TR201807700T4 - Çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin kullanımları. - Google Patents
Çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin kullanımları. Download PDFInfo
- Publication number
- TR201807700T4 TR201807700T4 TR2018/07700T TR201807700T TR201807700T4 TR 201807700 T4 TR201807700 T4 TR 201807700T4 TR 2018/07700 T TR2018/07700 T TR 2018/07700T TR 201807700 T TR201807700 T TR 201807700T TR 201807700 T4 TR201807700 T4 TR 201807700T4
- Authority
- TR
- Turkey
- Prior art keywords
- ctla4
- soluble
- molecules
- domain
- molecule
- Prior art date
Links
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 title claims abstract description 283
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 title claims abstract description 283
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 80
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 45
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 41
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 39
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 34
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 32
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 25
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 24
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 24
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 21
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 claims description 16
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 claims description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 14
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 13
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 12
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 11
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 10
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 10
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 10
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 claims description 10
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 9
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 9
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 8
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 6
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 5
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims description 5
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 claims description 5
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 5
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 claims description 5
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 claims description 4
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 4
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 claims description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000004300 Atrophic Gastritis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000036495 Gastritis atrophic Diseases 0.000 claims description 3
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 3
- 206010028665 Myxoedema Diseases 0.000 claims description 3
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 claims description 3
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 206010042742 Sympathetic ophthalmia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029052 T-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004982 autoimmune uveitis Diseases 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- 208000016644 chronic atrophic gastritis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 3
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 3
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000003786 myxedema Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002381 testicular Effects 0.000 claims description 3
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims description 2
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 208000016937 Extranodal nasal NK/T cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- 208000003250 Mixed connective tissue disease Diseases 0.000 claims description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 2
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 claims description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims description 2
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 claims description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000002500 ions Chemical group 0.000 claims description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 claims description 2
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 2
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 claims description 2
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims 2
- 208000028185 Angioedema Diseases 0.000 claims 1
- GXGAKHNRMVGRPK-UHFFFAOYSA-N dimagnesium;dioxido-bis[[oxido(oxo)silyl]oxy]silane Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[O-][Si](=O)O[Si]([O-])([O-])O[Si]([O-])=O GXGAKHNRMVGRPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000391 magnesium silicate Substances 0.000 claims 1
- 229940099273 magnesium trisilicate Drugs 0.000 claims 1
- 229910000386 magnesium trisilicate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000019793 magnesium trisilicate Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 51
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 45
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 abstract description 29
- 239000003446 ligand Substances 0.000 abstract description 14
- 108010045634 B7 Antigens Proteins 0.000 abstract description 10
- 102000005738 B7 Antigens Human genes 0.000 abstract description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 43
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 41
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 40
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 40
- 230000008859 change Effects 0.000 description 36
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 34
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 33
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 33
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 32
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 32
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 30
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 30
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 29
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 29
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 29
- 230000004044 response Effects 0.000 description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 25
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 24
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 24
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 22
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 22
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 22
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 22
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 22
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 21
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 20
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 20
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 20
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 19
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 19
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 19
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 19
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 18
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 17
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 17
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 17
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 16
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 15
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 14
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 206010023232 Joint swelling Diseases 0.000 description 13
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 13
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 13
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 12
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 11
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 11
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 11
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 11
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 10
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 10
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 10
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 10
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 8
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 8
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 8
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 8
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 7
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 7
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 7
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 7
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 7
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 7
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 7
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 7
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 7
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 7
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 description 6
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 5
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 5
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108090000630 Oncostatin M Proteins 0.000 description 5
- 102000004140 Oncostatin M Human genes 0.000 description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical group O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 5
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 5
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 5
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 102100039358 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2 Human genes 0.000 description 4
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 4
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 4
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 4
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 4
- 101001035740 Homo sapiens 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2 Proteins 0.000 description 4
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 4
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 4
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 4
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 4
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 4
- 208000025095 immunoproliferative disease Diseases 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 4
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 125000000143 2-carboxyethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 206010051728 Bone erosion Diseases 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 3
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 3
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 3
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 3
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 3
- 108010008212 Integrin alpha4beta1 Proteins 0.000 description 3
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 3
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 3
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 3
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 3
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N (7r)-7-[[(2z)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-(2,2-dimethylpropanoyloxymethoxyimino)acetyl]amino]-3-ethenyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(C=C)CSC21)C(O)=O)=O)C(=O)\C(=N/OCOC(=O)C(C)(C)C)C1=CSC(N)=N1 HMLGSIZOMSVISS-ONJSNURVSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000713842 Avian sarcoma virus Species 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Chemical group O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 2
- 241000388186 Deltapapillomavirus 4 Species 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 229940123907 Disease modifying antirheumatic drug Drugs 0.000 description 2
- 238000011891 EIA kit Methods 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- 101000759376 Escherichia phage Mu Tail sheath protein Proteins 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 101000868215 Homo sapiens CD40 ligand Proteins 0.000 description 2
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 2
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 102000051628 Interleukin-1 receptor antagonist Human genes 0.000 description 2
- 108700021006 Interleukin-1 receptor antagonist Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 102000016551 L-selectin Human genes 0.000 description 2
- 208000005777 Lupus Nephritis Diseases 0.000 description 2
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241001284373 Spinus Species 0.000 description 2
- 230000017274 T cell anergy Effects 0.000 description 2
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 2
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 2
- 241000702295 Tomato golden mosaic virus Species 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 2
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 229960004238 anakinra Drugs 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- -1 basilimiximab Chemical compound 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Chemical group O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 229940111134 coxibs Drugs 0.000 description 2
- 239000003255 cyclooxygenase 2 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 239000002988 disease modifying antirheumatic drug Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 2
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 2
- 150000002343 gold Chemical class 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical group O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N hydroxychloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CCO)CC)=CC=NC2=C1 XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004171 hydroxychloroquine Drugs 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 238000012153 long-term therapy Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 229960004866 mycophenolate mofetil Drugs 0.000 description 2
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 2
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 230000024664 tolerance induction Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDINUJSAMVOPCM-UHFFFAOYSA-N 15-Deoxyspergualin Natural products NCCCNCCCCNC(=O)C(O)NC(=O)CCCCCCN=C(N)N IDINUJSAMVOPCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062271 Acute-Phase Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011767 Acute-Phase Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 101710187573 Alcohol dehydrogenase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710133776 Alcohol dehydrogenase class-3 Proteins 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100036008 CD48 antigen Human genes 0.000 description 1
- 229940122739 Calcineurin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710192106 Calcineurin-binding protein cabin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100024123 Calcineurin-binding protein cabin-1 Human genes 0.000 description 1
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 208000027932 Collagen disease Diseases 0.000 description 1
- 102100037364 Craniofacial development protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 101150091887 Ctla4 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 229920002491 Diethylaminoethyl-dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 101150013359 E7 gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 101710139853 Female protein Proteins 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 101001120495 Haloarcula marismortui (strain ATCC 43049 / DSM 3752 / JCM 8966 / VKM B-1809) 30S ribosomal protein S17 Proteins 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000716130 Homo sapiens CD48 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001050473 Homo sapiens Intelectin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000798109 Homo sapiens Melanotransferrin Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000946850 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD86 Proteins 0.000 description 1
- 101000764622 Homo sapiens Transmembrane and immunoglobulin domain-containing protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100023353 Intelectin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100037872 Intercellular adhesion molecule 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710148794 Intercellular adhesion molecule 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010005716 Interferon beta-1a Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 206010023203 Joint destruction Diseases 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100032239 Melanotransferrin Human genes 0.000 description 1
- 241001068914 Melicope knudsenii Species 0.000 description 1
- FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M Methylprednisolone sodium succinate Chemical compound [Na+].C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)CC[C@H]21 FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M 0.000 description 1
- HZQDCMWJEBCWBR-UUOKFMHZSA-N Mizoribine Chemical compound OC1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HZQDCMWJEBCWBR-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010064584 Myosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 201000002481 Myositis Diseases 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 1
- 206010034464 Periarthritis Diseases 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 206010036030 Polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 108090000184 Selectins Proteins 0.000 description 1
- 102000003800 Selectins Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 101710165202 T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 102100026224 Transmembrane and immunoglobulin domain-containing protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000001400 Tryptase Human genes 0.000 description 1
- 108060005989 Tryptase Proteins 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N acetic acid;(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(O)=O.C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N 0.000 description 1
- NFXWJYUDIOHFAW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;tetradecanoic acid Chemical compound CC(O)=O.CCCCCCCCCCCCCC(O)=O NFXWJYUDIOHFAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000012443 analytical study Methods 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003356 anti-rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 208000002849 chondrocalcinosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 229940124301 concurrent medication Drugs 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012517 data analytics Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000000773 effect on pain Effects 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 229960000556 fingolimod Drugs 0.000 description 1
- KKGQTZUTZRNORY-UHFFFAOYSA-N fingolimod Chemical compound CCCCCCCCC1=CC=C(CCC(N)(CO)CO)C=C1 KKGQTZUTZRNORY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229960003776 glatiramer acetate Drugs 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000049849 human CD86 Human genes 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960004461 interferon beta-1a Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000006101 laboratory sample Substances 0.000 description 1
- 229960000681 leflunomide Drugs 0.000 description 1
- VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N leflunomide Chemical compound O1N=CC(C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)C(F)(F)F)=C1C VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Substances [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- ZAHQPTJLOCWVPG-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO ZAHQPTJLOCWVPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004169 mitoxantrone hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 229950000844 mizoribine Drugs 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 description 1
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 1
- BLUYEPLOXLPVCJ-INIZCTEOSA-N n-[(1s)-2-[4-(3-aminopropylamino)butylamino]-1-hydroxyethyl]-7-(diaminomethylideneamino)heptanamide Chemical compound NCCCNCCCCNC[C@H](O)NC(=O)CCCCCCNC(N)=N BLUYEPLOXLPVCJ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- ZHCAAFJSYLFLPX-UHFFFAOYSA-N nitrocyclohexatriene Chemical group [O-][N+](=O)C1=CC=C=C[CH]1 ZHCAAFJSYLFLPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000004796 pathophysiological change Effects 0.000 description 1
- 230000008289 pathophysiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 238000009521 phase II clinical trial Methods 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 201000006292 polyarteritis nodosa Diseases 0.000 description 1
- 208000030428 polyarticular arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 150000003147 proline derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- AAEVYOVXGOFMJO-UHFFFAOYSA-N prometryn Chemical compound CSC1=NC(NC(C)C)=NC(NC(C)C)=N1 AAEVYOVXGOFMJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 239000013636 protein dimer Substances 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 230000007026 protein scission Effects 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002412 selectin antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 229960001967 tacrolimus Drugs 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001755 vocal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 238000003466 welding Methods 0.000 description 1
- 239000011240 wet gel Substances 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
- A61K38/13—Cyclosporins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1793—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70521—CD28, CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Neurology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Obesity (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Oncology (AREA)
Abstract
Mevcut buluş, endojenöz B7 moleküllerinin ligandlarına bağlanmasını bloke eden çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin bir özneye uygulanması ile romatizmal hastalığın tedavi edilmesine yönelik bileşimler ve yöntemler ile ilgilidir.
Description
TARIFNAME
ÇÖZÜNÜR CTLA4 MUTANT MOLEKÜLLERININ KULLANIMLARI
BULUS SAHASI
Mevcut bulus genellikle romatizmal hastaliklar alani ile ilgilidir. Özellikle bulus,
istemlerde açiklandigi üzere çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin etkili bir miktarinin
bir özneye uygulanmasi ile romatoid artrit gibi romatizmal hastaliklarin tedavi
edilmesinde faydali bilesimler ile ilgilidir.
BULSUN ALT YAPISI
Günümüzde romatizmal hastaliklar için herhangi bir tedavi bulunmamaktadir. Tercihen
terapötik ajanlar semptomlari tedavi etmek üzere kullanilir. Tipik olarak terapötik
ajanlar, uzun zaman periyodlari boyunca uygulanir ve terapötik deger genellikle olumuz
yan etkiler ile azaltilir.
Romatizmal hastaliklar, vücudun kas iskelet ve bag dokularini etkileyen bir hastaliklar
grubunu kapsar. Bu hastaliklar, siklikla kalici doku hasari, deformite, atrofi ve sakatliga
yol açan kronik inflamasyon ile karakterize edilir. Romatizmal hastaliklar eklemler,
kemik, yumusak doku veya omuriligi etkiler (Mathies, H. 1983 Rheuma) ve inflamatuvar
romatizma, dejeneratif romatizma, ekstra-artiküler romatizma veya kollajen hastaliklari
olarak siniflandirilir. Bazi romatizmal hastaliklarin bir öznenin degistirilmis immün
yanitindan kaynaklanan otoimmün hastaliklar oldugu bilinir.
Romatoid artrit, gelismis ülkelerdeki yetiskin nüfusun yaklasik olarak %2”sini etkileyen
progresif romatizmal bir hastaliktir (Utsinger, P. D., et al., 1985 Romatoid artrit, p. 140).
Bu hastalik, periferik eklemlerde yapisal deformitelere yol açarak, kikirdak bozulmasina
ve kemik erozyonuna neden olan inatçi inflamatuvar sinovit ile karakterize edilir.
Romatoid artrit ile iliskili semptomlar, eklem sisligi, eklem hassasiyeti, inflamasyon,
sabah sertligi ve özellikle bükülme sonrasinda agri içerir. Ilerlemis artrit asamalari olan
özneler, kemik erozyonu ile eklem yikimi dahil yapisal hasardan muzdariptir (in:
hastalar, otoimmün proses ile iliskili vaskülit nedeniyle cilt, böbrek, kalp, akciger,
merkezi sinir sistemi ve göz Iezyonlari dahil çesitli organik Iezyonlara ait diger klinik
semptomlari gösterebilir.
Romatoid artrit ile iliskili diger semptomlar artmis eritrosit sedimentasyon hizlari ve
artmis serum C-reaktif protein (CRP) ve/veya çözünür IL-2 reseptör (IL-2r) seviyeleri
içerir. Eritrosit sedimentasyon hizi, hemen hemen aktif romatoid artritli hastalarin
tümünde arttirilir. Serum C-reaktif protein seviyesi de yükseltilir ve hastalik aktivitesi ve
progresif eklem hasari olasiligi ile iliskilidir. Ek olarak aktive T-hücrelerinin bir ürünü
olan çözünür IL-2r seviyesi, aktif romatoid artritli hastalarin kan serumunda ve eklem
sivisinda yükseltilir (bakiniz: "Principals of internal Medicine, Harrison, 13th edition,
Romatoid artritin T-Ienfositler ile antijen sunan hücreler arasindaki antijene spesifik
olmayan hücre içi etkilesimler dahil bir T hücre aracili otoimmün hastalik oldugu
düsünülür. Genellikle T hücre yanitinin büyüklügü, T hücre yüzey molekülleri ile
bunlarin ligandlari arasindaki etkilesim ile ortaya çikarilan es-uyarici yanit araciligiyla
sinyaller, antijen sunan hücreler üzerinde T hücre yüzey reseptörleri, 0028 ve CTLA4
ile bunlarin ligandlari, örnegin B7 iliskili moleküller CD80 (diger bir ifadeyle, B7-1) ve
CD86 (diger bir ifadeyle BT-2) arasindaki etkilesim ile saglanir (Linsley, P. ve
Es-uyarma yoklugundaki T hücre aktivasyonu, anerjik T hücre yaniti ile sonuçlanir
Romatoid artritin bir T hücre aracili immün sistemi hastaligi oldugu düsünüldügünden
romatoid artriti tedavi etmek üzere yeni ajanlarin gelistirilmesine yönelik bir strateji,
endojenöz CD28 veya CTLA4 ile B7 arasindaki etkilesim bloke edilerek, T Ienfositler ile
antijen sunan hücrelere arasindaki es-uyarici sinyalleri bloke eden moleküllerin
tanimlanmasidir. Potansiyel moleküller, B7'ye dogal sus CTLA4 (buna ait dizi Sekil
23'te gösterilir) veya CD28'den daha yüksek avidite ile baglanmak üzere modifiye
edilen çözünür CTLA4 moleküllerini içerir, böylelikle es-uyarici sinyaller bloke edilir.
CD28 ve CTLA4'n çözünür formlari, CD28 ve CTLA4'ün degisken (V)-benzeri hücre
disi domenlerinin CD28Ig ve CTLA4Ig ile sonuçlanarak immünoglobülin (lg) sabit
bölgelerine kaynastirilmasi ile yapilmistir. CTLA4Ig'nin bir nükleotid ve amino asit
dizisi, +1 pozisyonunda metiyonin veya -1 pozisyonunda alanin ile baslayan ve +357
pozisyonunda Iisin ile sonlanan protein ile Sekil 24'te gösterilir. CTLA4Ig, CD80-pozitif
ve CD86-pozitif hücreleri CD28Ig'den daha güçlü sekilde baglar (Linsley, P., et al.,
ve in vivo bloke edildigi bulunmustur. (Linsley, P., et al., 1991b, yukarida; Linsley, P., et
B7 gibi dogal Iigandlara yönelik baglanma afinitesini degistirmek üzere çözünür
CTLA4Ig füzyon proteinleri, moleküllerin CTLA4 kisminda amino asitlerin mutasyonu
yoluyla modifiye edilmistir. Mutasyona ugratildiginda B7 Iigandlarina yönelik baglanma
afinitesi veya aviditeyi degistiren CTLA4 bölgeleri, tamamlayicilik belirleme bölgesi 1
olan U.S. Patent Basvuru Seri Numarasi &SO/214,065 içerisinde ve Peach, R.J., et al J
korunan bölgesidir. CDR-3-benzeri bölge, CDR-3 bölgesini kapsar ve birkaç amino asit
ile CDR-3 motifinin yukari yönüne ve/veya asagi yönüne uzanir) içerir. CDR-3-benzeri
bölge, tüm CD28 ve CTLA4 familya üyelerinde yüksek derecede korunan bir
hekzapeptit motifi MYPPPY'yi içerir. CTLA4 içerisinde hekzapeptit motifi ile ve CD28Ig
içerisinde seçilmis kalintilarda alanin tarayan mutajenez CD80,e baglanmayi azaltmistir
CTLA4 ve CD28'in homolog bölgelerinin degistirilmesi yoluyla çözünür CTLA4Ig
moleküllerine yönelik ilave modifikasyonlar yapilmistir. Bu kimerik CTLA4/CD28
homolog mutant molekül, CTLA4'ün CDR-1- ve CDR-3-benzeri bölgelerindeki
korunmayan belirli amino asit kalintilarinin yani sira CTLA4 ve CD28 için ortak
MYPPPY hekzapeptit motifini CD80 ile CTLA4'ün baglanma aviditesinin
arttirilmasindan sorumlu bölgeler olarak tanimlamistir (Peach, R. J., et al., 1994 J Exp
CTLA4 mutantlarini ve çözünür CTLA4 mutantlarinin prednizon ile kombine edilebildigi
G106E'yi açiklar. Yukarida açiklandigi üzere CTLA4lg gibi çözünür CTLA4 molekülleri,
CTLA4 mutant molekülleri veya kimerik CTLA4/CD28 homolog mutantlari, romatizmal
hastaliklari tedavi etmek üzere terapötik ilaçlarin yeni bir grubunu sunar.
Romatoid artrit gibi romatizmal hastaliklara yönelik mevcut tedaviler spesifik olmayan
sitotoksik immünosupresif ilaçlar, örnegin metotreksat, siklofosfamid. azatiyoprin,
siklosporin A ve tümör nekroz faktör-alfa (TNFd) bloke ediciler veya antagonistlerin
uygulanmasini içerir. Bu immünosupresif ilaçlar, öznenin bütün immün sistemini
baskilar ve uzun süreli kullanim enfeksiyon riskini arttirir. Ek olarak bu ilaçlar sadece
romatoid artrit ilerleyisini yavaslatir, bu terapi durdurulduktan sonra hizlanmis bir
sekilde devam eder. Ek olarak bu spesifik olmayan ilaçlar ile uzun süreli terapi, belirli
malignitelerin gelisimi, böbrek yetmezligi, kemik iligi baskilanmasi, pulmoner fibroz,
malignite, diyabet ve karaciger fonksiyon bozukluklarina egilim dahil toksik yan etkiler
Üretir. Bu ilaçlar ayrica yaklasik 2-5 yil sonra etkili olmayi kademeli olarak durdurur
(Kelley's Textbook of Rheumatology, 6th Edition, pages 1001-1022).
Alternatif olarak spesifik olmayan immünosupresif ve anti-inflamatuvar ilaçlar olan
terapötik ajanlar, semptomatik rahatlamayi elde etmek üzere kullanilmistir. Bu ilaçlar
doza baglidir ve hastaligin ilerlemesinden koruma saglamaz. Bu ilaçlar steroid
bilesikleri, örnegin prednizon ve metilprednisolon içerir. Steroidler ayrica bunlarin uzun
süreli kullanimi ile iliskili önemli toksik yan etkilere sahiptir (Kelley's Textbook of
Rheumatology, 6th Edition, pages 829-833).
Dolayisiyla romatoid artrite yönelik mevcut tedaviler sinirli etkinlige sahiptir, önemli
toksik yan etkiler içerir ve uzun zaman periyotlari boyunca sürekli olarak kullanilamaz.
Buna uygun olarak romatoid artrit gibi romatizmal hastaliklarin tedavisi edilmesine
yönelik etkili ve daha güçlü olan ve oto-immünitenin patofizyolojik mekanizmasi hedef
alinarak klasik yöntemler ve ajanlarin dezavantajlarini önleyen tedavilerde kullanim için
bilesimlere yönelik bir ihtiyaç mevcuttur.
BULUSUN KISA AÇIKLAMASI
Mevcut bulus, B7-pozitif hücrelerinde B7 moleküllerine baglanan, böylelikle endojenöz
B7 moleküllerinin T hücreleri üzerinde CTLA4 ve/veya CD28`e baglanmasini inhibe
eden çözünür CTLA4 moleküllerinin bir özneye uygulanmasi ile immün sistemi
hastaliklarinin tedavi edilmesinde faydali bilesimler saglar. Bulusa ait yöntemlerde
kullanilan çözünür CTLA4 molekülleri, CTLA4lg ve çözünür CTLA4 mutant molekülü
L104EA29YIg içerir.
Mevcut bulus ayrica insandaki B7-pozitif hücrelerin bir çözünür CTLA4 ile temas
ettirilmesi ile bir insandaki T hücre tüketimi olmayacak sekilde T hücre fonksiyonunun
inhibe edilmesine yönelik bilesimleri saglar. Çözünür CTLA4 örnekleri CTLA4Ig ve
çözünür CTLA4 mutant molekülü örnegin L104EA29Ylg içerir.
Mevcut bulus ayrica romatoid artrit teshisi konulan bir özneye çözünür CTLA4
molekülleri örnegin CTLA4lg ve/veya çözünür CTLA4 mutant molekülü L104EA29YIg
uygulanmasi yoluyla romatoid artrit gibi romatizmal hastaliklarin tedavi edilmesine
(örnegin semptomlarin azaltilmasina) yönelik bilesimleri saglar. Sekil 19'da gösterildigi
üzere örnegin +1 pozisyonunda metiyonin veya -1 pozisyonunda alanin ile baslayan ve
+35? pozisyonunda Iisin ile biten CTLA4 mutant molekülü L104EA29Ylg, bulusa ait
yöntemlerde kullanim için tercih edilir.
Mevcut bulus ayrica romatoid artrit teshisi konulan bir özneye çözünür CTLA4
moleküllerinin uygulanmasi yoluyla yapisal hasar gibi romatizmal hastalik ile iliskili
patofizyolojik degisimlerin azaltilmasina yönelik bilesimleri saglar.
Mevcut bulus ayrica farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ve biyolojik olarak
etkili bir ajan örnegin çözünür CTLA4 molekülleri içeren, romatizmal hastaliklar gibi
immün sistemi hastaliklarinin tedavi edilmesine yönelik farmasötik bir bilesim saglar.
Immün sistemi hastaligina yönelik terapötik farmasötik bilesimler de bulus içerisinde
bulunur. Bir düzenlemede bulusa ait farmasötik bilesimlerin bir veya daha fazlasini
içeren bir kit, örnegin romatoid artrit gibi bir immün sistemi hastaligini tedavi etmek
üzere kullanilir. Örnegin farmasötik bilesim, B7-pozitif hücreleri üzerinde B7
moleküllerine baglanan, böylelikle BY moleküllerinin T hücreleri üzerinde CTLA4
ve/veya CD28'e baglanmasini bloke eden çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin etkili
bir miktarini içerir. Ayrica kit, bulusa ait farmasötik bilesimler ile birlikte kullanilan bir
veya daha fazla immünosupresif ajan içerebilir. Potansiyel immünosupresif ajanlar
bunlarla sinirli olmamak üzere kortikosteroidler, nonsteroidal anti inflamatuvar ilaçlar
(örnegin Cox-2 inhibitörleri), siklosporin prednison, azatioprin, metotreksat, TNFoi bloke
ediciler veya antagonistler, infliksimab, bir inflamatuvar sitokini hedef alan herhangi bir
biyolojik ajan, hidroksiklorokin, sülfasalazopirin, altin tuzlar, etarnersept ve anakinra
Mevcut bulus ayrica romatoid artrit ile iliskili olan eritrosit sedimentasyon hizinin
azaltilmasina yönelik bilesimleri saglar.
