Montoya

Biomédica
AE, Menco J, Osorio N, et al.
2008;28:252-61 Biomédica 2008;28:252-61

ARTÍCULO ORIGINAL

Concordancia entre gota gruesa, inmunocromatografía

y reacción en cadena de la polimerasa para el
diagnóstico de malaria
Astrid Elena Montoya1, José Menco1, Natalia Osorio2, María Alejandra Zuluaga2,
Juliana Duque2, Giovanny Torres1, Marcos Restrepo1
1
Instituto Colombiano de Medicina Tropical-CES, Sabaneta, Colombia
2
Facultad de Medicina, Universidad CES, Medellín, Colombia

Introducción. El diagnóstico oportuno y efectivo del paludismo, o malaria, son condiciones

determinantes para hacer un tratamiento adecuado de la enfermedad y un control de la misma.
Objetivo. Se evaluó la concordancia de la sensibilidad, especificidad, valor diagnóstico positivo
y negativo de una prueba rápida y de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), con la
prueba estándar, la gota gruesa, para el diagnóstico de la malaria.
Materiales y métodos. Se analizó una población de 100 pacientes con signos y síntomas
indicativos de paludismo, procedentes de las zonas de Urabá, Córdoba, Bajo Cauca y de otras
regiones de Colombia, como Valle, Chocó y Vichada, todas áreas endémicas de la enfermedad.
A cada paciente se le practicó una gota gruesa, la prueba rápida OptiMAL® y la amplificación
a través de una PCR de secuencias de ADN específicas para género y para Plasmodium
falciparum y Plasmodium vivax.
Resultados. La sensibilidad de la prueba rápida frente a la gota gruesa, para el diagnóstico de
ambas especies de Plasmodium fue de 93,85% (IC95% 87,23-100) y la especificidad de
94,29% (IC95% 85,17-100).
La PCR comparada con la gota gruesa mostró una sensibilidad de 100% (IC95% 99,23-100)
y una especificidad de 97,14% (IC95% 90,19-100).
Conclusiones. Estos hallazgos muestran que la sensibilidad y especificidad de la prueba
rápida y la PCR para el diagnóstico de malaria son comparables con el examen al microscopio
de la gota gruesa, recomendada por su eficacia y bajo costo.
Palabras clave: Plasmodium, malaria/diagnóstico, técnicas y procedimientos diagnósticos,
valor diagnóstico de las pruebas, sensibilidad y especificidad, reacción en cadena de la
polimerasa.
Concordance between thick blood smear, immunochromatography and polymerase chain
reaction for malaria diagnosis
Introduction. The rapid and effective diagnosis of malaria is the determining condition for an
appropriate treatment and control of the disease.
Objective. The sensitivity, specificity and the positive and negative predictive values were
evaluated in cases of suspected malaria in Colombia in a comparison of a rapid diagnostic test.
the PCR test and the thick blood smear—the traditional ‘gold standard.’
Materials and methods. A group of 100 patients with symptoms compatible with malaria, were
included in the study. They were selected from the following Colombian regions: Urabá, Córdoba,
lower Cauca, and relatively fewer from other malaria endemic areas of Colombia including the
provinces of Valle, Chocó in the central west of Colombia and Vichada to the east. To each
patient the following three tests were performed: the rapid OptiMAL® test, the PCR identification
and the thick blood smear. The PCR amplified specific DNA sequences with primers designed
to identify the genus Plasmodium, and the two species present in Colombia, P. falciparum and
P. vivax.
Results. The sensitivity of the rapid test versus the thick smear, for the diagnosis of both
species of Plasmodium was 93.9% (95% CI: 87-100%) and the specificity was 94.3% (95% CI:

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Biomédica 2008;28:252-61 Diagnóstico de malaria con OptiMAL® y PCR

85-100%). The PCR compared with the thick smear showed a sensitivity of 100% (95% CI: 99-
100%) and a specificity of 97.1% (95% CI: 90-100%).
Conclusions. The sensitivity and specificity of the three tests did not present statistically
significant differences. However, the thick blood smear was recommended as the standard
test, mainly due to its low cost.
Key words: Plasmodium, malaria/diagnosis, diagnostic techniques and procedures, predictive
value of tests, sensitivity and specificity, polymerase chain reaction.

