KR940000857B1 - 과민성 시험스트립 - Google Patents

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Description

과민성 시험스트립

본 발명은 외피의 폐쇄시험(패취시험)을 수행하기 위한 새로운 방법에 관한 것이다. 본 형태의 시험은 특이한 물질(알레르겐)에 대한 접촉성 알레르기(접촉감수성)를 검출하거나 물질의 알레르겐성 및/또는 자극적성질을 시험하기 위하여 사용된다. 단순하게, 본 발명의 방법은“진정 시험(True test)”이라고 불린다.

패취시험(Patch test)이라는 용어는 처음에 본 시험을 수행하기 위하여 섬유나 종이의 조각(patches)을 사용한다는 사실에서 유래됐으며, 이 조각들은 시험되어지는 물질로 적셔진다. 수년동안 많은 다른 형태의 패취(patches)가 사용되어 왔다. 본 발명과 연관되어 패취라는 용어는 기본직으로 시험물질을 포함하는 부분을 나타낸다.

외피성 시험방법에서는, 알레르겐성이거나 자극성 성질을 갖는 것으로 예상되는 물질을 어떤 일정기간동안 폐쇄(occlusion) 상태로 정상피부에 도포하게 되는데, 이러한 도포는 조절된 방법 및 시험물질의 적절한 제형 및 농도로 실행된다. 접촉성 알레르기의 경우, 이것은 시험부위에서 알레르기성 습진을 일으킬 것이다. 자극성 물질은 유사한 특성의 자극성 습진반응을 일으킨다(Manual of Contact Dermatitis ; FregertS, 2nd ed. Munksgaard, Copenhagen/1981/ pp. 71-76). 보통 시험물질은 일반적으로 와셀린(petrolatum)이나 물같은, 적절한 매질와 같이 사용한다. 오늘날 패취시험 방법에서“패취”란 통상적으로 시험 수행시에 적절히 제제된 시험물질로 채워진 알루미늄 호일로 된 작은 컵이며, 이는 시험이 폐쇄상태에서 수행될 수 있는 그러한 방법으로 사용된다. 가끔 패취의 대부분은 분리할 수 있는 보호 호일로 피복된 점착성 테이프에 부착시켜 사용된다.

보통 패취시험에 사용되는 방법과 재료는 안전성의 필요조건에 관하여서는 불만족스러운 상태이다 ; 특히 이것은 금속염에 사용된 재료와 방법면에서 특히 그러하다. 그러므로 개선이 필요하다. (참조 : CpKalimo, K. et at., Contact Dermatitis 10( 1984), pp. 25-29 : Schmidt H. et al., Contact Dermatitis6(1980), pp. 91-94). 알레르기성 시험과정에서, 특히, 시험물질이 자극의 역치값에 근접되는 농도로 사용될 경우, 자극성 반응은 평범하다. 적어도 부분적으로는 이것은 시험물질이 피부 접촉부위위에 고르게 분포되지 않는 사실에 기인한다. 표준 패취시험 물질의 현미경 검사는, 언급한 와셀린 매질에 혼입시 알레르겐(allergens)의 대부분은 입자나 다양한 크기의 방울형태로 그안에서 불균일하게 분산된다는 것을 보여준다(Vannestre D. et al., Contact Dermatitis 6(1980), pp. 197-203 ; Fossereau J. 등, Occupational Contact Dermatitis. Munksgaards, Copenhagen/1982/, p. 45) 이러한 입자중 가장 큰것은 직경이 0.5mm 이상으로 측정되었다. 땀에 용해되었을때 그같은 입자는 국소적으로 높은 농도의 알레르겐을 생성하고, 머리칼 소낭(hair follicles) 주위에 기공염증(“poritis”)을 일으킨다. 다른 단점은 표준 패취시험에 적합한 시험물질의 양이 1/6파우어 (power) 범위안에서 변할 수 있다는 것이다(Fisher T. et. al., Contact Dermatitis 1/1984/, pp. 285-87). 이같은 모든 것은, 패취시험 과정에서 사용되어지는 재료의 약물학적 성질을 개선시키는 것이 강력히 요망된다는 것을 보여준다.

진정 시험은 앞서 말한 문제를 해결해준다. 즉, 이 시험은 정확한 투약, 일정한 표면분포, 시험물질의 높은 생물 이용성을 가져다 준다. 그래서 진정 시험은 낮은 생물 이용성, 부정확한 투여량과 와셀린이 매질로써 사용되었을때 표면의 분포가 고르지 못하게 되기 쉬운 문제를 해결해준다. 본 발명은 흡수 패취시험 기술에 적용할 수 있는 방법을 제공한다. 상기 방법들은 (a) 요구되는 양을 최소화하고 시험물질의 투여 정확도(단위 면적당 투여량)을 높이며, (b) 보관에 안정한 시험제형을 조제할 수 있게 하고 (c) 상호 오염의 위험이 거의 없이, 많은 시험물질 제형을 각각 함유하는 미리 제조된 시험 스트립 (prefabricated teststrips)이 제조될 수 있도록 한다.

