Determinación de vitamina c por espectrofotometría

María Alejandra Perez Dimate, Karolina Suikan Sarmiento

Universidad el Bosque
maperezd@unbosque.edu.co, ksuikan@unbosque.edu.co

Abstract

In laboratory practice, the quantification of vitamin C by spectrophotometry (as a reducing character)

was carried out experimentally. Using the determination of this vitamin, a method known as the Mohr
method is used, which consists of a double reduction process in which the formation of a first solid,
which is the species to be quantified, occurs and the stoichiometric point is formed Another
precipitate that corresponds to the species that indicates the end point of the evaluation, is in a
spectrophotometric method, that is, it is based on the absorption of ultraviolet and visible radiation by
the analyte, as a consequence of which an activated state is generated that Subsequently, it eliminates
its excess energy in the form of heat, to be able to determine by UV-Vis spectrophotometry the
content of vitamin C in citrus fruits and to be able to carry out a calibration curve in order to know the
concentration of vitamin C in a food, managing to specify the importance of spectrophotometric
studies as a technique of wide application in research and industry.

Resumen

En la práctica de laboratorio se realizó de forma experimental la cuantificación de vitamina c por

espectrofotometría (como carácter reductor). Utilizando la determinación de esta vitamina se utiliza
un método conocido como el método de Mohr, el cual consiste en un proceso de doble precipitación
en donde se presenta la formación de un primer sólido, que es la especie a cuantificar, y alcanzado el
punto estequiométrico se forma otro precipitado que corresponde a la especie que señala el punto final
de la valoración, esté en un método espectrofotométrico, es decir que se basa en la absorción de
radiación ultravioleta y visible por el analito, como consecuencia de lo cual se origina un estado
activado que posteriormente elimina su exceso de energía en forma de calor, para poder determinar
por espectrofotometría UV-Vis el contenido de vitamina C en frutas cítricas y poder realizar una curva
de calibración con el fin de conocer la concentración de vitamina C de un alimento, logrando precisar
la importancia de los estudios espectrofotométricos como una técnica de amplia aplicación en la
investigación e industria.
Tabla 2. ​Datos obtenidos en la práctica de
I. DATOS concentraciones y absorbancias.
Curva de calibración
Tabla 1. ​Datos de absorbancia de la muestra Concentración (mg/100
de naranja. mL) L1 L2
0,2 0,402 0,402
Naranja 0,6 0,421 0,389
L1 0,38 1 0,402 0,356
L2 0,17 2 0,396 0,332
3 0,403 0,282
4 0,388 0,214
5 0,419 0,206
 6 0,427 0,179 Concentración del ácido ascórbico
7 0,423 0,16
8 0,422 0,086
II. ANÁLISIS

- Vitamina C

La vitamina C también conocida como ácido

ascórbico, es un nutriente hidrosoluble que se
encuentra en ciertos alimentos. En el cuerpo,
actúa como antioxidante, al ayudar a proteger
las células contra los daños causados por los
radicales libres; además de ayudar a la
producción de colageno a través de la
hidroxilación de la prolina y la lisina también
mejora la absorción de hierro y el sistema
inmunitario.
Los humanos no podemos sintetizar ácido
ascórbico al carecer de una enzima
Gráfica 1. ​Curva de calibración de vitamina c denominada gulonolactona oxidasa, lo cual
hace que nuestro único modo de obtención de
Reacciones esta vitamina sea mediante la alimentación de
vegetales y frutas como por ejemplo: El kiwi (
131 mg de vitamina C), La guayaba ( 228.3
mg), la naranja ( 65 mg), las fresas ( 85 mg),
etc. [3]

La determinación de la vitamina C es
Fig 1​. Reacción del ácido ascórbico y el importante debido a que como se explicó
2,6-diclorofenolindofenol anteriormente esta no es producida por el
cuerpo si no que se obtiene de un medio
Cálculos
externo y su consumo ya sea excesivo o
Concentración del ácido ascórbico insuficiente (tabla 3 con los valores
nutricionales normales de vitamina C
L1 - L2 dependiendo del género) da como resultado
diversas enfermedades en el humano como
0,38 - 0,17 = 0,21 cáncer, escorbuto, hipertensión, pancreatitis
aguda, gota, cataratas, alzheimer y demás. [4]
Pendiente de la recta

y = mx + b

0,21= 0,041 x + (- 0,010)

Tabla 3. Valores normales de la vitamina C en
x = (0,21 + 0,010) / 0,041 el organismo dependiendo del género.

