KR20170066646A - 글루코코르티코이드 및 미네랄로코르티코이드 수용체 길항제를 사용한 지방간 질환 치료법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피리미딘디온 사이클로헥실 화합물 부류를 사용한 지방간 질환의 치료법을 제공한다. 한 구체예에서, 본 발명은 지방간 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하여 지방간 질환을 치료하는 것을 포함하며, 화학식 I의 화합물은 구조식 (I)을 갖는다.

Description

글루코코르티코이드 및 미네랄로코르티코이드 수용체 길항제를 사용한 지방간 질환 치료법 {FATTY LIVER DISEASE TREATMENT USING GLUCOCORTICOID AND MINERALOCORTICOID RECEPTOR ANTAGONISTS}

관련 출원과 교차-참조

본 출원은 2014년 12월 15일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/092,041 및 2014년 10월 15일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/064,358에 대한 우선권을 주장한다. 상기 언급된 가출원의 전체 내용은 본원에 참조로 통합된다.

간 장애는 다양한 질병 군 예컨대, 알콜 유발성 지방간 질환 (AFLD), 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD), 약물- 또는 알콜-관련 간 질환, 바이러스성 질환, 면역-매개성 간 질환, 대사성 간 질환, 및 간 부전 및/또는 간 이식과 관련된 합병증으로 분류될 수 있다. 비알콜성 지방간 질환은 알콜을 거의 또는 전혀 섭취하지 않는 개체에서 알콜-유발된 지방간 질환의 것과 유사한 조직학적 특징을 갖는 흔한 간장 질환이다. 지방간 질환은 간세포 내부의 지질 (지방)의 비정상적 보유로 인한 것이다.

AFLD와 NAFLD에 대한 효과적인 치료는 여전히 불충분하다. 현재까지, 그러한 환자들에 대한 치료학적 약물 치료는 확립되어 있지 않다. 지방간 질환을 관리하기 위한 새로운 치료 옵션이 필요하다.

인간을 포함한 대부분의 종에서, 생리학적 글루코코르티코이드는 코르티솔(하이드로코르티손)이다. 글루코코르티코이드는 ACTH (코르티코트로핀)에 대한 반응으로 분비되는데, 이는 스트레스 및 음식에 대해 반응하는 하루 주기 리듬(circadian rhythm) 변화 및 상승 둘 모두를 나타낸다. 코르티솔 수준은 수분내에 외상, 수술, 운동, 불안 및 우울증을 포함하는 여러 신체적 및 심리적 스트레스에 대해 반응적이다. 코르티솔은 스테로이드이고, 세포내 글루코코르티코이드 수용체(GR)에 결합함으로써 작용한다. 인간에서, 글루코코르티코이드 수용체는 두 가지 형태로 존재한다: 777개의 아미노산의 리간드-결합 GR-알파; 및 50개의 카르복시 말단 잔기가 결여된 GR-베타 아이소형. 이들은 리간드 결합 도메인을 포함하기 때문에, GR-베타는 천연 리간드와 결합할 수 없고, 항시적으로 핵 내에 편재된다. 또한, GR은 GRII로서 알려져 있다.

코르티솔 및 기타 글루코코르티코이드는 또한 미네랄로코르티코이드 수용체 (MR)에 대해 작용하며, 이러한 경우 이들은 미네랄로코르티코이드 또는 미네랄로코르티코이드 수용체 길항제 (MRA)로서 불린다. 미네랄로코르티코이드 수용체는 주로 체내 염 농도를 조절한다. MR은 미네랄로코르티코이드 및 글루코코르티코이드에 대해 실질적으로 동일한 친화도를 가질 수 있다.

코르티솔 과다분비증(hypercortisolemia)에 의해 야기되는 효과를 포함한 코르티솔의 생물학적 효과들은 효능제(agonist), 부분 효능제 및 길항제와 같은 수용체 조절제를 사용하여 GR 수준에서 조절될 수 있다. 여러 다른 부류의 작용제(agent)들은 GR-효능제 결합의 생리학적 효과를 차단할 수 있다. 이러한 길항제들은 GR에 결합함으로써, GR에 효과적으로 결합하고/거나 GR을 활성화시키는 효능제의 능력을 차단하는 조성물을 포함한다. 이러한 공지된 하나의 GR 길항제인 미페프리스톤(mifepristone)은 인간에게서 효과적인 항-글루코코르티코이드제인 것으로 밝혀졌다[Bertagna (1984) J. Clin . Endocrinol . Metab . 59:25]. 미페프리스톤은 10^-9 M의 해리 상수(K_d)와 함께 높은 친화력으로 GR에 결합한다[Cadepond (1997) Annu. Rev. Med. 48:129].

코르티솔 이외에, 기타 스테로이드의 생물학적 효과는 수용체 조절제 예컨대, 효능제, 부분 효능제 및 길항제를 사용하여 GR 수준에서 조절될 수 있다. 이를 필요로 하는 대상체에 투여되는 경우, 스테로이드는 예를 들어, 글루코코르티코이드 수용체 전이발현(transepression)을 자극함으로써 의도된 치료학적 효과는 물론 예를 들어, 만성 글루코코르티코이드 수용체 전이활성화에 의한 부정적인 부작용 둘 모두를 제공할 수 있다.

당 기술에 요구되는 것은 지방간 질환을 치료하기 위해 GR 수용체를 조절하기 위한 신규한 조성물 및 방법이다. 놀랍게도, 본 발명은 이들 및 그 밖의 요구에 부합한다.

한 구체예에서, 본 발명은 지방간 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 치료학적 유효량의 하기 화학식 I의 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하여 지방간 질환을 치료하는 방법을 포함하며, 여기에서 화학식 I의 화합물은 하기 구조를 갖는다:

화학식 I의 화합물에서, 점선은 부재하거나 결합이다. X는 O 또는 S이다. R¹은 1 내지 3개의 R^1a 기로 치환되거나 비치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이다. 각 R^1a은 독립적으로 H, C_1-6　알킬, C_2-6　알케닐, C_2-6　알키닐, C_1-6　알콕시, C_1-6　알킬-OR^1b, 할로겐, C_1-6　할로알킬, C_1-6　할로알옥시, -OR^1b, -NR^1bR^1c, -C(O)R^1b, -C(O)OR^1b, -OC(O)R^1b, -C(O)NR^1bR^1c, -NR^1bC(O)R^1c, -SO₂R^1b, -SO₂NR^1bR^1c, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이다. R^1b 및 R^1c는 각각 H 또는 C_1-6　알킬이다. R²는 H, C_1-6　알킬, C_1-6　알킬-OR^1b, C_1-6　알킬-NR^1bR^1c 또는 C_1-6　알킬렌-헤테로사이클로알킬이다. R³은 H 또는 C_1-6　알킬이다. Ar은 1-4개의 R⁴ 기로 치환되거나 비치환된 아릴이다. 각 R⁴는 H, C_1-6　알킬, C_1-6　알콕시, 할로겐, C_1-6　할로알킬 또는 C_1-6　할로알콕시이다. L¹은 결합 또는 C_1-6　알킬렌이다. 아랫첨자 n은 0 내지 3의 정수이다. 또한, 본원에 언급된 화합물의 염 및 이성질체가 포함된다.

도 1은 고지방 식이 및 비히클이 제공된 대조군 마우스와 비교한, 고지방 식이 및 화합물 1 (60mg/kg/일)이 제공된 마우스로부터의 오일 레드 O(Oil Red O) 염색된 간에서 지방 (지질 소적)의 백분율을 보여준다.
도 2a 및 2b는 고지방 식이 및 비히클이 제공된 대조군 마우스 (도 2b) 및 고지방 ("HF") 식이 및 화합물 1이 제공된 마우스 (도 2a)의 간으로부터의 지질 소적의 오일 레드 O 염색을 보여준다.
도 3은 고지방 식이 및 비히클이 제공된 대조군 마우스와 비교한, 고지방 식이와 미페프리스톤 또는 화합물 1 (60mg/kg/일) 중 하나가 제공된 마우스의 오일 레드 O 염색된 간에서 지방 (지질 소적)의 백분율을 보여준다. * p<0.05 "CTRL"과 비교한 "화합물 1".
도 4는 정상적인 식이가 제공된 마우스 ("CHOW" 그룹), 3주 동안 고지방 식이가 제공된 마우스 ("HF-3wks" 그룹), 6주 동안 고지방 식이가 제공된 마우스 ("HF-6wks" 그룹), 6주 동안 고지방 식이 및 화합물 1이 제공된 마우스 ("HF+118335-6wks" 그룹), 및 6주 동안 고지방 식이가 제공되고 마지막 3주 동안에만 화합물 1이 투여된 마우스 ("HF-118335 rev" 그룹)의 간에서 트리글리세리드 수준을 보여준다. ** "CHOW"와 비교하여 p<0.01; # "HF-6wks"와 비교하여 p<0.05; ## "HF-6wks"와 비교하여 p<0.01.

I. 일반적 사항

본 발명은 본 발명의 화합물을 지방간 질환을 앓고 있는 환자에게 투여함으로써 지방간 질환을 치료하기 위한 화합물 및 방법을 제공한다. 어떠한 이론에도 구속되지 않으면서, 본 발명의 화합물이 글루코코르티코이드 수용체에 특이적으로 결합한다는 당해기술의 수용된 이해와 반대로, 본 발명에서 지방간 질환의 치료는 기타 핵 수용체 예컨대, 미네랄로코르티코이드 수용체 및 프로게스테론 수용체와 비교하여, 글루코코르티코이드 수용체에 특이적으로 결합하기보다는 글루코코르티코이드 및 미네랄로코르티코이드 수용체 둘 모두에 결합함으로써 달성된다.

II. 정의

본원에서 사용되는 약어들은 화학 및 생물학 분야에서의 이들의 통상적인 의미를 갖는다.

치환기가 좌측에서 우측으로 기재된 통상적 화학식으로 특정되는 경우, 치환체 기들은 구조식을 우측에서 좌측으로 기재한 것에 따른 화학적으로 동일한 치환체도 동등하게 포괄하는데, 예를 들어, -CH₂O-는 -OCH₂-와 등가이다.

"알킬"은 명시된 탄소 원자수를 갖는 직쇄 또는 분지형의 포화된 지방족 라디칼을 지칭한다. 예를 들어, C₁-C₆ 알킬은 비제한적으로, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 이소-프로필, 이소-부틸, 2차-부틸, 3차-부틸, 등을 포함한다.

"알킬렌"은 1 내지 7개 탄소 원자의 직쇄 또는 분지된 알킬렌 즉, 1 내지 7개 탄소 원자의 이가 탄화수소 라디칼을 지칭하며; 예를 들어, 직쇄 알킬렌은 화학식 -(CH₂)_n-의 이가 라디칼이며, 여기에서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7이다. 바람직하게는, 알킬렌은 1 내지 4개의 탄소 원자의 직쇄 알킬렌 예를 들어, 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 또는 부틸렌 사슬, 또는 C₁-C₃-알킬 (바람직하게는, 메틸)에 의해 모노-치환된 또는 C₁-C₃-알킬 (바람직하게는, 메틸)에 의해 동일한 또는 상이한 탄소 원자 상에서 이치환된 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌 또는 부틸렌 사슬을 나타내며, 탄소 원자의 총 수는 7 이하이다. 당업자는 -CH((CH₂)_nCH₃)- (여기에서, n = 0-5)에서와 같이 알킬렌의 단일 탄소가 이가일 수 있음을 이해할 것이다.

"알케닐"은 적어도 하나의 이중 결합을 갖는 2 내지 6개의 탄소 원자의 직쇄 또는 분지된 탄화수소를 지칭한다. 알케닐기의 예는 비제한적으로, 비닐, 프로페닐, 이소프로페닐, 1-부테닐, 2-부테닐, 이소부테닐, 부타디에닐, 1-펜테닐, 2-펜테닐, 이소펜테닐, 1,3-펜타디에닐, 1,4-펜타디에닐, 1-헥세닐, 2-헥세닐, 3-헥세닐, 1,3-헥사디에닐, 1,4-헥사디에닐, 1,5-헥사디에닐, 2,4-헥사디에닐, 또는 1,3,5-헥사트리에닐을 포함한다. 알케닐 기는 또한, 2 내지 3개, 2 내지 4개, 2 내지 5개, 3 내지 4개, 3 내지 5개, 3 내지 6개, 4 내지 5개, 4 내지 6개 및 5 내지 6개의 탄소 원자를 가질 수 있다. 알케닐 기는 전형적으로, 일가이나, 예컨대, 알케닐 기가 2개의 모이어티를 함께 연결하는 경우 이가일 수 있다.

"알키닐"은 적어도 하나의 삼중 결합을 갖는 2 내지 6개의 탄소 원자의 직쇄 또는 분지된 탄화수소를 지칭한다. 알키닐 기의 예는 비제한적으로, 아세틸레닐, 프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 이소부티닐, 2차-부티닐, 부타디이닐, 1-펜티닐, 2-펜티닐, 이소펜티닐, 1,3-펜타디이닐, 1,4-펜타디이닐, 1-헥시닐, 2-헥시닐, 3-헥시닐, 1,3-헥사디이닐, 1,4-헥사디이닐, 1,5-헥사디이닐, 2,4-헥사디이닐, 또는 1,3,5-헥사트리이닐을 포함한다. 알키닐 기는 또한, 2 내지 3개, 2 내지 4개, 2 내지 5개, 3 내지 4개, 3 내지 5개, 3 내지 6개, 4 내지 5개, 4 내지 6개 및 5 내지 6개의 탄소를 가질 수 있다. 알키닐 기는 전형적으로, 일가이나, 예컨대, 알킬닐 기가 2개의 모이어티를 함께 연결하는 경우 이가일 수 있다.

"알콕시"는 또 다른 탄화수소에 공유 결합될 수 있는 산소 치환기를 또한 함유하는 상기 기술된 바와 같은 알킬 라디칼 예를 들어, 메톡시, 에톡시 또는 t-부톡시 기를 지칭한다.

자체의 또는 또 다른 치환기의 일부로서의 "할로겐"은 달리 언급되지 않는 한 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 의미한다.

