CN102498107A - 作为激酶抑制剂的杂芳基化合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供式(I)化合物和其药学上可接受的盐。还提供使用式I化合物治疗由CDK抑制剂调节的疾病或疾患的方法。
Description
对相关申请的交叉参考
本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2009年9月4日提交的U.S.临时申请61/275,939的优先权，将其以全部内容引入文中作为参考。
发明领域
本发明提供一类新化合物、包含此类化合物的药物组合物和使用这些化合物治疗或预防可以通过抑制激酶来调节的与异常细胞信号通路相关的疾病或病症(特别是可以通过抑制CDK9来调节的与异常细胞信号通路相关的疾病或病症)的方法。
背景
蛋白激酶构成一大族结构上相关的酶，其负责控制细胞内的多种信号转导过程(Hardie，G.和Hanks，S.蛋白激酶真相书(The Protein KinaseFacts Book)I和II，Academic Press，San Diego，Calif.：1995)。由于它们的结构和催化功能的保守性，故认为蛋白激酶由共同的祖先基因进化而来。几乎所有激酶包含类似的250-300个氨基酸催化结构域。这些激酶可根据它们磷酸化的底物(例如蛋白质-酪氨酸、蛋白质-丝氨酸/苏氨酸、脂质等)而分成各个家族。已经鉴定了通常与这些激酶家族中的每一种相对应的序列基元(参见例如Hanks，S.K.，Hunter，T.，FASEB J.1995，9，576-596；Knighton等人，Science 1991，253，407-414；Hiles等人，Cell 1992，70，419-429；Kunz等人，Cell 1993，73，585-596；Garcia-Bustos等人，EMBOJ.1994，13，2352-2361)。
很多疾病与由上述蛋白激酶-介导的事件触发的异常细胞应答相关。这些疾病包括但不限于自身免疫性疾病、炎性疾病、骨疾病、代谢性疾病、神经疾病和神经变性疾病、癌症、心血管疾病、变态反应和哮喘、阿尔茨海默病、病毒性疾病和激素相关疾病。因此，为寻找作为治疗剂是有效的蛋白激酶抑制剂，在药物化学中已经付出了大量努力。
细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)复合体是一类为感兴趣靶点的激酶。这些复合体包括至少一个催化(CDK本身)和调节(细胞周期蛋白)亚基。细胞周期调节的一些更重要复合体包含细胞周期蛋白A(CDK1-也称为cdc2，和CDK2)、细胞周期蛋白B1-B3(CDK1)和细胞周期蛋白D1-D3(CDK2、CDK4、CDK5、CDK6)、细胞周期蛋白E(CDK2)。这些复合体中的每一个均参与细胞周期的特定阶段。此外，CDK 7、8和9涉及转录的调节。
显示CDK参与细胞周期进展和细胞转录，生长控制的丧失与疾病的异常细胞增殖有关(参见例如Malumbres和Barbacid，Nat.Rev.Cancer2001，1：222)。已经显示，细胞周期蛋白依赖性激酶的活性增加或短暂异常活化导致人肿瘤的发展(Sherr C.J.，Science 1996，274：1672-1677)。的确，人肿瘤发展通常与CDK蛋白自身或其调节因子的变化相关(Cordon-Cardo C.，Am.J.Pat1/701.1995；147：545-560；Karp J.E.和Broder S.，Nat.Med.1995；1：309-320；Hall M.等人，Adv.Cancer Res.1996；68：67-108)。
CDK 7和9显示分别在转录起始和延伸中起关键作用(参见例如Peterlin和Price.Cell 23：297-305，2006，Shapiro.J.Clin.Oncol.24：1770-83，2006；)。CDK9的抑制已通过下调抗凋亡蛋白如Mcl1的转录而与直接诱导造血谱系肿瘤细胞的细胞凋亡相关联(Chao，S.-H.等人J.Biol.Chem.2000；275：28345-28348；Chao，S.-H.等人J.Biol.Chem.2001；276：31793-31799；Lam等人Genome Biology 2：0041.1-11，2001；Chen等人Blood 2005；106：2513；MacCallum等人Cancer Res.2005；65：5399；和Alvi等人Blood 2005；105：4484)。在实体肿瘤细胞中，通过下调CDK9活性的转录抑制与细胞周期CDK、例如CDK1和2的抑制协同，以诱导细胞凋亡(Cai，D.-P.，Cancer Res 2006，66：9270)。通过CDK9或CDK7的转录抑制可能对依赖于具有短半衰期的mRNA的转录的肿瘤细胞类型具有选择性非增殖性作用，如外套细胞淋巴瘤中的细胞周期蛋白D1。一些转录因子如Myc和NF-kB选择性地募集CDK9到它们的启动子，且依赖于这些信号转导通路活化的肿瘤可能对CDK9抑制敏感。
小分子CDK抑制剂也可用于治疗心血管病症如再狭窄和动脉粥样硬化和由异常细胞增殖所致的其他血管病症。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂蛋白的过表达抑制气囊血管成形术后的血管平滑肌增殖和内膜增生。而且，嘌呤CDK2抑制剂CVT-313(Ki＝95nM)使得大鼠新内膜形成的抑制大于80％。
CDK在嗜中性粒细胞介导的炎症中非常重要，且CDK抑制剂促进动物模型中炎症的消退(Rossi，A.G.等人Nature Med.2006，12：1056)。因此，包括CDK9抑制剂的CDK抑制剂可用作抗炎剂。
某些CDK抑制剂根据它们抑制正常未转化细胞的细胞周期进程的能力而可用作化学保护剂(Chen，等人J.Natl.Cancer Institute，2000；92：1999-2008)。在使用细胞毒性剂之前用CDK抑制剂对癌症患者进行预治疗，可减少通常与化疗相关的副作用。通过选择性CDK抑制剂的作用，保护正常增殖组织免受细胞毒性作用。
因此，对于开发蛋白激酶如CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8和CDK9以及其组合的抑制剂存在很大需求。
概述
本发明提供了式I化合物或其药学上可接受的盐，
其中：
R1选自-(CH2)0-2-杂芳基、-(CH2)0-2-芳基、C1-8烷基、C3-8支链烷基、C3-8环烷基和4至8元杂环烷基基团，其中所述基团各自独立地任选被取代；
R2选自氢、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4-烷基和卤素；
R3选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基、-O-C1-4卤代烷基和卤素；
R4选自氢、卤素、5至7元杂环基-R14和A6-L-R9；
R5选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、羟基、CN、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基和卤素；
R6选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基、-O-C1-4卤代烷基和卤素；
R7选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、O-C1-3烷基和卤素；
A6选自O、SO2和NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CHD-、-CD2-、C3-6环烷基、C3-6卤代环烷基、C4-7-杂环烷基、C3-8支链亚烷基和C3-8支链卤代亚烷基；
R8选自氢、C1-4烷基或C3-8支链-烷基和-C3-8支链卤代烷基；
R9选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8支链烷基、-(CH2)0-2杂芳基、(CH2)0-2-4至8元杂环烷基或(CH2)0-2-芳基，其中所述基团任选被取代；且
R14选自氢、苯基、卤素、羟基、C1-4-烷基、C3-6-支链烷基、C1-4-卤代烷基、CF3、＝O和O-C1-4-烷基。
本发明该方面的优选的实施方案提供了式I化合物，其中：
R1选自-(CH2)0-2-杂芳基和-(CH2)0-2-芳基，其中所述R1基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自-NH2、-F、-Cl、-OH、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-C3-6支链烷基、C3-6支链卤代烷基、-C3-7环烷基、-C3-7卤代环烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2卤代烷基、-(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2卤代烷基、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、-O-C3-6支链烷基、-O-C3-6支链卤代烷基、-O-C3-7环烷基、-O-C3-7卤代环烷基、-O-(CH2)1-2-C3-6环烷基-R14、-O-(CH2)1-2-C4-6杂环烷基-R14、-NH-C1-4烷基、-NH-C2-4卤代烷基、-NH-C3-8支链烷基、-NH-C3-8支链卤代烷基、-NH-C3-7环烷基、-NH-C3-7卤代环烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4卤代烷基、-NH-C(O)-C3-8支链烷基、-NH-C(O)-C3-8支链卤代烷基、-NH-C(O)-C3-7环烷基、-NH-C(O)-C3-7卤代环烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4卤代烷基、-NH-C(O)-O-C1-4烷基、-NH-C(O)O-C2-4卤代烷基、-NH-C(O)-O-C3-8支链烷基、-NH-C(O)O-C3-8支链卤代烷基、-NH-C(O)-O-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-NH-SO2-C1-4烷基、-NH-SO2-C1-4卤代烷基、-NH-SO2-C3-8支链烷基、-NH-SO2-C3-8支链卤代烷基、-NH-SO2-C3-5环烷基、-NH-SO2-C3-5卤代环烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-C(O)-O-C2-4卤代烷基、-C(O)-O-C3-6支链烷基、-C(O)O-C3-6支链卤代烷基、-C(O)-O-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-C(O)-C1-4烷基、-C(O)C2-4卤代烷基、-C(O)-C3-8支链烷基、-C(O)-C3-8支链卤代烷基、-C(O)-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4卤代烷基、-SO2-C1-4烷基、-SO2-C1-4卤代烷基、-SO2-C3-8支链烷基、-SO2-C3-8支链卤代烷基、-SO2-C3-5环烷基和-SO2-C3-5卤代环烷基、-C(O)-NR15R16和-SO2-NR15R16，此外其中任何两个所述的取代基与它们所连接的原子一起可能形成环；
R2选自氢、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4-烷基和卤素；
R3选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基、-O-C1-4卤代烷基和卤素；
R4选自氢、卤素、5至7元杂环基-R14和A6-L-R9；
R5选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基和卤素；
R6选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基、-O-C1-4卤代烷基和卤素；
R7选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、O-C1-3烷基和卤素；
A6是O、SO2或NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CHD-、-CD2-、C3-6环烷基、C3-6卤代环烷基、C4-7-杂环烷基和C3-8支链亚烷基；
R8选自氢、C1-4烷基或C3-8支链-烷基和-C3-8支链卤代烷基；
R9选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8支链烷基、-(CH2)0-2杂芳基、(CH2)0-2-4至8元杂环烷基和(CH2)0-2-芳基，其中所述基团任选被取代；
R14选自氢、苯基、卤素、羟基、C1-4-烷基、C3-6-支链烷基、C1-4-卤代烷基、CF3、＝O和O-C1-4-烷基；并且
R15和R16独立地选自氢、羟基、烷基、支链烷基、卤代烷基、支链卤代烷基、烷氧基、环烷基和杂环烷基；或者，R15和R16与它们所连接的氮原子一起可能形成任选取代的四至六元杂芳香族或非芳香族的杂环。
另外一个优选的实施方案提供了式I化合物，其中：
R1选自-(CH2)0-2-杂芳基和-(CH2)0-2-芳基，其中所述R1基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自-NH2、F、Cl、-OH、-C1-4烷基、-NH-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-C3-6支链烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基、-NH-C(O)-C3-8支链烷基、-O-C3-6支链烷基、-NH-C(O)O-C1-4烷基、-NH-SO2-C1-4烷基、-NH-SO2-C3-8支链烷基、-NH-SO2-C3-5环烷基、(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-O-C1-4烷基、-C(O)O-C3-6支链烷基、-C(O)C1-4烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-C(O)-C3-8支链烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-SO2-C1-4烷基、-SO2-C3-8支链烷基、-O-(CH2)1-2-C3-6环烷基-R14、-O-(CH2)1-2-C4-6杂环烷基-R14、-SO2-NR15R16和-SO2-C3-5环烷基；
R2选自氢和卤素；
R3是氢；
R4选自哌啶基、吗啉基、吡咯烷基和A6-L-R9；其中所述哌啶基、吗啉基、吡咯烷基基团各自被R14取代；
R5选自氢、Cl、F和CF3；
R6是氢；
R7选自氢、F和Cl；
A6是NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CD2-和C3-8支链亚烷基；
R8选自氢和C1-4烷基；
R9选自C1-3烷基、C3-7环烷基、C4-6支链烷基、-(CH2)1-3-O-C1-4烷基、-(CH2)-吡啶基、(CH2)-4至8元杂环烷基、(CH2)-4至8元杂环烷基和(CH2)-苯基，其中所述基团任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、-OH、CN、＝O、C(O)-CH3、-O-C1-3烷基、-O-C1-3卤代烷基、-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-C(O)-C1-4烷基和-NH-C(O)-C1-4烷基；
R14选自苯基、卤素、羟基、C1-2-烷基、CF3和氢；并且
R15和R16独立地选自氢、羟基、烷基、支链烷基、卤代烷基、支链卤代烷基、烷氧基、环烷基和杂环烷基；或者，R15和R16与它们所连接的氮原子一起可能形成任选取代的四至六元杂芳香族的或非芳香族的杂环。
在另外一个优选的实施方案中，提供了式I化合物，其中，R1选自C1-8烷基、C3-8环烷基、C3-8支链烷基和4至8元杂环烷基基团，其中所述R1基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自-NH2、-F、-OH、＝O、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-C3-6支链烷基、C3-6支链卤代烷基、-C3-7环烷基、-C3-7卤代环烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2卤代烷基、-(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2卤代烷基、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、-O-C3-6支链烷基、-O-C3-6支链卤代烷基、-O-C3-7环烷基、-O-C3-7卤代环烷基、-O-(CH2)1-2-C3-6环烷基-R14、-O-(CH2)1-2-C4-6杂环烷基-R14、-NH-C1-4烷基、-NH-C2-4卤代烷基、-NH-C3-8支链烷基、-NH-C3-8支链卤代烷基、-NH-C3-7环烷基、-NH-C3-7卤代环烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4卤代烷基、-NH-C(O)-C3-8支链烷基、-NH-C(O)-C3-8支链卤代烷基、-NH-C(O)-C3-7环烷基、-NH-C(O)-C3-7卤代环烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4卤代烷基、-NH-C(O)-O-C1-4烷基、-NH-C(O)O-C2-4卤代烷基、-NH-C(O)-O-C3-8支链烷基、-NH-C(O)O-C3-8支链卤代烷基、-NH-C(O)-O-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-NH-SO2-C1-4烷基、-NH-SO2-C1-4卤代烷基、-NH-SO2-C3-8支链烷基、-NH-SO2-C3-8支链卤代烷基、-NH-SO2-C3-5环烷基、-NH-SO2-C3-5卤代-环烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-C(O)-O-C2-4卤代烷基、-C(O)-O-C3-6支链烷基、-C(O)O-C3-6支链卤代烷基、-C(O)-O-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-C(O)-C1-4烷基、-C(O)C2-4卤代烷基、-C(O)-C3-8支链烷基、-C(O)-C3-8支链卤代烷基、-C(O)-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4卤代烷基、-SO2-C1-4烷基、-SO2-C1-4卤代烷基、-SO2-C3-8支链烷基、-SO2-C3-8支链卤代烷基、-SO2-C3-5环烷基和-SO2-C3-5卤代环烷基；
-C(O)-NR15R16和-SO2-NR15R16，此外其中任何两个所述的取代基与它们所连接的原子一起可能形成环；
R2选自氢、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4-烷基和卤素；
R3选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基和卤素；
R4选自氢、卤素、5至7元杂环基-R14和A6-L-R9；
R5选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基和卤素；
R6选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基和卤素；
R7选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、O-C1-3烷基和卤素；
A6选自O、SO2和NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CHD-、-CD2-、C3-6环烷基、C3-6卤代环烷基、C4-7-杂环烷基、C3-8支链亚烷基和C3-8支链卤代亚烷基；
R8选自氢、C1-4烷基或C3-8支链-烷基和-C3-8支链卤代烷基；
R9选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8支链烷基、-(CH2)0-2杂芳基、(CH2)0-2-4至8元杂环烷基和(CH2)0-2-芳基，其中所述基团任选被取代；
R14选自氢、苯基、卤素、羟基、C1-4-烷基、C3-6-支链烷基、C1-4-卤代烷基、CF3、＝O和O-C1-4-烷基；并且
R15和R16独立地选自氢、羟基、烷基、支链烷基、卤代烷基、支链卤代烷基、烷氧基、环烷基和杂环烷基；或者，R15和R16与它们所连接的氮原子一起可能形成任选取代的四至六元杂芳香族的或非芳香族的杂环。
更优选的实施方案提供式I化合物，其中，R1选自C1-8烷基、C3-8支链烷基、C3-8环烷基和4至8元杂环烷基基团，其中所述R1基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自-NH2、F、-OH、＝O、-C1-4烷基、-NH-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-C3-6支链烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基、-NH-C(O)-C3-8支链烷基、-O-C3-6支链烷基、-NH-C(O)O-C1-4烷基、-NH-SO2-C1-4烷基、-NH-SO2-C3-8支链烷基、-NH-SO2-C3-5环烷基、(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-O-C1-4烷基、-C(O)O-C3-6支链烷基、-C(O)C1-4烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-C(O)-C3-8支链烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-SO2-C1-4烷基、-SO2-C3-8支链烷基和-SO2-C3-5环烷基；
R2选自氢和卤素；
R3是氢；
R4选自哌啶基、吗啉基、吡咯烷基和A6-L-R9；其中所述哌啶基、吗啉基、吡咯烷基基团各自被R14取代；
R5选自氢、F、Cl和CF3；
R6选自氢、F和Cl；
R7选自氢、F和Cl；
A6是NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CD2-和C3-8支链亚烷基；
R8选自氢和C1-4烷基；
R9选自C1-3烷基、C3-7环烷基、C4-6支链烷基、-(CH2)1-3-O-C1-4烷基、-(CH2)-吡啶基、(CH2)-4至8元杂环烷基、(CH2)-4至8元杂环烷基和(CH2)-苯基，其中所述基团任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、-OH、CN、＝O、C(O)-CH3、-O-C1-3烷基、-O-C1-3卤代烷基、-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-C(O)-C1-4烷基和-NH-C(O)-C1-4烷基；并且
R14选自苯基、卤素、羟基、C1-2-烷基和氢。
另外一个优选的实施方案提供式I化合物，其中，R1选自哌啶基、吗啉基、1-甲基哌啶基、四氢-吡喃、吡咯烷基、四氢-呋喃、氮杂环丁烷、吡咯烷-2-酮、氮杂环庚烷和1，4-氧氮杂环庚烷，其中所述R1基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自F、OH、NH2、CO-甲基、-NH-甲基、乙基、氟-乙基、三氟-乙基、(CH2)2-甲氧基、SO2-CH3、COO-CH3、SO2-乙基、SO2-环丙基、甲基、SO2-CH-(CH3)2、NH-SO2-CH3、NH-SO2-C2H5、＝O、CF3、(CH2)-甲氧基、甲氧基、NH-SO2-CH-(CH3)2、-(CH2)-O-(CH2)2-甲氧基、-O-CH-(CH3)2；
R2选自Cl和F；
R3是氢；
R4是A6-L-R9；
R5选自氢、F和Cl；
R6选自氢、F和Cl；
R7选自氢、F和Cl；
A6是NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CD2-和C3-8支链亚烷基；
R8选自氢和甲基；并且
R9选自C1-3烷基、C4-6支链烷基、-(CH2)1-3-O-C1-4烷基、-(CH2)-吡啶基、苄基、CD2-四氢-吡喃、四氢-吡喃、四氢-噻喃1，1-二氧化物、哌啶基、吡咯烷-2-酮、二烷、环丙基、四氢呋喃、环己基和环庚基，其中所述基团任选被一个至三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自F、OCHF2、CO-甲基、OH、甲基、甲氧基、CN、乙基和NH-CO-甲基。
特别优选的实施方案提供式I化合物，其中，R1选自哌啶基、吗啉基、吡咯烷基、氮杂环庚烷和1，4-氧氮杂环庚烷，其中所述R1基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自F、甲基、CF3、乙基、氟-乙基、三氟-乙基、-(CH2)2-甲氧基、-(CH2)-甲氧基、甲氧基、＝O、-(CH2)-O-(CH2)2-甲氧基、-O-CH-(CH3)2；
R2是Cl；
R3是氢；
R4是A6-L-R9；
R5选自氢、F和Cl；
R6选自氢、F和Cl；
R7选自氢、F和Cl；
A6是NR8；
L选自-CH2-、-CD2-；
R8选自氢和甲基；并且
R9选自吡啶基、苄基、四氢-吡喃、二
烷和四氢呋喃，其中所述基团任选被一个至三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自F、OH、甲基、乙基、甲氧基和CN。
本发明特别优选的式I化合物选自：
(R)-哌啶-3-甲酸[5-氯-4-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-2-基]-酰胺；(R)-哌啶-3-甲酸[5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基-苯基)-吡啶-2-基]-酰胺；(R)-哌啶-3-甲酸[5-氯-4-(5-氟-2-异丙氧基-苯基)-吡啶-2-基]-酰胺；(R)-哌啶-3-甲酸{5-氯-4-[3-(3-氟-苄基氧基)-苯基]-吡啶-2-基}-酰胺；(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{3-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；(S)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{3-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{3-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；(R)-3-(5-氯-4-{3-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基氨基甲酰基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯；(S)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{3-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{2-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{4-氯-3-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；吗啉-2-甲酸(5-氯-4-{3-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；和(R)-吗啉-2-甲酸(5-氯-4-{2-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺。
在另外一个实施方案中，本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐，
其中R1表示-C3-8-环烷基、-(CH2)-杂芳基或4-8元杂环烷基，其中所述环烷基和杂环烷基基团任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自-NH-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-NHC(O)-C1-4烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-C(O)-O-C3-6支链烷基、-C1-4烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-NH2、-SO2-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基和-NH-SO2-C1-4烷基；R2是-C1-4烷氧基或卤素；R3是氢或-C1-4烷氧基；R4是氢、-C1-4烷氧基、卤素或A6-L-R9；R5表示氢、-C1-4烷基或卤素；R6是氢、-C1-4烷氧基或卤素；R7是氢、C1-4烷基或卤素；A6是NR8；L是C1-3-烷基；R8是氢或C1-4烷基；并且R9是任选取代的4-8元杂环烷基、任选取代的杂芳基和任选取代的芳基，其中所述杂环烷基、杂芳基和芳基基团任选被一个至两个取代基取代，所述取代基选自卤素、C1-4-烷基或C1-4卤代烷基。
本发明优选的实施方案提供式I化合物，其中，R1表示-C5-6-环烷基或6元杂环烷基，其中所述环烷基和杂环烷基基团独立地任选被一个至两个取代基取代，所述取代基选自-C(O)-O-C1-4烷基和-C(O)-O-C3-6支链烷基；R2是卤素；R4选自卤素、-C1-4烷氧基和A6-L-R9；R7表示氢或卤素；A6是NR8；L是C1-3-烷基；R8表示氢或C1-2烷基；并且R9选自任选取代的4-8元杂环烷基、任选取代的杂芳基和任选取代的芳基，其中所述杂环烷基、杂芳基和芳基基团任选被一个至两个取代基取代，所述取代基选自卤素和C1-4-烷基。
在另外的实施方案中提供了式I化合物，其中，
R1表示环己基或哌啶基，其中所述环己基和所述哌啶基各自任选被一个至两个取代基取代，所述取代基选自-NHC(O)-C1-4烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-C1-4烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-SO2-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基和-NH-SO2-C1-4烷基；
R2是卤素；
R3是氢或-OCH3；
R4是氢或A6-L-R9；
R5是甲基、氢或卤素；
R6是-OCH3、氢或卤素；
R7是氢或卤素；
A6是NR8；
L是-CH2-；
R8是氢；并且
R9是四氢吡喃，其任选被一个至两个取代基取代，所述取代基选自卤素或C1-2-烷基。
本发明的另外一个方面提供了用式I化合物或其药学上可接受的盐治疗CDK9介导的疾病或疾患的方法。优选的方法包括使用治疗有效量的式I化合物。
本发明还提供了药物组合物，其包含：式I化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在另一个实施方案中还提供式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由CDK9介导的疾病或疾患的药物中的用途。
在另一方面，本发明提供了调节、调控或抑制蛋白激酶活性的方法，其包括使蛋白激酶与本发明化合物接触。适合的蛋白激酶包括CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8和CDK9或其任何组合。优选地，蛋白激酶选自CDK1、CDK2和CDK9或其任何组合。在又一个实施方案中，所述蛋白激酶在细胞培养物中。在再一个实施方案中，所述蛋白激酶在哺乳动物中。
在另一方面，本发明提供了治疗蛋白激酶相关的病症的方法，该方法包括向有其需要的受试者施用药学上可接受量的本发明化合物。适合的蛋白激酶包括CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8和CDK9或其任何组合(优选地，蛋白激酶选自CDK1、CDK2和CDK9，更优选地，蛋白激酶是CDK9)。适合的CDK组合包括CDK4和CDK9；CDK1、CDK2和CDK9；CDK9和CDK7；CDK9和CDK1；CDK9和CDK2；CDK4、CDK6和CDK9；CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6和CDK9。
在再一方面，本发明提供了治疗癌症的方法，该方法包括向有其需要的受试者施用药学上可接受量的本发明化合物。治疗的适合的癌症包括膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、结肠癌、肺癌、脑癌、喉癌、淋巴系统癌、造血系统癌、泌尿生殖道癌、胃肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、骨癌、小细胞肺癌、神经胶质瘤、结肠直肠癌和胰腺癌。
定义
如本文所用的术语“蛋白激酶相关的病症”包括与蛋白激酶如CDKs、例如CDK1、CDK2和/或CDK9的活性相关的病症和状态(例如疾病状态)。蛋白激酶相关的病症的非限制性实例包括异常细胞增殖(包括蛋白激酶相关的癌症)、病毒感染、真菌感染、自身免疫性疾病和神经变性病症。
术语“治疗”包括减轻或缓解与所治疗状态、病症或疾病相关或由其引起的至少一种症状。在某些实施方案中，所述治疗包括诱导蛋白激酶相关的病症，随后是本发明化合物的活化，从而其将减轻或缓解与所治疗的蛋白激酶相关的病症相关或由其引起的至少一种症状。例如，治疗可以是减轻病症的一种或数种症状或完全根除病症。