진정 시험은 여러종류의 비폐쇄적 기술과 혼동되지 말아야함을 지적해야 한다. 폐쇄적 기술에서, 시험물질과 피부간의 접촉은 이 사이의 공간에서 이루어지게 되는데 ; 이것은 시험물질이 도포된 시험 피부부위로부터 습기 (땀)를 함유함과 동시에 공기와 공기 내부의 습기가 제거되어지는 것을 의미한다. 이것을 달성하기 위해서 밀봉물질( sealing material), 예를들면 알루미늄 호일이나 불침투성 플라스틱 호일이 사용된다. 이 폐쇄된 공간방법은 폐쇄적 기술이 표준화되기 쉽게 해주며 믿을만한 결과를 제공하는 것으로 입증되었다.(참고, Pirila V. Contact Dermatitis 1/1975/ pp. 48-52) 필름형성 중합체는 초기에 비-폐쇄적 기술에서 사용되어 왔다(참고, Accession Number 31888/prove A358/Central Patents Index Section B, Farmdoc, Derwent Publica

tions Ltd, London 1968).

본 발명에 따르면, 앞서 말한 문제는 실질적으로 습기와 물에 침투될 수 없고, 시험물질이 혼입되어 균일하게 분포되어 있는 얇고 부드러운 필름으로 구성된 패취를 사용함으로써 해결될 수 있다. 이 패취는 이하에서“필름 운반체”라고 한다.“부드러운”이라는 용어는 필름이 진정 시험에 사용됐을때 금이 가서 부서지기가 쉽지 않다는 것을 의미한다. 사용시에 그 필름은 폐쇄상태로 피부에 도포되어 있는 동안 피부로부터 분비물을 흡수할 수 있도록 충분시 건조하며 친수성이어야 한다.

필름으로 적절한 것으로 간주되기 위해서 층(layer)은 0.25mm(0.01인치)이하의 두께를 가져야 한다[참고, Encyclopedia of Polymer Science and Technology, Plastics, Resins, Rubbers, Fibers, Vol. 6 p.764(1967) ; John Wiley & Sons Inc., USA]. 바람직한 구현에서 본 발명은 0.25mm 이하의 두께를 가지는 필름을 사용하며, 바람직하게는 약 0.1mm 이하, 예를들면 약 0.05mm 이하이다. 이러한 두께치는 피부에 적용시키기 전, 즉 피부로부터 어떤 것이 흡착되어지는 단계이전의 필름에 관한 것이다. 각 패취상의 필름면적은, 비록 바람직하게는 필름면적 전체가 점착성을 가지지만 부분 영역으로 세분될 수 있다.

[시험물질]

본 발명은 우선 접촉성 알레르기를 검출하기 위해 유용하므로 시험물질은 예컨대 알레르기를 일으키거나 일으킬 것으로 예상되는 알레르겐 중에서 주로 선택되지만 자극성 물질을 사용할 수도 있다. 본 발명에 따르면, 모든 종류의 접촉성 알레르겐과 자극성 물질은 고체물질이나 액체물질, 유기물질이나 무기물질, 금속염이나 비금속염, 용해성이거나 비용해성(예를들면 물에)이거나간에 사용되어질 수 있다.

패취시험을 사용하는 작업을 촉진시키기 위하여, 지리학상의 다른지역에 대하여 각기 저마다의 지역에서 가장 일반적인 알레르겐이 선택되어 왔다.

그래서 북미의 경우 미국 피부병학회에 의해서 1984년에 표준“트레이”(목록)가 편집되었으며 이것은 다음과 같이 구성되어 있다 : 벤조카일(5% 와셀린), 이미다 졸리디닐 우레아(2% 수용액), 티우람 혼합물(1%와셀런), 신남 알코올(5% 와셀린), 디부카인(1% 와셀린), 머캅토 벤조티아졸(1% 와셀린), 네오마이신 술페이트(20% 와셀린), p-페닐렌디아민(1% 와셀린), 테트라카인(1% 와셀린), p-3차 부틸페놀 포름알데히드 수지(1% 와셀린), 티오머르살(0.1% 와셀린), 포름알데히드(2% 수용액), 히드록시시트로넬랄(4% 와셀린), 카르바 혼합물(3% 와셀린), 신남 알데히드(2% 와셀린), 로신(콜로포니)(20% 와셀린), PPD 혼합물(검정고무 혼합물)(0.6% 와셀린), 올(라놀린) 알코올(30% 와셀린), 시클로메틸카인(1% 와셀린), 유게놀(4% 와셀린), 쿼터르늄 -15(2% 와셀린), 이소유게놀(4% 와셀린), 머캅토 혼합물(1% 와셀린), 에폭시수지 (1% 와셀린), 포타슘디크로메이트(0.5% 와셀린), 벤조카인이 덜섞인 카인(3% 와셀린), 에틸렌디아민디히드로클로라이드(1% 와셀린), 벤조일퍼옥시드(1% 와셀린), 페루의 발삼(25% 와셀린), 퀘터르늄 -15(2% 수용액), 참나무이끼(abs. mousse de chene)(5% 와셀린), 닉켈 술페이트(2.5% 와셀린).

