PT1569929E

PT1569929E - Compostos e métodos para o tratamento ou prevenção de infecções por flavivírus

Info

Publication number: PT1569929E
Application number: PT03767343T
Authority: PT
Inventors: Nghe Nguyen-Ba; Oswy Z Pereira; Thumkunta Jagadeeswar Reddy; Laval Chan Chun Kong; Sanjoy Kumar Das; Liliane Halab; Bettina Hamelin; Carl Poisson; Melanie Proulx; Ming-Qiang Zhang
Original assignee: Virochem Pharma Inc
Priority date: 2002-12-10
Filing date: 2003-12-09
Publication date: 2010-06-18
Also published as: US20080269481A1; US8357718B2; CN1795190A; ES2345438T3; US20050009804A1; US7402608B2; US8829030B2; DE60332482D1; KR101058696B1; KR20060023109A; US20130096106A1; CN100413861C

Description

ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

DESCRIÇÃO "Compostos e métodos para o tratamento ou prevenção de infecções por Flavivírus"

Campo do invento 0 presente invento refere-se a novos compostos e a um método para o tratamento ou a prevenção de infecções por Flavivirus utilizando novos compostos.

Antecedentes do invento A hepatite é uma doença que ocorre em todo o mundo. Ela é geralmente de natureza virai, embora haja outras causas conhecidas. A hepatite virai é de longe a forma mais comum de hepatite. Quase 750000 americanos são afectados pela hepatite todos os anos, e desses mais de 150000 são infectados pelo virus da hepatite C ("VHC"). O VHC é um virus de ARN de cadeia positiva pertencente à família Flaviviridae e apresenta uma relação próxima com os pestivírus, que incluem o vírus da peste suína clássica e o vírus da diarreia virai bovina (VDVB). Crê-se que o vírus VHC se replica através da produção de um molde de ARN de cadeia negativa complementar. Devido à inexistência de um sistema de replicação eficiente em cultura para o vírus, as partículas de VHC foram isoladas a partir de plasma humano combinado, mostrando-se, por meio de microscopia electrónica, que possuíam um diâmetro de cerca de 50-60 nm. O genoma do vírus VHC é um ARN de cadeia simples positiva com cerca de 9600 pb que codifica uma poliproteína com 3009-3030 aminoácidos, a qual é clivada, co- e pós-tradução, por proteinases celulares e por duas proteinases virais em proteínas virais maduras (núcleo, El, E2, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5B) . Crê-se que as proteínas estruturais, El e E2, as principais glicoproteínas estão integradas num envelope lipídico virai e formam hetero-dímeros estáveis. Crê-se igualmente que a proteína estrutural do núcleo interage com o genoma de ARN virai para formar a nucleocápside. As proteínas não estruturais designadas por NS2 a NS5 incluem proteínas com funções enzimáticas envolvidas na replicação do vírus e no processamento proteico, incluindo uma 2 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ polimerase, protease e helicase. A principal fonte de contaminação pelo VHC é o sangue. A magnitude da infecção pelo VHC como um problema de saúde é ilustrada pela sua prevalência entre os grupos de maior risco. Por exemplo, 60% a 90% dos hemofílicos e mais de 80% dos consumidores de drogas intravenosas nos países ocidentais estão infectados cronicamente com o VHC. No caso de consumidores de drogas intravenosas, a prevalência varia entre cerca de 28% e 70% dependendo da população estudada. Nos últimos anos, a proporção de novas infecções pelo VHC associadas a pós-transfusão sofreu uma redução marcada devido aos avanços nas ferramentas de diagnóstico utilizadas para rastrear os dadores de sangue. O único tratamento actualmente disponível para a infecção pelo VHC é o interferão α (IFN-oí) . Contudo, de acordo com diferentes estudos clínicos, apenas 70% dos doentes tratados normalizam os níveis de alanina-amino-transferase (ALT) no soro e, após a suspensão do IFN, 35% a 45% destes indivíduos respondentes têm uma recidiva. Em geral, somente 20% a 25% dos doentes apresentam respostas ao IFN a longo prazo. Os estudos clínicos têm mostrado que o tratamento combinado com IFN e ribavirina (RIBA) resulta numa resposta clínica superior à obtida com o IFN sozinho. Diferentes genótipos do VHC respondem de forma diferente à terapia com IFN: o genótipo lb é mais resistente à terapia com IFN que o tipo 2 e 3.

Por conseguinte, existe uma grande necessidade de desenvolver agentes antivirais.

Sumário do invento

Num aspecto, o presente invento proporciona um composto de fórmula:

3 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: Z é ciclo-hexilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados de forma independente entre oxo, halogéneo, S02Rf, CONRgRh, alquilo em Ci-6, aralquilo em C6-i2, arilo em C6-i2, alquiloxi em Ci-6, C (0)-alquilo em Ci-β, heterociclo em C3-10, hidroxilo, NRgRh, C(0)0Rf ou ciano;

Rf, Rg e Rh são, em cada caso e de modo independente, H ou alquilo em C1-6; Y é fenilo não substituído ou fenilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados de forma independente entre halogéneo, nitro, S02Rf, alquilo em C1-6, alquiloxi em C1-6, C (0)-alquilo em C1-6, C(0)0Rf, ciano e azido; X é ciclo-hexilo não substituído ou substituído com um ou mais substituintes seleccionados de modo independente entre alquilo em Ci_6, halogéneo, alcenilo em C2_6, alcinilo em C2_6 ou alquiloxi em Ci_6; m é 0 . É também descrito um método de tratamento ou prevenção de uma infecção virai por Flaviviridae num hospedeiro, que compreende a administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, composição ou combinação do invento.

Noutro aspecto, é proporcionada uma combinação que compreende um composto do invento e um ou mais agentes adicionais seleccionados entre um inibidor de protease de serina virai, um inibidor de polimerase virai e um inibidor de helicase virai, um agente imunomodulador, um agente antioxidante, um agente antibacteriano ou um agente anti-sentido.

Noutro aspecto, é fornecida uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto do invento e pelo menos um veículo ou um excipiente farmaceuticamente aceitável. 4 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ É adicionalmente descrita a utilização de um composto, composição ou combinação do invento para tratar ou prevenir uma infecção virai por Flaviviridae num hospedeiro.

Ainda noutro aspecto, é descrita a utilização de um composto do invento para inibir ou reduzir a actividade da polimerase virai num hospedeiro.

Noutro aspecto ainda, é proporcionada a utilização de um composto do invento para o fabrico de um medicamento destinado ao tratamento ou à prevenção de uma infecção virai por Flaviviridae num hospedeiro.

Descrição detalhada do invento

Numa concretização, os compostos do presente invento compreendem aqueles em que estão presentes as concretizações que se seguem, quer independentemente quer em combinação. 0 presente invento proporciona um composto de fórmula:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: Z é ciclo-hexilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados de forma independente entre oxo, halogéneo, S02Rf, CONRgRh, alquilo em Ci-6, aralquilo em C6-i2, arilo em C6-i2/ alquiloxi em Ci-6, C (0) -alquilo em Ci_6, heterociclo em C3-10/ hidroxilo, NRgRh, C(0)0Rf ou ciano;

Rf, Rg e Rh são, em cada caso e de modo independente, H ou alquilo em Ci_6; 5 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ Υ é fenilo não substituído ou fenilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados de forma independente entre halogéneo, nitro, S02Rf, alquilo em Ci-6, alquiloxi em Ci_6, C(0)-alquilo em Ci_6, C(0)0Rf, ciano e azido; X é ciclo-hexilo não substituído ou substituído com um ou mais substituintes seleccionados de modo independente entre alquilo em Ci-6, halogéneo, alcenilo em C2-6/ alcinilo em C2-6 ou alquiloxi em Ci-ei m é 0 .

Num aspecto, o presente invento proporciona novos compostos que incluem:

Composto 1 trifluoroacetato de 3-{[(2-carboxi-5-fenil- tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-piperidínio;

Composto 2 trifluoroacetato de 2-{[ (2-carboxi-5-fenil- tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-piperidínio;

Composto 3 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- piridin-3-ilmetil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 4 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- piridin-4-ilmetil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 5 ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 6 ácido 3-[azepan-4-il-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 7 ácido 3-[(2,4-dicloro-benzoíl)-[l,3]dioxolan- 2-ilmetil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 8 ácido 3-[[1,3]dioxolan-2-ilmetil-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; 6 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 9 ácido 3-[ (1-fluoro-4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 10 ácido 3-[(l-fluoro-4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 11 cloreto de 4-[(2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio;

Composto 12 ácido 3-[(2-acetilamino-4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 13 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4- oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 14 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- piridin-2-ilmetil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 15 ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 16 ácido 3-[(4-hidroxiimino-ciclo-hexil)-(4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 17 ácido 3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hex-3- enocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 18 ácido 3-[(l-azidometil-2-metil-butil)-(2,4- dicloro-benzoil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 19 trifluoroacetato de 2-[(2-carboxi-5-fenil- tiofen-3-il)-(2-cloro-benzoíl)-amino]-3-metil-pentilamónio;

Composto 20 ácido 3-[(l-aminometil-2-metil-butil)-(2,4- dicloro-benzoí1)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 21 trifluoroacetato de {2-[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(2,4-dicloro-benzoíl)-amino]-propil}-trimetil-amónio; 7 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 22 ácido 3-[isopropil-(5-metil-[1,3]dioxano-2- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 23 cloreto de 4-[[2-carboxi-5-(4-fluoro-fenil)-tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio;

Composto 24 ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-[(2-hidroxi-4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 25 ácido 3-[(4-metoxiimino-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil ) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 26 ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4- metil-ciclo-hex-l-enocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 27 ácido 3-[isopropil-(5-metil-tetra-hidro-piran- 2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 28 ácido 3-[isopropil-(4-metileno-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 29 ácido 3-[isopropil-(5-metil-tetra-hidro-piran- 2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 30 ácido 3-[isopropil-(5-metil-3,6-di-hidro-2h- piran-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 31 ácido 3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-(tetra-hidro-piran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 32 ácido 3-[(2-azido-l-metil-etil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 33 ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(i-metil-piperidin-4-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; 8 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 34 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- (tetra-hidro-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 35 cloreto de 3-{ [ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3- il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-1-metil-piperidínio;

Composto 36 ácido 3-[(2-amino-l-metil-etil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil ) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 37 ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-oxo-tetra-hidro-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2- carboxilico;

Composto 38 cloreto de 4-{[(2-carboxi-5-fenil-tiofen-3- il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-1-metil- piperidínio;

Composto 39 ácido 3-[ (l-etil-piperidin-4-il)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 40 ácido 3-[ (l-isopropil-piperidin-4-il)-(4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 41 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- piperidin-4-il-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 42 ácido 3-[[1-(4-metoxi-benzil)-2-oxo-piperidin-4-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 43 ácido 3-[(2-azido-l-metil-etil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 44 ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 45 cloreto de 4-[(2-carboxi-5-p-tolil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio; 9 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 46 ácido 3-[ (4-metoxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 47 ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexanocarbonil)-(4-metil-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 48 ácido 3-[ (l-acetil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 49 cloreto de 4-[(2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-azepânio;

Composto 50 ácido 5- (4 — fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 51 ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 52 ácido 3-[ (l-benzil-piperidin-4-il)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 53 ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4- metil-ciclo-hex-3-enocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 54 cloreto de 4-[[2-carboxi-5-(3-fluoro-fenil)- tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio;

Composto 55 cloreto de 4-[[2-carboxi-5-(4-metoxi-fenil)- tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio;

Composto 56 cloreto de 4-[ [2-carboxi-5-(4-nitro-fenil)- tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio;

Composto 57 cloreto de 4-[[2-carboxi-5-(4-cloro-fenil)- tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio; 10 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 58 cloreto de 4-[[2-carboxi-5-(4-ciano-fenil)-tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio;

Composto 59 ácido 5-(4-cloro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 60 ácido 3-[ (4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-(4-metoxi-fenil)-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 61 ácido 5- (4-ciano-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil) -(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 62 ácido 3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-isopropil-amino]-5-(4-metoxi-fenil)-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 63 ácido 3-[(1-formil-piperidin-4-il)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 64 ácido 3-[Ν',N'-dimetil-N-(4-metil-ciclo- hexano-carbonil)-hidrazino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 65 ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1- metil-l-oxi-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 66 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1- metil-l-oxi-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 67 ácido 3-[(2-amino-ciclo-hexil)-(2,4-dicloro- benzoíl)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 68 ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1- oxo-tetra-hidro-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; 11 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 69 ácido 5-(4 — fluorofenil)-((4-metil-ciclo- hexano-carbonil)-1-(metil-piperidin-3-ilmetil)-amino)-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 70 ácido 3-[ (l-metanossulfonil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 71 ácido 3-[(l-metilcarbamoil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 72 ácido 3-[N- (2,4-dicloro-benzoí1)-Ν',Ν'-dimetil-hidrazino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Num aspecto, o presente invento proporciona novos compostos que incluem:

Composto 73 ácido 5-(4 — fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 74 ácido 3-[(l-metilcarbamoíl-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 75 ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1- metil-2-oxo-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 76 ácido 3-[ (4-carboxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 77 ácido 3-[ (l-ciano-piperidin-4-il)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 78 ácido 3-[ (4-carboxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; 12 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 79 ácido 5-(3,4-difluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi- ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 80 ácido 5'-acetil-4-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-[2,2']bitiofenil-5-carboxílico;

Composto 81 ácido 3-[(l-carbamoil-piperidin-4-il)-(4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 82 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(7- oxo-azepan-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 83 ácido 3-[(l-aminooxalil-piperidin-4-il)-(4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 84 ácido 3-[etil-(4-metil-benzoil)-amino]-5- fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 85 ácido 5-(4-acetil-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo- hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 86 ácido 3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 87 ácido 3-[(3-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 88 ácido 3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 89 ácido 3-[(3-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil ) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 90 ácido 3-[(3-hidroxi-ciclopentil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil ) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; 13 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Numa concretização, o presente invento proporciona novos compostos ácido 3-[(cicloalquilo com 6 membros-carbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico seleccionados entre:

Composto 1 trifluoroacetato de 3-{[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-piperidinio;

Composto 2 trifluoroacetato de 2-{[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-piperidinio;

Composto 6 ácido 3-[azepan-4-il-(4-metil-ciclo-hexano carbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 8 ácido 3-[[1,3]dioxolan-2-ilmetil-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 9 ácido 3-[ (l-fluoro-4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 10 ácido 3-[(1-fluoro-4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 11 cloreto de 4-[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidinio;

Composto 12 ácido 3-[(2-acetilamino-4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 13 ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; 14 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 14 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- piridin-2-ilmetil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 15 ácido 3-[ (4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 17 ácido 3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hex-3-eno- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 25 ácido 3-[(4-metoxiimino-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 28 ácido 3-[isopropil-(4-metileno-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 33 ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-metil-piperidin-4-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 35 cloreto de 3-{ [ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-1-metil-piperidínio;

Composto 36 ácido 3-[ (2-amino-l-metil-etil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; 15 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 37 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-oxo-hexa-hidro-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 38 cloreto de 4-{ [ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-1-metil-piperidínio;

Composto 41 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- piperidin-4-il-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 43 ácido 3-[(2-azido-l-metil-etil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil )-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 46 ácido 3-[ (4-metoxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 47 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4- metil-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 48 ácido 3-[ (l-acetil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 49 cloreto de 4-[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-azepânio;

Composto 52 ácido 3-[(l-benzil-piperidin-4-il)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 63 ácido 3-[(l-formil-piperidin-4-il)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; 16 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 64 ácido 3-[Ν',Ν'-dimetil-N-(4-metil-ciclo- hexano-carbonil)-hidrazino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 65 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1- metil-l-oxi-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 66 ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1- metil-l-oxi-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 68 ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1- oxo-hexa-hidro-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 71 ácido 3-[ (l-metilcarbamoil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 74 ácido 3-[ (l-metilcarbamoil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 75 ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1- metil-2-oxo-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 77 ácido 3-[(l-ciano-piperidin-4-il)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil ) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 78 ácido 3-[ (4-carboxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; 17 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 81 ácido 3-[ (1-carbamoíl-piperidin-4-il) -(4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 82 ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(7-oxo-azepan-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 83 ácido 3-[(l-amino-oxalil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2- carboxílico;

Composto 86 ácido 3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 88 ácido 3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 89 ácido 3-[(3-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 90 ácido 3-[(3-hidroxi-ciclopentil)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil )-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Numa concretização, o presente invento proporciona novos compostos de ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico.

Numa concretização, o presente invento proporciona novos compostos contendo ácido 3-[(benzoilo não substituído ou substituído)-amino]-5-feniltiofeno-2-carboxílico seleccionados entre:

Composto 7 ácido 3-[(2,4-dicloro-benzoí1)-[1,3]dioxolan- 2-ilmetil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; 18 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Composto 18 ácido 3-[(l-azidometil-2-metil-butil) -(2,4- dicloro-benzoí1)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 20 ácido 3-[(l-aminometil-2-metil-butil)-(2,4- dicloro-benzoí1)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico;

Composto 21 trifluoroacetato de {2-[ (2-carboxi-5-fenil- tiofen-3-il)-(2,4-dicloro-benzoil)-amino]-propil}-trimetil-amónio;

Composto 67 ácido 3-[(2-amino-ciclo-hexil)-(2,4-dicloro-benzoil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 72 ácido 3-[N-(2,4-dicloro-benzoil)-Ν',N'- dimetil-hidrazino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 84 ácido 3-[etil-(4-metil-benzoíl)-amino]-5- fenil-tiofeno-2-carboxílico; ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Numa concretização, o presente invento proporciona novos compostos de ácido 3-[(heterociclo com 6 membros-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico seleccionados entre:

Composto 27 ácido 3-[isopropil-(5-metil-tetra-hidro-piran- 2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 29 ácido 3-[isopropil-(5-metil-tetra-hidro-piran- 2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico;

Composto 30 ácido 3-[isopropil-(5-metil-3,6-di-hidro-2h- piran-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 19 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Numa concretização, a infecção virai é seleccionada entre as infecções causadas por Flavivirus.

Numa concretização, a infecção por Flavivirus é seleccionada entre o virus da hepatite C (VHC), o virus da diarreia virai bovina (VDVB), o virus da peste suina clássica, o virus da dengue, o virus da encefalite japonesa e o virus da febre amarela.

Noutra concretização, a infecção por Flavivirus é a infecção virai hepatite C. É descrito um método de tratamento ou prevenção de uma infecção virai por Flaviviridae num hospedeiro, que compreende a administração ao hospedeiro de uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto de acordo com o invento aqui descrito.

Um método para o tratamento ou prevenção de uma infecção virai por Flaviviridae num hospedeiro compreende administrar ao hospedeiro uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto de acordo com o invento aqui descrito e compreende administrar adicionalmente pelo menos um agente adicional seleccionado entre um inibidor de protease de serina virai, um inibidor de polimerase virai, um inibidor de helicase virai, um agente imunomodulador, um agente antioxidante, um agente antibacteriano, uma vacina terapêutica, um agente hepatoprotector ou um agente anti-sentido. 0 agente adicional poderá ser interferão a, ribavirina, cardo mariano (silybum marianum), interleucina-12, amantadina, ribozima, timosina, N-acetilcisteína ou ciclosporina. A infecção virai por Flaviviridae poderá ser a infecção virai hepatite C (VHC).

Numa concretização, o presente invento proporciona uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto de acordo com o invento aqui descrito e pelo menos um veiculo ou um excipiente farmaceuticamente aceitável. 20 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Numa concretização, ο presente invento proporciona uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto de acordo com o invento aqui descrito e pelo menos um veiculo ou um excipiente farmaceuticamente aceitável e compreendendo adicionalmente pelo menos um agente adicional seleccionado entre um inibidor de protease de serina virai, um inibidor de polimerase virai, um inibidor de helicase virai, um agente imunomodulador, um agente antioxidante, um agente antibacteriano, uma vacina terapêutica, um agente hepatoprotector ou um agente anti-sentido.

Noutra concretização, o agente adicional é o interferão a, a ribavirina, o cardo mariano (silybum marianum), a interleucina-12, a amantadina, a ribozima, a timosina, a N-acetilcisteína ou a ciclosporina.

Numa concretização, o inibidor de protease de serina virai é um inibidor de protease de serina de Flaviviridae.

Numa concretização, o inibidor de polimerase virai é um inibidor de polimerase de Flaviviridae.

Numa concretização, o inibidor de helicase virai é um inibidor de helicase de Flaviviridae.

Em concretizações adicionais: o inibidor de protease de serina virai é um inibidor da protease de serina do VHC; o inibidor de polimerase virai é um inibidor da polimerase do VHC; o inibidor de helicase virai é um inibidor da helicase do VHC. É descrito um método para inibir ou reduzir a actividade da polimerase virai num hospedeiro, que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com o invento aqui descrito. 21 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ É também descrito um método para inibir ou reduzir a actividade da polimerase virai num hospedeiro, que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com o invento aqui descrito e compreende adicionalmente administrar um ou mais inibidores de polimerase virai. A polimerase virai poderá ser uma polimerase virai de Flaviviridae. A polimerase virai poderá ser uma ARN-polimerase dependente de ARN. A polimerase virai poderá ser a polimerase do VHC.

Numa concretização, é proporcionada uma combinação que compreende pelo menos um composto de acordo com o invento aqui descrito e um ou mais agentes adicionais seleccionados entre um inibidor de protease de serina virai, um inibidor de polimerase virai e um inibidor de helicase virai, um agente imunomodulador, um agente antioxidante, um agente antibacteriano, uma vacina terapêutica, um agente hepatoprotector ou um agente anti-sentido. 0 composto e o agente adicional poderão ser administrados sequencialmente. 0 composto e o agente adicional poderão ser administrados simultaneamente.

As combinações referidas acima poderão ser convenientemente proporcionadas para utilização sob a forma de uma formulação farmacêutica e, deste modo, as formulações farmacêuticas compreendendo uma combinação tal como definida acima, juntamente com um veiculo farmaceuticamente aceitável para ela, constituem um aspecto adicional do invento.

Os componentes individuais para utilização no método descrito ou nas combinações do presente invento poderão ser administrados quer sequencial quer simultaneamente, em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas. 22 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ É descrita a utilização de um composto de acordo com o invento aqui descrito para tratar ou prevenir uma infecção virai por Flaviviridae num hospedeiro.

Numa concretização, o presente invento proporciona a utilização de um composto de acordo com o invento aqui descrito para a produção de um medicamento destinado ao tratamento ou à prevenção de uma infecção virai por Flaviviridae num hospedeiro. A utilização de um composto de acordo com o invento aqui descrito para inibir ou reduzir a actividade da polimerase virai num hospedeiro é descrita.

Os peritos na especialidade compreenderão que os compostos de acordo com o presente invento podem conter um centro quiral. Os compostos da fórmula poderão, assim, existir sob a forma de dois isómeros ópticos diferentes (isto é, enantiómeros ( + ) ou (-) ) . Todos estes enantiómeros e suas misturas, incluindo as misturas racémicas, estão incluídos no âmbito do invento. 0 enantiómero ou isómero óptico individual pode ser obtido por métodos bem conhecidos na especialidade, tais como HPLC quiral, resolução enzimática e auxiliares quirais.

Preferivelmente, os compostos do presente invento são proporcionados sob a forma de um enantiómero individual pelo menos 95%, mais preferivelmente pelo menos 97% e, ainda mais preferivelmente, pelo menos 99% isento do enantiómero correspondente.

Mais preferivelmente, os compostos do presente invento encontram-se sob a forma do enantiómero (+) pelo menos 95% isento do correspondente enantiómero (-).

Mais preferivelmente, os compostos do presente invento encontram-se sob a forma do enantiómero (+) pelo menos 97% isento do correspondente enantiómero (-).

Mais preferivelmente, os compostos do presente invento encontram-se sob a forma do enantiómero (+) pelo menos 99% isento do correspondente enantiómero (-). 23 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Numa concretização mais preferida, os compostos do presente invento encontram-se sob a forma do enantiómero (-) pelo menos 95% isento do correspondente enantiómero (+). Mais preferivelmente, os compostos do presente invento encontram-se sob a forma do enantiómero (-) pelo menos 97% isento do correspondente enantiómero (+).

Mais preferivelmente, os compostos do presente invento encontram-se sob a forma do enantiómero (-) pelo menos 99% isento do correspondente enantiómero (+).

Compreender-se-á igualmente que os compostos de acordo com o presente invento podem conter mais de um centro quiral. Os compostos da fórmula poderão, deste modo, existir sob a forma de diferentes diastereoisómeros. Todos estes diastereoisómeros e suas misturas estão incluidos no âmbito do invento. 0 diastereoisómero individual pode ser obtido por métodos bem conhecidos na especialidade, tais como HPLC, cristalização e cromatografia.

Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos do presente invento são igualmente proporcionados. Pelo termo sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos pretendem designar-se aqueles sais derivados de ácidos e bases orgânicos e inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Os exemplos de ácidos adequados incluem os ácidos cloridrico, bromidrico, sulfúrico, nitrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, láctico, salicilico, succinico, tolueno-p-sulfónico, tartárico, acético, trifluoroacético, citrico, metanossulfónico, fórmico, benzóico, malónico, naftaleno-2-sulfónico e benzeno-sulfónico. Outros ácidos como o ácido oxálico, embora não sejam eles próprios farmaceuticamente aceitáveis, poderão ser úteis como intermediários para a obtenção de compostos do invento e dos seus sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis.

Os sais derivados de bases apropriadas incluem os sais de metais alcalinos (por exemplo, sódio, litio, potássio), metais alcalino-terrosos (por exemplo, magnésio), amónio e NR4+ (em que R é alquilo em Ci_4) . 24 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

As referências subsequentes a um composto de acordo com o invento incluem os compostos e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Numa concretização do invento, o sal farmaceuticamente aceitável é um sal de sódio.

Numa aceitável concretização do invento, é um sal de litio. o sal farmaceuticamente

Numa aceitável concretização do invento, é um sal de potássio. o sal farmaceuticamente A Requerente também apresentou o pedido US regular co-pendente 10/166,031, em 11 de Junho de 2002, intitulado "COMPOSTOS E MÉTODOS PARA O TRATAMENTO OU PREVENÇÃO DE INFECÇÕES POR FLAVIVÍRUS", cujo conteúdo é aqui incorporado por referência.

Excepto se definido contrariamente, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o significado geralmente entendido por um perito na especialidade à qual este invento pertence. Em caso de conflito, o presente fascículo, incluindo as definições, prevalecerá. Adicionalmente, os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não se destinam a limitar o âmbito do invento que é definido pelas reivindicações.

Tal como utilizado neste pedido, o termo "alquilo" representa um grupo funcional hidrocarboneto de cadeia linear ou cadeia ramificada, que poderá estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes entre halogéneo, nitro, nitroso, SO3R12, PChRcRd, CONR13R14, alquilo em C1-6, alcenilo em C2-6/ alcinilo em C2-6, aralquilo em C6-12/ arilo em C6-12/ alquiloxi em C1-6, alceniloxi em C2-6, alciniloxi em C2-6, ariloxi em C6-12/ C (O)-alquilo em C1-6, C (O)-alcenilo em C2-6, C (O)-alcinilo em C2-6, C(0)-arilo em C6_i2, C (0) -aralquilo em C6-i2í heterociclo em C3_i0, hidroxilo, NR13Ri4, C(0)0Ri2, ciano, azido, amidino ou guanido; em que Ri2, Rc, Rd, R13 e R14 são seleccionados, cada um de forma independente, entre H, alquilo em Ci_i2, alcenilo em C2_ alcinilo em C2_i2, arilo em C6-14, heterociclo em C3_i2, 12/ 25 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ heteroaralquilo em C3-i8, aralquilo em Ce-ie! ou Rc e Rd são considerados em conjunto com os oxigénios para formar um heterociclo com 5 a 10 membros; ou R13 e R14 são considerados em conjunto com o azoto para formar um heterociclo com 3 a 10 membros. Os exemplos úteis de alquilo incluem o isopropilo, o etilo, o fluoro-hexilo ou o ciclopropilo. O termo alquilo também pretende incluir os alquilos em que um ou mais átomos de hidrogénio estão substituídos por um oxigénio (por exemplo, um benzoílo) ou um halogéneo, mais preferivelmente, o halogéneo é o flúor (por exemplo, CF3- ou CF3CH2-) . 0 termo "cicloalquilo" representa um alquilo cíclico. 0 termo cicloalquilo também pretende incluir um cicloalquilo contendo pelo menos um grupo insaturado. Os exemplos úteis de cicloalquilo incluem o ciclopropilo, o ciclobutilo, o ciclo-hexenilo, o ciclo-hexadienilo e o ciclo-hexilo.