Ek olarak mevcut bulus, C-reaktif protein, çözünür ICAM-1, çözünür E-selektin ve/veya
çözünür IL-2r dahil olmak üzere romatoid artrit ile iliskili olan kan serumunun belirli
bilesenlerine ait seviyenin azaltilmasina yönelik bilesimleri saglar.
SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI
Sekil 1A: Hasta topluluklarinin demografik verisi. Demografik veri asagida
Örnek 3'te açiklandigi üzere cinsiyet, Irk veya hastalik devam süresini içerir.
Sekil 18: Hasta topluluklarinin demografik verisi. Demografik veri asagida
Örnek 3'te açiklandigi üzere cinsiyet, yas, agirlik ve hasta tarafindan ve hekim
tarafindan degerlendirilen hastalik aktivitesini içerir.
Sekil 10: Asagida Örnek 3'te açiklanan hasta topluluklarinin demografik verisi.
Demografik veri hastalik aktivitesi, eritrosit sedimentasyon hizi (ESR),
fiziksel fonksiyon (saglik anketi ile degerlendirilen sakatlik) ve C-reaktif protein
(CRP) içerir.
Sekil ID: Asagida, Örnek 3'te açiklanan hasta topluluklarinin demografik verisi.
Demografik veri, eklem sisligi, eklem hassasiyeti, sabah sertligi ve agriyi içerir.
Sekil 1E: Asagida, Örnek 3'te açiklanan hasta topluluklarinin demografik verisi.
Demografik veri önceki tedavileri içerir.
Sekil 2: Asagida, Örnek 3'te açiklanan nedene göre 85. günde devam
etmemenin açiklamasi.
Sekil 3A: Asagida, Ömek 3'te açiklandigi üzere 85. Gündeki ACR yanitlari:
ACR-20, -50 ve -70 yanitlari.
Sekil 38: Asagida, Örnek 3`te açiklandigi üzere plasebo yaniti dahil 85.
Gündeki ACR-20 yanitlari: %95 güvenlik siniri olan ACR-20 yaniti.
Sekil SC: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Gündeki ACR-20 yanitlari:
Sekil 4A: Asagida, Örnek 37te açiklandigi üzere 85. Günde hasta yüzdesi
cinsinden siskin ve hassas eklem sayisindaki temel (%20 gelisme) klinik
yanitlar: temel klinik yanit, ACR-20.
Sekil 48: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Günde hasta yüzdesi
cinsinden siskin ve hassas eklem sayisindaki (gelisme yüzdesi cinsinden) klinik
yanitlar: gelisme yüzdesi halinde klinik yanittaki degisim.
Sekil 5A: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Günde hasta yüzdesi
cinsinden agri yaniti (taban degerinden ortalama birim degisikligi ile Likert
ölçegi): taban degerinden agri skoru degisimleri
Sekil SB: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Günde hasta yüzdesi
cinsinden hastaya göre global hastalik degisimleri (taban degerinden ortalama
birim degisikligi ile Likert ölçegi araciligiyla): hastaya göre global hastalik
aktivite degisimleri.
Sekil 5C: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Günde hasta yüzdesi
cinsinden hekime göre global hastalik degisimleri (taban degerinden ortalama
birim degisikligi ile Likert ölçegi araciligiyla): hekime göre global hastalik aktivite
degisimleri.
Sekil 5D: Asagida, Örnek Site açiklandigi üzere 85. Günde hasta yüzdesi
cinsinden agri (taban degerinden ortalama birim degisikligi ile Likert ölçegi
araciligiyla): taban degerinden agri degisimleri.
Sekil 6A: Asagida, Örnek 3`te açiklandigi üzere 85. Günde 2 birim araligi ile
taban degerinden hastalik aktivite degisiminin hasta global degerlendirmesi:
hastalik aktivite gelismesi.
Sekil GB: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Günde 2 birim aralik ile
taban degerinden hastalik aktivite degisiminin hekime göre global
degerlendirmesi: hastalik aktivite gelisimi.
Sekil 7A: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Günde C-reaktif proteindeki
(CRP) azalma yüzdesi: taban degerinden CRP seviyelerindeki azalma yüzdesi.
Sekil ?8: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Günde C-reaktif proteinin
(CRP) azalma farki: %95 güven araligi olan CRP seviyelerindeki azalma farki
yüzdesL
Sekil 7C: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Günde C-reaktif proteinde
(CRP) ortalama azalma: taban degerinden ortalama degisim.
Sekil 8: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Günde taban degerinden
çözünür IL-2 reseptör seviyeleri ortalama degisimindeki azalma.
Sekil 9A: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere CTLA4Ig'nin zaman içerisinde
hassas eklemler üzerindeki etkisi: taban degerinden medyan farki.
Sekil 98: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere CTLA4Ig”nin zaman içerisinde
hassas eklemler üzerindeki etkisi.' taban degerinden ortalama farki.
Sekil 1OA: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere CTLA4Ig'nin zaman içerisinde
siskin eklemler üzerindeki etkisi.' taban degerinden medyan farki.
Sekil 1OB: Asagida, Örnek 3tte açiklandigi üzere CTLA4Ig”nin zaman içerisinde
siskin eklemler üzerindeki etkisi.' taban degerinden ortalama farki.
Sekil 11: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere CTLA4Ig'nin zaman içerisinde
taban degerinden agri degerlendirmesi ortalama farki üzerindeki etkisi.
Sekil 12A: Asagida, Örnek 3”te açiklandigi üzere CTLA4Ig'nin zaman içerisinde
taban degerinden hastalik aktivitesi ortalama farkinin hasta degerlendirmesi
üzerindeki etkisi.
Sekil 128: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere CTLA4Ig'nin zaman içerisinde
taban degerinden hastalik aktivitesi ortalama farkinin hekim degerlendirmesi
üzerindeki etkisi.
Sekil 13A: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere L104EA29YIg'nin zaman
içerisinde hassas eklemler üzerindeki etkisi: taban degerinden medyan farki.
Sekil 138: Asagida, Örnek 3`te açiklandigi üzere L104EA29YIg'nin zaman
içerisinde hassas eklemler üzerindeki etkisi: taban degerinden ortalama
degisimi.
Sekil 14A: Asagida, Örnek 3`te açiklandigi üzere L104EA29YIg'nin zaman
içerisinde siskin eklemler üzerindeki etkisi: taban degerinden medyan farki.
Sekil 14B: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere L104EA29YIg`nin zaman
içerisinde siskin eklemler üzerindeki etkisi: taban degerinden ortalama degisimi.
Sekil 15: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere L104EA29YIg'nin zaman
içerisinde agri degerlendirmesi üzerindeki etkisi: zaman içerisinde taban
degerinden ortalama degisim.
Sekil 16A: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere L104EA29YIg`nin zaman
içerisinde taban degerinden hastalik aktivitesi ortalama farkinin hasta
degerlendirmesi üzerindeki etkisi.
Sekil 168: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere L104EA29YIg'nin zaman
içerisinde taban degerinden hastalik aktivitesi ortalama farkinin hekim
degerlendirmesi üzerindeki etkisi.
Sekil 17: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere CTLA4lg ve L104EA29YIg
tedavisi ile 85. Gündeki taban degerine kiyasla Saglik Degerlendirme Anketi
(HAQ) ile degerlendirilen hasta sakatligindaki gelisme yüzdesi.
Sekil 18: Asagida, Örnek 1'de açiklandigi üzere L104Elg'nin nükleotid ve amino
asit dizisi.
Sekil 19: Asagida, Örnek 1'de açiklandigi üzere L104EA29Ylg'nin nükleotid ve
amino asit dizisi.
Sekil 20: Asagida, Örnek 1'de açiklandigi üzere L104EA29LIg'nin nükleotid ve
amino asit dizisi.
Sekil 21: Asagida, Örnek 1'de açiklandigi üzere L104EA29TIg'nin nükleotid ve
amino asit dizisi.
Sekil 22: Asagida, Örnek 1'de açiklandigi üzere L104EA29WIg”nin nükleotid ve
amino asit dizisi.
Sekil 23: CTLA4 reseptörünün nükleotid ve amino asit dizisi.
Sekil 24: CTLA4Ig'nin nükleotid ve amino asit dizisi.
boyut dislama kromatografisi.
Sekil 26 (sol ve sag gösterimler): NMR spektroskopisi ile belirlenen solüsyon
yapisindan üretilen CTLA4 hücre disi lg V-benzeri kivrimin bir serit diyagrami.
SEKIL 26 (sag gösterim), avidite arttirma mutasyonlarinin, L104 ve A29,
ve MYPPPY bölgesinin genisletilmis bir görünüsünü gösterir.
L104Elg ve CTLA4Ig'nin insan CD80- veya CD86-transfekte edilmis CHO
hücrelerine baglanmasini gösteren FACS analizleri.
Sekiller 28A & 288: Asagida, Örnek 2'de açiklandigi üzere CDSO-pozitif ve
CD86-pozitif CHO hücrelerinin proliferasyonunun inhibisyonunu gösteren
grafikler.
primer ve ikincil allo uyarilan T hücrelerinin proliferasyonunun inhibe
edilmesinde CTLA4Ig'den daha etkili oldugunu gösteren grafikler.
Sekiller 30A-C: Asagida, Örnek 2'de açiklandigi üzere L104EA29YIg'nin allo
uyarilan T hücrelerinin IL-2 (SEKIL 30A), IL-4 (SEKIL BOB) ve gamma (y)-
interferon (SEKIL 300) sitokin üretiminin inhibe edilmesinde CTLA4Ig'den daha
etkili oldugu gösteren grafikler.
Sekil 31: Asagida, Örnek 2'de açiklandigi üzere L104EA29YIg'nin
fitohemaglutinin- (PHA) ile uyarilan maymun T hücrelerinin proliferasyonunun
inhibe edilmesinde CTLA4IgZden daha etkili oldugu gösteren bir grafik.
baglanma analizini gösteren bir grafik.
Sekiller 33A & B: Asagida, Örnek 3'te açiklandigi üzere 85. Günde taban
degerinden çözünür ICAM-1 ve çözünür E-selektin seviyeleri ortalama
degisimindeki azalma.
BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI
TANIMLAMALAR
Bu basvuruda kullanilan tüm bilimsel ve teknik terimler, aksi belirtilmedikçe, teknikte
yaygin olarak kullanilan anlamlara sahiptir. Bu basvuruda kullanildigi sekliyle,
asagidaki kelimeler veya cümlecikler belirtilen anlamlara sahiptir.
Burada kullanildiginda, “ligand", baska molekülleri özel olarak taniyan ve baglayan bir
moleküle karsilik gelir, örnegin CTLA4 için bir ligand bir B7 molekülüdür.
Burada kullanilan "dogal sus CTLA4" veya "mutasyona ugramamis CTLA4", Sekil 23'te
gösterildigi gibi dogal olarak olusan tam uzunlukta CTLA4 (ayni zamanda U.S Patent
B7'yi taniyan ve baglayan veya bir B? ile etkilesime girerek CD28 ve/veya CTLA4'e
baglanmayi bloke eden herhangi bir bölümüne veya türevine (örnegin endojen CD28
ve/veya CTLA4) sahiptir. Özel düzenlemelerde, dogal sus CTLA4'ün hücre disi bölgesi,
+1 pozisyonundaki metiyonin ile baslar ve +124 konumundaki aspartik asitte sona erer
veya dogal sus CTLA4'ün hücre disi bölgesi, -1 konumunda alanin ile baslar ve +124
pozisyonunda aspartik asitte sona erer. Dogal sus CTLA4, bir N-terminal hücre disi
alani, bir zar-ötesi alan ve bir C-terminali sitoplazmik alana sahip olan bir hücre yüzeyi
proteinidir. Hücre disi alan, bir B7 molekülü gibi hedef moleküllere baglanir. Bir
hücrede dogal olarak olusan dogal sus CTLA4 proteini, N-terminali ucunda bir sinyal
peptidi içeren olgunlasmamis bir polipeptit olarak dönüstürülür. Olgunlasmamis
polipeptit, olgunlasmamis biçimde N- terminali ucundan farkli, yeni olusturulan bir N-
terminal ucuna sahip bir CTLA4 klevaj ürünü olusturmak için sinyal peptidinin klevajini
ve uzaklastirilmasini içeren bir dönüstürme sonrasi isleme tabi tutulur. Teknikte uzman
bir kisi, CTLA4 klevaj ürününün yeni olusturulan N-terminal ucundan bir veya daha
fazla amino asit çikaran ek dönüstürme sonrasi islemin gerçeklesebilecegini
anlayacaktir. Alternatif olarak, sinyal peptidi tamamen çikarilamayabilir, bu da ortak
baslatma amino asidi metiyoninden önce baslayan moleküller üretir. Böylece olgun
CTLA4 proteini, pozisyon +1'de metiyonin veya pozisyon -1'de alaninde baslayabilir.
CTLA4 molekülünün olgun sekli, hücre disi alani veya B7'ye baglanan herhangi bir
bölümünü içerir.
Burada kullanildigi üzere, bir "CTLA4 mutant molekülü", Sekil 23'te gösterilen dogal
sus CTLA4 veya bir mutasyona veya birden fazla mutasyona sahip olan (tercihen dogal
sus CTLA4'ün hücre disi alaninda) herhangi bir kismi veya türevi (SEQ ID NO: 9 ve
) anlamina gelir. Bir CTLA4 mutant molekülü dogal susta CTLA4 molekülünün dizisi
ile benzer olan ancak ayni olmayan fakat yine de bir B7'yi baglayan bir diziye sahiptir.
Mutasyonlar konservatif (örnegin, bir izolösini bir Iösin ile degistirme) veya konservatif
olmayan (örnegin bir triptofani bir glisin ile degistirme) yapiya sahip bir amino asit ile
yer degistiren bir veya daha fazla amino asit kalintisi veya kimyasal özellikler, amino
asit delesyonlari, eklemeler, çerçeve kaymalari veya kesmeleri içerebilir. CTLA4
mutant molekülleri içinde CTLA4 olmayan bir molekül içerebilir veya buraya eklenebilir.
Mutant moleküller çözünebilir (yani dolasimda olabilir) veya bir hücre yüzeyine
baglanabilir. Ilave CTLA4 mutant molekülleri, U.S. Patent Basvurusu Seri Numaralari
molekülleri sentetik veya rekombinant sekilde yapilabilir.
içeren bir çözünür füzyon proteini veya bir BT'yi baglayan bir parçasidir. Belirli bir
düzenleme +1 pozisyonunda metiyoninde baslayan ve +124 pozisyonunda aspartik
asitte sonlanan veya -1 pozisyonunda alanin ila +124 pozisyonunda aspartik asitte
baslayan dogal sus CTLA4'ün hücre disi domeni (Sekil 23'te gösterildigi gibi): +125
pozisyonunda bir baglanti amino asit kalintisi glutamini ve +126 pozisyonunda glutamik
asit ila +357 pozisyonunda lisin içeren bir immünoglobülin parçasi içerir (CTLA4lg2yi
kodlayan DNA, Budapeste Anlasmasi hükümleri altinda Amerikan Tipi Kültür
1991 tarihinde tevdi edilmistir ve ATCC erisim numarasi ATCC 68629,a uyumlu hale
CTLA4Ig-24, Bir Çin Hamster Yumurtalik (CHO) hücre hatti, ATCC tanimlama
ve/veya kitlerde kullanilan çözünür CTLA4Ig molekülleri bir sinyal (lider) peptit dizisini
içerebilir veya içermeyebilir. Tipik olarak bulusun yöntemleri ve/veya kitlerinde
moleküller bir sinyal peptit dizisi içermez.
tirosin amino asit kalintisi) ve L104E (+ 104. pozisyondaki bir Iösinin yerine geçen
glutamik asit amino asit kalintisi) ile dogal sus CTLA4'ün hücre disi bir alanini veya bir
B7 molekülüne bir Ig'nin kuyruguna eklenen bir kismini içeren çözünür CTLA4 mutant
molekülü olan bir füzyon proteinidir (Sekil 19`da bulunan; L104EA29YIg'yi kodlayan
beklemektedir). Bulusa ait yöntemler ve/veya kitlerde kullanilan çözünür L104EA29YIg
bulusun yöntem ve/veya kitlerinde, moleküller bir sinyal peptid dizisi içermez.
Burada kullanildigi üzere "çözünür", bir hücreye bagli olmayan veya bunun ile
birlestirilmemis, diger bir ifadeyle sirküle eden herhangi bir moleküle veya parçalari ve
derivelerine refere eder. Örnegin CTLA4, B7 veya CD28, sirasiyla CTLA4, B7 veya
CD28'in hücre disi domenine bir immünoglobülin (lg) kismin birlestirilmesi ile çözünür
hale getirilebilir. Alternatif olarak CTLA4 gibi bir molekül, transmembran domeninin
uzaklastirilmasi ile çözünür yapilabilir. Tipik olarak bulusa ait yöntemlerde kullanilan
çözünür moleküller bir sinyal (veya lider) dizi içermez.
Burada kullanildigi üzere "çözünür CTLA4 molekülleri", hücre yüzeyine bagli olmayan
(diger bir ifadeyle sirküle eden) CTLA4 molekülleri veya asagidakiler ile sinirli olmamak
üzere bunlari içeren BTye baglanan bir CTLA4 molekülünün fonksiyonel herhangi bir
kismini ifade eder: CTLA4lg füzyon proteinleri (örnegin ATCC 68629), burada
CTLA4,ün hücre disi domeni, füzyon molekülünü çözünür hale getiren bir
immünoglobülin (lg) kismina kaynastirilir veya parçalari ve deriveleri; papillomavirüs
E7 gen ürünü (CTLA4-E7), melanom iliskili antijen p97 (CTLA4-p97) veya HIV env
protein (CTLA4-env gp120) gibi biyolojik olarak aktif veya kimyasal aktif bir proteinin bir
kismina kaynasik veya bunun ile birlestirilen CTLA4'ün hücre disi domenine sahip
proteinler veya parçalari ve deriveleri; CD28/CTLA4Ig gibi hibrit (kimerik) füzyon
proteinleri veya parçalari ve deriveleri; proteini çözünür hale getirmek üzere
uzaklastirilan transmembran domenine sahip CTLA4 molekülleri (Oaks, M. K., et al.,
molekülleri", bunun parçalari, kisimlari veya derivelerini içerir ve CTLA4 baglanma
aktivitesine sahip çözünür CTLA4 mutant molekülleri içerir. Bulusa ait yöntemlerde
kullanilan çözünür CTLA4 molekülleri bir sinyal (lider) peptit dizisi içerebilir veya
içermeyebilir. Tipik olarak bulusa ait yöntemlerde moleküller bir sinyal peptit dizisi
içermez.
Burada kullanildigi üzere “CTLA4'ün hücre disi domeni”, B7 molekülleri gibi CTLA4
disi domeni +1 pozisyonunda metiyonin ila 124 pozisyonunda aspartik asit içerir (Sekil
23). Alternatif olarak CTLA4'ün bir hücre disi domeni, -1 pozisyonunda alanin ila +124
pozisyonunda aspartik asit içerir (Sekil 23). Hücre disi domen, bir B7 molekülüne
baglanan CTLA4'ün parçalari veya derivelerini içerir. Sekil 23'te gösterildigi üzere
CTLA4'ün hücre disi domeni ayrica CTLA4 molekülünün bir B7 molekülüne yönelik
baglanma aktivitesini degistiren mutasyonlari içerebilir.
Burada kullanildiginda "mutasyon" terimi, bir dogal sus molekülün nükleotid veya
amino asit diziliminde bir degisiklik, örnegin, dogal sus CTLA4 hücre disi alaninin DNA
ve/veya amino asit dizilerinde bir degisiklik anlamina gelir. DNA'daki bir mutasyon, bir
kodonu amino asit diziliminde bir degisime neden olacak sekilde degistirebilir. Bir DNA
degisikligi ikame, silme, ekleme, alternatif yapistirma veya kesmeleri içerebilir. Bir
amino asit degisikligi, proteinin ikameleri, silmeleri, eklemeleri, eklemeleri, kesmeleri ya
da proteinin islenmesi ya da bölünme hatalarini içerebilir. Alternatif olarak, bir nükleotid
dizisindeki mutasyonlar, teknikte iyi anlasilacagi üzere amino asit dizisinde sessiz bir
mutasyona neden olabilir. Bu baglamda, bazi nükleotid kodonlari ayni amino asidi
kodlar. Örnekler, amino asit, arjinin (R) kodlayan CGU, CGG, CGC ve CGA nükleotid
kodonlarini; veya amino asit, aspartik asidi (D) kodlayan kodonlar GAU ve GAC'dir. Bu
nedenle, bir protein, spesifik nükleotid diziliminde farklilik gösteren bir veya daha fazla
nükleik asit molekülü tarafindan kodlanabilir, ancak yine de ayni dizileri olan protein
moleküllerini kodlayabilir. Amino asit kodlama dizisi asagidaki gibidir:
Amino Asit Sembol Tek Harfli Kodonlar
Sistein Cys C UGU, UGC
Aspartik Asit Asp D GAU, GAC
Glutamik Glu E GAA, GAG
Fenilalanin Phe F UUU, UUC
Amino Asit Sembol Tek Harfli Kodonlar
Histidin His H CAU, CAC
Izolösin Ile I AUU, AUC, AUA
Lisin Lys K AAA, AAG
Lösin Leu L UUA, UUG, CUU, CUC, CUA,
Metiyonin Met M AUG
Asparajin Asn N AAU, AAC
Prolin Pro P CCU, CCC, CCA, CCG
Glutamin Gln Q CAA, CAG
Arjinin Arg R CGU, CGC, CGA, CGG, AGA,
Treonin Thr T ACU, ACC, ACA, ACG
Triptofan Trp W UGG
Tirosin Tyr Y UAU, UAC
Mutant molekül bir veya daha fazla mutasyona sahip olabilir.
Burada kullanildiginda bir “CTLA4 olmayan protein dizisi” veya “CTLA4 olmayan
molekül” BTye baglanmayan ve CTLA4'ün hedefine baglanmasiyla ilgili olarak
etkilesime geçmeyen protein molekülü anlamina gelir. Bir örnek, bunlarla sinirli
olmamak üzere, bir immünoglobülin (lg) sabit bölgesi veya bunun bir bölümünü içerir.
Tercihen, lg sabit bölgesi bir insan veya maymun lg sabit bölgesi, örnegin eklem, CH2
ve CH3 bölgeleri dahil olmak üzere, insan C (gamma)'dir. lg sabit bölgesi efektör
fonksiyonlarini azaltmak için mutasyona ugratilabilir (U.8. Patentleri
Burada kullanildiginda, bir "parça" veya "kisim", CTLA4 molekülünün, tercihen
CTLA4'ün hücre disi alaninin veya bir bölümünün veya parçasinin, örnegin bir B7
molekülü gibi, hedefini taniyan ve baglayan, herhangi bir parçasi veya bölümüdür.
Burada kullanildiginda "B7", CTLA4 ve/veya CD28'i taniyip baglayabilen B,
B ve B7-3 de dahil ancak bunlarla sinirli olmamak üzere moleküllerin B7
ailesi anlamina gelir.
Burada kullanildiginda, "B7-pozitif hücreler", hücre yüzeyi üzerinde ifade edilen bir
veya daha fazla B7 molekülüne sahip herhangi bir hücredir.
Burada kullanildiginda "türev", ana molekülün dizi homolojisi ve aktivitesini paylasan bir
moleküldür. Örnegin, CTLA4'ün bir türevi, dogal sus CTLA4'ün hücre disi alanina en az
çözünür CTLA4 mutant molekülü L104EA29YIg'yi taniyan ve baglayan bir çözünür
CTLA4 molekülünü içerir.
Burada kullanildigi üzere bir reseptör, sinyal veya molekülü “bloke etmek" veya “inhibe
etmek”, teknikte bilinen bir test ile tespit edildigi üzere reseptör, sinyal veya molekülün
aktivasyonuna müdahale etme anlamina gelir. Örnegin bir hücre aracili immün yanitin
blokaji, Romatizmal Hastalik ile iliskili semptomlarin azalmasinin belirlenmesi yoluyla
tespit edilebilir. Blokaj veya inhibisyon kismi veya toplam olabilir.
Burada kullanilan "B7 etkilesimini bloke etme", B7'nin CD28 ve/veya CTLA4 gibi
etkilesimlerini engellemek anlamina gelir. B7 etkilesimlerini bloke eden ajanlarin
örnekleri arasinda bunlarla sinirli olmamak üzere CTLA4, CD28 veya B7 moleküllerinin
(örnegin B7-1, B7- 2) herhangi birini taniyan ve baglayan bir antikor (veya bunun bir
kismi veya türevi) gibi moleküller; çözünür CTLA4 gibi moleküllerin çözünebilir bir
biçimi (veya bunun bir kismi veya türevi); CTLA4/CD28/B7 aracili etkilesim vasitasiyla
hücre sinyaline müdahale etmek üzere tasarlanmis bir peptit parçasi veya diger küçük
molekül içerir. Tercih edilen bir düzenlemede bloke edici ajan, bir çözünür CTLA4
molekül, örnegin CTLA4Ig (ATCC , bir
tarafindan açiklanan monoklonal antikorlar, bir anti-CTLA4 monoklonal antikor (örnegin
ATCC HB-304 ve referanslar 82-83'te açiklanan monoklonal antikorlar) ve/veya bir
anti-CD28 monoklonal antikordur (örnegin Hansen (Hansen et al., 1980.