유럽의 경우 추전된 1984 트레이는 다음 목록으로 이루어져 있다(간단히 표기하기 위해, 농도와 매질은 여기서 생략했다) ; 네오마이신 술페이트, 포타슘 디크로메이트, 울 알코올, 머캅토 혼합물, 벤조카인, 닉켈 술페이트, 에폭시 수지, 에틸렌디아민 디히드로클로라이드, 염화코발트, 페루의 발삼, 티우람 혼합물, 파라벤스(혼합물), p-페닐렌 디아민디히드로 클로라이드, 콜로포니, 퀴놀린 혼합물, 검정고무 혼합물, p-3차 부틸 페놀 포름알데히드 수지, 카르바 혼합물, 향료 혼합물, 쿼터르 늄 -15, 프리민, 포름알데히드. 또한 신체의 여러부분에 관한 접촉성 피부염 상태를 위한 표준 트레이가 있다. 예를들면 다리의 하지에 관한 피부염의 경우 : 네오마이신 술페이트, 퀴노포름, 벤조카인, 울 알코올, 페루의 발삼, 클로로퀴날돌, 파라벤스(혼합물), 무수성 유세린, 콜로포니.

이같이 소위“표준 알레르겐”이라 불리우는 것은 대부분의 환자에게 사용된다. 또한 그외의 알레르겐이 특이적으로 환자의 시험계열내에 포함되어져 있는지를 결정키 위하여 가끔 환자의 임상적 연혁이 언급된다. 패취시험 방법에 이용할 수 있는 알레르겐 화합물로서는 2000개가 더 알려져 있다.

본 발명에 따르면, 시험물질은 상기 물질이 미세화된 형태로 임의로 존재하는 균일한 유연고체상에 혼입된다. 필름면내 입자크기는 100μm 이하 예를들면 50μm 이하이다. 필름면의 오른쪽각에서, 입자크기는 10μm 이하, 예를들면 5μm 이하이다.

[매질]

매질은 필름형성 성질을 가지는 물질들중에서 선택되어질 수 있다. 보통 예를들어 물같은 휘발성 액체와 함께, 선택된 시험물질이 용해상태, 결정화 상태, 미세화 상태, 유상화 상태 또는 분산상태로 균일하게 분포되어질 수 있는 결합형 유상액 또는 겔을 제공하는 중합체이다. 그러나 본 발명의 대부분 실제 구현에서, 이 중합효소는 분산시 이것의 겔이나 유상액이 필름 형성을 위해 건조될 수 있는 것으로 선택된다. 매질는 사용시 습기를 흡수하기 위해 친수성을 가지고 있어야 한다.

매질의 친수성 성질을 나타내는 여러 특성을 나타내는 매질에 대한 정보는 안내서와 생산자로부터 입수할 수 있다. 예를들어 [참고, Encyclopedia of Polymer Science and Technology, Plastics, Rubbers, Resins, Fibers ; John Wiley & Sons Inc., Vol 6 pp. 778-779(1967)]. 적합한 중합체는 0.5%를 넘는 바람직하게는 1%를 넘는 수분흡수치를 (24시간) 가지는 것중에서 발견되어질 수 있다(ASTM D 570.63, American Standard Type Methods에 따라 측정함). 그래서 본원의 필름-형성중합체는 바람직하게 다중극성 구조들, 예를들면 카르복실 및/또는 에스테르류(폴리(메트)아크릴레이트같은), 아미드류(폴리(메트)아크릴아미드와 폴리아미드같은), 에테르류(고급 폴리에티렌- 및 폴리프로피렌 글리콜같은), 완전 알킬화된 폴리사카리드(예를들면, 완전 메틸화된 셀룰로오스 등.), 알코올류(예를들면, 폴리비닐알코올과 예를들어 각기 히드록시프로필 셀룰로오스와 메틸셀룰로오스처럼 히드록시 알킬화되고 부분적으로 알킬화된 형태같이 임의로 유도된 형태인 전분같은 다당류)를 포함하는 중합체 중에서 선택된다. 중합체의 친수성 정도를 위한 결정적 요인은 극성 기의 함량이다. 그래서 예를들면, 폴리프로피렌, 폴리스티렌등 같은 중합체는 수분흡수능력이 실질적으로 하찮은 반면, 많은 근접한 극성구조를 갖는 중합체는 현저한 흡착치를 가지며 본 발명과 관련해서 보다 적합하다. (필름-형성 다당류들, 폴리비닐알코올들 등.) 일반적으로 자연상에 존재하는 중합체(생체중합체)를 기초로 하는 둔 필름-형성 중합체는 충분한 친수성을 소유하고 있다.

