Curso

Validación de Métodos de Ensayo

Estuardo Monroy Benítez

Ingeniero Químico, USAC, Guatemala
MSc Biotecnología agroalimentaria, UAL, España
Doctor Honoris Causa, AAUN, Florida, USA
Asesor Experto ISO 17025
Consultor Calificado BANCO MUNDIAL, PTB, GTZ, UNION
EUROPEA, USAID, VISION MUNDIAL, OGA, etc.
 Instructor:
Ing. Estuardo Monroy Benítez
Ingeniero Químico, USAC - Colegiado No. 446.
Master en Biotecnología Agroalimentaria, Universidad de Almería, España
Dr. HC en Tecnología – Universidad Andragogica Miami, USA
Experto ISO 17025 por Unión Europea, USAID, PTB Alemania, Banco Mundial, OGA.
35 años Profesor Universitario en Gestión de Calidad e Ingeniería Azucarera, USAC
20 años Evaluador Técnico ISO 17025 de OGA - Laboratorios Físico-químicos y Calibraciones)
Experto en Validación de métodos, Incertidumbre de medición y Aseguramiento de Calidad
25 años Consultor e Implementador de Sistemas ISO 17025 en C.A.
22 años Auditor Interno ISO 19011 para 17025, 9001, 22001, 14001, BPL, BPM, HACCP, etc.
32 años experto Procesos y Control de Calidad en industria azucarera de C. A.
28 años Experto en Cromatografía líquida HPLC en azúcares y Gaseosa en alcoholes
 VALIDACION

Es el proceso por el cual se establece por

estudios de laboratorio que la metodología,
por sus características de desempeño
cumple con los requerimientos que se
pretenden para el método
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2017
7.2.1 Selección, verificación y validación de métodos
7.2.1 Selección y verificación de métodos
7.2.1.1 El laboratorio deberá utilizar métodos y procedimientos apropiados para
todas las actividades de laboratorio y, cuando corresponda, para la evaluación de
la incertidumbre de la medición, así como técnicas estadísticas para el análisis de
datos.

7.2.1.2 Todos los métodos, procedimientos y documentación de respaldo, tales

como instrucciones, estándares, manuales y datos de referencia relevantes para las
actividades de laboratorio, se mantendrán actualizados y estarán disponibles para
el personal (ver 8.3).

7.2.1.5 El laboratorio verificará que puede realizar correctamente los métodos

antes de introducirlos asegurándose de que puede lograr el rendimiento requerido.
Se conservarán los registros de la verificación. Si el organismo emisor revisa el
método, la verificación se repetirá en la medida necesaria
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2017
7.2.2 Validación de métodos
7.2.2.1 El laboratorio validará los métodos no estándar, los métodos desarrollados
en el laboratorio y los métodos estándar utilizados fuera de su alcance previsto o
modificado de otra manera. La validación debe ser tan extensa como sea necesaria
para satisfacer las necesidades de la aplicación o campo de aplicación dados.

NOTA 1 La validación puede incluir procedimientos para el muestreo, la

manipulación y el transporte de los elementos de prueba o calibración.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2017
NOTA 2 Las técnicas utilizadas para la validación de métodos pueden ser una de,
o una combinación de, las siguientes:
a) calibración o evaluación de sesgo y precisión utilizando estándares de referencia
o materiales de referencia;
b) evaluación sistemática de los factores que influyen en el resultado;
c) robustez del método de prueba mediante la variación de los parámetros
controlados, como la temperatura de la incubadora, volumen dispensado;
d) comparación de resultados logrados con otros métodos validados;
e) comparaciones entre laboratorios;
f) evaluación de la incertidumbre de medición de los resultados basada en la
comprensión de los principios teóricos del método y la experiencia práctica del
rendimiento del método de muestreo o prueba.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2017

7.2.2.2 Cuando se realicen cambios en un método validado, se determinará la

influencia de dichos cambios y, cuando se descubra que afectan a la validación
original, se realizará una nueva validación del método.
7.2.2.3 Las características de funcionamiento de los métodos validados según se
evalúa para el uso previsto, deberán ser relevante para las necesidades de los
clientes y consistente con los requisitos especificados.