Os termos "alcenilo" e "alcinilo" representam um alquilo contendo pelo menos um grupo insaturado (por exemplo, alilo, acetileno, etileno). O termo "arilo" representa um grupo funcional carbocíclico contendo pelo menos um anel do tipo benzenóide, que poderá estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes entre halogéneo, nitro, nitroso, SO3R12, P03RcRd, CONR13R14, alquilo em C1-6, alcenilo em C2-6, alcinilo em C2-6/ aralquilo em Ce-i2, arilo em Ce-i2, alquiloxi em Ci_6, alceniloxi em C2-6/ alciniloxi em C2-6, ariloxi em C6-i2, C (O)-alquilo em C1-6, C (O) -alcenilo em C2-è, C (O)-alcinilo em C2-6, C (O)-arilo em C6-12, C (O)-aralquilo em Ce-i2, heterociclo em C3-10, hidroxilo, NR13R14, C(0)0Ri2, ciano, azido, amidino ou guanido; em que R12, Rc, Rd, R13 e R14 são seleccionados, cada um de forma independente, entre H, alquilo em C1-12, alcenilo em C2-121 alcinilo em C2-12, arilo em C6-i4, heterociclo em C3-12, heteroaralquilo em C3-18/ aralquilo em C6-i8; ou Rc e Rd são considerados em conjunto com os oxigénios para formar um heterociclo com 5 a 10 membros; ou R13 e R14 são considerados em conjunto com o azoto para formar um heterociclo com 3 a 10 membros. Os exemplos de arilo incluem o fenilo e o naftilo. 26 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ Ο termo "aralquilo" representa um grupo arilo ligado ao átomo adjacente por um alquilo em Ci-6, alcenilo em Ci-β ou alcinilo em Ci_6 (por exemplo, benzilo) . 0 termo "heterociclo" representa um grupo funcional ciclico saturado ou insaturado, em que o referido grupo funcional ciclico está interrompido por pelo menos um heteroátomo (por exemplo, oxigénio, enxofre ou azoto) que poderá estar opcionalmente substituído com halogéneo, nitro, nitroso, SO3R12, PCgRcRd, CONR13R14, alquilo em C1-6, alcenilo em C2-6/ alcinilo em C2-6/ aralquilo em C6-12/ arilo em Cs-12/ alquiloxi em C1-6, alceniloxi em C2-6, alciniloxi em C2-6, ariloxi em Ce-12, C (0)-alquilo em Ci_6, C (0)-alcenilo em C2-6, C (0)-alcinilo em C2-6, C (0)-arilo em C6-i2, C (0)-aralquilo em C6-12, heterociclo em C3-10/ hidroxilo, NR13R14, C(0)0Ri2, ciano, azido, amidino ou guanido; em que R12, Rc, Rd, R13 e R14 são seleccionados, cada um de forma independente, entre H, alquilo em C1-12, alcenilo em C2-12/ alcinilo em C2-12, arilo em C6-14, heterociclo em C3-12, heteroaralquilo em C3-18, aralquilo em Ce-ie; ou Rc e Rd são considerados em conjunto com os oxigénios para formar um heterociclo com 5 a 10 membros; ou R13 e R14 são considerados em conjunto com o azoto para formar um heterociclo com 3 a 10 membros. Entende-se que o termo anel heterociclico representa um anel mono ou policiclico (por exemplo, biciclico). Os exemplos de anéis heterociclicos incluem, embora não estejam limitados a estes, epóxido, furano, benzofurano, isobenzofurano, oxatiolano, ditiolano, dioxolano, pirrol, pirrolidina, imidazol, piridina, pirimidina, indol, piperidina, morfolina, tiofeno e tiomorfolina. 0 termo "heteroaralquilo" representa um grupo heterociclico unido ao átomo adjacente por um grupo alquilo em C1-6, alcenilo em C1-6 ou alcinilo em C1-6.

Quando existe um átomo de enxofre presente, o átomo de enxofre pode encontrar-se em diferentes estados de oxidação, isto é, S, SO ou S02. Todos estes estados de oxidação estão no âmbito do presente invento. 27 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Quando existe um átomo de azoto presente, o átomo de azoto pode encontrar-se em diferentes estados de oxidação, isto é, N ou NO. Todos estes estados de oxidação estão no âmbito do presente invento. 0 termo "de forma independente" significa que um substituinte pode ter a mesma definição ou uma definição diferente para cada item.

Entender-se-á que a quantidade de um composto do invento necessária para uso no tratamento variará não só com o composto particular seleccionado, mas também com a via de administração, a natureza da condição para a qual é necessário tratamento, a idade e o estado do doente e, em último caso, ficará ao critério do médico assistente ou do veterinário. Em geral, contudo, uma dose adequada encontrar-se-á no intervalo compreendido entre cerca de 0,1 e cerca de 750 mg/kg de peso corporal por dia, preferivelmente no intervalo compreendido entre 0,5 e 60 mg/kg/dia, ainda mais preferivelmente no intervalo compreendido entre 1 e 20 mg/kg/dia. A dose desejada poderá apresentar-se convenientemente numa dose única ou como uma dose dividida administrada a intervalos apropriados, por exemplo, como duas, três, quatro ou mais doses por dia. O composto é administrado de modo conveniente sob uma forma farmacêutica unitária, por exemplo, contendo 10 a 1500 mg, convenientemente 20 a 1000 mg, mais convenientemente 50 a 700 mg de ingrediente activo por forma farmacêutica unitária.

Idealmente, o ingrediente activo deve ser administrado de forma a obterem-se concentrações plasmáticas máximas do composto activo compreendidas entre cerca de 1 e cerca de 75 μΜ, preferivelmente entre cerca de 2 e 50 μΜ, mais preferivelmente entre cerca de 3 e cerca de 30 μΜ. Isto poderá alcançar-se, por exemplo, por injecção intravenosa de uma solução do ingrediente activo a 0,1% a 5%, opcionalmente em solução salina, ou por administração oral como um bólus contendo cerca de 1 a cerca de 500 mg do ingrediente activo. Os niveis sanguíneos desejáveis poderão ser mantidos por meio 28 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ de uma infusão contínua para proporcionar cerca de 0,01 a cerca de 5,0 mg/kg/hora, ou por meio de infusões intermitentes contendo cerca de 0,4 a cerca de 15 mg/kg do ingrediente activo.

Quando os compostos do presente invento ou um dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis são utilizados em combinação com um segundo agente terapêutico activo contra o mesmo vírus, a dose de cada composto poderá ser igual ou poderá diferir da dose quando o composto é utilizado sozinho. As doses apropriadas serão facilmente avaliadas pelos peritos na especialidade.

Embora seja possível que, para uso em terapia, um composto do invento possa ser administrado sob a forma de reagente bruto, é preferível apresentar o ingrediente activo como uma composição farmacêutica. Assim, invento proporciona adicionalmente uma composição farmacêutica que compreende compostos do presente invento ou um seu derivado farmaceuticamente aceitável, juntamente com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis para esse fim, e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos e/ou profilácticos. 0(s) veículo(s) têm de ser "aceitáveis" no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não serem prejudiciais para o seu destinatário.

As composições farmacêuticas incluem as composições adequadas para administração oral, rectal, nasal, tópica (incluindo bucal e sublingual), transdérmica, vaginal ou parentérica (incluindo intramuscular, subcutânea e intravenosa) ou que estão numa forma apropriada para administração por inalação ou insuflação. As formulações poderão, quando apropriado, apresentar-se em doses discretas e poderão ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos na especialidade da farmácia. Todos os métodos incluem a etapa de associação do composto activo com veículos líquidos ou com veículos sólidos finamente divididos ou com ambos e em seguida, se necessário, a modelação do produto na formulação desejada.

As composições farmacêuticas apropriadas para administração oral poderão apresentar-se sob a forma de 29 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ unidades discretas tais como cápsulas, hóstias ou comprimidos, cada uma delas contendo uma quantidade predeterminada do ingrediente activo, como um pó ou grânulos, como uma solução, uma suspensão ou como uma emulsão. 0 ingrediente activo poderá também ser preparado como um bólus, um electuário ou uma pasta. Os comprimidos e as cápsulas para administração oral poderão conter excipientes convencionais tais como aglutinantes, cargas, lubrificantes, desintegrantes ou agentes molhantes. Os comprimidos poderão ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na especialidade. As preparações liquidas orais poderão encontrar-se sob a forma, por exemplo, de suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emulsões, xaropes ou elixires, ou poderão apresentar-se como um produto desidratado para constituição com água ou outro veiculo adequado antes da utilização. Estas preparações liquidas poderão conter aditivos convencionais tais como agentes de suspensão, agentes emulsionantes, veiculos não aquosos (que poderão incluir óleos comestíveis) ou conservantes.

Os compostos de acordo com o invento também poderão ser formulados para administração parentérica (por exemplo, por injecção, por exemplo, injecção em bólus ou infusão continua) e poderão apresentar-se numa forma farmacêutica unitária em ampolas, seringas pré-cheias, recipientes para uma infusão de pequeno volume ou recipientes multidose com um conservante adicionado. As composições poderão adoptar formas tais como suspensões, soluções ou emulsões em veiculos oleosos ou aquosos, e poderão conter agentes de formulação tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou dispersão. Em alternativa, o ingrediente activo poderá estar sob a forma de um pó, obtido por isolamento asséptico de um sólido estéril ou por liofilização a partir de uma solução, para constituição com um veiculo adequado, por exemplo, água estéril e apirogénica, antes da utilização.

Para administração tópica na epiderme, os compostos de acordo com o invento poderão ser formulados como unguentos, cremes ou loções, ou como um adesivo transdérmico. Estes adesivos transdérmicos poderão conter intensificadores de penetração como o linalol, o carvacrol, o timol, o citral, o mentol e o t-anetol. Os unguentos e cremes poderão, por exemplo, ser formulados com uma base aquosa ou oleosa com a 30 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ adição de agentes espessantes e/ou de gelificação adequados. As loções poderão ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e, geralmente, compreenderão também um ou mais agentes emulsionantes, agentes estabilizadores, agentes de dispersão, agentes de suspensão, agentes espessantes ou agentes corantes.

As composições adequadas para administração tópica na boca incluem rebuçados compreendendo o ingrediente activo numa base aromatizada, normalmente sacarose e goma arábica ou adragante, pastilhas compreendendo o ingrediente activo numa base inerte tal como gelatina e glicerina ou sacarose e goma arábica, e elixires bucais compreendendo o ingrediente activo num veiculo liquido adequado.

As composições farmacêuticas apropriadas para administração rectal, em que o veiculo é um sólido, apresentam-se muito preferivelmente sob a forma de supositórios de dose unitária. Os veiculos adequados incluem a manteiga de cacau e outros materiais habitualmente utilizados na especialidade, e os supositórios poderão ser convenientemente produzidos por mistura do composto activo com o(s) veiculo (s) amolecido(s) ou fundido(s), seguida de arrefecimento e moldagem em moldes.

As composições apropriadas para administração vaginal poderão apresentar-se sob a forma de pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou sprays contendo, além do ingrediente activo, os veiculos conhecidos na especialidade como sendo adequados.

Para administração intranasal, os compostos do invento poderão ser utilizados como um spray liquido ou um pó dispersivel ou sob a forma de gotas. As gotas poderão ser formuladas com uma base aquosa ou não aquosa, que também compreende um ou mais agentes de dispersão, agentes de solubilização ou agentes de suspensão. Os sprays liquidos são adequadamente distribuídos a partir de embalagens pressurizadas.

Para administração por inalação, os compostos de acordo com o invento são convenientemente distribuídos a partir de um insuflador, um nebulizador, uma embalagem pressurizada ou 31 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ outro meio conveniente de distribuição de um spray em aerossol. As embalagens pressurizadas poderão compreender um propulsor adequado como seja o diclorodifluorometano, o triclorofluorometano, o diclorotetrafluoroetano, o dióxido de carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a dose poderá ser determinada fornecendo uma válvula para distribuir uma quantidade medida.

Em alternativa, para administração por inalação ou por insuflação, os compostos de acordo com o invento poderão adoptar a forma de uma composição em pó desidratada, por exemplo, uma mistura em pó do composto e de uma base em pó adequada como a lactose ou o amido. A composição em pó poderá apresentar-se sob uma forma farmacêutica unitária em, por exemplo, cápsulas ou cartuchos ou, por exemplo, blisteres ou pacotes de gelatina a partir dos quais o pó poderá ser administrado com a ajuda de um inalador ou insuflador.

Quando desejado, poderão empregar-se as formulações descritas acima, mas adaptadas para fornecer uma libertação prolongada do ingrediente activo.

Os esquemas gerais e os exemplos seguintes são fornecidos para ilustrar várias concretizações do presente invento.

Exemplo 1

Trifluoroacetato de 3-{[(2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-piperidínio, Composto 1.

32 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Passo I

Uma suspensão de éster metílico do ácido 3-amino-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (0,268 g; 1,15 mmoles) e 3-formil-N-Cbz-piperidina (0,284 g; 1,15 mmoles) em THF (0,5 ml) foi tratada com dicloreto de dibutilestanho (17 mg; 0,057 mmoles). Após 5 min, adicionou-se fenilsilano (156 μΐ; 1,26 mmoles), e a mistura foi agitada durante 6 dias à temperatura ambiente. O solvente foi depois evaporado, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando CH2CI2: hexanos:EtOAc como eluente, para fornecer éster metílico do ácido 3-[(l-metil-piperidin-3-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico como um óleo (0,2723 g; rendimento de 51%). 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : 7, 63-7,59 (m, 2H) ; 7,40-7,28 (m, 9H) ; 7,18-6,84 (br s, 1H) ; 5,20 (d, 1H) ; 5,10 (d, 1H); 4,55 (m, 1H); 4,15 (m, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,58- 3,40 (m, 2H); 2,90 (t, 1H); 1,88-1,40 (m, 6H).

Passo II Éster metílico do ácido 3-[(l-metil-piperidin-3-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (162 mg; 0,348 mmoles) foi dissolvido em 1,2-dicloroetano (3,0 ml) e tratado com cloreto de trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonilo em 1,2-dicloroetano (1,0 ml; 0,43 mmoles). A solução foi aquecida ao refluxo durante 1 dia. O solvente foi depois evaporado, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando hexanos:EtOAc como eluente, para fornecer éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-metil-piperidin-3-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico como um óleo (0,194 g; rendimento de 95%). 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): rotâmero 65/35: 7,90 (s; 0,35H); 7,70 (d; 0, 65H) ; 7,62-7,10 (m, 10H) ; 5,20-5, 00 (m, 2H) ; 4,70 (m; 0,35H) ; 4, 60-4,40 (m; 0,65H); 4,12 (m, 1H) ; 3,82 (s, 3H) ; 3,52 (t; 0,6 5 H); 3,20 (t; 0,35H); 2,70 (d; 0,65H); 2,52 (t; 0,3 5 H); 1,90 (m, 1H); 1, 80-1,20 (m, 13H); 1, 00-0,85 (m, 1H); 0,76 (d, 3H) ; 0,64 (m, 2H) .

Passo III O composto éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil ) -(l-metil-piperidin-3-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (162 mg; 0,27 mmoles) foi dissolvido em uma mistura de THF:Me0H:H20 (3:2:1; 2,8 ml) e tratado com

Li0H.H20 (35 mg; 0,81 mmoles). A solução foi aquecida a 55°C 33 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ durante 3 h. Os solventes foram removidos, e o resíduo foi acidificado para pH 4 utilizando HC1. 0 produto foi extraído com EtOAc, e as camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secas e evaporadas para fornecer ácido 3-[(4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-metil-piperidin-3-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (146 mg; rendimento de 92%). 1H-RMN (CDCls, 400 MHz) : 9,98 (br s, 1H) ; 7,80 (d, 1H) ; 7,62 (d, 1H) ; 7,48-7,24 (m, 9H) ; 5,20-5, 05 (m, 2H); 4,35-3, 95 (m, 3H); 3,00 (m, 1H) ; 2,85-2,52 (m, 2H) ; 2,15 (m, 1H) ; 1,82-1,18 (m, 12H); 0,78 (d, 3H); 0,68 (m, 2H).

Passo IV

O composto ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-metil-piperidin-3-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (145 mg; 0,25 mmoles) foi dissolvido em CH3CN (2,5 ml), arrefecido a 0°C e tratado com TMSI (144 ml; 1,0 mmoles). A reacção foi agitada a 0°C durante lh e à temperatura ambiente durante 3h. O solvente foi removido, e o resíduo foi acidificado utilizando HC1. O produto foi extraído com EtOAc, e as camadas orgânicas foram lavadas com salmoura e secas. O solvente foi depois evaporado, e o resíduo foi primeiro purificado por HPLC de fase reversa, seguido de purificação por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando CH2CI2 :MeOH: AcOH como eluente, para proporcionar trifluoroacetato de 3-{[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-piperidínio (composto 1) (91,6 mg; rendimento de 66%). 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz): 7,92 (br s, 1H) ; 7,66 (m, 2H) ; 7,49 (s, 1H) ; 7,42 (m, 2H) ; 7,33 (m, 1H) ; 4,50 (m, 1H) ; 3,33 (m, 3H) ; 2,80 (m, 1H) ; 2,56 (m, 1H) ; 2,30 (m, 2H) ; 1,80-1,30 (m, 8H) ; 1,20 (m, 3H); 0,73 (d, 3H); 0,73-0,45 (m, 2H).

Os compostos seguintes foram preparados de uma forma similar: Composto 2, Composto 3, Composto 4, Composto 6 e Composto 14.

Exemplo 2

Cloreto de 4-{[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-metil}-1-metil-piperidínio, Composto 38 34 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Passo I

Ester benzilico cio acido 4—{ [ (2—metoxicarbonil—5—fenil— tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-piperidina-1-carboxílico (190 mg; 0,32 mmoles) foi dissolvido em MeOH (3,2 ml) e tratado com formaldeido (solução a 37%; 0,36 ml; 3,2 mmoles), AcOH (1 gota) e Pd a 10%/C (97 mg) sob H2 (30 psi) . A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 48h, e a mistura foi filtrada em celite. A solução foi evaporada para um resíduo, gue foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando CH2C12:MeOH como eluente, para proporcionar éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-metil-piperidin-4-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico como um óleo (46,5 mg; rendimento de 31%). 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : 7,62 (d, 2H) ; 7,43 (m, 3H) ; 7,10 (s, 1H) ; 3,97 (m, 1 H) ; 3,85 (s, 3H) ; 3,20 (m, 3H) ; 2,48 (s, 3H) ; 2,42 (m, 1H) ; 2,10 (m, 1H) ; 1,85 (m, 3H); 1,70-1,40 (m, 8H); 1,30 (m, 2H); 0,78 (d, 3H); 0, 68 (m, 2H) .

Passo II O composto éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil ) -(l-metil-piperidin-4-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (46 mg; 0,098 mmoles) foi dissolvido numa mistura de THF:MeOH:H20 (3:2:1; 1,0 ml) e tratado com

Li0H.H20 (12 mg; 0,29 mmoles). A solução foi aquecida a 55°C durante 3h. Os solventes foram removidos, e o resíduo foi acidificado para pH 4 utilizando HC1. O precipitado foi filtrado, lavado e triturado com hexanos para fornecer cloreto de 4-{[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-metil}-1-metil-piperidínio (composto 38) como um sólido (35,3 mg; rendimento de 73%) . 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz): 7,66 (d, 2H); 7,40 (t, 3H); 7,32 (t, 35 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 1H) ; 7,25 (s, 1H) ; 3,85 (dd, 1 H) , ; 3, 52 (dd, 1H) ; 3,34 (m, 2H) ; 2,78 (q, 2H) ; 2,70 (s, 3H); 2, . 35 (m, 1H) ; 2,05 (m, 1H) ; 1,84 (m, 2H) ; 1,72 (m, 1H) ; 1,65 -1, .20 (m, 8H) ; 0,76 (d, 3H) ; Ο, 68 (m, 2Η) .

Os compostos seguintes foram preparados de uma forma similar: Composto 33, Composto 35, Composto 49 e Composto 69.

Exemplo 3 Ácido 3-[isopropil-(5-metil-[1,3]dioxano-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 22

Procedimento para a síntese de ácido 5-metil-[1,3]-dioxano-2-carboxílico: Tetrahedron (1989) 45, PP 6987-6998.

Passo I

Uma solução de ácido 5-metil-[1,3]dioxano-2-carboxílico (53 mg; 0,47 mmoles) em 1,2-dicloroetano a 0°C foi tratada com PPh3 (124 mg; 0,47 mmoles), NCS (63 mg; 0,47 mmoles) e éster metílico do ácido isopropilamino-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (100 mg; 0,36 mmoles). A reacção foi aquecida ao refluxo durante 3 dias. A mistura foi evaporada para um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando EtOAc:hexanos como eluente, para proporcionar éster metílico do ácido 3-[isopropil-(5-metil-[1,3]dioxano-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (51,8 mg; rendimento de 35%). 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : 7,65 (d, 2H) ; 7,42 (m, 3H) ; 7,10 (s, 1H) ; 4,90 (q, 1H) ; 4,55 (s, 1H) ; 4,00 (dd, 1H) ; 3,90 (dd, 1H) ; 3,85 (s, 3H) ; 3,10 (t, 1H) ; 2,95 (t, 1H) ; 2,10 (m, 1H) ; 1,25 (d, 3H) ; 1,05 (d, 3H) ; 0,58 (d, 3H). 36 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Passo II Éster metílico do ácido 3-[isopropil-(5-metil- [1.3] dioxano-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (49 mg; 0,12 mmoles) foi dissolvido numa mistura de THF:MeOH:H20 (3:2:1; 1,1 ml) e tratado com LiOH.H20 (14 mg; 0,36 mmoles). A solução foi aquecida a 55°C durante 3h. Os solventes foram removidos, e o resíduo foi acidificado para pH 4 utilizando HC1. O produto foi extraído com EtOAc, e as camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secas e evaporadas para fornecer ácido 3-[isopropil-(5-metil- [1.3] dioxano-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 22) como um sólido (46,7 mg; rendimento de 98%) . 1H-RMN (CD30D, 400 MHz) : 7,65 (d, 2H) ; 7,45 (m, 3H) ; 7,30 (s, 1H) ; 4,80 (q, 1H) ; 4,80 (s, 1H) ; 4,00 (dd, 1H) ; 3,88 (dd, 1H) ; 3,08 (t, 1H) ; 2,98 (t, 1H); 2,00 (m, 1H); 1,30 (d, 3H); 1,05 (d, 3H) ; 0,60 (d, 3H) .

Exemplo 4 Ácido 5- (3-fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico, Composto 51

Passo I

Uma suspensão de éster metílico do ácido 3-amino-5-bromo-tiofeno-2-carboxílico (1,03 g; 4,38 mmoles) em THF seco (1,1 ml) foi tratada com monoetilenocetal de 1,4-ciclo-hexanodiona (684 mg; 4,38 mmoles), seguido de dicloreto de dibutilestanho (133 mg; 0,44 mmoles). Após 5 min, adicionou-se fenilsilano (877 μΐ; 4,8 mmoles), e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 dias, altura em que se obteve uma solução límpida. A solução foi depois 37 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ concentrada, e ο resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando EtOAc:hexanos como eluente, para originar éster metílico do ácido 5-bromo-3-(1,4-dioxa-spiro[4.5]dec-8-ilamino)-tiofeno-2-carboxílico (1,11 g; rendimento de 68%). 1H-RMN (CDC13, 400 MHz) : 6,90 (br s, 1H) ; 6,65 (s, 1H) ; 3,95 (s, 4H) ; 3,78 (s, 3H) ; 3,35 (m, 1H) ; 2,00 (m, 2H) ; 1,80 (m, 2H) ; 1,65 (m, 4H) .

Passo II

Uma solução de ácido trans-4-metil-ciclo-hexano-carboxílico (0,629 g; 4,42 mmoles) em 1,2-dicloroetano (30 ml) a 0°C foi tratada com trif enilf osf ina (1,16 g; 4,42 mmoles), N-clorosuccinimida (0,59 g; 4,42 mmoles) e éster metílico do ácido 5-bromo-3-(1,4-dioxa-spiro[4.5]dec-8- ilamino)-tiofeno-2-carboxílico (1,10 g; 2,92 mmoles). A mistura resultante foi depois agitada durante 36 h a 90°C e, em seguida, concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando

EtOAc:hexanos como eluente, para proporcionar uma mistura 1:1 (537 mg) do produto desejado, éster metílico do ácido 5-bromo-3-[(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-il)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico, e da correspondente cetona, éster metílico do ácido 5-bromo-3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxociclo-hexil)amino]-tiofeno-2-carboxílico.

Passo III A mistura de éster metílico do ácido 5-bromo-3-[(1,4-dioxa-spiro[4.5]dec-8-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico e de éster metílico do ácido 5-bromo-3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (352 mg) foi dissolvida em tetra-hidrofurano (4 ml) e tratada com solução de HCl 3N (4 ml) . A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas e depois foi diluída com acetato de etilo (10 ml) . A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x10 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram lavadas com salmoura (10 ml), secas com Na2S04, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando EtOAc:hexanos como eluente, para originar éster metílico do ácido 5-bromo-3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico como um 38 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ sólido (296 mg) . 1 H-RMN (CDCI3, 400 MHz): 6, 85 (s, 1H) ; 5, 04 (m, 1H) ; 3,82 (s, 3H) ; 2,58-2,30 (m, 4H); 2,18 (m, 1H) ; 2,06 (m, 1H) ; 1,90 (m, 1H) ; 1,70-1,52 (m, 6H); 1,48- 1,28 (m, 3H) ; 0,80 (d, 3H) ; 0,68 (m, 2H) .

Passo IV 0 composto éster metílico do ácido 5-bromo-3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (473 mg; 1,04 mmoles) foi dissolvido em metanol (10,4 ml), arrefecido a 0°C e tratado com boro-hidreto de sódio (43 mg; 1,14 mmoles). Após 30 minutos de agitação a 0°C, deixou-se a reacção a agitar à temperatura ambiente durante 30 min e parou-se com uma solução de ácido clorídrico a 10% (20 ml) . A fase aquosa foi extraida com acetato de etilo (3x10 ml) , e as camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2S04) e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando EtOAcrhexanos como eluente, para proporcionar éster metílico do ácido 5-bromo-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (365 mg; rendimento de 77%) como um sólido. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : 6, 82 (s, 1H) ; 4, 56 (m, 1H) ; 3, 82 (s, 3H); 3, 45 (m, 1H); 2,08- 1, 72 (m, 4H) ; 75 (m, 1H) ; 1, 68- 1,23 (m, 11H) ; 0, 98 (m, 1H); 0, 80 (d, 3H) ; 0, 68 (m, 2H) .