각 경우에서 매질의 정확한 선택은 그중에서도 시험물질과 사용된 필름 운반체에 따라 좌우될 수 있다. 시험물질은 균일하게 매질에 분포되어야 한다. 매질와 필름 운반체는 상호간에 부착성을 가지는 것들로 선택되어야 한다. 친수성 시험물질(예를들면, 물, 에탄올, 메탄올 같은 극성 휘발용매에 용해되는 물질)은, 소수성 시험물질을 사용하는 경우, 친수성만이 아니라 부가적으로 어느 정도 친유성 성질을 갖는 매질을 필요로 하는 것과 비교하여 보통 보다 높은 물흡착을 할 수 있는 매질을 필요로 한다. 소수성 시험물질로서는 콜타르, 발삼 및 다수의 항료를 언급할 수 있다. 출발점 농도에 대하여 시험물질의 화학구조를 고려한 다음 몇몇 간단한 시험을 수행하여, 제조업자는 각 개개의 경우에 가장 적합한 매질을 발견할 수 있다. 금속염과 친수성 시험물질의 경우, 극성 휘발용매, 바람직하게는 물, 에탄올, 메탄올 등 또는 이것들의 균질 혼합물과 함께 필름을 형성할 수 있는 필름-형성 중합체를 선택하는 것은 필수적으로 알아야 한다. 이런 유형의 시험물질의 경우, 적합한 중합체는 필름-형성 다당류, 예를들면 알킬화되거나 히드록시알킬화된 셀룰로오스, 중에서 선택된다. 그러한 매질중 하나는 부분 메틸화된 셀룰로오스로서, 이것은 매우 우수한 필름-형성 성질을 가지며 사람 피부에 무자극성이라는 것외에, 매우 우수한 친수성-소수성 균형을 갖는다.

매질은 상기 언급한 중합체의 혼합물로 이루어질 수 있다 ; 다른 말로, 매질은 적어도 하나의 중합체를 포함한다. 여기에서 요구되는 것은, 혼합물이 예를들어 외피시험의 경우에서와 같이 폐색적으로 적용될 때 부풀어질 수 있는 필름을 제공할 수 있어야 한다는 것이다.

출원시점에서, 본 발명의 가장 좋은 구현은, 실시예 2와 3에 따라서 각각 메틸화되고 히드록시프로필화된 셀룰로오스를 사용하는 것으로 생각되었다.

매질을 선택할 때 생각하여야 할 중요한 점은, 매질이 약학적으로 허용가능하고, 피부에 비자극적이고 필름 운반체에 대해 불활성이어야 한다는 것과 실질적 범위에서 시험물질의 알레르겐성 및/또는 자극성질을 변화시키지 않아야 한다는 것이다.

액체가 만약 사용한 시험물질의 운반체의 파괴없이, 필름에 남아있는 온도에서 증발할 수 있다면 이를“휘발성”이라 말한다. 일반적으로 실내온도에서 상대적으로 높은 증기압을 가지는 액체를 사용하는 것은 가능한다.

[부착포]

필름 운반체는 실질적으로 습기와 물에 비침투성일 수 있으나 절대적으로 필수적이진 않다. 필름 운반체는 피부의 자극을 일으키는 성분을 포함하지 않아야 한다. 본 발명과 관련하여 적합한 여러물질은 많은 제조업체에 의해 시판 되고 있다. 예를들면 플라스틱 종이 (Reynolds plastic-coated freezer paper, Reynolds Metal Co., Richmond, Virginia), Saran

'브릴리안트'종이, Saran

'무광택'종이 (Dow Chemi cal Co., Midland, Michigan), 소수성 플라스틱 필름(예를들면 폴리에스테르/ Mylar

/)과 알루미늄 호일, 필름 운반체 물질의 선택은 본 발명에 그리 중요하지 않다 ; 상기 언급한 일반적 개요를 단순히 따름으로써 제조업자들은 주어진 물질이 응시한 목적에 적합한지 아닌지의 여부를 결정할 수 있을 것이다. 만약 습기-침투성 필름 운반체가 선택된 경우, 흡수하에서 적용 되어질 수 있도록 양을 취하는 것이 중요하다.

