JPS62500305A - 過敏症テスト手段 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ｉｓコｊ二？≦乙−辷一」ＬＪ父 本発明は、閉鎖性上皮テスト　（ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ　ｅｐｉｃｕｔａｎｅＯｕ ｓｔｅｓｔｓ）　（バッチテスト）を実施するための新規な手段に関する。

この種のテストは、ある特定の物質（アレルゲン）に対する接触アレルギー（接 触感作）を検知するために、或いは物質のアレルギー性および／または刺激性を テストするために使用されている。簡潔のために、本発明方法を′°真（ＴＲＵ Ｅ）テスト′と呼称する。

゛バッチテスト”なる用語は、当初テストを実ＩＭ′？ｒ′るために被検物質を 浸漬させた布製もしくは紙製バッチが使用された事実に由来する。何年もの間各 種バッチが使用されてきた。本発明との関連において、バッチなる用語はテスト 物質を担持したエリア（ａｒｅａｌを主に指すものとする。

上皮テスト方法では、アレルギー性もしくは刺激性を有するか疑わしい物質を成 る期間閉鎖状態下で正常な皮膚に適用でる。

この適用は、適当な処方および濃度のテスト物質を用いてコントロールしながら 行われる。接触アレルギーの症例ではテストエリアでアレルギー湿疹が生ずる。

刺激性物質があると、同様の性質を有する刺激性湿疹反応が生ずる（Ｈａｎｕａ ｌ　ｏｆ　ｃｏｎｔａｃｔＤｅｒｉａｔｉｔｉｓ：　Ｆｒｅｇａｒｔ　Ｓ、第２ 版、　Ｈｕｎｋｓｇａａｒｄ、　−１ペンハーゲン／１９８１１０．７ｌ−７６ ）。通常テスト物質はペトロラタムあるいは水のような適当なビヒクル中に処方 されている。バッチテスト法における゛バツチパは従来はアルミニウム箔の小カ ップが一般的であり、テスｌ−を実施するときこのカップに適当に処方されたテ スト物質を充填し、テストが閉鎖状態で実施されるように適用される。しばしば 複数のバッチが脱着自在な保護ホイルを被覆した粘着テープに貼着される。

バッチテストで通常使用されている方法および材料は安全性の点で不満足である 。このことは使用された材料および方法が金属塩のときにとくにあてはまる。従 って改良が望まれている。

ｃｐ、にａｌｉｍｏ、　Ｋ、ら、Ｃｏｎｔａｃｔ　Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ　１０ （１９８４）、　ｐ、２５−２９：５Ｃｔｌｌｌｉｄｔ　Ｈ，ら、Ｃｏｎｔａｃ ｔ　Ｄｅｒｉａｔｉｔｓ　６（１９８０）、　ｐ、９１−９４゜アレルギーテス ト方法では刺激反応が一般的に生じ、特にテスト物質を刺激閾値に近い濃度で使 用したときには一般的である。この原因の少なくとも一部は、テスト物質が皮膚 接触エリアに均一に分布されないことにある。標準のバッチテスト材料を顕微鏡 検査すると、推奨されるペテロラタムビヒクル中に挿入されたアレルゲンの多く は様々な大きさの小滴あるいは粒子の形状で不均一に分散されていることが知見 された（　Ｖａｎｎｅｓｔｒｅ　Ｄ、ら、Ｃｏｎｔａｃｔ　Ｄｅｒｍａｔｉｔｉ ｓ　６（１９８０）、　ｐ、１９７−２０３ＨＦｏｓｓｅｒｅａｕ　Ｊ　ら、０ ｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｔａｃｔ　Ｄｅｒｔｉｔｉｓ、　Ｈｕｎｋｓｇ ａａｒｄｓ、　Ｄベンハーゲン／　１９８２／Ｄ、　４５）。これら封入体の最 大直径は０．５履以上である。

こうした粒子が汗で溶解すると局在的に高濃度のアレルゲンが生じ、毛包の周囲 に孔炎症（”ｐｏｒｉｔｉｓ　”　）が生ずる。別の欠点としては、標準バッチ テストで適用されるテスト物質のｍが６段階（ｓｉｘｔｈ−ｐｏｖｅｒ　ｒａｎ ｇｅ）でしか変更されないことである（Ｆｉｓｈｅｒ　Ｔ、ら、Ｃｏｎｔａｃｔ 　Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ　＋／１９８４／ｐ、２８５−８７）。上記から、バッ チテスト方法で使用されるべき材料の薬理学的特性の改善が高く望まれているこ とは明らかである。

ＴＲＩＪＥテストは上記した問題の多くを解決し、テスト物質の正確な用量、均 質な表面分布および高い生体効率（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔＶ）が得られ る。従って、ＴＲＵＥテストは、ペトロラタムをビヒクルとして使用したときに しばしば生ずる低い生体効率、不正確な用品および不均一な表面分布の問題の解 決手段を提供する。