"할로알킬"은 수소 원자의 일부 또는 전부가 할로겐 원자로 치환되는 상기 규정된 바와 같은 알킬을 지칭한다. 할로겐 (할로)는 바람직하게는, 클로로 또는 플루오로를 나타내나, 또한 브로모 또는 아이오도일 수 있다. 예를 들어, 할로알킬은 트리플루오로메틸, 플루오로메틸, 1,2,3,4,5-펜타플루오로-페닐 등을 포함한다. 용어 "퍼플루오로"는 불소로 치환된 적어도 2개의 이용가능한 수소를 갖는 화합물 또는 라디칼을 규정한다. 예를 들어, 퍼플루오로메탄은 1,1,1-트리플루오로메틸을 지칭한다.

"할로알콕시"는 수소 원자의 일부 또는 전부가 할로겐 원자로 치환되는 상기 규정된 바와 같은 알콕시를 지칭한다. "할로알콕시"는 모노할로알킬(옥시) 및 폴리할로알킬(옥시)를 포함함을 의미한다.

"알킬아민"은 하나 이상의 아미노 기를 갖는 규정된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 아미노 기는 일차, 이차 또는 삼차일 수 있다. 알킬 아민은 하이드록시 기로 추가로 치환될 수 있다. 본 발명에 유용한 알킬 아민은 비제한적으로, 에틸 아민, 프로필 아민, 이소프로필 아민, 에틸렌 디아민 및 에탄올아민을 포함한다. 아미노 기는 알킬 아민을 화합물의 나머지 부분과의 부착 지점에 연결시킬 수 있거나, 알킬 기의 오메가 지점에 위치할 수 있거나, 알킬 기의 적어도 2개의 탄소 원자와 함께 연결될 수 있다. 당업자는 기타 알킬 아민이 본 발명에 유용함을 이해할 것이다.

"사이클로알킬"은 3 내지 12개 고리 원자 또는 명시된 수의 원자를 함유하는 포화되거나 부분적으로 불포화된 모노사이클릭, 융합된 바이사이클릭 또는 브릿징된 폴리사이클릭 고리 어셈블리를 지칭한다. 예를 들어, C₃-C₈ 사이클로알킬은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 및 사이클로옥틸을 포함한다. 사이클로알킬은 또한, 노르보르닐 및 아다만틸을 포함한다.

"헤테로사이클로알킬"은 3 고리원 내지 약 20 고리원 및 1 내지 약 5개 헤테로원자 예컨대, N, O 및 S를 갖는 고리 시스템을 지칭한다. 추가적인 헤테로원자가 또한, 유용할 수 있으며, 비제한적으로, B, Al, Si 및 P를 포함한다. 헤테로원자가 또한 산화될 수 있으며, 예컨대, 비제한적으로, -S(O)- 및 -S(O)₂-을 포함한다. 예를 들어, 헤테로사이클은 비제한적으로, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로티오페닐, 모르폴리노, 피롤리디닐, 피롤리닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 인돌리닐, 퀴누클리디닐 및 1,4-디옥사-8-아자-스피로[4.5]데크-8-일을 포함한다.

"알킬렌-헤테로사이클로알킬"은 알킬렌에 의해 또 다른 기에 연결되는 상기 규정된 바와 같은 헤테로사이클로알킬 기를 지칭한다. 헤테로사이클로알킬 및 알킬렌에 의해 헤테로사이클로알킬이 연결되는 기는 알킬렌의 동일한 원자 또는 상이한 원자에 연결될 수 있다.

"아릴"은 달리 명시되지 않는 한, 함께 융합되거나 공유 결합되는 단일 고리 또는 다중 고리 (바람직하게는, 1 내지 3개 고리)일 수 있는 다중포화된 방향족의 탄화수소 치환기를 의미한다. 예로는 비제한적으로, 페닐, 바이페닐, 나프틸, 및 벤질을 포함한다.

"헤테로아릴"은 N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 아릴 기 (또는 고리)를 지칭하며, 이때 질소 및 황 원자는 선택적으로 산화되며, 질소 원자(들)는 선택적으로 사차화된다. 헤테로아릴 기는 탄소 또는 헤테로원자를 통해 분자의 나머지에 부착될 수 있다. 아릴 및 헤테로아릴 기의 비제한적 예는 페닐, 1-나프틸, 2-나프틸, 4-바이페닐, 1-피롤릴, 2-피롤릴, 3-피롤릴, 3-피라졸릴, 2-이미다졸릴, 4-이미다졸릴, 피라지닐, 2-옥사졸릴, 4-옥사졸릴, 2-페닐-4-옥사졸릴, 5-옥사졸릴, 3-이속사졸릴, 4-이속사졸릴, 5-이속사졸릴, 2-티아졸릴, 4-티아졸릴, 5-티아졸릴, 2-푸릴, 3-푸릴, 2-티에닐, 3-티에닐, 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜, 2-피리미딜, 4-피리미딜, 5-벤조티아졸릴, 푸리닐, 2-벤즈이미다졸릴, 5-인돌릴, 1-이소퀴놀릴, 5-이소퀴놀릴, 2-퀴녹살리닐, 5-퀴녹살리닐, 3-퀴놀릴, 및 6-퀴놀릴을 포함한다. 상기 언급된 아릴 및 헤테로아릴 고리 시스템 각각에 대한 치환기는 하기 기술된 허용가능한 치환기의 군으로부터 선택된다.

간단히, 다른 용어와 함께 사용되는 경우 (예를 들어, 아릴옥시, 아릴티옥시, 아릴알킬), 용어 "아릴"은 상기 규정된 바와 같은 아릴 및 헤테로아릴 고리 둘 모두를 포함한다. 따라서, 용어 "아릴알킬"은 탄소 원자 (예를 들어, 메틸렌 기)가 예를 들어, 산소 원자에 의해 대체된 그러한 알킬 기를 포함하는 알킬 기 (예를 들어, 벤질, 펜에틸, 피리딜메틸 및 기타 등등)에 아릴 기가 부착되는 그러한 라디칼 (예를 들어, 페녹시메틸, 2-피리딜옥시메틸, 3-(1-나프틸옥시)프로필, 및 기타 등등)을 포함함을 의미한다. 마찬가지로, 용어 "헤테로아릴알킬"은 헤테로아릴 기가 알킬 기에 부착되는 그러한 라디칼을 포함함을 의미한다.

상기 용어 (예를 들어, "알킬", "아릴" 및 "헤테로아릴") 각각은 명시된 라디칼의 치환된 및 비치환된 형태 둘 모두를 포함함을 의미한다. 각 유형의 라디칼에 대한 치환기의 예는 하기에 제공된다.

알킬 및 헤테로알킬 라디칼 (알킬렌, 알케닐, 헤테로알킬렌, 헤테로알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및 헤테로사이클로알케닐로서 종종 언급된 그러한 기를 포함)에 대한 치환기는 비제한적으로, 0 내지 (2m'+1) (여기에서, m'는 그러한 라디칼에서 탄소 원자의 총 수임) 범위의 갯수의 -OR', =O, =NR', =N-OR', -NR'R", -SR', -할로겐, -SiR'R"R"', -OC(O)R', -C(O)R', -CO₂R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)₂R', -NR-C(NR'R"R'")=NR"", -NR-C(NR'R")=NR'", -S(O)R', -S(O)₂R', -S(O)₂NR'R", -NR(SO₂)R', -CN 및 -NO₂로부터 선택된 다수의 기 중 하나 이상일 수 있다. R', R", R"' 및 R"" 각각은 바람직하게는, 독립적으로 수소, 치환되거나 비치환된 헤테로알킬, 치환되거나 비치환된 사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 아릴 (예를 들어, 1-3개의 할로겐으로 치환된 아릴), 치환되거나 비치환된 알킬, 알콕시 또는 티오알콕시 기, 또는 아릴알킬 기를 지칭한다. 본 발명의 화합물이 하나 초과의 R 기를 포함하는 경우, 예를 들어, R 기 각각은 각 R', R", R"' 및 R"" 기들 중 하나 초과의 기가 존재할 때 각 R', R", R"' 및 R"" 기로서 독립적으로 선택된다. R' 및 R"가 동일한 질소 원자에 부착되는 경우, 이들은 질소 원자와 조합되어 4-, 5-, 6-, 또는 7-원 고리를 형성할 수 있다. 예를 들어, -NR'R"는 비제한적으로, 1-피롤리디닐 및 4-모르폴리닐을 포함함을 의미한다. 치환기의 상기 논의로부터, 당업자는 용어 "알킬"이 수소 원자 이외의 기에 결합된 탄소 원자를 포함하는 기 예컨대, 할로알킬 (예를 들어, -CF₃ 및 -CH₂CF₃) 및 아실 (예를 들어, -C(O)CH₃, -C(O)C₃F, -C(O)CH₂OCH₃, 및 기타 등등)을 포함함을 뜻한다는 것을 이해할 것이다.

알킬 라디칼에 대해 기술된 치환기와 유사하게, 아릴 및 헤테로아릴 기에 대한 치환기는 변화되며, 예를 들어, 0 내지 방향족 고리 시스템 상의 열린 원자가의 총 수의 범위의 갯수의 할로겐, -OR', -NR'R", -SR', -할로겐, -SiR'R"R"', -OC(O)R', -C(O)R', -CO₂R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)₂R', -NR-C(NR'R"R'")=NR"", -NR-C(NR'R")=NR'", -S(O)R', -S(O)₂R', -S(O)₂NR'R", -NR(SO₂)R', -CN 및 -NO₂, -R', -N₃, -CH(Ph)₂, 플루오로(C₁-C₄)알콕시, 및 플루오로(C₁-C₄)알킬로부터 선택되며; R', R", R"' 및 R""는 바람직하게는, 독립적으로 수소, 치환되거나 비치환된 알킬, 치환되거나 비치환된 헤테로알킬, 치환되거나 비치환된 사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 아릴 및 치환되거나 비치환된 헤테로아릴로부터 선택된다. 본 발명의 화합물이 하나 초과의 R 기를 포함하는 경우, 예를 들어, R 기 각각은 각 R', R", R"' 및 R"" 기들 중 하나 초과의 기가 존재할 때 각 R', R", R"' 및 R"" 기로서 독립적으로 선택된다.

2개의 치환기가 "선택적으로 함께 결합되어 고리를 형성"하는 경우, 2개의 치환기는 2개의 치환기가 결합하여 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴, 치환되거나 비치환된 사이클로알킬, 또는 치환되거나 비치환된 헤테로사이클로알킬 고리를 형성하는 원자 또는 원자들과 함께 공유적으로 결합된다.

"염"은 본 발명의 방법에서 사용되는 화합물의 산 염 또는 염기 염을 지칭한다. 약제학적으로 허용되는 염의 예시적 예는 무기 산(염산, 브롬화수소산, 및 인산 등) 염, 유기 산(아세트산, 프로피온산, 글루탐산, 및 시트르산 등) 염, 4차 암모늄(메틸 아이오다이드, 및 에틸 아이오다이드 등) 염이다. 약제학적으로 허용되는 염은 비-독성인 것으로 이해된다. 적합한 약제학적으로 허용되는 염에 대한 추가 정보는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985]에서 확인될 수 있으며, 이러한 문헌은 본원에 참고로 포함된다.

"수화물"은 적어도 하나의 물 분자에 착화된 화합물을 지칭한다. 본 발명의 화합물은 1 내지 10개 물 분자로 착화될 수 있다.

"이성질체"는 동일한 화학식을 갖지만 구조적으로 구별 가능한 화합물을 지칭한다.

"호변 이성질체(tautomer)"는 평형 상태로 존재하고 하나의 형태에서 다른 하나의 형태로 용이하게 변환되는 두 개 이상의 구조 이성질체들 중 하나를 지칭한다.

"약제학적으로 허용되는 부형제" 및 "약제학적으로 허용되는 담체"는 대상체로의 활성제의 투여 및 대상체에 의한 흡수를 돕고 환자에 대한 상당한 독성학적 부작용을 야기시키지 않으면서 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 물질을 지칭한다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 비제한적인 예는 물, NaCl, 생리 식염수 용액, 락테이트화된 링거, 생리 수크로즈(normal sucrose), 생리 글루코스(normal glucose), 결합제, 충전제, 붕해제, 윤활제, 코팅제, 감미제, 착향제 및 착색제 등을 포함한다. 본 당업자는 그 밖의 약제학적 부형제가 본 발명에서 유용하다는 것을 인식할 것이다.

"치료하다," "치료하는" 및 "치료"는 증상의 경감; 진정; 감소 또는 상해, 병변 또는 병태를 환자가 더 견딜만하게 만드는 것; 퇴행이나 쇠퇴의 속도를 늦추는 것; 퇴행의 최종점이 덜 쇠약한 상태가 되도록 하는 것; 환자의 신체적 또는 정신적 건강 상태를 개선시키는 것과 같은 어떠한 객관적 또는 주관적 파라미터들을 포함하는, 상해, 병리 또는 병태의 치료 또는 완화에 있어 어떠한 성공적 징후를 지칭한다. 증상의 치료 또는 완화는 신체 검사, 신경정신과적 검사, 및/또는 정신과적 진찰의 결과를 포함하는, 객관적 또는 주관적 파라미터를 기준으로 할 수 있다.

"핵 수용체"는 스테로이드 및 티로이드 호르몬은 물론 합성 호르몬 및 화합물 감지 및 반응을 담당하는 단백질 부류를 지칭한다. 특히, 티로이드 호르몬 수용체-유사체, 레티노이드 X 수용체-유사체, 에스트로겐 수용체-유사체, 및 신경 성장 인자 IB-유사체를 포함하는 다수의 서브-패밀리가 존재한다. 서브-패밀리 에스트로겐 수용체-유사체는 에스트로겐 수용체, 에스트로겐 관련 수용체, 및 3-케토스테로이드 수용체 패밀리를 포함한다. 3-케토스테로이드 수용체 패밀리는 다수의 수용체 예컨대, 비제한적으로, 글루코코르티코이드 수용체 (GR), 미네랄로코르티코이드 수용체 (MR), 에스트로겐 수용체 (ER), 프로게스테론 수용체 (PR), 및 안드로겐 수용체(AR)를 포함한다.