[시험패취의 제조]

제조과정중, 얻어진 결과를 위해 가장 중요한 두가지 단계가 있다.

(1) 시험 알레르겐은 필름-형성 재료에 균일하게 분포해야 한다.

(2) 필름 운반체는 균일한 두께의 필름으로 재생적으로 피복되어야 한다.

만약 매질이 특성면에서 지나치게 소수성인 필름 운반체위에 사용되도록 선택된 경우 매질로 운반체를 균일하게 피복시키는 것은 어렵다고 밝혀질 수 있다. 그러한 경우, 운반체는 보다 친수성으로 만들기 위해서처리될 수 있다. 따라서 예를들어, 폴리에스테르 필름은 전기장에서 단시간 처리(예. 코로나 방전처리)할수 있고 폴리에티렌 필름은 극성구조가 도입되도록 부분적으로 산화시킬 수 있다.

필름을 생산하기 위한 최근 잘 알려진 방법에 의하면, 시험물질은 휘발성 액체에 용해되거나 굳혀진 필름-형성 중합체(매질)에 부가한다. 만약 시험물질이 액체에 용해된다면 중합체를 포함하는 혼합물에 직접부가한다. 만약 시험물질이 불용성이라면, 혼합물에 미세하게 분포된 상태로 균일하게 분산하거나 유화시킬수 있다. 이같은 각 경우에서 양자택일로서, 시험물질은 겔에 존재하는 액체와 섞일 수 있는 소량의 휘발성액체에 미리 분산시킬 수 있다. 필름 운반체는 균일한 층의 겔로 피복한 뒤 건조시킨 다음 이 물질은 적정수의 패취로 절단할 수 있는데, 후자는 모양과 크기(면적)가 같은 것이 바람직하다.

필름면에 사각 또는 둥그런 가장자리로 형성된 피복 패취를 갖는 것이 유지하다. 건조된 필름은 겔을 피복하는 형태에 따라 예를들어 0.2, 0.1, 0.05, 또는 0.01mm의 두께를 가질 수 있다. 패취의 면적은 0.2-4㎠일 수 있다. 필름 단위 면적당 필름에 있는 시험물질의 양은 알레르겐의 종류에 따라서 변할 수 있다. 몇몇 알레르겐은 다른것 보다 잠재성이 있다 ; 그래서 제조업자는 단위 면적당 적합한 유효량을 알기 위해서 반복된 시험을 수행해야 할 것이다. 진정 시험에 있어서, 본 발명과 관련하여 단위 면적당 필요량은, 생물 이용성이 개선되었으므로 폐쇄적 기술작업에 필요한 것보다 적은 양으로 기대될 수 있다는 것을 상기해야 하지만, 일반적인 지침치는 경험적으로 흡수기술에 적합한 것으로 이전에 발견된 값으로부터 유래될 수있다.“단위 면적당 적합한 양”이라는 것은, 본 시험에서 사용했을때 대부분의 감수성 또는 정상 개체에서 알레르기성 또는 자극적 반응을 일으킬 수 있는 시험물질의 양을 뜻한다. 일반적으로, 시험물질의 양은 10mg/㎠ 이하, 예를들면 1mg/㎠ 이하이다. 니켈의 경우에서 효과적인 양은 0.5μmol/㎠이다(진정시험,매질 : 메틸 셀룰로오스).

몇몇 경우 소위 환자의 역치를 결정하는 것이 바람직할 수 있다. 이 목적을 위하여 같은 항원의 단위 면적당 다른 양을 갖는 패취가 준비된다.

그때 패취는 각 패취주변에 적어도 약 5mm, 바람직하게는 적어도 약 1cm 돌출한 가장자리를 제공하는 압력에 민감한 접착종이에 놓여진다(각 패취의 필름-피복면은 접촉 종이물질과 직면하는 것을 피하기 위해서 놓여진다). 패취는 그들간에 10cm 이하의 간격으로 분리되어 유지된다. 그들의 모양은 본 발명과 관련해서 중요하지 않다. 따라서 원칙적으로, 패취모양의 다른 형태와 동등한 스트립을 사용하는 것은 가능하다.

접착성 물질은 만약 필름 운반체가 불침투성이라면 습기가 침투될 수 있으며, 피부에 잘 적용되도록 자연성이어야 한다.

시험과정을 촉진시키기 위하여, 한 보통 조각의 접착물질에 다수의 패취를 미리 배열시키는 것은 가능하다. 개개의 패취는 각기 다른 알레르겐 및/또는 단위 면적당 다른 양으로 같은 알레르겐을 제공한다. 패취의 선배열로서 다수의 알레르겐에 대해 동시에 단위 면적당 다른 양의 동일 알레르겐에 대해 각각 환자를 시험할 시험 스트립이 얻어진다. 각 스트립은 표준트레이에 상응한 패취를 포함할 수 있는데, 각 스트립은 25 이하, 바람직하게는 12패취이하를 포함할 수 있다.