本発明は閉鎖性バッチテストに適用可能な方法を提供する。

前記方法では、（ａ）テスト物質の所要量を最小にしかつ川伝精度（ｄｏｓａｇ ｅ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）を高めル（用ｆｆｉ／ｌｉｉ位面ＦＡ）：（ｂ）貯蔵 安定なテスト製剤を製造しうる：及び（Ｃ）各々が複数のテスト物質を含む予調 製テストストリップを相互クロス汚染の危険を少くして作成することができる。

ＴＲＵＥテストを各種非閉鎖性技法と混同してはならないことを指摘したい。閉 鎖性技法では、包囲されたスペースでテスト物質と皮膚とを接触させる。このこ とは、空気および湿気を除外し、テスト皮膚エリアからの水分く汗）がテスト物 質と共に封入されることを意味する。このことを達成するために、シーリング材 料例えばアルミニウム箔もしくは不透過性プラスチックホイルが使用される。こ の閉鎖されたスペース手法により、閉鎖性技術を容易に標準化することができ、 信頼できる結果が得られることが証明された（Ｐｉｒｉｌｉ　Ｖ、　Ｃｏｎｔａ ｃｔ　Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ　１／１９７５／１１．４８−５２）。非閉鎖性技 法では以前はフィルム形成性ポリマーが使用されてきた（取ｌ５Ｎ０．３１８８ ８／ｐｒＯＶ　Ａ３５ｇ／Ｃｅｎｔｒａｌ　ｐａｔｅｎｔｓ　Ｉｎｄｅｘ　５ｅ ｃｔｒｏｎ　Ｂ、　ＦａｒｌｌｄＯＣ，ＤＱｒＷｅｎｔ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏ ｎｓ　Ｌｔｄ。

ロンドン１９６８）。

本発明では、上記した問題を、実質的に水および湿気を透過せずかつテスト物質 が均質に分布される薄くて柔軟なフィルムから成るビヒクル中に配合されたテス ト物質を含むバッチを使用することにより解決する。このバッチを以後“フィル ムキャリＡ７”と称する。″柔軟な（ｓｕｌ）ｐｌｅ）”なる用語は、フィルム を’Ｔ”　ＲＩＪ　Ｅテストで使用したどき破けるはどもる（　（ｂｒｉｔｔｌ ｅ）ないことを意味する。用時にフィルムは、閉鎖状態下で皮膚に適用しながら 皮膚からの排出物を吸収しうる稈親水性でありかつ十分に乾燥していなければな らない。

正確に゛フィルム″とみなされるために層の厚さは０．２５Ｍ（００１インチ） 未満でなければならない。Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ　ｏｆＰｏｌ’ｙｍｅｒ　 ５ｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、　Ｐｌａｓｔｉｃｓ、　Ｒｅ ５ｉｎｓ、Ｒｕｂｂｅｒｓ。

Ｆｉｂｅｒｓ、　Ｖｏｌ、　６．　ｐ、７６４（１９６７）；　Ｊｏｎｎ　Ｗｉ ｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ　Ｉｎｃ、、　ＵＳＡ参照。従って本発明の好ましい具体 例では、０．２５ｍ未満、好ましくは約０１ｔｙｓ未満例えば約０．０５１１１ １１１未満のｊｌさを右するフィルムを使用する。これらの厚さは、皮膚に適用 する前、即ち皮膚から何も吸収されていない段階以前のフィルムについて示した 値である。各バッチのフィルムエリアは部分エリアに区分されうる。フィルムエ リアが全面に密着していることが望ましい。

テスト物質 本発明はまず接触アレルギーの検知に有用であり、従ってデス１−物質は、アレ ルギーを起こすか或いは起こす疑いのあるアレルゲンの中から主に選択される。

刺激性物質も使用されうる。

潜在的に、物質が固体か液体か、有礪物質か無機物質、金属塩か非金属ｊｎか、 （例えば水に）可溶性か不溶性かに拘らず、全ゆるかつ任意の種類の接触アレル ゲンおよび刺激性物質が本発明で使用されうる。

パッヂテストを容易に実施するために、各種地域（ｇｅｏｒａｐｈｉｃａｌ　ｒ ｅａｉｏｎｓ）で最も共通のアレルゲンを各地域毎に選択した。

従って北アメリカでは、八１ｅｒｉｃａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｄｅｒｍａ ｔｏｌｏｇｙにより１９８４年にまとめられた標準トレー（″ｔｒａｙ”　）　 （リス１〜）があり、この中には次の物質が列挙されている。ペンシカイン（５ ％べ１〜ロラタム）、イミダゾリジニルウレア（２％水）、チウラムミックス（ １％ペトロラタム）、シンナムアルコール（５％ペトロラタム）、ジブカイン（ １％ペトロラタム〉、メルカプ１〜ベンゾデアゾール（１％ペトロラタム）、硫 酸ネオマイシン（２０％ペトロラタム）、ｐ−フェニレンジアミン（１％ペトロ ラタム）。

