Teste Elisa
Teste Elisa
Teste Elisa
CAMPUS DE ASSIS
CURSO DE FARMCIA 5SEMESTRE
Assis
2016
INTRODUO
A quantificao da concentrao de antgenos e anticorpos feita
atravs dos mtodos imunolgicos e apresentam uma grande sensibilidade e
especificidade, tornando estes mtodos como padro na pesquisa e aplicaes
clinicas. E entre estas tcnicas um dos mais utilizados o ELISA, do ingls
Enzyme-linked immuno sorbent assay (Ensaio de Imunoabsoro Ligado a
Enzima) um mtodo eficiente que permite detectar quantidades de protena
da ordem de nanogramas.
um ensaio no qual, uma enzima, reage com um substrato produzindo
um produto colorido, o anticorpo especifico (monoclonal ou policlonal) ligado
quimicamente (covalentemente) a enzima, reconhecendo um antgeno alvo, se
estiver presente, o complexo anticorpo-enzima liga-se a ele e a enzima
catalisar a reao, portanto o produto colorido indicativo da presena deste
antgeno.
Simplificando esta tcnica se baseia em reaes antgeno-anticorpo
detectveis atravs de reaes enzimticas e a enzima mais utilizada para este
mtodo a peroxidase, que hidrolisa a gua oxigenada em gua e gs
oxignio, e mudando a cor ou a fluorescncia do complexo sinaliza a atividade
da enzima, que sinaliza a presena do segundo anticorpo e por fim detecta a
presena do antgeno procurado.
O mtodo diagnostico pode ser feito de quatro formas, sendo realizadas
a partir de amostras sorolgicas do paciente, indiretamente, diretamente, por
competio e sanduiche, como mostrado na figura abaixo:
4 Elisa direto
uma tcnica utilizada para a deteco de antgeno, sendo assim, pegase uma placa contendo anticorpos para a patologia a ser analisada. Coloca-se
o soro do paciente nos poos da placa, se existir presena de antgenos, estes
se ligaro aos anticorpos presentes na placa, formando um complexo
anticorpo-antgeno. Depois realizada uma lavagem da placa, para a retirada
dos antgenos no ligados, adiciona-se um anticorpo para este antgeno,
formando um complexo anticorpo-antgeno-anticorpo.
Leva-se para a incubao e aps realiza-se outra lavagem da placa,
retirando assim os anticorpos que no formaro o segundo complexo. Adicionase um anti-anticorpo conjugado (por exemplo uma enzima como a peroxidase)
formando um terceiro complexo anticorpo-antgeno-anticorpo-anti-anticorpo
conjugado, lave-se novamente a placa, retirando o excesso de anti-anticorpo
conjugado, no ligado ao complexo. Quando o conjugado umaenzima,
adiciona-se um substrato para a enzima, este ao ligar-se a enzima do
complexo, forma um produto colorido. Como mostra a figura a seguir:
CONCLUSO
Podemos observar que o mtodo de Elisa ou ensaio imunoenzimtico
utilizado para diversos diagnsticos, inclusive para o vrus do HIV
REFERNCIA
DIAGNSTICO DO HIV. Disponvel em
<http://telelab.aids.gov.br/moodle/pluginfile.php/22167/mod_resource/content/1/
HIV%20-%20Manual%20Aula%205.pdf>.Acesso em: 26 de maio de 2016.
http://pt.slideshare.net/labimuno/ap10-elisa-presentation
http://pt.slideshare.net/labimuno/elisa-3454963