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    RECUENTO Bacillus Cereus

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    Recuento microbiológico de Bacillus cereus

    En primer lugar hay que esterilizar todo el material de vidrio


    en estufa por calor seco , por 1 hora a 170°C

    Luego preparar el medio de cultivo y esterilizarlo


    MEDIOS DECULTIVO:

    Para cultivar microorganismos en el laboratorio se debe preparar un medio de cultivo, con todos los
    nutrientes necesarios para su crecimiento.

    En este caso se debe preparar el medio de cultivo selectivo para Bacillus cereus

    Se prepara de acuerdo a instrucciones del envase y se esteriliza por calor húmedo en autoclave
    Muestra

    Tomaremos como muestra 5 gr. de arroz cocido (dejado fuera


    de la heladera por 2 días) lo homogeneizaremos con 45 ml. de
    agua peptonada ( puede ser en una botella de vidrio o en
    bolsas de homogeneización)

    Luego pasar a 2 tubos y llevar 15 minutos a baño de agua a 60


    – 80 ºC. Enfriar 1 hora.
    Preparación de diluciones
    Para utilizar los métodos de recuento en placa es necesario que
    el número de colonias que se desarrollan en las placas sea el
    adecuado. Para obtener el número apropiado es necesario
    hacer diluciones de la muestra original. Se
    realizan diluciones decimales a partir del homogeneizado
    tomando 1 ml y colocándolo en 9 ml de diluyente, cambiando
    pipeta al efectuar cada dilución.
    Se considera al homogeneizado como la dilución 10-1.

    Para este práctico prepararemos diluciones hasta 10-4


    Para Bacillus cereus se realiza siembra en superficie,
    0,1 ml. de las diluciones decimales en placas con
    medio para Bacillus cereus.
    B- RASTRILLADO

    ALICUOTA
    0,1 ml
    Espátula de drigalsky
    INCUBAR A 30°C DURANTE 24 HS. PARA Bacillus cereus ,
    para hongos se incuba a 25- 28°C durante 4,5 días.
    1. OBSERVACIÓN

    Macroscópica:

    Colonias: Población de células, originadas de divisiones de una única


    célula y se observa macroscópicamente en medio sólido.
    Recuento de UFC (unidades formadoras de colonia)
    Conteo

    Se realiza el conteo de UFC por ejemplo si hay 45 colonias en la placa que


    sembré la dilución 10 a la menos 3, la cuenta es:

    45 X 10 elevado a la 3 X 10 ( porque sembré en superficie 0,1 ml.)

    El resultado es 450000 UFC (unidades formadoras de colonias ) por gramo de


    alimento
    2. OBSERVACIÓN
    Microscópica:

    MICROSCOPIA Y COLORACION DE GRAM


    COLORACIONES: Tinción de Gram Nicolle
    1. Primer colorante: Violeta de Genciana.
    2. Mordiente: solución de Lugol
    3. Decolorante: alcohol acetona
    4. Segundo colorante (de contraste): Safranina o fucsina
    Bacilos Gram positivo Bacilos Gram negativo
    Se puede realizar la tinción de esporas

    Bacillus cereus

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