KR20240163722A - Ilt3 및 cd3 결합제 및 이의 사용 방법 - Google Patents
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Abstract
본 개시는 ILT3 × CD3 결합제, 이를 포함하는 조성물, 및 이의 사용 방법에 관한 것이다. 본 개시는 또한 이러한 ILT3 × CD3 결합제를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 벡터에 관한 것이다.
Description
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 각각의 내용이 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 2022년 3월 29일에 출원된 미국 가출원 제63/325,101호 및 2022년 12월 8일에 출원된 미국 가출원 제63/386,634호에 대한 우선권의 이익을 주장한다.
서열 목록
본 출원은 XML 파일 포맷으로 본 출원과 함께 제출된 컴퓨터 판독 가능 서열 목록을 포함하며, 그 전체 내용은 본원에 그 전체가 참조로 포함된다. 이 출원서와 함께 제출된 서열 목록 XML 파일은 '13370-172-228_SEQLISTING.xml'이라는 이름으로 2023년 3월 24일에 생성되었으며 크기는 189,173 바이트다.
기술분야
본 개시는 면역글로불린-유사 전사물 3[immunoglobulin-like transcript 3, ILT3] 및 CD3에 결합하는 ILT3 × CD3 결합제, 이를 포함하는 조성물, 및 이의 사용 방법에 관한 것이다. 본 개시는 또한 이러한 ILT3 × CD3 결합제를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 벡터에 관한 것이다.
면역요법의 기초는 선천성 면역 반응 및 적응성 면역 반응 둘 모두를 포함하는 면역계의 조작 및/또는 조절이다. 면역요법의 일반적인 목적은 '이물질', 예를 들어, 병원체 또는 종양 세포에 대한 면역 반응을 제어함으로써 질환을 치료하는 것이다. 그러나, 일부 경우에, 면역요법은 자가면역 질환을 치료하는 데 사용되며, 자가면역 질환은 신체에 정상적으로 존재하는 단백질, 분자 및/또는 조직에 대한 비정상적인 면역 반응으로 인해 발생할 수 있다. 면역요법은 특이적 면역 반응을 유도하거나 향상시키거나, 특이적 면역 반응을 억제하거나 감소시키는 방법을 포함할 수 있다.
암 면역 감시의 개념은 면역계가 종양 세포를 인식하고 면역 반응을 일으키며 종양의 발달 및/또는 성장을 억제할 수 있다는 이론을 기반으로 한다. 그러나, 많은 암성 세포가 면역계를 회피하기 위해 기전을 개발하고/하거나, 정상 억제 기전을 탈취하여, 종양의 억제되지 않은 성장을 가능하게 할 수 있음이 분명하다. 암/종양 면역요법(면역 종양학)은 암/종양 세포의 증가된 사멸 및/또는 암/종양 성장의 억제를 초래하는 암/종양 세포에 대한 보다 효과적인 공격을 달성하기 위해 면역계를 활성화하고/하거나 추가항원자극시킬 수 있는 새롭고 신규한 작용제의 개발에 초점을 맞춘다. 다양한 질환 또는 장애를 치료하기 위한 보다 효과적인 분자에 대한 필요성이 당업계에 여전히 존재한다.
일 양태에서, 본 개시는 인간 ILT3에 결합하는 제1 결합 영역 및 인간 CD3에 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는 결합제를 제공하며, 여기서 CD3 결합 영역은 항-CD3 scFv를 포함한다.
특정 구현예에서, 제1 결합 영역은 항-ILT3 Fab를 포함한다. 특정 구현예에서, 인간 ILT3에 대한 제1 결합 영역의 결합 친화도는 인간 CD3에 대한 제2 결합 영역의 결합 친화도보다 높다. 특정 구현예에서, 인간 ILT3에대한 제1 결합 영역의 결합 친화도는 인간 CD3에 대한 제2 결합 영역의 결합 친화도보다 약 10배 내지 약 100배 높다. 특정 구현예에서, 결합제는 Fc 영역을 추가로 포함한다.
특정 구현예에서, 결합제는 (i) 항-CD3 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드; (ii) 제1 결합 영역의 VH 도메인, CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드; 및 (iii) 제1 결합 영역의 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 제1 결합 영역의 VH 도메인, CH1 도메인, 제1 결합 영역의 VL 도메인 및 CL 도메인은 항-ILT3 Fab를 형성하고, 제1 CH2 도메인, 제2 CH2 도메인, 제1 CH3 도메인 및 제2 CH3 도메인은 Fc 영역을 형성한다.
특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 조작된 공동을 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 조작된 돌출부를 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하며, 여기서 제1 폴리펩타이드는 돌출부를 공동 내에 위치시킴으로써 제2 폴리펩타이드와 이합체화된다.
특정 구현예에서, 제2 결합 영역은 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인; 및 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 제2 결합 영역에서, 제2 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제2 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, 제1 결합 영역은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 제1 결합 영역에서, (a) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나, (b) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나, (c) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나, (d) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나, (e) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, (i) 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하고, 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하거나, (ii) 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 ILT3에 결합하는 제1 결합 영역 및 인간 CD3에 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는 결합제를 제공하며, 여기서 제2 결합 영역은 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 제2 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제2 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, 제1 결합 영역은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 제1 결합 영역에서, (a) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나, (b) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나, (c) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나, (d) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나, (e) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, (i) 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하고, 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하거나, (ii) 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 제1 결합 영역은 항-ILT3 Fab를 포함한다. 특정 구현예에서, 제2 결합 영역은 항-CD3 scFv를 포함한다. 특정 구현예에서, 결합제는 Fc 영역을 추가로 포함한다.
특정 구현예에서, 결합제는 (i) 항-CD3 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드; (ii) 제1 결합 영역의 VH 도메인, CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드; 및 (iii) 제1 결합 영역의 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 제1 결합 영역의 VH 도메인, CH1 도메인, 제1 결합 영역의 VL 도메인 및 CL 도메인은 항-ILT3 Fab를 형성하고, 제1 CH2 도메인, 제2 CH2 도메인, 제1 CH3 도메인 및 제2 CH3 도메인은 Fc 영역을 형성한다.
특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 조작된 공동을 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 조작된 돌출부를 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하며, 여기서 제1 폴리펩타이드는 돌출부를 공동 내에 위치시킴으로써 제2 폴리펩타이드와 이합체화된다.
특정 구현예에서, (i) 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하고, 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하거나, (ii) 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 19의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, 제1 결합 영역은 2개의 동일한 항-ILT3 Fab를 포함하고, 제2 결합 영역은 항-CD3 scFv를 포함한다.
특정 구현예에서, 결합제는 다음을 포함한다: (i) 항-CD3 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드; (ii) 제1 VH 도메인, 제2 VH 도메인, 제1 CH1 도메인, 제2 CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드이되, 제1 및 제2 VH 도메인 각각은 제1 결합 영역의 VH 도메인을 포함함; 및 (iii) 제1 VL 도메인 및 제1 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드이되, 제1 VL 도메인은 제1 결합 영역의 VL 도메인을 포함함; 및 (iv) 제2 VL 도메인 및 제2 CL 도메인을 포함하는 제4 폴리펩타이드이되, 제2 VL 도메인은 제1 결합 영역의 VL 도메인을 포함하고, 제2 폴리펩타이드의 제1 VH 도메인과 제1 CH1 도메인, 및 제3 폴리펩타이드의 제1 VL 도메인과 제1 CL 도메인은 제1 Fab 영역을 형성하고, 제2 폴리펩타이드의 제2 VH 도메인과 제2 CH1 도메인 및 제4 폴리펩타이드의 제2 VL 도메인과 제2 CL 도메인은 제2 Fab 영역을 형성하고, 제1 CH2 도메인, 제2 CH2 도메인, 제1 CH3 도메인 및 제2 CH3 도메인은 Fc 영역을 형성함.
특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 조작된 공동을 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 조작된 돌출부를 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하되, 제1 폴리펩타이드는 돌출부를 공동 내에 위치시킴으로써 제2 폴리펩타이드와 이합체화된다.
특정 구현예에서, (i) 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하고, 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, 제4 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하거나, (ii) 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 169의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제4 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, 항-CD3 scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 결합제는 인간화 항체이다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 (i) 인간 CD3에 결합하는 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드; (ii) 인간 ILT3에 결합하는 VH 도메인, CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드; 및 (iii) 인간 ILT3에 결합하는 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하되, 인간 CD3에 결합하는 scFv는 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 인간 ILT3에 결합하는 VH 도메인은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 인간 ILT3에 결합하는 VL 도메인은 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 결합제를 제공한다.
특정 구현예에서, (a) scFv의 HCDR1은 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하고, scFv의 HCDR2는 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하고, scFv의 HCDR3은 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하고, scFv의 LCDR1은 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하고, scFv의 LCDR2는 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하고, scFv의 LCDR3은 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하며, (b) 인간 ILT3에 결합하는 VH 도메인 및 인간 ILT3에 결합하는 VL 도메인에서, (i) HCDR1은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나, (ii) HCDR1은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나, (iii) HCDR1은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나, (iv) HCDR1은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나, (v) HCDR1은 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, 인간 CD3에 결합하는 scFv의 VH 도메인은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하고, 인간 CD3에 결합하는 scFv의 VL 도메인은 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하며, 인간 ILT3에 결합하는 VH 도메인은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하고, 인간 ILT3에 결합하는 VL 도메인은 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 본원에 개시된 결합제를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터를 포함하는 단리된 세포를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 본원에 개시된 결합제를 생산하는 단리된 세포를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 본원에 개시된 결합제, 본원에 개시된 단리된 폴리뉴클레오타이드, 본원에 개시된 벡터, 또는 본원에 개시된 단리된 세포, 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 ILT3을 발현하는 암 또는 종양 세포로 T 세포를 유도하는 방법으로서, T 세포를 본원에 개시된 결합제 또는 본원에 개시된 약학 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
특정 구현예에서, T 세포는 ILT3을 발현하는 암 세포 또는 종양 세포의 사멸을 유도한다. 특정 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 혈액학적 암 또는 종양 세포이다. 특정 구현예에서, 혈액학적 암 또는 종양 세포는 급성 골수성 백혈병[acute myeloid leukemia, AML] 세포, M4/M5 AML 세포, 만성 골수단핵구성 백혈병[chronic myelomonocytic leukemia, CMML] 세포, B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-cell acute lymphoblastic leukemia, B-ALL] 세포, 만성 림프구성 백혈병[chronic lymphocytic leukemia, CLL] 세포, 미만성 거대 B-세포 림프종[diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL] 세포, 외투세포 림프종[mantle cell lymphoma, MCL] 세포, 다발성 골수종[multiple myeloma, MM] 세포, 골수이형성 증후군[myelodysplastic syndrome, MDS] 세포, 호지킨 림프종 세포, 림프형질세포성 림프종[lymphoplasmacytic lymphoma, LPL] 세포, 여포성 림프종 세포, 버킷 림프종 세포, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm, BPDCN] 세포, 변연부 림프종 세포 또는 점막-연관 림프 조직[mucosa-associated lymphoid tissue, MALT] 림프종 세포로 이루어진 군에서 선택된다. 특정 구현예에서, T 세포는 정상 조혈 줄기 세포[hematopoietic stem cell, HSC]의 사멸을 유도하지 못한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 T 세포를 활성화하는 방법으로서, T 세포를 본원에 개시된 결합제 또는 본원에 개시된 약학 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하되, 제2 결합 영역은 T 세포에 결합하는, 방법을 제공한다.
특정 구현예에서, T 세포는 미감작 T 세포이다. 특정 구현예에서, T 세포는 PBMC의 집단에서 다클론적으로 확장된다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 ILT3을 발현하는 암 또는 종양 세포를 사멸시키거나 이의 증식을 억제하는 방법으로서, 암 또는 종양 세포를 본원에 개시된 결합제 또는 본원에 개시된 약학 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
특정 구현예에서, 결합제는 T 세포를 활성화한다. 특정 구현예에서, 활성화된 T 세포는 암 또는 종양 세포의 사멸을 유도한다.
특정 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 혈액학적 암 또는 종양 세포를 포함한다. 특정 구현예에서, 혈액학적 암 또는 종양 세포는 급성 골수성 백혈병[AML] 세포, M4/M5 AML 세포, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML] 세포, B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL] 세포, 만성 림프구성 백혈병[CLL] 세포, 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL] 세포, 외투세포 림프종[MCL] 세포, 다발성 골수종[MM] 세포, 골수이형성 증후군[MDS] 세포, 호지킨 림프종 세포, 림프형질세포성 림프종[LPL] 세포, 여포성 림프종 세포, 버킷 림프종 세포, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN] 세포, 변연부 림프종 세포 또는 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종 세포로 이루어진 군에서 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 대상에서 ILT3을 발현하는 암 또는 종양을 치료하는 방법으로서, 본원에 개시된 결합제 또는 본원에 개시된 약학 조성물의 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
특정 구현예에서, 암 또는 종양은 혈액학적 암 또는 종양을 포함한다. 특정 구현예에서, 혈액학적 암 또는 종양은 급성 골수성 백혈병[AML], M4/M5 AML, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML], B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL], 만성 림프구성 백혈병[CLL], 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL], 외투세포 림프종[MCL], 다발성 골수종[MM], 골수이형성 증후군[MDS], 호지킨 림프종, 림프형질세포성 림프종[LPL], 여포성 림프종, 버킷 림프종, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN], 변연부 림프종 또는 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종으로 이루어진 군에서 선택된다.
도 1은 본원에 개시된 예시적인 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446)를 나타낸다. 좌측 팔(항체의 제2 결합 영역)은 본원에 제공된 항-CD3 scFv를 나타내고, 우측 팔(항체의 제1 결합 영역)은 본원에 제공된 항-ILT3 Fab를 나타낸다.
도 2는 상이한 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(hz45G10-2B2, 16C5-2B2 및 12A12-2B2)를 이용한 T-세포 의존적 세포성 세포독성[T-cell dependent cellular cytotoxicity, TDCC] 검정의 결과를 나타낸다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 3은 상이한 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(hz45G10-1G4, 16C5-1G4 및 12A12-1G4)를 이용한 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 검정의 결과를 나타낸다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 4는 상이한 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(hz45G10-2B2, 3A3-2B2 및 12A12-2B2)를 이용한 TNFα 사이토카인 생산 검정의 결과를 나타낸다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 5는 ILT3 × CD3 이중특이적 항체를 이용한 AML 세포에서의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 검정의 결과를 보여준다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 6은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체를 이용한 TNFα 사이토카인 생산 검정의 결과를 나타낸다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 7은 본원에 제공된 예시적인 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 다양한 포맷을 나타낸다.
도 8은 확장된 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 MOLM13 세포에서 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 다양한 포맷(도 7)의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 활성을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군을 나타낸다.
도 9는 전혈 샘플이 표시된 농도에서 다양한 포맷의 ILT3 × CD3 이중특이적 항체로 미리 코팅된 플레이트에 첨가된 경우(도 7)의 TNFα 사이토카인 방출을 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 50 μg/ml, 10 μg/ml, 1 μg/ml 및 0.1 μg/ml를 나타냄).
도 10은 전혈 샘플이 표시된 농도에서 다양한 포맷의 가용성 ILT3 × CD3 이중특이적 항체를 함유하는 배양 배지에 첨가된 경우(도 7)의 TNFα 사이토카인 방출을 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 100 μg/ml, 10 μg/ml, 1 μg/ml 및 0.1 μg/ml를 나타냄).
도 11은 확장된 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 ILT3 양성(ILT3+) AML 세포(MOLM13)의 강력한 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 12는 미감작 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 ILT3 양성(ILT3+) AML 세포(MOLM13)의 강력한 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 13은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 낮은 ILT3 발현으로 OCI-AML-2 세포의 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 14는 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 낮은 ILT3 발현을 갖는 NALM-1 세포의 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 15는 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 미감작 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 낮은 ILT3 발현을 갖는 OCI-AML-2 세포의 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 16은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 미감작 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 낮은 ILT3 발현을 갖는 NALM-1 세포의 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 17은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 ILT3 넉아웃 THP-1 세포의 아폽토시스를 유도하는 데 실패하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 18은 플레이트 코팅된 포맷 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적) 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)의 증가하는 농도로 인큐베이션된 PBMC에서 TNFα 사이토카인 생산의 결과를 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 100 μg/ml, 10 μg/ml, 1 μg/ml 및 0.1 μg/ml을 나타냄). 가용성 포도상구균 장독소 B[staphylococcal enterotoxin B, SEB]를 양성 대조군으로 포함하였다.
도 19는 본원에 제공된 가용성 항-KLH(음성 대조군), SEB[포도상구균 장독소 B](양성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적) 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)의 증가하는 농도로 인큐베이션된 PBMC에서 TNFα 사이토카인 생산의 결과를 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 10 μg/ml, 1 μg/ml, 0.1 μg/ml 및 0.01 μg/ml를 나타냄).
도 20은 F0(ABX1446) 및 F13(ABX1520)을 포함하는 두 가지 상이한 포맷의 플레이트 코팅된 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적), 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 증가하는 농도로 인큐베이션된 전혈에서의 TNFα 사이토카인 분비 검정의 결과를 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 10 μg/ml, 1 μg/ml, 0.1 μg/ml 및 0.01 μg/ml를 나타냄)(도 7 참조). 가용성 포도상구균 장독소 B[SEB]를 양성 대조군으로서 포함하였다.
도 21은 F0(ABX1446) 및 F14(ABX1521)를 포함하는 두 가지 상이한 포맷의 가용성 항-KLH(음성 대조군), SEB[포도상구균 장독소 B](양성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적), 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 증가하는 농도로 인큐베이션된 전혈에서의 TNFα 사이토카인 분비 검정의 결과를 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 10 μg/ml, 1 μg/ml, 0.1 μg/ml 및 0.01 μg/ml를 나타냄)(도 7 참조).
도 22는 미감작 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 ILT3 양성(ILT3+) AML 세포(MOLM13)를 이용한 TDCC 검정에서 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446)가 낮은 TNFα 사이토카인 분비를 유도하였음을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군(음성 대조군)을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군을 나타낸다.
도 23은 미감작 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 ILT3 양성(ILT3+) AML 세포(MOLM13)를 이용한 TDCC 검정에서 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446)가 낮은 IL6 사이토카인 분비를 유도하였음을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군을 나타낸다.
도 24는 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적), 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446 및 플로테투주맙(CD123 × CD3 DART)을 이용한 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 검정의 결과를 나타낸다.
도 25는 가용성 항-KLH(음성 대조군), SEB[포도상구균 장독소 B](양성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적), ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446 그리고 플로테투주맙(CD123 × CD3 DART)의 증가하는 농도를 이용한 전혈에서의 TNFα 사이토카인 분비 검정의 결과를 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 10 μg/ml, 1 μg/ml, 0.1 μg/ml 및 0.01 μg/ml를 나타냄).
도 26은 M5 AML 환자에서 단리된 PBMC에서의 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적) 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446의 증가하는 농도의 CD3 양성(CD3+) T 세포(총 PBMC의 백분율로서)의 팽창을 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 0.1 μg/ml, 1 μg/ml, 및 10 μg/ml를 나타냄).
도 27은 M5 AML 환자에서 단리된 PBMC에서의 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적) 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446의 증가하는 농도를 이용하여 CD25 양성(CD25+) T 세포(총 T 세포의 백분율로서)의 팽창을 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 0.1 μg/ml, 1 μg/ml, 및 10 μg/ml를 나타냄).
도 28은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446이 CD34 양성(CD34+) 조혈 줄기 세포[HSC]에 대한 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC]을 유도하는 데 실패한 반면, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 CD34+ HSC에 대한 TDCC를 유도하였음을 나타낸다. 각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 0.0006 μg/ml, 0.005 μg/ml, 0.04 μg/ml, 0.3 μg/ml 및 2.5 μg/ml를 나타낸다.
도 29는 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446이 CD34 양성(CD34+) 조혈 줄기 세포[HSC]에 대한 아폽토시스를 유도하는 데 실패한 반면, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 CD34+ HSC에 대한 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. 각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 0.001 μg/ml, 0.01 μg/ml, 0.1 μg/ml 및 1.0 μg/ml를 나타낸다.
도 30은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446이 비-단핵구 KU812 호염기구에 대한 아폽토시스를 유도하는데 실패하였음을 나타낸다.
도 31은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446이 비-단핵구 LAMA84 호염기구에 대한 아폽토시스를 유도하는데 실패하였음을 나타낸다.
도 32는 확장된 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 MM1S 세포에서의 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 다양한 포맷(도 7)의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 활성을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 블린사이토(CD3 × CD19 BiTe)는 양성 대조군을 나타낸다.
도 33은 확장된 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 H929 세포에서의 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 다양한 포맷(도 7)의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 활성을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 블린사이토(CD3 × CD19 BiTe)는 양성 대조군을 나타낸다.
도 34는 확장된 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 U226B1 세포에서의 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 다양한 포맷(도 7)의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 활성을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 블린사이토(CD3 × CD19 BiTe)는 양성 대조군을 나타낸다.
도 35는 마우스 AML 모델에서의 치료 스키마 및 종양 부담 정량화를 나타낸다. 마우스를 MOLM13 또는 MV4;11 세포 주사 48시간 전에 조사하였다. 2일차에, 확장된 T 세포를 MOLM13 세포를 제공받은 마우스에 주사하거나 전체 PBMC를 MV4;11 세포를 제공받은 마우스에 주사하였다. 이어서, ABX1446을 7일차, 14일차, 21일차 및 28일차에 주사하였다. 이어서, 말초 혈액 내의 종양 부담을 FACS, 및 획득된 세포의 수/획득된 비드의 수 × 1000의 방정식을 이용하여 정량화하였다.
도 36은 ABX1446 및 ABX1520이 MOLM13 마우스 AML 모델에서 순환 종양 부담을 감소시켰음을 나타낸다. NTB는 비-종양 보유 마우스를 나타내고, 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, hz45G10은 Fc 영역에 N297G 치환을 포함하는 ILT3 항체를 나타내고, IO-202는 ILT3을 길항하는 단클론 항체를 나타내고, ABX1559는 ILT3 Fab 결합 영역이 결여된 항체에 상응하여 항-CD3만 있는 대조군을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군을 나타낸다.
도 37은 ABX1446이 2주차에 MV4;11 마우스 AML 모델에서 순환 종양 부담을 감소시켰음을 나타낸다. NTB는 비-종양 보유 마우스를 나타내고, 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군(좌측에서 우측으로, 0.01 mpk, 0.1 mpk 및 1 mpk의 증가하는 농도에서)을 나타낸다.
도 38은 ABX1446이 3주차에 MV4;11 마우스 AML 모델에서 순환 종양 부담을 감소시켰음을 나타낸다. NTB는 비-종양 보유 마우스를 나타내고, 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군(좌측에서 우측으로, 0.01 mpk, 0.1 mpk 및 1 mpk의 증가하는 농도에서)을 나타낸다.
도 39는 마우스 AML 모델에서의 치료 스키마 및 종양 부담 정량화를 나타낸다. CD34+ 조혈 줄기 세포(HSC)를 MV4;11 세포 주사 3개월 전에 마우스에 이식하였다. 7일차, 14일차, 21일차 및 28일차에, ABX1446을 주사하였다. 이어서, 종양 부담을 FACS, 및 획득된 세포의 수/획득된 비드의 수 × 1000의 방정식을 이용하여 정량화하였다.
도 40은 ABX1446이 CD34+ 인간화 마우스에서 순환 종양 부담을 감소시켰음을 나타낸다. 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적; 양성 대조군) 및 ABX1446을 1 mpk로 투약한 경우, 혈액 1 μL 당 순환 MV4;11 세포의 수가 크게 감소하였다.
도 41은 일차 M5 AML 골수 배양물에서 ABX1446 유도된 용량 의존적 종양 세포 고갈을 나타낸다.
도 42는 일차 M5 AML 골수 배양물에서 ABX1446 유도된 용량 의존적 T 세포 활성화를 나타낸다.
도 43은 일차 MM 골수 배양물에서 ABX1446 유도된 용량 의존적 종양 세포 고갈을 나타낸다.
도 44는 일차 MM 골수 배양물에서 ABX1446 유도된 용량 의존적 T 세포 활성화를 나타낸다.
도 2는 상이한 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(hz45G10-2B2, 16C5-2B2 및 12A12-2B2)를 이용한 T-세포 의존적 세포성 세포독성[T-cell dependent cellular cytotoxicity, TDCC] 검정의 결과를 나타낸다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 3은 상이한 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(hz45G10-1G4, 16C5-1G4 및 12A12-1G4)를 이용한 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 검정의 결과를 나타낸다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 4는 상이한 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(hz45G10-2B2, 3A3-2B2 및 12A12-2B2)를 이용한 TNFα 사이토카인 생산 검정의 결과를 나타낸다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 5는 ILT3 × CD3 이중특이적 항체를 이용한 AML 세포에서의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 검정의 결과를 보여준다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 6은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체를 이용한 TNFα 사이토카인 생산 검정의 결과를 나타낸다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 7은 본원에 제공된 예시적인 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 다양한 포맷을 나타낸다.
도 8은 확장된 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 MOLM13 세포에서 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 다양한 포맷(도 7)의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 활성을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군을 나타낸다.
도 9는 전혈 샘플이 표시된 농도에서 다양한 포맷의 ILT3 × CD3 이중특이적 항체로 미리 코팅된 플레이트에 첨가된 경우(도 7)의 TNFα 사이토카인 방출을 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 50 μg/ml, 10 μg/ml, 1 μg/ml 및 0.1 μg/ml를 나타냄).
도 10은 전혈 샘플이 표시된 농도에서 다양한 포맷의 가용성 ILT3 × CD3 이중특이적 항체를 함유하는 배양 배지에 첨가된 경우(도 7)의 TNFα 사이토카인 방출을 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 100 μg/ml, 10 μg/ml, 1 μg/ml 및 0.1 μg/ml를 나타냄).
도 11은 확장된 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 ILT3 양성(ILT3+) AML 세포(MOLM13)의 강력한 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 12는 미감작 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 ILT3 양성(ILT3+) AML 세포(MOLM13)의 강력한 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 13은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 낮은 ILT3 발현으로 OCI-AML-2 세포의 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 14는 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 낮은 ILT3 발현을 갖는 NALM-1 세포의 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 15는 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 미감작 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 낮은 ILT3 발현을 갖는 OCI-AML-2 세포의 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 16은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 미감작 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 낮은 ILT3 발현을 갖는 NALM-1 세포의 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 17은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)가 ILT3 넉아웃 THP-1 세포의 아폽토시스를 유도하는 데 실패하였음을 나타낸다. CD123 × CD3 이중특이적인 비베코타맙을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-KLH를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 18은 플레이트 코팅된 포맷 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적) 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)의 증가하는 농도로 인큐베이션된 PBMC에서 TNFα 사이토카인 생산의 결과를 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 100 μg/ml, 10 μg/ml, 1 μg/ml 및 0.1 μg/ml을 나타냄). 가용성 포도상구균 장독소 B[staphylococcal enterotoxin B, SEB]를 양성 대조군으로 포함하였다.