如果没有另外说明，术语“用途”分别酌情包括本发明下述实施方案中的一种或多种：治疗蛋白激酶相关的病症的用途；制备用于治疗这些疾病的药物组合物的用途，例如在制备药物中的用途；在治疗这些疾病中使用本发明化合物的方法；用于治疗这些疾病的含有本发明化合物的药物制剂；和用于治疗这些疾病的本发明化合物。特别地，待治疗的且因此对于本发明化合物的用途而言是优选的疾病选自癌症、炎症、心脏肥大和HIV感染，以及依赖于蛋白激酶活性的那些疾病。术语“用途”进一步包括本文组合物的实施方案，其与蛋白激酶充分结合以用作示踪物或标记，以致于当偶联于荧光素或标志(tag)或者被致以放射性时，可用作研究试剂或诊断剂或成像剂。
除非另外说明，术语“烷基”，本身或作为另一取代基的部分，意指完全饱和的直链(线性的；无支链的)或支链，如果指定了的话，其具有指定数目的碳原子(即C1-C10意指一个至十个碳)。示例性的“烷基”基团实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等等。如果没有指定大小，文中所提及的烷基基团包含1-10个碳原子，典型地1-8个碳原子，且优选1-6或1-4个碳原子。
术语“烷氧基”表示-O-烷基，其中术语烷基如上文所定义。
除非另外说明，术语“环烷基”(本身或与其它术语组合的)表示环状形式的烷基。此外，环烷基可包含稠合的环，但要排除稠合的芳基和杂芳基基团。除非另外指出，环烷基基团是未被取代的。环烷基的示例性实例是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、降冰片烷基等等。如果没有指定环大小，文中所述的环烷基基团一般包含3-10个环成员，优选3-6个环成员。
术语“杂环的”或“杂环烷基”或“杂环基”(本身或与其它术语组合的)表示包含至少一个环碳原子和至少一个环杂原子的环烷基，所述杂原子选自O、N、P、Si和S，优选选自N、O和S，其中环不是芳香族的但可包含不饱和度。杂环基团的氮和硫原子可任选被氧化且氮杂原子可任选被季铵化。如果没有另行说明，文中所讨论杂环基团包含3-10个环成员且至少一个环成员是选自N、O、P、Si和S的杂原子。优选地，在杂环基团中包含不超过三个所述杂原子，并且一般来讲，在杂环基团的单个环中存在不超过两个所述的杂原子。杂环基团可与另外的碳环或杂环稠合。杂环基团可在环碳或环杂原子上与分子其余部分连接。此外，杂环可包含稠合的环，但是排除含有作为稠环体系一部分的杂芳基基团的稠合体系。示例性的杂环基团的实例包括1-(1，2，5，6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基、哌啶-2-酮、氮杂环庚烷、四氢-2H-吡喃基、吡咯烷基、甲基吡咯烷酮、烷基哌啶基、卤代烷基哌啶基(peridinyl)、1-(烷基哌啶-1-基)乙酮等等。
除非另外说明，术语“芳基”表示可以是单环或稠合在一起的多环(例如，1至3环)的芳香族烃基团。芳基包含稠合的环，其中稠合的环中的一个或多个是全饱和的(例如，环烷基)或部分不饱和的(例如，环己烯基)，但不是杂环或杂芳环。示例性的芳基基团实例包括但不仅限于苯基、1-萘基、2-萘基和四氢萘基。
如本文所用，术语“杂芳基”是指包括单环或稠环的基团，其中至少一个环是含有一个至四个作为环成员的选自N、O和S的杂原子的芳环(即，其包含至少一个杂芳族环)，其中氮和硫原子可被氧化，且氮原子可被季铵化。杂芳基基团能通过环碳或环杂原子与分子的其余部分连接，并且如果杂芳基基团是双环、三环或稠环体系，则该杂芳基基团能通过其任何环连接。杂芳基基团可包含稠合的环，其中的稠合的环中的一个是芳香族的或杂芳香族的，并且其它稠合的环是部分不饱和的(例如，环己烯基、2，3-二氢呋喃、四氢吡嗪和3，4-二氢-2H-吡喃)或完全饱和的(例如环己基、环戊基、四氢呋喃、吗啉和哌嗪)。术语杂芳基还旨在包括包含芳香族和杂芳香族环体系的组合的稠环体系(例如，吲哚、喹啉、喹唑啉和苯并咪唑)。示例性的杂芳基基团实例是1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-
唑基、4-唑基、2-苯基-4-唑基、5-
唑基、3-异唑基、4-异
唑基、5-异
唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上文所提到的各芳基和杂芳基环体系的取代基选自下述的可接受的取代基。
术语“卤代”或“卤素”表示氟、氯、溴或碘原子。术语“卤代烷基”表示如上文所定义的烷基基团，其中烷基基团的一个或多个氢原子被卤素原子替换，该卤素原子可以是相同或不同的。因此术语卤代烷基包括单-卤代烷基、二-卤代烷基、三-卤代烷基、四-卤代烷基等等以及全卤代烷基。前缀“全卤代”涉及其中所有的可用化合价被卤素基团替代的各基团。例如“全卤代烷基”包括-CCl3、-CF3、-CCl2CF3等等。术语“全氟烷基”和“全氯烷基”是其中所有可用化合价分别被氟和氯基团替代的全卤代烷基的子集。全氟烷基的示例性实例包括-CF3和-CF2CF3，并且全氯烷基的示例性实例包括-CCl3和-CCl2CCl3。
如本文所用的“任选取代”意指正被描述的特定基团可以不具有非氢取代基(即，它可以是未取代的)或所述基团可以具有一个或多个非氢取代基。如果没有另外说明，可以存在的此类取代基的总数等于被描述的基团的未取代形式上存在的H原子的数目。通常，任选取代的基团含有至多4个(1-4个)取代基。当任选的取代基通过双键连接时，例如羰基氧(＝O)，该基团占据被取代的基团上的两个可用的化合价，因此，可以被包含的取代基的总数根据可用化合价的数目而减少。适当的任选的取代基基团包括卤素、C1-4烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-NHC(O)-C1-4烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、-C1-4亚烷基-O-C1-4卤代烷基、-C1-4亚烷基-O-C1-4烷基、-NH-C1-4烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-C(O)-O-C3-6支链烷基、-C1-4卤代烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-C1-4-环烷基、-C1-4亚烷基-O-C1-4烷基、-NH2、-SO2-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基和-NH-SO2-C1-4烷基、羟基、硝基、氰基、氧代、-C(O)-C1-4烷基、-C(O)-等。
除非另外说明，术语“本发明化合物”是指式I化合物、其前药，所述化合物和/或前药的药学上可接受的盐，和所述化合物、盐和/或前药的水合物或溶剂化物，以及所有立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、互变异构体和同位素标记的化合物(包括氘取代)和固有形成的部分(moieties)(例如，多晶型物、溶剂化物和/或水合物)。
如本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物学效力和性质的盐，并且其通常不是生物学或其它方面所不期望的。
术语本发明化合物的“治疗有效量”是指这样的本发明化合物的量，当施用至受试者时，其有效地(1)至少部分缓解、抑制、预防和/或改善(i)由一种或多种CDK酶介导的或(ii)与一种或多种CDK酶活性相关的或(iii)以由一种或多种CDK酶(直接或间接)调节的蛋白质(例如RNA聚合酶II)的活性为特征的疾患或病症或疾病；或(2)降低或抑制蛋白质的表达，所述蛋白质的表达直接或间接依赖于一种或多种CDK酶(例如Mcl-1、细胞周期蛋白D、Myc等)。当与细胞关联使用时，术语“治疗有效量”是指这样的本发明化合物的量，当施用至细胞或组织或非细胞生物材料或介质时，其有效地至少部分降低或抑制由一种或多种CDK酶调节的蛋白质的活性；或至少部分降低或抑制蛋白质的表达，所述蛋白质的表达直接或间接依赖于一种或多种CDK酶。
如本文所用的术语“受试者”是指动物。典型的动物是哺乳动物。受试者也意指例如灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等等。在某些实施方案中，受试者是灵长类动物。在又一实施方案中，受试者是人。
除非另外定义或者根据上下文清楚地表明，文中所用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属的技术领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。
详述
文中所公开的化合物可以由容易获得的原料采用下面的一般方法和操作来制备。应当理解，除非另外说明，当给出典型的或优选的方法条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)时，还可以使用其它方法条件。最佳的反应条件可以根据所用的具体反应物或溶剂而变化，但这些条件可由本领域技术人员通过常规实验确定。
此外，本领域技术人员众所周知的是，可能需要常规保护基团以防止某些官能团进行不希望的反应。用于各种官能团的适当的保护基团以及保护和脱保护具体保护基团的适当条件是本领域众所周知的。例如，许多保护基团描述在T.W.Greene和G.M.Wuts，有机合成中的保护基团(Protecting Groups in Organic Synthesis)，第3版，Wiley，New York，1999，和文中引用的参考文献。
下面反应的原料是众所周知的化合物或者可以通过已知的方法或其明显的变体来制备。例如，许多原料可得自供应商例如Aldrich ChemicalCo.(Milwaukee，Wisconsin，USA)、Bachem(Torrance，California，USA)、Emka-Chemce或Sigma(St.Louis，Missouri，USA)。其它的可通过标准参考书中所述的方法或其明显变体来制备，所述参考书例如Fieser和用于有机合成的Fieser试剂(Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis)，第1-15卷(John Wiley and Sons，1991)、Rodd氏的碳化合物化学(Rodd′sChemistry of Carbon Compounds)，第1-5卷和增刊(Elsevier SciencePublishers，1989)、有机反应(Organic Reactions)，1-40卷(John Wiley andSons，1991)、马奇的高等有机化学(March′s Advanced OrganicChemistry)，(John Wiley and Sons，第4版)和Larock的综合有机转化(Larock′s Comprehensive Organic Transformations)(VCH Publishers Inc.，1989)。
所述实施方案的各种原料、中间体和化合物，在适当时，可以通过常规技术例如沉淀、过滤、结晶、蒸发、蒸馏和色谱法分离和纯化。这些化合物的鉴定可以采用常规方法例如通过熔点、质谱、核磁共振和各种其它光谱分析法来进行。
文中公开内容的描述应当按照符合化学键合的规则和原理的方式进行解释。例如，为了在任何给定位置容纳取代基，可能必须除去氢原子。此外，应当理解，本发明的通式(例如式I或II)的变量(即“R基团”)的定义以及键位置将符合本领域已知的化学键合规则。还应当理解，根据满足各原子的化合价的需要，上面所述的所有本发明化合物将还包含相邻原子间的键和/或氢。也就是说，添加键和/或氢原子来为下面类型的各原子提供下面的总键数：碳：四键；氮：三键；氧：两键；和硫：2-6键。
实施方案的化合物一般可使用许多本领域技术人员熟悉的方法来制备。
本发明化合物可以以其本身或作为它们的药学上可接受的盐分离得到或使用。在许多情况中，由于存在氨基和/或羧基基团或与其类似的基团，本发明化合物能够形成酸和/或碱盐。
可以与无机酸和有机酸形成的药学上可接受的酸加成盐例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐(camphorsulfornate)、氯化物/盐酸盐、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。
可以由其衍生得到盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以由其衍生得到盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、羟乙酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。可以与无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。
可以由其衍生得到盐的无机碱包括例如铵盐和来自周期表第I到XII族的金属。在某些实施方案中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适当的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。
可以由其衍生得到盐的有机碱包括例如伯、仲和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星(benzathine)、胆碱盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨基丁三醇。
本发明的药学上可接受的盐可以由母体化合物、碱性或酸性部分(moiety)通过常规化学方法合成。通常，此类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计算量的适当的碱(例如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应或使这些化合物的游离碱形式与化学计算量的适当的酸反应来制备。典型地，此类反应在水或有机溶剂中或在两者的混合物中进行。一般来讲，当可用时，应用非水介质例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是合乎需要的。其它适当的盐的列表可见于例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，第20版，Mack PublishingCompany，Easton，Pa.，(1985)；和“Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use”，Stahl和Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，德国，2002)。
本发明化合物还包括化合物的同位素标记形式，其可以采用文中所述的方法或本领域技术人员已知的其变通方法来合成。除了一个或多个原子被具有选择的原子质量或原子数的原子替换外，同位素标记的化合物具有文中所给出的式描述的结构。可以掺入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、125I。本发明包括各种同位素标记的文中所定义的化合物，例如放射性同位素例如3H、13C和14C存在于其中的那些。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、检测或成像技术例如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射计算机体层摄影(SPECT)包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射治疗。具体来讲，18F或标记的化合物可能特别适于PET或SPECT研究。同位素标记的本发明化合物和其前药通常可以如下制备：通过用容易获得的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来进行流程或下面所述的实施例和制备中所公开的方法。
此外，用较重同位素特别是氘(即，2H或D)取代可提供由更高的代谢稳定性产生的某些治疗优点，例如体内半衰期增加或剂量需求降低或治疗指数改善。应当理解，在本文中将氘认为是式(I)化合物的取代基。所述较重同位素特别是氘的浓度可以用同位素富集因子来确定。本文所用的术语“同位素富集因子”意指指定的同位素的同位素丰度和天然丰度的比例。如果本发明化合物中的取代基指明为氘，对于每一指定的氘原子，所述化合物具有至少3500(在每一指定的氘原子处52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)的同位素富集因子。
同位素标记的式(I)化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术来制备或通过与下面的实施例和制备中描述的方法类似的方法采用适当的同位素标记的试剂代替之前应用的非标记的试剂来制备。
除非另外特别指出，本发明化合物包括异构体，所述异构体包括文中的式中涉及的化合物的所有立体异构体，包括对映异构体、非对映异构体、以及构象异构体、旋转异构体和互变异构体。本发明包括公开的任何手性化合物的所有对映异构体，其以基本上纯的左旋或右旋形式或外消旋混合物或任何比例的对映异构体存在。
此外，文中所公开的化合物可以包含一个或多个手性中心。因此，如果需要的话，所述化合物可作为纯的立体异构体即单独的对映异构体或非对映异构体或作为立体异构体富集的混合物来制备或分离得到。除非另外指明，所述此类立体异构体(和富集的混合物)包括在实施方案的范围内。可以采用例如光学活性原料或本领域众所周知的立体选择性试剂来制备纯的立体异构体(或富集的混合物)。或者，可以采用例如手性柱色谱法、手性拆分剂等分离所述化合物的外消旋混合物。
除非在化学结构或化学名称中清楚地指明立体化学，化学结构或化学名称旨在包括所描述化合物的所有可能的立体异构体、构象异构体、旋转异构体和互变异构体。例如，包含一个手性碳原子的化合物意欲包括(R)对映异构体和(S)对映异构体两者，以及对映异构体的混合物包括外消旋混合物；并且包含两个手性碳原子的化合物意欲包括所有对映异构体和非对映异构体(包括(R，R)、(S，S)、(R，S)和(R，S)异构体)。
本发明化合物可以固有地或经设计与药学上可接受的溶剂(包括水)形成溶剂化物；因此，本发明意欲包括溶剂化形式和非溶剂化形式。术语“溶剂化物”意指本发明化合物(包括其药学上可接受的盐)与一种或多种溶剂分子形成的分子复合物。此类溶剂分子是在制药领域通常使用的那些，已知其对于接受者是无害的，例如水、乙醇等等。术语“水合物”意指其中溶剂分子是水的所述复合物。如文中所定义，本发明化合物的溶剂化物和水合物被认为是组合物，其中，该组合物包含本发明化合物和溶剂(包括水)。
本发明化合物可以以无定形或多晶型形式存在；因此，认为所有物理形式在本发明的范围内。
本发明的化合物(即包含能够充当氢键供体和/或受体的基团的本发明化合物)可能能够与适当的共晶形成物(former)形成共晶。这些共晶可以由式(I)化合物通过已知的共晶形成操作来制备。此类操作包括研磨、加热、共升华、共熔或在结晶条件下使式(I)化合物与共晶形成物在溶液中接触且分离如此形成的共晶。适当的共晶形成物包括如WO 2004/078163中所述的那些。因此本发明还提供包含式(I)化合物的共晶。
在本发明化合物的某些应用中，使用化合物的前药可能是有优势的。一般而言，前药在体内转化为本发明化合物。前药是活性或无活性的化合物，在施用前药给受试者后其通过体内生理作用例如水解、代谢等化学修饰转化成本发明化合物。与制备和使用前药相关的适应性和技术是本领域技术人员众所周知的。前药可概念性地分为两种非排他的类型：生物前体前药和载体前药。参见The Practice of Medicinal Chemistry，Ch.31-32(Ed.Wermuth，Academic Press，San Diego，Calif.，2001)。一般而言，生物前体前药与相应的活性药物化合物相比是无活性的或具有低活性的化合物，其包含一个或多个保护基团并且通过代谢或溶剂分解转化为活性形式。活性药物形式和任何释放的代谢产物都应当具有可接受的低毒性。
载体前药是包含例如改善摄取和/或使递送局限于作用位置的转运部分的药物化合物。对于此类载体前药希望的是，药物部分和转运部分间的连接是共价键，所述前药是无活性或比药物化合物活性小，并且任何释放的转运部分是可接受地无毒性的。对于前药，当转运部分旨在提高摄取时，转运部分的释放通常应当是快速的。在其它情况下，期望使用提供慢释放的部分，例如某些聚合物或其它部分(例如环糊精类)。载体前药例如能用于改善一种或多种下述性质：增加亲脂性、增加药理学效应的持续时间、增加位点特异性、减小毒性和副作用和/或改良药物制剂(例如稳定性、水溶性、抑制不希望的器官感觉性质或生理化学特性)。例如，能通过(a)羟基基团与亲脂的羧酸(例如，具有至少一个亲脂部分的羧酸)的酯化或(b)羧酸基团与亲脂的醇(例如，具有至少一个亲脂部分的醇，如脂肪族醇)的酯化来增加亲脂性。
示例性前药例如是游离羧酸的酯和硫醇的S-酰基衍生物和醇或酚的O-酰基衍生物，其中酰基具有文中所定义的含义。适当的前药通常是在生理条件下可通过溶剂解转化为母体羧酸的药学上可接受的酯衍生物，例如本领域常规使用的低级烷基酯、环烷基酯、低级烯基酯、苄基酯、单-或二-取代的低级烷基酯，例如ω-(氨基、单-或二-低级烷基氨基、羧基、低级烷氧基羰基)-低级烷基酯、α-(低级烷酰基氧基、低级烷氧基羰基或二-低级烷基氨基羰基)-低级烷基酯例如新戊酰基氧基甲基酯等。此外，胺已经被掩蔽为芳基羰基氧基甲基取代的衍生物，其在体内被酯酶裂解释放游离的药物和甲醛(Bundgaard，J.Med.Chem.2503(1989))。此外，已经将含有酸性NH基团例如咪唑、酰亚胺、吲哚等的药物用N-酰基氧基甲基基团掩蔽(Bundgaard，Design of Prodrugs，Elsevier(1985))。羟基基团已经被掩蔽为酯和醚。EP 039,051(Sloan和Little)公开了曼尼希碱异羟肟酸前药、它们的制备和用途。
典型地，本发明化合物作为药物组合物施用。典型的药物组合物包含本发明化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。如本文所用的术语“药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣材料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等和其组合，这是本领域技术人员所熟知的(例如参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，18thEd.Mack Printing Company，1990，pp.1289-1329)。除了与活性成分不相容的载体外，在治疗或药物组合物中考虑使用任何常规载体。
药物组合物可配制用于特定施用途径例如口服施用和胃肠外施用等等。此外，本发明的药物组合物可以以固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、散剂或栓剂)或液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬剂或乳剂)存在。药物组合物可进行常规制药操作例如灭菌和/或可包含常规惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及辅助剂例如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂和缓冲剂等。
典型地，药物组合物是片剂或明胶胶囊，其包含活性成分和
a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸的镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还有
c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要的话
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或海藻酸钠盐、或泡腾合剂；和/或
e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。
用于口服施用的适当的组合物包含在片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散的散剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂或糖浆剂或酏剂形式中的有效量的本发明化合物。意欲用于口服使用的组合物根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法来制备，并且此类组合物可以包含一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的物质，以提供药学上雅致和可口的制剂。片剂可以含有活性成分以及无毒性的药学上可接受的适于制备片剂的赋形剂。这些赋形剂例如是惰性稀释剂例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂未被包衣或用已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，并因此提供更长时间的持续作用。例如，可以使用延时材料例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂可以作为硬明胶胶囊存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或作为软明胶胶囊存在，其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
某些可注射组合物是等渗水溶液剂或混悬剂，并且栓剂有利地由脂肪性乳液或混悬液制备。所述组合物可以被灭菌和/或含有辅助剂例如防腐剂、稳定剂、湿润剂或乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，它们还可以含有其它有治疗价值的物质。所述组合物根据常规混合、制粒或包衣方法分别制备，并含有约0.1-75％或约1-50％的活性成分。
本发明还提供可以包含一种或多种降低作为活性成分的本发明化合物分解速率的物质的药物组合物和剂型。此类文中称为“稳定剂”的物质包括但不限于抗氧化剂例如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。
游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物具有有价值的药理性质，例如CDK抑制性质，例如下面提供的体外和体内实验中所示，因此推荐用于治疗。
当与文中所述的治疗/预防方法以及化合物和其制剂的用途一起使用时，“有其需要的”个体可以是已经被诊断患有待治疗的疾患或之前已经就待治疗的疾患进行治疗的个体。就预防而言，有其需要的个体还可以是处于疾患风险(例如，疾患的家族史、指示疾患风险的生活方式因素等)的个体。典型地，当文中公开了施用本发明化合物的步骤时，本发明还考虑鉴定需要待被施用的特定治疗或患有待治疗的特定疾患的个体或受试者的步骤。
实施例
参考下面的实施例，采用文中描述的方法或本领域技术人员已知的其它方法合成实施方案的化合物。化合物和/或中间体用采用带有2695分离模块的Waters Millenium色谱系统(Milford，MA)的高效液相色谱法(HPLC)鉴定。分析柱是来自Alltech(Deerfield，IL)的反相PhenomenexLuna C185μ，4.6x50mm。使用梯度洗脱(流速2.5mL/min)，典型地以5％乙腈/95％水开始，在10分钟期间渐变至100％乙腈。所有溶剂含有0.1％三氟乙酸(TFA)。通过220或254nm紫外线(UV)吸收检测化合物。HPLC溶剂来自Burdick and Jackson(Muskegan，MI)或FisherScientific(Pittsburgh，PA)。
在一些情况中，用采用玻璃或塑料硅胶板例如Baker-Flex Silica Gel1B2-F软板的薄层色谱法(TLC)来评价纯度。在紫外线下通过视觉、或应用众所周知的碘蒸发和其它各种染色技术容易地检测TLC结果。
质谱分析在LCMS仪器上进行：Waters系统(Acuity UPLC和Micromass ZQ质谱仪；柱：Acuity HSS C181.8-微米，2.1x50mm；梯度：5-95％乙腈的水(含0.05％TFA)溶液，历经1.8min；流速1.2mL/min；分子量范围200-1500；锥电压20V；柱温50℃)。所有质量以质子化的母体离子的质量来报告。
比旋度
在带有100-mm径长的圆柱玻璃池的Autopol IV AutomaticPolarimeter(Rudolph Research AnalyticaD上在20℃温度下测量比旋度。所用的光波长为589纳米(钠D线)。填充有溶剂的相同池的旋光度作为空白扣除。最终结果是两次测量的平均值，每次测量历经10秒。采用MeOH作为溶剂制备10mg/mL样品溶液。
GCMS分析在Hewlett Packard仪器(带有质量选择检测器5973的HP6890 Series气相色谱仪；进样体积：1
L；初始柱温：50℃；终柱温：250℃；斜坡时间：20分钟；气体流速：1mL/min；柱：5％苯基甲基硅氧烷，模式No.HP 190915-443，尺寸：30.0mx25mx0.25m)上进行。
用Varian 300MHz NMR(Palo Alto，CA)或Varian 400MHz MRNMR(Palo Alto，CA)对一些化合物进行核磁共振(NMR)分析。波谱参照是TMS或者溶剂的已知化学位移。一些化合物样品在升高的温度下(例如，75℃)测定，以促进样品溶解度增加。在Laboratory Devices Mel-Temp仪器(Holliston，MA)上测定熔点。
制备性分离采用带有RediSep硅胶柱(Teledyne Isco，Lincoln，NE)或SiliaSep硅胶柱(Silicycle Inc.，Quebec City，加拿大)的Combiflash Rf系统(Teledyne Isco，Lincoln，NE)或采用硅胶(230-400目)填料的快速柱色谱法或采用Waters 2767 Sample Manager、C-18反相柱(30X50mm)、流速75mL/min的HPLC来进行。用于Combiflash Rf系统和快速柱色谱法的典型溶剂是二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、己烷、庚烷、丙酮、氨水(或氢氧化铵)和三乙胺。用于反相HPLC的典型溶剂是不同浓度的乙腈和水(含0.1％三氟乙酸)。
下面的缩写具有下述含义。如果没有特别定义的话，缩写具有它们被广泛接受的含义。
缩写
ACN：乙腈
BINAP：2，2′-双(二苯基膦基)-1，1′-联萘
BOC-酐：二碳酸二-叔丁酯
bp：沸点
d：天
DAST：三氟化二乙基氨基硫
DBU：1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCM：二氯甲烷
DIEA：二异丙基乙胺
DIPEA：N，N-二异丙基乙胺
DMAP：4-二甲基氨基吡啶
DME：1，2-二甲氧基乙烷
DMF：N，N-二甲基甲酰胺
DMSO：二甲基亚砜
dppf：1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁
eq：当量
EtOAc：乙酸乙酯
EtOH：乙醇
GCMS：气相色谱-质谱法
HATU：2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐
HPLC或hplc：高效液相色谱法
hr：小时
hrs：小时
KO-tBu：叔丁醇钾
LHMDS：双(三甲基硅基)氨基锂
MCPBA：间氯过氧苯甲酸
MeOH：甲醇
n.a.：不可获得
NaH：氢化钠
NBS：N-溴代琥珀酰亚胺
NEt3：三乙胺
NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮
Rt：保留时间
THF：四氢呋喃
TLC：薄层色谱法
本发明化合物可通过本领域技术人员已知的方法和如下所列的一般流程来合成。
流程1
如流程1所示，合成可以由官能化的吡啶I开始，其中LG是离去基团例如F、Cl、OTf等。X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二
烷中、在30-120℃加热；和
2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和苯基III间进行Suzuki交叉偶联反应得到联-杂芳基中间体IV。在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中、加热(30-130℃)条件下在IV和氢氧化铵之间进行SNAR反应，能够得到化合物V。使新得到的氨基吡啶V与载有离去基团的酰基中间体在碱例如Et3N、iPr2NEt或吡啶存在下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中偶联，能够得到化合物VI。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VII。当R1’与R1相同时，化合物VII将与化合物VI相同。
流程2
另一种备选的路线如流程2所示。合成可以由官能化的苯基I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二
烷中、在30-120℃加热；和
2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的吡啶III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中、加热(30-130℃)条件下在IV和氢氧化铵之间进行SNAR反应，能够得到化合物V。使新得到的氨基吡啶V与载有离去基团的酰基中间体在碱例如Et3N、iPr2NEt或吡啶存在下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中偶联，能够得到化合物VI。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VII。当R1’与R1相同时，化合物VII将与化合物VI相同。
流程3