La malaria, o paludismo, es una enfermedad para- identificación de la especie del parásito. Bajo
sitaria, a la cual están expuestos 2.600 millones condiciones óptimas, la sensibilidad de la gota
de personas, sobre todo aquéllas que habitan las gruesa es de 10 a 30 parásitos por microlitro de
regiones tropicales del mundo, en territorios sangre, lo que, aproximadamente, equivale a
situados hasta los 1.600 metros sobre el nivel del 0,001% de glóbulos rojos infectados (7). Por otra
mar, con lluvias escasas, una temperatura media parte, requiere de insumos, equipos y personal
de 25 °C o en zonas donde predomina la vegetación capacitado, particularmente cuando las parasitemias
selvática (1,2). El 85% del territorio colombiano son bajas o existe una infección mixta, además
reúne las condiciones climáticas y geográficas del control periódico de la calidad de los procesos
que favorecen la transmisión de la enfermedad. y de la experiencia de los microscopistas (8).
De las cuatro especies del parásito que causan Se han empleado métodos alternativos para la
la enfermedad, Plasmodium vivax y Plasmodium identificación de las especies de Plasmodium a
falciparum son responsables de casi la totalidad partir de muestras de sangre, como las pruebas
de los casos que se presentan en Colombia, inmunocromatográficas y las moleculares.
donde la enfermedad es endémica con casos
Las pruebas inmunocromatográficas, o rápidas,
autóctonos de prevalencia estable.
denominadas así porque se pueden hacer junto
En las localidades endémicas de Colombia se al paciente, se basan en un inmunoensayo que
registraron 125.872 y 107.866 casos de paludismo incorpora un anticuerpo monoclonal, algunas de
para los años 2004 y 2005, respectivamente (3,4), ellas contra la proteína II del parásito rica en
cifras que demuestran que aun con acciones histidina (HRP-2) útil para el diagnóstico de P.
orientadas al diagnóstico y tratamiento oportuno falciparum (9-14), cuyo antígeno permanece por
del paludismo, la prevalencia de esta enfermedad más de dos semanas lo que da como resultado
no se ha modificado en los últimos años. falsos positivos. Otra prueba rápida, el DiaMed
El diagnóstico oportuno y efectivo es determinante OptiMAL® (Flow Inc., Portland, Oregon) detecta
para hacer el tratamiento adecuado de la el antígeno lactato deshidrogenasa (pLDH),
enfermedad y el control de la misma. La detección enzima metabólica del parásito que se expresa
y la identificación por microscopía de las especies sólo en los parásitos vivos, incluidos los
de Plasmodium en muestras de sangre gametocitos, y se usa para el diagnóstico tanto
coloreadas con Giemsa y otros colorantes, ha sido de P. falciparum como de P. vivax (11,15-20).
tradicionalmente el método de referencia y no ha Esta metodología permite hacer un diagnóstico
tenido modificaciones desde el año 1903 (5,6). rápido o de urgencia, y es muy útil en lugares
La gota gruesa es una metodología sencilla de apartados donde no se dispone de un microscopio
realizar, económica, rápida, que permite la o de una persona debidamente entrenada para el
estudio de la gota gruesa. Tiene una sensibilidad
Correspondencia:
de 97% en infecciones cuando existen más de
Astrid Elena Montoya, Carrera 43ª Nº 52 sur-99. 100 parásitos/µl. También, como en el caso de la
Teléfono: (574) 305 3500; fax: (574) 301 4258. gota gruesa, puede dar falsos negativos cuando
amontoya@ces.edu.co la parasitemia es baja. Los inconvenientes de las
Recibido: 18/09/07; aceptado: 15/02/08 pruebas rápidas radican en que no es posible hacer

