BRPI1013246B1

BRPI1013246B1 - Derivados de benzofuranila, suas composições farmacêuticas e seus usos

Info

Publication number: BRPI1013246B1
Application number: BRPI1013246-5A
Authority: BR
Inventors: Anthony Lai Ling; Jeffrey Allen Pfefferkorn
Original assignee: Pfizer, Inc.
Priority date: 2009-03-11
Filing date: 2010-03-04
Publication date: 2019-10-01
Also published as: US8455496B2; ES2427279T3; AP2011005882A0; PE20120668A1; TW201036961A; IL214942A0; AU2010222589A1; EA201190158A1; NI201100166A; CU24036B1; MA33119B1; PL2406253T3; HK1164281A1; CU20110168A7; CA2754681A1; KR101295937B1; WO2010103437A1; CO6430427A2; US8735396B2; PT2406253E

Abstract

derivados de benzofuranila, suas composições farmacêuticas e seus usos a presente invenção se refere a compostos da fórmula (i) que agem como ativadores de glicoquinase, a suas composições farmacêuticas e usos dos mesmos para tratar doenças, distúrbios, ou condições mediadas por glicoquinase.

Description

Campo da Invenção [001] A presente invenção diz respeito a derivados de benzofuranila substituídos, bem como a composições farmacêuticas e seus usos como ativadores de glicoquinase.

Antecedentes da Invenção [002] Diabetes é uma principal preocupação de saúde pública, em virtude de sua crescente prevalência e riscos de saúde associados. A doença é caracterizada por defeitos metabólicos na produção e utilização de carboidratos que resultam na falha em manter níveis de glicose no sangue apropriados. Duas formas principais de diabetes são reconhecidas. Diabetes Tipo I, ou diabetes melito dependente de insulina (IDDM), que é o resultado de uma deficiência absoluta de insulina. Diabetes Tipo II, ou diabetes melito não dependente de insulina (NIDDM), que frequentemente ocorre com níveis de insulina normais ou mesmo elevados e parece ser o resultado da incapacidade de tecidos e células responder apropriadamente à insulina. O controle agressivo de NIDDM com medicação é essencial; de outra forma, ela pode progredir no IDDM. [003] Uma vez que a glicose no sangue aumenta, ela é transportada nas células beta pancreáticas por meio um transportador de glicose. Glicoquinase (GK) de mamífero Intracelular detecta o aumento na glicose e ativa a glicólise celular, isto é, a conversão de glicose em glicose-6-fosfato, e subsequente liberação de insulina. Glicoquinase é encontrada principalmente em células β pancreáticas e células parenquimais do fígado. Em virtude de transferência de glicose do sangue no músculo e tecido gorduroso ser dependente de insulina, diabéticos não têm a capacidade de utilizar glicose adequadamente, que leva ao acúmulo indesejado de glicose no sangue (hiperglicemia).

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 11/64

2/46

Hiperglicemia crônica leva a redução na secreção de insulina e contribui para aumentar a resistência à insulina. Glicoquinase também age como um sensor em células parenquimais hepáticas que induzem síntese de glicogênio, prevenindo assim a liberação de glicose no sangue. Os processos GK são assim críticos para a manutenção de toda a homeostase de glicose do corpo.

[004] Espera-se que um agente que ativa GK celular facilite a secreção dependente de glicose das células beta pancreáticas, corrija hiperglicemia pós-prandial, aumente utilização de glicose hepática e iniba potencialmente a liberação de glicose hepática. Consequentemente, um ativador GK pode fornecer tratamento terapêutico para NIDDM e complicações associadas, inter alia, hiperglicemia, dislipidemia, síndrome de resistência a insulina, hiperinsulinemia, hipertensão e obesidade.

[005] Diversos medicamentos em cinco principais categorias, cada qual agindo por diferentes mecanismos, são disponíveis para tratar hiperglicemia e subsequentemente NIDDM (Moller, D. E., New drug targets for Type 2 diabetes and the metabolic syndrome Nature 414; 821-827, (2001)):. (A) Secretogogos de insulina, incluindo sulfonilúreias (por exemplo, glipizida, glimepirida, gliburida) e meglitinidas (por exemplo, nateglidina e repaglinida) aumentam a secreção de insulina agindo nas células beta pancreáticas. Embora esta terapia possa diminuir nível de glicose no sangue, ela tem eficácia e tolerabilidade limitada, causa ganho de peso e frequentemente induz hipoglicemia. (B) Considera-se que iguanidas (por exemplo, metformina) ajam basicamente diminuindo a produção de glicose hepática. Biguanidas frequentemente causam distúrbios gastrintestinal e acidose lática, limitando ainda mais seu uso. (C) Inibidores de alfa-glicosidase (por exemplo, acarbose) diminuem a absorção de glicose intestinal. Esses agentes frequentemente causam distúrbios gastrintestinais. (D)

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 12/64

3/46

Tiazolidinedionas (por exemplo, pioglitazona, rosiglitazona) agem em um receptor específico (receptor-gama ativado por proliferador de peroxissoma) no fígado, músculo e tecidos gordurosos. Eles regulam o metabolismo de lipídio, melhorando subsequentemente a resposta desses tecidos às ações da insulina. O uso frequente desses medicamentos pode levar a ganho de peso e pode induzir edema e anemia. (E) Insulina é usada em casos mais graves, tanto sozinha quanto em combinação com os agentes anteriores.

[006] Idealmente, um tratamento inédito efetivo para NIDDM reuniria os seguintes critérios: (a) ele não teria efeitos colaterais significantes, incluindo indução de hipoglicemia; (b) ele não causaria ganho de peso; (c) ele substituiria pelo menos parcialmente a insulina agindo por meio de mecanismo(s) que é(são) independente(s) das ações de insulina; (d) ele seria de forma desejável metabolicamente estável para permitir uso menos frequente; e (e) ele seria usável em combinação com quantidades toleráveis de qualquer das categorias de medicamentos aqui listadas.

[007] Heteroarilas substituídas, particularmente piridonas, têm sido implicadas na mediação de GK e podem desempenhar um papel significante no tratamento de NIDDM. Por exemplo, o relatório descritivo de patente U.S. No. 2006/0058353 e publicações PCT Nos. WO2007/043638, WO2007/043638 e WO2007/117995 relatam certos derivados heterocíclicos com utilidade para o tratamento de diabetes. Embora investigações estejam em andamento, existe ainda uma necessidade de um tratamento terapêutico mais efetivo e seguro para diabetes, particularmente NIDDM.

Sumário da Invenção [008] A presente invenção diz respeito a compostos da fórmula (I) que agem como mediadores de glicoquinase, em particular, ativadores de glicoquinase; portanto, que podem ser usados no tratamento de

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 13/64

4/46 doenças mediadas por tal ativação (por exemplo, doenças relacionadas a diabetes Tipo 2 e co-morbidez relacionada a diabetes e relacionada a obesidade),

[009] em que, Y é N e Z é C, ou Y é C e Z é N; R1 e R² são cada qual independentemente metila ou etila; e R3 é 5-metilpirazin-2-il, 5metoxipirazin-2-il, ou 1-metil-1H-pirazol-3-ila; ou um sal farmaceuticamente aceitável desses.

[0010] Em uma modalidade preferida, Y é N e Z é C.

[0011] Em uma outra modalidade preferida, Y é C e Z é N.

[0012] Um composto preferido da fórmula (1) é um composto onde

R¹ e R² são ambos metila; e R³ é 5-metilpirazin-2-ila; ou um sal farmaceuticamente aceitável desses.

[0013] Um composto preferido é N,N-dimetil-5-(2-metil-6-((5metilpirazin-2-il)carbamoil-benzofuran-4-ilóxi)pirazina-2-carboxamida.

[0014] Um outro composto preferido é N,N-dimetil-5-(2-metil-6-((5metilpirazin-2-il)carbamoil)-benzofuran-4-ilóxi)pirimidina-2carboxamida.

[0015] Um outro aspecto da presente invenção é uma composição farmacêutica que compreende (1) um composto da presente invenção, e (2) um excipiente, diluente, ou veículo farmaceuticamente aceitáveis.

Preferivelmente, a composição compreende uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da presente invenção. A composição pode também conter pelo menos um agente farmacêutico

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 14/64

5/46 adicional (aqui descrito). Agentes preferidos incluem agentes antiobesidade e/ou agentes antidiabéticos (aqui descritos a seguir).

[0016] Ainda em um outro aspecto, a presente invenção é um método para tratar uma doença, condição, ou distúrbios mediados por glicoquinase, em particular, ativação da dita enzima, em um mamífero que inclui a etapa de administrar a um mamífero, preferivelmente um humano, que necessita de tal tratamento, uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da presente invenção, ou uma composição farmacêutica deste.

[0017] Doenças, distúrbios, ou condições mediadas por ativadores de glicoquinase incluem diabetes Tipo II, hiperglicemia, síndrome metabólica, tolerância a glicose prejudicada, glicosúria, catarata, neuropatia diabética, nefropatia diabética, retinopatia diabética, obesidade, dislididemia, hipertensão, hiperinsulinemia, e síndrome de resistência a insulina. Doenças, distúrbios, ou condições preferidas incluem diabetes Tipo II, hiperglicemia, tolerância a glicose prejudicada, obesidade, e síndrome de resistência a insulina. Mais preferidos são diabetes Tipo II, hiperglicemia, e obesidade. Acima de tudo mais preferido é diabetes Tipo II.

[0018] Ainda em um outro aspecto, a presente invenção é um método de reduzir o nível de glicose no sangue em um mamífero, preferivelmente um humano, que inclui a etapa de administrar a um mamífero que necessita de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da presente invenção, ou uma composição farmacêutica deste.

[0019] Compostos da presente invenção podem ser administrados em combinação com outros agentes farmacêuticos (em particular, agentes antiobesidade e antidiabéticos aqui descritos a seguir). A terapia de combinação pode ser administrada como (a) uma composição farmacêutica única que compreende um composto da

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 15/64

6/46 presente invenção, pelo menos um agente farmacêutico adicional aqui descrito e um excipiente, diluente, ou veículo farmaceuticamente aceitáveis; ou (b) duas composições farmacêuticas separadas compreendendo (i) uma primeira composição compreendendo um composto da presente invenção e um excipiente, diluente, ou veículo farmaceuticamente aceitáveis, e (ii) uma segunda composição compreendendo pelo menos um agente farmacêutico adicional aqui descrito e um excipiente, diluente, ou veículo farmaceuticamente aceitáveis. As composições farmacêuticas podem ser administradas simultaneamente ou sequencialmente e em qualquer ordem.