テトラカイン（１％ペトロラタム）、ｐ−ｔｅｒｔ、ブチルフェノールホルムア ルデヒドレジン（１χペトロラタム）、チオメルサール（０，１％ペトロラタム ）、ホルムアルデヒド（ハ水）、ヒドロキシシトロネラール（４％ペトロラタム ）、カルバ・ミックス（３蒐ペトロラタム）、シンナムアルデヒド（２％ペトロ ラタム）。

ロジン（松脂）（２０％ペトロラタム）、ＰＰＤミックス（黒色ラバーミックス ）（０，６％ペトロラタム）、羊毛（Ｗｏｏｌ）　（ラノリン）アルコール（３ ０ｘペトロラタム）、シクロメチ力イン（１％ぺ１−ロラタム）、オイゲノール （４％ペトロラタム）、クォータニウム−１５（２％ペトロラタム）、イソオイ ゲノール（４％ペトロラタム）、メルカプト・ミックス（１％ペトロラタム）、 エポキシ樹脂〈１％べ１〜ロラタム）、徂クロム酸カリウム（０，５％ペトロラ タム）、カイン・ミックス・レス・ペンシカイン（３％ペトロラタム）、エチレ ンジアミンニ塩酸塩（１％ペトロラタム）、ベンゾイルペルオキサイド（１％ペ トロラタム）、ペルーバルサム（２５％ペトロラタム）、クォータニウム−１５ 〈２％水）、相こけ（ａｂｓ、　ｍｏｕｓｓｃ　ｄｅ　ｃｈｅｎｅ）　（５％へ １−ロラタム）、硫酸ニッケル（２，５％ペトロラタム）。ヨーロッパの１９８ ４年１１１奨トレー（リスト）には次の物質が含まれている（但しここでは簡潔 のために濃度およびビヒクルを省略した）。硫酸ネオマイシン、重クロム酸カリ ウム、羊毛アルコール、メルカプト・ミックス、ベンシカイン、ｌａ酸ニッケル 、エポキシ樹脂、エチレンジアミンニ塩ＩＳ！２塩、塩化コバルト、ペルーバル サム、チウラム・ミックス。

パラベン（ミックス）、ｐ−フエニレンジアミンニ塩酸塩、松脂、キノリン・ミ ックス、黒色ラバーミックス、ｐ−ｔｅｒｔ　ブチルフェノール・ホルムアルデ ヒドレジン芳香性物質（ｆｒａｇｒａｎｃｅ）ミックス、クォータニウム−１５ ，ブリミン，ホルムアルデヒド。種々の体部位における接触皮膚炎状態例えば下 肢部の皮膚炎用の標準トレーは次の通りである。硫酸ネオマイシン、キノホルム 、ベンシカイン、羊毛アルコール。

ペルーバルサム、クロロキナドール、パラベン（ミックス）。

無水ニーセリン、松脂。

これらのいわゆる“′標準アレルゲン”は多くの患者に対して使用される。彼／ 彼女のテストシリーズに特別に更にどんなアレルゲンを含めるかを決めるために 、患者の病歴もしばしば参照される。バッチテスト法用に興味がもたれているア レルゲンは更に約２０００ある。

本発明では、テスト物質が均質で柔軟な固体相中に組み込まれ、前記相中で物質 が所要により微粒子の形態であってもよい。

フィルム面の粒子サイズは１００＊未満、例えば５０−未満である。

フィルム面に対して直角では粒子サイズは１０ＩＩＩＲ未満、例えば５μｓ未満 でありうる。

ビヒクル ビヒクルはフィルム形成能を有する物質の中から選択される。

通常ビヒクルは、水の如き揮発性液体と一緒になってゲルモｔ。

くは融合性エマルジョンを形成し、その中に選択されたテスト物質が溶解．結晶 化，微粒子化，乳化あるい（よ分散状態で均一に分布しうるポリマーである。本 発明の最も実際的な具体例では、このポリマーは展開させたとき前記ゲルもしく はエマルジョンが乾燥によりフィルムを形成するように選択される。ビヒクルは 使用時に水分を吸収するように親水性でなければならない。

ビヒクルの親水性を示す各種特性に関する情報は、ハンドブックおよび製品から 提供されつる。例えば［ｎＣＹＣＩＯｌ）ｅｄｉａ　ｏｒＰｏｌｙｍｅｒ　５ｃ ｌｃｎｃｃ　ａｎｄ　ｒｃｃｈｎｏｌｏｇｙ、　Ｐｌａｓｔｉｃｓ、　１ｌｕｂ ｂｅｒｓ、Ｒｅ５ｉｎｓ。

