreras etal，1993，Br.J.Ophthalmol.77(8)：509-514；Saiga〔西贺〕etal，1992，Ophthalmic Res.24(1)：45-50；和Kunert etal，2001，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.42(11)：2483-2489。全身性肥大细胞增多症的适当动物模型描述可参看：O'Keefe et al，1987，J.Vet.Intern.Med.1(2)：75-80和Bean-Knudsen etal，1989，Vet.Pathol.26(1)：90-92。高IgE征候群的适当动物模型描述可参看：Claman etal，1990，Clin.Immunol.Immunopathol.56(1)：46-53。B细胞林巴瘤的适当动物模型描述可参看：Hough et al，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA95：13853-13858和Hakim etal，1996，J.Immunol.157(12)：5503-5511。特应性疾病(如特应性皮肤炎、特应性湿疹和特应性哮喘的适当动物模型描述可参看Chan etal，2001，J.Invest.Dermatol.117(4)：977-983和Suto〔须藤〕etal，1999，Int.Arch.Allergy Immunol.120(Suppl1)：70-75。通常熟谙此艺者可利用此类信息作常规变动，求出适合于人类给药剂量。其它适当的动物模型将在实例部份进行描述。
剂量的典型数值范围从约0.0001或0.001或0.01毫克/公斤/天到约100毫克/公斤/天的范围，但可高于或低于此范围，取决于多种因素，包括化合物活性、其生物利用度、给药方式和上述其它因素。剂量的数值与用药的时间间隔可因人而异，以维持提供治疗或预防效果所需的化合物的血浆浓度。例如，化合物可每星期用药一次，每星期用药若干次(例如，每隔一天)，每天一次或每天若干次，取决于多种因素，包括给药的方式、拟治疗的具体疾病，以及处方医师的判断。在局部用药或选择摄取的情况，例如在相关部位局部用药时，(各)活性化合物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。熟谙此艺者完全能够得出最佳的局部用药剂量，而无须经过不必要的实验过程。
(各)化合物如能提供治疗或预防效果，而并无重大的毒性，自然最为理想。(各)化合物的毒性可用标准药物学规程测定。毒性与治疗(或预防)效果之剂量比为治疗指数。治疗指数高的化合物较为理想。
本项发明业已描述如上。以下实例仅作举例说明，并无限制之意。
7.实例
7.1合成对按流程(I)-(V)合成2,4-嘧啶二胺化合物有用的起始材料与中间体
按以下方法制备了一系列对按流程(I)-(V)合成2,4-嘧啶二胺化合物有用的起始材料和N4-单取代-嘧啶胺与N2-单取代-4-嘧啶二胺〔单取代亲核性芳族反应(SNAR)产物〕。适合于合成单取代亲核芳族反应(SNAR)的条件以2-氯基-N4-(3,4-伸乙二氧基苯基)-5-氟基-4-嘧啶胺(R926087)为例举例说明。
7.5本发明的2,4-嘧啶二胺抑制FcεRI受体介导去颗粒作用
一系列以培养人类肥大细胞(CHMC)与/或小鼠骨髓衍生细胞(BMMC)进行的细胞检定均显示本发明的2,4-嘧啶二胺化合物具有抑制IgE诱导去颗粒作用的能力。去颗粒作用的抑制通过在低细胞密度和高细胞密度下测定颗粒特异因子类胰蛋白脢、组织胺和己糖胺脢的释放量来进行衡量。脂质介质的释放与/或合成的抑制作用系通过测量白三烯素LTC4的释放评估，细胞活素的释放与/或合成的抑制系通过对TNF-α、IL-6和IL-13的定量监测。类胰蛋白脢和己糖胺脢系分别按各个实例所述以萤光基质定量。组织胺、TNFα、IL-6、IL-13和LTC4系使用下列市售ELISA检测盒〔脢联免疫吸附检定用检测盒〕定量：组织胺(Immunotech#2015，Beckman Coulter)、TNFα(Biosource#KHC3011)、IL-6(Biosource#KMC006)、IL-13(Biosource#KHC0132)、LTC4(Cayman Chemical#520211)。各种检定的实验方案提供于下。
7.5.1人类肥大细胞与嗜碱细胞的培养
人类肥大和嗜碱细胞按以下所述，从CD34-阴性祖代细胞培养(也请参看于2001年1月8日申请的相关美国专利申请案序号10/053,355所述的方法，其内容以引文方式披露于本文中)。
7.5.5.1STEMPRO-34完全培养基的制备
为制备STEMPRO-34完全培养基(“CM”)，将250毫升STEMPRO-34TM无血清培养基(“SFM”；GibcoBRL，目录号10640)加进过滤瓶中。向其中加入13毫升STEMPRO-34营养补充物(“NS”；GibcoBRL，目录号10641)(详细制备方法的描述见下)。NS容器以大约10毫升无血清培养基(SFM)冲洗，并将该清洗液加至过滤瓶中。在加入5毫升L-榖胺酰胺(200mM；Mediatech，目录号MT25-005-CI和5毫升100X青霉素/链霉素(“pen-strep”；HyClone，目录号SV30010)之后，加SFM使体积达到500毫升，并过滤溶液。
制备完全培养基〔CM〕时的最大可变因素是在加入的无血清培养基〔SFM〕之前营养补充物〔NS〕的融解和混合方法。营养补充物〔NS〕应在37℃的水浴中融解，并进行旋流搅拌，而不是涡动搅拌或者震荡，直至其完全成为溶液为止。旋流搅拌时，注意观察有无尚未溶解的脂类漂浮其上。如果有脂类漂浮，营养补充物〔NS〕外观不均匀，则应放回水浴中，重复旋流搅拌程序，直到其外观均匀时为止。有时此项成份立即溶解到溶液之中，有时要经过几个旋流搅拌周期，有时则根本不能溶解。如果经过几个小时，营养补充物(NS)仍然未能溶解，将其丢弃，另外融解一份新的营养补充物。融解之后质地看上去不均匀的营养补充物(NS)不应该使用。
7.5.1.2CD34+细胞的增殖
使用下述培养基和方法把起始时数量较小的CD34-阳性(CD34+)细胞群落(1-5×l06个细胞)增殖到数量较大的CD34-阴性祖代细胞(大约2-4xl09个细胞)。CD34+细胞(来自同一个捐赠者)系得自Allcells公司(加州伯克利市)。由于Allcells公司通常所提供的CD34+细胞在品质和数量上是有某种程度的波动，应将新递送的细胞转移到15毫升锥形管中，并在使用前在培养基〔CM〕中增殖至10毫升。
在第0天，对活细胞(phase-bright〔生机蓬勃〕期细胞)进行细胞计数，并以1200转/分速度旋转，将细胞滚为球粒。令细胞重新悬浮于含20毫微克/毫升重组人类干细胞因子(“SCF”;Peprotech,Catalog No.300-07)和20毫微克/毫升人类flt-3配位体(Peprotech,Catalog No.300-19)的培养基(“CM/SCF/flt-3培养基”)中，密度为275,000个细胞/毫升。在第4天或第5天左右，进行细胞计数，检查培养物的密度，并加入新鲜的“CM/SCF/flt-3”培养基，将密度稀释为275,000个细胞/毫升。在第7天左右，将培养物转移到无菌玻璃管中，再进行一次细胞计数。在1200转/分转速下对细胞离心分离，并在新鲜的“CM/SCF/flt-3”培养基中重新悬浮为275,000个细胞/毫升的密度。
此项循环从第0天开始重复进行，在增殖期内总共重复3-5次。
在培养物数量较大，在多个培养瓶中进行培养，而且需要再悬浮时，应在进行细胞计数之前把所有培养瓶中的内容物归并到一个单一的容器中。这样能得出一个准确的细胞计数，而且保证了对整个细胞群落的相对均匀一致的处理。在归并之前，要在显微镜下单独检查每一个培养瓶有否污染现象，以免造成整个细胞群落的污染。
在第17-24天之间，培养物即可开始进入衰退期(也就是说，总数大约5-10%的细胞死亡)，不能再像过去那样迅速增殖。在此期间应每天对细胞进行监测，因为培养的完全失败有可能在短短的24小时之内发生。如已开始衰退，对细胞计数，在850转/分转速下旋转分离15分钟，以350,000个细胞/毫升的密度重新再悬浮于“CM/SCF/flt-3”培养基中，以便诱导培养物细胞再进行一次至两次分裂。每天对细胞进行监视，以防止培养失败。
当祖代细胞培养基中有15%以上细胞死亡，并在培养基中开始出现一些碎屑时，即可开始对CD34-阴性祖代细胞进行分化。
7.5.1.3将CD34-阴性祖代细胞分化为黏膜肥大细胞
进行第二阶段的操作，将增殖的CD34-阴性祖代细胞转化为分化的黏膜肥大细胞。这些黏膜的培养人类肥大细胞(“CHMC”)获自由脐带血中分离的CD34+细胞，并按上述方法处理，使其增殖成为CD34-阴性祖代细胞群落。为获取CD43-阴性祖代细胞，培养基的再悬浮循环与以上所述相同，只是培养物以425,000个细胞/毫升的密度植入，并在第4或者第5天另外添加15%的培养基，而不进行细胞计数。此外，培养基的细胞活素成份也进行了修正，使其包含SCF〔人类干细胞因子〕(200毫微克/毫升)和重组人白细胞介素-6〔recombinanthuman interleukin-6(IL-6)〕(200毫微克/毫升；Peprotech,Catalog No.200-06，在无菌10mM乙酸中重新配制为100微克/毫升的培养基)(“CM/SCF/IL-6培养基”)。
第I和第II阶段持续大约5个星期。在1-3星期期间培养物中明显有一些细胞死亡，并出现一些碎屑；在2-5星期期间有一段时间占百分比不很大的一部份培养物不再处于悬浮状态，而是附着于培养容器的表面。
像在第I阶段中一样，在每个循环的第7天对培养物重新悬浮时，应在进行细胞计数之前把所有培养瓶中内容物的归并到一个单一的容器中，以保证对整个细胞群落的处理相对均匀一致。在归并之前，要在显微镜下单独检查每一个培养瓶有否污染现象，以免造成整个细胞群落的污染。
归并各个培养瓶时，将体积的大约75%转移到公共容器中，在培养瓶中留下大约10毫升的培养液。在装有剩余培养液的培养瓶侧面以锐角的角度叩击，敲下附着在瓶壁上的细胞。然后在与第一次叩击处成直角的部位再次叩击，以便使附着在瓶壁上的细胞完全脱落。
将培养瓶呈45度角斜倚几分钟，然后再把剩余培养液倾倒到计数容器之中。细胞先以950转/分转速旋转15分钟，然后植入瓶中，每瓶植入35-50毫升(密度为425,000个细胞/毫升)。
7.5.1.4CD34-阴性祖代细胞分化为结缔组织型肥大细胞
按以上所述方法制备CD34-阴性祖代细胞的增殖群落，然后进行处理，使其形成类胰蛋白脢/胃促胰脢阳性(结缔组织)表现型。所采用方法与上述黏膜肥大细胞相同，但在培养基中用IL-4〔人白细胞介素-4〕代替IL-6〔人白细胞介素-6〕。所获得的细胞具有典型的结缔组织肥大细胞的特征。
7.5.1.5CD34-阴性祖代细胞分化为嗜碱性细胞
按第7.5.1.3所述制备CD34-阴性祖代细胞的增殖群落，用以形成嗜碱性细胞的增殖群落。CD34-阴性细胞的处理方法与黏膜肥大细胞所述的处理方法相同，但在培养基中以IL-3〔人白细胞介素-3〕代替IL-6〔人白细胞介素-6〕。
7.5.2CHMC〔培养人类肥大细胞〕低细胞密度IgE〔免疫球蛋白E〕的激活﹕类胰蛋白脢和LTC4〔白三烯C4〕的检定
为复制96孔U-形底板脢标板(Costar3799)，在已经制备的包含2%MeOH和1%DMSO〔二甲基亚砜〕的微管蛋白〔MT〕〔137mMNaCl、2.7mM KCl、1.8mM CaCl2、 1.0mM MgCl2、5.6mM葡萄糖、20mM Hepes缓冲液(pH值7.4)、0.1%牛血清白蛋白(Sigma公司A4503)〕中加入65微升的化合物稀释液或者对照样品。将培养人类肥大细胞〔CHMC〕制备成球粒(980转/分转速，10分钟)并再悬浮于预热的微管蛋白〔MT〕中。向每个96孔脢标板上加65微升的细胞。根据每个特定的培养人类肥大细胞〔CHMC〕捐赠者的去颗粒作用活性，装载量为1000-1500细胞/孔。混合四次，并在37℃下培育1小时。在1小时的培育期间内，制备6X抗免疫球蛋白〔IgE〕溶液〔兔抗人类免疫球蛋白(IgE,1毫克/毫升，Bethyl Laboratories A80-109A)，在MT缓冲液中稀释为1：167浓度〕。向各个适当的脢标板上加25微升的6X抗免疫球蛋白E(IgE)溶液，刺激细胞。向未受刺激的对照脢标板孔内注入25微升的微管蛋白〔MT〕溶液。加入抗免疫蛋白E〔IgE〕后混合两次。在30分钟的培育期间，按1：2000的比例以类胰蛋白脢检定缓冲液〔0.1MHepes缓冲液(pH值7.5)、10%重量/体积甘油、10μM肝素(Sigma H-4898)、0.01%NaN3〕稀释20mM类胰蛋白脢基质母液〔(Z-Ala-Lys-Arg-AMC2TFA;Enzyme Systems Products,#AMC-246)〕。在1000转/分转速下离心旋转脢标板10分钟，使细胞滚为球粒状。将25微升上层清液转移到96孔黑底脢标板上，并向各个孔中加入100微升新稀释的类胰蛋白脢基质溶液。在室温下的脢标板培育30分钟。在分光光度计标板读数仪学读取355毫微米/460毫微米精度的光密度。
也按照供应者的说明，用适当的ELISA检测盒〔脢联免疫吸附检定用检测盒〕对经适当稀释的上层清液(稀释度通过对每个捐赠者细胞群落经验测定，以使样品测定值保持在标准曲线的范围之内)进行白三烯素C4(LTC4)的定量测定。
7.5.3CHMC〔培育人类肥大细胞〕高细胞密度IgE〔免疫球蛋白E〕激活作用﹕去颗粒作用（类胰蛋白脢、组织胺）、白三烯素（LTC4）和细胞活素（TNFα、IL-13）的检定
培育人类肥大细胞〔CHMC〕在CM〔完全培养基〕中以IL-4〔白细胞介素-4〕(20毫微克/毫升)、SCF〔干细胞因子〕(200毫微克/毫升)、IL-6〔白细胞介素-6〕(200毫微克/毫升)和人类IgE〔免疫球蛋白E〕(CP1035K，Cortx Biochem公司,100-500毫微克/毫升，因世代而异)敏化5天。敏化后进行细胞计数，滚为球粒状(1000转/分转速，5-10分钟)，并以1-2×106细胞/毫升的密度重新悬浮于MT〔微管蛋白〕缓冲液中。向每个孔中注入100微升细胞悬浮液和100微升化合物稀释液。最终的媒介液浓度为0.5%DMSO〔二甲基亚砜〕。在37℃下(5%CO2)培育一小时。在以化合物处理1小时之后，以6X抗-IgE刺激细胞。混合注有细胞的孔，并允许脢标板在37℃下(5%CO2)培育一小时。培育1小时后，将细胞滚为球粒状(1000转/分转速，10分钟)，在每个孔中收集200微升上层清液，注意不要扰动球粒状的细胞。将上层清液板置于冰上。在为时7小时的步骤(参看下文)对已稀释为1：500的上层清液进行类胰蛋白脢检定。将细胞颗粒重新悬浮于240微升含0.5%DMSO〔二甲基亚砜〕和相对应浓度化合物的完全培养基〔CM〕中。培育人类肥大细胞〔CHMC〕在37°C(5%CO2)下培育7小时。培育后，将细胞滚为颗粒状(1000转/分转速，10分钟)，从每个孔中收集225微升，置于-80°C温度下，直到ELISA检定〔脢联免疫吸附检定〕准备就绪时为止。按照供应者的说明，用经适当稀释的样品(稀释度通过对每个捐赠者细胞群落经验测定，以使样品测定值保持在标准曲线的范围之内)进行ELISA检定。
7.5.4BMMC〔骨髓肥大细胞〕高细胞密度IgE〔免疫球蛋白E〕激活作用﹕去颗粒作用（己糖胺脢、组织胺）、白三烯素（LTC4）和细胞活素（TNFα、IL-6）的检定
7.5.4.1WEHI-调理培养基的制备
WEHI-调理培养基是在加湿的、温度为37°C、含5%CO2/95%空气的培育箱中，以Iscove’s Modified Eagles Media培养基(来源：Mediatech,Hernandon,VA)辅以10%加热灭活胎牛血清(来源：FBS;JRH Biosciences,Kansas City,MO)、50μM的2-巯基乙醇(来源：Sigma,St.Louis,MO)和100国际单位/毫升青霉素-链霉素(来源：Mediatech)培育鼠骨髓单核血球WEHI-3B细胞(来源：American Type Culture Collection,Rockville,MD)而获得。最初的细胞悬浮液以200,000细胞/毫升密度植入，然后在两周期间每3-4天以1：4的比例离心分离。撇取无细胞的上层清液，分成为等份试样，置于-80°C温度下保存备用。
7.5.4.2BMMC〔骨髓肥大细胞〕培养基的制备
BMMC培养基的成份包括：20%的WEHI-调理培养基、10%加热灭活FBS〔胎牛血清〕(来源：JHR Biosciences)、25mM HEPES,pH值7.4(来源：Sigma)、2mM L-谷氨酸胺(来源：Mediatech)、0.1mM非必要氨基酸(来源：Mediatech)、1mM丙酮酸钠(来源：Mediatech)、50μM2-巯基乙醇(来源：Sigma)和100国际单位/毫升的青霉素-链霉素(来源：Mediatech)溶解于RPMI1640培养基(来源：Mediatech)之中。为制备BMMC培养基，把所有成份加入到无菌IL过滤装置之中，在使用之前通过0.2μm过滤器过滤。
7.5.4.3实施方案