另一种备选的路线如流程3所示。合成可以由官能化的苯基I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二烷中、在30-120℃加热；和2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的吡啶III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。除去保护基团PG能够得到化合物V。使新得到的氨基吡啶V与载有离去基团的酰基中间体在碱例如Et3N、iPr2NEt或吡啶存在下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中偶联，能够得到化合物VI。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VII。当R1’与R1相同时，化合物VII将与化合物VI相同。
流程4
另一种备选的路线如流程4所示。合成可以由官能化的苯基I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二
烷中、在30-120℃加热；和2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的吡啶III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。除去保护基团PG能够得到化合物V。在碱性条件(DIEA、TEA、二甲基吡啶、吡啶)下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中、加热(30-180℃)条件下，或在Pd(OAc)2和P-配体(例如，BINAP)存在下在二
烷中、加热(80-110℃)条件下，在V和官能化的胺NH2R1’之间进行SNAR反应或金属催化的胺化，能够得到化合物VI。使新得到的氨基吡啶VI与载有离去基团的酰基中间体在碱例如Et3N、iPr2NEt或吡啶存在下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二烷中偶联，能够得到化合物VII。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VIII。当R1’与R1相同时，化合物VIII将与化合物VII相同。
流程5
另一种备选的路线如流程5所示。合成可以由官能化的吡啶I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二
烷中、在30-120℃加热；和2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的苯基III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。在碱性条件(DIEA、TEA、二甲基吡啶、吡啶)下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中、加热(30-180℃)条件下，或在Pd(OAc)2和P-配体(例如，BINAP)存在下在二烷中、加热(80-110℃)条件下，在V和官能化的胺NH2R1’之间进行SNAR反应或金属催化的胺化，能够得到化合物VI。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VI。当R1’与R1相同时，化合物VI将与化合物V相同。
流程6
另一种备选的路线如流程6所示。合成可以由官能化的苯基I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二
烷中、在30-120℃加热；和2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的吡啶III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。在碱性条件(DIEA、TEA、二甲基吡啶、吡啶)下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中、加热(30-180℃)条件下，或在Pd(OAc)2和P-配体(例如，BINAP)存在下在二
烷中、加热(80-110℃)条件下，在V和官能化的胺NH2R1’之间进行SNAR反应或金属催化的胺化，能够得到化合物VI。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VI。当R1’与R1相同时，化合物VI将与化合物V相同。
流程7
另一种备选的路线如流程7所示。合成可以由官能化的苯基I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二
烷中、在30-120℃加热；和2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的吡啶III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VI。当R1’与R1相同时，化合物VI将与化合物V相同。
流程8
另一种备选的路线如流程8所示。合成可以由官能化的吡啶I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二烷中、在30-120℃加热；和2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的苯基III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VI。当R1’与R1相同时，化合物VI将与化合物V相同。
流程9
另一种备选的路线如流程9所示。合成可以由官能化的吡啶I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二
烷中、在30-120℃加热；和2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的苯基III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。除去保护基团PG能够得到化合物V。使新得到的氨基吡啶V与载有离去基团的酰基中间体在碱例如Et3N、iPr2NEt或吡啶存在下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中偶联，能够得到化合物VI。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VII。当R1’与R1相同时，化合物VII将与化合物VI相同。
流程10
另一种备选的路线如流程10所示。合成可以由官能化的吡啶I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二
烷中、在30-120℃加热；和2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的苯基III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。除去保护基团PG能够得到化合物V。在碱性条件(DIEA、TEA、二甲基吡啶、吡啶)下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中、加热(30-180℃)条件下，或在Pd(OAc)2和P-配体(例如，BINAP)存在下在二烷中、加热(80-110℃)条件下，在V和官能化的胺NH2R1’之间进行SNAR反应或金属催化的胺化反应，能够得到化合物VI。使新得到的氨基吡啶VI与载有离去基团的酰基中间体在碱例如Et3N、iPr2NEt或吡啶存在下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中偶联，能够得到化合物VII。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VIII。当R1’与R1相同时，化合物VIII将与化合物VII相同。
流程11
另一种备选的路线如流程11所示。合成可以由官能化的吡啶I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二烷中、在30-120℃加热；和2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的苯基III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二烷中、加热(30-130℃)条件下在IV和氢氧化铵之间进行SNAR反应，能够得到化合物V。在碱性条件(DIEA、TEA、二甲基吡啶、吡啶)下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二烷中、加热(30-180℃)条件下，或在Pd(OAc)2和P-配体(例如，BINAP)存在下在二
烷中、加热(80-110℃)条件下，在V和官能化的胺NH2R1’之间进行SNAR反应或金属催化的胺化，能够得到化合物VI。使新得到的氨基吡啶VI与载有离去基团的酰基中间体在碱例如Et3N、iPr2NEt或吡啶存在下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二烷中偶联，能够得到化合物VII。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VIII。当R1’与R1相同时，化合物VIII将与化合物VII相同。
流程12
另一种备选的路线如流程12所示。合成可以由官能化的苯基I(其中X可以是官能基团如Cl、Br、I或OTf)开始。化合物I可以如下转化成硼酸或硼酸酯II：
1)与PdCl2(dppf)DCM加合物、乙酸钾、双(频哪醇合)二硼在溶剂例如THF、DMF、DME、DMA、甲苯和二
烷中、在30-120℃加热；和2)在溶剂例如THF或乙醚中，通过加入nBuLi或LDA进行负离子卤素交换，然后用硼酸三异丙酯淬灭负离子。经水解可以得到硼酸。然后在化合物II和官能化的吡啶III间进行Suzuki交叉偶联反应，得到联-杂芳基中间体IV。在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中、加热(30-130℃)条件下在IV和氢氧化铵之间进行SNAR反应，能够得到化合物V。在碱性条件(DIEA、TEA、二甲基吡啶、吡啶)下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中、加热(30-180℃)条件下，或在Pd(OAc)2和P-配体(例如，BINAP)存在下在二
烷中、加热(80-110℃)条件下，在V和官能化的胺NH2R1’之间进行SNAR反应或金属催化的胺化，能够得到化合物VI。使新得到的氨基吡啶VI与载有离去基团的酰基中间体在碱例如Et3N、iPr2NEt或吡啶存在下在溶剂例如DMF、THF、DMSO、NMP、二
烷中偶联，能够得到化合物VII。当R1’与R1不同时，需要进一步的官能化操作以获得VIII。当R1’与R1相同时，化合物VIII将与化合物VII相同。
中间体的合成
5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶-2-胺的合成
步骤1：5-氯-2-氟-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶的制备
将5-氯-2-氟-4-碘吡啶(325mg，1.262mmol)、5-氟-2-甲氧基苯基硼酸(300mg，1.767mmol)的DME(4.5mL)溶液和2M碳酸钠水溶液(1.89mL，3.79mmol)的混合物在封闭管中约85℃下加热约2hrs。然后将混合物冷却至室温，用EtOAc(～25mL)稀释，用水(2x)、盐水(1x)洗涤，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，12g，EtOAc/庚烷＝0/100至15/85]，得到5-氯-2-氟-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶(330mg)，为白色固体。LCMS(m/z)：255.9[M+H]+；Rt＝1.05min.
步骤2：5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶-2-胺的制备
在氩气下，将5-氯-2-氟-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶(155mg，0.606mmol)和氢氧化铵水溶液(30-35wt.％，1.5mL)的DMSO(1.8mL)混合物在微波反应器中约125℃下加热210min。将混合物用EtOAc和盐水稀释。将分离的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩得到粗5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶-2-胺(155mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：252.9/254.8[M+H]+；Rt＝0.60min.
[5-(2-氨基-5-氯-吡啶-4-基)-2-氯-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸
叔丁酯的合成
步骤1：2-氯-5-(5-氯-2-氟吡啶-4-基)-苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
向5-氯-2-氟-4-碘吡啶(210mg，0.816mmol)、3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氯苯基硼酸(310mg，1.142mmol)和PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(66.6mg，0.082mmol)的DME(3.6mL)混合物中加入2M碳酸钠水溶液(1.2mL)。将得到的混合物在封闭管中在氩气100℃下加热2hrs。将混合物冷却至室温，用EtOAc(10mL)和MeOH(5mL)稀释，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，12g，EtOAc/庚烷＝0/100至15/85]。合并流分并在减压下浓缩，得到2-氯-5-(5-氯-2-氟吡啶-4-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(243mg)，为白色固体。LCMS(m/z)：357.0/358.9[M+H]+；Rt＝1.23min.
步骤2：[2-氯-5-(5-氯-2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯的制备
在0℃下，将氢化钠(60wt.％在矿物油中，15.74mg)的DMF(0.7mL)混合物加入到2-氯-5-(5-氯-2-氟吡啶-4-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(213mg，0.596mmol)的DMF(0.70mL)溶液中。将得到的混合物在0℃下搅拌30min。然后向该搅拌的混合物中一次性加入4-甲基苯磺酸(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基酯(161mg，0.596mmol)。将混合物升温至40℃并保持在室温下16hrs。将反应混合物用EtOAc稀释，用1N氢氧化钠水溶液、水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过制备TLC纯化[硅胶，1mm；EtOAc/庚烷＝15/85]，得到[2-氯-5-(5-氯-2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(176mg)，为无色油状物。LCMS(m/z)：355.0/356.9[M+H，失去t-Bu]；Rt＝1.21min.
步骤3：[5-(2-氨基-5-氯-吡啶-4-基)-2-氯-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯的制备
在氩气气氛下，将[2-氯-5-(5-氯-2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(120mg，0.264mmol)和氢氧化铵水溶液(30-35wt.％，1.5mL)的DMSO(1.5mL)混合物在微波反应器中120℃下加热200min。将反应混合物用EtOAc和盐水稀释。将分离的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过制备TLC纯化[硅胶，1mm，EtOAc/庚烷＝3/1]，得到[5-(2-氨基-5-氯-吡啶-4-基)-2-氯-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(100mg)，部分被5-氯-4-(4-氯-3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-胺污染。LCMS(m/z)：452.1[M+H]+；Rt＝0.84min.
5-氯-4-(3-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-4-基)-甲基)氨基)苯基)-吡啶-2-胺的合
成
步骤1：3-溴-5-氟-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)苯胺的制备
将Pd(OAc)2(88mg，0.394mmol)和BINAP(294mg，0.473mmol)的二烷(8mL)混合物在封闭管中搅拌～5min。然后向混合物中加入1，3-二溴-5-氟苯(0.496mL，3.94mmol)和(四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺盐酸盐(299mg，1.969mmol)，再持续搅拌～5min，加入KOtBu(486mg，4.33mmol)。将得到的混合物在93℃下加热～18hrs。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc(～50mL)和MeOH(～10mL)稀释，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，40g，EtOAc/庚烷＝5/95至30/70]，得到3-溴-5-氟-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)苯胺(220mg)，为无色液体。LCMS(m/z)：289.9[M+H]+；Rt＝1.03min.
步骤2：3-(5-氯-2-氟吡啶-4-基)-5-氟-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)苯胺的制备
将3-溴-5-氟-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)苯胺(220mg，0.763mmol)、5-氯-2-氟吡啶-4-基硼酸(268mg，1.527mmol)和PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(62.3mg，0.076mmol)的DME(3.6mL)溶液和2M碳酸钠水溶液(1.2mL)的混合物在封闭管中103℃下加热约2hrs。将混合物冷却至室温，用EtOAc(～25mL)和MeOH(～5mL)稀释，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，12g，EtOAc/庚烷＝10/90至50/50]，得到3-(5-氯-2-氟吡啶-4-基)-5-氟-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)苯胺(200mg)，为无色液体。LCMS(m/z)：339.0[M+H]+；Rt＝1.05min.
步骤3：5-氯-4-(3-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-4-基)-甲基)氨基)苯基)吡啶-2-胺的制备
在氩气气氛下，将3-(5-氯-2-氟吡啶-4-基)-5-氟-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)苯胺(200mg，0.590mmol)、氢氧化铵水溶液(30-35wt.％，1.5mL)的DMSO(1.8mL)混合物在微波反应器中125℃下加热210min。将混合物用EtOAc和盐水稀释，分离有机层，用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗5-氯-4-(3-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-胺(95mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：335.9/337.7[M+H]+；Rt＝0.67min.
5-氯-4-{2-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基胺的合成
步骤1：(3-溴-4-氟-苯基)-氨基甲酸叔丁酯的制备
向3-溴-4-氟苯胺(1.0g，5.26mmol)的DMF(10mL)溶液中加入氢化钠(60wt.％，210mg)。将混悬液在环境温度下搅拌5min并加入BOC-酐(1.15g，5.26mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌48hrs并用EtOAc稀释。将有机相用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，12g，EtOAc/庚烷＝0/100至40/60]，得到(3-溴-4-氟-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(800mg)，为淡黄色固体。LCMS(m/z)：275/277[M+H，失去t-Bu]；Rt＝1.08min.
步骤2：(3-溴-4-氟-苯基)-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯的制备
在氩气气氛下，向(3-溴-4-氟-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(300mg，1.03mmol)和甲苯-4-磺酸四氢-吡喃-4-基甲基酯(335mg，1.24mmol)的DMF(4mL)溶液中加入氢化钠(60wt.％，83mg)。将混合物在环境温度下搅拌30min并在45℃下搅拌15hrs。将反应混合物冷却至室温并用EtOAc稀释。将有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗(3-溴-4-氟-苯基)-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(320mg)，为黄色油状物，其没有纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：288/290[M+H，失去t-Bu]；Rt＝1.11min.
步骤3：5-氯-4-{2-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基胺的制备
向(3-溴-4-氟-苯基)-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(320mg，0.82mmol)和5-氯-2-氟-吡啶-4-硼酸(400mg，2.2mmol)的DMF(3mL)溶液中，加入2M碳酸钠水溶液(0.8mL，1.6mmol)，然后加入PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(107mg，0.13mmol)。将反应混合物在95℃下加热20hrs。将反应混合物冷却至室温并用EtOAc稀释。将混合物用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，12g，EtOAc/庚烷＝10/90至30/70]，得到5-氯-4-{2-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基胺(190mg)。LCMS(m/z)：339/341[M+H]+；Rt＝1.13min.
[3-(2-氨基-5-氯-吡啶-4-基)-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁
酯的合成
步骤1：3-(5-氯-2-氟吡啶-4-基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
向5-氯-2-氟-4-碘吡啶(1750mg，6.80mmol)中，加入3-(叔丁氧基羰基氨基)苯基硼酸(3223mg，13.60mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(444mg，0.544mmol)、DME(28mL)，最后加入2M碳酸钠水溶液(13.6mL)。将反应混合物在100℃下搅拌2hrs。将粗混合物冷却至室温，并用EtOAc(50mL)和甲醇(10mL)稀释，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，120g，EtOAc/庚烷＝0/100至40/60]，得到3-(5-氯-2-氟吡啶-4-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(1.82g)。LCMS(m/z)：323.0[M+H]+；Rt＝1.10min.
步骤2：[3-(5-氯-2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯的制备
在0℃下，向3-(5-氯-2-氟吡啶-4-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(270mg，0.837mmol)的DMF(3mL)溶液中，缓慢加入氢化钠(60wt.％在矿物油中，40.1mg)。除去冰浴，并将粗混合物在室温下搅拌20min。向粗混合物中加入4-甲基苯磺酸(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基酯(271mg，1.004mmol)，并在40℃持续搅拌40hrs。将反应混合物冷却至室温并用EtOAc(150mL)稀释。将混合物用饱和的碳酸氢钠水溶液(2x)、水(2x)和盐水(1x)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，24g，EtOAc/庚烷＝0/100至30/70]，得到[3-(5-氯-2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(205mg)。LCMS(m/z)：421.2[M+H]+；Rt＝1.19min.
步骤3：[3-(2-氨基-5-氯-吡啶-4-基)-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯的制备
向[3-(5-氯-2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(195mg，0.463mmol)的DMSO(5mL)溶液中，小心地加入氢氧化铵水溶液(30-35wt.％，6mL)。将混合物在钢瓶中在110℃加热20hrs。将反应混合物冷却至室温并用EtOAc(200mL)稀释。将混合物用水(3x)和盐水(1x)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。没有进一步纯化将粗[3-(2-氨基-5-氯-吡啶-4-基)-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(130mg)直接使用。LCMS(m/z)：418.2[M+H]+；Rt＝0.77min.
(R)-3-(5-氯-4-碘吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
步骤1：5-氯-4-碘吡啶-2-胺的制备
将5-氯-2-氟-4-碘吡啶(4.120g，16.00mmol)和氢氧化铵水溶液(32wt.％，70mL)的DMSO(70mL)混合物在封闭的钢瓶中、90℃下加热18hrs。将混合物冷却至室温并用EtOAc(450mL)稀释。将混合物用水(3x)和盐水(1x)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗5-氯-4-碘吡啶-2-胺(3.97g)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：254.9[M+H]+；Rt＝0.43min.
步骤2：(R)-3-(5-氯-4-碘吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
在0℃下，向(R)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(1.081g，4.72mmol)的二氯甲烷(6mL)溶液中加入1-氯-N，N，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(0.735g，5.50mmol)。将混合物在室温下搅拌30min，并加至5-氯-4-碘吡啶-2-胺(1.00g，3.93mmol)和吡啶(0.445mL，5.50mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2hrs。将混合物用EtOAc(350mL)稀释并用饱和的碳酸氢钠水溶液(1x)、水(2x)、盐水(1x)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，40g，EtOAc/庚烷＝0/100至75/25]，得到(R)-3-(5-氯-4-碘吡啶-2-基氨基甲酰基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.80g)。LCMS(m/z)：466.0[M+H]+；Rt＝1.06min.
2，5-二氟吡啶-4-基硼酸的合成
在氩气气氛、-20℃下，向二异丙基胺(1.74mL，12.20mmol)的无水四氢呋喃(22mL)溶液中历经10min缓慢加入正丁基锂(7.66mL，1.6M在己烷中)。然后将新生成的LDA冷却至-78℃。将2，5-二氟吡啶(1.05mL，11.5mmol)的无水四氢呋喃(3mL)溶液历经30min缓慢加入，并将混合物在-78℃下搅拌4hrs。滴加硼酸三异丙酯(5.90mL，25.4mmol)的无水四氢呋喃(8.6mL)溶液。一旦加入完成，将反应混合物升温至室温并继续再搅拌1小时。将反应混合物用氢氧化钠水溶液(4wt.％，34mL)稀释。将分离的水层冷却至0℃，然后缓慢地用6N盐酸水溶液(～10mL)酸化至pH＝4。将混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物用乙醚研磨，得到2，5-二氟吡啶-4-基硼酸(808mg)。
(S)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙胺的合成
步骤1：(R，E)-2-甲基-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺的制备
将四氢-2H-吡喃-4-甲醛(2.0g，17.52mmol)、(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.062g，8.76mmol)、吡啶4-甲基苯磺酸盐(0.110g，0.438mmol)和硫酸镁(5.27g，43.8mmol)的二氯乙烷(13mL)混合物在室温下搅拌18hrs。过滤固体并将滤液在减压下浓缩至干。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶]，得到(R，E)-2-甲基-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(1.9g)。LCMS(m/z)：218.1[M+H]+；Rt＝0.58min.
步骤2：(R)-2-甲基-N-((S)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺的制备
在0℃下，向(R，E)-2-甲基-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(0.93g，4.28mmol)的二氯甲烷(21.4mL)的溶液中缓慢加入甲基溴化镁(2.0M的四氢呋喃溶液，4.28mL，8.56mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌3hrs。将混合物用饱和的氯化铵水溶液(5mL)稀释。将分离的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并在减压下浓缩至干。将残留物通过柱色谱纯化，得到(R)-2-甲基-N-((S)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(910mg)。LCMS(m/z)：234.0[M+H]+；Rt＝0.58min.
步骤3：(S)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙胺的制备
向(R)-2-甲基-N-((S)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(400mg，1.714mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入4M氯化氢的二
烷溶液(5mL)。将反应混合物在室温下搅拌30min。将混合物在减压下浓缩并将残留物用乙醚(10mL)稀释。通过过滤收集沉淀物并用乙醚洗涤，得到粗(S)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙胺盐酸盐。将该盐酸盐溶解在水(10mL)中并用饱和的碳酸氢钠水溶液中和。将混合物用二氯甲烷萃取。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗(S)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙胺(212mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z)：130.1[M+H]+；Rt＝0.34min.