Passo V

Uma solução desgaseifiçada de éster metílico do ácido 5-bromo-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (70 mg; 0,15 mmoles) e ácido 3-fluorofenilborónico (32 mg; 0,23 mmoles), numa mistura de DME (2,0 ml) e solução aquosa de Na2CC>3 2M (1,0 ml), foi tratada com Pd(PPh3)4 (17,6 mg; 0,015 mmoles). A reacção foi aquecida ao refluxo durante 18h. A mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca e concentrada para um resíduo, que foi purificado por cromatografia preparativa, utilizando EtOAc:hexanos como eluente, para fornecer éster metílico do ácido 5- (3-fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico sob a forma de um óleo contaminado com óxido de trifenilfosfina, que não pôde ser removido (61,7 mg). 1H-RMN (CDC13, 400 MHz): 7,65 (dd, 3H) ; 39 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 7,53 (t, 2Η) ; 7,43 (m, 5Η) ; 7,32 (m, 1H) ; 7,1 (m, 1H) ; 7,02 (s, 1H); 4,56 (m, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,40 (m, 1H); 2,14 (br s, 1H); 2,05-1,88 (m, 4H); 1,78 (m, 1H); 1,68-1,54 (m, 5H); 1,51-1,26 (m, 4H) ; 0,98 (m, 1H) ; 0,75 (d, 3H) ; 0,72-0,54 (m, 2H) .

Passo VI O composto éster metílico do ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (61 mg; 0,13 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxanoitbO (1,3 ml) e tratado com L1OH.H2O (20 mg; 0,476 mmoles). Após 3 horas de agitação a 55°C, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 5 ml de H2O acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x5 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2SC>4) e concentradas. O residuo foi purificado por cromatografia preparativa (10% MeOH/CH2Cl2) para obter ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxiciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino] -tiofeno-2-carboxílico (composto 51) como um sólido branco (20,1 mg; rendimento de 34%) 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz) : 7,72 (d, 1H) ; 7,60 (m, 2H) ; 7,50 (m, 1H) ; 7,24 (m, 1H) ; 4,50 (d, 1H) ; 4,28 (m, 1H) ; 3,18 (m, 1H) ; 1,95 (m, 1H) ; 1,85- 1,10 (m, 14H); 0,88 (m, 1H); 0,75 (d, 3H); 0, 68-0,45 (m, 2H) .

Os compostos seguintes foram preparados de uma forma similar: Composto 50, Composto 59, Composto 60 e Composto 61.

Exemplo 5 Ácido 3- [ (l-metilcarbamoil-piperidin-4-il)-(4-metil- ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 71

o 40 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Passo I

Uma solução de éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperidin-4-il-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (145 mg; 0,33 mmoles) em CH2CI2 (3,3 ml) foi tratada com EtsN (69 ml; 0,49 mmoles) e isocianato de metilo (28,2 mg; 0,49 mmoles). Após agitação à temperatura ambiente durante 18h, ainda permanecia material de partida. Adicionou-se isocianato de metilo (28,2 mg; 0,49 mmoles) à reacção, gue foi agitada durante mais 4h. O solvente foi evaporado, e o resíduo foi dissolvido em EtOAc, lavado com HC1 (0, 1 M) e salmoura, seco (Na2S04) e concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando (5% MeOH/CH2Cl2), para proporcionar éster metílico do ácido 3-[(l-metilcarbamoíl-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (142 mg; rendimento de 87%) . 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : 7,65 (m, 2H) ; 7,45 (m, 3H) ; 7,00 (s, 1H); 4,78 (m, 1H); 4,35 (g, 1H); 4,05 (dd, 1H) ; 3,90 (m, 1H) ; 3,85 (s, 3H) ; 2,85 (m, 2H) ; 2,75 (d, 3H) ; 1,95 (m, 2H) ; 1,80 (m, 1H) ; 1,70-1,55 (m, 5H) ; 1,50-1,25 (m, 3H); 1,10 (m, 1H); 0,78 (d, 3H); 0,75-0,58 (m, 2H) .

Passo II Éster metílico do ácido 3-[(1-metilcarbamoí1-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (139 mg; 0,28 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxano:H20 (2,8 ml) e tratado com LÍOH.H2O (35,3 mg; 0,84 mmoles). Após 3 horas de agitação a 55°C, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 5 ml de H2O acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x5 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2S04) e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando (10% MeOH/CH2Cl2) , para fornecer ácido 3-[(1-metilcarbamoíl-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 71) como um sólido branco (101,8 mg; rendimento de 75%). 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz): 7,72 (m, 2H) ; 7,47-7,37 (m, 3H) ; 7,32 (s, 1H) ; 4,65 (m, 1H) ; 4,00 (m, 1H) ; 2,82 (q, 2H) ; 2,65 (d, 3H) ; 2,10 (m, 1H) ; 1,90 (m, 2H); 1,80-1,22 (m, 8H); 1,14 (m, 1H); 0,78 (d, 3H); 0,75-0,55 (m, 2H). 41 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 6 Ácido 3-[[1,3]dioxolan-2-ilmetil-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 8

Passo I 0 composto éster metílico do ácido 3-[ ( [1,3]dioxolan-2-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico foi preparado utilizando o procedimento de acoplamento com Pd descrito no exemplo 32.

Passo II 0 composto éster metilico do ácido 3-[[1,3]dioxolan-2-ilmetil-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico foi preparado utilizando um procedimento semelhante ao procedimento descrito no exemplo 32.

Passo III 0 composto ácido 3-[[1,3]dioxolan-2-ilmetil-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico foi preparado utilizando um procedimento semelhante ao procedimento descrito no exemplo 32. 0 composto 7 foi preparado utilizando um método similar.

Exemplo 7 Ácido 5- (3-fluoro-fenil)-3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-tiofeno-2-carboxilico, Composto 44 42 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Passo I A uma solução desgaseifiçada de éster metílico do ácido 5-bromo-3-isopropilamino-2-carboxílico (210 mg; 0,755 mmoles) e ácido 3-fluorofenilborónico (140 mg; 0,116 mmoles), numa mistura de DME (8 ml) e solução aquosa de Na2CC>3 2M (4 ml), adicionou-se Pd(PPh3)4 (43 mg), e a mistura reaccional foi agitada em condições de refluxo durante 3h sob uma atmosfera de N2. A mistura reaccional foi diluida com acetato de etilo e água. A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) e concentrada. O composto éster metílico do ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-isopropilamino-tiofeno-2-carboxílico (200 mg; 91%) foi isolado como um xarope espesso. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): δ 7,50-7,25 (m, 3H) ; 7,13-7,05 (m, 1H) ; 6,88 (s, 1H) ; 6,74 (bs, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,75 (m, 1H); 1,35-1,30 (2s, 6H) .

Passo II A uma solução de éster metílico do ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-isopropilamino-tiofeno-2-carboxílico (200 mg; 0,683 mmoles) em 1,2-dicloroetano (5 ml) adicionou-se éster 2-clorocarbonil-5-metil-ciclo-hexílico do ácido acético (148 mg; 0,679 mmoles) e trifenilfosfina (197 mg; 0,751 mmoles) sob uma atmosfera de N2. A mistura reaccional foi submetida a refluxo durante 12h e depois foi diluída com clorofórmio e água. A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia CCF preparativa, utilizando 15% acetato de etilo/hexano, para obter éster metílico do ácido 3-[(2-acetoxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropilamino]-5-(3-fluoro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico como um sólido branco (40 mg, 12%) . 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : δ 7, 45-7,25 (m, 4H) ; 7,13-6,95 (m, 1H) ; 5,13 (m, 1H) ; 4,87-4,75 (m, 1H); 3,80 (s, 3H); 2,37-0,62 (m, 20H). 43 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Passo III 0 composto éster metílico do ácido 3-[(2-acetoxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropilamino]-5-(3-fluoro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico (30 mg; 0,063 mmoles) foi colocado numa mistura de THF:Me0H:H20 (3:2:1; 2 ml) e, em seguida, adicionou-se solução aquosa de Li0H.H20 IN (0,38 ml; 0,380 mmoles). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 12h. Os solventes foram removidos, e o residuo foi submetido a partição entre água e acetato de etilo. A camada aquosa foi acidificada utilizando solução de KHSO4 a 10%. A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) e concentrada. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de silica, utilizando clorofórmio e metanol (8:2), para obter ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-tiofeno-2-carboxilico (composto 44) (15 mg, 58%) como um sólido branco com dois rotâmeros. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : δ 7,50-7,25 (m, 3H) ; 7,06 (m, 2H) ; 6,25 (bs, 1H) ; 5,25 (s, 1H, secundário); 4,87 (s, 1H, principal); 4,13 (s, 1H, principal); 3,87 (s, 1H, secundário); 2,38-0,45 (m, 17H). ESI (M-H): 418. O composto 62 foi preparado de uma forma similar.

Exemplo 8 Ácido 3-[isopropil-(4-metileno-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico, Composto 28

Passo I A uma solução de éster metilico do ácido 3-isopropil-amino-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (1,5 g; 5,45 mmoles) em 1,2-dicloroetano adicionou-se N-clorosuccinamida (0,940 g; 44 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 7,091 mmoles) , trifenilfosfina (1,9 g; 7,091 mmoles) e ácido 4-oxo-ciclo-hexanocarboxílico (800 mg; 5,455 mmoles). A mistura reaccional foi agitada sob refluxo durante a noite sob uma atmosfera de N2. A mistura reaccional foi diluida com CH2CI2 e extraída com solução saturada de NaHCCb. A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) e concentrada. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando acetato de etilo:hexano (1:4) como eluente, para obter éster metílico do ácido 3-[isopropil-(4-oxo-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (1,2 g; 55%) como xarope. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : δ 7,75-7,50 (m, 2H); 7,70-7,38 (m, 3H) ; 7,12 (s, 1H); 4,95 (m, 1H); 3,87 (s, 3H); 2,75-0,83 (m, 15H).

Passo II

Adicionou-se butil-lítio (2,5 M; 0,9 ml; 2,280 mmoles) a uma solução fria (-78°C) de brometo de metiltrifenilfosfónio (939 mg; 2, 630 mmoles) em THF (10 ml). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante lh e, em seguida, adicionou-se éster metílico do ácido 3-[isopropil-(4-oxo-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (700 mg; 1,754 mmoles) em THF (5 ml) a -78°C. Permitiu-se que a mistura reaccional agitasse à temperatura ambiente durante 12h. A reacção foi parada por adição de solução saturada de NH4CI e diluída com acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando acetato de etilo:hexano (1:4), para obter éster metílico do ácido 3-[isopropil-(4-metileno-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (300 mg; 43%) como um sólido. 1H-RMN (CDC13, 400 MHz): δ 7,63 (d, 2H) ; 7,50-7,38 (m, 3H) ; 7,12 (s, 1H) ; 4,99 (m, 1H) ; 4,55 (d, 2H) ; 3,85 (s, 3H) ; 2,25 (m, 3H) ; 1,83-1, 63 (m, 5H) ; 1,50 (m, 1H) ; 1,25 (d, 3H); 0,99 (d, 3H).

Passo III O composto éster metílico do ácido 3-[isopropil-(4-metileno-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (50 mg; 0,126 mmoles) foi colocado numa mistura de THF:Me0H:H20 (3:2:1; 3 ml) e, em seguida, adicionou-se solução aquosa de LiOH.H20 IN (0,8 ml; 0,800 mmoles). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 45 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 12h. Os solventes foram removidos, e o resíduo foi submetido a partição entre água e acetato de etilo. A camada aquosa foi acidificada utilizando solução de KHSO4 a 10%. A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando clorofórmio e metanol (8:2), para obter ácido 3-[isopropil-(4-metileno-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 28) (25 mg; 52%) como um sólido branco. 1H-RMN (CDC13, 400 MHz) : δ 7,61 (d, J= 7 Hz, 2H) ; 7,40-7,38 (m, 3H) ; 7,04 (s, 1H) ; 4,92 (m, 1H) ; 4,50 (d, J= 7,6 Hz, 2H) ; 2,21-1,43 (m, 9H) ; 1,15 (bd, 3H) ; 0,93 (bd, 3H) .

Exemplo 9 Ácido 5- (4 — fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hex-3-enocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico, Composto 53

Passo I A uma solução agitada de éster metílico do ácido 3-amino-5-(4 — fluoro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico (500 mg; 2,0 mmoles) em 1,2-dicloroetano (10 ml) adicionou-se sequencialmente 2-metoxipropeno (0,76 ml; 8,0 mmoles), AcOH (0,12 ml; 4,0 mmoles) e NaBH(OAc)3 (0,848 mg; 8,0 mmoles) e agitou-se durante 16h. Em seguida, diluiu-se com EtOAc e Η20. A solução aquosa foi ajustada a pH=7 através da adição de NaHC03. A fase aquosa foi extraída com EtOAc, e o extracto combinado foi lavado com salmoura, seco com MgS04 e filtrado. A purificação em "Bond Elut" com hexano até 5% EtOAc-hexano forneceu o composto éster metílico do ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-isopropilamino-tiofeno-2-carboxílico (0,530 mg; rendimento de 91%). 1H-RMN (CDC13; 400 MHz): δ 7,62 (d, 2H) ; 46 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 7,09 (m, 2Η) ; 6,81 (s, 1Η) ; 3,84 (s, 3H) ; 3,71 (m, 1H) ; 1,35 (d, 6H) .

Passo II O composto cloreto de 4-metil-ciclo-hex-3-enocarbonilo foi preparado de acordo com o procedimento referido em Journal of Organic Chemistry (1986) 51(23), PP4485-8. Este cloreto de 4-metil-ciclo-hex-3-enocarbonilo (0,121 g; 0,77 mmoles) foi dissolvido, juntamente com éster metilico do ácido 5- (4-fluorofenil)-3-isopropilamino-tiofeno-2-carboxílico (0,150 g; 0,51 mmoles), em 1,2-dicloroetano anidro (2 ml). A mistura reaccional foi agitada durante 16 horas sob refluxo. Em seguida, os solventes foram removidos, e o residuo foi purificado por cromatografia flash (hexano:EtOAc, 8:2) para fornecer 140 mg (66%) de éster metilico do ácido 5-(4-fluorofenil) -3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hex-3-enocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : δ 7,60 (m, 2H) ; 7,15 (m, 2H) ; 7,02 (d, 1H) ; 5,42-5,20 (m, 1H) ; 4,99 (m, 1H) ; 3,83 (d, 3H); 2,41-1,50 (m, 10H); 1,20 (m, 3H); 0,98 (d, 3H).

Passo III O composto éster metilico do ácido 5- (4-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hex-3-enocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico (0,140 g; 0,34 mmoles) foi colocado numa mistura de THF:MeOH:H20 (3:2:1; 10 ml) e, em seguida, juntou-se solução aguosa de LiOH.H20 IN (2,1 ml; 2,04 mmoles). A mistura reaccional foi agitada a 50°C durante lh. Os solventes foram removidos, e o residuo foi submetido a partição entre água e acetato de etilo. A camada aguosa foi acidificada utilizando solução de KHSO4 a 10%. A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) e concentrada. O residuo foi purificado por cromatografia CCF preparativa, utilizando diclorometano:metanol (9:1), para obter ácido 5-(4-fluorofenil) -3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hex-3-enocarbonil)-amino]- tiofeno-2-carboxilico (composto 53) (31 mg; 23%) 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): δ 7,81 (m, 2H) ; 7,43 (d, 1H) ; 7,28 (m, 2H); 5,38-5,16 (m, 1H) ; 4,72 (m, 1H) ; 2,20 (d, 2H) ; 1, 95- £ 0 CM \—1 1 8H) ; 1,12 (m, 3H) ; 0,90 (d, 3H) . O composto seguinte foi sintetizado de uma forma similar: Composto 17. 47 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 10 Ácido trans-3-[(1-fluoro-4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 9

Passo I A uma solução agitada de éster metilico do ácido 3-amino-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (1,82 g; 7,8 mmoles) em 1,2-dicloroetano (40 ml) adicionou-se sequencialmente 2-metoxipropeno (3,0 ml; 31,2 mmoles), AcOH (1,8 ml; 31,2 mmoles) e NaBH(OAc)3 (3,31 g; 15,6 mmoles) e agitou-se durante 2h. Em seguida, diluiu-se com EtOAc e H2O. A solução aquosa foi ajustada a pH=7 através da adição de NaHCCb. A fase aquosa foi extraída com EtOAc, e o extracto combinado foi lavado com salmoura, seco com MgS04 e filtrado. A purificação em "Bond Elut" com hexano até 5% EtOAc-hexano forneceu o composto éster metilico do ácido 3-isopropilamino-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (2,07 g; rendimento de 96%). 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : δ 7,62 (d, 2H) ; 7,40 (m, 3H) ; 6,91 (s, 1H); 3,84 (s, 3H); 3,71 (m, 1H); 1,35 (d, 6H).

Passo II O composto ácido cis/trans-l-fluoro-4-metil-ciclo-hexano-carboxílico foi preparado de acordo com o procedimento referido em Synthesis, April (1998) PP310-313. O composto ácido cis/trans-l-fluoro-4-metil-ciclo-hexano-carboxílico (0,220 g; 1,37 mmoles) foi dissolvido, juntamente com PPh3 (0,360 g; 1,37 mmoles), em 1,2-dicloroetano anidro (20 ml) a 0°C. Em seguida, adicionou-se NCS (0,181 g; 1,37 mmoles) e éster metilico do ácido 3-isopropilamino-5-fenil-tiofeno-2- 48 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ carboxílico (0,290 g; 1,05 mmoles), e a mistura reaccional foi agitada durante 16h ao refluxo. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, o produto bruto foi lavado com solução saturada de NaHC03. A camada orgânica foi seca (MgS04) e concentrada, e o resíduo foi purificado por cromatografia CCF preparativa (20% EtOAc/Hexano) para obter 171 mg (39%) de éster metílico do ácido cis/trans-3-[(l-fluoro-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2- carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MH: z) : pr: incipal δ 6, 61 (d, 2H) ; 6,40 (m, 3H) ; 7,03 (s, 1H) ; 4, 93 (m, 1H); 3, . 81 (s, 3H) ; 2,18 -1,30 (m, 7H) ; 1,20 (d, 3H) ; 1, 10 (m, 2H); 0, 96 (d, 3H) ; 0,81 (d, 3H).

Passo III 0 composto éster metílico do ácido 3-[(1 — fluoro-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (0,049 g; 0,12 mmoles) foi colocado numa mistura de THF:Me0H:H20 (3:2:1; 10 ml) e, em seguida, adicionou-se

solução aquosa de Li0H.H20 IN (0,35 ml; 0,35 mmoles). A mistura reaccional foi agitada a 50°C durante 3h. Os solventes foram removidos, e o resíduo foi submetido a partição entre água e acetato de etilo. A camada aquosa foi acidificada utilizando solução de KHSO4 a 10%. A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia CCF preparativa, utilizando diclorometano:metanol (9:1), para obter ácido trans-3-[(l-fluoro-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (Composto 9) (9 mg; 19%). 1H-RMN (MeOD, 400 MHz) : δ 6,75 (d, 2H); 6,41 (m, 3H); 7,29 (s, 1H) ; 4,85 (m, 1H) ; 2,1-1,85 (m, 4H) ; 1,59-1,24 (m, 3H) ; 1,22 (d, 3H) ; 1,10 (m, 2H) ; 0,99 (d, 3H) ; 0,81 (d, 3H) . 0 composto seguinte foi sintetizado de uma forma similar: composto 10. 49 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 11 Ácido 3-[Ν-(2,4-dicloro-benzoíl)-Ν',Ν'-dimetil-hidrazino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 72

Passo I A uma solução de éster metílico do ácido 3-bromo-5- fenil-tiofeno-2-carboxílico (0,500 g; 1,68 mmoles) em tolueno (10 ml) adicionou-se N,N-dimetil-hidrazina (0,121 g; 2,02 mmoles), carbonato de césio (0,767 g; 2,36 mmoles), BINAP (0,106 g; 0,17 mmoles) e acetato de paládio (II) (0,019 g; 0,08 mmoles). A mistura reaccional foi agitada durante 16h a 110°C. A mistura foi sujeita a partição entre tolueno (20 ml) e água (20 ml), e a camada orgânica foi separada. A fase aquosa foi lavada duas vezes com tolueno (2x10 ml) , e as camadas combinadas de tolueno foram secas (MgSCg) e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia CCF preparativa (10% EtOAc/Hexano) para obter 0,350 g (75%) de éster metílico do ácido 3-(Ν',N'-dimetil-hidrazino)-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : δ 7,71 (d, 2H); 7,40 (m, 3H); 7,13 (s, 1H); 3,87 (s, 3H); 2,65 (s, 6H).

Passo II A uma solução de éster metílico do ácido 3-(N',N'- dimetil-hidrazino)-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (0,200 g; 0,72 mmoles) em 1,2-dicloroetano (10 ml), sob uma atmosfera de N2, adicionou-se cloreto de 2,4-dicloro-benzoílo (0,228 g; 1,08 mmoles). A mistura reaccional foi agitada durante l,5h ao refluxo. Em seguida, os solventes foram removidos, e o resíduo foi purificado por cromatografia CCF preparativa 50 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ (hexano/EtOAc, 8:2) para obter 0,017 g (5%) de éster metílico do ácido 3-[N-(2,4-dicloro-benzoí1)-Ν',N'-dimetil-hidrazino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : δ 7,62 (m, 2H); 7,40 (m, 3H); 7,23 (d, 1H); 3,87 (s, 3H); 2,52 (s, 6H) .

Passo III O composto éster metílico do ácido 3-[N-(2,4-dicloro-benzoíl)-Ν',N'-dimetil-hidrazino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (0,050 g; 0,11 mmoles) foi colocado numa mistura de THF:Me0H:H20 (3:2:1; 10 ml) e, em seguida, adicionou-se solução aquosa de Li0H.H20 IN (0,67 ml; 0,67 mmoles). A mistura reaccional foi agitada a 60°C durante 2h. Os solventes foram removidos, e o resíduo foi submetido a partição entre água e acetato de etilo. A camada aquosa foi acidificada utilizando solução de KHS04 a 10%. A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia CCF preparativa, utilizando diclorometano:metanol (9:1), para fornecer ácido 3-[N-(2,4-dicloro-benzoíl)-N',N'-dimetil-hidrazino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 72) (0, 008 g; 17%). 1H-RMN (DMSO, 400 MHz): δ 7,81 (d, 2H) ; 7,69 (d, 2H); 7,54-7,40 (m, 5H); 2,42 (s, 6H) . O composto seguinte foi sintetizado de uma forma similar: Composto 64.

Exemplo 12 Ácido 5- (3-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico, Composto 5

Passo I Â mistura de ácido 3-fluorobenzenoborónico (25,0 mg; 0,180 mmoles) e éster metílico do ácido 5-bromo-3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (24 mg; 0,060 mmoles), numa mistura 5:1 de 51 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ tolueno/MeOH (1,0 ml), adicionou-se uma solução de Pd(PPh3)4 (7,0 mg; 0,006 iranoles; 10% em mole) em tolueno (0,5 ml), seguida de uma solução aquosa de Na2C03 2M (0,06 ml; 0,120 mmoles). A mistura reaccional resultante foi aquecida a 70°C durante 18h, arrefecida até à temperatura ambiente, filtrada através de MgS04 e lavada com EtOAc. A evaporação do solvente e a purificação do resíduo por cromatografia CCF preparativa, utilizando acetato de etilo/hexano (20:80) como eluente, forneceu (25,0 mg; rendimento de 99%) de éster metílico do ácido 5- (3 — fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CDC13, 400 MHz): 7,45-7,39 ppm (m, 2H); 7,34-7,31 ppm (m, 1H); 7,13-7,07 ppm (m, 1H); 7,06 ppm (s, 1H); 5,00-4,93 ppm (m, 1H); 3,85 ppm (s, 3H); 2,04-1,95 ppm (m, 1H); 1,74-1,57 ppm (m, 5H); 1,48- 1,38 ppm (m, 1H) ; 1,36-1,27 ppm (m, 1H) ; 1,17 ppm (d, 3H) ; 0,94 ppm (d, 3H); 0,77 ppm (d, 3H); 0,73-0,55 ppm (m, 2H).

Passo II O composto éster metílico do ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (25 mg; 0,060 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxano:H20 (0,8 ml) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN (0,3 ml; 0,300 mmoles). Após 3 horas de agitação à temperatura ambiente, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 10 ml de H20 acidificada para pH 4 e 10 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x10 ml). As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2S04) e concentradas, e o resíduo foi purificado por cromatografia preparativa (10% MeOH/CH2Cl2) para fornecer 20 mg (83%) de ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-tiofeno-2-carboxílico (composto 5). 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 7,57-7,44 ppm (m, 3H) ; 7,39 ppm (s, 1H); 7,17-7,11 ppm (m, 1H); 4,87-4,81 ppm (m, 1H); 2,15-2,09 ppm (m, 1H) ; 1,82-1,78 ppm (m, 1H) ; 1,71-1,52 ppm (m, 4H) ; 1,42-1,25 ppm (m, 2H) ; 1,22 ppm (d, 3H) ; 1,00 ppm (d, 3H); 0,78 ppm (d, 3H); 0,73-0,56 ppm (m, 2H). 52 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 13 Ácido 3-[(2-acetilamino-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 12

Passo I 0 composto éster etílico do ácido 2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarboxílico (495 mg; 2,66 mmoles) foi dissolvido em THF (13 ml) e, em seguida, adicionou-se difenil-fosforilazida (680 μΐ; 3,19 mmoles) e trifenilfosfina (837 mg; 3,19 mmoles). A solução resultante foi arrefecida num banho de gelo e adicionou-se azodicarboxilato de dietilo (502 μΐ; 3,19 mmoles). Após agitação à temperatura ambiente durante 20 horas, os solventes foram removidos, e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (0% a 3% EtOAc/hexano) para proporcionar 365 mg (65%) de éster etílico do ácido 2-azido-4-metil-ciclo-hexanocarboxílico.

Passo II 0 composto éster etílico do ácido 2-azido-4-metil-ciclo-hexanocarboxílico (425 mg; 2,01 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxano:H20 (20 ml) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN (10 ml; 10,05 mmoles). Após 35 minutos de agitação à temperatura ambiente, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 15 ml de H20 acidificada para pH 4 e 15 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x10 ml). As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2SC>4) e concentradas para obter 166 mg de uma mistura 2:1 de ácido 2-azido-4-metil-ciclo-hexano-carboxílico e ácido 4- 53 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ metil-ciclo-hex-1-enocarboxílico.

Passo III A uma solução da mistura 2:1 de ácido 2-azido-4-metil-ciclo-hexanocarboxílico e ácido 4-metil-ciclo-hex-l-eno- carboxílico (166 mg; 0,91 mmoles) em diclorometano (9 ml) adicionou-se uma solução de cloreto de oxalilo 2,0 M (905 μΐ; 1,82 mmoles), seguida de 1 gota de dimetilformamida. A mistura reaccional foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente. Os solventes foram depois removidos para fornecer 182 mg (99%) de uma mistura 2:1 de cloreto do ácido 2-azido-4-metil-ciclo-hexanocarboxílico e cloreto do ácido 4-metil-ciclo-hex-l-enocarboxílico.

Passo IV A uma solução de éster metilico do ácido 3- isopropilamino-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (227 mg; 0,824 mmoles) em 1,2-dicloroetano (2,5 ml) adicionou-se a mistura 2:1 de cloreto do ácido 2-azido-4-metil-ciclo-hexano-carboxílico e cloreto do ácido 4-metil-ciclo-hex-l-eno-carboxílico (182 mg; 0,906 mmoles) dissolvida em 1,2-dicloroetano (0,5 ml) . A solução resultante foi agitada durante 18h a 90°C e depois arrefecida até à temperatura ambiente. Em seguida, diluiu-se com acetato de etilo (10 ml) e com uma solução saturada de NaHCCb (10 ml) . A fase aquosa foi separada e lavada com acetato de etilo (2x10 ml), e as camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) , filtradas e concentradas. O residuo foi purificado por cromatografia flash (0% a 20% EtOAc/hexano) para proporcionar 178 mg (49%) de éster metilico do ácido 3-[(2-azido-4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-isopropilamino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico.