22) tarafindan açiklanan ATCC HB 11944 ve mAb 9.3).
Burada kullanildigi üzere “immün sistemi hastaligi”, otoimmün hastaliklar, greft iliskili
bozukluklar ve immünoproliferatif hastaliklar dahil ancak bunlarla sinirli olmayan B7-
pozitif hücreleri ile T hücre etkilesimleri aracili herhangi bir hastaligi ifade eder. immün
sistemi hastaliklarinin örnekleri greft versus host hastaligi (GVHD) (örnegin kemik iligi
transplantasyonundan veya tolerans indüksiyonunda ortaya çikabilen gibi), solid
organlar, deri, isletler, kaslar, hepatositler, nöronlar dahil olmak üzere greft
transplantasyon reddi, kronik ret ve soku veya hücre allo- veya ksenogreftler ile iliskili
immün bozukluklarini içerir. immünoproliferatif hastaliklarin örnekleri bunlarla sinirli
olmamak üzere psoriyazis, T-hücre Ienfoma, T-hücre akut lenfoblastik lösemi, testiküler
anjiyosentrik T-hücre Ienfoma, selim tip Ienfositik anjeit, lupus (örnegin lupus
eritematozus, lupus nefriti), Hashimoto tiroiditi, primer miksödem, Graves hastaligi,
pernisiyöz anemi, otoimmün atrofik gastrit, Addison hastaligi, diyabet (örnegin insüline
bagimli diyabet hastaligi, tip I diyabet hastaligi, tip II diyabet hastaligi), good pasture
sendromu, miyastenya gravis, pemfigüs, Crohn hastaligi, sempatik oftalmi, otoimmün
üveit, multipl skleroz, otoimmün hemolitik anemi, idiyopatik trombositopeni, primer
biliyer siroz, kronik aksiyon hepatit, ülseratif kolit, Sjogren sendromu, romatizmal
hastaliklar (örnegin romatoid artrit), polimiyozit, skleroderma ve karisik bag doku
hastaligi içerir.
Burada kullanildigi üzere "romatizmal hastaliklar", eklemler, kemik, yumusak doku
veya omuriligi etkileyen herhangi bir hastaligi ifade eder (Mathies, H. 1983 Rheuma) ve
inflamatuvar romatizma, dejeneratif romatizma, ekstra-artiküler romatizma ve kollajen
hastaliklari içerir. Ek olarak romatizmal hastaliklar bunlarla sinirli olmamak üzere kronik
poliartrit, psoriyazis artropati, ankilozan spondilit, romatoid artrit, panarteritis nodoza,
sistemik lupus eritematozus, progresif sistemik skleroderma, periartrit
humeroscapularis, kötü artrit, kondrokalsinoz, dermatomiyozit, muskuler
romatizma, miyozit ve miyojeloz içerir. Bazi romatizmal hastaliklarin, bir öznenin
degistirilmis immün yanitindan kaynaklanan otoimmün bir hastalik oldugu bilinir.
Burada kullanildigi üzere “gen terapisi”, bir nükleik asit dizisi bir hücreye transfer
edilecek, daha sonra hücre nükleik asit ile kodlanan herhangi bir genetik ürün ifade
edecek sekilde genetik manipülasyondan olan bir hastaligi tedavi etmek üzere bir
prosestir. Örnegin teknikte uzman kisilerce iyi bilindigi üzere nükleik asit transferi, ilgili
nükleik asidi içeren bir ifade vektörünün örnegin kalsiyum fosfat çökelmesi,
dietilaminoetil dekstran, polietilen glikol (PEG), elektroporasyon, direkt enjeksiyon,
vitro hücrelere eklenmesi ile gerçeklestirilebilir (Sambrook et al., Molecular Cloning: A
Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press 1989); Kriegler M. Gene
Transfer ad Expression: A Laboratory Manual (W. H. Freeman ve Co, New York, N.Y.,
1993) ve Wu, Methods in Enzymology (Academic Press, New York, 1993). Alternatif
olarak ilgili nükleik asit dizileri, örnegin çesitli vektörler ile ve nükleik asidin bir özneye
direkt uygulanmasi (Williams et al, veya nükleik asidin bir
viral vektöre yerlestirilmesi ve öznenin virüs ile enfeksiyonu (Battleman et al, 1993 J
Patent 5,354,678; Davison ve Elliott, Molecular Virology: A Practical Approach (IRL
Press, New York, 1993)) dahil çesitli yöntemler in vivo bir hücreye transfer edilebilir. In
vivotransfere yönelik kullanilan diger yöntemler, nükleik asidin Iipozomlar halinde
enkapsülasyonu ve Iipozomlarin veya hemaglütine edici Sendai virüsü ile kombine
edilen Iipozomlarin bir özneye direkt transferini içerir (U.S. Patent 5,824,655).
Transfekte edilmis veya enfekte olmus hücreler, bir hastaligi ve bir hastaligin
semptomlarini iyilestirmek amaciyla nükleik asit ile kodlanan protein ürünlerini ifade
Burada açiklanan bulusun daha kapsamli sekilde anlasilabilmesi amaciyla asagidaki
açiklama belirtilir.
BULUSA AIT BILESIMLER VE YÖNTEMLER
Mevcut bulus, Bî'ye örnegin çözünür CTLA4 moleküllerine (örnegin CTLA4Ig ve/veya
L104EA29Ylg) baglanan bir Iigandin ve B7'yi taniyan ve buna baglanan mAb'Ierin etkili
bir miktarinin bir özneye uygulanmasi ile romatizmal hastaliklar gibi immün sistemi
hastaliklarinin tedavi edilmesinde kullanima yönelik bilesimleri saglar. Etkili bir miktar,
çözünür CTLA4 molekülün, B7-pozitif hücreler üzerinde B7 moleküllerine
baglandiginda B7 moleküllerinin CTLA4 ve CD28 gibi endojenöz Iigandlara
baglanmasini inhibe eden miktari olarak tanimlanir.
Tercih edilen bir düzenlemede immün hastaligi, bir romatizmal hastaliktir. Romatizmal
hastaliklar, (i) kaslar, tendonlar, kikirdak, sinoviya ve fibröz dokular dahil ve özellikle
eklemler olmak üzere vücudun kas iskelet veya bag doku yapilarinin inflamasyonu
veya dejenerasyonu ile karakterize edilen, (ii) eklem sisligi, eklem hassasiyeti,
inflamasyon, sabah sertligi ve/veya agri veya bu yapilarin hareket kabiliyeti veya
fonksiyonunun bozulmasi ile beraber ve bazi durumlarda (iii) siklikla romatoid faktör ve
diger inflamatuar temsili markörlerinin serolojik kaniti ile beraber olan herhangi bir
hastaliktir.
Romatizmal hastaliklar bununla sinirli olmamak üzere romatoid artrit içerir. Romatoid
artrit semptomlari eklem sisligi, eklem hassasiyeti, inflamasyon, sabah sertligi ve
fiziksel sakatliga yol açan agriyi içerir. Ilerlemis artrit asamalarindan muzdarip özneler,
yapisal hasar ve zayiflatan agri semptomlarindan muzdariptir. Diger organlar da
otoimmün mekanizma nedeniyle bozulabilir.
Bilesimler
Mevcut bulus, çözünür CTLA4 moleküllerini içeren, romatizmal hastaliklar gibi immün
hastaliklarinin tedavi edilmesine yönelik bilesimleri saglar. Ayrica mevcut bulus
insandaki B7-pozitif hücrelerin bir çözünür CTLA4 ile temas ettirilmesi ile bir insandaki
T hücre tüketimi olmayacak sekilde T hücre fonksiyonunun inhibe eden bir biyolojik
ajan içeren bilesimleri saglar. Çözünür CTLA4 örnekleri CTLA4lg ve çözünür CTLA4
mutant molekülü örnegin L104EA29YIg içerir.
Mutant veya dogal sus diziler ile CTLA4 molekülleri, CTLA4 transmembran
segmentinin silinmesi ile çözünür hale getirilebilir (Oaks, M. K., et al., 2000 Cellular
Alternatif olarak mutant veya dogal sus diziler ile çözünür CTLA4 molekülleri, füzyon
proteinleri olabilir, burada CTLA4 molekülleri, CTLA4 moleküllerini çözünür hale getiren
immünoglobülin (lg) molekülleri gibi CTLA4 disi kisimlar ile kaynastirilir. Örnegin bir
CTLA4 füzyon proteini, CTLA4Ig molekülleri ile sonuçlanarak bir immünoglobülin sabit
bölgeye kaynasik hücre disi CTLA4 domenini içerir (Sekil 24) (Linsley, P. S., et al.,
Klinik protokoller için, immünoglobülin bölgenin, bir gönüllüde zararli bir bagisiklik
tepkisi ortaya çikarmamasi tercih edilir. Tercih edilen parça, insan veya maymun
immünoglobülin sabit bölgelerini içeren immünoglobülin sabit bölgesidir. Uygun bir
immünoglobülin bölgesine örnek, eklem, Fc reseptörlerine baglanma, tamamlayici
bagimli sitotoksisiteye aracilik etme (CDC) gibi efektör fonksiyonlara aracilik edebilen
veya antikora bagli hücre aracili sitotoksisiteye aracilik edebilen eklem, CH2 ve CH3
bölgeleri de dahil olmak üzere insan Cyl'dir (ADCC). Immünoglobulin parçasi,
mutasyonun immünoglobülinden Fc reseptörlerine baglanma kabiliyetini arttirarak veya
azaltarak, immünoglobülinin kendi Iigandina baglanma kabiliyetini modüle ettigi, bir
veya daha fazla mutasyona sahip olabilir (örnegin CH2 alaninda CDC veya ADCC gibi
efektör fonksiyonlarini azaltmak için). Örnegin, immünoglobülin bölgesindeki
mutasyonlar eklem alani içindeki sistein kalintilarinin herhangi birinde veya tamaminda
degisiklik gösterebilir, örnegin +130, +136 ve +139 konumlarindaki sisteinler serin ile
ikame edilir (Sekil 24). Immünoglobulin molekülü, Sekil 24'te gösterildigi gibi +148
pozisyonunda bir serinle ikame edilmis prolin de içerebilir. Ayrica, immünoglobülin
parçasindaki mutasyonlar fenilalanin ile ikame edilmis +144 konumunda lösin, glutamik
asit ile ikame edilmis +145 pozisyonundaki lösin veya alanin ile ikame edilmis +147
konumundaki glisini içerebilir.
Çözünür CTLA4 moleküllerinde veya çözünür CTLA4 mutant moleküllerinde kullanima
yönelik CTLA4 disi ek kisimlar bunlarla sinirli olmamak üzere p97 molekülü, env gp120
molekülü, E7 molekülü ve ova molekülü içerir (Dash, B. et al. 1994 J. Gen. Virol. 75 (Pt
2332209).
Bulusa ait çözünür CTLA4 molekülü molekülün CTLA4 kisminin hücre disi alaninin N-
terminal ucuna bagli bir sinyal peptid dizisini içerebilir. Sinyal peptidi, onkostatin M'den
proteinden gelen sinyal peptidi dahil molekülün sekresyonuna müsaade eden herhangi
bir dizin olabilir.
Bulusa ait çözünür CTLA4 molekülü, CTLA4'ün hücre disi bölgesinin N-terminal
ucunda bagli onkostatin M sinyal peptidi ve CTLA4 hücre disi bölgesinin (dogal sus
veya mutasyona ugramis) C-terminal ucuna bagli insan immünoglobulin molekülü
(örnegin, eklem, CH2 ve CH3) içerebilir. Bu molekül, -26 konumundaki metiyonin ile -1
konumundaki alanin sahip bir amino asit dizisini kapsayan onkostatin M sinyal
peptidini, +1 konumundaki metiyonin ile +124 konumundaki aspartik asit içeren bir
amino asit dizisini kapsayan CTLA4 kismini, +125 konumundaki amino asit kalinti
glutamini ve +126 konumunda glutamik asitten + 357 konumundaki Iizine sahip bir
amino asit dizisini kapsayan bir immünoglobülin bölümü içerir.
Spesifik olarak asagida açiklanan mutasyona ugramis CTLA4 dizilerini içereni bulusa
ait çözünür CTLA4 mutant moleküller, mutasyona ugramis CTLA4 parçalarina
kaynasik insan IgCy1 kisimlarini içeren füzyon molekülleridir.
Bir düzenlemede çözünür CTLA4 mutant molekülleri, hücre disi domende tek alanli bir
mutasyonu içeren bir CTLA4 parçasina kaynasik Ing1`i içerir. CTLA4'ün hücre disi
domeni +1 pozisyonunda metiyonin ila +124 pozisyonunda aspartik asit içerir (örnegin,
Sekil 23). CTLA4'ün hücre disi kismi -1 pozisyonunda alanin ila +124 pozisyonunda
aspartik asit içerir (örnegin, Sekil 23). Tek alanli mutasyonlarinin örnekleri asagidakileri
içerir burada +104 pozisyonundaki lösin diger herhangi bir amino aside degistirilir:
Tek alanli mutant: Kodon degisimi:
L104Elg Glutamik asit GAG
L104SIg Serin AGT
L104Tlg Treonin ACG
L104Alg Alanin GCG
L104WIg Triptofan TGG
L104ng Glutamin CAG
Tek alanli mutant: Kodon degisimi:
L104Klg Lisin AAG
L104Rlg Arjinin CGG
L104Glg Glisin GGG
Ayrica bulus, bir lg Cv1 kismina kaynasik, iki mutasyonlu CTLA4iün hücre disi
domenine sahip mutant molekülleri saglar. Örnekler asagidakileri içerir burada +104
pozisyonundaki Iösin, bir diger amino aside (örnegin glutamik asit) degistirilir ve +105
pozisyonundaki glisin, +25 pozisyonundaki serin, +30 pozisyonundaki treonin veya +29
pozisyonundaki alanin diger herhangi bir amino aside degistirilir:
Iki alanli mutantlar: Kodon degisimi:
L104EG105FIg Fenilalanin TTC
L104EG105WIg Triptofan TGG
L104EG105LIg Lösin CTT
L104E825Rlg Arjinin CGG
L104ETBOGIg Glisin GGG
L104ET30NIg Asparajin AAT
L104EA29YIg Tirosin TAT
L104EA29LIg Lösin TTG
L104EA29TIg Treonin ACT
L104EA29WIg Triptofan TGG
Ayrica yine bulus, bir lg Cv1 kismina kaynasik, üç mutasyonu içeren CTLA4'ün hücre
disi domenine sahip mutant molekülleri saglar. örnekler asagidakileri içerir burada 104
pozisyonundaki Iösin, bir diger amino aside (örnegin glutamik asit) degistirilir, +29
pozisyonundaki alanin, bir diger amino aside (örnegin tirosin) degistirilir ve +25
pozisyonundaki serin bir diger amino aside degistirilir.
Üç alanli mutantlar: Kodon degisimi:
Üç alanli mutantlar: Kodon degisimi:
L104EA29Y825K|9 Lisin AAA
L104EA29Y825KIg Lisin AAG
L104EA29Y825NIg Asparajin AAC
L104EA29Y825RIg Arjinin CGG
Çözünür CTLA4 mutant molekülleri, molekülün CTLA4 kismi ile lg kismi arasina
yerlestirilen bir baglanti amino asit kalintisina sahip olabilir. Baglanti amino asit,
glutamin dahil herhangi bir amino asit olabilir. Baglanti amino asit, teknikte bilinen
moleküler veya kimyasal sentez yöntemleri ile eklenebilir.
Mevcut bulus, mutant molekülün CTLA4 kisminin hücre disi domeninin N-terminal
ucuna bagli bir sinyal peptit dizisini içeren CTLA4 mutant moleküllerini saplar. Sinyal
disi herhangi bir proteinden salgilanmasi sahil mutant molekülün salgilanmasina izin
verecek herhangi bir dizi olabilir.
Bulus, L104Elg (Sekil 18'de gösterildigi gibi) veya L104SIg gibi hücre disi CTLA4
domeninde tek alanli bir mutasyon içeren çözünür CTLA4 mutant moleküllerini saglar,
burada L104Elg ve L104SIg bunlarin CTLA4 dizilerinde mutasyona ugratilir böylece
+104 pozisyonundaki Iösin, sirasiyla glutamik asit veya serin ile sübstitüe edilir. Tek
alani mutant molekülleri ayrica +1 pozisyonunda metiyonin ila +124 pozisyonunda
aspartik asidi içeren CTLA4 kisimlari, +125 pozisyonundaki bir baglanti amino asit
kalinti glutamini ve +126 pozisyonundaki glutamik asit ila +357 pozisyonunda Iisini
içeren bir immünoglobülin kismi içerir. Mutant molekülün immünoglobülin kismi ayrica
mutasyona ugratilabilir böylece +130, +136 ve +139 pozisyonlarindaki sisteinler, serin
ile sübstitüe edilir ve +148 pozisyonundaki prolin, serin ile sübstitüe edilir. Alternatif
olarak tek alanli çözünür CTLA4 mutant molekülü, -1 pozisyonunda alanin ila +124
pozisyonunda aspartik asidi içeren bir CTLA4 kismina sahip olabilir.
CTLA4 domeninde iki alanli bir mutasyon içeren çözünür CTLA4 mutant molekülleri
saglar, burada +104 pozisyonundaki Iösin, bir glutamik asit ile sübstitüe edilir ve +29
pozisyonundaki alanin sirasiyla tirozin, Iösin, treonin ve triptofana degistirilir. +1
pozisyonunda metiyoninde baslayan ve +35? pozisyonunda lisinde sonlanan
sinyal (lider) peptit dizisi, sirasiyla Sekiller 19-22'de gösterilen sekilde diziye dahil edilir.
Iki alanli mutant molekülleri ayrica +1 pozisyonunda metiyonin ila +124 pozisyonunda
aspartik asidi içeren CTLA4 kisimlari, +125 pozisyonundaki bir baglanti amino asit
kalinti glutamini ve +126 pozisyonundaki glutamik asit ila +357 pozisyonunda lisini
içeren bir immünoglobülin kismi içerir. Mutant molekülünün immünoglobülin kismi da
ile sübstitüe edilir ve +148 pozisyonundaki prolin, serin ile sübstitüe edilir. Alternatif
olarak bu mutant molekülleri, -1 pozisyonunda alanin ila +124 pozisyonunda aspartik
asidi içeren bir CTLA4 kismina sahip olabilir.
domeninde iki alanli bir mutasyon içeren çözünür CTLA4 mutant moleküllerini saglar
burada +104 pozisyonundaki Iösin, bir glutamik asit ile sübstitüe edilir ve +105
pozisyonundaki glisin sirasiyla fenilalanin, triptofan ve Iösin ile sübstitüe edilir. Iki alanli
mutant molekülleri ayrica +1 pozisyonunda metiyonin ila +124 pozisyonunda aspartik
asidi içeren CTLA4 kisimlari, +125 pozisyonundaki bir baglanti amino asit kalinti
glutamini ve +126 pozisyonundaki glutamik asit ila +35? pozisyonunda Iisini içeren bir
immünoglobülin kismi içerir. immünoglobülin kismi da mutasyona ugratilabilir böylece
pozisyonundaki prolin, serin ile sübstitüe edilir. Alternatif olarak bu mutant molekülleri, -
1 pozisyonunda alanin ila +124 pozisyonunda aspartik asidi içeren bir CTLA4 kismina
sahip olabilir.
Bulus, +1 pozisyonunda metiyonin ila +124 pozisyonunda aspartik asit, +125
pozisyonundaki bir baglanti amino asit kalinti glutamini ve +126 pozisyonundaki
glutamik asit ila 357 pozisyonunda Iisin içeren immünoglobülin kismi içeren bir CTLA4
kismi dahil bir iki alanli mutant molekül olan L104ES25RIg'yi saglar. CTLA4'ün hücre
disi domenine sahip kisim mutasyona ugratilir böylece +25 pozisyonundaki serin,
arjinin ile sübstitüe edilir ve +104 pozisyonundaki Iösin, glutamik asit ile sübstitüe edilir.
Alternatif olarak L104ES25RIg, -1 pozisyonunda alanin ila +124 pozisyonunda aspartik
asit içeren bir CTLA4 kismina sahip olabilir.
mutasyonu içeren çözünür CTLA4 mutant molekülleri saglar burada +104
pozisyonundaki Iösin, bir glutamik asit ile sübstitüe edilir ve +30 pozisyonundaki
treonin, sirasiyla glisin ve asparajin ile sübstitüe edilir. Iki alanli mutant molekülleri
ayrica +1 pozisyonunda metiyonin ila +124 pozisyonunda aspartik asidi içeren CTLA4
kisimlari, +125 pozisyonundaki bir baglanti amino asit kalinti glutamini ve +126
pozisyonundaki glutamik asit ila +35? pozisyonunda Iisini içeren bir immünoglobülin
kismi içerir. Mutan molekülün immünoglobülin kismi da mutasyona ugratilabilir böylece
pozisyonundaki prolin, serin ile sübstitüe edilir. Alternatif olarak bu mutant molekülleri, -
1 pozisyonunda alanin ila +124 pozisyonunda aspartik asidi içeren bir CTLA4 kismina
sahip olabilir.
CTLA4 domeninde üç alanli bir mutasyonu içeren çözünür CTLA4 mutant molekülleri
saglar burada +104 pozisyonundaki Iösin, bir glutamik asit ile sübstitüe edilir, +29
pozisyonundaki alanin, tirosine degistirilir ve +25 pozisyonundaki serin sirasiyla Iisin,
asparajin ve arjinine degistirilir. Üç alanli mutant molekülleri ayrica +1 pozisyonunda
metiyonin ila +124 pozisyonunda aspartik asidi içeren CTLA4 kisimlari, +125
pozisyonundaki bir baglanti amino asit kalinti glutamini ve +126 pozisyonundaki
glutamik asit ila +357 pozisyonunda Iisini içeren bir immünoglobülin kismi içerir. Mutan
molekülün immünoglobülin kismi da mutasyona ugratilabilir böylece +130, +136 ve
+139 pozisyonundaki sisteinler, serin ile sübstitüe edilir ve +148 pozisyonundaki prolin,
serin ile sübstitüe edilir. Alternatif olarak bu mutant molekülleri, -1 pozisyonunda alanin
ila +124 pozisyonunda aspartik asidi içeren bir CTLA4 kismina sahip olabilir.
Çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin ek düzenlemeleri bir B7'ye baglanan kimerik
CTLA4/CD28 homolog mutant moleküllerini içerir (Peach, R. J., et al., 1994 J Exp Med
HS14 (U.S. patent numarasi 5,773,253) içerir.
Bulusun tercih edilen düzenlemeleri, CTLA4Ig (Sekil 24'te gösterildigi üzere, +1
pozisyonunda metiyoninde baslayan ve +35? pozisyonunda lisinde sonlanan) ve
çözünür CTLA4 mutant L104EA29YIg (in Sekil 19”da gösterildigi üzere, +1
pozisyonunda metiyoninde baslayan ve +35? pozisyonunda lisinde sonlanan) gibi
çözünür CTLA4 molekülleridir. Bulus ayrica bulusa ait çözünür CTLA4 moleküllerine
karsilik gelen amino asit dizilerini kodlayan nükleotid dizilerini içeren nükleik asit
moleküllerini saglar. Bir düzenlemede nükleik asit molekülü, bir DNA (örnegin, cDNA)
veya bir hibritidir. CTLA4Ig'yi kodlayan DNA (Sekil 24), Amerikan Tipi Kültür Koleksiyon
tarihinde tevdi edilmistir ve ATCC erisim numarasi ATCC 68629'a uyumlu hale
getirilmistir. L, ATCC ile 19
Haziran 2000 tarihinde tevdi edilmistir ve ATCC erisim numarasi PTA-21045e uyumlu
hale getirilmistir. Alternatif olarak nükleik asit molekülleri RNA veya bir hibritidir.
Ek olarak bulus, bulusa ait nükleotid dizilerini içeren bir vektör saglar. Ifade
vektörlerinin örnekleri bunlarla sinirli olmamak üzere memeli konakçi hücrelere yönelik
vektörler (örnegin, BPV-1, pHyg, pRSV, pSV2, pTK2 (Maniatis); pIRES (Clontech);
pRc/CMV2, pRc/RSV, pSFV1 (Life Technologies); pVPakc Vektörleri, pCMV vektörleri,
pSG5 vektörleri (Stratagene)), retroviral vektörleri (örnegin, pFB vektörleri
(Stratagene)), pCDNA-3 (Invitrogen) veya modifiye formlari, adenoviral vektörler;
adeno iliskili virüs vektörler, bakülovirüs vektörleri, maya vektörleri (örnegin, pESC
vektörleri (Stratagene)) içerir.
Bir konakçi sistem de saglanir. Konakçi vektör sistem, uygun bir konakçi hücrede
bulusa ait vektör içerir. Uygun konakçi hücrelerin örnekleri bunlarla sinirli olmamak
üzere prokaryotik ve ökaryotik hücreleri içerir. Bulus uygulamasina göre ökaryotik
hücreler de uygun konakçi hücrelerdir. Ökaryotik hücrelerin örnekleri herhangi bir
hayvan hücresi, primer veya immortalize, maya (örnegin, Saccharomyces
cerevisiae, Schizosaccharomvces pombe ve Pichia pastoris) ve bitki hücrelerini içerir.