(R)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙胺的合成
步骤1：(S，E)-2-甲基-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺的制备
将四氢-2H-吡喃-4-甲醛(2.0g，17.52mmol)、(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.062g，8.76mmol)、吡啶4-甲基苯磺酸盐(0.110g，0.438mmol)和硫酸镁(5.27g，43.8mmol)的二氯乙烷(13mL)混合物在室温下搅拌18hrs。过滤固体并将滤液在减压下浓缩至干。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(S，E)-2-甲基-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(1.50g)。LCMS(m/z)：218.1[M+H]+；Rt＝0.58min.
步骤2：(S)-2-甲基-N-((R)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺的制备
在0℃下，向(S，E)-2-甲基-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(1.5g，6.90mmol)的二氯甲烷(34.5mL)的溶液中，缓慢加入甲基溴化镁(1.646g，13.80mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌3hrs。将混合物用饱和的氯化铵水溶液(5mL)稀释。将分离的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并在减压下浓缩至干。将残留物通过柱色谱纯化，得到(S)-2-甲基-N-((R)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(1.40g)。LCMS(m/z)：234.3[M+H]+；Rt＝0.57min.
步骤3：(R)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙胺的制备
向(S)-2-甲基-N-((R)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(400mg，1.714mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入4M氯化氢的二
烷溶液(5mL)。将反应混合物在室温下搅拌30min。将混合物在减压下浓缩并将残留物用乙醚(10mL)稀释。通过过滤收集沉淀物并用乙醚洗涤，得到粗(R)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙胺盐酸盐。将该盐酸盐溶解在水(10mL)中并用饱和的碳酸氢钠水溶液中和。将混合物用二氯甲烷(2x)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗(R)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙胺(200mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z)：130.1[M+H]+；Rt＝0.34min.
(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺的合成
步骤1：4-甲基苯磺酸(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基酯的制备
向(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)甲醇(1g，6.93mmol)的二氯甲烷(5mL)和吡啶(5mL，61.8mmol)溶液中加入对甲苯磺酰氯(1.586g，8.32mmol)和DMAP(0.042g，0.347mmol)。将得到的混合物室温下搅拌18hrs。将反应混合物在减压下浓缩并将残留物用水和二氯甲烷稀释。将分离的有机相用0.2N盐酸水溶液(1x)、1N盐酸水溶液(2x)、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，40g，EtOAc/己烷＝0/100至50/50]，得到4-甲基苯磺酸(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基酯(2.05g)，为无色油状物。LCMS(m/z)：299.1[M+H]+；Rt＝0.96min.
步骤2：(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺的制备
在-78℃，向钢瓶中的4-甲基苯磺酸(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基酯(3g，10.05mmol)的四氢呋喃(25mL)溶液中加入浓氨水(～5.00mL)。将混合物在钢瓶中、125℃下加热～18hrs。将混合物冷却至-78℃，打开钢瓶，并将混合物在氮气气流下升温至室温。将混合物在减压下浓缩，并将残留物在氢氧化钠水溶液(5wt.％)和二氯甲烷间分配。将分离的水层用二氯甲烷(1x)萃取。将合并的有机层用氢氧化钠水溶液(5wt.％)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗(2，2-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺(～2.36g)，为黄色液体，其没有进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z)：144.1[M+H]+；Rt＝0.26min.
(6，6-二甲基-1，4-二
烷-2-基)甲胺的合成
步骤1：1-(烯丙基氧基)-2-甲基丙-2-醇的制备
在0℃下，向烯丙醇(57.4mL，844mmol)加入氢化钠(60wt.％在矿物油中，2.43g，101mmol)。搅拌20min后，加入2，2-二甲基环氧乙烷(15mL，169mmol)并将溶液回流过夜。将混合物冷却至室温，用饱和的氯化铵水溶液稀释并用乙醚萃取(3x)。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩除去乙醚。将残留物蒸馏，得到1-(烯丙基氧基)-2-甲基丙-2-醇(12.3g，42托(torr)，bp 58-60℃)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：5.87-5.96(m，1H)5.26-5.31(m，1H)5.18-5.21(m，1H)4.03-4.05(m，2H)3.28(s，2H)2.31(br.s，1H)1.23(s，3H)1.22(s，3H).
步骤2：6-(碘甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷的制备
向1-(烯丙基氧基)-2-甲基丙-2-醇(5.0g，38mmol)的乙腈(400mL)溶液中加入碳酸氢钠(19.5g，77mmol)，并将混合物冷却至0℃。加入碘(11.7g，46.1mmol)并将反应混合物升至室温并搅拌过夜。向混合物中加入三乙胺(6.42mL，46.1mmol)和另外的碘(7.8g，30.7mmol)，并在0℃下再继续搅拌5hrs。向混合物中加入碳酸钾(6.37g，46.1mmol)，并将混悬液在室温下搅拌～3天。将反应混合物用饱和的硫代硫酸钠水溶液(200mL)和EtOAc(300mL)稀释。将分离的水层用EtOAc(2x)萃取，并将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/己烷＝10/100至10/40]，得到6-(碘甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷，为黄色油状物(2.07g)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：4.01(dd，J＝11.2，2.8Hz，1H)3.81-3.88(m，1H)3.44(d，J＝11.2Hz，1H)3.22(dd，J＝11.6，0.8Hz，1H)2.97-3.13(m，3H)1.33(s，3H)1.14(s，3H).回收1-(烯丙基氧基)-2-甲基丙-2-醇(1.63g)。
步骤3：6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷的制备
向6-(碘甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷(1.80g，7.03mmol)的无水DMF(9mL)溶液中加入叠氮化钠(0.685g，10.5mmol)，并将混悬液在80℃下加热2.5hrs。将混合物用水(30mL)和EtOAc(30mL)稀释。将分离的有机层用水(3x)洗涤。将水层合并，并用EtOAc(1x)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/己烷＝10/40至20/40]，得到6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷(0.93g)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：4.00-4.06(m，1H)3.75(ddd，J＝11.2，2.4，0.4Hz，1H)3.49(d，J＝11.2Hz，1H)3.14-3.29(m，4H)1.35(s，3H)，1.14(s，3H).
步骤4：(6，6-二甲基-1，4-二
烷-2-基)甲胺的制备
在0℃下，向6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基-1，4-二烷(502mg，2.93mmol)的无水四氢呋喃(15mL)溶液中缓慢加入氢化铝锂溶液(1M在四氢呋喃中，3.81mL)，并将混合物在0℃下搅拌1hr并在室温下搅拌0.5hr。将反应混合物冷却至0℃并缓慢加入硫酸钠十水合物(过量)，并将混悬液剧烈搅拌过夜。将混悬液通过棉花过滤并将滤液在减压下浓缩，得到粗(6，6-二甲基-1，4-二烷-2-基)甲胺(410mg)，为无色油状物，其不需要纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：146.1[M+H]+；Rt＝0.42min.
(5，5-二甲基-1，4-二
烷-2-基)甲胺的合成
步骤1：2-(烯丙基氧基)-2-甲基丙-1-醇的制备
在0℃下，向2，2-二甲基环氧乙烷(15.0mL，169mmol)的烯丙醇(57.4mL)溶液中缓慢加入高氯酸(70wt.％，7.26mL，84mmol)。将溶液升温至室温并搅拌1.5hrs。将反应混合物用饱和的碳酸氢钠水溶液稀释并用乙醚(3x)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以除去乙醚。蒸馏残留物得到2-(烯丙基氧基)-2-甲基丙-1-醇(9.70g，38torr，bp 74-76℃)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：5.87-5.97(m，1H)5.25-5.31(m，1H)5.12-5.16(m，1H)3.92-3.94(m，2H)3.45(m，2H)1.19(s，6H).
步骤2：5-(碘甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷的制备
向2-(烯丙基氧基)-2-甲基丙-1-醇(5.0g，38.4mmol)的乙腈(350mL)溶液中加入碳酸氢钠(9.68g，115mmol)，并将混合物冷却至0℃。加入碘(29.2g，115mmol)并将反应混合物升温至室温并搅拌6hrs。将反应混合物用饱和的硫代硫酸钠水溶液稀释并在减压下浓缩除去大部分有机溶剂。将残留物用EtOAc(2x)萃取，并将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/己烷＝10/100至10/40]，得到6-(碘甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷，为无色油状物(7.04g).1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：3.70-3.73(m，1H)3.57-3.64(m，2H)3.43-3.50(m，2H)3.13-3.15(m，2H)1.32(s，3H)1.13(s，3H).
步骤3：5-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷的制备
向5-(碘甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷(2.58g，10.1mmol)的无水DMF(13mL)溶液中加入叠氮化钠(0.982g，15.1mmol)并将混悬液在80℃下加热2.5hrs。将混合物用水(40mL)和EtOAc(40mL)稀释。将分离的有机层用水(3x)洗涤。将水层合并并用EtOAc(1x)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/己烷＝10/40至50/50]，得到6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷(1.61g)，为无色油状物。NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：3.63-3.72(m，2H)3.52-3.59(m，2H)3.42(d，J＝11.6Hz，1H)3.29(d，J＝4.4Hz，2H)1.33(s，3H)1.13(s，3H).
步骤4：(5，5-二甲基-1，4-二烷-2-基)甲胺的制备
在0℃下，向5-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基-1，4-二
烷(810mg，4.73mmol)的无水四氢呋喃(20mL)溶液中缓慢加入氢化铝锂溶液(1.0M四氢呋喃，6.2mL)，并将混合物在0℃下搅拌1hr并在室温下搅拌0.5hr。将反应混合物冷却至0℃并缓慢加入硫酸钠十水合物(过量)，并将混悬液剧烈搅拌过夜。将混悬液通过棉花过滤并将滤液在减压下浓缩，得到粗(5，5-二甲基-1，4-二
烷-2-基)甲胺(673mg)，为无色油状物，其不需要纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：146.1[M+H]+；Rt＝0.42min.
(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺的合成
步骤1：4-甲基四氢-2H-吡喃-4-腈的制备
在0-5℃下，向四氢-2H-吡喃-4-腈(2g，18.00mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中缓慢加入LHMDS(21.59mL，21.59mmol)。将混合物在0℃下搅拌1.5hrs。缓慢加入碘甲烷(3.37mL，54.0mmol)并在～0℃下继续搅拌30min，然后在室温下搅拌～2hrs。将混合物冷却至0℃并小心地用1N盐酸水溶液(30mL)和EtOAc(5mL)稀释并在减压下浓缩。将残留物溶取在乙醚中，并将分离的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗4-甲基四氢-2H-吡喃-4-腈(1.8g)，为橙色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z)：126.1[M+H]+；Rt＝0.44min.
步骤2：(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺的制备
在0℃下，向4-甲基四氢-2H-吡喃-4-腈(1.8g，14.38mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中小心地加入氢化铝锂(1M四氢呋喃溶液，21.57mL，21.57mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌15min，升温至室温并在室温再搅拌3hrs。向反应混合物中小心地加入水(0.9mL)[注意：气体生成！]、1N氢氧化钠水溶液(2.7mL)和水(0.9mL)。将混合物剧烈搅拌30min。将沉淀物过滤并用四氢呋喃淋洗。将溶液在减压下浓缩，得到粗(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺(1.54g)，为黄色固体，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：130.1[M+H]+；Rt＝0.21min.
4-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-4-腈的合成
步骤1：二氢-2H-吡喃-4，4(3H)-二腈的制备
将丙二腈(0.991g，15mmol)、1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(3.83g，16.50mmol)和DBU(4.97mL，33.0mmol)的DMF(6mL)混合物在85℃下加热3hrs。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残留物用EtOAc(25mL)稀释，用水(2x10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，并在高真空下进一步干燥，得到粗的二氢-2H-吡喃-4，4(3H)-二腈(1.65g)，为淡棕色固体，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。GCMS：136[M]；Rt＝5.76min.1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ[ppm]：2.14-2.32(m，4H)3.77-3.96(m，4H).
步骤2：4-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-4-腈的制备
向二氢-2H-吡喃-4，4(3H)-二腈(450mg，3.31mmol的EtOH(15mL)溶液中分次加入硼氢化钠(375mg，9.92mmol)并将混合物在室温下搅拌4hrs。将混合物在减压下浓缩并将残留物用EtOAc(30mL)稀释，用水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗4-(氨基甲基)四氢-2H-吡喃-4-腈(388mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：141.0[M+H]+；Rt＝0.18min.
甲苯-4-磺酸4-甲氧基-四氢-吡喃-4-基甲基酯的合成
步骤1：1，6-二氧杂螺[2.5]辛烷的制备
在氮气气氛下，向三甲基碘化锍(3.27g，16mmol)的DMSO(20mL)溶液中加入二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(1.0g，10mmol)。向混合物中缓慢加入叔丁醇化(1.68g，15mmol)的DMSO(15mL)溶液，并将溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水(50mL)缓慢稀释并用乙醚(3x20mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗1，6-二氧杂螺[2.5]辛烷(650mg)，其没有进一步纯化直接使用。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ.[ppm]：1.44-1.62(m，2H)1.76-1.98(m，2H)2.70(s，2H)3.70-3.98(m，4H).
步骤2：(4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)MeOH的制备
在氮气气氛、0℃下，向1，6-二氧杂螺[2.5]辛烷(600mg，5.26mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入樟脑磺酸(50mg，0.21mmol)，并将混合物在0℃下搅拌2hrs。将混合物在减压下浓缩，得到粗(4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)甲醇(707mg)，为淡黄色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ.[ppm]：1.89-2.08(m，4H)，3.18-3.30(m，3H)，3.47-3.59(m，2H)，3.64-3.78(m，4H).
步骤3：甲苯-4-磺酸4-甲氧基-四氢-吡喃-4-基甲基酯的制备
在室温下，向(4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)MeOH(300mg，2.05mmol)的吡啶(4mL)溶液中加入甲苯磺酰氯(430mg，2.25mmol)，并将混合物在25℃下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩并将残留物溶解在二氯甲烷(2mL)中。通过柱色谱纯化[硅胶，12g，EtOAc/己烷＝0/100至30/70]，得到甲苯-4-磺酸4-甲氧基-四氢-吡喃-4-基甲基酯(360mg)，为淡黄色固体。1HNMR(300MHz，氯仿-d)δ.[ppm]：1.45-1.63(m，2H)1.61-1.79(m，2H)2.46(s，3H)，3.16(s，3H)3.53-3.75(m，4H)3.93(s，2H)，7.36(d，J＝8.20Hz，2H)7.81(d，J＝8.20Hz，2H).
(4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺的合成
步骤1：4，4-二甲氧基四氢-2H-吡喃的制备
将二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(501mg，5mmol)、原甲酸三甲酯(0.608mL，5.50mmol)和甲苯磺酸一水合物(2.85mg，0.015mmol)的MeOH(1mL)混合物在封闭管中、80℃下搅拌30min。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩，得到粗4，4-二甲氧基四氢-2H-吡喃(703mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ.[ppm]：1.61-1.90(m，4H)3.20(s，6H)3.60-3.78(m，4H).
步骤2：4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-腈的制备
在-70℃下，向4，4-二甲氧基四氢-2H-吡喃(0.703g，4.81mmol)和氯化锡(IV)(0.564mL，4.81mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中缓慢加入2-异氰基-2-甲基丙烷(0.400g，4.81mmol)，并将混合物历经2-3hrs升温至室温。将混合物用碳酸氢钠水溶液(10mL)和二氯甲烷(20mL)稀释。将分离的有机层用水(3x10mL)洗涤并用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-腈(511mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。GCMS：109[M-MeOH]；Rt＝5.44min.
步骤3：(4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺的制备
在室温下，向LiAlH4(275mg，7.24mmol0的四氢呋喃(10mL)混合物中，缓慢加入4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-腈(511mg，3.62mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液。将混合物在室温下搅拌1hr并加热回流3hrs。将反应混合物冷却至0℃并小心地滴加水(3mL)。将得到的混合物再搅拌30min并过滤除去所有固体。将滤液用硫酸钠干燥2hrs，过滤并在减压下浓缩，得到粗(4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺(370mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：146.1[M+H]+，114.0[M-MeOH]；Rt＝0.19min.
甲苯-4-磺酸1’，1’-二氧代-六氢-1-噻喃-4-基-甲基酯的合成
将(1’，1’-二氧代-六氢-1-噻喃-4-基)-甲醇(2.5g，15.22mmol)[OrganicProcess Research & Development 2008，12，892-895.]、吡啶(25mL)和甲苯磺酰氯(2.90g，15.22mmol)的混合物在50℃下搅拌18hrs。将反应混合物在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/己烷＝0/100至70/30]。合并流分并在减压下浓缩，得到甲苯-4-磺酸1’，1’-二氧代-六氢-1-噻喃-4-基-甲基酯(3.78g).LCMS(m/z)：319.0[M+H]+；Rt＝0.71min.
1-(叔丁氧基羰基)-3-氟哌啶-3-甲酸的合成
步骤1：(3-氟哌啶)-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯的制备
在0℃下，向LDA溶液[由BuLi(1.6M的己烷溶液，5.14mL，8.22mmol)和二异丙基胺(1.44mL，10.39mmol)在四氢呋喃(6mL)中在0℃下新鲜制备]中，滴加哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(2g，8.22mmol)的四氢呋喃(8mL)溶液。将溶液在0℃下搅拌30min，然后转移至0℃的N-氟代双苯磺酰胺(N-fluorobenzenesulfonimide)(3.24g，10.28mmol)的四氢呋喃(12mL)溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌15min然后在室温下搅拌～20hrs。在减压下总溶剂体积减少至约三分之一并加入EtOAc。将混合物用水、0.1N盐酸水溶液、饱和的碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗产物混悬在EtOAc中并倾泻。将滤液在减压下浓缩并通过柱色谱纯化[硅胶，80g，EtOAc/庚烷＝0/100至50/50]，得到(3-氟哌啶)-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(775mg)，为无色液体。LCMS(m/z)：262.1[M+H]+，206.1[M+H，失去t-Bu]+；Rt＝0.86min.
步骤2：1-(叔丁氧基羰基)-3-氟哌啶-3-甲酸的制备
向3-氟哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(250mg，0.957mmol)的MeOH(6mL)溶液中缓慢加入2N氢氧化钠水溶液(6mL，12.00mmol)并将混合物在室温下搅拌2hrs。将反应混合物用1N盐酸水溶液酸化并用乙醚(3x)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗1-(叔丁氧基羰基)-3-氟哌啶-3-甲酸(215mg)，为白色固体，该粗物质没有进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z)：192.0[M+H，失去t-Bu]+；Rt＝0.69min.
(3R，4S)-1-(苄氧基羰基)-4-氟吡咯烷-3-甲酸的合成
步骤1：(3S，4S)-3-氟-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的制备
在氩气气氛下，向(3R，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(5.0g，20.22mmol)的(三氟甲基)苯(84mL)溶液中加入二异丙基乙胺(53.0mL，303mmol)和三乙胺三氢氟酸盐(19.75mL，121mmol)。分五次缓慢加入全氟丁烷磺酰氟(PBSF)(9.09mL，50.5mmol)，每次在30min内加入。将反应混合物搅拌过夜。将有机溶液用1N盐酸水溶液(2x)、饱和的碳酸氢钠水溶液(2x)和水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，120g，EtOAc/庚烷＝0/100至50/50]，得到(3S，4S)-3-氟-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(3.8g)。LCMS(m/z)：250.0[M+H]+；Rt＝0.92min.
步骤2：(3R，4S)-1-(苄氧基羰基)-4-氟吡咯烷-3-甲酸的制备
将(3S，4S)-3-氟-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(3.8g，15.24mmol)、三氯化钌(199mg，0.762mmol)、高碘酸钠(13.04g，61.0mmol)的四氯化碳(43.6mL)、水(65.3mL)和乙腈(43.6mL)混合物室温下搅拌过夜。将反应混合物用二氯甲烷(200mL)和水(200mL)稀释并过滤除去淤浆。将分离的水层用二氯甲烷(2x200mL)洗涤，将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在丙酮(50mL)中，并加入三氧化铬(3.05g，30.5mmol)和1N硫酸水溶液(50mL)。将得到的混合物在室温下搅拌3hrs。将反应混合物用二氯甲烷(2x100mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩并将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(3R，4S)-1-(苄氧基羰基)-4-氟吡咯烷-3-甲酸(2.9g)。LCMS(m/z)：268.0[M+H]+；Rt＝0.68min.
(3S，4S)-1-(苄氧基羰基)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)吡咯烷-3-甲酸的
合成
步骤1：(3S，4S)-3-(4-甲氧基苯甲酰基氧基)-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的制备
将(3R，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(2.25g，9.10mmol)、对-茴香酸(1.66g，10.92mmol)、N1，N1，N2，N2-四甲基二氮烯-1，2-二甲酰胺(2.350g，13.65mmol)、苯(18.20mL)和三丁基膦(3.37mL，13.65mmol)的混合物在封闭瓶中、在60℃下搅拌2hrs。将反应混合物冷却至环境温度，并用EtOAc(100mL)稀释。将混合物用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到(3S，4S)-3-(4-甲氧基苯甲酰基氧基)-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(2.58g)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：382.2[M+H]+；Rt＝1.08min.
步骤2：(3S，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的制备
向粗(3S，4S)-3-(4-甲氧基苯甲酰基氧基)-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(2.58g)的四氢呋喃(30mL)溶液中加入1N氢氧化钠水溶液(30mL)，并将混合物在60℃下搅拌18hrs。将反应混合物冷却至室温并用EtOAc(100mL)稀释。将混合物用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(3S，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(1.8g)。LCMS(m/z)：248.1[M+H]+；Rt＝0.87min.
步骤3：(3S，4S)-3-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的制备
向(3S，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(1.8g，7.28mmol)的二氯甲烷(14mL)溶液中加入咪唑(0.842g，12.37mmol)和叔丁基二苯基氯硅烷(2.057mL，8.01mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18hrs并通过一薄层的硅藻土过滤。将滤液用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗(3S，4S)-3-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(2.4g)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：486.2[M+H]+；Rt＝1.44min.
步骤4：(3S，4S)-1-(苄氧基羰基)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-吡咯烷-3-甲酸的制备
将(3S，4S)-3-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(3.9g，8.03mmol)、三氯化钌(0.105g，0.401mmol)、高碘酸钠(6.87g，32.1mmol)的四氯化碳(11.5mL)、水(17.2mL)和乙腈(11.5mL)混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷(200mL)和水(200mL)稀释并过滤除去淤浆。将分离的水层用二氯甲烷(2x200mL)洗涤，将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在丙酮(50mL)中，并加入三氧化铬(1.606g，16.06mmol)和1N硫酸水溶液(50mL)。将混合物在室温下搅拌3hrs。将反应混合物用二氯甲烷(2x100mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(3S，4S)-1-(苄氧基羰基)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)吡咯烷-3-甲酸(2.5g)。LCMS(m/z)：504.1[M+H]+；Rt＝1.18min.
(3S，4R)-1-(苄氧基羰基)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)吡咯烷-3-甲酸的
合成
步骤1：2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸苄酯的制备
向2，5-二氢-1H-吡咯(30g，434mmol)的二
烷(1000mL)溶液中加入CbzOSu(130g，521mmol)，并将混合物在室温下搅拌18hrs。将反应混合物浓缩至体积～300mL并用EtOAc(1000mL)稀释。将有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸苄酯(80.0g)，为无色油状物。Rf＝0.6(EtOAc/己烷＝30∶70).1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：7.32(m，5H)，5.80(m，2H)，5.77(s，2H)，4.22(m，4H).LCMS(m/z)：204.2[M+H]+；Rt＝0.86min.
步骤2：6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯的制备
向2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸苄酯(33g，163mmol)的二氯甲烷(540mL)溶液中加入MCPBA(77wt.％，44g)，并将反应混合物在室温下搅拌18hrs。将混合物用饱和的碳酸钠水溶液(500mL)稀释并将得到的混合物在室温下搅拌1hr。将分离的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(29.5g)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：3.38(dd，J＝12.8，6.0Hz，2H)，3.68(d，J＝3.6Hz，2H)，3.87(dd，J＝13.2，19.6，2H)，5.11(s，2H)，7.33(m，5H).LCMS(m/z)：220.0[M+H]+；Rt＝0.69min.
步骤3：反式-(±)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的制备
在-40℃下，向6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(28.5g，130mmol)和CuBr·SMe2(26.7g，130mmol)的无水THF(260mL)溶液中缓慢加入乙烯基溴化镁(1.0M的THF溶液，520mL)。将反应混合物升温至-20℃保持2hrs。将混合物用饱和的氯化铵水溶液(200mL)淬灭，并用EtOAc(500mL)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到反式-(±)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的外消旋混合物(15.5g)，为黄色油状物。Rf＝0.2(EtOAc/己烷＝30∶70).1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：2.71(m，1H)3.28(m，2H)3.72(m，2H)4.11(m，1H)5.14(s，2H)5.16-5.23(m，2H)5.69(m，1H)7.33(m，5H).LCMS(m/z)：248.0[M+H]+；Rt＝0.78min.