Passo V

Ao composto éster metilico do ácido 3-[(2-azido-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropilamino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (17,5 mg; 0,04 mmoles) em metanol (400 μΐ) adicionou-se ácido clorídrico concentrado (15 μΐ), seguido de paládio a 10% em carvão (4 mg; 0, 004 mmoles). O vaso de reacção foi submetido a 20 psi de hidrogénio e depois agitado à temperatura ambiente durante 17 horas. O residuo foi, em 54 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ seguida, filtrado através de celite, lavado com metanol e evaporado para fornecer o produto em bruto. Ao produto em bruto em diclorometano (400 μΐ) adicionou-se piridina (19 μΐ; 0,24 mmoles), seguida de anidrido acético (15 μΐ; 0,16 mmoles) e de uma quantidade catalítica de DMAP. A solução resultante foi agitada durante 24 horas à temperatura ambiente e depois parada com uma solução saturada de NaHCCb (5 ml) . A fase aquosa foi separada e lavada com diclorometano (2x5 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) , filtradas e concentradas. O residuo foi depois purificado por cromatografia preparativa (60% EtOAc/hexano) para proporcionar 8,5 mg (47% para dois passos) de éster metilico do ácido 3- [ (2-acetilamino-4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico.

Passo VI O composto éster metilico do ácido 3-[(2-acetilamino-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (8,5 mg; 0,019 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxano:H20 (250 μΐ) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN (22 μΐ; 0,023 mmoles). Após 22 horas de agitação à temperatura ambiente, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 5 ml de H20 acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x5 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2S04) e concentradas para proporcionar 7,5 mg (91%) de ácido 3-[(2-acetilamino-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 12). 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 7,78-7,73 ppm (m, 2H) ; 7,60 ppm (s, 1H); 7,49-7,39 ppm (m, 3H); 4,84-4,77 ppm (m, 1H); 4,36-4,33 ppm (m, 1H) ; 2,50-2,45 ppm (m, 1H) ; 1,98 ppm (s, 3H) ; 1,95-1,85 ppm (m, 2H) ; 1,73-1,49 ppm (m, 5H) ; 1,17 ppm (d, 3H) ; 0,94 ppm (d, 3H); 0,83-0,77 ppm (m e d, 4H). 55 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 13 Ácido 3- [ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 13

Passo I

A uma suspensão de éster metílico do ácido 3-amino-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (987 mg; 4,23 mmoles) em THF seco (1,0 ml), à temperatura ambiente, adicionou-se mono-etilenocetal de 1,4-ciclo-hexanodiona (661 mg; 4,23 mmoles), seguido de dicloreto de dibutilestanho (129 mg; 0,42 mmoles). Após 5 min, adicionou-se fenilsilano (575 μΐ; 4,65 mmoles), e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 dias, altura em que se obteve uma solução límpida. A solução foi depois concentrada, e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (0% a 30% EtOAc/hexano) para originar 1,22 g (77%) de éster metílico do ácido 3-(1,4-dioxa-spiro-[4.5]dec-8-ilamino)-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 7,64-7,61 ppm (m, 2H) ; 7,42-7,33 ppm (m, 3H) ; 6,85 ppm (s, 1H) ; 3,96 ppm (s, 4H) ; 3,82 ppm (s, 3H) ; 3,49 ppm (bs, 1H); 2,06-2,00 ppm (m, 2H); 1,85-1,81 ppm (m, 2H) ; 1,79-1, 63 ppm (m, 4H) .

Passo II A uma mistura de ácido trans-4-metil-ciclo-hexano-carboxílico (148 mg; 1,044 mmoles) e trifenilfosfina (274 mg; 1,044 mmoles) dissolvidos em 1,2-dicloroetano (1,5 ml) adicionou-se N-clorosuccinimida (145 mg; 1,084 mmoles). Após 15 minutos de agitação à temperatura ambiente, adicionou-se uma solução de éster metílico do ácido 3-(1,4-dioxa-spiro[4.5]dec-8-ilamino)-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (300 mg; 0,803 mmoles) em 1,2-dicloroetano (1,5 ml). A mistura resultante foi agitada durante 18h a 90°C e depois arrefecida 56 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ até à temperatura ambiente. Em seguida, diluiu-se com acetato de etilo (10 ml) e juntou-se uma solução saturada de NaHCCb (10 ml) . A fase aquosa foi separada e lavada com acetato de etilo (2x10 ml), e as camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2SC>4) , filtradas e concentradas. O residuo foi purificado por cromatografia flash (0% a 30% EtOAc/hexano) para originar 265 mg (66%) de éster metilico do ácido 3-[ (1,4-dioxa- spiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metilciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 7,66-7,61 ppm (m, 2H); 7,47-7,38 ppm (m, 3H); 7,04 ppm (s, 1H); 4,72-4,64 ppm (m, 1H); 3,90-3,65 ppm (m, 7H); 2,04-1,89 ppm (m, 2H) ; 1,79-1,50 ppm (m, 10H) ; 1,49-1,37 ppm (m, 1H) ; 1,35-1,17 ppm (m, 3H); 0,77 ppm (d, 3H); 0,73-0,55 ppm (m, 2H).

Passo III

Ao composto éster metilico do ácido 3-[(1,4-dioxa-spiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metilciclo-hexanocarbonil)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (401 mg; 0,806 mmoles) em tetra-hidrofurano (4 ml) adicionou-se uma solução de HC1 3N (4 ml) , e a reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. Em seguida, diluiu-se com acetato de etilo (10 ml), a camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x10 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram lavadas com salmoura (10 ml), secas com Na2S04, filtradas e concentradas. O residuo foi purificado por cromatografia flash (0% a 40%

EtOAc/Hexano) para fornecer 315 mg (86%) de éster metilico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 7, 64-7, 62 ppm (m, 2H) ; 7,48-7,40 ppm (m, 3H) ; 7,02 ppm (s, 1H); 5,13-5,05 ppm (m, 1H); 3,86 ppm (s, 3H); 2,59-2,24 ppm (m, 5H); 2,15-2,09 ppm (m, 1H); 2,04-1,99 ppm (m, 1H); 1,78-1,60 ppm (m, 6H) ; 1,50-1,32 ppm (m, 3H) ; 0,78 ppm (d, 3H) ; 0,74-0,57 ppm (m, 2H).

Passo IV O composto éster metilico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) - (4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (34 mg; 0,075 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxano:H20 (1 ml) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN (375 μΐ; 0,375 mmoles) . Após 3 horas de agitação à temperatura ambiente, os solventes foram removidos e depois 57 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ sujeitos a partição entre 5 ml de H20 acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x5 ml). As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2S04) e concentradas. 0 residuo foi purificado por cromatografia preparativa (10% MeOH/CH2Cl2) para proporcionar 17 mg (52%) de ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (composto 13). 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 7, 64-7, 62 ppm (m, 2H) ; 7,38-7,28 ppm (m, 3H) ; 7,26 ppm (s, 1H) ; 4,88-4,81 ppm (m, 1H); 2,55-2,41 ppm (m, 1H); 2,26-1,91 ppm (m, 3H); 1,88-1,26 ppm (m, 11H); 0,88-0,78 ppm (m, 1H); 0,69 ppm (d, 3H); 0,63-0,48 ppm (m, 2H).

Exemplo 15 Ácido 3-[ (4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 15

Passo I 0 composto éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) - (4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (55 mg; 0,121 mmoles) foi dissolvido em metanol (1,2 ml), arrefecido para 0°C e, em seguida, adicionou-se boro-hidreto de sódio (4,6 mg; 0,121 mmoles). Após 30 minutos de agitação a 0°C, a reacção foi parada com uma solução de ácido clorídrico a 10% (5 ml) , e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (3x10 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2S04) e concentradas. O resíduo foi depois purificado por cromatografia preparativa (3% MeOH/CH2Cl2) para obter 34 mg (62%) de éster metílico do ácido 3-[(trans-4-hidroxi-ciclo-hexil)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 7, 66-7, 63 ppm (m, 2H) ; 7,48-7,39 ppm (m, 3H) ; 7,02 ppm (s, 1H) ; 4, 62-4,54 ppm (m, 1H) ; 3,85 ppm (s, 58 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 3Η); 3,46-3,39 ppm (m, 1Η); 2,03-1,91 ppm (m, 4H); 1,83-1,78 ppm (m, 1H); 1,72-1,23 ppm (m, 10H); 1, 07-0, 97 ppm (m, 1H) ; 0,76 ppm (d, 3H); 0,73-0,55 ppm (m, 2H).

Passo II O composto éster metílico do ácido 3-[(trans-4-hidroxi-ciclo-hexil)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (34 mg; 0,075 mmoles) foi

dissolvido numa mistura 4:1 de dioxanoiíbO (1 ml) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN (375 μΐ; 0,375 mmoles). Após 4 horas de agitação à temperatura ambiente, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 5 ml de H2O acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x5 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2SC>4) e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatograf ia preparativa (10% MeOH/CH2Cl2) para proporcionar 21 mg (64%) de ácido 3-[(trans-4-hidroxi-ciclo-hexil)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 15). 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 7,73-7,70 ppm (m, 2H) ; 7,46-7,37 ppm (m, 3H) ; 7,28 ppm (s, 1H); 4,47-4,41 ppm (m, 1H); 3,38-3,32 ppm (m, 1H); 2,14-2,08 ppm (m, 1H) ; 1, 99-1,88 ppm (m, 4H); 1,80-1,77 ppm (bd, 1H) ; 1,70-1,51 ppm (m, 4H); 1,44-1,27 ppm (m, 5H); 1,10-1,03 ppm (m, 1H); 0,77 ppm (d, 3H); 0,72-0,55 ppm (m, 2H).

Exemplo 16 Ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 47

Passo I O composto éster metílico do ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil) -(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (62 mg; 0,136 mmoles) foi dissolvido em benzeno 59 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ (0,7 ml) e, em seguida, adicionou-se ácido p-nitrobenzóico (27 mg; 0,163 mmoles) e trifenilfosfina (43 mg; 0,163 mmoles). A solução resultante foi arrefecida num banho de gelo e adicionou-se azodicarboxilato de dietilo (26 μΐ; 0,163 mmoles). Após agitação à temperatura ambiente durante 22 horas, os solventes foram removidos, e o resíduo foi purificado por cromatografia preparativa (30% EtOAc/hexano) para fornecer 44 mg (54%) de éster metílico do ácido 3-{ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-[4-(4-nitro-benzoíloxi)ciclo-hexil]-amino}-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 7,91-7,83 ppm (m, 4H); 7, 69-7, 64 ppm (m, 2H) ; 7,50-7,47 ppm (m, 3H); 7,16 ppm (s, 1H); 5,24 ppm (bs, 1H); 4,82-4,74 ppm (m, 1H) ; 3,86 ppm (s, 3H) ; 2,13-1,90 ppm (m, 4H) ; 1,82-1,59 ppm (m, 9H); 1,50-1,39 ppm (m, 1H); 1,37-1,24 ppm (m, 2H); 0,78 ppm (d, 3H); 0,75-0,59 ppm (m, 2H).

Passo II O composto éster metílico do ácido 3-{ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-[4-(4-nitro-benzoíloxi)-ciclo-hexil]-amino}-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (44 mg; 0,073 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxano:H20 (1 ml) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN (365 μΐ; 0,365 mmoles). Após 4 horas de agitação à temperatura ambiente, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 5 ml de H20 acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x5 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2S04) e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatograf ia preparativa (10% MeOH/CH2Cl2) para proporcionar 15 mg (47%) de ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 7,64-7,61 ppm (m, 2H) ; 7,37-7,27 ppm (m, 3H) ; 7,20 ppm (s, 1H) ; 4,43-4,37 ppm (m, 1H); 3,79 ppm (bs, 1H); 2,08-2,02 ppm (m, 1H); 1,77-1,43 ppm (m, 13H) ; 1,36-1,24 ppm (m, 2H) ; 0,68 ppm (d, 3H) ; 0,64-0,50 ppm (m, 2H). 60 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 17 Ácido 3-[ (4-metoxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 46

Passo I 0 composto éster metílico do ácido 3-[ (4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-

2- carboxílico (27 mg; 0,059 mmoles) foi dissolvido em THF (0,6 ml), arrefecido para 0°C num banho de gelo e depois adicionou-se hidreto de sódio a 60% (5 mg; 0,118 mmoles), seguido de uma quantidade catalítica de iodeto de tetrabutilamónio. Após agitação durante 1 hora, adicionou-se iodometano (37 μΐ; 0,590 mmoles) e agitou-se a reacção durante mais 3 horas. Esta foi depois parada com água (5 ml) e extraída com acetato de etilo (3x5 ml). As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2S04) e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia preparativa (10% MeOH/CH2Cl2) para obter 5 mg (18%) de ácido 3- [(4-metoxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 46). 1H-RMN (CDC13, 400 MHz) 7, 67-7, 65 ppm (m, 2H) ; 7,47-7,40 ppm (m, 3H) ; 7,05 ppm (s, 1H) ; 4,59 ppm (bs, 1H) ; 3,28 ppm (s, 3H) ; 3, 06-2, 97 ppm (m, 1H) ; 2,18-2,01 ppm (m, 4H) ; 1, 94-1,90 ppm (m, 1H); 1,74-1,25 ppm (m, 11H); 0,77 ppm (d, 3H); 0,71-0,61 ppm (m, 2H). 61 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 18 Ácido 3-[(4-hidroxiimino-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico,

Composto 16

Passo I 0 composto éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (67 mg; 0,148 mmoles) foi dissolvido em metanol (1,5 ml) e adicionou-se o sal cloridrato de hidroxilamina (62 mg; 0,888 mmoles). Após agitação durante 2 horas à temperatura ambiente e 2 horas sob refluxo, o pH da solução foi ajustado para 8-9 através da adição de uma solução de hidróxido de sódio a 10%. A solução resultante foi depois sujeita a refluxo durante 30 minutos e arrefecida até à temperatura ambiente. Em seguida, a reacção foi parada com água (5 ml) e extraída com acetato de etilo (3x5 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram lavadas com salmoura, secas (Na2SC>4) e concentradas. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (0% a 60% EtOAc/Hex) para proporcionar 49 mg (71%) de éster metílico do ácido 3 —[ (4 — hidroxiiminociclo-hexil)-(4-metilciclo-hexanocarbonil)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 7,63-7,60 ppm (m, 2H) ; 7,47-7,39 ppm (m, 3H) ; 6,98 ppm (s, 1H) ; 4,90-4,82 ppm (m, 1H); 3,84 ppm (s, 3H); 3,39-3,29 ppm (m, 1H); 2,44-2,20 ppm (m, 2H) ; 2,13-2,09 ppm (m, 1H) ; 2,04-1,73 ppm (m, 4H) ; 1,70-1,57 ppm (m, 4H); 1,50-1,22 ppm (m, 4H); 1,13-1,02 ppm (m, 1H); 0,77 ppm (d, 3H); 0,73-0,55 ppm (m, 2H).

Passo II

Éster metílico do ácido 3-[(4-hidroxiimino-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (34 mg; 0,073 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxano:H20 (1 ml) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN 62 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ (365 μΐ; 0,365 mmoles) . Após 3 horas de agitação à temperatura ambiente, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 5 ml de H20 acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x5 ml). As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2SC>4) e concentradas. O residuo foi purificado por cromatografia preparativa (10% MeOH/CH2Cl2) para fornecer 15 mg (45%) de ácido 3-[(4-hidroxiimino-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 16). 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 7,72-7, 69 ppm (m, 2H) ; 7,50-7,36 ppm (m, 3H) ; 7,29 ppm (s, 1H) ; 4,73-4,70 ppm (m, 1H); 3,42-3,31 ppm (m, 1H); 2,42-2,07 ppm (m, 5H); 1,89-1,28 ppm (m, 9H) ; 1,18-1,03 ppm (m, 1H) ; 0,78 ppm (d, 3H) ; 0,73-0,56 ppm (m, 2H) . O composto 25 foi preparado de uma forma similar.

Exemplo 19 Ácido 3- [ (l-etil-3-metilamino-propil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico,

Composto 41

CBZ CBZ

Passo I A uma solução agitada de éster metilico do ácido 3-amino-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (1,0 g; 4,29 mmoles) em THF (1,0 ml) adicionou-se a cetona (1,0 g; 4,29 mmoles), dicloreto de dibutilestanho (130 mg; 0,43 mmoles) e fenilsilano (582 μΐ; 4,72 mmoles), e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 dias. A reacção foi depois parada com uma solução saturada de NaHCCb, e a mistura 63 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ foi extraída 3 vezes com EtOAc. Os extractos combinados foram depois lavados com salmoura, secos com Na2S04, filtrados e concentrados. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (0% a 30% EtOAc/Hex) para fornecer 1,86 g (96%) de éster benzílico do ácido 4-(2-metoxicarbonil-5-fenil-tiofen-3-ilamino)-piperidina-l-carboxílico.

Passo II A uma solução agitada de ácido trans-4-metil-ciclo-hexílico (637 mg; 4,48 mmoles) em diclorometano (22 ml) adicionou-se uma solução de cloreto de oxalilo (2M em CH2CI2; 4,5 ml), seguida de 2 gotas de DMF. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2h e depois foi evaporada para remover o solvente e o excesso de cloreto de oxalilo. O produto em bruto foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. A uma solução agitada de éster benzílico do ácido 4- (2-metoxicarbonil-5-fenil-tiofen-3-ilamino)-piperidina-l-carboxílico (1,01 g; 2,24 mmoles) em dicloroetano (7,5 ml) adicionou-se cloreto de trans-4-metilciclo-hexilo (720 mg; 4,48 mmoles). A mistura reaccional resultante foi aquecida durante 17h a 90°C, arrefecida até à temperatura ambiente, parada com uma solução saturada de NaHC03 e depois extraída 3 vezes com EtOAc. Os extractos combinados foram depois lavados com salmoura, secos com Na2S04, filtrados e concentrados. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (0% a 25% EtOAc/Hex) para fornecer 1,00 g (78%) de éster benzílico do ácido 4-[ (2-metoxicarbonil-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-piperidina-l-carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 7,65-7,62 ppm (m, 2H); 7,49-7,40 ppm (m, 3H); 7,31-7,23 ppm (m, 5H); 7,0 ppm (s, 1H); 5,05 ppm (s, 2H) ; 4,82-4,76 ppm (m, 1H) ; 4,19 ppm (bs, 2H) ; 3,85 ppm (s, 3H) ; 2,87 ppm (bs, 2H); 2,03-1,58 ppm (m, 9H); 1,49-1,28 ppm (m, 2H); 1,10 ppm (bs, 2H); 0,78 ppm (d, 3H); 0,73-0,56 ppm (m, 2H).

Passo III A uma solução de éster benzílico do ácido 4 — [ (2 — metoxicarbonil-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-piperidina-l-carboxílico (506 mg; 0,88 mmoles) numa mistura 6:1 de acetato de etilo e metanol (7 ml) adicionou-se paládio a 10% sobre carvão (103 mg; 0,097 mmoles). A mistura reaccional resultante foi colocada sob 64 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ atmosfera de Η2 (25 psi), agitada à temperatura ambiente durante 3 dias e depois filtrada em celite e evaporada à secura. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (100/90/16/1, CH2Cl2/CHCl3/MeOH/Et3N) para fornecer 287 mg (74%) de éster metilico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-piperidin-4-il-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 7,64-7,61 ppm (m, 2H) ; 7,46-7,38 ppm (m, 3H) ; 7,04 ppm (s, 1H) ; 4,74-4, 68 ppm (m, 1H) ; 3,84 ppm (s, 3H); 3,13-3,03 ppm (m, 2H); 2,78-2,67 ppm (m, 2H); 2,03-1,92 ppm (m, 2H); 1,77-1,74 ppm (m, 1H); 1,69-1,13 ppm (m, 9H); 0,77 ppm (d, 3H); 0,72-0,59 ppm (m, 2H).

Passo IV O composto éster metilico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperidin-4-il-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (20 mg; 0,045 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxano:H20 (0,5 ml) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN (135 μΐ; 0,135 mmoles). Após 4 horas de agitação à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi acidificada para pH 3-4 com uma solução de ácido clorídrico a 10% e depois os solventes foram removidos. A mistura foi adicionalmente diluída com água fria (1 ml) e filtrada para proporcionar 16 mg (84%) de ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-piperidin-4-il-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (Composto 41). 1H-RMN (CD30D, 400 MHz) 7,78-7,75 ppm (m, 2H) ; 7,50-7,41 ppm (m, 4H) ; 4,77-4, 69 ppm (m, 1H) ; 3,47-3,36 ppm (m, 2H); 3,16-3,06 ppm (m, 2H); 2,24-2,21 ppm (m, 1H); 2,15-2,07 ppm (m, 2H) ; 1,91-1,80 ppm (m, 1H) ; 1,76-1,51 ppm (m, 6H); 1,44-1,26 ppm (m, 2H); 0,79 ppm (d, 3H); 0,76-0,60 ppm (m, 2H).

Exemplo 20 Ácido 3- [ (1- (benzil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo- hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico,

Composto 52

o 0 65 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Passo I

Ao composto éster metilico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperidin-4-il-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (43 mg; 0,098 mmoles) em dicloroetano (1,0 ml) adicionou-se benzaldeído (15 μΐ; 0,146 mmoles), seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (41 mg; 0,195 mmoles). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 4h, parada com solução saturada de NaHCCt e depois extraida com acetato de etilo (3*5 ml). Os extractos combinados foram depois lavados com salmoura, secos com Na2S04, filtrados e concentrados. O residuo foi purificado por cromatografia preparativa (50% EtOAc/Hex) para fornecer 32 mg (61%) de éster metilico do ácido 3-[ (1-(benzil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico.

Passo II O composto éster metilico do ácido 3-[(1-(benzil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (32 mg; 0,060 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxanoiíbO (0,5 ml) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN (180 μΐ; 0,180 mmoles). Após 2 horas de agitação à temperatura ambiente e 4 horas de refluxo, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 5 ml de H20 acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2*5 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2S04) e concentradas. O residuo foi purificado por cromatografia preparativa (10% MeOH/CH2Cl2) para fornecer 22 mg (71%) de ácido 3-[(1-(benzil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (composto 52). 1H-RMN (CD2C12, 400 MHz) 7,41-7,36 ppm (m, 4H) ; 7,31-7,28 ppm (m, 6H) ; 6,82 ppm (s, 1H) ; 4,80-4,73 ppm (m, 1H) ; 4,37 ppm (d, 1H) ; 3,65 ppm (bd, 1H) ; 3,53 ppm (d, 1H) ; 3,10 ppm (bd, 1H) ; 2,63 ppm (t, 1H) ; 2,47 ppm (t, 1H) ; 2,10-2,06 ppm (m, 2H); 1,85-1,63 ppm (m, 4H); 1,57-1,38 ppm (m, 4H); 1,28-1,18 ppm (m, 2H) ; 0,66 ppm (d, 3H) ; 0, 62-0,50 ppm (m, 2H) . 66 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 21 Ácido 3- [ (l-acetil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo- hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico, Composto 48

Passo I

Ao composto éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperidin-4-il-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (58 mg; 0,132 mmoles) em diclorometano (1,3 ml) adicionou-se piridina (64 μΐ; 0,789 mmoles), seguida de anidrido acético (50 μΐ; 0,526 mmoles) e de uma quantidade catalítica de DMAP. A solução resultante foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente e depois foi parada com uma solução saturada de NaHC03 (5 ml) . A fase aquosa foi separada e lavada com acetato de etilo (2x5 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) , filtradas e concentradas. O residuo foi depois purificado por cromatografia preparativa (100/90/16/1, CH2Cl2/CHCl3/MeOH/ Et3N) para obter 50 mg (78%) de éster metilico do ácido 3-[(l-acetil-piperidin-4-il)- (4-metilciclo-hexanocarbonil)amino]-5-feniltiofeno-2-carboxílico.

Passo II O composto éster metilico do ácido 3-[(1-acetil-piperidin-4-il)-(4-metilciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (50 mg; 0,104 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxano:H20 (1 ml) e depois adicionou-se LiOH IN (310 μΐ; 0,310 mmoles). Após 5 horas de agitação à temperatura ambiente e 4 horas de refluxo, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 5 ml de H20 acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x5 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2S04) e concentradas. O residuo foi purificado por cromatografia preparativa (100/90/16/1, CH2Cl2/CHCl3/MeOH/Et3N) para proporcionar 27 mg (56%) de ácido 67 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 3-[(l-acetil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 48). 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) mistura 1:1 de rotâmeros - 7,75-7,73 ppm (m, 2H); 7,48-7,40 ppm (m, 3H); 7,37 ppm (s, 1H); 4,74-4,51 ppm (m, 1H); 3,99-3,90 ppm (m, 1H); 3,23-3,12 ppm (m, 1H); 2,70- 2,60 ppm (m, 1H); 2,27-2,00 ppm (m, 2H); 2,04 ppm (s; 1,5H); 2,00 ppm (s; 1,5H); 1,96-1,87 ppm (m, 1H); 1,77-1,06 ppm (m, 9H); 0,78 ppm (d, 3H); 0,73-0,57 ppm (m, 2H). O composto 63 foi preparado de uma forma semelhante. 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) mistura 1:1 de rotâmeros - 7,91 ppm (s; 0,5H); 7,88 ppm (s; 0,5H); 7,75-7,72 ppm (m, 2H); 7,48-7,39 ppm (m, 3H) ; 7,37 ppm (s; 0,5H); 7,36 ppm (s; 0,5H); 4,78-4, 68 ppm (m, 1H) ; 4,42-4,31 ppm (m, 1H) ; 3, 79-3, 63 ppm (m, 1H); 3,26-3,15 ppm (m, 1H); 2,78-2,66 ppm (m, 1H); 2,12- 1,91 ppm (m, 3H) ; 1,7 6-1,04 ppm (m, 9H) ; 0,7 8 ppm (d, 3H) ; 0. 73-0,57 ppm (m, 2H). O composto 23, o composto 39 e o composto 40 foram preparados da forma descrita no Exemplo 24.

Composto 23: 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 7, 65-7, 63 ppm (m, 2H) ; 7,25 ppm (s, 1H); 7,16-7,12 ppm (m, 2H); 4,76-4,70 ppm (m, 1H); 3,53-3,46 ppm (m, 1H); 3,17-3,04 ppm (m, 2H); 2,80 ppm (s, 3H) ; 2,23-2,09 ppm (m, 3H) ; 2,01-1,92 ppm (m, 1H) ; 1,82-1,79 ppm (m, 1H); 1,70-1,48 ppm (m, 5H); 1,41-1,25 ppm (m, 2H); 0,77 ppm (d, 3H); 0,73-0,54 ppm (m, 2H).

Composto 39: 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 7,77-7,74 ppm (m, 2H); 7,50-7,40 ppm (m, 4H); 4,77-4,71 ppm (m, 1H); 3,62-3,54 ppm (m, 2H) ; 3,15-3,04 ppm (m, 4H) ; 2,29-2,08 ppm (s, 3H) ; 1, 97-1, 88 ppm (m, 1H) ; 1,78-1,51 ppm (m, 6H) ; 1,45-1,34 ppm (m, 1H) ; 1,30-1,26 ppm (m, 1H) ; 1,28 ppm (t, 3H) ; 0,79 ppm (d, 3H); 0,76-0,59 ppm (m, 2H).

Composto 40: 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 7,76-7,74 ppm (m, 2H) ; 7,49-7,40 ppm (m, 4H); 4,78-4,72 ppm (m, 1H); 3,51-3,42 ppm (m, 3H) ; 3,22-3,13 ppm (m, 2H) ; 2,30-2, 09 ppm (s, 3H) ; 2,00-1,91 ppm (m, 1H); 1,78-1,51 ppm (m, 7H); 1,47-1,34 ppm (m, 1H); 1,30 ppm (d, 6H); 0,79 ppm (d, 3H); 0,74-0,59 ppm (m, 2H). 68 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 22 Ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- (1-metil-l-oxi-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico,

Composto 65

Passo I 0 composto éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil ) -(l-metilpiperidin-4-il)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (42 mg; 0,092 mmoles) foi dissolvido em diclorometano (1,8 ml) e depois adicionou-se ácido m-cloro-peroxibenzóico (27 mg; 0,111 mmoles). Após agitação à temperatura ambiente durante 2 horas, os solventes foram removidos, e o residuo foi diluido com acetato de etilo (5 ml) . Esta solução foi adicionalmente lavada com uma solução de hidróxido de sódio a 10% (2x5 ml) e salmoura (5 ml) e depois foi seca (Na2S04) , filtrada e concentrada. O residuo foi purificado por cromatografia preparativa (10% MeOH/CH2Cl2) para fornecer 33 mg (77%) de éster metilico do ácido 3 — [ (4 — metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-metil-l-oxi-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 7,64-7,61 ppm (m, 2H); 7,45-7,37 ppm (m, 3H); 7,10 ppm (s, 1H); 4,76-4,68 ppm (m, 1H); 3,83 ppm (s, 3H); 3,34-3,22 ppm (m, 4H); 3,18 ppm (s, 3H) ; 2,85 ppm (bs, 2H) ; 2,57-2,47 ppm (m, 1H) ; 2,23-2,14 ppm (m, 1H); 2,03-1,96 ppm (m, 1H); 1,90-1,87 ppm (m, 1H) ; 1,70-1,58 ppm (m, 3H) ; 1,46-1,35 ppm (m, 1H) ; 1,31-1,22 ppm (m, 2H); 0,76 ppm (d, 3H); 0,71-0,56 ppm (m, 2H).

