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Practica 8 Bioquimica
Practica 8 Bioquimica
Practica 8 Bioquimica
INTRODUCCIÓN
Los reactivos de biuret contienen CuSO4 (debido a la presencia de NaOH) en una solución
acuosa alcalina. La reacción se basa en la formación de un compuesto púrpura debido a la
formación de un complejo de coordinación entre el ion Cu+2 y el par solitario de electrones
de nitrógeno que forman parte del enlace peptídico si la reacción es positiva. Si el biuret tiene
una reacción negativa, permanece azul.
Las proteínas tienen un nivel de pH característico donde su carga neta es cero. Este valor de
pH se denomina punto isoeléctrico (PI). En el punto isoeléctrico, las cargas positivas y
negativas están en equilibrio, por lo que las proteínas tienen el mayor potencial de
precipitación, reduciendo su solubilidad y favoreciendo su agregación. El punto isoeléctrico
es el valor de pH en el que la carga neta es cero y no se produce transferencia de campo
eléctrico. Para los aminoácidos, generalmente se consideran puntos isotónicos, donde las
cargas positivas y negativas son iguales.
Para las proteínas, estos dos puntos no siempre son los mismos porque los iones distintos de
los iones de hidrógeno (H+) pueden unirse a los aminoácidos. La caseína constituye el 80 %
de la proteína de la leche y el 2,7 % de la composición de la leche líquida. La caseína es una
proteína láctea conjugada del tipo fosfoproteína, que se separa de la leche por acidificación y
forma una masa blanca. En la caseína, la mayoría de los grupos fosfato están unidos a los
grupos hidroxilo de los aminoácidos serina y treonina.
La caseína en la leche existe en forma de sales de calcio. Las caseínas son un grupo
heterogéneo de proteínas y, por lo tanto, difíciles de definir. Pero todas las proteínas de
caseína tienen una cosa en común: cuando la leche se acidifica a un pH de 4,6, precipitan. Es
por eso que la caseína también se conoce como una proteína de leche insoluble.
MARCO TEÓRICO
Proteínas: Las proteínas son moléculas grandes y complejas que desempeñan muchas
funciones críticas en el cuerpo. Realizan la mayor parte del trabajo en las células y son
necesarias para la estructura, función y regulación de los tejidos y órganos del cuerpo.
Propiedades de las proteínas: Las propiedades de las proteínas dependen básicamente de los
radicales R presentes en los aminoácidos que las constituyen, que pueden reaccionar entre sí
y con las sustancias que los rodean. El centro activo de una proteína viene dado por los
aminoácidos, cuyos radicales pueden reaccionar con otras moléculas. Las principales
propiedades de las proteínas son tres:
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Especificidad: La especificidad se refiere a su función; cada una lleva a cabo una
determinada función y lo realiza porque posee una determinada estructura primaria y una
conformación espacial propia; por lo que un cambio en la estructura de la proteína puede
significar una pérdida de la función. Además, no todas las proteínas son iguales en todos los
organismos, cada individuo posee proteínas específicas suyas que se ponen de manifiesto en
los procesos de rechazo de órganos trasplantados. La semejanza entre proteínas son un grado
de parentesco entre individuos, por lo que sirve para la construcción de "árboles
filogenéticos".
Solubilidad: Las proteínas son solubles en agua cuando adoptan una conformación globular.
La solubilidad es debida a los radicales (-R) libres de los aminoácidos que, al ionizarse,
establecen enlaces débiles (puentes de hidrógeno) con las moléculas de agua.
PROCEDIMIENTO
Agitar cada tubo y observar la coloración formada. Dibuje los resultados obtenidos.
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Huevo, leche, sacarosa
ANÁLISIS DE RESULTADOS
Coloración de la albúmina de huevo: luego de haber agregado reactivo de biuret 0.5 ml, se
agitó el tubo de ensayo y se observó después de un minuto que esté presentó un precipitado
de color violeta oscuro y a medida que pasó unos pocos minutos el color se volvió más
intenso. segun la teoria nos dice que al tornarse de color violeta oscuro nos indica que la
reacción fue positiva e indicando la presencia de proteínas.
Coloración de la leche: al agregar reactivo de biuret 0.5 ml, se agitó el tubo de ensayo y se
observó después de un minuto que este presentó un color violeta claro. Esto quiere decir que
si hay presencia de enlaces peptídicos.
Coloración de la sacarosa: al agregar reactivo de biuret 0.5 ml, se agitó el tubo de ensayo y
se observó después de un minuto que este presentó una coloración azul cielo. En esta
reacción no hay presencia de enlaces peptídicos.