Definições da Invenção [0020] Da maneira aqui usada, o termo “alquila” refere-se a um radical hidrocarboneto da fórmula geral CnH2n+1. O radical alcano pode ser reto ou ramificado. Por exemplo, o termo “alquila(C1-C6)” refere-se a um grupo alifático monovalente, reto, ou ramificado contendo 1 a 6 átomos de carbono (por exemplo, metila, etila, n-propila, /-propila, nbutila, /-butila, s-butila, f-butila, n-pentila, 1-metilbutila, 2-metilbutila, 3metilbutila, neopentila, 3,3-dimetilpropila, hexila, 2-metilpentila, e similares). Similarmente, a porção alquila (isto é, fração alquila) de um grupo alcóxi, acila (por exemplo, alcanoíla), alquilamino, dialquilamino, alquilsulfonila, e alquiltio tem a mesma definição anterior. Quando indicado como sendo “opcionalmente substituído”, o radical alcano ou fração alquila pode ser insubstituído ou substituído com um ou mais substituintes (geralmente, um a três substituintes exceto no caso de substituintes de halogênio tal como percloro ou perfluoralquilas) independentemente selecionados do grupo de substituintes listados a seguir na definição para “substituído.” “Alquila substituído por halo” refere-se a um grupo alquila substituído com um ou mais átomos de halogênio (por exemplo, fluormetila, difluormetila, trifluormetila, perfluoretila, 1,1-difluoretila e similares).

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 16/64

7/46 [0021] O termo “cicloalquila” refere-se a anéis não aromáticos que são completamente hidrogenados e podem existir como um anel único, anel bicíclico ou um anel espiral. A menos que de outra forma especificada, o carbocíclico anel é geralmente um anel de 3 a 8 elementos. Por exemplo, os grupos incluem cicloalquila tais como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, cicloexenila, norbornil (biciclo[2.2.1]heptil), biciclo[2.2.2]octila, e similares.

[0022] O termo “heterociclo” refere-se a anéis não aromáticos que são completamente hidrogenados e podem existir como um anel único, anel bicíclico ou um anel espiral. A menos que de outra forma especificada, o anel heterocíclico é geralmente um anel de 3 a 6 elementos contendo 1 a 3 heteroátomos (preferivelmente 1 ou 2 heteroátomos) independentemente selecionados de enxofre, oxigênio e/ou nitrogênio. Anéis heterocíclicos incluem grupos tais como epóxi, aziridinila, tetraidrofuranila, pirrolidinila, N-metilpirrolidinila, piperidinila, piperazinila, pirazolidinila, 4H-piranila, morfolino, tiomorfolino, tetraidrotienila, tetraidrotienila 1,1-dioxida, e similares.

[0023] A frase “quantidade terapeuticamente efetiva” significa uma quantidade de um composto da presente invenção que (i) trata ou previne a doença, condição, ou distúrbios particulares, (ii) atenua, melhora, ou elimina um ou mais sintomas da doença, condição, ou distúrbios particulares, ou (iii) previne ou atrasa o início de ação de um ou mais sintomas da doença, condição, ou distúrbios particulares aqui descritos.

[0024] O termo “animal” refere-se a humanos (macho ou fêmea), animais de companhia (por exemplo, cães, gatos e cavalos), animais de fonte de alimentação, animais de zoológico, animais marinhos, pássaros e outras espécies animais similares. “Animais comestíveis” refere-se a animais de fonte de alimentação, tais como vacas, porcos, ovelha e aves domésticas.

[0025] A frase “farmaceuticamente aceitável” indica que a

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 17/64

8/46 substância ou composição deve ser compatível quimicamente e/ou toxicologicamente, com os outros ingredientes compreendendo uma formulação, e/ou o mamífero que está sendo tratado com ela.

[0026] Os termos “tratando”, “tratar”, ou “tratamento” englobam tanto tratamento preventivo, isto é, profilático, quanto paliativo.

[0027] Os termos “modulado” ou “modulando”, ou “modula(m)”, da maneira aqui usada, a menos que de outra forma indicada, referem-se à ativação da enzima de glicoquinase com compostos da presente invenção.

[0028] Os termos “mediado” ou “mediando” ou “media(m)”, da maneira aqui usada, a menos que de outra forma indicada, referem-se ao tratamento ou prevenção da doença, condição, ou distúrbios particulares, (ii) redução, melhoria, ou eliminação de um ou mais sintomas da doença, condição, ou distúrbios particulares, ou (iii) prevenção ou atraso do início de ação de um ou mais sintomas da doença, condição, ou distúrbios particulares aqui descritos, ativando a enzima de glicoquinase por meio de melhoria de ligação de glicose, alívio ou inibição de proteína regulatória de glicoquinase, um regulador chave de atividade de glicoquinase no fígado, e/ou aumentando a taxa catalítica da enzima de glicoquinase (por exemplo, mudança Vmax).

[0029] Os termos “compostos da presente invenção” (a menos que especificamente identificado de outra forma) referem-se a compostos da fórmula (I) e qualquer sal farmaceuticamente aceitáveis dos compostos, bem como, todos os estereoisômeros (incluindo diaestereoisômeros e enantiômeros), tautômeros, isômeros conformacionais, e compostos isotopicamente marcados. Hidratos e solvatos dos compostos da presente invenção são considerados composições da presente invenção, em que o composto está em associação com água ou solvente, respectivamente.

Descrição Detalhada da Invenção [0030] Compostos da presente invenção podem ser sintetizados por

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 18/64

9/46 vias sintéticas que incluem processos análogos àqueles bem conhecidos nas tecnologias químicas, particularmente à luz da descrição contida aqui. Os materiais de partida são geralmente disponíveis pelas fontes comerciais tal como Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) ou são rapidamente preparados usando métodos bem conhecidos aos versados na tecnologia (por exemplo, preparados por métodos geralmente descritos em Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed.), ou Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, incluindo suplementos (também disponíveis por meio da base de dados em linha da Beilstein)).

[0031 ] Com propósitos ilustrativos, os esquemas de reação descritos a seguir fornecem vias potenciais para sintetizar os compostos da presente invenção, bem como intermediários chaves. Para uma descrição mais detalhada das etapas de reação individuais, ver a seção de Exemplos a seguir. Versados na tecnologia perceberão que outras vias sintéticas podem ser usadas para sintetizar os compostos inventivos. Embora materiais de partida e reagentes específicos sejam descritos nos esquemas e discutidos a seguir, outros materiais de partida e reagentes podem ser facilmente substituídos para fornecer uma variedade de derivados e/ou condições de reação. Além disso, muitos dos compostos preparados pelos métodos descritos a seguir, podem ser adicionalmente modificados à luz desta revelação usando substâncias químicas convencionais bem conhecidas aos versados na tecnologia.

[0032] Na preparação de compostos da presente invenção, pode ser necessária proteção de funcionalidade remota (por exemplo, amina primária ou secundária) de intermediários. A necessidade de tal proteção variará dependendo da natureza da funcionalidade remota e das condições dos métodos de preparação. Grupos de amino proteção adequados (NH-Pg) incluem acetila, trifluoracetila, í-butoxicarbonila

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 19/64

10/46 (BOC), benziloxicarbonila (CBz) e 9-fluorenilmetilenoxicarbonila (Fmoc). Similarmente, um “grupo de hidróxi proteção” refere-se a um substituinte de um grupo hidróxi que bloqueia ou protege a funcionalidade hidróxi. Grupos hidroxil-proteção (O-Pg) adequados incluem, por exemplo, allila, acetila, silila, benzila, para-metoxibenzila, tritila, e similares. A necessidade de tal proteção é rapidamente determinada por versados na tecnologia. Para uma descrição geral de grupos de proteção e seu uso, ver T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

[0033] Esquema I esboça os procedimentos gerais que pode-se usar para fornecer compostos da presente invenção tendo a Fórmula (I).

O

(Ic)

CH3 (Ib)

L= Grupo abandonador

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 20/64

11/46 [0034] Dietil succinato e 5-metil-2-furaldeído podem ser condensados para formar o intermediário (Ia) usando condições de reação de condensação aldo convencionais. Por exemplo, os dois materiais de partida podem ser tratados com uma base forte e calor (por exemplo, etóxido de sódio em etanol sob refluxo) seguido por acidificação. O anel de benzofurano no intermediário (1b) pode ser formado por tratamento de intermediário (1a) com anidreto acético e acetato de sódio a cerca de temperatura ambiente seguido por aquecimento a refluxo. O grupo acetato pode então ser removido para fornecer o intermediário hidroxila (1c) que então permite a adição da fração de pirazinilamida ou pirimidilamida desejada por meio do grupo hidroxila livre para formar o intermediário (1d). O intermediário (1d) pode então reagir com a amina desejada (R³NH2) para formar um composto da fórmula (I) por meio de condições de reação amidação padrões bem conhecidas pelos versados na tecnologia Os exemplos a seguir fornecem uma descrição mais detalhada das condições de reação descritas anteriormente.

[0035] Os compostos da presente invenção podem ser isolados e usados per se, ou, quando possível, na forma de seu sal farmaceuticamente aceitável. O termo “sais” refere-se a sais inorgânicos e orgânicos de um composto da presente invenção. Esses sais podem ser preparados in situ durante o isolamento final e purificação de um composto, ou reagindo separadamente o composto com um ácido orgânico ou inorgânico adequado ou base e isolando o sal assim formado. Sais representativos incluem os sais de bromidrato, cloridrato, iodidrato, sulfato, bissulfato, nitrato, acetato, trifluoracetato, oxalato, besilato, palmitato, pamoato, malonato, estearato, laurato, malato, borato, benzoato, lactato, fosfato, hexafluorfosfato, sulfonato de benzeno, tosilato, formato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoeptonato, lactobionato, e

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 21/64

12/46 laurilsulfonato, e similares. Esses podem incluir cátions com base em o álcali e metais alcalinos terrosos, tais como sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio, e similares, bem como amônio não tóxico, amônio quaternário, e cátions de amina incluindo, mas sem limitações, amônio, tetrametilamônio, tetraetilamônio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina, e similares. Ver, por exemplo, Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).

[0036] Os compostos da presente invenção podem conter centros assimétricos ou quirais e, portanto, existir em diferentes formas estereoisoméricas. A menos que de outra forma especificada, pretendese que todas as formas estereoisoméricas dos compostos da presente invenção, bem como suas misturas, incluindo misturas racêmicas, formem parte da presente invenção. Além disso, a presente invenção engloba todos os isômeros geométricos e posicionais. Por exemplo, se um composto da presente invenção incorporar uma ligação dupla ou um anel fundido, tanto as formas cis- quanto trans-, bem como misturas, estarão incluídas no escopo da invenção.

[0037] Misturas diastereoméricas podem ser separadas no seu diaestereoisômeros individual com base nas suas diferenças físicas e químicas por métodos bem conhecidos aos versados na tecnologia, tais como por cromatografia e/ou cristalização fracional. Enantiômeros podem ser separados convertendo o mistura enantiomérica em um mistura diastereomérica por reação com um apropriado composto oticamente ativo (por exemplo, quiral auxiliar tal como um álcool quiral ou cloreto de ácido de Mosher), separando os diaestereoisômeros e convertendo (por exemplo, hidrolisando) os diaestereoisômeros individuais nos enantiômeros puros correspondentes. Também, alguns dos compostos da presente invenção podem ser atropisômeros (por exemplo, biarilas substituídas) e são considerados parte desta invenção. Enantiômeros podem também ser separados por uso de uma

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 22/64

13/46 coluna HPLC quiral. Alternativamente, os estereoisômeros específicos podem ser sintetizados usando um material de partida oticamente ativo, por síntese assimétrica usando reagentes, substratos, catalisadores ou solventes, oticamente ativos ou convertendo um estereoisômero no outro por transformação assimétrica.