骨髓肥大细胞(BMMC)在BMMC培养基中以666x103细胞/毫升的细胞密度用鼠干细胞因子〔murine SCF〕(20毫微克/毫升)和单株抗二硝基酚抗体〔monoclonal anti-DNP〕(10毫微克/毫升,来源：Clone SPE-7,Sigma#D-8406)敏化过夜。敏化后，对细胞计数，将细胞滚为球粒状(1000转/分转速，5-10分钟)，并以1-3×106细胞/毫升的密度重新悬浮于MT〔微管蛋白〕缓冲液中。向各孔注入100微升的细胞悬浮液和100微升的化合物稀释液。最终媒液浓度为0.5%DMSO〔二甲基亚砜〕。在37°C(5%CO2)下培育1小时。经1小时化合物处理后，以6X刺激物(60毫微克/毫升DNP-BSA〔二硝基酚-牛血清白蛋白〕)刺激细胞。混合注有细胞的孔，让标板在37°C(5%CO2)下培育1小时。培育1小时后，将细胞滚为球粒状(1000转/分转速，10分钟)，在每个孔中收集200微升上层清液，注意不要扰动球粒状的细胞，并将其转移的洁净的管中或者96孔脢标板上。将上层清液标板置于冰上。在为时4-5小时的步骤(参看下文)中，进行己糖胺脢检定。将细胞颗粒重新悬浮于240微升含0.5%DMSO〔二甲基亚砜〕和相对应浓度化合物的WEI-调理培养基中。骨髓肥大细胞〔BMMC〕在37°C(5%CO2)下培育4-5小时。培育后，将细胞滚为颗粒状(1000转/分转速，10分钟)，从每个孔中收集225微升，置于-80°C温度下，直到ELISA检定〔脢联免疫吸附检定〕准备就绪时为止。按照供应者的说明，用经适当稀释的样品(稀释度通过对每个捐赠者细胞群落经验测定，以使样品测定值保持在标准曲线的范围之内)进行ELISA检定。
己糖胺脢检定：在固体黑色96孔检定板上的各个孔中注入50微升己糖胺脢基质(4-甲基伞花基-N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷；2mM)。向己糖胺脢基质上加入50微升骨髓肥大细胞〔BMMC〕上层清液，在37°C下放置30分钟，并于5、10、15和30分钟时在分光光度计上读取读数。
7.5.5嗜碱细胞IgE或尘螨激活作用﹕组织胺释放检定
嗜碱细胞激活作用检定用采自对尘螨过敏捐赠者并以葡聚糖沉降作用除去大部份红血球的人类末梢血管血进行。人类末梢血管血按1：1的比例与3%葡聚糖T500混合，并令RBC〔红细胞〕沉降20-25分钟。上半部份用3倍体积的D-PBS〔杜氏无菌磷酸盐缓冲生理盐水液〕稀释，并在室温(RT)下以1500转/分转速离心沉降细胞。吸出上层清液，用等体积的MT〔微管蛋白〕缓冲液洗涤细胞。最后将细胞重新悬浮于含0.5%DMSO〔二甲基亚砜〕的MT-缓冲液之中，令其体积相当于血液的原有体积。在V-形底96孔组织培育板上，在0.5%DMSO〔二甲基亚砜〕的存在下，令三组80微升细胞与20微升化合物混合。共检测8个化合物浓度，得出一个包括最大值(刺激)和最小值(无刺激)的10点剂量反应曲线。细胞在37°C,5%CO2条件下培养1小时，随后加入20微升6X的刺激物〔1微克/毫升抗-IgE(来源：Bethyl Laboratories)667抗体单位/毫升室内尘螨(来源：Antigen Laboratories)〕。细胞在在37°C,5%CO2下刺激30分钟。培养板在室温下以1500转/分转速离心旋转10分钟，收集80微升上层清液，用Immunotech公司出品的组织胺ELISA检测盒进行组织胺含量分析。ELISA检定按供货商的说明进行。
7.5.6结果
低密度CHMC〔培养人类肥大细胞〕检定结果(第7.5.2节)、高密度BMMC〔骨髓肥大细胞〕检定结果(第7.5.4节)和嗜碱细胞检定结果(第7.5.5节)如表1所示。高密度CHMC〔培养人类肥大细胞〕的检定结果(第7.5.3节)显示于表2之中。在表1与表2中，所有报告值均为IC50值(单位是μM)。“9999”值表示IC50>10μM，因而在10μM浓度下无可量度的活性。所测定的大部份化合物具有小于10μM的浓度，其中许多的IC50在亚微摩尔级别之上。
7.62,4-嘧啶二胺抑制FcγRI受体介导去颗粒作用
化合物R921218、R921302、R921303、R940347、R920410、R927050、R940350、R935372、R920323、R926971和R940352在与第7.5节的描述相似的检定中显示了本发明的2,4-嘧啶二胺化合物对FcγRI受体介导去颗粒作用的抑制能力，唯一的例外是细胞接触的并非IgE〔免疫球蛋白E〕，而是由家兔抗人类免疫球蛋白G抗原结合片段〔rabbit anti-humanIgG Fab fragment〕(来源：Bethyl Laboratories,Catalog No.A80-105)激活。
所有被测定化合物均显示亚微摩尔浓度级别的IC50值。
7.7本发明的2,4-嘧啶二胺化合物有选择地抑制上游IgE受体级联
为确认本发明的2,4-嘧啶二胺化合物有许多能通过阻断或者抑制早期IgE〔免疫球蛋白E〕受体信号转导级联而发挥其对活性的抑制作用，在细胞检定中对若干种化合物的艾诺霉素诱导去颗粒作用的影响进行了检测，其结果如以下描述所示。
7.7.1 CHMC〔培养人类肥大细胞〕低细胞密度艾诺霉素激活﹕类胰蛋白脢检定
艾诺霉素诱导的肥大细胞去颗粒作用检定按CHMC低密度IgE激活作用检定(参看上文第7.5.2节)所描述的方法进行，所不同的是：在1小时的培育中，制备6X的艾诺霉素溶液〔5mM艾诺霉素(来源：Signma I-0634)溶解于MeOH(母液)中，在MT缓冲液中稀释为1：416.7(2μM最终浓度)〕，向适当的标板上加入25微升的6X艾诺霉素，对细胞进行刺激。
7.7.2 嗜碱细胞艾诺霉素激活作用﹕组织胺释放检定
艾诺霉素诱导的嗜碱细胞去颗粒作用检定按嗜碱细胞IgE检定或者尘螨激活检定(参看上文第7.5.5节)所描述的方法进行，所不同的是在以化合物培育之后，细胞以20微升2μM的艾诺霉素进行刺激。
7.7.3 结果
以IC50值(单位μM)报告的艾诺霉素诱导去颗粒作用检定结果已列于上述表1之中。在被测试的活性化合物(即对IgE诱导去颗粒作用具有抑制作用的化合物)中，绝大多数对艾诺霉素诱导去颗粒作用并无抑制作用,从而确认了这些活性化合物选择性地抑制早期(或上游)IgE受体信号转导级联。
通过测定CHMC细胞〔培育人类肥大细胞〕中的抗IgE诱导或者艾诺霉素诱导钙流出，我们确认了一些活性化合物的此种结果。在这些Ca2+流出检验中，10μM的R921218和10μM的R902420对抗-IgE-诱导Ca2+流出有抑制作用，但对艾诺霉素诱导的Ca2+流出毫无作用(参看图4)。
7.8本发明的2,4-嘧啶二胺化合物的抑制作用是即刻的
为验证其作用的即刻性，本发明的某些2,4-嘧啶二胺与抗-IgE抗体激活剂同时加入以上所描述的细胞检定中。所有的被测试化合物都起着阻断CHMC细胞的IgE诱导去颗粒作用，其阻断程度相当于在受体交联之前以化合物对CHMC细胞预先培育10分钟或30分钟所观察到的阻断程度。
7.9活体外药理学活性的动力学
以冲洗实验对化合物R921218、R921302、R921219、R926240、R940277、R926742、R926495、R909243和R926782进行检测。在这些实验中，CHMC细胞或者是即刻在1.25μM化合物存在下(零时间)、或者在冲洗除去化合物后隔30分钟、60分钟或者120分钟再以抗-IgE抗体激活。在这些化合物除去30分钟之后，其抑制能力显著减退，表明要想得到最大的去颗粒作用抑制效果，肥大细胞必须始终与这些化合物保持接触。所测试的其它化合物显示相同的结果。
7.10毒性﹕T细胞与B细胞
以B细胞和T细胞进行的细胞检定显示本发明的化合物能起到它们抑制活性的或作用，而不会给免疫细胞带来毒性。毒性检定的实施方案如以下所示。
7.10.1Jurkat(T-细胞)毒性
将Jurkat细胞在全RPMI(10%加热灭活胎牛血清)培养液中稀释至2×105细胞/毫升的浓度，在at37°C,5%CO2环境下培育18小时。向含65微升2X化合物(最终媒介液浓度为0.5%DMSO〔二甲基亚砜〕,1.5%MeOH)的96孔V-形底培养板(经组织培养液处理，来源：Costar)上注入65微升密度为7.7x105细胞/毫升的细胞培养液。将其混合，并在37°C,5%CO2的环境下培育18-24小时。通过细胞光散射的流动细胞计数分析对毒性进行评估。
7.10.2BJAB(B-细胞)毒性
将对数期〔log phase〕B-细胞株BJAB置于RPMI1640培养基+10%热灭活胎牛血清、1x L-谷氨酰胺、1x青霉素、1x链霉抗生物素蛋白和1xβ-巯基乙醇中在37°C与 5%CO2的环境下培育。首先收取BJAB，旋转分离，并将其重新悬浮于培养基中，使其密度达到7.7×105细胞/毫升。在0.1%DMSO〔二甲基亚砜〕存在下于96孔V-形底组织培养板上混合两份65微升细胞与65微升化合物的混合物。通过细胞光散射的流动细胞计数分析对毒性进行评估。
7.10.3毒性﹕细胞荧光活性检测
向每个含有50微升化合物的孔内植入50毫升的细胞(密度1×106/毫升)。最终媒介液浓度为0.5%DMSO〔二甲基亚砜〕，1.5%MeOH。震荡培养板1分钟，将细胞与化合物混合。在37°C,5%CO2的环境下培育18小时。次日，从每个孔取出50微升细胞，加入50微升细胞荧光检定试剂(Invitrogen)。将板震荡1分钟。在荧光计上读取读数。
7.10.4结果
以IC50值(单位μM)报告的T-细胞与B-细胞毒性检定结果显示于上述表2之中。除若干个例外(见表1)以外，所有被测试化合物在有效的抑制浓度下对B-细胞和T-细胞均无毒性。对原B-细胞进行的检定结果与此相同。
7.11动物对2,4-嘧啶二胺具有耐受性
以化合物R921218、R921219和R921302显示了本发明的化合物能在低于对动物产生毒性的剂量下展现出抑制作用。
7.11.1R921218
R921218为一项长期的非临床安全研究项目，其结论显示啮齿类和非啮齿类动物对此项药剂有很好的耐受力。对R921218的毒物学/非临床安全测试的结果可以概述如下：在为期14天的重复剂量毒性研究期间，以比对人类产生预期药效的剂量高出许多倍的剂量对非啮齿类动物(家兔与灵长类动物)进行鼻腔内投药，以及的啮齿类动物(小白鼠与大鼠)进行口腔内投药均未显示限制药物极限剂量的毒性。在对心血管系统、呼吸系统与/或中枢神经系统功能进行的核心药理学安全试验组合中，并未发现任何不良后果。遗传毒性测试中并未显示有可能导致突变或者诱发畸变的证据，暴露于皮肤上以及眼睛中也并未发现不良副作用。以下是关键毒性研究的简短讨论。
以2.1、4.5或6.3毫克/公斤/日的剂量对狒狒(Cynomolgus monkeys)进行了为期14天的重复剂量鼻内投药毒性研究。其生命参数包括：临床观察、体重、摄食状况、眼科检查、血压、心电图检查、血液学检查、临床化学、尿化验分析、免疫毒物学评估、总体尸检、器官重量、毒物动力学评估和组织病理学检查(包括鼻腔)。在任何一项研究参数中均未发现由R621218所导致的不良结果，研究得出的NOAEL(=no observed adverse effect level〔无观察到的不良后果〕)剂量为6.3毫克/公斤/天。
以1.7、3.4或5.0毫克/公斤/日的剂量对纽西兰白色家兔进行了为期14天的重复剂量鼻内投药毒性研究。其生命参数包括：临床观察、体重、摄食状况、眼科检查、血液学检查、临床化学、总体尸检、器官重量、毒物动力学评估和组织病理学检查(包括鼻腔)。在任何一项研究参数中均未发现由R621218所导致的不良结果，研究得出的NOAEL(=noobservedadverse effect level〔无观察到的不良后果〕)剂量为5.0毫克/公斤/天。
7.11.2R921219
在初步剂量探讨研究中，600毫克/公斤的一次性口服剂量被认为是NOEL(=noobserved effect level〔无观察到效果〕)剂量，而200毫克/公斤/天或者更高的重复(7天)剂量则不被耐受。
活体外沙门氏菌-大肠杆菌/哺乳动物-微粒体逆突变检定(Ames氏试验)发现试验菌株TA1537对R921219呈试验阳性，代谢激活可以存在或者不存在，证实了原先的一项研究结果。对其它4个测试菌株，R921219并未显示任何不良后果。在活体外染色体畸变检定中，并未发现R921219具有任何致畸变的潜在可能。
7.11.3R921302
对啮齿类动物曾进行过若干个非GLP〔GLP=Good Laboratory Practice优良药品安全检验规范〕毒性探索研究，发现小白鼠可对1000毫克/公斤的口服剂量耐受7天。以100、300和1000毫克/公斤的剂量对小白鼠进行了14天的口服毒性研究。1000毫克/公斤的剂量无法耐受，而300毫克/公斤的剂量则有证据表明能导致外阴部的组织病理学变化。100毫克/公斤的剂量在该项研究中被认定是NOAEL〔无观察到效果〕的剂量。以100毫克/公斤每日一次、100毫克/公斤每日两次、300毫克/公斤每日一次和300毫克/公斤每日两次的剂量对小白鼠进行了为期28天的口服毒性试验。事实证明R921302在300毫克/公斤每日一次或每日两次的剂量均属不可耐受。较低的剂量(100毫克/公斤每日一次或每日两次)看来耐受良好(临床和组织病理学结果尚不得而知)。对大鼠来说，以50、 150和300毫克/公斤的剂量给药32天看来均耐受良好(临床和组织病理学结果尚不得而知)。
活体外沙门氏菌-大肠杆菌/哺乳动物-微粒体逆突变检定(Ames氏试验)发现具有S9和TA1537的试验菌株TA98对R921302呈试验阳性。对其它3个测试菌株，R921302并未显示任何不良影响。在活体外染色体畸变检定中，并未发现R921302具有任何致畸变的潜在可能。
7.122,4-嘧啶二胺可以通过口服生物利用
对50个以上本发明的2,4-嘧啶二胺化合物进行了口服生物利用率检验。为了进行此项研究，化合物被融解在各种媒介液(例如PEG400溶液和CMC悬浮液)，对大鼠进行静脉内和口服给药。给药后，采血萃取血浆样本，以高性能液相层析/串联质谱法(LC/MS/MS)测定化合物的血浆浓度。药物代谢动力学分析依据血浆浓度数据完成。感兴趣的药物代谢动力学参数包括：廓清率(CL)、稳态分布体积(Vss)、最终半衰期(t1/2)和口服生物利用率(%F)。
这些药物代谢动力学研究表明许多2,4-嘧啶二胺化合物是可以口服利用的，其生物利用率(%F)最高可以达到50%(范围在0-50之内)。其半衰期为0.5到3小时。尤其是化合物R940350、R935372、R935193、R927050和R935391在大鼠中呈现了良好的口服生物利用率和半衰期。因此，这些研究确认了这些2,4-嘧啶二胺化合物适合于口服给药。
7.13化合物对治疗过敏有效
化合物R926109、R921218、R921219、R921302、R926495、R926508、R926742、R926745和R945150对治疗过敏症状的功效曾在小白鼠被动性皮肤过敏(PCA)模型中进行过活体内评估。这一模型提供了对组织肥大细胞IgE-诱导去颗粒作用的直接量度。在这个模型中，令已接触IgE抗原的动物暴露于过敏原激发之下，由于肥大细胞组织胺的释放造成的皮肤血管系统的渗透性变化依据渗漏到周围组织中的染料数量的变化进行量度。化合物对直接调控肥大细胞去颗粒作用的介导物质的抑制可以从萃取渗入组织中的染料很容易地进行量度。
7.13.1研究方案的描述及研究结果
在PCA〔被动皮肤过敏〕检定中，给小白鼠皮内注射抗二硝基苯酚〔DNP〕IgE抗体(第-1天)，使其被动致敏。在预定试剂给动物注射处理药剂(第0天)。在静脉注射与人类血清白蛋白共轭的二硝基苯酚〔HSA-DNP〕和伊文思氏蓝染料〔Evans blue dye〕并量度药剂的皮肤肥大细密去颗粒作用的调制效应。所产生的IgE受体交联以及随后的肥大细胞去颗粒作用诱导的血管渗透性的增进通过量度染料外渗进入组织的数量而测定。染料以甲酰胺从组织中萃取，然后在620毫微米读取萃取物的吸收度。药剂处理的抑制效果以与媒介液处理相比的百分比抑制表示，即以A620的下降百分比表示。
有两种化合物经测试用作阳性对照剂：组织胺拮抗剂苯海拉明和5-羟色胺拮抗剂二苯环庚啶。两种介导物质〔组织胺和5-羟色胺)都在小白鼠肥大细胞IgE-介导去颗粒作用发生时释放。两种参照化合物均抑制PCA〔被动皮肤过敏〕反应；二苯环庚啶作为常规使用于以后的试验中。二苯环庚啶可重复抑制61%+/-4%(8毫克/公斤,i.p.,30分钟预治疗时间,n=23个试验)的PCA反应。
7.13.1.1结果
试验中观察到了随R921218、R926109、R921219和RR921302剂量增加而增强的对FcεR-介导血管渗漏量的剂量依赖性抑制作用。这些化合物或者以溶液配方形式(67%PEG/33%柠檬酸盐缓冲剂)或者以水悬浮液形式(15%Avicel〔微晶粉末纤维素〕)给药。这些结果表明在化合物血浆浓度、活体内功效和活体外效能三者之间存在着很强的相关关系。效能最强的化合物R921219在大约10微克/毫升循环暴露量下即具有活性(剂量水平为100毫克/公斤时达到68%的抑制)，而较弱的分子R921302在100毫克/公斤剂量水平下仅能减少42%的血浆外渗。此外，暴露于血内循环化合物中的时间长短在抑制活性持续时间长短中直接表现出来。在药物动力学研究中测定为代谢最稳定的化合物R921302在抗原诱导受体信号出现之前能抑制血管外渗1-2小时，随后其功效开始减弱。
表3和表4小结了以上所述数据。
化合物R926495、R926508、R926742、R926745和R926150以PEG型配方口服给药也能抑制被动性皮肤过敏〔PCA〕反应(数据未在此显示)。
7.14化合物治疗哮喘有效
化合物R921218、R921302、R926495、R926508、R926742和R921219治疗哮喘的功效展示于羊模型过敏性哮喘之中。羊在暴露于吸入抗原(猪蛔虫Ascaris suum)后几分钟内出现支气管收缩，在早期过敏反应(EAR,early allergic response)阶段出现最大气流阻塞。预形成的肥大细胞介导物质的释放可能是此种早期气流阻塞的原因。除EAR〔早期过敏反应〕之外，羊模型还允许我们进一步评估我们的化合物对迟发性哮喘反应(LAR,lateasthmatic reaction)和由于气道局部或者小范围过敏原激惹而导致的非特异性气道超敏反应(AHR,airway hyperresponsiveness)的治疗效果。在羊身上，在接触抗原几小时后，开始出现AHR〔气道超敏反应〕，且最长可持续两周的时间。以下所述的结果显示所测试的化合物具有抑制由于肥大细胞释放细胞因子而造成的一连串连锁反应事件。