Passo II O composto éster metilico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil ) -(l-metil-l-oxi-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (33 mg; 0,070 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxanoifhO (0,7 ml) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN (210 μΐ; 0,210 mmoles). Após 4 horas de agitação à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi acidificada para pH 3-4 com uma solução de 69 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ ácido clorídrico a 10% e depois os solventes foram removidos. A mistura foi adicionalmente diluída com água fria (1 ml) e filtrada para proporcionar 23 mg (72%) de ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-metil-l-oxi-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 65) . 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 7,74-7,72 ppm (m, 2H); 7,48-7,39 ppm (m, 3H); 7,38 ppm (s, 1H) ; 4,75-4, 67 ppm (m, 1H) ; 3, 80-3, 65 ppm (m, 4H) ; 3,42 ppm (s, 3H) ; 2,32-2,21 ppm (m, 1H) ; 2,17-1,95 ppm (m, 4H); 1,81-1,71 ppm (m, 2H); 1, 66-1,28 ppm (m, 5H) ; 0,78 ppm (d, 3H); 0,76-0,59 ppm (m, 2H).

Exemplo 23 Ácido 3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- (tetra-hidro-piran-4-il)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 31

Passo I

Acilação utilizando trifenilfosfina em 1,2-dicloroetano sob refluxo, como descrito para o Exemplo 25, Passo VI.

Passo II O composto éster metílico do ácido 3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(tetra-hidropiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (31 mg; 0,062 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxano:H20 (0,6 ml) e, em seguida, adicionou-se LiOH IN (310 μΐ; 0,310 mmoles). Após 4 horas de agitação à temperatura ambiente, os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 5 ml de H20 acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x5 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo 70

ΕΡ 1 569 929/PT foram secas (Na2S04) e concentradas. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para proporcionar 14 mg (52%) de ácido 3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(tetra-hidro-piran-4-il)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 31). 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 7,80-7,75 ppm (m, 2H) ; 7, 50-7,40 ppm (m, 4H); 4,80-4,68 ppm (m, 1H); 4,15 ppm (s, 1H); 4,00-3,85 ppm (m, 2H) ; 3,55-3, 40 ppm (m, 2H) ; 2,35-2,15 ppm (m, 1H) ; 2,00-1,45 ppm (m, 4H) ; 1,40-1,25 ppm (m, 2H) ; 0,75 ppm (d, 3H); 0,73-0,55 ppm (m, 2H).

Exemplo 24

Cloreto de 4-[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio, Composto 11 \

Passo I (a) A uma solução agitada de l-metil-piperidin-4-ona (6,0 g; 53 mmoles; 6,52 ml) e EtsN (14,16 g; 140 mmoles; 19,5 ml) em 1,4-dioxano (20 ml) adicionou-se clorotrimetilsilano (7,6 g; 70 mmoles; 8,88 ml), gota a gota, durante 30 min. A mistura reaccional resultante foi aquecida lentamente ao refluxo a 110°C, agitada à mesma temperatura durante 24h, adicionou-se uma quantidade adicional de clorotrimetilsilano (4,44 ml), aqueceu-se durante 24h (recolheu-se uma alíquota e efectuou-se uma análise de 1H-RMN), arrefeceu-se até à temperatura ambiente, filtrou-se o sólido e lavou-se com n-pentano. O filtrado foi concentrado no evaporador rotativo e depois diluído com n-pentano, filtrando-se o sólido. A solução resultante foi concentrada no evaporador rotativo, seguida de alto vácuo, e forneceu o composto l-metil-4-trimetilsilaniloxi-1,2,3,6-tetra-hidropiridina (9,68 g; o 71 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ espectro de 1H-RMN mostrou uma razão de cerca de 10:1 de sililenoléter e de material de partida) . O produto em bruto foi utilizado desta forma no passo seguinte sem purificação adicional. (b) A uma solução agitada de 3-amino-5-fenil-tiofeno-carboxilato de metilo (233 mg; 1,0 mmoles) e l-metil-4-trimetilsilaniloxi-1,2,3,6-tetra-hidropiridina (370 mg; 2,0 mmoles) em dicloroetano (3,0 ml) adicionou-se AcOH (0,114 ml; 2,0 eq), seguido da adição de NaBH(OAc)3 (424 mg; 2,0 mmoles) em uma porção. A mistura reaccional resultante foi agitada à temperatura ambiente durante o fim-de-semana, adicionou-se solução aquosa de NaOH a 10% (até à basicidade) e, após 30 min, a mistura reaccional foi extraída com diclorometano. O extracto orgânico foi lavado com salmoura e seco. O produto em bruto foi purificado em coluna de gel de sílica, utilizando 20% EtOAc/hexano para o material de partida que não reagiu, seguido de CHCl3/MeOH/Et3N (180/16/1), e forneceu o composto éster metílico do ácido 3-(l-metil-piperidin-4-ilamino)-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (240 mg; 73%). 1H-RMN (CDC13, 400 MHz) : 7,64-7,6 (m, 2H) ; 7,43-7,34 (m, 3H) ; 6,83 (br s, 2H) ; 3,83 (s, 3H) ; 3,46-3,4 (m, 1H) ; 2,82-2,74 (m, 1H); 2,3 (s, 3H); 2,26-2,2 (m, 4H); 1,72-1,62 (m, 2H).

Passo II (a) A uma solução agitada de ácido trans-4-metilciclo- hexílico (656 mg; 4,6 mmoles) em diclorometano (23 ml) adicionou-se uma solução de cloreto de oxalilo (2M; 4,6 ml) em diclorometano, seguida de 2-3 gotas de DMF (com uma agulha de calibre 22G) . Após agitação durante 2h, o solvente e o excesso de cloreto de oxalilo foram removidos no evaporador rotativo, e as quantidades vestigiárias de solventes foram removidas sob baixo vácuo (nota: o produto é muito volátil, não aplicar vácuo durante muito tempo, cerca de 1-2 min) . O cloreto de 4-metil-ciclo-hexanocarbonilo em bruto foi utilizado imediatamente no passo seguinte. (b) A uma solução agitada do composto éster metílico do ácido 3-(l-metil-piperidin-4-ilamino)-5-fenil-tiofeno-2- carboxílico (540 mg; 1,636 mmoles) em 1,2-dicloroetano (15 ml) adicionou-se cloreto de trans-4-metil-ciclo-hexano-carbonilo, seguido de PPh3 (429 mg; 1,635 mmoles). A mistura 72 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ reaccional resultante foi aquecida durante 48h a 90°C, arrefecida até à temperatura ambiente, alcalinizada com solução aquosa de NaOH a 10% e depois extraída com diclorometano. O extracto orgânico combinado foi lavado com salmoura, seco, concentrado e purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando CíbC^/CHCls/MeOH/EtsN 200/90/16/1, eluindo primeiro o composto éster metílico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-metil- piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (760 mg; que estava contaminado com ácido ciclo-hexílico), seguido do material de partida (270 mg). 1H-RMN (CDC13, 400 MHz): 7,64- 7.6 (m, 2H) ; 7,47-7,38 (m, 3H) ; 7,04 (s, 1H) ; 4, 68-4,58 (m) ; 3,84 (s, 3H) ; 2,95-2,8 (m, 2H) ; 2,26 (s, 3H) ; 2,2-1,26 (m, 14H) ; 0,767 (d, J= 6,6 Hz, 3H) ; 0,74-0,56 (m, 2H) .

Passo III

Uma mistura de éster metílico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-metil-piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (176 mg; 0,387 mmoles) e LÍOH.H2O (48,8 mg; 1,16 mmoles; 4,0 eq) em dioxano:água (3:1; 3,9 ml; 0,1 M) foi aquecida a 50°C durante 5h, arrefecida até à temperatura ambiente, acidificada com solução aquosa de HC1 IN, concentrada e diluída com uma pequena quantidade de água. O produto foi filtrado, seco (136 mg) e depois foi triturado várias vezes com hexanos para remover o composto cloreto de 4-[(2-carboxi-5-feniltiofen-3-il)-(trans-4-metilciclo-hexano-carbonil)-amino]-1-metil-piperidínio (composto 11) (101 mg; rendimento de 60%). 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz): 7,76-7,72 (m, 2H) ; 7,5-7,38 (m, 4H) ; 4,8-4,65 (m, 1H) ; 3,6-3,4 (m, 2H) ; 3,25-3,2 (m, 2H); 2,8 (s, 3H); 2,3-1,2 (m, 12H); 0,78 (d, J= 6.6 Hz, 3H) ; 0, 96-0,58 (m, 2H) .

Exemplos 25 Ácido (4R)-5-(4 — fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metil- ciclo-hex-l-enocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico, Composto 26, e ácido (IR,2S,4R)-5-(4-fluoro-fenil) -3-[(2- hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-tiofeno-2-carboxílico, Composto 24 73 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

BCH-25513 BCH-255QS Ο composto (IS,2R,5R)-2-isopropenil-5-metil-ciclo-hexanol foi preparado da forma descrita em Tetrahedron Letter (1993), vol. 49, pp6429-6436. 1H-RMN (CDC13, 400 MHz) : 4,95 ppm (s, 1H) ; 4,78 ppm (s, 1H) ; 3,99 ppm (s, 1H) ; 2,01-1,95 ppm (m, 2H) ; 1,79 ppm (s, 3H); 1,79-1, 66 ppm (m, 3H) ; 1,48-1,42 ppm (m, 1H) ; 1,16-1,09 ppm (m, 1H) ; 1, 00-0, 87 ppm (m, 2H); 0,88 ppm (d, 3H).

Passo I

No composto (IS,2R,5R)-2-isopropenil-5-metilciclo-hexanol (2,07 g; 13,42 mmoles) em DCM (67 ml) e MeOH (1,6 ml), a -78°C, borbulhou-se ozono/oxigénio gasoso até a mistura reaccional ficar azul, e o ozono em excesso foi arrastado com oxigénio. Adicionou-se sulfureto de dimetilo (4,9 ml) à mesma temperatura, agueceu-se lentamente até à temperatura ambiente, agitou-se durante a noite, concentrou-se e purificou-se por cromatografia em coluna, utilizando 10-20% EtOAc/hexano, para fornecer (IR,2S,4R)-1-(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-etanona (1,40 g; 67%) como um óleo. 1H-RMN (CDC13, 400 MHz): 4,29-4,27 ppm (m, 1H) ; 2,40-2,35 ppm (m, 1H) ; 2,19 ppm (s, 3H); 1,91-1,73 ppm (m, 5H); 1,05-0,91 ppm (m, 2H); 0,88 ppm (d, 3H).

Passo II A uma solução gelada de NaOH (4,8 g; 119,2 mmoles) em 74 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ água (40 ml) e 1,4-dioxano (30 ml) adicionou-se bromo (1,5 ml; 29, 57 mmoles) . À solução amarela resultante de NaOBr adicionou-se, gota a gota, uma solução de (IR, 2S,4R)-1-(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-etanona (1,4 g; 8,962 mmoles) em dioxano (130 ml) e água (35 ml) . A solução resultante foi agitada durante 3h a 10-15°C. A solução de NaOBr em excesso foi decomposta através da adição de uma solução de Na2S03 (1,1 g em 11 ml de água), acidificou-se com HC1 a 10% e extraiu-se com DCM. O extracto orgânico combinado foi lavado com salmoura, seco e concentrado para originar ácido (IR,2S,4R)-2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarboxílico (1,30 g; 92%). 1H-RMN (CDC13, 400 MHz) : 4,34 ppm (s, 1H) ; 2,43-2,39 ppm (m, 1H) ; 1, 96-1,76 ppm (m, 5H) ; 1,14-1,08 ppm (m, 1H) ; 1,02-0,93 ppm (m, 1H); 0,90 ppm (d, 3H).

Passo III A uma solução de ácido (IR, 2S, 4R)-2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarboxílico (162 mg; 1,02 mmoles) em diclorometano (5 ml) adicionou-se piridina (495 μΐ; 6,12 mmoles), seguida de anidrido acético (385 μΐ; 4,08 mmoles). A mistura reaccional foi agitada durante 20h à temperatura ambiente. Em seguida, os solventes foram removidos e adicionaram-se 10 ml de solução de HC1 3N. Esta mistura foi agitada durante 30 minutos e, em seguida, adicionou-se lentamente uma solução saturada de NaHCCb até pH = 9-10. Esta solução foi depois extraida com acetato de etilo (2x5 ml). A fase aquosa foi, em seguida, acidificada com uma solução de HC1 a 10% e extraida com acetato de etilo (3x5 ml) . As camadas de acetato de etilo foram combinadas, secas (Na2S04) e concentradas para obter 109 mg (53%) de ácido (IR,2S,4R)-2-acetoxi-4-metil-ciclo-hexanocarboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): 4,34-4,32 ppm (m, 1H); 2,42-2,37 ppm (m, 1H); 1,95-1,76 ppm (m, 5H) ; 1,13-1,06 ppm (m, 1H) ; 1,01-0,92 ppm (m, 1H) ; 0,89 ppm (d, 3H).

Passo IV A uma solução de ácido (IR, 2S, 4R)-2-acetoxi-4-metil-ciclo-hexanocarboxílico (109 mg; 0,54 mmoles) em diclorometano (2,7 ml) adicionou-se cloreto de oxalilo (545 μΐ; 1,09 mmoles), seguido de 1 gota de dimetilformamida. A mistura reaccional foi agitada durante 4h à temperatura ambiente. Os solventes foram depois removidos para obter 119 mg (99%) de 75 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ cloreto do ácido (IR*,2S*,4R*)-2-acetoxi-4-metil-ciclo- hexano-carboxí lico. ^-RMN (CDCI3, 400 MHz) : 5,45 ppm (s, 1H); 2,46-2,42 ppm (m, 1H); 2,02 ppm (s, 3H); 2,02-1,96 ppm (m, 1H); 1,91-1,76 ppm (m, 3H); 1,70-1,61 ppm (m, 1H); 1,16-1,08 ppm (m, 1H); 0,99-0,88 ppm (m, 1H); 0,87 ppm (d, 3H).

Passo V A uma solução agitada de éster metílico do ácido 3-amino-5-(4-fluoro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico (0,502 g; 2,0 mmoles) em 1,2-dicloroetano (6,0 ml) adicionou-se sequencialmente 2-metoxipropeno (0,38 ml; 4,0 mmoles), AcOH (0,114 ml; 2,0 mmoles) e NaBH(OAc)3 (0,84 g; 4,0 mmoles) e agitou-se durante 2h. Em seguida, diluiu-se com EtOAc e H20. A solução aquosa foi ajustada a pH=7 através da adição de NaHCC>3. A fase aquosa foi extraída com EtOAc, o extracto combinado foi lavado com salmoura, seco com MgS04 e filtrado. A purificação em "Bond Elut" com hexano até 10% EtOAc-hexano forneceu o composto éster metílico do ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-isopropilamino-tiofeno-2-carboxílico (0,538 g; rendimento de 92%).

Passo VI: Éster metílico do ácido (4R)-5-(4-fluoro-fenil) -3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hex-l-enocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico e éster metílico do ácido (IR,2S,4R)-3-[(2-acetoxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropilamino]-5-(4-fluoro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico. A uma solução de éster metílico do ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-isopropilamino-tiofeno-2-carboxílico (146 mg; 0,50 mmoles) em 1,2-dicloroetano (1,5 ml) adicionou-se cloreto do ácido (IR, 2S, 4R)-2-acetoxi-4-metil-ciclo-hexanocarboxílico (119 mg; 0,54 mmoles) dissolvido em 1,2-dicloroetano (0,5 ml), seguido de PPh3 (131 mg; 0,5 mmoles). A solução resultante foi agitada durante 24h a 90°C e depois arrefecida até à temperatura ambiente. Em seguida, diluiu-se com acetato de etilo (10 ml) e com uma solução saturada de NaHCC>3 (10 ml). A fase aquosa foi separada e lavada com acetato de etilo (2x10 ml), e as camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) , filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (0% a 25% EtOAc/Hexano) para fornecer 96 mg como uma mistura do composto do título. 76 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Passo VII

Os compostos (95 mg) do passo VI foram dissolvidos numa mistura de dioxano:H20 (4:1) (1,0 ml) e, em seguida, adicionaram-se 600 μΐ de LiOH IN. Após 24h a 60°C, a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, e os solventes foram removidos. O resíduo foi depois sujeito a partição entre 10 ml de H20 acidificada para pH 4 e 10 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada com acetato de etilo (2x10 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2SC>4) e concentradas, e o resíduo foi purificado por cromatografia preparativa para obter o composto ácido (4R)-5-(4-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metilciclo-hex-l-enocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (composto 26) (21 mg), 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz): 7,76-7,68 (m, 2H); 7,3-7,1 (m, 3H); 5,78 (br s, 1H); 4,9-4,75 (m, 1H); 2,3-1,4 (m) ; 1,33 (d, J= 4,3 Hz, 3H) ; 1,09 (d, J= 4,5 Hz, 3H) ; 0,815 (d, J= 3,5 Hz, 3H), e o composto ácido (IR,2S,4R)-5-(4-fluoro-fenil)-3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropilamino]-tiofeno-2-carboxílico (composto 24) (41 mg), 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz): 7,75-7,7 (m, 2H) ; 7,23 (s, 1H) ; 7,2-7,15 (m, 2H) ; 4,9-4,8 (m, 1H) ; 2,0-1,4 (m, 5H) ; 1,206 (d, J= 6,6 Hz, 3H) ; 1,017 (d, J= 6,4 Hz, 3H) ; 0,76 (d, J= 6,6 Hz, 3H) .

Exemplo 26 Ácido 3-[isopropil-(5-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-2- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 30

R = H

Passo I

A uma suspensão fria (0°C) e agitada de NaH (dispersão a 55% em óleo; 227, 9 mg; 5,2 mmoles; 1,3 eq) em THF (20 ml) adicionou-se, gota a gota, uma solução de éster etílico do ácido 2-hidroxi-pent-4-enóico (0,576 g; 4,0 mmoles) em THF 77 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ (20 ml) e agitou-se durante lh. A mistura reaccional foi depois tratada com 3-bromo-2-metilpropeno (0,81 g; 6,0 mmoles; 0,61 ml), aquecida lentamente até à temperatura ambiente e agitada durante lh. A reacção foi cuidadosamente parada com solução saturada de NH4C1. A mistura reaccional foi extraída com EtOAc (3><20 ml) , e a solução orgânica foi lavada com salmoura, seca (Na2S04) e concentrada. A purificação do resíduo por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando 5% EtOAc-Hexano, proporcionou o composto éster etílico do ácido 2-(2-metil-aliloxi)-pent-4-enóico (0,521 g; 66%) como um óleo. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : 5,9- 5,78 (m, 1H) ; 5,16-5,06 (m, 2H) ; 4,97 (s, 1H) ; 4,91 (s, 1H) ; 4,26-4,16 (m, 2H) ; 4,072 (d, J= 12,3 Hz, 1H) ; 3,93 (t, J= 6,5 Hz, 1H); 3,813 (d, J= 12,4 Hz, 1H); 1,15 (s, 3H); 1,28 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Passo II A uma solução agitada e sob refluxo de éster etílico do ácido 2-(2-metil-aliloxi)-pent-4-enóico (396 mg; 2,0 mmoles) em CH2CI2 (100 ml; solução 0,02 M) adicionou-se, gota a gota, uma solução de dicloreto de triciclo-hexilfosfina-(1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-4,5-di-hidroimidazol-2-ilideno)-(benzilidina) ruténio (IV) (85 mg; 0,1 mmoles) em CH2CI2 (3,0 ml) . Após 50 min, a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, concentrada e purificada em "Bond Elut" de gel de sílica, utilizando EtOAc/hexano (1:20) como eluente, para proporcionar éster etílico do ácido 5-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-2-carboxílico (320 mg; rendimento de 92%) como um óleo castanho. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): 5,51 (br s, 1H) ; 4,28-4, 08 (m, 4H) ; 2,32 (br s, 3H) ; 1,29 (t, J= 7,2

Hz, 3H).

Passo III

Uma solução de éster etílico do ácido 5-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-2-carboxílico (140 mg; 0,823 mmoles) em MeOH (3,5 ml) e solução aquosa de NaOH a 10% (1,0 ml; 2,5 mmoles) foi aquecida a 65°C durante 3h, a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, o solvente foi evaporado e o resíduo diluído com água. A solução aquosa foi lavada com éter, acidificada com solução aquosa de HC1 IN e extraída com éter. A solução etérea foi lavada com salmoura e seca. A evaporação do solvente forneceu o composto ácido 5-metil-3, 6-di-hidro-2H-piran-2-carboxílico (82 mg; rendimento de 70%). 1H-RMN (CDC13, 400 MHz): 5,54-5,5 (m, 1H) ; 4,24-4,1 78 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ (m, 3Η) ; 2,4-2,3 (m, 2Η) ; 1,6 (s, 3H) .

Passo IV 0 acoplamento do composto éster metílico do ácido 3-isopropilamino-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (63,3 mg; 0,23 mmoles) com o composto ácido 5-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-2-carboxílico (40 mg; 0,28 mmoles), utilizando PPh3 (78,6 mg; 0,3 mmoles) e NCS (39,9 mg; 0,3 mmoles), forneceu éster metilico do ácido 3-[ isopropil-(5-metil-3,6-di-hidro-2H- piran-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (60 mg; rendimento de 65,3%) . ^-RMN (CDCI3, 400 MHz, para o rotâmero principal): 7,68-7,62 (m, 2H); 7,4-7,5 (m, 3H); 7,22 (s, 1H) ; 5,46 (m, 1H) ; 3,86 (s, 3H) ; 1,48 (s, 3H) ; 1,24 (d, 3H) ; 1,0 (d, 3H) .

Passo V A hidrólise do composto éster metilico do ácido 3-[isopropil-(5-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (38 mg; 0,095 mmoles) utilizando LÍOH.H2O (12 mg), tal como descrito para o Exemplo 25, passo 7, proporcionou o composto ácido 3-[isopropil-(5-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (composto 30) (13 mg; rendimento de 35,5%) . 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz, para o rotâmero principal) : 7,8-7,7 (m, 2H) ; 7,5-7,3 (m, 4H) ; 5,45 (br s, 1H) ; 4,95-4,8 (m, 1H) ; 2,56-1,82 (m) ; 1,46 (br s, 3H) ; 1,26 (d, 3H) ; 1,2 (d, 3H); 1,0-0,84 (m).

Exemplos 27 Ácido 3-[isopropil-(cis-5-metil-tetra-hidro-piran-2- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico, Composto 29, e ácido 3-[ isopropil-(trans-5-metil-tetra-hidro-piran-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico, Composto 27

79 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Passo I A uma solução de ácido 5-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-2-carboxílico (40 mg; 0,28 mmoles) em MeOH (2,0 ml) adicionou-se Pt a 5% em C (20 mg) e hidrogenou-se durante 16h a 20 psi. A mistura reaccional foi filtrada através de celite, lavada com MeOH, e a concentração do filtrado originou uma razão 2:1 dos isómeros geométricos do ácido 5-metil-tetra-hidro-piran- 2- carboxilico (37 mg; 91%).

Passo II A utilização do procedimento descrito para o Exemplo 26, passo 4, forneceu uma mistura separável de éster metilico do ácido 3-[isopropil-(cis-5-metil-tetra-hidro-piran-2-carbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (30 mg; 35,5%), 1H-RMN (CDC13, 400 MHz, para o rotâmero principal): 7,66-7,6 (m, 2H) ; 7,48-7,36 (m, 3H) ; 7,162 (s, 1H) ; 5,0-4,88 (m, 1H) ; 3, 98-3, 94 (m) ; 3,86 (s, 3H) ; 3,29 (m) ; 2,18-1,4 (m) ; 1,25 (d, 3H); 0,98 (d, 3H); 0,72 (d, 3H), e éster metilico do ácido 3- [isopropil-(trans-5-metil-tetra-hidro-piran-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (14,0 mg; 16,6%), 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz, para o rotâmero principal): 7,65-7,63 (m, 2H) ; 7,48-7,38 (m, 3H) ; 7,184 (s, 1H) ; 4, 96-4,86 (m, 1H) ; 3, 86-3,52 (m) ; 2,55 (t, 1H) ; 1, 96-1,46 (m) ; 1,218 (d, J= 3,7

Hz, 3H); 0,985 (d, J= 6,7 Hz, 3H); 0,657 (d, J= 6,7 Hz, 3H).

Passo III A hidrólise do composto éster metilico do ácido 3- [isopropil-(cis-5-metiltetra-hidropiran-2-carbonil)-amino]- 5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (30 mg; 0,075 mmoles) utilizando LiOH, tal como descrito para o Exemplo 25, passo 7, proporcionou o composto ácido 3-[isopropil-(cis-5-metil-tetra-hidro-piran-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 29) (13 mg; 44,8%). XH-RMN (CD3OD, 400 MHz, para o rotâmero principal): 7,7-7,64 (m, 2H) ; 7,44-7,3 (m, 3H) ; 7,15 (s, 1H) ; 4,88-4,78 (m, 1H) ; 4,06-4,0 (m, 1H) ; 3,46-3,4 (m, 1H) ; 2,06-1,4 (m) ; 1,24 (d, J= 6,7 Hz, 3H) ; 1,057 (d, J= 6,9 Hz, 3H) ; 1,01 (d, J= 6,7 Hz, 3H) .

Passo IV O composto éster metilico do ácido 3-[isopropil- (trans-5-metil-tetra-hidro-piran-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno- 80 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 2- carboxílico (15 mg; 0,038 mmoles) foi transformado em ácido 3- [isopropil-(trans-5-metil-tetra-hidro-piran-2-carbonil)- amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (composto 27) (10 mg; 68%) da forma descrita para o Exemplo 25, passo 7. 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz, para o rotâmero principal) : 7,7-7,64 (m, 2H); 7,44-7,3 (m, 3H); 7,142 (s, 1H) ; 5,0-4,75 (m); 3,9-3,65 (m) ; 2,63 (t) ; 2,0-1,4 (m) ; 1,24 (d, 3H) ; 1,07 (d, 3H) ; 0,67 (d, 3H) .

Exemplos 28 Ácido 3- [ (trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(tetra-hidro-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico, Composto 34, ácido 3-[(1,l-dioxo-tetra-hidro-tiopiran-4-il)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico, Composto 37, e Passo VII: ácido 3-[ (trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-oxo-tetra-hidro-llambda*4*-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico, Composto 68

Passo I A aminação redutora de éster metilico do ácido 3-amino-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (0,933 g; 4,0 mmoles) e tetra-hidro-tiopiran-4-ona (0,464 g; 4,0 mmoles) em THF (1,0 ml), utilizando Bu2SnCl2 (60,5 mg; 0,2 mmoles) e PhSiH3 (0,476 g; 0,542 ml), foi realizada da forma descrita para o Exemplo 13, passo 1, e forneceu o composto éster metilico do ácido 5-fenil-3-(tetra-hidro-tiopiran-4-ilamino)-tiofeno-2-carboxilico (0,753 g; 56,3%). 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): 7,64-7,6 (m, 2H) ; 7,44-7,34 (m, 3H) ; 6,9 (br m, 1H) ; 6,81 (br s, 81 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 1Η) ; 3,84 (s, 3Η) ; 3,5-3,4 (m, 1Η) ; 2,85-2,7 (m, 4H) ; 2,4-2,25 (m, 2H); 1,85-1,7 (m, 2H).

