UROCULTIVO

ROTULACION DE LA MUESTRA
TOMA DE MUESTRA
Para la recoleccin de orina. Debes lavar con
agua y con jabn los genitales para evitar una
contaminacin de la muestra.
Por lo general este estudio no requiere que
ests en ayunas o limitar o alterar tus
actividades antes del estudio, sin embargo, te
sugerimos pedirle al laboratorio indicaciones.

UROCULTIVO
AISLAMIENTO

IDENTIFICACION

ANTIBIOGRAMA

VALORES ENCONTRADOS
Menos 10,000 u.f.c / ml se considera
contaminacin
Entre 10,000 y 100,000 u.f.c / ml se considera
sospecha de infeccin
Mayor a 100,000 U.F.C/ml se considera
infeccin
*U.F.C. Unidades Formadoras de Colonias.
Los resultados varan de laboratorio a
laboratorio, por lo que, se sugiere siempre
realizar los anlisis en el mismo laboratorio.

PATOGENESIS Y FLORA MICROBIANA

DE ITU
Las ITU son causadas en la mayora de los
casos por bacterias provenientes de la propia
flora intestinal del paciente, que penetran el
tracto urinario va la uretra llamada ruta
ascendente de la infeccin. En nios y adultos
sin complicaciones, Escherichia coli es el
organismo ms frecuentemente aislado de
urocultivos, siguiendo en frecuencia Klebsiella y
Proteus spp. En adultos sexualmente activos se
encuentran bacterias provenientes de la flora
normal vaginal e intestinal causando UTI.

PREPARACIN DEL SEDIMENTO

EXAMEN MICROSCPICO (recomendado)

El procedimiento elegido debe permitir:

Recuento de leucocitos al menos semicuantitativo
Deteccin de clulas epiteliales (CE): su presencia indica muy
probablemente contaminacin de la muestra por contacto con
genitales externos. Ante un resultado (urocultivo) positivo si se
observa presencia de clulas epiteliales debe pedirse nueva
muestra para confirmar
El examen microscpico debe hacerse en una muestra centrifugada
(si el volumen de la muestra es demasiado pequeo como para
centrifugarlo, por Ej. slo unas pocas gotas, aqulla se examina
directamente, pero se seala en el informe que los resultados se
obtuvieron de una muestra sin centrifugar). Se mezcla la muestra y
se colocan aproximadamente 10-15 ml de orina en un tubo de
centrifugacin, se centrfuga a 2000 r. p.m. durante 5 minutos

AGENTES ETIOLGICOS A INVESTIGAR

RUTINARIAMENTE

Escherichia coli
klebsiella spp.
Enterobacter spp.
Serratia spp.
Enterococus spp.
Proteus spp.
Pseudomonas spp.
Acinetobacter spp.
Cndida spp.
Staphylococus spp.
Estreptococo grupo B
(imprescindible en embarazadas)
neumococos

CULTIVO
Debe permitir el aislamiento y el recuento cuantitativo desde 1.000 10.000 a mas Unidades Formadoras
de Colonias (UFC)/ml. de los uropatgenos ms comunes:
Se sembrar cuantitativamente, generalmente con asa calibrada de 1 10 l. en uno de los siguientes
medios en placa las mas comunes:
- Agar sangre
Manitol salado
Emb (ethylene methyl blue)
Agar azida
CLED
Sb ( saboroud)
Mac conque (levine)
Incubar a 35-37 C en aerobiosis durante 24-48 horas

Lectura de cultivo en UFC/ml.:

Menos de 1.000 10.000 UFC, se informar: menos de 1.000

10.000 UFC.
De 10.000 a 100.000 UFC
Un patgeno sin clulas epiteliales: informar microorganismo,
nmero de colonias, antibiograma y valorar clnicamente
Dos patgenos: informar microorganismos, nmero de colonias y
solicitar nueva muestra.
Ms de dos patgenos: informar cultivo mixto, probable
contaminacin.
100.000 ms UFC:
Uno o dos patgenos: informar identificacin ms antibiograma
Ms de dos especies: informar cultivo mixto, probable
contaminacin

NO SE CULTIVARAN NUNCA
Catteres de Foley.
Orina de miccin o de catter para anaerobios.
Orinas de ms de 2 horas de su recogida sin conservacin
adecuada.
En caso de que no exista posibilidad de recibir las muestras de orina
en el laboratorio con menos de dos horas desde el momento de la
recogida y no se puedan refrigerar las muestras, se podr optar
entre uno de los siguientes procedimientos.
a) Enviar la muestra con un conservante. }
b) Enviar la muestra ya sembrada por el sistema de lamino cultivo
o similar.
En este ltimo caso sera recomendable que el personal de
laboratorio en el momento de la siembra introdujese una tira para
deteccin de leucocitos/nitritos en la orina y anotase los datos
correspondientes a los leucocitos en el vale

Urocultivo positivo a
E. Coli
Servicio de
Microbiologa y
Parasitologa
. Hospital Vall d'Hebrn.
(Barcelona). Dra.
Antonia Andru
Domingo.