Miyelom, COS ve CHO hücreleri, konakçilar olarak kullanilabilen hayvan hücrelerinin
örnekleridir. Belirli CHO hücreleri bunlarla sinirli olmamak üzere DG44 (Chasin, et la.,
(GEIMG, Genova, IT), CHO klon B (GEIMG, Genova, IT), ECACC 93061607 olarak
gösterilen CHO-Ki/SF (CAMR, Salisbury, Wiltshire, BK) ve ECACC 92052129 olarak
gösterilen RR-CHOK1 (CAMR, Salisbury, Wiltshire, BK) içerir. Örnek niteliginde bitki
hücreleri türün (tam bitkiler, hücre kültürü veya kallus), misir, soya fasulyesi ve pirinç
hücreleri içerir. Misir, soya fasulyesi ve pirinç tohumlari da kabul edilebilirdir.
Bulusa ait CTLA4 mutant molekülleri, dogal olarak olusan polipeptitler olarak veya
dogal, sentetik, yari sentetik veya rekombinant herhangi bir kaynaktan izole edilebilir.
Buna uygun olarak CTLA4 mutant polipeptit molekülleri, özellikle memeli olmak üzere
bovin, ovin, porsin, mürin, ekuin ve tercihen insan dahil herhangi bir türeden alinan
dogal olarak meydana gelen proteinler olarak izole edilebilir. Alternatif olarak CTLA4
mutant polipeptit molekülleri, prokaryot veya ökaryot konakçi hücrelerde ifade edilen
rekombinant polipeptitler olarak izole edilebilir veya kimyasal olarak sentezlenen bir
polipeptit olarak izole edilebilir.
Uzaman bir kisi, izole CTLA4 mutant moleküllerini elde etmek üzere standart izolasyon
yöntemlerini kolay bir sekilde kullanabilir. Izolasyon yapisi ve derecesi kaynaga ve izole
moleküllerin tasarlanan kullanimina bagli olacaktir.
CTLA4 mutant molekülleri ve parçalari veya deriveleri, rekombinant yöntemler
araciligiyla üretilebilir. Buna uygun olarak dogal sus CTLA4 moleküllerini kodlayan bir
izole nükleotid dizisi, CTLA4 mutant polipeptit moleküllerini kodlayan nükleotid dizileri
ile sonuçlanarak mutasyonlari uygulamak üzere manipüle edilebilir. Örnegin CTLA4
mutant moleküllerini kodlayan nükleotid dizileri, primerler be PCR amplifikasyonu
kullanilarak alan yönelimli mutajenez yöntemleri ile üretilebilir. Primerler istenen
mutasyonlari uygulamak üzere tasarlanan spesifik dizileri içerebilir. Alternatif olarak
primerler, rastgele mutasyonlari uygulamak üzere randomize veya yari randomize
dizileri içerecek sekilde tasarlanabilir. Standart rekombinant yöntemler (Molecular
Cloning; A Laboratory Manual, 2nd edition, Sambrook, Fritch ve Maniatis 1989, Cold
Spring Harbor Press) ve PCR teknolojisi (U. 3. Patent No. 4,603,102), CTLA4 mutant
polipeptitleri kodlayan CTLA4 mutant polinükleotidlerin üretilmesi ve izole edilmesine
yönelik kullanilabilir.
Bulus, çözünür CTLA4 moleküllerinin farmasötik olarak etkili miktarlarini içeren immün
sistemi hastaliklarinin tedavisinde kullanima yönelik farmasötik bilesimleri içerir. Belirli
düzenlemelerde immün sistemi hastaliklarina, CD28/CTLA4/B7 etkilesimleri aracilik
eder. Çözünür CTLA4 molekülleri tercihen dogal sus diziye sahip CTLA4 molekülleri
ve/veya hücre disi CTLA4 domeninde bir veya daha fazla mutasyona sahip çözünür
CTLA4 molekülleridir. Farmasötik bilesim çözünür CTLA4 protein molekülleri ve/veya
nükleik asit molekülleri ve/veya molekülleri kodlayan vektörleri içerebilir. Tercih edilen
düzenlemelerde çözünür CTLA4 molekülleri, Sekiller 24 veya 19'da gösterildigi üzere
(sirasiyla CTLA4lg veya L104EA29Y) CTLA4'ün hücre disi domeminin amino asit
dizisine sahiptir. Hatta daha çok tercihen çözünür CTLA4 mutant molekülü, burada
açiklandigi üzere L104EA29YIg'dir. Bilesimler ek olarak bunlarla sinirli olmamak üzere
ilaç toksinleri, enzimler, antikorlar veya konjugatlar dahil diger terapötik ajanlari
içerebilir.
Teknikte standart uygulama oldugu üzere teknikte uzman kisilerce bilinen kabul
edilebilir bir tasiyici veya adjuvan ile karistirilan bulusa ait molekülleri içeren farmasötik
bilesimler saglanir. Farmasötik bilesimler tercihen bulusa ait molekül (örnegin CTLA4Ig
veya L ile kombine edildiginde molekülün
aktivitesini sürdüren ve öznenin immün sistemi ile reaktif olmayan herhangi bir
materyali içeren uygun tasiyicilar ve adjuvanlari içerir. Bu tasiyicilar ve adjuvanlar
bunlarla sinirli olmamak üzere iyon degistiriciler, alümina, alüminyum stearat, lesitin,
serum proteinleri, örnegin insan serum albumin, tampon maddeleri örnegin fosfatlar,
glisin, sorbik asit, potassam sorbat, doymus bitkisel yag asitlerinin kismi gliserit
karisimlari, fosfat tamponlu salin solüsyonu, su, emülsiyonlar (örnegin yag/su
emülsiyonu), tuzlar veya elektrolitler örnegin protamin, sülfat, disodyum hidrojen fosfat,
potasyum hidrojen fosfat, sodyum klorid, çinko tuzlari, kolloidal silika, magnezyum
trisilikat, polivinil pirolidon, selüloz bazli maddeler, polietilen glikol içerir. Diger
tasiyicilar ayrica steril solüsyonlar; kaplanmis tabletler ve kapsüller dahil tabletleri
içerebilir. Tipik olarak bu tür tasiyicilar eksipiyanlar örnegin nisasta, süt, seker (örnegin
sukroz, glukoz, maltoz), belirli kil türleri, jelatin, stearik asit ve tuzlari, magnezyum veya
kalsiyum stearat, talk, bitkisel kati yaglar veya sivi yaglar, zamklar, glikoller veya bilinen
diger eksipiyanlari içerebilir. Bu tür tasiyicilar ayrica lezzet ve renk katki maddeleri
veya diger bilesenleri içerebilir. Bu tür tasiyicilari içeren bilesimler, iyi bilinen klasik
yöntemler ile formüle edilir. Bu tür bilesimler ayrica çesitli Iipid bilesimleri halinde
örnegin Iipozomlar ve ayrica çesitli polimerik bilesimler halinde örnegin polimer
mikroküreler halinde formüle edilebilir. Burada ayrica BY-pozitif hücreler ile fonksiyonel
CTLA4- ve CD28- pozitif hücre etkilesimlerinin regüle edilmesine yönelik yöntemler
açiklanir. Yöntemler, çözünür CTLA4/B7 komplekslerini olusturmak üzere bulusa ait bir
çözünür CTLA4 molekülü ile B7-pozitif hücrelerinin temas ettirilmesini içerir,
kompleksler bir endojenöz CTLA4 ve/veya CD28 molekülün bir B7 molekülü ile
reaksiyonuna müdahale eder. Ayrica insandaki B7-pozitif hücrelerin bir çözünür CTLA4
ile temas ettirilmesi ile bir insanda T hücre tüketimi olmayacak sekilde T hücre
fonksiyonunun inhibe edilmesine yönelik yöntemler açiklanir. Çözünür CTLA4 örnekleri
CTLA4Ig ve çözünür CTLA4 mutant molekülü örnegin L104EA29YIg içerir.
Mevcut bulus, romatizmal hastaliklar gibi immün sistemi hastaliklarinin tedavi
edilmesinde kullanima yönelik bilesimler saglar. Yöntemler bulusa ait çözünür CTLA4
moleküllerinin içeren terapötik bir bilesiminin immün sistemi hastaliklari ile iliskili
SemptOmIarinin en az birini rahatlatmak üzere etkili bir miktarda bir özneye
uygulanmasini içerir. Ek olarak bulus, T-hücre/B7-pozitif hücre etkilesimleri bloke
edilerek, böylelikle T hücre anerjisi veya toleransinin indüksiyonuna yol açan, B7'nin
CD28'e baglanmasi gibi es uyarici sinyaller ile T hücre uyarimin bloke edilmesi ile
immün sistemi hastaliklarina yönelik uzun süreli terapi saglayabilir. immün sistemi
hastaliklari otoimmün hastaliklar, immünoproliferatif hastaliklar ve greft iliskili
bozukluklari içerir. Greft iliskili hastaliklarin örnekleri greft versus host hastaligi (GVHD)
(örnegin kemik iligi transplantasyonundan veya tolerans indüksiyonunda ortaya
çikabilen gibi), solid organlar, deri, isletler, kaslar, hepatositler, nöronlar dahil olmak
üzere greft transplantasyon reddi, kronik ret ve soku veya hücre aIIo- veya
ksenogreftler ile iliskili immün bozukluklarini içerir. immünoproliferatif hastaliklarin
örnekleri psoriyazis; T-hücre Ienfoma; T hücre akut Ienfoblastik lösemi; testiküler
anjiyosentrik T-hücre Ienfoma; selim tip Ienfositik anjeit; ve otoimmün hastaliklar
örnegin lupus (örnegin, lupus eritematozus, lupus nefriti), Hashimoto tiroiditi, primer
miksödem, Graves hastaligi, pernisiyöz anemi, otoimmün atrofik gastrit, Addison
hastaligi, diyabet (örnegin insüline bagimli diyabet hastaligi, tip I diyabet hastaligi, tip II
diyabet hastaligi), good pasture sendromu, miyastenya gravis, pemfigüs, Crohn
hastaligi, sempatik oftalmi, otoimmün üveit, multipl skleroz, otoimmün hemolitik anemi,
idiyopatik trombositopeni, primer biliyer siroz, kronik aksiyon hepatit, ülseratif kolit,
Sjogren sendromu, romatizmal hastaliklar (örnegin, romatoid artrit), polimiyozit,
skleroderma ve karisik bag doku hastaligi içerir.
Bulusa ait çözünür CTLA4 molekülleri, in vivo inhibitör özellikleri sergiler. T-hücre/B7-
pozitif hücre etkilesimleri, örnegin T hücre/B hücre etkilesimlerinin T hücreleri ile B7-
pozitif hücreler arasindaki temas sonucu meydana geldigi kosullar altinda eklenen
CTLA4 moleküllerinin reaksiyona girmek üzere örnegin B hücreleri gibi B7-pozitif
hücrelere baglanmasi, immün yanitlarin regülasyonu ile sonuçlanarak T hücre/ B7-
pozitif hücre etkilesimlerine müdahale edebilir, diger bir ifadeyle inhibe edebilir. Ayrica
immün yanitlarinin asagi regüle edilmesine yönelik yöntemler açiklanir. Bulusa ait
çözünür CTLA4 molekülleri araciligiyla bir immün yanitinin asagi regülasyonu, devam
etmekte olan bir immün yanitinin inhibe edilmesi veya bloke edilmesi yoluyla olabilir
veya bir immün yanitinin indüksiyonunun önlenmesini içerebilir. Bulusa ait çözünür
CTLA4 molekülleri, T hücre yanitlarinin baskilanmasi ile veya T hücrelerinde spesifik
toleransin indüklenmesi veya her iki yol araciligiyla aktive T hücreleri, örnegin T Ienfosit
proliferasyonu ve sitokin salgilama fonksiyonlarini inhibe edebilir. Ayrica,
CTLA4/CD28/B7 yolagina müdahale eden, bu bulusa ait çözünür CTLA4 molekülleri T
hücre proliferasyonu ve/veya sitokin salgisini inhibe edebilir ve dolayisiyla düsük doku
yikimi ve T hücre yanitsizligini veya anerjisinin indüksiyonu ile sonuçlanir.
Bulusun tercih edilen bir düzenlemesi, B7-pozitif hücreler ile fonksiyonel CTLA4- ve
CD28- pozitif hücre etkilesimlerini regüle etmek üzere, romatizmal hastaliklar gibi
immün sistemi hastaliklarini tedavi etmek üzere ve/veya immün yanitlarini asagi regüle
etmek üzere çözünür CTLA4 mutant molekülü L104EA29YI kullanimini içerir. Bulusa
ait L104EA29Ylg, en az iki amino asit degisimi, +104 pozisyonunda lösin (L) ila
glutamik asit (E) ve +29 pozisyonunda alanin (A) ile tirosin (Y) degisimi içeren bir
çözünür CTLA4 mutant molekülüdür. L104EA29YIg molekülü ayrica burada belirtilen
ikiden daha fazla mutasyon içerebilir. Bir düzenleme çözünür CTLA4 moleküllerinin
etkili bir miktarinin bir özneye uygulanmasi ile romatoid artrit gibi romatizmal bir
hastaligin tedavi edilmesinde kullanima yönelik bilesimleri içerir. terapötik bilesimin
etkili bir miktarinin uygulanmasi, eklem sisligi, eklem hassasiyeti, inflamasyon, sabah
sertligi ve agrinin ve yapisal hasarin daha sonra fiziksel sakatligin azaltilmasi dahil,
hastalik ile iliskili semptomlarin en az birinden özneyi rahatlatir. Bulusa ait yöntemler
ayrica eritrosit sedimentasyon hizlari, C-reaktif protein, çözünür ICAM-1, çözünür E-
selektin ve/veya çözünür IL-2r serum seviyelerin azaltilmasi dahil olmak üzere
romatoid artrit ile iliskili en az bir semptomu azaltmak üzere kullanilabilir.
Mevcut bulus ile saglanan semptom rahatlatma miktari, klinik bir ortamda semptom
rahatlamasini ölçmek ve belgelendirmek üzere belirlenen kabul görmüs kriterlerden
herhangi biri kullanilarak ölçülebilir. Semptom rahatlamasinin ölçülmesine yönelik kabul
edilebilir kriterler, American College of Rheumatology (örnegin, ACR 20) tarafindan
belirlenen kriterlere dayanan Skorlar, dört semptom rahatlama ölçümü ("CDER
Guideline for the Clinical Evaluation of Anti-Inflammatory ve Antirheumatic Drugs-FDA
(Fries, J. F., et al., 1982 J. of
Rheumatology 9:789-793) içerir. Bu kriterlerin genel bir açiklamasi için bakiniz
Biological products for the Treatment of Rheumatoid Arthritis (RA)", February 1999.
Mevcut bulus ile tedavi edilen özneler insan, maymun, insansi maymun, köpek, kedi,
inek, at, tavsan, fare ve siçan dahil memeli özneleri içerir. Burada ayrica çözünür
CTLA4 molekülünün uygulanmasina yönelik lokal veya sistemik çesitli yöntemler
açiklanir. Yöntemler intravenöz, intramüsküler, intraperitoneal, oral, inhalasyon ve
subkütanöz yöntemler ve ayrica implante edilebilir pompa, bitisik infüzyon, gen terapisi,
lipozomlar, supozituvar, topikal temas, kesecikler, kapsüller ve enjeksiyon yöntemlerini
içerir. Bir tasiyici ile bilesik haline getirilen terapötik ajan yaygin sekilde depolama için
pH 7.5) sahip tamponlu bir solüsyon veya su ile yeniden yapilandirilir.
Teknikteki standart uygulamada oldugu gibi bulusa ait bilesimler, farmasötik olarak
kabul edilebilir herhangi bir formda özneye uygulanabilir.
Bulus pratigine göre kullanimlar, B7-pozitif hücreler ile CD28- ve/veya CTLA4-pozitif
hücre etkilesimlerini regüle etmek üzere bulusa ait çözünür CTLA4 moleküllerinin bir
özneye uygulanmasini içerir. B7-pozitif hücreleri, çözünür CTLA4/B7 komplekslerini
olusturmak amaciyla bulusa ait çözünür CTLA4 moleküllerinin etkili bir miktari veya
parçalari veya deriveleri ile temas ettirilir. Kompleksler, B7 familya molekülleri ile
endojenöz CTLA4 ile CD28 molekülleri arasindaki etkilesime müdahale eder.
Çözünür CTLA4 molekülleri, endojenöz B7 moleküllerinin öznede ilgili Iigandlara
baglanmasini bloke etmek üzere yeterli bir miktarda ve sürede (örnegin belirli bir süre
ve/veya defalarca) bir özneye uygulanabilir. Endojenöz B7/Iigand baglanmasinin
blokaji böylelikle CDZ8-ve/veya CTLA4-pozitif hücreleri ile BY-pozitif hücreleri
arasindaki etkilesimleri inhibe eder.
Bir terapötik ajanin dozaji, bunlarla sinirli olmamak üzere etkilenen doku türü, tedavi
edilen otoimmün hastaligin türü, hastaligin ciddiyeti, bir öznenin sagligi ve ajanlar ile
tedaviye yanit dahil birçok faktöre baglidir. Buna uygun olarak ajanlarin dozajlari, her
bir özne ve uygulama moduna bagli olarak degiskenlik gösterebilir. Çözünür CTLA4
mg/kg/gün arasindaki bir miktarda uygulanabilir.
Bulus, immün sistem hastaliklarini tedavi etmek üzere diger farmasötik ajanlar ile
birlikte bulusa ait bilesimlerin kullanimini içerir. Örnegin romatizmal hastaliklar,
kortikosteroidler ile birlikte bulusa ait moleküller ile tedavi edilebilir. Burada ayrica
metotreksat (R. Handschumacher, in: "Drugs Used for Immunosuppression" pages
1264-1276), TNFa bloke ediciler veya antagonistler (New England Journal of Medicine,
Medicine, vol. 130: 478-486) veya bir inflamatuvar sitokini hedef alan diger herhangi bir
biyolojik ajan, nonsteroidal antiinflamatuvar ilaçlar Cox-2 inhibitörleri, hidroksiklorokin,
sülfasalazopirin, altin tuzlar, etarnersept, infliksimab, rapamisin, mikofenolat mofetil,
azatiyoprin, takrolismus, basilimiksimab, sitoksan, interferon beta-la, interferon beta-Ib,
glatiramer asetat, mitoksantron hidroklorid, anakinra ve/veya diger biyolojik ürünleri
açiklanir.
Çözünür CTLA4 molekülleri (tercihen, L104EA29YIg), bir immün yaniti regüle etmek
Üzere asagidaki ajanlarin biri veya daha fazlasi ile kombinasyon halinde kullanilabilir:
çözünür gp39 (ayrica CD40 Iigand (CD4OL), CD,
TCR, çözünür VLA-4, çözünür VCAM-1, çözünür LECAM-1, çözünür ELAM-1, çözünür
antikorlar, CD40 (örnegin ATCC HB-9110) ile reaktif antikorlar, B7 (örnegin ATCC HB-
reaktif antikorlar, CD28 (örnegin ATCC HB-11944 veya Martin et al (J. Clin. Immun.
ATCC HB- ile reaktif antikorlar, LFA-2 ile reaktif antikorlar, IL-2
ile reaktif antikorlar, IFN-gamma ile reaktif antikorlar, CD2 ile reaktif antikorlar, CD48 ile
reaktif antikorlar, herhangi bir lCAM (örnegin, ICAM-1 (ATCC CRL-2252), ICAM-2 ve
1 ile reaktif antikorlar, CD56 ile reaktif antikorlar, CD3 ile reaktif antikorlar, CD29 ile
reaktif antikorlar, TCR ile reaktif antikorlar, VLA-4 ile reaktif antikorlar, VCAM-1 ile
reaktif antikorlar, LECAM-1 ile reaktif antikorlar, ELAM-1 ile reaktif antikorlar, CD44 ile
reaktif antikorlar. Belirli düzenlemelerde monoklonal antikorlar tercih edilir. Diger
düzenlemelerde antikor parçalari tercih edilir. Teknikte uzman kisilerin kolay anlayacagi
üzere kombinasyon, bulusa ait çözünür CTLA4 molekülleri ve diger bir immünosupresif
ajan, diger iki immünosupresif ajana sahip çözünür CTLA4 molekülleri. üç diger
immünosupresif ajana sahip çözünür CTLA4 molekülleri, vb. içerebilir. Optimal
kombinasyon ve dozajlar belirlenebilir ve teknikte iyi bilinen yöntemler kullanilarak
optimize edilebilir.
Bazi spesifik kombinasyonlar asagidakileri içerir: L104EA29YIg ve CD80 monoklonal
ve anti-gp39 mAb. Bir gp39 mAb'nin spesifik bir örnegin MR1 'dir. Diger kombinasyonlar
kolay bir sekilde kabul edilecektir ve teknikte uzman kisiler tarafindan anlasilacaktir.
Bulusa ait çözünür CTLA4 molekülleri, örnegin L104EA29YIg, örnegin allo- veya
ksenograft akut veya kronik ret veya inflamatuvar veya otoimmün bozukluklarin tedavisi
veya önlenmesine yönelik veya toleransi indüklemek Üzere immüno modüle edici
rejimlerde bir kortikosteroid veya diger anti-inflamatuvar ajanlari ile birlikte uygulanir.
Burada ayrica bir kalsinörin inhibitörü, örnegin siklosporin A veya FK506; bir
immünosupresif makrolid, örnegin rapamisin veya bir derivesi; örnegin 40-O-(2-
hidroksi)etiI-rapamisin, bir Ienfosit yuvalanma ajani, örnegin FTY720 veya bir analogu;
kortikosteroidler; siklofosfamid; azatiopren; metotreksat; leflunomid veya bir analogu;
mizoribin; mikofenolik asit; mikofenolat mofetil; 15-deoksispergualin veya bir analogu;
immünosupresif monoklonal antikorlar, örnegin, Iökosit reseptörlere monoklonal
diger immünomodülatör bilesikler, örnegin CTLA4/CD28-Ig veya diger adhezyon
molekül inhibitörleri, örnegin mAbs veyaLFA-1 antagonistleri, Selektin antagonistleri ve
VLA-4 antagonistleri dahil düsük moleküler agirlikli inhibitörler ile bir kombinasyon
açiklanir. Bilesik özellikle örnegin CD40,a antikorlar ve CD40-L'ye antikorlar gibi CD40
veya Iigandina müdahale eden bir bilesik ile kombinasyon halinde faydalidir.
Çözünür CTLA4 mutant molekülleri, diger immünosupresif/immünomodülatör veya anti-
inflamatuvar terapi ile birlikte uygulanir, örnegin yukarida belirtildigi üzere birlikte
uygulanan immüno baskilayici, immünomodülatör veya anti-inflamatuvar bilesigin
dozajlari, örnegin steroid veya bir siklosporin olsun veya olmasin, kullanilan es ilaç
türüne, kullanilan spesifik ilaca, tedavi edilen duruma ve benzerine bagli olarak
degiskenlik gösterecektir.
Önceki açiklamaya göre mevcut bulus yine ilave bir açida serbest formda veya
farmasötik olarak kabul edilebilir tuz formunda örnegin CTLA4Ig ve/veya L104EA29YIg
gibi bulusa ait çözünür CTLA4 moleküllerin terapötik olarak etkili bir miktarinin ve ikinci
bir ilaç maddesinin, örnegin birlikte veya sirasiyla, birlikte uygulanmasini içeren
yöntemleri saglar, söz konusu ikinci ilaç maddesi örnegin yukarida gösterildigi üzere bir
immüno baskilayici, immünomodülatör veya anti-inflamatuvardir. Ayrica bir immüno
baskilayici, immünomodülatör veya anti-inflamatuvar ilaç içeren en az bir farmasötik
bilesim ile birlikte veya sirayla kullanilarak, serbest formda veya farmasötik olarak
kabul edilebilir tuz formunda bir çözünür CTLA4 molekülü içeren, örnegin yukarida
tanimlanan herhangi bir yöntemde kullanima yönelik terapötik bilesimler, örnegin bir kit
saglanir. Kit, uygulamaya yönelik talimatlari içerebilir.
Bulus ayrica bulusa ait çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin üretilmesine yönelik
yöntemleri saglar. Çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin ifadesi prokaryotik hücrelerde
veya ökaryotik hücrelerde olabilir.
Prokaryotlar çogunlukla çesitli bakteri suslari ile temsil edilir. Bakteriler, bir gram pozitif
veya bir gram negatif olabilir. Tipik olarak g coli gibi gram negatif bakteriler tercih edilir.
Diger mikrobiyal suslar da kullanilabilir. Çözünür CTLA4 mutant molekülleri kodlayan
diziler, E. coli gibi prokaryotik hücrelerdeki yabanci dizilerin ifade edilmesine yönelik
tasarlanan bir vektöre yerlestirilebilir. Bu vektörler, beta-Iaktamaz (penicillinase) ve
promotör sistemi (Goeddel, et al., (1980) Nucleic Acids Res. &4057) ve Iambda deriveli
PL promotör ve N-gen ribozom baglanma alani (Shimatake, et al., (1981) Nature
2922128) olarak bu tür yaygin sekilde kullanilan promotörler dahil olmak üzere ribozom
baglanma alani dizileri ile birlikte, istege bagli olarak bir operatör ile transkripsiyon
baslatilmasina yönelik burada promotörleri içerecek sekilde tanimlanan yaygin sekilde
kullanilan prokaryotik kontrol dizileri içerebilir.