Passo II A amidação de éster metílico do ácido 5-fenil-3-(tetra-hidro-tiopiran-4-ilamino)-tiofeno-2-carboxílico (0,2 g; 0,6 mmoles) e cloreto de 4-metil-ciclo-hexanocarbonilo foi efectuada da forma descrita para o Exemplo 19, passo 2, e proporcionou o composto éster metílico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(tetra-hidro-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (0,208 g; 75,7%). 1H-RMN (CDC13, 400 MHz) : 7, 68-7, 62 (m, 2H) ; 7,5-7,4 (m, 3H) ; 7,04 (s, 1H) ; 4, 68-4,58 (m, 1H) ; 3,86 (s, 3H) ; 2,9-1,2 (m, 16H) ; 0,78 (d, 3H); 0,76-0,56 (m, 2H).

Passo III

A hidrólise de éster metílico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(tetra-hidro-tiopiran-4-il)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (60 mg; 0,13 mmoles) com LiOH foi realizada da forma descrita para o Exemplo 24, passo 3, e originou o composto ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-(tetra-hidro-tiopiran-4-il)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 34) (38 mg; 65,9%). 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz): 7,76-7,72 (m, 2H); 7,48-7,38 (m, 3H); 7,34 (s, 1H) ; 4,52-4,42 (br t, 1H) ; 2,9-2,5 (m, 4H) ; 1,8-1,2 (m, 9H); 0,773 (d, J= 6,4 Hz, 3H); 0,76-0,56 (m, 2H).

Passo IV A uma solução gelada e agitada de éster metílico do ácido 3-[ (trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(tetra-hidro-tiopiran-4-il)amino]-5-feniltiofeno-2-carboxílico (119 mg; 0,26 mmoles), do passo 2, em DCM (1,0 ml) adicionou-se ácido m-cloroperbenzóico (90 mg; 60%; 0,312 mmoles) em uma porção e agitou-se durante lh. A mistura reaccional foi depois diluída com DCM, lavada com solução aquosa saturada de NaHCCb e salmoura, seca e concentrada. A purificação do resíduo por cromatografia CCF preparativa, utilizando 50% EtOAc-hexano como eluente, originou éster metílico do ácido 3-[(1,1-dioxo-tetra-hidrotiopiran-4-il)-(trans-4-metilciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (88 mg; 69%) como um sólido branco. 1H-RMN (CDC13, 400 MHz): 7,68-7,6 (m, 2H) ; 7,5-7,4 (m, 3H) ; 7,03 (s, 1H); 4, 96-4,84 (m, 1H) ; 3,86 (s, 3H) ; 3,28-2,94 (m, 4H) ; 82 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 2,36-1,2 (m, 11Η); 0,776 (d, J=4,8 Hz, 3H); 0,76-0,54 (m, 2H).

Passo V A hidrólise do éster metilico do ácido 3-[ (1,1-dioxo-tetra-hidro-tiopiran-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (47 mg; 0,095 mmoles) com LiOH foi realizada da forma descrita para o Exemplo 25, passo 7, e proporcionou o composto ácido 3-[(1,1-dioxo-tetra-hidro-llambda*6*-tiopiran-4-il)-(trans-4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (composto 37) (38 mg; 84%). 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) : 7, 697 (d, J= 7,17 Hz, 2H) ; 7,426 (t, 2H) ; 7,35 (t, 1H) ; 7,23 (s, 1H) ; 4,72 (br t, 1H) ; 3,4-3,26 (m, 2H) ; 3,3-2,54 (m, 2H) ; 2,48-2,14 (m, 4H) ; 1,96-1,2 (m, 8H) ; 0,76-0,56 (m, 2H) ; 0,776 (d, J= 6,6 Hz, 3H) .

Passo VI A uma solução agitada de éster metilico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(tetra-hidro-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (57 mg; 0,124 mmoles) em EtOH (1,2 ml), do passo 2, adicionou-se sal de magnésio do ácido monoperoxiftálico (29,6 mg; 0,06 mmoles) em uma porção e agitou-se durante 24h. A mistura reaccional foi diluida com água e extraida com EtOAc. A solução orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca e concentrada. A purificação do residuo por cromatografia CCF preparativa, utilizando 5% MeOH-DCM, originou o composto éster metilico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-oxo-tetra-hidro-llambda*4*-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (30 mg; 51%) . 1H-RMN (CDC13, 400 MHz, para o isómero principal): 7,66-7,6 (m, 2H); 7,5-7,4 (m, 3H) ; 7,09 (s, 1H); 4,84-4,76 (t, 1H); 3,85 (s, 3H); 3,4-1,2 (m); 0,772 (d, J= 6,6 Hz, 3H) ; 0,74-0,56 (m, 2H) .

Passo VII

A hidrólise do composto éster metilico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-oxo-tetra-hidro-llambda*4*-tiopiran-4-il)amino]-5-feniltiofeno-2-carboxílico (30 mg; 0,063 mmoles) com LiOH foi efectuada da forma descrita para o Exemplo 25, passo 7, e proporcionou o composto ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- (1-oxo-tetra-hidro-llambda*4*-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 68) (15 mg; 51,8%). 1H-RMN 83 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ (CD3OD, 400 ΜΗζ, para ο isómero principal): 7,76-7,7 (m, 2H); 7,5-7,38 (m, 3H) ; 7,39 (s, 1H) ; 4,74-4,56 (m, 1H) ; 3,5-1,2 (m) ; 0,782 (d, J= 6,4 Hz, 1H); 0,75-0,55 (m, 2H) .

Exemplo 2 9 Ácido 5- (4-cloro-fenil)-3-[(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-(l-metilpiperidin-4-il)amino]tiofeno-2-carboxilico, Composto 57

Passo I A aminação redutora de éster metilico do ácido 3-amino-tiofeno-2-carboxílico (3,0 g; 19,1 mmoles) e éster benzílico do ácido 4-oxo-piperidina-l-carboxílico (4,46 g; 19,1 mmoles) em THF (4,6 ml), utilizando Bu2SnCl2 (0, 598 g; 1,92 mmoles) e PhSiH3 (2,58 ml; 21,6 mmoles), foi realizada da forma descrita para o Exemplo 19, passo I, e forneceu o composto éster benzilico do ácido 4-(2-metoxicarbonil-tiofen-3-ilamino)-piperidina-l-carboxílico (7,25 g; quantitativo). 1H-RMN (CDC13, 400 MHz) : 7,4-7,3 (m, 6H) ; 6,9-6,78 (m, 1H) ; 6,7-6,6 (m, 1H) ; 5,14 (s, 2H) ; 4,15-4,0 (m, 2H) ; 3,81 (s, 3H) ; 3,6-3,45 (m) ; 3,1 (br t, 2H) ; 2,1-1,9 (m, 2H) ; 1,6-1,45 (m, 2H) .

Passo II A amidação do composto éster benzilico do ácido 4- (2-metoxicarbonil-tiofen-3-ilamino)-piperidina-l-carboxílico (3,7 g; 10 mmoles) e de cloreto de ciclo-hexilo foi efectuada da forma descrita para o Exemplo 19, passo II, e originou éster benzílico do ácido 4-[(2-metoxicarbonil-tiofen-3-il)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-piperidina-l-carboxílico (3,0 g; 60%). 1H-RMN (CDC13, 400 MHz): 7,55 (d, 1H) ; 7,36-7,26 (m, 5H) ; 6,82 (d, 1H) ; 5,05 (br s, 2H) ; 4,82- 84 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 4,7 (m, 1Η) ; 4,31-4,1 (m, 2H) ; 3,82 (s, 3H) ; 2,8-2,75 (m, 2H); 1,9-0,9 (m, 11H); 0,78 (d, 3H); 0,74-0,5 (m, 2H).

Passo III A hidrogenação de éster benzílico do ácido 4- [ (2-metoxicarbonil-tiofen-3-il)-(trans-4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-piperidina-l-carboxílico (3,0 g; 6,02 mmoles) com Pd/negro em EtOAc foi efectuada durante 36h a 40 psi, conforme descrito para o Exemplo 19, passo III, e originou o composto éster metilico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperidin-4-il-amino]-tiofeno-2-carboxilico (1,0 g; 45,6%). 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : 7, 525 (d, J= 5,3 Hz, 1H) ; 6,84 (d, J= 5,3 Hz, 1H) ; 4, 674 (tt, 1H) ; 3,81 (s, 3H); 3,1-2,94 (m, 2H) ; 2,74-2,6 (m, 2H) ; 2,26-2,2 (m, 1H); 1,9-1,0 (m, 11H) ; 0,75 (d, J= 6,6 Hz, 3H) ; 0,7-0,5 (m, 2H) .

Passo IV A uma solução agitada de éster metilico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperidin-4-il-amino]-tiofeno-2-carboxilico (1,0 g; 2,7 mmoles), do passo 3, em 1,2-dicloroetano (10 ml) adicionou-se sequencialmente solução aquosa de HCHO a 37% (0,45 ml; 5,4 mmoles) e NaBH(OAc)3 (2,86 g; 13,5 mmoles) em uma porção, agitou-se durante a noite, e a reacção foi depois parada com solução aquosa de NaOH a 10% e extraida com DCM. O extracto orgânico combinado foi lavado com salmoura, seco e concentrado para obter éster metilico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-metil- piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxilico (0,876 g; 85,5%) como um sólido branco. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): 7,54 (d, 1H) ; 6,86 (d, 1H) ; 4,7-4,6 (m, 1H) ; 3,85 (s, 3H) ; 2,9-2,7 (m, 2H) ; 2,22 (s, 3H); 2,15-1,1 (m, 14H); 0,8 (d, 3H); 0,75-0,5 (m, 2H).

Passo V A uma solução agitada de diisopropilamina (0,3 ml; 2,14 mmoles) em THF (10 ml) adicionou-se n-BuMgCl (2,0M em éter; 1,0 ml; 2,0 mmoles) e agitou-se durante 24 horas. À solução resultante adicionou-se, gota a gota, uma solução de éster metilico do ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-metil-piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (0,189 g; 0,5 mmoles) em THF (2,0 ml) e agitou-se durante lh à temperatura ambiente. Em seguida, adicionou-se uma solução de iodo (1,28 g; 5,0 mmoles) em THF (2,0 ml) e agitou-se durante 85 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ lh. A mistura reaccional foi depois parada com uma solução aquosa de Na2S2C>3 a 10%, extraida com EtOAc, lavada com salmoura, seca e concentrada. A purificação do residuo num pequeno tampão de "Bond Elut" de qel de silica, utilizando DCM/CHCls/MeOH/EtsN (200:90:16:1) como eluente, proporcionou éster metilico do ácido 5-iodo-3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-metil-piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxilico (0,250 q; quantitativo). 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): 7,05 (s, 1H) ; 4, 68-4,55 (m, 1H) ; 3,83 (s, 3H) ; 2,95-2,8 (m, 2H) ; 2,26 (s, 3H) ; 2,2-1,1 (m, 14H) ; 0,819 (d, J= 6,3 Hz, 3H); 0,75-0,6 (m, 2H).

Passo VI À mistura de ácido 4-clorofenilborónico (46,9 mg; 0,3 mmoles) e éster metilico do ácido 5-iodo-3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-metil-piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxilico (50 mg; 0,099 mmoles), do passo 5, numa mistura 5:1 de tolueno/MeOH (2,0 ml) adicionou-se uma solução de Pd(PPh3)4 (12,0 mg; 0,01 mmoles; 10% em mole) em tolueno (1,0 ml), seguida de uma solução aquosa de Na2CC>3 2M (0,1 ml; 0,2 mmoles). A mistura reaccional resultante foi aquecida a 70°C durante 16h, arrefecida até à temperatura ambiente, filtrada através de MgS04 e lavada com EtOAc. A evaporação do solvente e a purificação do residuo por cromatografia CCF preparativa (1 mm; 60 Â), utilizando DCM/CHCl3/MeOH/Et3N (100:90:16:1) como eluente, forneceu o composto éster metilico do ácido 5-(4-cloro-fenil)-3-((trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-metil-piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (35,0 mg; rendimento de 71,5%). 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): 7,53 (d, J= 8,3 Hz, 2H) ; 7,4 (d, J= 8,5 Hz, 2H) ; 7,0 (s, 1H) ; 4, 67-4,58 (m, 1H) ; 3,84 (s, 3H) ; 2,82-2, 64 (m, 1H) ; 2,2 (s, 3H) ; 2,14-1,35 (m) ; 0,763 (d, J= 6,6 Hz, 3H) ; 0,76-0,56 (m, 2H).

Passo VII A hidrólise do éster metilico do ácido 5-(4-cloro-fenil) -3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-metil-piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (19 mg; 0,039 mmoles) com LiOH foi realizada da forma descrita no Exemplo 25, passo VII, e proporcionou o composto ácido 5-(4-cloro-fenil) -3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-metil-piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (composto 57) (9,0 mg; 86 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 48,6%). 1H-RMN (CD3OD, 400 ΜΗζ) : 7,761 (d, J= 8,8 Hz, 2H) ; 7,487 (d, J= 8,5 Hz, 2H) ; 7,476 (s, 1H) ; 4,7 (t, 1H) ; 3,59- 3,49 (m, 2H) ; 3,2-3,11 (m, 2H) ; 2,81 (s, 3H) ; 2,3-1,2 (m, 12H) ; 0,791 (d, J= 6,59 Hz, 3H) ; 0,88-0,5 (m, 2H) .

Utilizando uma sequência semelhante, o Composto 45, o Composto 54, o composto 55, o Composto 56 e o Composto 58 foram preparados.

Exemplo 30 Ácido 3-[ [1- (4-metoxi-benzil)-2-oxo-piperidin-4-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 42

I- R = Mb

I-»- R = H PMB = p-metoxibenzilo

Passo I

Uma solução de p-metoxibenzilamina (690 mg; 722 μΐ; 8,01 mmoles) em metanol seco (5 ml), sob azoto, foi arrefecida até 0°C e tratada, gota a gota, com uma solução de metacrilato (951 μΐ; 1,0 g; 7,28 mmoles) em MeOH (1,0 ml) adicionada ao longo de 2 min. Após 15,5h, a solução límpida foi destilada à pressão atmosférica para remover o MeOH. O resíduo de ponto de ebulição elevado (>170°C) formou o composto éster metílico do ácido 3-(4-metoxi-benzilamino)-propiónico (1,88 g; quantitativo). 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : 1,78 (bs, 1H); 2,45 e 2,53 (t, J = 3,0 Hz, 2H) ; 2,77 e 2,87 (t, J = 3,0 Hz, 2H) ; 3,46 e 3,67 (s, 3H) ; 3,64 e 3,73 (s, 3H) ; 3,88 (m, 2H) ; 6,78 e 6,85 (m, 2H) ; 7,17 e 7,23 (m, 2H) . 87 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Passo II

Uma solução de malonato de dimetilo puro (7,4 ml; 8,5 g; 64 mmoles; 8 eq) foi aquecida num recipiente a 170°C e depois foi tratada, gota a gota e ao longo de 40 min, com uma solução de éster metilico do ácido 3-(4-metoxi-benzilamino)-propiónico em malonato de dimetilo (0,92 ml). A reacção foi aquecida a 169-170°C durante l,5h, altura em que a cromatografia CCF mostrou perda total da amina de partida para um composto menos polar. Após arrefecimento, o material em bruto foi aplicado numa coluna de silica e eluido inicialmente com CH2CI2, para remover o malonato de dimetilo em excesso, e depois com hexano: CH2CI2: EtOAc 1:1:1. O composto éster metilico do ácido N-(4-metoxi-benzil)-N-(2-metoxicarbonil-etil)-malonâmico foi recolhido como um óleo incolor (1,502 g; 58%). ^-RMN (300 MHz, CDC13) : 2,52 e 2,61 (t, J= 6,0 Hz, 2H) ; 3,62 e 3,70 (s, 3H) ; 3,65 e 3,74 (s, 3H) ; 3,77 e 3,78 (s, 3H) ; 4,50 e 4,54 (s, 2H) ; 6, 82-6, 88 (m, 2H) ; 7,68 e 7,18 (m, 2H) .

Passo III

Uma mistura de um K2C03 hidratado (3,2 g; 23,2 mmoles; 5 eq) e éter 18-coroa-6 (submetido a destilação azeotrópica várias vezes com tolueno) (122 mg; 0,464 mmoles; 10% em mole) em tolueno seco (4 ml) , sob azoto, foi aquecida ao refluxo e depois tratada, gota a gota e ao longo de 40 min, com uma solução de éster metilico do ácido N-(4-metoxi-benzil)-N-(2-metoxicarbonil-etil)-malonâmico. Após 7h sob refluxo, a reacção foi diluida com água (4 ml) e tolueno (4 ml), arrefecida para 0°C e cuidadosamente acidificada para pH 1,7 com HC1 0,1N. A mistura foi depois extraida várias vezes com CH2CI2 (3x80 ml), e as camadas orgânicas combinadas foram secas e evaporadas para um óleo castanho (1,33 g) . 0 óleo castanho foi tratado com solução aquosa de ácido oxálico a 10% e aquecido ao refluxo durante 6,5h. A mistura foi então extraida repetidamente com CH2CI2, e as camadas orgânicas combinadas foram secas e evaporadas para um óleo amarelo sujo (1,03 g) . O material em bruto foi purificado em gel de silica, utilizando CH2Cl2:MeOH 30:1 como eluente, para fornecer 1-(4-metoxi-benzil)-piperidina-2,4-diona como um sólido castanho-pálido (750 mg; 69%). 1H-RMN (300 MHz, CDCI3) : 2,52 (t, J= 5,7 Hz, 2H) ; 3,41 (s, 2H) ; 3,47 (t, J= 5,7 Hz, 2H) ; 3,80 (s, 3H) ; 4,62 (s, 2H) ; 6,16-6,88 (m, 2H) ; 88 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 7,20 (m, 2Η) .

Passo IV

Uma suspensão de 3-amino-5-feniltiofeno-2-carboxilato de metilo (459 mg; 1,96 mmoles) e 1-(4-metoxi-benzil)-piperidina-2,4-diona (457 mg; 1,96 mmoles) a 21°C, sob N2, foi tratada com dicloreto de dibutilestanho (29 mg; 0,098 mmoles; 5% em mole) , seguido após 5 min de fenilsilano (266 μΐ; 233 mg; 2,15 mmoles; 1,1 eq) . A mistura heterogénea foi agitada durante 18h a 21°C, altura em que se obteve uma solução limpida. Deixou-se a reacção durante 5h adicionais e depois evaporou-se até à obtenção de um óleo espesso (1,27 g) . 0 material em bruto foi purificado em sílica, utilizando hexanos:CH2CI2:EtOAc 1:1:1 como eluente, para proporcionar o composto éster metílico do ácido 3-[1-(4-metoxi-benzil)-2-oxo-piperidin-4-ilamino]-5-(1-metil-hexa-l,3,5-trienil)-tiofeno-2-carboxílico como uma espuma amarela (432 mg; 49%) . 1H-RMN (300 MHz, CDCI3) : 1,8-1,9 (m, 1H) ; 2,25-2,44 (m, 1H) ; 2,95 (dd, J= 1,5 Hz, J= 3,90 Hz, 1H) ; 3,98 (dd, J= 1,5 Hz, J= 3,90 Hz, 1H); 3,22-3,40 (m, 4H); 3,80 (s, 3H); 3,33 (s, 3H); 3, 85-3, 93 (m, 1H) ; 4,08 (m, 2H) ; 6,81 (s, 1H) ; 6,85-6,9 (m, 2H); 7,20-7,24 (m, 2H); 7,36-7,42 (m, 3H); 7,59-7,61 (m, 2H).

Passo V

Uma solução de ácido trans-4-metil-ciclo-hexano-carboxílico (56 mg; 0,399 mmoles; 1,2 eq) em 1,2-dicloroetano (1 ml), a 0°C e sob N2, foi tratada com cloreto de oxalilo (solução 2,0 M em CH2C12) (231 μΐ; 0,46 mmoles; 1,4 eq) , seguido de dimetilformamida (8 μΐ; 7 mg; 0,1 mmoles; 30% em mole) . Após lh, a reacção foi tratada com uma solução de éster metílico do ácido 3-[1-(4-metoxi-benzil)-2-oxo-piperidin-4-ilamino]-5-(1-metil-hexa-l, 3, 5-trienil)-tiofeno-2-carboxílico (150 mg; 0,33 mmoles) em DCE (2 ml). A reacção foi depois colocada num banho a 90°C e deixada sob refluxo durante a noite por 21 horas. A reacção foi desprovida do solvente, e o resíduo (212 mg) foi purificado por cromatografia em "Bond Elut", utilizando hexano:CH2C12:EtOAc 1:1:1 como eluente, para fornecer éster metílico do ácido 3-[[1-(4-metoxi-benzil)-2-oxo-piperidin-4-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)amino]-5-(1-metil-hexa-l, 3, 5-trienil) -tiofeno-2-carboxílico (21 mg; 11%) como uma espuma amarela. 1H-RMN (300 MHz, CDCI3) : 0,55-0,73 (m, 1H) ; 0,77 (d, J= 5,4 Hz, 3H); 89 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 1,26-1,30 (m, 12Η); 1,94-2,12 (m, 1Η) ; 2,14-2,19 (m, 1H); 2,40 (dd, J= 9,0 Hz, J= 12,0 Hz, 1H); 2,64-2,70 e 2,80 e 2,84 (m, 1H); 3,10-3,15 (m, 3H) ; 3, 79-3, 82 (m, 1H); 3,78 (s, 3H) ; 3,83 e 3,87 (s, 3H) ; 4,32 (t, J= 12,0 Hz, 1H) ; 4,62 (dd, J= 5,7 Hz, J= 10,8 Hz, 1H) ; 4,50-5,0 (m, 1H) ; 6, 79-6, 83 (m, 2H) ; 6,99-7,14 (m, 2H) ; 7,26-7,48 (m, 3H) ; 7,61-7,65 (m, 2H) .

Passo VI O composto éster metilico do ácido 3-[[1-(4-metoxi- benzil)-2-oxo-piperidin-4-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (40 mg; 0,069 mmoles) foi hidrolisado com LiOH, como anteriormente descrito no

Exemplo 25, passo VII, para proporcionar o composto ácido 3-[[1- (4-metoxi-benzil)-2-oxo-piperidin-4-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 42) como um sólido branco (8,4 mg; 21%). 1H-RMN (300 MHz, Acetona-de) : 0,42-0, 62 (m, 1H) ; 0,64 (d, J= 4,18

Hz, 3H); 1,16-1,34 (m, 7H); 1,40-1,54 (m, 4H); 1,58-1,66 (m, 2H) ; 1,76-1,78 (m, 1H) ; 1,87-1, 90 (m, 1H) ; 1, 98-1, 99 (m, 1H) ; 2,08-2,09 (m, 1H); 3,63 (s, 3H); 4,23 (dd, J= 5,7 Hz, J= 12,0

Hz, 1H) ; 4,44 (dd, J= 1,5 Hz, J= 11,7 Hz, 1H); 4, 66-4,80 (m, 1H) ; 6, 20-6, 23 (m, 2H); 7, 04-7, 07 (m, 2H); 7,31-7,40 (m, 3H); 7,44 e 7,53 (s, 1H) ; 7, 69-7,75 (m, 2H) .

Exemplo 31 Ácido 3-[(l-metanossulfonil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 70

CBZ = benziloxicarbonilo 90 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Os passos I a III foram conduzidos de forma semelhante à descrita no Exemplo 30.

Passo IV

Uma solução de éster metilico do ácido 3-[(1-piperidin-4-il)-(4-metilciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (44 mg; 0,1 mmoles) em DCM (1,0 ml; ~0,1 M) , a 21°C e sob N2, foi tratada com trietilamina (29 μΐ; 21 mg; 0,21 mmoles; 2,1 eq) , seguida de cloreto de metanossulfonilo (15,5 μΐ; 23 mg; 0,2 mmoles; 1,2 eq). Um ligeiro precipitado foi evidente. Após l,5h, a reacção encontrava-se completa. A mistura foi diluida com DCM, lavada sequencialmente com HC1 N, água e salmoura e seca. A evaporação do extracto orgânico forneceu uma goma (56 mg), que foi purificada por "Bond Elut" de silica, utilizando hexano:CH2C12:EtOAc 1:1:1 como eluente, para fornecer éster metilico do ácido 3-[ (1-metanossulfonil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (40 mg; 78%) . 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : 0,50-0, 67 (m, 1H) ; 0,70 (d, J= 4,8 Hz, 3H) ; 1,16-1,43 (m, 6H) ; 1,48-1, 64 (m, 10H) ; 1,80-1,86 (m, 1H) ; 1,90-2,0 (m, 1H) ; 2, 62-2,759 (m, 2H) ; 2,68 (s, 3H) ; 3, 68-3,75 (m, 1H) ; 3,76-3, 82 (m, 1H) ; 3,85 (s, 3H) ; 4,61-4,71 (m, 1H) ; 6,94 (s, 1H); 7,35-7,43 (m, 3H); 7,55-7,59 (m, 2H).

Passo V

Uma solução de éster metilico do ácido 3-[(1-metano-sulfonil-piperidin-4-il)-(4-metilciclo-hexanocarbonil)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (40 mg; 0,077 mmoles) foi hidrolisada com hidróxido de litio (2 M; 114 μΐ; 5,5 mg; 0,23 mmoles), conforme descrito anteriormente, para fornecer, após acidificação, o composto ácido 3-[(1-metanossulfonil- piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (29 mg; 74%) como um pó incolor. 1H-RMN (300 MHz, MeOD) : 0,56-0,72 (m, 1H) ; 0,79 (d, J= 4,8

Hz, 3H) ; 1,23-1,44 (m, 5H) ; 1,51-1,79 (m, 6H) ; 1, 92-1,98 (m, 1H) ; 2,04-2,14 (m, 2H) ; 2,78-2, 90 (m, 2H) ; 2,80 (s, 3H) ; 3, 66-3, 74 (m, 1H) ; 3,75-3,81 (m, 1H) ; 4,52-4, 62 (m, 1H) ; 7,39 (s, 1H); 7,40-7,90 (m, 3H); 7,73-7,77 (m, 2H) . 91 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 32 Ácido 3- [ (2-amino-l-metil-etil)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-(1-metil-hexa-l,3,5-trienil) -tiofeno-2-carboxílico, Composto 36; Ácido 3-[(2-azido-l-metil-etil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-(1-metil-hexa-l,3,5-trienil)-tiofeno-2-carboxílico, Composto 32

Passo I

Uma mistura de (S)-(+)-2-amino-l-propanol (1,04 g; 13,85 mmoles), cloreto de ter-butildimetilsililo (2,09 g; 13,85 mmoles) e trietilamina (2 ml; 1,05 eq) foi agitada em DCM durante a noite cerca de 16h. A reacção foi diluída com DCM, lavada com água, solução saturada de NH4C1 e salmoura, seca e evaporada para um óleo. A purificação do produto em bruto em gel de sílica, utilizando 3% MeOH/CH2Cl2 como eluente, proporcionou 2-(ter-butil-dimetil-silaniloxi)-1-metil- etilamina (1,76 g; 80%). 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : 0,0 (s, 6H) ; 0,82 (s, 9H) ; 0,99 (d, J= 6,5 Hz, 3H) ; 2,22 (b s, 2H) ; 2,98 (b s, 1H) ; 3,30 (dd, J= 10 Hz, J= 17,0 Hz, 1H) ; 3,48 (dd, J= 10,0 Hz, J= 4,3 Hz, 1H).