도 19는 본원에 제공된 가용성 항-KLH(음성 대조군), SEB[포도상구균 장독소 B](양성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적) 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446 및 ABX1520)의 증가하는 농도로 인큐베이션된 PBMC에서 TNFα 사이토카인 생산의 결과를 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 10 μg/ml, 1 μg/ml, 0.1 μg/ml 및 0.01 μg/ml를 나타냄).
도 20은 F0(ABX1446) 및 F13(ABX1520)을 포함하는 두 가지 상이한 포맷의 플레이트 코팅된 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적), 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 증가하는 농도로 인큐베이션된 전혈에서의 TNFα 사이토카인 분비 검정의 결과를 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 10 μg/ml, 1 μg/ml, 0.1 μg/ml 및 0.01 μg/ml를 나타냄)(도 7 참조). 가용성 포도상구균 장독소 B[SEB]를 양성 대조군으로서 포함하였다.
도 21은 F0(ABX1446) 및 F14(ABX1521)를 포함하는 두 가지 상이한 포맷의 가용성 항-KLH(음성 대조군), SEB[포도상구균 장독소 B](양성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적), 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 증가하는 농도로 인큐베이션된 전혈에서의 TNFα 사이토카인 분비 검정의 결과를 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 10 μg/ml, 1 μg/ml, 0.1 μg/ml 및 0.01 μg/ml를 나타냄)(도 7 참조).
도 22는 미감작 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 ILT3 양성(ILT3+) AML 세포(MOLM13)를 이용한 TDCC 검정에서 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446)가 낮은 TNFα 사이토카인 분비를 유도하였음을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군(음성 대조군)을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군을 나타낸다.
도 23은 미감작 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 ILT3 양성(ILT3+) AML 세포(MOLM13)를 이용한 TDCC 검정에서 ILT3 × CD3 이중특이적 항체(ABX1446)가 낮은 IL6 사이토카인 분비를 유도하였음을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군을 나타낸다.
도 24는 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적), 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446 및 플로테투주맙(CD123 × CD3 DART)을 이용한 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 검정의 결과를 나타낸다.
도 25는 가용성 항-KLH(음성 대조군), SEB[포도상구균 장독소 B](양성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적), ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446 그리고 플로테투주맙(CD123 × CD3 DART)의 증가하는 농도를 이용한 전혈에서의 TNFα 사이토카인 분비 검정의 결과를 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 10 μg/ml, 1 μg/ml, 0.1 μg/ml 및 0.01 μg/ml를 나타냄).
도 26은 M5 AML 환자에서 단리된 PBMC에서의 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적) 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446의 증가하는 농도의 CD3 양성(CD3+) T 세포(총 PBMC의 백분율로서)의 팽창을 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 0.1 μg/ml, 1 μg/ml, 및 10 μg/ml를 나타냄).
도 27은 M5 AML 환자에서 단리된 PBMC에서의 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적) 및 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446의 증가하는 농도를 이용하여 CD25 양성(CD25+) T 세포(총 T 세포의 백분율로서)의 팽창을 나타낸다(각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 0.1 μg/ml, 1 μg/ml, 및 10 μg/ml를 나타냄).
도 28은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446이 CD34 양성(CD34+) 조혈 줄기 세포[HSC]에 대한 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC]을 유도하는 데 실패한 반면, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 CD34+ HSC에 대한 TDCC를 유도하였음을 나타낸다. 각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 0.0006 μg/ml, 0.005 μg/ml, 0.04 μg/ml, 0.3 μg/ml 및 2.5 μg/ml를 나타낸다.
도 29는 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446이 CD34 양성(CD34+) 조혈 줄기 세포[HSC]에 대한 아폽토시스를 유도하는 데 실패한 반면, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 CD34+ HSC에 대한 아폽토시스를 유도하였음을 나타낸다. 각각의 처리군에 대해, 좌측에서 우측으로의 막대는 각각 0.001 μg/ml, 0.01 μg/ml, 0.1 μg/ml 및 1.0 μg/ml를 나타낸다.
도 30은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446이 비-단핵구 KU812 호염기구에 대한 아폽토시스를 유도하는데 실패하였음을 나타낸다.
도 31은 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 ABX1446이 비-단핵구 LAMA84 호염기구에 대한 아폽토시스를 유도하는데 실패하였음을 나타낸다.
도 32는 확장된 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 MM1S 세포에서의 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 다양한 포맷(도 7)의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 활성을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 블린사이토(CD3 × CD19 BiTe)는 양성 대조군을 나타낸다.
도 33은 확장된 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 H929 세포에서의 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 다양한 포맷(도 7)의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 활성을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 블린사이토(CD3 × CD19 BiTe)는 양성 대조군을 나타낸다.
도 34는 확장된 T 세포를 효과기로서 사용한 경우 U226B1 세포에서의 ILT3 × CD3 이중특이적 항체의 다양한 포맷(도 7)의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC] 활성을 나타낸다. 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 블린사이토(CD3 × CD19 BiTe)는 양성 대조군을 나타낸다.
도 35는 마우스 AML 모델에서의 치료 스키마 및 종양 부담 정량화를 나타낸다. 마우스를 MOLM13 또는 MV4;11 세포 주사 48시간 전에 조사하였다. 2일차에, 확장된 T 세포를 MOLM13 세포를 제공받은 마우스에 주사하거나 전체 PBMC를 MV4;11 세포를 제공받은 마우스에 주사하였다. 이어서, ABX1446을 7일차, 14일차, 21일차 및 28일차에 주사하였다. 이어서, 말초 혈액 내의 종양 부담을 FACS, 및 획득된 세포의 수/획득된 비드의 수 × 1000의 방정식을 이용하여 정량화하였다.
도 36은 ABX1446 및 ABX1520이 MOLM13 마우스 AML 모델에서 순환 종양 부담을 감소시켰음을 나타낸다. NTB는 비-종양 보유 마우스를 나타내고, 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, hz45G10은 Fc 영역에 N297G 치환을 포함하는 ILT3 항체를 나타내고, IO-202는 ILT3을 길항하는 단클론 항체를 나타내고, ABX1559는 ILT3 Fab 결합 영역이 결여된 항체에 상응하여 항-CD3만 있는 대조군을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군을 나타낸다.
도 37은 ABX1446이 2주차에 MV4;11 마우스 AML 모델에서 순환 종양 부담을 감소시켰음을 나타낸다. NTB는 비-종양 보유 마우스를 나타내고, 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군(좌측에서 우측으로, 0.01 mpk, 0.1 mpk 및 1 mpk의 증가하는 농도에서)을 나타낸다.
도 38은 ABX1446이 3주차에 MV4;11 마우스 AML 모델에서 순환 종양 부담을 감소시켰음을 나타낸다. NTB는 비-종양 보유 마우스를 나타내고, 항-KLH는 음성 대조군을 나타내고, 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적)은 양성 대조군(좌측에서 우측으로, 0.01 mpk, 0.1 mpk 및 1 mpk의 증가하는 농도에서)을 나타낸다.
도 39는 마우스 AML 모델에서의 치료 스키마 및 종양 부담 정량화를 나타낸다. CD34+ 조혈 줄기 세포(HSC)를 MV4;11 세포 주사 3개월 전에 마우스에 이식하였다. 7일차, 14일차, 21일차 및 28일차에, ABX1446을 주사하였다. 이어서, 종양 부담을 FACS, 및 획득된 세포의 수/획득된 비드의 수 × 1000의 방정식을 이용하여 정량화하였다.
도 40은 ABX1446이 CD34+ 인간화 마우스에서 순환 종양 부담을 감소시켰음을 나타낸다. 항-KLH(음성 대조군), 비베코타맙(CD123 × CD3 이중특이적; 양성 대조군) 및 ABX1446을 1 mpk로 투약한 경우, 혈액 1 μL 당 순환 MV4;11 세포의 수가 크게 감소하였다.
도 41은 일차 M5 AML 골수 배양물에서 ABX1446 유도된 용량 의존적 종양 세포 고갈을 나타낸다.
도 42는 일차 M5 AML 골수 배양물에서 ABX1446 유도된 용량 의존적 T 세포 활성화를 나타낸다.
도 43은 일차 MM 골수 배양물에서 ABX1446 유도된 용량 의존적 종양 세포 고갈을 나타낸다.
도 44는 일차 MM 골수 배양물에서 ABX1446 유도된 용량 의존적 T 세포 활성화를 나타낸다.
본 개시는 부분적으로, 본원에 제공된 신규한 결합제 및 그의 놀라운 특성에 기반한다.
본원에 달리 정의되지 않는 한, 본 개시 내용에서 사용되는 과학적 및 기술적 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가질 것이다. 기재된 용어에 대한 임의의 설명이 참조에 의해 본원에 포함된 임의의 문서와 충돌하는 경우, 아래에 기재된 용어에 대한 설명이 우선한다.
용어 '결합제'는 특이적 항원 또는 표적(예컨대, ILT3 및/또는 CD3)에 결합하는 분자를 지칭한다. 결합제는 단백질, 펩타이드, 핵산, 탄수화물, 지질 또는 저분자량 화합물을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 결합제는 전장 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제는 항체의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 결합제는 대안적인 단백질 스캐폴드 또는 인공 스캐폴드(예컨대, 비면역글로불린 골격)를 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제는 항원 결합 부위를 포함하는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 결합제는 적어도 2개의 항원 결합 부위를 포함하는 이중특이적 분자이다.
용어 '결합한다' 또는 '결합하는'은 예를 들어, 복합체를 형성하는 것을 포함하는 분자 사이의 상호작용을 지칭한다. 상호작용은 예를 들어, 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호작용, 및/또는 반 데르 발스 상호작용을 포함하는 비공유 상호작용일 수 있다. 복합체는 또한 공유 또는 비공유 결합, 상호작용 또는 힘에 의해 함께 유지되는 2개 이상의 분자의 결합을 포함할 수 있다. 항체상의 단일 항원 결합 부위와 표적 분자, 예컨대, 항원의 단일 에피토프 사이의 전체 비공유 상호작용의 강도는 해당 에피토프에 대한 항체 또는 기능적 단편의 친화도이다. 1가 항원에 대한 결합 분자(예컨대, 항체)의 결합 속도(kon)에 대한 해리 속도(koff)의 비(koff/kon)는 해리 상수 KD이며, 이는 친화도와 반비례적으로 관련된다. KD 값이 낮을수록, 항체의 친화도가 높다. KD 값은 항체와 항원의 상이한 복합체에 대해 다르며, kon 및 koff 둘 모두에 따라 다르다. 본원에 제공된 항체에 대한 해리 상수 KD는 본원에 제공된 임의의 방법 또는 당업자에게 잘 알려진 임의의 다른 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 하나의 결합 부위에서의 친화도가 항상 항체와 항원 사이의 실제 상호작용 강도를 반영하는 것은 아니다. 다가 항원과 같은 다수의 반복 항원성 결정인자를 함유하는 복합 항원이 다수의 결합 부위를 함유하는 항체와 접촉할 때, 하나의 부위에서 항체와 항원의 상호작용은 제2 부위에서의 반응의 확률을 증가시킬 것이다. 다가 항체와 항원 사이의 이러한 다중 상호작용의 강도를 결합력이라고 한다.
본원에 기재된 결합 분자와 관련하여, 용어 예컨대, '결합하는', '특이적으로 결합하는', 및 유사한 용어는 또한 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 항원, 예컨대, 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인의 결합 분자를 지칭한다. 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 예를 들어, 면역검정, Octet®, Biacore®, 또는 당업자에게 알려진 다른 기술에 의해 식별될 수 있다. 일부 구현예에서, 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 실험 기술, 예컨대, 효소 결합 면역흡착 검정[enzyme linked immunosorbent assay, ELISA]을 사용하여 결정된 바와 같이 임의의 교차 반응성 항원보다 더 높은 친화도로 항원에 결합할 때 항원에 결합하거나 특이적으로 결합한다. 전형적으로, 특이적 또는 선택적 반응은 배경 신호 또는 잡음의 적어도 2배일 것이며, 배경의 10배 초과일 수 있다. 결합 특이성에 관한 논의에 대해 예컨대, 문헌[Fundamental Immunology 332-36(Paul ed., 2d ed. 1989)]을 참조한다. 특정 구현예에서, '비표적' 단백질에 대한 결합 분자 또는 항원 결합 도메인의 결합의 정도는 예를 들어, 형광 활성화 세포 분류[fluorescence activated cell sorting, FACS] 검정에 의해 결정된 바와 같이, 그의 특정 표적 항원에 대한 결합 분자 또는 항원 결합 도메인의 결합의 약 10% 미만이다. 항원에 결합하는 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 결합 분자가 예를 들어, 항원을 표적화하는 데 있어 치료제 및/또는 진단제로서 유용하도록 충분한 친화도로 항원에 결합할 수 있는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 항원에 결합하는 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 1 μM, 800 nM, 600 nM, 550 nM, 500 nM, 300 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM 이하의 해리 상수(KD)를 갖는다. 특정 구현예에서, 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 상이한 종으로부터의 항원 사이에서 보존되는 항원의 에피토프에 결합한다.
용어 '항체'는 본원에서 가장 넓은 의미로 사용되며, 원하는 항원 결합 활성을 나타내는 한, 적어도 하나의 항원 결합 부위를 통해 표적을 인식하고 이에 결합하는 면역글로불린 분자, 다클론 항체, 재조합 항체, 단클론 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 이중특이적 항체, 다중특이적 항체, 디아바디, 트라이바디, 테트라바디, 단일 쇄 Fv[single chain Fv, scFv] 항체, 및 항체 단편을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 항체 구조를 포함한다.
전형적인 4-쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경[light, L] 쇄 및 2개의 동일한 중[heavy, H] 쇄로 구성된 이종사합체 당단백질이다. IgG의 경우에, 4-쇄 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 쇄는 1개의 공유 이황화물 결합에 의해 H 쇄에 연결되는 반면, 2개의 H 쇄는 H 쇄 동종형에 따라 하나 이상의 이황화물 결합에 의해 서로 연결된다. 각각의 H 및 L 쇄는 또한 규칙적으로 이격된 내부쇄 이황화물 다리를 갖는다. 각각의 H 쇄는 N-말단에서, 가변 도메인[VH]에, 이어서 α와 γ 쇄 각각에 대해 3개의 불변 도메인[constant domain, CH] 및 μ와 ε 동종형에 대해 4개의 CH 도메인을 갖는다. 각각의 L 쇄는 N-말단에서, 가변 도메인[VL]에, 이어서 이의 다른 말단에서 불변 도메인을 갖는다. VL은 VH와 정렬되고, CL은 중쇄의 제1 불변 도메인[CH1]과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성하는 것으로 여겨진다. VH와 VL이 함께 페어링되면 단일 항원 결합 부위를 형성한다. 상이한 클래스의 항체의 구조 및 특성에 대해서는, 예를 들어, 문헌[Basic and Clinical Immunology 71(Stites et al. eds., 8th ed. 1994); 및 Immunobiology(Janeway et al. eds., 5th ed. 2001)]을 참조한다.
용어 'Fab' 또는 'Fab 영역'은 항원에 결합하는 항체 영역을 지칭한다. 통상적인 IgG는 일반적으로 2개의 Fab 영역을 포함하며, 각각은 Y-형 IgG 구조의 2개의 팔 중 하나에 존재한다. 각각의 Fab 영역은 전형적으로 중쇄 및 경쇄 각각의 하나의 가변 영역 및 하나의 불변 영역으로 구성된다. 보다 구체적으로, Fab 영역에서 중쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VH 및 CH1 영역이고, Fab 영역에서 경쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VL 및 CL 영역이다. Fab 영역 내의 VH, CH1, VL 및 CL은 본 개시에 따른 항원 결합 능력을 부여하기 위해 다양한 방식으로 배열될 수 있다. 예를 들어, 통상적인 IgG의 Fab 영역과 유사하게, VH 및 CH1 영역은 하나의 폴리펩타이드상에 있을 수 있고, VL 및 CL 영역은 별개의 폴리펩타이드상에 있을 수 있다. 또는, VH, CH1, VL 및 CL 영역은 모두 동일한 폴리펩타이드상에 있을 수 있고, 하기 섹션에 보다 상세히 기재된 바와 같이 상이한 순서로 배향될 수 있다.
일부 구현예에서, Fab는 단일쇄 Fab[single chain Fab, scFab]이며, 여기서 Fab의 중쇄 및 경쇄는 폴리펩타이드 링커에 의해 연결된다.
용어 '가변 영역', '가변 도메인', 'V 영역' 또는 'V 도메인'은 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 아미노 말단에 위치하고 중쇄에서 약 120 내지 130개의 아미노산 및 경쇄에서 약 100 내지 110개의 아미노산의 길이를 갖는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 부분을 지칭하고, 그의 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다. 중쇄의 가변 영역은 'VH'로서 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 영역은 'VL'로서 지칭될 수 있다. 용어 '가변'은 가변 영역의 특정 분절이 항체 사이에서 서열에서 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 영역은 항원 결합을 매개하고, 그의 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 정의한다. 그러나, 가변성은 가변 영역의 110개의 아미노산 범위에 걸쳐 고르게 분포되지 않는다. 대신에, V 영역은, 각각이 약 9-12개의 아미노산 길이인 "초가변 영역"이라고 불리는 더 큰 가변성(예컨대, 극도의 가변성)의 짧은 영역에 의해 분리된 약 15-30개의 아미노산의 프레임워크 영역[framework region, FR]이라고 불리는 덜 가변적인(예컨대, 비교적 불변적인) 스트레치(stretch)로 이루어진다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 각각은 3개의 초가변 영역에 의해 연결된, 크게는 β 시트 입체배열을 채택한 4개의 FR을 포함하여, β 시트 구조를 연결하고, 그리고 일부 경우에는 β 시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성한다. 각각의 쇄의 초가변 영역은 FR에 의해 근접하여 함께 유지되고, 그리고 다른 쇄로부터의 초가변 영역과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다(예컨대, 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest(5th ed. 1991)]을 참조한다). 불변 영역은 항원에 항체를 결합하는 것에 직접적으로 관여하지는 않지만, 항체 의존적 세포성 세포독성[antibody dependent cellular cytotoxicity, ADCC] 및 보체 의존적 세포독성[complement dependent cytotoxicity, CDC]에서의 항체의 참여와 같은 다양한 효과기 기능을 나타낸다. 가변 영역은 상이한 항체 사이의 서열이 광범위하게 상이하다. 구체적인 구현예에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다.
용어 '카바트에 따른 가변 영역 잔기 넘버링' 또는 '카바트에서와 같은 아미노산 위치 넘버링', 및 이의 변형은 위의 문헌[Kabat et al.]에서 항체의 편집의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역에 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 이 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축 또는 이들 내로의 삽입에 상응하는 더 소수의 또는 추가적인 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 52번째 잔기 뒤에 단일 아미노산 삽입(카바트에 따른 잔기 52a) 및 82번째 잔기 뒤에 3개의 삽입된 잔기(예컨대, 카바트에 따른 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카바트 넘버링은 항체 서열의 상동성 영역에서 '표준' 카바트 넘버링된 서열과의 정렬에 의해 주어진 항체에 대하여 결정될 수 있다. 카바트 넘버링 시스템은 일반적으로 가변 도메인 내의 잔기를 지칭할 때 사용된다(경쇄의 대략적인 1-107번째 잔기 및 중쇄의 1-113번째 잔기)(예컨대, 위의 문헌[Kabat et al.]). 'EU 넘버링 시스템' 또는 'EU 지수'는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역 내의 잔기를 지칭할 때 사용된다(예컨대, 위의 문헌[Kabat et al.]에서 보고된 EU 지수). '카바트에서와 같은 EU 지표'는 인간 IgG 1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 다른 넘버링 시스템은 예를 들어, AbM, 코티아, 접촉점, IMGT, 및 AHon에 의해 기재되었다.
항체와 관련하여 사용되는 경우 용어 '중쇄'는 약 50-70 kDa의 폴리펩타이드 쇄를 지칭하며, 여기서 아미노 말단 부분은 약 120 내지 130개 또는 그 초과의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카복시 말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 불변 영역은 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열에 기반하여 알파[alpha, α], 델타[delta, δ], 엡실론[epsilon, ε], 감마[gamma, γ], 및 뮤[mu, μ]로 지칭되는 5개의 별개의 유형(예컨대, 동종형) 중 하나일 수 있다. 별개의 중쇄는 크기가 상이하다. α, δ, 및 γ는 대략 450개의 아미노산을 함유하는 반면, μ 및 ε는 대략 550개의 아미노산을 함유한다. 경쇄와 조합되는 경우, 이러한 별개의 유형의 중쇄는 각각 IgG의 4개의 하위부류, 즉 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 5개의 잘 알려진 클래스(예컨대, 동종형)의 항체, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 생성한다.
항체와 관련하여 사용되는 경우 용어 '경쇄'는 약 25 kDa의 폴리펩타이드 쇄를 지칭하며, 여기서 아미노 말단 부분은 약 100 내지 110개 또는 그 초과의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카복시 말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 경쇄의 대략적인 길이는 211 내지 217개의 아미노산이다. 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여 카파[κ] 또는 람다[λ]로서 지칭되는 2개의 별개의 유형이 존재한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '초가변 영역', 'HVR', '상보성 결정 영역' 및 'CDR'은 상호교환적으로 사용된다. 'CDR'은 면역글로불린(Ig 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역(H1, H2 또는 H3) 중 하나, 또는 항체 VL β-시트 프레임워크의 비프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역(L1, L2 또는 L3) 중 하나를 지칭한다. VH 도메인 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 또한 각각 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3으로서 지칭된다. VL 도메인 내의 CDR1, CDR2 및 CDR3은 또한 각각 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3으로 지칭된다. 따라서, CDR은 프레임워크 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다.
CDR 영역은 당업자에게 잘 알려져 있고, 잘 알려진 넘버링 시스템에 의해 정의되었다. 예를 들어, 카바트 상보성 결정 영역[complementarity determining region, CDR]은 서열 가변성에 기반하며, 가장 통상적으로 사용된다(예컨대, 위의 문헌[Kabat et al.]; 문헌[Nick Deschacht et al., J Immunol 2010; 184:5696-5704]을 참조한다). 코티아는 그 대신에, 구조적 루프의 위치를 지칭한다(예컨대, 문헌[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-17(1987)]을 참조한다). 카바트 넘버링 규약을 사용하여 넘버링된 경우 코티아 CDR-H1 루프의 단부는 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다(이것은 카바트 넘버링 방식이 H35A와 H35B에서 삽입을 배치하기 때문이다; 35A와 35B 둘 모두 존재하지 않으면, 루프는 32에서 끝난다; 단지 35A만 존재하면, 루프는 33에서 끝난다; 35A와 35B 둘 모두 존재하면, 루프는 34에서 끝난다). AbM 초가변 영역은 카바트 CDR 및 코티아 구조적 루프 사이에 절충안을 나타내고, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다(예컨대, 문헌[Antibody Engineering Vol. 2(Kontermann and Dbel eds., 2d ed. 2010)]을 참조한다). '접촉점' 초가변 영역은 이용 가능한 복합체 결정 구조의 분석을 기반으로 한다. 개발되어 널리 채택되고 있는 또 다른 보편적인 넘버링 시스템은 ImMunoGeneTics[IMGT] 정보 시스템®(문헌[Lafranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77(2003)]). IMGT는 인간 및 기타 척추동물의 면역글로불린[immunoglobulin, IG], T-세포 수용체[T-cell receptor, TCR] 및 주요 조직적합성 복합체[major histocompatibility complex, MHC]를 전문으로 하는 통합 정보 시스템이다. 본원에서, CDR은 아미노산 서열 및 경쇄 또는 중쇄 내의 위치 둘 모두의 측면에서 지칭된다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조 내에서 CDR의 '위치'는 종 사이에서 보존되고 루프라고 불리는 구조에 존재하기 때문에, 구조적 특징에 따라 가변 도메인 서열을 정렬하는 넘버링 시스템을 사용함으로써, CDR 및 프레임워크 잔기가 용이하게 식별된다. 이 정보는 한 종의 면역글로불린으로부터 CDR 잔기를 전형적으로 인간 항체로부터 수용체 프레임워크로 이식 및 대체하는 데 사용될 수 있다. 추가적인 넘버링 시스템(AHon)이 문헌[Honegger and Plckthun, J. Mol. Biol. 309: 657-70 (2001)]에 의해 개발되었다. 예를 들어, 카바트 넘버링 및 IMGT 독특한 넘버링 시스템을 포함하는 넘버링 시스템 사이의 상응성은 당업자에게 잘 알려져 있다(예컨대, 위의 문헌[Kabat], 위의 문헌[Chothia and Lesk]; 위의 문헌[Martin]; 위의 문헌[Lefranc et al.]을 참조한다). 이들 초가변 영역 또는 CDR의 각각으로부터의 잔기가 하기 표에 예시되어 있다.
다양한 넘버링 시스템에 따른 예시적인 CDR
주어진 CDR의 경계는 식별을 위해 사용되는 방식에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대, 가변 영역의 용어 'CDR' 및 '상보적 결정 영역'뿐만 아니라 항체 또는 이의 영역의 개별 CDR(예컨대, CDR-H1, CDR-H2)은 본원에 상술한 알려진 방식 중 임의의 것에 의해 정의된 바와 같은 상보적 결정 영역을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우에, 특정 CDR 또는 CDR들, 예컨대, IMGT, 카바트, 코티아, 또는 접촉점 방법에 의해 정의된 바와 같은 CDR의 식별을 위한 방식이 명시된다. 다른 경우에, CDR의 특정 아미노산 서열이 주어진다. CDR 영역은 또한 다양한 넘버링 시스템의 조합, 예컨대, 카바트 및 코티아 넘버링 시스템의 조합, 또는 카바트 및 IMGT 넘버링 시스템의 조합에 의해 정의될 수 있음을 주목해야 한다. 따라서, '특이적 VH에 기재된 바와 같은 CDR1'과 같은 용어는 상술한 예시적인 CDR 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 임의의 CDR1을 포함하지만, 이에 의해 제한되지 않는다. 일단 가변 영역(예컨대, VH 또는 VL)이 주어지면, 당업자는 영역 내의 CDR이 상이한 넘버링 시스템 또는 이들의 조합에 의해 정의될 수 있음을 이해할 것이다.