Bu tür ifade vektörleri ayrica antibiyotiklere direnç sunan bir beta-laktamaz veya
neomisin fosfotransferaz geni gibi replikasyon ve seçilebilir markörler kökenlerini
içerecektir, böylece vektörler bakteride çogalabilir ve plazmidleri tasiyan hücreler,
ampisilin veya kanamisin gibi antibiyotikler varliginda büyütüldügünde seçilebilir.
Sambrook et al. (eds.), "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 2nd Edition, Cold
Spring Harbor Press, (1989)) ve elektroporasyon dahil olmak üzere çesitli standart
yöntemler ile prokaryotik hücrelere yerlestirilebilir.
Bulus uygulamasina göre ökaryotik hücreler ayrica uygun konakçi hücrelerdir.
Ökaryotik hücrelerin örnekleri primer veya immortalize herhangi bir hayvan hücresi,
maya (örnegin, Saccharomvces cerevisiae,Schizosaccharomvces pombe ve Pichia
gastoris) ve bitki hücreleri içerir. Miyelom, COS ve CHO hücreleri, konakçilar olarak
kullanilabilen hayvan hücrelerinin örnekleridir. Belirli CHO hücreleri DG44 (Chasin, et
(GEIMG, Genova, IT), CHO klonu B (GEIMG, Genova, IT), ECACC 93061607 olarak
gösterilen CHO-K1/SF (CAMR, Salisbury, Wiltshire, BK) ve ECACC 92052129 olarak
gösterilen RR-CHOK1 (CAMR, Salisbury, Wiltshire, BK) içerir. Örnek teskil eden bitki
hücreleri tütün (bütün bitkiler, hücre kültürü veya kalus), misir, soya fasulyesi ve pirinç
hücrelerini içerir. Misir, soya fasulyesi ve pirinç tohumlari da kabul edilebilir.
CTLA4 mutant moleküllerini kodlayan nükleik asit dizileri, ökaryotik bir konakta yabanci
dizilerin ifade edilmesi için tasarlanmis bir vektör içine sokulabilir. Vektörün düzenleyici
unsurlari, ökaryotik konakçiya göre degisebilir.
Ifade vektörlerinde kullanima yönelik yaygin sekilde kullanilan ökaryotik kontrol dizileri,
örnegin CMV promotörü (CDM8 vektörü) ve kuslara ait sarkoma virüsü (ASV) (nLN
vektörü) gibi memeli hücreler ile uyumlu promotörleri ve kontrol dizilerini içerir. Diger
yaygin olarak kullanilan promotörler arasinda, Simian Virüs 40'dan (SV40) (Fiers, et
sigir papiloma virüsünden türetilenler gibi diger viral promotörler bulunmaktadir. HMTII
kullanilabilir.
Ökaryotlarda CTLA4 mutant moleküllerini ifade eden vektörler, zenginlestirici bölgeler
diye adlandirilan dizileri de tasiyabilir. Bunlar gen ifadesini optimize etmede önemlidir
ve promotör bölgesinin yukari akis yönünde veya asagi akis yönünde bulunur.
Ökaryotik konakçi hücreler için ifade vektörlerine örnek olarak, bunlarla sinirli olmamak
üzere memeli konukçu hücreler için vektörler BPV-1, pHyg, pRSV, pSV2, pTK2
(Maniatis); pIRES (Clontech); pRc/CMVZ, pRc/RSV, pSFV1 (Life Technologies)
pVPakc vektörleri, pCMV vektörleri, pSGS vektörleri (Stratagene)), retroviral vektörler
(örnegin pFB vektörleri (Stratagene)), pCDNA-3 (Invitrogen) veya bunlarin modifiye
edilmis biçimleri, adenoviral vektörler; Adeno-iliskili virüs vektörleri, bakülovirüs
vektörleri, maya vektörlerini (örnegin pESC vektörleri (Stratagene)) içerir.
CTLA4 mutant moleküllerini kodlayan nükleik asit dizileri, ökaryotik konakçi hücrenin
genomuna entegre olabilir ve ana genom çogaldiginda çogalabilir. Alternatif olarak,
CTLA4 mutant moleküllerini tasiyan vektör, ekstrakromozomal replikasyona izin veren
replikasyonun kökenlerini içerebilir.
Endojen maya plazmidinden replikasyonun kaynagi olan Saccharomyces
cerevisiae'deki nükleik asit dizilerini ifade etmek için 2p daire kullanilabilir. (Broach,
maya genom dizileri kullanilabilir (bakiniz, örnegin, Stinchcomb et al., (1979) Nature
1012300). Maya vektörleri için transkripsiyonel kontrol dizileri, glikolitik enzimlerin
sentezi için promotörler (Hess et al. (1968) J. Adv. Enzyme Reg., 7: 149; Holland et al.
2073) ve diger glikolitik enzimler için olan vektörleri içerir.
Diger promotörler indüklenebilirler, çünkü çevresel uyaranlar veya hücrelerin büyüme
ortami ile düzenlenebilirler. Bu indüklenebilir promotörler, isi soku proteinleri, alkol
dehidrojenaz 2, izositokrom C, asit fosfataz, azot katabolizmasi ile iliskili enzimler ve
maltoz ve galaktoz kullanimindan sorumlu enzimlere ait genleri içerir.
Düzenleyici diziler, kodlayici dizilerin 3 'ucuna da yerlestirilebilir. Bu dizileri haberci
RNA'yi stabilize etmek için etki gösterebilir. Bu sonlandiricilar, birkaç maya türevi ve
memeli geninde kodlama dizilerini izleyen 3 ' çevrilmemis bölgede bulunur.
Bitkiler ve bitki hücreleri için örnek teskil eden vektörler arasinda, bunlarla sinirli
olmaksizin, Agrobacterium Ti plazmidleri, karnabahar mozaik virüsü (CaMV) ve
domates altin mozaik virüsü (TGMV) bulunur.
Memeli hücre konukçusu sistemi dönüsümlerinin genel yönleri, Axel (16 Agustos
hücreleri, kalsiyum fosfat varliginda transfeksiyon, mikroenjeksiyon, elektroporasyon
veya viral vektörler ile transdüksiyon yoluyla dahil ancak bunlarla sinirli olmayan
yöntemlerle transforme edilebilir.
Yabanci DNA dizilerinin bitki ve maya genomlarina dahil edilmesi için yöntemler
arasinda (1) DNA'nin tek hücrelere veya protoplastlara mikroenjeksiyonu, DNA'nin
varliginda cam boncuklarla hücrelerin vortekslenmesi veya DNA kapli tungsten veya
altin küreciklerin hücrelere veya protoplastlara çekilmesi gibi mekanik yöntemler; (2)
polietilen glikol muamelesi veya yüksek voltaj elektriksel darbelerine tabi tutulmasi
yoluyla hücre membranlarinin makromoleküllere geçirgen hale getirilmesi suretiyle
DNA'nin eklenmesi (elektroporasyon): veya (3) hücre membranlarina yapisan
Bulusa ait CTLA4 mutant molekülleri ifade edilir edilmez bunlar, hücre parçalanmasi
(örnegin sonikasyon, lizozim ve/veya deterjanlar) ve büyük ölçüde saf ürün saglamak
üzere örnegin afinite kromatografisi veya iyon degisim kromatografisi gibi standart
protein saflastirma yollari kullanilarak gerçeklestirilen protein kazanimi gibi teknikte iyi
bilinen yöntemler ile hasat edilebilir (R. Scopes in: "Protein Purification. Principles ve
Practice", Third Edition, Springer-Verlag (1994); Sambrook et al. (eds.), "Molecular
Cloning: A Laboratory Manual", 2nd Edition, Cold Spring Harbor Press, (1989)). CTLA4
mutant moleküllerinin ifadesi, teknikte bilinen yöntemler ile tespit edilebilir. Örnegin
mutant molekülleri, CTLA4'e baglanan antikorlarin kullanildigi immünoblotlama ve
Coomassie boyayan SDS-PAGE jelleri ile tespit edilebilir.
Asagidaki örnekler, mevcut bulusu göstermek üzere ve bunun yapilmasi ve
kullanilmasi konusunda uzman bir kisiye yardim etmek üzere sunulur.
Asagidakiler, bulusa ait CTLA4 molekülleri kodlayan nükleotid dizilerini üretmek üzere
kullanilan yöntemlerin bir açiklamasini saglar.
Ilk olarak bir CTLA4Ig kodlayan plazmid yapilmistir ve U.S. Patent No.
etmek üzere gösterilir. Daha sonra tek alanli mutant molekülleri (örnegin, L104Elg),
CTLA4Ig kodlama dizisinden üretilmistir, çesitli BT moleküllerinin baglanma
kinetiklerine yönelik ifade edilmis ve test edilmistir. L104Elg nükleotid dizisi (Sekil 18'de
gösterilen dizide bulunan sekilde), proteinler olarak ifade edilen ve baglanma
kinetiklerine yönelik test edilen iki alanli CTLA4 mutant dizilerini (Sekiller 19-22'de
gösterilen dizilerde gösterildigi gibi) üretmek üzere bir kalip olarak kullanilmistir. Iki
ve L104EA29ng. Üç alanli mutantlar da üretilmistir.
CTLA4Ig Yapisi
CTLA4'ün hücre disi domenini ve bir IgCgamma1 domenini içeren CTLA4Ig'yi
kodlayan genetik bir yapi, içerikleri burada referans yoluyla eklenen U.S. Patent
hücre disi domeni, yayinlanan diziye karsilik gelen sentetik oligonükleotidler
(1988)).
CTLA4 için bir sinyal peptidinin CTLA4 geninde tanimlanmasi nedeniyle CTLA4'ün ön
görülen dizisinin N-terminali, örtüsen oligonükleotidlerin kullanildigi iki adimda
kaynastirilir. Birinci adim için oligonükleotid,
TCAGTCTGGTCCTTGCACTCCTGTTTCCAAGCATGGCGAGCATGGCAATGCA
CGTGGCCCAGCC (CTLA4'ün N terminal 7 amino asidine kaynasik onkostatin M
sinyal peptidinden C terminal 15 amino asidi kodlamistir), ileri primer olarak
kullanilmistir ve TTTGGGCTCCTGATCAGAATCTGGGCACGGTTG (CTLA4 reseptörü
kodlayan ve bir Bcl I restriksiyon enzim alanini kodlayan amino asit dizisinin amino asit
kalintisi 119-125'i kodlayan) geri primer olarak kullanilmistir. Bu adima yönelik kalip,
H38 hücrelerinden (Drs. Salahudin ve Gallo, NCI, Bethesda, MD araciligiyla saglanan
bir HTLV II ile enfekte edilmis Y-hücre Iösemik hücre hatti) 1 mikro 9 toplam RNA'dan
sentezlenen cDNA'dir. Birinci adimdan gelen PCR ürününün bir kismi, onkostatin M
sinyal peptidin N terminal kismini kodlayan ve bir Hind III restriksiyon endonükleaz
TAGCCACTGAAGCTTCACCAATGGGTGTACTGCTCACACAGAGGACGCTGC
TCAGTCTGGTCCTTGCACTC içeren, örtüsen bir ileri primer ve ayni ters primer
kullanilarak yeniden çogaltilmistir. PCR reaksiyonunun ürünü, Hind III ve Bcl I ile
parçalanmistir ve Hind lll/Xba I ile klevaj edilen ifade vektörü, CDM8 veya Hind III/Xba I
ile klevaj edilen ifade vektörü piLN (ayrica ITLN olarak bilinir) içine IgC(gamma)1`in
mentese, CH2 ve CH3 bölgelerine karsilik gelen amino asit dizilerini kodlayan bir Bcl
1/Xba I ile klevaj edilen cDNA parçasi ile birlikte baglanmistir.
CTLA4Ig'ye karsilik gelen amino asit dizisini kodlayan DNA, 31 Mayis 1991 tarihinde
Budapeste Anlasmasi altinda ATCC ile tevdi edilmistir ve ATCC erisim numarasi
68629'a uyumlu hale getirilmistir.
Bir mutajenez ve tarama stratejisi, CD8O ve/veya 0086 moleküllerinden daha yavas
ayrisma oranlarina ("off' oranlari), diger bir ifadeyle gelismis baglanma kabiliyetine
sahip mutant CTLA4Ig moleküllerini tanimlama üzere gelistirilmistir. Bu düzenlemede
mutasyonlar, CTLA4'ün hücre disi domeninin -1, CDR-2 (ayrica C' ipligi olarak bilinir)
ve/veya CDR-3 bölgelerindeki kalintilar içinde ve/veya etrafinda gerçeklestirilmistir
2058 tarafindan açiklanan sekilde. Bir CDR benzeri bölge, her bir CDR bölgesini
kapsar ve CDR motifinin yukari yönlü ve/veya asagi yönlü birkaç amino asidine kadar
uzanir). Bu alanlar, kimerik CD28/CTLA4 füzyon proteinleri (Peach ve digerleri, J. Exp.
maruz kalacagini ve CD28 ile CTLA4 arasindaki belirli pozisyonlarda amino asit kalinti
kimligi veya homolojisinin eksikligini tahmin eden bir modeli temel alarak seçildi. Ayni
zamanda, tanimlanmis kalintilara uzaysal olarak yakin (5-20 Angstrom Birimler) olan
herhangi bir kalinti, mevcut açiklamanin parçasi olarak düsünülür.
Bir B7 molekülü (örnegin CD80, CD86) için degistirilmis afiniteleri olan çözünür CTLA4
mutant moleküllerini sentezlemek ve taramak için iki adimli bir strateji benimsenmistir.
Deneylerin önce CTLA4'ün hücre disi bir kiSminin spesifik bir kodonunda bir mutasyon
kütüphanesi üretmesi ve bundan sonra B7'ye degisen reaktiviteye sahip mutantlarin
tanimlanmasi için BIAcore analizi ile taranmasini gerektirir. Biacore analiz sistemi
(Pharmacia, Piscataway, NJ), CD80Ig'nin veya CD86Ig'nin detektöre yerlestirilmis
dekstran kapli bir sensör çipine kovalent olarak baglanmasini içeren bir yüzey plazmon
rezonans detektör sistemi kullanmaktadir. Test molekülü daha sonra, sensör çipi içeren
bölmeye enjekte edilebilir ve baglanan tamamlayici protein miktari, sensör çipinin
dekstranla kaplanmis tarafiyla fiziksel olarak iliskili olan molekül kütlesi degisimine
dayanarak degerlendirilebilir; molekül kütlesi içindeki degisim detektör sistemi ile
ölçülebilir.
Spesifik olarak tek alanli mutant nükleotid dizileri, tek alanli mutant nükleotid dizileri, bir
kodlayan mutasyona ugramamis (örnegin dogal
sus) DNA kullanilarak üretilmistir. Mutajenik oligonükleotid PCR primerleri, kodonun 1
ve 2 pozisyonlarinda herhangi bir baz ancak 3 pozisyonda sadece guanin veya timidine
(XXG/T veya ayrica NNG/T olarak not edilir) olanak taninarak spesifik bir kodonun
rastgele mutajenezi için tasarlanmistir. Bu sekilde bir amino asidi kodlayan spesifik bir
kodon, 20 amino asidin her birini kodlamak üzere rastgele sekilde mutasyona
ugratilabilir. Bu baglamda XXG/T mutajenezi, 20 amino asidin her birini kodlayan 32
potansiyel kodon saglar. CTLA4Ig'nin (MYPPPY) CDR3 benzeri ilmegine çok yakin
mutasyonlari kodlayan PCR ürünleri, SacI/Xbal ile parçalanmistir ve benzer sekilde
kesilen CTLA4Ig (Sekil 24'te gösterildigi gibi) TrLN ifade vektöründe alt klonlanmistir.
Bu yöntem, tek alanli CTLA4 mutant molekülü L104Elg (Sekil 18'de gösterildigi gibi)
üretmek üzere kullanilmistir.
CTLA4Ig'nin CDR1 benzeri ilmegine yakin mutajenez için sessiz bir Nhel restriksiyon
alani öncelikle PCR primer yönelimli mutajenez araciligiyla bu ilmege 5' eklenmistir.
PCR ürünleri, Nhel/Xbal ile parçalanmistir ve benzer sekilde kesilmis CTLA4Ig veya
L104Elgifade vektörlerine alt klonlanmistir. Bu yöntem, iki alanli CTLA4 mutant
molekülü L104EA29Ylg'yi üretmek üzere kullanilmistir (Sekil 19'da gösterildigi gibi).
Özellikle tek alanli CTLA4 mutant molekülü, L104Elg'yi kodlayan nükleik asit molekülü,
iki alanli CTLA4 mutant molekülü, L104EA29YIg'yi üretmek üzere bir kalip olarak
kullanilmistir.
L104EA29YIg gibi CTLA4 mutant moleküllerini kodlayan iki alanli mutant nükleotid
dizileri (Amerikan Tipi Kültür Koleksiyon (ATCC), 10801 University Blvd., Manassas,
PTA-2104”e uyumlu hale getirilmistir), bir kalip olarak L104Elg kullanilarak yukarida
açiklanan mutajenez prosedürünün tekrar edilmesi ile üretilmistir. Bu yöntem, bu
CTLA4 molekülleri L104EA29YIg (Sekil 19'da gösterilen dizide gösterildigi gibi),
gösterilen dizide gösterildigi gibi) ve L104EA29Wl92yi (Sekil 22'de gösterilen dizide
gösterildigi gibi) kodlayanlar gibi çesitli iki alanli mutant nükleotid dizilerini üretmek
kodlayanlar gibi üç alanli mutantlar da üretilmistir.
Çözünür CTLA4 molekülleri, nükleotid dizilerinden ifade edilmistir ve asagida Örnek
3'te açiklanan faz II klinik çalismalarinda kullanilmistir.
Teknikte uzman kisilerin anlayacagi sekilde, özellikle PCR amplifikasyonu ile olmak
üzere nükleik sit dizilerinin replikasyonu baz degisimlerini kolay bir sekilde DNA
ipliklerine yerlestirir. Ancak bununla birlikte nükleotid degisimleri, bazi kodonlarin ayni
amino asidi gereksiz yere kodlamasi nedeniyle amino asit degisimlerine zorunlu olarak
çevrilmez. Burada açik bir sekilde açiklanmazken sessiz (diger bir ifadeyle transle
edilmis amino asitte herhangi bir degisime neden olmayan) veya baska sekilde, orijinal
veya dogal diziden herhangi bir nükleotid degisimleri bulus kapsami içerisindedir.
Asagidaki örnek, Örnek 1'de açiklanan yapilardan ifade edilen, B7 molekülleri için daha
yüksek bir baglanma aviditesi sergileyen, mutasyona ugramamis CTLA4Ig
moleküllerine kiyasla, tek ve çift alanli mutant CTLA polipeptidlerini tanimlamak için
kullanilan tarama yöntemlerinin bir tarifini saglar.
Mevcut in vitro ve in vivo çalismalar, CTLA4Ig'nin tek basina, antijen spesifik aktive
edilmis T hücrelerinin baslatilmasini tamamen engelleyemedigini göstermektedir.
CTLA4Ig ve CD80 veya CD86 için spesifik monoklonal antikor ile T hücre çogalmasinin
inhibisyonunu ölçen in vitro çalismalar, anti-CD80 monoklonal antikorun CTLA4Ig
inhibisyonunu arttirmadigini gösterir. Bununla birlikte, anti-CD86 monoklonal antikor
inhibisyonu artirdi, bu CTLA4Ig'nin CD86 etkilesimlerini bloke etmekte etkili olmadigini
gösterdi. Bu veriler CD86 aracili yanitlara kiyasla yaklasik 100 kat daha düsük
CTLA4Ig konsantrasyonu gerektiren CD80 aracili hücresel yanitlarin inhibisyonunu
desteklemektedir. Bu bulgulara dayanarak, dogal sus CTLA4'e kiyasla CD86 için daha
yüksek bir aviditeye sahip olan çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin, CTLA4Ig'den
daha antijen spesifik aktive hücrelerin baslatilmasini daha iyi engelleyebilecegi
düsünülmüstür.
Bu amaçla, yukaridaki Örnek 1'de açiklanan çözünür CTLA4 mutant molekülleri, CDöO
ve CD86 için baglanma aviditesini iyilestiren CTLA4'ün hücre disi alanindaki birkaç
mutasyonu tanimlamak için yeni bir tarama prosedürü kullanilarak tarandi. Bu tarama
stratejisi, "kapali" oran tespiti konsantrasyona bagimli olmadigindan, protein
saflastirmasi veya niceleme ihtiyaci olmaksizin görünüste daha yavas "kapali" oranlari
olan mutantlari dogrudan belirlemek için etkili bir yöntem saglamistir (O'Shannessy et
COS hücreleri bireysel miniprep saflastirilmis plazmid DNA ile transfekte edildi ve
birkaç gün boyunca çogaltildi. Çözünür CD80|g veya CD86|g ile kaplanmis BlAcore
biyo-sensör çiplerine (Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Isveç) üç günlük sartlandirilmis
kültür ortami uygulandi. Mutant proteinlerin spesifik baglanmasi ve ayrilmasi, yüzey
plazmon rezonansi ile ölçülmüstür (O'Shannessy, D. J., et al. (1993) Anal. Biochem.
üzerinde yürütülmüstür. Ligandlar, standart N-etil-N '- (dimetilaminopropil) karbodiimid
N-hidroksisüksinimid baglantisi kullanilarak NCMSarastirma dereceli sensör çiplerine
Tarama Yöntemi
24 gözlü doku kültürü plakalarinda yetistirilen COS hücreleri, geçici olarak mutant
CTLA4Ig ile transfekte edildi. Salgilanan çözünür mutant CTLA4Ig içeren kültür ortami
3 gün sonra toplandi.
Uygun hale getirilen COS hücre kültür ortaminin, CD86Ig veya CD80lg ile
türevlendirilen BIAcore biyosensör cipsi üzerinden akmasina izin verildi (Greene et al.,
tanimlanan mutant moleküller, dogal sus CTLA4Ig için gözlemlenenden daha yavastir.
Seçilen ortam numunelerine karsilik gelen DNA'Iar dizilenmistir ve daha fazla DNA,
kültür ortaminin protein A saflastirmasinin ardindan CTLA4Ig mutant proteininin
hazirlandigi daha büyük ölçekli COS hücresi geçici transfeksiyonu gerçeklestirmek
üzere hazirlanmistir.
BIAcore analiz kosullari ve denge baglama verileri analizi, buraya referans yoluyla
BIAcore Veri Analizleri
Senosorgram taban çizgileri, analizden önce sifir tepki birimine (RU) normalize
edilmistir. Numuneler, çözeltiler arasindaki kütle kirma indisi farklarina bagli olarak arka
plan RU degerlerini belirlemek için sahte türevlendirilmis akis hücreleri üzerinde
yürütülmüstür. Denge ayrilma sabitleri (Kd), Req versus C'Ierin arsa çizelgelerinden
hesaplanmistir; burada Req, bir sahte türevlendirilmis çip üzerindeki tepkiden çikartilan
sabit durum tepkisidir ve C, analitin molar konsantrasyonudur. Baglanma egrileri, ticari
dogrusal olmayan egri uydurma yazilimi (Prism, GraphPAD Software) kullanilarak
analiz edilmistir.
Deneysel veriler, ilk olarak tek bir reseptöre baglanan tek bir Iigand (1 alanli model,
yani basit bir langmuir sistemi, A + B<-›AB) modeline uymustur ve denge iliskilendirme
sabitleri (Kd=[A]~[B]\[AB]) R=Rmaks'C/(Kd+C) denkleminden hesaplanmistir. Daha sonra
veriler, Iigand baglanmasinin en basit iki alan modeline (yani, denklem
R=Rmaks1°C\(Kd1+C))+Rmak52°C\(Kd2+C) ile tarif edildigi gibi etkilesmeyen bagimsiz
baglanma yerlerine sahip olan bir reseptöre uymustur.
Bu iki modelin uygunlugu, deneysel verilerle karsilastirildiginda görsel olarak ve
karelerin toplamlarinin bir F testiyle istatistiksel olarak analiz edildi. Iki alanli modelin
anlamli olarak daha iyi sigmadigi sürece (p <0.1), daha basit tek alanli model en uygun
olarak seçilmistir.
Birlesme ve ayrisma analizleri BIA degerlendirme 2.1 Yazilimi (Pharmacia) kullanilarak
gerçeklestirildi. Birlesme hiz sabitleri, hem homojen tek alanli etkilesimler hem de
paralel iki alanli etkilesimler varsayarak iki yoldan hesaplanmistir. Tek alanli
etkilesimler için, kon degerleri, Ri=Req(1-exp'k$(”0) denklemine göre hesaplanmistir,
burada R1 belirli bir zamanda verilen yanit, t; Req kararli durum tepkisi, to enjeksiyonun
baslangicindaki zaman; ve ks=dedt=kon'Ckoff, burada C monomerik baglanma
mevkileri açisindan hesaplanan analit konsantrasyonudur. Iki alanli etkilesimler için, kon
degerleri Rt:Req1(1_exp-k81(I-t0)+Peq2(1'ekaSZÜ-to) denklemine göre hesaplanmistir. Her
model için kon degerleri ks”nin C'ye kiyasla hesaplanan egiminden (yaklasik % 70
maksimum iliski) belirlenmistir.