7.14.1研究实施方案
在过敏性哮喘的羊模型中，通过气管内插管将试验对象以气溶胶形式投予给羊，随后以气溶胶形式向羊投予从猪蛔虫(Ascaris suum)萃取的抗原，羊对此种抗原具有天然的过敏性。过敏原的激发导致直接的气管收缩(包括早期过敏反应和迟发过敏反应)和持续的非特异性气道超敏反应(AHR)。种三项特征和人类过敏性哮喘患者身上所看到的症状十分相似。试验药剂的活性通过测量肺抵抗力(RL)的改变测定，此项数据根据跨肺压力、流量和呼吸量数值进行计算。采自同一头羊经生理盐水治疗后的历史对照数据与过敏原激惹后采得的数据比较表明在EAR〔早期过敏反应〕阶段RL值急剧上升，并在过敏原激惹之后一直持续大约2-3个小时。LAR〔迟发过敏反应〕表现为较不明显的RL值上升，它开始于过敏原激惹之后约5-6个小时，在过敏原激惹之后8个小时后得到缓解。在激惹24小时之后，进行了对卡巴胆碱(carbachol)剂量反应的测定，以判断是否存在AHR〔气道超敏反应〕，后者的定义是令RL从基线上升400%所需要的卡巴胆碱剂量。(此项数值称为激惹RL从基线上升400%所需的卡巴胆碱激惹浓度(provocative concentration at400%,PC400)。此项数据一同一个体给予生理盐水对照气溶胶投予后的历史对照数据以及以猪蛔虫激惹后所得数据进行比较。
7.14.2结果
所有被测试化合物均显示了对LAR〔迟发过敏反应〕和AHR〔非特异性气道超敏反应〕的抑制作用，其中有些药物一显示了对EAR〔早期过敏反应〕的抑制作用。表5所示是在一系列评估活性的试验中，在不同的预治疗时间，用若干种不同溶液和悬浮液配方所得到的每种化合物的最佳反应。R921218对EAR〔早期过敏反应〕的效力似乎取决于配方，剂量为每头羊30毫克，以10%乙醇溶液气溶胶形式给药看来效果最好。R926495、R926742、R926508和R921219以每头羊45毫克的剂量，以水悬浮液的形式在过敏原激惹前60分钟给药，结果显示完全阻断了LAR〔迟发过敏反应〕和AHR〔非特异性气道超敏反应〕。除了这些后期参数之外，以R921219、R926508或R926495治疗也大大减轻了EAR〔早期过敏反应〕的症状。以45%PEG400/55%柠檬酸盐缓冲液媒介液对RR921302的功效进行了研究。在这些条件下，R921302,如在激惹之前60分钟以每头羊30毫克的剂量给媒液影响。
这些数据清楚显示此类化合物可以阻断过敏性羊的哮喘反应。与历史对照数据相比，所有化合物都显著地抑制了AHR〔气道超敏反应〕和LAR〔迟发过敏反应〕。R921219、R926508和R926495对EAR〔早期过敏反应〕有显著的抑制作用(分别为54%、21%和33%)。与此相比，R921218、R921302和R926742以水悬浮液形式投药时，对EAR〔早期过敏反应〕无抑制作用。
表5
举例化合物对羊模型过敏性哮喘的功效
7.15化合物对治疗哮喘有效
R921304和R921219治疗哮喘的功效也在过敏性哮喘的小白鼠模型中得到了显示。
7.15.1研究实施方案
小白鼠在第0天和第7天经由腹膜内给药途径在辅药〔明矾〕的存在下以卵清蛋白〔鸡蛋蛋白〕进行敏化。一周后，小白鼠在第14天、第15天和第16天(较严格的模型)或者在第14天(较不严格的模型)以鼻内给予方式用卵清蛋白进行激惹。此项敏化和激惹过程导致气道超敏反应和肺部发炎，这是人类过敏性哮喘的两项占主导地位的症状。在小白鼠模型中，活体内气道反应以全身体积描记器测定，以求出PENH值(enhanced Pause,BuxcoElectronics)。PENH是一项包括峰吸气量(PIF)、峰吐气量(PEF)、吸气时间、吐气时间和舒缓时间的无因次值，并被认为是衡量气道反应的一项有效参数。对过敏原激惹的反应(OVA)与仅受生理盐水激惹的动物进行比对。激惹24小时之后，小白鼠暴露于加大剂量的乙酰甲胆碱(一种蕈毒碱受体促效剂)之下，造成平滑肌收缩。与仅用生理盐水激惹的小白鼠相比，受到卵清蛋白激惹的小白鼠对乙酰甲胆碱表现出显著的气道超敏反应。除此以外，受卵清蛋白激惹的小白鼠与仅受生理盐水激惹的小白鼠相比，在气道上观察到明显的细胞浸润。此种细胞浸润主要以嗜伊红细胞为特征，但也出现少量的嗜中性细胞和单核细胞的进入组织。
以这一模型对肥大细胞去颗粒作用的小分子抑制剂进行评估的可信性在若干方面得到了验证。首先，采用缺乏肥大细胞的小白鼠品种(W/Wv)进行的试验证实卵清蛋白诱导的反应取决于肥大细胞的存在。在缺乏肥大细胞的小白鼠品种中，卵清蛋白敏化和激惹并不导致气道的超敏反应和嗜伊红细胞的浸润。其次，肥大细胞稳定剂色甘酸(Cromolyn)能阻断卵清蛋白诱导的气道超敏反应和发炎(数据未显示)。此外，类甾醇类如地塞米松(dexamethasone)和布地奈德(budesonide)对乙酰甲胆碱诱导的支气管收缩的抑制效应支持了用这一模型来评估治疗哮喘反应的化合物(尤其是并非由肥大细胞稳定机制介导的哮喘反应)的可信性。
7.15.2结果
R921304的功效从第7天至第16天以鼻内给予方式连续给药10天，最后三次给药每次都在生理盐水或者卵清蛋白激惹之前30分钟。与以媒介液治疗的小白鼠相比，R921304能抑制由卵清蛋白诱导的对乙酰甲胆碱的气道超敏反应。
在一项不甚严格的试验方案中，小白鼠只在第14天以卵清蛋白激惹一次，然后以皮下注射方式投予70毫克/公斤剂量的溶解于67%PEG400/33%柠檬酸盐缓冲液中的R921219，并在30分钟之后以生理盐水或者卵清蛋白激惹，该项试验显示R921219完全阻断了气道超敏反应以及细胞浸润现象。
在较不迫切的实验方案中，其中此类老鼠只在第14天以卵蛋白激发一次，在盐水或卵蛋白激发的前30分钟R921219皮下投药于70毫克/公斤在67％PEG400/33％柠檬酸盐缓冲液中，证明R921219完全阻断卵蛋白-诱导的气道过敏感和细胞浸润。
这些结果清楚显示R921219和R921304在过敏性哮喘的小白鼠模型中能有效抑制气道反应。
7.16 2,4-嘧啶二胺化合物在激活肥大细胞中抑制Syk激脢下游的蛋白质磷酸化作用
2,4-嘧啶二胺类化合物对Syk激脢下游的蛋白质磷酸化作用的抑制效果以化合物R921218、R218219和R921304在由IgE受体激活的BMMC细胞〔骨髓肥大细胞〕中进行试验。
在检定中，BMMC细胞〔骨髓肥大细胞〕在37°C下在不同浓度(0.08μM、0.4μM、2μM和10μM)的试验化合物存在下培育1小时。此类细胞随后以抗-IgE抗体激惹，如前所述。10分钟后，溶解细胞，以电泳法(SDS PAGE)分离细胞蛋白质。
电泳之后，以免疫印迹法〔immunoblot〕评估图7、10和11A-D所示的蛋白质磷酸化作用。抗体购自以下来源：Cell Signaling Technology,Beverley,MA。
参看图7、10和11A-D，所显示的被测化合物抑制IgE受体信号级联中Syk上游的蛋白质磷酸化，而不是Syk下游的蛋白质磷酸化，从而既确认了这些化合物抑制上游的IgE诱导去颗粒作用，而且也确认了这些化合物通过抑制Syk激脢来实现其抑制活性的作用。
7.17 2,4-嘧啶二胺类化合物在生化检定中抑制Syk激脢
对若干种2,4-嘧啶二胺化合物进行了测试，以了解在以单离Syk激脢进行生化萤光极化检定中，此类化合物对肽基质的Syk激脢催化磷酸化作用的抑制能力。在此试验中，化合物在激脢缓冲液(20mM HEPES,pH值7.4、5mM MgCl2、2mM MnCl2、1mM DTT、0.1毫克/毫升乙酰化牛γ-球蛋白)稀释至1%DMSO〔二甲基亚砜〕。溶于1％DMSO〔二甲基亚砜〕(最终浓度0.2％DMSO)中的化合物在室温下与ATP〔三磷酸腺苷〕/基质溶液混合。加入Syk激脢(来源：Upstate,Lake Placid NY)，使其达到最终反应体积20微升，在室温下培育反应30分钟。最终酵素反应条件为：20mM HEPES,pH7.4、5mM MgCl2、2mM MnCl2、1mM DTT、0.1毫克/毫升乙酰化牛γ-球蛋白0.125毫微克Syk,4uMATP〔三磷酸腺苷〕、2.5uM肽基质(来源：biotin-EQEDEPEGDYEEVLE-CONH2,SynPep Corporation)。按照制造厂商(厂商名：PanVeraCorporation)的说明，将EDTA〔乙二胺四乙酸〕(最终浓度：10mM)/抗磷基酪氨酸抗体(1X最终浓度)/萤光磷基肽示踪剂(0.5X最终浓度)加入FP稀释缓冲液中以停止反应，取得40微升的总体积。培养板于室温下在黑暗中培育30分钟。培养板在Polarion萤光极化板读数仪(Tecan)上读取。用由制造商(PanVera Corporation)为与磷基肽竞争者竞争而在酪氨酸激脢检定盒中提供的校正曲线将数据转换成所存在的磷基肽含量。
检定的结果如以下表6所示：
这些数据显示当IC50在亚微摩尔范围之内时，所有的被测试化合物，除R945142和R909236外，都对Syk激脢磷酸化起抑制作用。当IC50在微摩尔范围之内时，所有被测试化合物都具有抑制Syk激脢磷酸化的作用。
7.18化合物对治疗自体免疫有效
在反向被动阿图斯氏反应〔reverse passive Arthus reaction〕，一种急性抗原-抗体介导组织损害模型，以及在若干种自体免疫与炎症疾病模型中，我们进行了某些2,4-嘧啶二胺化合物对自体免疫疾病在活体内功效的评估。这些模型的相似之处在于都有一个特异的抗原介导免疫复合物诱发的(IC-triggered)炎症性疾病以及随后的组织破坏。免疫复合物(IC)在特定解剖部位的淀积〔例如淀积在中枢神经系统(CNS)造成的实验性脑脊髓炎(EAE)和淀积在滑膜造成的胶原诱导性关节炎(CIA)〕会造成表现表面FcγR和FcεR的细胞的激活，特别是肥大细胞、巨噬细胞和嗜中性细胞，从而造成细胞因子的释放和嗜中性细胞的趋药性。炎症反应的激活造成了下游效应器的反应，包括水肿、出血、嗜中性细胞浸润和前炎症介质的释放。这些免疫复合物〔IC〕所诱发的事件在自体免疫性疾患中比较难以辨识；但许多研究者业已显示这些动物模型中的FcγR信号路径抑制可以使疾病的发病率和严重程度大大减轻。
7.18.1化合物对小白鼠阿图斯氏反应有效
在小白鼠反向被动阿图斯氏反应〔RPA反应)中显示了化合物R921302、R926891、R940323、R940347和R921303在活体内抑制IC〔免疫复合物〕诱发炎症级联的功效。
7.18.1.1模型
一系列人类自体免疫性疾病都会牵涉到免疫复合物〔IC〕介导急性炎症性组织损害，包括脉管炎综合征、不良血清综合征、周身性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、古德帕斯彻氏病〔肾小球性肾炎咯血综合征〕和肾小球肾炎。免疫复合体〔IC〕介导组织损害的经典试验模型是反向被动阿图斯氏反应〔RPA反应〕。RPA反应模型是在探讨IC所诱发的并无周身反应的局部炎症反应的十分方便的活体内模型。皮下注射对鸡卵清蛋白特异的抗体(Abs)(家兔抗-OVA〔卵清蛋白〕IgG)，随后静脉注射(IV)抗原(Ags)，具体地说，注射鸡蛋卵清蛋白(ovalbumin,OVA)，造成血管周围IC〔免疫复合体〕的淀积和迅速蔓延的炎症反应，其特征是注射部位的水肿、嗜中性细胞浸润和出血。小白鼠RPA反应〔反向被动阿图斯氏反应〕模型的许多方面有类风湿性关节炎、SLE〔周身性红斑狼疮〕和肾小球肾炎患者的炎症反应相似。
7.18.1.2研究实施方案
在此模型系统中，测试化合物要在Abs〔抗体〕和Ags〔抗原〕给予之前的若干个时间点给药。家兔抗-OVA IgG〔家兔抗卵清蛋白免疫球蛋白G〕溶液〔50微克溶于25微升/小白鼠〕以皮下注射方式注入，随后立即静脉注射溶解于含1%伊文思氏蓝染料的鸡蛋清蛋白溶液(20毫克/每公斤体重)。水肿和出血的程度从C57BL/6小白鼠背部皮肤进行测量，以伊文思氏蓝染料作为局部组织损害的指针。用作对照物质的是提纯的多克隆家兔IgG。
在Ab/Ag〔抗体/抗原〕激惹之前给予测试化合物的预治疗时间取决于每项个别化合物的药物动力学〔PK〕性质。在诱导阿图斯氏反应和四小时，将小白鼠安乐处死，获取组织以便对水肿进行评估。此模型系统允许我们迅速筛选许多抑制剂的活体内行为。
7.18.1.3结果
所有被测试化合物均以口服途径给药。
R921302在以50毫克/公斤、100mg/kg毫克/公斤和200毫克/公斤剂量在Ab/Ag〔抗体/抗原〕激惹之前60分钟对C57Bl6小白鼠给药时，显示出对水肿形成的剂量依存性抑制(分别为49.9%、93.2%和99.1%)。此外，R921302不仅显示出对水肿的预防性抑制作用，而且还显示了治疗性功效，在激惹之后30分钟以100毫克/公斤剂量给予化合物时，能对水肿抑制7735%。
在激惹之前60分钟以200毫克/公斤剂量给药时，R940323和R926891对水肿的抑制功效分别是32.4%和54.9%。这些化合物口服给药时，其生物利用率要小得多，其周身暴露水平比R921302要小50倍(数据未显示)。R940347在激惹前2小时以100毫克/公斤剂量给药时，其水肿抑制功效是89%。
在以200毫克/公斤剂量和30分钟、60分钟和120分钟的预治疗时间给药时，化合物R921303对水肿的抑制程度分别为100%、100%和93.6%。在剂量分别为50毫克/公斤、100毫克/公斤和200毫克/公斤时，该化合物也显示了剂量依存性抑制，其抑制率分别为65.4%、81.2%和100%。表7以概括的方式总结了各化合物测试的结果。
*nd=未测定。N/A=不适用
7.18.2化合物在小白鼠胶原抗体诱导关节炎模型中有效
化合物R921302的自体免疫性疾病的活体内功效显示于小白鼠模型胶原抗体诱导关节炎(CAIA)之中。
7.18.2.1模型
啮齿类动物的胶原诱导关节炎(CIA)常被用来作为IC〔免疫复合体〕诱导组织损害的实验模型之一。向小白鼠或大鼠投予II型胶原能引起以远程关键软骨与骨骼炎症性破坏以及周围组织同时肿胀为特征的免疫反应。CIA〔胶原诱导关节炎〕通常用以评估有用于作为治疗类风湿性关节炎和其它慢性炎症状况药物的潜在可能的化合物。
近年来，在CIA〔胶原诱导关节炎〕模型试验中出现了一项新技术，此项技术运用抗II型胶原抗体诱导抗体介导的CIA。这种方法的优点是：疾病诱导的时间紧凑〔静脉注射(IV)抗体之后24-48小时内出现病情〕；在对CIA敏感的小白鼠品种和对CIA有抵抗力的小白鼠品种中均可引发关节炎；是迅速筛选抗炎症的治疗药物的最理想程序。
在第0天，以单克隆抗体诱导关节炎用鸡尾酒制剂(来源：ChemiconInternational Inc.)对Balb/c品系小白鼠进行静脉内注射(每只小鼠2毫克)。48小时之后，在腹膜内注射100微升LPS〔脂多糖〕。在第4天，脚趾看上去可能浮肿。到第5天，一只或者两只脚爪(尤其是后腿)开始发红肿胀。从第6天往后，红肿的脚爪至少将保证1-2周。在研究中，记录了炎症的临床症状，以便对脚爪水肿的严重程度进行评估。关节炎的严重程度记录为每个动物两只后爪的得分总和(最高的可能得分是8)。相关脚爪的发炎程度按脚爪的直径进行计算。同时对体重变化进行监测。
动物从第0天在关节炎诱发之时起开始进行治疗。试验化合与对照化合物按原先确定的PK〔药物动力学〕分析结果以每日一次(q.d.)或者每日两次(b.i.d)的方式投药。
在研究结束时(诱发关节炎1-2周之后)，将小白鼠安乐处死，用环形刀从胫骨远程截断脚爪，并秤取其重量。每日从各个动物的临床记录求出每组动物的平均值±平均值标准误差(SEM)，并在试验结束时计算每个试验组动物后爪的重量，并将其记录下来。并应获取脚爪的组织病理学评估。
7.18.2.2结果
R921302的投予显著抑制了关节炎的发展，减轻了疾病的严重性(统计概率p<0.005)，正如平均每日关节炎临床记录变化所示(图12)。与媒介液对照组(图13)相比，治疗组从第4天到第14天每日平均关节炎记录减少71-92%。依据脚爪重量测定的脚爪发炎的程度与对照组相比在以R921302治疗的动物中有所减轻(图13)。在研究结束是，肿胀的程度按所测得的平均脚爪重量评估，该项评估显示以R921302治疗的一组比对照组减轻99.9%(p<0.002)。
对切除下来的脚爪的组织病理学评估显示与CIA〔胶原诱导关节炎〕一致的明显的滑膜炎。以生理盐水或者媒介液处理的动物表现出明显的病损；而以R921302治疗的一组动物只发现最轻微的病损。滑膜的增殖造成关节增厚。纤维母细胞增加，并伴随有密集的嗜中性细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞和血浆细胞的浸润。同时还存在血管增殖及与之伴随的充血、出血和肿胀。关节间隙存在着血管翳形成以及软骨损害。经治疗的一组的关节接近正常，或者只显示有限的发炎，但软骨未受到牵涉。
表8.各组组织病理评估平均得分(0-15)
与未经治疗的对照组(媒液,p=0.1)相比，经R050治疗，剂量为100毫克/公斤每日两次的动物的关节炎临床得分和脚爪肿胀平均减轻20%。按后爪厚度(p=0.1)测量，脚爪肿胀比未经治疗的对照组(媒液)受到了月20%的一致。R050的剂量水平达到30毫克/公斤时未显示关节炎迹象。
R070是R050的一种盐类，以50或100毫克/公斤的剂量水平每日两次给药时与未经治疗的对照组(媒液)相比，能分别平均抑制临床疾病症状39.75%(p<0.0002)或35.28%(p<0.0004)。脚爪厚度减少大约50%。
R429是R363的一种盐，在以每日两次，每次50或100毫克/公斤的剂量给药时与未经治疗(媒液)的对照组相比，分别平均显示23.81%(p<0.05)或20.82%(p=0.05)的关节炎临床得分的抑制。脚爪厚度也同样减少。
R347在受测试的剂量水平(每日两次，每次30和100毫克/公斤)并未影响关节炎得分。