步骤4：(3S，4R)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯和(3R，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的拆分
量：10g溶解在{正己烷∶乙醇∶甲醇}＝{8∶2∶1}；200mg/mL.
分析分离：
柱：CHIRALPAK AD(20um)250x4.6mm.
溶剂：正庚烷∶乙醇∶甲醇＝8∶1∶1.
流速：1.0mL/min；检测器：UV＝220nm.
流分1：保留时间：9.16min.
流分2：保留时间：13.10min.
制备分离：
柱：CHIRALPAK AD-prep(20um)5cmx50cm.
溶剂：正庚烷∶乙醇∶甲醇＝8∶1∶1.
流速：100mL/min；每次进样：1000mg/5mL；检测：UV＝220nm.
流分1：(3S，4R)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯。褐色液体。产量：4530mg；ee＝99.5％(UV，220nm).
流分2：(3R，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯。褐色液体。产量：4117mg；ee＝99.5％(UV，220nm).
步骤5：(3R，4S)-3-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的制备
向(3R，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(3.0g，12.13mmol)的二氯甲烷(24mL)溶液中加入咪唑(1.404g，20.62mmol)和叔丁基二苯基氯硅烷(3.43mL，13.34mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18hrs并通过一薄层的硅藻土过滤。将滤液用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗(3R，4S)-3-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(6.2g)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：486.2[M+H]+；Rt＝1.46min.
步骤6：(3S，4R)-1-(苄氧基羰基)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)吡咯烷-3-甲酸的制备
将(3R，4S)-3-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯、三氯化钌(0.167g，0.638mmol)、高碘酸钠(10.92g，51.1mmol)的四氯化碳(18.2mL)、水(27.4mL)和乙腈(18.2mL)混合物在室温搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷(200mL)和水(200mL)稀释并过滤除去淤浆。将分离的水层用二氯甲烷(2x200mL)洗涤，将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在丙酮(50mL)中，并加入三氧化铬(2.55g，25.5mmol)和1N硫酸水溶液(50mL)。将混合物在室温下搅拌3hrs。将反应混合物用二氯甲烷(2x100mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(3S，4R)-1-(苄氧基羰基)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)吡咯烷-3-甲酸(3.5g)。LCMS(m/z)：504.1[M+H]+；Rt＝1.26min.
(3R，5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-甲酸的合成
步骤1：(2S，4S)-4-甲磺酰氧基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯的制备
将(2S，4S)-4羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(5.0g，20.39mmol)、N，N-二异丙基-N-乙基胺(3.16，24.46mmol)和甲磺酰氯(2.8g，24.46mmol)的二氯甲烷(50mL)混合物在23℃下搅拌18hrs。将反应混合物在减压下浓缩并将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，80g，EtOAc/庚烷＝0/100至40/60]，得到(2S，4S)-4-甲磺酰氧基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(6.0g).LCMS(m/z)：324.1[M+H]+；Rt＝0.69min.
步骤2：(2S，4S)-2-(羟基甲基)-4-(甲基磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2S，4S)-4-甲磺酰氧基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(5.0g)的四氢呋喃(31mL)溶液中加入硼氢化钠(1.170g，30.9mmol)并将混合物加热回流3hrs。将反应混合物冷却至室温并用饱和的氯化铵水溶液(5mL)和EtOAc(100mL)稀释。将混合物用水、碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，40g，EtOAc/庚烷＝0/100至70/30]，得到(2S，4S)-2-(羟基甲基)-4-(甲基磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.0g).LCMS(m/z)：296.0[M+H]+；Rt＝0.59min.
步骤3：(2S，4S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基氧基)甲基)-4-(甲基磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2S，4S)-2-(羟基甲基)-4-(甲基磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.0g，16.18mmol)的二氯甲烷(32.4mL)溶液中加入咪唑(1.872g，27.5mmol)和叔丁基二苯基氯硅烷(4.57mL，17.79mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18hrs并通过一薄层的硅藻土过滤。将滤液用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/庚烷＝0/100至40/60]，得到(2S，4S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基氧基)甲基)-4-(甲基磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(6.0g)。LCMS(m/z)：534.5[M+H]+；Rt＝1.33min.
步骤4：(2S，4R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基氧基)甲基)-4-氰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2S，4S)-2-((叔丁基二苯基硅烷基氧基)甲基)-4-甲基磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(6g，11.24mmol)的DMF(50mL)溶液中加入氰化四丁基铵(3.62g，13.49mmol)并将混合物在60℃下搅拌18hrs。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥～18hrs，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/庚烷＝0/100至50/50]，得到(2S，4R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基氧基)甲基)-4-氰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.8g)。LCMS(m/z)：465.2[M+H]+；Rt＝1.37min.
步骤5：(2S，4R)-4-氰基-(2-羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2S，4R)-2-((叔丁基二苯基硅烷基氧基)甲基)-4-氰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.8g，8.18mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中加入氟化四丁基铵(2.57g，9.81mmol)并将混合物在23℃下搅拌3hrs。将反应混合物在减压下浓缩并将残留物溶解在EtOAc(50mL)中。将有机溶液用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(2S，4R)-4-氰基-(2-羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.7g).
步骤6：(2S，4R)-4-氰基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2S，4R)-4-氰基-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(850mg，3.76mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中小心地加入氢化钠(60wt.％在矿物油中，184mg，4.51mmol)并将混合物在室温下搅拌30min。向混合物中加入碘甲烷(0.470mL，7.51mmol)，并在室温下持续搅拌3hrs。将反应混合物小心地用饱和氯化铵水溶液(50mL)和EtOAc(100mL)稀释。将有机层在减压下浓缩并将残留物溶解在EtOAc(100mL)中。将混合物用水(2x50mL)和盐水(2x100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/庚烷＝0/100至60/40]，得到(2S，4R)-4-氰基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(560mg)。LCMS(m/z)：241.2[M+H]+；Rt＝0.76min.
步骤7：(3R，5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-甲酸的制备
将(2S，4R)-4-氰基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(600mg，2.497mmol)、6N氢氧化钠水溶液(13.73mL，82mmol)和EtOH(15mL)的混合物在封闭的瓶中、在80℃下搅拌1hr。将反应混合物冷却至室温，用1N盐酸水溶液酸化直至pH～5并用二氯甲烷(3x100mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩并将残留物溶解在EtOAc中。将有机层用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(3R，5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-甲酸(510mg)。LCMS(m/z)：260.2[M+H]+；Rt＝0.69min.1H NMR(400MHz，甲醇-d)δ[ppm]：1.46(s，9H)2.10-2.20(m，2H)3.15-3.26(m，1H)3.34(s，3H)3.44(d，J＝4.30Hz，2H)3.47-3.60(m，2H)3.94-4.05(m，1H).
4-(叔丁氧基羰基)-2-甲基吗啉-2-甲酸的合成
步骤1：吗啉-2，4-二甲酸4-叔丁酯2-甲酯的制备
向4-(叔丁氧基羰基)吗啉-2-甲酸(500mg，2.162mmol)的MeOH(15mL)溶液中加入硫酸(10μL，0.188mmol)，并将反应混合物在70℃下搅拌18hrs。将反应混合物冷却至室温，并用1N氢氧化钠水溶液(5mL)稀释。将混合物在减压下浓缩并将残留物溶解在EtOAc中。将溶液用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到吗啉-2，4-二甲酸4-叔丁酯2-甲酯(300mg)。LCMS(m/z)：246.1[M+H]+；Rt＝0.72min.
步骤2：2-甲基-吗啉-2，4-二甲酸4-叔丁酯2-甲酯的制备
在0℃下，向二异丙胺(0.174mL，1.223mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入n-BuLi(0.764mL，1.223mmol)，并将混合物在0℃下搅拌1hr。将混合物冷却至-78℃并加入吗啉-2，4-二甲酸4-叔丁酯2-甲酯(300mg，1.223mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌1hr并缓慢升温至室温。将混合物用饱和的氯化铵水溶液(5mL)稀释并用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/庚烷＝0/100至40/60]，得到2-甲基-吗啉-2，4-二甲酸4-叔丁酯2-甲酯(211mg).LCMS(m/z)：260.0[M+H]+；Rt＝0.77min.
步骤3：4-(叔丁氧基羰基)-2-甲基吗啉-2-甲酸的制备
将2-甲基-吗啉-2，4-二甲酸4-叔丁酯2-甲酯(290mg，1.118mmol)和1N氢氧化钠水溶液(12mL，12.00mmol)的四氢呋喃(10mL)混合物在70℃下搅拌2hrs。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩以除去四氢呋喃。将水溶液用1N盐酸水溶液酸化直至pH～5并用EtOAc(3x15mL)萃取。将有机层合并并用盐水洗涤，之后用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/庚烷＝0/100至70/30]，得到4-(叔丁氧基羰基)-2-甲基吗啉-2-甲酸(155mg)。LCMS(m/z)：268.0[M+Na]+；Rt＝0.61min.
(3R，5S)-/(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-甲酸[顺式异构体的混
合物]和(3R，5R)-/(3S，5S)-1-(苄氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-甲酸[反式异构体的
混合物]的合成
步骤1：5-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(顺和反式异构体的混合物)的制备
将5-甲基烟酸甲酯(1.06g，7.01mmol)、Pd/C(10wt.％，100mg)和氧化铂(IV)(150mg，0.661mmol)的乙酸(30mL)混合物在钢瓶中在氢气气氛(200psi)、25℃下搅拌16hrs。将反应混合物通过硅藻土垫层过滤并用MeOH(150mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到粗5-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(1.5g；顺式和反式异构体的混合物)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：158.1[M+H]+；Rt＝0.32min.
步骤2：(3R，5S)-/(3S，5R)-5-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]和(3R，5R)-/(3S，5S)-5-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[反式异构体]的制备
向粗5-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(1.5g，7.01mmol)和碳酸钠水溶液(10wt.％；20mL)的四氢呋喃(40mL)混合物中，缓慢加入氯甲酸苄酯(1.491mL，10.45mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16hrs。将混合物用EtOAc稀释并再搅拌30min。将分离的有机层用饱和的碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，120g，EtOAc/庚烷＝0/100至60/40]，得到顺式异构体(3R，5S)-/(3S，5R)-5-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(1.66g)，为无色油状物，和反式异构体(3R，5R)-/(3S，5S)-5-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(1.52g)，为无色油状物。
顺式异构体：LCMS(m/z)：292.1[M+H]+；Rt＝0.99min.分析HPLC：Rt＝4.04min.
1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ[ppm]：0.92(d，J＝6.45Hz，3H)1.21(q，J＝12.41Hz，1H)1.60(br.s.，1H)2.11(d，J＝13.19Hz，1H)2.29(br.s.，1H)2.43-2.57(m，1H)2.75(br.s.，1H)3.69(s，3H)4.14(br.s.，1H)4.42(br.s.，1H)5.14(br.s.，2H)7.36(s，5H).
反式异构体：LCMS(m/z)：292.1[M+H]+；Rt＝0.96min.分析HPLC：Rt＝3.85min.
1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ[ppm]：0.92(d，J＝6.74Hz，3H)1.47(br.s.，1H)1.88-2.07(m，2H)2.67(br.s.，1H)2.80-3.09(m，1H)3.30-4.08(m，6H)5.13(q，J＝12.31Hz，2H)7.29-7.39(m，5H).
步骤3-a：(3R，5S)-/(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-甲酸[顺式异构体]的制备
向(3R，5S)-/(3S，5R)-5-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯(1.66g，5.70mmol)的MeOH(4.5mL)和水(3mL)混合物中，加入6N氢氧化钠水溶液(1.5mL，9.0mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2hrs，并在减压下浓缩至体积为～2mL。将混合物用1N盐酸水溶液酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到顺式异构体(3R，5S)-和(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-甲酸的混合物(1.36g)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：278.1[M+H]+；Rt＝0.81min.
步骤3-b：(3R，5R)-/(3S，5S)-1-(苄氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-甲酸[反式异构体]的制备
向(3R，5S)-/(3S，5R)-5-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯(1.55g，5.32mmol)的MeOH(4.5mL)和水(3mL)混合物中，加入6N氢氧化钠水溶液(1.5mL，9.0mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2hrs，并在减压下浓缩至体积为～2mL。将混合物用1N盐酸水溶液酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到反式异构体(3R，5R)-和(3S，5S)-1-(苄氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-甲酸的混合物(1.22g)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：278.1[M+H]+；Rt＝0.79min.
(3S，4R)-1-(苄氧基羰基)-4-甲氧基吡咯烷-3-甲酸的合成
步骤1：(3R，4S)-3-甲氧基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的制备
向(3R，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(5.3g，21.43mmol)的DMF(25mL)溶液中，小心地加入氢化钠(60wt.％在矿物油中，1.714g，42.9mmol)，并将混合物在室温下搅拌1hr。向混合物中历经30min缓慢地加入碘甲烷(4.29mL，68.6mmol)并在25℃下再继续搅拌18hrs。将混合物用饱和的氯化铵水溶液(10mL)和EtOAc(100mL)稀释。将混合物用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/庚烷＝0/100至50/50]，得到(3R，4S)-3-甲氧基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(5.0g).LCMS(m/z)：262.1[M+H]+；Rt＝0.78min.
步骤2：(3S，4R)-1-(苄氧基羰基)-4-甲氧基吡咯烷-3-甲酸的制备
将(3R，4S)-3-甲氧基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(5g，19.13mmol)、三氯化钌(4.99g，19.13mmol)、高碘酸钠(16.37g，77mmol)在四氯化碳(20mL)、水(20mL)和乙腈(20mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用二氯甲烷(200mL)和水(200mL)稀释并过滤除去淤浆。将分离的水层用二氯甲烷(2x200mL)洗涤，将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在丙酮(50mL)中，并加入三氧化铬(3.05g，30.5mmol)和1N硫酸水溶液(50mL)。将混合物在室温下搅拌3hrs。将反应混合物用二氯甲烷(2x100mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩并将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(3R，4S)-1-(苄氧基羰基)-4-甲氧基吡咯烷-3-甲酸(2.7g)。LCMS(m/z)：280.0[M+H]+；Rt＝0.69min.
(3R，5R)-1-(叔丁氧基羰基)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-甲酸的合成
步骤1：(2R，4R)-4-(叔丁基二苯基-硅烷基氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯的制备
向(2R，4R)-4-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(5.0g，20.22mmol)的二氯甲烷(35mL)溶液中，加入咪唑(2.34g，34.4mmol)和叔丁基二苯基氯硅烷(5.71mL，22.24mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18hrs并通过一薄层的硅藻土过滤。将滤液用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗(2R，4R)-4-(叔丁基二苯基-硅烷基氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(10.9g)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：486.2[M+H]+；Rt＝1.36min.
步骤2：(2R，4R)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2R，4R)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(10.0g，20.68mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液中加入硼氢化钠(1.564g，41.4mmol)，并将混合物在70℃下加热2hrs。将反应混合物冷却至室温并用饱和的氯化铵水溶液(5mL)和EtOAc(100mL)稀释。将混合物用水、碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，40g，EtOAc/庚烷＝0/100至70/30]，得到(2R，4R)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5.0g).LCMS(m/z)：456.2[M+H]+；Rt＝0.88min.
步骤3：(2R，4R)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2R，4R)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5.0g，10.97mmol)的四氢呋喃(25mL)溶液中，小心地加入氢化钠(0.316g，13.17mmol)并将混合物在室温下搅拌2hrs。向混合物中加入碘甲烷(1.372mL，21.95mmol)并在23℃下持续搅拌183hrs。将反应混合物小心地用饱和的氯化铵水溶液(10mL)和EtOAc(100mL)稀释。将混合物用水(2x50mL)和盐水(2x100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/庚烷＝0/100至40/60]，得到(2R，4R)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.7g).LCMS(m/z)：470.1[M+H]+；Rt＝1.45min.
步骤4：(2R，4R)-4-羟基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2R，4R)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.60g，9.79mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中，加入氟化四丁基铵(2.56g，9.79mmol)并将混合物在23℃下搅拌2hrs。将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释并用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，400g，EtOAc/庚烷＝0/100至50/50]，得到(2R，4R)-4-羟基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g).LCMS(m/z)：232.1[M+H]+；Rt＝0.62min.
步骤5：(2R，4S)-4-(4-甲氧基苯甲酰基氧基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
将(2R，4R)-4-羟基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1g，4.32mmol)、对-茴香酸(0.789g，5.19mmol)、N1，N1，N2，N2-四甲基二氮烯-1，2-二甲酰胺(0.744g，4.32mmol)、苯(20mL)和三丁基膦(1.60mL，6.49mmol)的混合物在封闭的瓶中在60℃下搅拌2hrs。将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释。将混合物用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(2R，4S)-4-(4-甲氧基苯甲酰基氧基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.2g)。LCMS(m/z)：366.2[M+H]+；Rt＝1.02min.
步骤6：(2R，4S)-4-羟基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2R，4S)-4-(4-甲氧基苯甲酰基氧基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.2g，3.28mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入3N氢氧化钠水溶液(20mL)，并将混合物在70℃下搅拌18hrs。将反应混合物冷却至室温并用水(50mL)稀释。将混合物用EtOAc(2x100mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(2x100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(2R，4S)-4-羟基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(600mg)。LCMS(m/z)：232.1[M+H]+；Rt＝0.62min.
步骤7：(2R，4S)-2-(甲氧基甲基)-4-(甲基磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
将(2R，4S)-4-羟基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(600mg，2.59mmol)、N，N-二异丙基-N-乙胺(0.544mL，3.11mmol)和甲磺酰氯(357mg，3.11mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物在23℃下搅拌18hrs。将反应混合物在减压下浓缩并将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，(2R，4S)-2-(甲氧基甲基)-4-(甲基磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(650mg).LCMS(m/z)：310.1[M+H]+；Rt＝0.90min.
步骤8：(2R，4R)-4-氰基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2R，4S)-2-(甲氧基甲基)-4-(甲基磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(910mg，2.94mmol)的DMF(15mL)溶液中加入氰化四丁基铵(948mg，3.53mmol)，并将混合物在60℃下搅拌18hrs。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并用水(2x)和盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/庚烷＝0/100至50/50]，得到(2R，4R)-4-氰基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(250mg).LCMS(m/z)：185.0[M+H，失去t-Bu]+；Rt＝0.78min.
步骤9：(3R，5R)-1-(叔丁氧基羰基)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-甲酸的制备
将(2R，4R)-4-氰基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(250mg，1.040mmol)、6N氢氧化钠水溶液(5.72mL，34.3mmol)和EtOH(7mL)的混合物在封闭的瓶中、在85℃下搅拌30min。将反应混合物冷却至室温，用1N盐酸水溶液酸化直至pH～5并用二氯甲烷(3x100mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩，并将残留物溶解在EtOAc中。将有机层用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗(3R，5R)-1-(叔丁氧基羰基)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-甲酸(210mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：282.0[M+Na]+；Rt＝0.68min.1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ[ppm]：1.46(s，9H)2.08-2.22(m，2H)3.15-3.27(m，1H)3.34(s，3H)3.44(d，J＝4.70Hz，2H)3.46-3.61(m，2H)3.94-4.05(m，1H).
1-(苄氧基羰基)-5-氟哌啶-3-甲酸[顺式异构体]的合成
步骤1：1-苄基-5-羟基哌啶-3-甲酸的制备
向5-羟基哌啶-3-甲酸(3g，20.67mmol)和碳酸钾(4.41g，31.9mmol)在MeOH(48mL)和水(24mL)中的混合物中，缓慢加入苄基溴(2.58mL，21.70mmol)的MeOH(2.00mL)溶液。将混合物在室温下搅拌～3hrs。减压下除去挥发的溶剂，并将剩余的溶液小心地用1N盐酸水溶液(～100mL)酸化。将水溶液在减压下浓缩至干。将残留物混悬在MeOH(～50mL)中并过滤。向滤液中加入甲醇钠的MeOH溶液(25wt.％，6.8g)并将反应混合物搅拌～18hrs。将混合物过滤并在减压下浓缩，得到粗1-苄基-5-羟基哌啶-3-甲酸，为固体，其没有进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z)：336.0[M+H]+；Rt＝0.36min.
步骤2：1-苄基-5-羟基哌啶-3-甲酸甲酯的制备
将三甲基氯硅烷(17.11mL，134mmol)缓慢加入到粗1-苄基-5-羟基哌啶-3-甲酸(4.5g，19.13mmol)的MeOH(90mL)溶液中。将混合物搅拌～18hrs并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，80g，30min，EtOAc/庚烷＝20/80至70/30]，得到1-苄基-5-羟基哌啶-3-甲酸甲酯(3.37g，71％经2个步骤)，为无色油状物。LCMS(m/z)：250.3[M+H]+；Rt＝0.36min.
步骤3：(3S，5R)-/(3R，5S)-1-苄基-5-氟哌啶-3-甲酸甲酯[顺式异构体]和(3R，5R)-/(3S，5S)-1-苄基-5-(氟甲基)吡咯烷-3-甲酸甲酯[顺式异构体]的混合物的制备
在-78℃下，向1-苄基-5-羟基哌啶-3-甲酸甲酯(2g，8.02mmol)的DCM(32mL)溶液中滴加DAST(2.12mL，16.04mmol)。将混合物历经～16hrs缓慢升温至室温。将反应混合物用饱和的碳酸氢钠水溶液稀释。将分离的水层用二氯甲烷(2x)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，40g，30min，EtOAc/庚烷＝0/100至40/60]，得到1-苄基-5-氟哌啶-3-甲酸甲酯[顺式异构体]和1-苄基-5-(氟甲基)吡咯烷-3-甲酸甲酯[顺式异构体]的混合物(1.80g)，为浅橙色油状物。LCMS(m/z)：252.1[M+H]+；Rt＝0.41min.
步骤4：5-氟哌啶-3-甲酸甲酯乙酸盐[顺式异构体]和5-(氟甲基)吡咯烷-3-甲酸甲酯乙酸盐[顺式异构体]的混合物的制备
向在乙酸(14mL)中的1-苄基-5-氟哌啶-3-甲酸甲酯[顺式异构体]和1-苄基-5-(氟甲基)吡咯烷-3-甲酸甲酯[顺式异构体]的混合物(1.8g，7.16mmol)中，加入Pd/C(10wt.％，170mg)和氧化铂(IV)(240mg，1.057mmol)。将混合物在钢瓶中氢化～16hrs(压力：1400psi)。将催化剂通过硅藻土过滤并将澄清的溶液在减压下浓缩，得到5-氟哌啶-3-甲酸甲酯乙酸盐[顺式异构体]和5-(氟甲基)吡咯烷-3-甲酸甲酯乙酸盐[顺式异构体]的粗混合物，为浅黄色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z)：162.0[M+H]+；Rt＝0.19min.
步骤5：(3R，5S)-/(3S，5R)-5-氟-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]和(3R，5R)/(3S，5S)-5-氟甲基-吡咯烷-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]的制备
向粗5-氟哌啶-3-甲酸甲酯(1.584g，7.16mmol)乙酸盐混合物的四氢呋喃(15mL)溶液中加入碳酸钠水溶液(10wt.％，～7mL)至pH～8-9。缓慢加入氯甲酸苄酯(1.145mL，8.02mmol)并加入饱和的碳酸氢钠水溶液。将反应混合物搅拌1hr并用EtOAc稀释。将分离的有机相用饱和的碳酸氢钠水溶液(2x)洗涤并在减压下浓缩。将残留物溶解在EtOAc中，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，40g，16min，EtOAc/庚烷＝0/100至40/60]。合并流分，并在减压下浓缩，得到流分1：1.005g(异构体比例：～90∶10)；流分2：459mg(异构体比例：～50∶50)。将流分2溶解在DMSO中并通过HPLC纯化[～50mg/1mL DMSO]。收集P1和P2流分并冻干，得到5-氟哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的顺式异构体和反式异构体，为无色油状物。
流分1/流分P1：5-氟-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]
产量：143mg；LCMS(m/z)：296.0[M+H]+；Rt＝0.83min.1HNMR(400MHz，DMSO-d6，70℃)δ[ppm]：7.21-7.48(m，5H)，5.07-5.15(m，2H)，4.54-4.76(m，1H)，3.75-3.95(m，2H)，3.58-3.63(m，3H)，3.26-3.38(m，1H)，3.17-3.27(m，1H)，2.68(ttd，J＝9.2，4.5，1.6Hz，1H)，2.27(ddt，J＝17.6，13.2，4.2Hz，1H)，1.89(br.s.，1H)
流分P2：5-氟甲基-吡咯烷-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]
产量：118mg；LCMS(m/z)：296.0[M+H]+；Rt＝0.85min.1HNMR(400MHz，DMSO-d6，70℃)δ[ppm]：7.14-7.58(m，5H)，5.09(d，J＝5.0Hz，2H)，4.46-4.64(m，1H)，4.40(d，J＝3.4Hz，1H)，3.96-4.15(m，1H)，3.80(dd，J＝10.6，8.2Hz，1H)，3.35-3.49(m，1H)，3.16(quin，J＝8.0Hz，1H)，3.09(s，3H)，2.26-2.45(m，1H)，2.04-2.13(m，1H)
步骤6：(3R，5S)-/(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-氟哌啶-3-甲酸[顺式异构体]的制备
向流分1(5-氟-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]；500mg，1.693mmol)的MeOH(10mL)溶液中缓慢加入2N氢氧化钠水溶液(10mL)。将混合物在室温下搅拌～10min。将混合物用1N盐酸水溶液酸化并在减压下除去挥发的溶剂。将残留物用EtOAc稀释。将分离的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的(3R，5S)-/(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-氟哌啶-3-甲酸[顺式异构体](487mg)的混合物，为白色固体，其没有进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z)：282.0[M+H]+；Rt＝0.70min.