"글루코코르티코이드 수용체" ("GR")는 코르티솔 및/또는 코르티솔 유사체에 특이적으로 결합하는 세포내 수용체의 패밀리를 지칭한다. 글루코코르티코이드 수용체는 또한, 코르티솔 수용체로서 지칭된다. 본 용어는 GR의 아이소형, 재조합 GR 및 돌연변이화된 GR을 포함한다. "글루코코르티코이드 수용체" ("GR")는 코르티솔 및/또는 코르티솔 유사체 예컨대, 덱사메타손에 특이적으로 결합하는 타입 II GR을 지칭한다 (예를 들어, 문헌 [Turner & Muller, J Mol Endocrinol October 1, 2005 35 283-292] 참조). 인간 핵 수용체에 대한 본 발명의 화합물에 대한 억제 상수 (K_i)는 0.0001 nM 내지 1,000 nM; 바람직하게는, 0.0005 nM 내지 10 nM, 및 가장 바람직하게는, 0.001 nM 내지 1 nM이다.

"핵 수용체 조절"은 글루코코르티코이드, 글루코코르티코이드 길항제, 효능제, 및 부분적 효능제에 대한 글루코코르티코이드 수용체는 물론, 미네랄로코르티코이드, MR 길항제, 효능제 및 부분 효능제에 대한 미네랄로코르티코이드 수용체의 반응을 조절하는 방법을 지칭한다. 본 방법은 GR 및 MR을 유효량의 길항제, 효능제 또는 부분 효능제와 접촉시키고, GR 활성, 또는 GR과 MR 활성 변화를 검출하는 것을 포함한다.

"핵 수용체 조절제"는 글루코코르티코이드 수용체 (GR) 효능제 예컨대, 코르티솔, 또는 합성 또는 천연의 코르티솔 유사체의 GR로의 결합을 조절할 뿐만 아니라, MR 효능제 예컨대, 알도스테론 또는 이의 유사체의 MR로의 결합을 조절하는 임의의 조성물 또는 화합물을 지칭한다. 조절은 GR 효능제의 GR로의 결합 및/또는 MR 효능제의 MR로의 결합을 부분적으로 또는 완전하게 억제 (길항)하는 것을 포함할 수 있다.

"길항(antagonizing)"은 수용체 분자에서 효능제가 결합하는 것을 차단하는 것 또는 수용체-효능제에 의해 생성된 신호를 억제하는 것을 지칭한다. 수용체 길항제는 효능제-매개된 반응을 차단하거나 저하시킨다.

"글루코코르티코이드 수용체 길항제"는 글루코코르티코이드 수용체 (GR) 효능제 예컨대, 코르티솔, 또는 합성 또는 천연의 코르티솔 유사체의 GR로의 결합을 부분적으로 또는 완전히 억제(길항)하는 임의의 조성물 또는 화합물을 지칭한다.

"특정 글루코코르티코이드 수용체 길항제" 또는 "특정 미네랄로코르티코이드 수용체 길항제"는 효능제로의 GR 및/또는 MR의 결합과 관련된 임의의 생물학적 반응을 억제하는 임의의 조성물 또는 화합물을 지칭한다. "특정"에 의해, 본 발명자는 약물이 기타 핵 수용체 예컨대, 에스트로겐 수용체 (ER), 프로게스테론 수용체 (PR) 또는 안드로겐 수용체 (AR) 이외의 GR 및/또는 MR에 우선적으로 결합하는 것으로 의도한다.

"미네랄로코르티코이드 수용체"는 미네랄로코르티코이드 예컨대, 알도스테론, 및 글루코코르티코이드 예컨대, 코르티솔에 실질적으로 동일한 친화도로 결합하는 세포내 수용체의 패밀리를 지칭한다. 미네랄로코르티코이드 수용체 (MR)는 또한, 알도스테론 수용체 또는 핵 수용체 서브패밀리 3, 군 C, 멤버 2, (NR3C2)로서 지칭된다. MR은 사이토솔 수용체 패밀리에 속한다. MR은 미네랄로코르티코이드 예컨대, 알도스테론 및 이의 전구체 데옥시코르티코스테론은 물론 글루코코르티코이드 예컨대, 코르티솔에 의해 활성화된다.

"미네랄로코르티코이드 수용체 길항제"는 미네랄로코르티코이드 수용체 (MR) 효능제, 예컨대, 알도스테론 또는 합성 또는 천연의 알도스테론 유사체의 MR로의 결합을 부분적으로 또는 완전히 억제(길항)하는 임의의 조성물 또는 화합물을 지칭한다.

"환자" 또는 "대상체"는 본원에 제공된 바와 같은 약제 조성물의 투여에 의해 치료될 수 있는 병태를 갖거나 갖기 쉬운 살아있는 유기체를 지칭한다. 비제한적인 예는 인간, 다른 포유동물들, 및 다른 비-포유동물들을 포함한다.

"치료학적 유효량"은 확인된 질환 또는 병태를 치료하거나 개선하거나, 검출 가능한 치료 또는 억제 효과를 나타내는데 유용한 컨쥬게이팅된 작용제 또는 약제 조성물의 양을 지칭한다. 이러한 효과는 당해 분야에 공지된 임의의 검정법에 의해 검출될 수 있다.

본원에서 치환기들 또는 "치환 기"와 관련하여 사용될 경우, 단수 형태의 용어는 적어도 하나를 의미한다. 예를 들어, 화합물이 "단수" 알킬 또는 아릴로 치환되는 경우, 화합물은 적어도 하나의 알킬 및/또는 적어도 하나의 아릴로 치환되거나 비치환되며, 여기에서 각 알킬 및/또는 아릴은 선택적으로 상이하다. 또 다른 예에서, 화합물이 "단수" 치환 기로 치환되는 경우, 화합물은 적어도 하나의 치환기로 치환되며, 여기에서 각 치환기는 선택적으로 상이하다.

"지방간 질환"은 적어도 부분적으로 비정상 간지질 침착에 의해 초래된 질환 또는 병리학적 병태를 지칭한다. 지방간 질환은 예를 들어, 알콜성 지방간 질환, 비알콜성 지방간 질환, 및 임신의 급성 지방간을 포함한다. 지방간 질환은 예를 들어, 거대혈관 지방증 또는 미세혈관 지방증일 수 있다.

"알콜-관련 간 질환" 또는 "ARLD"는 알콜의 과다 소모에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 초래되거나 알콜의 과다 소모가 기여하는 간의 질환을 지칭한다. 4개의 주요 유형의 ARLD 즉, 알콜성 지방간 (AFL, 지방간 질환의 하위-유형), 알콜성 지방간염 (ASH), 알콜-유도된 경화증, 및 알콜성 간세포 암이 있다. 본원에 사용된 바와 같이 "알콜의 과다 소모"는 일반적으로, 약 15 - 30 g/일 초과의 에탄올 소모를 지칭한다.

간 기능 또는 질환에 대한 알콜 소모의 생리학적 효과는 ARLD의 임상 과정 및 개별적 감수성 둘 모두를 변형하는 여러 유전자 및 비-유전자 인자에 의존적이다. 따라서, 특정 환자에서, ARLD는 적어도 약 12 g/일, 15 g/일, 20 g/일, 25 g/일 또는 그 초과의 소모를 포함하여, 훨씬 더 낮은 알콜 소모 비율에서 발생할 수 있다. 게다가, 일부 환자에서, 알콜의 일일 소모량의 추정은 알콜 소모가 거의 또는 전혀 없는 기간과 과다한 알콜 섭취 기간을 포함하는 평균 값으로 이해된다. 이러한 평균 값은 적어도 약 1주, 2주, 1개월, 3개월, 6개월, 9개월, 1년, 2년, 3년, 또는 4년 또는 그 초과에 걸친 알콜 소모의 평균을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 간 기능장애가 ARLD인지의 여부에 대한 결정은 비제한적으로, 알콜 음료 소모의 양 및 유형 (예를 들어, 맥주 또는 스프라이트); 알콜 남용 기간; 음주 행동 패턴 (예를 들어, 폭음, 음식은 섭취하지 않으면서 하는 음주, 등등); 성별; 민족성; 대사 증후군 또는 당뇨병과 같은 병존 질환, 철분 과다 또는 간염 바이러스 감염, 유전적 마커; 가족력; 간 효소 수준; 전염증성 사이토카인 수준; 유전자 또는 단백질 발현 분석; 또는 간 조직 또는 세포의 조직병리학적 검사를 포함하는 다양한 인자에 대한 참조를 기준으로 한다.

"과도한 알콜 섭취와 무관한 간 장애"는 ARLD와 구별되는 간 장애이다. 따라서, 이러한 장애는 알콜 섭취에 의해 초래되지 않은 다양한 간 질환을 지칭한다. 예를 들어, 간염은 바이러스 감염에 의해 초래될 수 있다. 과도한 알콜 섭취 및 기타 요인에 의해 초래된 간 장애는 과도한 알콜 섭취와 무관한 간 장애보다는 ARLD로 간주된다. 이에 반해, 과도한 알콜 섭취에 의해 단지 악화된 간 장애는 알콜의 과다 섭취와 무관한 간 장애로 간주된다.

"비알콜성 지방간 질환" 또는 "NAFLD"는 간에서 지방 (지질)의 존재를 특징으로 하는 지방간 질환 및 실질적인 비 염증 또는 간 손상을 지칭한다. NAFLD는 비알콜성 지방간염으로 이어서 비가역적인 진행된 간 흉터 또는 경화증으로 진행될 수 있다.

"비알콜성 지방간염" 또는 "NASH"는 알콜 간 질환을 닮았으나 알콜을 거의 또는 전혀 마시지 않는 인간에서 발생하는 지방간 질환을 지칭한다. NASH 중의 주요 특징부는 염증 및 손상과 함께 간의 지방이다. NASH는 간이 영구적으로 손상되고 상처를 입으며 더이상 적절하게 기능할 수 없는 경화증으로 이어질 수 있다. NASH 대 NAFLD의 다양한 진단은 간 생검에 의해 결정될 수 있다.

본 발명의 화합물의 설명은 당업자에게 공지된 화학적 결합의 원리에 의해 제한된다. 이에 따라, 기가 다수의 치환기 중 하나 이상에 의해 치환될 수 있는 경우에, 이러한 치환은 화학적 결합의 원리에 따르고 본질적으로 불안정하지 않고/거나 주변 조건, 예를 들어, 수성, 중성 또는 생리학적 조건 하에서 불안정하지 않을 것으로 당업자에게 알려져 있는 화합물을 제공하도록 선택된다.

III. 지방간 질환

지방간 질환 (FLD, 또한, 간지방증으로 알려짐)은 지질이 간 세포에서 축적되는 경우 발생하는 일반적인 간 병태이다. 지질 축적은 세포 손상을 초래하고 간이 추가의 손상에 예민해지게 한다. 지방간 질환은 간 세포에 의해 지질의 비정상 보유 (즉, 지방증)에 의해 일반적으로 초래된 간 세포에서 과도한 지방 (지질)의 축적을 특징으로 한다. 지방 이외에도, 단백질 및 물이 간세포에 보유되며, 이는 간세포의 팽창으로 이어질 수 있다. 간에서 지방의 축적은 간세포 및 지방세포의 지질 대사에서 하기 단계 중 하나의 교란에 기여할 수 있다: (1) 간으로의 증가된 자유 지방산 전달; (2) 간 내부에서 증가된 자유 지방산 합성; (3) 지방산의 감소된 베타-산화; 및 (4) 감소된 매우 낮은 밀도의 지질단백질 합성 또는 분비. (Bacon et al., Gastroenterology, 1994, 107:1103-1109).

FLD는 과도한 알콜 소모 및 대사 장애 예컨대, 인슐린 내성, 비만 및 고혈압과 관련된 장애를 포함하는 다수의 원인으로부터 발생할 수 있다. 질환은 비만이거나 당뇨가 있는 개체에서 가장 흔하다. 알콜 유발된 지방간 질환 (AFL)에서, 처음에는 지방이 간 세포에서 축적되나, 이어서 질환은 알콜성 간염으로 진행될 수 있으며, 이는 간이 팽창되게 하고 개체가 알콜을 계속해서 섭취하는 경우 간을 손상시킨다. 개체는 또한 알콜성 간경화 또는 간 손상을 발생시킬 수 있으며 이는 이어서 간부전을 초래할 수 있다. 과음자는 AFL에서 알콜성 간염으로 시간에 따라 알콜성 간경변으로 진행될 수 있다.

비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)는 AFL의 조직학적 특징을 지니나 알콜을 전혀 또는 거의 섭취하지 않는 개체에서의 간 질환이다. AFL과 마찬가지로, NAFLD는 간세포에 의한 지방 (지질)의 비정상적인 보유로 인한 것이다. 기타 지방간 질환은 다른 유형의 간 질환 예컨대, 비제한적으로, 만성 바이러스 C형 간염 (HCV), 만성 바이러스 B형 간염 (HBV), 만성 자가면역 간염 (AIH), 당뇨 및 윌슨병을 갖는 환자에서 발생할 수 있다. 지방간은 또한, 지질 대사의 파괴 예컨대, 약물로 인한 장애 예를 들어, 위장 장애 (예를 들어, 장내 세균 과다 성장, 위마비 및 과민성 대장 증후군), 화학요법, 비만을 위한 장 수술, 영양실조 및 지질을 처리하는 단백질 유전자 결함에 의해 초래된 적응증과 관련될 수 있다.

일부 구체예에서, 지방간 질환은 알콜 관련 간 질환 (ARLD) 또는 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)이다. 일부 경우, 알콜 관련 간 질환은 알콜성 지방간 질환 (AFL), 알콜성 지방간염 (ASH) 또는 알콜성 간경변이다. 일부 경우에, 비알콜성 지방간 질환은 비알콜성 지방간염 (NASH) 또는 비알콜성 간경화증이다.

A. 알콜 관련 간 질환 ( ARLD )

알콜-관련 간 질환 (ARLD)는 알콜 유발된 지방간 질환 (AFL), 알콜성 간염 및 알콜성 간경화를 포함하는 알콜-관련된 또는 알콜-유도된 간 병리의 패밀리를 기술한다. 사실상, 알콜의 만성적 소비자 및 폭음자인 모든 인간은 AFL을 발생할 것이다. 추가적으로, 일반적인 군집에서 비만, 당뇨 및 대사 증후군과 같은 복잡한 요인의 높은 유병률로 인해, 만성 폭음자의 기준을 충족시키지 않는 많은 개체가 AFL을 발생시키기 쉽다.