초가변 영역은 다음과 같이 '연장된 초가변 영역'을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34(L1), 46-56 또는 50-56(L2) 및 89-97 또는 89-96(L3), 그리고 VH에서 26-35 또는 26-35A(H1), 50-65 또는 49-65(H2) 및 93-102, 94-102 또는 95-102(H3).
용어 '불변 영역' 또는 '불변 도메인'은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 효과기 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카복시 말단 부분을 지칭한다. 용어는 면역글로불린의 다른 부분인 항원 결합 부위를 함유하는 가변 영역과 비교하여 보다 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2, 및 CH3 영역 및 경쇄의 CL 영역을 함유할 수 있다.
용어 '프레임워크' 또는 'FR'은 CDR에 측접하는 가변 영역 잔기를 지칭한다. FR 잔기는 예를 들어, 키메라, 인간화, 인간, 도메인 항체, 디아바디, 선형 항체 및 이중특이적 항체에 존재한다. FR 잔기는 초가변 영역 잔기 또는 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
본원의 용어 'Fc 영역'은 예를 들어, 천연 서열 Fc 영역, 재조합 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단의 영역을 정의하기 위해 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계가 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 종종 위치 Cys226, 또는 Pro230의 아미노산 잔기로부터 이의 카복시 말단까지의 스트레치로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 리신(EU 넘버링 시스템에 따른 447번 잔기)는 예를 들어, 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산을 재조합 가공함에 의하여, 또는 항체의 생산 또는 정제 동안, 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 있거나 또는 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. '기능적 Fc 영역'은 천연 서열 Fc 영역의 '효과기 기능'을 보유한다. 예시적인 '효과기 기능'은 하기를 포함한다: C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식균작용; 세포 표면 수용체(예컨대, B 세포 수용체)의 하향 조절, 등. 이러한 효과기 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 영역 또는 결합 도메인(예컨대, 항체 가변 영역 또는 도메인)과 조합되는 것을 필요로 하고, 당업자에게 알려진 다양한 검정을 사용하여 평가될 수 있다. '변이체 Fc 영역'은 적어도 하나의 아미노산 변형(예컨대, 치환, 첨가 또는 결실)에 의해 천연 서열 Fc 영역의 것과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역에 또는 모체 폴리펩타이드의 Fc 영역에 비해 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들어, 천연 서열 Fc 영역에서 또는 모체 폴리펩타이드의 Fc 영역에서 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 또는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원의 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모체 폴리펩타이드의 Fc 영역과 적어도 약 80%의 상동성, 또는 그와 적어도 약 90%의 상동성, 예를 들어, 그와 적어도 약 95%의 상동성을 보유할 수 있다.
용어 '항체 단편'은 항체의 일부 및 일반적으로 항원 결합 부위를 포함하는 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 단일 쇄 항체 분자, scFv, sc(Fv)2, 이황화물 결합된 scFv[disulfide-linked scFv, dsscFv], 디아바디, 트라이바디, 테트라바디, 미니바디, 이중 가변 도메인 항체[dual variable domain antibody, DVD], 단일 가변 도메인 항체(예컨대, 낙타과 항체), 및 항원 결합 항체 단편에서 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 '단클론 항체'는 단일 항원성 결정인자 또는 에피토프의 고도로 특이적 인식 및 결합에 관련된 실질적으로 동질적인 항체 집단을 지칭한다. 용어 '단클론 항체'는 무손상 항체 및 전장 항체뿐만 아니라 항체 단편(예컨대, Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단일 쇄 항체, scFv, 항원 결합 항체 단편을 포함하는 융합 단백질 및 적어도 하나의 항원 결합 부위를 포함하는 임의의 기타 변형된 면역글로불린 분자를 포함한다. 게다가, '단클론 항체'는 하이브리도마 생산, 파지 라이브러리 디스플레이, 재조합 발현 및 형질전환 동물을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 수의 기법에 의해 만들어진 이러한 항체를 지칭한다.
용어 '에피토프' 또는 '항원성 결정인자'는 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 특정 항체에 의해 인식되고 결합될 수 있는 항원 또는 표적의 부분을 지칭한다. 항원 또는 표적이 폴리펩타이드인 경우, 에피토프는 단백질의 삼차 접힘에 의해 병치된 인접한 아미노산 및 비인접한 아미노산 둘 모두로부터 형성될 수 있다. 인접한 아미노산에서 형성된 에피토프(또한 선형 에피토프로서 지칭됨)는 전형적으로, 단백질 변성 시에 유지되고, 반면 삼차 접힘에 의해 형성된 에피토프(또한 입체형태 에피토프로서 지칭됨)는 전형적으로 단백질 변성 시에 상실된다. 에피토프는 전형적으로, 독특한 공간적 입체형태에서 적어도 3개, 그리고 더 일반적으로, 적어도 5, 6, 7 또는 8-10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프는 공개적으로 이용 가능한 많은 생물정보학 소프트웨어 도구 중 어느 하나를 사용하여 예측할 수 있다. X-선 결정학은 항원/항체 복합체의 아미노산 잔기 상호작용을 분석함으로써 표적 단백질상의 에피토프의 특징을 규명하는 데 사용될 수 있다.
용어 '키메라 항체'는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 제1 공급원 또는 종에서 유래한 반면, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지는 상이한 공급원 또는 종에서 유래한 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '인간화 항체'는 인간 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 지칭하며, 여기서 천연 CDR 아미노산 잔기는 비인간 항체(예컨대, 마우스, 래트, 토끼, 또는 비인간 영장류)로부터의 상응하는 CDR에서의 잔기에 의해 대체되고, 여기서 비인간 항체는 원하는 특이성, 친화도 및/또는 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 인간 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 하나 이상의 프레임워크 영역 아미노산 잔기는 비인간 항체로부터의 상응하는 잔기에 의해 대체된다. 게다가, 인간화 항체는 인간 항체 또는 비인간 항체에서 발견되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 변형은 항체 특성을 추가로 정제 및/또는 최적화하기 위해 이루어진다. 일부 구현예에서, 인간화 항체는 인간 면역글로불린 불변 영역(예컨대, CH1, CH2, CH3, Fc 및/또는 힌지 영역)의 적어도 일부를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '인간 항체'는 인간에 의해 생산된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 항체 및/또는 인간 항체를 만드는 기술 분야의 당업자에게 알려진 기법 중 임의의 것을 사용하여 만들어진 항체를 지칭한다. 이러한 기법은 파지 디스플레이 라이브러리, 효모 디스플레이 라이브러리, 형질전환 동물, 재조합 단백질 생산, 및 B-세포 하이브리도마 기법을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '특이적으로 결합한다'는 대체 물질보다 특정 항원, 에피토프, 단백질 또는 표적 분자에 대해 더 빈번하게, 더 신속하게, 더 긴 지속시간으로, 더 큰 친화도로, 또는 위의 것들의 일부 조합으로 상호작용하는 작용제를 지칭한다. 용어 '특이적으로 결합한다' 및 '결합한다'은 일부 구현예에서 상호교환적으로 사용된다. 항원에 특이적으로 결합하는 결합제는 예를 들어, 면역검정, ELISA, 표면 플라스몬 공명[surface plasmon resonance, SPR], 또는 당업자에게 알려진 다른 기법에 의해 식별될 수 있다. 일부 구현예에서, 항원(예컨대, 인간 ILT3 또는 CD3)에 특이적으로 결합하는 작용제는 관련 항원(예컨대, 사이노 ILT3 또는 CD3)에 결합할 수 있다. 일반적으로, 항원에 특이적으로 결합하는 결합제는 상이한 항원에 대한 그의 친화도보다 더 높은 친화도로 표적 항원에 결합할 것이다. 상이한 항원은 관련 항원일 수 있다. 일부 구현예에서, 항원에 특이적으로 결합하는 결합제는 상이한 항원에 대한 그의 친화도보다 적어도 20배 더 큰, 적어도 30배 더 큰, 적어도 40배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 60배 더 큰, 적어도 70배 더 큰, 적어도 80배 더 큰, 적어도 90배 더 큰, 또는 적어도 100배 더 큰 친화도로 표적 항원에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 항원에 특이적으로 결합하는 결합제는 결합이 본원에 기재되거나 달리 당업계에 알려진 검정을 사용하여 검출될 수 없는 낮은 친화도로 상이한 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 친화도는 본원에 기재되거나 당업자에게 알려진 바와 같은 Biacore 시스템에서 SPR 기술을 사용하여 측정된다.
용어 '폴리펩타이드' 및 '펩타이드' 및 '단백질'은 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭한다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 그것은 변형된 아미노산을 포함할 수 있으며, 그것은 비아미노산에 의해 중단될 수 있다. 용어는 또한 자연적으로 변형된 또는 개입, 예를 들어, 이황화물 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다. 예를 들어, 비자연 아미노산뿐만 아니라 당업계에 알려진 다른 변형을 포함하나 이에 제한되지 않는 아미노산의 하나 이상의 유사체를 함유하는 폴리펩타이드가 또한 정의 내에 포함된다. 본 개시의 폴리펩타이드는 항체를 기반으로 할 수 있기 때문에, 용어 '폴리펩타이드'는 단일 쇄로서의 폴리펩타이드 및 2개 이상의 연관된 쇄의 폴리펩타이드를 포함하는 것으로 이해된다.
용어 '폴리뉴클레오타이드' 및 '핵산'은 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 임의의 길이의 뉴클레오타이드의 중합체를 지칭하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오타이드는 데옥시리보뉴클레오타이드, 리보뉴클레오타이드, 변형된 뉴클레오타이드 또는 염기, 및/또는 이들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 중합효소에 의해 중합체에 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드의 맥락에서 용어 '동일한' 또는 '동일성' 퍼센트는 임의의 보존적 아미노산 치환을 서열 동일성의 일부로서 고려하지 않으면서, 최고 상응성을 위해 비교되고 정렬될 때 (필요하면, 갭을 도입함), 동일하거나 또는 명시된 백분율의 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기를 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 동일성 퍼센트는 서열 비교 소프트웨어 또는 알고리즘을 사용하여 또는 시각적 검사에 의해 측정될 수 있다. 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열의 정렬을 수득하기 위해 사용될 수 있는 다양한 알고리즘 및 소프트웨어는 당업계에 잘 알려져 있다. 이들은 BLAST, ALIGN, Megalign, BestFit, GCG Wisconsin Package, 및 이들의 변형을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 본 개시의 2개의 핵산 또는 폴리펩타이드는 실질적으로 동일한데, 이는 이들이 최고 상응성을 위해 비교되고 정렬될 때, 서열 비교 알고리즘을 사용하거나 또는 시각적 검사에 의해 측정된 바와 같이, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 그리고 일부 구현예에서, 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기 동일성을 갖는다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 동일성은 적어도 약 10개, 적어도 약 20개, 적어도 약 20-40개, 적어도 약 40-60개, 적어도 약 60-80개의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 길이, 또는 이들 사이의 임의의 정수 값의 길이인 서열의 영역에 걸쳐 존재한다. 일부 구현예에서, 동일성은 60-80개의 뉴클레오타이드 또는 아미노산보다 긴 영역, 예컨대, 적어도 약 80-100개의 뉴클레오타이드 또는 아미노산에 걸쳐 존재하고, 일부 구현예에서 서열은 비교될 서열, 예를 들어, (i) 뉴클레오타이드 서열의 코딩 영역 또는 (ii) 아미노산 서열의 전장에 걸쳐 실질적으로 동일하다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 '벡터'는 숙주 세포에서 하나 이상의 관심 유전자(들) 또는 서열(들)을 전달하고, 일반적으로 발현할 수 있는 작제물을 의미한다. 벡터의 예는 바이러스 벡터, 노출 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 플라스미드, 코스미드 또는 파지 벡터, 양이온성 축합제와 연관된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 리포좀에서 캡슐화된 DNA 또는 RNA 발현 벡터를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '단리된'은 자연에서 발견되지 않는 형태의 폴리펩타이드, 가용성 단백질, 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포 또는 조성물을 지칭한다. '단리된' 항체는 그것이 유래하는 세포 공급원으로부터의 재료가 실질적으로 없다. 일부 구현예에서, 단리된 폴리펩타이드, 가용성 단백질, 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포 또는 조성물은 자연에서 발견되는 형태가 더 이상 아닐 정도로 정제된 것들이다. 일부 구현예에서, 단리된 폴리펩타이드, 가용성 단백질, 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포 또는 조성물은 실질적으로 순수하다. 폴리펩타이드, 가용성 단백질, 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포 또는 조성물은 자연 공급원(예컨대, 조직) 또는 조작된 세포주와 같은 공급원에서 단리될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '실제적으로 순수한'은 적어도 50% 순수한(즉, 오염체가 없는), 적어도 90% 순수한, 적어도 95% 순수한, 적어도 98% 순수한, 또는 적어도 99% 순수한 재료를 지칭한다.
용어 '대상'은 인간, 비인간 영장류, 개, 고양이, 토끼, 및 설치류 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 동물(예컨대, 포유동물)을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 '담체'는 임의의 부형제, 희석제, 충전제, 염, 완충액, 안정화제, 가용화제, 오일, 지질, 지질 함유 소포, 미세구, 리포좀 캡슐화 또는 약학 제형 중에 사용하기 위해 당업계에 잘 알려진 다른 재료를 지칭한다. 담체, 부형제 또는 희석제의 특성은 특정 적용을 위한 투여 경로에 따라 달라질 것이라는 것이 이해될 것이다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 '약학적으로 허용되는'은 규제 기관이 승인하였거나 승인할 수 있거나 또는 미국 약전, 유럽 약전 또는 인간을 포함하여 동물에 사용하기 위한 다른 일반적으로 인정된 약전에 열거된 물질을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '약학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 보조제' 또는 '허용되는 약학적 담체'는 적어도 하나의 치료제와 함께 대상에게 투여될 수 있고, 일반적으로 안전하고, 비독성이며, 치료제의 약리학적 활성에 영향을 미치지 않는 부형제, 담체 또는 보조제를 지칭한다. 일반적으로, 당업자 및 정부 기관은 약학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 보조제를 임의의 제형 또는 임의의 약학 조성물의 비활성 성분인 것으로 고려한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '약학 조성물' 또는 '약학 제형'은 결합제의 생물학적 활성이 효과적일 수 있도록 하는 형태의 제제를 지칭한다. 약학 제형 또는 조성물은 일반적으로 약학적으로 허용되는 부형제, 담체, 보조제, 완충액 등과 같은 추가적인 구성요소를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '유효량' 또는 '치료적 유효량'은 (i) 대상에서의 질환, 장애 또는 병태, 및/또는 (ii) 대상에서의 증상의 중증도 및/또는 지속기간을 감소 및/또는 호전시키기에 충분한 작용제의 양을 지칭한다. 용어는 또한 (i) 주어진 질환, 장애 또는 병태의 진전 또는 진행의 감소 또는 호전, (ii) 주어진 질환, 장애 또는 병태의 재발, 발달 또는 발병의 감소 또는 호전, 및/또는 (iii) 다른 작용제 또는 요법(예컨대, 본원에 제공된 결합제 이외의 작용제)의 예방적 또는 치료적 효과(들)의 개선 또는 향상에 필요한 작용제의 양을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '치료하다' 또는 '치료' 또는 '치료하는 것' 또는 '완화하다' 또는 '완화' 또는 '완화하는 것'은 병리학적 병태 또는 장애를 치유하고/치유하거나, 늦추고/늦추거나, 이의 증상을 경감하고/경감하거나, 이의 진행을 중단시키는 치료책을 지칭한다. 따라서, 치료가 필요한 이들은 장애가 이미 있는 이들을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 '면역 반응'은 선천성 면역계 및 적응성 면역계 둘 모두로부터의 반응을 포함한다. 이는 세포 매개 반응 및/또는 체액성 면역 반응 둘 모두를 포함한다. T-세포 및 B-세포 반응 둘 모두뿐만 아니라 자연살해[natural killer, NK] 세포, 단핵구, 대식세포, 수지상세포 등과 같은 면역계의 다른 세포로부터의 반응을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, '약' 또는 '대략' 값 또는 매개변수에 대한 언급은 해당 값 또는 매개변수에 관한 구현예를 포함한다(그리고 설명한다). 예를 들어, "약 X"에 관한 설명은 "X"의 설명을 포함한다.
본 명세서 및 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥에서 달리 지시되지 않는 한, 복수의 지시대상을 포함한다.
구현예가 본원에서 용어 '포함하는'으로 기재될 때는 언제나, '이로 이루어지는' 및/또는 '본질적으로 이로 이루어지는'의 용어로 기재된 달리 유사한 구현예가 또한 제공되는 것으로 이해된다. 구현예가 본원에서 어구 '본질적으로 이로 이루어지는'으로 기재될 때는 언제나, '이로 이루어지는'의 용어로 기재된 달리 유사한 구현예가 또한 제공되는 것으로 이해된다.
본원에서 'A 및/또는 B'와 같은 어구에서 사용된 바와 같은 용어 '및/또는'은 A 및 B 둘 모두; A 또는 B; A(단독); B(단독)을 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, 'A, B 및/또는 C'와 같은 어구에서 사용된 바와 같은 용어 '및/또는'은 다음의 구현예 각각을 포함하는 것으로 의도된다: A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
5.1 ILT3 결합 영역
여기에 제공된 결합제는 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 결합하는 영역을 포함하고, 따라서 본 결합제는 ILT3 결합제이다.
인간 ILT3(UniProtKB 번호 Q8NHJ6) 및 사이노몰구스 원숭이[cynomolgus monkey, '사이노'] ILT3(NCBI Ref 번호 XP_015297198)에 대한 아미노산[amino acid, aa] 서열이 알려져 있다. ILT3은 대략 47 kDa의 예측 분자량을 갖는 단일 통과 유형 I 막관통 단백질이다. ILT3는 정상 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포와 같은 골수성 항원 제시 세포에서 주로 발현되는 것으로 관찰되었다. ILT3은 2개의 Ig-유사 C2 유형 도메인을 포함하는 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 3개의 ITIM 도메인을 함유하는 긴 세포질 도메인을 특징으로 한다(예컨대, 문헌[Cella et al., 1997, J. Exp. Med., 185:1743-1751]을 참조한다). 2개의 Ig-유사 C2-유형 도메인은 본원에서 도메인 1[domain 1, D1] 및 도메인 2[domain 2, D2]로서 지칭될 수 있다. D1은 단백질의 N-말단 부분에 위치하고, D2는 막관통 영역에 가장 가깝게 위치한다. UniProtKB 내에서 특징 규명되는 바와 같이, 인간 ILT3은 448개의 아미노산[aa]의 단백질이며 - 신호 서열은 aa 1-21이고, 세포외 도메인은 aa 22-259이고, 막관통 영역은 aa 260-280이고, 세포질 도메인은 aa 281-448이다. 세포외 도메인 내에서, D1은 aa 27-188이고, D2는 aa 124-218이고, '스템 영역'은 aa 219-259이다. 세포질 도메인 내에서, ITIM은 aa 358-363, 410-415, 및 440-445이다.
본 개시는 ILT3에 결합하는 작용제(예컨대, 이중특이적 항체)를 제공한다. 일부 구현예에서, ILT3 결합제는 인간 ILT3 또는 이의 단편에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 결합제 내의 ILT3 결합 영역은 항체 또는 항체에서 유래한 결합 도메인이다. 일부 구현예에서, 항체는 재조합 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 단클론 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 키메라 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 인간화 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG1 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG2 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG3 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG4 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG1 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG2 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG4 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 카파 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 람다 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 람다 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항원 결합 부위를 포함하는 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 scFv이다. 일부 구현예에서, 항체는 이황화물 연결된 scFv이다. 일부 구현예에서, 항체는 이황화물 연결된 sc(Fv)2이다. 일부 구현예에서, 항체는 Fab, Fab', 또는 F(ab)2 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 단일 쇄 Fab[scFab]를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 디아바디이다. 일부 구현예에서, 항체는 나노바디이다. 일부 구현예에서, 항체는 단일특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 이중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 1가 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 다가 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 2가 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 4가 항체이다.
일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 단클론 항체에서 유래한다. 단클론 항체는 당업에게 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 단클론 항체는 당업자에게 알려진 하이브리도마 방법을 사용하여 제조된다. 예를 들어, 하이브리도마 방법을 사용하여 마우스, 래트, 토끼, 햄스터 또는 기타 적절한 숙주 동물은 상술한 바와 같이 면역화된다. 일부 구현예에서, 림프구는 시험관내에서 면역화된다. 일부 구현예에서, 면역화 항원은 인간 단백질 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, 면역화 항원은 마우스 단백질 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, 면역화 항원은 사이노 단백질 또는 이의 단편이다.
면역화 후, 림프구를 단리하고, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 적합한 골수종 세포주와 융합시킨다. 하이브리도마 세포는 당업계에 알려진 바와 같은 특수 배지를 사용하여 선택되고, 융합되지 않은 림프구 및 골수종 세포는 선택 과정에서 생존하지 못한다. 선택된 항원에 대해 특이적으로 유도된 단클론 항체를 생산하는 하이브리도마는 면역침전, 면역블롯팅, 및 시험관내 결합 검정(예컨대, 유세포 분석법, FACS, ELISA, SPR(예컨대, Biacore), 및 방사선면역검정)을 포함하나, 이에 제한되지 않는 다양한 방법에 의해 식별될 수 있다. 원하는 특이성, 친화도, 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 식별되면, 클론은 한계 희석 절차에 의해 서브클로닝될 수 있다. 일부 구현예에서, 고 처리량 방법은 단일 세포 하이브리도마 세포를 플레이트에 분배하는 데 사용된다. 하이브리도마는 표준 방법을 사용하여 시험관내 배양물에서 또는 동물에서 복수 종양으로서 생체내에서 증식될 수 있다. 단클론 항체는 친화도 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 겔 전기영동 및 투석을 포함하나 이에 제한되지 않는 당업계의 표준 방법에 따라 배양 배지 또는 복수액에서 정제될 수 있다.
일부 구현예에서, 단클론 항체는 당업자에게 알려진 재조합 DNA 기법을 사용하여 제조된다. 예를 들어, 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 성숙 B-세포 또는 하이브리도마 세포에서 예컨대, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자를 특이적으로 증폭시키는 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 사용하는 RT-PCR에 의해 단리되고, 이들의 서열은 표준 기술을 사용하여 결정된다. 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드는 적합한 발현 벡터에 클로닝되고, 이 벡터는 대장균[E. coli], 유인원 COS 세포, 중국 햄스터 난소[chinese hamster ovary, CHO] 세포 또는 면역글로불린 단백질을 달리 생산하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포에 형질주입되는 경우 단클론 항체를 생산한다.
일부 구현예에서, 재조합 단클론 항체는 원하는 종의 가변 도메인 또는 CDR을 발현하는 파지 디스플레이 라이브러리에서 단리된다. 파지 라이브러리의 스크리닝은 당업계에 알려진 다양한 기법에 의해 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 단클론 항체는 재조합 DNA 기술을 사용하여 변형되어, 대체 항체를 생성한다. 일부 구현예에서, 마우스 단클론 항체의 경쇄 및 중쇄의 불변 도메인은 인간 항체의 불변 영역으로 치환되어, 키메라 항체를 생성한다. 일부 구현예에서, 불변 영역은 단클론 항체의 원하는 항체 단편을 생성하기 위해 절두되거나 또는 제거된다. 일부 구현예에서, 가변 영역(들)의 부위 지정 또는 고 밀도 돌연변이 유발은 단클론 항체의 특이성 및 친화도를 최적화하는 데 사용된다.
일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간화 항체에서 유래한다. 인간화 항체를 생성하기 위한 다양한 방법이 당업계에 알려져 있다. 일부 구현예에서, 인간화 항체는 비인간인 공급원으로부터 그 안으로 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, 인간화는 하나 이상의 비인간 CDR 서열을 인간 항체의 상응하는 CDR 서열로 치환함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 인간화 항체는 비인간 항체(예컨대, 마우스 항체)의 6개의 CDR 모두를 인간 항체의 상응하는 CDR로 치환함으로써 작제된다.
인간화 항체를 생성하기 위해 사용할 인간 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역의 선택은 다양한 인자 및 당업계에 알려진 다양한 방법을 기반으로 이루어질 수 있다. 일부 구현예에서, "최적 적합" 방법은 비인간(예컨대, 설치류) 항체의 가변 영역의 서열을 알려진 인간 가변 영역 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝하는 데 사용된다. 비인간(예컨대, 설치류) 서열과 가장 유사한 인간 서열이 인간화 항체의 인간 가변 영역 프레임워크로서 선택된다. 일부 구현예에서, 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위그룹의 모든 인간 항체의 공통 서열에서 유래한 특정 가변 영역 프레임워크는 가변 영역 프레임워크로서 선택된다. 일부 구현예에서, 가변 영역 프레임워크 서열은 가장 풍부한 인간 하위클래스의 공통 서열에서 유래한다. 일부 구현예에서, 인간 생식계열 유전자는 가변 영역 프레임워크 서열의 공급원으로서 사용된다.
인간화를 위한 다른 방법은 인간 생식계열 프레임워크에 대한 CDR의 직접 전달로서 기재되는 '초인간화'라고 불리는 방법, '항체 인간성'의 메트릭스에 기반한 인간 스트링 함량[human string content, HSC]이라고 하는 방법, 인간화 변이체의 큰 라이브러리의 생성에 기반한 방법(파지, 리보솜, 및 효모 디스플레이 라이브러리를 포함함), 및 프레임워크 영역 셔플링(shuffling)에 기반한 방법을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간 항체에서 유래한다. 인간 항체는 당엽계에 알려진 다양한 기법을 사용하여 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 항체는 시험관내에서 면역화된 불멸화된 인간 B 림프구에서 생성된다. 일부 구현예에서, 인간 항체는 면역화된 개체에서 단리된 림프구에서 생성된다. 임의의 경우에, 표적 항원에 대해 유도된 항체를 생산하는 세포가 생성되고 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 항체는 파지 라이브러리에서 선택되고, 여기서 파지 라이브러리는 인간 항체를 발현한다. 대안적으로, 파지 디스플레이 기술은 면역되지 않은 인간 공여자의 면역글로불린 가변 영역 유전자 레퍼토리로부터 시험관내에서 인간 항체 및 항체 단편을 생하기 위해 사용될 수 있다. 항체 파지 라이브러리의 생성 및 사용을 위한 기법은 당업계에 잘 알려져 있다. 항체가 식별되면, 쇄 셔플링 및 부위 지향 돌연변이 유발을 포함하나 이에 제한되지 않는 당업계에 알려진 친화도 성숙 전략은 더 높은 친화도의 인간 항체를 생성가는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 항체는 인간 면역글로불린 유전자좌를 함유하는 형질전환 마우스에서 생산된다. 면역화 시 내인성 면역글로불린 생산의 부재하에 인간 항체의 완전한 레퍼토리를 생산할 수 있는 마우스를 생산할 수 있다.