ＦｉｌｌｅｒＳ；　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ　Ｉｎｃ、、　Ｖｏｌ 、６．　ｐ、７７８−７７９（１９６７）参照。（ＡＳＴ）ｌ　Ｄ５７０．６３ に準じて測定したとき）０．５％を超える、好ましくは１％を超える吸水量（２ ４時間）を有するポリマーが特に適当である。従って、本発明において意図され るフィルム形成性ポリマーは、極性基構造を複数含むポリマーの巾から選択され るのが好ましい。前記極性基構造としては例えばカルボキシルＪ’ｉ　Ｊ：び、 ／又はエステル基（ポリ（メタ）アクリレート等）。

アミド基（ポリ（メタ）アクリルアミドおよびポリアミド等）。

エーテル基〈高級ポリエチレン−およびポリプロピレングリコール等）、完全に アルキル化されたポリサッカライド（完全にメチル化されたセルロース等）、ア ルコール基（ポリビニルアルコールおよびポリ書ナッカライド等、例えば澱粉、 これは任意にヒドロキシアルキル化および部分アルキル化された形態の如ぎ誘導 体くヒドロキシプロピルセルロースやメチルセルロース等〉の形であってもよい 。ポリマーの親水度を決定する因子は極性基の含量である。従って、例えばポリ プロピレンやボリスヂレン等のポリマーは実質的に無視できる程度の吸水能しか 持たないが、近接して多くの極性構造を有するポリマー（フィルム形成性ポリサ ッカライド、ポリビニルアルコール等）は高い吸水量を示すので本発明により適 している。天然に存在するポリマーをベースとするフィルム形成性ポリマー（バ イオポリマー）は概して高い親水性を有する。

ビヒクルは各ケース毎に特に使用されるテスト物質およびフィルムキャリヤに依 存して正確に選択される。デス１〜物質はビヒクル中に均質に分散されなければ ならない。ビヒクルおよびフィルムキャリヤは互いに接着するように選択されな ければならない。親水性テスト物質（例えば水、エタノール、メタノールの如き 極性揮発性溶媒に可溶性の物質）では通常より多くの水を吸収しうるビヒクル（ より親水性のビヒクル）が必要とされる。これに対して疎水性テスト物質を使用 したときには単に親水性であるだけでなくある程度親油性のビヒクルが要求され る。疎水性テスト物質としては、コールタール、バルサムや多くの芳香性物質が 列挙されうる。まず最初にテスト物質の化学的構造を考え、次いで幾つかの簡単 なテストを行えば、検査技師は個々のケースで最も適当なビヒクルを見つけ出す ことができる。金属塩や親水性テスト物質の場合には、極性揮発性溶媒好ましく は水、エタノール、メタノール等或いはその均質混合物と組合せてフィルムを形 成しうるフィルム形成性ポリマーを選択することが必須であることに注目された い。上記した種類のテスト物質では、適当なポリマーはフィルム形成性ポリサッ カライド類例えばアルキル化もしくはヒドロキシアルキル化セル［１−スの中か ら選択される。前記ビヒクルが部分的にメチル化されたセルロースであってもよ く、このビヒクルは親水性−疎水性バランスが俺めて良好であることに加えて、 極めて良好なフィルム形成性を有しかつヒトの皮膚に対して非刺激性である。

ビヒクルは上記ポリマーの混合物から成るものであってもよい。即ち、ビヒクル 中に上記ポリマーが少なくとも１種含まれるものでもよい。しかしこの場合にも 、混合物は上皮テストのように閉鎖的に適用したとき膨潤しうるフィルムを形成 しうるちのでなければならない。

本願出願時本発明の最良の具体例は、実施例２および３のメチルセルロースやヒ ドロキルプロピル化セルロースを使用する例と考えられていた。

ビヒクルを選択するときに考慮しなければならない重要な点は、ビヒクルが薬理 学的に許容され、皮膚に対して非刺激性であってフィルムキレリヤに不活性でな ければならず、加えてテスト物質のアレルギー性および／又は刺激性を実質的に 変えるものであってはならないことである。

液体は、使用されるテスト物質がフィルム内に留まっている温度でキャリヤを壊 すことなく蒸発しうるときに゛″揮発性″であると言う。一般に、室温で比較的 高い蒸気圧を有する液体を使用することができる。

フィルムキャリヤ フィルムキャリＶは実質的に湿気および水を透過させないものがよいが、完全に そうである必要はない。フィルムキャリヤが、皮膚に刺激を与える物質を含んで いてはならない。本発明においで適当な材料が多くの会社から販売されている。

例えば、プラスチック塗装紙（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ　ｐｌａｓｔｉｃ−ｃｏａｔｅ ｄ　ｆｒｅｅｚｅｒ　ｐａｐｅｒ。