(3S，5S)-/(3R，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-(氟甲基)吡咯烷-3-甲酸[顺式异构
体]的合成
向流分P2(5-氟甲基-吡咯烷-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]；70mg，0.237mmol)的MeOH(8mL)溶液中缓慢加入2N氢氧化钠水溶液(8mL)。将混合物在室温下搅拌～5min。将混合物在减压下部分浓缩并用1N盐酸水溶液酸化，并用EtOAc稀释。将分离的水层用EtOAc(2x)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的(3S，5S)-/(3R，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-(氟甲基)吡咯烷-3-甲酸[顺式异构体]的混合物(56mg)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z)：282.1[M+H]+；Rt＝0.71min.
(3R，5S)-/(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸和
(3R，5R)-/(3S，5S)-1-(苄氧基羰基)-5-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸的合成
步骤1：5-(三氟甲基)烟酸甲酯的制备
向5-(三氟甲基)烟酸(1.0g，5.08mmol)的MeOH(10mL)溶液中缓慢加入亚硫酰氯(0.926mL，12.69mmol)。将反应混合物在45℃下搅拌18hrs然后在减压下浓缩。将残留物溶解在二氯甲烷中，并将有机层用饱和的碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的5-(三氟甲基)烟酸甲酯(736mg)，为油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：206.0[M+H]+；Rt＝0.72min.
步骤2：5-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸甲酯(顺式和反式异构体的混合物)的制备
将5-(三氟甲基)烟酸甲酯(736mg，3.59mmol)、Pd/C(10wt.％，36mg)和氧化铂(IV)(52.5mg，0.231mmol)的乙酸(11mL)混合物在钢瓶中、氢气气氛(200psi)下、在25℃搅拌20hrs。将反应混合物通过硅藻土垫层过滤并用MeOH(50mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到粗的5-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸甲酯(936mg；顺式和反式异构体的混合物)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：212.0[M+H]+；Rt＝0.38min.
步骤3：(3R，5S)-/(3S，5R)-5-三氟甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]和(3R，5R)-/(3S，5S)-5-三氟甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[反式异构体]的制备
向粗的5-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸甲酯(953mg，3.61mmol)碳酸钠水溶液(10wt.％；5.13mL)的四氢呋喃(15mL)的混合物中缓慢加入氯甲酸苄酯(0.58mL，4.04mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2hrs。将混合物用EtOAc稀释并再搅拌30min。将分离的有机层用饱和的碳酸氢钠水溶液、水和盐水溶液洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，24g，EtOAc/庚烷＝0/100至30/70]，得到顺式异构体(3R，5S)-/(3S，5R)-5-三氟甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(296mg)，为白色固体，和反式异构体(3R，5R)-/(3S，5S)-5-三氟甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(240mg)，为油状物。
顺式异构体：LCMS(m/z)：346.0[M+H]+；Rt＝1.01min.分析HPLC：Rt＝4.22min.
反式异构体：LCMS(m/z)：346.1[M+H]+；Rt＝0.98min.分析HPLC：Rt＝4.09min.
步骤4-a：(3R，5S)-/(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸[顺式异构体]的制备
向在MeOH(0.9mL)和水(0.6mL)中的顺式异构体(3R，5S)-/(3S，5R)-5-(三氟甲基)哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(296mg，0.857mmol)中，加入6N氢氧化钠水溶液(0.3mL，1.8mmol)。将反应混合物在25℃搅拌1hr并在减压下浓缩至体积为～0.5mL。将混合物用1N盐酸溶液酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到(3R，5S)-和(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸的混合物(254mg)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：332.0[M+H]+；Rt＝0.91min.
步骤4-b：(3R，5R)-/(3S，5S)-1-(苄氧基羰基)-5-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸[反式异构体]的制备
向在MeOH(0.75mL)和水(0.5mL)中的反式异构体(3R，5R)-/(3S，5S)-5-(三氟甲基)哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物中(1.55g，5.32mmol)，加入6N氢氧化钠水溶液(0.25mL，1.5mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2hrs并在减压下浓缩体积至～0.5mL。将混合物用1N盐酸酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到(3R，5R)-/(3S，5S)-1-(苄氧基羰基)-5-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸的混合物(218mg)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：332.1[M+H]+；Rt＝0.83min
(3R，6S)-/(3S，6R)-1-(苄氧基羰基)-6-甲基哌啶-3-甲酸和
(3R，6R)-/(3S，6S)-1-(苄氧基羰基)-6-甲基哌啶-3-甲酸的合成
步骤1：6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(顺式和反式异构体的混合物)的制备
将6-甲基烟酸甲酯(1.52g，10mmol)、Pd/C(10wt.％，100mg)和氧化铂(IV)(150mg，0.661mmol)的乙酸(16mL)混合物在钢瓶中在氢气气氛(200psi)、25℃下搅拌16hrs。将反应混合物通过硅藻土垫层过滤并用MeOH(150mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到粗的6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(2.5g；顺式和反式异构体的混合物)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：158.1[M+H]+；Rt＝0.28min.
步骤2：(3R，6S)-/(3S，6R)-6-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]和(3R，6R)-/(3S，6S)-6-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[反式异构体]的制备
向粗的6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(2.33g，10mmol)、碳酸钠水溶液(10wt.％；20mL)的四氢呋喃(40mL)混合物中缓慢加入氯甲酸苄酯(1.431mL，10.03mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2hrs。将混合物用EtOAc稀释并再搅拌30min。将分离的有机层用饱和的碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，120g，EtOAc/庚烷＝0/100至40/60]，得到顺式异构体(3R，6S)-/(3S，6R)-6-甲基-哌啶1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(1.74g)，为无色油状物，和反式异构体(3R，6R)-/(3S，6S)-6-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(0.725g)，为固体。
顺式异构体：LCMS(m/z)：292.1[M+H]+；Rt＝0.95min.分析HPLC：Rt＝3.91min.
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ[ppm]：1.16(d，J＝7.04Hz，3H)1.58-1.83(m，3H)1.86-1.95(m，1H)2.43(tt，J＝11.74，4.30Hz，1H)2.98(t，J＝12.91Hz，1H)3.68(s，3H)4.15-4.25(m，1H)4.39-4.49(m，1H)5.12(s，2H)7.27-7.38(m，5H).
反式异构体：LCMS(m/z)：292.1[M+H]+；Rt＝0.93min.分析HPLC：Rt＝3.75min.
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ[ppm]：1.11-1.23(m，3H)1.38-1.47(m，1H)1.76-2.06(m，3H)2.66(br.s.，1H)3.19(dd，J＝13.89，4.11Hz，1H)3.58(s，3H)4.33-4.46(m，2H)5.02-5.08(m，1H)5.10-5.19(m，1H)7.27-7.39(m，5H)
步骤3-a：(3R，6S)-/(3S，6r)-1-(苄氧基羰基)-6-甲基哌啶-3-甲酸[顺式异构体]的制备
向顺式异构体(3R，6S)-/(3S，6R)-6-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯(1.55g，4.84mmol)的MeOH(4.5mL)和水(3mL)混合物中加入6N氢氧化钠水溶液(1.5mL，9mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2hrs并在减压下浓缩体积至～2mL。将混合物用1N盐酸酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到(3R，6S)-和(3S，6R)-1-(苄氧基羰基)-6-甲基哌啶-3-甲酸的混合物(1.56g)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：278.1[M+H]+；Rt＝0.79min.
步骤3-b：(3R，6R)-/(3S，6S)-1-(苄氧基羰基)-6-甲基哌啶-3-甲酸[反式异构体]的制备
向反式异构体(3R，6R)-/(3S，6S)-6-甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯(884mg，3.03mmol)的MeOH(3mL)和水(2mL)混合物中加入6N氢氧化钠水溶液(1.0mL，6.0mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2hrs并在减压下浓缩体积至～2mL。将混合物用1N盐酸酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到(3R，6R)-/(3S，6S)-1-(苄氧基羰基)-6-甲基哌啶-3-甲酸的混合物(870mg)，为白色固体，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：278.1[M+H]+；Rt＝0.77min
4-(叔丁氧基羰基)-1，4-氧氮杂环庚烷-6-甲酸的合成
步骤1：6-亚甲基-1，4-氧氮杂环庚烷-4-甲酸叔丁酯的制备
在～5℃(冰浴)下，向氢化钠(60wt.％在矿物油中，2.464g，61.6mmol)的DMF(50mL)混合物中，加入3-氯-2-(氯甲基)丙-1-烯(3.5g，28.0mmol)和(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(4.51g，28.0mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液。将反应混合物在20-30℃下搅拌～2hrs，并在减压下浓缩以除去四氢呋喃。将得到的混合物倾入水中并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，80g，EtOAc/庚烷＝0/100至50/50]，得到6-亚甲基-1，4-氧氮杂环庚烷-4-甲酸叔丁酯(4g)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：1.46(s，9H)3.33-3.62(m，2H)3.62-3.82(m，2H)4.09(m，2H)4.16(m，2H)4.99(m，2H).
步骤2：6-(羟基甲基)-1，4-氧氮杂环庚烷-4-甲酸叔丁酯的制备
在25℃下，经注射器向6-亚甲基-1，4-氧氮杂环庚烷-4-甲酸叔丁酯(3.2g，15.0mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中加入硼烷四氢呋喃(1M四氢呋喃溶液，13.50mL)。将无色混合物在室温下搅拌3hrs。将反应混合物冷却至0℃并连续加入3N氢氧化钠水溶液(5mL，15.00mmol)和过氧化氢水溶液(～30wt.％，2mL，19.6mmol)。将得到的白色混浊的混合物搅拌过夜并用戊烷稀释。将分离的有机层用碳酸钾干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，40g，EtOAc/庚烷＝0/100至50/50]，得到6-(羟基甲基)-1，4-氧氮杂环庚烷-4-甲酸叔丁酯(2.6g)，为无色油状物。
步骤3：6-甲酰基-1，4-氧氮杂环庚烷-4-甲酸叔丁酯的制备
向6-(羟基甲基)-1，4-氧氮杂环庚烷-4-甲酸叔丁酯(0.9g，3.89mmol)的(15mL)溶液中加入戴斯-马丁试剂(Dess-Martin periodinane)(1.650g，3.89mmol)并将混合物在室温下搅拌～64hrs。将反应混合物用二氯甲烷(60mL)稀释，并用水、饱和的碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到为几乎无色油状物的粗的6-甲酰基-1，4-氧氮杂环庚烷-4-甲酸叔丁酯(0.45g)，其直接用于下一步反应。
步骤4：4-(叔丁氧基羰基)-1，4-氧氮杂环庚烷-6-甲酸的制备
在0℃下，向6-甲酰基-1，4-氧氮杂环庚烷-4-甲酸叔丁酯(0.45g，1.963mmol)的叔丁醇(5mL)混合物中加入亚氯酸钠(0.231g，2.55mmol)和磷酸二氢钠(0.306g，2.55mmol)的水(1mL)溶液。将混合物升温至室温并搅拌约16hrs。将混合物过滤并将滤液倾入水中，并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到4-(叔丁氧基羰基)-1，4-氧氮杂环庚烷-6-甲酸(0.73g)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：190.1[M+H，失去t-Bu]+；Rt＝0.60min.1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：1.38-1.57(br.s，9H)2.92-3.24(m，1H)3.28-3.44(m，1H)3.47-4.19(m，7H).
1-(叔丁氧基羰基)氮杂环庚烷-3-甲酸的合成
步骤1：3-(烯丙基氨基)丙酸乙酯的制备
在25℃下，向烯丙胺(2.62mL，35.0mmol)的EtOH(50mL)溶液中加入丙烯酸乙酯(3.81mL，35.0mmol)，并在氩气气氛下将混合物搅拌～16hrs。将混合物在减压下浓缩，得到粗3-(烯丙基氨基)丙酸乙酯(5.5g)，为油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤2：3-(烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)丙酸乙酯的制备
向3-(烯丙基氨基)丙酸乙酯(5.50g，35.0mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中连续地加入二异丙胺(6.11mL，35.0mmol)、DMAP(0.428g，3.50mmol)和二碳酸二叔丁酯(8.13mL，35mmol)。在氩气气氛下，将混合物在室温下搅拌约16hrs。将反应混合物倾入水并用二氯甲烷萃取。将有机萃取物合并，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到3-(烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)丙酸乙酯(9.12g)，为黄色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：258.1[M+H]，158.1[M+H，失去Boc基团]+；Rt＝0.95min.
步骤3：2-((烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)甲基)戊-4-烯酸乙酯的制备
在-78℃下，向3-(烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)丙酸乙酯(2g，7.77mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中缓慢地加入双(三甲基硅烷基)氨基锂(8.55mL，8.55mmol)。将混合物搅拌1hr，并加入烯丙基碘(0.787mL，8.55mmol)。将反应混合物缓慢升至室温并持续搅拌16hrs。将反应混合物倾入水并用EtOAc萃取。将有机萃取物合并，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到2-((烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)甲基)戊-4-烯酸乙酯(2.15g)，为棕色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：198.1[M+H，失去Boc基团]+；Rt＝1.11min.
步骤4：2，3，4，7-四氢-氮杂
-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯的制备
在氩气气氛下，向粗的2-((烯丙基(叔丁氧基羰基)氨基)甲基)戊-4-烯酸乙酯(2.15g，7.23mmol)的二氯甲烷(400mL)溶液中加入二(三环己基膦)亚苄基二氯化钌(IV)(Grubbs I催化剂；0.605g，0.723mmol)。将反应混合物加热回流(45至65℃油浴温度)～5hrs。在减压下除去溶剂并将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，80g，EtOAc/庚烷＝0/100至30/70]，得到2，3，4，7-四氢-氮杂
-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(1.84g)，为黑色油状物。LCMS(m/z)：M+1＝170.1[M+H，失去Boc基团]+；Rt＝0.96min.
步骤5：氮杂环庚烷-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯的制备
向2，3，4，7-四氢-氮杂
-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(1.6g，5.94mmol)的MeOH(40mL)和四氢呋喃(10mL)溶液中加入Pd/C(10wt.％，0.632g)。将混合物在氢气(球)下搅拌约60hrs。将反应混合物用二氯甲烷稀释并通过硅藻土垫层过滤。将滤液在减压下浓缩并将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，80g，EtOAc/庚烷＝0/100至20/80]，得到氮杂环庚烷-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(0.6g)，为棕色油状物。
步骤6：1-(叔丁氧基羰基)氮杂环庚烷-3-甲酸的制备
向氮杂环庚烷-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-乙酯(0.6g，2.211mmol)的四氢呋喃(8mL)溶液中加入1N氢氧化锂水溶液(2.65mL，2.65mmol)。将混合物在室温下搅拌16hrs，然后加热至55℃反应16hrs。将反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并用1N氢氧化钠水溶液(2x20mL)萃取。将水萃取物用10％盐酸水溶液酸化直至pH～5并用EtOAc萃取。将有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的1-(叔丁氧基羰基)氮杂环庚烷-3-甲酸(0.4g)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ[ppm]：1.36-1.52(br.s，9H)1.52-2.10(m，6H)2.65-2.98(m，1H)3.04-3.72(m，3H)3.72-3.97(m，1H).
1-苄基-6，6-二甲基哌啶-3-甲酸的合成
步骤1：1-苯基-N-(丙-2-亚基)甲胺的制备
在温和振摇下，向良好混合的丙酮(4.65g，80mmol)和碱性氧化铝(15g)的混合物中分次加入预先混合的苄胺(8.57g，80mmol)和碱性氧化铝(20g)的混合物。将得到的混合物用手振摇5min然后静置～1.5天。将混合物用二氯甲烷(3x15mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩并在高真空、60℃下进一步干燥1天，得到粗的1-苯基-N-(丙-2-亚基)甲胺(6.3g)，为淡黄色油状物，其直接用于下一步骤。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ.[ppm]：1.93(s，3H)2.09(s，3H)4.46(s，2H)7.20-7.41(m，5H).
步骤2：N-苄基-2-甲基戊-4-烯-2-胺的制备
在0℃下，向1-苯基-N-(丙-2-亚基)甲胺(1.472g，10mmol)的乙醚(20mL)溶液中缓慢加入烯丙基溴化镁(1m四氢呋喃溶液，22mL)。将反应混合物在0℃下搅拌1hr并在室温下搅拌3hrs。将混合物用饱和的氯化铵水溶液稀释并将分离的水层用乙醚萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的N-苄基-2-甲基戊-4-烯-2-胺(1.75g)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ[ppm]：1.14-1.31(m，6H)2.20-2.40(m，2H)3.71-3.77(m，4H)5.03-5.15(m，2H)5.80-5.90(m，1H)7.20-7.36(m，5H).
步骤3：2-((苄基(2-甲基戊-4-烯-2-基)氨基)甲基)丙烯酸乙酯的制备
向N-苄基-2-甲基戊-4-烯-2-胺(284mg，1.5mmol)的乙腈(4mL)溶液中加入粉末状碳酸钾(498mg，2.4mmol)和2-(溴甲基)丙烯酸乙酯(319mg，1.65mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物过滤并将滤液在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，24g，EtOAc/庚烷＝0/100至25/75]，得到2-((苄基(2-甲基戊-4-烯-2-基)氨基)甲基)丙烯酸乙酯(194mg)，为澄清液体。LCMS(m/z)：302.2[M+H]+；Rt＝0.73min.
步骤4：1-苄基-6，6-二甲基-1，2，5，6-四氢吡啶-3-甲酸乙酯的制备
在氮气气氛下，向2-((苄基(2-甲基戊-4-烯-2-基)氨基)甲基)丙烯酸乙酯(194mg，0.644mmol)的甲苯(6.5mL)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(135mg，0.708mmol)。将混合物加热至50℃反应30min，加入(1，3-双(2，4，6-三甲基苯基)-2-(咪唑烷亚基)-(二氯苯基亚甲基)-(三环己基膦)钌(第二代的Grubbs催化剂，27.3mg)并在55℃下持续加热5hrs。将混合物冷却至室温，用饱和的碳酸钠水溶液(2mL)稀释并通过硅藻土垫层过滤。将分离的有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，24g，EtOAc/庚烷＝10/90至25/75]，得到1-苄基-6，6-二甲基-1，2，5，6-四氢吡啶-3-甲酸乙酯(117mg)，为澄清液体。LCMS(m/z)：274.1[M+H]+；Rt＝0.58min.
步骤5：1-苄基-6，6-二甲基哌啶-3-甲酸乙酯的制备
向1-苄基-6，6-二甲基-1，2，5，6-四氢吡啶-3-甲酸酯(117mg，0.428mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入镁(镁屑，41.6mg，1.712mmol)并将混合物在33℃下剧烈搅拌5hrs。将混合物在饱和的氯化铵水溶液(20mL)和乙醚(20mL)间分配。将分离的水层用乙醚(3x10mL)萃取并将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的1-苄基-6，6-二甲基哌啶-3-甲酸乙酯(115mg)，为淡黄色液体，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：276.2[M+H]+；Rt＝0.59min.
步骤6：1-苄基-6，6-二甲基哌啶-3-甲酸的制备
将1-苄基-6，6-二甲基-1，2，5，6-四氢吡啶-3-甲酸酯(118mg，0.428mmol)和氢氧化锂(102mg，4.28mmol)的四氢呋喃(1mL)、MeOH(1mL)和水(0.5mL)混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用1N盐酸水溶液酸化直至pH～5-6并用EtOAc(5x20mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的1-苄基-6，6-二甲基哌啶-3-甲酸(55mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：248.2[M+H]+；Rt＝0.38min.
1-(叔丁氧基羰基)-6，6-二甲基哌啶-3-甲酸的合成
步骤1：6，6-二甲基哌啶-3-甲酸甲酯的制备
将1-苄基-6，6-二甲基哌啶-3-甲酸甲酯(55mg，0.210mmol)、甲酸铵(66.3mg，1.052mmol)和Pd/C(10wt.％，水50wt.％，6mg)的MeOH(1mL)混合物在70℃下搅拌30min。将混合物冷却至室温过滤除去Pd/C和固体。滤液在高真空下浓缩，得到粗的6，6-二甲基哌啶-3-甲酸甲酯(36mg)，为淡黄色液体，其没有进一步纯化直接使用。LCMS(m/z)：171.4[M+H]+；Rt＝0.21min.
步骤2：6，6-二甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯的制备
向6，6-二甲基哌啶-3-甲酸甲酯(36.0mg，0.21mmol)和三乙胺(0.088mL，0.630mmol)的四氢呋喃(1.5mL)混合物中加入BOC-酐(0.059mL，0.252mmol)。将反应混合物在35℃下搅拌过夜，并在减压下浓缩，得到粗的6，6-二甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(61mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤3：1-(叔丁氧基羰基)-6，6-二甲基哌啶-3-甲酸的制备
将6，6-二甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(60mg，0.221mmol)和氢氧化锂(5.30mg，0.221mmol)的四氢呋喃(1mL)、MeOH(1mL)和水(0.5mL)混合物室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩除去大部分的有机溶剂。将残留物用1N盐酸水溶液酸化直至pH～5并用EtOAc(2x20mL)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的1-(叔丁氧基羰基)-6，6-二甲基哌啶-3-甲酸(21mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。
1-(苄氧基羰基)-6-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸的合成
步骤1：6-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸乙酯(顺式和反式异构体的混合物)的制备
将6-(三氟甲基)烟酸乙酯(2.2g，10mmol)、Pd/C(10wt.％，100mg)和氧化铂(IV)(150mg，0.661mmol)的乙酸(30mL)混合物在钢瓶中、氢气气氛(200psi)、25℃下搅拌24hrs。将反应混合物通过硅藻土垫层过滤并用MeOH(150mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到粗的6-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸乙酯(776mg；顺式和反式异构体的混合物)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：226.1[M+H]+；Rt＝0.36min.
步骤2：6-三氟甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-乙酯[4种异构体的混合物]的制备
向粗的6-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸乙酯(766mg，3.4mmol)、碳酸钠水溶液(10wt.％，5mL)的四氢呋喃(15mL)混合物，缓慢加入氯甲酸苄酯(0.583mL，4.08mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌24hrs。将混合物用EtOAc稀释并再搅拌30min。将分离的有机层用饱和的碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，24g，EtOAc/庚烷＝0/100至30/70]，得到6-三氟甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-乙酯的顺式和反式异构体的混合物(826mg)，为油状物。LCMS(m/z)：316.1[M+H]+；Rt＝1.07min.
步骤3：1-(苄氧基羰基)-6-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸[4种异构体的混合物]的制备
向1-苄基6-三氟甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-乙酯(823mg，2.38mmol)的MeOH(1.8mL)和水(1.2mL)中加入6N氢氧化钠水溶液(0.6mL，3.6mmol)。将得到的反应混合物在25℃下搅拌1.5hrs并在减压下浓缩体积至～0.5mL。将混合物用1N盐酸溶液酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到1-(苄氧基羰基)-6-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸(782mg，4种异构体的混合物)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：332.0[M+H]+；Rt＝0.90min.
