Determinación de Macromoléculas
Determinación de Macromoléculas
Determinación de Macromoléculas
FACULTAD DE AGRONOMIA
DEPARTAMENTO DE QUIMICA Y TECNOLOGIA
CATEDRA DE BIOQUMICA
PRACTICA DE LABORATORIO N 2
DETERMINACIN CUALITATIVA DE MACROMOLCULAS
(CARBOHIDRATOS, PROTENAS Y LPIDOS)
INTRODUCCIN
Los compuestos orgnicos presentes en la materia viva muestran enorme variedad y la mayor
parte de ellos son extraordinariamente complejos; an la ms simple de las clulas, las bacterias,
contienen gran nmero de distintas molculas orgnicas. La mayor parte de la materia orgnica en
las clulas vivas est constituida por macromolculas, de pesos moleculares muy grandes, que
incluyen protena, carbohidratos, lpidos y cidos nucleicos.
En esta sesin prctica se realizaran algunos ejercicios que permitan diferenciar soluciones de
carbohidratos, lpidos y protenas.
OBJETIVOS:
Utilizar reacciones cualitativas de coloracin que nos permitan detectar la presencia de grupos
Las protenas son sustancias qumicas orgnicas de alto peso molecular, constituidas por
muchos aminocidos, que juegan un papel importante en la estructura y dinmica de la
materia viva. Solamente 20 diferentes aminocidos se encuentran formando parte de las
protenas; sin embargo, no todas las protenas contienen todos esos aminocidos.
FUNDAMENTO DE LAS REACCIONES:
1.- Reaccin de la Ninhidrina.
Esta es una reaccin general para cualquier - aminocido y es debido a la presencia del grupo
- amino ( - NH2). De manera que todos los aminocidos y por supuesto las protenas, dan
positiva esta reaccin. No obstante, cualquier sustancia no proteca que contenga un grupo - NH2
tambin da positiva la reaccin. La reaccin se efecta en tres etapas:
a) Reduccin de la Ninhidrina oxidada por accin del aminocido :
b) Hidrlisis del - aminocido producido para formar un -cetocido, el cual se descarboxila bajo
ninhidrina reducida para formar un compuesto de color azul violeta, el cual es proporcional a la
cantidad de aminocido presente.
Esta reaccin se desarrolla mejor a pH neutro. Todos los aminocidos dan color azul violeta con
ninhidrina, con excepcin de prolina e hidroxiprolina que dan color amarillo.
2.- Reaccin de Biuret.
Esta reaccin es caracterstica para aquellos compuestos que poseen dos ms enlaces
peptdicos. La denominacin Biuret se debe a que el compuesto orgnico Biuret tambin da
positiva esta reaccin.
La reaccin del Biuret se basa en la formacin, en medio alcalino, de un complejo de
coordinacin de color violeta entre el ion cprico (cu+2) y 4 tomos de nitrgeno, provenientes de
las cadenas peptdicas.
Esta reaccin se basa en la formacin de derivados furfricos a partir de los carbohidratos, por
accin deshidratante del cido sulfrico y permite reconocer cualquier azcar libre o combinado. En
el caso de las pentosas, el derivado furfrico que se forma es el furfural y en el de las hexosas es el
hidroximetil furfural.
Estos derivados furfricos se condensan con -naftol para producir compuestos coloreados de
constitucin desconocida.
Furfural
O
Hidroximetil furfural
- naftol
(condensacin)
Reaccin de Benedict
Esta reaccin se utiliza para detectar la presencia de carbohidratos reductores o sea aquellos
carbohidratos que poseen un grupo aldehdico o cetnico libre o potencialmente libre. La reaccin
se efecta en medio ligeramente alcalino; en este medio los carbohidratos reductores originan
formas enlicas intermedias, denominadas enodioles, las cuales reducen rpidamente el in cprico
a cuproso. Estos iones cuprosos se combinan con los iones oxidrilos produciendo hidrxido
cuproso, el cual se transforma en un precipitado rojo, indica la presencia de un azcar reductor.
Como ejemplo de la accin de los lcalis diluidos sobre los azcares, tenemos la isomerizacin
de la D-glucosa, la cual se representa a continuacin:
La
posible
reduccin del
azcar es la siguiente:
reaccin
de
cobre por el
PROCEDIMIENTO
Reaccin de Molisch :
a) Coloque 2 ml de solucin de carbohidrato a un tubo de ensayo. Aada 5 gotas de naftol al 5%.
Agite, incline el tubo y deje deslizar cuidadosamente por las paredes de ste entre 25 y 30 gotas
de H2SO4 concentrado, de modo que el cido se deposite en el fondo.
b) En caso de estar presente un carbohidrato libre o combinado, aparecer un anillo de color violeta
en la interfase de los lquidos al cabo de pocos segundos.
Soluciones a usar:
Solucin problema
Agua (como testigo)
Glucosa
b) Lpidos sencillos o
Ejemplo:
C15 H31 CO
CH2
CH2
OH
C15H31CO
CH + 3NaOH
CH
OH + 3 C15H31COONa
C15H31CO
CH2
CH2
OH
Tripalmitina
Palmitato de sodio
(Jabn)
Glicerol
En el experimento realizado hemos obtenido un jabn que aparece como una pasta homognea y
al adicionar agua se obtiene una solucin jabonosa.
PROCEDIMIENTOS
Solubilidad de un aceite.
a) Coloque en dos tubos de ensayo 1 ml de aceite.
b) Agregue 1 ml de agua a uno de ellos y 1 ml de ciclohexano en el otro, mezcle bien deje reposar y
observe.
c) Anote sus observaciones.
Saponificacin
a)
b)
c)
d)
e)
MATERIALES Y REACTIVOS.
Tubos de ensayo
Sulfato cprico al 1%
Buretas de 50 ml
Aceite neutro
Bao de mara
Planchas de calentamiento
Solucin de Ninhidrina al 1%
Frascos goteros
Cpsulas de porcelana
Cilindro de 10 o 25 ml
Etanol
Ciclohexano
Fecha
Grupo
Nota
INFORME DE LABORATORIO N 2
DETERMINACIN CUALITATIVA DE MACROMOLECULAS
NOMBRE
CARNET
RESULTADOS
En el siguiente cuadro indique con el signo (+) si la reaccin es positiva, o con el signo (-) si es
negativa. En observaciones indique como se manifiesta la reaccin de su solucin problema.
REACCIONES
PROTENA
CARBOHIDRATOS
LPIDOS
Solubilidad
Saponificacin
SOLUCIONES Ninhidrina Biuret Molisch Iodo
Benedict
Leucina
Lisina
Albmina
Glucosa
Almidn
Sacarosa
Aceite
Agua destilada
Ciclohexano
Solucin
problema
Observaciones