Ｒｅｙｎｏｌｄｓ　Ｈｃｔａｌ　Ｃｏ、、リッチモンド、バージニア　）　、５ ａｒａｎ＠゛ブリリアント″紙、５ａｒａｎ”　”）や消し紙（Ｄｏｗ　Ｃｈｅ ｍｉｃａｌｃｏ、、　Ｈｉｌｄｌａｎｄ、ミシガン）、疎水性プラスチックフィ ルム（例［Ｆ］ えばポリエステル／Ｈｙｌａｒ　）およびアルミニウム箔である。フィルムキャ リャは本発明に臨界的な方法で選択されるのではない。技師は上記した一般的な アラ１〜ラインに従って所与の材料が意図する目的に適しているか否かを簡単に 決定することができる。湿気透過性フィルムキャリヤを選択するときには、閉鎖 状態下で適用しうる手段を構じることが重要である。

テストパッチの製造 製造方法には２つの重要なステップがあり、良い結果を得るためには特に重要で ある。　（＋＞テストアレルゲンがフィルム形成性材わ１中に均一に分散されて いなければならない。■フィルムキャリヤは均一厚さのフィルムで再現可能に被 覆されていなければならない。親水性ビヒクルをかなり疎水性のフィルムキャリ ヤ上に使用すべく選択したときには、キャリヤをビヒクルで均一に被ｒＩＩプる ことはむずかしい。そのような場合には、キｔ７リヤを処理してより親水性にす ればよい。従って例えば、ポリニスデルフィルムを電場で短時間処理（例：コロ ナ放電処理）するか、或いはポリエチレンフィルムを部分的に酸化して極性構造 を導入ずればよい。

一般に良く知られたフィルムの製造方法では、揮発性液体中に溶解もしくはゲル 化したフィルム形成性ポリマー（ビヒクル）中にテスト物質を添加する。テスト 物質が液体に可溶性のどきには、ポリマーを含有する混合物中に直接添加しても よい。不溶性のときには、微細状態で混合物中に均質に分散あるいは乳化させれ ばよい。いずれの場合にも、ゲル中に存在する液体と混和性の揮発性液体の少量 中にデスｌ−物質を予め分散させておくこともできる。次いでフィルムキャリヤ を均一なゲル層で被覆し、乾燥させ、その後この材料を好ましくは同じ形状およ び１ナイズ（面積）の複数のパッチに裁断する。形成された被覆バッチのフィル ムサイドが斜めあるいは丸いエッチを有していることが好ましい。乾燥したフィ ルムの厚さは、被覆ゲルの種類に応じて例えば０．２．０．１．０．０５あるい は０．０１ｔｍでありうる。

パッチの面積は０．２−４　ｃｉである。フィルム中の（フィルムの単位面積あ たりの）デス１〜物質の遭はアレルゲンの種類に応じて変更される。アレルゲン の中には他に比べて強力なものがある。

従って、技師は思考錯誤を繰り返しながら単位面積あたりの適当な有効量を決定 する。ＴＲＵＥテストでは、閉鎖法では適当であると以前に紅験的にめられてき た値から一般的な基準値を導き出すことができるが、本発明では単位面積あたり の所要量が生体効率が改良されているために閉鎖法で要求されている間より少な くて演むことを念頭に入れておかなければならない。

“単位面積あたりの有効５″なる用語は、テスト物質をテストに使用したとき敏 感なヒトあるいは正常人の多くにアレルギー反応もヒ〈は刺激性反応を引き起こ す間を指す。一般的なテスト物質の出は１０１１１ｇ／ｃｉ未満であり、例えば １■／　ｃｉ未満である。

ニッケルの場合には、有効量は０．５μｍｏｌ／Ｃｉ（Ｔ　ＲＵ　Ｅテスト。

ビヒクルーメヂルセルロース）である。

場合によっては患者のいわゆる閾値をめることが望ましい。

このためには同じアレルゲンで単位面積あたりの吊を変化させた幾つかのパッチ を用意する。

次いでパッチを感圧型粘着性保護材（ｓｋｃｅｔ　ｍａｔｅｒｉａｌ）上に置く 。前記保護材は各パッチの周りに少なくとも約５閤、好ましくは少なくとも約１ ｃＩＸ突き出した縁が設けられている〈各パッチのフィルム被覆面は粘着性シー ト材から離れて対面するように設［ｄする）。パッチは１０ａＲ未満の間隔でｍ 間して設置される。

本発明においてその形状は特に限定されない。従って原則的にはパッチの形状と は別の形状のストリップを使用することができる。

粘着材は、フィルムキャリヤが不透過性のときには水分透過性のものがよく、皮 膚にやさしく適応する性質を右するものでなければならない。

テストを容易に実施するために、個々に別のアレルゲンを設けたおよび／又は同 じアレルゲンを単位面積あたりの量を変えて設けた複数のパッチを１つの共通な 粘着剤ピース上に予め用意することもできる。このようなパッチを用いると、複 数のアレルゲンおよび／又は同じアレルゲンについてｒＵ位面積あたりの異なる 量について患者を同時にテストすることが可能なテストストリップが得られる。