일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 항체 단편이다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 '항체 단편'은 항체의 일부 및 일반적으로 항원 결합 부위를 포함하는 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 단일 쇄 항체 분자(예컨대, scFv), 이황화물 연결된 scFv[dsscFv], 나노바디, 디아바디, 트라이바디, 테트라바디, 미니바디, 이중 가변 도메인 항체[DVD], 단일 가변 도메인 항체(예컨대, 낙타과 항체) 및 항체 단편에서 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
일부 구체적인 구현예에서, ILT3 결합 영역은 ILT3에 결합하는 scFv를 포함한다. 일부구체적인 구현예에서, ILT3 결합 영역은 ILT3에 결합하는 하나 이상의 Fab를 포함한다. 일부 구체적인 구현예에서, ILT3 결합 영역은 Fab를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, ILT3 결합 영역은 2개의 Fab를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, ILT3 결합 영역은 2개의 Fab를 탠덤으로 포함한다.
항체 단편은 무손상 항체의 단백질 분해 소화를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 기법에 의해 만들어질 수 있다. 본원에 기재된 항체 단편은 당업계에 알려진 재조합 기술(예컨대, 대장균 또는 파지 발현)을 사용하여 생산될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM(예컨대, 10-8 M 이하, 예컨대, 10-8 M 내지 10-13 M, 예컨대, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수(KD)로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 ≤ 0.1 nM의 해리 상수로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 ≤ 0.2 nM의 해리 상수로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 ≤ 0.3 nM의 해리 상수로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 ≤ 0.8 nM의 해리 상수로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 ≤ 3 nM의 해리 상수로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 ≤ 9 nM의 해리 상수로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 결합한다. 결합 친화도를 측정하는 다양한 방법이 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어, 관심 항체의 Fab 버전과 그 항원을 이용하여 수행하는 RIA(Chen et al., 1999, J. Mol Biol 293:865-81)에 의한 방법, 예를 들어, Octet®Red96 시스템을 사용하는 Octet®에 의한 생물층 간섭법(BLI) 또는 표면 플라스몬 공명(SPR) 검정 또는 예를 들어, Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 사용하는 Biacore®에 의한 방법을 포함하여 이 중 임의의 것이 본 개시의 목적을 위해 사용될 수 있다. '온-속도[on-rate]' 또는 '결합의 속도' 또는 '결합 속도' 또는 'kon'은 또한, 예를 들어, Octet®Red96, Biacore®TM-3000, 또는 Biacore®TM-8000 시스템을 사용하여 상술한 것과 동일한 생물층 간섭계(BLI) 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기술을 이용하여 결정될 수 있다.
당업계에 알려진 임의의 ILT3 결합제(예컨대, 항-ILT3 항체)는 본원에 개시된 ILT3 결합 영역을 유도하기 위해 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 개시된 ILT3 결합 영역은 그의 내용이 본원에 참조로 포함되는 국제 공개공보 WO2021/183839호에 개시된 ILT3 항체 중 임의의 것에서 유래한다. 예를 들어, 본원에 개시된 ILT3 결합 영역은 WO2021/183839에 개시된 H7K3 또는 이의 변이체에서 유래한다. 특정 구현예에서, H7K3 변이체는 WO2021/183839에 개시된 바와 같이 H7m1, H7m2, H7m3 및 H7m4로 이루어진 군에서 선택된 VH 변이체를 포함하고/하거나, K3m1, K3m2, K3m3, K3m4, K3m5, K3m6, K3m7 및 K3m8로 이루어진 군에서 선택된 VL 변이체를 포함한다. H7K3의 CDR, VL 및 VH 및 그의 변이체의 아미노산 서열은 예를 들어 WO2021/183839의 표 1 및 단락 [0155]에 개시되어 있다. 특정 구현예에서, 본원에 개시된 ILT3 결합 영역은 다음의 특허 공개물 중 임의의 것에 기재된 임의의 항-ILT3 항체에서 유래한다: 이들 각각의 내용이 본원에 참조로 포함되는 US20190153093, WO2020056077, WO2021183839, US20200031926, US20210221887, US20150110714, US20200031926, US20190241655, WO2020180789, 및 WO2020056077.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 그의 내용이 본원에 참고로 포함되는 국제 공개공보 WO 2021/127200호의 항체에서 유래한다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 표 1-8의 것들 중 임의의 하나이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 17, 서열 번호 18, 서열 번호 37, 서열 번호 38, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 73, 서열 번호 74, 서열 번호 91, 서열 번호 92, 서열 번호 109, 서열 번호 110, 서열 번호 127, 서열 번호 128, 서열 번호 145, 및 서열 번호 146 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열의 하나 이상의 CDR 서열을 포함한다. CDR 서열은 임의의 잘 알려진 넘버링 시스템에 따라 결정 및 정의될 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 넘버링에 따라 결정 및 정의된다. 일부 구현예에서, CDR은 카바트 넘버링에 따라 결정 및 정의된다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 넘버링에 따라 결정 및 정의된다. 다른 구현예에서, CDR은 코티아 넘버링에 따라 결정 및 정의된다. 다른 구현예에서, CDR은 접촉점 넘버링에 따라 결정 및 정의된다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 55에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 56에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 55에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열 번호 56에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 73에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 74에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 73에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열 번호 74에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 92에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열 번호 92에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 109에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 110에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 109에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열 번호 110에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 127에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 128에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 127에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열 번호 128에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 145에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 146에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 145에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열 번호 146에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
CDR 서열은 잘 알려진 넘버링 시스템 또는 이들의 조합에 따라 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 넘버링에 따라 정의된다. 일부 구현예에서, CDR은 카바트 넘버링에 따라 정의된다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 넘버링에 따라 정의된다. 다른 구현예에서, CDR은 코티아 넘버링에 따라 정의된다. 다른 구현예에서, CDR은 접촉점 넘버링에 따라 정의된다.
다른 구현예에서, ILT3 결합 영역은 서열 번호 1, 7, 10 및 11 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 2, 8, 9 및 12 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 3 또는 13과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 4 또는 14와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 5 또는 15와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 6 또는 16과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 표 1의 하나 이상의 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 1, 7, 10 및 11 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 2, 8, 9 및 12 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 3 또는 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 4 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 5 또는 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 6 또는 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, ILT3 결합 영역은 서열 번호 21, 27, 30 및 31 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 22, 28, 29 및 32 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 23 또는 33과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 24 또는 34와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 25 또는 35와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 26 또는 36과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 표 2의 하나 이상의 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 21, 27, 30 및 31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 22, 28, 29 및 32 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 23 또는 33의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 24 또는 34의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 25 또는 35의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 26 또는 36의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, ILT3 결합 영역은 서열 번호 39, 45, 48 및 49 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 40, 46, 47 및 50 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 41 또는 51과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 42 또는 52와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 43 또는 53과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 44 또는 54와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 표 3의 하나 이상의 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 39, 45, 48 및 49 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 40, 46, 47 및 50 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 41 또는 51의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 42 또는 52의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 43 또는 53의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 44 또는 54의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, ILT3 결합 영역은 서열 번호 57, 63, 66 및 67 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 58, 64, 65 및 68 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 59 또는 69와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 60 또는 70과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 61 또는 71과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 62 또는 72와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 표 4의 하나 이상의 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 57, 63, 66 및 67 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 58, 64, 65 및 68 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 59 또는 69의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 60 또는 70의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 61 또는 71의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 62 또는 72의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, ILT3 결합 영역은 서열 번호 75, 81, 84 및 85 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 76, 82, 83 및 86 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 77 또는 87과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 78 또는 88과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 79 또는 89와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 80 또는 90과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 표 5의 하나 이상의 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 75, 81, 84 및 85 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 76, 82, 83 및 86 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 77 또는 87의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 78 또는 88의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 79 또는 89의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 80 또는 90의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 81의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, ILT3 결합 영역은 서열 번호 93, 99, 102 및 103 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 94, 100, 101 및 104 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 95 또는 105과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 96 또는 106와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 97 또는 107와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 98 또는 108과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 표 6의 하나 이상의 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 93, 99, 102 및 103 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 94, 100, 101 및 104 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 95 또는 105의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 96 또는 106의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 97 또는 107의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 98 또는 108의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 108의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, ILT3 결합 영역은 서열 번호 111, 117, 120 및 121 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 112, 118, 119 및 122 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 113 또는 123과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 114 또는 124와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 115 또는 125와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 116 또는 126과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 표 7의 하나 이상의 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 111, 117, 120 및 121 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 112, 118, 119 및 122 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 113 또는 123의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 114 또는 124의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 115 또는 125의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 116 또는 126의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 120의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 124의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 126의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, ILT3 결합 영역은 서열 번호 129, 135, 138 및 139 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 130, 136, 137 및 140 중 어느 하나와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 131 또는 141과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 132 또는 142와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 133 또는 143과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 134 또는 144와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 표 8의 하나 이상의 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 129, 135, 138 및 139 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 130, 136, 137 및 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, (iii) 서열 번호 131 또는 141의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 132 또는 142의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 133 또는 143의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 134 또는 144의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, ILT3 결합 영역은 서열 번호 17, 서열 번호 18, 서열 번호 37, 서열 번호 38, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 73, 서열 번호 74, 서열 번호 91, 서열 번호 92, 서열 번호 109, 서열 번호 110, 서열 번호 127, 서열 번호 128, 서열 번호 145, 및 서열 번호 146의 아미노산 서열의 하나 이상의 프레임워크 영역을 추가로 포함한다. 본원에 기재된 프레임워크 영역은 CDR 넘버링 시스템의 경계에 기반하여 결정된다. 다시 말하면, CDR이 예컨대, 카바트, IMGT 또는 코티아에 의해 결정되는 경우, 프레임워크 영역은 N-말단에서 C-말단까지 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 포맷으로 가변 영역에서 CDR을 둘러싸는 아미노산 잔기이다. 예를 들어, FR1은 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR1 아미노산 잔기의 N-말단의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR2는 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR1과 CDR2 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR3은 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR2와 CDR3 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR4는 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR3 아미노산 잔기의 C-말단의 아미노산 잔기로서 정의된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 본원(예컨대, 표 1, 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7 및 표 8)에 제공된 임의의 ILT3 결합 영역에 대해 특정 동일성 퍼센트를 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
2개의 서열(예컨대, 아미노산 서열 또는 핵산 서열) 간의 동일성 퍼센트의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 2개의 서열의 비교를 위해 이용되는 수학적 알고리즘의 비제한적인 예는 문헌[Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264 2268 (1990)]의 알고리즘이며, 이는 문헌[Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873 5877 (1993)]에서와 같이 수정된다. 이러한 알고리즘은 문헌[Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403 (1990)]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 통합된다. BLAST 뉴클레오타이드 검색은 NBLAST 뉴클레오타이드 프로그램 매개변수 세트를 이용하여, 예컨대, 점수 = 100, 단어 길이 = 12에 대해 수행되어, 본원에 기재된 핵산 분자와 상동성인 뉴클레오타이드 서열을 수득할 수 있다. BLAST 단백질 검색은 XBLAST 프로그램 매개변수 세트를 이용하여, 예컨대, 점수 50, 단어 길이 = 3으로 수행되어, 본원에 기재된 단백질 분자와 상동성인 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭형 정렬을 수득하기 위해, 갭형 BLAST는 문헌[Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389 3402 (1997)]에 기재된 바와 같이 이용될 수 있다. 대안적으로, PSI BLAST는 분자 사이의 먼 관련성[distant relationship]을 검출하는 반복된 검색을 수행하는 데 사용될 수 있다(Id.). BLAST, 갭형 BLAST, 및 PSI Blast 프로그램을 이용하는 경우, 각각의 프로그램의(예컨대, XBLAST 및 NBLAST의) 디폴트 매개변수가 사용될 수 있다(예컨대, 월드와이드 웹상의 국립 생명공학 정보 센터[National Center for Biotechnology Information, NCBI], ncbi.nlm.nih.gov 참조). 서열의 비교를 위해 이용되는 수학적 알고리즘의 또 다른 비제한적인 예는 문헌[Myers and Miller, CABIOS 4:11-17 (1998)]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된다. 아미노산 서열을 비교하기 위한 ALIGN 프로그램을 이용하는 경우, PAM120 중량 잔기 표, 12의 갭 길이 페널티, 및 4의 갭 페널티가 사용될 수 있다. 2개의 서열 사이의 동일성 퍼센트는 갭을 허용하거나 허용하지 않으면서, 상술한 기술과 유사한 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 동일성 퍼센트를 계산함에 있어, 전형적으로 정확한 매칭만이 계수된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 기준 서열에 대해 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 해당 서열을 포함하는 ILT3 결합 영역은 ILT3에 결합하는 능력을 유지한다. 일부 구현예에서, 기준 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환되고/되거나, 삽입되고/되거나, 결실되었다. 일부 구현예에서, 치환, 삽입 또는 결실은 CDR 외측의 영역에서(즉, FR에서) 발생한다. 임의로, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 기준 서열의 번역 후 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 37의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 38의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 55의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 73의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 74의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 92의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 109의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 110의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 127의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 128의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 145의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 146의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 ILT3 결합 영역과 경쟁적으로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 ILT3 결합 영역과 경쟁적으로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 ILT3 결합 영역과 경쟁적으로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 ILT3 결합 영역과 경쟁적으로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 ILT3 결합 영역과 경쟁적으로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 ILT3 결합 영역과 경쟁적으로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 ILT3 결합 영역과 경쟁적으로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 결합 영역은 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 ILT3 결합 영역과 경쟁적으로 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)에 특이적으로 결합한다.
표 1: 45G10 결합 영역 서열
표 2: 3A3 결합 영역 서열
표 3: 5A7 결합 영역 서열
표 4: 12A12 결합 영역 서열
표 5: 16C5 결합 영역 서열
표 6: 48A6 결합 영역 서열
표 7: 53F10 결합 영역 서열
표 8: Hz5A7.v5 결합 영역 서열
5.2 CD3 결합 영역
여기에 제공된 결합제는 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합하는 영역을 포함하므로, 본 결합제는 CD3 결합제이다.
인간 CD3(UniProtKB 번호 P07766) 및 사이노몰구스 원숭이[cynomolgus monkey, '사이노'] CD3(예컨대, 아이소폼 X1(NCBI Ref 번호 XP_015290838.2) 및 X2(NCB1 Ref 번호 XP_015290839.2)에 대한 아미노산(aa) 서열이 알려져 있다. CD3은 대략 23 kDa의 예측 분자량을 갖는 단일 통과 유형 I 막관통 단백질이다. CD3은 다른 조직 중에서도 T 세포상에 발현되는 것으로 관찰되었다. CD3은 페어링된 Ig 접함 도메인을 포함하는 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 1개의 ITAM 도메인을 함유하는 긴 세포질 도메인을 특징으로 한다(예컨대, 문헌[Kuhns et al., 2006, Immunity, 24.2:133-139]을 참조한다). UniProtKB내에서 특징 규명되는 바와 같이, 인간 CD3은 207개의 아미노산[aa]의 단백질이며 - 신호 서열은 aa 1-22이고, 세포외 도메인은 aa 23-126이고, 막관통 영역은 aa 127-152이고, 세포질 도메인은 aa 153-207이다. 세포외 도메인 내에서, Ig-유사 도메인은 aa 32-112이다. 세포질 도메인 내에서, ITAM은 aa 178-205이다.
본 개시는 CD3에 결합하는 작용제(예컨대, 이중특이적 항체)를 제공한다. 일부 구현예에서, CD3 결합제는 인간 CD3 또는 이의 단편에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 결합제의 CD3 결합 영역은 항체 또는 항체에서 유래한 결합 도메인이다. 일부 구현예에서, 항체는 재조합 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 단클론 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 키메라 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 인간화 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG1 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG2 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG3 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG4 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG1 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG2 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG4 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 카파 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 람다 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 람다 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항원 결합 부위를 포함하는 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 scFv이다. 일부 구현예에서, 항체는 이황화물 연결된 scFv이다. 일부 구현예에서, 항체는 이황화물 연결된 sc(Fv)2이다. 일부 구현예에서, 항체는 Fab, Fab', 또는 F(ab)2 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 단일 쇄 Fab[single chain Fab, scFab]를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 디아바디이다. 일부 구현예에서, 항체는 나노바디이다. 일부 구현예에서, 항체는 단일특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 이중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 1가 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 다가 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 2가 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 4가 항체이다.
일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 단클론 항체에서 유래한다. 단클론 항체는 당업자에게 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 단클론 항체는 위의 섹션에 기재된 바와 같은 하이브리도마 방법을 사용하여 제조된다. 일부 구현예에서, 단클론 항체는 위의 섹션에 기재된 바와 같은 재조합 DNA 기술을 사용하여 변형된다.
일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 인간화 항체에서 유래한다. 인간화 항체를 생성하기 위한 다양한 방법이 당업계에 알려져 있다. 일부 구현예에서, 인간화 항체는 비인간인 공급원으로부터 그 안으로 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, 인간화는 하나 이상의 비인간 CDR 서열을 인간 항체의 상응하는 CDR 서열로 치환함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 인간화 항체는 비인간 항체(예컨대, 마우스 항체)의 6개의 CDR 모두를 인간 항체의 상응하는 CDR로 치환함으로써 작제된다. 인간화를 위한 다른 방법은 위의 섹션에 기재된 것들을 포함한다.
일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 인간 항체에서 유래한다. 인간 항체는 위의 섹션에 기재된 기술을 포함하여 당업계에 알려진 다양한 기술을 사용하여 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 항체 단편이다. 예를 들어, 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 단일 쇄 항체 분자(예컨대, scFv), 이황화물 연결된 scFv[dsscFv], 나노바디, 디아바디, 트라이바디, 테트라바디, 미니바디, 이중 가변 도메인 항체[DVD], 단일 가변 도메인 항체(예컨대, 낙타과 항체) 및 항체 단편에서 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 항체 단편은 위의 섹션에 기재된 기술을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
일부 구체적인 구현예에서, CD3 결합 영역은 항-CD3 scFv를 포함한다. 일부 구체적인 구현예에서, CD3 결합 영역은 하나 이상의 Fab를 포함한다. 일부 구체적인 구현예에서, CD3 결합 영역은 Fab를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, CD3 결합 영역은 2개의 Fab를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM(예컨대, 10-8 M 이하, 예컨대, 10-8 M 내지 10-13 M, 예컨대, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수(KD)로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 ≤ 0.1 nM의 해리 상수로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 ≤ 0.01 nM의 해리 상수로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 ≤ 2 nM의 해리 상수로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 ≤ 3 nM의 해리 상수로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 ≤ 4 nM의 해리 상수로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 ≤ 300 nM의 해리 상수로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 약 1 nM 내지 약 1 μM의 KD로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 약 1 nM 내지 약 500 nM, 약 1 nM 내지 약 250 nM, 약 1 nM 내지 약 100 nM, 약 1 nM 내지 약 50 nM, 약 1 nM 내지 약 25 nM, 약 1 nM 내지 약 20 nM, 약 1 nM 내지 약 15 nM, 약 1 nM 내지 약 10 nM, 약 1 nM 내지 약 5 nM, 약 5 nM 내지 약 1 μM, 약 5 nM 내지 약 500 nM, 약 5 nM 내지 약 250 nM, 약 5 nM 내지 약 100 nM, 약 5 nM 내지 약 50 nM, 약 5 nM 내지 약 25 nM, 약 5 nM 내지 약 20 nM, 약 5 nM 내지 약 15 nM, 약 5 nM 내지 약 10 nM, 약 10 nM 내지 약 1 μM, 약 10 nM 내지 약 500 nM, 약 10 nM 내지 약 250 nM, 약 10 nM 내지 약 100 nM, 약 10 nM 내지 약 50 nM, 약 10 nM 내지 약 25 nM, 약 10 nM 내지 약 20 nM, 약 10 nM 내지 약 15 nM, 약 15 nM 내지 약 1 μM, 약 15 nM 내지 약 500 nM, 약 15 nM 내지 약 250 nM, 약 15 nM 내지 약 100 nM, 약 15 nM 내지 약 50 nM, 약 15 nM 내지 약 25 nM, 약 15 nM 내지 약 20 nM, 약 20 nM 내지 약 1 μM, 약 20 nM 내지 약 500 nM, 약 20 nM 내지 약 250 nM, 약 20 nM 내지 약 100 nM, 약 20 nM 내지 약 50 nM, 약 20 nM 내지 약 25 nM, 약 25 nM 내지 약 1 μM, 약 25 nM 내지 약 500 nM, 약 25 nM 내지 약 250 nM, 약 25 nM 내지 약 100 nM, 약 25 nM 내지 약 50 nM, 약 50 nM 내지 약 1 μM, 약 50 nM 내지 약 500 nM, 약 50 nM 내지 약 250 nM, 약 50 nM 내지 약 100 nM, 약 100 nM 내지 약 1 μM, 약 100 nM 내지 약 500 nM, 약 100 nM 내지 약 250 nM, 약 250 nM 내지 약 1 μM, 약 250 nM 내지 약 500 nM, 또는 약 500 nM 내지 약 1 μM의 KD로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 약 5 nM 내지 약 15 nM의 KD 로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 6 nM 내지 13 nM의 KD 로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 SRP에 의해 측정된 바와 같이 6 nM의 KD 로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 결합 친화도를측정하는 상이한 방법에 의해 측정된 바와 같이 6 nM 내지 13 nM의 KD 로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 결합한다.
결합 친화도를 측정하는 다양한 방법이 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어, 관심 항체의 Fab 버전과 그 항원을 이용하여 수행하는 RIA문헌[Chen et al., 1999, J. Mol Biol 293:865-81]에 의한 방법, 예를 들어, Octet®Red96 시스템을 사용하는 Octet®에 의한 생물층 간섭법[BLI] 또는 표면 플라스몬 공명[SPR] 검정 또는 예를 들어, Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 사용하는 Biacore®에 의한 방법을 포함하여 이 중 어느 하나가 본 개시의 목적을 위해 사용될 수 있다. '온-속도[on-rate]' 또는 '결합의 속도' 또는 '결합 속도' 또는 'kon'은 또한, 예를 들어, Octet®Red96, Biacore®TM-3000, 또는 Biacore®TM-8000 시스템을 사용하여 상술한 것과 동일한 생물층 간섭법[BLI] 또는 표면 플라즈몬 공명[SPR] 기술을 이용하여 결정될 수 있다.
당업계에 알려진 임의의 항-CD3 항체, 예를 들어, 이들 각각의 내용이 본원에 참조로 포함되는 문헌[Kuhn & Weiner, Immunotheray, 2016 Jul;8(8):889-906], 국제 특허 공개 번호 WO2016204966, WO2017053856, WO2015095392, WO2016116626, WO2018114748, WO2005118635, 및 WO2014047231에 개시된 항-CD3 항체는 본원에 개시된 CD3 결합 영역을 도출하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 이들 각각의 내용이 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 공개공보 WO 2008/119567호 및 미국 특허 제10,066,016호에 기재된 항체에서 유래한다. 일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 하기 실시예 섹션(섹션 7 참조)에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 2B2 또는 이의 유도체이다. 일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 1G4 또는 이의 유도체이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 149, 150, 158 및 159에 기재된 아미노산 서열의 하나 이상의 CDR 서열을 포함한다. CDR 서열은 잘 알려진 넘버링 시스템에 따라 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 넘버링에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 카바트 넘버링에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 넘버링에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 코티아 넘버링에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 접촉점 넘버링에 따른다. 일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. CDR 서열은 잘 알려진 넘버링 시스템 또는 이들의 조합에 따라 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 넘버링에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 카바트 넘버링에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 넘버링에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 코티아 넘버링에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 접촉점 넘버링에 따른다.
다른 구현예에서, CD3 결합 영역은 서열 번호 152와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 153과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (iii) 서열 번호 154와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 155와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 156과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 157과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3은 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 서열 번호 149 및 150의 아미노산 서열의 하나 이상의 프레임워크 영역을 추가로 포함한다. 본원에 기재된 프레임워크 영역은 CDR 넘버링 시스템의 경계에 기반하여 결정된다. 다시 말하면, CDR이 예컨대, 카바트, IMGT 또는 코티아에 의해 결정되는 경우, 프레임워크 영역은 N-말단에서 C-말단까지 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 포맷으로 가변 영역에서 CDR을 둘러싸는 아미노산 잔기이다. 예를 들어, FR1은 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR1 아미노산 잔기의 N-말단의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR2는 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR1과 CDR2 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR3은 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR2와 CDR3 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR4는 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR3 아미노산 잔기의 C-말단의 아미노산 잔기로서 정의된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 본원에 제공된 임의의 CD3 결합 영역에 대해 특정 동일성 퍼센트를 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 동일성 퍼센트의 결정은 위의 섹션에 기재된 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 기준 서열에 대해 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 해당 서열을 포함하는 CD3 결합 영역은 CD3에 결합하는 능력을 유지한다. 일부 구현예에서, 참조 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환되고/되거나, 삽입되고/되거나, 결실되었다. 일부 구현예에서, 치환, 삽입 또는 결실은 CDR 외측의 영역에서(즉, FR에서) 발생한다. 임의로, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 기준 서열의 번역 후 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열과 95% 내지 96%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열과 90% 내지 91%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 CD3 결합 영역과 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 CD3 결합 영역과 경쟁적으로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 특이적으로 결합한다.
일부 구체적인 구현예에서, CD3 결합 영역은 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv는 하나 이상의 아미노산 치환, 예컨대, scFv를 안정화시키는 것들을 포함한다. 구체적인 구현예에서, scFv 안정화 돌연변이는 G44C 돌연변이이다. 또 다른 구체적인 구현예에서, scFv 안정화 돌연변이는 G100C 돌연변이이다. 또 다른 구현예에서, scFv는 G44C 및 G100C 돌연변이 둘 모두를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD3 scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CD3 scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD3 scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열과 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD3 scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열과 적어도 92%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD3 scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열과 92% 내지 93%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 158에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 159에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 158에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열 번호 159에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. CDR 서열은 잘 알려진 넘버링 시스템 또는 이들의 조합에 따라 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 넘버링에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 카바트 넘버링에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 넘버링에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 코티아 넘버링에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 접촉점 넘버링에 따른다.