따라서, 본 발명에 따른 시험 스트립은 그안에 혼입된 시험물질을 갖는 필름으로 피복된 적어도 한 부분(=패취)를 그 자체의 접착면위에 갖는 접착물질(“자체-접착”, 감압-접착물질)의 스트립으로 구성되어 있다. 스트립은 사용전에 즉시 벗기는 보호종이로 덮혀질 수 있다.

선적과 판매를 위해서, 보호종이로 싸여진 스트립은, 필요에 따라, 공기, 수분, 습기 및 빛의 침입에 대하여 밀봉하기 위하여 가스상태의 질소대기같은 불활성 대기중에 포장될 수 있다.

[시험과정]

본 과정은 본 발명에 따른 패취를 사용하여 공지의 방법으로 수행한다. 그래서 하나 또는 다수의 진정 시험 스트립(상기 제시한 접착성 물질에 적용한 패취)은 시험부위의 피부에 필름이 접촉할 수 있는 것 같은 방법으로 환자의 피부에 놓은후, 고정된 위치에서 피부에 대하여 스트립을 밀폐적으로 압착한다.

본 발명은 몇몇 비제한적인 실시예에 의하여 설명될 것이다.

예비시험으로서, 한 모델물질(메틸렌 블루)을 셀룰로오스 및 폴리에티렌 글리콜을 기초로하는 여러 필름-형성 매질에 혼입한 후, 이것을 필름 운반체에 적용시키고 본 발명에 따라 사용한다. 이렇게 얻어진 필름흔적은 모델물질의 균일한 분포를 나타내며 따라서 이는, 적합한 필름 운반체를 가진 매질와 적합한 시험물질이 본 발명의 방법의 실제에서 유용함을 나타낸다. 메틸 셀룰로오스가 훨씬 좋은 필름-형성성질을 가진다는 것이 발견되었다 ; 그러므로 셀룰로오스 유도체를 사용하여 부가적인 실험을 수행하였다.

[실시예 2]

[시험재료]

염화코발트 1%, 니켈술페이트 5%, 와셀린중의 포타슘 디크로메이트 0.5%(Hermal-Chemie, Reinbekb. Hamburg, W. Germany). Finn Chambers

(Ep

icon Oy, Finland) on Scanpor

. Scanpor

(Norgesplaster A/S, Norway) .

화학물질 :

염화코발트 pro analysi, 염화니켈 pro analysi, 니켈 술페이트 pro analysi, 포타슘 디크로메이트 pro analysi, 소듐 히드록시 pro analysi, 디메틸글리옥심, 결정체( Sigma Chemical Co., St. Louis, USA)

도데실 소듐 술페이트(=소듐 라우릴 술페이트) 공업용, (Matheson Coleman & Bell, Norwood,Ohio, USA) .

Methocel

A 4M(메틸 셀룰로오스) 27-31% 메틸화정도/글리코오스단위 ; Dow Chemical Co.,Midland, Mich., USA).

백색 와셀린(Hermal-Chemie, Reinbek b. Hamburg, W. Germany)

플라스틱 호일들 및 플라스틱-피부종이들(필름 운반체) : 레이놀드 플라스틱-피복 동결종이 (Raynolds Metal Co., Richmond, Virginia, USA).

폴리에스테르 0.03mm(Mylar

).

Saran

brilliant 35 CIS/10 SARAN/15 PE, and dull paper/15 PE(Dow Chemical Co., Midland,Mich., USA) .

니켈에 과민성인 6명의 지원자.

[시험재료의 준비]

Methocel

겔(3% w/v)은 뜨거운물 방법(Methocel

을 끓는 물에서 교반한다 ; 그 결과로 생기는 혼합물은 냉각시 겔을 형성한다.)에 의해 준비한다. 결정체 또는 물에 용해된 금속염들을 겔에 혼입한다. 물을 최종농도 2.4% w/v의 Methocel

에 첨가한다. 그다음 겔은 그 염들이 균일하게 분산되고 녹을때까지 자기 교반기로 철저히 교반한다. 실시에 앞서 겔은 기포를 없애도록 원심분리한다.

상기 겔은 다음 금속염 농도로 준비한다.

희석단계(몰/리터) 0.8, 0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.025, 0.013, 0.0063, 0.0031, 0.0016, 0.00078, 0.00039, 0.00020, 0.00010 및 0.000049.

NiCl : 0.8-0.000049

NiSO : 0.2-0.000049

CoCl : 0.2-0.0031

K Cr O : 0.1-0.0031

도데실 소듐 술페이트(중량%) 4.0, 2.0, 1.0 및 0.5.