前記ストリップは標準トレイに応じたパッチを含んでいる。各ストリップに最ｉ ！ａ２５個、好ましくは最高１２個のパッチを含ませてもよい。

よって、本発明のストリップは粘着剤（自己粘着性、感圧型粘着剤）から成り、 その粘着面上の少なくとも１つのエリア（パッチ）がテスト物質を含んだフィル ムで被覆されている。

ストリップが使用直前に引きはがすことができる保護シートで覆われていてもよ い。

輸送および販売のために、所望により保護シー１−を設けたス１〜リップを、空 気、湿気、温度および光の侵入に対して密閉させるべく窒素ガス雰囲気の如き不 活性雰囲気中で包装することこの方法は、本発明のパッチを使用する以外は公知 の方法で実施される。１個あるいは複数のＴＲＬＪＥテストストリップ（前記し た如く粘着剤上に設けたバッチ）をフィルムがデス１〜領域で皮膚と接触するよ うに思考の皮膚に載せ、皮膚に対して所定位置でストリップを密接に圧着させる 。

本発明を幾つかの非限定的実施例に基いてご２明する。

実施例　１ 予備実験として、モデル物質（メチレンブルー）をセルロースおよびポリ１チレ ングリコールをベースとする各種フィルム形成性ビヒクルに混入し、これをフィ ルムキャリヤに適用し、本発明に従って使用した。こうして得られたフィルムの インプリント（！ｍｐｒ！ｎ１ｓ）からモデル物質が均一に分布していることが 示され、適当なフィルムキャリヤと適当なテスト物質を含むビヒクルが本発明方 法を実施するのに有用であることが判明した。

メチルセルロースのフィルム形成性は断熱良好であることが知見された。従って 、今後の実験はこのセルロース誘導体を用いて実施した。

ペトロラタム（西独、ハンブルグ、　Ｒｅ１ｎｂｅｋ　ｂ’＋　１ＩＯｒｌＤａ ｌ　−Ｃｈｃｍｉｅｌ中の塩化コバル１−１％、硫酸ニッケル５％、重クロム酸 カリウム０５％ ５ＣａｎＤＯｒ　上のＦｉｎｎ　Ｃｂａｍｂｃｒｓ　（フィンランド、Ｅｐｉｃ ｏｎＯＶ） Ｓｃａｎｐｏｒ　（ノルウｘ−，Ｎｏｒｇｅｓｐｌａｓｔｃｒ　Ａ／Ｓ）化学物 質゛ 分析用（ＤｒＯａｎａ＋ｙｓＩ）　ｌ化コバル１〜１分析用塩化ニッケル。

分析用硫酸ニッケル、分析用ＩＦ重クロム酸カリウム分析用水酸化す１−リウム 、ジメチルグリオキシム、クリスタリン（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ）　（米国、 １ン１〜ルイス、　Ｓｉｇｍａ　Ｃｔ＋ｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）ドデシル硫酸す トリウム（＝ラウリルｆａｂ９ブートリウム）テクニカルグレード（米国、オハ イオ州、　Ｎｏｒｗｏｏｄ、　ＨａｔｈｅＳＯｎ　Ｃｏｌｅｍａｎ　＆　Ｂｅ１ ｌ） ■ Ｈｃｔｈｏｃｅｌ　Ａ４Ｈ（メチルセルロース）メチレン度２７−３１％／グル コース単位（米国、ミシガン州、ミツドランド、　Ｄｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａｔ　 Ｃｏ、） 白色ペトロラタム（西独、ハンブルグ、　Ｒｅ１ｎｌ＋ｃｋ　ｂ、　ｌｌｅｒｍ ａｌ−Ｃｈｅｍｉｅ） プラスチック箔およびプラスチック塗装紙（フィルムキャリヤ） レイノルズ　プラスナック塗装フリーザー紙（米国、バージニア州、リッチモン ド、　Ｒｃｙｎｏｌｄｓ　Ｍｅｔａｌ　Ｃｏ、）■ ポリエステルＱ、Ｑ３ｇ（Ｈｙｌａｒ　）［Ｆ］ ５ａｒａｎ　ブリリアンｈ　３５ＣＩＳ／１０５ＡＩＩＡＮ／　１５ＰＥおよび つや消し４５ペーパー／１５ＰＥ（米国、ミシガン州、ミツドランド、００ｗＣ ｈａｍｉｃａｌ　Ｃｏ、） ニッケルに対して過敏症の６名のボランティアテスト材料の調製 ＨｅｔｈＯＣＱｌ　ゲル（３％Ｗ／Ｖ）を熱水法で調製した（　Ｈｅｔｈｏｃｅ ｌ＠を沸騰水によくかき混ぜる；１ｑられた混合物を冷却するとゲルが形成され る）。金属塩−結晶性または水に溶解させた−をグ■ ル中に混入させた。水を添加してＨｅｔｈｏｃｅｌ　の最終濃度を２．４％　ｗ ／ｖとした。次いで塩が均質に分散、溶解するまでゲルを磁気撹拌はを用いて十 分に撹拌した。適用する前にゲルを遠心し、気泡のない状態とした。