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Montoya AE, Menco J, Osorio N, et al. Biomédica 2008;28:252-61

un cálculo del número de parásitos y que en Colombia, que consultaron a los puestos de las
pacientes tratados, la presencia de gametocitos direcciones locales de salud de los municipios de
da una prueba positiva para P. falciparum (15-20). las zonas mencionadas, y a las sedes del Instituto
Colombiano de Medicina Tropical-CES de
Los métodos moleculares basados en la amplifi-
Apartadó y de Sabaneta, en Antioquia, y que dieron
cación del ADN se han empleado desde finales
su consentimiento para participar en este trabajo.
de la década de los años 80 para el diagnóstico
de la malaria (12). El valor de la reacción en cadena Técnica de recolección
de la polimerasa (PCR), método para el cual se Las muestras de sangre para realizar la gota
han descrito diferentes secuencias blanco de gruesa, impregnar un papel de filtro para la
amplificación y condiciones de reacción, radica extracción de ADN y llenar una pipeta aforada con
en la alta sensibilidad, puesto que detecta de tres 10 µl para la prueba inmunocromatográfica, se
a cuatro parásitos por µl de sangre (0,0005% a obtuvieron por punción con lanceta del pulpejo del
0,0015% de glóbulos rojos infectados). Además, dedo medio de la mano.
permite la diferenciación de las especies, cuando
existen dificultades morfológicas o una infección Tanto la lectura de la gota gruesa como la prueba
mixta (10,16,21-25). rápida se efectuaron una vez tomada la muestra.
El papel de filtro impregnado con la sangre, así
Este es un método poco práctico para un diagnós- como la gota gruesa ya coloreada con azul de
tico de urgencia y su uso está limitado a países metileno fosfatado, se conservaron a temperatura
donde el paludismo no es endémico. También, y ambiente (28 °C a 32 °C) en el sitio de toma de la
como en el caso de la gota gruesa, requiere per- muestra hasta su traslado al laboratorio del
sonas expertas para ejecutar la técnica e Instituto Colombiano de Medicina Tropical en
interpretar los resultados. En la práctica, es un Sabaneta, lugar en el cual se hizo la extracción
método más costoso y puede generar confusiones de ADN a partir del papel de filtro impregnado con
por que detecta ADN de parásitos no viables. la sangre y el control de calidad de la lectura de la
En el presente estudio, se compararon el método gota gruesa.
de PCR y la prueba de captación inmunocromato- Procesamiento de las muestras
gráfica OptiMAL®, usando como método de
referencia para el diagnóstico de Plasmodium spp. La gota gruesa, realizada por duplicado, se coloreó
la gota gruesa, y se determinaron la sensibilidad, con azul de metileno fosfatado y luego se tiñó
la especificidad, los valores diagnóstico positivo con el colorante de Romanowsky modificado. El
y negativo de las pruebas. diagnóstico fue hecho por una persona capacitada
en la preparación, lectura e informe de la gota gruesa.
Materiales y métodos
El conteo de los parásitos se hizo con base en
Área y población de estudio 100 leucocitos y, para informar la parasitemia por
Se realizó un estudio descriptivo de concordancia mm3 se empleó como valor de referencia 8.000
de 100 muestras obtenidas del mismo número de leucocitos. La muestra se consideró negativa
pacientes, correspondiente a una muestra ampliada, cuando no se observaron formas del parásito en
que se calculó con base en una población de más de 200 campos microscópicos revisados.
107.866 casos de paludismo que se registraron Se informó paludismo mixto cuando en 100
en Colombia para el año 2005, una prevalencia parásitos se encontraron trofozoítos maduros,
del evento (sensibilidad de la prueba) de 95% y esquizontes, gametocitos de P. vivax y 40% o
un nivel de confianza de 95%. más de trofozoítos inmaduros o la presencia de
Se consideraron para el estudio pacientes mayores gametocitos de P. falciparum.
de dos meses, con signos y síntomas indicativos El control de calidad de la lectura de la gota gruesa
de la enfermedad, procedentes de las zonas de se hizo en el laboratorio del Instituto Colombiano
Urabá, Córdoba, Bajo Cauca y otras zonas de de Medicina Tropical en Sabaneta.