(3R，6R)-/(3S，6S)-1-(苄氧基羰基)-6-乙基哌啶-3-甲酸和
(3R，6S)-/(3R，6S)-1-(苄氧基羰基)-6-乙基哌啶-3-甲酸的合成
步骤1：6-乙基烟酸甲酯的制备
向6-氯烟酸甲酯(5.0g，29.1mmol)、乙酰丙酮铁(1.0g，2.83mmol)的四氢呋喃(160mL)和NMP(1mL)溶液中缓慢加入乙基溴化镁(1M的四氢呋喃溶液，1.09mL，7.27mmol)溶液。将反应混合物在25℃下搅拌3hrs。将反应混合物用饱和的氯化铵水溶液稀释并再搅拌30min。将混合物用EtOAc稀释，将分离的有机层用饱和的氯化铵水溶液、水和盐水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，80g，EtOAc/庚烷＝0/100至30/70]，得到6-乙基烟酸甲酯(2.48g)，为油状物。LCMS(m/z)：166.1[M+H]+；Rt＝0.32min.
步骤2：6-乙基哌啶-3-甲酸甲酯(顺式和反式异构体的混合物)的制备
将6-乙基烟酸甲酯(2.48g，15mmol)、Pd/C(10wt.％，100mg)和氧化铂(IV)(150mg，0.661mmol)的乙酸(30mL)混合物在钢瓶中、氢气气氛(200psi)下、在25℃搅拌16hrs。将反应混合物通过硅藻土垫层过滤并用MeOH(150mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到粗的6-乙基哌啶-3-甲酸甲酯(4.45f；顺式和反式异构体的混合物)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：172.1[M+H]+；Rt＝0.31min.
步骤3：(3R，6S)-/(3S，6R)-6-乙基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]和(3R，6R)-/(3S，6S)-6-乙基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[反式异构体]的制备
向粗的6-乙基哌啶-3-甲酸甲酯(4.5g，15mmol)、碳酸钠水溶液(10wt.％，30mL)的四氢呋喃(60mL)混合物中缓慢加入氯甲酸苄酯(2.14mL，15mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2hrs。将混合物用EtOAc稀释并再搅拌30min。将分离的有机层用饱和的碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，120g，EtOAc/庚烷＝0/100至30/70]，得到顺式异构体(3R，6S)-/(3S，6R)-6-乙基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(3.03g)，为无色油状物，和反式异构体(3R，6R)-/(3S，6S)-6-乙基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(1.23g)，为固体。
顺式异构体：LCMS(m/z)：306.1[M+H]+；Rt＝1.01min.分析HPLC：Rt＝4.15min.
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ[ppm]：0.83(t，J＝6.85Hz，3H)1.49(d，J＝5.87Hz，1H)1.66-1.76(m，4H)1.85-1.93(m，1H)2.38-2.49(m，J＝11.79，11.79，4.21，3.91Hz，1H)2.90(d，J＝1.96Hz，1H)3.67(s，3H)4.16-4.29(m，2H)5.12(br.s.，2H)7.28-7.40(m，5H).
反式异构体：LCMS(m/z)：306.1[M+H]+；Rt＝0.98min.分析HPLC：Rt＝4.01min.
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ[ppm]：0.83(t，J＝7.43Hz，3H)1.43-1.57(m，2H)1.71-1.93(m，3H)1.94-2.02(m，1H)2.64(br.s.，1H)3.11(dd，J＝14.09，3.91Hz，1H)3.49-3.69(m，3H)4.11-4.20(m，1H)4.45(d，J＝13.69Hz，1H)5.03-5.19(m，2H)7.19-7.40(m，5H).
步骤3-a：(3R，6R)-/(3S，6S)-1-(苄氧基羰基)-5-乙基哌啶-3-甲酸[反式异构体]的制备
向反式异构体(3R，6R)-/(3S，6S)-6-乙基哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯(1.23g，3.1mmol)的MeOH(3mL)和水(2mL)混合物中，加入6N氢氧化钠水溶液(1.0mL，6mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2.5hrs并在减压下浓缩体积至～2mL。将混合物用1N盐酸水溶液酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的(3R，6R)-/(3S，6S)-1-(苄氧基羰基)-6-乙基哌啶-3-甲酸的混合物(1.02g)，为白色固体，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：292.2[M+H]+；Rt＝0.85min.
步骤3-b：(3R，6S)-/(3S，6R)-1-(苄氧基羰基)-6-乙基哌啶-3-甲酸[顺式异构体]的制备
向顺式异构体(3R，6S)-/(3S，6R)-6-乙基哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯(0.92g，3.0mmol)的MeOH(3mL)和水(2mL)混合物中加入6N氢氧化钠水溶液(1.0mL，6mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1.5hrs并在减压下浓缩体积至～2mL。将混合物用1N盐酸水溶液酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的(3R，6S)-/(3S，6R)-1-(苄氧基羰基)-6-乙基哌啶-3-甲酸的混合物(0.91g)，为油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：292.1[M+H]+；Rt＝0.87min.
(3R，6S)-/(3S，6R)-1-(苄氧基羰基)-6-(甲氧基甲基)哌啶-3-甲酸的合成
步骤1：6-(羟基甲基)烟酸甲酯的制备
在0℃下，向吡啶-2，5-二甲酸二甲酯(3.08g，15.78mmol)和氯化钙(7.01g，63.1mmol)的四氢呋喃(33mL)和EtOH(67mL)混合物中分次加入硼氢化钠(1.493g，39.5mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌12hrs。将混合物倾入冰/水中，用二氯甲烷(400mL)稀释并剧烈搅拌15分钟。将分离的有机层用硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩，得到6-(羟基甲基)烟酸甲酯(1.2g)，为类白色固体，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：168.0[M+H]+；Rt＝0.26min
步骤2：6-(氯甲基)烟酸甲酯的制备
将6-(羟基甲基)烟酸甲酯(250mg，1.496mmol)和亚硫酰氯(1mL，13.70mmol)的二氯甲烷(2mL)混合物在45℃下搅拌3hrs并在减压下浓缩。将残留物溶取在二氯甲烷(25mL)中，超声处理并在减压下浓缩。重复三次该操作，并将残留物高真空干燥，得到6-(氯甲基)烟酸甲酯(266mg)，其没有进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z)：186.0[M+H]+；Rt＝0.63min.
步骤3：6-(甲氧基甲基)烟酸甲酯的制备
向6-(氯甲基)烟酸甲酯(250mg，1.347mmol)的MeOH(2mL)溶液中加入甲醇钠(25wt.％的MeOH溶液；1mL)。将混合物在75℃下加热30min并在减压下浓缩。将残留物溶解在EtOAc中并将有机层用饱和的碳酸氢钠水溶液(3x)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，12g，EtOAc/庚烷＝0/100至70/30]，得到6-(甲氧基甲基)烟酸甲酯(129mg).LCMS(m/z)：182.0[M+H]+；Rt＝0.43min.
步骤4：6-(甲氧基甲基)哌啶-3-甲酸甲酯(顺式和反式异构体的混合物)的制备
将6-(甲氧基甲基)烟酸甲酯(250mg，1.380mmol)和氧化铂(IV)(100mg，0.440mmol)的乙酸(10mL)混合物在钢瓶中、氢气气氛(200psi)下、在25℃搅拌12hrs。将反应混合物通过硅藻土垫层过滤并用二氯甲烷(50mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到粗的6-(甲氧基甲基)哌啶-3-甲酸甲酯(266mg；顺式和反式异构体的混合物)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：188.1[M+H]+；Rt＝0.30min.
步骤5：(3S，6R)-/(3R，6S)-6-甲氧基甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[反式异构体]和(3R，6R)-/(3S，6S)-6-甲氧基甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]的制备
向6-(甲氧基甲基)哌啶-3-甲酸甲酯(260mg，1.389mmol)和碳酸钠水溶液(10wt.％；～4mL)的四氢呋喃(4mL)混合物中缓慢加入氯甲酸苄酯(0.297mL，2.083mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1hr。将混合物用EtOAc稀释并再搅拌10min。将分离的有机层用硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，12g，EtOAc/庚烷＝0/100至70/30]，得到反式异构体(3S，6R)-/(3R，6S)-6-甲氧基甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(256mg)和顺式异构体(3R，6R)-/(3S，6S)-6-甲氧基甲基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(200mg)。
顺式异构体：LCMS(m/z)：322.1[M+H]+；Rt＝0.89min.分析HPLC：Rt＝4.20min.
反式异构体：LCMS(m/z)：322.1[M+H]+；Rt＝0.86min.分析HPLC：Rt＝3.98min.
步骤6-a：(3S，6R)-/(3R，6S)-1-(苄氧基羰基)-6-(甲氧基甲基)哌啶-3-甲酸[反式异构体]的制备
向6-(甲氧基甲基)哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯(40mg，0.124mmol)的MeOH(3mL)溶液中加入1N氢氧化钠水溶液(3mL)。将反应混合物在25℃下搅拌12hrs并在减压下浓缩体积至～2mL。将混合物用12N盐酸酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩，得到(3S，6R)-/(3R，6S)-1-(苄氧基羰基)-6-(甲氧基甲基)哌啶-3-甲酸的混合物(35mg)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：308.1[M+H]+；Rt＝0.73min.
(3S，4R)-1-(苄氢基羰基)-4-异丙氧基吡咯烷-3-甲酸的合成
步骤1：(3R，4S)-3-异丙氧基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的制备
向(3R，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(3.0g，12.13mmol)的乙腈(30mL)溶液中加入2-碘丙烷(20.6g，121mmol)和氧化银(I)(8.43g，36.4mmol)。将混合物在室温下搅拌18hrs。过滤固体并将滤液在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(3R，4S)-3-异丙氧基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(870mg).LCMS(m/z)：290.0[M+H]+；Rt＝1.03min.
步骤2：(3S，4R)-1-(苄氧基羰基)-4-异丙氧基吡咯烷-3-甲酸的制备
将(3R，4S)-3-异丙氧基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(550mg，1.90mmol)、三氯化钌(496mg，1.90mmol)和高碘酸钠(1.63g，7.60mmol)的四氯化碳(10mL)、水(10mL)和乙腈(10mL)混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用二氯甲烷(200mL)和水(200mL)稀释。将混合物过滤并将分离的水层用二氯甲烷(2x)洗涤。将所有有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，EtOAc/庚烷＝0/100至90/10]，得到(3S，4R)-1-(苄氧基羰基)-4-异丙氧基吡咯烷-3-甲酸(350mg).LCMS(m/z)：308.0[M+H]+；Rt＝0.82min.
(3R，5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-((2-甲氧基乙氧基)甲基)吡咯烷-3-甲酸的
合成
步骤1：(2S，4S)-4-(叔丁基二苯基-硅烷基氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯的制备
在室温下，向(2S，4S)-4-羟基-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(2.54g，10.25mmol)的DCM(20mL)溶液中加入咪唑(1.187g，17.43mmol)然后加入叔丁基二苯基氯硅烷(2.90mL，11.28mmol)，并将反应混合物搅拌18hrs。将反应混合物过滤并将滤液用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到(2S，4S)-4-(叔丁基二苯基-硅烷基氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(4.9g，10.09mmol，98％产率).LCMS(m/z)：506.2[M+H]+；Rt＝1.46min.
步骤2：(2S，4S)4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2S，4S)-4-(叔丁基二苯基-硅烷基氧基)-吡咯烷-1，2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(5.6g，11.58mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中加入硼氢化钠(0.876g，23.16mmol)并将混合物在70℃下搅拌4hrs。将反应混合物冷却至室温并用EtOAc(100mL)稀释。将混合物用水、碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，40g，EtOAc/庚烷＝0/100至70/30]，得到(2S，4S)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.9g).LCMS(m/z)：456.2[M+H]+；Rt＝1.30min.
步骤3：(2S，4S)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2S，4S)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.3g，2.86mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中小心地加入氢化钠(60wt.％在矿物油中，142mg，3.42mmol)，并将混合物在25℃下搅拌1hr。向混合物中加入溴乙基甲基醚(0.714g，5.14mmol)并在25℃下持续搅拌18hrs。将反应混合物用EtOAc稀释，用水、饱和的碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(2S，4S)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(800mg).LCMS(m/z)：514.2[M+H]+；Rt＝1.41min.
步骤4：(2S，4S)-4-羟基-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向(2S，4S)-4-(叔丁基二苯基硅烷基氧基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(310mg，0.603mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入氟化四丁基铵(316mg，1.207mmol)并将混合物在25℃下搅拌2hrs。将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释并用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，24g，EtOAc/庚烷＝0/100至50/50]，得到(2S，4S)-4-羟基-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(140mg).LCMS(m/z)：298.1[M+Na]+；Rt＝0.67min.
步骤5：(2S，4S)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-4-(甲苯磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
将(2S，4S)-4-羟基-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.508mmol)和甲苯磺酰氯(291mg，1.525mmol)的吡啶(5mL)混合物在25℃下搅拌18hrs。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，用水(2x)和盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在二氯甲烷(2mL)中并通过柱色谱[硅胶]进行纯化，得到(2S，4S)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-4-(甲苯磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(180mg，LCMS(m/z)：430.1[M+H]+；Rt＝1.06min.
步骤6：(2S，4R)-4-氰基-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的制备
向2S，4S)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-4-(甲苯磺酰基氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.419mmol)的DMF(2mL)溶液中加入氰化四丁基铵(343mg，1.26mmol)并将混合物在60℃下搅拌18hrs。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(2S，4R)-4-氰基-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(123mg).LCMS(m/z)：285.1[M+H]+；Rt＝0.82min.
步骤7：(3R，5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-吡咯烷-3-甲酸的制备
将(2S，4R)-4-氰基-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(123mg，0.433mmol)、6N氢氧化钠水溶液(2mL，12mmol)和EtOH(2mL)的混合物在封闭的瓶中、在85℃下搅拌3hrs。将反应混合物冷却至室温，用1N盐酸水溶液酸化直至pH～5，并用二氯甲烷(3x100mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩并将残留物溶解在EtOAc中。将有机层用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱[硅胶]纯化，得到(3R，5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-((2-甲氧基乙氧基)甲基)吡咯烷-3-甲酸(29mg).LCMS(m/z)：326.0[M+Na]+；Rt＝0.69min.
(3R，5S)-/(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-甲氧基哌啶-3-甲酸和
(3R，5R)-/(3S，5S)-1-(苄氧基羰基)-5-甲氧基哌啶-3-甲酸的合成
步骤1：5-甲氧基哌啶-3-甲酸甲酯(顺式和反式异构体的混合物)的制备
将5-甲氧基烟酸甲酯(1g，5.98mmol)、Pd/C(10wt.％，90mg)和氧化铂(IV)(135mg，0.595mmol)的乙酸(18mL)混合物在钢瓶中、氢气气氛(200psi)下、在25℃搅拌6hrs。将反应混合物通过硅藻土垫层过滤，并用MeOH(100mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到粗的5-甲氧基哌啶-3-甲酸甲酯(1.53g；顺式和反式异构体的混合物)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：174.1[M+H]+；Rt＝0.26min.
步骤2：(3R，5S)-/(3S，5R)-5-甲氧基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[顺式异构体]和(3R，5R)-/(3S，5S)-5-甲氧基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯[反式异构体]的制备
向粗的5-甲氧基哌啶-3-甲酸甲酯(1.5g，6.06mmol)、碳酸钠水溶液(10wt.％，12mL)的四氢呋喃(38mL)混合物中缓慢加入氯甲酸苄酯(1.09mL，7.27mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌90min。将混合物用EtOAc稀释并再搅拌30min。将分离的有机层用饱和的碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱纯化[硅胶，120g，EtOAc/庚烷＝0/100至50/50]，得到顺式异构体(3R，5S)-/(3S，5R)-5-甲氧基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(441mg)，为无色油状物，和顺式/反式异构体5-甲氧基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的混合物(596mg)，为无色油状物。
顺式异构体：LCMS(m/z)：308.1[M+H]+；Rt＝0.89min.分析HPLC：Rt＝3.510min.
顺/反式异构体：LCMS(m/z)：308.0[M+H]+；Rt＝0.83min.分析HPLC：Rt＝3.516min.
步骤3-a：(3R，5S)-/(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-甲氧基哌啶-3-甲酸[顺式异构体]的制备
向顺式异构体(3R，5S)-/(3S，5R)-5-甲氧基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯(440mg，1.43mmol)的MeOH(1.44mL)和水(0.96mL)混合物中加入6N氢氧化钠水溶液(0.48mL，2.88mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1hr并在减压下浓缩体积至～0.5mL。将混合物用1N盐酸酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到(3R，5S)-/(3S，5R)-1-(苄氧基羰基)-5-甲氧基哌啶-3-甲酸的混合物(323g)，为白色固体，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：294.0[M+H]+；Rt＝0.71min.
步骤3-b：1-(苄氧基羰基)-5-甲基哌啶-3-甲酸[顺式/反式异构体]的制备
向5-甲氧基-哌啶-1，3-二甲酸1-苄酯3-甲酯的顺式/反式异构体(596mg，1.94mmol)的MeOH(1.95mL)和水(1.3mL)混合物中加入6N氢氧化钠水溶液(0.65mL，3.9mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌2hrs并在减压下浓缩体积至～0.5mL。将混合物用1N盐酸酸化直至pH～4，用EtOAc稀释并搅拌10min。将分离的有机层用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到1-(苄氧基羰基)-5-甲氧基哌啶-3-甲酸的顺式/反式异构体的混合物(530mg)，为无色油状物，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：294.0[M+H]+；Rt＝0.71min.
实施例1
(R)-N-(5-氯-4-苯基吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺
步骤1：(R)-3-(5-氯-4-苯基吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
向(R)-3-(5-氯-4-碘吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(24mg，0.052mmol)中加入苯基硼酸(18.85mg，0.155mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(10.52mg，0.013mmol)、DME(0.4mL)，然后加入2M碳酸钠水溶液(0.129mL，0.258mmol)。将反应混合物在95℃下搅拌90min。将混合物冷却至室温并用EtOAc(5mL)和甲醇(1mL)稀释，过滤并在减压下浓缩。将残留物通过HPLC纯化。合并流分并冻干，得到为其三氟乙酸盐的(R)-3-(5-氯-4-苯基吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。LCMS(m/z)：416.2[M+H]+；Rt＝1.10min.
步骤2：(R)-N-(5-氯-4-苯基吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺的制备
向(R)-3-(5-氯-4-苯基吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.052mmol)中加入4M氯化氢的二
烷溶液(1mL，4.00mmol)并将混合物在室温下搅拌1hr。减压下除去溶剂，将残留物溶解在DMSO(1mL)中，通过注射器式滤器过滤并通过HPLC纯化。合并流分并冻干，得到(R)-N-(5-氯-4-苯基吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺(7.6mg)，为其三氟乙酸盐。LCMS(m/z)：316.1[M+H]+；Rt＝0.66min.
实施例4
(R)-N-(5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺
步骤1：(R)-3-(5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
将(R)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(152mg，0.665mmol)、HATU(361mR，0.950mmol)的乙腈(1.5mL)和NMP(0.5mL)混合物在室温下搅拌～1hr。向该混合物中加入5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶-2-胺(80mg，0.317mmol)的NMP(0.5mL)溶液和DIPEA(0.254mL，1.456mmol)，并将得到的混合物在封闭管中在70℃下加热～36hrs。将混合物冷却至室温并用EtOAc(～40mL)稀释。将有机相用饱和的碳酸氢盐水溶液和盐水洗涤，并在减压下浓缩。将残留物溶解在DMSO(～2.5mL)中，通过注射器式滤器过滤，并通过HPLC纯化。将流分冻干，得到(R)-3-(5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(52.5mg).LCMS(m/z)：464.2/466.2[M+H]+；Rt＝1.12min.
步骤2：(R)-N-(5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺的制备
向(R)-3-(5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(50mg)的MeOH(2mL)溶液中加入4M氯化氢的二
烷溶液(6mL)。将混合物在室温下搅拌～30min。将混合物在减压下浓缩，溶解在DMSO(～2.6mL)中，通过注射器式滤器过滤，并通过HPLC纯化。将流分冻干，得到(R)-N-(5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基苯基)吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺(25.4mg)，为其三氟乙酸盐。LCMS(m/z)：364.1/366.0.[M+H]+；Rt＝0.72min.
实施例7
(R)-N-(5-氯-4-(3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-基)哌
啶-3-甲酰胺
步骤1：(R)-3-(4-(3-(叔丁氧基羰基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)-5-氯吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
在0℃下，向(R)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(63.4mg，0.276mmol)的DCM(0.8mL)溶液中加入1-氯-N，N，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(40.3mg，0.301mmol)，并将混合物在室温下搅拌30min。将混合物加入到[3-(2-氨基-5-氯-吡啶-4-基)-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(105mg，0.251mmol)的THF(0.8mL)和吡啶(0.026mL，0.324mmol)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌18hrs。将混合物用EtOAc(100mL)稀释，用饱和的碳酸氢钠水溶液(1x)和水(2x)洗涤，过滤并在减压下浓缩，得到粗的(R)-3-(4-(3-(叔丁氧基羰基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)-5-氯吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，其没有进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z)：629.4[M+H]+；Rt＝1.28min.
步骤2：(R)-N-(5-氯-4-(3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺的制备
向(R)-3-(4-(3-(叔丁氧基羰基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)-5-氯吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.251mmol)中加入4M氯化氢的二
烷溶液(6.0mL，24.0mmol)并将混合物在室温下搅拌1hr。将混合物在减压下浓缩并将残留物溶解在DMSO(2mL)中，并通过HPLC纯化，得到(R)-N-(5-氯-4-(3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺，为其三氟乙酸盐。将该三氟乙酸盐溶解在DCM(150mL)中，用饱和的碳酸氢钠水溶液(2x)、水(2x)和盐水(1x)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物溶解在乙腈/水(1/1)中，通过注射器式滤器过滤，并冻干，得到(R)-N-(5-氯-4-(3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)-吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺(64mg).LCMS(m/z)：[M+H]+；Rt＝0.62min.
实施例9
(R)-N-(5-氯-4-(3-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-4-基)-甲基)氨基)苯基)-吡啶-2-
基)哌啶-3-甲酰胺
步骤1：(R)-3-(5-氯-4-(3-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
将(R)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(136mg，0.594mmol)、HATU(323mg，0.849mmol)的乙腈(1.5mL)和NMP(0.5mL)混合物在室温下搅拌1hr。然后将混合物与5-氯-4-(3-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-胺(95mg，0.283mmol)的NMP(0.5mL)和DIPEA(0.227mL，1.301mmol)溶液合并，并将得到的混合物在封闭管中在约70℃下加热～16hrs。将混合物冷却至室温并用EtOAc(～40mL)稀释。将有机相分离并用饱和的碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，并在减压下浓缩。将残留物溶解在DMSO(～2.5mL)中，通过注射器式滤器过滤并通过HPLC纯化。将流分冻干，得到(R)-3-(5-氯-4-(3-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。LCMS(m/z)：547.2/549.2[M+H]+；Rt＝1.20min.
步骤2：(R)-N-(5-氯-4-(3-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-4-基)-甲基)氨基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺的制备
向(R)-3-(5-氯-4-(3-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的MeOH(2mL)溶液中加入4M氯化氢的二
烷溶液(6mL，40.0mmol)，并将得到的混合物在室温下搅拌～30min，并在减压下浓缩。将残留物溶解在DMSO(～2.6mL)中，通过注射器式滤器过滤并通过HPLC纯化。将流分冻干，得到为其三氟乙酸盐的(R)-N-(5-氯-4-(3-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺(27.7mg)。LCMS(m/z)：447.2/449.1[M+H]+；Rt＝0.77min.
实施例12
(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{2-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡
啶-2-基)-酰胺
步骤1：[3-(2-氨基-5-氯-吡啶-4-基)-4-氟-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯的制备
将[3-(5-氯-2-氟-吡啶-4-基)-4-氟-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(140mg，0.32mmol)和氢氧化铵水溶液(28wt.％，1.0mL)的DMSO(1.5mL)混合物在封闭管中在130℃下加热～5hrs。将混合物冷却至室温并用EtOAc(50mL)稀释，用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗的[3-(2-氨基-5-氯-吡啶-1-基)-4-氟-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(180mg)，为黄色油状物，其没有进一步纯化直接使用。LCMS(m/z)：436.2/438.1[M+H]+；Rt＝0.78min.
步骤2：(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{2-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺的制备
向(R)-1-Boc-哌啶-3-甲酸(29mg，0.12mmol)的DCM(1.0mL)溶液中加入1-氯-N，N-三甲基-1-丙烯基胺(16.9mg，0.12mmol)。将得到的溶液在环境温度下搅拌～10min并加入到[3-(2-氨基-5-氯-吡啶-4-基)-4-氟-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.12mmol)和吡啶(10.9mg，0.14mmol)的DCM(1.0mL)溶液中。将得到的反应混合物搅拌约1hr。将混合物用EtOAc(20mL)稀释，用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。向残留物中加入三氟乙酸(30体积％在DCM中，10mL)。将混合物搅拌15min并在减压下浓缩。将残留物通过HPLC纯化，得到为其三氟乙酸盐的(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{2-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺(10.5mg)。LCMS(m/z)：447.1/449.2[M+H]+；Rt＝0.64min.