[0038] É também possível que os intermediários e compostos da presente invenção possam existir em diferentes formas tautoméricas, e todas tais formas sejam abrangidas no escopo da invenção. O termo “tautômero” ou “forma tautomérica” refere-se a isômeros estruturais de diferentes energias que são interconvertíveis por meio uma barreira de baixa energia. Por exemplo, tautômeros de próton (também conhecidos como tautômeros prototrópicos) incluem interconversões por meio de migração de um próton, tais como isomerizações de ceto-enol e iminaenamina. Um exemplo específico de um tautômero de próton é a fração de imidazol onde o próton pode migrar entre os dois anéis de nitrogênio. Tautômeros de valência incluem interconversões por reorganização de alguns dos elétrons de ligação.

[0039] Certos compostos da presente invenção podem existir em diferentes formas conformacionais estáveis que podem ser separáveis. Assimetria torcional devido a rotação restrita cerca de um assimétricos ligação única, por exemplo, em virtude de impedimento estérico ou deformação do anel, pode permitir separação de diferente conformadores.

[0040] A presente invenção também diz respeito a compostos isotopicamente marcados da presente invenção que são idênticos aos aqui relatados, mas pelo fato de que um ou mais átomos são substituídos por um átomo com uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa normalmente encontrado na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 23/64

14/46 hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxofre, flúor, iodo, e cloro, tais como 2H, 3H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸O, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F, ¹²³I, ¹²⁵I e ³⁶Cl, respectivamente.

[0041] Certos compostos isotopicamente marcados da presente invenção (por exemplo, aqueles marcados com ³H e ¹⁴C) são usados em composto e/ou ensaios de distribuição de tecido do substrato. Isótopos tritiado (isto é, ³H) e carbono-14 (isto é, ¹⁴C) são particularmente preferidos por sua facilidade de preparação e detecção. Adicionalmente, substituição com isótopos mais pesados tal como deutério (isto é, ²H) pode disponibilizar certas vantagens terapêuticas resultante de maior estabilidade metabólica (por exemplo, exigências de maior meia vida in vivo ou dosagem menor) e consequentemente pode ser preferido em algumas circunstâncias. Isótopos de emissão pósitron tais como ¹⁵O, ¹³N, ¹¹C, e ¹⁸F são usados para estudos de tomografia de emissão de pósitron (PET) para examinar ocupação do substrato. Compostos isotopicamente marcados da presente invenção podem geralmente ser preparados pelos seguintes procedimentos análogos aos revelados nos Esquemas e/ou nos Exemplos aqui a seguir, substituindo um reagente isotopicamente marcado por um reagente não isotopicamente marcado.

[0042] Certos compostos da presente invenção podem existir em mais de uma forma cristalina (geralmente referida como “polimorfos”). Polimorfos podem ser preparados por cristalização em várias condições, por exemplo, usando diferentes solventes ou diferentes misturas de solvente para recristalização; cristalização em diferentes temperaturas; e/ou vários modos de resfriamento, variando resfriamento de muito rápido a muito lento durante a cristalização. Polimorfos podem também ser obtidos aquecendo ou fundindo o composto da presente invenção seguido por resfriamento gradual ou rápido. A presença de polimorfos pode ser determinada por espectroscopia NMR de sonda

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 24/64

15/46 sólida, espectroscopia IR, calorimetria de varredura diferencial, difração de pós de raios X ou outras técnicas como essas.

[0043] Compostos da presente invenção são usados para tratar doenças, condições e/ou distúrbios modulados pela ativação da enzima de glicoquinase; portanto, uma outra modalidade da presente invenção é uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da presente invenção e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Os compostos da presente invenção (incluindo as composições e processos usados aqui) podem também ser usados na fabricação de um medicamento para as aplicações terapêuticas aqui descritas.

[0044] Uma formulação típica é preparada misturando um composto da presente invenção e um veículo, diluente ou excipiente. Veículos, diluentes e excipientes adequados são bem conhecidos pelos versados na tecnologia e incluem materiais tais como carboidratos, ceras, polímeros solúveis em água e/ou intumescíveis, materiais hidrofílicos ou hidrofóbicos, gelatina, óleos, solventes, água, e similares. O veículo, diluente ou excipiente particular usado dependerá dos meios e propósitos para os quais o composto da presente invenção está sendo aplicada. Solventes são geralmente selecionados com base em solventes reconhecidos pelos versados na tecnologia como seguros (GRAS) para ser administrados a um mamífero. Em geral, solventes seguros são solventes aquosos não tóxicos tais como água e outros solventes não tóxicos que são solúveis ou miscíveis em água. Solventes aquosos adequados incluem água, etanol, propileno glicol, polietileno glicóis (por exemplo, PEG400, PEG300), etc. e suas misturas. As formulações podem também incluir um ou mais tampões, agentes estabilizadores, agentes tensoativos, agentes umectantes, agentes lubrificantes, emulsificantes, agentes de suspensão, e, antioxidantes, agentes de opacidade, deslizantes, auxiliares de processamento,

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 25/64

16/46 colorantes, edulcorantes, agentes perfumantes, agentes flavorizantes outros aditivos conhecidos para fornecer uma apresentação elegante do medicamento (isto é, um composto da presente invenção ou composição farmacêutica deste) ou ajuda na fabricação do produto farmacêutico (isto é, medicamento).

[0045] As formulações podem ser preparadas usando procedimentos de dissolução e mistura convencionais. Por exemplo, a substância de medicamento massivo (isto é, composto da presente invenção ou forma estabilizada do composto (por exemplo, complexo com um derivado de ciclodextrina ou outro agente de complexação conhecido)) é dissolvida em um solvente adequado na presença de um ou mais dos excipientes descritos anteriormente. O composto da presente invenção é tipicamente formulado nas formas de dosagem farmacêutica para fornecer uma dosagem facilmente controlável do medicamento e para dar o paciente um produto superior e facilmente manuseável.

[0046] As composições farmacêuticas também incluem solvatos e hidratos dos compostos da fórmula (I). O termo “solvato” refere-se a um complexo molecular de um composto representado pela Fórmula (I) (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis deste) com uma ou mais moléculas do solvente. Tais moléculas do solvente são aquelas comumente usadas na técnica farmacêutica, que são conhecidas para ser inofensivas para o recipiente, por exemplo, água, etanol, etileno glicol, e similares, O termo “hidrato” refere-se a o complexo onde a molécula do solvente é água. Os solvatos e/ou hidratos preferivelmente existem em forma cristalina. Outros solventes podem ser usados como solvatos intermediários na preparação de mais solvatos desejáveis, tal como metanol, éter metil t-butílico, acetato de etila, acetato de metila, (S)-propileno glicol, (R)-propileno glicol, 1,4-butino-diol, e similares.

[0047] A composição farmacêutica (ou formulação) para aplicação

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 26/64

17/46 pode ser embalada em uma variedade de maneiras dependendo do método usado para administrar o medicamento. Geralmente, um artigo para distribuição inclui um recipiente tendo depositado nele a formulação farmacêutica em uma forma apropriada. Recipientes adequados são bem conhecidos pelos versados na tecnologia e incluem materiais tais como garrafas (plástico e vidro), sachês, ampolas, sacolas plásticas, cilindros metálicos, e similares. O recipiente pode também incluir uma embalagem a prova de violação para impedir acesso indiscreto aos conteúdos da embalagem. Além disso, o recipiente tem depositado nele um rótulo que descreve os conteúdos do recipiente. O rótulo pode também incluir advertências apropriadas.

[0048] A presente invenção adicionalmente diz respeito a um método de tratar doenças, condições e/ou distúrbios modulados pela ativação da enzima de glicoquinase em um animal que inclui administrar a um animal que necessita de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da presente invenção ou uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade efetiva de um composto da presente invenção e um excipiente, diluente, ou veículo farmaceuticamente aceitável. O método é particularmente usado para tratar doenças, condições e/ou distúrbios que beneficiam da ativação de glicoquinase que incluem: distúrbios alimentares (por exemplo, distúrbios de compulsão alimentar, anorexia, bulimia, perda ou controle de peso e obesidade), prevenção de obesidade e resistência a insulina por expressão de glicoquinase em músculo esquelético de camundongo transgênico (Otaegui, P.J., et.al., The FASEB Journal, 17; 2097-2099, (2003)); e diabetes Tipo II, síndrome de resistência a insulina, resistência a insulina, e hiperglicemia (Poitout, V., et.al., “An integrated view of β-cell dysfunction in type-II diabetes”, Annul. Rev. Medicine, 47; 69-83, (1996)).

[0049] Um aspecto da presente invenção é o tratamento de

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 27/64

18/46 obesidade, e distúrbios relacionados a obesidade (por exemplo, sobrepeso, ganho de peso, ou manutenção de peso).

[0050] Obesidade e sobrepeso são geralmente definidos por índice de massa corpórea (BMI), que está correlacionado com gordura corpórea total e estima o risco relativo da doença. BMI é calculado por peso em quilogramas dividido por altura em metros quadrados (kg/m²). Sobrepeso é tipicamente definido como um BMI de 25-29,9 kg/m², e a obesidade é tipicamente definida como um BMI de 30 kg/m². Ver, por exemplo, National Heart, Lung, and Blood Institute, Clinical Guidelines on the Identification, Evaluation, and Treatment fo Overweigth and Obesity in Adults, The Evidence Report, Washington, DC: U.S. Department of Health and Human Services, NIH publicationno. 98-4083 (1998).

[0051] Um outro aspecto da presente invenção é para o tratamento ou atraso da progressão ou início de ação de diabetes ou distúrbios relacionados a diabetes incluindo Tipo 1 (diabetes melito dependente de insulina, também referido como “IDDM”) e diabetes Tipo 2 (diabetes melito não dependente de insulina, também referido como “NIDDM”), tolerância a glicose prejudicada, resistência a insulina, hiperglicemia, e complicações diabéticas (tais como aterosclerose, doença arterial coronária, acidente vascular cerebral, doença vascular periférica, nefropatia, hipertensão, neuropatia, e retinopatia).

[0052] Ainda um outro aspecto da presente invenção é o tratamento de co-morbidez relacionada a diabetes ou a obesidade, tal como síndrome metabólica. Síndrome metabólica inclui doenças, condições ou distúrbios tais como dislipidemia, hipertensão, resistência a insulina, diabetes (por exemplo, diabetes Tipo 2), ganho de peso, doença da artéria coronária e falência cardíaca. Para informação mais detalhada na síndrome metabólica, ver, por exemplo, Zimmet, P.Z., et al., “The

Metabolic Syndrome: Perhaps an Etiologic Mystery but Far From a Myth

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 28/64

19/46

- Where Does the International Diabetes Federation Stand?”, Diabetes & Endocrinology, 7(2), (2005); and Alberti, K.G., et al., “The Metabolic Syndrome - A New Worldwide Definition,” Lancet, 366, 1059-62 (2005). Preferivelmente, administração dos compostos da presente invenção diz respeito a uma redução estatisticamente significante (p<0,05) em pelo menos um fator de risco de doença cardiovascular, tal como redução de leptina no plasma, proteína C reativa (CRP) e/ou colesterol, comparado a um controle veículo não contendo nenhum medicamento. A administração de compostos da presente invenção pode também fornecer uma redução estatisticamente significante (p<0,05) em níveis do da glicose.

