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Hipotesis de Trabajo
Hipotesis de Trabajo
Hipotesis de Trabajo
Hiptesis nula:
Hiptesis alternativa:
Materialesy equipo
Pipetas graduadas estriles de 1 mL con tapn de algodn a, c. (se debe
utilizar una pipeta para cada dilucin)
Pipetas Pasteur estriles
Pipetas graduadas estriles de 10 mL con tapn de algodn. a. (en caso
que la
muestra sea lquida.
Varillas de vidrio de 3.5 mm de dimetro aproximadamente y 20 cm. de
largo,
dobladas en ngulo recto (forma de L), estriles (se debe utilizar una por
dilucin). a
Utensilios estriles para manipular las muestras: cuchillos, cucharas,
pinzas, tijeras,
esptulas y separador de huevo. a
Vaso de licuadora estril o Bolsa para Stomacher a
Motor para licuadora o Stomacher a.
Asa bacteriolgica
Portaobjetos
Microscopio ptico
Balanza granataria .
Horno para esterilizar material de vidrio.
Autoclave
Bao de agua a ebullicind
Incubadora a 35 2C
PROCEDIMIENTO
1. Aislamiento selectivo.
1. Pesar 10.0 g de muestra en una caja de Petri estril.
2. Transferir la muestra pesada a una bolsa de Stomacher o vaso de
licuadora estril.
3. Adicionar 90.0 mL de agua peptonada estril al 0.1% o solucin
amortiguadora de fosfatos 0.1M de pH 7.2.
4. Homogeneizar 30 segundos en Stomacher a velocidad media o 10
segundos en licuadora a velocidad mnima.
5. Realizar diluciones decimales hasta 10-4(el nmero de diluciones est en
funcin de la procedencia de la muestra) en tubos de 16 x 150 mm
conteniendo cada tubo 9.0 mL del mismo diluyente.
6. Transferir 0.1 mL de las diluciones 10-1, 10-2,10-3 y 10-4 10-5 10-6 a
cajas de Petri con agar Baird Parker.
7. Extender el volumen inoculado a cada una de las cajas de Petri con una
varilla de vidrio estril, en forma de L, iniciando a partir de la mayor
dilucin (Mtodo de inoculacin por extensin en superficie).
8. Mantener las placas en su posicin hasta que el inculo sea absorbido
por el
agar, entre 5 y 10 minutos aproximadamente.
9. Invertir las placas e incubar a 35 1 C. durante 45 a 48 h.
10.Despus de incubar, observar las colonias caractersticas de este
microorganismo en el agar Baird Parker (BP). stas se presentan como:
colonias negras, circulares, brillantes, convexas, lisas con dimetro de 1 a 2
mm, muestran una zona circular opaca y un halo claro alrededor de la
colonia.
2. Recuperacin de la cepa.
1. Seleccionar las placas que contengan entre 15 y 150 colonias tpicas de
S. aureus, si no es posible, seleccionar las placas que contienen
concentraciones de la muestra ms diluidas, no obstante que contengan
ms de 150 colonias.
2. Cuando las placas contengan menos de 15 colonias tpicas, tambin
pueden ser utilizadas y al reportar se deber agregar la nota de valor
estimado.
3. Con ayuda del cuadro 1, determinar el nmero de colonias a evaluar,
tomando en cuenta el nmero de colonias tpicas de S. aureus obtenidas en
el agar Baird-Parker: As mismo seleccionar las colonias para realizar las
pruebas cuantitativas y cualitativas; dentro de estas ltimas estn
comprendidas la coagulasa y la termonucleasa.
4. Reinocular cada una de las colonias aisladas y seleccionadas, que son
caractersticas de este microorganismo, utilizando asa bacteriolgica recta
estril, en caldo infusin cerebro corazn.
5. Incubar a 35 1 C durante 24 h.6. Inocular e incubar en la misma forma,
cepas tipo de S. aureus ATCC 6538 y S. epidermidis ATCC 12228, como
controles positivo y negativo
pruebas bioqumicas.
NOTA
Analizar la consistencia del cogulo y registrar sta, de acuerdo con los
valores
del cuadro 2.Considerar la prueba positiva solamente si hay formacin de
cogulo con un valor igual o superior a 2 cruces.
Pruebas de suceptibilidad