AFL은 초음파를 통해 진단될 수 있다. 전형적으로, AFL을 갖는 환자의 간은 "에코발생"으로서 나타내는데, 이는 이미징 초음파에 대해 일반적인 것보다 더욱 조밀함을 의미한다. 또한, 간은 일반적으로 붓기와 다량의 지방의 존재로 인해 확대된다.

AFL은 또한, 하나 이상의 증상 또는 위험 인자 (예를 들어, 비만, 당뇨, 음주 행동 등)의 제시에 의해 나타내고 이로 인해 진단될 수 있다. 지방간 질환은 증상 예컨대, 피로, 근육 약화, 복부 불편감, 체중 감소, 및 착란을 나타낼 수 있다. 그러나, 지방간 질환은 일반적으로, 명백한 신체 증상을 나타내지 않는다. 지방간 질환은 또한, 간의 염증 또는 간 섬유증을 동반하거나 이를 선행할 수 있다. 지방간 질환을 갖는 환자는 일반적으로, 증가된 혈청 간 효소 수치를 나타낸다. 게다가, 수개의 간 효소의 상대적 수준이 변경된다. AFL은 일반적으로 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT)의 수준보다 높은 혈청 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST) 수준을 나타낸다. 이는 ALT가 AST보다 높은 비알콜성 지방간 질환과 구별된다.

AFL에는 4개의 주요 병원성 인자가 존재한다: (1) 알콜 산화, 유리한 지방산 및 트리-글리세리드 합성에 의해 및 지방산의 미토콘드리아 β-산화 억제에 의해 초래된 NADH의 증가된 발생. (2) 장 점막으로부터의 킬로미크론 및 지방조직으로부터의 자유 지방산의 향상된 간 유입. (3) 퍼옥시좀 증식-활성화된 수용체 α (PPARα)를 억제하고 스테롤 조절 요소 결합 단백질 1c (SREBP1c)를 자극함으로써 증가된 지방형성 및 감소된 지방분해를 유도하는 아데노신 모노포스페이트 활성화된 키나제 (AMPK) 활성의 에탄올-매개된 억제. 그리고, (4) NADH 산화의 감소 및 VLDL의 축적 각각을 유도하는, 아세트알데하이드에 의한 미토콘드리아 및 미세소관 손상.

AFL의 성공적 치료는 하나 이상의 임상, 실험실 또는 조직병리학적 증상의 개선으로 나타낸다. 예를 들어, 성공적인 치료는 예를 들어, 초음파 검사에 의해 나타낸 바와 같은 지방간의 체적 감소에 의해 나타낼 수 있다. 또 다른 예로서, 성공적인 치료는 피로, 약화 또는 체중 감소의 중지와 같은 하나 이상의 임상 증상의 감소로 나타낼 수 있다. 또 다른 예로서, 성공적인 치료는 간 효소 수치 또는 상대 수치의 정상화 (예를 들어, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제/알라닌 아미노트랜스퍼라제 비의 정상화)에 의해 나타낼 수 있다.

알콜성 간염, 또는 알콜성 지방간염 (ASH)은 AFL 후의 ARLD의 다음 단계이다. 일반적으로, AFL은 ASH 발병에 대한 전제 조건이다. 알콜 해독을 위해 입원한 환자의 모든 간 생검의 17%는 ASH를 드러내며, 알콜성 간경화를 갖는 환자의 40%는 또한, 경화 간에서 ASH를 갖는다. 환자의 25%는 간 기능부전 및 간 뇌병증의 임상 신호를 갖는 과도한 간 괴사를 일으킨다. 심한 경우에, ASH는 심한 간 손상, 혈류에 대한 증가된 저항성을 초래할 수 있으며, 불량한 예후와 관련된다. 중증 ASH의 급성 사망률은 약 15% 내지 25%이다. ASH는 간의 염증을 특징으로 한다. 다양한 요인들이 ASH의 발병에 기여할 수 있는데, 다음을 포함한다: (1) 아세트알데하이드-유도된 독성 효과; (2) 반응성 산소 종 (ROS) 생성 및 유도된 지질 과산화; (3) 전염증성 사이토카인의 상향 조절; 및 (4) 손상된 유비퀴틴-프로테아좀 경로 기능.

아세트알데하이드는 단백질과 DNA에 결합하여 기능적 경과와 단백질 부가물을 유도한다. 이러한 부가물은 자가항원을 형성함으로써 면역계를 활성화시킬 수 있다. 아세트알데하이드는 또한 미토콘드리아 손상을 유도하고 글루타티온 기능을 손상시켜 산화 스트레스와 아폽토시스를 유도한다.

ROS의 주요 근원은 CYP2E1-의존적 미토콘드리아 전자 수송, NADH-의존적 사이토크롬 리덕타제 및 크산틴 옥시다제이다. 만성 알콜 섭취는 CYP2E1을 현저히 상향-조절하며, 이는 ROS 생성을 악화시킨다. 또한, CYP2E1은 에탄올을 아세트알데하이드로 대사시켜 단백질과 DNA를 추가로 변형시킨다.

알콜 대사산물과 ROS는 신호전달 경로 예컨대, 간 거주 세포 내 JNK, NF-κB, 및 STAT-JAK에 의해 매개되는 경로를 자극하여 TNFα 및 CXC 케모카인 (예를 들어, 인터류킨-8)과 같은 염증 매개인자는 물론 오스테오폰틴의 국소 합성을 유도한다. 알콜 남용은 또한 결장 마이크로비오타의 변화 및 증가된 장내 투과성을 발생시켜, CD14/TLR4를 통해 쿠퍼 세포에서 염증 작용을 유도하는 리포폴리사카라이드의 혈청 수준을 증가시킨다. 알콜성 간에서 생성된 염증 환경은 다형핵 백혈구 (PMN) 침투, ROS 형성 및 간세포 손상으로 이어진다.

ASH 조직병리학은 괴사, 향상된 아폽토시스, 및 빈번하게는, 말로리덴크체(MDB)의 발생과 관련된 간세포의 풍선 변성을 특징으로 할 수 있다. ASH 조직병리학은 또한, 다형핵 세포, T-림프구, 또는 자연 살상 세포를 포함한 면역 세포의 침윤을 나타낼 수 있다. MDB는 불량한 예후와 관련이 있다. MDB 이외에, 거대 미토콘드리아는 ASH 환자의 간 세포에서 관찰될 수 있다. ASH의 추가적인 조직병리학적 특징은 거대소포 지방증, 미세소포 지방증, 소엽성 간염, 핵 공포, 담즙관 증식증, 정맥주위 섬유증 또는 간경화를 포함한다.

ASH 환자는 진행성 섬유증을 발생할 수 있다. ARLD에서, 섬유화 조직은 전형적으로, 중심주위 및 굴주위 영역에 위치한다. 진행된 단계에서, 콜라겐 밴드가 분명해지고 브릿징 섬유화가 진행된다. 이러한 병태는 재생 결절 및 간경화의 발병에 선행된다. ARLD에서 섬유증의 세포 및 분자 메카니즘은 완전하게 이해되지 않았다. 알콜 대사산물 예컨대, 아세트알데하이드는 손상된 간에서 간 성상 세포 (HSC) 즉, 주요 콜라겐-생산 세포를 직접적으로 활성화시킬 수 있다. HSC는 또한 손상된 간세포, 활성화된 쿠퍼 세포 및 침윤성 PMN 세포에 의해 비공유적으로 활성화될 수 있다. 이들 세포는 성장 인자 (TGF-β1, PDGF), 사이토카인 (렙틴, 안지오텐신 II, 인터류킨-8 및 TNFα), 용해성 매개인자 (산화 질소) 및 ROS와 같은 섬유발생 매개인자를 분비한다. 중요하게는, ROS는 ERK, PI3K/AKT, 및 JNK에 의해 매개되는 것을 포함하여 HSC에서 전-섬유발생 세포내 신호전달 경로를 자극한다. 이들은 또한, TIMP-1을 상향-조절하며, 금속단백분해효소의 작용을 감소시켜 콜라겐 축적을 촉진한다. HSC 이외의 세포는 또한 ARLD에서 콜라겐을 합성할 수 있다. 이들은 문맥성 섬유아세포 및 골수 유래 세포를 포함한다.

ASH는 다양한 주관적이고 객관적인 임상 결과의 강도와 빈도로 인해, 경증, 중등도 및 중증 형태로 분류될 수 있다. ASH의 임상 증상으로는 발열과 황달이 자주 동반되는 비정형 우상부 통증, 메스꺼움, 및 구토를 포함한다. 다른 증상으로는 피로, 구강 건조 및 갈증 증가, 또는 식도 하부 벽의 확장된 혈관 출혈을 포함한다. ASH를 나타내는 기타 피부 상태는 피부 상의 작은 붉은 거미모양 정맥, 매우 어둡거나 창백한 피부, 발 또는 손의 발적, 또는 가려움증을 포함한다. ASH 환자는 또한, 알콜 금단 증상 및 영양실조 증상을 나타낼 수 있다. 추가의 임상 마커는 간비대, 복수, 식욕부진, 뇌증, 비장비대, 체중 감소, 췌장염 또는 위장 출혈을 포함한다. 심한 경우, 환자는 사고력, 기억력, 및 기분관련 문제, 졸도 또는 현기증, 다리와 발의 마비를 나타낼 수 있다.

ASH의 혈청 및 혈액 마커는 알라닌 아미노트랜스퍼라제에 비해 더 높은 수준의 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제가 수반되는, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제의 활성 증가를 포함한다. 전형적으로, 감마 글루타밀 펩티다제가 또한 ASH 환자에서 증가된다. 증가된 감마 글루타밀 펩티다제가 일반적으로 에탄올에 의한 효소 유도로 인한 것으로 여겨진다; 그러나, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제 수준은 간 세포 손상의 마커인 것으로 간주된다. 환자의 40-80%는 또한 증가된 알칼리성 포스파타제 활성 수준을 나타낸다. 심한 ASH에서, 베타 및 감마 글로불린 수준은 증가된다. 또한, ASH는 독성 과립화 및 발열을 동반한 증가된 백혈구 수를 나타낼 수 있다. ASH에 대한 혈액학적 이상은 대구성 고색소성 빈혈(macrocytotic hyperchromic anemia) 및 혈소판 증가증을 포함한다. 중증 ASH는 또한 프로트롬빈 시간, 혈청 빌리루빈, 또는 혈청 알부민과 같은 주요 간 기능을 나타내는 파라미터의 감소를 나타낼 수 있다. 일부 경우에, ASH는 소변 빌리루빈의 존재에 의해 검출될 수 있다.

ASH는 일반적으로 초음파를 통해 AFL과 구별될 수 있다. 그러나, 초음파는 유사한 임상 증상 (예를 들어, 황달)을 나타낼 수 있는 간외 담즙 분비를 배제하는데 유용할 수 있다. 임상 마커, 혈청 또는 혈액 마커, 및 초음파 검사에 의해 진단할 수 없는 경우, 간 생검을 시행할 수 있다. 간 생검은 또한, 질병의 중증도를 결정하거나 약물학적 개입을 안내하는데 도움이 될 수 있다.

ASH의 성공적 치료는 하나 이상의 임상, 실험실 또는 조직병리학적 증상의 개선으로 나타낸다. 예를 들어, 성공적인 치료는 예를 들어, 초음파 검사에 의해 나타낸 바와 같은 지방간의 체적 감소에 의해 나타낼 수 있다. 또 다른 예로서, 성공적인 치료는 피로, 약화 또는 체중 감소의 중지와 같은 하나 이상의 임상 증상의 감소로 나타낼 수 있다. 또 다른 예로서, 성공적인 치료는 간 효소 수치 또는 상대 수치의 정상화 (예를 들어, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제/알라닌 아미노트랜스퍼라제 비의 정상화)에 의해 나타낼 수 있다. 추가의 또 다른 예로서, 성공적인 치료는 베타 및 감마 글로불린 수준 또는 알칼리성 포스파타제 수준의 감소로 나타낼 수 있다. 또 다른 예로서, 프로트롬빈 시간, 혈청 또는 소변 빌리루빈, 및 혈청 알부민과 같은 주요 간 기능의 파라미터의 회복 또는 개선은 성공적인 치료를 나타낼 수 있다. 또 하나의 추가의 예로서, 성공적인 치료는 간비대, 복수, 식욕부진, 뇌증, 비장비대, 체중 감소, 췌장염 또는 위장 출혈 중 하나 이상의 개선, 또는 중지에 의해 나타낼 수 있다.

알콜성 간경화는 염증, 부종, 섬유증, 세포막 손상, 흉터 및 괴사로 나타나는 심각한 간 질환의 후기 단계이다. 중증 폭음자의 약 10% 내지 약 20%는 간의 간경화를 발생시킬 것이다. 간경화의 증상에는 황달, 간 비대 및 통증과 압통이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 성공적인 치료는 간 기능 저하의 진행 속도의 임의의 감소로 나타낼 수 있다.

B. 비- 알콜성 지방간 질환 ( NAFLD )

NAFLD에는 간 지방증을 포함한 다양한 조직학적 형태와 간 세포의 파괴로 인한 간 염증, 지방증, 괴사 및 섬유화가 특징인 비-알콜성 지방간염 (NASH)이 포함된다. NAFLD와 관련된 상태는 다양하며, 타입 2 당뇨병, 비만, 이상 지질 혈증, 대사 증후군, 간독성 약물로의 치료, 독소, 전염제 또는 기타 외인성 원인을 포함한다. 예를 들어, NAFLD는 영양실조, 총 비경구 영양법, 기아 및 과영양과 같은 식이 상태 뿐만 아니라, 예를 들어, 갈락토스 혈증, 글리코겐축적병, 호모시스틴뇨증 및 티로시혈증과 같은 대사 장애로부터 기인할 수 있다. 어떤 경우에는 NAFLD는 공장 바이패스 수술(jejunnal bypass surgery)과 관련된다. 기타 원인은 예를 들어, 탄화수소 용매와 같은 특정 화학물질, 및 예를 들어, 아미오다론, 에스트로겐 (예를 들어, 합성 에스트로겐), 타목시펜, 말레에이트, 메토트렉세이트, 뉴클레오시드 유사체, 및 퍼헥실린과 같은 특정 약물로의 노출을 포함한다. 급성 지방간 상태가 또한 임심 중에 발생할 수 있다.