다른 구현예에서, CD3 결합 영역은 서열 번호 161과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; (ii) 서열 번호 162와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; (iii) 서열 번호 163과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; (iv) 서열 번호 164와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; (v) 서열 번호 165와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및/또는 (vi) 서열 번호 166과 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 인간화된다. 일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 수용자 인간 프레임워크, 예컨대, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역에서, HCDR1은 서열 번호 161의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 162의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 164의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 165의 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3은 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 서열 번호 158 및 159의 아미노산 서열의 하나 이상의 프레임워크 영역을 추가로 포함한다. 본원에 기재된 프레임워크 영역은 CDR 넘버링 시스템의 경계에 기반하여 결정된다. 다시 말하면, CDR이 예컨대, 카바트, IMGT 또는 코티아에 의해 결정되는 경우, 프레임워크 영역은 N-말단에서 C-말단까지 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 포맷으로 가변 영역에서 CDR을 둘러싸는 아미노산 잔기이다. 예를 들어, FR1은 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR1 아미노산 잔기의 N-말단의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR2는 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR1과 CDR2 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR3은 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR2와 CDR3 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로서 정의되고, FR4는 예컨대, 카바트 넘버링 시스템, IMGT 넘버링 시스템, 또는 코티아 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR3 아미노산 잔기의 C-말단의 아미노산 잔기로서 정의된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 158의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 159의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 158의 아미노산 서열과 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 159의 아미노산 서열과 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 158의 아미노산 서열과 적어도 97%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 159의 아미노산 서열과 적어도 98%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 158의 아미노산 서열과 97% 내지 98%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 159의 아미노산 서열과 98% 내지 99%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 CD3 결합 영역과 동일한 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CD3 결합 영역은 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열 번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 CD3 결합 영역과 경쟁적으로 CD3(예컨대, 인간 CD3)에 특이적으로 결합한다.
일부 구체적인 구현예에서, CD3 결합 영역은 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv는 하나 이상의 아미노산 치환, 예컨대, scFv를 안정화시키는 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함한다.
5.3 ILT3 및 CD3에 대한 다중특이적 결합제
본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 ILT3 결합 영역 및 CD3 결합 영역을 포함하며, 이들 각각은 위의 섹션 5.1 및 섹션 5.2에 보다 상세히 기재되어 있다.
특정 구현예에서, ILT3 결합 영역은 인간 CD3에 대한 CD3 결합 영역의 결합 친화도보다 인간 ILT3에 대해 더 높은 결합 친화도를 갖는다. 특정 구현예에서, 인간 ILT3에 대한 ILT3 결합 영역의 결합 친화도는 인간 CD3에 대한 CD3 결합 영역의 결합 친화도보다 약 10배 내지 약 100배 높다. 특정 구현예에서, 인간 ILT3에 대한 ILT3 결합 영역의 결합 친화도는 인간 CD3에 대한 CD3 결합 영역의 결합 친화도보다 약 10배 내지 약 100배, 약 10배 내지 약 90배, 약 10배 내지 약 80배, 약 10배 내지 약 70배, 약 10배 내지 약 60배, 약 10배 내지 약 50배, 약 10배 내지 약 40배, 약 10배 내지 약 30배, 약 10배 내지 약 20배, 약 20배 내지 약 100배, 약 20배 내지 약 90배, 약 20배 내지 약 80배, 약 20배 내지 약 70배, 약 20배 내지 약 60배, 약 20배 내지 약 50배, 약 20배 내지 약 40배, 약 20배 내지 약 30배, 약 30배 내지 약 100배, 약 30배 내지 약 90배, 약 30배 내지 약 80배, 약 30배 내지 약 70배, 약 30배 내지 약 60배, 약 30배 내지 약 50배, 약 30배 내지 약 40배, 약 40배 내지 약 100배, 약 40배 내지 약 90배, 약 40배 내지 약 80배, 약 40배 내지 약 70배, 약 40배 내지 약 60배, 약 40배 내지 약 50배, 약 50배 내지 약 100배, 약 50배 내지 약 90배, 약 50배 내지 약 80배, 약 50배 내지 약 70배, 약 50배 내지 약 60배, 약 60배 내지 약 100배, 약 60배 내지 약 90배, 약 60배 내지 약 80배, 약 60배 내지 약 70배, 약 70배 내지 약 100배, 약 70배 내지 약 90배, 약 70배 내지 약 80배, 약 80배 내지 약 100배, 약 80배 내지 약 90배, 또는 약 90배 내지 약 100배 더 높다. 2개의 결합 영역 사이의 이러한 결합 친화도 차이는 ILT3 × CD3 결합제가 임의의 T 세포와 연결되기 전에 ILT3 발현 표적 세포에 결합할 수 있게 하며, 따라서 표적 이탈 효과를 감소시키고 본원에 개시된 ILT3 × CD3 결합제의 안전성 프로파일을 증가시킨다.
일부 구현예에서, ILT3 × CD3 결합제는 다중특이적 항체, 예컨대, 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체 또는 당업계에 알려진 임의의 다중특이적 포맷을 작제하기 위한 당업계에 알려진 임의의 기술은 본원에 제공된 본 다중특이적 항체를 작제하는 데 사용될 수 있다. 비제한적인 예시적인 기술 및 포맷이 아래에 기재된다.
본원에 제공된 결합제는 전장 항체 구조를 갖는 항체를 포함할 수 있다. '전장 항체'는 2개의 전장 항체 중쇄 및 2개의 전장 항체 경쇄를 갖는 항체를 지칭한다. 전장 항체 중쇄[heavy chain, HC]는 잘 알려진 중쇄 가변 및 불변 도메인 VH, CH1, 힌지, CH2, 및 CH3으로 이루어진다. 전장 항체 경쇄[light chain, LC]는 잘 알려진 경쇄 가변 및 불변 도메인 VL 및 CL로 이루어진다. 전장 항체는 중쇄 중 하나 또는 둘 모두에서 C-말단 리신(K)이 결여될 수 있다. 'Fab-아암' 또는 '반분자'는 항원에 특이적으로 결합하는 하나의 중쇄 경쇄 쌍을 지칭한다.
전장 이중특이적 항체는 예를 들어, 시험관내 무세포 환경에서 또는 공동-발현을 사용하여 별개의 특이성을 갖는 2개의 항체 반분자의 이종이합체 형성을 촉진하기 위해 각각의 반분자에서 중쇄 CH3 계면에 치환을 도입함으로써 2개의 단일특이적 2가 항체 사이의 Fab 팔 교환(또는 반분자 교환)을 사용하여 생성될 수 있다. Fab 팔 교환 반응은 이황화물 결합 이성질체화 반응 및 CH3 도메인의 해리 결합의 결과이다. 모체 단일특이적 항체의 힌지 영역에서 중쇄 이황화물 결합이 감소된다. 모체 단일특이적 항체 중 하나의 생성된 유리 시스테인은 제2 모체 단일특이적 항체 분자의 시스테인 잔기와 함께 중쇄간 이황화물 결합을 형성하고, 동시에 모체 항체의 CH3 도메인은 해리 결합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 팔의 CH3 도메인은 동종이합체화보다 이종이합체화를 선호하도록 조작될 수 있다. 생성된 생성물은 각각이 별개의 에피토프, 즉 ILT3상의 에피토프 및 CD3상의 에피토프에 결합하는 2개의 Fab 팔 또는 반분자를 갖는 이중특이적 항체이다.
'동종이합체화'는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. '동종이합체화'는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다. '동종이합체화'는 비동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. '동종이합체화'는 비동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 결합제는 설계, 예컨대, 트리오맙/쿼드로마(Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인-홀(Genentech), CrossMAb(Roche) 및 정전기적으로 매칭된(Chugai, Amgen, NovoNordisk, Oncomed), LUZ-Y(Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 본체(SEEDbody)(EMD Serono), 바이클로닉(Merus) 및 듀오바디(Genmab A/S)를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 노브-인-홀 포맷이다. 일부 구현예에서, Fc 영역의 CD3 결합 영역(예컨대, 항-CD3 scFv) 측면은 홀을 보유하고, Fc 영역의 ILT3 결합 영역(예컨대, 항-ILT3 Fab) 측면은 노브를 보유한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 듀오바디 포맷이다.
트리오맙 쿼드로마 기술은 본원에 제공된 전장 이중특이적 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 트리오맙 기술은 2개의 모체 키메라 항체인, IgG2a를 갖는 하나의 모체 mAb 및 랫트 IgG2b 불변 영역을 갖는 제2 모체 mAb 사이의 Fab 팔 교환을 촉진하여, 키메라 이중특이적 항체를 생성한다.
'노브-인-홀' 전략(예컨대, 국제 공개 번호 WO 2006/028936호 참조)은 전장 이중특이적 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 간략하게, 인간 IgG에서 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산은 이종이합체 형성을 촉진시키기 위해 CH3 도메인 상호작용에 영향을 미치는 위치에서 돌연변이될 수 있다. 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄에는 작은 측쇄를 갖는 아미노산(홀)이 도입되어 있고, 제2 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄에는 큰 측쇄를 갖는 아미노산(노브)이 도입되어 있다. 2개의 항체의 공동-발현 후에, 이종이합체는 '노브'를 갖는 중쇄와 '홀'을 갖는 중쇄의 우선적 상호작용의 결과로서 형성된다. 노브 및 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)은 T366Y/F405A, T366W/ F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S_L368A_Y407V이다.
CrossMAb 기술은 본원에 제공된 전장 이중특이적 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. Fab 팔 교환을 촉진시키기 위해 '노브-인-홀' 전략을 이용하는 것 이외에, CrossMAb는 한쪽 팔 중 하나에서, 생성된 이중특이적 항체의 정확한 경쇄 페어링을 보장하기 위해 교환된 CH1 및 CL 도메인을 갖는다(예컨대, 미국 특허 제8,242,247호 참조).
다른 교차 전략은 이중특이적 항체에서 중쇄 및 경쇄 사이 또는 중쇄 내에서, 가변 또는 불변 또는 둘 모두의 도메인을 하나 또는 둘 모두의 팔에서 교환함으로써 본원에 제공된 전장 이중특이적 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 이들 교환은 예를 들어, 국제 공개 번호 WO 2009/080254, WO 2009/080251, WO 2009/018386 및 WO 2009/080252에 기재된 바와 같은 VH-CH1과 VL-CL, VH와 VL, CH3과 CL, 및 CH3과 CH1 간의 교환을 포함한다.
하나의 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기 및 제2 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기적 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이합체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략은 이들 각각의 내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 공개 번호 US2010/0015133호; 미국 특허 공개 번호 US2009/0182127호; 미국 특허 공개 번호 US2010/028637호; 또는 미국 특허 공개 번호 US2011/0123532호에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 다른 전략에서, 이종이합체화는 다음의 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)에 의해 촉진될 수 있다: 이들 각각의 내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 공개 번호 US2012/0149876호 또는 미국 특허 공개 번호 US2013/0195849호에 기재된 바와 같은 L351Y_F405AY407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W.
LUZ-Y 기술은 본원에 제공된 이중특이적 항체를 생성하는 데 이용될 수 있다. 이 기술에서, 류신 지퍼를 CH3 도메인의 C 말단에 첨가하여, 문헌[Wranik et al., (2012) J Biol Chem 287(52): 42221-9]에 기재된 바와 같이 정제 후 제거된 모체 mAb로부터 이종이합체 조립체를 유도한다.
SEEDbody 기술은 본원에 제공된 전장 이중특이적 항체를 생성하는 데 이용될 수 있다. SEEDbody는 이들의 불변 도메인에서, 그 내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 US20070287170호에 기재된 바와 같은 이종이합체화를 촉진하기 위해 IgA 잔기로 치환된 선택된 IgG 잔기를 갖는다.
상술한 방법 이외에, 본원에 제공된 결합제는 PCT 특허 공개 번호 WO 2011/131746호에 기재된 방법에 따라 이황화물 결합 이성질체화를 허용하는 환원 조건하에, 2개의 단일특이적 동종이합체 항체의 CH3 영역에 비대칭 돌연변이를 도입하고 2개의 모체 단일특이적 동종이합체 항체로부터 이중특이적 이종이합체 항체를 형성함으로써 무세포 환경에서 시험관내 생성될 수 있다.
본원에 기재된 일부 구현예에서, ILT3 × CD3 이중특이적 항체는 ILT3에 결합하는 제1 결합 영역 및 CD3에 결합하는 제2 결합 영역을 포함하고, 항체 CH3 불변 도메인 내의 적어도 하나의 치환을 추가로 포함한다. 치환은 전형적으로 표준 방법을 사용하여 항체의 불변 도메인과 같은 분자에 대한 DNA 수준에서 이루어진다.
본원에 제공된 항체는 다양한 잘 알려진 항체 형태로 조작될 수 있다.
일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 디아바디 또는 크로스바디이다.
일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 이종이합체화를 촉진하는 상보성 CH3 도메인을 갖는 IgG-유사 분자; 분자의 2개의 측면 각각이 적어도 2개의 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부를 함유하는 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자; 전장 IgG 항체가 추가의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부에 융합된 IgG 융합 분자; 단일 쇄 Fv 분자 또는 안정화된 디아바디가 중쇄 불변 도메인, Fc 영역 또는 이의 일부에 융합된 Fc 융합 분자; 상이한 Fab 단편이 함께 융합된 Fab 융합 분자; 상이한 단일 쇄 Fv 분자 또는 상이한 디아바디 또는 상이한 중쇄 항체(예컨대, 도메인 항체, 나노바디)가 서로 또는 또 다른 단백질 또는 담체 분자에 융합된 ScFv- 및 디아바디-기반 및 중쇄 항체(예컨대, 도메인 항체, 나노바디)를 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자는 이중 표적화[dual targeting, DT]-Ig(GSK/Domantis), 2-인-원 항체(Genentech), 가교된 Mab(Karmanos Cancer Center), mAb2(F-Star) 및 CovX-바디(CovX/Pfizer)를 포함한다.
일부 구현예에서, IgG 융합 분자는 이중 가변 도메인[DVD]-Ig(Abbott), IgG-유사 이중특이적(ImClone/Eli Lilly), Ts2Ab(MedImmune/AZ) 및 BsAb(Zymogenetics), HERCULES(Biogen Idec) 및 TvAb(Roche)를 포함한다.
일부 구현예에서, Fc 융합 분자는 ScFv/Fc 융합체(Academic Institution), SCORPION(Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS), 이중 친화도 재표적화 기술(Fc-DART)(MacroGenics) 및 이중(ScFv)2-Fab(국립 항체 의약 연구 센터--중국)를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, Fab 융합 이중특이적 항체는 F(ab)2(Medarex/AMGEN), 이중-작용 또는 비스-Fab(Genentech), 도크-앤-락(DNL)(ImmunoMedics), 2가 이중특이적(Biotecnol) 및 Fab-Fv(UCB-Celltech)를 포함한다. ScFv-, 디아바디-기반, 및 도메인 항체는 이중특이적 T 세포 연결체(BiTE)(Micromet), 탠덤 디아바디(Tandab)(Affimed), 이중 친화도 재표적화 기술(DART)(MacroGenics), 단일 쇄 디아바디(Academic), TCR-유사 항체(AIT, ReceptorLogics), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합(Merrimack) 및 콤바디(Epigen Biotech), 이중 표적화 나노바디(Ablynx), 이중 표적화 중쇄만 있는 도메인 항체를 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 이중특이적 항체의 다양한 포맷이 예를 들어, 문헌[Chames and Baty (2009) Curr Opin Drug Disc Dev 12: 276; 및 Nunez-Prado et al., (2015) Drug Discovery Today 20(5):588-594]에 기재되어 있다.
본원에서 식별된 VH 및 VL 도메인 중 임의의 것(예컨대, CD3에 결합하는 것)은 scFv 포맷으로 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, scFv 포맷은 VH-링커-VL 배향이다. 다른 구현예에서, scFv 포맷은 VL-링커-VH 배향이다. 본원에서 식별된 VH 및 VL 도메인 중 임의의 것은 또한 sc(Fv)2 구조를 생성하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, sc(Fv)2 구조는 VH-링커-VL-링커-VL-링커-VH이다. 일부 구현예에서, sc(Fv)2 구조는 VH-링커-VL-링커-VH-링커-VL이다. 일부 구현예에서, sc(Fv)2 구조는 VH-링커-VH-링커-VL-링커-VL이다. 일부 구현예에서, sc(Fv)2 구조는 VL-링커-VH-링커-VH-링커-VL이다. 일부 구현예에서, sc(Fv)2 구조는 VL-링커-VH-링커-VL-링커-VH이다. 일부 구현예에서, sc(Fv)2 구조는 VL-링커-VL-링커-VH-링커-VH이다.
구체적인 구현예에서, 링커는 펩타이드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 자연 발생 아미노산을 포함한다. 링커에 포함될 수 있는 예시적인 아미노산은 Gly, Ser Pro, Thr, Glu, Lys, Arg, Ile, Leu, His 및 The이다. 일부 구현예에서, 링커는 이들이 표적(예컨대, ILT3 또는 CD3)에 결합하는 것과 같은 원하는 활성을 보유하도록 서로에 대해 정확한 입체형태를 형성하는 방식으로 Fab의 VH 및 VL 또는 중쇄 및 경쇄를 연결시키기에 적합한 길이를 갖는다.
특정 구현예에서, 링커는 약 5-50개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 10-40개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 10-35개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 10-30개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 10-25개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 10-20개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 15-20개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 6개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 7개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 8개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 9개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 10개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 11개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 12개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 13개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 14개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 15개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 16개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 17개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 18개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 19개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 20개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 21개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 22개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 23개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 24개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 25개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 26개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 27개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 28개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 29개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 30개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 31개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 32개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 33개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 34개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 35개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 36개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 37개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 38개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 39개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 링커는 40개의 아미노산 길이이다. 사용될 수 있는 예시적인 링커는 Gly 풍부 링커, Gly 및 Ser 함유 링커, Gly 및 Ala 함유 링커, Ala 및 Ser 함유 링커, 및 다른 유연한 링커이다. 예시적인 링커는 서열(G4S)n을 포함하며, 여기서 n=1-10, 예컨대, 1-5 또는 2-5, 예를 들어, 2, 3, 4, 또는 5이다.
사용될 수 있는 예시적인 링커는 예를 들어, 그 내용이 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 출원 번호 WO 2019/060695호에 기재된 링커 중 어느 하나를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체를 포함하는 항체는 2개의 링커를 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 3개의 링커를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 4개 이상의 링커를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체는 이의 항원 결합 단편이다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 개시된 포맷 중 어느 하나로 구성된다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 도시된 바와 같은 F0의 포맷을 갖는다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 도시된 바와 같은 F1의 포맷을 갖는다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 도시된 바와 같은 F5의 포맷을 갖는다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 도시된 바와 같은 F13의 포맷을 갖는다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 도시된 바와 같은 F7의 포맷을 갖는다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 도시된 바와 같은 F2의 포맷을 갖는다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 도시된 바와 같은 F6의 포맷을 갖는다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 도시된 바와 같은 F3의 포맷을 갖는다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 도시된 바와 같은 F14의 포맷을 갖는다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 도 7에 도시된 바와 같은 F4의 포맷을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 CD3에 결합하는 scFv 및 ILT3에 결합하는 Fab를 포함하고, 결합제는 Fc 영역을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, scFv 포맷으로서 CD3 결합 영역을 갖는 것은 세포독성을 개선하고, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제의 사이토카인 방출을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 Fc 영역은 예컨대, 감소된 Fc 수용체 결합을 통해 감소된 Fc-매개 효과기 기능을 갖도록 변경된다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 수용체 결합을 감소시키기 위해 다음의 아미노산 위치 중 하나 이상에서 변경된다: Leu 234(L234), Leu235(L235), Asp265(D265), Asp270(D270), Ser298(S298), Asn297(N297), Asn325(N325) 및 Ala327(A327). 특정 구현예에서, Fc 영역은 다음의 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함한다: Leu 234Ala(L234A), Leu235Ala(L235A), Asp265Asn(D265N), Asp270Asn(D270N), Ser298Asn(S298N), Asn297Ala(N297A), Asn325Glu(N325E) 및 Ala327Ser(A327S). 일부 구현예에서, Fc 영역은 아미노산 234 및 235 둘 모두에서 변경되는 데, 예컨대, Leu234Ala 및 Leu235Ala (L234A/L235A)이다. Fc 영역에서의 아미노산 치환에 대한 언급은 카바트에 의한 EU 넘버링에 의한 것이다. EU 넘버링은 알려져 있고, 가장 최근에 업데이트된 IMGT 과학 차트(IMGT®, the international ImMunoGeneTics information System®) 및 문헌[Kabat, E. A. et al. Sequences of Proteins of Immunological interest. 5th ed. US Department of Health and Human Services, NIH publication No. 91-3242 (1991)]에 보고된 바와 같은 EU 인덱스에 따른다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 (i) Fc 영역의 하나의 팔에 연결된 CD3에 결합하는 scFv를 포함하는 제1 폴리펩타이드, (ii) Fc 영역의 다른 팔에 연결된 ILT3에 결합하는 VH 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드, 및 (iii) ILT3에 결합하는 VL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 VH 도메인 및 VL 도메인은 ILT3에 결합하는 Fab를 형성하고, 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성한다. 일부 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 효과기 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 L234A/L235A 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 영역의 2개의 팔의 이합체화를 용이하게 하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 중 하나 이상(예컨대, T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 모두)을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366W 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 (i) Fc 영역의 하나의 팔에 연결된 CD3에 결합하는 scFv를 포함하는 제1 폴리펩타이드, (ii) ILT3에 결합하는 VH 도메인 및 Fc 영역의 다른 팔에 연결된 CH1 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드, 및 (iii) ILT3에 결합하는 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 VH 도메인, CH1 도메인, CL 도메인 및 VL 도메인은 ILT3에 결합하는 Fab를 형성하고, 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성한다. 일부 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 효과기 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 L234A/L235A 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 영역의 2개의 팔의 이합체화를 용이하게 하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 중 하나 이상(예컨대, T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 모두)을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366W 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 (i) CD3에 결합하는 scFv, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드, (ii) ILT3에 결합하는 VH 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드, 및 (iii) ILT3에 결합하는 VL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 VH 도메인 및 VL 도메인은 ILT3에 결합하는 Fab를 형성하고, 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성한다. 일부 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 효과기 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 L234A/L235A 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 영역의 2개의 팔의 이합체화를 용이하게 하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드의 CH3 도메인은 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 중 하나 이상(예컨대, T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 모두)을 포함하고, 제2 폴리펩타이드의 CH3 도메인은 T366W 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 (i) CD3에 결합하는 scFv, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드, (ii) ILT3에 결합하는 VH 도메인, CH1 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드, (iii) ILT3에 결합하는 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 VH 도메인, CH1 도메인, CL 도메인 및 VL 도메인은 ILT3에 결합하는 Fab를 형성하고, 제1 CH2 도메인, 제2 CH2 도메인, 제1 CH3 도메인 및 제2 CH3 도메인은 Fc 영역을 형성한다. 일부 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 효과기 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 L234A/L235A 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 영역의 2개의 팔의 이합체화를 용이하게 하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드의 CH3 도메인은 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 중 하나 이상(예컨대, T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 모두)을 포함하고, 제2 폴리펩타이드의 CH3 도메인은 T366W 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, ILT3 × CD3 결합제는 도 7의 F0에 도시된 바와 같은 입체배열을 갖는다.
일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩타이드, 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩타이드, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 CD3에 결합하는 scFv 및 각각이 ILT3에 결합하는 2개의 Fab를 포함하고, 결합제는 Fc 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 2개의 Fab는 동일하고, 서로 연결된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 (i) Fc 영역의 하나의 팔에 연결된 CD3에 결합하는 scFv를 포함하는 제1 폴리펩타이드, (ii) 각각이 Fc 영역의 다른 팔에 연결된 ILT3에 결합하는 2개의 동일한 VH 도메인을 연속적으로 포함하는 제2 폴리펩타이드, (iii) ILT3에 결합하는 VL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드, 및 (iv) ILT3에 결합하는 VL 도메인을 포함하는 제4 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 2개의 VH 도메인 및 2개의 VL 도메인은 ILT3에 결합하는 2개의 Fab를 형성하고, 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성한다. 일부 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 효과기 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 L234A/L235A 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 영역의 2개의 팔의 이합체화를 용이하게 하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 중 하나 이상(예컨대, T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 모두)을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366W 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 (i) Fc 영역의 하나의 팔에 연결된 CD3에 결합하는 scFv를 포함하는 제1 폴리펩타이드, (ii) 각각이 ILT3에 결합하는 2개의 동일한 VH 도메인, 및 CH1 도메인 중 하나가 Fc 영역의 다른 팔에 연결되는 2개의 동일한 CH1 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드, (iii) ILT3에 결합하는 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드, 및 (iv) ILT3에 결합하는 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제4 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 2개의 VH 도메인, 2개의 VL 도메인, 2개의 CH1 도메인 및 2개의 CL 도메인은 ILT3에 결합하는 2개의 Fab를 형성하고, 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성한다. 일부 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 효과기 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 L234A/L235A 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 영역의 2개의 팔의 이합체화를 용이하게 하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 중 하나 이상(예컨대, T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 모두)를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366W 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 (i) CD3에 결합하는 scFv, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드, (ii) ILT3에 결합하는 제1 VH 도메인, ILT3에 결합하는 제2 VH 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드, (iii) ILT3에 결합하는 제1 VL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드, 및 (iv) ILT3에 결합하는 제2 VH 도메인을 포함하는 제4 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 제1 VH 도메인 및 제1 VL 도메인은 ILT3에 결합하는 제1 Fab를 형성하고, 제2 VH 도메인 및 제2 VL 도메인은 ILT3에 결합하는 제2 Fab를 형성하며, 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성한다. 일부 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 효과기 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 L234A/L235A 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 영역의 2개의 팔의 이합체화를 용이하게 하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 중 하나 이상(예컨대, T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 모두)을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366W 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 (i) CD3에 결합하는 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드, (ii) ILT3에 결합하는 제1 VH 도메인, 제1 CH1 도메인, ILT3에 결합하는 제2 VH 도메인, 제2 CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드, (iii) ILT3에 결합하는 제1 VL 도메인 및 제1 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드, 및 (iv) ILT3에 결합하는 제2 VL 도메인 및 제2 CL 도메인을 포함하는 제4 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 제1 VH 도메인, 제1 CH1 도메인, 제1 VL 도메인 및 제1 CL 도메인은 ILT3에 결합하는 제1 Fab를 형성하고, 제2 VH 도메인, 제2 CH1 도메인, 제2 VL 도메인 및 제2 CL 도메인은 ILT3에 결합하는 제2 Fab를 형성하고, 제1 CH2 도메인, 제2 CH2 도메인, 제1 CH3 도메인 및 제2 CH3 도메인은 Fc 영역을 형성한다. 일부 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 폴리펩타이드는 전체 또는 부분적 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 효과기 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 L234A/L235A 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 Fc 영역의 2개의 팔의 이합체화를 용이하게 하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 제1 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 중 하나 이상(예컨대, T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 모두)을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 Fc 영역을 형성하는 도메인(예컨대, CH3 도메인)에서 T366W 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, ILT3 × CD3 결합제는 도 7의 F13에 도시된 바와 같은 입체배열을 갖는다. 일부 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩타이드, 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩타이드, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 제3 폴리펩타이드, 및 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 제4 폴리펩타이드를 포함한다.