Placas de agar McConkey y de agar CLED,donde ha crecido un

Escherichia Coli en cultivo puro, con un recuento superior a 100.000
UFC/ml. (cultivo sembrado con asa calibrada de 1/1000).

MEDIOS DIFERENCIALES
T.S.I
L.I.A
CITRATO DE
SIMMONS
CALDO UREA
SIM
INDOL
MIO

Microorganismos Gram. positivos

Las bacterias Gram. positivas son clulas con
una gruesa pared celular de peptidoglicano.
Ests clulas poseen una membrana
citoplasmtica con fosfolpidos y protenas. Por
fuera de la membrana citoplasmtica se
encuentra la pared celular que est compuesta
por una ancha capa de peptidoglicano. Este
peptidoglicano
es una macromolcula gigante formada por
cadenas de un dmero compuesto por Nacetilglucosamina y N-acetilmurmico

Microorganismos Gram. negativos

Las bacterias Gram. negativas son clulas con
una delgada capa de peptidoglicano y una
segunda envoltura denominada membrana
externa.
Las clulas se encuentran envueltas por una
membrana citoplasmtica formada por una
bicapa fosfolipdica y protenas. Por encima de
esta membrana se encuentra una fina capa de
peptidoglicano que se halla unida
covalentemente a unas lipoprotenas de
anclaje que fijan la membrana externa por
medio de porciones lipoflicas

Tipo de
bacteria
composicin

fotos

GRAM (+)

GRAM (-)

Peptidoglicano

Peptidoglicano

cidos teitoicos

Lipopolisacaridos

Aspecto de la
pared celular al
microscopio
electrnico

ESCALA DE MAC FARLAND

Preparacin del inculo
Mtodo del medio de cultivo lquido: Coger de 3 a 5
colonias iguales de la placa de cultivo de 18 a 24 horas y
sembrarlas en 5 ml de un medio lquido (Brain-Heart,
Todd Hewitt, Tripticasa soja, etc.) e incubar en la estufa
a 35 C durante 2 a 6 horas hasta conseguir o superar
una turbidez del 0.5 de la escala de Mac Farland. Si la
turbidez es superior se realiza el ajuste necesario con
suero salino estril. (Preparacin de la suspensin Mac
Farland ver apartado control de calidad

 Control del inculo: Se utiliza un Mac

Farland 0.5. Para prepararlo se emplea
0.5 ml de 0.048 M de Bacl2 (1,175%
Bacl2+ 2H2O) en 99,5 ml de 0.18 M
H2SO4 (1% v/v) con agitacin constante.
La absorcin a 625 nm ha de estar entre
0.08 y 0.10 (comprobar cada mes).
Alcuotas de 4 a 6 ml se distribuyen en
tubos con tapn de rosca y se guardan en
la oscuridad a temperatura ambiente.

ANTIBIOGRAMA
Cuando hacemos un cultivo de orina, sangre, heces, piel
o de cualquier otra parte de nuestro organismo, lo que
intentamos conocer es que microorganismo es el
causante de la infeccin o enfermedad que estemos
pasando. Una vez hemos logrado aislarlo, diagnosticarlo
y cultivarlo, procederemos a averiguar cual es el
tratamiento adecuado.
Un "ANTIBIOGRAMA" consiste en poner en contacto al
germen que hemos cultivado con distintos antibiticos
para su tratamiento

METODO DE DIFUCION
MTODO DEL ANTIBIOGRAMA DISCO-PLACA

Fundamento

El antibiograma disco-placa basado en el trabajo de Bauer,

Kirby y colaboradores es uno de los mtodos que el National
Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)
recomienda para la determinacin de la sensibilidad
bacteriana a los antimicrobianos. El antibiograma disco-placa
consiste en depositar, en la superficie de agar de una placa
de petri previamente inoculada con el microorganismo, discos
de papel secante impregnados con los diferentes antibiticos