Ayrisma verileri, bir alana (AB = A + B) veya iki alana (AiBj = Ai + Bj) ait modellere göre
analiz edildi ve hiz sabitleri (kon) en iyi uyan egrilerden hesaplandi. Baglanma bölgesi
modeli, kalintilarin makinenin arka planindan ( daha büyük
oldugu durumlar haricinde kullanildi; bu durumda iki baglanma bölgesi modeli
kullanildi. Reseptör kullanim süresinin yari zamani t1/2:0.693/k0ff iliskisi kullanilarak
hesaplandi.
Akis Sitometrisi:
Murin mAb L ve IT2.2'den
(anti-B7-O [CD86 olarak da bilinir]) Pharmingen'den (San Diego, Kaliforniya) satin
alindi. Immüno boyama için, CD80-pozitif ve/veya CD86-pozitif CHO hücreleri, kültür
kaplarindan 10mM EDTA ihtiva eden fosfat-tamponlu salin (PBS) içerisinde inkübasyon
yoluyla çikarildi. CHO hücreleri (1-10 x 105) önce mAb'lar veya %10 fötal bovin serumu
(FBS) içeren DMEM içinde Immünoglobülin füzyon proteinleri ile inkübe edildi, daha
sonra floresin izotiosiyanatla konjuge keçi anti-fare veya anti-insan immünoglobulin
ikinci adim reaktifleri ile yikanip inkübe edildi (Tago, Burlingame, Kaliforniya). Hücrelere
son bir yikama yapildi ve bir FACScan (Becton Dickinson) üzerinde analiz edildi.
SDS-PAGE, Tris/glisin % 4-20 akrilamid jelleri üzerinde (Novex, San Diego, CA)
gerçeklestirildi. Analitik jeller Coomassie Blue ile Iekelenmis ve islak jel görüntüleri
NAN3 içeren fosfat tamponlu salin içinde 1.0 mI/dk bir akis hizi ile dengelenen TSK-
GEL G kullanilarak
boyut dislama kromatografisi ile analiz edildi.
Tek zincirli CTLA4XC1208, daha önce tarif edildigi gibi hazirlanmistir (Linsley et al.,
ifade plazmidi bir sablon olarak kullanildi, ileri primer,
GAGGTGATAAAGCTTCACCAATGGGTGTACTGCTCACACAG vektördeki dizilislerle
eslesecek sekilde seçildi; ve ters primer,
GTGGTGTATTGGTCTAGATCAATCAGAATCTGGGCACGGTTC, CTLA4'ün hücre
disi alaninda son yedi amino aside (yani, amino asitler 118-124) karsilik geldi ve bir
kisitlama enzimi bölgesi ve bir durdurma kodonu (TGA) içeriyordu. Ters primer, 01208
(120. pozisyonda sisteinden serin) mutasyonunu belirtti. Özellikle, yukarida gösterilen
ters primerin GCA (nükleotidleri 34-36) nükleotid dizisi, asagidaki nükleotit dizilerinden
biri ile degistirilir: AGA, GGA, TGA, CGA, ACT veya GCT. Teknikte tecrübeli kisilerce
anlasilacagi üzere, GCA nükleotid dizisi, sistein için TGC kodonunun ters çevrilmis
tamamlayici bir dizisidir. Benzer sekilde, AGA, GGA, TGA, CGA, ACT veya GCT
nükleotid dizileri serin kodonlarinin ters çevrilmis tamamlayici dizileridir. Polimeraz
zincir reaksiyon ürünleri HindIII/Xbal ile sindirildi ve yönlendirici olarak îLN ifade
vektörüne (Bristol-Myers Squibb Company, Princeton, NJ) alt klonlandi.
L104EA29YXC1208 ayni sekilde hazirlandi. Her bir yapi, DNA dizilimi ile
dogrulanmistir.
Yüksek Avidite Mutantlarin Tanimlanmasi ve Biyokimyasal Karakterizasyonu
Mutajenez için yirmi dört amino asit seçildi ve ortaya çikan -2300 mutant proteinler
CD86Ig baglanmasi için yüzey plazmon rezonansi (SPR; yukarida tarif edildigi gibi) ile
denendi. Her bölgede mutajenezin baskin etkileri asagidaki Tablo Il'de özetlenmistir.
CDR-1 bölgesindeki (825-R33) bazi amino asitlerin rasgele mutajenezi. görünüste
mutajenezi, görünüste Iigand baglanmasinin azalmasina neden olmustur. Kalintilarin,
yavas "kapali" oranlari olan proteinler ile sonuçlandi. Bu sonuçlar, CDR-1 (S25-R33)
bölgesindeki kalintilarin ve M97-Y102 içindeki ya da yakinindaki kalintilarin Iigand
baglanmasini etkiledigi önceki bulgulari dogrulamaktadir (Peach et al. (1994) J. Exp.
Bununla birlikte, bu örneklerde, yavas "off“ orani, yavas bir "on" hizla uzlasildi; bu,
CD86Ig için genel bir aviditeye sahip mutant proteinlere neden oldu; bu, görünüste
dogal sus CTLA4Ig ile görülenle benzerdi. Ek olarak, K93'ün mutajenezi gözlemlenen
kinetik degisimlerden sorumlu olabilecek önemli agregasyona neden olmustur.
L104'ün rastgele mutajenezi, bunu takiben COS hücre transfeksiyonu ve kültür ortami
örneklerinin SPR'si ile sabitlenmis CD86Ig üzerinde tarama, dogal sus CTLA4Ig'den
yaklasik 2 kat daha yavas "kapatma" oranlari olan mutant proteinler içeren alti ortam
numunesi vermistir. Bu mutantlarin mukabil cDNA'si dizilendiginde, her birinin, bir
glutamik asit mutasyonuna (L104E) karsi bir Iösin kodladigi bulunmustur. Anlasilan,
etkilememistir.
Mutajenez daha sonra Tablo ll'de listelenen her bir yerde tekrar edildi, bu sefer
yukarida tarif edildigi gibi dogal sus CTLA4Ig yerine PCR sablonu olarak L104E
kullanildi. SPR analizi, yine sabitlenmis CD86Ig kullanilarak, alanin 29'un dogal sus
CTLA4Ig'den yaklasik 4 kat daha yavas "off" oranlara sahip olan proteinlerle
mutajenezinden alti kültür ortami numunesi tespit etti. En yavas olani tirosin ikameleri
de treonin (L104EA29T) idi. Görünüse göre, alanin 29'un dogal susta CTLA4lg'de tek
basina rasgele mutasyon geçirdigi zaman, yavas "kapali" oran mutantlari
saptanmamistir.
Saflastirilmis L104E ve L104EA29YIg'nin bagil moleküler kütlesi ve topaklanma
durumu SDS-PAGE ve boyut dislama kromatografisi ile degerlendirildi. Görünüste,
azaltma (~ 50 kDa; + ßME; arti 2-merkaptoetanol) altinda CTLA4Ig (~ 1 ug; serit 1),
ayni elektroforetik hareketlilige sahip oldugu anlasildi. Ebat dislama kromatografisi
oldugunu ortaya koymustur (Sekil 258). Ana tepeler, protein dimerini temsil ederken,
Sekil 258'de daha hizli çikan tepe daha yüksek molekül agirlikli agregalari temsil eder.
CTLA4Ig'nin yaklasik %5.0'i daha yüksek moleküler agirlikli agrega olarak mevcuttu,
ancak L104EA29YIg veya L104Elg'lerin bir araya toplanmasi için bir kanit bulunmadi.
mutajenez ile indüklenen agregasyona atfedilemedi.
Denqe ve Kinetik Baglanma Analizi
Denge ve kinetik baglanma analizi, yüzey plazmon rezonansi (SPR) kullanilarak
protein A saflastirilmis CTLA4Ig, L104Elg ve L104EA29YIg üzerinde gerçeklestirildi.
Sonuçlar asagidaki Tablo 1'de gösterilmektedir. Gözlemlenen denge ayrilma sabitleri
(Kd; Tablo I), bir dizi konsantrasyonda (5. üretilen bag egrilerinden
düsük Kd, L104EA29YIg'nin CD86Ig'ye daha yüksek baglanma aviditesini gösterir.
düsük Kd, L104EA29YIg'nin CD80Ig'ye daha yüksek baglanma aviditesini gösterir.
karsilastirmali "on" orantilarin CD86Ig için "on“ oranlarda oldugu gibi benzer oldugunu
ortaya koymustur (Tablo l). Bununla birlikte, bu moleküller için "kapali'i oranlar esdeger
degildi (Tablo I). CTLA4Ig ile karsilastirildiginda, L104EA29Ylg, CD80Ig'den yaklasik 2
kat daha yavas "off" orani ve CD86Ig'den yaklasik 4 kat daha yavas "off" orani vardi.
L104E, L104EA29Ylg ve CTLA4Ig arasinda ara geçis oranlarina sahipti. Bu
mutasyonlarin uygulanmasinin "on" oranlari üzerinde önemli bir etkisi olmadigindan,
L104EA29YIg ile gözlemlenen CD80Ig ve CD86lg için aviditesindeki artis muhtemelen
öncelikle "off" oranlarinda bir düsüse bagliydi.
CD86Ig ve CD80Ig için L104EA29YIg'nin aviditesindeki artisin, dimer olarak iliskili her
bir monomerin yolunu etkileyen mutasyonlardan mi yoksa her bir monomer içine giren
aviditeyi arttiran yapisal degisiklikler olup olmadigina karar vermek için, yukarida tarif
edildigi gibi sistein 120'nin serin'e mutajenezini takiben CTLA4 ve L104EA29Y hücre
proteinlerinin, ligand baglama özellikleri SPR ile analiz edilmeden önce jel nüfuz etme
kromatografisi (Linsley ve digerleri, (1995), yukarida) ile monomerik olduklari
gösterilmistir. Sonuçlar, hem monomerik proteinlerin CD86 lg için baglanma afinitesi,
ilgili dimerler için görülenlerden yaklasik 35-80 kat daha düsük oldugunu göstermistir
(Tablo I). Bu, yüksek aviditeli ligand baglanmasi için CTLA4'ün dimerizasyonunun
gerekli oldugunu belirten daha önce yayinlanmis verileri desteklemektedir (Greene et
daha yüksek afinite ile baglanmistir. Artan afinite, her iki Iigandtan yaklasik olarak 3 kat
daha yavas dissosiyasyon oranina bagli olmustur. Bu nedenle, L104EA29Y ile daha
güçlü ligand baglanmasi büyük olasilikla, molekülün dimerlestigi degisiklikler yerine her
bir monomer zincirine dahil edilen aviditeyi arttirici yapisal degisimlere bagliydi.
Aviditesi Artan Mutasyonlarin Konumu ve Yapisal Analizi
CTLA4'ün hücre disi IgV-benzeri alaninin çözelti yapisi, NMR spektroskopi (Metzler et
edilmistir. Bu, üç boyutlu kivrimda lösin 104 ve alanin 29'un dogru konumlanmasina
izin verdi (Sekil 26 sol ve sag gösterimler). Lösin 104, oldukça korunmus MYPPPY
amino asit dizisinin yakininda bulunmaktadir. Alanin 29, MYPPPY bölgesine uzaysal
olarak bitisik olan CDR-1 (825-R33) bölgesinin C-terminal ucunun yakininda
bulunmaktadir. Bu iki bölgenin tabanindaki kalintilar arasinda önemli bir etkilesim
varken, her ikisi de protein içinde bitisik bir hidrofobik çekirdegin bir bölümünü olustursa
da, görünüste L104 ve A29 arasinda dogrudan etkilesim yoktur. Iki avidite arttirici
mutantin yapisal sonuçlari modelleme yoluyla degerlendirildi. A29Y mutasyonu, CDR-1
(825-R33) bölgesi ile MYPPPY bölgesi arasindaki yarik içine kolayca konabilir ve
MYPPPY bölgesinin biçimini stabilize etmeye yarayabilir. Dogal sus CTLA4'te L104,
MYPPPY bölgesi yakininda L96 ve V94 ile kapsamli hidrofobik etkilesimler olusturur.
Glutamik asit mutasyonunun iki nedenden ötürü L104'ünkine benzer bir konformasyonu
benimsemesi ihtimali oldukça düsüktür. Birincisi, yapida uzun glutamik asit yan zincirini
barindiracak yeterli alan yoktur, böylece CDR-1 (825-R33) bölgesine anlamli bir
karisiklik olmaz. Ikinci olarak, glutamik asit yan zincirinin hidrofobik bölgedeki negatif
yükünün gömülmesinin enerjik maliyetleri büyük olacaktir. Bunun yerine, modelleme
çalismalari, glutamik asit yan zincirinin, yükünün çözünme yoluyla stabilize edilebildigi
yüzeye çiktigini öngörür. Böyle bir yapilandirma degisikligi, bölgedeki diger kalintilara
minimal distorsiyon ile G105 tarafindan kolayca yerlestirilebilir.
Eksek Avigliteli Mgtantl_arin Cl_)80 veva CD86'vi Ifade Eden CHO Hücrelerine
Baglanmasi
CTLA4Ig'nin FACS analizi (Sekil 27) ve stabil sekilde nakledilen CD8O + ve CD86 +
CHO hücrelerine baglanan mutant moleküller burada tarif edildigi gibi gerçeklestirildi.
CD80-pozitif ve CD86-pozitif CHO hücreleri artan konsantrasyonlarda CTLA4Ig,
L104EA29YIg veya L104Elg ile inkübe edildi ve daha sonra yikandi. Baglanmis
immünoglobülin füzyon proteini, floresin izotiyosiyanat ile konjuge edilmis keçi anti-
insan immünoglobülin kullanilarak tespit edildi.
Sekil 27'de gösterildigi gibi, CDBO-pozitif veya CD86-pozitif CHO hücreleri (1.5x105)
belirtilen CTLA4Ig konsantrasyonlari (kapali kareler), L104EA29YIg (daireler) veya
L104Elg (üçgenler) ile 2 saat inkübe edildi. 23°C'de yikandi, yikanir ve floresin
izotiyosiyanat ile konjuge edilmis keçi anti-insan immünoglobulin antikoru ile inkübe
edildi. Toplam 5,000 canli hücrede baglanma bir FACScan üzerinde analiz edildi (tek
belirleme) ve PC-LYSYS kullanilarak veri histogramlarindan ortalama flüoresans
yogunlugu (MFI) belirlendi. Veriler, yalnizca ikinci asamali reaktif ile (MFI = 7) inkübe
edilen hücreler üzerinde ölçülen arka plan flüoresansi için düzeltildi. Kontrol L6 mAb
(80 ug/ml) MFI <30 verdi. Bu sonuçlar dört bagimsiz deneyin temsilcisidir.
hücrelerine baglanmasi yaklasik olarak esdegerdir (Sekil 27A). L104EA29Ylg ve
L104Elg, CTLA4Ig'ye kiyasla insan CD86'si ile kararli sekilde transfekte edilmis CHO
hücrelerine daha güçlü bir sekilde baglanir (Sekil 27B).
Fonksiyonel Analizler:
Insan CD4-pozitif T hücreleri, Immüno manyetik negatif seleksiyon ile izole edildi
inhibitörün titrasyon konsantrasyonlarinin varliginda, forbal miristat asetat (PMA) arti
CD80-pozitif veya CD86-pozitif CHO hücreleriyle uyarildi. CD4-pozitif T hücreleri (8-10
x 104/göz) isinlanmamis CHO hücresi uyaricilari olsun olmasin, 1 nM PMA varliginda
kültürlendi. Proliferatif yanitlar 72 saatlik bir kültürün son 7 saatinde 1 uCi/oyuk [3H]
timidin ilavesiyle ölçüldü. L104EA29YIg ve CTLA4Ig ile uyarilmis T hücrelerinin PMA
arti CD80-pozitif CHO veya CD86-p02itif CHO'nun inhibisyonu gerçeklestirildi.
Sonuçlar SEKIL 28'de gösterilmektedir. L104EA29Ylg CD80-pozitif PMA ile islenmis
CHO hücrelerinin çogalmasini CTLA4Ig'den daha fazla inhibe etti (Sekil 28A).
L104EA29YIg, CD86-pozitif PMA ile muamele edilmis CHO hücrelerinin
proliferasyonunu inhibe etmekte CTLA4Ig'den daha etkilidir (Sekil 288). Bu nedenle,
L104EA29YIg, CD80 ve CD86 aracili T hücrelerinin ortak uyarilmasinin daha güçlü bir
Inhibitörüdür.
Sekil 29 yukarida hazirlanan allostimüle edilmis insan T hücrelerinin L104EA29YIg ve
CTLA4lg tarafindan inhibe edilmesini gösterir ve daha sonra, CD80 ve CD86'yi
(3.0X104/göz ve PM 8.0x1O3/göz T hücreleri) ifade eden PM adi verilen bir insan B
gün boyunca gerçeklesmistir, daha sonra hücreler radyoaktif isaretin eklenmesinden
önce 7 saat süreyle 3H-timidin ile palse edilmistir.
Ikincil allostimülasyon asagidaki gibi gerçeklestirildi. Yedi gün primer olarak allostimüle
edilen T hücreleri Ienfosit ayirma ortami (LSM) (ICN, Aurora, OH) üzerinde hasat edildi
ve 24 saat dinlendirildi. T hücreleri, yukaridaki ile ayni oranda PM ilave edilerek titre
edici miktarlarda CTLA4lg veya L104EA29YIg varliginda yeniden stimüle edildi (ikincil).
Stimülasyon 3 gün boyunca gerçeklesti, daha sonra hücreler radyoaktif isaret ile
palslandi ve yukaridaki gibi hasat edildi. L104EA29YIg'nin primer olarak allostimüle
edilmis T hücreleri üzerindeki etkisi SEKIL 29A. L104EA29Ylg'nin ikincil olarak
allostimüle edilmis T hücreleri üzerindeki etkisi SEKIL 298'de gösterilmektedir.
L104EA29YIg hem primer hem de ikincil T hücre proliferatif yanitlarini CTLA4Ig'den
daha iyi inhibe eder.
Sitokin üretimini ölçmek için (Sekil 30), duplikat ikincil allostimülasyon plakalari kuruldu.
3 gün sonra, kültür ortami, imalatçi tarafindan önerilen kosullari kullanarak ELISA kitleri
(Biosource, Camarillo, CA) kullanilarak analiz edildi. L104EA29YIg'nin, ikincil alojenik
bir stimülasyonundan sonra T hücresi IL-2, IL-4 ve y-IFN Sitokin üretimini bloke etmede
CTLA4Ig'den daha güçlü oldugu bulundu (Sekil SOA-C).
L üzerindeki etkileri
Sekil 31'de gösterilmektedir. 2 maymundan periferik mononükleer kan hücreler
(PBMC'S; her maymundan üzerinde
saflastirildi ve 2ug/ml fitohemaglütinin (PHA) ile karistirildi. Hücreler 3 gün uyarildi,
daha sonra hasattan 16 saat önce radyoetiket ile palse edildi. L104EA29Ylg maymun T
hücresi çogalmasini CTLA4Ig'den daha iyi inhibe etti.
Tablo I:
Dengeli ve belirgin kinetik sabitler, asagidaki tabloda verilir (degerler, üç farkli
deneyden alinan ortalama ± standart sapmadir):
Immobilize Analit ko.. (x ko.f (x 10' K., nM
Protein 105) M'1S'1 `7') S'1
0.18 1.08
Dengeli ve belirgin kinetik sabitler, asagidaki tabloda verilir (degerler, üç farkli
deneyden alinan ortalama ± standart sapmadir):
Immobilize Analit kon (x kon (x 10' K., nM
Protein 105) M'1S'1 3) 8"
0.52 2.27
0.11 0.05
Tablo Il
Listelenen alanlarda CTLA4Ig mutajenezi araciligiyla CD86lg baglanmasi
üzerindeki etki, yukarida açiklanan SPR araciligiyla belirlenmistir. Baskin etki,
bir "+" isareti ile gösterilir.
Mutagenez Alani Mutagenez Etkileri
Belirgin sifir Yavas "on“ orani/ Düsük Iigand
etki yavas "off orani baglanmasi
Listelenen alanlarda CTLA4Ig mutajenezi araciligiyla CDBGIg baglanmasi
üzerindeki etki, yukarida açiklanan SPR araciligiyla belirlenmistir. Baskin etki.
bir "+" isareti ile gösterilir.
Mutagenez Alani Mutagenez Etkileri
Belirgin sifir Yavas "on" orani/ Düsük Iigand
etki yavas "off orani baglanmasi
Y98 ' +
P100 +
P101 +
Y102 +
Y103 +
L104 +
6107 +
Ol 11 +
Mutagenez Alani Mutagenez Etkileri
Belirgin sifir Yavas "on" orani/ Düsük Iigand
etki yavas "off orani baglanmasi
Y1 13 +
Asagidakiler, eklem sisligi, eklem hassasiyeti, inflamasyon. sabah sertligi ve agrinin
azaltilmasi dahil romatoid artrit ile iliskili en az bir semptomu rahatlatmak üzere
çözünür CTLA4 mutant molekülü L104EA29YIg (ayrica LEA29Y veya LEA olarak
bilinir) veya CTLA4Ig uygulanan insan hastalara ait faz II klinik çalismalarinin bir
açiklamasini saglar. Burada kullanilan CTLA4Ig molekülü, Sekil 24'te gösterildigi üzere
+1 pozisyonunda metiyonin ile (veya alternatif olarak -1 pozisyonunda alanin ile) baslar
ve +35? pozisyonunda Iisin ile biter. CTLA4Ig molekülünün bir düzenlemesini kodlayan
Sekil 19'da gösterildigi üzere +1 pozisyonunda metiyonin ile (veya alternatif olarak -1
pozisyonunda alanin ile) baslar ve +35? pozisyonunda Iisin ile sonlanir. L104EA29YIg
molekülünün bir düzenlemesini kodlayan DNA, ATCC PTA 2104 olarak tevdi edilmistir.
Ek olarak asagidakileri, eritrosit sedimentasyon hizlari ve C-reaktif protein ve/veya IL2
reseptör serum seviyelerinin azaltilmasi dahil romatoid artrit ile iliskili en az bir biyolojik
temsili markörü rahatlatmak üzere L104EA29YIg veya CTLA4Ig uygulanan insan
hastalar ile ilgili bir açiklama saglar.
Hasta Topluluklari
54 erkek ve 160 disi olmak üzere toplamda 214 hasta çalismaya katilmistir (Sekiller
1A, 1B). Taban degerindeki hastalar, 3.4 (±2.0) yil olan ortalama bir hastalik devam
süresine sahiptir ve en az bir Hastaligi Modifiye Edici Antiromatizmal Ilaci (DMARD)
basarisizliga ugratmistir. Stabil steroid yapisinda olmayan anti-inflamatuar ilaçlar
(NSAIDS) veya steroidler (S 10 mg/gün) izin verilmistir ve beraberindeki DMARDS
yasaklanmistir. Hastalar, her tedavi grubu basina 25 ila 32 hastadan olusan gruplar
halinde randomize edilmistir. Otuz iki hasta bir plasebo almistir, 92'si L104EA29YIg
almistir ve 90'ni CTLA4Ig almistir. Protokol kilavuzlarini takip eden ve 57. günden
önceye kadar devam eden hastalar, her biri 1., 15., 29. ve 57. günde bir infüzyon olmak
85. günde degerlendirilmistir. Dozlar uygulanan dozlar 0.5, 2.0 veya 10.0 mg/kg
veya CTLA4Ig (Sekiller 1A-1E'de sirasiyla CTLA.5, CTLA2 ve CTLA1O olarak
gösterilmistir) içermistir.
Tüm özneler, potansiyel yan etkilerin listelendigi bir anketi yanilarak peri-infüzyonel yan
etkiler ve global güvenlik açisindan izlendi. Hastalara, infüzyon sonrasi yirmi dört saat
içerisinde meydana gelebilen potansiyel olumsuz etkiler sorulmustur. Hekimler rutin
olarak örnegin sitokinler (TNF, IL-6), triptaz ve tamamlayici gibi inflamatuvar yanit
medyatörlerin seviyelerini degerlendiren hematoloji ve kan kimyasindaki anormallerine
yönelik hastalardan alinan laboratuvar numunelerini izlemistir. Primer son nokta. 85.
günde ACR 20 kriterlerini karsilayan öznelerin oraniydi.
Test Materyalinin Saklanmasi
L104EA29YIg içeren tek kullanimlik cam siselerde tedarik edilmistir. Infüzyon öncesi
CTLA4Ig ve L ile 25 mg/ml`lik nihai
bir konsantrasyona seyreltilmistir.
Uygulama Protokolü
Tüm infüzyonlar, 1 saat boyunca intravenöz olarak uygulanmistir (Sekil 1 ila 17). Tüm
özneler, çalisma ilacinin en az bir infüzyonunu almistir.
Grup 1: 32 hasta, CTLA4Ig veya L104EA29YIg eslesen plasebo.