5.4 약학 조성물
또 다른 일반적인 양태에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 또 다른 일반적인 양태에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제 또는 이의 단편 또는 일부를 암호화하는 핵산 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 또 다른 일반적인 양태에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제를 발현하는 조작된 세포 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 원하는 순도의 정도를 갖는 결합제와 임의의 생리학적으로 허용되는 부형제(예컨대, 문헌[Remington, Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed. 1980)]를 참조한다)를 수용액 또는 동결건조된 또는 다른 건조된 형태의 형태로 혼합함으로써 저장을 위해 제조된다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 생산하는 방법이 본원에 제공되며, 이는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 약학적으로 허용되는 담체와 조합하여 약학 조성물을 수득하는 단계를 포함한다.
5.5 사용 방법
본원에 제공된 결합제의 기능적 활성은 당업계에 알려지고 본원에 기재된 바와 같은 방법에 의해 특징이 규명될 수 있다. 결합제의 특징을 규명하기 위한 방법은 Biacore, ELISA, 및 OctetRed 분석을 포함하는 친화도 및 특이성 검정; FACS에 의해 표적 세포에 대한 항체의 결합을 검출하는 결합 검정; 세포상의 표적 항원에 대한 항체의 결합을 검출하는 결합 검정을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 특정 구현예에 따르면, 결합제의 특징을 규명하기 위한 방법은 하기 기재된 것들을 포함한다.
본 개시의 ILT3 × CD3 결합제는 치료적 치료 방법, 예컨대, ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암의 치료를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 적용에서 유용하다. 일부 구현예에서, 치료적 치료 방법은 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암에 대한 면역요법을 포함한다. 일부 구현예에서, ILT3 × CD3 결합제는 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 암 세포에 대한 면역 반응을 활성화, 촉진, 증가 및/또는 향상시키는 데 유용하다. 일부 구현예에서, ILT3 × CD3 결합제는 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 종양 또는 종양 세포에 대한 면역 반응을 활성화, 촉진, 증가 및/또는 향상시키는 데 유용하다. 일부 구현예에서, ILT3 × CD3 결합제는 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 암 세포에 대한 T 세포 반응을 활성화, 촉진, 증가 및/또는 향상시키는 데 유용하다. 일부 구현예에서, ILT3 × CD3 결합제는 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 종양 또는 종양 세포에 대한 T 세포 반응을 활성화, 촉진, 증가 및/또는 향상시키는 데 유용하다. 사용 방법은 시험관내, 생체외또는 생체내 방법일 수 있다.
일 양태에서, T 세포를 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 종양 세포로 T 세포를 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 CD3 결합 영역은 T 세포에 결합한다. 또 다른 양태에서, T 세포를 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제를 포함하는 약학 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 종양 세포로 T 세포를 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 CD3 결합 영역은 T 세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 유도된 T 세포는 암 또는 종양 세포에서 아폽토시스를 유도한다. 일부 구현예에서, T 세포가 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 종양 세포에 대해 유도되는 경우, T 세포는 차등 세포독성 및 사이토카인 방출을 유도한다. 즉, ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 종양 세포로 T 세포를 유도하는 방법은 T 세포 사이토카인 방출과 반비례하는 T-세포 의존적 세포독성[TDCC]을 초래한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, TDCC는 기준에 비해 증가되고, 사이토카인 방출은 기준에 비해 감소된다. 일부 구현예에서, 상기 TDCC 기준은 (a) 상응하는 정상 세포 또는 조직에서 측정된 TDCC; (b) 동일한 대상의 이웃하는 비암성 세포 또는 조직에서 측정된 TDCC; 또는 (c) 건강한 대상의 코호트에서 측정된 상응하는 세포 또는 조직에서 측정된 TDCC이다. 일부 구현예에서, 상기 TDCC는 아폽토시스를 측정함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 카스파제 매개 아폽토시스는 증가된다. 일부 구현예에서, 사이토카인 기준은 (a) 상응하는 정상 세포 또는 조직에서 측정된 사이토카인; (b) 동일한 대상의 이웃하는 비암성 세포 또는 조직에서 측정된 사이토카인; 또는 (c) 건강한 대상의 코호트에서 측정된 상응하는 세포 또는 조직에서 측정된 사이토카인이다. 일부 구현예에서, 상기 사이토카인 방출은 TNFα를 측정함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, TNFα 사이토카인 방출은 감소된다.
일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 혈액학적 암 또는 종양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액학적 암 또는 종양 세포는 급성 골수성 백혈병[AML] 세포이다. 일부 구현예에서, AML은 M4/M5 AML이다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 급성 골수성 백혈병[AML] 세포, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML] 세포, B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL] 세포, 만성 림프구성 백혈병[CLL] 세포, 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL] 세포, 외투세포 림프종[MCL] 세포, 다발성 골수종[MM] 세포, 골수이형성 증후군[MDS] 세포, 호지킨 림프종 세포, 림프형질세포성 림프종[LPL] 세포, 여포성 림프종 세포, 버킷 림프종 세포, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN] 세포, 또는 변연부 림프종 세포, 또는 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종 세포로 이루어진 군에서 선택된다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 고형 종양 세포이다.
일부 구현예에서, 암 세포는 기준 발현 수준에 비해 높은 수준의 ILT3을 발현한다. 일부 구현예에서, 암 세포는 기준 발현 수준에 비해 낮은 수준의 ILT3을 발현한다. 일부 구현예에서, ILT3의 상기 기준 발현 수준은 (a) ILT3의 소정의 발현 수준; (b) 상응하는 정상 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준; (c) 동일한 대상의 이웃하는 비암성 세포 또는 조직에서 측정된 ILT3 발현 수준; 또는 (d) 건강한 대상의 코호트에서 측정된 상응하는 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준이다. 일부 구현예에서, ILT3의 상기 발현 수준은 ILT3의 단백질 발현 수준을 측정함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 기준 발현 수준에 비해 낮은 수준의 ILT3을 발현하며, 여기서 기준 발현 수준은 알려진 ILT3고 암성 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준이다. 낮은 수준의 ILT3을 발현하는 암 세포는 OCI-AML-2 또는 NALM-1 세포를 포함한다. 높은 수준의 ILT3을 발현하는 암 세포는 M4 및 M5 AML, MM, 및 B-ALL, THP-1 및 MOLM13 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 결합제는 정상 골수 조혈 줄기 세포[hematopoietic stem cell, HSC]의 T 세포 매개 사멸을 유도하지 않는다.
일 양태에서, T 세포를 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, T 세포를 활성화하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 CD3 결합 영역은 T 세포에 결합한다. 또 다른 양태에서, T 세포를 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제를 포함하는 약학 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, T 세포를 활성화하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, T 세포는 미감작 T 세포이다. 일부 구현예에서, T 세포는 PBMC의 집단에서 다클론적으로 확장된다.
일 양태에서, 본원에서는 ILT3을 발현하는 표적 세포(예를 들어, 인간 ILT-3)의 표면 상에서 항원을 표적화하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 표적 세포를 유효량의 본원에서 제공된 ILT3 × CD3 결합제와 접촉시키는 것을 포함하고, 여기서 상기 ILT3 결합 영역은 상기 표적 세포에 결합한다. 또 다른 양태에서, 표적 세포를 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제를 포함하는 약학 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, 표적 세포의 표면상의 항원을 표적화하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 ILT3 결합 영역은 표적 세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 표적 세포를 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제를 포함하는 약학 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, 표적 세포의 표면상의 항원을 표적화하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 표적 세포는 기준 발현 수준에 비해 높은 수준의 ILT3을 발현한다. 일부 구현예에서, 표적 세포는 기준 발현 수준에 비해 낮은 수준의 ILT3을 발현한다. 일부 구현예에서, ILT3의 상기 기준 발현 수준은 (a) ILT3의 소정의 발현 수준; (b) 상응하는 정상 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준; (c) 동일한 대상의 이웃하는 비암성 세포 또는 조직에서 측정된 ILT3 발현 수준; 또는 (d) 건강한 대상의 코호트에서 측정된 상응하는 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준이다. 일부 구현예에서, ILT3의 상기 발현 수준은 ILT3의 단백질 발현 수준을 측정함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 표적 세포는 기준 발현 수준에 비해 낮은 수준의 ILT3을 발현하며, 여기서 기준 발현 수준은 알려진 ILT3고 암성 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준이다. 낮은 수준의 ILT3을 발현하는 암 세포는 OCI-AML-2 또는 NALM-1 세포를 포함한다. 높은 수준의 ILT3을 발현하는 암 세포는 M4 및 M5 AML, MM, 및 B-ALL, THP-1 및 MOLM13 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 세포는 암(예컨대, 혈액학적 암)에서 유래한다. 일부 구현예에서, 표적 세포는 B 세포 악성종양 또는 백혈병에서 유래한 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 M4/M5 AML, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML], B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL], 만성 림프구성 백혈병[CLL], 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL], 외투세포 림프종[MCL], 다발성 골수종[MM], 골수이형성 증후군[MDS], 호지킨 림프종, 림프형질세포성 림프종[LPL], 여포성 림프종, 버킷 림프종, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN], 또는 변연부 림프종(예컨대, 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종)을 포함한 급성 골수성 백혈병[AML]이다. 일부 구현예에서, 암은 고형 종양이다.
일 양태에서, 암 또는 종양 세포를 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제와 접촉시키는 단계를 포함하는, ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 종양 세포를 사멸시키거나 이의 증식을 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 또 다른 양태에서, 암 또는 종양 세포를 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제를 포함하는 약학 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 종양 세포를 사멸시키거나 이의 증식을 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, ILT3 × CD3 결합제는 T 세포를 활성화한다. 일부 구현예에서, CD3 결합 영역은 T 세포를 활성화한다. 일부 구현예에서, 활성화된 T 세포는 암 세포 또는 종양 세포에서 아폽토시스를 유도한다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 혈액학적 암 또는 종양 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액학적 암 또는 종양 세포는 급성 골수성 백혈병[AML] 세포이다. 일부 구현예에서, AML은 M4/M5 AML이다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 급성 골수성 백혈병[AML] 세포, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML] 세포, B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL] 세포, 만성 림프구성 백혈병[CLL] 세포, 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL] 세포, 외투세포 림프종[MCL] 세포, 다발성 골수종[MM] 세포, 골수이형성 증후군[MDS] 세포, 호지킨 림프종 세포, 림프형질세포성 림프종[LPL] 세포, 여포성 림프종 세포, 버킷 림프종 세포, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN] 세포, 또는 변연부 림프종 세포, 또는 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종 세포이다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 고형 종양 세포이다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 기준 발현 수준에 비해 높은 수준의 ILT3을 발현한다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 기준 발현 수준에 비해 낮은 수준의 ILT3을 발현한다. 일부 구현예에서, ILT3의 상기 기준 발현 수준은 (a) ILT3의 소정의 발현 수준; (b) 상응하는 정상 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준; (c) 동일한 대상의 이웃하는 비암성 세포 또는 조직에서 측정된 ILT3 발현 수준; 또는 (d) 건강한 대상의 코호트에서 측정된 상응하는 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준이다. 일부 구현예에서, ILT3의 상기 발현 수준은 ILT3의 단백질 발현 수준을 측정함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 기준 발현 수준에 비해 낮은 수준의 ILT3을 발현하며, 여기서 기준 발현 수준은 알려진 ILT3고 암성 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준이다. 낮은 수준의 ILT3을 발현하는 암 세포는 OCI-AML-2 또는 NALM-1 세포를 포함한다. 높은 수준의 ILT3을 발현하는 암 세포는 M4 및 M5 AML, MM, 및 B-ALL, THP-1 및 MOLM13 세포를 포함한다.
일 양태에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 종양을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 또 다른 양태에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제를 포함하는 약학 조성물 또는 본원에 제공된 약학 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 종양을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양은 혈액학적 암 또는 종양이다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양은 백혈병이다. 일부 구현예에서, 혈액학적 암 또는 종양은 급성 골수성 백혈병[AML]이다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양은 골수이형성 증후군이다. 골수이형성 증후군[MDS]은 골수 내의 미성숙 혈액 세포가 성숙하지 않아 건강한 혈액 세포로 변하지 않는 암의 그룹이다. 일부 구현예에서, 골수이형성 증후군은 AML로 발달한다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양은 M4/M5 AML, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML], B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL], 만성 림프구성 백혈병[CLL], 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL], 외투세포 림프종[MCL], 다발성 골수종[MM], 골수이형성 증후군[MDS], 호지킨 림프종, 림프형질세포성 림프종[LPL], 여포성 림프종, 버킷 림프종, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN], 또는 변연부 림프종(예컨대, 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종)을 포함한 급성 골수성 백혈병[AML]이다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양은 고형 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 기준 발현 수준에 비해 높은 수준의 ILT3을 발현한다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 기준 발현 수준에 비해 낮은 수준의 ILT3을 발현한다. 일부 구현예에서, ILT3의 상기 기준 발현 수준은 (a) ILT3의 소정의 발현 수준; (b) 상응하는 정상 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준; (c) 동일한 대상의 이웃하는 비암성 세포 또는 조직에서 측정된 ILT3 발현 수준; 또는 (d) 건강한 대상의 코호트에서 측정된 상응하는 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준이다. 일부 구현예에서, ILT3의 상기 발현 수준은 ILT3의 단백질 발현 수준을 측정함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 기준 발현 수준에 비해 낮은 수준의 ILT3을 발현하며, 여기서 기준 발현 수준은 알려진 ILT3고 암성 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준이다. 낮은 수준의 ILT3을 발현하는 암 세포는 OCI-AML-2 또는 NALM-1 세포를 포함한다. 높은 수준의 ILT3을 발현하는 암 세포는 M4 및 M5 AML, MM, 및 B-ALL, THP-1 및 MOLM13 세포를 포함한다.
또 다른 양태에서, 대상에서 ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 종양의 치료를 위한 의약의 제조에 있어 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제의 용도가 본원에 제공된다. 또 다른 추가의 양태에서, ILT3(예컨대, 인간 ILT3)을 발현하는 암 또는 종양의 치료에 사용하기 위한 결합제가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양은 혈액학적 암 또는 종양이다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양은 M4/M5 AML, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML], B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL], 만성 림프구성 백혈병[CLL], 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL], 외투세포 림프종[MCL], 다발성 골수종[MM], 골수이형성 증후군[MDS], 호지킨 림프종, 림프형질세포성 림프종[LPL], 여포성 림프종, 버킷 림프종, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN], 또는 변연부 림프종(예컨대, 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종)을 포함한 급성 골수성 백혈병[AML]이다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양은 골수이형성 증후군이다. 골수이형성 증후군[MDS]은 골수 내의 미성숙 혈액 세포가 성숙하지 않아 건강한 혈액 세포로 변하지 않는 암의 그룹이다. 일부 구현예에서, 골수이형성 증후군은 AML로 발달한다. 특정 구현예에서, 암 또는 종양은 혈액학적 암을 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액학적 암 또는 종양은 급성 골수성 백혈병[AML]이다. 일부 구현예에서, AML은 M4/M5 AML이다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양은 고형 종양을 포함한다.
일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 기준 발현 수준에 비해 높은 수준의 ILT3을 발현한다. 일부 구현예에서, 암 또는 종양 세포는 기준 발현 수준에 비해 낮은 수준의 ILT3을 발현한다. 일부 구현예에서, ILT3의 상기 기준 발현 수준은 (a) ILT3의 소정의 발현 수준; (b) 상응하는 정상 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준; (c) 동일한 대상의 이웃하는 비암성 세포 또는 조직에서 측정된 ILT3 발현 수준; 또는 (d) 건강한 대상의 코호트에서 측정된 상응하는 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준이다. 일부 구현예에서, ILT3의 상기 발현 수준은 ILT3의 단백질 발현 수준을 측정함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 기준 발현 수준에 비해 낮은 수준의 ILT3을 발현하며, 여기서 기준 발현 수준은 알려진 ILT3고 암성 세포 또는 조직에서의 ILT3 발현 수준이다. 낮은 수준의 ILT3을 발현하는 암 세포는 OCI-AML-2 또는 NALM-1 세포를 포함한다. 높은 수준의 ILT3을 발현하는 암 세포는 M4 및 M5 AML, MM, 및 B-ALL, THP-1 및 MOLM13 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 대상은 이를 필요로 하는 대상이다. 일부 구현예에서, 대상은 인간이다. 구체적인 구현예에서, 대상은 본원에 개시된 결합제 또는 약학 조성물의 유효량을 투여받는다.
특정 구현예에 따르면, 본원에 기재된 약학 조성물은 대상로의 의도된 투여 경로에 적합하도록 제형화된다. 예를 들어, 본원에 기재된 약학 조성물은 정맥내, 피하 또는 근육내 투여에 적합하도록 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제는 보충 요법과 조합하여 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 2개 이상의 요법의 대상으로의 투여의 맥락에서 용어 '조합하여'는 1개 초과의 요법의 사용을 지칭한다. 용어 '조합하여'의 사용은 요법이 대상에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 제1 요법(예컨대, 본원에 기재된 조성물)은 대상에게 제2 요법의 투여 전에(예컨대, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주 또는 12주 전), 그와 동시에 또는 이에 후속하여(예컨대, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주 또는 12주 후) 투여될 수 있다.
5.6
키트
또 다른 일반적 양태에서, 본 개시는 본원에 제공된 단리된 이중특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 사용 설명서를 포함하는 키트에 관한 것이다.
일 구현예에서, 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제를 포함하는 키트가 제공된다. 기재된 키트는 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합 단편을 사용하는 방법 또는 당업자에게 알려진 다른 방법을 수행하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 기재된 키트는 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편, 및 생물학적 샘플에서 ILT3 × CD3 결합제의 존재를 검출하는 데 사용하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 따라서, 기재된 키트는 본원에 기재된 항체 중 하나 이상, 또는 이의 항원 결합 단편(들), 및 사용되지 않을 때 항체 또는 단편을 함유하기 위한 용기, 항체 또는 단편의 사용 설명서, 고체 지지체에 부착된 항체 또는 단편, 및/또는 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 단편의 검출 가능하게 표지된 형태를 포함할 수 있다.
또 다른 구현예에서, ILT3에 특이적으로 결합하는 제1 결합 영역 및 본원에 제공된 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는 ILT3 × CD3 결합제를 포함하는 키트가 제공된다.
일부 구현예에서, 키트는 본원에 기재된 항체 및 항체를 검출하기 위한 시약을 포함한다. 키트는 추가로 다음을 포함하는 하나 이상의 다른 요소를 추가로 포함할 수 있다: 사용 설명서; 다른 시약, 예컨대, 라벨, 치료제, 또는 항체를 킬레이팅하거나 달리 커플링하는 데 유용한 작용제, 라벨 또는 치료제에 대한 항체, 또는 방사선보호 조성물; 투여를 위한 항체를 제조하기 위한 장치 또는 기타 재료; 약학적으로 허용되는 담체; 및 대상에게 투여하기 위한 장치 또는 기타 재료.
일부 구현예에서, 키트는 용기 내의 본원에 제공된 ILT3 × CD3 결합제, 및 키트 사용에 대한 설명서를 포함한다.
일부 구현예에서, 키트 내의 ILT3 × CD3 결합제는 표지된다.
상충의 경우에, 정의를 포함하는 본 명세서가 지배할 것이다. 본원에 사용된 바와 같이 그리고 첨부된 청구범위에서, 단수 형태는 문맥이 명백히 다르게 나타내지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, '펩타이드 서열' 또는 '치료'에 대한 언급은 복수의 이러한 서열, 및 치료 등을 포함한다. 임의의 임의적 요소를 배제하도록 청구범위를 작성할 수 있음을 또한 주목해야 한다. 이와 같이, 이러한 진술은 청구범위 요소의 인용 또는 '부정적인' 제한의 사용과 관련하여 '단독', 및 '오직' 등과 같은 이러한 배타적인 용어의 사용을 위한 선행 기준으로서 역할을 하기 위한 것이다.
값의 범위가 제공되는 경우, 문맥이 달리 명확히 지시되지 않는 한, 해당 범위의 상한과 하한 사이에, 하한의 단위의 1/10까지, 각각의 중간 값 및 해당 언급된 범위에서의 임의의 다른 언급된 값 또는 중간 값이 본 발명 내에 포함되는 것으로 이해된다. 이러한 보다 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 보다 작은 범위에 포함될 수 있으며, 명시된 범위에서 구체적으로 배제되는 임의의 한계에 따라 본 발명 내에 또한 포함된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 이들 포함된 한계 중 어느 하나 또는 둘 모두를 배제한 범위가 본 발명에 또한 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, 수치 값은 본 문서 전반에 걸쳐 종종 범위 포맷으로 제시된다. 범위 포맷에서의 사용은 편의성 및 간결성을 위한 것일 뿐이며, 문맥상 명확히 달리 표시되지 않는 한, 발명의 범주에 대한 융통성 없는 제한으로서 해석되어서는 안 된다. 따라서, 범위의 사용은 문맥상 명확히 달리 표시되지 않는 한, 모든 가능한 하위 범위, 해당 범위 내의 모든 개별 수치 값, 및 이러한 범위 내의 정수 및 범위 내의 값 또는 정수의 분수를 포함하는 모든 수치 값 또는 수치 범위를 명시적으로 포함한다. 이러한 구성은 본 특허 문서 전반에 걸쳐 범위의 폭 및 모든 맥락에 관계없이 적용된다. 따라서, 예를 들어, 90-100%의 범위에 대한 언급은 91-99%, 92-98%, 93-95%, 91-98%, 91-97%, 91-96%, 91-95%, 91-94%, 및 91-93% 등을 포함한다. 90-100%의 범위에 대한 언급은 또한 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 등, 뿐만 아니라 91.1%, 91.2%, 91.3%, 91.4%, 91.5%, etc., 92.1%, 92.2%, 92.3%, 92.4%, 92.5%, 등을 포함한다. 또한, 1-3, 3-5, 5-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-100, 100-110, 110-120, 120-130, 130-140, 140-150, 150-160, 160-170, 170-180, 180-190, 190-200, 200-225, 225-250의 범위에 대한 언급은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 등을 포함한다. 추가의 예에서, 25-250, 250-500, 500-1000, 1000-2500, 2500-5000, 5000-25,000, 또는 5000-50,000의 범위에 대한 언급은 이러한 값 내에 있거나 이를 포함하는 임의의 수치 값 또는 범위, 예컨대, 25, 26, 27, 28, 29...250, 251, 252, 253, 254,...500, 501, 502, 503, 504,... 등을 포함한다. 일련의 범위를 사용하면 또 다른 범위를 제공하기 위해 상위 범위와 하위 범위의 조합이 포함된다. 이러한 구성은 본 특허 문서 전반에 걸쳐 범위의 폭 및 모든 맥락에 관계없이 적용된다. 따라서, 예를 들어, 5-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-75, 75-100, 100-150과 같은 일련의 범위에 대한 언급은 5-20, 5-30, 5-40, 5-50, 5-75, 5-100, 5-150, 및 10-30, 10-40, 10-50, 10-75, 10-100, 10-150, 및 20-40, 20-50, 20-75, 20-100, 20-150 등과 같은 범위를 포함한다.
간결성을 위해, 특정 약어가 본원에 사용된다. 일 예는 아미노산 잔기를 나타내는 단일 문자 약어이다. 아미노산 및 이들의 상응하는 세 글자 및 단일 글자 약어는 다음과 같다.
본 발명은 일반적으로 다수의 구현예를 설명하기 위해 긍정 언어를 사용하여 본원에 개시된다. 본 발명은 또한 구체적으로 특히 물질 또는 재료, 방법 단계 및 조건, 프로토콜, 절차, 검정 또는 분석과 같은 특정 주제가 완전히 또는 부분적으로 배제되는 구현예를 포함한다. 따라서, 본 발명이 일반적으로 본 발명이 포함하지 않는 것의 관점에서 본원에서 표현되지 않더라도, 그럼에도 불구하고 본 발명에 명시적으로 포함되지 않은 양태가 본원에 개시된다.
본 발명을 수행하기 위한 발명자에게 알려진 최선의 방식을 포함하는 본 발명의 특별한 구현예가 본원에 기재된다. 전술한 설명의 판독 시, 개시된 구현예의 변경이 당업자에게 명백해질 수 있고, 당업자는 이러한 변경을 적절하게 사용할 수 있을 것으로 기대된다. 따라서, 본 발명은 본원에 구체적으로 기재한 바와 다르게 실시되고, 본 발명은 적용 가능한 법률에 의해 허용되는 바에 따라 본원에 첨부된 청구범위에 언급된 주제의 모든 변형 및 균등물을 포함한다고 의도된다. 더욱이, 이들의 모든 가능한 변경에서의 전술한 요소의 임의의 조합은 본 명세서에 달리 표시되지 않거나 또는 문맥에 의해 달리 명확하게 모순되지 않는 한, 본 발명에 의해 포함된다.
본 명세서에서 인용된 모든 공개물, 특허 출원, 수탁 번호 및 기타 참고문헌은 각각의 개별 공개물 또는 특허 출원이 구체적으로 그리고 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 기재된 것과 같이 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 본원에서 논의된 공개물은 본 출원의 출원일 전에 이들의 개시에 대해 단독으로 제공된다. 본원에서 어떠한 것도 본 발명이 이전 발명에 의해 이러한 공개물보다 선행할 권리가 없음을 인정하는 것으로 해석되지 않는다. 또한, 제공되는 공개물의 날짜는 실제 공개 날짜와 상이할 수 있으며 이는 개별적으로 확인될 필요가 있을 수 있다.
본 발명의 다수의 구현예가 기재되어 있다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 정신 및 범주를 벗어나지 않고 다양한 변형이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 실험 섹션의 설명은 청구범위에 기재된 발명의 범주를 예시하기 위한 것이지 제한하려는 것이 아니다.