[0053] Ainda em um outro aspecto da presente invenção, a condição tratada é tolerância a glicose prejudicada, hiperglicemia, complicações diabéticas tal como catarata diabética, neuropatia diabética, nefropatia diabética, retinopatia diabética e cardiomiopatia diabética, anorexia nervosa, bulimia, cachexia, hiperuricemia, hiperinsulinemia, hipercolesterolemia, hiperlipidemia, dislipidemia, dislipidemia misturada, hipertrigliceridemia, doença hepática gordurosa não alcoólica, aterosclerose, arteriosclerose, falência cardíaca aguda, falência cardíaca congestiva, doença da artéria coronária, cardiomiopatia, infarto do miocárdio, angina pectoris, hipertensão, hipotensão, acidente vascular cerebral, isquemia, lesão de reperfusão isquemia, aneurisma, restenose, estenose vascular, tumores sólidos, câncer de pele, melanoma, linfoma, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer colorretal, câncer de estômago, câncer esofageal, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer do rim, câncer do fígado, câncer da bexiga, câncer cervical, câncer uterino, testicular câncer e câncer do ovário.

[0054] A presente invenção também diz respeito a métodos terapêuticos para tratar as condições supracitadas em um mamífero,

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 29/64

20/46 incluindo um humano, em que um composto da fórmula (I) desta invenção é administrado como parte de um regime de dosagem apropriado projetado para obter os benefícios da terapia. O regime dosagem apropriado, a quantidade de cada dose administrada e os intervalos entre doses do composto dependerá do composto da fórmula (I) desta invenção que está sendo usado, do tipo de composições farmacêuticas que estão sendo usadas, das características do sujeito que está sendo tratado e da gravidade das condições.

[0055] Em geral, uma dosagem efetiva para os compostos da presente invenção é na faixa de 0,01 mg/kg/dia a 30 mg/kg/dia, preferivelmente 0,01 mg/kg/dia a 5 mg/kg/dia de composto ativo em doses únicas ou divididas. Entretanto, alguma variabilidade na faixa de dosagem geral pode ser exigida dependendo da idade e peso do sujeito que está sendo tratado, da via de administração visada, do composto particular que está sendo administrado e similares. A determinação das faixas de dosagem e dosagens ideais para um paciente particular está bem na capacidade dos versados na tecnologia tendo o benefício da presente revelação. Versados na tecnologia perceberão que “kg” referese ao peso do paciente medido em quilogramas.

[0056] Os compostos ou composições desta invenção podem ser administrados em doses únicas (por exemplo, uma vez diariamente) ou múltiplas ou por meio de infusão constante. Os compostos desta invenção podem também ser administrados sozinhos ou em combinação com veículoes, veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, tanto em doses únicas quanto múltiplss. Veículoes, veículos e diluentes farmacêuticos adequados incluem diluentes sólidos inertes ou cargas, soluções aquosas estéreis e vários solventes orgânicos.

[0057] Os compostos ou composições da presente invenção podem ser administrados a um sujeito que necessita de tratamento por uma variedade de vias de administração convencionais, incluindo oralmente

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 30/64

21/46 e parenteralmente, (por exemplo, intravenosamente, subcutaneamente ou intramedular). Adicionalmente, as composições farmacêuticas desta invenção podem ser administradas intranasalmente, como um supositório, ou usando uma formulação “relâmpago”, isto é, permitindo a medicação dissolver na boca sem precisar usar água.

[0058] Nota-se também que os compostos da presente invenção podem ser usados em formulações de liberação sustentada, liberação controlada, e liberação atrasada, cujas formas são também bem conhecidas pelos versados na tecnologia.

[0059] Os compostos desta invenção podem também ser usados junto com outros agentes farmacêuticos para o tratamento das doenças, condições e/ou distúrbios aqui descritos. Portanto, são também providos métodos de tratamento que incluem administrar compostos da presente invenção em combinação com outros agentes farmacêuticos. Agentes farmacêuticos adequados que podem ser usados em combinação com os compostos da presente invenção incluem agentes antiobesidade (incluindo supressores de apetite), agentes antidiabéticos, agentes anti-hiperglicêmico, agentes de redução de lipídio, e agentes anti-hipertensivos.

[0060] Agentes antidiabéticos adequados incluem um inibidor de acetil-CoA carboxilase-2 (ACC-2), um inibidor de diacilglicerol Oaciltransferase 1 (DGAT-1), um inibidor de fosfodiesterase (PDE)-10, uma sulfoniluréia (por exemplo, acetoexamida, clorpropamida, diabinese, glibenclamida, glipizida, gliburida, glimepirida, gliclazida, glipentida, gliquidona, glisolamida, tolazamida, e tolbutamida), uma meglitinida, um inibidor α-amilase (por exemplo, tendamistate, trestatina e AL-3688), um inibidor α-glicosídeo hidrolase (por exemplo, acarbose), um inibidor α-glicosidase (por exemplo, adiposina, camiglibose, emiglitato, miglitol, voglibose, pradimicina-Q, e salbostatina), um agonista PPARy (por exemplo, balaglitazona, ciglitazona, darglitazona,

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 31/64

22/46 englitazona, isaglitazona, pioglitazona, rosiglitazona e troglitazona), um agonista PPAR α/γ (por exemplo, CLX-0940, GW-1536, GW-1929, GW2433, KRP-297, L-796449, LR-90, MK-0767 e SB-219994), um biguanida (por exemplo, metformina), um agonista do peptídeo tipo glucagon 1 (GLP-1) (por exemplo, exendina-3 e exendina-4), um inibidor de proteína tirosina fosfatase-1B (PTP-1B) (por exemplo, trodusquemina, extrato de hirtiosal, e compostos revelados por Zhang, S., et al., Drug Discovery Today, 12(9/10), 373-381 (2007)), inibidor de SIRT-1 (por exemplo, reservatrol), um inibidor de dipeptidil peptidease IV (DPP-IV) (por exemplo, sitagliptina, vildagliptina, alogliptina e saxagliptina), um secretagogo de insulina, um inibidor de oxidação de ácido graxo, um antagonista A2, um inibidor c-jun amino-terminal quinase (JNK), insulina, uma insulina mimética, um inibidor de glicogênio fosforilase, e um agonista do receptor VPAC2. Agentes antidiabéticos preferidos são inibidores de metformina e DPP-IV (por exemplo, sitagliptina, vildagliptina, alogliptina e saxagliptina).

[0061] Agentes antiobesidade adequados incluem inibidores de

113-hidróxi esteróide deidrogenase-1 (113-HSD tipo 1), inibidor de estearoil-CoA desaturase-1 (SCD-1), agonistas MCR-4, agonistas colecistocinina-A (CCK-A), inibidores de recaptação de monoamina (tal como sibutramina), agentes simpatomiméticos, β3 agonistas adrenérgicos, agonistas dopamina (tal como bromocriptina), análogos do hormônio estimulante de melanócito, agonistas 5HT2c, antagonistas do hormônio de concentração de melanina, leptina (a proteína OB), análogos de leptina, agonistas de leptina, antagonistas galanina, inibidores de lipase (tal como tetraidrolipstatina, isto é, orlistato), agentes anoréxicos (tal como um agonista de bombesina), antagonistas neuropeptídeo-Y (por exemplo, antagonistas NPY Y5), PYY3-36 (incluindo seus análogos), agentes tiromiméticos, deidroepiandrosterona ou um análogo destes, agonistas ou

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 32/64

23/46 antagonistas de glicocorticóide, antagonistas da orexina, agonistas do peptídeo-1 tipo glucagon, fatores neurotróficos ciliares (tal como Axokine™ disponível pela Regeneron Pharmaceuticals, Inc., Tarrytown, NY and Procter & Gamble Company, Cincinnati, OH), inibidores de proteína relacionada a agouti humano (AGRP), antagonistas da grelina, antagonistas da histamina 3 ou agonistas inverso, agonistas de neuromedina U, inibidores de MTP/ApoB (por exemplo, inibidores MTP gut-seletivo, tal como dirlotapide), antagonista de opióide, antagonista de orexina, e similares.

[0062] Agentes antiobesidade preferidos para uso nos aspectos da combinação da presente invenção incluem inibidores MTP gut-seletivo (por exemplo, dirlotapide, mitratapide e implitapide, R56918 (CAS No. 403987) e CAS No. 913541-47-6), agonistas CCKa (por exemplo, Nbenzil-2-[4-(1H-indol-3-ilmetil)-5-oxo-1-fenil-4,5-di-idro-2,3,6,10b-tetraaza-benzo[e]azulen-6-il]-N-isopropil-acetamida descritos na Publicação PCT No. WO 2005/116034 ou Publicação US No. 2005-0267100 A1), agonistas 5HT2c (por exemplo, lorcaserina), agonista MCR4 (por exemplo, compostos descritos na US 6.818.658), inibidor de lipase (por exemplo, Cetilistat), PYY3-36 (da maneira aqui usada “PYY3-36” inclui análogos, tal como PYY3-36 peglados por exemplo, os descritos na Publicação US 2006/0178501), antagonistas de opióide (por exemplo, naltrexona), oleoil-estrona (CAS No. 180003-17-2), obinepitide (TM30338), pramlintide (Symlin®), tesofensina (NS2330), leptina, liraglutida, bromocriptina, orlistate, exenatide (Byetta®), AOD-9604 (CAS No. 221231-10-3) e sibutramina. Preferivelmente, compostos da presente invenção e terapias de combinação são administrados junto com exercício e uma dieta sensata.

[0063] Todas as patentes U.S. e publicações relatadas anteriormente estão incorporadas aqui pela referência.

[0064] Modalidades da presente invenção são ilustradas pelos

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 33/64

24/46

Exemplos seguintes. Deve-se entender, entretanto, que as modalidades da invenção não estão limitadas aos detalhes específicos destes Exemplos, uma vez que outras variações destes serão conhecidas, ou ficarão aparentes sob a luz da presente revelação, pelos versados na tecnologia.

