Este documento describe un método para diferenciar Streptococcus pneumoniae de otros estreptococos alfa hemolíticos mediante el uso de discos impregnados con optoquina. La optoquina inhibe el crecimiento de S. pneumoniae pero no otros estreptococos. Colonias sensibles a la optoquina indican S. pneumoniae. La prueba de solubilidad en bilis también puede usarse para confirmar los resultados.
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Este documento describe un método para diferenciar Streptococcus pneumoniae de otros estreptococos alfa hemolíticos mediante el uso de discos impregnados con optoquina. La optoquina inhibe el crecimiento de S. pneumoniae pero no otros estreptococos. Colonias sensibles a la optoquina indican S. pneumoniae. La prueba de solubilidad en bilis también puede usarse para confirmar los resultados.
Este documento describe un método para diferenciar Streptococcus pneumoniae de otros estreptococos alfa hemolíticos mediante el uso de discos impregnados con optoquina. La optoquina inhibe el crecimiento de S. pneumoniae pero no otros estreptococos. Colonias sensibles a la optoquina indican S. pneumoniae. La prueba de solubilidad en bilis también puede usarse para confirmar los resultados.
Este documento describe un método para diferenciar Streptococcus pneumoniae de otros estreptococos alfa hemolíticos mediante el uso de discos impregnados con optoquina. La optoquina inhibe el crecimiento de S. pneumoniae pero no otros estreptococos. Colonias sensibles a la optoquina indican S. pneumoniae. La prueba de solubilidad en bilis también puede usarse para confirmar los resultados.
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USO
Diferenciacin de Streptococcus pneumoniae de otras especies de
estreptococos alfa hemolticos (por ejemplo Streptococcus grupo viridans). FUNDAMENTO Streptococcus pneumoniae y Streptococcus grupo viridans son co- cos Gram positivos que presentan colonias alfa hemolticas cuando crecen en medios slidos suplementados con 5-10 % de sangre de carnero. Se pueden diferenciar mediante la realizacin de pruebas bioqumi- cas como ser la prueba de sensibilidad a la optoquina y la prueba de solubilidad en bilis. La optoquina inhibe el desarrollo de Streptococcus pneumoniae mientras que otros estreptococos no son inhibidos o presentan una zona pequea de inhibicin alrededor del disco. La correlacin entre la sensibilidad a la optoquina y la prueba de solubilidad en bilis ha sido demostrada por varios autores. CONTENIDO Y COMPOSICIN Cdigo B1240227: envase x 50 discos. Discos impregnados con optoquina (clorhidrato de etilhidrocupre- na) 5 ug. INSTRUCCIONES Producto listo para usar. ALMACENAMIENTO Entre -20 C y 0 C. Alternativamente a 2-8 C durante 7 das. PROCEDIMIENTO Siembra A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, utilizan- do un hisopo o un ansa de inoculacin estril, inocular una placa de Agar Sangre ( ) en las cuatro direcciones para cubrir toda la supercie del medio de cultivo. Luego colocar un disco de Optoquina sobre la supercie del agar. Incubacin En atmsfera 5-10% de CO 2 , a 35-37 C durante 18 - 24 horas. INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS Examinar la placa y medir el dimetro de la zona de inhibicin del Discos de Optoquina B1240227 HOJA 1 DE 2 desarrollo microbiano alrededor del disco de Optoquina. Sensible: halo de inhibicin del desarrollo microbiano, de dimetro mayor o igual a 14 mm es presuntivo para Streptococcus pneu- moniae. Las zonas de inhibicin inferiores a 14 mm de dimetro son cues- tionables para Streptococcus pneumoniae y deben ser conrmadas por pruebas adicionales, como ser la prueba de solubilidad en bilis. Resistente: crecimiento no inhibido alrededor del disco o menor a 14 mm. CONTROL DE CALIDAD CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO Medio sin inocular Sin cambios MICROORGANISMOS Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Streptococcus salivarius ATCC 13419
OPTOQUINA Sensible Sensible Resistente LIMITACIONES - Trabajar con cultivo puro del microorganismo en estudio. - Luego de aplicar el disco, ejercer ligera presin sobre el mismo para lograr el buen contacto con el agar. - Algunas cepas de Streptococcus pneumoniae no son inhibidas por la optoquina. - En el caso que sea necesario realizar la prueba de solubilidad en bilis. Se detalla a continuacin la tcnica correspondiente: Realizacin de la prueba de solubilidad en bilis: Fundamento: Las colonias de Streptococcus pneumoniae se disuelven o se lisan dentro de los 30 minutos en presencia de una solucin de desoxi- colato de sodio al 10%. La metodologa consiste en hacer una suspensin densa de las colonias sopechosas (turbiedad 1.0 escala Mc Farland) en 1 ml de solucin siolgica. Luego separar la suspensin en 2 fracciones y a una de ellas agregarle 3 a 4 gotas de la solucin de desoxicolato de sodio al 10% y al otro tubo solucin siolgica. Incubar en aerobiosis, a 35 - 37 C durante 2 horas y examinar luego para ver aclaramiento de la turbiedad por lisis. SMBOLOS UTILIZADOS DIAGNSTICO IN VITRO CDIGO N ELABORADOR ESTRIL N DE DETERMINACINES LOTE N FECHA DE VENCIMIENTO LMITE DE TEMPERATURA INSTRUCCIONES DE USO LABORATORIOS BRITANIA S.A. LOS PATOS 2175 (C1283ABI) CABA - ARGENTINA TEL/FAX 54 11 4306 0041 Discos de Optoquina HOJA 2 DE 2 0 7 / 2 0 1 2
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R E V
.0 0 MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales segn requeri- miento. PRECAUCIONES - Solamente para uso diagnstico in vitro. Uso profesional exclu- sivo. - No utilizar el producto si al recibirlo su envase est abierto o da- ado. - No utilizar el producto si existen signos de contaminacin o dete- rioro, as como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento. - Dejar que los envases conteniendo el producto alcancen la tem- peratura ambiente antes de abrirlos. - Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el produc- to. - Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y ma- nipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad establecidas por el laboratorio. - Las caractersticas del producto pueden alterarse si no se conser- va apropiadamente. - Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del mismo segn reglamentaciones vigentes. REFERENCIAS - Murray P.R., Baron, Pfaller, Tenover and Yolken. 1999. Manual of clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. - MacFaddin. 2000. Biochemical tests for identication of medical bacteria, 3rd ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Md. INDICACIONES AL CONSUMIDOR Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento. Conservar el producto segn las indicaciones del rtulo.