그다음, 겔을 에탄올로 씻은 필름 운반체 위에 일정한 두께(약 0.1mm)로 펴바른다. 겔층은 실내온도에서 마르도록 놓아둔 후(약 0.01mm의 필름두께가 제공됨) 그리고 날카로운 칼로, 정방형의 패취로 자른다.

비교목적용 희석 계열의 니켈 술페이트는, 표준 패취 시험물질을 페트롤라툼과 혼합시켜 12번째희석단계(5%, 2.5%, 1.3%...등, 12번째 단계로 0.0025% 이하)로 준비된다.

[니켈분석]

상기 제시한 다른 필름 운반체 위에 0.1M 니켈 술페이트 필름을 갖는 패취(1.0×1.0cm)는 10번의 연속으로 분석한다. 그것들은 8ml의 탈이온수에 넣고 12ml의 지시용액(탈이온수중의 1.0N 수산화나트륨과 에탄올중의 1% 디메틸글리옥심의 동일부분) 첨가전에 1분간 초음파에 의한 분해를 한다. 샘플은 4시간후 분광광도계로 470nm에서 측정한다.

[패취시험방법]

와셀린/니켈 술페이트와 상기 전술한 패취를 가진 시험재료는 각 개체의 등의 윗부분에 도포하는데 이것은 각기 Scanpor

테이프상의 Finn Chambers

또는 Scan por

테이프만의 도움으로 행해지며, 48시간동안 고정되게 놓아둔다. 판독은 48시간 및 72시간에 행해진다.

[결과]

[니켈분석]

0.1M 니켈 술페이트 겔을 갖는 4개의 다른 시험종이 1.0×1.0cm내 니켈의 양과 와셀린중의 5% 니켈 술페이트를 갖는 9-16mg 표본내 니켈의 양.

[표 1]

니켈분석의 이같은 결과는, 본 발명에 따른 시험물질이 선기술에서 얻을 수 있었던 것보다 커다란 정확한 조제를 줄 수 있다는 것을 보여준다.

현미경 검사에 의해 검출될 수 있는 결정은 모두 필름면에서 약 90μm 이하였으며 모두 필름면에 수직인면에서 약 10μm 이하였다.

[패취시험]

니켈에 과민성이 있는 6명의 각개인들(또한 그들중의 한 사람은 코발트에 과민성 이었음)은 계열희석된와 셀린중의 니켈 술페이트와 니켈 술페이트, 염화 니켈, 염화 코발트, 포타슘 디크로메이트, 소듐 라우릴술페이트가 포함된 본 발명에 따른 패취를 가지고 패취시험을 했다. 본 발명에 따른 패취는 1㎠ 크기였다. 3명은 부가적으로 폴리에스테르와 Saran

의 패취상의 니켈 술페이트로 시험했다(각 1㎠). 2명은 플라스틱-피복 종이상의 니켈 술페이트 0.7×0.7cm(0.5㎠) 패취를 가지고 시험했다.

본 발명에 따른 시험방법은 휜 챔버 (Finn Chambers

)를 사용한 시험보다 크고 균일한 분포의 시험반응을 초래했다 ; 이것은 패취가 많은 희석형태의 알레르겐을 포함했을 경우에서 가장 명백하게 보여질 수 있었다. 일반적으로 와셀린중의 5% 니켈 술페이트와의 시험반응의 강도는 0.05M 니켈 술페이트 겔(0.3μmolNi/㎠)을 포함하는 본 발명의 패취에 대응한다. 0.7×0.7cm 패취는, 1.0×1.0cm 패취를 한 것과 같은반응강도와 같은 희석계열의 종말점을 나타내지만 평가하기는 보다 어렵다. 폴리에스테르와 사란(Saran

)상의 시험계열중의 반응은 종이/플라스틱 계열의 시험반응과 동일하다. 코발트에 과민성인 사람은 와셀린중의 1% 염화코발트로 시험했을 때 및 플라스틱이 피복된 종이상의 0.013M 염화코발트의 겔로 시험했을 때와 동일한 강도로 반응했다. 0.2 및 0.1M 염화코발트의 겔과 포타슘 디크로메이트를 이용한 본 발명의 방법은 와셀린중의 5-10%의 이들염으로 얻어진 것과 강도면에서 동일한 자극반응을 일으킨다(시험은 정상인에 대해 수행했다).

본 발명에 따라서 필름에 함입된 피부자극 소듐 라우릴 술페이트(0.5-4%) 수용액중의 같은 물질(0.25-2%)을 사용한 통상의 패취시험에서 얻어진 것과 일치하는 자극성 반응을 나타낸다.