7.18.3化合物对大鼠胶原诱导关节炎有效
化合物R921302治疗自体免疫疾病的活体内功效以大鼠胶原诱导关节炎(CIA)模型进行了显示。
7.18.3.1模型的描述
类风湿性关节炎(RA)的特征是慢性关键炎症，逐渐导致不可逆转的软骨损害。患有RA〔类风湿性关节炎〕的患者的滑膜组织中有丰富的含IgG的IC〔免疫复合体〕。这些复合体在疾病的病源和病理方面究竟起着何种作用虽然仍有争议，但IC〔免疫复合体〕是通过FcγR与成血细胞沟通的。
CIA〔胶原诱导关节炎〕是为人们广泛接受的RA〔类风湿性关节炎〕的动物模型，它可以导致以血管翳形成和关节退化为特征的慢性炎症性滑膜炎。在这一模型中，以不完全弗氏佐剂乳化的原始II型胶原进行皮下免疫化在10天或11天内造成炎症性多发关节炎，并在随后3至4周内出现关节损害。
7.18.3.2研究实施方案
同系基因型LOU大鼠在第0天以原始II型胶原免疫敏化，然后在预防实施方案和治疗实施方案中分别评估R921302的功效。在预防实施方案中，从免疫敏化之日起以口服给药方式给予不同剂量的R921302。在治疗实施方案中，在关节炎临床症状开始出现的第10天开始以R921302治疗〔300毫克/公斤，口服，每日一次)，一直继续的杀死大鼠的第28天。在两项实施方案中，每天获取临床得分，每周称量两次体重。在第28天，获取X光照相数据，并以ELISA〔脢联免疫吸附检定〕检测II型胶原抗体的血清水平。
7.18.3.3结果
免疫敏化或第10天前后，大鼠出现临床CIA〔胶原诱导关节炎〕症状，表现为它们的关节炎得分增高(图14)。在第10天以后，只以媒液治疗的大鼠的平均关节炎得分逐渐上升，到第28天平均临床得分达到6.75±0.57。从免疫敏化之日(第0天)开始以高剂量(300毫克/公斤/天)R921302治疗的动物在第10-28天的平均临床得分比媒液对照组相比显著减低(p<0.01)。从发病开始以300毫克/公斤剂量治疗的大鼠从第16天开始关节炎得分显著减低，此项差异一直继续观察到第28天研究结束之日为止。CIA〔胶原诱导关节炎〕第28天取得的盲目放射照相得分(标度0-6)媒液对照组为4.8±0.056，而每天一次分别以75、150和300毫克/公斤/天剂量治疗的预防实施方案动物的得分则分别为2.5±0.0.16、2.4±0.006和0.13±0.000001，而从疾病发病开始每天一次以300毫克/公斤/天治疗的动物的得分为0.45±.031。以300毫克/公斤/天剂量进行R921302治疗上，无论是预防性(从免疫敏化时开始)和在疾病发病时开始治疗，都能防止出现侵蚀现象，并减少软组织肿胀。与此相似，R921302治疗也使血清抗II型胶原抗体显著减少(未显示数据)。
7.18.4化合物对小鼠实验性自体免疫性脑脊髓炎有效
化合物R921302对自体免疫疾病的活体内功效以实验性自体免疫脑脊髓炎(EAE)小鼠模型显示。
7.18.4.1模型描述
EAE〔实验性自体免疫性脑脊髓炎〕是多发性硬化症〔MS〕的一个有用的模型，多发性硬化症是CNS〔中枢神经系统〕白质免疫细胞浸润所造成的CNS〔中枢神经系统〕自体免疫疾病。脊髓的炎症和随后的受破坏造成了渐进性麻痹。像人类的疾病一样，EAE〔实验性自体免疫性脑脊髓炎〕与T细胞与髓磷脂蛋白(例如髓磷脂碱基蛋白〔MBP〕、蛋白脂蛋白〔PLP〕、或髓鞘少突神经胶质细胞蛋白〔MOG〕)的自体反应末梢激活相关。激活的神经抗原特异性T细胞穿过血脑屏障，导致集中的单核细胞浸润和脱髓鞘现象。EAE〔实验性自体免疫性脑脊髓炎〕可以通过以髓磷脂特异的蛋白配合佐剂对敏感小鼠品系免疫敏化诱导。在这些研究中的小鼠模型中，免疫敏化后第10天就出现后肢和尾巴的麻痹，在第10天至第14天期间，疾病的严重性达到峰值，并且直到第35天还会出现一个部份自然缓解和复发按周期。以下描述的结果显示测试药剂(R921302)具有抑制疾病的严重性和防止疾病症状复发的潜力，造成症状复发是由于免疫细胞FcγR介导细胞因子释放引起的。
7.18.4.2研究实施方案
在EAE〔实验性自体免疫性脑脊髓炎〕SJL鼠模型中，每只小鼠均以PLP/CFA(150微克PLP139-151随同200微克CFA溶于0.05毫升后侧面四个部位的同型配子中总共制成0.2毫升的乳剂，用于诱导EAE)敏化。在抑制的实施方案中，从免疫敏化之日(第0天)起就以媒液或者不同剂量的R921302通过口服给药。在治疗实施方案中，从病情出现之日起，就将动物分离，以便取得从一开始就具有相似平均临床得分的各组动物，然后通过口服给药给予媒液或不同剂量频率的实验药物。在两组实施方案中，临床得分每日进行监控，体重每周测量两次。
7.18.4.3结果
PLP免疫敏化后10天，SJL小鼠出现临床EAE〔实验自体免疫性脑脊髓炎〕症状，表现为平均临床得分升高(图15)。仅以媒液治疗的动物从免疫敏化之日(第0天)起麻痹得分逐渐上升，到第14天平均得分达到5.1+0.3的峰值。在疾病高峰时(第14天)，以每天一次，每次剂量100毫克/公斤或者每天两次，每次剂量100毫克/公斤治疗的动物的平均临床得分显著降低(分别为p<0.05,4.3+1.3和4.3+1.4)。到第16天，所有动物均显示平均临床症状严重程度的部份缓解，这是SJL模型的典型现象。直到全部动物均被处死的第30天，以100毫克/公斤剂量的R921302每天两次给药的动物的显著较低的临床得分始终保持其明显的统计意义(p<0.05)。在整个治疗期间的这些较低的得分反映在显著较低的累计疾病指数(CDI,cumulative disease index)和上升的累计体重指数(CWI,cumulative weight index)之上，如表9所述。在仅以媒液治疗的一组动物中，2/5小鼠出现症状复发。在以100毫克/公斤/每天剂量治疗的动物中，3/8的小鼠复发。在以每天两次，每次100毫克/公斤剂量治疗的小鼠中，没有一只小鼠出现复发。
表9
从免疫敏化之日起以150微克PLP139-151/200微克MTB(CFA)的Rigel化合物R921302进行治疗的SJL雌性小鼠
CDI=到第+26天累计疾病指数
CWI=到第+23天累计体重指数
a=由非EAE因素，与摄食相关的损伤，或者因脑积水而处死的动物
b=学生进行的双尾t检定显示对照组与实验组之间存在着具有统计意义的差异(p<0.05)。
从疾病症状出现之日(第11天)开始一每天两次，每次200毫克/公斤剂量的R921302治疗的SJL小鼠的CDI〔累计疾病指数〕显示了具有统计意义的下降(p=0.003)〔以R921302治疗的小鼠为53.5±16.9，而仅以媒液治疗的小鼠为72.9±8.9〕。此外，与仅以媒液治疗的小鼠的复发数量(7/11)相比，以R921302治疗的小鼠的复发数量突出下降(2/12)。实验结果显示于表10和图16。
表10
从发病开始之日起以Rigel化合物R921302治疗的SJL雌性小鼠
CDI=直到第+27天的累计疾病指数
7.18.5本发明的2,4-嘧啶二胺化合物能抑制T-细胞激活
7.18.5.1描述
本发明的2,4-嘧啶二胺抑制T-细胞激活的能力通过以Jurkat T-细胞品系和原代T-细胞培养基进行一系列检定了加以显示。作为对T-细胞受体(TCR)刺激的响应，JurkatT-细胞激活的抑制通过量化细胞表面标记CD69的向上调节进行测定。原代T-细胞激活的抑制通过量化作为对TCR/CD28辐助刺激响应的细胞因子释放进行测定，上述细胞因子包括肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFNγ)和粒巨噬系集落刺激因子(GMSCF)。
7.18.5.2Jurkat T-细胞激活抑制的筛选
人类Jurkat T-细胞(克隆N)按常规在RPMI1640培养基(来源：Mediatech)辅以10%胎牛血清(FBS)(来源：Hyclone)、青霉素和链霉素之中培育。筛选过程在三天之内进行。
在筛选的第一天，培育的细胞在离心机上旋转分离(1000转/分,5分钟)，并重新悬浮于3.0×105细胞/毫升密度的RPMI+5%FBS之中。筛选的第二天，将细胞在1000转/分转速下离心分离5分钟，在1.3×105细胞/毫升密度下重新悬浮于RPMI+5%FBS之中。将85微升的这种细胞悬浮液加入U形底96孔(来源：Corning)培养板的各孔之中。将85微升的化合物或者仅仅是稀释的RPMI+5%FBS(作为对照)加入每个孔中，在37°C下培育1小时。然后通过在板上细胞中加入25微升8X溶液，在500毫微克/毫升下以抗-TCR(C305)刺激细胞。然后细胞在37°C下培育20小时。
在筛选的第三天，培养板在Beckman GS-6R离心机上以2500转/分转速旋转1分钟，然后除去培养基。加入50微升染色液〔1:100稀释的抗-CD69-APC抗体(来源：BectonDickenson)置于PBS+2%FBS之中〕在每个孔之中，随后在4度下在黑暗中将板培育20分钟。然后向每个孔中加150微升冲洗缓冲液(PBS+2%FBS)，将培养板在3000转/分下离心旋转1分钟。再次撇除上层清液，把球状颗粒在轻轻涡动搅拌下重新悬浮。随后加入75微升PBS+2%FBS+Cytofix(1:4稀释)，轻轻涡动搅拌培养板，用铝箔包裹起来。板上细胞以带自动化液体处理系统的流式细胞测定器进行计量。
不同浓度的化合物与溶剂单独比较，以判断每种化合物对T-细胞激活的抑制程度IC50。表11所示为本发明的2,4-嘧啶二胺化合物的代表性IC50值。
7.18.5.3原代T-细胞的分离
在rIL-2中生长的、获自健康人类捐献者的E8-4E8PBMC或增殖T细胞悬浮于PBS中进行离心分离(1500转/分,8-10分钟)，并重新悬浮于100毫升RPMI完全培养基(1%青-链霉素、1%L-谷氨酰胺,10mM HEPES)中。细胞涂布于T175烧瓶中(37°C,5%CO2)，允许单核细胞附着2-3小时。单核细胞附着后，采集无附着性的细胞，以血细胞计数器计数，以PBS冲洗若干次，然后以1.54E6细胞/毫升的密度重新悬浮于Yssels完全培养基(改性IMDM培养基，含1%人AB血清、1%青-链霉素、1%L-谷氨酰胺、10mMHEPES)。然后将90微升细胞稀释液加入到在Yssel’s培养基中稀释到2X浓度的化合物中，在37°C(5%CO2)下培育30分钟。此项预培育步骤完成后，将化合物/细胞混合液按以下所述转移到刺激板上。
7.18.5.4为抑制受激原代T细胞的细胞因子生成进行的筛选
在96孔板上以5微克/毫升αCD3(来源：BD PharMingen,Catalog#555336)+溶于PBS(无Ca2+/Mg2+)中的10微克/毫升αCD28(来源：Beckman Coulter,Catalog#IM1376)在37°C(5%CO2)下涂布3-5小时，以制备刺激板。刺激抗体培育完成后，除去上述鸡尾酒制剂，在加入原代T细胞/化合物混合液之前用PBS冲洗该板三次。
将化合物/细胞混合物转移在刺激板上，在37°C(5%CO2)下培育18小时。细胞刺激或，将月150微升上层清液从每个孔中转移到96孔过滤板(来源：Corning PVDF FilterPlates)上，离心分离之(2000转/分,2-3分钟)，或者立即用于ELISA或者LUMINEX测定，或者将其在-80°C下冷冻，供将来使用。
按制造商说明，用Quantikine Human IL-2ELISA检测盒(来源：R&D Systems,Catalog#D2050)进行白细胞介素-2ELISA检定，并在450毫微米波长下以分光光度计测定吸收光谱。减去空白值，根据标准曲线把吸收率换算为pg/mL单位。
对TNF、IL-2、GMSCF、IL-4和IFNγ进行的Luminex多重免疫检定的操作基本上按制造商(Upstate Biotechnology)的说明进行。基本上是把50微升试样稀释于50微升检定稀释剂和50微升培育缓冲液之中，然后以100微升稀释的探测抗体在室温下在黑暗中培育1小时。用洗涤缓冲液洗涤过滤板两次，然后以100微升稀释的辐助试剂(SAV-RPE)在室温下在黑暗中培育30分钟。最后将板洗涤三次，用Luminex仪器进行bead〔磁珠〕识别和RPE荧光测定。
不同浓度的化合物与溶剂单独比较，以判断每种化合物对T-细胞激活的抑制程度IC50。表11所示为本发明的2,4-嘧啶二胺化合物的代表性IC50值。
7.18.6本发明的2,4-嘧啶二胺化合物抑制B-细胞的激活
7.18.3.1描述
本发明的2,4-嘧啶二胺化合物抑制B-细胞的激活能力用荧光激活细胞分选仪(FACS)在细胞表面标记检定中检定原代B-细胞来显示。作为的B-细胞受体(BCR)刺激的响应的原代B-细胞激活的抑制通过量化细胞表面标记CD69的向上调节进行测定。
7.18.6.2原代B-细胞的分离
人原代B-细胞分离自棕黄层，这是抗凝人血离心分离时在红细胞和血小板之间形成的白细胞层，也可用bead〔磁珠〕s和FACS分离自新鲜人血。棕黄层获自斯坦福大学医学院血液中心，该棕黄层是同一天由血库制备的，并(以冰块)冷冻储存运送。将棕黄层(约35毫升)置于500毫升无菌离心机锥形筒中，在冰上冷却，然后以含0.2%BSA(来源：Sigma:A7638)和柠檬酸钠(0.1%,来源：Sigma:S-5570)(P-B-C)的冷PBS稀释，使其总量达到200毫升，并轻轻混合。新鲜人血采自献血者，并将其置于含肝素的真空容器中(一管真空容器可采集大约8.5毫升血)。血液在冰上冷却，转移到50毫升的Falcon试管中(20毫升/管)或者是500毫升无菌离心机锥形筒中，以等量的P-B-C稀释。
将25毫升稀释血液或棕黄层倒在冷聚蔗糖〔ficoll〕之上，使其分层，然后放回冰上。以聚蔗糖分层的血液在2000转/分,4°C下进行密度梯度离心分离(Beckman GS-6R型离心机)45分钟，以便把末梢血液单核细胞(PBMC)从红血细胞(RBC)和粒细胞中分离出来。吸出顶部水层，直到离PBMC层上方1英寸处。从每两个ficoll管中把PBMC层转移到一个清洁的50毫升falcon管中(大约10毫升/管)。转移的PBMC以冰冷的PBS和0.2%BSA(P-B)稀释5x,并在1400转/分和4°C下离心分离20分钟。吸出上层清液(有时可能有些浑浊)，将PBMC重新悬浮于25毫升P-B中，对细胞计数(以1：5稀释)，并置于冰上。
按制造商的说明用与bead〔磁珠〕结合的抗-CD19抗体对细胞进行正向选择。按所计数的PBMS细胞的5%估算B-细胞的数量，加上每个细胞需要大约10个磁珠吸引，以及bead stock〔磁珠液〕的密度(4×108磁珠/毫升)计算beads〔磁珠〕(来源：CD19-coated dyna beads M-450(pabB),)大致需要量。在5毫升管内用磁铁以5毫升在P-B中对磁珠洗涤两次，然后加入悬浮的PBMC之中。然后把混合物通过磁铁，洗涤若干次，以分离与磁珠结合的细胞。
7.18.6.3筛选抑制B-细胞激活的化合物
分离后，用脱磁珠液在30°C下操作45分钟除去磁珠与抗体。典型的收率为每份棕黄层2×107B-细胞。洗涤B-细胞，并以1E6细胞/毫升密度重新悬浮于RPM I1640+10%FBS+青霉素/抗生蛋白链菌素+1毫微克/毫升IFNα8之中。令细胞在37°C和5%CO2之下静置过夜。
第二天，将细胞洗涤并重新悬浮于RPMI+2.5%FBS之中，使其达到1×106细胞/毫升的密度。然后将细胞分配到V-形底96孔板(来源：Corning)各孔中，每孔65微升细胞。用机器人向各孔加入65微升的2x化合物，使最终DMSO浓度达到0.2%，并在37°C下培育1小时。然后用购自Jackson laboratories的20微升7.5xα-IgM(最终5微克/毫升)对细胞刺激24小时。在第3天离心分离细胞，以CD69染色，以FACS选通活细胞进行分析(用光散射)。
不同浓度的化合物与溶剂单独比较，以判断每种化合物对B-细胞激活的抑制程度IC50。表11所示为本发明的2,4-嘧啶二胺化合物的代表性IC50值。
7.18.7本发明的2,4-嘧啶二胺化合物抑制巨噬细胞激活
7.18.7.1描述
本发明的2,4-嘧啶二胺化合物抑制分化巨噬细胞激活的能力可以通过测定受激巨噬细胞所释放的细胞因子显示。我们对作为对IgG或LPS刺激的响应的肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素6(IL-6)的释放进行了量化。
7.18.7.2人巨噬细胞的提纯与培养
按制造商的说明，用单核细胞分离专用设备(来源：Miltenyi biotec#130-045-501)以PBMC〔末梢血液单核细胞〕(来源：Allcells#PB002)为原始材料提纯CD14+单核细胞。以流式细胞术〔flow cytometry〕检测CD14+细胞的百分比，对其纯度进行评估。在典型情况下能取得>90%的纯度。然后将提纯的CD14+细胞置于培养皿(6x106细胞/150厘米TC培养皿，内装15毫升培养基)的带100毫微克/毫升M-CSF(来源：Pepro Tech#300-25)的Macrophage-SFM〔巨噬细胞无血清培养基〕(来源：Gibco#12065-074)之中，令其分化5天。5天结束后，细胞形态和细胞表面标记(CD14、HLA-DR、B7.1、B7.2、CD64、CD32和CD16)表明成熟的分化巨噬细胞的存在。
7.18.7.3IgG〔免疫球蛋白G〕刺激
Immulon4HBX96孔培养板(来源：VWR#62402-959)涂敷以混合人免疫球蛋白G〔IgG〕(来源：Jackson Immunoresearch lab#009-000-003)，涂敷量10微克/孔，在4°C下放置过夜，或在37°C下放置1小时。另外制备一份反向对照，以F(ab’)2片段进行涂敷，以便评估背景刺激。以200微升PBS洗涤两次，冲洗掉未结合的抗体。在每个孔中加入20微升5X的化合物，随后加入从培养板上刮下的置于80微升液体中的15k〔15000〕分化的巨噬细胞。细胞在一个37°C的培育器中培育16小时，收集上层清液进行对IL-6and TNFα的Luminex分析，方法与上升原代T细胞的描述相似。