これらのゲルを次の金属塩濃度で調製した。

希釈段階　（１０１／ρ）　０．８．０．４．０．２．０．１．０．０５．０． ０２５゜０．０１３．０．００６３．０．００３１．０．００１６．０．０００ ７８．０．０００３９．０．０００２０゜０．０００１０および０．００００４ ９　。

ＮｉＣ！：０．８〜０．００００４９ Ｎｉ３Ｃ：０．２〜０．００００４９ Ｃ０Ｃ１）　：　０．２〜０．００３１Ｋ　Ｃｒ　Ｏ：　０．１〜０．００３＋ トｒ’シル＠Ｗ１ｔト’Ｊウム（ｆｆｉｆｆｉ％）　４．０．２．０．１．０オ ヨヒ０．５予めエタノールで洗浄したフィルムキャリヤ上にゲルを均一厚さく約 ０．１１ＭＲ）の層として展開させた。ゲル層を（約０．０１ｉ＊のフィルム厚 さを与える）室温で放置乾燥後、鋭利なナイフで四角いバッチに＃ｉ断した。

比較のために、標準バッチテスト材料を１２の希釈段階（５％。

２．５％、　１．３％・・・・・・０．００２５％の１２段階）でペトロラタム と混合して硫酸ニッケルの希釈シリーズを：Ｉ！ｙした。

ニッケル分析 上記した各種フィルムキャリヤ上に０．１８１１ニツケルゲルのフィルムを担持 したバッチ（１，Ｏｘ　ｉ、Ｏｃｔｇ　＞　１０個を分析した。これらを脱イオ ン水８ｍ！！中に入れ、１分間の超音波処理後、０．　ＩＮ水酸化すトリウムの 脱イオン水溶液と１％ジメヂルグリオキシムのエタノール溶液を等部で含む指示 薬溶液１２７を添加した。４時間後サンプルを分光光度ｉｔ　（４７０ｎｍ）で 検査した。

パッチテスト法 ペトロラタム／硫酸ニッケル含むテスト材料および上記の如［Ｆ］　− きバッチを各人の背中上部に夫々５ｃａｎｐｏｒ　７−プ上のＦｉｎｎ＠　− Ｃｈａｍｂｅｒｓ　あるいは５ＣａｎＤＯｒ　７−ブのみを用いて貼着シ、４８ 時間そのままとした。４８時間および７２時間目に調べた。

結　果 ０．１Ｈ硫酸ニツケルゲルを含む４１！ｌ！のテスト紙（１，Ｏｘ　１．０α） およびペトロラタム中５％硫酸ニッケルを含む９９−１６１ＲサンプルにおＣノ るニッケル屋 μｍｏＩ　Ｎｉ　ｒｒｔｇ旧Ｓ０４ ポリエステルＨｙｌａｒ＠　０．６８土０．０６　０．１８０＋０．０１７プラ スチツク塗装紙　０．６６±０．０２　０．１７４±０．００６Ｓａｒａｎ＠　 つや消し　０．７３±０．０８　０．１９２±０．０２１３ａｒａｎ＠ブリリア ンｌ−０，７１±０．０２　０．１８６±０００６ベトロラタム中５％硫酸ニッ ケル　２．５０±０．６１　０．６６０＋０．１６０これらのニッケル分析の結 果から、本発明のテスト材料により従来方法Ｊ：りも高い用量精度（ｄｏｓａｇ ｅ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）が得られることが示される。

顕微鏡検査で検出可能な結晶は全て、フィルム面では約９０譚未満であり、フィ ルム面に垂直な而では約１０−未満であった。

パッチテスト ニッケルに対して過敏症の６名（うち　１名はコバルトに対しても過敏症）に、 ペトロラタム中の５Ｍニッケルの希釈シリーズおよび本発明の＠耐ニッケル、塩 化ニッケル、塩化コバルト。

川りＯム酸カリウム及びラウリル硫酸ナトリウム含有パッチを用いてバツチテス １〜を施した。本発明のパッチの大きさは１ａｉであった。３名には更に、ポリ エステルおよび５ａｒａｎ　上に硫酸ニッケルを含むパッチ（両方とも１ｃｉ） を用いてテストした。

２名には、プラスチック塗装紙上に＠酸ニッケルを含むパッチ０、７Ｘ　０．７ 国（０，５ｏｊ）を用いてテストした。

本発明のテスト方法では、Ｆｉｎｎ　Ｃｈａｍｂｅｒｓ　を用いるテストに比べ てより大きくかつより均一に分布したテスト反応が得られた。このことは、パッ チが非常に希釈された形でアレルゲンを含んでいる場合に最も顕著に認められう る。ペトロラタム中５％硫酸ニッケルを用いるテスト反応の強度は、０．０５Ｈ ｆｉｌｉｌ酸ニッケルゲル（０，３μｍｏｌＮｉ／ｃａｔ）を含む本発明パッチ に相当した。