 Tan pronto el disco impregnado de antibitico

se pone en contacto con la superficie hmeda
del agar, el filtro absorbe agua y el antibitico
difunde al agar. El antibitico difunde
radialmente a travs del espesor del agar a
partir del disco formndose un gradiente de
concentracin. Transcurridas 18-24 horas de
incubacin los discos aparecen rodeados por
una zona de inhibicin. La concentracin de
antibitico en la interfase entre bacterias en
crecimiento y bacterias inhibidas se conoce
como concentracin crtica y se aproxima a la
concentracin mnima inhibitoria (CMI)

INDICACIONES Y LIMITACIONES
El antibiograma est indicado cuando se asla
una bacteria responsable de un proceso
infeccioso y no puede predecirse su
sensibilidad, especialmente si se sabe que este
tipo de bacteria puede presentar resistencia a
los antimicrobianos ms habituales. Estas
pruebas de sensibilidad tambin son tiles en
estudios epidemiolgicos ya que el resultado del
antibiograma puede ser considerado como el
primer marcador epidemiolgico del que se
dispone.

pH y DISCOS DE SENSIBILIDAD
El pH del medio debe ajustarse entre 7,2-7,4, debe
almacenarse a 2-8 C y utilizarse dentro de los 7 das
siguientes a su preparacin. El medio debe dejarse a
temperatura ambiente unas dos horas antes de utilizarlo.
Si existe agua en la superficie del agar, las placas
pueden colocarse en el incubador a 35 C durante unos
30 minutos con la tapa ligeramente entreabierta.
Discos de antibiticos. Se deben guardar a 4 C y
dejarlos a temperatura ambiente 1 hora antes de
utilizarlos. Los discos se congelarn si son
antimicrobianos beta-lactmicos y ha de transcurrir ms
de una semana hasta su utilizacin.

INOCULACION DE LAS PLACAS

Antes de que transcurran 15 minutos de haber ajustado
el inculo, introducir un escobilln dentro de la
suspensin y al retirarlo rotar varias veces contra la
pared del tubo por encima del nivel del lquido con la
finalidad de eliminar el exceso de inculo.

Inocular las placas de Mueller-Hinton completamente,

sin dejar ninguna zona libre. Esto se consigue
deslizando el escobilln por la superficie del agar tres
veces, rotando la placa unos 60 cada vez y pasndola
por ltimo por la periferia del agar para conseguir una
siembra uniforme. Dejar secar de 3 a 5 minutos antes de
depositar los discos.

DISPENSACION DE LOS DISCOS

Colocar los discos con los dispensadores o
manualmente con pinzas estriles. Debe
asegurase que contacten perfectamente con la
superficie del agar, por lo que deben
presionarse ligeramente sobre la superficie del
agar. No deben situarse a menos de 15 mm del
borde de la placa, y han de estar distribuidos de
forma que no se produzca superposicin de los
halos de inhibicin. Para placas de 150 mm no
se emplearn ms de 12 discos y para las de
100 mm no ms de 6
INCUBAR.

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Despus de 18 horas de incubacin leer el
dimetro de las zonas de completa inhibicin
con un pie de rey o regla.
Las zonas de los medios transparentes se
miden sobre el reverso de la placa y los medios
que contienen sangre sobre la superficie del
agar
Cuando aparecen colonias dentro del halo de
inhibicin, puede tratarse de mutantes
resistentes, contaminaciones, poblaciones
heterogneas o cultivos mixtos y conviene
volver a identificarlas y realizar otra vez el
ensayo de sensibilidad antimicrobiana

ANTIMICROBIANOS SELECCIONADOS
Es evidente la imposibilidad de ensayar un
gran nmero de antimicrobianos frente a
un microorganismo determinado. La
seleccin final de qu antibiticos deben
ser estudiados depender del Laboratorio
de Microbiologa en sintona con las
decisiones del Comit de Infecciones de
cada hospital. se muestran los
antimicrobianos recomendados por la
NCCLS, agrupados en cuatro grupos
segn el trabajo de Washington

RESULTADOS
Interpretacin: Comparando los dimetros del halo de
inhibicin con la tabla de valoracin de antibiticos del
INS, y estableciendo las correspondientes rectas de
regresin, se han fijado unos criterios para clasificar las
cepas estudiadas. De esta forma se han fijado tres
categoras: sensible (S), intermedia (I) y resistentes (R).
La determinacin de la Concentracin Inhibidora Mnima
(CIM) es la base de la medida de la sensibilidad de una
bacteria a un determinado antibitico. La CIM se define
como la menor concentracin de una gama de diluciones
de antibitico que provoca una inhibicin de cualquier
crecimiento bacteriano visible. Es el valor fundamental
de referencia que permite establecer una escala de
actividad del antibitico frente a diferentes especies
bacterianas.