7.18.7.4LPS〔脂多糖〕刺激
进行LPS〔脂多糖〕刺激时，将10微升10X储备液加到预先培育就绪的细胞-化合物混合液中，使其最终浓度达到10毫微克/毫升。然后在37°C下对细胞培育16小时，按以上所述方法对上层清液进行分析。
不同浓度的化合物与溶剂单独比较，以判断每种化合物对每种细胞因子的IC50。表11所示为本发明的2,4-嘧啶二胺化合物的代表性IC50值。
虽然以上以上发明已经进行了比较详尽的描述，以便于理解，但显然仍可进行某些更动和修改，而并不超出后面所述的权利申请的范围之内。因此，所描述的具体体现应被视为举例说明，而不应看成是范围限制，本发明并不局限于以上所描述的细节范围之内，而是可以在所附的权利申请条款相当的范围进行修改。
所有在本申请中引用的文献以及专利无论在何种情况下均仅仅作为参考资料在此引用。

Claims (19)

1.结构式(I)所示2,4-嘧啶二胺化合物用于制造药物的用途，所述药物用于治疗或者预防自体免疫性疾病与/或与其相关的一种或多种症状的方法，其中所述自体免疫性疾病选自：自体免疫性血小板减少、周身性红斑狼疮、肾小球性肾炎、类风湿性关节炎和多发性硬化，所述方法包括向患有自体免疫性疾病，或者有罹患自体免疫性疾病风险的人投予有效剂量的结构式(I)所示2,4-嘧啶二胺化合物﹕
及其盐及N-氧化物，其中：
L1和L2各自独立为一直接键；
R2系被一个R8在3位或5位单取代、或多个相同或不同的R8基二取代或三取代之苯基；
R4是其中：
一个Y1是O，另一个Y1是NH；
X选自CH和N的基团；
A是O；
R5是氟；
每个R6各自是氢；
R8系选自以下基团﹕Ra、Rb、被一个或多个相同或不同的Ra或Rb取代之Ra、被一个或多个相同或不同的Ra或Rb取代之-ORa、-(CH2)m-Rb、-O-(CH2)m-Rb、-O-CRa(Rb)2、-C(O)NH-(CH2)m-Rb、-O-(CHRa)m-C(O)NH-(CHRa)m-Rb、-N[(CH2)mRb]2、和-NH-(CH2)m-C(O)-NH-(CH2)m-Rb；
每个Ra各自独立选自以下基团﹕氢、(C1-C6)烷基、环丙基、吗啉基、哌嗪基、和哌啶基；
每个Rb各自为一种独立选自下列基团之基，即：-ORd、(C1-C3)卤烷氧基、-NRcRc、卤素、-CF3、-CN、-C(O)Rd、-C(O)ORd、-C(O)NRcRc、-[NRaC(O)]nRd、-[NRaC(O)]nORd、和-[NRaC(O)]nNRcRc；
Rc各自独立为Ra；
每个Rd各自独立为Ra；
每个m各自独立为1至3之整数；
每个n各自独立为0至3之整数；及
R9和R10分别选自氢、氟和(C1-C6)烷基。
2.如权利要求1所述的用途，其中R8系选自以下基团﹕(C1-C10)烷基、(C1-C10)支链烷基、-ORd、-O-(CH2)m-NRcRc、–O-C(O)NRcRc、-O-(CH2)m-C(O)NRcRc、-O-C(O)ORa、-O-(CH2)m-C(O)ORa、-O-C(NH)NRcRc、-O-(CH2)m–C(NH)NRcRc、-NH-(CH2)m-NRcRc、-NH-C(O)NRcRc和-NH-(CH2)m-C(O)NRcRc，其中m、Ra、Rc和Rd如权利要求1中所定义。
3.如权利要求1所述的用途，其中亦可被取代之苯基为二取代苯基。
4.如权利要求3所述的用途，其中R8取代基位于2,3-；2,4-；2,5-；2,6-；3,4-；或3,5-位。
5.如权利要求3所述的用途，其中R8各自独立选自以下基团﹕(C1-C10)烷基、(C1-C10)支链烷基、亦可被一个或多个相同或不同的Ra和Rb基团所取代的-ORa、-O-(CH2)m-NRcRc、–O-C(O)NRcRc、-O-(CH2)m-C(O)NRcRc、-O-C(O)ORa、-O-(CH2)m-C(O)ORa、-O-C(NH)NRcRc、-O-(CH2)m-C(NH)NRcRc、-NH-(CH2)m-NRcRc、-NH-C(O)NRcRc和-NH-(CH2)m-C(O)NRcRc，其中m、Ra、Rb和Rc如权利要求1所定义。
6.如权利要求1所述的用途，其中亦可被取代之苯基为三取代苯基。
7.如权利要求6所述的用途，其中R8取代基位于2,3,4；2,3,5；2,3,6；2,4,5；2,4,6；2,5,6；或3,4,5位。
8.如权利要求7所述的用途，其中R8各自独立选自以下基团，即﹕(C1-C10)烷基、(C1-C10)支链烷基、亦可被一个或多个相同或不同的Ra或Rb基取代之-ORa、-O-(CH2)m-NRcRc、–O-C(O)NRcRc、-O-(CH2)m-C(O)NRcRc、-O-C(O)ORa、-O-C(NH)NRcRc、-O-(CH2)m-C(O)ORa、-O-(CH2)m–C(NH)NRcRc、-NH-(CH2)m-NRcRc、-NH-C(O)NRcRc和-NH-(CH2)m-C(O)NRcRc，其中m、Ra、Rb和Rc如权利要求1所定义。
9.如权利要求6所述的用途，其中三取代之苯基具有以下分子式：
其中：R31为甲基或(C1-C6)烷基；R32为氢、甲基或(C1-C6)烷基；和R33为卤基。
10.如权利要求8所述的用途，其中的2,4-嘧啶二胺化合物为一种具有以下结构式(Ic)结构的化合物：
及其盐、水合物、溶剂合物和N-氧化物，其中：
R18为–O(CH2)m-Rb，其中m和Rb如权利要求1中所定义。
11.如权利要求10所述的用途，其中R8为-O-CH2-C(O)-NHCH3。
12.如权利要求1所述的用途，其中2,4-嘧啶二胺化合物选自以下一组化合物，即﹕R940347和R921303。
13.如权利要求1-12任何一项所述的用途，所述方法中，以药物组合物的形式给予所述化合物，所述组合物包含所述化合物和药物学上可接受的载体或赋形剂。
14.如权利要求1-12任何一项所述的用途，所述方法中，以药物组合物的形式给予所述化合物，所述组合物包含所述化合物和药物学上可接受的稀释剂。
15.如权利要求1-12任何一项所述的用途，所述药物用于治疗。
16.如权利要求1-12任何一项所述的用途，其中治疗对象是人。
17.如权利要求1所述的用途，其中自体免疫性疾病是周身性红斑狼疮。
18.如权利要求1所述的用途，其中自体免疫性疾病是类风湿性关节炎。
19.如权利要求1所述的用途，其中自体免疫性疾病是多发性硬化症。
CN201310060555.0A 2002-07-29 2003-07-29 用2,4‑嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法 Expired - Lifetime CN103169708B (zh)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US39967302P 2002-07-29 2002-07-29
US60/399,673 2002-07-29
US44394903P 2003-01-31 2003-01-31
US60/443,949 2003-01-31
US45233903P 2003-03-06 2003-03-06
US60/452,339 2003-03-06
US10/631,029 US7517886B2 (en) 2002-07-29 2003-07-29 Methods of treating or preventing autoimmune diseases with 2,4-pyrimidinediamine compounds
US10/631,029 2003-07-29
CNA038211203A CN1678321A (zh) 2002-07-29 2003-07-29 用2,4－嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA038211203A Division CN1678321A (zh) 2002-07-29 2003-07-29 用2,4－嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103169708A CN103169708A (zh) 2013-06-26
CN103169708B true CN103169708B (zh) 2018-02-02

Family

ID=31721742

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310060555.0A Expired - Lifetime CN103169708B (zh) 2002-07-29 2003-07-29 用2,4‑嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法
CNA038211203A Pending CN1678321A (zh) 2002-07-29 2003-07-29 用2,4－嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA038211203A Pending CN1678321A (zh) 2002-07-29 2003-07-29 用2,4－嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法

Country Status (25)

Country Link
US (5) US7517886B2 (zh)
EP (1) EP1534286B1 (zh)
JP (2) JP2006514989A (zh)
CN (2) CN103169708B (zh)
AT (1) ATE451104T1 (zh)
AU (1) AU2003265336B8 (zh)
BR (1) BR0313059B8 (zh)
CA (1) CA2492325C (zh)
CY (1) CY1110292T1 (zh)
DE (1) DE60330466D1 (zh)
DK (1) DK1534286T3 (zh)
ES (2) ES2445208T3 (zh)
HK (2) HK1079978A1 (zh)
HR (1) HRP20050089B1 (zh)
IL (3) IL166241A0 (zh)
IS (1) IS2923B (zh)
MX (1) MXPA05001096A (zh)
NO (1) NO332550B1 (zh)
NZ (1) NZ537752A (zh)
PL (1) PL216744B1 (zh)
RS (1) RS51752B (zh)
RU (1) RU2659777C9 (zh)
SE (1) SE0500203L (zh)
SG (1) SG176311A1 (zh)
WO (1) WO2004014382A1 (zh)

Families Citing this family (177)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI329105B (en) 2002-02-01 2010-08-21 Rigel Pharmaceuticals Inc 2,4-pyrimidinediamine compounds and their uses
CN103169708B (zh) 2002-07-29 2018-02-02 里格尔药品股份有限公司 用2,4‑嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法
MXPA05005547A (es) * 2002-11-28 2005-07-26 Schering Ag Pirimidinas inhibidoras de chk, pdk y akt, su produccion y uso como agentes farmaceuticos.
UA80767C2 (en) * 2002-12-20 2007-10-25 Pfizer Prod Inc Pyrimidine derivatives for the treatment of abnormal cell growth
CL2004000306A1 (es) * 2003-02-20 2005-04-08 Tibotec Pharm Ltd Compuestos derivados de pirimidina sustituidas con indano; proceso para su preparacion; composicion farmaceutica que lo comprende; combinacion farmaceutica; y su uso para el tratamiento o profilaxis de una enfermedad infecciosa.
CA2533377C (en) * 2003-07-30 2012-11-27 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating or preventing autoimmune diseases with 2,4-pyrimidinediamine compounds
AU2004261484A1 (en) * 2003-07-30 2005-02-10 Cyclacel Limited 2-aminophenyl-4-phenylpyrimidines as kinase inhibitors
WO2005013996A2 (en) * 2003-08-07 2005-02-17 Rigel Pharmaceuticals, Inc. 2,4-pyrimidinediamine compounds and uses as anti-proliferative agents
CA2533320A1 (en) * 2003-08-15 2006-02-24 Novartis Ag 2, 4-pyrimidinediamines useful in the treatment of neoplastic diseases, inflammatory and immune system disorders
RU2006139258A (ru) 2004-04-08 2008-05-20 Таргеджен, Инк. (US) Бензотриазиновые ингибиторы киназ
CA2566531A1 (en) 2004-05-18 2005-12-15 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Cycloalkyl substituted pyrimidinediamine compounds and their uses
AU2005276974B2 (en) 2004-08-25 2012-08-02 Targegen, Inc. Heterocyclic compounds and methods of use
WO2006028833A1 (en) * 2004-09-01 2006-03-16 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 2,4-pyrimidinediamine compounds
EP1805142A4 (en) 2004-09-23 2009-06-10 Reddy Us Therapeutics Inc PYRIDINE-BASED COMPOUNDS, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND COMPOSITIONS CONTAINING SAME
GB2420559B (en) 2004-11-15 2008-08-06 Rigel Pharmaceuticals Inc Stereoisomerically enriched 3-aminocarbonyl bicycloheptene pyrimidinediamine compounds and their uses
CA2584295C (en) 2004-11-24 2014-08-26 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Spiro-2, 4-pyrimidinediamine compounds and their uses
MY169441A (en) * 2004-12-08 2019-04-11 Janssen Pharmaceutica Nv 2,4, (4,6) pyrimidine derivatives
US7799778B1 (en) 2005-01-12 2010-09-21 Alcon, Inc. 5-substituted 2-aminopyridine analogs for treating allergic and inflammatory diseases
US7713975B1 (en) 2005-01-12 2010-05-11 Alcon, Inc. 3,6-substituted imidazol[1,2-b]pyridazine analogs for treating allergic and inflammatory diseases
ES2337496T3 (es) * 2005-01-19 2010-04-26 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Profarmacos de compuestos de 2,4-pirimidindiamina y sus usos.