NAFLD는 전형적으로 양성의 비-진행성 임상 경과를 따르지만, NASH는 잠재적으로 심각한 상태이다. NASH 환자의 25% 만큼의 많은 환자가 진행성 섬유증, 간경화로 진행될 수 있으며, 문맥 고혈압, 간 기능 부전 및 간세포 암종의 합병증을 겪을 수 있다 (Yeh and Brunt, Am J Clin Pathol, 2007, 128 (5): 837-47).

NAFLD를 갖는 개체는 무증상일 수 있으나, 임상 실험 결과는 증가된 간 효소 수치를 보여줄 수 있다. 개체는 복부 불편감 (예를 들어, 복부 상부 우측의 불편감), 흑색가시세포증, 장 운동장애, 혼수, 변비, 파종 혈관내 응고, 상복부 통증, 피로, 불쾌감, 간비대 (일반적으로, 촉진시 부드럽고 단단한 표면 동반), 저혈당, 황달, 지방종증, 지방위축, 지방이상증, 구역, 신경학적 결함, 팔머 홍반, 대뇌염, 대퇴부 통증, 소장 세균 과증식, 거미 혈관종, 비장 비대증, 아급성 간 기능부전 및 구토와 같은 NAFLD 증상을 나타낼 수 있다. 알콜 관련 지방간 질환을 배제하기 위한 임상적 평가는 개체가 과도한 알콜을 섭취하는지를 측정하는 것을 포함할 수 있다 (예를 들어, 지난 5년 이내에 남성의 경우 > 60g/일 및 여성의 경우 > 20g/일). C형 항-간염 항체의 존재와 수준 및 혈청 세룰로플라스민 수준은 개체가 NAFLD를 가지고 있음을 나타내는데 이용될 수 있다.

생화학 및 대사에 대한 비-침습적 평가는 NAFLD 및 NASH를 진단하는데 이용될 수 있다. 혈액, 혈장 또는 혈청과 같은 생물학적 샘플을 사용함으로써, 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT), 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST), 알칼리성 포스파타제 (AP) 및/또는 γ 글루타밀 트랜스펩티다제 (GGT)와 같은 효소의 높은 수준뿐만 아니라 간 유래의 다른 단백질 (합토글로빈, 총 빌리루빈, 알파-2-마이크로글로불린, 레지스틴, 절단되거나 손상되지 않은 사이토케라틴-18 포함)의 존재가 혈청 글루코스 및 인슐린 내성 파라미터에 더하여 일반적으로 측정된다. NASH 환자에서 ALT 활성 수준이 빈번히 증가하기 때문에 (Angulo and Lindor, Best Pract Res Clin Gastroenterol, 2002, 16 (5) : 797-810), 이러한 기준은 간 손상을 평가하기 위한 대용 마커로 간주된다.

NAFLD 또는 NASH가 의심되는 개체에서, 혈청의 기준선 검사에는 지질 패널뿐만 아니라 AST, ALT, 총 빌리루빈과 직접 빌리루빈 및 공복 혈청 글루코스의 수치를 측정하거나 결정하는 것이 포함될 수 있다. 예를 들어, 지방증은 다른 원인 (예를 들어, 급성 간염, 자가면역 질환, 만성 간염, 간경화, 극심한 간염, 간세포 암종, 전이성 암종, 우심실 부전 및 바이러스성 간염과 같은 원인)이 제거된 경우, 간 효소(예를 들어, AST, ALT, GGT 및 알칼리성 포스파타제)의 상승된 혈청 수준 (종종 적정하게 증가된 예를 들어, 정상 수준보다 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11 또는 12-배 증가됨)에 의해 나타낼 수 있다. 예를 들어, 혈청 리터 당 32, 24 또는 56 단위 초과의 ALT 값 또는 정상 값보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 배 또는 그 초과 배수의 ALT 값은 간 지질 침착과 관련된 질환을 나타낼 수 있거나 혈청 리터 당 40 단위 초과의 ALT 값 또는 정상 값보다 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 배 또는 그 초과 배수의 AST 값에 의해 나타낼 수 있다. 혈청 아미노트랜스퍼라제 수준의 경도 내지 중도 상승이 가장 일반적으로 발견된다 (평균 범위, 100-200 IU/L). AST/ALT의 비율은 종종 NAFLD에서 1 미만이지만, 환자가 섬유증으로 진행되는 경우 또는 알콜성 간 질환 또는 진행된 간 질환을 갖는 환자에서는 1 초과일 수 있다. GGT 수준은 또한, 정상적인 건강한 개체에 의해 규정된 바와 같은 정상 값의 예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 배 또는 그 초과 배수로 상당히 증가될 수 있다. 간 효소 수치는 NAFLD 환자의 상당 부분에서 정상일 수 있으므로 정상 AST 또는 ALT 수치는 진행된 질환의 존재를 배제하지 않는다. 혈청 알칼리성 포스파타제 및 GGT 수치는 경미하게 비정상일 수 있다. NAFLD 환자의 80% 초과가 대사 증후군의 일부 요소를 가지고 있다고 가정하면, 공복시 글루코스 및 인슐린뿐만 아니라 공복시 콜레스테롤 및 트리글리세리드의 혈청 수준이 측정될 수 있다. 알부민, 빌리루빈 및 혈소판 수치는 질병이 간경화로 진행되지 않는 한 정상일 수 있다. 일부 NAFLD 환자는 자가면역 항체 (예를 들어, 항핵 및 항-평활근 항체)의 낮은 역가 및 페리틴 증가를 갖는다 (Carey et al., “Nonalcoholic Fatty Liver Disease” in Current Clinical Medicine, 2nd edition, Elsevier, New York). 일부 구체예에서, 1 초과의 AST/ALT 비는 보다 진행된 지방간 질환을 예측할 수 있다.

비제한적으로, x-선 영상, 초음파, 컴퓨터 단층촬영 (CT), 자기 공명 영상 (MRI) 및 자기 공명 분광기와 같은 방사선 방법을 사용하여 NAFLD를 검출할 수 있다. 초음파 검사에서 신장에 비해 간에서의 에코의 증가는 간 지방증을 나타낼 수 있다.

NASH는 거대소포 지방증, 풍선 변성, 간세포 괴사, 소엽성 염증, 메가미토콘드리아, 염증 세포의 침윤, 아폽토시스, 및 섬유증을 평가하기 위해 간 샘플에 대한 조직병리학적 방법 (예를 들어, 생검)을 사용하여 진단될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Brunt and Tiniakos, World J Gastroenterol, 2010, 16(42):5286-8296] 참조). 간세포 풍선확장(ballooning)은 세포의 팽창과 확대, 및 때로는 말로리덴크체를 함유하는 세포질 변화의 출현을 특징으로 한다. 섬유증은 또한 시간에 걸쳐 처음에는 세포주변/정맥주변 섬유증으로, 결국에는 문맥-중앙 브릿징 섬유증 및 간경화를 발생시킬 수 있다.

조직 및 세포 특징을 분석하기 위해 헤마톡실린 및 에오신 (H&E), 매슨 트리크롬(Masson trichrome), 오일 레드 O (Oil Red O) 및 면역조직화학 염색법 및 당업자에게 공지된 다른 표준 조직학적 방법이 수행될 수 있다. 하나 이상의 조직학적 특징을 포함하는 스코어링 시스템 (예를 들어, NAFLD 활성 스코어)은 NASH를 포함하여 NAFLD를 스코어링하고 진단하는데 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, NASH 임상 연구 네트워크의 병리위원회에 의해 개발된 NASH 임상 연구 네트워크 스코어링 시스템 (예를 들어, 문헌 [Kleiner et al., Hepatology, 2005, 41(6): 1313-1321] 참조)은 개체가 NAFLD 또는 NASH를 갖는지의 여부를 예측하는데 이용될 수 있다. 미국 위장병 학회, 미국 간 질환 연구 협회, 및 미국 위장병 학회 (Chalasani et al., Gastroenterology, 2012, 142: 1592-1609)에 의해 출판된 진료 지침(Practice Guidelines)에 따라 임상의가 비-알콜성 지방간, NASH 및 NASH 관련 간경화를 포함한 NAFLD를 진단 또는 모니터 할 수 있다.

생체 검사 결과 적어도 5-10% w/w의 지방 축적이 드러나면 개체의 간은 지방증을 띠는 것으로 간주될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Clark et al., J. Am. Med. Assoc., 2003, 289:3000-3004 (2003) and Adams et al., Can. Med. Assoc. J., 2005, 172:899-905] 참조). 25% (w/w) 이하의 지방 침착을 갖는 간은 경미한 지방증으로서 간주될 수 있으며, 25% (w/w) 초과의 지방 침착을 갖는 간은 중증의 지방증으로 간주될 수 있다.

NASH를 포함한 NAFLD 치료는 운동, 체중 감소, 및 간독 또는 간을 손상시킬 수 있는 물질을 회피하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 치료법은 항산화제, 세포 보호제, 항당뇨병제, 인슐린-감작제 (예를 들어, 메트포르민), 항-고지혈증제, 기타 화학적 화합물 예컨대, 피브레이트, 티아졸리딘디온 (즉, 로시글리타존 또는 피오글리타존), 비구아니드, 스타틴, 칸나비노이드, 및 핵 수용체, 안지오텐신 수용체, 칸나비노이드 수용체 또는 HMG-CoA 리덕타제를 표적으로 하는 다른 치료 화합물 또는 분자의 투여를 포함한다.

치료의 효능은 질환에 대한 하나 이상의 증상 또는 임상 양상에서의 감소 검출에 의해서 뿐만 아니라 진단을 위해 상기 기술된 임의의 시험에 의해 측정될 수 있다.

IV. 화합물

일부 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물을 제공한다:

상기 식에서, 점선은 결합이거나 부재한다. X는 O 또는 S이다. R¹은 1 내지 3개의 R^1a 기로 치환되거나 비치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이다. 각 R^1a은 독립적으로 H, C_1-6　알킬, C_2-6　알케닐, C_2-6　알키닐, C_1-6　알콕시, C_1-6　알킬-OR^1b, 할로겐, C_1-6　할로알킬, C_1-6　할로알옥시, -OR^1b, -NR^1bR^1c, -C(O)R^1b, -C(O)OR^1b, -OC(O)R^1b, -C(O)NR^1bR^1c, -NR^1bC(O)R^1c, -SO₂R^1b, -SO₂NR^1bR^1c, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이다. R^1b 및 R^1c는 각각 H 또는 C_1-6　알킬이다. R²는 H, C_1-6　알킬, C_1-6　알킬-OR^1b, C_1-6　알킬-NR^1bR^1c 또는 C_1-6　알킬렌-헤테로사이클로알킬이다. R³은 H 또는 C_1-6　알킬이다. Ar은 1-4개의 R⁴ 기로 치환되거나 비치환된 아릴이다. 각 R⁴는 H, C_1-6　알킬, C_1-6　알콕시, 할로겐, C_1-6　할로알킬 또는 C_1-6　할로알콕시이다. L¹은 결합 또는 C_1-6　알킬렌이다. 아랫첨자 n은 0 내지 3의 정수이다. 또한, 본원에 언급된 화합물의 염 및 이성질체를 포함한다.

일부 기타 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 Ia를 갖는 화합물을 제공한다:

일부 구체예에서, L¹은 메틸렌이다. 기타 구체예에서, Ar은 페닐이다.

일부 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 Ib를 갖는 화합물을 제공한다:

일부 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 Ic를 갖는 화합물을 제공한다:

일부 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 Id를 갖는 화합물을 제공한다:

일부 구체예에서, 각 R^1a, R² 및 R⁴는 화학식 I에 대해 상기 정의된 바와 같다. 일부 구체예에서, 화학식 Id의 화합물은 각 R^1a가 독립적으로 H, C_1-6　알킬, 할로겐, 또는 C_1-6　할로알킬이며; R²는 H, 또는 C_1-6　알킬이고; 각 R⁴가 H, C_1-6　알킬, 할로겐, 또는 C_1-6　할로알킬인 화합물이다.

일부 구체예에서, 본 발명은 R¹이 아릴 또는 헤테로아릴인 화합물을 제공한다. 기타 구체예에서, R¹은 페닐, 피리딜, 피리미딘, 및 티아졸로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 다른 구체예에서, 각 R^1a는 독립적으로 H, C_1-6　알킬, C_1-6　알콕시, 할로겐, C_1-6　할로알킬, -NR^1bR^1c, 또는 -SO₂R^1b이다. 추가의 기타 구체예에서, 각 R^1a는 C_1-6　할로알킬이다. 일부 기타 구체예에서, 각 R^1a는 독립적으로 H, Me, Et, -OMe, F, Cl, -CF₃, -NMe₂, 또는 -SO₂Me이다. 일부 구체예에서, 각 R^1a는 독립적으로 H, Me, Et, F, Cl, 또는 -CF₃이다. 기타 구체예에서, 각 R^1a는 -CF₃이다. 일부 기타 구체예에서, R²는 H 또는 C_1-6　알킬이다. 기타 구체예에서, R²는 H이다.

일부 구체예에서, 본 발명은 하기로부터 선택된 화합물을 제공한다:

일부 구체예에서, 화합물은

이다.