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Biomédica 2008;28:252-61 Diagnóstico de malaria con OptiMAL® y PCR

Prueba de captura inmunocromatográfica Selección de cebadores o iniciadores

Se utilizó el método rápido de la tirilla DiaMED Los iniciadores empleados se muestran en el
OptiMAL®. Los estuches correspondientes a los cuadro 1. Para determinar la especificidad de las
lotes 13300.59.10 y 13300.66.10, incluían un secuencias de estos iniciadores, se hizo un
dispositivo con una tira reactiva, un pozo que análisis BLAST (basic local alignment search tool),
contenía el conjugado y otro pozo de lavado. El en la página de internet del National Center for
estuche también contenía la tapa para los pozos, Biotechnology Information (NCBI) y se
un recipiente con la solución tampón y la pipeta seleccionaron aquéllos que mostraron una alta
con la marca impresa de 10 µl. identidad con las secuencias reportadas para
Plasmodium sp., P. falciparum y P. vivax, y un
Tanto el procedimiento como el diagnóstico
valor E del alineamiento inferior a 0,5 (27). Este
diferencial con base en el número de bandas
procedimiento consistió en realizar una
presente en la tirilla de reacción, se efectuaron
comparación base a base entre los cebadores, o
siguiendo las instrucciones del fabricante (19).
iniciadores, y las secuencias previamente
Extracción de ADN reportadas en las bases de datos del GenBank.
La extracción del ADN se llevó a cabo siguiendo Acceso al GenBank
las recomendaciones descritas por Fischer (26). Los números de accesos de los cebadores
Una tira de tres mm de largo por dos de ancho del seleccionados corresponden a M76611 ( P.
papel de filtro impregnado con, aproximadamente, falciparum), X13926 (P. vivax).
50 µl de sangre total y conservada a temperatura
ambiente (22 °C a 24 °C), se depositó en un tubo Reacción en cadena de la polimerasa
de 1,5 ml. Luego, se lavó dos veces con 1 ml de El ADN se amplificó en un termociclador (JM
Tween® (Merck) al 0,1% en solución amortiguada Research, Inc.) usando cebadores específicos
de fosfato salino (PBS) durante 10 minutos a para género, P. falciparuim (24) y P. vivax (25),
temperatura ambiente con agitación permanente. así como para el gen de la β-globina humana (28),
La tira del papel de filtro se transfirió a un tubo de que se empleó como control interno para garantizar
1,5 ml y se le adicionaron 200 µl de resina Chelex la ausencia de inhibidores (cuadro 1). Las
100® (Sigma), preparada al 5% en agua destilada. condiciones de la reacción relacionadas con los
Después de someter la muestra a una temperatura perfiles térmicos y el número de ciclos se llevaron
de 60 °C durante 30 minutos y posterior a cabo siguiendo las indicaciones descritas por
ebullición a 100 °C por 30 minutos, se centrifugó Morassin (29), como se muestra en el cuadro 2.
por tres segundos a 12.000g para recuperar el Para P. vivax se emplearon las mismas
sobrenadante, el cual se conservó a -20 °C hasta condiciones, excepto la temperatura de
realizar la PCR. alineamiento que fue de 53 °C.

Cuadro 1. Cebadores empleados para la PCR convencional.

Especificidad Cebadores Secuencia (5'-3') Producto PCR

β-globina BG07 GGT TGG CCA ATC TAC TCC CAGG 262pb
BG08 TGG TCT CCT TAA ACC TGT CTT G
Plasmodium sp. L1 GAC CTG CAT GAA AGA TG 595pb
L2 GTA TCG CTT TAA TAG GCG
P. falciparum Pf1 GGA ATG TTA TTG CTA ACA C 422 pb
Pf2 AAT GAA GAG CTG TGT ATC
P. vivax Pv1 CAC CAT TAA GTA CAT CAC 871 pb
Pv2 TGT TAA TAC AAC TCC AAT

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Cuadro 2. Condiciones de la PCR β-globina, género y P. falciparum.