AU2006209216A1 (en) 2005-01-25 2006-08-03 Galenea Corp Substituted arylamine compounds and their use as 5-HT6 modulators
US8227455B2 (en) 2005-04-18 2012-07-24 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cell proliferative disorders
US20060270694A1 (en) * 2005-05-03 2006-11-30 Rigel Pharmaceuticals, Inc. JAK kinase inhibitors and their uses
JP5225079B2 (ja) 2005-06-08 2013-07-03 ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｊａｋ経路の阻害のための組成物および方法
US20070203161A1 (en) * 2006-02-24 2007-08-30 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the jak pathway
US7576053B2 (en) 2005-06-13 2009-08-18 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating degenerative bone disorders
EA015890B1 (ru) * 2005-06-14 2011-12-30 Тайджен Байотекнолоджи Ко. Лтд. Производные пиримидина
DE602005000514T2 (de) * 2005-06-17 2007-10-25 Magneti Marelli Powertrain S.P.A. Brennstoffeinspritzventil
US20070032514A1 (en) * 2005-07-01 2007-02-08 Zahn Stephan K 2,4-diamino-pyrimidines as aurora inhibitors
WO2007009681A1 (en) * 2005-07-15 2007-01-25 Glaxo Group Limited 1 , 1-DIOXID0-2 , 3-DIHYDRO-l , 2-BENZISOTHIAZ0L-6-YL-1H-INDAZOL-4-YL-2 , 4-PYRIMIDINEDI AMINE DERIVATIVES
WO2007028445A1 (en) * 2005-07-15 2007-03-15 Glaxo Group Limited 6-indolyl-4-yl-amino-5-halogeno-2-pyrimidinyl-amino derivatives
PT1951684T (pt) * 2005-11-01 2016-10-13 Targegen Inc Inibidores de cinases de tipo biaril-meta-pirimidina
US8604042B2 (en) 2005-11-01 2013-12-10 Targegen, Inc. Bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases
US8133900B2 (en) 2005-11-01 2012-03-13 Targegen, Inc. Use of bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases
US7713987B2 (en) 2005-12-06 2010-05-11 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine-2,4-diamines and their uses
JP2009518443A (ja) * 2005-12-06 2009-05-07 リゲル ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド 脂質を主材料とする担体に内封された、不溶性小分子治療剤の製剤
WO2007085540A1 (en) * 2006-01-27 2007-08-02 Glaxo Group Limited 1h-indaz0l-4-yl-2 , 4-pyrimidinediamine derivatives
SI1984357T1 (sl) * 2006-02-17 2014-02-28 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Spojine 2,4-pirimidindiamina za zdravljenje ali preventivo avtoimunih bolezni
JP2009528295A (ja) 2006-02-24 2009-08-06 ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｊａｋ経路の阻害のための組成物および方法
PE20120006A1 (es) * 2006-05-15 2012-02-02 Boehringer Ingelheim Int Compuestos derivados de pirimidina como inhibidores de la quinasa aurora
CA2673125C (en) 2006-10-19 2015-04-21 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the jak pathway
ES2633318T3 (es) 2006-10-23 2017-09-20 Cephalon, Inc. Derivados bicíclicos fusionados de 2,4-diaminopirimidina como inhibidores de ALK y c-Met
US8163902B2 (en) 2006-11-21 2012-04-24 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Prodrugs of 2,4-pyrimidinediamine compounds and their uses
US7947698B2 (en) 2007-03-23 2011-05-24 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the JAK pathway
US7834024B2 (en) 2007-03-26 2010-11-16 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the JAK pathway
BRPI0809715A2 (pt) 2007-04-16 2019-11-05 Hutchison Medipharma Entpr Ltd "composto, método de tratamento de um distúrbio relacionado com a angiogênese,método de inibição da atividade de receptor de domínio de inserto de quinase, método de inibição de angiogênese e método de tratamento de degeneração macular"
ES2593486T3 (es) 2007-04-18 2016-12-09 Pfizer Products Inc. Derivados de sulfonil amida para el tratamiento del crecimiento celular anómalo
ATE521609T1 (de) * 2007-05-04 2011-09-15 Astrazeneca Ab Aminothiazolylpyrimidinderivate und ihre verwendung bei der behandlung von krebs
CA2693594A1 (en) 2007-07-17 2009-01-22 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Cyclic amine substituted pyrimidinediamines as pkc inhibitors
EP2178870B1 (en) * 2007-08-17 2018-09-19 LG Chem, Ltd. Indole and indazole compounds as an inhibitor of cellular necrosis
US20090088371A1 (en) * 2007-08-28 2009-04-02 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy with syk kinase inhibitor
CA2710118A1 (en) 2007-12-20 2009-07-02 Cellzome Limited Sulfamides as zap-70 inhibitors
HUE026193T2 (en) 2008-01-22 2016-05-30 Dow Agrosciences Llc N-Cyano-4-amino-5-fluoropyrimidine derivatives as fungicides
NZ587589A (en) 2008-02-15 2012-10-26 Rigel Pharmaceuticals Inc Pyrimidine-2-amine compounds and their use as inhibitors of jak kinases
WO2009112490A1 (en) * 2008-03-11 2009-09-17 Cellzome Limited Sulfonamides as zap-70 inhibitors
PT2323993E (pt) 2008-04-16 2015-10-12 Portola Pharm Inc 2,6-diamino-pirimidina-5-il-carboxamidas como inibidores de quinasses syk ou jak
US8138339B2 (en) 2008-04-16 2012-03-20 Portola Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of protein kinases
SG2014015085A (en) 2008-04-16 2014-06-27 Portola Pharm Inc 2,6-diamino-pyrimidin-5-yl-carboxamides as syk or jak kinases inhibitors
NZ588830A (en) * 2008-04-22 2012-11-30 Portola Pharm Inc Inhibitors of protein kinases
US7829574B2 (en) 2008-05-09 2010-11-09 Hutchison Medipharma Enterprises Limited Substituted quinazoline compounds and their use in treating angiogenesis-related diseases
EP2300013B2 (en) 2008-05-21 2024-11-13 Takeda Pharmaceutical Company Limited Phosphorous derivatives as kinase inhibitors
US9273077B2 (en) 2008-05-21 2016-03-01 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Phosphorus derivatives as kinase inhibitors
US11351168B1 (en) 2008-06-27 2022-06-07 Celgene Car Llc 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
RU2536584C2 (ru) 2008-06-27 2014-12-27 Авила Терапьютикс, Инк. Гетероарильные соединения и их применение
US8338439B2 (en) 2008-06-27 2012-12-25 Celgene Avilomics Research, Inc. 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
US8426430B2 (en) 2008-06-30 2013-04-23 Hutchison Medipharma Enterprises Limited Quinazoline derivatives
TW201008933A (en) 2008-08-29 2010-03-01 Hutchison Medipharma Entpr Ltd Pyrimidine compounds
CN101659659B (zh) * 2008-08-29 2013-01-02 和记黄埔医药（上海）有限公司 嘧啶衍生物及其医药用途
EP2161259A1 (de) 2008-09-03 2010-03-10 Bayer CropScience AG 4-Halogenalkylsubstituierte Diaminopyrimidine als Fungizide
EP2344476B1 (en) * 2008-09-23 2015-04-29 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Tricyclic carbamate jak inhibitors
WO2010078369A2 (en) 2008-12-30 2010-07-08 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidinediamine kinase inhibitors
US8377924B2 (en) 2009-01-21 2013-02-19 Rigel Pharmaceuticals Inc. Protein kinase C inhibitors and uses thereof
US8324200B2 (en) 2009-01-23 2012-12-04 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the JAK pathway
EP2440559B1 (en) 2009-05-05 2018-01-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Egfr inhibitors and methods of treating disorders
US8367689B2 (en) 2009-05-06 2013-02-05 Portola Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of JAK
WO2010143733A1 (en) 2009-06-09 2010-12-16 Takeda Pharmaceutical Company Limited Novel fused cyclic compound and use thereof
US20120142667A1 (en) * 2009-06-10 2012-06-07 Nigel Ramsden Pyrimidine derivatives as zap-70 inhibitors
UA108077C2 (xx) 2009-07-02 2015-03-25 Синтез динатрієвої солі n4-(2,2-диметил-4-$(дигідрофосфонокси)метил]-3-оксо-5-піридо$1,4]оксазин-6-іл)-5-фтор-n2-(3,4,5-триметоксифеніл)-2,4-піримідиндіаміну
US20110015155A1 (en) * 2009-07-17 2011-01-20 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Deuterated 2, 4-Pyrimidinediamine Compounds and Prodrugs Thereof and Their Uses
CN106420756A (zh) * 2009-07-28 2017-02-22 里格尔药品股份有限公司 抑制jak途径的组合物和方法
JP2013502424A (ja) 2009-08-17 2013-01-24 メモリアル スローン−ケタリング キャンサー センター 熱ショックタンパク質結合化合物、組成物、およびそれらを製造するための方法
WO2011063241A1 (en) 2009-11-20 2011-05-26 Rigel Pharmaceuticals, Inc. 2,4-pyrimidinediamine compounds and prodrugs thereof and their uses
CA2780759A1 (en) 2009-12-01 2011-06-09 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Protein kinase c inhibitors and uses thereof
US8618095B2 (en) 2010-04-13 2013-12-31 Rigel Pharmaceuticals, Inc. 2, 4-pyrimidinediamine compounds and prodrugs thereof and their uses
EP2571867B1 (en) * 2010-05-21 2015-11-04 Noviga Research AB Novel pyrimidine derivatives
BR112012030625A2 (pt) 2010-06-03 2017-06-27 Pharmacyclics Inc uso de inibidores de tirosina quinase de bruton (btk)
EP2595982B1 (en) 2010-07-21 2018-06-13 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Protein kinase c inhibitors and uses thereof
MX347331B (es) 2010-07-28 2017-04-21 Rigel Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para inhibicion de la via jak.
SG187796A1 (en) 2010-08-10 2013-03-28 Celgene Avilomics Res Inc Besylate salt of a btk inhibitor
WO2012061428A2 (en) 2010-11-01 2012-05-10 Portola Pharmaceuticals, Inc. Nicotinamides as jak kinase modulators
SG10201508958WA (en) 2010-11-01 2015-11-27 Celgene Avilomics Res Inc Heterocyclic Compounds And Uses Thereof
EP3176154B1 (en) 2010-11-01 2019-02-20 Portola Pharmaceuticals, Inc. Benzamides and nicotinamides as syk modulators
WO2012061415A1 (en) 2010-11-01 2012-05-10 Portola Pharmaceuticals, Inc. Oxypyrimidines as syk modulators
JP5956999B2 (ja) 2010-11-01 2016-07-27 セルジーン アヴィロミクス リサーチ， インコーポレイテッド ヘテロアリール化合物およびその使用
CA2816957A1 (en) 2010-11-07 2012-05-10 Targegen, Inc. Compositions and methods for treating myelofibrosis
US8796255B2 (en) 2010-11-10 2014-08-05 Celgene Avilomics Research, Inc Mutant-selective EGFR inhibitors and uses thereof
WO2012088266A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Incyte Corporation Substituted imidazopyridazines and benzimidazoles as inhibitors of fgfr3
EP2489663A1 (en) 2011-02-16 2012-08-22 Almirall, S.A. Compounds as syk kinase inhibitors
MX343517B (es) 2011-03-10 2016-11-07 Rigel Pharmaceuticals Inc 2,4 pirimidinadiaminas sustituidas para su uso en lupus discoide.
CA2830129C (en) 2011-03-24 2016-07-19 Chemilia Ab Novel pyrimidine derivatives
US9249124B2 (en) 2011-03-30 2016-02-02 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Aurora kinase inhibitors and methods of making and using thereof
CN111471021B (zh) 2011-04-22 2024-04-02 西格诺药品有限公司 取代的二氨基甲酰胺和二氨基甲腈嘧啶，其组合物，和用其治疗的方法
WO2012151561A1 (en) 2011-05-04 2012-11-08 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Compounds for inhibiting cell proliferation in egfr-driven cancers
DK2736487T4 (da) 2011-07-28 2024-11-04 Rigel Pharmaceuticals Inc Nye (trimethoxyphenylamino)pyrimidinyl-formuleringer
CN103974955B (zh) 2011-08-23 2018-06-19 阿萨纳生物科技有限责任公司 嘧啶并-哒嗪酮化合物及其用途
WO2013063401A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Celgene Avilomics Research, Inc. Methods of treating a bruton's tyrosine kinase disease or disorder
JP6039683B2 (ja) 2011-11-23 2016-12-07 ポートラ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ピラジンキナーゼ阻害剤
JP6317320B2 (ja) 2012-03-15 2018-04-25 セルジーン シーエーアール エルエルシー 上皮成長因子受容体キナーゼ阻害剤の塩
US9056839B2 (en) 2012-03-15 2015-06-16 Celgene Avilomics Research, Inc. Solid forms of an epidermal growth factor receptor kinase inhibitor
AU2013204563B2 (en) 2012-05-05 2016-05-19 Takeda Pharmaceutical Company Limited Compounds for inhibiting cell proliferation in EGFR-driven cancers
US20130310340A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Method of treating muscular degradation
PT3176170T (pt) 2012-06-13 2019-02-05 Incyte Holdings Corp Compostos tricíclicos substituídos como inibidores de fgfr
CN104853596B (zh) 2012-06-15 2018-10-09 联邦科学技术研究组织 在植物细胞中产生长链多不饱和脂肪酸
WO2014026125A1 (en) 2012-08-10 2014-02-13 Incyte Corporation Pyrazine derivatives as fgfr inhibitors
KR101446742B1 (ko) 2012-08-10 2014-10-01 한국화학연구원 Ｎ2,ｎ4-비스(4-(피페라진-1-일)페닐)피리미딘-2,4-디아민 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
EP2895172B1 (en) 2012-09-12 2019-02-06 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Treatment for vitiligo
EP2903970A4 (en) 2012-10-08 2016-11-30 Portola Pharm Inc SUBSTITUTED PYRIMIDINYL KINASE INHIBITORS
EP2909886A4 (en) 2012-10-19 2016-06-15 Univ North Carolina IONIC CONDUCTIVE POLYMERS AND MIXTURES OF POLYMERS FOR ALKALINOMETALLIC-ION BATTERIES
BR112015009777A2 (pt) * 2012-10-31 2017-07-11 Fujifilm Corp derivado de amina ou sal do mesmo
JP6357167B2 (ja) 2012-12-04 2018-07-11 ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド プロテインキナーゼｃ阻害剤およびそれらの用途
US9266892B2 (en) 2012-12-19 2016-02-23 Incyte Holdings Corporation Fused pyrazoles as FGFR inhibitors
EP2935226A4 (en) 2012-12-21 2016-11-02 Celgene Avilomics Res Inc HETEROARYL COMPOUNDS AND USES THEREOF
EP2948150A1 (en) 2013-01-25 2015-12-02 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for treating inflammatory bowel diseases
EP2953457B1 (en) 2013-02-08 2020-04-08 Celgene CAR LLC Erk inhibitors and uses thereof
DK2970138T3 (en) 2013-03-13 2019-03-25 Canadian Blood Services PYRAZOLD DERIVATIVES AND THEIR USE THEREOF
CA2904610A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Protein kinase c inhibitors and uses thereof
EP2982001A2 (en) 2013-04-01 2016-02-10 The University of North Carolina At Chapel Hill Ion conducting fluoropolymer carbonates for alkali metal ion batteries
US9611283B1 (en) 2013-04-10 2017-04-04 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Methods for inhibiting cell proliferation in ALK-driven cancers
KR102469849B1 (ko) 2013-04-19 2022-11-23 인사이트 홀딩스 코포레이션 Fgfr 저해제로서 이환식 헤테로사이클
US9492471B2 (en) 2013-08-27 2016-11-15 Celgene Avilomics Research, Inc. Methods of treating a disease or disorder associated with Bruton'S Tyrosine Kinase
TWI667233B (zh) * 2013-12-19 2019-08-01 德商拜耳製藥公司 新穎吲唑羧醯胺，其製備方法、含彼等之醫藥製劑及其製造醫藥之用途
US9415049B2 (en) 2013-12-20 2016-08-16 Celgene Avilomics Research, Inc. Heteroaryl compounds and uses thereof
NZ715903A (en) 2014-01-30 2017-06-30 Signal Pharm Llc Solid forms of 2-(tert-butylamino)-4-((1r,3r,4r)-3-hydroxy-4-methylcyclohexylamino)-pyrimidine-5-carboxamide, compositions thereof and methods of their use
BR112016026470A8 (pt) 2014-05-13 2021-07-20 Memorial Sloan Kettering Cancer Center composto modulador de hsp70, composição farmacêutica que o compreende e uso do referido composto
WO2016025561A1 (en) 2014-08-13 2016-02-18 Celgene Avilomics Research, Inc. Forms and compositions of an erk inhibitor
US10851105B2 (en) 2014-10-22 2020-12-01 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR4 inhibitors
BR112017012795A2 (pt) 2014-12-16 2018-01-02 Signal Pharmaceuticals, Llc Formulações de 2-(terc-butilamino)-4-((1r,3r,4r)-3- hidroxi-4-metilciclo-hexilamino)-pirimidina-5- carboxamida
JP6903577B2 (ja) 2014-12-16 2021-07-14 シグナル ファーマシューティカルズ，エルエルシー 皮膚におけるｃ−Ｊｕｎ Ｎ末端キナーゼの阻害の測定方法
WO2016123291A1 (en) 2015-01-29 2016-08-04 Signal Pharmaceuticals, Llc Isotopologues of 2-(tert-butylamino)-4-((1r,3r,4r)-3-hydroxy-4-methylcyclohexylamino)-pyrimidine-5-carboxamide
US10227288B2 (en) 2015-02-03 2019-03-12 Blue Current, Inc. Functionalized fluoropolymers and electrolyte compositions
MA41551A (fr) 2015-02-20 2017-12-26 Incyte Corp Hétérocycles bicycliques utilisés en tant qu'inhibiteurs de fgfr4
SG11201706287PA (en) 2015-02-20 2017-09-28 Incyte Corp Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
US9580423B2 (en) 2015-02-20 2017-02-28 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR4 inhibitors
AU2016290950A1 (en) * 2015-07-09 2018-01-18 Merck Patent Gmbh Pyrimidine derivatives as BTK inhibitors and uses thereof
EP3795553B1 (en) 2015-07-24 2024-05-15 Celgene Corporation Methods of synthesis of (1r,2r,5r)-5-amino-2-methylcyclohexanol hydrochloride and intermediates useful therein
EP3371154A4 (en) * 2015-10-30 2019-06-05 Trillium Therapeutics Inc. HETEROCYCLIC DERIVATIVES AND THEIR USE FOR THE TREATMENT OF CNS DISORDERS
PT3442947T (pt) * 2016-04-15 2023-08-07 Epizyme Inc Compostos de arilo ou heteroarilo substituídos com amina como inibidores de ehmt1 e ehmt2
ES2747768T3 (es) 2017-03-20 2020-03-11 Forma Therapeutics Inc Composiciones de pirrolopirrol como activadores de quinasa de piruvato (PKR)
US11672800B2 (en) 2017-04-21 2023-06-13 Epizyme, Inc. Combination therapies with EHMT2 inhibitors
KR20190140011A (ko) 2017-04-28 2019-12-18 아사나 바이오사이언시스 엘엘씨 아토피성 피부염을 치료하고, 활성 약학적 성분의 안정성을 개선하기 위한 제형물, 방법, 키트, 및 투여형
AR111960A1 (es) 2017-05-26 2019-09-04 Incyte Corp Formas cristalinas de un inhibidor de fgfr y procesos para su preparación
AU2018294054B2 (en) * 2017-06-30 2022-05-26 Beijing Tide Pharmaceutical Co., Ltd. Rho-associated protein kinase inhibitor, pharmaceutical composition comprising same, and preparation method and use thereof
CN107417611A (zh) * 2017-07-25 2017-12-01 广州大学 一种3‑（4‑甲氧基苯基）‑6‑甲氧基‑4‑氯‑5,7‑二溴喹啉的合成方法
PE20210920A1 (es) 2018-05-04 2021-05-19 Incyte Corp Formas solidas de un inhibidor de fgfr y procesos para prepararlas
CN112566912A (zh) 2018-05-04 2021-03-26 因赛特公司 Fgfr抑制剂的盐
CN113166060B (zh) 2018-09-19 2024-01-09 诺沃挪第克健康护理股份公司 用丙酮酸激酶激活化合物治疗镰状细胞病
CN113226356A (zh) 2018-09-19 2021-08-06 福马治疗股份有限公司 活化丙酮酸激酶r
CN111362928A (zh) * 2018-12-26 2020-07-03 上海喆邺生物科技有限公司 2,4-二氨基嘧啶衍生物
WO2020185532A1 (en) 2019-03-08 2020-09-17 Incyte Corporation Methods of treating cancer with an fgfr inhibitor
MA55890A (fr) 2019-05-08 2022-03-16 Aligos Therapeutics Inc Modulateurs de thr-beta et leurs procédés d'utilisation
WO2020243612A1 (en) 2019-05-29 2020-12-03 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Method of preventing and treating thrombosis
WO2020257495A1 (en) * 2019-06-18 2020-12-24 Purdue Research Foundation Inhibitors of erythrocyte band 3 tyrosine phosphorylation and uses thereof
WO2021003417A1 (en) 2019-07-03 2021-01-07 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Tyrosine kinase non-receptor 1 (tnk1) inhibitors and uses thereof
US11591329B2 (en) 2019-07-09 2023-02-28 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR inhibitors
EP4009974A1 (en) 2019-08-08 2022-06-15 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compounds and method for treating cytokine release syndrome
EP4013420B1 (en) 2019-08-14 2023-11-01 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Method of blocking or ameliorating cytokine release syndrome
CN110746402B (zh) * 2019-09-21 2021-01-15 温州医科大学 一种2-n-芳基-4-n-芳基-5-氟嘧啶类化合物及其制备方法和应用
US12122767B2 (en) 2019-10-01 2024-10-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR inhibitors
TW202128685A (zh) 2019-10-14 2021-08-01 美商英塞特公司 作為ｆｇｆｒ抑制劑之雙環雜環
US11566028B2 (en) 2019-10-16 2023-01-31 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR inhibitors
EP4069696A1 (en) 2019-12-04 2022-10-12 Incyte Corporation Tricyclic heterocycles as fgfr inhibitors
MX2022006691A (es) 2019-12-04 2022-09-19 Incyte Corp Derivados de un inhibidor de receptores del factor de crecimiento de fibroblastos (fgfr).