일부 기타 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식을 갖는 화합물을 제공한다:

본 발명의 화합물은 염으로서 존재할 수 있다. 본 발명은 그러한 염을 포함한다. 적용가능한 염 형태의 예는 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 설페이트, 메탄설포네이트, 니트레이트, 말레에이트, 아세테이트, 시트레이트, 푸마레이트, 타르트레이트(예를 들어, (+)-타르트레이트, (-)-타르트레이트 또는 라세미 혼합물을 포함하는 이들의 혼합물), 석시네이트, 벤조에이트, 및 글루탐산과 같은 아미노산과의 염을 포함한다. 이들 염은 당업자들에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 또한, 염기 부가 염 예컨대, 소듐, 포타슘, 칼슘, 암모늄, 유기 아미노, 또는 마그네슘 염, 또는 유사한 염이 포함된다. 본 발명의 화합물이 상대적으로 염기성 작용기를 함유하는 경우, 산 부가 염이 중성 형태의 이러한 화합물을 순수한 또는 적합한 불활성 용매 중에서 충분량의 요망하는 산과 접촉시킴으로써 얻어질 수 있다. 허용되는 산 부가 염의 예는 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 일수소탄산, 인산, 일수소인산, 이수소인산, 황산, 일수소황산, 요오드화수소산, 또는 포스포러스산 등과 같은 무기산으로부터 유래된 것들 뿐만 아니라 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산 말레산, 말론산, 벤조산, 석신산, 수베르산, 푸마르산, 락트산, 만델산, 프탈산, 벤젠설폰산, p-톨릴설폰산, 시트르산, 타르타르산, 및 메탄설폰산 등과 같은 유기 산으로부터 유래된 염을 포함한다. 또한, 아미노산의 염, 예컨대 아르기네이트 등, 및 글루쿠론산 또는 갈락투노르산 등과 같은 유기산의 염이 포함된다. 본 발명의 소정의 특정 화합물은 염기성 및 산성 작용기 둘 모두를 함유하여 화합물이 염기 또는 산 부가 염으로 전환되게 한다.

기타 염은 본 발명의 방법에서 사용되는 화합물의 산 또는 염기 염을 포함한다. 약제학적으로 허용되는 염의 예시적 예는 무기 산(염산, 브롬화수소산, 및 인산 등) 염, 유기 산(아세트산, 프로피온산, 글루탐산, 및 시트르산 등) 염, 및 4차 암모늄(메틸 아이오다이드, 및 에틸 아이오다이드 등) 염이다. 약제학적으로 허용되는 염은 비-독성인 것으로 이해된다. 적합한 약제학적으로 허용되는 염에 대한 추가 정보는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985]에서 확인될 수 있으며, 이 문헌은 본원에 참고로 포함된다.

약제학적으로 허용되는 염은 본원에 기술된 화합물에서 발견된 특정 치환기에 따라, 비교적 비독성인 산 또는 염기와 제조되는 활성 화합물의 염을 포함한다. 본 발명의 화합물이 비교적 산성인 작용기를 함유하는 경우, 염기 부가 염은 중성 형태의 이러한 화합물을 순수한 또는 적합한 불활성 용매에서 충분한 양의 요망되는 염기와 접촉시킴으로써 수득될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염기 부가염의 예는 소듐, 포타슘, 칼슘, 암모늄, 유기 아미노, 또는 마그네슘 염, 또는 유사한 염을 포함한다. 본 발명의 화합물이 상대적으로 염기성 작용기를 함유하는 경우, 산 부가 염이 중성 형태의 이러한 화합물을 순수한 또는 적합한 불활성 용매 중에서 충분량의 요망하는 산과 접촉시킴으로써 얻어질 수 있다. 약제학적으로 허용되는 산 부가 염의 예는 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 일수소탄산, 인산, 일수소인산, 이수소인산, 황산, 일수소황산, 요오드화수소산, 또는 포스포러스산 등과 같은 무기산으로부터 유래된 것들 뿐만 아니라 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산 말레산, 말론산, 벤조산, 석신산, 수베르산, 푸마르산, 락트산, 만델산, 프탈산, 벤젠설폰산, p-톨릴설폰산, 시트르산, 타르타르산, 및 메탄설폰산 등과 같은 유기 산으로부터 유래된 염을 포함한다. 또한, 아미노산의 염, 예컨대 아르기네이트 등, 및 글루쿠론산 또는 갈락투노르산 등과 같은 유기산의 염이 포함된다 (예를 들어, 문헌 [Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19] 참조). 본 발명의 소정의 특정 화합물은 염기성 및 산성 작용기 둘 모두를 함유하여 화합물이 염기 또는 산 부가 염으로 전환되게 한다.

중성 형태의 화합물은 바람직하게는, 염을 염기 또는 산과 접촉시키고 통상적인 방법으로 모 화합물을 분리시킴으로써 생성될 수 있다. 모 형태의 화합물은 특정 물리적 성질, 예컨대 극성 용매 중에서의 용해도에서 다양한 염 형태들과 차이가 난다.

본 발명의 특정 화합물은 비용매화된 형태 뿐만 아니라 수화된 형태를 포함하는 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 용매화된 형태는 비용매화된 형태와 동등하고, 본 발명의 범위 내에 포함된다. 본 발명의 특정 화합물은 다결정형 또는 무정형으로 존재할 수 있다. 일반적으로, 모든 물리적 형태는 본 발명에 의해 고려되는 용도에 대해 동등하고 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다.

본 발명의 특정 화합물은 비대칭 탄소 원자(광학 중심) 또는 이중 결합을 가지는데, 아미노산에 대한 (R)- 또는 (S)-로서, 또는 (D)- 또는 (L)-로서의 절대 입체 화학의 측면에서 정의될 수 있는 거울상 이성질체, 라세미체, 부분입체 이성질체, 호변 이성질체, 기하 이성질체, 입체 이성질체 형태, 및 각각의 이성질체는 본 발명의 범위 내에 포함된다. 본 발명의 화합물은 너무 불안정하여 합성 및/또는 분리할 수 없는 것으로 당업계에 공지된 것들은 포함하지 않는다. 본 발명은 라세미 및 광학적 순수 형태의 화합물을 포함하는 것을 의도한다. 광학적으로 활성인 (R)- 또는 (S)-, 또는 (D)- 또는 (L)-이성질체는 키랄 신톤(synthon) 또는 키랄 시약을 사용하여 제조할 수 있거나, 통상적인 기법을 이용하여 분해할 수 있다.

이성질체는 동일한 수 및 종류의 원자를 지녀서 동일한 분자량을 지니지만 원자의 구조적 배열 또는 구성에 있어서 차이가 나는 화합물을 포함한다.

당업자들에게는, 본 발명의 특정 화합물이 호변 이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 이러한 모든 호변 이성질체 형태의 화합물은 본 발명의 범위 내에 있음이 자명할 것이다. 호변 이성질체는 평형 상태로 존재하고 어느 한 이성질체 형태로부터 다른 이성질체 형태로 용이하게 전환되는 둘 이상의 구조적 이성질체 중 어느 하나를 지칭한다.

달리 명시되지 않는 한, 본원에서 묘사된 구조식은 또한 구조식의 모든 입체화학 형태, 즉, 각각의 비대칭 중심에 대한 R 및 S 배열을 포함함을 의미한다. 그러므로, 본 발명의 단일 입체화학 이성질체 뿐만 아니라 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체 혼합물은 본 발명의 범위 내에 있는 것이다.

달리 명시되지 않는 한, 본 발명의 화합물은 또한 이러한 화합물을 구성하는 하나 이상의 원자에서 비중립 비율의 원자 동위원소(isotope)를 함유할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 방사성 동위원소, 예를 들어, 중수소(²H), 삼중수소(³H), 요오드-125(¹²⁵I), 탄소-13(¹³C), 또는 탄소-14(¹⁴C)로 방사선표지될 수 있다. 본 발명의 화합물의 모든 동위원소 변이형은 방사성이거나 아니거나 간에 본 발명의 범위 내에 포함된다.

염 형태 이외에, 본 발명은 프로드러그 형태인 화합물을 제공한다. 본원에 기재된 화합물의 프로드러그는 생리학적 조건 하에서 용이하게 화학적 변화를 거쳐 본 발명의 화합물을 제공하는 그러한 화합물이다. 또한, 프로드러그는 생체외 환경에서 화학적 또는 생화학적 방법에 의해 본 발명의 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들어, 프로드러그는 적절한 효소 또는 화학적 시약을 사용하여 경피 패취 저장기(transdermal patch reservoir)에 넣는 경우, 본 발명의 화합물로 천천히 전환될 수 있다.

본 발명의 화합물은 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 그 전체가 참조로 본원에 참조로 통합된 미국 특허 번호 8,685,973 참조.

V. 약제 조성물

일부 구체예에서, 본 발명은 약제학적으로 허용되는 부형제 및 본 발명의 화합물을 포함하는 약제 조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물은 광범위하게 다양한 경구, 비경구 및 국소 투약 형태로 제조하여 투여될 수 있다. 경구 제제는 환자가 섭취하기에 적합한 정제, 환제, 분말제, 당의정, 캡슐, 액상제, 로젠지, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등을 포함한다. 또한, 본 발명의 화합물은 주입, 즉 정맥내, 근육내, 피내, 피하, 십이지장내, 또는 복강내 투여될 수 있다. 또한, 본원에 기술된 화합물은 흡입, 예를 들면 비강내 투여될 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물은 경피 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 GR 조절제는 안내, 질내, 및 직장내 경로를 통해 좌약, 흡입, 분말 및 에어로졸 제형을 비롯한 제형으로 투여될 수 있다 [예를 들면, 스테로이드 흡입제의 경우, 문헌(Rohatagi, J. Clin . Pharmacol. 35:1187-1193, 1195; Tjwa Ann. Allergy Asthma Immunol. 75:107-111, 1995) 참조]. 따라서, 또한 본 발명은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제 및 화학식 (I)의 화합물, 또는 화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제 조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물로부터 약제 조성물을 제조하는 경우, 약제학적으로 허용되는 담체는 고체 또는 액체일 수 있다. 고체 형태 제제는 분말제, 정제, 환제, 캡슐, 샤셋, 좌약 및 산재성 과립제를 포함한다. 고체 담체는 하나 이상의 물질일 수 있고, 이들 물질은 또한 희석제, 향미제, 결합제, 보존제, 정제 붕해제, 또는 캡슐화 물질로서 작용할 수 있다. 제형 및 투여에 관한 기법에 대한 상세한 설명은 과학 및 특허 문헌에 잘 기재되어 있다[참조예:the latest edition of Remington's Pharmaceutical Sciences, Maack Publishing Co, Easton PA("Remington's)].

분말제에서, 담체는 미분 고형물이고, 이 미분 고형물은 미분 활성 성분과의 혼합물 형태로 존재한다. 정제에서는 활성 성분은 적합한 비율의 필요한 결합 특성을 보유하는 담체와 혼합되고, 요망하는 형상 및 크기로 치밀화된다.

분말제 및 정제는 바람직하게는, 5% 또는 10% 내지 70%의 활성 화합물을 함유한다. 적합한 담체는 마그네슘 카보네이트, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 당, 락토즈, 펙틴, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로즈, 소듐 카르복시메틸셀룰로즈, 저 융점 왁스, 코코아 버터 등이다. 용어 "제제"는 담체로서 캡슐화 물질과 활성 화합물의 제형을 포함하는 것으로 의도되며, 이는 기타 담체의 존재 또는 부재하에 활성 성분이 담체에 의해 둘러싸이며 따라서 이와 관련되는 캡슐을 제공한다. 유사하게는, 샤셋 및 로젠지가 포함된다. 정제, 분말제, 캡슐, 환제, 샤셋 및 로젠지가 경구 투여에 적합한 고체 투약 형태로서 사용될 수 있다.

적합한 고체 부형제는 탄수화물 또는 단백질 충전제이며, 이는 비제한적으로, 락토즈, 수크로즈, 만니톨 또는 소르비톨을 포함하는 당; 옥수수, 밀, 쌀, 감자 또는 다른 식물로부터 유래하는 전분; 셀룰로즈, 예를 들어, 메틸 셀룰로즈, 하이드록시프로필메틸 셀룰로즈, 또는 소듐 카르복시메틸셀룰로즈; 및 아라비아 검 및 트라가칸트 검을 포함한 검; 뿐만 아니라 단백질 예컨대, 젤라틴 및 콜라겐을 포함한다. 요망에 따라, 붕해제 및 가용화제, 예를 들어, 가교 결합된 폴리비닐 피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 이들의 염, 예를 들어, 알긴산나트륨을 첨가할 수 있다.

당의정 코어는 적합한 코팅, 예를 들어, 농축 당 용액을 구비하고 있으며, 또한 아라비아 검, 탈크, 폴리비닐피롤리돈, 카보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜, 및/또는 이산화티탄, 락커 용액, 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 함유할 수 있다. 염료 또는 안료는 제품 식별을 위해서 또는 활성 화합물의 정량(즉, 용량)을 특징화시키기 위해서 정제 또는 당의정 코팅에 첨가될 수 있다. 또한, 본 발명의 약제 제제는 예를 들어, 젤라틴으로 제조된 푸시-핏(push-fit) 캡슐 뿐만 아니라 젤라틴으로 제조된 연질 밀봉 캡슐 및 코팅, 예를 들어, 글리세롤 및 소르비톨을 사용하여 경구 사용될 수 있다. 푸시-핏 캡슐은 충전제 또는 결합제, 예를 들어, 락토즈 또는 전분, 활택제, 예를 들어, 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트 및 임의로 안정화제와 함께 혼합된 상태로 GR 조절제를 함유할 수 있다. 연질 캡슐에서, GR 조절제 화합물은 안정화제와 함께 또는 없이 적합한 액체, 예를 들어, 지방 오일, 액상 파라핀, 또는 액상 폴리에틸렌 글리콜 중에 용해 또는 현탁될 수 있다.

좌약을 제조하는 경우에는 먼저 저융점 왁스, 예를 들어, 지방산 글리세리드 또는 코코아 버터의 혼합물이 용해되고, 이 안에 활성 성분이 교반에 의해 균질하게 현탁된다. 이어서, 용융된 균질한 혼합물이 용이한 크기의 몰드 내에 부어지고, 냉각됨으로써 고형화된다.

액체 형태 제제는 용액, 현탁액, 및 에멀젼, 예를 들면 물 또는 물/프로필렌 글리콜 용액을 포함한다. 비경구 주입의 경우, 액체 제제는 수성 폴리에틸렌 글리콜 용액 중에서 용액으로 제형화될 수 있다.