 Sensible.- si existe una buena

probabilidad de xito teraputico en el
caso de un tratamiento a la dosis habitual.
Resistente.- si la probabilidad de xito
teraputico es nula o muy reducida. No es
de esperar ningn efecto teraputico sea
cual fuere el tipo de tratamiento.
Intermedia.-cuando el xito teraputico es
imprevisible. Se puede conseguir efecto
teraputico en ciertas condiciones (fuertes
concentraciones locales o aumento de la
posologa).

Patrones estndar del halo de inhibicin, puntos de corte equivalente y empleada

como control de calidad segn el INS y CIM.

GRUPO

Antimicrobiano

Carga
del
Disco
(g)

Dimetro del halo de inhibicin (mm)

Punto de corte
Equivalente a la CMI
(g/ml)

Resistente

Intermedia

Sensible

Resistente

Sensible

E. coli
ATC
C
2592
2
inter
valo
b

Ampicilina a,c

10

<13

14-16

>17

>32

<8

16-22

Cefalotina c, d

30

<14

15-17

>18

>32

<8

15-21

Cefazolina c, d

30

<14

15-17

>18

>32

<8

23-29

Gentamicina c

10

<12

13-14

> 15

>8

<4

19-26

20/10

<13

14-17

>18

>16/8

<8/4

19-25

Amoxicilina/cido
clavulnico

Ampicilina/
sulbactam

10/10

<11

12-14

>15

>32/16

<8/4

20-24

Piperacilina/
tazobactam

100/10

<17

18-20

>21

>128/4

<16/4

24-30

Ticarcilina/cido
clavulnico

75/10

<14

15-19

>20

>128/2

<16/2

25-29

Mezlocilina

75

<17

18-20

>21

>128

<64

23-29

Ticarcilina

75

<14

15-19

>20

>128

<16

24-30

Piperacilina

100

<17

18-20

>21

>128

<16

24-30

Cefamandol

30

<14

15-17

>18

>32

<8

26-32

Cefonicid

30

<14

15-17

>18

>32

<8

25-29

Cefuroxima (oral)

30

<14

15-22

>23

>32

<4

20-26

Cefpodoxima

10

<17

18-20

>21

>8

<2

23-28

Cefixima

<15

16-18

>19

>4

<1

23-27

Cefoxitina

30

<14

15-17

>18

>32

<8

23-29

Cefotetan

30

<12

13-15

>16

>64

<16

28-34

Cefmetazol

30

<12

13-15

>16

>64

<16

26-32

Cefoperazonaa

75

<15

16-20

>21

>64

<16

28-34

Cefotaximaa, d

30

<14

15-22

>23

>64

<8

29-35

Ceftizoximaa

30

<14

15-19

>20

>32

<8

30-36

Ceftriaxonaa, d

30

<13

14-20

>21

>64

<8

29-35

Cefepima

30

<14

15-17

>18

>32

<8

29-35

Imipenem

10

<13

14-15

>16

>16

<4

26-32

Meropenem

10

<13

14-15

>16

>16

<4

28-34

Amikacina

30

<14

15-16

>17

>32

<16

19-26

Ciprofloxacino

<15

16-20

>21

>4

<1

30-40

<13

14-16

>17

>8

<2

29-37

1,25/23,75

<10

11-15

>16

>8/152

<2/38

24-32

a, c

Levofloxacino
Trimetoprim/
sulfametoxazol
a, c

Ceftazidimae

30

<14

15-17

>18

>32

<8

25-32

Aztreoname

30

<15

16-21

>22

>32

<8

28-36

Kanamicina

30

<13

14-17

>18

>25

<6

17-25

Netilmicina

30

<12

13-14

>15

>32

<12

22-30

Tobramicina

10

<12

13-14

>15

>8

<4

18-26

Tetraciclina c

30

<14

15-18

>19

>16

<4

18-25

Cloranfenico
l

30

<12

13-17

>18

>32

<8

21-27

Carbenicilina

100

<19

20-22

>23

>64

<16

23-29

Cinoxacino

100

<14

15-18

>19

>64

<16

26-32

Lomefloxaci
no

10

<18

19-21

>22

>8

<2

--

Norfloxacino

10

<12

13-16

>17

>16

<4

28-35

Ofloxacino

<12

13-15

>16

>8

<2

29-33

Loracarbeff

30

<14

15-17

>18

>32

<8

23-29

Nitrofurantoi
na

300

<14

15-16

> 17

>128

<32

20-25

Sulfisoxazol

250 o 300

<12

13-16

>17

>350

<100

15-23

Trimetoprim

<10

11-15

>16

>16

<4

21-28

Fosfomicina

200

<12

13-15

>16

>256

<64

22-30