Reactivo [ ] final Perfil térmico

Solución tampón para PCR 1X Calentamiento inicial 95 °C 7’

MgCl2 2,5 mM Desnaturalización 94 1’
Cebador hacia adelante 0,4 µM Alineamiento 56 2’
Cebador inverso 0,4 µM Extensión 72 1’
dNTP 200 µM Extensión final 72 5’
Polimerasa de Taq 0,5 U
ADN 5,0 µl 40 ciclos

Las muestras de ADN que se emplearon como el Comité de Bioética del Instituto Colombiano de
controles positivos para la PCR, tanto de género Medicina Tropical, Universidad CES.
como de P. vivax y P. falciparum, se obtuvieron
Resultados
de sangre total de pacientes que estaban
infectados con una de las especies del parásito. Se analizaron 100 muestras, de las cuales, 52
(52%) provenían de la región de Urabá, 35 (35%)
Productos de la PCR
de las regiones de Córdoba y del Bajo Cauca y 13
La electroforesis de un gel de agarosa al 1,5% en (13%) de otras zonas como Valle, Chocó y
presencia de bromuro de etidio (1µl por cada 10 Vichada. Los resultados obtenidos coincidieron,
ml de gel, 10 mg/ml), sometido a una corriente de en el 90% de las muestras, por los tres métodos
100 voltios por una hora, y la posterior empleados para el diagnóstico.
visualización de las bandas obtenidas en un
fotodocumentador (UVP- Biomaging Systems®), Gota gruesa
permitieron identificar la presencia o ausencia de En 65 pacientes (65%), las dos preparaciones de
los parásitos de malaria y de la especie la gota gruesa hicieron el diagnóstico para Plas-
correspondiente. modium sp., de las cuales, 33 (50,76%) fueron
El tiempo requerido para el procedimiento de la positivas para P. falciparum, 29 para P. vivax
PCR hasta observar la banda del producto (44,6%) y tres muestras se reportaron como
amplificado en el gel, fue de siete horas. infecciones mixtas (4,6%). El conteo de los
parásitos en las muestras positivas fluctuó entre
Análisis de los datos 240 y 38.000 formas del parásitos/mm3 de sangre.
Los datos se analizaron en el programa Epi Info Prueba rápida OptiMAL®
versión 6.0 (Centers for Disease Control and Pre-
vention, Atlanta, Georgia, USA). La evaluación Mediante la prueba rápida OptiMAL®, se
de las pruebas diagnósticas se hizo mediante el diagnosticaron 63 pacientes (63%) con paludismo
cálculo de los porcentajes de los índices de (cuadro 3).
sensibilidad, especificidad, valor diagnóstico En 37 pacientes, 59% de los casos diagnostica-
positivo, valor diagnóstico negativo y la dos, se observaron en la tirilla de reacción las tres
concordancia entre las pruebas diagnósticas a bandas (C, P y Pf) correspondientes para hacer
través del índice kappa (Epidat 3.1). Además, se diagnóstico de P. falciparum. En 26, 41% de las
determinó para cada uno de los indicadores un pruebas rápidas, la tirilla de reacción mostró las
intervalo de confianza de 95%. señales en la banda de control y en la banda P, lo
Aspectos éticos cual indica una prueba positiva para P. vivax.
Este estudio, considerado de riesgo mínimo Los tres casos en los cuales se hizo diagnóstico
(artículo 11 de la Resolución 008430 de 1993), de paludismo mixto por gota gruesa y PCR,
fue revisado y aprobado por el Comité Técnico y presentaron las tres bandas en la tirilla de reacción

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Cuadro 3. Comparación de los resultados entre la gota gruesa y Optimal®.

Gota gruesa
Optimal P. falciparum P. vivax Mixto Negativo Total general

P. falciparum 32 2 34
Plasmodium sp.* 26 3 29
Negativo 1 3 33 37
Total general 33 29 3 35 100

*Con base en el perfil epidemiológico en Colombia, sp. se toma como positivo para P. vivax.