实施例13
(R)-N-(5-氯-4-(4-氯-3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)-吡啶-2-
基)哌啶-3-甲酰胺
步骤1：(R)-3-(4-(3-(叔丁氧基羰基-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-4-氯苯基)-5-氯吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
将(R)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(106mg，0.464mmol)、HATU(252mg，0.663mmol)的乙腈(1.5mL)和NMP(0.500mL)混合物在室温下搅拌～30min。然后将混合物与[5-(2-氨基-5-氯-吡啶-4-基)-2-氯-苯基]-(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.221mmol)的NMP(0.5mL)和DIPEA(0.178mL，1.017mmol)溶液合并。将得到的混合物在封闭管中在约70℃下加热～16hr。将搅拌～1hr的另外的(R)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(106mg，0.464mmol)、HATU(252mg，0.663mmol)的乙腈(0.75mL)和NMP(0.6mL)混合物加入反应混合物中，然后加入DIPEA(0.178mL，1.017mmol)，并在70℃下持续搅拌～20hrs。将混合物冷却至室温，然后用EtOAc(～40mL)稀释。将有机相分离，用饱和的碳酸氢盐水溶液、盐水洗涤并在减压下浓缩。将残留物溶解在DMSO(～2.5mL)中，通过注射器式滤器过滤，并通过HPLC纯化。将流分冻干，得到(R)-3-(4-(3-(叔丁氧基羰基-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-4-氯苯基)-5-氯吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(72mg).LCMS(m/z)：663.3/665.3[M+H]+；Rt＝1.29min.
步骤2：(R)-N-(5-氯-4-(4-氯-3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺的制备
向(R)-3-(4-(3-(叔丁氧基羰基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-4-氯苯基)-5-氯吡啶-2-基氨基甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的MeOH(2mL)溶液中加入4M氯化氢的二
烷溶液(6mL)。将得到的混合物在室温下搅拌～30min。将混合物在减压下浓缩并将残留物溶解在DMSO(1.3mL)中，通过注射器式滤器过滤，并通过HPLC纯化。将流分冻干，得到为其三氟乙酸盐的(R)-N-(5-氯-4-(4-氯-3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)-吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺(17.5mg)。LCMS(m/z)：463.1/465.1[M+H]+；Rt＝0.84min.
表1提供了采用适宜的原料并按照以上描述的方法制备的一系列化合物。
表1
下面表2提供了代表性化合物的1H NMR数据。
表2
下面表3的化合物可以采用适宜的原料并按照本领域技术人员已知的方法或上面描述的方法来制备。
表3
生物学方法
Cdk9/细胞周期蛋白T1 IMAP方案
本发明化合物的生物学活性可以通过下面描述的测定法来测定。
Cdk9/细胞周期蛋白T1购买自Millipore，目录#14-685。在该测定法中最终总蛋白浓度是4nM。5TAMRA-cdk7tide肽底物，即5TAMRA-YSPTSPSYSPTSPSYSTPSPS-COOH，购买自MolecularDevices，目录#R7352。肽底物的最终浓度是100nM。ATP底物(腺苷-5’-三磷酸)购买自Roche Diagnostics，目录#1140965。ATP底物的最终浓度是6uM。IMAP(用于磷化学的固定金属测定(Immobilized Metal Assay forPhosphochemicals))前进结合试剂(Progressive Binding reagent)购买自Molecular Devices，目录#R8139。荧光偏振(FP)用于检测。5TAMRA-cdk7tide肽被Cdk9/细胞周期蛋白T1激酶采用ATP底物来磷酸化。磷酸-5TAMRA-cdk7tide肽底物与IMAP前进结合试剂结合。IMAP前进结合试剂的结合改变了5TAMRA-cdk7tide肽的荧光偏振，该荧光偏振在531nm激发和595nm FP发射处测量。测定法在100mM Tris，pH＝7.2、10mM MgCl2、0.05％NaN3、0.01％吐温-20、1mM二硫苏糖醇和2.5％二甲基亚砜中进行。IMAP前进结合试剂以1∶800稀释在100％1X溶液A(来自Molecular Devices，目录#R7285)中。
一般方案如下：向10uL的cdk9/细胞周期蛋白T1中加入0.5uL的测试化合物的二甲基亚砜溶液。将5TAMRA-cdk7tide和ATP混合。将10uL的5TAMRA-cdk7tide/ATP混合物加入以启动反应。使反应进行4.5hrs。加入60uL的IMAP前进结合试剂。在培育＞1hr后，将板在来自Perkin-Elmer的Envision 2101上读数。该测定法使用黑色Corning板(目录#3573)以384-孔格式进行。
Cdk9/细胞周期蛋白T1α筛选方案
全长野生型Cdk9/细胞周期蛋白T1购买自Invitogen，目录#PV4131。在测定法中的最终总蛋白浓度是1nM。cdk7tide肽底物，即生物素-GGGGYSPTSPSYSPTSPSYSPTSPS-OH，是委托Tufts University CoreFacility合成的。cdk7tide肽底物的最终浓度是200nM。ATP底物(腺苷-5’-三磷酸)购买自Roche Diagnostics。ATP底物的最终浓度是6uM。磷酸-Rpb1 CTD(ser2/5)底物抗体购买自Cell Signaling Technology。抗体的最终浓度是0.67ug/mL。包含供体和受体珠的Alpha Screen Protein A检测盒购买自PerkinElmer Life Sciences。供体和受体珠两者的最终浓度是15ug/mL。将Alpha Screen用于检测。生物素化的-cdk7tide肽被cdk9/细胞周期蛋白T1利用ATP底物磷酸化。生物素化的-cdk7tide肽底物与抗生蛋白链菌素包覆的供体珠结合。抗体与蛋白质A包覆的受体珠结合。抗体将与磷酸化形式的生物素化的-cdk7tide肽底物结合，使得供体和受体珠紧密接近。在680nm下激光照射供体珠产生短暂的单线态氧分子流。当供体和受体珠紧密接近时，通过供体珠的照射所产生的活性氧在受体珠上引起发光/荧光级联。该过程导致在530-620nm范围内有高度放大的信号输出。测定法在50mM Hepes，pH＝7.5、10mM MgCl2、0.1％牛血清白蛋白、0.01％吐温-20、1mM二硫苏糖醇、2.5％二甲基亚砜中进行。采用50mMHepes，pH＝7.5、18mM EDTA、0.1％牛血清白蛋白、0.01％吐温-20合并停止和检测步骤。
一般方案如下：向5uL的cdk9/细胞周期蛋白T1中，加入0.25uL的测试化合物的二甲基亚砜溶液。将cdk7tide和ATP混合物。将5uL的cdk7tide肽/ATP混合物加入以启动反应。使反应进行5hrs。加入10uL的Ab/Alpha Screen珠/停止-检测缓冲液。小心地确保Alpha Screen珠一直处于黑暗中。将板在室温、黑暗下培育过夜，以使得在读数之前检测发展。该测定法使用白色聚丙烯Greiner板以384-孔格式进行。
下面表4所示的数据采用上述测定法之一产生。
表4
Claims (13)
1.式I化合物或其药学上可接受的盐，
其中：
R1选自-(CH2)0-2-杂芳基、-(CH2)0-2-芳基、C1-8烷基、C3-8支链烷基、C3-8环烷基和4至8元杂环烷基基团，其中所述基团各自独立地任选被取代；
R2选自氢、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4-烷基和卤素；
R3选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基、-O-C1-4卤代烷基和卤素；
R4选自氢、卤素、5至7元杂环基-R14和A6-L-R9；
R5选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、羟基、CN、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基和卤素；
R6选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基、-O-C1-4卤代烷基和卤素；
R7选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、O-C1-3烷基和卤素；
A6选自O、SO2和NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CHD-、-CD2-、C3-6环烷基、C3-6卤代环烷基、C4-7-杂环烷基、C3-8支链亚烷基和C3-8支链卤代亚烷基；
R8选自氢、C1-4烷基或C3-8支链-烷基和-C3-8支链卤代烷基；
R9选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8支链烷基、-(CH2)0-2杂芳基、(CH2)0-2-4至8元杂环烷基和(CH2)0-2-芳基，其中所述基团任选被取代；且
R14选自氢、苯基、卤素、羟基、C1-4-烷基、C3-6-支链烷基、C1-4-卤代烷基、CF3、＝O和O-C1-4-烷基。
2.权利要求1的化合物，其中：
R1选自-(CH2)0-2-杂芳基和-(CH2)0-2-芳基，其中所述基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自-NH2、-F、-Cl、-OH、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-C3-6支链烷基、C3-6支链卤代烷基、-C3-7环烷基、-C3-7卤代环烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2卤代烷基、-(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2卤代烷基、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、-O-C3-6支链烷基、-O-C3-6支链卤代烷基、-O-C3-7环烷基、-O-C3-7卤代环烷基、-O-(CH2)1-2-C3-6环烷基-R14、-O-(CH2)1-2-C4-6杂环烷基-R14、-NH-C1-4烷基、-NH-C2-4卤代烷基、-NH-C3-8支链烷基、-NH-C3-8支链卤代烷基、-NH-C3-7环烷基、-NH-C3-7卤代环烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4卤代烷基、-NH-C(O)-C3-8支链烷基、-NH-C(O)-C3-8支链卤代烷基、-NH-C(O)-C3-7环烷基、-NH-C(O)-C3-7卤代环烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4卤代烷基、-NH-C(O)-O-C1-4烷基、-NH-C(O)O-C2-4卤代烷基、-NH-C(O)-O-C3-8支链烷基、-NH-C(O)O-C3-8支链卤代烷基、-NH-C(O)-O-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-NH-SO2-C1-4烷基、-NH-SO2-C1-4卤代烷基、-NH-SO2-C3-8支链烷基、-NH-SO2-C3-8支链卤代烷基、-NH-SO2-C3-5环烷基、-NH-SO2-C3-5卤代环烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-C(O)-O-C2-4卤代烷基、-C(O)-O-C3-6支链烷基、-C(O)O-C3-6支链卤代烷基、-C(O)-O-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-C(O)-C1-4烷基、-C(O)C2-4卤代烷基、-C(O)-C3-8支链烷基、-C(O)-C3-8支链卤代烷基、-C(O)-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4卤代烷基、-SO2-C1-4烷基、-SO2-C1-4卤代烷基、-SO2-C3-8支链烷基、-SO2-C3-8支链卤代烷基、-SO2-C3-5环烷基和-SO2-C3-5卤代环烷基、-C(O)-NR15R16和-SO2-NR15R16，并且此外其中任何两个所述的取代基与它们所连接的原子一起可能形成环；
R2选自氢、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4-烷基和卤素；
R3选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基、-O-C1-4卤代烷基和卤素；
R4选自氢、卤素、5至7元杂环基-R14和A6-L-R9；
R5选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基和卤素；
R6选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基、-O-C1-4卤代烷基和卤素；
R7选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、O-C1-3烷基和卤素；
A6是O、SO2或NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CHD-、-CD2-、C3-6环烷基、C3-6卤代环烷基、C4-7-杂环烷基和C3-8支链亚烷基；
R8选自氢、C1-4烷基或C3-8支链-烷基和-C3-8支链卤代烷基；
R9选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8支链烷基、-(CH2)0-2杂芳基、(CH2)0-2-4至8元杂环烷基和(CH2)0-2-芳基，其中所述基团任选被取代；
R14选自氢、苯基、卤素、羟基、C1-4-烷基、C3-6-支链烷基、C1-4-卤代烷基、CF3、＝O和O-C1-4-烷基；并且
R15和R16独立地选自氢、羟基、烷基、支链烷基、卤代烷基、支链卤代烷基、烷氧基、环烷基和杂环烷基；或者R15和R16与它们所连接的氮原子一起能够形成任选取代的四至六元杂芳香族的或非芳香族的杂环。
3.权利要求1的化合物，其中：
R1选自-(CH2)0-2-杂芳基和-(CH2)0-2-芳基，其中所述基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自-NH2、F、Cl、-OH、-C1-4烷基、-NH-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-C3-6支链烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基、-NH-C(O)-C3-8支链烷基、-O-C3-6支链烷基、-NH-C(O)O-C1-4烷基、-NH-SO2-C1-4烷基、-NH-SO2-C3-8支链烷基、-NH-SO2-C3-5环烷基、(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-O-C1-4烷基、-C(O)O-C3-6支链烷基、-C(O)C1-4烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-C(O)-C3-8支链烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-SO2-C1-4烷基、-SO2-C3-8支链烷基、-O-(CH2)1-2-C3-6环烷基-R14、-O-(CH2)1-2-C4-6杂环烷基-R14、-SO2-NR15R16和-SO2-C3-5环烷基；
R2选自氢和卤素；
R3是氢；
R4选自哌啶基、吗啉基、吡咯烷基和A6-L-R9；其中所述哌啶基、吗啉基、吡咯烷基基团各自被R14取代；
R5选自氢、Cl、F和CF3；
R6是氢；
R7选自氢、F和Cl；
A6是NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CD2-和C3-8支链亚烷基；
R8选自氢和C1-4烷基；
R9选自C1-3烷基、C3-7环烷基、C4-6支链烷基、-(CH2)1-3-O-C1-4烷基、-(CH2)-吡啶基、(CH2)-4至8元杂环烷基、(CH2)-4至8元杂环烷基和(CH2)-苯基，其中所述基团任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、-OH、CN、＝O、C(O)-CH3、-O-C1-3烷基、-O-C1-3卤代烷基、-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-C(O)-C1-4烷基和-NH-C(O)-C1-4烷基；
R14选自苯基、卤素、羟基、C1-2-烷基、CF3和氢；并且
R15和R16独立地选自氢、羟基、烷基、支链烷基、卤代烷基、支链卤代烷基、烷氧基、环烷基和杂环烷基；或者R15和R16与它们所连接的氮原子一起可能形成任选取代的四至六元杂芳香族的或非芳香族的杂环。
4.权利要求1的化合物，其中：
R1选自C1-8烷基、C3-8环烷基、C3-8支链烷基和4至8元杂环烷基基团，其中所述的基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自-NH2、-F、-OH、＝O、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-C3-6支链烷基、C3-6支链卤代烷基、-C3-7环烷基、-C3-7卤代环烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2卤代烷基、-(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2卤代烷基、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、-O-C3-6支链烷基、-O-C3-6支链卤代烷基、-O-C3-7环烷基、-O-C3-7卤代环烷基、-O-(CH2)1-2-C3-6环烷基-R14、-O-(CH2)1-2-C4-6杂环烷基-R14、-NH-C1-4烷基、-NH-C2-4卤代烷基、-NH-C3-8支链烷基、-NH-C3-8支链卤代烷基、-NH-C3-7环烷基、-NH-C3-7卤代环烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4卤代烷基、-NH-C(O)-C3-8支链烷基、-NH-C(O)-C3-8支链卤代烷基、-NH-C(O)-C3-7环烷基、-NH-C(O)-C3-7卤代环烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4卤代烷基、-NH-C(O)-O-C1-4烷基、-NH-C(O)O-C2-4卤代烷基、-NH-C(O)-O-C3-8支链烷基、-NH-C(O)O-C3-8支链卤代烷基、-NH-C(O)-O-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-NH-SO2-C1-4烷基、-NH-SO2-C1-4卤代烷基、-NH-SO2-C3-8支链烷基、-NH-SO2-C3-8支链卤代烷基、-NH-SO2-C3-5环烷基、-NH-SO2-C3-5卤代-环烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-C(O)-O-C2-4卤代烷基、-C(O)-O-C3-6支链烷基、-C(O)O-C3-6支链卤代烷基、-C(O)-O-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-C(O)-C1-4烷基、-C(O)C2-4卤代烷基、-C(O)-C3-8支链烷基、-C(O)-C3-8支链卤代烷基、-C(O)-C3-7环烷基、-NH-C(O)-O-C3-7卤代环烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4卤代烷基、-SO2-C1-4烷基、-SO2-C1-4卤代烷基、-SO2-C3-8支链烷基、-SO2-C3-8支链卤代烷基、-SO2-C3-5环烷基和-SO2-C3-5卤代环烷基；
-C(O)-NR15R16和-SO2-NR15R16，并且此外其中任何两个所述的取代基与它们所连接的原子一起可能形成环；
R2选自氢、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4-烷基和卤素；
R3选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基和卤素；
R4选自氢、卤素、5至7元杂环基-R14和A6-L-R9；
R5选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基和卤素；
R6选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、CN、-O-C1-4烷基、C3-4环烷基、C3-4卤代环烷基和卤素；
R7选自氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、O-C1-3烷基和卤素；
A6选自O、SO2和NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CHD-、-CD2-、C3-6环烷基、C3-6卤代环烷基、C4-7-杂环烷基、C3-8支链亚烷基和C3-8支链卤代亚烷基；
R8选自氢、C1-4烷基或C3-8支链-烷基和-C3-8支链卤代烷基；
R9选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、C3-8支链烷基、-(CH2)0-2杂芳基、(CH2)0-2-4至8元杂环烷基和(CH2)0-2-芳基，其中所述基团任选被取代；
R14选自氢、苯基、卤素、羟基、C1-4-烷基、C3-6-支链烷基、C1-4-卤代烷基、CF3、＝O和O-C1-4-烷基；并且
R15和R16独立地选自氢、羟基、烷基、支链烷基、卤代烷基、支链卤代烷基、烷氧基、环烷基和杂环烷基；或者，R15和R16与它们所连接的氮原子一起可能形成任选取代的四至六元杂芳香族的或非芳香族的杂环。
5.权利要求1的化合物，其中：
R1选自C1-8烷基、C3-8支链烷基、C3-8环烷基和4至8元杂环烷基基团，其中所述的基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自-NH2、F、-OH、＝O、-C1-4烷基、-NH-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-C3-6支链烷基、-(CH2)1-3-O-C1-2烷基、-NH-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-NH-C(O)-C1-4烷基、-NH-C(O)-C3-8支链烷基、-O-C3-6支链烷基、-NH-C(O)O-C1-4烷基、-NH-SO2-C1-4烷基、-NH-SO2-C3-8支链烷基、-NH-SO2-C3-5环烷基、(CH2)0-2-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-O-C1-4烷基、-C(O)O-C3-6支链烷基、-C(O)C1-4烷基、-C(O)-O-C1-4烷基、-C(O)-C3-8支链烷基、-C(O)-CH2-O-C1-4烷基、-SO2-C1-4烷基、-SO2-C3-8支链烷基和-SO2-C3-5环烷基；
R2选自氢和卤素；
R3是氢；
R4选自哌啶基、吗啉基、吡咯烷基和A6-L-R9；其中所述哌啶基、吗啉基、吡咯烷基基团各自被R14取代；
R5选自氢、F、Cl和CF3；
R6选自氢、F和Cl；
R7选自氢、F和Cl；
A6是NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CD2-和C3-8支链亚烷基；
R8选自氢和C1-4烷基；
R9选自C1-3烷基、C3-7环烷基、C4-6支链烷基、-(CH2)1-3-O-C1-4烷基、-(CH2)-吡啶基、(CH2)-4至8元杂环烷基、(CH2)-4至8元杂环烷基和(CH2)-苯基，其中所述基团任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、-OH、CN、＝O、C(O)-CH3、-O-C1-3烷基、-O-C1-3卤代烷基、-O-(CH2)2-3-O-C1-2烷基、-C(O)-C1-4烷基和-NH-C(O)-C1-4烷基；并且
R14选自苯基、卤素、羟基、C1-2-烷基和氢。
6.权利要求1的化合物，其中：
R1选自哌啶基、吗啉基、1-甲基哌啶基、四氢-吡喃、吡咯烷基、四氢-呋喃、氮杂环丁烷、吡咯烷-2-酮、氮杂环庚烷和1，4-氧氮杂环庚烷，其中所述R1基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自F、OH、NH2、CO-甲基、-NH-甲基、乙基、氟-乙基、三氟-乙基、(CH2)2-甲氧基、SO2-CH3、COO-CH3、SO2-乙基、SO2-环丙基、甲基、SO2-CH-(CH3)2、NH-SO2-CH3、NH-SO2-C2H5、＝O、CF3、(CH2)-甲氧基、甲氧基、NH-SO2-CH-(CH3)2、-(CH2)-O-(CH2)2-甲氧基、-O-CH-(CH3)2；
R2选自Cl和F；
R3是氢；
R4是A6-L-R9；
R5选自氢、F和Cl；
R6选自氢、F和Cl；
R7选自氢、F和Cl；
A6是NR8；
L选自C0-3-亚烷基、-CD2-和C3-8支链亚烷基；
R8选自氢和甲基；且
R9选自C1-3烷基、C4-6支链烷基、-(CH2)1-3-O-C1-4烷基、-(CH2)-吡啶基、苄基、CD2-四氢-吡喃、四氢-吡喃、四氢-噻喃1，1-二氧化物、哌啶基、吡咯烷-2-酮、二
烷、环丙基、四氢呋喃、环己基和环庚基，其中所述基团任选被1至3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自F、OCHF2、CO-甲基、OH、甲基、甲氧基、CN、乙基和NH-CO-甲基。
7.权利要求1的化合物，其中：
R1选自哌啶基、吗啉基、吡咯烷基、氮杂环庚烷和1，4-氧氮杂环庚烷，其中所述R1基团各自独立地任选被1至3个取代基取代，所述取代基选自F、甲基、CF3、乙基、氟-乙基、三氟-乙基、-(CH2)2-甲氧基、-(CH2)-甲氧基、甲氧基、＝O、-(CH2)-O-(CH2)2-甲氧基和-O-CH-(CH3)2；
R2是Cl；
R3是氢；
R4是A6-L-R9；
R5选自氢、F和Cl；
R6选自氢、F和Cl；
R7选自氢、F和Cl；
A6是NR8；
L选自-CH2-和-CD2-；
R8选自氢和甲基；且
R9选自吡啶基、苄基、四氢-吡喃、二
烷和四氢呋喃，其中所述基团任选被1至3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自F、OH、甲基、乙基、甲氧基和CN。
8.选自以下的化合物：
(R)-哌啶-3-甲酸[5-氯-4-(2-甲氧基-苯基)-吡啶-2-基]-酰胺；
(R)-哌啶-3-甲酸[5-氯-4-(5-氟-2-甲氧基-苯基)-吡啶-2-基]-酰胺；
(R)-哌啶-3-甲酸[5-氯-4-(5-氟-2-异丙氧基-苯基)-吡啶-2-基]-酰胺；和
(R)-哌啶-3-甲酸{5-氯-4-[3-(3-氟-苄基氧基)-苯基]-吡啶-2-基}-酰胺。
9.选自以下的化合物：
(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{3-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；
(S)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{3-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；
(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{3-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；
(R)-3-(5-氯-4-{3-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基氨基甲酰基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯；
(S)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{3-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；
(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{2-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；
(R)-哌啶-3-甲酸(5-氯-4-{4-氯-3-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；
吗啉-2-甲酸(5-氯-4-{3-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺；和
(R)-吗啉-2-甲酸(5-氯-4-{2-氟-5-[(四氢-吡喃-4-基甲基)-氨基]-苯基}-吡啶-2-基)-酰胺。
10.根据权利要求1-9中任何一项的化合物或其药学上可接受的盐，其在治疗由CDK9介导的疾病或疾患的方法中使用。
11.根据权利要求1-9中任何一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由CDK9介导的疾病或疾患的药物中的用途。
12.治疗由CDK9介导的疾病或疾患的方法，其包括向有其需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-9中任何一项的化合物或其药学上可接受的盐。
13.药物组合物，其包含根据权利要求1-9中任何一项的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
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|---|---|---|---|---|
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112574181A (zh) * | 2019-09-30 | 2021-03-30 | 天津药业研究院股份有限公司 | 苏沃雷生中间体的制备方法及应用 |
| CN115867535A (zh) * | 2020-05-27 | 2023-03-28 | 星座制药公司 | 经取代的苯甲酰胺作为trex1的调节剂 |
| WO2022247785A1 (zh) * | 2021-05-24 | 2022-12-01 | 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 | 一种周期蛋白依赖性激酶9抑制剂的用途 |
| WO2022247796A1 (zh) * | 2021-05-24 | 2022-12-01 | 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 | 周期蛋白依赖性激酶9抑制剂的用途 |
| WO2022257965A1 (zh) * | 2021-06-09 | 2022-12-15 | 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 | 固体形式的周期蛋白依赖性激酶9抑制剂及其用途 |
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