Passo II

Uma solução de 3-bromo-5-feniltiofeno-2-carboxilato de metilo (0,5 g; 1,6 mmoles) em tolueno (10 ml) foi tratada, a 21°C e sob N2, com 2-(ter-butil-dimetil-silaniloxi)-1-metil-etilamina (301 mg; 2,01 mmoles; 1,2 eq) , seguida de acetato de paládio (38 mg; 0,1 eq) , BINAP (105 mg; 0,1 eq) e CsC03 (766 mg; 1,4 eq) . A mistura foi aquecida ao refluxo durante 18h e depois foi filtrada através de uma almofada de celite. A almofada foi lavada com EtOAc, e as lavagens combinadas foram secas e evaporadas para uma goma, que foi purificada 92 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ por cromatografia em sílica, utilizando 3% EtOAc/Hexano como eluente, para fornecer o composto desejado éster metílico do ácido 3-[2-(ter-butil-dimetil-silaniloxi)-1-metil-etilamino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (645 mg; 95%). 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : 0,0 (s, 6H) ; 0,82 (s, 9H) ; 1,24 (d, J= 6,0 Hz, 3H) ; 3,56-3,57 (m, 3H) ; 3,90 (s, 3H) ; 6,88 (b s, 1H) ; 6,84 (s, 1H) ; 7,30-7,40 (m, 3H) ; 7,56 (d, J= 6,0 Hz, 2H) .

Passo III A uma solução de éster metílico do ácido 3-[2-(ter-butil-dimetil-silaniloxi) -1-metil-etilamino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (1,08 g; 2,69 mmoles) em MeOH (10 ml), a 21°C e sob N2, adicionou-se uma solução de cloreto de acetilo previamente misturada em MeOH (100 μΐ/ΐ ml; 210 μΐ; 2,96 mmoles; 1,1 eq). A reacção foi seguida por CCF. Ao terminar, a reacção foi desprovida do solvente, e o resíduo foi purificado em sílica, utilizando progressivamente 5%, 20% e depois 30% EtOAc/hexano como eluente, para proporcionar éster metílico do ácido 3-(2-hidroxi-l-metil-etilamino)-5-(1-metil-hexa-1,3,5-trienil)tiofeno-2-carboxílico como um sólido amarelo (518 mg; 79%). XH-RMN (300 MHz, CDC13) : 1,25 (d, 6,6

Hz, 3H); 3,52-3,62 (m, 1H); 3,73-3,77 (m, 2H); 3,84 (s, 3H); 6,92 (s, 1H) ; 7,36-7,42 (m, 3H) ; 3,62 (d, J= 8,3 Hz, 2H) .

Passo IV

Uma mistura de éster metílico do ácido 3-(2-hidroxi-l-metil-etilamino) -5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (213 mg; 0,257 mmoles), diazodicarboxilato de dietilo (250 μΐ; 1,59 mmoles; 2 eq) , difenilfosforilazida (343 μΐ; 1,59 mmoles; 2 eq) e trifenilf osf ina (417 mg; 1,59 mmoles; 2 eq) foi agitada a 21°C até todo o álcool inicial ter sido consumido. A reacção foi evaporada à secura, e o resíduo em bruto foi purificado em Biotage, utilizando 5% EtOAc/hexano, seguido de 100% tolueno como eluente. O composto éster metílico do ácido 3-(2-azido-l-metil-etilamino)-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico foi isolado como um sólido (181 mg; 78%) . 1H-RMN (300 MHz, CDCI3) : 1,33 (d, J= 6,6 Hz, 3H) ; 3, 38-3, 46 (m, 2H) ; 3,78-3,81 (m, 1H) ; 6,82 (s, 1H) ; 7,36-7,41 (m, 3H) ; 7, 60-7, 62 (m, 2H) .

Passo V

Uma solução de éster metílico do ácido 3-(2-azido-l-metil-etilamino)-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (60 mg; 0,188 93 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ mmoles) foi tratada conforme descrito no Exemplo 30, passo V, com cloreto do ácido trans-4-metilciclo-hexanocarboxílico acabado de preparar (25 mg; 0,176 mmoles; 1,2 eq) para fornecer éster metilico do ácido 3-[(2-azido-l-metiletil)-(4-metilciclo-hexanocarbonil)amino]-5-feniltiofeno-2-carboxílico (14,6 mg; 17%). 1H-RMN (300 MHz, CDC13) : 0,5-0,7 (m, 4H) ; 0,71 (d, J= 6,6 Hz, 3H) ; 1,23 (d, J= 7,0 Hz, 3H) ; 1,2-1,42 (m, 4H) ; 2,12-2,25 (m, 1H) ; 3,24 (dd, J= 5,6 Hz, J= 5,7 Hz, 1H) ; 3,52 (dd, J= 5,6 Hz, J= 5,7 Hz, 1H) ; 3,80 (s, 3H) ; 4, 82-4,90 (m, 1H); 7,20 (s, 1H); 7,32-7,42 (m, 3H) ; 7,56-7,61 (m, 2H) .

Passo VI

Uma solução de éster metilico do ácido 3-[(2-azido-l-metiletil) -(4-metilciclo-hexanocarbonil)amino]-5-feniltiofeno- 2- carboxílico (14 mg; 0,032 mmoles) em dioxano:água 4:1 (0,5 ml) foi tratada com LiOH (4 mg; 3 eq) da forma descrita no Exemplo 25, passo 7, para fornecer, após acidificação, ácido 3- [(2-azido-l-metiletil)-(4-metilciclo-hexanocarbonil)amino]- 5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (composto 32) como uma espuma verde-pálido (11,2 mg; 82%). 1H-RMN (300 MHz, Acetona-de) : 0,43-0, 62 e 0,77-0, 86 (m, 1H) ; 0,63 e 0,75 (d, J= 5,1 Hz, 3H) ; 0,93 e 1,20 (d, J= 5,2 Hz, 3H) ; 1,78-1,85 e 1,97-2,10 (m, 2H) ; 3,20-3, 68 (m, 1H) ; 3,32 e 3,50 (m, 1H) ; 4,40 e 4,50 (m, 1H) ; 7,3-7,4 (m, 3H) ; 7,44 (s, 1H) ; 7, 67-7, 69 (m, 2H) .

Passo VII

Uma solução de ácido 3-[(2-azido-l-metil-etil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (8 mg; 0,19 mmoles) em EtOH (0,2 ml) a 21°C foi tratada com Pd a 10%/C (4 mg; 50% p/p) e agitada sob uma atmosfera de H2 durante l,5h. A mistura reaccional foi filtrada através de uma almofada de celite com EtOAc quente, e o filtrado e as lavagens combinados foram secos e evaporados para um vidro para fornecer o composto ácido 3-[(2-amino-l-metil-etil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (composto 36) (7 mg; %) . 1H-RMN (300 MHz,

Acetona-d6) : 0,43-0, 65 e 0,75-0, 90 (m, 4H) ; 1,17-1,64 (m, 6H); 1,81-1,90 e 2,01-2,40 (m, 3H); 2,54 (b s, 1H) ; 3,00 (b s, 1H) ; 3,50 e 3,70 (b s, 1H) ; 7,20 (s, 1H) ; 7,22-7,25 e 7,29-7,34 (m, 3H) ; 7,58-7, 62 (m, 2H) . 94 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ Ο composto 43, ο composto 20, ο composto 19, ο composto 18, ο composto 7 e ο composto 8 foram preparados de modo semelhante.

Exemplo 33 Ácido 3-[(l-ciano-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, Composto 77

Passo I

Uma solução de éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperidin-4-il-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (197 mg; 0,45 mmoles) em CH2CI2 (4,5 ml) foi tratada com K2CO3 (93 mg; 0,67 mmoles) e brometo de cianogénio (100 mg; 0,94 mmoles). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e aquecida ao refluxo durante 18h. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada em celite. O filtrado foi lavado com AcOH (IN) e salmoura, seco (Na2S04) e concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando 2% MeOH/CH2Cl2, para fornecer o composto éster metílico do ácido 3-[(l-ciano-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (154 mg; rendimento de 74%) sob a forma de uma espuma amarela-pálido.

Passo II

O composto éster metílico do ácido 3-[(l-ciano-piperidin-4-il)-(4-metilciclo-hexanocarbonil)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (150 mg; 0,32 mmoles) foi dissolvido numa mistura 4:1 de dioxanoitbO (3,2 ml) e tratado com Li0H.H20 (20 mg; 0,48 mmoles). Após 2 horas de agitação a 50°C 95 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ os solventes foram removidos e depois sujeitos a partição entre 5 ml de H20 acidificada para pH 4 e 5 ml de EtOAc. A camada orgânica foi separada, e a fase aquosa foi lavada duas vezes com acetato de etilo (2x5 ml) . As camadas combinadas de acetato de etilo foram secas (Na2SC>4) e concentradas. 0 residuo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de silica, utilizando 5% MeOH/CH2Cl2, para fornecer o composto ácido 3-[(l-cianopiperidin-4-il)-(4-metilciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico (114,3 mg; rendimento de 78%) sob a forma de uma espuma verde-pálido. 1H-RMN (DMS0-d6, 400 MHz) : 7,80 (m, 2H) ; 7,45 (m, 4H) ; 4,44 (m, 1H) ; 3,35 (m, 2H) ; 3,13 (m, 2H) ; 1,96 (t, 1H) ; 1,88 (d, 1H) ; 1,75 (m, 1H) ; 1,70-1,40 (m, 6H); 1,20 (m, 3H); 0,70 (d, 3H); 0,60 (m, 2H).

Exemplo 34 Ácido cis-3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metilciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico, Composto 86

Passo I A uma suspensão agitada de pó de zinco (2,87 g; 44,0 mmoles) e dibromoetano (1,00 ml; 14,4 mmoles) em tetra-hidrofurano (20 ml), sob uma atmosfera de azoto e a -40°C, adicionou-se tetracloreto de titânio (10 ml de uma solução 1M em diclorometano; 10 mmoles). Permitiu-se depois que a mistura aquecesse até à temperatura ambiente e agitou-se durante dois dias a esta temperatura. Este reagente de metilação (2,5 eq) foi adicionado a uma solução de éster metilico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (0,200 g; 96 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 0,440 mmoles; 1 eq) em diclorometano (2 ml), e a mistura resultante foi agitada durante 3h à temperatura ambiente. Uma solução saturada de bicarbonato de sódio foi depois adicionada, e a mistura reaccional foi extraída com diclorometano (3><30 ml) . As fases orgânicas foram combinadas, secas com sulfato de sódio e concentradas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (30% acetato de etilo/hexanos) para fornecer 160 mg (81%) de éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-metileno-ciclo- hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico como um sólido branco. XH-RMN (CDC13, 400 MHz) : 7,63 ppm (d, 2H) ; 7,40 ppm (m, 3H) ; 6,98 ppm (s, 1H) ; 4,82 ppm (tt, 1H) ; 4,78 ppm (d, 2H) ; 3,85 ppm (s, 3H) ; 2,20 ppm (m, 4H) ; 2,05 ppm (m, 2H) ; 1,90 ppm (d, 1H) ; 1,65 ppm (m, 4H) ; 1,42 ppm (m, 1H) ; 1,30 ppm (m, 2H) ; 1,00 ppm (m, 2H) ; 0,7 8 ppm (d, 3H) ; 0,64 ppm (m, 2H) .

Passo II A uma solução de água (1 ml) e tetra-hidrofurano (1 ml) adicionou-se acetato mercúrico (83,0 mg; 0,277 mmoles; 1 eq) à temperatura ambiente. Após agitação durante 10 min, a solução amarela foi arrefecida a 0°C, e uma solução de éster metílico do ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-metileno-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (125 mg; 0,277 mmoles; 1 eq) foi adicionada gota a gota. A mistura resultante foi agitada durante lh a 0°C. Adicionou-se depois NaOH 3M (1 ml), seguido de boro-hidreto de sódio (10,0 mg; 0,277 mmoles; 1 eq) , e a mistura reaccional foi agitada durante 15 min à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi extraída com diclorometano (3χ30 ml) . As fases orgânicas foram combinadas, secas com sulfato de sódio e concentradas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (50% acetato de etilo/hexanos), e os diastereoisómeros foram separados para originar 90 mg de éster metílico do ácido cis-3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico e 6,5 mg de éster metílico do ácido trans-3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (74%), ambos sob a forma de um sólido branco. Éster metílico do ácido cis-3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxí lico 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): 7,63 ppm (d, 2H) ; 7,40 ppm (m, 3H) ; 6,98 ppm (s, 1H) ; 4,50 ppm (tt, 1H) ; 3,85 ppm 97 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ (s, 3Η) ; 2,00 ppm (m, 1H); 1,80-1,20 ppm (m, 15H); 1,18 ppm (s, 3H); 0,78 ppm (d, 3H); 0,64 ppm (m, 2H).

Passo III A uma solução de éster metílico do ácido cis-3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico (70,0 mg; 0,149 mmoles; 1 eq) em tetra-hidrofurano (1 ml), água (0,5 ml) e metanol (0,5 ml) adicionou-se hidróxido de litio (19,0 mg; 0,447 mmoles; 3 eq) . A mistura resultante foi agitada durante 3h à temperatura ambiente e depois foi extraída com éter (2><10 ml). A fase aquosa foi separada, e as fases orgânicas combinadas foram eliminadas. A fase aquosa foi acidificada para pH 1 e extraída com diclorometano (3x30 ml) . As fases orgânicas de diclorometano foram combinadas, secas com sulfato de sódio e concentradas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia (10% metanol/diclorometano) para proporcionar 50 mg (74%) de ácido cis-3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) : 7,60 ppm (d, 2H); 7,39 ppm (m, 3H); 7,03 ppm (s, 1H); 4,51 ppm (b s, 2H); 2,00 ppm (m, 1H); 1,80-1,20 ppm (m, 15H); 1,12 ppm (s, 3H) ; 0,71 ppm (d, 3H); 0,60 ppm (m, 2H).

Exemplo 35

Preparação do sal de sódio dos compostos

Uma solução do composto ácido carboxílico A (1 mmole) em solução de dioxano/água 1:1 a 0°C é tratada com solução de NaOH 0,1N (1 mmole; 1 eq). A reacção é agitada durante 15 min. A solução é depois concentrada e liofilizada para fornecer o composto carboxilato de sódio B sob a forma de um sólido. 98 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Exemplo 36 Lista de compostos e actividade da polimerase relacionada

Tabela I N. ° Estrutura Nome Actividade 1 O Η. H FF N-V TRIFLUOROACETATO DE 3-{[(2-CARBOXI-5-FENIL-TIOFEN-3-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-METIL}-PIPERIDÍNIO +++ 2 >Λ>' fF H rKl TRIFLUOROACETATO DE 2-{[(2-CARBOXI-5-FENIL-TIOFEN-3-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-METIL}-PIPERIDÍNIO +++ 3 N-* C Ve^N-/££VCH. ^ ÍTÍ 0 QiskH ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-PIRIDIN-3-ILMETIL-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO +++ 4 /-Λ W N-Y\t^V-CH3 _ /ri O 0^sVh ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-PIRIDIN-4-ILMETIL-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO +++ 5 .CH3 $P Çr^f- F ÁCIDO 5-(3-FLUORO-FENIL)-3-[ISOPROPIL-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO +++ 6 H Q A,-/CA-c"· 0^sV°h ÁCIDO 3-[AZEPAN-4-IL-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO +++ 7 c-ÁÍ O^s^i0H ÁCIDO 3-[(2,4-DICLORO-BENZOÍL)-[1,3]DIOXOLAN-2-ILMETIL-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO +++ 8 Qs C*Y^S1T0H \s^ Q ÁCIDO 3-[[1,3]DIOXOLAN-2-ILMETIL-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO +++ 99 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 9 (V-s 0Η ÁCIDO 3-[(1-FLU0R0-4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-ISOPROPIL-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 10 LxU^ 0Η ÁCIDO 3-[(1-FLUORO-4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-ISOPROPIL-AMINO]-5-FENIL-TI0FEN0-2-CARB0XÍLICO + 11 • Η,ς^ cr Q ΐΓ^Ι^·s^Y°H CLORETO DE 4-[(2-CARBOXI-5-FENIL-TIOFEN-3-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-1-METIL-PIPERIDÍNIO + + + 12 gHHN~f Q^S>5 CIÁ ÁCIDO 3-[(2-ACETILAMINO-4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-ISOPROPIL-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + 13 h^· o^V" ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(4-OXO-CICLO-HEXIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 14 fV w^ny^ch3 JTÍ· 0 0^ o°H ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-PIRIDIN-2-ILMETIL-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 15 "4 3^“· Cr^* ÁCIDO 3-[(4-HIDROXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 16 OH 3^ IHÍ o Ογ*\ ÁCIDO 3-[(4-HIDROXIIMINO-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TI0FEN0-2-CARB0XÍLICO + + + 17 H3C cu JvOc- q3?yoh 0 ÁCIDO 3-[ISOPROPIL-(4-METIL-CICL0-HEX-3-EN0CARB0NIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 100 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 18 ^α^·Ν=Ν h>cV rrc' ο ci ff J Sjt°H o ÁCIDO 3-[(l-AZIDOMETIL-2-METIL-BUTIL)-(2,4-DICLORO-BENZOÍL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 19 H3C\ ^ 0 > N-H (Γ\^Λ V o ci \ Js ΤΓ0Η 0 2- [ (2-Carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(2-cloro-benzoíl)-amino]-3-metil-pentilamónio + 20 vf 0 rCffe, .cVfV' rvii 0 Cl ff S'lpOH ÁCIDO 3-[(l-AMINOMETIL-2-METIL-BUTIL)-(2,4-DICLORO-BENZOÍL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + 21 Λ°- o h3c m h3c-n 00çr rvXl S ci ff T 'S'V0H TRIFLUOROACETATO DE {2-[(2-CARBOXI-5-FENIL-TIOFEN-3-IL)-(2,4-DICLORO-BENZOÍL)-AMINO]-PROPIL}-TRIMETILAMÓNIO + + + 22 ch3 0^s^r°H ÁCIDO 3-[ISOPROPIL-(5-METIL-[1,3]DIOXANO-2- CARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + 23 Cf Η3°0 ch3 Q0 /vÍt"” F-^V5=4 0 CLORETO DE 4-[[2-CARBOXI-5-(4-FLUORO-FENIL)-TIOFEN-3-IL]-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-1-METIL-PIPERIDÍNIO + + + 24 CH,c>“ _/N"^ ÔH ---v yTu o F-O^5 S0H ÁCIDO 5-(4-FLUORO-FENIL-3-[(2-HIDROXI-4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-ISOPROPIL-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 101 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 25 OMe hçr ÁCIDO 3-[(4-METOXIIMINO-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 26 CH3Chlra| F Xss1' Ο ÁCIDO 5-(4-FLUORO-FENIL)-3-[ISOPROPIL-(4-METIL-CICLO-HEX-l-ENOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 27 rvÇ^»·8" Ο ÁCIDO 3-[ISOPROPIL-(5-METIL-TETRA-HIDRO-PIRAN-2-CARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 28 ^dr ,η-ζ ÁCIDO 3-[ISOPROPIL-(4-METILENO-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 29 CH, β~% 0 CH, /Τγ^3Χ.°Η 3 \==^ ο ÁCIDO 3-[ISOPROPIL-(5-METIL-TETRA-HIDRO-PIRAN-2-CARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + 30 cHj .__. /Γ\ ο ί^Τ'β'^Ύ'0” ÁCIDO 3-[ISOPROPIL-(5-METIL-3,6-DI-HIDRO-2H-PIRAN-2-CARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 31 „ CH, QO _/ΝΎ οη ιγ\ ° Οτ$χί ÁCIDO 3-[(2-HIDROXI-4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(TETRA-HIDRO-PIRAN-4-IL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 32 Ν3 Chiral ròt^ · I^V^s^cB^h ÁCIDO 3-[(2-AZIDO-l-METIL-ETIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 33 π3Ον O-Vasv*· 0^sVOH ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(1-METIL-PIPERIDIN-4-ILMETIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 102 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 34 Q ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(TETRA-HIDRO-TIOPIRAN-4-IL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 35 cf JTÍ ° QTsW0* CLORETO DE 3-{[(2-CARBOXI-5-FENIL-TIOFEN-3-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-METIL}-1-METIL-PIPERIDÍNIO + + + 36 Μ “ ÁCIDO 3-[(2-AMINO-l-METIL-ETIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 37 V o^t ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(1,1-DIOXO-TETRA-HIDRO-TIOPIRAN-4-IL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 38 Cf πΑ^-γ^-^ο h, O^T°0H CLORETO DE 4-{[(2-CARBOXI-5-FENIL-TIOFEN-3-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-METIL]-1-METIL-PIPERIDÍNIO + + + 39 <ch* ÁCIDO 3-[(1-ETIL-PIPERIDIN-4-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 40 CH, Hjc~( N-\ ^^CH’ Cr^V" ÁCIDO 3-[(1-ISOPROPIL-PIPERIDIN-4-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 41 cf H + HN—i o^V" ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-PIPERIDIN-4-IL-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 103 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 42 (Υ 11 7 s μ,η ÁCIDO 3-[[1-(4-METOXI-BENZIL)-2-OXO-PIPERIDIN-4-IL]-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 43 Μ3 Chifal (1 j s co2H ÁCIDO 3-[(2-AZIDO-l-METIL-ETIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 44 h3c^ch3 ,n-X^Y^Vch3 Q^Voh- F ÁCIDO 5-(3-FLUORO-FENIL)-3-[(2-HIDROXI-4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-ISOPROPIL-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 45 χ-Λ^0"· CLORETO DE 4-[(2-CARBOXI-5-p-TOLIL-TIOFEN-3-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-1-METIL-PIPERIDÍNIO + + + 46 £ Q ^w’*· 0-çÓ» ÁCIDO 3-[(4-METOXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 47 v» ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(4-HIDROXI-CICLO-HEXIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 48 H.C-f .5^ /TV^s^y^ ÁCIDO 3-[(1-ACETIL-PIPERIDIN-4-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 49 a" •v o^r CLORETO DE 4-[(2-CARBOXI-5-FENIL-TIOFEN-3-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANO-CARBONIL)-AMINO]-1-METIL-AZEPÂNIO + + + 104 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 50 "b JY1 sbr0H ÁCIDO 5-(4-FLUORO-FENIL)-3-[(4-HIDROXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 51 HO ri 0 (VsV0H F ÁCIDO 5-(3-FLUORO-FENIL)-3-[(4-HIDROXI- CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 52 chíT qXV" ÁCIDO 3-[(1-BENZIL-PIPERIDIN-4-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 53 cn3 ^>H ÁCIDO 5-(4-FLUORO-FENIL)-3-[ISOPROPIL-(4-METIL-CICLO-HEX-3-ENOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 54 Cf Η,ς /~C.8h C<SQ F CLORETO DE 4-[[2-CARBOXI-5-(3-FLUORO-FENIL)-TIOFEN-3-IL]-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-1-METIL-PIPERIDÍNIO + + + 55 ci_ h3c h N—v H.C J 7 S ti CLORETO DE 4-[[2-CARBOXI-5-(4-ΜΕΤΟΧΙ-FENIL)-TIOFEN-3-IL]- (4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-1-METIL-PIPERIDÍNIO + + + 56 c Γ ΗΛ* Ν"Λ 5-^“· rybbr0H CLORETO DE 4-[[2-CARBOXI-5-(4-NITRO-FENIL)-TIOFEN-3-IL]-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-1-METIL-PIPERIDÍNIO + + + 105 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 57 α π3ς ρ ITÃ ο Γν^εν°Η ο CLORETO DE 4-[ [2-CARBOXI-5-(4-CLORO-FENIL)-TIOFEN-3-IL]-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-1-METIL-PIPERIDÍNIO + + + 58 α" H,Ç ^ 5^ /Γ~ζ ο ΜνΗ CN'nn?^’ 0 CLORETO DE 4-[[2-CARBOXI-5-(4-CIANO-FENIL)-TIOFEN-3-IL]-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-1-METIL-PIPERIDÍNIO + + + 59 HO ' ^ rvÇSr°0H c\^\s^ o ÁCIDO 5-(4-CLORO-FENIL)-3-[ (4-HIDROXI-CICLO-HEXIL) -(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 60 HO h3c rVv-r0" 0 0 ÁCIDO 3-[(4-HIDROXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-(4-METOXI-FENIL)-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 61 ^ ri 0 ry4 sVoH NC"\^ o ÁCIDO 5-(4-CIANO-FENIL)-3-[(4-HIDROXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 62 HjC^ch, /Y^AC^ rvTkJSH0» ^-O^V ÁCIDO 3-[(2-HIDROXI-4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-ISOPROPIL-AMINO]-5-(4-METOXI-FENIL)-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 63 H^° Ο^Ύ“ ÁCIDO 3-[(1-FORMIL-PIPERIDIN-4-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 64 jf Γ\~{χ£ o ÁCIDO 3-[Ν',N'-DIMETIL-N-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-HIDRAZINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 106 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 65 V ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(1-METIL-l-0XI-PIPERIDIN-4-IL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 66 0*h ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(1-METIL-l-OXI-PIPERIDIN-4-IL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 67 MV™ 0 ÁCIDO 3-[(2-AMINO-CICLO-HEXIL)-(2,4-DICLORO-BENZOÍL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO — 68 pt^“· 0<V" ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(1-OXO-TETRA-HIDR0-TI0PIRAN-4-IL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 69 1 «λ Ρ f-o^V0” ÁCIDO 5-(4-FLUOROFENIL)-((4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-1-(METIL-PIPERIDIN-3-ILMETIL)-AMINO)-TI0FEN0-2-CARB0XÍLICO + + + 70 %Ι° Ν CH3 rtv jj^V^V^cSj.H ÁCIDO 3-[(1-METANOSSULFONIL-PIPERIDIN-4-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TI0FEN0-2-CARB0XÍLICO + + + 71 H3C 0 «-L Q 'n-{^ch= __ ri 0 QisiH ÁCIDO 3-[(1-METILCARBAMOÍL-PIPERIDIN-4-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TI0FEN0-2-CARB0XÍLICO + + + 72 Cl _,'Á rio Cl ÁCIDO 3-[N-(2,4-DICLORO-BENZOÍL)-Ν',Ν'-DIMETIL-HIDRAZINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 107 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 73 0 ÁCIDO 5-(4-FLUORO-FENIL)-3-[(4-HIDROXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-ΑΜΙΝΟ]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 74 ^ //° Ν—(/ Q /1 0 0Λ>τΟΗ ÁCIDO 3-[(1-METILCARBAMOÍL-PIPERIDIN-4-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-ΑΜΙΝΟ]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 75 Vrr r£T Χ S^^COjH ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(1-METIL-2-OXO-PIPERIDIN-4-IL)-ΑΜΙΝΟ]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 76 °γ°Η 0 (γΟγ* ÁCIDO 3-[(4-CARBOXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-ΑΜΙΝΟ]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 77 \ Q Ο^μ0η ÁCIDO 3-[(1-CIANO-PIPERIDIN-4 — IL) -(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 78 Ο^ΟΗ 6 r y^-s-^y-oh ÁCIDO 3-[(4-CARBOXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 79 ΗΟ Ò „ /Γ\ 0 jTy^s^t0» ργ^ 0 F ÁCIDO 5-(3,4-DIFLUORO-FENIL)-3-[(4-HIDROXI- CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 108 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 80 ΗΟ Ò ΥΛΑ-"1 Jkr-OH \j & Ύ \-' 0 ÁCIDO 5'-ACETIL-4-[(4-HIDROXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-[2,2']BITIOFENIL-5-CARBOXÍLICO + + + 81 .0 Η.Ν—/ ' Q JTÍ 0 0^sV ÁCIDO 3-[(1-CARBAMOÍL-PIPERIDIN-4-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 82 Jfa- jj^p^s co2h ÁCIDO 3-[(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-(7-OXO-AZEPAN-4-IL)-AMINO]-5-FENIL-TI0FEN0-2-CARB0XÍLICO + + + 83 NH, yÁ ji v o ÁCIDO 3-[(1-AMINOOXALIL-PIPERIDIN-4-IL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 84 CH, __/ 0 ÍW° OH ÁCIDO 3-[ETIL-(4-METIL-BENZOÍL)-AMINO]-5-FENIL-TI0FEN0-2-CARB0XÍLICO + + + 85 ιΓ\~Λ. 3K^0H °%-Â J s II H.c ÁCIDO 5-(4-ACETIL-FENIL)-3-[(4-HIDROXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-TI0FEN0-2-CARB0XÍLIC0 + + + 86 H°/\ 3^ O^T°OH ÁCIDO 3-[(4-HIDROXI-4-METIL-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TI0FEN0-2-CARB0XÍLICO + + + 109

ΕΡ 1 569 929/PT 87 ✓0H ÁCIDO 3-[(3-HIDROXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 88 HO„ / ir\ o fYvV" \s^ 0 ÁCIDO 3-[(4-HIDROXI-4-METIL-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO +++ 89 ,'0H ÁCIDO 3-[(3-HIDROXI-CICLO-HEXIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + 90 OH ÁCIDO 3-[(3-HIDROXI-CICLOPENTIL)-(4-METIL-CICLO-HEXANOCARBONIL)-AMINO]-5-FENIL-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO + + + +++ CI50 < 5 μΜ ++ CI50 5 μΜ - 20 μΜ + CI50 > 20 μΜ

Exemplo 37

Avaliação dos compostos no ensaio da ARN-polimerase dependente de ARN do VHC.