de la prueba rápida, lo que indica una prueba sensibilidad de 93,85%, una especificidad de
positiva para P. falciparum. 94,29% y una concordancia de 89,22% (cuadro 5).
Reacción en cadena de polimerasa La sensibilidad de la PCR frente a la gota gruesa
El 66% de las muestras fueron positivas para para P. falciparum, así como, la especificidad y
género cuando se empleó como método la concordancia, fueron del 100%. Para P. vivax
diagnóstico la PCR (cuadro 4); 50% de ellas fueron se obtuvo la misma sensibilidad que para P.
positivas para P. falciparum y 45,5% para P. falciparum, una especificidad de 97,14% y
vivax. Los tres pacientes con diagnóstico de concordancia de 97,01%. El total de las muestras
infección mixta por la gota gruesa (4,5%), dieron reveló sensibilidad del 100%, especificidad de
positivo para la PCR específica, tanto de P. 97,14% y concordancia de 97,79% (cuadro 6).
falciparum como de P. vivax. Resultados discrepantes
En todas las muestras se obtuvo amplificación En siete muestras se encontraron discrepancias
para el gen de la β-globina humana, descartando entre las pruebas empleadas.
así la presencia de inhibidores de la PCR. En la
El diagnóstico de cuatro pacientes (4%), tres con
figura 1 se observa el gel de la electroforesis con
P. vivax cuyas parasitemias estaban entre de
los productos obtenidos de la PCR para β-globina,
25.000 y 36.000 parásitos por mm3, y uno con P.
género, P. falciparum y para P. vivax.
falciparum con un conteo de 4.000 trofozoítos por
Sensibilidad, especificidad, valores mm3, se hizo con la gota gruesa y fue consistente
diagnóstico positivo y negativo, y con lo que se obtuvo en la PCR, pero la prueba
concordancia de las pruebas rápida OptiMAL® fue negativa y mostró ser
Al comparar la prueba rápida de OptiMAL® con la reactiva sólo la banda de control interno revelando
gota gruesa para el diagnóstico de P. falciparum, que la prueba funcionaba, pero que era negativa
se encontró una sensibilidad de 96,97%, una para cualquier tipo de Plasmodium.
especificidad de 94,29% y un valor diagnóstico En dos casos la prueba rápida OptIiMAL® fue
positivo y negativo de 94,12% y 97,06%, positiva para P. falciparum ; estas mismas
respectivamente, como se muestra en el cuadro muestras fueron negativas por gota gruesa y por
5. La concordancia se determinó con base en el PCR. En una de las muestras no se observaron
índice kappa y el valor que se obtuvo fue de parásitos en la gota gruesa y la prueba rápida
91,78%. también se reportó como negativa, pero por PCR
se encontró la banda de amplificación que indicaba
La sensibilidad para P. vivax fue de 89,66%, la
ADN de P. vivax.
especificidad de 94,29%, el valor diagnóstico
positivo de 92,86%, el negativo de 91,67% y la Discusión
concordancia de 90,75%.
Desde tiempo atrás, en las áreas endémicas para
Para el total de los casos de paludismo, tanto por paludismo en Colombia, como en muchos otros
P. falciparum como por P. vivax, se obtuvo una países del mundo donde la enfermedad es un

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Figura 1. Gel de la electroforesis de los productos de la PCR; líneas 1 y 18: marcador de peso molecular (50 pares de
bases); líneas 2 a 5: β-globina: control positivo y tres muestras de pacientes con malaria; líneas 6 a 9: control y muestras
positivas para género Plasmodium sp., líneas 10 a 13: control y tres muestras positivas para P. falciparum; líneas 14 a 17:
control y muestras positivas para P. vivax.

Cuadro 4. Comparación de los resultados entre la gota gruesa y la PCR.

Gota gruesa
PCR P. falciparum P. vivax Mixto Negativo Total general

P. falciparum 33 33
P. vivax 29 1 30
Mixto 3 3
Negativo 34 34
Total general 33 29 3 35 100

Cuadro 5. Índices de sensibilidad, especificidad, valor diagnóstico positivo, valor diagnóstico negativo OptiMAL® Vs. gota
gruesa (%).

Sensibilidad IC 95% Especificidad IC 95% VDP IC95% VDN IC 95%

P. falciparum 96,97 89,61-100 94,29 85,17 -100 94,12 84,74-100 97,06 89,91-100
P. vivax 89,66 76,85-100 94,29 85,17 -100 92,86 81,53-100 91,67 81,25-100
Total 93,85 87,23-100 94,29 85,17-100 96,83 91,70-100 89,19 77,83-100

Cuadro 6. Cálculo de los índices de sensibilidad, especificidad, valor diagnóstico positivo, valor diagnóstico negativo PCR
Vs. gota gruesa.