NOTA Las características de rendimiento pueden incluir, entre otras, el rango de

medición, la precisión, la incertidumbre de medición de los resultados, límite de
detección, límite de cuantificación, selectividad del método, linealidad,
respetabilidad o reproducibilidad, robustez frente a influencias externas o cruces -
sensibilidad a la interferencia de la matriz de la muestra o el objeto de prueba, y
sesgo.
 REQUERIMIENTOS DE LA NORMA
ISO 17025:2017
7.2.2.4 El laboratorio conservará los siguientes registros de validación:
a) el procedimiento de validación utilizado;
b) especificación de los requisitos;
c) determinación de las características de rendimiento del método;
d) resultados obtenidos;
e) una declaración sobre la validez del método, detallando su idoneidad para el uso
previsto.
CASO EJEMPLO DE PROCEDIMENTO…
(Elaborar y documentar métodos de ensayo)
CASO EJEMPLO DE PROCEDIMENTO…
(Ejecutar procesos de verificación y validación de
métodos de ensayo)
 CUANDO VALIDAR Y
REVALIDAR UN METODO
• Cuando validar un método: Antes de
introducirlo como método de rutina.
• Es exigencia normativa
• Cuando revalidar un método: Cuando el
método ha cambiado, es nueva versión y/o
provoca modificaciones en los resultados.
 COMO EMPEZAR
•Definir la aplicación, propósito y alcance del
método original

•Definir parámetros de desempeño (Performance)

•Para definir estos parámetros de desempeño es necesario

hacerse las siguientes preguntas:
Que debe ser analizado?
Cual es la matriz?
Cuales son las expectativas del desempeño
 COMO EMPEZAR…continuación
• Características de desempeño (Performance)
• Calificación de materiales : (Estándares y Reactivos).
• Calificación de equipos (Instrumental y cristalería)
• Documentar el método (Investigar y Seleccionar)
• Desarrollar el procedimiento/Instructivo estándar de
operación –método de rutina-.
 COMO CONTINUAR
• Desarrollo del procedimiento o Protocolo de
validación (Procedimiento/Instructivo)
– Definir criterios de validación.
• Definir los experimentos de validación
• Realizar las pruebas o experimentos de validación
y constatar contra los criterios aceptables de
validación
• DOCUMENTAR LAS PRUEBAS DE VALIDACION Y
RESULTADOS EN EL REPORTE O “DECLARATORIA DE
VALIDACION”.
 Parámetros de validación
• Especificidad/Selectividad
• Linealidad del sistema
• Precisión
• Repetibilidad
• Reproducibilidad
• Exactitud (sesgo, error, recuperación)
• linealidad y ranto del método
• Límite de detección
• Límite de cuantificación
• Tolerancia/ Robustez
• Otros
 Especificidad / Selectividad
(Cómo asegurar que estamos haciendo las mediciones
a los compuestos correctos)

• Especificidad: Es la habilidad de un método

analítico para obtener una respuesta debida
únicamente a la sustancia de interés y no a otros
componentes de la muestra.

• Selectividad: Es la capacidad que tiene un método

analítico, para “distinguir” o separar la respuesta
de la sustancia de interés del resto de los
componentes de una muestra.
 Linealidad
(Como asegurar que la cuantificación sobre un rango es exacta)

• Es la habilidad para asegurar que los

resultados analíticos son proporcionales a la
concentración de la sustancia de interés
dentro de un intervalo o rango determinado.
• Este resultado analítico puede ser obtenido
directamente o por medio de una
transformación matemática.
 Linealidad
• Se determina por ejemplo, construyendo una curva
de calibración (Concentración vrs Respuesta)
utilizando mínimo 5 diluciones preparadas a partir
de una misma solución patrón y haciendo análisis
cuando menos por duplicado para cada dilución.
• Criterios:
• CV < 1.5%
• r > 0.99
r2 > 0.98
• b=O m = Sensibilidad del Sistema
 Precisión
Es el grado de concordancia entre una serie
de determinaciones obtenidas de repetir el
análisis de una muestra homogénea.