０．７×０．７αバツチは、１．ＯＸｌ、０ｃｍパッチの場合と同じ反応強度（ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）および同じ希釈シリース終止点を示すが、評価はより困難 であった。ポリエステルや５ａｒａｎ　のテストシリーズでの反応は、紙／プラ スチックシリーズの反応と同一であった。コバルトに過敏症の人では、ペトロラ タム中１ｘ塩化コバルトでテストしたときもプラスチック塗装紙上の０．０１３ Ｍ塩化コバルトゲルでテス１〜したときら反応強度は等しかった。０．１Ｈ塩化 コバル］〜ゲル並びに蛋りロム醇カリウムを用いる本発明方法では、（正常のヒ トに対して行ったテスト）ペトロラタム中５〜１０％の塩でテス１へしたときと 同強度の過敏反応を示した。

皮膚刺激剤のラウリルＩａＭナトリウムを本発明のフィルムに（０，５−４％） 混入さゼるど、同一物質を水溶液中に含む（０，２５−２％）従来のパッヂテス ｌ〜で得られる反応に対応する過敏反応を呈した。

ＴＲＵＥパッヂを被験者に貼付した位置にそのまま保持している間にフィルムの 膨潤がみとめられた。これによりフィルム−皮膚の接触が増大し、多分テスト物 質の皮膚への浸透が容易になるであろう。水溶性物質は皮膚の水相へより容易に 接近し、脂溶性物質は皮膚の脂肪相へより容易に入り込むからである。

本実施例から、固体の柔軟なフィルムがビヒクルとして使用されうることが知見 された。

フィルムＨｅｔｈｏｃｅｌ　に混入させて臨床的に首尾よく評価された他のテス １へ物質としては、硫酸ネオマイシン、エチレンジアミン塩酸塩およびペルーバ ルサムが挙げられうる。

実施例　３ 実施例２と同様にして、各種テスト物質を含有するに１ｕｃｅｌ＠（ヒドロキシ プロピル化セルロース、米国、　ｌ１ｅｒｃｕｌｅｓ　Ｉｎｃ暑のゲルを調製し 、フィルムキャリヤに適用し、乾燥させた。使用した溶媒は水とエタノールの各 種混合物であり、各エタノール濃度は使用した特定のテスト物質を溶解させるに 十分量とした。

フィルムキャリヤは、フィルムとの接着性を高めるべくコロナ放電処理により親 水性にしたポリエステルフィルムであった。

乾燥フィルムを顕ｙ＆鏡観察したところ、結晶の形成は検出されなかった。皮膚 で得られたテスト結果の判定は容易であった。

に１ｕｃｅｌ　のフィルムに混入させて臨床的に首尾よく評価された他のテスト 物質としては、ＩｉＭニッケル、重りＯム酸カリウム、カインミックス（ｃａｉ ｎｅ　ｍ１ｘ）　、ペルーバルサムジアミン塩酸塩，塩化コバルｌ−　、チウラ ムミックスおよびエボキシ樹脂が挙げられうる。

被験物辺の中でペルーバルサムおよび芳香性物質（Ｆ　ｒａｇｒａｎｃｃＳ）混 合物は揮発性成分を含む。

実施例　４ 水中でスラリー化した微Ｖ）ハイド［ｌコルチゾンアセテート（主に好脂性の物 質の例）（１０χＷ／Ｖ）を、熱水法で調製したＨｅｔｈｏｃｅｌ　ゲルに添加 した。次いでフィルムの形態でゲルをプラスチック塗装紙（実施例２）に適用し た。顕微鏡検査から、ヒドロコルデシンアセテートがフィルム中に均一に分布し ていることがη１明した。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．少なくとも１個のパッチを有する閉鎖性パッチテストに使用するためのテス トストリップであって、ストリップのパッチの少なくとも１個の上にテスト物質 を混入したフィルムがパッチと接着するように設けられていることを特徴とする テストストリップ。
2. ２．フィルムが使用時に膨潤しうるポリマーを含む請求の範囲１のテストストリ ップ。
3. ３．フィルムの厚さが０．２５ｍｍ未満である請求の範囲１または２のテストス トリップ。
4. ４．フィルムのフィルム形成性物質がフィルム形成性を有するポリサッカライド あるいはその誘導体である請求の範囲２のテストストリップ。
5. ５．閉鎖技法を用いるパッチテスト法であって、使用する物質がバッチに接着性 のフィルム内に混入されていることを特徴とする方法。
6. ６．フィルムが使用時に膨潤しうるポリマーを含む請求の範囲５の方法。
7. ７．フィルムの厚さが０．２５ｍｍ未満である請求の範囲５または６の方法。
8. ８．フィルムのフィルム形成性物質がフィルム形成性を有するポリサッカライド あるいはその誘導体である請求の範囲６の方法。