Sensibilidad IC 95% Especificidad IC95% VDP IC 95% VDN IC 95%

P. falciparum 100 98,48-100 100 98,53-100 100 98,48-100 100 98,53-100

P. vivax 100 98,28-100 97,14 90,19-100 96,67 88,58-100 100 98,53-100
Total 100 99,23-100 97,14 90,19-100 98,48 94,78-100 100 98,53-100

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problema de salud, el diagnóstico se hace a través obtuvo producto de amplificación para género y
de la observación al microscopio de la gota gruesa especie en estos dos casos.
que se colorea con Giemsa o con Romanowsky
Se ajusta lo encontrado en las pruebas que dan
modificado que, para el caso de Colombia, es el
falso negativo, con lo informado por otros autores
colorante más empleado. La sensibilidad y espe-
que han relacionado esta circunstancia con
cificidad de este método están determinadas por
parasitemias altas (34), como las que en este caso
la densidad de la parasitemia y por la experiencia
se presentaron para P. vivax.
del microscopista, con el riesgo de reportar falsos
negativos o una especie del parásito diferente a En este estudio, la PCR reveló una sensibilidad
la que está causando la infección. superior a la de la gota gruesa y una especificidad
mayor que la de la prueba rápida, lo que permitió
Las muestras de este estudio provenían de zonas
la detección de Plasmodium spp. en muestras
de Colombia donde el diagnóstico de malaria se
con baja parasitemia y la identificación de ambas
realiza por microscopistas con un entrenamiento
especies en las infecciones mixtas. La
básico. Se evidenció que la observación al
sensibilidad y especificidad de esta prueba son
microscopio efectuada por ellos es acertada,
similares a lo reportado en estudios previos
orienta hacia el diagnóstico de especie y, por lo
usando el mismo protocolo para la amplificación
tanto, se puede hacer un tratamiento adecuado.
del ADN (21,22,24,25).
La prueba de captura OptiMAL® mostró ser muy
Con base en los resultados obtenidos en este
sensible (96,97%) para la determinación de P.
estudio, la prueba rápida OptiMAL® y la PCR
falciparum, hecho que concuerda con lo informado
mostraron valores de sensibilidad y especificidad
en un estudio previo (98,1%) realizado en Colombia
comparables con la gota gruesa, que es el método
(30) y similar a los resultados obtenidos en otros
de referencia para el diagnóstico de malaria.
dos estudios (31,32), pero lejos de lo reportado
por Londoño y colaboradores (33) quienes La prueba rápida, a pesar de ser una prueba
obtuvieron una sensibilidad de 40% en una cualitativa cuya sensibilidad es de 97% sólo
población cuyo diagnóstico se hizo simultá- cuando existen más de 100 parásitos/µl, de que
neamente por gota gruesa y OptiMAL®. La no se puede diagnosticar un paludismo mixto ni
sensibilidad para P. vivax fue inferior (89,66%) hacer un cálculo del número de parásitos y de
que para P. falciparum y es concordante con lo que en pacientes tratados la presencia de
descrito en reportes previos (30,32). gametocitos da una prueba positiva para P.
falciparum (15-20), es una herramienta útil para
La prueba rápida mostró ser muy específica tanto
el diagnóstico de malaria, puesto que es de fácil
para el diagnóstico de P. vivax (94,29%) como
interpretación y requiere un mínimo de
para el de P. falciparum (94,29%), concordante
entrenamiento para su empleo, sobre todo en
con lo obtenido en trabajos previos llevados a cabo
lugares apartados que no cuentan con la
en Colombia (31,32).
infraestructura adecuada para el diagnóstico por
Son contradictorias las razones para explicar los microscopía y, además, las muestras se pueden
casos falsos positivos de P. falciparum. Por una conservar a temperatura ambiente en condiciones
parte, se menciona que la enzima metabólica hasta de 30 °C sin menoscabo de su viabilidad.
lactato deshidrogenasa (pLDH) puede permanecer
El uso de cualquiera de estos métodos de
en la sangre hasta 10 días después de iniciada la
diagnóstico requiere del seguimiento y
terapia antipalúdica (34) y, por otra parte, que
acompañamiento por parte de los entes
OptiMAL® no detecta antígeno a menos que los
encargados de la calidad y manejo de los
parásitos estén intactos y funcionales, de tal
programas de control del paludismo.
manera que los niveles de pLDH declinan
simultáneamente con la disminución de los La reacción en cadena de la polimerasa es el
parásitos asexuados (35). Lo cierto es que no se método más sensible y específico que existe
observaron parásitos en la gota gruesa, ni se hasta el momento, para el diagnóstico de malaria,