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ANÁLISIS DE RESULTADOS:
- Tubo con ácido acético al 5%: En este caso a medida que aumenta la temperatura de
la proteína, su estructura cambia, provocando la desnaturalización de la proteína.
Como también el factor de cambio de pH provocado por el ácido, facilita la
deformación de las estructuras de un estado complejo como lo pueden ser las
terciarias y las cuaternarias a una estructura básica como lo es la primaria.
1 3 mL 0.5 g
2 3 mL 0.5 g
3 3 mL 0.5 g
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ANÁLISIS DE RESULTADOS
El agente que facilitó la separación de las proteínas fue el Sulfato de Amonio, ya que altera la
solubilidad por la presencia de sal en altas concentraciones, este reactivo también provoca la
desnaturalización de las estructuras de los aminoácidos.
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Se adiciona despacio el etanol y sin agitar. Observe la formación de precipitado en la
zona de unión de los dos líquidos.
ANÁLISIS DE RESULTADOS
La función del etanol consta de principalmente en 3 Formas:
l) Cambiar la fluidez de la membrana que afectará directamente la operación
proteínas tales como enzimas y canales.
2) Produce una deshidratación a nivel de membrana.
3) interactúa directamente con las proteínas de la membrana.
● Albúmina de huevo: El alcohol reacciona con la albúmina, responsable de convertir
la clara transparente en una tonalidad blanca; ya que el alcohol rompe los enlaces
proteicos de las claras de huevo.
● Leche: El alcohol provoca inestabilidad coloidal de las micelas de caseína debido a su
efecto desnaturalizante. Entre los muchos factores que contribuyen a la inestabilidad
de la leche se encuentran el pH de la leche, la raza, la calidad nutricional y el
equilibrio mineral. Por esta razón los enlaces peptídicos se separan hasta cierto punto
quedando en el precipitado las estructuras que no fueron separadas.
● Sacarosa: Por último, el etanol tuvo total efecto sobre la sacarosa pues desintegró
cada estructura que poseía, sin generar precipitación
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5. DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA CASEÍNA
Extracción de la Caseína
Agregue 20 mL de agua destilada y 5 mL de NaOH 1N; agite hasta lograr una solución
total de la caseína.
Una vez disuelta la caseína, se vierte en un matraz aforado de 50 mL, adicione 5mL de
ácido acético 1N y diluya con agua destilada hasta 50 mL y mezcle bien.
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7 5.0 ml - 4.0 ml - 1.0 ml 4.1
8 1.0 ml - 8.0 ml - 1.0 ml 3.8
9 7.4 ml - - 1.6 ml 1.0 ml 3.5
✓ Agitar cada uno de los tubos de ensayo cada vez que añade un reactivo y esperar unos 3
minutos.
✓ La aparición de turbidez indicará la insolubilidad de la proteína.
✓ Mayor turbidez menor solubilidad de la proteína.
✓ Escriba el valor del punto isoeléctrico de la caseína y explique por qué llego a esa
conclusión.
El punto isoelectrico de la caseína no se logro identificar pero el de la albúmina de
huevo es 4.4 se llega a esta conclusión teniendo en cuenta que en este tubo se presentó
mayor turbidez y algo de precipitado según la teoría este tipo de proteínas en general,
son solubles en agua, se digieren fácilmente y contienen una buena proporción de
aminoácidos esenciales. Su punto isoeléctrico es 4,9 y pues nuestro dato está cerca hay
que tener en cuenta que se pudieron cometer errores en el momento de medir.
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Hay que tener en cuenta que no pudimos utilizar la caseína de acuerdo que un
grupo al utilizarla no obtuvo resultados y se concluyó que podía estar en mal
estado o mal preparada de acuerdo a esto se utilizó la albúmina de huevo la
cual no se obtuvo mucho resultado solo en uno intentó haber un poquito
precipitado y otros 4 intentaron obtener una leve turbidez y las demás no se
obtuvo ningún resultado, al haber utilizado la caseína esta tiende a tomar un
color violeta y en uno de estos tubos se notaría más turbio .
● ¿La caseína tiene que ver con la calidad de la leche?
Dentro de la caseína de la leche, la kappa-caseína tiene gran influencia en la
composición de la leche en relación con su capacidad de coagulación, tiempo
de formación del cuajo, tasa de formación de la cuajada, y vigor del coágulo
en la producción de queso para consumo humano
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS.
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● juntadeandalucia.es. Recuperado el 25 de noviembre de 2022, de
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ubén, J., & Mairena, E. (n.d.). Efecto del Etanol sobre las Membranas Biológicas.
http://cidbimena.desastres.hn/RMH/pdf/1993/pdf/Vol61-1-1993-4.pdf
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