As seguintes referências estão todas incorporadas por meio de referência: 1. Behrens, S., Tomei, L., De Francesco, R. (1996) EMBO 15, 12-22. 2. Harlow, E. & Lane, D. (1988) Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbord Laboratory. Cold Spring Harbord. NY. 3. Lohmann, V., Kõrner, F., Herian, U. & Bartenschlager, R. (1997) J. Virol. 71, 8416-8428. 4. Tomei, L., Failla, C., Santolini, E., De Francesco, R. & La Monica, N. (1993) J Virol 67, 4017-4026. 5. O pedido de patente US co-pendente 10/166,031 está incorporado por meio de referência. 110 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

Os compostos foram avaliados utilizando um ensaio de polimerase in vitro contendo ARN-polimerase dependente de ARN do VHC (proteína NS5B) recombinante purificada. A proteína NS5B do VHC foi expressa em células de insecto utilizando um baculovírus recombinante como vector. Os procedimentos experimentais utilizados para a clonagem, expressão e purificação da proteína NS5B do VHC estão descritos abaixo. Seguem-se os detalhes dos ensaios de ARN-polimerase dependente de ARN utilizados para testar os compostos.

Expressão da proteína NS5B do VHC em células de insecto: 0 ADNc que codifica a proteína NS5B completa da estirpe HCV-Bk, genótipo lb, foi amplificado por PCR utilizando os iniciadores NS5Nhe5' (5'-GCTAGCGCTAGCTCAATGTCCTACACATGG-3' ) e XhoNS53' (5'-CTCGAGCTCGAGCGTCCATCGGTTGGGGAG-3') e o plasmídeo pCD 3.8-9.4 como molde (Tomei et al, 1993). Os iniciadores NS5Nhe5' e XhoNS53' contêm dois sítios Nhe I e Xhol (sequências sublinhadas), respectivamente, na sua extremidade 5' . 0 fragmento de ADN amplificado foi clonado no plasmídeo de expressão bacteriana pET-21b (Novagen) entre os sítios de restrição MieI e Xhol para gerar o plasmídeo pET/NS5B. Este plasmídeo foi posteriormente utilizado como molde para amplificar por PCR a região que codifica NS5B, utilizando os iniciadores NS5B-H9 (5'-ATACATATGGCTAGCATGTCAATGTCCTACACA TGG-3') e NS5B-R4 (5'-GGATCCGGATCCCGTTCATCGGTTGGGGAG-3'). O iniciador NS5B-H9 abrange uma região de 15 nucleótidos no plasmídeo pET-21b, seguida pelo codão de iniciação da tradução (ATG) e por 8 nucleótidos que correspondem à extremidade 5' da região codificante de NS5B (nt. 7590-7607 na sequência do VHC com o número de acesso M58335) . O iniciador NS5B-R4 contém dois sítios BamRI (sublinhados), seguidos por 18 nucleótidos correspondentes à região à volta do codão de paragem no genoma do VHC (nt. 9365-9347) . A sequência amplificada, com 1,8 kb, foi digerida com Nhel e BamHI e ligada a um plasmídeo pBlueBacII previamente digerido (Invitrogen). O plasmídeo recombinante resultante foi designado por pBac/NS5B. Células Sf9 foram co-transfectadas com 3 pg de pBac/NS5B, juntamente com 1 pg de ADN de baculovírus linearizado (Invitrogen), tal como descrito no protocolo do fabricante. Após dois ciclos de purificação de placas, isolou-se um baculovírus de NS5B recombinante, 111 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ

BacNS5B. A presença da proteína NS5B recombinante foi determinada por análise de transferência de Western (Harlow & Lane, 1988) de células Sf9 infectadas por BacNS5B, utilizando um anti-soro policlonal de coelho (anti-NS5B) produzido contra uma versão da proteína NS5B contendo uma marca His expressa em E. coli. As infecções das células Sf9 com este vírus purificado via placas foram realizadas em recipientes de fundo deformado de 1 litro, a uma densidade celular de 1,2*106 células/ml e uma multiplicidade de infecção de 5.

Preparação de uma proteína NS5B recombinante solúvel:

As células Sf9 foram infectadas da forma descrita acima. Sessenta horas após a infecção, as células foram colhidas e depois lavadas duas vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS). As proteínas totais foram solubilizadas conforme descrito em Lohmann et al. (1997) com algumas modificações. Resumidamente, as proteínas foram extraídas em três etapas, Sl, S2, S3, utilizando os tampões de lise (LB) I, LB II e LB III (Lohmann et al., 1997) . A composição de LBII foi modificada para conter Triton X-100 a 0,1% e NaCl 150 mM, de modo a reduzir a quantidade de proteína NS5B solubilizada nesta etapa. Adicionalmente, a sonicação dos extractos celulares foi evitada ao longo de todo o protocolo para preservar a integridade da estrutura da proteína.

Purificação de NS5B recombinante usando cromatografia líquida rápida de proteínas (FPLC): A proteína NS5B solúvel na fracção S3 foi diluída para reduzir a concentração de NaCl para 300 mM e, em seguida, foi incubada com esferas de DEAE-sepharose (Amersham-Pharmacia) durante 2 horas a 4°C, tal como descrito por Behrens et al. (1996) . O material que não se ligou foi eliminado por centrifugação a 25000 rpm durante 15 min a 4°C, utilizando um rotor SW41 (Beckman). O sobrenadante foi adicionalmente diluído para reduzir a concentração de NaCl para 200 mM e subsequentemente carregado, com um caudal de 1 ml/min, numa coluna de heparina HiTrap® de 5 ml (Amersham-Pharmacia) ligada a um sistema FPLC® (Amersham-Pharmacia). As proteínas ligadas foram eluídas em fracções de 1 ml, utilizando um gradiente contínuo de NaCl entre 0,2M e 1M, num volume de 25 112 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ ml. As fracções contendo NS5B foram identificadas por meio de electroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE), seguida de transferência de Western utilizando o anti-soro anti-NS5B numa diluição de 1:2000. As fracções positivas foram reunidas, e o tampão de eluição foi trocado por NaP04 50 mM, pH 7,0; glicerol a 20%; Triton X-100 a 0,5%; e DTT 10 mM, utilizando uma coluna PD-10 (Amersham-Pharmacia). A amostra foi depois carregada numa coluna HiTrap® SP de 1 ml (Amersham-Pharmacia) , com um caudal de 0,1 ml/min. As proteínas ligadas foram eluidas utilizando um gradiente contínuo de NaCl entre 0 e 1M, num volume de 15 ml. As fracções eluidas foram analisadas por SDS-PAGE e transferência de Western. Em alternativa, as proteínas foram visualizadas, após SDS-PAGE, por coloração com prata, utilizando o kit Silver Stain Plus (BioRad) conforme descrito pelo fabricante. As fracções positivas foram testadas quanto a actividade da RdRp (ver abaixo) , e as mais activas foram reunidas e armazenadas como uma solução a 40% em glicerol a -70°C.

Ensaio in vitro de cintilação por proximidade em placas Flashplate da RdRp do VHC (ENSAIO STREP-FLASH) utilizado para avaliar os análogos:

Este ensaio consiste em medir a incorporação de [3H]-UTP radiomarcado num hibrido de molde-iniciador oligo(dT) biotinilado/polyrA, capturado à superfície de placas Flashplate™ de microtitulação revestidas com estreptavidina e contendo liquido de cintilação incorporado (NEN Life Science Products Inc., MA, EUA, SMP 103A). Resumidamente, uma solução de polyrA 400 ng/μΐ (Amersham Pharmacia Biotech) foi misturada volume a volume com 5'-biotina-oligo dTi5 a 20 pmol/μΐ. O molde e os iniciadores foram desnaturados a 95°C durante 5 min e depois incubados a 37°C durante 10 minutos. Os híbridos de molde-iniciador emparelhados foram subsequentemente diluídos num tampão contendo Tris-HCl, permitindo-se que se ligassem às placas Flashplate revestidas com estreptavidina durante a noite. O material não ligado foi eliminado, e os compostos foram adicionados numa solução de 10 μΐ, seguida de 10 μΐ de uma solução contendo MgCl2 50 mM, Tris-HCl 100 mM, pH 7,5; NaCl 250 mM e DTT 5 mM. A reacção enzimática foi iniciada mediante a adição de 30 μΐ de uma 113 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ solução contendo a enzima e o substrato para obter as seguintes concentrações: UTP 25 μΜ, [3H]-UTP 1 μΟί, NS5B do VHC recombinante 100 nM. Permitiu-se que as reacções da RdRp prosseguissem durante 2 horas à temperatura ambiente, após o que os poços foram lavados três vezes com 250 μΐ de solução de NaCl 0,15M, secos ao ar a 37°C e contados utilizando um contador de cintilações (Wallac Microbeta Trilex, Perkin-Elmer, MA, EUA). Os resultados são apresentados na Tabela 1.

Os exemplos anteriores podem ser repetidos com um êxito semelhante substituindo os reagentes e/ou as condições operacionais utilizados nos exemplos anteriores pelos reagentes e/ou as condições operacionais genérica ou especificamente descritos deste invento. A partir da descrição precedente, um perito na especialidade pode determinar facilmente as caracteristicas essenciais deste invento e, sem afastamento do seu espirito e âmbito, pode fazer várias alterações e modificações do invento para o adaptar a várias utilizações e condições.

Lisboa, 2010-06-11

Claims

ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 1/21 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável; em que: Z é ciclo-hexilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados de forma independente entre oxo, halogéneo, S02Rf, CONRgRh, alquilo em Ci-e, aralquilo em C6-12, arilo em C6-i2/ alquiloxi em Ci-6, C (0)-alquilo em Ci-6, heterociclo em C3_io, hidroxilo, NRgRh, C(0)0Rf ou ciano; Rf, Rg e Rh são, em cada caso e de modo independente, H ou alquilo em C1-6; Y é fenilo não substituído ou fenilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados de forma independente entre halogéneo, nitro, S02Rf, alquilo em C1-6, alquiloxi em C1-6, C (0) -alquilo em Ci_6, C(0)0Rf, ciano e azido; X é ciclo-hexilo não substituído ou substituído com um ou mais substituintes seleccionados de modo independente entre alquilo em Ci_6, halogéneo, alcenilo em C2_6, alcinilo em C2_6 ou alquiloxi em Ci-s; m é 0 .
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Z é ciclo-hexilo substituído com um ou mais substituintes seleccionados de forma independente entre halogéneo, S02Rf, CONRgRh, alquilo em C1-6, aralquilo em C6-12, arilo em C6-12, alquiloxi em Ci_6, C (0)-alquilo em Ci_6, heterociclo em C3-10, hidroxilo, NRgRh, C(0)0Rf ou ciano. ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 2/21
3 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 10/21

3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Z é hidroxiciclo-hexilo.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Z é 4-hidroxiciclo-hexilo.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que X é ciclo-hexilo substituido com alquilo em Ci-6.
6. Composto de acordo com a reivindicação 5, em que X é ciclo-hexilo substituido com alquilo em C1-3. é
7. Composto de 4-metil-ciclo-hexilo acordo com a reivindicação 1, em que ou 2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexilo. X
8. Composto de acordo com a reivindicação 7, em que X é 4-metil-ciclo-hexilo.
9. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Y é fenilo não substituido ou fenilo substituido com um ou mais substituintes seleccionados de forma independente entre halogéneo, nitro, alquilo em Ci-e, alquiloxi em C1-6 e ciano.
10. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Y é fenilo substituido com um ou mais halogéneos.
11. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Y é fenilo substituido com um ou mais alquiloxi em C1-6.
12. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Y é fenilo substituido com um ou mais metiloxi.
13. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Y é fenilo substituido com um ou mais alquilos em C1-6.
14. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Y é fenilo substituido com um ou mais metilos.
15. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Y é fenilo. ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 3/21
16. Composto de acordo com a reivindicação í, em que Y é 4-fluoro-fenilo, 3-fluoro-fenilo, 4-cloro-fenilo, 4-metoxi-fenilo, 4-ciano-fenilo ou p-tolilo.
17. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o referido composto é seleccionado entre: ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[(4-hidroxi-imino-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(4-metoxi-imino-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(4-metoxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano carbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexanocarbonil)-(4-metil-ciclo- hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-tiofeno-2-carboxilico; ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-tiofeno-2-carboxilico; ácido 5-(4-cloro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano carbonil) -amino]-5-(4-metoxi-fenil)-tiofeno-2-carboxilico; ácido 5-(4-ciano-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[(4-carboxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 4/21 ácido 5-(3,4-difluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico; ácido 5-(4-acetil-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo- hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(3-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
18. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
19. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil ) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
20. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(4-hidroxi-imino-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
21. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(4-metoxi-imino-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
22. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(4-metoxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. ΕΡ 1 569 929/PT 5/21
23. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexano-carbonil)-(4-metil-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
24. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 5-(4 — fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
25. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
26. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 5- (4-cloro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
27. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil ) -amino]-5-(4-metoxi-fenil)-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
28. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 5-(4-ciano-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil) -(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
29. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[ (4-carboxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
30. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 5-(3,4-difluoro-fenil)-3-[ (4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 6/21
31. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 5-(4-acetil-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
32. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
33. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(3-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
34. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o referido composto é seleccionado entre os compostos das fórmulas seguintes e seus sais farmaceuticamente aceitáveis:

ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 7/21

ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 8/21 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ
35. referido fórmulas Composto de acordo com a reivindicação 34, em que o composto é seleccionado entre os compostos das seguintes e seus sais farmaceuticamente aceitáveis:

HO

•CH, ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 9/21 ΕΡ 1 569 929/ΡΤ HO
36. referido fórmulas Composto de acordo com a reivindicação 34, em que o composto é seleccionado entre os compostos das seguintes e seus sais farmaceuticamente aceitáveis:
37. referido fórmulas Composto de acordo com a reivindicação 34, em que o composto é seleccionado entre os compostos das seguintes e seus sais farmaceuticamente aceitáveis:
38. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[ (trans-4-hidroxi-ciclo-hexil)_ (trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável; ou ácido cis-3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
39. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(trans-4-hidroxi-ciclo-hexil)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
40. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido cis-3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
41. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é ácido 3-[(trans-4-hidroxi-ciclo-hexil)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico.
42. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o referido composto é o ácido cis-3-[(4-hidroxi-4-metil-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico.
43. Composto seleccionado entre: trifluoroacetato de 3-{ [ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-piperidinio; trifluoroacetato de 2-{ [ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-piperidinio; ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piridin-3-ilmetil- amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piridin-4-ilmetil- amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 11/21 ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[azepan-4-il-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(2,4-dicloro-benzoíl)-[1,3]dioxolan-2-ilmetil- amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[[1,3]dioxolan-2-ilmetil-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[(l-fluoro-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; cloreto de 4-[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil )-amino]-1-metil-piperidínio; ácido 3-[(2-acetilamino-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- isopropil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piridin-2-ilmetil-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hex-3-enocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(l-azidometil-2-metil-butil)-(2,4-dicloro-benzoí1)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; 2-[(2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(2,4-dicloro-benzoíl)-amino]-3-metil-pentilamónio; ácido 3-[(l-aminometil-2-metil-butil)-(2,4-dicloro-benzoíl)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; trifluoroacetato de {2-[(2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(2,4-dicloro-benzoíl)-amino]-propil}-trimetilamónio; ácido 3-[isopropil-(5-metil-[1,3]dioxano-2-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 12/21 cloreto de 4-[ [2-carboxi-5-(4-fluoro-fenil)-tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio; ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-isopropil-amino]-tiofeno-2-carboxílico; ácido 5- (4-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hex-l-enocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[isopropil-(5-metil-tetra-hidro-piran-2-carbonil)- amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[isopropil-(4-metileno-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[isopropil-(5-metil-tetra-hidro-piran-2-carbonil)- amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3- [isopropil-(5-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-2-carbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(tetra- hidro-piran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(2-azido-l-metil-etil)-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-metil-piperidin-4-ilmetil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(tetra-hidro- tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; cloreto de 3-{[ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil )-amino]-metil}-1-metil-piperidínio; ácido 3-[(2-amino-l-metil-etil)-(4-metil-ciclo-hexano carbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1,1-dioxo-hexa- hidro-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 13/21 cloreto de 4-{ [ (2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-1-metil-piperidinio; ácido 3-[ (l-etil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(l-isopropil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperidin-4-il- amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[[1- (4-metoxi-benzil)-2-oxo-piperidin-4-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[ (2-azido-l-metil-etil)-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 5- (3-fluoro-fenil)-3-[ (2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-isopropil-amino]-tiofeno-2-carboxílico; cloreto de 4-[(2-carboxi-5-p-tolil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil ) -amino]-1-metil-piperidinio; ácido 3-[ (l-acetil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; cloreto de 4-[(2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil ) -amino]-1-metil-azepânio; ácido 3-[(l-benzil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; o ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-[isopropil-(4-metil-ciclo-hex-3-enocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxilico; cloreto de 4-[ [2-carboxi-5-(3-fluoro-fenil)-tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidinio; cloreto de 4-[ [2-carboxi-5-(4-metoxi-fenil)-tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidinio; ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 14/21 cloreto de 4-[[2-carboxi-5-(4-nitro-fenil)-tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio; cloreto de 4-[[2-carboxi-5-(4-cloro-fenil)-tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio; cloreto de 4-[[2-carboxi-5-(4-ciano-fenil)-tiofen-3-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio; ácido 3-[(2-hidroxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropil-amino]-5-(4-metoxi-fenil)-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(l-formil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[Ν',N'-dimetil-N-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)- hidrazino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-metil-l-oxi- piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[ (4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-metil-l-oxi- piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(2-amino-ciclo-hexil)-(2,4-dicloro-benzoíl)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-oxo-hexa-hidro-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 5-(4 — fluorofenil)-((4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-1-(metil-piperidin-3-ilmetil)-amino)-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(l-metanossulfonil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(l-metilcarbamoíl-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[N-(2,4-dicloro-benzoíl)-N',N'-dimetil-hidrazino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ΕΡ 1 569 929/PT 15/21 ácido 3-[(l-metilcarbamoíl-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(l-metil-2-οχο- piperidin-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; ácido 3-[(l-ciano-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexano carbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 5'-acetil-4-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-[2,2']bitiofenil-5-carboxílico; ácido 3-[(1-carbamoíl-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(7-oxo-azepan-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[(l-amino-oxalil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo- hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ácido 3-[etil-(4-metil-benzoíl)-amino]-5-fenil-tiofeno-2- carboxílico; ácido 3-[(3-hidroxi-ciclopentil)-(4-metil-ciclo-hexano- carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxilico; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
44. Composto de acordo com a reivindicação 43, em que o referido composto é seleccionado entre: 4-[(2-carboxi-5-fenil-tiofen-3-il)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-1-metil-piperidínio, ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(tetra-hidro- tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, ácido 3-[(1,l-dioxo-tetra-hidro-tiopiran-4-il)-(trans-4- metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 16/21 ácido 3-[(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(1-oxo-tetra-hidro-llambda*4*-tiopiran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico, e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
45. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 44, em que o sal farmaceuticamente aceitável é um sal de sódio.
46. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 44, em que o referido sal farmaceuticamente aceitável é um sal de litio.
47. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 44, em que o referido sal farmaceuticamente aceitável é um sal de potássio.
48. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 47, como substância terapêutica.
49. Utilização de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 47, para o fabrico de um medicamento.
50. Utilização de acordo com a reivindicação 49 para o fabrico de um medicamento para tratar ou prevenir uma infecção virai por Flaviviridae num hospedeiro.
51. Utilização de acordo com a reivindicação 50, em que a referida infecção virai por Flaviviridae é o VHC.
52. Utilização de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 47, para o fabrico de um medicamento para inibir ou reduzir a actividade de uma polimerase virai de Flaviviridae num hospedeiro.
53. Utilização de acordo com a reivindicação 52, em que a referida polimerase é uma ARN-polimerase dependente de ARN.
54. Utilização de acordo com a reivindicação 52, em que a referida polimerase é a polimerase do VHC. ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 17/21
55. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 4 9 a 54, em que o referido medicamento compreende adicionalmente pelo menos um agente adicional seleccionado entre inibidores de protease de serina virai, inibidores de polimerase virai, inibidores de helicase virai, agentes imunomoduladores, agentes antioxidantes, agentes antibacterianos, vacinas terapêuticas, agentes hepato-protectores e agentes anti-sentido.
56. Utilização de acordo com a reivindicação 55, em que o referido pelo menos um agente adicional é interferão a, ribavirina, cardo mariano (silybum marianum), interleucina-12, amantadina, ribozima, timosina, N-acetilcisteina ou ciclosporina.
57. Utilização de acordo com a reivindicação 56, em que o referido pelo menos um agente adicional é interferão a.
58. Utilização de acordo com a reivindicação 56, em que o referido pelo menos um agente adicional é ribavirina.
59. 49 a 58, 60. 49 a 58, Utilização de acordo com qualquer das reivindicações em que o hospedeiro é um animal.
Utilização de acordo com qualquer das reivindicações em que o hospedeiro é um ser humano.
61. Composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 47 e pelo menos um veiculo ou um excipiente farmaceuticamente aceitável.
62. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 61, que compreende adicionalmente pelo menos um agente adicional seleccionado entre inibidores de protease de serina virai, inibidores de polimerase virai, inibidores de helicase virai, agentes imunomoduladores, agentes antioxidantes, agentes antibacterianos, vacinas terapêuticas, agentes hepatoprotectores e agentes anti-sentido. ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 18/21
63. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 62, em que o referido pelo menos um agente adicional é interferão a, ribavirina, cardo mariano (silybum marianum), interleucina-12, amantadina, ribozima, timosina, N-acetilcisteina ou ciclosporina.
64. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 63, em que o agente adicional é interferão a.
65. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 63, em que o agente adicional é ribavirina.
66. Combinação farmacêutica que compreende pelo menos um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 47 e pelo menos um agente adicional seleccionado entre inibidores de protease de serina virai, inibidores de polimerase virai, inibidores de helicase virai, agentes imunomoduladores, agentes antioxidantes, agentes antibacterianos, vacinas terapêuticas, agentes hepato-protectores e agentes anti-sentido.
67. Combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 66, em que o referido pelo menos um agente adicional é interferão a, ribavirina, cardo mariano (silybum marianum), interleucina-12, amantadina, ribozima, timosina, N-acetilcisteina ou ciclosporina.
68. Combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 67, em que o agente adicional é interferão a.
69. Combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 67, em que o agente adicional é ribavirina.
70. Composição farmacêutica de acordo com qualquer das reivindicações 66 a 69, em que o referido composto e o referido agente adicional são utilizados sequencialmente.
71. Composição farmacêutica de acordo com qualquer das reivindicações 66 a 69, em que o referido composto e o referido agente adicional são utilizados simultaneamente. ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 19/21
72. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 47 para tratar uma infecção pelo VHC num hospedeiro.
73. Utilização de acordo com a reivindicação 50, para o fabrico de um medicamento para tratar uma infecção virai por Flaviviridae num hospedeiro.
74. Utilização de acordo com a reivindicação 73, em que a referida infecção virai por Flaviviridae é o VHC.
75. Utilização de acordo com a reivindicação 74, em que o hospedeiro é um animal.
76. Utilização de acordo com a reivindicação 74, em que o hospedeiro é um ser humano.
77. Composto intermediário seleccionado entre: éster metilico do ácido 5-bromo-3-(1,4-dioxa-spiro[4.5]dec-8-ilamino)-tiofeno-2-carboxílico; éster metilico do ácido 5-bromo-3-[(1,4-dioxa-spiro[4.5]dec-8-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico; éster metilico do ácido 5-bromo-3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico; éster metilico do ácido 5-bromo-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico; éster metilico do ácido 3-[isopropil-(4-oxo-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metilico do ácido 3-(1,4-dioxa-spiro[4.5]dec-8-ilamino)-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metilico do ácido 3-[(1,4-dioxa-spiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 20/21 éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-(4-oxo-ciclo-hexil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 3-[(trans-4-hidroxi-ciclo-hexil)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 3-(l-metil-piperidin-4-ilamino)-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 5-fenil-3-(tetra-hidro-tiopiran-4-ilamino)-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 5-iodo-3-[(trans-4-metil-ciclo- hexanocarbonil)-(l-metil-piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxílico; éter metílico do ácido 3-[1-(4-metoxi-benzil)-2-oxo- piperidin-4-ilamino]-5-(1-metil-hexa-l,3, 5-trienil)-tiofeno-2-carboxílico; e éster metílico do ácido 3-[ 1-(benziloxicarbonil)-2-oxo- piperidin-4-ilamino]-5-(1-metil-hexa-l, 3,5-trienil) -tiofeno-2-carboxílico.
78. Composto intermediário seleccionado entre: éster benzílico do ácido 3-{[(2-metoxicarbonil-5-fenil- tiofen-3-il)-amino]-metil}-piperidina-l-carboxílico; éster benzílico do ácido 3-{[(2-metoxicarbonil-5-fenil- tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-metil}-piperidina-l-carboxílico; éster metílico do ácido 5-(3-fluoro-fenil)-3-[(4-hidroxi-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 3-[(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperidin-4-il-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 3-[ (2-acetoxi-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-isopropilamino]-5-(3-fluoro-fenil)-tiofeno-2- ΕΡ 1 569 929/ΡΤ 21/21 carboxílico; éster metílico do ácido 3-[isopropil-(4-oxo-ciclo-hexano-carbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 3-[(2-azido-4-metil-ciclo-hexano-carbonil)-isopropilamino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 3-{(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-[4-(4-nitro-benzoíloxi)-ciclo-hexil]-amino}-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 3-[(4-hidroxi-imino-ciclo-hexil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster benzílico do ácido 4-(2-metoxicarbonil-5-fenil-tiofen-3-ilamino)-piperidina-1-carboxílico; éster benzílico do ácido 4-[(2-metoxicarbonil-5-fenil-tiofen-3-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-piperidina-1-carboxílico; éster metílico do ácido 3-[ (l-benzil-piperidin-4-il)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 3-[(tetra-hidro-piran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 3-[(2-0-acetil-4-metil-ciclo- hexanocarbonil)-(tetra-hidro-piran-4-il)-amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico; éster metílico do ácido 3-[[1-(4-metoxi-benzil)-2-oxo- piperidin-4-il]-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-(1-metil-hexa-1,3,5-trienil)-tiofeno-2-carboxílico; e éster metílico do ácido 3-[(2-azido-l-metil-etil)-(4-metil-ciclo-hexanocarbonil) -amino]-5-fenil-tiofeno-2-carboxílico. Lisboa, 2010-06-11