La precisión se expresa como la desviación

estándar relativa o el coeficiente de
variación.
Precisión y Exactitud
 Precisión-Repetibilidad
(Resultados de precisión del método dentro del mismo
laboratorio)

• Es la precisión de un método analítico

expresado como la concordancia entre
determinaciones independientes realizadas bajo
las mismas condiciones (Analista, tiempo,
aparato, reactivos, laboratorio, etc)
* Se determina mediante el análisis por
sextuplicado de una misma solución estándar a
la concentración del 100 % establecido en la
linealidad.
• Criterio de aceptación
• CV < 1.5 %
 Precisión - Reproducibilidad
Resultados de precisión del método usándolo en
diferentes condiciones

• Es la precisión de un método analítico expresado

como la concordancia entre determinaciones
independientes realizadas bajo las diferentes
condiciones (Analista, tiempo, aparato, reactivos,
laboratorio , etc.)
• Se determina mediante el análisis por triplicado
de una muestra homogénea del producto final,
valorada por dos analistas y en dos días
diferentes, siendo un total de 12 análisis.
• Criterio de aceptación
• CV < 2%
 Exactitud
(Como aseguras la exactitud de los resultados)

• Es la concordancia entre un valor obtenido

experimentalmente y el valor de referencia.
• Se expresa como el % de recobro obtenido del análisis
de muestras a las que se les ha adicionado cantidades
conocidas de la sustancia.
• Criterio de aceptaci6n
• 0/o Recobrado: 98 a 102%

• CV < 20/o
• % Recuperado vs. % Adicionado
• m = 1 b = 0 r2 > 0.98
 Sensibilidad
(Como conocer el efecto de la diferencia de cambios
versus los resultados)

• Capacidad que tiene un sistema analítico

para detectar pequeñas variaciones en la
concentración de la sustancia de interés
(Pendiente “m” de la curva).
 Límite de detección
(Como asegurar la detección del analito de interés)

• Es la concentración mínima de la sustancia

de interés que puede ser detectada por el sistema
analítico propuesto, pero no necesariamente
cuantificada.

Criterio de aceptación:
• Mínimo 3 veces el nivel de ruido

• Ruido: es la variación observada en la señal del

detector cuando la muestra no esta presente.
 Limite de cuantificación
Como Asegurar la cuantificación exacta rango mínimo
y máximo

• Es la concentración mínima de la sustancia de

interés que puede ser cuantificada de manera
confiable con una exactitud y precisión
adecuada.

• Es particularmente usada para determinación

de impurezas y/o productos de degradación.
• Típicamente 10 a 20 veces la altura del ruido.
 Robustez o Tolerancia
(Precisión ante variaciones en el trabajo normal de rutina)
Robustez: Es la medida de la capacidad que tiene
un sistema analítico de no ser afectado por
pequeñas variaciones en los parámetros
analíticos.
Tolerancia: Es el grado de reproducibilidad de los
resultados analíticos obtenidos por el análisis de
la misma muestra, cuando es influenciada por
condiciones operacionales o ambientales

Cambios en pH, Temperatura, Flujo, Columna,

Reactivo, marca de equipo, etc.
INTERCOMPARACION DE ENSAYOS
Ejemplo de Intercomparación de ensayo en Color del Azucar
Ejemplo de Intercomparación de ensayo en Color del Azúcar
Ejemplo de Intercomparación de ensayo en Color del Azúcar
Ejemplo de un Plan para ejecutar la Validación/Verificación
Ejemplo de un Plan para ejecutar la Validación/Verificación
Ejemplo de Informe deValidación/Verificación
Ejemplo de Informe deValidación/Verificación
 EVALUACIÓN PRÁCTICA

Presentar un PLAN DE VALIDACIÓN DE METODOS

de cualquiera de los ensayos en la acreditación
1. Cronograma
2. Plan que incluye los parámetros de desempeño
3. Criterios de referencia y su bibliografía

Tiempo máximo: 4 días

(Grupos de 2 participantes)
 GRACIAS POR SU ATENCION

ESTUARDO MONROY BENITEZ

Consultorías Monroy & De León
Ingeniero Químico, USAC - Colegiado activo No. 446.
Master en Biotecnología Agroalimentaria, Universidad de Almería, España
Dr. HC en Tecnología – Universidad Andragogica Miami, USA
Experto ISO 17025 por Unión Europea, USAID, PTB Alemania, Banco Mundial, OGA.
Auditor interno ISO 17025 PTB 2004

Guatemala, C. A. – ingmonroy1@yahoo.com - Tel. (502) 57748672