259
Montoya AE, Menco J, Osorio N, et al. Biomédica 2008;28:252-61

pero requiere de personal muy bien entrenado y 4. Instituto Nacional de Salud. Tablas de notificación
de una tecnología apropiada, y frente a las otras semanal obligatoria. Semana 52 de 2006. [Consultado:
agosto de 2007]. Disponible en:http://www.ins.gov.co/
dos pruebas resulta muy costosa. Tiene valor en pdf/vcsp/Tablas/2006/2006_semana_52.pdf
pacientes con síntomas y gota gruesa negativa,
5. Aron JL. Malaria epidemiology and detectability. Trans
para confirmar la especie en los casos en que
R Soc Trop Med Hyg. 1982;76:595-601.
existan dudas, en infecciones mixtas y para
evaluar la respuesta al tratamiento. 6. Ndao M, Bandyayera E, Kokoskin E, Gyorkos TW,
MacLean JD, Ward BJ. Comparison of blood smear,
La gota gruesa es el método de elección para el antigen detection, and nested- PCR methods for screen-
diagnóstico del paludismo; se debe seguir ing refugees from regions where malaria is endemic
after a malaria outbreak in Quebec, Canada. J Clin
entrenando al personal de áreas afectadas por esta Microbiol. 2004;42:2694-700.
grave enfermedad en la lectura de las láminas.
7. Perandin F, Manca G, Piccolo A, Calderaro A, Galati
Se proponen las pruebas de captura inmunocro- L, Ricci L, et al. Identification of Plasmodium falciparum,
matográfica como método de confirmación y se P. vivax, P. ovale and P. malariae and detection of
mixed infection in patients with imported malaria in Italy.
deben tener disponibles en las zonas afectadas New Microbiol. 2003;26:91-100.
por esta enfermedad por su alta sensibilidad, su
fácil realización y su costo accesible. 8. Barat L, Chipipa J, Kolczak M, Sukwa T. Does the
availability of blood slide microscopy for malaria at
Agradecimientos health centers improve the management of persons
with fever in Zambia? Am J Trop Med Hyg. 1999;
A la Universidad CES por el soporte financiero, a 60:1024-30.
Berta Nelly Restrepo por su colaboración en el 9. Garcia M, Marlborough D, Leafasia J, Rieckmann
análisis de los resultados, a David Botero por la KH. Immunochromatographic test for malaria diagno-
revisión del artículo, a la microscopista Aleida sis. Lancet. 1996;347:1549.
Gutiérrez por la labor de campo y a los pacientes 10. Craig MH, Sharp BL. Comparative evaluation of four
por acceder a participar en este trabajo. techniques for the diagnosis of Plasmodium falciparum
infections. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1997;91:279-
Conflicto de interés 82.

Los autores del artículo declaran no tener ningún 11. Stow NW, Torrens JK, Walker J. An assessment of
tipo de compromiso con las casas comerciales the accuracy of clinical diagnosis, local microscopy,
and a rapid immunochromatographic card test in com-
que producen o distribuyen las pruebas inmuno- parison with expert microscopy in the diagnosis of
cromatográficas para el diagnóstico rápido del malaria in rural Kenya. Trans R Soc Trop Med Hyg.
paludismo, ni los cebadores y demás elementos 1999;93:519-20.
empleados para llevar a cabo la reacción en cadena 12. Moody A. Rapid diagnostic tests for malaria parasites.
de la polimerasa. Clin Microbiol Rev. 2002;15:66-78.

Financiación 13. Coleman RE, Maneechai N, Rachapaew N, Kumpitak

C, Soyseng V, Mille RS, et al. Field evaluation of the
Este estudio fue financiado por la Dirección de ICT Malaria Pf/Pv immunochromatographic test for the
Investigación de la Universidad CES y por el detection of asymptomatic malaria in a Plasmodium
falciparum/vivax endemic area in Thailand. Am J Trop
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