Exemplos [0065] A menos que de outra forma especificada, materiais de partida são geralmente disponíveis das fontes comerciais tais como Aldrich Chemicals Co. (Milwaukee, WI), Lancaster Syntesis, Inc. (Windham, NH), Acros Organics (Fairlawn, NJ), Maybridge Chemical Company, Ltd. (Cornwall, England), Tyger Scientific (Princeton, NJ), and AstraZeneca Pharmaceuticals (London, England). Os materiais seguintes são disponíveis pelas fontes correspondentes:

[0066] 5-metil-2-furaldeído - Sigma-Aldrich (Milwaukee, WI);

[0067] 5-metil-2-aminopirazina - Princeton Bimolecular Research,

Inc (Monmouth Junction , NJ);

[0068] 5-metoxipirazin-2-amina - Anichem (Monmouth Junction ,

NJ);

[0069] Ácido 5-cloropirazina-2-carboxílico- Ark Pharma, Inc (Libertyville, IL);

[0070] 1-metil-1H-pirazol-3-il amina - Matrix Scientific (Columbia,

SC);

[0071] Ácido 5-bromo-pirimidina-2-carboxílico- Ark Pharma, Inc (Libertyville, IL) [0072] Procedimentos Experimentais Gerais [0073] Espectros NMR foram registrados em um Varian Unidadey™

400 (disponível pela Varian Inc., Palo Alto, CA) à temperatura ambiente a 400 MHz para próton. Deslocamentos químicos são expressos em partes por milhão (δ) com relação ao solvente residual como uma referência interna. As formas de pico são denotadas da maneira a

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 34/64

25/46 seguir: s, singleto; d, dupleto; dd, duplo dupleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto; bs, singleto amplo; 2s, dois singletos. Espectros de massa de ionização química a pressão atmosférica (APCI) foram obtidos em um Fisons™ Platform II Spectrometer (gás veículo: acetonitrila: disponível pela Micromass Ltd, Manchester, UK). Espectros de massa de ionização química (CI) foram obtidos em um instrumento HewlettPackard™ 5989 (ionização de amônia, PBMS: disponível pela HewlettPackard Company, Palo Alto, CA). Espectros de massa de ionização por eletroaspersão (ES) foram obtidos em um instrumento Waters™ ZMD (gás veículo: acetonitrila: disponível pela Waters Corp., Milford, MA). Espectros de massa de alta resolução (HRMS) foram obtidos em um Agilent™ Model 6210 usando método de tempo de vôo. Onde a intensidade de íons contendo cloro ou bromo é descrita, a razão da intensidade esperada foi observada (aproximadamente 3:1 para íons contendo ³⁵Cl/³⁷Cl e 1:1 para íons contendo ⁷⁹Br/⁸¹Br) e é dada somente a intensidade do íon de massa mais baixa. Em alguns casos são dados somente picos NMR 1H representativos. Rotações óticas foram determinadas em um polarímetro 241 PerkinElmer™ (disponível pela PerkinElmer Inc., Wellesley, MA) usando a linha D de sódio (λ = 589 nm) na temperatura indicada e são reportados da maneira a seguir [a]D^temp, concentração (c = g/100 mL), e solvente.

[0074] Cromatografia de coluna foi realizada tanto com sílica gel

Baker™ (40 μm; J.T. Baker, Phillipsburg, NJ) quanto sílica gel 50 (EM Sciences™, Gibbstown, NJ) em colunas de vidro ou em colunas Flash 40 Biotage™ (ISC, Inc., Shelton, CT) ou cartucho Biotage™ SNAP KPsil ou Redisep Rf sílica (pela Teledyne™ Isco™) sob baixa pressão de nitrogênio.

[0075] Preparação de Materiais de partida e Intermediários chaves

Preparação de ácido (E)-3-(etoxicarbonil)-4-(5-metilfuran-2il)but-3-enóico Intermediário (I-1a):

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 35/64

26/46

	O
	y^^CH₂CH3
	N^O
	HO
(Ma)
[0076] A uma	solução agitada vigorosamente de 5-metil-2-

furaldeído (264 mL, 2.650 mmol) e succinato de dietila (840 mL, 5.050 mmol) em etanol (1,820 L) à temperatura ambiente foi adicionado etóxido de sódio (0,93 L de uma solução 21 % em peso em etanol) em uma porção. A mistura da reação foi então aquecida a refluxo por 13 horas. Depois do resfriamento à temperatura ambiente, a mistura foi concentrada in vácuo (todos os lotes foram combinados neste ponto). O resíduo resultante foi particionado entre acetato de etila (1 L) e ácido clorídrico (1 L de uma solução aquosa 2 M). Depois da separação, a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2 x 1 L). Os extratos orgânicos combinados foram então extraídos com hidrogeno carbonato de sódio (2 x 1 L de uma solução aquosa saturada). Esses extratos aquosos foram combinados e ajustados ao pH 2 com ácido clorídrico (solução aquosa 2 M) então extraídos com acetato de etila (2 x 1 L). Esses extratos orgânicos foram combinados e concentrados in vácuo para dar ácido (E)-3-(etoxicarbonil)-4-(5-metilfuran-2-il)but-3-enóico desejado (I-1a: 34,34 g, 5 %). O extrato orgânico original foi extraído com hidróxido de sódio (2 L de uma solução aquosa 2 M). Este extrato aquoso foi ajustado ao pH 2 com ácido clorídrico (solução aquosa 2 M) então extraído com acetato de etila (2 x 1 L). Esses extratos orgânicos foram combinados e concentrados in vacuo para dar materiais adicionais desejados (395,2 gramas, 63 %) na forma de líquido vermelho. NMR 1H (CDCh, 300 MHz) δ ppm 7,48 (s, 1H), 6,57 (d, 1H), 6,09 (d, 1H), 4,24 (q, 2H), 3,87 (s, 2H), 2,32 (s, 3H), 1,31 (t, 3H).

Preparação de 4-acetóxi-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila intermediário (I-1b):

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 36/64

27/46

CH3 (Mb) [0077] A uma solução agitada vigorosamente de ácido (E)-3(etoxicarbonil)-4-(5-metilfuran-2-il)but-3-enóico (I-1a: 326,6 g, 1,371 mol) em anidreto acético (1,77 L, 18,72 mol) à temperatura ambiente foi adicionado acetato de sódio (193 g, 2.350 mmol) em uma porção. A mistura da reação foi então aquecida a refluxo por 2,5 horas. Depois do resfriamento à temperatura ambiente, a mistura foi concentrada in vácuo (todos os lotes foram combinados neste ponto). O resíduo resultante foi suspenso em diclorometano (1,5 L) e filtrado, lavando os sólidos com diclorometano (3 x 500 mL). Os filtrados e lavados combinados foram então lavados com hidrogencarbonato de sódio (2 x 1 L de uma solução aquosa saturada) e salmoura (2 L), então concentrados in vácuo para dar 4-acetóxi-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila desejado (I-1b: 549,03 g, quantitativo). NMR 1H (CDCl3, 300 MHz) Πδ ppm 8,00-7,99 (m, 1H), 7,64 (d, 1H), 6,32-6,32 (m, 1H), 4,38 (q, 2H), 2,47 (d, 3H), 2,37 (s, 3H), 1,39 (t, 3H).

Preparação de 4-hidróxi-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila intermediário (I-1c):

(Mç) [0078] A uma solução agitada de 4-acetóxi-2-metilbenzofuran-6carboxilato de etila (I-1b: 549,03 g, 1,37 mol) em etanol (4,00 L) à temperatura ambiente foi adicionado carbonato de potássio (266 g, 1,92

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 37/64

28/46 mol) em uma porção. A mistura da reação foi então aquecida a 60 °C por 3 horas. Carbonato de potássio (100 g, 0,720 mol) foi então adicionado em uma porção e a mistura da reação foi aquecida a 60 °C por mais 3 horas. Depois do resfriamento à temperatura ambiente a mistura foi diluída com diclorometano (2 L) e a suspensão filtrada, lavando os sólidos com diclorometano (2 x 1 L) (todos os lotes foram combinados neste ponto). Os filtrados e lavados combinados foram então lavados com ácido cítrico (2,5 L de uma solução aquosa 1 M), então concentrados in vácuo e o resíduo resultante purificado por cromatografia flash a seco (hexano então 2:1 hexano:acetato de etila). Todas as frações contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas in vácuo. O resíduo resultante, que solidificou em repouso, foi misturado com tolueno frio e filtrado. Os sólidos foram então agitados com tolueno quente e carvão vegetal descolorante por 1 hora, seguido por filtração da mistura quente através de uma almofada de celite. O filtrado foi resfriado naturalmente e o precipitado resultante isolado por filtração para dar 4-hidróxi-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila desejado (I-1c: 360 g, 90 %) na forma de pó laranja.

[0079] NMR 1H (CDCh, 300 MHz) δ ppm 7,73-7,73 (m, 1H), 7,45 (d,

1H), 6,51-6,50 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,39 (q, 2H), 2,48 (d, 3H), 1,40 (t, 3H), LCMS (espectrometria de massa de cromatografia líquida): m/z 221,06 (96,39 % de pureza).

Preparação de Material de partida 5-cloro-N,N-dimetilpirazina-2carboxamida (SM-1):

(SM-1) [0080] Ácido 5-cloropirazina-2-carboxílico (1,00 grama, 6,31 mmol) em diclorometano (30 mL) foi tratado com quantidade catalítica de

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 38/64

29/46 dimetilformamida, seguido por (COCl)2 (0,85 ml, 9,46 mmol). A mistura resultante foi agitada por toda a noite. A reação foi concentrada in vácuo, e seca sobre vácuo para dar cloreto de 5-cloropirazina-2carbonila desejado na forma de sólido (1,05 g, 100 %).

[0081] Cloreto de 5-cloropirazina-2-carbonila (2,13 gramas, 12,05 mmol) e sal HCl de dimetilamina ( 1,06 grama, 12,7 mmol) foram suspensos em diclorometano (50 mL) com agitação. Trietilamina (5,04 mL, 36,2 mmol) em diclorometano (25 mL) foi adicionado gota a gota a 0 °C na mistura da reação. A solução combinada foi aquecida até temperatura ambiente e agitada por 4 horas. O composto foi diluído com diclorometano, lavado com HCl 1 N, água, salmoura, seco (Na2SO4), filtrado e concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (sílica gel, gradiente de 30 a 80 % de acetato de etila em heptano) para fornecer 5-cloro-N,N-dimetilpirazina-2-carboxamida desejado (SM-1: 2,24 g, 85 %), NMR 1H (400 MHz, CLOROFORM-d) δ ppm 8,74 (d, J=1,37 Hz, 1 H) 8,53 (d, J=1,37 Hz, 1 H) 3,15 (s, 3 H) 3,12 (s, 3 H)

Preparação de 4-(5-(dimetilcarbamoil)pirazin-2-ilóxi)-2metilbenzofuran-6-carboxilato de etila intermediário (I-1d):

(l-1d) [0082] O frasco foi carregado com 4-hidróxi-2-metilbenzofuran-6carboxilato de etila (I-1c: 6,07 g, 27,6 mmol), 5-cloro-N,Ndimetilpirazina-2-carboxamida (SM-1: 5,06 g, 27,3 mmol), carbonato de césio (9,78 g, 30 mmol). Os sólidos foram dissolvidos em

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 39/64

30/46 dimetilformamida (60 mL). A reação foi aquecida a 90 °C por 3 horas. Depois d a reação ser resfriada abaixo da temperatura ambiente, dimetilformamida foi removida in vácuo. A mistura da reação bruta foi particionada entre acetato de etila (100 ml) e água (30 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (50 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com água, salmoura, seca sob sulfato de sódio, e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (sílica gel, 30 a 80 % de gradiente de acetato de etila em heptano) para dar 4-(5-(dimetilcarbamoil)pirazin-2-ilóxi)-2-metilbenzofuran-6carboxilato de etila desejado (I-1d) na forma de um sólido marrom claro (8,3 g, 95 %).