경구 용도에 적합한 수성 용액은 활성 성분을 수 중에 용해시키고, 적합한 착색제, 향미제, 안정화제 및 점증제를 요망에 따라 첨가함으로써 제조될 수 있다. 경구 용도에 적합한 수성 현탁액은 미분 활성 성분을 수 중에 점성 물질, 예를 들어, 천연 또는 합성 검, 수지, 메틸셀룰로즈, 소듐 카르복실메틸셀룰로즈, 하이드록시프로필메틸셀룰로즈, 소듐 알기네이트, 폴리비닐피롤리돈, 트라가칸트 검 및 아카시아 검, 및 분산제 또는 습윤제, 예를 들어, 천연 발생 인지질(예, 레시틴), 알킬렌 옥사이드와 지방산의 축합 생성물(예를 들면, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방족 알콜의 축합 생성물(예를 들면, 헵타데카에틸렌 옥시세탄올), 에틸렌 옥사이드와 지방산 및 헥시톨로부터 유도된 부분 에스테르와의 축합 생성물(예를 들면, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노-올레이트), 또는 에틸렌 옥사이드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분 에스테르와의 축합 생성물(예를 들면, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노-올레이트)와 함께 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 또한, 수성 현탁액은 하나 이상의 보존제, 예를 들어, 에틸 또는 n-프로필 p-하이드록시벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 향미제, 및 하나 이상의 감미제, 예를 들어, 수크로즈, 아스파르탐 또는 사카린을 함유할 수 있다. 제형은 몰삼투압농도(osmolarity)에 대하여 조정될 수 있다.

또한, 사용하기 직전에 경구 투여를 위한 액체 형태 제제로 전환되도록 고안된 고체 형태 제제도 포함된다. 이러한 액체 형태는 용액, 현탁액 및 에멀젼을 포함한다. 이들 제제는 활성 성분 이외에도 착색제, 향미제, 안정화제, 완충제, 인공 및 천연 감미제, 분산제, 점증제, 및 가용화제 등을 함유할 수 있다.

오일 현탁액은 식물성 오일, 예를 들어, 땅콩(arachis) 오일, 올리브 오일, 참깨 오일 또는 코코넛 오일 중에 또는 광유(mineral oil), 예를 들어, 액상 파라핀 중에 또는 이들의 혼합물 중에 본 발명의 화합물을 현탁시킴으로써 제형화될 수 있다. 오일 현탁액은 점증제, 예를 들어, 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알콜을 함유할 수 있다. 감미제, 예를 들어, 글리세롤, 소르비톨 또는 수크로즈를 첨가하여 식용가능한 경구 제제를 제공할 수 있다. 이들 제형은 항산화제, 예를 들어, 아스코르브산을 첨가하여 보존시킬 수 있다. 주입가능한 오일 비히클의 예로서는 문헌(Minato, J. Pharmacol. Exp . Ther . 281:93-102, 1997)을 참조한다. 또한, 본 발명의 약제학적 제형은 수중유 에멀젼의 형태로 존재할 수 있다. 유상은 상기 기술된 식물성 오일 또는 광유일 수 있거나, 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 유화제는 천연 발생 검, 예를 들어, 아카시아 검 및 트라가칸트 검, 천연 발생 인지질, 예를 들어, 대두 레시틴, 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 에스테르 또는 부분 에스테르, 예를 들어, 소르비탄 모노-올레이트, 및 이들 부분 에스테르와 에틸렌 옥사이드와의 축합 생성물, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노-올레이트를 포함한다. 또한, 에멀젼은 시럽 및 엘릭시르의 제형에서와 같이 감미제 및 향미제를 함유할 수 있다. 이러한 제형은 또한 완화제(demulscent), 보존제 또는 착색제를 함유할 수 있다.

본 발명의 화합물은 경피로, 국소 경로에 의해 전달될 수 있으며, 도포기 스틱, 용액, 현탁액, 에멀젼, 겔, 크림, 연고, 페이스트, 젤리, 페인트, 분말제 및 에어로졸로서 제형화될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물 및 조성물은 체내에서 서서히 방출하기 위한 미소구로서 전달될 수 있다. 예를 들면, 미소구는 피하로 서서히 방출하는 약물 함유 미소구의 피내 주사를 통해[예를 들면, 문헌(Rao, J. Biomater Sci . Polym . Ed. 7:623-645, 1995) 참조]; 생분해성의 주입 가능한 겔 제형[예를 들면, 문헌(Gao Pharm . Res. 12:857-863, 1995) 참조]으로서; 또는 경구 투여하기 위한 미소구[예를 들면, 문헌, Eyles, J. Pharmacol . 49:669-674, 1997) 참조]로서 투여될 수 있다. 경피 경로 및 피내 경로는 모두 수주 또는 수개월 동안 일정한 전달을 제공한다.

본 발명의 약제 제형은 염으로서 제공될 수 있으며, 비제한적으로, 염산, 황산, 아세트산, 락트산, 타르타르산, 말산, 숙신산 등을 포함하는 많은 산과 형성될 수 있다. 염은 상응하는 수성 또는 자유 염기 형태인 기타 양성자 용매 중에 더욱 용해되는 성향이 있다. 다른 경우에, 제제는 4.5 내지 5.5의 pH 범위에서 1mM-50mM 히스티딘, 0.1%-2% 수크로즈, 2%-7% 만니톨 중에 동결건조된 분말일 수 있으며, 이는 사용 전에 완충제와 조합된다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 세포막과 융합되거나 내포작용하는 리포좀을 사용하여, 즉 리포좀에 부착된 리간드를 사용하거나 올리고뉴클레오티드에 직접 부착된 리간드를 사용함으로써 전달될 수 있으며, 이는 내포작용(endocytosis)을 초래하는 세포의 표면 막 단백질 수용체에 결합한다. 리포좀을 사용함으로써, 특히 리포좀 표면이 표적 세포에 특이적인 리간드를 운반하거나 그렇지 않으면 우선적으로 특이적 기관으로 유도되는 경우, 생체내에서 표적 세포 내로의 GR 조절제의 전달에 집중될 수 있다 (참조예: Al-Munhammed, J. Microencapsul. 13:293-306, 1996; Chonn, Curr . Opin . Biotechnol . 6: 698-708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp . Pharm. 46:1576-1587, 1989).

약제학적 제제는 바람직하게는, 단위 용량 형태이다. 그러한 형태에서, 제제는 적당한 정량의 활성 성분을 함유하는 단위 용량으로 세분한다. 단위 용량 형태는 포장된 제제, 제제의 구별되는 정량을 함유하는 패키지, 예를 들어, 포장된 정제, 캡슐 및 바이알 또는 앰플내 분말일 수 있다. 또한, 단위 용량 형태는 캡슐, 정제, 샤셋, 또는 로젠지 자체일 수 있거나, 또는 이들 포장된 형태 중 어느 것이든 적당한 수로 존재할 수 있다.

단위 용량 제제 중의 활성 성분의 정량은 활성 성분의 특정 적용 및 효능에 따라 0.1 mg 내지 10,000 mg, 더욱 전형적으로, 1.0 mg 내지 1000 mg, 가장 전형적으로, 10 mg 내지 500 mg으로 변화되거나 조절될 수 있다. 조성물은 필요에 따라, 또한 기타 필적하는 치료제를 함유할 수 있다.

또한, 용량 요법은 당업계에 잘 공지된 약물동태학적 파라미터, 즉 흡수 속도, 생체 이용률, 대사, 클리어런스 등을 고려한다 (예를 들어, Hidalgo-Aragones (1996) J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 58:611-617; Groning (1996) Pharmazie 51:337-341; Fotherby (1996) Contraception 54:59-69; Johnson (1995) J. Pharm. Sci. 84:1144-1146; Rohatagi (1995) Pharmazie 50:610-613; Brophy (1983) Eur. J. Clin. Pharmacol. 24:103-108; 최신의 상기 Remington 문헌 참조). 최신 기술은 임상가가 각각의 개별 환자, GR 조절제 및 치료된 질병 또는 병태에 대한 투여 요법을 결정할 수 있게 한다.

제형의 단일 또는 다중 투여는 환자에 의해 요구되고 허용되는 투여량 및 빈도에 따라 투여될 수 있다. 제형은 질병 상태를 효과적으로 치료하기에 충분한 양의 활성제를 제공해야한다. 따라서, 한 구체예에서, 본 발명의 화합물의 경구 투여용 약제 제형은 일당 체중 킬로그램 당 약 0.5 내지 약 20 mg의 1일 양으로 존재한다. 대안적 구체예에서, 투여량은 일당 환자 당 체중 kg 당 약 1mg 내지 약 4mg이다. 특히, 약물이 뇌척수액 (CSF) 공간과 같은 해부학적으로 외딴 위치에 약물을 투여하는 경우, 경구 투여, 혈류로, 체강 내로 또는 기관의 루멘 내로 투여하는 것과는 대조적으로, 더 적은 투여량이 사용될 수 있다. 실질적으로 더 많은 용량이 국소 투여에 사용될 수 있다. 비경구적으로 투여 가능한 제형을 제조하기 위한 실제 방법은 당업자에게 공지되거나 자명할 것이며, Remington의 상기 문헌과 같은 간행물에 더욱 상세히 기술되어 있다. 또한, 문헌 [Nieman, In "Receptor Mediated Antisteroid Action," Agarwal, et al., eds., De Gruyter, New York (1987)] 참조.

본원에 기재된 화합물은 서로 조합되어, 글루코코르티코이드 수용체를 조절하는데 유용한 것으로 공지된 다른 활성제와 조합되어, 또는 단독으로는 효과적이지 않지만 활성제의 효능에 기여할 수있는 보조제와 조합되어 사용될 수 있다.

일부 구체예에서, 공동-투여는 하나의 활성제를 투여하고 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 또는 24 시간 내에 제 2 활성제를 투여하는 것을 포함한다. 공동-투여는 2개의 활성제를 동시에, 거의 동시에 (예를 들어, 서로 약 1, 5, 10, 15, 20 또는 30 분 이내), 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 공동-투여는 공동-제형에 의해 즉, 두 활성제 모두를 포함하는 단일 약제 조성물을 제조함으로써 이루어질 수 있다. 기타 구체예에서, 활성제는 별도로 제형화될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 활성제 및/또는 보조제는 서로 결합되거나 컨주게이팅될 수 있다.

본 발명의 GR 조절제를 포함하는 약제 조성물을 허용가능한 담체중에 제형화시킨 후, 적절한 용기에 넣고 지시된 조건의 치료를 위해 표지될 수 있다. 본 발명의 화합물의 투여를 위해, 그러한 표지는 예를 들어, 투여량, 투여 빈도 및 투여 방법에 관한 지침을 포함할 것이다.

본 발명의 약제 조성물은 염으로서 제공될 수 있고, 염산, 황산, 아세트산, 락트산, 타르타르산, 말산, 숙신산 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 많은 산으로 형성될 수 있다. 염은 수성 또는 상응하는 자유 염기 형태인 다른 양성자 용매에 더욱 용해성을 띠는 경향이 있다. 다른 경우, 상기 제제는 4.5 내지 5.5의 pH 범위에서 1mM-50mM 히스티딘, 0.1%-2% 수크로즈, 2%-7% 만니톨 중에 동결건조된 분말일 수 있으며, 이는 사용 전에 완충제와 조합된다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 조성물은 비경구 투여, 예를 들어, 정맥내(IV) 투여 또는 신체 동공 또는 기관의 내강 내로의 투여에 유용하다. 투여용 제형은 통상적으로 약제학적으로 허용되는 담체 중에 용해된 본 발명의 조성물의 용액을 포함한다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에서도 특히 물 및 링거 용액, 등장성 염화나트륨이 있다. 또한, 살균된 고정 오일은 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수 있다. 이러한 목적을 위해서는 합성 모노글리세리드 및 디글리세리드를 비롯한 임의의 블랜드 고정 오일을 사용할 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방 산이 마찬가지로 주입 제제에 사용될 수 있다. 이들 용액은 살균되어 있고, 일반적으로 바람직하지 못한 물질을 함유하고 있지 않다. 이러한 제형은 종래의 잘 알려진 살균 기법으로 살균 처리될 수 있다. 제형은 적당한 생리학적 조건에 필요한 약제학적으로 허용되는 보조 물질, 예를 들어, pH 조절제 및 완충제, 독성 조절제, 예를 들어, 소듐 아세테이트, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 및 소듐 락테이트 등을 함유할 수 있다. 이들 제형에서 본 발명의 조성물의 농도는 광범위하게 다양할 수 있으며, 선택된 구체적인 투여 방식 및 환자의 필요성에 따라 주로 유체 부피, 점도, 및 체중 등에 기초하여 선택될 것이다. IV 투여의 경우, 제형은 살균된 주입가능한 제제, 예를 들어, 살균된 주입가능한 수성 또는 유성 현탁액일 수 있다. 이러한 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 공지된 기술에 따라 제형화될 수 있다. 또한, 살균된 주입가능한 제제는 비독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 살균된 주입가능한 용액 또는 현탁액, 예를 들어, 1,3-부탄디올의 용액일 수 있다.

VI. 지방간 질환 치료 방법

일부 구체예에서, 본 발명은 글루코코르티코이드 수용체를 조절하여 장애 또는 병태를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 그러한 치료를 필요로하는 대상체에 치료학적 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

일부 기타 구체예에서, 본 발명은 글루코코르티코이드 수용체를 길항하여 장애 또는 병태를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 그러한 치료를 필요로하는 대상체에 유효량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 본원에 기술된 기법을 사용하여 핵 수용체 활성을 조절하는 방법을 제공한다. 예시적인 구체예에서, 상기 방법은 GR 및 MR을 유효량의 본 발명의 화합물 예컨대, 화학식 I의 화합물과 접촉시키고, GR 및 MR 활성의 변화를 검출하는 것을 포함한다.