WO2021146424A1 (en) 2020-01-15 2021-07-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
CN112920124B (zh) * 2021-01-29 2024-03-01 安徽医科大学 一种嘧啶-2,4-二胺类化合物及其制备方法与应用
US12128035B2 (en) 2021-03-19 2024-10-29 Novo Nordisk Health Care Ag Activating pyruvate kinase R
JP2024513575A (ja) 2021-04-12 2024-03-26 インサイト・コーポレイション Ｆｇｆｒ阻害剤及びネクチン－４標的化剤を含む併用療法
TW202313611A (zh) 2021-06-09 2023-04-01 美商英塞特公司 作為ｆｇｆｒ抑制劑之三環雜環

Family Cites Families (198)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3159547A (en) * 1963-06-28 1964-12-01 Abbott Lab Method of lowering blood pressure with 4-(2-amino-4-pyrimidylamino)-benzene-sulfonamide
US3320256A (en) * 1965-04-09 1967-05-16 Hoffmann La Roche Fluorinated imidazoo[1, 2-c]pyrimidines and pyrimido[1, 2-c]pyrimidines
GR80171B (en) 1983-08-29 1985-01-02 Ciba Geigy Ag N-(2-nitrophenyl)-4-aminopyrimidine derivatives process for the preparation thereof and use
DE3618353A1 (de) 1986-05-31 1987-12-03 Hoechst Ag Schaedlingsbekaempfungsmittel auf der basis von aminopyrimidin-derivaten sowie neue aminopyrimidin-verbindungen
US4968781A (en) * 1987-04-02 1990-11-06 Ciba-Geigy Corporation Fiber-reactive dyes comprising a halopyrimidine for which a vinylsulfonyl or the like moiety is attached via a bridge member
SU1499883A1 (ru) 1987-11-24 1991-10-23 Научно-исследовательский институт фармакологии АМН СССР Дихлоргидрат 2,4-бис-(п-трет-бутиланилино)-5-окси-6-метилпиримидина, обладающий анальгетической и противовоспалительной активностью
HU206337B (en) * 1988-12-29 1992-10-28 Mitsui Petrochemical Ind Process for producing pyrimidine derivatives and pharmaceutical compositions
IE63502B1 (en) * 1989-04-21 1995-05-03 Zeneca Ltd Aminopyrimidine derivatives useful for treating cardiovascular disorders
US5179204A (en) * 1989-09-05 1993-01-12 Hoechst-Roussel Pharmaceuticals Incorporated N-substituted-4-pyrimidinamines and pyrimidinediamines
US4983608A (en) * 1989-09-05 1991-01-08 Hoechst-Roussell Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-4-pyrimidinamines and pyrimidinediamines
JPH03127790A (ja) 1989-10-11 1991-05-30 Morishita Pharmaceut Co Ltd Ｎ―（１ｈ―テトラゾール―５―イル）―２―アニリノ―５―ピリミジンカルボキシアミド類及びその合成中間体
TW224941B (zh) 1989-11-08 1994-06-11 Yamanouchi Pharma Co Ltd
GB9012592D0 (en) 1990-06-06 1990-07-25 Smithkline Beecham Intercredit Compounds
DE4029650A1 (de) 1990-09-19 1992-03-26 Hoechst Ag 2-anilino-pyrimidine, verfahren zu ihrer herstellung, sie enthaltene mittel und ihre verwendung als fungizide
CA2074864A1 (en) 1991-07-30 1993-01-31 Carmen Almansa Tetralones with pharmacological activity
US5728536A (en) 1993-07-29 1998-03-17 St. Jude Children's Research Hospital Jak kinases and regulation of Cytokine signal transduction
US5521184A (en) * 1992-04-03 1996-05-28 Ciba-Geigy Corporation Pyrimidine derivatives and processes for the preparation thereof
TW287160B (zh) * 1992-12-10 1996-10-01 Hoffmann La Roche
AU692484B2 (en) * 1993-10-12 1998-06-11 Du Pont Pharmaceuticals Company 1N-alkyl-N-arylpyrimidinamines and derivatives thereof
IL112290A (en) 1994-01-12 1999-01-26 Novartis Ag Transformed aryl and the troiryl pyrimidines and herbicides containing them
CA2150609C (en) * 1994-06-01 1998-12-08 Mikiro Yanaka Pyrimidine derivatives and pharmaceutical composition
US5733932A (en) * 1995-01-06 1998-03-31 The Picower Institute For Medical Research Compounds and methods of use to derivatize neighboring lysine residues in proteins under physiological conditions
GB9516121D0 (en) * 1995-08-05 1995-10-04 Pfizer Ltd Organometallic addition to ketones
GB9523675D0 (en) 1995-11-20 1996-01-24 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
TW440563B (en) * 1996-05-23 2001-06-16 Hoffmann La Roche Aryl pyrimidine derivatives and a pharmaceutical composition thereof
GB9619284D0 (en) * 1996-09-16 1996-10-30 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
US6004985A (en) * 1996-10-09 1999-12-21 Berlex Laboratories, Inc. Thio acid derived monocylic N-heterocyclics as anticoagulants
DE19710435A1 (de) * 1997-03-13 1998-09-17 Hoechst Ag Verwendung von Pyrimidinderivaten zur Prävention von Krebs allein oder in Kombination mit anderen therapeutischen Maßnahmen
GB9705361D0 (en) 1997-03-14 1997-04-30 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
US6022884A (en) * 1997-11-07 2000-02-08 Amgen Inc. Substituted pyridine compounds and methods of use
GB9723859D0 (en) 1997-11-12 1998-01-07 Zeneca Ltd Compound,composition and use
DE19750701A1 (de) * 1997-11-15 1999-05-20 Dystar Textilfarben Gmbh & Co Verfahren zur Umsetzung von fluorsubstituierten Heterocyclen mit Aminen in Gegenwart von Phasentransfer-Katalysatoren
WO1999031073A1 (fr) 1997-12-15 1999-06-24 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Nouveaux derives de pyrimidine-5-carboxamide
WO1999033846A2 (en) 1997-12-31 1999-07-08 The University Of Kansas Water soluble prodrugs of secondary and tertiary amine containing drugs and methods of making thereof
IL137922A0 (en) * 1998-02-17 2001-10-31 Tularik Inc Anti-viral pyrimidine derivatives
ES2244178T3 (es) * 1998-03-09 2005-12-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Derivados de 1,2-diazepan como inhibidores de la enzima convertidora de interleuquina-1 beta.
CA2319493A1 (en) 1998-03-18 1999-09-23 Regine Bohacek Heterocyclic signal transduction inhibitors, compositions containing them
ES2193660T3 (es) 1998-03-27 2003-11-01 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de pirimidina inhibidores de vih.
BRPI9909191B8 (pt) * 1998-03-27 2021-07-06 Janssen Pharmaceutica Nv derivados de pirimidina inibidores do hiv, seu uso e composição farmacêutica que os compreende
GB9806739D0 (en) 1998-03-28 1998-05-27 Univ Newcastle Ventures Ltd Cyclin dependent kinase inhibitors
WO1999050249A2 (en) 1998-04-01 1999-10-07 Du Pont Pharmaceuticals Company Pyrimidines and triazines as integrin antagonists
HUP0102058A3 (en) 1998-05-22 2002-05-28 Smithkline Beecham Corp Novel 2-alkyl substituted imidazole compounds, process for their preparation, pharmaceutical compositions containing them and their use
US6093743A (en) * 1998-06-23 2000-07-25 Medinox Inc. Therapeutic methods employing disulfide derivatives of dithiocarbamates and compositions useful therefor
JP2004504259A (ja) 1998-06-30 2004-02-12 パーカー　ヒューズ　インスティテュート Ｊａｋ−３インヒビターを用いたｃ−ｊｕｎ発現の阻害方法
CA2342503A1 (en) 1998-08-21 2000-03-02 Parker Hughes Institute Quinazoline derivatives
DE69933680T2 (de) 1998-08-29 2007-08-23 Astrazeneca Ab Pyrimidine verbindungen
DE19851421A1 (de) 1998-11-07 2000-05-11 Boehringer Ingelheim Pharma Neue Pyrimidine, deren Herstellung und Verwendung
EA004049B1 (ru) 1998-11-10 2003-12-25 Янссен Фармацевтика Н.В. Пиримидины, ингибирующие репликацию вич
US6127376A (en) * 1998-12-04 2000-10-03 Berlex Laboratories, Inc. Aryl and heterocyclyl substituted pyrimidine derivatives as anti-coagulants
GB9828511D0 (en) * 1998-12-24 1999-02-17 Zeneca Ltd Chemical compounds
US6080747A (en) 1999-03-05 2000-06-27 Hughes Institute JAK-3 inhibitors for treating allergic disorders
US6518286B1 (en) 1999-03-26 2003-02-11 Astrazeneca Ab Compounds
EP1165522A1 (en) 1999-04-06 2002-01-02 Krenitsky Pharmaceuticals, Inc. Neurotrophic thio substituted pyrimidines
DE19917785A1 (de) 1999-04-20 2000-10-26 Bayer Ag 2,4-Diamino-pyrimidin-Derivate
AU5108000A (en) 1999-06-10 2001-01-02 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Novel nitrogen-contaiing heterocyclic derivatives or salts thereof
GB9914258D0 (en) * 1999-06-18 1999-08-18 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
GB9918035D0 (en) 1999-07-30 1999-09-29 Novartis Ag Organic compounds
DE19945982A1 (de) 1999-09-24 2001-03-29 Knoll Ag Geschwindigkeitsbestimmte Partikel
DK1225874T3 (da) 1999-09-24 2006-06-12 Janssen Pharmaceutica Nv Antivirale, faste dispersioner
CA2379640C (en) 1999-09-30 2006-11-28 Neurogen Corporation Certain alkylene diamine-substituted heterocycles
AU1026901A (en) 1999-10-29 2001-05-08 Syngenta Participations Ag Novel herbicides
AU4903201A (en) 1999-11-30 2001-07-03 Parker Hughes Institute Inhibitors of thrombin induced platelet aggregation
HU229671B1 (en) 1999-12-10 2014-04-28 Pfizer Prod Inc Pyrrolo[2,3-d]pirimidine compounds
WO2001047921A1 (en) * 1999-12-28 2001-07-05 Pharmacopeia, Inc. Pyrimidine and triazine kinase inhibitors
US20020065270A1 (en) 1999-12-28 2002-05-30 Moriarty Kevin Joseph N-heterocyclic inhibitors of TNF-alpha expression
US6362172B2 (en) 2000-01-20 2002-03-26 Bristol-Myers Squibb Company Water soluble prodrugs of azole compounds
WO2001060816A1 (en) 2000-02-17 2001-08-23 Amgen Inc. Kinase inhibitors
GB0004888D0 (en) * 2000-03-01 2000-04-19 Astrazeneca Uk Ltd Chemical compounds
GB0004890D0 (en) 2000-03-01 2000-04-19 Astrazeneca Uk Ltd Chemical compounds
GB0004886D0 (en) 2000-03-01 2000-04-19 Astrazeneca Uk Ltd Chemical compounds
GB0004887D0 (en) * 2000-03-01 2000-04-19 Astrazeneca Uk Ltd Chemical compounds
US6525051B2 (en) * 2000-03-27 2003-02-25 Schering Aktiengesellschaft N-heterocyclic derivatives as NOS inhibitors
WO2001085699A2 (en) 2000-05-08 2001-11-15 Janssen Pharmaceutica N.V. Prodrugs of hiv replication inhibiting pyrimidines
CA2406562C (en) 2000-05-08 2009-09-15 Janssen Pharmaceutica N.V. Hiv replication inhibiting pyrimidines and triazines
PL359563A1 (en) 2000-06-26 2004-08-23 Pfizer Products Inc. Pyrrolo[2,3-d]pyrimidine compounds as immunosuppressive agents
GB0016877D0 (en) 2000-07-11 2000-08-30 Astrazeneca Ab Chemical compounds
ES2266258T3 (es) 2000-09-15 2007-03-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compuestos de pirazol utiles como inhibidores de proteina cinasas.
CN1592645A (zh) * 2000-09-18 2005-03-09 拜奥根Idec公司 使用b细胞耗尽/免疫调节抗体组合治疗自身免疫病的联合疗法
WO2002043735A1 (en) 2000-11-29 2002-06-06 Parker Hughes Institute Inhibitors of thrombin induced platelet aggregation
US20020137755A1 (en) 2000-12-04 2002-09-26 Bilodeau Mark T. Tyrosine kinase inhibitors
JP4253188B2 (ja) 2000-12-21 2009-04-08 グラクソ グループ リミテッド 血管新生制御剤としてのピリミジンアミン
AU2002234047A1 (en) 2000-12-21 2002-07-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
EP1363702A4 (en) 2001-01-30 2007-08-22 Cytopia Pty Ltd PROCESS FOR INHIBITING KINASES
WO2002064096A2 (en) 2001-02-16 2002-08-22 Tularik Inc. Methods of using pyrimidine-based antiviral agents
BR0207096A (pt) 2001-02-20 2004-01-20 Astrazeneca Ab Uso de um composto, compostos, formulação farmacêutica, e, método de tratamento e/ou profilaxia de condições associadas com a inibição de glicogênio sintase quinase-3
GB2373186A (en) 2001-02-23 2002-09-18 Astrazeneca Ab Pharmaceutical combinations of a CCR3 antagonist and a compound which is usefulreatment of asthma, allergic disease or inflammation
EP1975620A3 (en) * 2001-03-02 2008-12-24 GPC Biotech AG Three hybrid assay system
RU2330024C2 (ru) 2001-05-29 2008-07-27 Шеринг Акциенгезельшафт Ингибирующие cdk-киназы пиримидины, способ их получения и их применение в качестве лекарственных средств
WO2002096905A1 (en) 2001-06-01 2002-12-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Thiazole compounds useful as inhibitors of protein kinases
MXPA03010961A (es) 2001-05-31 2004-02-27 Vertex Pharma Compuestos de tiazol utiles como inhibidores de proteinas cinasas.
US7301023B2 (en) 2001-05-31 2007-11-27 Pfizer Inc. Chiral salt resolution
MXPA03011652A (es) 2001-06-15 2004-05-31 Vertex Pharma 5-(2-aminopirimidin-4-il) benzioxazoles como inhibidores de proteinas cinasa.
EP1397142A4 (en) 2001-06-19 2004-11-03 Bristol Myers Squibb Co PYRIMIDINE PHOSPHODIESTERASE (PDE) INHIBITORS 7
EP1408978A4 (en) 2001-06-21 2005-07-13 Ariad Pharma Inc NOVEL PHENYLAMINO-PYRIMIDINES AND THEIR USE
GB0115393D0 (en) 2001-06-23 2001-08-15 Aventis Pharma Ltd Chemical compounds
MXPA03011998A (es) 2001-06-23 2005-07-01 Aventis Pharma Inc Pirrolopirimidinas como inhibidores de protein cinasa.
WO2003002544A1 (en) * 2001-06-26 2003-01-09 Bristol-Myers Squibb Company N-heterocyclic inhibitors of tnf-alpha expression
JO3429B1 (ar) 2001-08-13 2019-10-20 Janssen Pharmaceutica Nv مشتقات برميدينات مثبطة فيروس الايدز
US7115617B2 (en) 2001-08-22 2006-10-03 Amgen Inc. Amino-substituted pyrimidinyl derivatives and methods of use
US6939874B2 (en) 2001-08-22 2005-09-06 Amgen Inc. Substituted pyrimidinyl derivatives and methods of use
WO2003030909A1 (en) 2001-09-25 2003-04-17 Bayer Pharmaceuticals Corporation 2- and 4-aminopyrimidines n-substtituded by a bicyclic ring for use as kinase inhibitors in the treatment of cancer
WO2003026666A1 (en) 2001-09-26 2003-04-03 Bayer Pharmaceuticals Corporation 2-phenylamino-4- (5-pyrazolylamino)-pyrimidine derivatives as kinase inhibitors, in particular, as src kinase inhibitors
WO2003040141A1 (en) 2001-09-28 2003-05-15 Bayer Pharmaceuticals Corporation Oxazolyl-phenyl-2,4-diamino-pyrimidine compounds and methods for treating hyperproliferative disorders
WO2003032994A2 (de) 2001-10-17 2003-04-24 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg 5-substituierte 4-amino-2-phenylamino-pyrimidinderivate und ihre verwendung als beta-amyloid modulatoren
ES2314106T3 (es) * 2001-10-17 2009-03-16 BOEHRINGER INGELHEIM PHARMA GMBH &amp; CO.KG Derivados de pirimidina, agentes farmaceuticos que contiene dichos compuestos, uso y metodo para su obtencion.