[0083] NMR 1H (400 MHz, CLOROFORM-d) δ ppm 8,48 (d, J=1,17

Hz, 1 H) 8,41 (d, J=0,98 Hz, 1 H) 8,04 (t, J=1,07 Hz, 1 H) 7,71 (d, J=1,17 Hz, 1 H) 6,16 - 6,21 (m, 1 H) 4,38 (q, J=7,22 Hz, 2 H) 3,17 (s, 3 H) 3,14 (s, 3 H) 2,45 (d, J=1,17 Hz, 3 H) 1,38 (t, J=7,12 Hz, 3 H), MS (M+1): 370,1

Preparação de SM-2 5-bromo-N,N-dimetilpirimidina-2 carboxamida (SM-2):

(SM-2) [0084] Cloreto de oxalila (47,4 g, 369 mmol) foi adicionado a uma suspensão de ácido 5-bromo-pirimidina-2-carboxílico (50 g, 250 mmol) em diclorometano (821 mL) à temperatura ambiente seguido por

1-2 gotas de dimetilformamida. A mistura da reação foi agitada sobre nitrogênio por 2 horas, LCMS em metanol indicou a presença do éster metílico e algum ácido. Dimetilformamida (0,2 mL) foi adicionada na mistura da reação. O ácido foi dissolvido depois de 30 minutos.

LCMS mostrou éster metílico correspondente e não foi observado

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 40/64

31/46 nenhum pico de material de partida. O solvente foi removido e seco in vacuo para disponibilizar o cloreto de 5-bromo-pirimidina-2-carbonila bruto (55 g, 100 %).

[0085] O cloreto de 5-bromo-pirimidina-2-carbonila (55 g, 250 mmol) foi dissolvido em tetraidrofurano (828 mL) e dimetil-amina (solução 2 M em tetraidrofurano) (373 mL, 745 mmol) foi adicionada em porções à temperatura ambiente. A reação foi agitada à temperatura ambiente sobre nitrogênio por 16 horas, depois de cujo tempo, LCMS indicou a conclusão. A mistura foi diluída com acetato de etila (500 mL) e lavada com H2O (500 mL). A camada aquosa foi adicionalmente extraída com CH₂Cl2 (5x500 mL), todos os orgânicos combinados, e secos sob sulfato de magnésio. O filtrado foi concentrado in vácuo e então suspenso em metil-t-butiléter (650 mL). A solução foi então aquecida a refluxo. A solução quente foi resfriada naturalmente por toda a noite para disponibilizar cristais rosa. Os cristais foram filtrados e lavados com metil-t-butiléter frio (100 mL) o sólido foi seco em forno a vácuo a 55 ^oC por 12 horas para disponibilizar o composto título 5-bromo-N,Ndimetilpirimidina-2-carboxamida (SM-2: 44 g, 77 %) na forma de um sólido rosa.

[0086] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 2,94 (s, 3 H)

3,13 (s, 3 H) 8,85 (s, 2 H) m/z (M+1) = 232.

Preparação de 4-(2-(dimetilcarbamoil)pirimidin-5-ilóxi)-2metilbenzofuran-6-carboxilato de etila intermediário (I-2a):

O (h2a) [0087] Uma mistura de Cs2CO3 (62,1 g, 191 mmol), 5-bromo-N,NPetição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 41/64

32/46 dimetilpirimidina-2-carboxamida (SM-2: 24 g, 104 mmol) e 4-hidróxi-2metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-1c: 20 g, 91 mmol); 1,10fenantrolina (1,64 g, 9,07 mmol) e iodeto de cobre (864 mg, 4,54 mmol) em dimetilformamida (200 mL) foi purgada com gás N2 e então aquecida a 90 °C usando um agitador mecânico. A mistura da reação heterogênea foi agitada nesta temperatura por 18 horas. HPLC indicou conclusão próxima. A mistura da reação foi resfriada a 35 ^oC e diluída com acetato de etila (300 mL). A mistura foi filtrada para remover todo carbonato de césio. O filtrado foi então particionado entre água (500 mL) e acetato de etila (500 mL); entretanto, não foi observada nenhuma separação. HCL concentrado (20 mL) foi adicionado na mistura. Quando a fase aquosa foi cerca de pH1, as fases separaram. Os orgânicos foram separados e a camada aquosa ré-extraída com acetato de etila (2x500 mL). Todos os orgânicos foram combinados e extraída de volta com água (200 mL) e salmoura (500 mL). Os orgânicos foram separados e tratados com carvão vegetal ativado (10 g) e sulfato de magnésio. A mistura foi agitada naturalmente por 10 minutos e então filtrada através de um plugue de celite para disponibilizar uma solução amarela bruta. A torta do filtro foi lavada com acetato de etila (100 mL). Os orgânicos foram concentrados in vácuo para disponibilizar um sólido bruto, isto foi seco sobre alto vácuo por 4 dias. O sólido bruto seco foi triturado usando metanol (80 mL). Os sólidos foram dispersos em um pó cristalino laranja claro fino com um licor vermelho. Os sólidos foram isolados por filtração e rinsados com metanol (20 mL). O sólido foi seco no forno a vácuo a 55 ^oC por 12 horas para disponibilizar 4-(2(dimetilcarbamoil)pirimidin-5-ilóxi)-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-2a) na forma de um sólido amarelo (18,2 g, 54 %) [0088] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,41 (t,

J=7,12 Hz, 3 H) 2,50 (d, J=0,98 Hz, 3 H) 3,00 (s, 3 H) 3,17 (s, 3 H) 4,41 (d, J=7,22 Hz, 2 H) 6,29 (s, 1 H) 7,62 (d, J=1,17 Hz, 1 H) 8,06 (s, 1 H)

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 42/64

33/46

8,50 (s, 2 H), m/z (M+1) = 370.5

Preparação de Material de partida 5-bromo-N-etil-Nmetilpirimidina-2-carboxamida (SM-3):

Biv

Zl N CH₃

N γ CH₂CH₃

O (SM-3) [0089] Cloreto de oxalila (1,45 g, 11,1 mmol) foi adicionado a uma suspensão de ácido 5-bromo-pirimidina-2-carboxílico (1,5 g, 7,4 mmol) em diclorometano (50 mL) à temperatura ambiente seguido por 1-2 gotas de dimetilformamida. A mistura da reação foi agitada sobre nitrogênio por 2 horas, LCMS em metanol indicou a presença do éster metílico e algum ácido. Dimetilformamida (0,2 mL) foi adicionada na mistura da reação e todo o ácido dissolvido depois de 30 minutos. LCMS mostrou éster metílico correspondente e nenhum pico de material de partida foi observado. O solvente foi removido e seco in vácuo para disponibilizar o cloreto de 5-bromo-pirimidina-2-carbonila bruto (1,6 g).

[0090] Cloreto de 5-bromo-pirimidina-2-carbonila (1.600 mg, 7,225 mmol) foi dissolvido em diclorometano (25 mL) e trietilamina (4,03 mL, 28,9 mmol) foi adicionada seguido por etil-metil-amina (0.68 mL, 7.92 mmol). A reação foi agitada à temperatura ambiente sobre nitrogênio por 16 horas, depois de cujo tempo, LCMS indicou a conclusão. A mistura foi diluída com diclorometano (50 mL) e lavada com água (50 mL) seguida por 10 % de ácido cítrico (50 mL) e salmoura (50 mL). A camada orgânica foi separada e seca sob MgSO4, o resíduo foi filtrado e o solvente foi removido in vácuo para disponibilizar o composto título 5-bromo-N-etil-N-metilpirimidina-2-carboxamida (SM-3): (1,4 g, 79,4 %) na forma de um óleo marrom.

[0091] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,08 - 1,31 (m, 3 H) 2,99 (d, J=79,05 Hz, 3 H) 3,19 (q, J=7,22 Hz, 1 H) 3,59 (q, J=7,22 Hz, 1 H) 8,84 (d, J=3,12 Hz, 2 H)

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 43/64

34/46

Preparação de 4-(2-(etil(metil)carbamoil)pirimidin-5-ilóxi)-2metilbenzofuran-6-carboxilato de etila intermediário (I-5a):

O ch₂ch₃ (I-5a) [0092] O frasco foi carregado com 5-bromo-N-etil-N-metilpirimidina2-carboxamida (SM-3: 615 mg, 2,5 mmol), 4-hidróxi-2-metilbenzofuran6-carboxilato de etila (I-1c: 378 mg, 1,7 mmol), CS2CO3 (1,15 g, 3,5 mmol), 1,10-fenantrolina (30,3 mg, .17 mmol), iodeto de cobre (16 mg, 0,08 mmol) e dimetilformamida (17 mL). A mistura da reação foi degaseificada com N2 por 5 minutos e então aquecida a 90 °C por 16 horas sobre uma atmosfera de N2. A mistura da reação foi diluída com etilacetato (250 mL), lavada com água (3 x100 mL), seca (MgSO4) e concentrada. O material bruto foi purificado por uma coluna biotage 50 g de sílica gel (20 %-100 % de EtOAc em Hep) para disponibilizar o composto título 4-(2-(etil(metil)carbamoil)pirimidin-5-ilóxi)-2metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-5a: 180 mg, 28 %) na forma de um sólido amarelo.

[0093] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,07 - 1,26 (m, 3 H) 1,34 (t, J=7,12 Hz, 3 H) 2,42 (d, J=0,98 Hz, 3 H) 2,97 (d, J=65,77 Hz, 3 H) 3,14 - 3,66 (m, 2 H) 4,33 (q, J=7,22 Hz, 2 H) 6,14 - 6,32 (m, 1 H) 7,54 (dd, J=3,32, 1,17 Hz, 1 H) 7,92 - 8,04 (m, 1 H) 8,43 (d, J=4,10 Hz, 2 H), MS (M+1) = 384,3

Preparação de Material de partida 5-cloro-N-etil-N-metilpirazina2-carboxamida (SM-4):

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 44/64

35/46

Cl

X CH₂CH₃

V-a*

O (SM-4) [0094] O composto título (I-7a) foi preparado por um método análogo ao descrito para a preparação de SM-1 usando ácido 5cloropirazina-2-carboxílico (2 g, 12,62 mmol) e etil-metil-amina (0,846 g, 13,9 mmol) para disponibilizar o composto título 5-cloro-N-etil-Nmetilpirazina-2-carboxamida (SM-4: 2,05 g, 81 %) na forma de um óleo limpo [0095] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 8,72 (dd,

J=7,41, 1,37 Hz, 1 H), 8,53 (d, J=1,56 Hz, 1 H), 3,60 (q, J=7,22 Hz, 1 H), 3,42 (q, J=7,02 Hz, 1 H), 3,09 (d, J=10,73 Hz, 3 H), 1,17 - 1,31 (m, 3 H).

Preparação de 4-(5-(etil(metil)carbamoil)pirazin-2-ilóxi)-2metilbenzofuran-6-carboxilato de etila Intermediário (I-7a):

CH2CH

CH3 (EZa) [0096] 4-hidróxi-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-1c: 2,25 g, 10,22 mmol), carbonato de potássio (2,1 g, 15,3 mmol), 5-cloro-N-etilN-metilpirazina-2-carboxamida (SM-4: 2,04 g, 10,2 mmol) foram misturados em acetonitrila (30 mL). A mistura foi aquecida a 100 ^oC por toda a noite, depois de cujo tempo, a mistura da reação foi diluída com etilacetato (50 mL) e filtrada. A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia de coluna em sílica gel eluindo com etilacetato em heptanos 20-100 % para disponibilizar 4-(5(etil(metil)carbamoil)pirazin-2-ilóxi)-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 45/64

36/46 etila (I-7a: (3,9 g, 99.5 %) na forma de uma goma.