6. 구현예
본 발명은 다음의 비제한적인 구현예를 제공한다.
1. 인간 ILT3에 결합하는 제1 결합 영역 및 인간 CD3에 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는 결합제로서, 여기서 CD3 결합 영역은 항-CD3 scFv를 포함하는, 결합제.
2. 구현예 1에 있어서, 여기서 제1 결합 영역은 항-ILT3 Fab를 포함하는, 결합제.
3. 구현예 1 또는 2에 있어서, 여기서 인간 ILT3에 대한 제1 결합 영역의 결합 친화도는 인간 CD3에 대한 제2 결합 영역의 결합 친화도보다 높은, 결합제.
4. 구현예 3에 있어서, 인간 ILT3에 대한 제1 결합 영역의 결합 친화도는 인간 CD3에 대한 제2 결합 영역의 결합 친화도보다 약 10배 내지 약 100배 높은, 결합제.
5. 구현예 1 내지 4 중 어느 하나의 결합제는 Fc 영역을 추가로 포함하는 결합제.
6. 구현예 5에 있어서,
(i) 항-CD3 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드;
(ii) 제1 결합 영역의 VH 도메인, CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드; 및
(iii) 제1 결합 영역의 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하되,
제1 결합 영역의 VH 도메인, CH1 도메인, 제1 결합 영역의 VL 도메인 및 CL 도메인은 항-ILT3 Fab를 형성하고, 제1 CH2 도메인, 제2 CH2 도메인, 제1 CH3 도메인 및 제2 CH3 도메인은 Fc 영역을 형성하는, 결합제.
7. 구현예 6에 있어서, 여기서 제1 폴리펩타이드는 조작된 공동을 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 조작된 돌출부를 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하며, 제1 폴리펩타이드는 돌출부를 공동 내에 위치시킴으로써 제2 폴리펩타이드와 이합체화되는, 결합제.
8. 구현예 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 제2 결합 영역은 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인; 및 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 결합제.
9. 구현예 8에 있어서, 여기서 제2 결합 영역에서,
제2 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제2 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 결합제.
10. 구현예 1내지9중 어느 하나에 있어서, 제1 결합 영역은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 결합제.
11. 구현예 10에 있어서, 여기서 제1 결합 영역에서,
(a) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(b) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(c) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(d) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(e) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 결합제.
12. 구현예 10 또는 11에 있어서, 여기서
(i) 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하고, 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하거나,
(ii) 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 결합제.
13. 인간 ILT3에 결합하는 제1 결합 영역 및 인간 CD3에 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는 결합제로서, 제2 결합 영역은 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 결합제.
14. 구현예 13에 있어서, 여기서 제2 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제2 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1,서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 결합제.
15. 구현예 13 또는 14에 있어서, 여기서 제1 결합 영역은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 결합제.
16. 구현예 13 내지 15에 있어서, 여기서 제1 결합 영역에서,
(a) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(b) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(c) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(d) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(e) 제1 결합 영역의 VH 도메인은 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 결합제.
17. 구현예 15 또는 16에 있어서, 여기서
(i) 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하고, 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VL 도메인을 포함하거나,
(ii) 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 결합제.
18. 구현예 13 내지 17중 어느 하나에 있어서, 여기서 제1 결합 영역은 항-ILT3 Fab를 포함하는, 결합제.
19. 구현예 13 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 여기서 제2 결합 영역은 항-CD3 scFv를 포함하는, 결합제.
20. 구현예 13 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 여기서 결합제는 Fc 영역을 추가로 포함하는, 결합제.
21. 구현예 20에 있어서, 여기서 결합제는
(i) 항-CD3 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드;
(ii) 제1 결합 영역의 VH 도메인, CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드; 및
(iii) 제1 결합 영역의 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하되,
제1 결합 영역의 VH 도메인, CH1 도메인, 제1 결합 영역의 VL 도메인 및 CL 도메인은 항-ILT3 Fab를 형성하고, 제1 CH2 도메인, 제2 CH2 도메인, 제1 CH3 도메인 및 제2 CH3 도메인은 Fc 영역을 형성하는, 결합제.
22. 구현예 21에 있어서, 여기서 제1 폴리펩타이드는 조작된 공동을 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 조작된 돌출부를 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제1 폴리펩타이드는 돌출부를 공동 내에 위치시킴으로써 제2 폴리펩타이드와 이합체화되는, 결합제.
23. 구현예 21 또는 22에 있어서, 여기서
(i) 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하고, 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하거나,
(ii) 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 19의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 결합제.
24. 구현예 13 내지 17에 있어서, 여기서 제1결합 영역은 두 개의 동일한 항-ILT3 Fab를 포함하고, 제2 결합 영역은 항-CD3 scFv를 포함하는, 결합제.
25. 구현예 24에 있어서, 여기서 결합제는
(i) 항-CD3 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드;
(ii) 제1 VH 도메인, 제2 VH 도메인, 제1 CH1 도메인, 제2 CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드로서, 제1 및 제2 VH 도메인 각각은 제1 결합 영역의 VH 도메인을 포함하는, 제2 폴리펩타이드;
(iii) 제1 VL 도메인 및 제1 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드로서, 제1 VL 도메인은 제1 결합 영역의 VL 도메인을 포함하는, 제3 폴리펩타이드; 및
(iv) 제2 VL 도메인 및 제2 CL 도메인을 포함하는 제4 폴리펩타이드로서, 제2 VL 도메인은 제1결합 영역의 VL 도메인을 포함하는, 제4 폴리펩타이드를 포함하되,
여기서 제2 폴리펩타이드의 제1 VH 도메인 및 제1 CH1 도메인, 및 제3 폴리펩타이드의 제1 VL 도메인 및 제1 CL 도메인은 제1 Fab 영역을 형성하고, 제2 폴리펩타이드의 제2 VH 도메인 및 제2 CH1 도메인, 및 제4 폴리펩타이드의 제2 VL 도메인 및 제2 CL 도메인은 제2 Fab 영역을 형성하고, 제1 CH2 도메인, 제2 CH2 도메인, 제1 CH3 도메인 및 제2 CH3 도메인은 Fc 영역을 형성하는, 결합제.
26. 구현예 25에 있어서, 여기서 제1 폴리펩타이드는 조작된 공동을 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 조작된 돌출부를 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하되, 제1 폴리펩타이드는 돌출부를 공동 내에 위치시킴으로써 제2 폴리펩타이드와 이합체화되는, 결합제.
27. 구현예 25 또는 26에있어서, 여기서
(i) 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하고, 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, 제4 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하거나,
(ii) 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 169의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제4 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 결합제.
28. 구현예 1-12 및 19-27 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD3 scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는, 결합제.
29. 구현예 1 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 상기 결합제는 인간화 항체인, 결합제.
30. 결합제로서,
(i) 인간 CD3에 결합하는 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드;
(ii) 인간 ILT3에 결합하는 VH 도메인, CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드; 및
(iii) 인간 ILT3에 결합하는 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하되,
인간 CD3에 결합하는 scFv는 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고,
인간 ILT3에 결합하는 VH 도메인은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 인간 ILT3에 결합하는 VL 도메인은 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 결합제.
31. 구현예 30에 있어서, 여기서,
(a) scFv의 HCDR1은 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하고, scFv의 HCDR2는 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하고, scFv의 HCDR3은 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하고, scFv의 LCDR1은 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하고, scFv의 LCDR2는 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하고, scFv의 LCDR3은 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하며,
(b) 인간 ILT3에 결합하는 VH 도메인 및 인간 ILT3에 결합하는 VL 도메인에서,
(i) HCDR1은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나,
(ii) HCDR1은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나,
(iii) HCDR1은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나,
(iv) HCDR1은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나,
(v) HCDR1은 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는, 결합제.
32. 구현예 30 또는 구현예31에 있어서, 여기서 인간 CD3에 결합하는 scFv의 VH 도메인은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하고, 인간 CD3에 결합하는 scFv의 VL 도메인은 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하며, 인간 ILT3에 결합하는 VH 도메인은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하고, 인간 ILT3에 결합하는 VL 도메인은 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는, 결합제.
33. 구현예 30 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 여기서 scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는, 결합제.
34. 구현예 1 내지 33 중 어느 하나의 결합제를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드.
35. 구현예 34의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터.
36. 구현예 34의 폴리뉴클레오타이드 또는 구현예 35 의 벡터를 포함하는 단리된 세포.
37. 구현예 1 내지 33 중 어느 하나의 결합제를 생산하는 단리된 세포.
38. 구현예 1 내지 33 중 어느 하나의 결합제, 구현예 34 의 단리된 폴리뉴클레오타이드, 구현예 35의 벡터, 또는 구현예 36 또는 37의 단리된 세포, 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
39. ILT3을 발현하는 암 또는 종양 세포로 T 세포를 유도하는 방법으로서, T 세포를 구현예 1 내지 33 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 38의 약학 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
40. 구현예 39에 있어서, 여기서 T 세포는 ILT3을 발현하는 암 또는 종양 세포의 사멸을 유도하는, 방법.
41. 구현예 40에 있어서, 여기서 암 또는 종양 세포는 혈액학적 암 또는 종양 세포인, 방법.
42. 구현예 41에 있어서, 여기서 혈액학적 암 또는 종양 세포는 급성 골수성 백혈병[AML] 세포, M4/M5 AML 세포, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML] 세포, B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL] 세포, 만성 림프구성 백혈병[CLL] 세포, 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL] 세포, 외투세포 림프종[MCL] 세포, 다발성 골수종[MM] 세포, 골수이형성 증후군[MDS] 세포, 호지킨 림프종 세포, 림프형질세포성 림프종[LPL] 세포, 여포성 림프종 세포, 버킷 림프종 세포, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN] 세포, 변연부 림프종 세포 또는 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종 세포로 이루어진 군에서 선택되는, 방법.
43. 구현예 39 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 여기서 T 세포는 정상 조혈 줄기 세포[HSC]의 사멸을 유도하지 못하는, 방법.
44. T 세포를 활성화하는 방법으로서, T 세포를 구현예 1 내지 33 중 어느 하나의 결합제 또는 구현예 38의 약학 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하되, 제2 결합 영역은 T 세포에 결합하는, 방법.
45. 구현예 44에 있어서, 여기서 T 세포는 미감작 T 세포인, 방법.
46. 구현예 44 또는 구현예 45에 있어서, 여기서 T 세포는 PBMC의 집단에서 다클론적으로 확장되는, 방법.
47. ILT3을 발현하는 암 또는 종양 세포를 사멸시키거나 이의 증식을 억제하는 방법으로서, 암 또는 종양 세포를 구현예 1 내지 33 중 어느 한 항의 결합제 또는 구현예 38의 약학 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
48. 구현예 47에 있어서, 여기서 결합제는 T 세포를 활성화하는, 방법.
49. 구현예 48에 있어서, 여기서 활성화된 T 세포는 암 또는 종양 세포의 사멸을 유도하는, 방법.
50. 구현예 47 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 여기서 암 또는 종양 세포는 혈액학적 암 또는 종양 세포를 포함하는, 방법.
51. 구현예 50에 있어서, 여기서 혈액학적 암 또는 종양 세포는 급성 골수성 백혈병[AML] 세포, M4/M5 AML 세포, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML] 세포, B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL] 세포, 만성 림프구성 백혈병[CLL] 세포, 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL] 세포, 외투세포 림프종[MCL] 세포, 다발성 골수종[MM] 세포, 골수이형성 증후군[MDS] 세포, 호지킨 림프종 세포, 림프형질세포성 림프종[LPL] 세포, 여포성 림프종 세포, 버킷 림프종 세포, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN] 세포, 변연부 림프종 세포 또는 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종 세포로 이루어진 군에서 선택되는, 방법.
52. 대상에서 ILT3을 발현하는 암 또는 종양을 치료하는 방법으로서, 구현예 1 내지 33 중 어느 한 항의 결합제 또는 구현예 38의 약학 조성물의 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
53. 구현예 52에 있어서, 여기서 암 또는 종양은 혈액학적 암 또는 종양을 포함하는, 방법.
54. 구현예 53에 있어서, 여기서 혈액학적 암 또는 종양은 급성 골수성 백혈병[AML], M4/M5 AML, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML], B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL], 만성 림프구성 백혈병[CLL], 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL], 외투세포 림프종[MCL], 다발성 골수종[MM], 골수이형성 증후군[MDS], 호지킨 림프종, 림프형질세포성 림프종[LPL], 여포성 림프종, 버킷 림프종, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN], 변연부 림프종 또는 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종으로 이루어진 군에서 선택되는, 방법.
7. 실시예
다음은 연구에 사용된 다양한 방법 및 재료에 대한 설명이고, 본 발명을 제조하는 방법 및 사용하는 방법에 관한 완전한 개시 및 설명을 당업자에게 제공하기 위해 제시되며, 발명자들이 자신의 발명이라고 간주하는 것의 범주를 제한하고자 하는 것은 아니며 또한 다음의 실험이 수행되었음을 그리고 수행될 수 있는 모든 실험들임을 나타고자 하는 것도 아니다. 본 시제로 기술된 예시적 설명은 반드시 수행될 필요는 없고, 오히려 설명이 본 발명의 교시와 연관된 데이터 등을 생성하기 위해 수행될 수 있음이 이해되어야 한다. 사용된 숫자(예컨대, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위한 노력이 수행되었지만, 일부 실험 오차 및 편차가 고려되어야 한다.
달리 나타내지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이고, 온도는 섭씨 온도(℃)이고 압력은 대기압 또는 이의 근접 압력이다. 다음을 포함하는 표준 약어가 사용된다: bp = 염기쌍(들); kb = 킬로베이스(들); s 또는 sec = 초; min = 분; h 또는 hr = 시간; aa = 아미노산(들); kb = 킬로베이스(들); nt = 뉴클레오타이드(들); pg = 피코그램; ng = 나노그램; μg = 마이크로그램; mg = 밀리그램; g = 그램; kg = 킬로그램; pl 또는 pL = 피코리터(들); dl 또는 dL = 데시리터; μl 또는 μL = 마이크로리터; ml 또는 mL = 밀리리터; l 또는 L = 리터; μM = 마이크로몰; mM = 밀리몰; M = 몰; kDa = 킬로달톤; i.m. = 근육내(로); i.p. = 복강내(로); SC 또는 SQ = 피하(로); QD = 매일; BID = 하루에 두 번; QW = 매주; TIW = 일주일에 세 번; QM = 매달; HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피; BW = 체중; U = 단위; ns = 통계적으로 유의하지 않음; PBS = 인산 완충 식염수; PCR = 중합효소 연쇄 반응; NHS = N-하이드록시석신이미드; HSA = 인간 혈청 알부민; BSA = 소 혈청 알부민; DMEM = 둘베코의 이글 배지 변형; GC = 게놈 복사; EDTA = 에틸렌다이아민테트라아세트산.
다음의 실험 방법을 본원에 기재된 실시예 전반에 걸쳐 사용하였다.
확장된 T 세포의 생성을 위한 프로토콜. T 세포를 범용 T 세포 단리 키트(Miltenyi)를 사용하여 음성 선택에 의해 인간 PBMC로부터 정제하고, 5% 정상 인간 혈청(MilliporeSigma), 2 mM GlutaGro(Corning), 10 mM HEPES(Corning) 및 5 ng/mL IL-17, 5 ng/mL IL-15, 및 25 ng/mL IL-2(모두 Peprotech로부터)를 함유하는 X-Vivo 15 배지(Lonza)에서 1:1 세포:비드 비로 인간 항-CD3/CD28 항체(Gibco/ThermoFisher Scientific)로 코팅된 Dynabead로 2일 동안 활성화시켰다. 자기 컬럼을 통과시켜 Dynabead를 제거한 후, 활성화된 T 세포를 동일한 배지에서 8일 더 배양하고, 향후 T-세포 의존적 세포독성[TDCC] 검정에 사용하기 위해 CryoStor CS10 세포 보존 배지(StemCell Technologies)에서 생존 가능하게 동결시켰다.
T-세포 의존적 세포독성[TDCC] 검정에 사용하기 위한 적색 형광 세포주의 생성을 위한 프로토콜. 표적 세포주를 1-3의 감염 다중도[multiplicity of infection, MOI]에서 Nuclight Red 렌티바이러스 시약(Sartorius)을 사용하여 적색 핵 염료로 안정적으로 형질주입시켰다. 적색 형광 세포를 Aria II 유세포 분석기에서 분류하고 확장시켰다.
확장된 T 세포에 대한 T-세포 의존적 세포독성[TDCC]을 평가하기 위한 프로토콜. T 세포 독성 검정 하루 전에, 동결보존된 확장된 T 세포(위에 기재된 바와 같이 생성됨)를 해동시키고, X-Vivo 15 배지(Lonza)에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 96-웰, 평평한 바닥 플레이트의 웰을 X-Vivo에서 최종 농도 15배에서 4배까지 희석된 시험 항체의 연속 희석물 100 μL/웰로 미리 충전하였다. 각각의 시험 물품의 1 μg/mL의 최고 최종 농도를 사용하였다. 동결보존된 확장된 T 세포를 생존 가능하게 해동시키고, X-Vivo 15 배지 중에 1 × 106개의 세포/mL의 밀도로 재현탁시키고, 50 μL/웰로 플레이트에 첨가하였다. 형광 표지된 세포주를 계수하고, X-Vivo 15 배지에서 2 × 105개의 세포/mL의 밀도로 재현탁시키고, 50 μL/웰로 플레이트에 첨가하였다. 최종 효과기:표적 세포 비는 5:1이었다. 활성화된 카스파제 3/7에 의한 카스파제 절단 도메인[caspase cleavage domain, DEVD] 절단시 방출되는 녹색 DNA-결합 형광 표지에 커플링된 DEVD인 카스파제 3/7 녹색 시약(Sartorius)을 1:1000의 최종 농도로 웰에 첨가하였다. 이어서, 배양물을 Incucyte ZOOM 생 세포 영상화기(Sartorius)를 사용하여 24시간 기간에 걸쳐 영상화하였다. 아폽토시스 표적 세포의 백분율을 적색 및 녹색(카스파제 3/7+) 신호의 중첩에 의해 결정하였다. 데이터를 Incucyte ZOOM 소프트웨어, 버전 2018A(Sartorius)를 사용하여 분석하였다. 일부 실험에서, 무세포 배양 상청액을 24시간 후에 수확하고, Luminex(ProcartaPlex 시스템; ThermoFisher Scientific)에 의해 사이토카인 수준에 대해 분석하였다.
PBMC 세포독성을 평가하기 위한 프로토콜. 96-웰, 평평한 바닥 플레이트의 웰을 X-Vivo 15 배지(Lonza)에 최종 농도의 4배까지 희석된 시험 항체의 연속 희석물 100 μL/웰로 미리 충전하였다. 각각의 시험 물품의 10 μg/mL의 최고 최종 농도를 사용하였다. 동결보존된 인간 PBMC를 생존 가능하게 해동시키고, X-Vivo 15 배지 중에 1 Х 106개의 세포/mL의 밀도로 재현탁시키고, 50 μL/웰로 플레이트에 첨가하였다. 형광 표지된 세포주를 계수하고, X-Vivo 15 배지에서 2 Х 105개의 세포/mL의 밀도로 재현탁시키고, 50 μL/웰로 플레이트에 첨가하였다. 최종 효과기:표적 세포 비는 5:1이었다. 활성화된 카스파제 3/7에 의한 카스파제 절단 도메인[DEVD] 절단시 방출되는 녹색 DNA-결합 형광 표지에 커플링된 DEVD인 카스파제 3/7 녹색 시약(Sartorius)을 1:1000의 최종 농도로 웰에 첨가하였다. 이어서, 배양물을 Incucyte ZOOM 생세포 영상화기(Sartorius)를 사용하여 24시간 기간에 걸쳐 영상화하고, 24시간 후에 Luminex(ProcartaPlex 시스템; ThermoFisher Scientific)에 의해 사이토카인 측정을 위해 상청액을 수확하였다. 아폽토시스 표적 세포의 백분율을 적색 및 녹색(카스파제 3/7+) 신호의 중첩에 의해 결정하였다. 데이터를 Incucyte ZOOM 소프트웨어, 버전 2018A(Sartorius)를 사용하여 분석하였다.
전혈 사이토카인 방출 검정. 항체 및 참조 분자에 의한 면역 활성화를 사이토카인 방출 검정에 의해 평가하였다. 항체를 플레이트 코팅된 포맷 및 가용성 포맷 둘 모두에서 시험하였다. 플레이트 코팅된 포맷의 경우, 항체 희석물을 PBS 중의 표시된 농도로 제조하고, 50 μL/웰로 96-웰 평평한 바닥 조직 배양 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 300 rpm의 진탕기에서 4°C에서 밤새 인큐베이션한 후, PBS로 2회 세척하였다. 가용성 항체 포맷의 경우, 항체 희석물을 표시된 최종 농도의 20배로 제조하고, 7.5 μL/웰을 96-웰 U-바닥 조직 배양 플레이트의 바닥에 첨가하였다. 새로 수집한 Na2+ 헤파린 처리된 전혈을 플레이트에 150 μl/웰로 첨가하고, 샘플을 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 실온에서 5분 동안 1800 ×g에서 원심분리한 후, Luminex 검정(ProcartaPlex 시스템; ThermoFisher Scientific)에 의한 사이토카인 분석을 위해 각각의 웰로부터 혈장을 수집하였다. 사용된 참조 분자에는 포도상구균 장독소 B(1 μg/ml, 가용성 단독), 항-CD3(Biolegend), 및 항-CD28 초효능제 항체(클론 ANC28.1, AnCell)가 포함되었다.
PBMC 사이토카인 방출 검정. 동결보존된 PBMC를 생존 가능하게 해동시키고, 150 μL/웰의 최종 부피로 X-Vivo 15 배지(Lonza)에서 2 × 105개의 세포/웰로 플레이팅한 것을 제외하고는, PBMC를 이용한 사이토카인 방출 검정을 전혈 사이토카인 방출 검정과 유사하게 수행하였다.
일차 AML 샘플을 이용한 T 세포 활성화 검정. M5 AML 환자로부터의 동결보존된 골수 또는 PBMC(Reprocell)를 실온에서 HBSS에서 해동시키고, 10% 열 비활성화 FBS, 1% GlutaGro(Corning), 50 mM β-머캅토에탄올(Gibco/ThermoFisher Scientific) 및 1% 페니실린 스트렙토마이신(Corning)을 함유하는 RPMI 1640(Corning)에 재현탁시켰다. 일차 AML 세포(배지 100 μL 중의 2 × 105개의 세포/웰)를 X-Vivo 15 배지 중의 2배 농도로 제조한 시험 항체 100 μL에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 5일 동안 시험 항체와 함께 인큐베이션하였다. 5일차에, 세포를 수확하고, 아래에 나열된 형광색소 컨쥬게이션된 항체로 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 데이터를 LSR Fortessa 유세포 분석기(BD Biosciences)상에서 수집하고, FlowJo 소프트웨어, v. 10을 사용하여 분석하였다.
일차 CD34 + HSC를 이용한 TDCC 검정. T 세포 독성 검정 하루 전에, 동결보존된 확장된 T 세포(위에 기재된 바와 같이 생성됨)를 해동시키고, X-Vivo 15 배지(Lonza)에서 밤새 배양하였다. 검정 당일에, 동결보존된 CD34+ 골수 세포(StemCell Technologies)를 실온에서 HBSS(Corning)에서 해동시키고, X-Vivo 15 배지에 재현탁시켰다. 96-웰 플레이트의 웰을 2배 농도의 시험 항체 100 μL로 미리 충전시켰다. CD34+ 조혈 줄기 세포(1 × 104개의 세포/50 μL 부피의 웰) 및 확장된 T 세포(5 × 104개의 세포/50 μL 부피의 웰)를 시험 항체를 함유하는 각각의 웰에 첨가하고, 카스파제 3/7 녹색 시약(Sartorius)을 1:1000의 최종 농도로 첨가하였다. 세포를 37℃에서 밤새 배양하였다. 원심분리 후, 사이토카인 분비 분석을 위해 상청액을 수집하고, 세포를 위에 나열된 시약을 사용하여 CD45, CD25, CD34, ILT3 및 CD123에 대한 항체를 이용하여 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 데이터를 LSR Fortessa 유세포 분석기(BD Biosciences)상에서 수집하고, FlowJo 소프트웨어, v. 10을 사용하여 분석하였다.
7.1
실시예 1: ILT3 × CD3 이중특이적 분자의 생성
본 연구의 목적은 종양 세포에 대한 향상된 선택성 및 개선된 치료계수(즉, ILT3 발현 세포에 대한 결합에 대한 높은 친화도, 및 효율적인 종양 세포 사멸과 조합된 양호한 안전성 프로파일)를 갖는 세포독성 T 세포 연결체를 설계하는 것이었다. T 세포 연결체의 안전성은 사이토카인 방출을 최소화하고 종양 세포 사멸을 최대화하는 것에 좌우된다. 종양 세포 사멸과 T 세포 연결체에 의해 유도된 사이토카인 방출 사이의 비를 사용하여 치료계수를 측정한다. 비가 클수록, T 세포 연결체에 대한 치료계수가 우수하다.
항-ILT3 항체의 패널, 및 상이한 결합 친화도(높음 및 낮음)를 갖는 항-CD3 항체를 시험하였다. 이중특이성의 ILT3 표적화 팔의 선택을 위한 주요 기준은 높은 친화도였다. CD3 표적화 팔을 선택하기 위한 기준은 양호한 치료계수였다. 추가로, 설계 이론적 근거는 CD3에 결합하는 CD3 표적화 팔으로부터의 친화도보다 10배 내지 100배 더 높은 친화도로 ILT3에 결합하는 ILT3 표적화 팔을 가져서, T 세포 연결체가 임의의 T 세포와 연결되기 전에 ILT3 발현 암 세포에 결합하게 하는 것이었다. 그 결과, 이 설계는 목표 이탈 효과를 감소시키고 안전성 프로파일을 증가시켰다. 다양한 항체 조합 및 포맷으로 종양 세포 세포독성 및 사이토카인 생산을 평가하였다.
ILT3 표적화 팔의 선택. 다양한 ILT3 항체 클론(표 1-8 참조)을 높은 친화도 CD3 scFv(2B2) 또는 낮은 친화도 CD3 scFv(1G4)에 커플링시켰다. 다양한 ILT3 항체의 ILT3에 대한 결합 친화도는 표 9에 나타나 있다. CD3 scFv 2B2 또는 CD3 scFv 1G4에 커플링된 경우 각각의 항-ILT3 Fab의 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC]은 표 9에 나타나 있다.
