CONTROL HIGIENICO - Frascos Spray

 CONTROL HIGIENICO
Proceder según POE-CC-MB-008 “Control higiénico de material de empaque primario”

versión vigente.
Preparación de la muestra
- Tomar 50 unidades de Frascos Tukol Buc Spray y colocarlos de a grupos de 10.

Colocar dentro de cada frasco, solución fisiológica estéril (también puede utilizarse
agua destilada o agua peptona estéril). Dejar reposar 2 a 5 minutos bajo flujo
laminar.
Recuento en placa de microorganismos aerobios totales
- Filtrar a través de membrana de nitrocelulosa de 0,45 um de poro (utilizar monitor

estéril o unidad filtrante previamente esterilizada) la solución fisiológica contenida
dentro de 10 frascos.
- Realizar un lavado con 100 mL de solución fisiológica.
- Transferir la membrana, en forma aséptica con pinza estéril, a una placa de Agar
Digerido de Caseína-Soja (TSA) con la parte de retención hacia arriba, evitando la
formación de burbujas entre la membrana y el medio.
- Repetir, utilizando otras 10 unidades de frascos.
- Tapar las placas e incubar a 30-35°C durante 3-5 días (*).
- Contar el número de colonias en las placas sembradas, promediar y dividir por 10

para poder expresar el resultado en términos de unidades formadoras de colonias
por envase. Si no se detectan colonias en las placas expresar los resultados como
menos de 1 unidad formadora de colonia por envase (<1 UFC/envase).
Recuento en placa de hongos filamentosos y levaduras

- Realizar un lavado con 100 mL de solución fisiológica.
- Transferir la membrana, en forma aséptica con pinza estéril, a una placa de Agar
Sabouraud (SDA) con la parte de retención hacia arriba, evitando la formación de
burbujas entre la membrana y el medio.
- Repetir, utilizando otras 10 unidades de frascos.
- Tapar las placas e incubar a 20-25°C durante 5-7 días (*).

- Contar el número de colonias en las placas sembradas, promediar y dividir por 10
para poder expresar el resultado en términos de unidades formadoras de colonias
por envase. Si no se detectan colonias en las placas expresar los resultados como
menos de 1 unidad formadora de colonia por envase (<1 UFC/envase).
(*) Revisar las placas a diario ya que hay microorganismos que se desarrollan de
forma invasiva a las 48 hs. de ser incubadas.
Investigación de Microorganismos específicos
Preparación de la muestra

- Transferir la membrana en forma aséptica con pinza estéril a un frasco con 90 mL

de caldo TSB.
- Incubar a 30 -35º C durante 18 a 24 hs para la investigación de Pseudomonas

aeruginosa y Staphylococcus aureus; y continuar incubando a la misma
temperatura por 24 a 48 hs más, para la investigación del complejo Burkholderia
cepacea.
- Observar el medio en busca de desarrollo, en forma de turbidez.
Investigación de Pseudomonas aeruginosa:
- Tomar con ansa estéril una muestra del caldo TSB preparado en el punto
“Preparación de la muestra” y realizar un repique sobre placa de Agar Cetrimida.
Incubar a 30°C- 35°C durante 18-72 hs.
- Si hay desarrollo de colonias generalmente verdosas con halo azul y fluorescentes

a la luz UV (254 ηm), identificarlas según POE CC-MB-003 CEPARIO DE
MICROBIOLOGIA CONTROL USO MANTENIMIENTO E IDENTIFICACION DE
MICROORGANISMOS, versión vigente, para descartar o confirmar la presencia de
Pseudomonas aeruginosa.
Investigación de Staphylococcus aureus
“Preparación de la muestra” y realizar un repique sobre placa de Agar Manitol
Salado. Incubar a 30°C- 35°C durante 18-72 hs.
- Si hay desarrollo de colonias típicas amarillas o blancas rodeadas de una zona

amarilla, identificarlas según POE CC-MB-003 CEPARIO DE MICROBIOLOGIA
CONTROL USO MANTENIMIENTO E IDENTIFICACION DE
MICROORGANISMOS, versión vigente, para descartar o confirmar la presencia de
Staphylococcus aureus
Investigación del complejo Burkholderia cepacea
“Preparación de la muestra”, y realizar un repique sobre placa de agar selectivo
para Burkholderia cepacia (BCSA), e incubar a 30 °C - 35 °C durante 48 - 72
horas. Generalmente las colonias del cBc desarrollan en el medio con las
siguientes características: colonias de color marrón verdoso con halos de color
amarillo o colonias de color blanco rodeadas de una zona de color rosado–rojo.
Toda colonia que desarrolle en el medio selectivo para cBc debe ser identificada
según el POE-CC-MB-003 CEPARIO DE MICROBIOLOGIA CONTROL USO,
MANTENIMIENTO E IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS, VERSIÓN
VIGENTE, para descartar o confirmar presencia de del complejo Burkholderia
cepacea.
- Especificaciones:
-Recuento de bacterias aerobias totales < 200 UFC/envase
-Recuento de hongos filamentosos y levaduras < 20 UFC/envase
- Ausencia de Staphylococcus aureus / envase
- Ausencia de Pseudomona aeruginosa / envase
- Ausencia del complejo Burkholderia cepacea/ envase

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 CONTROL HIGIENICO

Proceder según POE-CC-MB-008 “Control higiénico de material de empaque primario”

- Tomar 50 unidades de Frascos Tukol Buc Spray y colocarlos de a grupos de 10.

Recuento en placa de microorganismos aerobios totales

- Filtrar a través de membrana de nitrocelulosa de 0,45 um de poro (utilizar monitor

- Realizar un lavado con 100 mL de solución fisiológica.

- Repetir, utilizando otras 10 unidades de frascos.

- Tapar las placas e incubar a 30-35°C durante 3-5 días (*).

- Contar el número de colonias en las placas sembradas, promediar y dividir por 10

Recuento en placa de hongos filamentosos y levaduras

- Filtrar a través de membrana de nitrocelulosa de 0,45 um de poro (utilizar monitor

- Realizar un lavado con 100 mL de solución fisiológica.

- Repetir, utilizando otras 10 unidades de frascos.

- Tapar las placas e incubar a 20-25°C durante 5-7 días (*).

Investigación de Microorganismos específicos

- Filtrar a través de membrana de nitrocelulosa de 0,45 um de poro (utilizar monitor

- Transferir la membrana en forma aséptica con pinza estéril a un frasco con 90 mL

- Incubar a 30 -35º C durante 18 a 24 hs para la investigación de Pseudomonas

- Observar el medio en busca de desarrollo, en forma de turbidez.

Investigación de Pseudomonas aeruginosa:

- Si hay desarrollo de colonias generalmente verdosas con halo azul y fluorescentes

Investigación de Staphylococcus aureus

- Si hay desarrollo de colonias típicas amarillas o blancas rodeadas de una zona

Investigación del complejo Burkholderia cepacea

-Recuento de bacterias aerobias totales < 200 UFC/envase

-Recuento de hongos filamentosos y levaduras < 20 UFC/envase

- Ausencia de Staphylococcus aureus / envase

- Ausencia de Pseudomona aeruginosa / envase

- Ausencia del complejo Burkholderia cepacea/ envase

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