[0097] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 8,45 (dd,

J=7,43, 1,17 Hz, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 8,04 (t, J=1,07 Hz, 1 H), 7,71 (d, J=0,98 Hz, 1 H), 6,18 (d, J=0,98 Hz, 1 H), 4,38 (q, J=7,04 Hz, 2 H), 3,60 (q, J=7,23 Hz, 1 H), 3,48 (q, J=6,91 Hz, 1 H), 3,11 (d, J=10,36 Hz, 3 H), 1,38 (t, J=7,13 Hz, 3 H), 1,20 - 1,28 (m, 3 H).

Exemplo 1

Preparação de N,N-dimetil-5-(2-metil-6-((5-metilpirazin-2il)carbamoil-benzofuran-4-ilóxi)pirazina-2-carboxamida (I):

(1) [0098] 5-metil-2-aminopirazina (6,8 g, 63 mmol) foi captado em 70 mL de dimetiléter e resfriado a 0 °C. Cloreto de dimetilalumínio (131 mmol, 1 M em hexano) foi adicionado gota a gota. A mistura resultante foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada por 30 minutos. 4-(5(dimetilcarbamoil)pirazin-2-ilóxi)-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-1d: 10,1 g, 27,3 mmol) em dimetiléter (70 mL) foi então adicionado na solução amina ativada por meio cânula. A solução combinada foi aquecida a refluxo por toda a noite. A reação foi resfriada no gelo e lentamente finalizada pela adição gota a gota de sal de Rochelle aquoso (concentrado, 100 mL). A mistura foi agitada por 20 minutos. A mistura foi separada. Camada orgânica foi lavada com sal de Rochelle aquoso (30 mL), HCl 1 N (30 mL), salmoura (30 mL), seca sob sulfato de sódio, e concentrada in vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (sílica gel, gradiente de acetato

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 46/64

37/46 de etila de 50-100 % em heptano) para dar N,N-dimetil-5-(2-metil-6-((5metilpirazin-2-il)carbamoil)benzofuran-4-ilóxi)pirazina-2-carboxamida desejado (1: 8,5 gramas 72 %).

[0099] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 9,57 (d,

J=1,37 Hz, 1 H) 8,49 (d, J=1,37 Hz, 1 H) 8,45 (d, J=1,37 Hz, 1 H) 8,42 (s, 1 H) 8,14 (dd, J=1,56, 0,59 Hz, 1 H) 7,91 - 7,94 (m, 1 H) 7,62 (d, J=1,37 Hz, 1 H) 6,22 (t, J=0,98 Hz, 1 H) 3,18 (s, 3 H) 3,15 (s, 3 H) 2,55 (s, 3 H) 2,48 (d, J=1,17 Hz, 3 H) [00100] MS (M+1): 433,1.

Exemplo 2

Preparação de N,N-dimetil-5-(2-metil-6-((5-metilpirazin-2il)carbamoil)-benzofuran-4-ilóxi)pirimidina-2-carboxamida (2):

H3C

O

(2) [00101] A uma solução de 5-metil-2-aminopirazina (38,9 g, 356 mmol) em dimetiléter (315 mL) em um frasco de 3 gargalos equipado com agitação suspensa e um condensador a 0 ^oC foi adicionado Me2AlCl (solução 1 M em hexanos) (715 mL). A mistura foi aquecida à temperatura ambiente e agitada por 1,5 hora. Em um frasco separado, 4-(2-(dimetilcarbamoil)pirimidin-5-ilóxi)-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-2a: 52,6 g, 142,5 mmol) foi dissolvido em dimetiléter (210 mL). Esta mistura foi então adicionada na amina complexada. Uma goma precipitou mediante arranhão no frasco e dissipou em um sólido. A reação resultante foi refluxada por 3,5 horas, HPLC indicou 93 % completos. Cinco litros de sal de Rochelle feitos em água e 2 litros de 2metiltetraidrofurano foram adicionados na mistura. A mistura da reação

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 47/64

38/46 foi então vertida no sistema bifásico. A mistura foi agitada naturalmente com agitação suspensa por 14 horas, depois de cujo tempo, um sólido amarelo precipitou. O sólido foi coletado através de filtração. O sólido retido foi lavado com 2-metiltetraidrofurano. O sólido resultante foi seco em forno in vácuo por toda a noite para disponibilizar o composto título N,N-dimetil-5-(2-metil-6-((5-metilpirazin-2-il)carbamoil)benzofuran-4ilóxi)pirimidina-2-carboxamida (2): (49,98 g, 81 %) [00102] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) d ppm 2,49 (d, J=1,17 Hz, 3 H) 2,55 (s, 3H) 2,98 (s, 3 H) 3,14 (s, 3 H) 6,28 (t, J=0,98 Hz, 1 H) 7,52 (d, J=1,37 Hz, 1 H) 7,88 - 7,92 (m, 1 H) 8,14 (d, J=0,78 Hz, 1 H) 8,37 (s, 1 H) 8,50 (s, 2 H) 9,54 (d, J=1,56 Hz, 1 H), m/z (M+1) = 433,4, m/z (M-1)= 431,5

Exemplo 3

Preparação de 5-(6-((5-metoxipirazin-2-il)carbamoil)-2metilbenzofuran-4-ilóxi)-N,N-dimetilpirimidina-2-carboxamida (3):

CH3 y N

H₃C ch₃ (3) [00103] O composto título (3) foi preparado por um método análogo ao descrito no Exemplo 1 usando 5-metoxipirazin-2-amina e 4-(2(dimetilcarbamoil)-pirimidin-5-ilóxi)-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-2a).

[00104] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 2,49 (s, 3H),

2,99 (s, 3H), 3,15, (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 6,28 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,50 (s, 2H), 9,17 (s, 1H), m/z = 449,1

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 48/64

39/46 (MH+)

Exemplo 4

Preparação de N,N-dimetil-5-(2-metil-6-((1-metil-1H-pirazol-3-il)carbamoil)benzofuran-4-ilóxi)pirimidina-2-carboxamida (4):

H3C

O

<m-^N'CH₃

N ³ (4) [00105] O composto título (4) foi preparado por um método análogo ao descrito no Exemplo 1 usando 1-metil-1H-pirazol-3-amina e 4-(2(dimetilcarbamoil)pirimidin-5-ilóxi)-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-2a) [00106] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 8,55 (br, s,, 2 H), 8,08 (s, 1 H), 7,41 - 7,42 (m, 1 H), 7,03 - 7,05 (m, 1 H), 6,34 (s, 1 H), 3,92 (s, 3 H), 3,19 (s, 3 H), 3,09 (s, 3 H), 2,50 (s, 3 H), m/z = 421,1 (MH+)

Exemplo 5

Preparação de N-etil-N-metil-5-(2-metil-6-((5-metilpirazin-2il)carbamoil)benzofuran-4-ilóxi)pirimidina-2-carboxamida (5):

(5) [00107] O composto título (5) foi preparado por um método análogo ao descrito no Exemplo 1 usando 4-(2-(etil(metil)carbamoil)pirimidin-5

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 49/64

40/46 ilóxi)-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-5a: 99 mg, 0,26 mmol), cloreto de 5-metil-2-aminopirazina (84 mg, 0,77 mmol), dimetilalumínio (1,29 mmol, 1 M em hexano) e dimetiléter (4,5 mL) para disponibilizar N-etil-N-metil-5-(2-metil-6-((5-metilpirazin-2-il)carbamoil)benzofuran-4ilóxi)pirimidina-2-carboxamida (5: 70 mg, 61 %) na forma de um sólido branco gelo.

[00108] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,15-1,24 (m, 3 H) 2,44 (s, 3 H) 2,49 (s, 3 H) 2,99 (d, J=58,94 Hz, 3 H) 3,20-3,59 (m, 2 H) 6,23 (d, J=1,17 Hz, 1 H) 7,50 (dd, J=2,93, 1,17 Hz, 1 H) 7,89 (d, J=1,17 Hz, 1 H) 8,01 (s, 1 H) 8,46 (d, J=4,10 Hz, 2 H) 9,22 (d, J=3,71 Hz, 1 H) 9,48 (s, 1 H), MS (M+1): 447,3

Exemplo 6

Preparação de N-etil-N-metil-5-(2-metil-6-((1-metil-1H-pirazol-3il)carbamoil)benzofuran-4-ilóxi)pirimidina-2-carboxamida (6):

O (6) [00109] O composto título (6) foi preparado por um método análogo ao descrito no Exemplo 1 usando 4-(2-(etil(metil)carbamoil)pirimidin-5ilóxi)-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-5a: 90 mg, 0,24 mmol), cloreto de 5-metil-2-aminopirazina (84 mg, 0,70 mmol), dimetilalumínio (1,17 mmol, 1M em hexano) e dimetiléter (4,5 mL) para disponibilizar o composto título N-etil-N-metil-5-(2-metil-6-((1-metil-1H-pirazol-3il)carbamoil)benzofuran-4-ilóxi)pirimidina-2-carboxamida (6: 49 mg, 48 %).

[00110] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,12 - 1,26 (m, 3 H) 2,43 (s, 3 H) 2,99 (d, J=63,04 Hz, 3 H) 3,20-3,60 (m, 2 H) 3,68 (s, 3 H) 6,22 (s, 1 H) 6,78 (d, J=1,56 Hz, 1 H) 7,18 - 7,30 (m, 1 H) 7,47

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 50/64

41/46 (d, J=2,93 Hz, 1 H) 7,82 (s, 1 H) 8,43 (d, J=4,10 Hz, 2 H) 9,18 (s, 1 H), MS (M+1): 435,3

Exemplo 7

Preparação de N-etil-N-metil-5-(2-metil-6-((5-metilpirazin-2il)carbamoil)-benzofuran-4-ilóxi)pirazina-2-carboxamida (7):

N CH₃

O (7) [00111] O composto título (7) foi preparado por um método análogo ao descrito no Exemplo 1 usando 4-(5-(etil(metil)carbamoil)pirazin-2ilóxi)-2-metilbenzofuran-6-carboxilato de etila (I-7a: 2,5 g, 6,52 mmol); 5-metil-2-aminopirazina (1,42 g, 13 mmol), cloreto de dimetilalumínio (26,1 mmol, 1 M em hexano) e dimetiléter (50 mL) para disponibilizar Netil-N-metil-5-(2-metil-6-((5-metilpirazin-2-il)carbamoil)-benzofuran-4ilóxi)pirazina-2-carboxamida (7: 2,89 g, 99 %) na forma de um sólido branco gelo.

[00112] NMR 1H (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 9,56 (d, J=1,37 Hz, 1 H), 8,37 - 8,52 (m, 2 H), 8,13 (d, J=0,78 Hz, 1 H), 7,93 (t, J=1,07 Hz, 1 H), 7,61 (s, 1 H), 6,10 - 6,27 (m, 1 H), 3,60 (q, J=7,17 Hz, 1 H), 3,40 - 3,53 (m, 1 H), 3,12 (d, J=12,70 Hz, 3 H), 2,55 (s, 3 H), 2,47 (s, 3 H), 1,22 - 1,28 (m, 3 H), MS (M+1): 447,3 (M-1) 445,4

TESTE FARMACOLÓGICO [00113] A prática da presente invenção para o tratamento de doenças moduladas pela ativação da enzima de glicoquinase pode ser evidenciada por atividade em pelo menos um dos protocolos aqui descritos a seguir. Os acrônimos seguintes são usados no ensaio a seguir e têm as definições correspondentes. A fonte de suprimento é

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 51/64

42/46 provida em parênteses.