EP1473289B1 (en) * 2001-11-28 2009-08-05 Btg International Limited Preventives or remedies for alzheimer's disease or amyloid protein fibrosis inhibitors containing nitrogen-containing heteroaryl compounds
GT200200234A (es) 2001-12-06 2003-06-27 Compuestos cristalinos novedosos
SE0104140D0 (sv) 2001-12-07 2001-12-07 Astrazeneca Ab Novel Compounds
AU2002367172A1 (en) 2001-12-21 2003-07-15 Bayer Pharmaceuticals Corporation 2,4-diamino-pyrimidine derivative compounds as inhibitors of prolylpeptidase, inducers of apoptosis and cancer treatment agents
EP1470121B1 (en) 2002-01-23 2012-07-11 Bayer HealthCare LLC Pyrimidine derivatives as rho-kinase inhibitors
TWI329105B (en) * 2002-02-01 2010-08-21 Rigel Pharmaceuticals Inc 2,4-pyrimidinediamine compounds and their uses
US6998391B2 (en) 2002-02-07 2006-02-14 Supergen.Inc. Method for treating diseases associated with abnormal kinase activity
WO2003066601A1 (en) 2002-02-08 2003-08-14 Smithkline Beecham Corporation Pyrimidine compounds
ATE365165T1 (de) 2002-03-01 2007-07-15 Smithkline Beecham Corp Diaminopyrimidine und deren verwendung als angiogenesehemmer
EP1483260A1 (de) * 2002-03-11 2004-12-08 Schering Aktiengesellschaft Cdk inhibitorische 2-heteroaryl-pyrimidine, deren herstellung und verwendung als arzneimittel
US7288547B2 (en) * 2002-03-11 2007-10-30 Schering Ag CDK-inhibitory 2-heteroaryl-pyrimidines, their production and use as pharmaceutical agents
GB0206215D0 (en) * 2002-03-15 2002-05-01 Novartis Ag Organic compounds
RU2312857C2 (ru) 2002-03-20 2007-12-20 Бристол-Маерс Сквибб Компани Фосфатные производные фтороксиндолов и способ лечения с их использованием
WO2004039359A2 (en) 2002-05-06 2004-05-13 Bayer Pharmaceuticals Corporation Use of pyrimidine derivates for the manifacture of a medicament for the treatment of hyper-proliferative disorders
EP2316834A1 (en) 2002-05-06 2011-05-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Thiadiazoles or oxadiazoles and their use as inhibitors of JAK protein kinase
AU2003231231A1 (en) 2002-05-06 2003-11-11 Bayer Pharmaceuticals Corporation Pyridinyl amino pyrimidine derivatives useful for treating hyper-proliferative disorders
AR039540A1 (es) 2002-05-13 2005-02-23 Tibotec Pharm Ltd Compuestos microbicidas con contenido de pirimidina o triazina
EP1507779A1 (en) 2002-05-30 2005-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of jak and cdk2 protein kinases
PL374963A1 (en) 2002-06-17 2005-11-14 Smithkline Beecham Corporation Chemical process
ES2373226T3 (es) 2002-06-28 2012-02-01 Astellas Pharma Inc. Derivado de diaminopirimidincarboxamida.
CN103169708B (zh) 2002-07-29 2018-02-02 里格尔药品股份有限公司 用2,4‑嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法
WO2004014384A2 (en) 2002-08-13 2004-02-19 Warner-Lambert Company Llc Cyclic compounds containing zinc binding groups as matrix metalloproteinase inhibitors
WO2004016597A2 (en) 2002-08-14 2004-02-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Protein kinase inhibitors and uses thereof
CA2506772A1 (en) * 2002-11-01 2004-05-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions useful as inhibitors of jak and other protein kinases
ATE371656T1 (de) * 2002-11-04 2007-09-15 Vertex Pharma Heteroaryl-pyrimidinderivate als jak-inhibitoren
AU2003286895A1 (en) 2002-11-05 2004-06-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds useful as inhibitors of jak and other protein kinases
GB0226582D0 (en) 2002-11-14 2002-12-18 Cyclacel Ltd Anti-viral compounds
GB0226583D0 (en) 2002-11-14 2002-12-18 Cyclacel Ltd Compounds
WO2004046112A2 (en) 2002-11-21 2004-06-03 Pfizer Products Inc. 3-amino-piperidine derivatives and processes for their preparation
PL378246A1 (pl) 2002-11-26 2006-03-20 Pfizer Products Inc. Sposób leczenia odrzucania przeszczepu
MXPA05005547A (es) 2002-11-28 2005-07-26 Schering Ag Pirimidinas inhibidoras de chk, pdk y akt, su produccion y uso como agentes farmaceuticos.
AU2002350719A1 (en) 2002-11-29 2004-06-23 Janssen Pharmaceutica N.V. Pharmaceutical compositions comprising a basic respectively acidic drug compound, a surfactant and a physiologically tolerable water-soluble acid respectively base
AU2003289330A1 (en) 2002-12-13 2004-07-09 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Preventives and/or remedies for central diseases
US7226919B2 (en) 2002-12-18 2007-06-05 Vertex Pharmaceuticals Inc. Compositions useful as inhibitors of protein kinases
US7098332B2 (en) * 2002-12-20 2006-08-29 Hoffmann-La Roche Inc. 5,8-Dihydro-6H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-ones
UA80767C2 (en) 2002-12-20 2007-10-25 Pfizer Prod Inc Pyrimidine derivatives for the treatment of abnormal cell growth
CL2004000192A1 (es) 2003-02-07 2005-03-18 Janssen Pharmaceutica Nv Uso de compuestos derivados de 2-aminopirimidina para preparar un medicamento para la prevencion de una infeccion por vih relaciones sexuales o un contacto intimo en la pareja.
CL2004000306A1 (es) 2003-02-20 2005-04-08 Tibotec Pharm Ltd Compuestos derivados de pirimidina sustituidas con indano; proceso para su preparacion; composicion farmaceutica que lo comprende; combinacion farmaceutica; y su uso para el tratamiento o profilaxis de una enfermedad infecciosa.
ATE433447T1 (de) 2003-02-20 2009-06-15 Smithkline Beecham Corp Pyrimiidinverbindungen
GB0305929D0 (en) 2003-03-14 2003-04-23 Novartis Ag Organic compounds
MXPA05011523A (es) 2003-04-30 2006-01-23 Inst For Pharm Discovery Inc Heteroarilos sustituidos como inhibidores de proteinas de tirosina fosfatasas.
GB0311274D0 (en) 2003-05-16 2003-06-18 Astrazeneca Ab Chemical compounds
GB0311276D0 (en) 2003-05-16 2003-06-18 Astrazeneca Ab Chemical compounds
US7915293B2 (en) 2003-05-30 2011-03-29 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Ubiquitin ligase inhibitors
CA2531401A1 (en) 2003-07-10 2005-01-27 Neurogen Corporation Substituted heterocyclic diarylamine analogues
ATE370142T1 (de) 2003-07-16 2007-09-15 Janssen Pharmaceutica Nv Triazolopyrimidinderivate als inhibitoren von glycogensynthasekinase-3
CN100549014C (zh) 2003-07-16 2009-10-14 詹森药业有限公司 作为糖原合酶激酶3抑制剂的三唑并嘧啶衍生物
CN1826328A (zh) 2003-07-22 2006-08-30 神经能质公司 经取代的吡啶－2－基胺类似物
US7442698B2 (en) * 2003-07-24 2008-10-28 Amgen Inc. Substituted heterocyclic compounds and methods of use
AU2004261484A1 (en) 2003-07-30 2005-02-10 Cyclacel Limited 2-aminophenyl-4-phenylpyrimidines as kinase inhibitors
CA2533377C (en) 2003-07-30 2012-11-27 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating or preventing autoimmune diseases with 2,4-pyrimidinediamine compounds
WO2005013996A2 (en) * 2003-08-07 2005-02-17 Rigel Pharmaceuticals, Inc. 2,4-pyrimidinediamine compounds and uses as anti-proliferative agents
CA2533320A1 (en) 2003-08-15 2006-02-24 Novartis Ag 2, 4-pyrimidinediamines useful in the treatment of neoplastic diseases, inflammatory and immune system disorders
WO2005028467A1 (en) 2003-09-15 2005-03-31 Anadys Pharmaceuticals, Inc. Antibacterial 3,5-diaminopiperidine-substitute aromatic and heteroaromatic compounds
GB0321710D0 (en) 2003-09-16 2003-10-15 Novartis Ag Organic compounds
US20070105839A1 (en) 2003-09-18 2007-05-10 Patricia Imbach 2, 4-Di (phenylamino) pyrimidines useful in the treatment of proliferative disorders
WO2005027848A2 (en) 2003-09-19 2005-03-31 Barnes-Jewish Hospital Methods for screening osteogenic compounds targeting syk kinase and/or vav3 and uses of syk modulators and/or vav modulators
AP2006003517A0 (en) 2003-09-25 2006-02-28 Janssen Pharmaceutica Nv Hiv replication purine derivatives.
DE10349423A1 (de) 2003-10-16 2005-06-16 Schering Ag Sulfoximinsubstituierte Parimidine als CDK- und/oder VEGF-Inhibitoren, deren Herstellung und Verwendung als Arzneimittel
AU2004292773A1 (en) 2003-11-28 2005-06-09 Novartis Ag Diaryl urea derivatives in the treatment of protein kinase dependent diseases
MY141255A (en) 2003-12-11 2010-03-31 Memory Pharm Corp Phosphodiesterase 4 inhibitors, including n-substituted diarylamine analogs
US7511137B2 (en) * 2003-12-19 2009-03-31 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Stereoisomers and stereoisomeric mixtures of 1-(2,4-pyrimidinediamino)-2-cyclopentanecarboxamide synthetic intermediates
MXPA06007640A (es) 2004-01-12 2007-04-17 Cytopia Res Pty Ltd Inhibidores de quinasa selectivos.
GB0402653D0 (en) 2004-02-06 2004-03-10 Cyclacel Ltd Compounds
PL1713806T3 (pl) 2004-02-14 2013-09-30 Irm Llc Związki i kompozycje jako inhibitory kinaz białkowych
US7607424B2 (en) * 2004-02-17 2009-10-27 Planet Eclipse Limited Electro-magnetically operated rotating projectile loader
US7745625B2 (en) 2004-03-15 2010-06-29 Bristol-Myers Squibb Company Prodrugs of piperazine and substituted piperidine antiviral agents
WO2005107760A1 (en) 2004-04-30 2005-11-17 Irm Llc Compounds and compositions as inducers of keratinocyte differentiation
CA2566531A1 (en) 2004-05-18 2005-12-15 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Cycloalkyl substituted pyrimidinediamine compounds and their uses
GB0419161D0 (en) 2004-08-27 2004-09-29 Novartis Ag Organic compounds
US20060047135A1 (en) 2004-08-30 2006-03-02 Chadwick Scott T Process for preparing chloromethyl di-tert-butylphosphate
WO2006028833A1 (en) * 2004-09-01 2006-03-16 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 2,4-pyrimidinediamine compounds
WO2006034872A1 (de) 2004-09-29 2006-04-06 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Substituierte 2-anilinopyrimidine als zellzyklus -kinase oder rezeptortyrosin-kinase inhibitoren, deren herstellung und verwendung als arzneimittel
JP2008518967A (ja) 2004-10-29 2008-06-05 ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｓｙｋキナーゼに対する活性を有する置換ピリジン
CA2584295C (en) * 2004-11-24 2014-08-26 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Spiro-2, 4-pyrimidinediamine compounds and their uses
US7442716B2 (en) 2004-12-17 2008-10-28 Merck Frosst Canada Ltd. 2-(phenyl or heterocyclic)-1H-phenantrho[9,10-d]imidazoles as mPGES-1 inhibitors
ATE519759T1 (de) 2004-12-30 2011-08-15 Exelixis Inc Pyrimidinderivate als kinasemodulatoren und anwendungsverfahren
ES2337496T3 (es) * 2005-01-19 2010-04-26 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Profarmacos de compuestos de 2,4-pirimidindiamina y sus usos.
US20060270694A1 (en) * 2005-05-03 2006-11-30 Rigel Pharmaceuticals, Inc. JAK kinase inhibitors and their uses
US20070203161A1 (en) * 2006-02-24 2007-08-30 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the jak pathway
JP5225079B2 (ja) * 2005-06-08 2013-07-03 ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｊａｋ経路の阻害のための組成物および方法
US7576053B2 (en) * 2005-06-13 2009-08-18 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating degenerative bone disorders
MX2008000574A (es) 2005-07-11 2008-03-14 Sanofi Aventis Nuevos derivados de 2,4-dianilinopirimidinas, la preparacion de los mismos, su uso como medicamentos, composiciones farmaceuticas y, en particular, como inhibidores ikk.
JP5227795B2 (ja) 2005-07-28 2013-07-03 インターベツト・インターナシヨナル・ベー・ベー 抗寄生虫活性を有する新規ベンゾイミダゾール（チオ）カルバメートおよびその合成
US20090114877A1 (en) 2005-09-13 2009-05-07 Eisai R&D Management Co., Ltd. Composition Containing Stability-Improved Chloromethyl Phosphate Derivatve and Process for Producing Same
US20070117775A1 (en) * 2005-10-31 2007-05-24 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and Methods For Treating Inflammatory Disorders
PT1951684T (pt) 2005-11-01 2016-10-13 Targegen Inc Inibidores de cinases de tipo biaril-meta-pirimidina
US7713987B2 (en) * 2005-12-06 2010-05-11 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine-2,4-diamines and their uses
TW200736232A (en) 2006-01-26 2007-10-01 Astrazeneca Ab Pyrimidine derivatives
WO2007085540A1 (en) 2006-01-27 2007-08-02 Glaxo Group Limited 1h-indaz0l-4-yl-2 , 4-pyrimidinediamine derivatives
SI1984357T1 (sl) * 2006-02-17 2014-02-28 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Spojine 2,4-pirimidindiamina za zdravljenje ali preventivo avtoimunih bolezni
JP2009528295A (ja) 2006-02-24 2009-08-06 ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｊａｋ経路の阻害のための組成物および方法
US7776855B2 (en) 2006-07-27 2010-08-17 Janssen Pharmaceutica N.V. Antimicrobial oxazolidinone prodrugs

Also Published As

Publication number Publication date
RU2659777C2 (ru) 2018-07-04
BR0313059B8 (pt) 2021-07-27
RU2013123881A (ru) 2014-11-27
US7825116B2 (en) 2010-11-02
US20070299095A1 (en) 2007-12-27
US8158621B2 (en) 2012-04-17
MXPA05001096A (es) 2005-11-23
PL373455A1 (en) 2005-08-22
CA2492325C (en) 2012-09-18
PL216744B1 (pl) 2014-05-30
CA2492325A1 (en) 2004-02-19
RU2659777C9 (ru) 2019-09-03
JP2006514989A (ja) 2006-05-18
DK1534286T3 (da) 2010-04-26
AU2003265336B2 (en) 2008-06-19
RS20050069A (en) 2007-11-15
ES2337782T3 (es) 2010-04-29
BR0313059A (pt) 2005-07-05
JP2011016800A (ja) 2011-01-27
NO20051069L (no) 2005-02-28
ATE451104T1 (de) 2009-12-15
EP1534286A1 (en) 2005-06-01
EP1534286B1 (en) 2009-12-09
HK1159472A1 (zh) 2012-08-03
SE0500203L (sv) 2005-03-29
WO2004014382A1 (en) 2004-02-19
CN1678321A (zh) 2005-10-05
DE60330466D1 (de) 2010-01-21
RS51752B (en) 2011-12-31
JP5441841B2 (ja) 2014-03-12
US7517886B2 (en) 2009-04-14
ES2445208T3 (es) 2014-02-28
US7812029B1 (en) 2010-10-12
US20100125069A1 (en) 2010-05-20
US8557806B2 (en) 2013-10-15
US20120230984A1 (en) 2012-09-13
HRP20050089B1 (hr) 2015-06-19
AU2003265336A1 (en) 2004-02-25
IL214607A (en) 2015-09-24
NZ537752A (en) 2006-12-22
BRPI0313059B1 (pt) 2018-05-08
AU2003265336B8 (en) 2009-04-23
CN103169708A (zh) 2013-06-26
IL166241A0 (en) 2006-01-15
IL166241A (en) 2011-12-29
IS7669A (is) 2005-01-27
SG176311A1 (en) 2011-12-29
NO332550B1 (no) 2012-10-22
IL214607A0 (en) 2011-09-27
CY1110292T1 (el) 2015-01-14
HRP20050089A2 (en) 2007-08-31
IS2923B (is) 2015-05-15
US20070060603A1 (en) 2007-03-15
HK1079978A1 (en) 2006-04-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103169708B (zh) 用2,4‑嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法
CN1849318B (zh) 用2,4-嘧啶二胺化合物预防和治疗自体免疫疾病的方法
CN102174024B (zh) 2,4-嘧啶二胺化合物及其用途
JP4653842B2 (ja) 自己免疫疾患を治療または予防するための２，４−ピリミジンジアミン化合物
CN105408315B (zh) 激酶抑制剂
CA2584295C (en) Spiro-2, 4-pyrimidinediamine compounds and their uses
CN105979948A (zh) Pi3k抑制剂和btk抑制剂的治疗组合
CN106164067A (zh) 作为抗炎化合物的芳族杂环化合物
CN102066339A (zh) 作为syk或jak蛋白激酶抑制剂的2,6-二氨基-嘧啶-5-基甲酰胺类化合物
UA74850C2 (en) Amide derivatives as nmda receptor antagonists
CN102388032A (zh) 作为ccr3拮抗剂的取代的哌啶
EP1675850B1 (en) Quinoline compounds and their uses
TW201932111A (zh) 用於治療癌症之組合療法
CN101514191A (zh) 用2,4-嘧啶二胺化合物治疗或者预防自体免疫性疾病的方法
CN103664938A (zh) 含有嘧啶并环的syk抑制剂
CN106831779A (zh) 一类jak激酶抑制剂的新化合物
RU2376992C2 (ru) Способы лечения или профилактики аутоиммунных заболеваний с помощью соединений 2,4-пиримидиндиамина
KR101297924B1 (ko) 2,4-피리미딘디아민 화합물을 이용한 자가면역질환의 치료및 예방 방법
EP2316459A1 (en) Methods of treating or preventing autoimmune diseases with 2,4-pyrimidinediamine compounds

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CX01 Expiry of patent term

Granted publication date: 20180202

CX01 Expiry of patent term