Grup 2: 26 hasta; dozaj 0.5 mg/kg CTLA4Ig.
Grup 3: 32 hasta; dozaj 2.0 mg/kg CTLA4Ig.
Grup 4: 32 hasta; dozaj 10.0 mg/kg CTLA4Ig.
Klinik Gözlem
Hastalar, herhangi bir infüzyon almadan önce hastalik aktivitesinin taban deger
semptomlari için degerlendirilmistir. Bu taban deger degerlendirmeleri sunlari içermistir:
eklem sisligi, eklem hassasiyeti, inflamasyon, sabah sertligi, hasta ve hekim tarafindan
degerlendirilen hastalik aktivitesi ve ayrica Saglik Anketi Degerlendirmesi (HAQ) ile
degerlendirilen sakatlik (Sekil 1C'de bir fiziksel fonksiyon skoru olarak belirtilir) ve agri
(Sekiller 1A ila ID). Ek olarak taban degeri degerlendirmeleri, eritrosit sedimentasyon
hizlari (ESR) ve C-reaktif protein (CRP) ve çözünür lL-2 reseptör (lL-2r) serum
seviyelerini içermistir (Sekiller 10 ve 1D).
Klinik yanit çalismalari, Amerikan Romatoloji Koleji (ACR) tarafindan belirlenen kritere
dayanir. Hassas ve siskin eklem sayilarinda yüzde 20'lik bir iyilesme ve hastaya ve
hekime göre global hastalik degisimleri, agri, sakatlik ve bir akut faz reaktani gibi
ölçülen bes kalan semptomun üçünde yüzde 20'lik iyilesme olmasi halinde bir özne
ACR20 kriterini karsilamistir (Felson, D. T., et al., 1993 Arthritis and Rheumatism
Biyomarkörler
Hastalik aktivitesinin potansiyel biyomarkörleri (romatoid faktör, CRP, ESR, çözünür IL-
ZR, çözünür ICAM-1, çözünür E-selektin ve MMF-3) de degerlendirilmistir. Onaylanmis
enzim immüno analiz (EIS) yöntemleri, IL-25R0i, sICAM-1, sE-selektin ve MMP serum
konsantrasyonunu belirlemek üzere kullanilmistir. TNFd ve IL-6, gerekli olmasi halinde
2 saat öncesi ve sonrasinda infüzyonda degerlendirilmistir.
ticari olarak temin edilebilir kolorimetrik EIA kitleri kullanilarak ölçülmüstür. Miktar
9.0 araliginda sirlanmistir. Kit üreticisine göre normal serum degerleri sirasiyla 676-
2,132 pg/mL araligindadir.
MMP-3, Amersham Pharmacia Biotech'ten (Piscataway, NJ) alinan ticari olarak temin
edilebilen kolorimetrik EIA kiti kullanilarak ölçülmüstür. Miktar tayinin alt ve üst sinirlari
araliginda sirlanmistir. Kit üreticisine göre normal serum degerleri 28-99 ng/mL
araligindadir.
dilebilen kemilüminesan EIS kitleri kullanilarak ölçülmüstür. Miktar tayinin alt ve üst
arasi katsayisi sirasiyla %3.1-5.7 ve %6.4-20.7 araliginda sirlanmistir. Kit üreticisine
göre normal serum degerleri <0.3-12 pg/mL ve <0.7-7.5 pg/mL araligindadir.
Antikor testi
Serum numuneleri, 1 günlük pn dozlama öncesinde ve yaklasik olarak 15., 29., 57., 85.
ve 169. günlerde ilaca spesifik antikorlarin degerlendirilmesi için elde edilmistir.
Molekülün immünoglobülin (lg) kismina yönelik yüksek, önceden var olan titreler
nedeniyle lg sabit bölgeleri olmaksizin CTLA4Ig ve LEA29Y'ye karsi spesifik antikor
olusumu da degerlendirilmistir.
Doksan alti gözlü Immulon II ELISA plakalari (Dynex, Chantilly, Virjinya), sirasiyla
fosfat tamponlu salin (PBS) içerisinde 2, 4, 2 veya 1 ug/ml'de CTLA4Ig, lg sabit
bölgeleri olmaksizin CTLA4Ig, LEA29Y veya lg sabit bölgeleri olmaksizin LEA29Y ile
kaplanmistir ve 2-8°C'de bir gece inkübe edilmistir. Plakalar, %005 Tween 20 içeren
PBS ile yikanmistir ve %1 bovin serum albumin (BSA) içeren PBS ile 37°C'de 1 saat
bloke edilmistir. Plakalar daha sonra yikanmistir ve test serumlari ve kalite kontrol (QC)
serumlarinin seri dilüsyonlari, uygun gözlere eklenmistir ve 37°C'de 2 saat inkübe
PBS içerisinde üç kat seyreltilmistir. Plakalar yikanmistir ve bir alkalin-fosfataz-konjuge
keçi anti-insan kappa ve Iambda (Southern Biotechnology Associates, Inc.,
Birmingham, Alabama) antikor kokteyli eklenmistir. 37°C'de 1 saatlik bir inkübasyonu
takiben plakalar yikanmistir ve dietanolamin tamponu içerisinde 1 mg/ml para-nitrofenil
her bir göze eklenmistir. 25°C'de 30 dakika sonra reaksiyonlar, 3N NaOH ile
durdurulmustur ve absorbans (çift dalga boyu: 405 nm ve 550 nm) kaydedilmistir.
Sonuçlar, ortalama plaka arka plan absorbansindan bes kat daha büyük veya buna esit
bir absorbans okumasi ile sonuçlanan en yüksek dilüsyonun tersi olarak tanimlanan,
son nokta titresi (EPT) olarak ifade edilmistir. Plaka arka plani, serum yoklugunda
kaydedilen absorbans ölçümü olarak belirlenmistir. Degerler, en az iki seri dilüsyon
(dokuz kat) veya doz öncesi EPT degerlerine göre daha büyük olmalari halinde
serokonversiyon için pozitif olarak düsünülmüstür. CTLA4Ig- veya LEA29Y spesifik
antikorlar için serum QC numuneleri, immünize maymunlardan üretilmistir. Uygun QC
numunesinin bir alikuotu, her bir analitik çalisma sirasinda analiz edilmistir. Analitik
çalismalar, sadece QC numuneleri analiz kabuk kriteri içerisinde oldugunda kabul
edilmistir.
Sonuçlar
CTLA4Ig ve L104EA29YIg genellikle tüm doz seviyelerinde iyi tolere edilmistir. Peri-
infüzyonel olumsuz durumlar, bas agrisi hariç tüm doz gruplarinda benzerdir.
Hastalarin 85. gündeki bas agrisi yaniti, CTLA4Ig ile tedavi edilen hastalarda doza
tedavi edilen hastalarda %34, %45 ve %61 artmistir. Bunun aksine plasebo uygulanan
hastalarin %31'i bas agrisi yasamistir.
Artrit atesi ve diger olumsuz etkiler nedeniyle klinik çalisamaya devam etmeyen hasta
yüzdesi, Sekil 2'de kisaca açiklanir. Plasebo durumunda hastalarin daha yüksek bir
yüzdesi artrit atesi nedeniyle tedaviyi birakmistir. CTLA4Ig ile tedavi edilen hastalar,
artan dozlar ile tedaviyi daha az birakmislardir. L104EA29YIg ile tedavi edilen çok az
hasta tedavi birakmistir. Bu sonuçlar, CTLA4Ig için iyi bir ters doza bagimli yanit ve
L104EA29YIg terapisi ile daha güçlü bir terapötik yaniti gösterir.
50 ve -70 yanitlari Sekil 3A'da kisaca açiklanmistir. Benzer sekilde Sekiller 38 ve C,
göre 10 mg/kg'de belirgin önemli bir yanit ile doza bagimli olarak görünür.
CTLA4Ig, L104EA29YIg veya plasebo ile tedaviye yanit vermeyen hastalara kiyasla
düsük siskin ve hassas eklem sayisina sahip hastalarin yüzdesi Sekiller 4A ve B'de
gösterilir. Terapötik yanitlarin doza bagimli oldugu görülür. Hastalarin büyük bir
gelisme gösterir.
CTLA4Ig, L104EA29Ylg veya plasebo ile hasta ve hekime göre ortalama skor ile
degerlendirilen düsük agri, hastalik aktivitesine sahip hastalarin yüzdesi, Sekiller 5A, B,
C ve D'de gösterilir. Likert ölçegi ile gözlendigi üzere terapötik yanitlarin, 85. günde
plasebo ile karsilastirilan aktif tedavi gruplari lehine doza bagimli oldugu görünür.
Likert ölçegi, semptomlari siralamak üzere sifatlari kullanan onaylanmis sözel bir
derecelendirme ölçegidir (The American College of Rheumatology Preliminary Core
Set of Disease Activity Measures for Rheumatoid Arthritis Clinical Trials: Arthritis and
CTLA4Ig, L104EA29YIg veya plasebo ile tedaviden sonuçlanan, en az 2 birim kadar
taban degerinden hastalik aktivitesi degisiminin hasta ve hekime göre degerlendirmesi
Sekiller 6A ve B`de gösterilir. Yanitlarin, aktif ilaçlarin daha yüksek dozlari için daha
çok isaretlenmis gelisim ile doza bagimli oldugu görülür.
CTLA4Ig, L104EA29YIg veya plasebo ile tedavi edilen hastalarda C-reaktif protein
(CRP) seviyelerindeki azalma yüzdesi Sekiller ?A ve B'de gösterilir. Yanitlarin, 2 ve 10
mg/kg aktif tedavi gruplari için belirgin bir azalma ile doza bagimli oldugu görünür. Ek
olarak Sekil 78, farkin %95 güvenlik araligi olan plasebo ile karsilastirildiginda oldukça
önemli oldugunu göstermistir. Sekil 70, 85. günde taban degerinden serum seviyesi
degisimlerindeki degisimleri gösterir.
CTLA4Ig, L104EA29YIg veya plasebo ile tedavi edilen hastalarda serum çözünür IL-2
reseptör miktari Sekil 8'de gösterilir. Çözünür IL-2 reseptör seviyelerindeki azalmanin
doza bagimli oldugu görünür.
CTLA4Ig, L104EA29YIg veya plasebo ile tedavi edilen hastalarda serum çözünür
E-selektin seviyelerindeki azalmanin doza bagimli oldugu görünür.
CTLA4Ig veya plasebo ile tedavi edilen hastalarda medyan ve ortalama hassas eklem
sayisi Sekiller 9A ve B'de gösterilir. Taban degerinden degisimin (örnegin hassas
eklemlerdeki azalma), 2 ve 10 mg/kg ile tedavi edilen gruplarda, plasebo veya 0.5
mg/kg gruplarinkinden daha önemli oldugu görünür.
Zaman içerisinde CTLA4Ig veya plasebo ile tedavi edilen hastalardaki medyan ve
ortalama siskin eklem sayisi Sekiller 10A ve B'de gösterilir. Taban degerinden
degisimin (örnegin siskin eklemlerdeki azalma), 2 ve 10 mg/kg ile tedavi edilen
gruplarda plasebo veya 0.5 mg/kg gruplarindan daha önemli oldugu görünür.
CTLA4Ig veya plasebo ile tedavi edilen hastalarda zaman içerisindeki ortalama agri
degerlendirme skorlari Sekil 11'de gösterilir. Taban degerinden degisimin (örnegin
agridaki azalma), 2 ve 10 mg/kg ile tedavi edilen gruplarda plasebo veya 0.5 mg/kg
gruplarindan daha önemli oldugu görünür.
Zaman içerisinde CTLA4lg veya plasebo ile tedavi edilen hastalarda hasta veya hekim
ile degerlendirilen ortalama hastalik aktivitesi degerlendirme skorlari Sekiller 12A ve
Bide gösterilir. Taban degerinden degisimin (örnegin hastalik aktivitesindeki azalma), 2
ve 10 mg/kg ile tedavi edilen gruplarda plasebo ve 0.5 mg/kg gruplarindan daha önemli
oldugu görünür.
Zaman içerisinde L veya
plasebo ile tedavi edilen hastalardaki medyan ve ortalama hassas eklem sayilari
Sekiller 13A ve B`de gösterilir. Taban degerinden degisimin (örnegin hassas
eklemlerdeki azalma), doza bagimli oldugu görünür.
Zaman içerisinde L veya plasebo ile
tedavi edilen hastalardaki medyan ve ortalama siskin eklem sayilari, Sekiller 14A ve
Bide gösterilir. Taban degerinden degisimin (örnegin siskin eklemlerdeki azalma), 2 ve
mg/kg ile tedavi edilen gruplarda plasebo veya 0.5 mg/kg gruplarindan daha önemli
oldugu görünür.
Zaman içerisinde L veya plasebo ile
tedavi edilen hastalarda ortalama agri degerlendirme skorlari Sekil 15'te gösterilir.
Taban degerinden degisimin (örnegin agridaki azalma), doza bagimli oldugu görünür.
Zaman içerisinde L veya plasebo ile
tedavi edilen hastalarda hasta veya hekim tarafindan degerlendirilen ortalama hastalik
aktivitesi degerlendirme skorlari Sekiller 16A ve B'de gösterilir. Taban degerinden
degisimin (örnegin hastalik aktivitesindeki azalma), doza bagimli oldugu görünür.
CTLA4Ig, L104EA29YIg veya plasebo ile tedavi edilen hastalar için 85. günde HAQ ile
degerlendirilen fiziksel sakatligin iyilesme yüzdesi Sekil 17'de gösterilir (Saglik
Bu parametre ile belirgin bir doza bagimli gelisme mevcuttur.
Çözünür IL-2r ve C-reaktif protein seviyelerine yönelik taban degerinden degisimler,
her iki tedavi grubunda doza bagimlidir. Tedaviden sonra çözünür IL-2r seviyeleri,
plasebo için +%3 ile karsilastirildiginda sirasiyla 0.5. 2.0 ve 10.0 mg/kg'de CTLA4Ig
seviyeleri, plasebo için +%20 ile karsilastirildiginda sirasiyla 0.5, 2.0 ve 10.0 mg/kg'de
(Sekil 7A).
Rutin hematoloji testi, her iki ilacin daha yüksek dozlarinda IgA ve IgG düzeylerinde
hafif bastirmalar hariç kimyasal laboratuvar testleri, fiziksel bulgular veya önemli bulgu
degerlendirmeleri ile ilgili klinik olarak dikkat çekici bulgular gözlenmemistir. Özellikle
herhangi bir ilaç ilaca spesifik antikorlari indüklememistir.
Asagidaki örnekler, onaylanmis radyografik ölçeklerinin kullanildigi kemik veya eklem
erozyonu dahil yapisal hasari azaltmak veya önlemek üzere L104EA29YIg
uygulanacak insan hastalarin faz II klinik çalismalarini açiklar. Yapisal hasarin
azaltilmasi veya önlenmesindeki bu gelisme, klinik parametreler ile ölçülen klinik
gelisme ile paraleldir.
Kemik yapisinin durumu, CTLA4Ig veya L104EA29YIg ile tedaviden önce insan
hastalarin bazilarinda izlenir. Bu hastalara zamana içerisinde terapötik gelismelerini
iki haftada (te basina veya diger ajanlar ile kombinasyon halinde) kronik olarak 0.5 ve
mg/kg arasinda CTLA4Ig veya L104EA29YIg uygulanir. Hastalarin elleri ve
ayaklarinin radyo grafikleri önceden belirlenen araliklarda alinir: FDA kilavuzlari ile
tavsiye edilen sekilde 6 ay ve daha sonra yillik olarak. Bu hastalar, CTLA4Ig veya
L104EA29YIg ile tedavinin kemik bozulmasinin ilerlemesini azaltip azaltilmadigini
belirlemek üzere 6 ve 12 hafta sonra uzun süreli uzatmada ve daha sonra yillik olarak
izlenir. Hastalar, teknikteki standart uygulamaya göre X-isini ve/veya manyetik
rezonans görüntüleme (MRI) dahil radyografik yöntemler ile izlenir (Larsen, A. K. and
ve/veya yeni erozyonlarin önlenmesi ile kemik erozyonu ve kikirdak hasarinin
ilerlemesinin yavaslatilmasi dahil olmak üzere yapisal hasarin önlenmesi için
degenendkmr.
Claims (1)
- ISTEMLER Greft versus host hastaligi, graft transplantasyon reddi, kronik ret ve doku veya hücre allogrefti veya ksenogreftler ile iliskili immün bozukluklari, psoriyazis, T- hücre Ienfoma, T-hücre akut Ienfoblastik lösemi, testiküler anjiyosentrik T-hücre lenfoma, selim tip Ienfositik anjeit, lupus, Hashimoto tiroiditi, primer miksödem, Graves hastaligi, pernisiyöz anemi, otoimmün atrofik gastrit, Addison hastaligi, diyabet, good pasture sendromu, miyastenya gravis, pemfigüs, Crohn hastaligi, Sempatik oftalmi, otoimmün üveit, multipl skleroz, otoimmün hemolitik anemi, idiyopatik trombositopeni, primer biliyer siroz, kronik aksiyon hepatit, ülseratif kolit, Sjogren sendromu, romatoid artrit, polimiyozit, skleroderma ve karisik bag doku hastaliginin tedavi edilmesinde kullanima yönelik bir çözünür CTLA4 mutant molekülü ve bir kortikosteroid olup, özelligi çözünür CTLA4 mutant molekülünün hücre disi CTLA4 domenini içeren bir lg füzyon proteini olmasidir ve hücre disi CTLA4 domeni Sekil 24'te gösterildigi üzere CTLA4'ün +104 pozisyonunda bir mutasyon içerir, burada +104 pozisyonundaki lösin, glutamik asit ile sübstitüe edilir. Toleransin indüklenmesinde kullanima yönelik olarak allogreft veya ksenograft akut veya kronik ret tedavi edilmesinde veya önlenmesinde kullanima yönelik bir çözünür CTLA4 mutant molekülü ve bir kortikosteroid olup, özelligi çözünür CTLA4 mutant molekülünün, hücre disi CTLA4 domenini içeren bir lg füzyon proteini olmasidir ve hücre disi CTLA4 domeni Sekil 24lte gösterildigi üzere CTLA4'ün +104 pozisyonunda bir mutasyon içerir, burada +104 pozisyonundaki lösin, glutamik asit ile sübstitüe edilir. Istem 1 veya 2'e göre kullanima yönelik istem 1 veya 2yye göre çözünür CTLA4 mutant molekülü ve kortikosteroid olup, özelligi çözünür CTLA4 mutant molekülünün Sekil 18'de gösterildigi üzere +1 pozisyonunda metiyonin ila +35? pozisyonunda Iisin ile baslayan L104Elg veya Sekil 18`de gösterildigi üzere -1 pozisyonunda alanin ila +35? pozisyonunda lisin ile baslayan L104Elg olmasidir. istem 1 veya 2'e göre kullanima yönelik istem 1 veya 2lye göre çözünür CTLA4 mutant molekülü ve kortikosteroid olup, özelligi CTLA4'ün hücre disi domeninin Sekil 24lte gösterildigi üzere CTLA4'ün +29 pozisyonunda ikinci bir mutasyon içermesidir, burada +29 pozisyondaki alanin tirosin ile sübstitüe edilir. istem 4'e göre kullanima yönelik istem 4'e göre çözünür CTLA4 mutant molekülü ve kortikosteroid olup, özelligi çözünür CTLA4 mutant molekülünün asagidaki olmasidir: Sekil 19'da gösterildigi üzere +1 pozisyonunda metiyonin ile baslayan ve +35? pozisyonunda Iisin ile sonlanan L104EA29YIg veya Sekil 19'da gösterildigi üzere -1 pozisyonunda alanin ile baslayan ve+357 pozisyonunda lisin ile sonlanan L104EA29YIg. istem 1 veya 2'e göre kullanima yönelik istem 1 veya 2'ye göre çözünür CTLA4 mutant molekülü ve kortikosteroid olup, özelligi CTLA4'ün hücre disi domeninin asagidaki pozisyonlarda bir mutasyon içermesidir a. Sekil 24'te gösterildigi üzere CTLA4'ün +104 pozisyonu, burada Sekil 24'te gösterilen +104 pozisyonundaki Iösin, glutamik asit ile sübstitüe b. Sekil 24'te gösterildigi üzere CTLA4lün +29 pozisyonu, burada +29 pozisyonundaki alanin, tirosin ile sübstitüe edilir ve 0. Sekil 24yte gösterildigi üzere CTLA4'ün +25 pozisyonu, burada +25 pozisyonundaki serin, diger herhangi bir amino asid ile sübstitüe edilir. Istemler 1 ila 6'nin herhangi birine göre kullanima yönelik istemler 1 ila 6'dan herhangi birine göre çözünür CTLA4 mutant molekülü ve kortikosteroid olup, özelligi kortikosteroidun prednison olmasidir. Istemler 1 ila 7'nin herhangi birine göre kullanima yönelik istemler 1 ila 7'den herhangi birine göre çözünür CTLA4 mutant molekülü ve kortikosteroid olup, özelligi çözünür CTLA4 mutant molekülü ve kortikosteroidun birlikte veya sirayla Farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ve bir çözünür CTLA4 mutant ve bir kortikosteroidun etkili bir miktarini içeren farmasötik bir bilesim olup, özelligi çözünür CTLA4 mutant molekülünün hücre disi CTLA4 domenini içeren bir lg füzyon proteini olmasidir ve hücre disi CTLA4 domeni CTLA4'ün +104 pozisyonunda bir mutasyon içerir, burada Sekil 24'te gösterildigi üzere +104 pozisyonundaki lösin, glutamik asit ile sübstitüe edilir ve CTLA4'ün +29 pozisyonunda bir mutasyon içerir, burada Sekil 24'te gösterildigi üzere +29 pozisyonundaki alanin tirosin ile sübstitüe edilir. Istem 9ia göre farmasötik bilesim olup, özelligi çözünür CTLA4 mutant molekülünün L104EA29YIg olmasidir. .Istem 10'a göre farmasötik bilesim olup, özelligi L104EA29YIginin Sekil 19”da gösterildigi gibi +1 pozisyonunda metiyonin ile baslamasi ve +35? pozisyonunda Iisin ile sonlanmasidir. Istem 10'a göre farmasötik bilesim olup, özelligi L104EA29YIg'nin Sekil 19'da gösterildigi gibi -1 pozisyonunda alanin ile baslamasi ve +357 pozisyonunda lisin ile sonlanmasidir. Istemler 9 ila 12'den herhangi birine göre farmasötik bilesim olup, özelligi kortikosteroidun prednison olmasidir. Istem 9'a göre farmasötik bilesim olup, özelligi farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicinin iyon degistiriciler, alümina, alüminyum stearat, Iesitin, serum proteinleri, örnegin insan serum albumin, tampon maddeleri, glisin, sorbik asit, potassam sorbat, doymus bitkisel yag asitlerinin kismi gliserit karisimlari, fosfat tamponlu salin solüsyonu, su, emülsiyonlar, tuzlar veya elektrolitler, kolloidal silika, magnezyum trisilikat, polivinil pirolidon, selüloz bazli maddeler, polietilen glikol, steril solüsyonlar, tabletler, eksipiyanlar, sukroz, glukoz, maltoz, lezzet ve renk katki maddeleri, Iipid bilesimleri ve polimerik bilesimlerinden seçilir.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US21591300P | 2000-07-03 | 2000-07-03 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TR201807700T4 true TR201807700T4 (tr) | 2018-06-21 |
Family
ID=22804919
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TR2018/07700T TR201807700T4 (tr) | 2000-07-03 | 2001-07-02 | Çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin kullanımları. |
Country Status (39)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7455835B2 (tr) |
| EP (4) | EP1935427B1 (tr) |
| JP (1) | JP2004517806A (tr) |
| KR (3) | KR100864120B1 (tr) |
| CN (1) | CN1318086C (tr) |
| AR (2) | AR035037A1 (tr) |
| AT (1) | ATE401909T1 (tr) |
| AU (2) | AU7317401A (tr) |
| BG (2) | BG66024B1 (tr) |
| BR (1) | BR0112104A (tr) |
| CA (2) | CA2630062C (tr) |
| CY (3) | CY1109786T1 (tr) |
| CZ (1) | CZ303959B6 (tr) |
| DE (1) | DE60135029D1 (tr) |
| DK (2) | DK1372696T3 (tr) |
| EE (1) | EE05378B1 (tr) |
| ES (2) | ES2310557T3 (tr) |
| HK (1) | HK1058486A1 (tr) |
| HR (1) | HRP20030071B1 (tr) |
| HU (3) | HU227669B1 (tr) |
| IL (2) | IL153593A0 (tr) |
| IS (1) | IS2834B (tr) |
| LT (2) | LT1935427T (tr) |
| LV (1) | LV12993B (tr) |
| MX (1) | MXPA02012603A (tr) |
| MY (1) | MY137552A (tr) |
| NO (3) | NO20026264L (tr) |
| PE (1) | PE20020772A1 (tr) |
| PL (2) | PL212205B1 (tr) |
| PT (2) | PT1935427T (tr) |
| RS (1) | RS50811B (tr) |
| RU (1) | RU2287340C2 (tr) |
| SI (3) | SI21078A (tr) |
| SK (1) | SK287940B6 (tr) |
| TR (1) | TR201807700T4 (tr) |
| TW (2) | TWI322153B (tr) |
| UY (1) | UY26815A1 (tr) |
| WO (1) | WO2002002638A2 (tr) |
| ZA (1) | ZA200210058B (tr) |
Families Citing this family (65)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5637481A (en) | 1993-02-01 | 1997-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell |
| US6887471B1 (en) * | 1991-06-27 | 2005-05-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Method to inhibit T cell interactions with soluble B7 |
| AU710998B2 (en) * | 1996-03-20 | 1999-10-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for inhibiting an immune response by blocking the GP39/CD40 and CTLA4 /CD28/B7 pathways and compositions for use therewith |
| ZA98533B (en) * | 1997-01-31 | 1999-07-22 | Bristol Myers Squibb Co | Soluble CTLA4 mutant molecules and uses thereof. |
| US20030219863A1 (en) * | 1997-01-31 | 2003-11-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Soluble CTLA4 mutant molecules and uses thereof |
| US7094874B2 (en) | 2000-05-26 | 2006-08-22 | Bristol-Myers Squibb Co. | Soluble CTLA4 mutant molecules |
| TR200402703T4 (tr) * | 2000-05-26 | 2004-11-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Çözünür CTLA4 mutantları ve bunların kullanımı. |
| CA2411962A1 (en) * | 2000-06-09 | 2001-12-20 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for regulating a cell-mediated immune response by blockinglymphocytic signals and by blocking lfa-1 mediated adhesion |
| US20040022787A1 (en) | 2000-07-03 | 2004-02-05 | Robert Cohen | Methods for treating an autoimmune disease using a soluble CTLA4 molecule and a DMARD or NSAID |
| TR201807700T4 (tr) * | 2000-07-03 | 2018-06-21 | Squibb Bristol Myers Co | Çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin kullanımları. |
| PL375139A1 (en) * | 2001-01-26 | 2005-11-28 | Emory University | Methods of inducing organ transplant tolerance and correcting hemoglobinopathies |
