Cromatografía en Capa Fina y en Papel
Cromatografía en Capa Fina y en Papel
Cromatografía en Capa Fina y en Papel
Proceso de Adsorción
La adsorción es un proceso por el cual moléculas de gas, líquido o sólido en
solución, llamados soluto, interactúan con las moléculas de la superficie de un
sólido, llamado adsorbente. La adsorción es estrictamente un proceso
superficial que depende de las fuerzas electrostáticas entre el adsorbente y la
muestra. Estas fuerzas se derivan de las interacciones dipolo-dipolo, ión-
dipolo y enlaces por puente de hidrógeno. La superficie del adsorbente dista
mucho de ser perfectamente lisa, ésta tiene discontinuidades, hendiduras y
crestas con centros de densidad de carga positiva y negativa. El soluto se une
al adsorbente a través de la atracción electrostática de sus centros de densidad
de carga y los de la superficie del adsorbente. Los lugares en la superficie del
adsorbente donde la muestra se une se llaman sitios de unión. Los iones y las
moléculas con momentos dipolares permanentes se unen fácilmente al
adsorbente.
δ- soluto O
soluto
δ+ H
δ- OH OH
δ-
δ+ δ+ Si Si
Adsorbente O
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entre la fase móvil y los diferentes solutos pueden considerarse muy similares y
no desempeñan un papel crucial en la separación.
a) Sitios de unión
adsorbente
soporte
b)
c)
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móvil desplaza las moléculas de soluto de los sitios de unión moviendo las
moléculas sobre la superficie del adsorbente. Conforme la fase móvil corre
sobre la superficie del adsorbente, las moléculas de soluto son desplazadas a
nuevos sitios de unión. Debido a que la fase móvil tiene una interacción más
fuerte con el adsorbente, los triángulos no se unen de manera efectiva y son
transportados a lo largo de la superficie a una alta velocidad. Al término de la
corrida del cromatograma los triángulos quedan cerca de la línea final del
solvente.
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Existen algunas reglas a aplicar para la selección del solvente y el adsorbente:
La polaridad del solvente debe ser similar a la polaridad del soluto y la
actividad del adsorbente debe ser baja para solutos altamente polares y alta
para solutos no polares.
Solvente Constante
dieléctrica
hexanos 1.89
ciclohexanos 2.02
tolueno 2.38
diteil éter 4.34
etil acetatoa 6.02
cloruro de metilenoa 8.93
acetona 20.7
metanol 32.7
agua 80.1
a
Con base en datos cromatográficos, el
acetato de etilo es considerado más polar
que el cloruro de metileno.
Procedimiento.
1. Corte una pieza rectangular de papel Whatman No. 1 para cromatografía
6,5 x 4 cm
2. Dibuje una línea con lápiz, aproximadamente a 1,0 cm del lado mas angosto
(ver figura 1-a)
3. Haga cuatro marcas con lápiz en la línea, a intervalos equidistantes e
identifique cada marca con la inicial del colorante. (previo a la aplicación de
muestra)
4. Diluya en agua un poco de colorante para alimentos de cada uno de los
cuatro colores a trabajar
5. Usando micropipetas o capilares por separado para cada muestra, coloque
una gota de cada color en cada marca y deje secar. (figura 1-a, aplicación
de la muestra)
6. Diluya 5 ml de alcohol isopropílico con 2,5 ml de agua en un matraz
Erlenmeyer pequeño y transfiera esta solución a un vaso de precipitados
(150 ml), evitando salpicar las paredes. Asegúrese que el nivel del solvente
quede abajo de la muestra aplicada. (figura 1-b)
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Límite del solvente
a b c d
Placa inicial Placa dentro de la cámara de A medida que el disolvente se Un buen disolvente
Línea a lápiz desarrollo desplaza, hace que la muestra causa una buena
Aplicación de muestra Nivel del disolvente aplicada se mueva también separación de los
componentes de la
mezcla
Figura 1
Distancia
recorrida por
el disolvente
muestra
Centro de masa
Distancia
Distancia recorrida por la muestra Rastro
Rf recorrida por
la muestra
Distancia recorrida por el solvente
Figura 2
NOTA IMPORTATE
¡NO MUEVA LA CAMARA DE DESARROLLO NI LA
CROMATOPLACA MIENTRAS REALICE LA ELUCION!
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8. Saque el cromatograma y déjelo secar.
9. Calcule los factores de reparto (Rf) dividiendo la distancia que recorrió cada
muestra entre la distancia que recorrió el solvente para cada colorante.
(Figura 2)
Procedimiento.
1. Limpie y seque varios (2 o 3) portaobjetos.
4. Deje secar durante 15-30 min hasta que el agua de la superficie haya
desaparecido. Después active la placa en una estufa a 105 oC durante 30
min.
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7. Aplique con un capilar o micropipeta una gota de cada solución patrón y una
gota de la mezcla problema a 1,0 cm del borde de la placa, a una distancia
de separación razonable. Anote en su bitácora el orden en que haga las
aplicaciones. (figura 1-a)
9. Saque la placa y déjela secar al aire. Ilumine la placa con luz UV, marque
las manchas que observe y mida la distancia recorrida. Enseguida revele
también con Iodo. Coloque algunos cristales de yodo en un frasco con tapa,
coloque la placa dentro, tape y espere unos minutos hasta que las manchas
reaccionen con el Iodo y se observen a simple vista. La mayoría de los
compuestos orgánicos reaccionan con el Iodo dando compuestos con
diferentes tonalidades entre los colores amarillo-naranja-café.
10. Calcule el factor de reparto (Rf) para cada una de las manchas.
7
Cromatografía en papel y capa fina.
Rf =
8
7) Si el valor Rf de un componente desconocido corresponde al valor Rf de
una sustancia pura conocida obtenido bajo las mismas condiciones ¿Puede
decirse entonces que ambos Rf son la misma sustancia?