표 9
시험된 모든 ILT3 × CD3 이중특이적 분자는 TDCC 및 사이토카인 방출을 유도하였다. 모든 항-ILT3 클론 시험 중에서, Hz45G10은 ILT3에 대해 높은 친화도를 가졌다. Hz45G10은 CD3 scFv 2B2(도 2) 또는 CD3 scFv 1G4(도 3)와 커플링된 경우, 다른 ILT3 항체 클론(16C5 또는 12A12)에 비해 아폽토시스를 강력하게 유도하였다. 게다가, Hz45G10 Fab는 CD3 scFv 2B2와 커플링된 경우 낮은 TNFα 방출을 유도하였다(도 4, 표 10). ILT3 항체의 변경은 세포독성과 사이토카인 생산 사이의 비에 영향을 미치지 않았다(표 10 참조).
표 10
CD3 표적화 팔의 선택. T 세포 연결체의 CD3 결합 팔의 친화도는 종양 항원 결합 팔에 따라 달라질 수 있다. ILT3-CD3 T 세포 연결체의 경우, 선택된 Hz45G10 클론을 기반으로 하여 최적의 CD3 scFv를 생산하였다. 먼저, Hz45G10과 커플링된 경우 상이한 CD3 결합 친화도를 갖는 2개의 CD3 scFv 클론을 시험하였다(CD3에 대한 높은 친화도를 갖는 CD3 scFv 2B2, 및 CD3에 대한 낮은 친화도를 갖는 r CD3 scFv 1G4, 국제 공개 번호 WO 2008/119567호 및 미국 특허 제10,066,016호 참조). CD3 scFv 2B2는 scFv 1G4에 비해 CD3에 대해 35배 더 높은 친화도를 나타냈다. 2B2 scFv는 scFv IG4에 비해 T-세포 의존적 세포성 세포독성[TDCC]의 160배 증가를 나타냈지만, 사이토카인 생산은 20배 증가했을 뿐이다. 도 5, 도 6 및 표 11을 참조한다.
표 11
위의 결과를 고려하여, CD3에 대한 높은 결합 친화도를 갖는 항-CD3 scFv 클론을 개발하였다(SPR에 의해 결정된 서열 번호 149로서의 VH, 서열 번호 150으로서의 VL, KD = 6 nM). 인간 ILT3에 대한 Hz45G10의 결합 친화도는 CD3 scFv보다 38배 더 높은 친화도였다.
다음으로, Hz45G10 및 CD3 scFv를 혼입시킨 이중특이적 항체를 도 7에 나타낸 바와 같은 다양한 포맷으로 생성시키고 평가하였다. 모든 이중특이적 포맷을 세포독성 및 사이토카인 방출 검정에서 스크리닝하였다.
F0(즉, ABX1446) ILT3 × CD3 이중특이적 항체 포맷은 AML 세포주인 MOLM13에서 강한 세포용해 활성을 나타냈다(표 12 및 도 8 참조). F0 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 포맷은 또한 전혈이 F0로 미리 코팅된 플레이트에 첨가되거나(도 9) 가용성 F0를 포함하는 배양 배지에 첨가된 경우(도 10) 전혈 사이토카인 방출 검정에서 낮은 사이토카인 분비를 유도하였다. 표 13을 참조한다. 유사하게, 시험 포맷 중에서, F13(즉, ABX1520)은 강한 세포용해 활성을 나타내지만, 사이토카인 분비는 낮았다.
표 12
표 13
7.2 실시예 2: ILT3 × CD3 이중특이적 분자의 시험관내 특징 규명
본 연구의 목적은 ILT3을 발현하는 세포주에서 F0(즉, ABX1446) 및 F13(즉, ABX1520)의 시험관내 활성을 평가하는 것이었다. 세포 독성 검정 및 사이토카인 분비를 실시예 1에 개략된 바와 같이 수행하였다.
ABX1446 및 ABX1520은 확장된 T 세포(도 11) 또는 미감작 T 세포(PBMC로부터; 도 12)를 효과기로서 사용한 경우 ILT3 양성(ILT3+) AML 세포(MOLM13)에서 아폽토시스를 강력하게 유도하였다. 표 14를 참조한다.
표 14
ABX1446 및 ABX1520은 확장된 T 세포(도 13, 도 14 및 표 15) 또는 미감작 T 세포(PBMC로부터의; 도 15, 도 16 및 표 16)를 효과기로서 사용한 경우, ILT3의 발현이 낮은 AML 세포(OCI-AML-2 및 NALM-1 세포)에서 아폽토시스를 강력하게 유도하였다.
표 15
표 16
ABX1446 및 ABX1520은 ILT3 녹아웃 THP-1 세포에 대해 TDCC를 유도하는 데 실패하였다. 도 17 및 표 17을 참조한다.
표 17
ABX1446 및 ABX1520은 PBMC를 플레이트 코팅된 포맷(도 18) 또는 가용성 포맷(도 19)으로 ABX1446 또는 ABX1520과 함께 인큐베이션한 경우 PBMC 사이토카인 분비 검정에서 낮은 사이토카인 방출을 유도하였다. 표 18을 참조한다.
표 18
*비베코타맙: 10 μg/mL Ab = 74.62 nM
**ABX1446: : 10 μg/mL Ab = 80.65 nM
***ABX1520: : 10 μg/mL Ab = 55.2 nM
ABX1446 및 ABX1520은 전혈이 플레이트 코팅된 포맷(도 20) 또는 가용성 포맷(도 21)으로 ABX1446과 함께 인큐베이션되는 경우 전혈 사이토카인 분비 검정에서 낮은 사이토카인 방출을 유도하였다. 표 19를 참조한다. 추가적으로, ABX1446 및 비베코타맙이 PBMC 세포독성 검정에서 유사한 효능을 나타냈지만, ABX1446은 PBMC 세포독성 검정에서 낮은 사이토카인 분비를 유도하였다. 도 22, 도 23 및 표 20을 참조한다.
표 19
표 20
*비베코타맙: 10 μg/mL Ab = 74.62 nM
**ABX1446: 10 μg/mL Ab = 80.65 nM
*** ABX1520: 10 μg/mL Ab = 55.2 nM
CD123 × CD3 DART(플로테투주맙)와 비교할 때, ABX1446은 낮은 사이토카인 분비를 유도하였지만(도 25), MOLM13 세포에서 강력한 아폽토시스를 유도하였다(도 24). ABX1446은 플로테투주맙에 비해 사이토카인 분비를 덜 유도하였다. 표 21을 참조한다.
표 21
M5 AML 환자에서 단리된 PBMC에서의 T 세포 확장 및 활성화를 연구하기 위해, PBMC를 ABX1446과 함께 인큐베이션하고, 확장 및 활성화를 유세포 측정법에 의해 측정하였다. ABX1446은 M5 PBMC에서 T 세포 확장(도 26) 및 활성화(도 27)를 유도하였다.
ABX1446은 일차 HSC에 대해 고갈(도 28) 및 아폽토시스(도 29)를 유도하는 데 실패하였다.
또한, ABX1446은 비-단핵구 면역 세포를 절제하는 데 실패하였다. CD123은 많은 면역 세포 유형에서 발현되는 반면, ILT3은 하위세트에서만 발현된다. 이중특이적 항체인 비베코타맙의 사용은 임상 환경에서 안전성 위험을 나타낼 수 있다. 따라서, KU812 호염기구 및 LAMA84 호염기구에서의 세포독성을 측정하였다. 두 세포 유형 모두는 CD123-양성 및 ILT3-음성이다. 따라서, ABX1446은 이러한 호염기구에 영향을 미치지 않았다. 도 30 및 도 31을 참조한다.
다발성 골수종 세포는 또한 ILT3을 발현한다. F0 ILT3 × CD3 이중특이적 항체 포맷(ABX1446)은 MM1S(도 32), H929(도 33) 및 U226B1(도 34) 다발성 골수종 세포주에 대해 강한 세포용해 활성을 나타냈다. 표 22를 참조한다.
표 22
위의 기재된 연구에서는 ABX1446이 T 세포 연결체 이중특이적 비베코타맙에 비해 낮은 수준의 사이토카인 방출과 함께 강력한 세포독성을 보였음을 입증하였다. 추가적으로, ABX1446은 HSC 또는 성숙 면역 세포를 절제하지 않았다. 따라서, ABX1446은 시판 중인 현재 T 세포 연결 이중특이적 항체와 구별되는 안전성 프로파일을 가졌다.
7.3 실시예 3: ILT3 × CD3 이중특이적 분자의 시험관내 특징 규명
본 연구의 목적은 MOLM13 AML 모델(도 35), MV4;11 AML 모델(도 35), 및 MV4;11 AML 세포가 이식된 CD34+ 인간화 마우스를 이용한 모델(도 39)을 포함한 3개의 인간 AML 마우스 모델에서 F0(즉, ABX1446) 및 F13(즉, ABX1520)의 생체내 활성을 평가하는 것이었다.
MOLM13 마우스 모델에서, ABX1446 및 ABX1520은 비베코타맙과 유사하게 순환 종양 세포의 수를 감소시켰다. 도 36 및 표 23을 참조한다.
표 23
MV4;11 마우스 모델에서, ABX1446의 증가하는 농도(0.01 mpk, 0.1 mpk 및 1 mpk)를 제공받은 마우스는 비베코타맙과 유사하게, 2주차(도 37) 및 3주차(도 38)에 감소된 개수의 순환 종양 세포를 가졌다. 혈액 μL당 MV4;11 세포의 개수를 나타내는 표 24를 참조한다.
표 24
MV4;11 AML 세포가 이식된 CD34+ 인간화 마우스를 이용한 모델에서, ABX1446은 혈액 μL 당 순환 MV4;11 세포의 개수를 감소시켰다. 혈액 μL당 MV4;11 세포의 개수를 나타내는 표 25를 참조한다. 마우스는 1 mpk에서 ABX1446, 항-KLH 및 비베코타맙을 제공받았다.
표 25
위의 기재된 연구에서는 ABX1446이 3개의 상이한 인간 AML 마우스 모델에서 종양 성장을 억제하였음을 입증하였다.
7.4 실시예 4: 일차 종양 세포 배양물에서 ILT3 × CD3 이중특이적 분자의 특징 규명
ILT3 × CD3 이중특이적 분자의 활성을 천연 종양 미세환경 플랫폼(Vivia Biotech)에서 평가하였다. 이 플랫폼에서, M5 AML로 진단된 인간 환자로부터의 전체 골수 샘플을 ABX1446의 용량 적정으로 배양하였다. T 세포 활성화 및 종양 세포 고갈을 평가하였다. 간략하게, M5 AML을 갖는 3명의 환자로부터의 전체 골수를 Vivia Biotech 천연 종양 미세환경 플랫폼에서 평가하였다. 골수 공여자의 인구통계는 다음과 같다.
표 26. 환자 인구통계
각각의 샘플에 대해, 동결보존된 전체 골수를 생존가능하게 해동시키고, 기준선에서의 ILT3 수용체 밀도를 Quantibrite 비드(BD Biosciences, 340495) 및 PE-컨쥬게이션된 ILT3 항체(클론 ZM4.1, BD Biosciences, 333007)를 사용하는 유세포 측정법에 의해 정량화하였다. 또한, 기준선에서 종양 세포 및 T 세포의 개수를 계수하기 위해 유세포 분석법을 사용하였다. 기준선 효과기:표적(E:T) 비를 각각의 샘플에 대해 계산하였다.
표 27. ILT3 수용체 밀도 및 기준선 E:T 비
ILT3 × CD3 이중특이적 분자의 활성을 평가하기 위해, 골수 샘플을 태아 소 혈청[FBS] 및 성장 인자의 독점적인 칵테일로 보충된 무혈청 배지에 플레이팅하였다. ABX1446을 8점 용량 적정(최종 농도, 0.3-3 × 10-6 mg/mL)으로 배양물에 첨가하였다. 대조군 조건은 PBS로 처리한 골수, 및 0.3 mg/mL의 동종형 대조군 항체로 처리한 골수를 포함하였다. 유세포 측정법에 의한 종양 세포 고갈 및 T 세포 활성화의 평가를 위해 72 및 120시간에 세포를 수확하였다. 결과를 각각의 공여자에 대한 기준선 값으로 정규화하였다. ABX1446은 하나의 대표적인 공여자(평가된 3명의 공여자 중)에서 도 41 및 도 42에 도시된 바와 같이, 일차 M5 AML 골수 샘플에서 용량 의존적 종양 세포 고갈 및 T 세포 활성화를 유도하였다.
ILT3+ 다발성 골수종 샘플의 일차 배양물에서 ILT3 × CD3 이중특이적 분자의 활성을 평가하기 위해 유사한 연구를 개시하였다. 신선한 다발성 골수종 골수 샘플을 먼저 ILT3 발현에 대해 분석하고, 충분한 세포 개수 및 생존력을 갖는 ILT3+ 샘플(CD138+ 골수종 모세포의 ≥ 60%가 ILT3+인 샘플로서 정의됨)을 천연 종양 미세환경 플랫폼에서 평가하였다. ABX1446은 CD138+ 다발성 골수종 세포의 용량 의존적 고갈, 및 수반되는 T 세포 활성화를 유도하였다. 대표적인 공여자로부터의 결과는 도 43 및 도 44에 나타나 있다.
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Claims (54)
- 인간 ILT3에 결합하는 제1 결합 영역 및 인간 CD3에 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는 결합제로서, 상기 CD3 결합 영역은 항-CD3 scFv를 포함하는, 결합제.
- 제1항에 있어서, 상기 제1 결합 영역은 항-ILT3 Fab를 포함하는, 결합제.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 인간 ILT3에 대한 상기 제1 결합 영역의 결합 친화도는 상기 인간 CD3에 대한 상기 제2 결합 영역의 결합 친화도보다 높은, 결합제.
- 제3항에 있어서, 상기 인간 ILT3에 대한 상기 제1 결합 영역의 결합 친화도는 상기 인간 CD3에 대한 상기 제2 결합 영역의 결합 친화도보다 약 10배 내지 약 100배 높은, 결합제.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Fc 영역을 추가로 포함하는 결합제.
- 제5항에 있어서,
(i) 항-CD3 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드;
(ii) 상기 제1 결합 영역의 VH 도메인, CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드; 및
(iii) 상기 제1 결합 영역의 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하되,
상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인, 상기 CH1 도메인, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인 및 상기 CL 도메인은 상기 항-ILT3 Fab를 형성하고, 상기 제1 CH2 도메인, 상기 제2 CH2 도메인, 상기 제1 CH3 도메인 및 상기 제2 CH3 도메인은 상기 Fc 영역을 형성하는, 결합제. - 제6항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드는 조작된 공동을 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드는 조작된 돌출부를 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하며, 상기 제1 폴리펩타이드는 상기 돌출부를 상기 공동 내에 위치시킴으로써 상기 제2 폴리펩타이드와 이합체화되는, 결합제.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 결합 영역은 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인; 및 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 결합제.
- 제8항에 있어서, 상기 제2 결합 영역에서,
상기 제2 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제2 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 결합제. - 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 결합 영역은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 결합제.
- 제10항에 있어서, 상기 제1 결합 영역에서,
(a) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(b) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(c) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(d) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(e) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 결합제. - 제10항 또는 제11항에 있어서,
(i) 상기 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 상기 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 상기 VL 도메인을 포함하고, 상기 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 상기 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 상기 VL 도메인을 포함하거나,
(ii) 상기 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 상기 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 상기 VL 도메인을 포함하고, 상기 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 상기 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 상기 VL 도메인을 포함하는, 결합제. - 인간 ILT3에 결합하는 제1 결합 영역 및 인간 CD3에 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는 결합제로서, 상기 제2 결합 영역은 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 결합제.
- 제13항에 있어서, 상기 제2 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제2 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 결합제.
- 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 제1 결합 영역은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 결합제.
- 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 결합 영역에서,
(a) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(b) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(c) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나;
(d) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나,
(e) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인은 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, 상기 제1 결합 영역의 VL 도메인은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 결합제. - 제15항 또는 제16항에 있어서,
(i) 상기 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 상기 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 상기 VL 도메인을 포함하고, 상기 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 상기 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 상기 VL 도메인을 포함하거나,
(ii) 상기 제1 결합 영역은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 상기 VH 도메인, 및 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 상기 VL 도메인을 포함하고, 상기 제2 결합 영역은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 상기 VH 도메인, 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 상기 VL 도메인을 포함하는, 결합제. - 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 결합 영역은 항-ILT3 Fab를 포함하는, 결합제.
- 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 결합 영역은 항-CD3 scFv를 포함하는, 결합제.
- 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제는 Fc 영역을 추가로 포함하는, 결합제.
- 제20항에 있어서, 상기 결합제는
(i) 상기 항-CD3 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드;
(ii) 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인, CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드; 및
(iii) 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하되,
상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인, 상기 CH1 도메인, 상기 제1 결합 영역의 상기 VL 도메인 및 상기 CL 도메인은 상기 항-ILT3 Fab를 형성하고, 상기 제1 CH2 도메인, 상기 제2 CH2 도메인, 상기 제1 CH3 도메인 및 상기 제2 CH3 도메인은 상기 Fc 영역을 형성하는, 결합제. - 제21항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드는 조작된 공동을 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드는 조작된 돌출부를 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 상기 제1 폴리펩타이드는 상기 돌출부를 상기 공동 내에 위치시킴으로써 상기 제2 폴리펩타이드와 이합체화되는, 결합제.
- 제21항 또는 제22항에 있어서,
(i) 상기 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하거나,
(ii) 상기 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 19의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 결합제. - 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1결합 영역은 두 개의 동일한 항-ILT3 Fab를 포함하고, 상기 제2 결합 영역은 항-CD3 scFv를 포함하는, 결합제.
- 제24항에 있어서, 상기 결합제는
(i) 상기 항-CD3 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드;
(ii) 제1 VH 도메인, 제2 VH 도메인, 제1 CH1 도메인, 제2 CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드로서, 상기 제1 및 제2 VH 도메인 각각은 상기 제1 결합 영역의 상기 VH 도메인을 포함하는, 제2 폴리펩타이드;
(iii) 제1 VL 도메인 및 제1 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드로서, 상기 제1 VL 도메인은 제1 결합 영역의 VL 도메인을 포함하는, 제3 폴리펩타이드; 및
(iv) 제2 VL 도메인 및 제2 CL 도메인을 포함하는 제4 폴리펩타이드로서, 상기 제2 VL 도메인은 제1결합 영역의 VL 도메인을 포함하는, 제4 폴리펩타이드를 포함하되,
상기 제2 폴리펩타이드의 상기 제1 VH 도메인 및 상기 제1 CH1 도메인, 및 상기 제3 폴리펩타이드의 상기 제1 VL 도메인 및 상기 제1 CL 도메인은 제1 Fab 영역을 형성하고, 상기 제2 폴리펩타이드의 상기 제2 VH 도메인 및 상기 제2 CH1 도메인, 및 상기 제4 폴리펩타이드의 상기 제2 VL 도메인 및 상기 제2 CL 도메인은 제2 Fab 영역을 형성하고, 상기 제1 CH2 도메인, 상기 제2 CH2 도메인, 상기 제1 CH3 도메인 및 상기 제2 CH3 도메인은 Fc 영역을 형성하는, 결합제. - 제25항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드는 조작된 공동을 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드는 조작된 돌출부를 형성하는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하되, 상기 제1 폴리펩타이드는 상기 돌출부를 상기 공동 내에 위치시킴으로써 상기 제2 폴리펩타이드와 이합체화되는, 결합제.
- 제25항 또는 제26항에 있어서,
(i) 상기 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제4 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하거나,
(ii) 상기 제1 폴리펩타이드는 서열 번호 147의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드는 서열 번호 169의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제3 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제4 폴리펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 결합제. - 제1항 내지 제12항 및 제19항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD3 scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는, 결합제.
- 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제는 인간화 항체인, 결합제.
- 결합제로서,
(i) 인간 CD3에 결합하는 scFv, 제1 CH2 도메인 및 제1 CH3 도메인을 포함하는 제1 폴리펩타이드;
(ii) 인간 ILT3에 결합하는 VH 도메인, CH1 도메인, 제2 CH2 도메인 및 제2 CH3 도메인을 포함하는 제2 폴리펩타이드; 및
(iii) 인간 ILT3에 결합하는 VL 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 제3 폴리펩타이드를 포함하되,
상기 인간 CD3에 결합하는 상기 scFv는 서열 번호 149에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 VH 도메인, 및 서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 VL 도메인을 포함하고,
인간 ILT3에 결합하는 상기 VH 도메인은 서열 번호 17에 기재된 아미노산 서열의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 인간 ILT3에 결합하는 상기 VL 도메인은 서열 번호 18에 기재된 아미노산 서열의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 결합제. - 제30항에 있어서,
(a) 상기 scFv의 상기 HCDR1은 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 scFv의 상기 HCDR2는 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 scFv의 상기 HCDR3은 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 scFv의 상기 LCDR1은 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 scFv의 상기 LCDR2는 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 scFv의 상기 LCDR3은 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하며,
(b) 상기 인간 ILT3에 결합하는 상기 VH 도메인 및 VL 도메인에서,
(i) 상기 HCDR1은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR2는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나,
(ii) 상기 HCDR1은 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR2는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나,
(iii) 상기 HCDR1은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR2는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나,
(iv) 상기 HCDR1은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR2는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR3은 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR1은 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR2는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR3은 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하거나,
(v) 상기 HCDR1은 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR2는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HCDR3은 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR1은 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR2는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 LCDR3은 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는, 결합제. - 제30항 또는 제31항에 있어서, 인간 CD3에 결합하는 상기 scFv의 상기 VH 도메인은 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하고, 인간 CD3에 결합하는 상기 scFv의 상기 VL 도메인은 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하며, 인간 ILT3에 결합하는 상기 VH 도메인은 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하고, 인간 ILT3에 결합하는 상기 VL 도메인은 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는, 결합제.
- 제30항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 scFv는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는, 결합제.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 결합제를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드.
- 제34항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터.
- 제34항의 폴리뉴클레오타이드 또는 제35항의 벡터를 포함하는 단리된 세포.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 결합제를 생산하는 단리된 세포.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 결합제, 제34항의 단리된 폴리뉴클레오타이드, 제35항의 벡터, 또는 제36항 또는 제37항의 단리된 세포, 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
- ILT3을 발현하는 암 또는 종양 세포로 T 세포를 유도하는 방법으로서, 상기 T 세포를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제38항의 약학 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
- 제39항에 있어서, 상기 T 세포는 ILT3을 발현하는 암 또는 종양 세포의 사멸을 유도하는, 방법.
- 제40항에 있어서, 상기 암 또는 종양 세포는 혈액학적 암 또는 종양 세포인, 방법.
- 제41항에 있어서, 상기 혈액학적 암 또는 종양 세포는 급성 골수성 백혈병[acute myeloid leukemia, AML] 세포, M4/M5 AML 세포, 만성 골수단핵구성 백혈병[chronic myelomonocytic leukemia, CMML] 세포, B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-cell acute lymphoblastic leukemia, B-ALL] 세포, 만성 림프구성 백혈병[chronic lymphocytic leukemia, CLL] 세포, 미만성 거대 B-세포 림프종[diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL] 세포, 외투세포 림프종[mantle cell lymphoma, MCL] 세포, 다발성 골수종[multiple myeloma, MM] 세포, 골수이형성 증후군[myelodysplastic syndrome, MDS] 세포, 호지킨 림프종 세포, 림프형질세포성 림프종[lymphoplasmacytic lymphoma, LPL] 세포, 여포성 림프종 세포, 버킷 림프종 세포, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm, BPDCN] 세포, 변연부 림프종 세포 또는 점막-연관 림프 조직[mucosa-associated lymphoid tissue, MALT] 림프종 세포로 이루어진 군에서 선택되는, 방법.
- 제39항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포는 정상 조혈 줄기 세포[hematopoietic stem cell, HSC]의 사멸을 유도하지 못하는, 방법.
- T 세포를 활성화하는 방법으로서, 상기 T 세포를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제38항의 약학 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하되, 상기 제2 결합 영역은 상기 T 세포에 결합하는, 방법.
- 제44항에 있어서, 상기 T 세포는 미감작 T 세포인, 방법.
- 제44항 또는 제45항에 있어서, 상기 T 세포는 PBMC의 집단에서 다클론적으로 확장되는, 방법.
- ILT3을 발현하는 암 또는 종양 세포를 사멸시키거나 이의 증식을 억제하는 방법으로서, 상기 암 또는 종양 세포를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제38항의 약학 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
- 제47항에 있어서, 상기 결합제는 T 세포를 활성화하는, 방법.
- 제48항에 있어서, 상기 활성화된 T 세포는 상기 암 또는 종양 세포의 사멸을 유도하는, 방법.
- 제47항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암 또는 종양 세포는 혈액학적 암 또는 종양 세포를 포함하는, 방법.
- 제50항에 있어서, 상기 혈액학적 암 또는 종양 세포는 급성 골수성 백혈병[AML] 세포, M4/M5 AML 세포, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML] 세포, B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL] 세포, 만성 림프구성 백혈병[CLL] 세포, 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL] 세포, 외투세포 림프종[MCL] 세포, 다발성 골수종[MM] 세포, 골수이형성 증후군[MDS] 세포, 호지킨 림프종 세포, 림프형질세포성 림프종[LPL] 세포, 여포성 림프종 세포, 버킷 림프종 세포, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN] 세포, 변연부 림프종 세포 또는 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종 세포로 이루어진 군에서 선택되는, 방법.
- 대상에서 ILT3을 발현하는 암 또는 종양을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 결합제 또는 제38항의 약학 조성물의 유효량을 상기 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
- 제52항에 있어서, 상기 암 또는 종양은 혈액학적 암 또는 종양을 포함하는, 방법.
- 제53항에 있어서, 상기 혈액학적 암 또는 종양은 급성 골수성 백혈병[AML], M4/M5 AML, 만성 골수단핵구성 백혈병[CMML], B-세포 급성 림프모구성 백혈병[B-ALL], 만성 림프구성 백혈병[CLL], 미만성 거대 B-세포 림프종[DLBCL], 외투세포 림프종[MCL], 다발성 골수종[MM], 골수이형성 증후군[MDS], 호지킨 림프종, 림프형질세포성 림프종[LPL], 여포성 림프종, 버킷 림프종, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물[BPDCN], 변연부 림프종 또는 점막-연관 림프 조직[MALT] 림프종으로 이루어진 군에서 선택되는, 방법.
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