| EP1397153B1 (en) | 2001-05-23 | 2008-04-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for protecting allogeneic islet transplant using soluble ctla4 mutant molecules |
| EP1496931A4 (en) * | 2002-04-19 | 2009-07-01 | Bristol Myers Squibb Co | METHODS OF TREATING AUTOIMMUNE DISEASE USING SOLUBLE CTLA4 MOLECULE AND ARMM OR NSAID |
| US7541164B2 (en) * | 2002-12-23 | 2009-06-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Mammalian cell culture processes for protein production |
| TWI328614B (en) * | 2002-12-23 | 2010-08-11 | Bristol Myers Squibb Co | Product quality enhancement in mammalian cell culture processes for protein production |
| MXPA05007019A (es) | 2002-12-30 | 2005-08-18 | Amgen Inc | Terapia de combinacion con factores co-estimuladores. |
| NZ545314A (en) * | 2003-08-04 | 2009-03-31 | Bristol Myers Squibb Co | Methods for treating cardiovascular disease using a soluble CTLA4 molecule |
| AU2004287431B2 (en) | 2003-10-27 | 2010-03-11 | Amgen Inc. | Compositions and methods to modulate an immune response to an immunogenic therapeutic agent |
| US7815765B2 (en) * | 2004-04-01 | 2010-10-19 | Swei Mu Wang | Method for forming laminated synthetic leather |
| CN106589132B (zh) * | 2005-12-20 | 2022-03-29 | 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 | 组合物和用于生产组合物的方法 |
| US9309316B2 (en) | 2005-12-20 | 2016-04-12 | Bristol-Myers Squibb Company | Stable subcutaneous protein formulations and uses thereof |
| NO347247B1 (no) * | 2005-12-20 | 2023-07-31 | Bristol Myers Squibb Co | Stabile proteinformuleringer |
| AR058568A1 (es) | 2005-12-20 | 2008-02-13 | Bristol Myers Squibb Co | Metodos para producir una composicion con moleculas ctla4-ig a partir de un medio de cultivo |
| US7528111B2 (en) * | 2006-05-12 | 2009-05-05 | Bristol-Myers Squibb Company | Method of vaccinating subjects receiving immune modulating therapy |
| GB0620934D0 (en) | 2006-10-20 | 2006-11-29 | Cambridge Antibody Tech | Protein variants |
| RU2506275C2 (ru) * | 2007-11-01 | 2014-02-10 | Астеллас Фарма Инк. | Иммуносупрессорные полипептиды и нуклеиновые кислоты |
| AU2014250683B2 (en) * | 2007-11-01 | 2015-11-26 | Astellas Pharma Inc. | Immunosuppressive polypeptides and nucleic acids |
| AU2012202324B2 (en) * | 2007-11-01 | 2014-08-28 | Astellas Pharma Inc. | Immunosuppressive polypeptides and nucleic acids |
| US8986253B2 (en) | 2008-01-25 | 2015-03-24 | Tandem Diabetes Care, Inc. | Two chamber pumps and related methods |
| US7915222B2 (en) * | 2008-05-05 | 2011-03-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Method of preventing the development of rheumatoid arthritis in subjects with undifferentiated arthritis |
| US8408421B2 (en) | 2008-09-16 | 2013-04-02 | Tandem Diabetes Care, Inc. | Flow regulating stopcocks and related methods |
| AU2009293019A1 (en) | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Tandem Diabetes Care Inc. | Solute concentration measurement device and related methods |
| WO2010042433A1 (en) | 2008-10-06 | 2010-04-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination of cd137 antibody and ctla-4 antibody for the treatment of proliferative diseases |
| EP2365823B1 (en) * | 2008-10-30 | 2016-11-30 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Anti third party central memory t cells, methods of producing same and use of same in transplantation and disease treatment |
| US20110152770A1 (en) | 2009-07-30 | 2011-06-23 | Tandem Diabetes Care, Inc. | Infusion pump system with disposable cartridge having pressure venting and pressure feedback |
| CN102030828B (zh) * | 2009-09-25 | 2014-10-29 | 上海抗体药物国家工程研究中心有限公司 | 一种高亲和力的CTLA4-Ig融合蛋白突变体 |
| HUE050768T2 (hu) * | 2010-02-19 | 2021-01-28 | Xencor Inc | Új CTLA4-IG immunadhezinek |
| KR20130049775A (ko) | 2010-03-12 | 2013-05-14 | 애브비 바이오테라퓨틱스 인크. | Ｃｔｌａ４ 단백질 및 이의 용도 |
| WO2011146395A2 (en) | 2010-05-17 | 2011-11-24 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Prevention of immunological rejection of transplanted stem cells by leukocyte costimulatory molecule blockade |
| CN103270050A (zh) | 2010-09-08 | 2013-08-28 | 耶达研究及发展有限公司 | 用于稳定和长期移植的免疫抑制药物组合 |
| MX357746B (es) | 2010-09-08 | 2018-07-23 | Yeda Res And Development Co Ltd Star | Uso de células t de memoria central anti-tercera parte para el tratamiento anti-leucemia/linfoma. |
| WO2013010537A1 (en) * | 2011-07-20 | 2013-01-24 | Aarhus Universitet | Method of treating morphea |
| JP6196620B2 (ja) | 2011-09-08 | 2017-09-13 | イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド | 抗第三者セントラルメモリーｔ細胞、その作製方法ならびに移植および疾患処置におけるその使用 |
| US9180242B2 (en) | 2012-05-17 | 2015-11-10 | Tandem Diabetes Care, Inc. | Methods and devices for multiple fluid transfer |
| US8735359B2 (en) | 2012-05-24 | 2014-05-27 | Orban Biotech Llc | Combinations of modalities for the treatment of diabetes |
| US9555186B2 (en) | 2012-06-05 | 2017-01-31 | Tandem Diabetes Care, Inc. | Infusion pump system with disposable cartridge having pressure venting and pressure feedback |
| CA2877986A1 (en) | 2012-06-27 | 2014-01-03 | Orban Biotech Llc | Ctla4 fusion proteins for the treatment of diabetes |
| US9173998B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-11-03 | Tandem Diabetes Care, Inc. | System and method for detecting occlusions in an infusion pump |
| WO2014151230A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Method of treating granulomatosis with polyangiitis |
| CN104740608A (zh) * | 2013-12-30 | 2015-07-01 | 上海中信国健药业股份有限公司 | 可溶性ctla4分子用于制备治疗类风湿性关节炎药物的用途 |
| GB2523399B (en) | 2014-02-25 | 2019-03-13 | Orban Tihamer | A composition comprising ten overlapping peptide fragments of the entire preproinsulin sequence |
| EP3134109A1 (en) * | 2014-04-25 | 2017-03-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Use of ctla4 compound for achieving drug-free remission in subjects with early ra |
| WO2016168771A2 (en) | 2015-04-17 | 2016-10-20 | Alpine Immune Sciences, Inc. | Immunomodulatory proteins with tunable affinities |
| CN108135938A (zh) | 2015-07-16 | 2018-06-08 | 耶达研究及发展有限公司 | 基因修饰的抗第三方中央型记忆t细胞及其在免疫疗法中的用途 |
| EP3192805A1 (en) | 2016-01-15 | 2017-07-19 | Humanitas Mirasole S.p.A. | Inhibitors of t cell activation or stimulation and uses thereof |
| SG11201808783XA (en) | 2016-04-15 | 2018-11-29 | Alpine Immune Sciences Inc | Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof |
| IL268126B2 (en) | 2017-01-18 | 2024-02-01 | Yeda Res & Dev | Genetically engineered Veto cells and their uses in immunotherapy |
| US10751368B2 (en) | 2017-01-18 | 2020-08-25 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of transplantation and disease treatment |
| CA3198255A1 (en) | 2017-10-10 | 2019-04-18 | Alpine Immune Sciences, Inc. | Ctla-4 variant immunomodulatory proteins and uses thereof |
| JP7282760B2 (ja) | 2017-10-18 | 2023-05-29 | アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド | バリアントｉｃｏｓリガンド免疫調節タンパク質ならびに関連する組成物および方法 |
| WO2019175380A2 (en) | 2018-03-16 | 2019-09-19 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antigenic peptides deriving from secretogranin v and uses thereof for the diagnosis and treatment of type 1 diabetes |
| US20210023209A1 (en) | 2018-03-16 | 2021-01-28 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antigenic peptides deriving from pcsk2 and uses thereof for the diagnosis and treatment of type 1 diabetes |
| WO2019175384A2 (en) | 2018-03-16 | 2019-09-19 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antigenic peptides deriving from urocortin 3 and uses thereof for the diagnosis and treatment of type 1 diabetes |
| WO2020148338A1 (en) | 2019-01-15 | 2020-07-23 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Mutated interleukin-34 (il-34) polypeptides and uses thereof in therapy |
| WO2023112992A1 (ja) * | 2021-12-16 | 2023-06-22 | レグセル株式会社 | 免疫系の異常に関連する疾患、障害または症状を処置するための医薬組成物 |
Family Cites Families (61)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US644792A (en) * | 1899-09-14 | 1900-03-06 | Stanhope Boal | Heater. |
| US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
| DE3424893A1 (de) | 1984-07-06 | 1986-02-06 | Agfa-Gevaert Ag, 5090 Leverkusen | Photographisches silberhalogenidaufzeichnungsmaterial |
| US5858358A (en) * | 1992-04-07 | 1999-01-12 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
| IL92382A (en) * | 1988-11-23 | 1994-12-29 | Univ Michigan | Use of a ligand specific for CD28 in the manufacture of medicament |
| US6352694B1 (en) * | 1994-06-03 | 2002-03-05 | Genetics Institute, Inc. | Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells |
| US6905680B2 (en) * | 1988-11-23 | 2005-06-14 | Genetics Institute, Inc. | Methods of treating HIV infected subjects |
| US6685941B1 (en) * | 1988-11-23 | 2004-02-03 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods of treating autoimmune disease via CTLA-4Ig |
| US5580756A (en) * | 1990-03-26 | 1996-12-03 | Bristol-Myers Squibb Co. | B7Ig fusion protein |
| US7070776B1 (en) * | 1990-03-26 | 2006-07-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for blocking binding of CD28 receptor to B7 |
| US5173414A (en) | 1990-10-30 | 1992-12-22 | Applied Immune Sciences, Inc. | Production of recombinant adeno-associated virus vectors |
| US6277969B1 (en) * | 1991-03-18 | 2001-08-21 | New York University | Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
| CA2110518C (en) | 1991-06-27 | 2007-05-22 | Peter S. Linsley | Ctla4 receptor, fusion proteins containing it and uses thereof |
| US5844095A (en) | 1991-06-27 | 1998-12-01 | Bristol-Myers Squibb Company | CTLA4 Ig fusion proteins |
| US5770197A (en) | 1991-06-27 | 1998-06-23 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for regulating the immune response using B7 binding molecules and IL4-binding molecules |
| US6090914A (en) | 1991-06-27 | 2000-07-18 | Bristol-Myers Squibb Company | CTLA4/CD28Ig hybrid fusion proteins and uses thereof |
| US5637481A (en) | 1993-02-01 | 1997-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell |
| US5851795A (en) | 1991-06-27 | 1998-12-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Soluble CTLA4 molecules and uses thereof |
| US5624823A (en) * | 1991-11-22 | 1997-04-29 | The General Hospital Corporation | DNA encoding procine interleukin-10 |
| US5958403A (en) | 1992-02-28 | 1999-09-28 | Beth Israel Hospital Association | Methods and compounds for prevention of graft rejection |
| DE69333580D1 (de) | 1992-04-07 | 2004-09-09 | Univ Michigan | Immunregulation über die cd28-route |
| US5747034A (en) * | 1992-07-09 | 1998-05-05 | Chiron Corporation | Methods and materials for the induction of T cell anergy |
| US5397703A (en) | 1992-07-09 | 1995-03-14 | Cetus Oncology Corporation | Method for generation of antibodies to cell surface molecules |
| US5773253A (en) | 1993-01-22 | 1998-06-30 | Bristol-Myers Squibb Company | MYPPPY variants of CTL A4 and uses thereof |
| ES2240962T3 (es) | 1993-06-04 | 2005-10-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Metodo para estimular selectivamente la proliferacion de celulas t. |
| AU7107794A (en) | 1993-06-10 | 1995-01-03 | Regents Of The University Of Michigan, The | Cd28 pathway immunosuppression |
| ES2120067T3 (es) | 1993-09-02 | 1998-10-16 | Dartmouth College | Metodos para inducir tolerancia de celulas t antigeno especifica. |
| EP0806204A4 (en) | 1993-12-01 | 2001-06-27 | Sankyo Co | PRODUCTION INHIBITOR OF INFLAMMATORY CYTOKIN CONTAINING A POLYPRENYL DERIVATIVE AS AN ACTIVE SUBSTANCE |
| US5683693A (en) | 1994-04-25 | 1997-11-04 | Trustees Of Dartmouth College | Method for inducing T cell unresponsiveness to a tissue or organ graft with anti-CD40 ligand antibody or soluble CD40 |
| AU1333195A (en) | 1994-06-03 | 1996-01-04 | Dana-Farber Cancer Institute | Methods for selectively stimulating proliferation of t cells |
| US6719972B1 (en) * | 1994-06-03 | 2004-04-13 | Repligen Corporation | Methods of inhibiting T cell proliferation or IL-2 accumulation with CTLA4- specific antibodies |
| CA2191733A1 (en) * | 1994-06-07 | 1995-12-21 | Daniel A. Vallera | Methods for inhibiting antigen specific t cell responses |
| US5634055A (en) * | 1994-09-27 | 1997-05-27 | Bidplus, Inc. | Method for selecting assignments |
| AU4158396A (en) | 1994-11-10 | 1996-06-06 | Dana-Farber Cancer Institute | Methods for inhibiting graft versus host disease in bone marrow transplantation |
| US5876950A (en) | 1995-01-26 | 1999-03-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Monoclonal antibodies specific for different epitopes of human GP39 and methods for their use in diagnosis and therapy |
| US5824655A (en) | 1995-02-15 | 1998-10-20 | The University Of Utah | Anti-transforming growth factor-β gene therapy |
| US5993800A (en) | 1995-06-05 | 1999-11-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for prolonging the expression of a heterologous gene of interest using soluble CTLA4 molecules and an antiCD40 ligand |
| US6113898A (en) | 1995-06-07 | 2000-09-05 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies |
| US6750334B1 (en) * | 1996-02-02 | 2004-06-15 | Repligen Corporation | CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor |
| AU710998B2 (en) * | 1996-03-20 | 1999-10-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for inhibiting an immune response by blocking the GP39/CD40 and CTLA4 /CD28/B7 pathways and compositions for use therewith |
| JPH1067653A (ja) * | 1996-06-17 | 1998-03-10 | Eisai Co Ltd | 関節疾患治療剤 |
| US6495579B1 (en) * | 1996-12-02 | 2002-12-17 | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | Method for treating multiple sclerosis |
| KR19980066046A (ko) | 1997-01-18 | 1998-10-15 | 정용훈 | 고역가의 CTLA4-Ig 융합단백질 |
| US20030219863A1 (en) * | 1997-01-31 | 2003-11-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Soluble CTLA4 mutant molecules and uses thereof |
| ZA98533B (en) * | 1997-01-31 | 1999-07-22 | Bristol Myers Squibb Co | Soluble CTLA4 mutant molecules and uses thereof. |
| IL133070A0 (en) | 1997-06-11 | 2001-03-19 | Us Navy | Composition and method to prevent graft rejection and other counter-adaptive t lymphocyte mediated immune responses |
| EP0947524A1 (en) * | 1998-03-30 | 1999-10-06 | Upither B.V. | Novel peptides for the treatment of autoimmune diseases |
| AU2999199A (en) * | 1998-04-03 | 1999-10-25 | Osiris Therapeutics, Inc. | Mesenchymal stem cells as immunosuppressants |
| WO1999062525A1 (en) * | 1998-06-05 | 1999-12-09 | Supergen, Inc. | Compositions comprising methotrexate and pentostatin for treating rheumatoid arthritis |
| JP2000086519A (ja) * | 1998-09-17 | 2000-03-28 | Mitsui Chemicals Inc | 抗リウマチ薬効果増強剤 |
| IL126681A0 (en) | 1998-10-21 | 1999-08-17 | Opperbas Holding Bv | Treatment of trauma-related conditions |
| US6040292A (en) * | 1999-06-04 | 2000-03-21 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating diabetes |
| JP2003520828A (ja) | 2000-01-27 | 2003-07-08 | ジェネティクス インスティテュート，エルエルシー | Ｃｔｌａ４（ｃｄ１５２）に対する抗体、これを含む結合体、およびその使用 |
| WO2001090122A2 (en) | 2000-05-23 | 2001-11-29 | Genaissance Pharmaceuticals, Inc. | Haplotypes of the ctla4 gene |
| TR200402703T4 (tr) | 2000-05-26 | 2004-11-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Çözünür CTLA4 mutantları ve bunların kullanımı. |
| US7094874B2 (en) * | 2000-05-26 | 2006-08-22 | Bristol-Myers Squibb Co. | Soluble CTLA4 mutant molecules |
| CA2411962A1 (en) * | 2000-06-09 | 2001-12-20 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for regulating a cell-mediated immune response by blockinglymphocytic signals and by blocking lfa-1 mediated adhesion |
| TR201807700T4 (tr) * | 2000-07-03 | 2018-06-21 | Squibb Bristol Myers Co | Çözünür CTLA4 mutant moleküllerinin kullanımları. |
| US20040022787A1 (en) * | 2000-07-03 | 2004-02-05 | Robert Cohen | Methods for treating an autoimmune disease using a soluble CTLA4 molecule and a DMARD or NSAID |
| PL375139A1 (en) * | 2001-01-26 | 2005-11-28 | Emory University | Methods of inducing organ transplant tolerance and correcting hemoglobinopathies |
| EP1397153B1 (en) * | 2001-05-23 | 2008-04-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for protecting allogeneic islet transplant using soluble ctla4 mutant molecules |
-
2001
- 2001-07-02 TR TR2018/07700T patent/TR201807700T4/tr unknown
- 2001-07-02 IL IL15359301A patent/IL153593A0/xx unknown
- 2001-07-02 EP EP08001340.2A patent/EP1935427B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 EP EP01952420A patent/EP1372696B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 AU AU7317401A patent/AU7317401A/xx active Pending
- 2001-07-02 PL PL389002A patent/PL212205B1/pl unknown
- 2001-07-02 UY UY26815A patent/UY26815A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-07-02 AR ARP010103156A patent/AR035037A1/es active IP Right Grant
- 2001-07-02 ES ES01952420T patent/ES2310557T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 TW TW097137769A patent/TWI322153B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 AU AU2001273174A patent/AU2001273174B2/en not_active Expired
- 2001-07-02 PT PT80013402T patent/PT1935427T/pt unknown
- 2001-07-02 TW TW090116137A patent/TWI311564B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 DE DE60135029T patent/DE60135029D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 EP EP18158752.8A patent/EP3384924A1/en not_active Withdrawn
- 2001-07-02 RU RU2003103098/14A patent/RU2287340C2/ru active
- 2001-07-02 DK DK01952420T patent/DK1372696T3/da active
- 2001-07-02 LT LTEP08001340.2T patent/LT1935427T/lt unknown
- 2001-07-02 MY MYPI20013159A patent/MY137552A/en unknown
- 2001-07-02 SI SI200120046A patent/SI21078A/sl not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 CN CNB018122299A patent/CN1318086C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 EP EP10184596.4A patent/EP2281568A3/en not_active Withdrawn
- 2001-07-02 BR BR0112104-9A patent/BR0112104A/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-07-02 KR KR1020087005505A patent/KR100864120B1/ko active IP Right Grant
- 2001-07-02 SK SK1774-2002A patent/SK287940B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 CA CA2630062A patent/CA2630062C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 DK DK08001340.2T patent/DK1935427T3/en active
- 2001-07-02 SI SI200131067T patent/SI1935427T1/en unknown
- 2001-07-02 ES ES08001340.2T patent/ES2667203T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 MX MXPA02012603A patent/MXPA02012603A/es active IP Right Grant
- 2001-07-02 WO PCT/US2001/021204 patent/WO2002002638A2/en active Application Filing
- 2001-07-02 SI SI200130864T patent/SI1372696T1/sl unknown
- 2001-07-02 HU HU0900660A patent/HU227669B1/hu unknown
- 2001-07-02 CZ CZ20024261A patent/CZ303959B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-07-02 KR KR1020087019039A patent/KR100895552B1/ko active Protection Beyond IP Right Term
- 2001-07-02 KR KR10-2003-7000018A patent/KR20030017606A/ko active Application Filing
- 2001-07-02 HU HU0301727A patent/HU226847B1/hu active Protection Beyond IP Right Term
- 2001-07-02 CA CA002413190A patent/CA2413190C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 PT PT01952420T patent/PT1372696E/pt unknown
- 2001-07-02 US US09/898,195 patent/US7455835B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-02 EE EEP200300004A patent/EE05378B1/xx active Protection Beyond IP Right Term
- 2001-07-02 JP JP2002507889A patent/JP2004517806A/ja active Pending
- 2001-07-02 PL PL365942A patent/PL207534B1/pl unknown
- 2001-07-02 AT AT01952420T patent/ATE401909T1/de active
- 2001-07-02 RS YUP-1011/02A patent/RS50811B/sr unknown
- 2001-11-14 PE PE2001001131A patent/PE20020772A1/es not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-12-06 BG BG107362A patent/BG66024B1/bg unknown
- 2002-12-11 ZA ZA2002/10058A patent/ZA200210058B/en unknown
- 2002-12-23 IL IL153593A patent/IL153593A/en active IP Right Grant
- 2002-12-27 NO NO20026264A patent/NO20026264L/no not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-01-02 IS IS6667A patent/IS2834B/is unknown
- 2003-01-07 LT LT2003002A patent/LT5063B/lt not_active IP Right Cessation
- 2003-02-03 LV LVP-03-08A patent/LV12993B/en unknown
- 2003-02-03 HR HRP20030071AA patent/HRP20030071B1/hr not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-02-25 HK HK04101364.2A patent/HK1058486A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-05-09 AR ARP080101975A patent/AR066511A2/es unknown
- 2008-10-21 CY CY20081101167T patent/CY1109786T1/el unknown
- 2008-11-05 CY CY2008017C patent/CY2008017I2/el unknown
-
2010
- 2010-03-05 BG BG110611A patent/BG66454B1/bg unknown
- 2010-04-22 NO NO20100580A patent/NO20100580L/no not_active Application Discontinuation
- 2010-04-22 NO NO20100579A patent/NO20100579L/no unknown
- 2010-04-27 HU HUS1000008C patent/HUS1000008I1/hu unknown
-
2018
- 2018-05-23 CY CY20181100546T patent/CY1120577T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20210115107A1 (en) | Methods of treatment using ctla4 molecules | |
| RU2287340C2 (ru) | Способы лечения ревматических заболеваний с применением растворимого ctla4 | |
| US8722632B2 (en) | Methods for treating Sjogrens syndrome by administering a soluble CTLA4 molecule | |
| AU2001263466C1 (en) | Soluble CTLA4 mutant molecules and uses thereof | |
| AU2001273174A1 (en) | Methods for treating rheumatic diseases using a soluble CTLA4 molecule | |
| AU2006203199A1 (en) | Soluble CTLA4 mutant molecules and uses thereof |