Transformación Genetica
Transformación Genetica
Transformación Genetica
DIRECTA:
1. Biobalística.
2. Electroporación.
3. Sonicación.
4. Protoplastos.
5. Microinyección.
6. Transformación mediada por láser.
1. Biobalística
También llamada bombardeo con microproyectiles, es el método alternativo más
importante para transferir DNA a plantas. Se basa en utilizar microproyectiles
recubiertos del DNA que se desea transferir, son disparados sobre los tejidos
vegetales a altas velocidades que atraviesan la pared y la membrana celular,
llevando al interior de la célula los genes de interés para que se integren en el
genoma vegetal. La técnica consiste en bañar partículas esféricas de oro o
tungsteno (0,4-1,2 micrómetros de diámetro) con DNA, el cual ha sido precipitado
con CaCl2, espermidina o polietilen glicol. Después las partículas bañadas con
DNA son aceleradas a altas velocidades (300-600 mt/sg) con un equipo especial
llamado Pistola de Partículas ó Pistola de Genes (Fig.3). El DNA una vez dentro
de la célula se separa de las partículas y se integra dentro del núcleo de las
plantas.
Hay algunas desventajas que se presentan, como:
2. Electroporación.
Es la aplicación de pulsos eléctricos de alto voltaje en la membrana celular
causando de forma temporal poros que permiten la entrada de macromoléculas
al interior de la célula (Fig. 4). Lo que pasa es que las Membranas se
desestabilizan causando pérdida temporal de la permeabilidad y produciendo
poros reversibles, por lo que pasan macromoléculas, fuga de iones, escape de
metabolitos y como consecuencia se presenta una mayor absorción de DNA que
es lo que realmente nos interesa, y tras el tratamiento la membrana vuelve a su
estado normal, como si nada hubiera pasado. Se lleva a cabo en un aparato
llamado “Electroporador” que utiliza descargas de capacitores para producir
pulsos de alto voltaje, originando una corriente eléctrica que se hace pasar a
través de la suspensión que contiene las células.
Una de sus ventajas es que es casi diez veces más efectiva que la
transformación mediada por métodos químicos, es muy eficiente y fácil de
operar, relativamente simple y económico. Una de sus desventajas es la
necesidad de tener que usar Protoplastos (células sin pared), para que se pueda
llevar a cabo la permeabilización de la membrana celular.
3. Sonicación
4. Protoplastos
Es una de las técnicas más precisas para introducir DNA foráneo dentro de
compartimentos específicos de las células, por medio del uso de micro agujas
de vidrio para depositar el DNA foráneo en el interior de células vegetales.
Esta técnica ofrece la ventaja de que es uno de los dos métodos (junto con la
transformación mediada por láser) que permite la transferencia génica a una
célula concreta. La célula continuará su desarrollo y el transgén expresado lo
hará también en su descendencia. Pero el principal problema en plantas es la
pared celular, que hace a la técnica más dificultosa que en animales, ya que esta
hace necesario el uso de capilares mucho más gruesos para llevar a cabo la
microinyección, también dificulta mucho la visualización del núcleo provocando
que la microinyección suceda muchas veces en el citoplasma. Otro problema es
la presencia de grandes vacuolas en células vegetales, ya que si el DNA es
transportado a su interior, este será degradado antes de alcanzar el núcleo.
3) Vectores virales
Esta técnica implica usar Virus que solo afectan a Plantas, se llaman Fitovirus y
depende si su genoma es basado en DNA o RNA. Son usados principalmente
para producir proteínas de interés debido a la expresión transitoria de genes
foráneos, mediante la replicación de los virus en las plantas. La técnica
consiste en modificar a los Virus para que sean capaces de transportar el
transgen de interés al interior de la célula vegetal.
Existen dos grupos de virus vegetales, los virus DNA y los que tienen RNA. Los
virus de RNA tienen su ciclo celular en el citoplasma mientras que los de DNA
deben tener su replicación en el núcleo. De esta manera, los virus de DNA
presentan mecanismos de regulación similares a los de la planta huésped,
mientras que los virus de RNA tienen mecanismos de regulación diferentes.
Los virus DNA constituyen aproximadamente el 2% de los virus vegetales que
se conocen y se dividen Caulimovirus y en Geminivirus. La mayoría de las
técnicas para vectores virales usan Virus de DNA ya que es más fácil trabajar
con ellos.
Estas son las principales ventajas que ofrecen:
a) Facilidad en la infección.
b) Rango de hospedadores más amplio.
c) Producción de altos niveles de proteína.
d) Los genes transmitidos no se limitan a una célula.
e) Mayor velocidad en la expresión.