HEPES - N-[2-hidroxietil] piperazina-N’-[ácido 2etanossulfônico] (Sigma)

NADH - Beta-Nicotinamida adenina di-nucleotídeo, forma reduzida (Sigma)

PEP - Fosfoenolpiruvato (Sigma)

ATP - Trifosfato de adenosina (Sigma)

DTT - Ditiotreitol (Sigma) PK/LDH = enzimas de acoplamento de piruvato deidrogenase quinase/lactato (Sigma)

Glicose - (Calbiochem)

BSA - Fração Cohn de albumina de soro bovino (Calbiochem)

Célula beta glicoquinase (Molecular Biology)

Ensaio In Vitro [00114] Glicoquinase de comprimento total (isoforma de célula beta) foi His-marcado no terminal N e purificado por uma coluna Ni seguido por cromatografia de exclusão de tamanho. Uma coluna de 320 mL foi empacotada em casa usando resina de grau de preparação Superdex75 (Amersham Pharmacia, Carlsbad, CA). Glicose foi obtida pela Calbiochem (San Diego, CA) e outros reagentes foram adquiridos pela Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).

[00115] Todos os ensaios foram realizados em uma placa de 384 poços Corning usando espectrofotômetro Spectramax PLUS (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) à temperatura ambiente. O volume final do ensaio foi 40 gL. As condições do tampão usado neste ensaio foram da maneira a seguir: HEPES 50 mM, glicose 5 mM, ATP 2,5 mM, MgCb3,5 mM, NADH 0,7 mM, ditiotreitol 2 mM, piruvato deidrogenase quinase/lactato 1 unidade/mL (PK/LDH), fosfoenolpiruato 0,2 mM, e KCl 25 mM. O tampão pH foi 7,1. O composto teste em solução de

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 52/64

43/46 dimetilsulfóxido foi adicionado no tampão e misturado por um agitador de placa por 7,5 minutos. A concentração final de dimetilsulfóxido introduzida no ensaio foi 0,25 %.

[00116] Glicoquinase foi adicionado na mistura do tampão para iniciar a reação na presença e ausência de composto. A reação foi monitorada por absorbância a 340 nm devido a depleção de NADH. A velocidade da reação inicial foi medida pela inclinação de um curso de tempo linear de 0-300 segundos. A porcentagem de ativação máxima foi calculada pela seguinte equação:

% de Ativação Máxima = (Va/Vo - 1) x 100;

[00117] em que cada qual de Va e Vo é definido como a velocidade de reação inicial na presença e ausência do composto testado, respectivamente.

[00118] Para determinar o EC50 (meia concentração efetiva máxima) e % de ativação máxima, compostos foram serialmente diluídos em dimetilsulfóxido por 3 vezes. As atividades de glicoquinase foram medidas na forma de uma função de concentrações do composto. Os dados foram ajustados na equação a seguir para obter o EC50 e valores de % de ativação máxima:

[00119] Va/Vo = 1 + (% de ativação máxima/100)/(1 + EC50/ concentração do composto) [00120] Purificação His-Tag Glicoquinase da Célula beta [00121] Condições Crescimento e Indução:

[00122] Células BL21(DE3) (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA) contendo vetor pBCGK (C ou N His) cresceram a 37 ^oC (em 2XYT) até o OD600 ficar entre 0,6-1,0. Expressão foi induzida por adição de isoipropiltiogalactosídeo a uma concentração final de 0,1-0,2 mM para as células que foram então incubadas por toda a noite a 23 °C. No dia seguinte, as células foram colhidas por meio de centrifugação a 5.000 rpm por 15 minutos a 4 °C. O precipitado da célula foi armazenado a Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 53/64

44/46 °C para purificação futura.

Purificação:

[00123] Uma coluna Ni-NTA (Quigan, Germantown, MD) (15-50 mL) foi usada para separação. Dois tampões foram preparados, 1) um tampão de lavagem e equilíbrio de lise/níquel e 2) um tampão de eluição de níquel. O tampão de de lise/equilíbrio/lavagem foi preparado como tal: tampão 25 mM HEPES a pH 7,5, NaCl 250 mM, imidazol 20 mM, e β-mercaptoetanol 14 mM como concentrações finais. O tampão de eluição foi preparado como tal: HEPES 25 mM a pH 7,5, NaCl 250 mM, imidazol 400 mM, e β-mercaptoetanol 14 mM como concentrações finais. Os tampões foram filtrados com um filtro de 0,22 um antes do uso. O precipitado celular (cultura 1 L) foi ressuspenso em 300 mL do tampão de lise/equilíbrio. As células foram então lisadas (3 vezes) com um microfluizante Microfluidics Model 110Y (Microfluidics Corporation, Newton, MA). A lama foi centrifugada com um ultracentrífugo Beckman Coulter Model LE-80K (Beckman Coulter, Fullerton, CA) a 40.000 rpm por 45 minutos a 4 °C. O sobrenadante foi transferido para um frasco resfriado. Um volume de 20 pl foi guardado para análise de gel. Um sistema de purificação Pharmacia AKTA (GMI, Inc., Ramsey, MN) foi usado para separação. As linhas principais foram purgadas com tampão lise/equilíbrio. A coluna Ni-NTA foi equilibrada com 200 mL do tampão lise/equilíbrio a uma vazão de 5 mL/minuto. O sobrenadante foi carregado na coluna a 4 mL/minuto e o fluxo direto foi coletado em um frasco. As proteínas não ligadas foram lavadas com tampão lise/equilíbrio a uma vazão de 5 mL/minuto até ultravioleta atingir a linha de base. A proteína foi então eluída da coluna com o tampão de eluição imidazol por meio de gradiente imidazol 20 mM a 400 mM em 320 mL. A coluna foi então desprovida de qualquer proteína adicional com 80 mL do tampão de eluição. As frações de eluição tiveram cada qual 8 mL, para um rendimento total de 50 amostras. As frações foram analisadas

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 54/64

45/46 por dodecil sulfato de sódio poliacrilamida (SDS-PAGE) e as frações contendo proteína de interesse foram agrupadas e concentradas a 10 mL usando célula de ultrafiltração com uma membrana Millipore (MWCO) de corte de peso molecular 10.000 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) sobre gás de nitrogênio (60 psi). A proteína foi adicionalmente purificada por cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) usando um detector de dispersão de luz evaporativo Sedex 75 (320 mL) (Amersham Pharmacia, Uppsala, Sweden). SEC foi equilibrada com 450 mL de tampão de classificação por tamanho contendo HEPES 25 mM pH 7,0, NaCl 50 mM, e ditiotreitol 5 mM. A proteína concentrada foi então carregada sob SEC e eluição com 400 mL de tampão de classificação por tamanho foi realizada por toda a noite a 0,5 mL/minuto. As frações de eluição foram 5 mL cada qual. As frações foram analisadas por SDSPAGE e proteína contendo frações foi agrupada. Concentração foi medida usando Bradford Ensaio/BSA Standard. A proteína purificada foi armazenada em pequenas alíquotas a -80 °C.

[00124] Os dados EC50 (μΜ) e Ativação máxima (%) são sumarizados na Tabela 1 a seguir.

Tabela 1

No. do Exemplo	Nome de IUPAC	Glicoquina se EC50	Ativação máxima (%)
1	N,N-dimetil-5-(2-metil-6-((5metilpirazin-2-il)carbamoilbenzofuran-4-ilóxi)pirazina-2carboxamida	0,412 μΜ (n=11)	60,8 %
2	N,N-dimetil-5-(2-metil-6-((5metilpirazin-2-il)carbamoil)benzofuran-4ilóxi)pirimidina-2-carboxamida	0,555 μΜ (n=7)	54,7 %

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 55/64

46/46

No. do Exemplo	Nome de IUPAC	Glicoquina se EC50	Ativação máxima (%)
3	5-(6-((5-metoxipirazin-2il)carbamoil)-2-metil-benzofuran-4ilóxi)-N,N-dimetilpirimidina-2carboxamida	0,462 μΜ (n=6)	69,5 %
4	N, N-dimetil-5-(2-metil-6-((1-metil-1Hpirazol-3-il)-carbamoil)benzofuran-4ilóxi)pirimidina-2-carboxamida	0,629 μΜ (n=1)	63,9 %
5	N-etil-N-metil-5-(2-metil-6-((5metilpirazin-2-il)carbamoil)benzofuran-4ilóxi)pirimidina-2-carboxamida	0,546 μΜ (n=2)	57,6%
6	N-etil-N-metil-5-(2-metil-6-((1-metil- 1H-pirazol-3- il)carbamoil)benzofuran-4ilóxi)pirimidina-2-carboxamida	0,382 μΜ (n=3)	54,1 %
7	N-etil-N-metil-5-(2-metil-6-((5metilpirazin-2-il)carbamoil)benzofuran-4-ilóxi)pirazina-2carboxamida	0,474 μΜ (n=3)	63,4 %

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 56/64

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que é N,N-dimetil5-(2-metil-6-((5-metilpirazin-2-il)carbamoil)-benzofuran-4ilóxi)pirimidina-2-carboxamida ou um sal farmaceuticalmente aceitável do mesmo.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte estrutura:
3. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende (i) um composto, como definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (ii) um excipiente, diluente, ou veículo farmaceuticamente aceitável.
4. Composição, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o referido composto ou o referido sal farmaceuticamente aceitável do mesmo está presente em uma quantidade terapeuticamente efetiva.
5. Composição, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que compreende ainda pelo menos um agente farmacêutico adicional selecionado do grupo que consiste em um agente antiobesidade e um agente antidiabético.
6. Composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o referido agente antiobesidade é

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 57/64

2/4 selecionado do grupo que consiste em dirlotapide, mitratapide, implitapide,

R56918 (CAS No. 403987),

CAS No. 913541-47-6, lorcaserina, cetilistato,

PYY3-36, naltrexona, oleoil-estrona, obinepitida, pramlintida, tesofensina, leptina, liraglutida, bromocriptina, orlistate, exenatida,

AOD-9604 (CAS No. 221231-10-3) e sibutramina.
7. Composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o referido agente antidiabéticos é selecionado do grupo que consiste em metformina, acetohexamida, clorpropamida, diabinese, glibenclamida, glipizida, gliburida,

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 58/64

3/4 glimepirida, gliclazida, glipentida, gliquidona, glisolamida, tolazamida, tolbutamida, tendamistate, trestatina, acarbose, adiposina, camiglibose, emiglitato, miglitol, voglibose, pradimicina-Q, salbostatina, balaglitazona, ciglitazona, darglitazona, englitazona, isaglitazona, pioglitazona, rosiglitazona, troglitazona, exendina-3, exendina-4, trodusquemina, reservatrol, extrato de hirtiosal,

Petição 870190020044, de 27/02/2019, pág. 59/64

4/4 sitagliptina, vildagliptina, alogliptina e saxagliptina.
8. Uso do composto, como definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para tratar obesidade e distúrbios relacionados a obesidade em animais.
9. Uso do composto, como definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para tratar ou atrasar o progresso ou início de ação de diabetes Tipo 2 e distúrbios relacionados a diabetes em animais.