진정패취가 시험대상자에게 부착시킨 그 위치에 남아있는 동안 필름이 부풀러지는 것이 관찰되었다. 이것은 필름-피부접촉을 증가시키며, 아마도 피부안으로 시험물질의 침투를 촉진시킬 것이다. 즉 수용성물질은 피부의 수용층에 보다 쉽게 접근함을 발견할 수 있으며 지용성 물질은 피부의 지질층안으로 보다 쉽게 진행되는 것을 발견할 수 있다. 실시예는 고체, 부드러운 필름이 매질로서 사용되어질 수 있다는 것을 보인다.

필름 Methocel

에 섞일 수 있고 임상면에서 성공적으로 평가된 다른 시험물질 중에서, 다음의 네오마이신 술페이트, 에틸렌디아민 히드로클로라이드, 및 페루의 발삼을 언급할 수 있다.

[실시예 3]

실시예 2와 유사한 방법으로, 여러 시험물질이 포함된 Klucel

겔(미합중국의 Hercules Inc.사의 히드록시 프로필화된 셀룰로오스)을 준비하고 필름 운반체에 도포한 후, 건조시킨다. 사용한 용매는 물과 에탄올로 이루어진 다양한 혼합물로 각 경우의 에탄올 농도는 사용된 특별한 시험물질을 용해시키기에 충분한 농도이다.

[표 2]

필름 운반체는, 필름의 보다 우수한 접착을 위해 코로나 방전처리하여 친수성이 되어진 폴리에스테르 필름이다. 건조된 필름을 현미경 관찰했을 때 결정형을 관찰할 수 없었다. 피부에 대해 얻어진 시험결과는 쉽게 판독된다.

Klucel

의 필름에 섞일 수 있으며 임상면에서 성공적으로 평가된 다른 시험물질 중에서 니켈 술페이트, 포타슘 디크로메이트, 카인 혼합물, 페루의 발삼, 에티렌디아민 히드로크로리드, 염화 코발트, 티우람 혼합물과 에폭시 수지가 제시된다.

그 물질중에서 시험된 페루의 발삼 및 향료혼합물은 휘발성 성분을 포함한다.

[실시예 4]

물에 슬러리화된(10% w/v) 미분화 히드로코르티손 아세테이트(탁월한 친유성 성질 성분의 예)를 뜨거운 물 방법 (hot water method)에 따라 준비된 Methocel

겔에 첨가했다. 그다음, 필름형태의 겔을 프라스틱-피복 종이에다 도포한다(실시예 2에 다음) . 현미경 검사는 히드로코르티손 아세테이트가 필름에 일정하게 분포되어 있음을 보여준다.

Claims (9)

1. 접촉성 알레르기 시험물질이 포함된 1개 이상의 패취를 구비하고 있고 접촉성 알레르기를 검출하기 위해 외피의 폐색흡수시험에 사용하기 위한 시험스트립에 있어서, 시험물질은 스트립의 1개 이상의 패취상에 필름형태로 제형화된 매질에 혼입되어 균일하게 분포하고 있고, 필름-형성 중합체를 필름-형성 물질로서 포함하고 있는 상기 매질은 균일한 두께의 필름으로 재생적으로 피복되어 있으며, 시험스트립의 사용시에 시험대상이 되는 피부로부터 습기를 흡수할 수 있도록 되어 있는 것을 특징으로 하는 시험스크립.
2. 제1항에 있어서, 시험용 스트립에는 시험용 물질이 혼입된 복수개의 패취가 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 시험스트립.
3. 제1항에 있어서, 패취중 1개 이상의 면적의 범위가 0.2 내지 4㎠인 것을 특징으로 하는 시험스트립.
4. 제1항에 있어서, 시험용 물질이 혼입된 필름의 두께가 0.25mm 이하인 것을 특징으로 하는 시험스트립.
5. 제1항에 있어서, 시험용 물질이 혼입된 필름의 두께가 0.10mm 이하인 것을 특징으로 하는 시험스트립.
6. 제1항에 있어서, 시험용 물질이 혼입된 매질이 1가지 이상의 친수성 필름-형성 중합체로 이루어져 있는 것을 특징으로 하는 시험스트립.
7. 제1항 또는 제6항에 있어서, 복수개 패취중의 1개 이상에 존재하는 필름-형성 중합체가 다수개의 알코올기를 가지고 있거나 상기 중합체의 친수성 필름-형성 유도체인 것을 특징으로 하는 시험스트립.
8. 제2항에 있어서, 복수개 패취중의 1개 이상에 존재하는 접촉성 알레르기 시험용 물질이 금속염인 것을 특징으로 하는 시험스트립.
9. 제2항에 있어서, 복수개 패취중의 1개 이상에 존재하는 필름-형성 중합체가 메틸화 셀룰로오스와 히드록시프로필화 셀룰로오스 그리고 이것들의 혼합물 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 시험스트립.