x = 5, 366 mg/dl - Práctica

 extinción que es específica de cada cromóforo.
La espectrofotometría es una técnica analítica [1]
que permite determinar la concentración de un Para poder realizar las medidas de la práctica,
compuesto en solución. Se basa en que las se toma de una solución diluida de un
moléculas absorben las radiaciones compuesto, cuya absorbancia máxima entra
electromagnéticas y a su vez que la cantidad dentro del rango de medida del
de luz absorbida depende de forma lineal de la espectrofotómetro, se verá el valor de
concentración. Para hacer este tipo de medidas absorbancia a diferentes longitudes de onda
se emplea un espectrofotómetro, en el que se frente a un blanco que contenga el disolvente
puede seleccionar la longitud de onda de la luz de la solución de la muestra a caracterizar
que pasa por una solución y medir la cantidad
de luz absorbida por la misma. [1] es importante el uso del blanco, debido a que
cuando se incide un haz de el color (contiene
todas las longitudes de onda), este absorberá
En la espectrofotometría se aprovecha la ciertas longitudes de onda y reflejará otras,
absorción de radiación electromagnética en la siendo éstas últimas las responsables del color.
zona d​el ultravioleta y visible del espectro. La [2]
muestra absorbe parte de la radiación incidente
en este espectro y promueve la transición del la reacción de la figura 1 da un valor de
analito hacia un estado excitado, transmitiendo concentración de la cantidad de vitamina C
un haz de menor energía radiante. En esta debido al poder reductor del ácido ascórbico;
técnica se mide la cantidad de luz absorbida donde el ácido ascórbico se determina por
como función de la longitud de onda utilizada. valoración con el colorante
La absorción de las radiaciones ​ultravioletas​, 2,6-diclorofenolindofenol que es reducido por
visibles e infrarrojas depende de la estructura el ácido ascórbico a una forma incolora en
de las moléculas, y es característica de cada medio ácido. La forma oxidada del reactivo es
sustancia química. [2] azul y la reducida incolora.
Para la realización de esta práctica de
laboratorio se utilizó la ley de Lambert Beer la En la gráfica 1 de la calibración del ácido
cual expresa la relación entre absorbancia de ascórbico o vitamina c, se puede ver que de los
luz monocromática (de longitud de onda fija) y resultados obtenidos en la pendiente de la recta
concentración de un cromóforo en solución. se puede obtener la concentración de ácido
ascórbico cuantificado, el cual fue de 5, 366
mg/dl. por tanto se puede evidenciar que la
concentración obtenida fue muy baja, ya que la
de un hombre adulto normal está en un rango
de 90 mg por día y un máximo de 2000 mg y
Donde la absorbancia de una solución es debido a esto tiene una concentración nutritiva
directamente proporcional a su concentración muy baja.
a mayor número de moléculas mayor Ya que la vitamina C se encuentra de dos
interacción de la luz con ellas; también formas, como ácido ascórbico y ácido
depende de la distancia que recorre la luz por dehidroascórbico, se utiliza el método de la
la solución a igual concentración, cuanto transformación del ácido ascórbico, en este
mayor distancia recorre la luz por la muestra método se utiliza un colorante llamado 2,6
más moléculas se encontrará; y por último, dicloroindofenol, siendo este el que muestra
depende de ε, una constante de un máximo de absorción a 540 nm. La técnica
proporcionalidad denominada coeficiente de de análisis, por espectrofotometría, es un
método muy aceptable, y permitió determinar una persona y las enfermedades que
con un buen grado de precisión las esto conlleva.
absorbancias en las muestras preparadas, así - La espectrofotometría es factible para
trabajar con curva de calibración para calcular la determinación de los niveles de la
concentraciones de la vitamina c. vitamina C en el organismo.
Por comparación con una solución conocida:
A través de una curva de calibración: la curva IV. BIBLIOGRAFÍA
de calibración es la representación gráfica en
un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje 1. Abril, N. Barcena, A.
de ordenadas) frente a la Concentración (eje de Fernandez, E. Galvan, A.
abscisas) como se muestra en la gráfica 1. Se Jorrín, J. Peinado, J. Toribio,
ensayaron varias soluciones de concentración F. Túnes, I. Espectrofometría:
conocida y se determinan sus A realizando una Espectros de absorción y
resta entre L1 y L2, construyéndose así la cuantificación colorimétrica
curva de calibración, que es una recta. Una vez de biomoléculas.
ensayadas las soluciones problemas, su https://www.uco.es/dptos/bioq
concentración se encontró por la ecuación de uimica-biol-mol/pdfs/08_ESP
la pendiente de la recta y encontrando el valor ECTROFOTOMETRIA.pdf
de x. 2. Brunatti, C; Martín, A.
Introducción a la
III. CONCLUSIONES Espectroscopía de Absorción
Molecular Ultravioleta,
- Para el Control de la linealidad Visible e Infrarrojo Cercano​.
fotométrica. El estudio de la linealidad http://materias.fi.uba.ar/6305/
fotométrica permite establecer el download/Espectrofotometria.
rango de absorbancia en el que el pdf
instrumento tiene respuesta 3. Hidgon, J. (2004) Vitamina C.
proporcional a los cambios de Universidad estatal de
concentración. Para ello se determina Oregon.
la respuesta del espectrofotómetro a https://lpi.oregonstate.edu/es/
diferentes concentraciones de una mic/vitaminas/vitamina-C
sustancia que cumpla con la ley de 4. National institutes of health.
Lambert-Beer. (2018). datos sobre la
- Hay que tener en cuenta la linealidad, vitamina c.
que es el intervalo de concentraciones https://ods.od.nih.gov/pdf/fact
del cromógeno entre las cuales existe sheets/VitaminC-DatosEnEsp
una relación lineal entre Absorbancia anol.pdf
y Concentración. Cuando la
concentración del cromógeno
sobrepasa los límites de linealidad se
deja de cumplir la Ley de Beer,
convirtiéndose la recta en una curva.
- La concentración de vitamina c
obtenida fue muy baja, teniendo en
cuenta el valor nutricional diario de