예시적인 구체예에서, 핵 조절제는 GR 및 MR 활성의 길항제이다. 본원에서 사용되는 핵 수용체 길항제는 글루코코르티코이드 수용체에 대한 GR 효능제 (예를 들어, 코르티솔 및 합성 또는 천연 코르티솔 유사체)의 결합을 부분적으로 또는 완전히 억제 (길항)시키고, 미네랄로코르티코이드 수용체에 대한 MR 효능제 (예를 들면, 알도스테론 및 합성 또는 천연 알도스테론 유사체)의 결합을 부분적으로 또는 완전히 억제 (길항)시킴으로써, 효능제에 대한 GR 및 MR의 결합과 관련된 임의의 생물학적 반응을 억제하는 임의의 조성물 또는 화합물을 지칭한다. 일부 구체예에서, 핵 수용체 길항제는 에스트로겐 수용체 (ER), 프로게스테론 수용체 (PR) 및/또는 안드로겐 수용체 (AR)에 비해 GR 및/또는 MR에 우선적으로 결합한다. ER, PR 및/또는 AR에 비해 GR 및/또는 MR에 대한 핵 수용체 길항제의 선호는 적어도 10:1보다 클 수 있다. 예를 들어, 선호도는 적어도 10:1, 50:1, 100:1, 500:1 또는 적어도 1000:1일 수 있다. 일부 구체예에서, 핵 수용체 길항제는 ER, PR 및/또는 AR 대비 GR 및/또는 MR에 적어도 100:1로 우선적으로 결합한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 핵 수용체 길항제는 지방간 질환의 하나 이상의 증상을 개선 또는 감소시키기 위해 하나 이상의 치료와 병용될 수 있다. 핵 길항제는 체중 감량 요법 또는 칼로리 제한, 운동 증가 및/또는 알콜 또는 헵타톡신의 회피의 채택과 같은 생활 습관 개선을 겪고 있거나 겪은 지방간 질환 환자에게 투여될 수 있다. 환자는 체중 감량 수술 (비만대사 수술)을 받을 수 있거나 받았다. 일부 구체예에서, 특정 글루코코르티코이드 수용체 길항제가 AFL 및 ASH를 포함하는 알콜 관련 지방간 질환을 치료하기 위해 비제한적으로 프로필티오우라실, 인플릭시맙, 인슐린, 글루카곤, 칼슘 채널 차단제, 항산화제 (예를 들어, 비타민 E), S-아데노실-L-메티오닌 (SAMe), 실리마린, 및 펜톡시필린과 같은 치료제와 조합되어 개체에 투여된다. 기타 구체예에서, 특정 글루코코르티코이드 수용체 길항제는 NASH를 포함하는 비알콜성 지방간 질환을 치료하기 위해 비제한적으로, 세로토닌 재흡수 억제제, 시부트라민, 오를리스타트, 인슐린-감작제 (예를 들어, 티아졸리딘디온, 로시글리타존 및 피오글리타존), 지질-저하제 (예를 들어, 프로부콜), 항산화제 (예를 들어, 비타민 E, 펜톡시필린, 베타인 및 N-아세틸시스테인), 간보호 요법제 (예를 들어, 우르소데옥시콜릭산), 안지오텐신-전환 효소 억제제, 안지오텐신-수용체 차단제, 메트포르민, 단일불포화 지방산, 다중불포화 지방산, 및 이들의 조합물과 같은 치료제와 조합되어 개체에 투여된다.

VII. 지방간 질환을 치료하기 위한 화합물을 평가하기 위한 검정 및 방법

본 발명의 화합물은 이들의 항글루코코르티코이드 성질에 대해 평가될 수 있다. 글루코코르티코이드 수용체 활성을 조절할 수 있는 화합물을 검정하는 방법이 본원에 제시된다. 전형적으로, 본 발명의 화합물은 핵 수용체 예컨대, GR 및 MR에 결합함으로써 또는 GR 및 MR 리간드가 상응하는 GR 및 MR에 결합하는 것을 방지함으로써 핵 수용체 활성을 조절할 수 있다. 일부 구체예에서, 화합물은 세포 독성을 거의 또는 전혀 나타내지 않는다.

A. 결합 검정

일부 구체예에서, 핵 수용체 조절제는 덱사메타손과 같은 핵 수용체의 리간드와 경쟁하는 분자에 대해 스크리닝함으로써 확인된다. 당업자들은 경쟁적인 결합 검정을 수행하는 방식이 다수 존재한다는 것을 인식할 것이다. 일부 구체예에서, 핵 수용체는 표지화된 핵 수용체 리간드와 함께 사전-인큐베이션되고, 이어서 시험 화합물과 접촉된다. 이러한 유형의 경쟁적인 결합 검정(competitive binding assay)은 또한 본원에서 결합 변위 검정(binding displacement assay)이라고 지칭할 수 있다. 핵 수용체에 결합된 리간드의 양의 변화(예를 들면, 감소)는 분자가 잠재적인 핵 수용체 조절제라는 것을 나타낸다. 대안적으로, 핵 수용체에 대한 시험 화합물의 결합은 표지화 시험 화합물로 직접 측정될 수 있다. 이러한 후자 유형의 검정은 직접 결합 검정(direct binding assay)이라고 지칭된다.

직접 결합 검정 및 경쟁적 결합 검정은 모두 다양한 다른 포맷으로 사용될 수 있다. 그 포맷은 면역검정 및 수용체 결합 검정에서 사용된 것과 유사할 수 있다. 경쟁적 결합 검정 및 직접 결합 검정을 비롯한 결합 검정에 대한 상이한 포맷에 관한 설명에 대해서는 문헌[Basic and Clinical Immunology 7th Edition(D. Stites and Terr ed.) 1991; Enzyme Immunoassay, E.T. Maggio, ed., CRC Press, Boca Raton, Florida(1980); 및 "Practice and Theory of Enzyme Immunoassays", P. Tijssen, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Elsevier Science Publshers B.V. Amsterdam(1985)]을 참조하며, 이들 각각은 본원에 참조로 포함된다.

고체상 경쟁적 결합 검정에서, 예를 들면 샘플 화합물은 고체 표면에 결합된 결합제 상의 특이적 결합 부위에 대하여 표지화 분석물과 경쟁할 수 있다. 이러한 유형의 포맷에서, 표지화 분석물은 핵 수용체 결합 리간드일 수 있고, 결합제는 고체상에 결합된 핵 수용체일 수 있다. 대안적으로, 표지화 분석물은 표지화 핵 수용체일 수 있고, 결합제는 고체상 핵 수용체 리간드일 수 있다. 포획제에 결합된 표지화 분석물의 농도는 결합 검정에서 경쟁하는 시험 화합물의 능력에 반비례한다.

대안적으로, 경쟁적 결합 검정은 액체상에서 수행될 수 있으며, 당해 분야에 공지된 다양한 기법 중 임의의 기법을 이용하여 미결합된 표지화 단백질로부터 결합된 표지화 단백질을 분리할 수 있다. 예를 들면, 결합된 리간드와 과량 결합된 리간드 사이를 구별하거나 결합된 시험 리간드와 과량의 미결합된 시험 화합물 사이를 구별하기 위한 몇 가지 절차가 개발되어 있다. 이들 절차는 수크로즈 구배의 침전, 겔 전기영동, 또는 겔 등전 포커싱(gel isoelectric focusing)에 의한 결합된 착물의 식별; 프로타민 설페이트에 의한 수용체-리간드 착물의 침전 또는 하이드록실아파타이트 상의 흡착; 및 덱스트란-피복된 활성탄(DCC) 상의 흡착 또는 부동화 항체에 대한 결합에 의한 미결합된 화합물 또는 리간드의 제거를 포함한다. 분리 후, 결합된 리간드 또는 시험 화합물의 양을 측정한다.

대안적으로, 분리 단계가 필요 없는 균일한 결합 검정이 수행될 수 있다. 예를 들면, 핵 수용체 상의 표지는 핵 수용체를 그 리간드 또는 시험 화합물에 결합시킴으로써 변화될 수 있다. 표지화 핵 수용체에서 이러한 변화는 결과적으로 표지에 의해 방출된 신호의 감소 또는 증가를 발생시킴으로써, 결합 검정의 종료시 표지의 측정은 결합된 상태의 핵 수용체의 검출 또는 정량화를 허용한다. 광범위하게 다양한 표지가 사용될 수 있다. 성분은 몇 가지 방법 중 임의의 한 방법에 의해 표지화될 수 있다. 유용한 방사활성 표지는 ³H, ¹²⁵I, ³⁵S, ¹⁴C 또는 ³²P가 혼입된 것들을 포함한다. 유용한 비방사활성 표지는 형광제, 화학발광제, 인광제, 및 전자화학발광제 등이 혼입된 것들을 포함한다. 형광제는 단백질 구조내 이동, 예를 들어, 형광 이방성 및/또는 형광 편광을 검출하는데 이용되는 분석 기법에서 특히 유용하다. 표지의 선택은 요구되는 감도, 화합물과의 컨주게이션 용이성, 안정성 요건, 및 이용가능한 기기에 따라 좌우된다. 이용될 수 있는 다양한 표지화 또는 신호 생성 시스템의 개관에 대해서는 미국 특허 4,391,904를 참조할 수 있으며, 상기 특허는 다목적으로 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다. 표지는 해당 기술 분야에 잘 알려진 방법에 따라 검정의 요망 성분에 직접적으로 또는 간접적으로 커플링될 수 있다.

고효율 스크리닝(high-throughput screening) 방법이 대다수의 잠재적인 조절제 화합물을 검정하는데 이용될 수 있다. 이로써, 그러한 "화합물 라이브러리"는, 본원에서 기술된 바와 같이, 하나 이상의 검정으로 스크리닝되어 소정의 특징적인 활성을 나타내는 라이브러리 구성원(특정 화학종 또는 하위부류)이 확인된다. 화학 라이브러리의 제조 및 스크리닝은 해당 기술 분야의 당업자에 잘 알려져 있다. 화학 라이브러리의 제조를 위한 장치는 시중에서 입수가능하다 (참조예: 357 MPS, 390 MPS, Advanced Chem Tech, Louisville KY, Symphony, Rainin, Woburn, MA, 433A Applied Biosystems, Foster City, CA, 9050, Plus, Millipore, Bedford, MA).

B. 세포계 검정

세포계 검정은 본 발명의 화합물에 의한 핵 수용체의 결합 또는 활성 조절에 대하여 검정하기 위해서 핵 수용체를 함유하는 전체 세포 또는 세포 분획을 포함한다. 본 발명의 방법에 따라 사용할 수 있는 예시적인 세포 유형은, 예를 들면 백혈구, 예를 들어, 호중구, 단핵구, 마크로파지, 호산구, 호염기구, 비만 세포, 및 림프구, 예를 들어, T 세포 및 B 세포, 백혈병(leukemia), 버키트 림프종, (마우스 유방 종양 바이러스 세포를 비롯한) 종양 세포, 내피 세포, 섬유아세포, 심장 세포, 근세포, 유방 종양 세포, 난소 암, 암종, 자궁경부암, 교모세포종, 간 세포, 신장 세포, 및 신경 세포를 포함하는 임의의 포유동물 세포, 뿐만 아니라 효모를 포함하는 진균 세포를 포함한다. 세포는 일차 세포 또는 종양 세포일 수 있거나 다른 유형의 불멸 세포주일 수 있다. 물론, 핵 수용체는 핵 수용체의 내인성 버젼을 발현하지 않은 세포에서 발현될 수 있다.

일부 경우에는, 핵 수용체의 단편 뿐만 아니라 단백질 융합물이 스크리닝에 이용될 수 있다. 핵 수용체 리간드와 결합 경쟁하는 분자가 필요한 경우, 사용된 핵 수용체의 단편은 리간드(예를 들어, 덱사메타손)에 결합할 수 있는 단편이다. 대안적으로, 핵 수용체의 임의의 단편은 핵 수용체에 결합하는 분자를 확인하기 위한 표적으로서 사용될 수 있다. 핵 수용체 단편은 예를 들어, 적어도 20개, 30개, 40개, 50개의 아미노산의 임의의 단편 내지 핵 수용체의 1개를 제외한 모든 아미노산을 함유하는 단백질을 포함할 수 있다. 전형적으로, 리간드-결합 단편은 트랜스멤브레인 영역 및/또는 핵 수용체의 세포외 도메인의 전부 또는 대부분을 포함할 것이다.

일부 구체예에서, 핵 수용체 활성화에 의해 촉발된 신호전달(signalling)은 핵 수용체 조절제를 확인하는데 이용된다. 핵 수용체의 신호전달 활성은 많은 방식으로 측정될 수 있다. 예를 들어, 다운스트림 분자 이벤트(downstream molecular event)는 신호전달 활성을 측정하는데 모니터링될 수 있다. 다운스트림 이벤트는 핵 수용체 수용체의 자극의 결과로서 발생하는 활성 또는 징후를 포함한다. 미변경된 세포에서 전사 활성화 및 길항작용의 기능적 평가에 유용한 예시적인 다운스트림 이벤트는 다수의 반응 요소(RE)-의존성 유전자(PEPCK, 티로신 아미노 트랜스퍼라제, 아로마타제)의 상향조절을 포함한다. 또한, 글루코코르티코이드에 의해 하향조절되는 골아세포에서 오스테오칼신 발현과 같은 핵 수용체 활성화에 민감한 특정 세포 유형, 즉 PEPCK 및 글루코스-6-포스페이트(G-6-Pase)의 핵 수용체 매개된 상향조절을 나타내는 초기 간세포도 사용될 수 있다. RE 매개된 유전자 발현은 또한 잘 알려진 RE-조절된 서열(예를 들어, 리포터 유전자 작제물의 업스트림에 트랜스펙션된 마우스 유방 종양 바이러스 프로모터(MMTV))을 사용하여 트랜스펙션된 세포주에서 또한, 입증되었다. 유용한 리포터 유전자 작제물의 예로는 루시퍼라제(luc), 알칼리성 포스파타제(ALP) 및 클로르암페니콜 아세틸 트랜스퍼라제(CAT)를 포함한다. 전사 억제의 작용성 평가는 세포주, 예를 들어, 단핵구 또는 인간 피부 섬유아세포에서 수행될 수 있다. 유용한 작용성 검정은 IL-1베타 자극된 IL-6-발현; 콜라게나제, 사이클로옥시게나제-2 및 다양한 케모카인 (MCP-1, RANTES)의 하향조절; 또는 트랜스펙션된 세포주에서 NF-κB 또는 AP-1 전사 인자에 의해 조절된 유전자의 발현을 측정하는 것들을 포함한다.

전형적으로, 전-세포 검정에서 시험된 화합물은 또한 세포독성 검정에서 시험된다. 세포독성 검정은 인지된 조절 효과가 비-핵 수용체 결합 세포 효과에 기인하는 정도를 측정하기 위해 사용된다. 예시적인 구체예에서, 세포독성 검정은 구성적 활성 세포를 시험 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다. 세포 활성에서의 어떠한 저하는 세포독성 효과를 나타내는 것이다.

C. 특이성

본 발명의 화합물은 특이성 검정(또한, 본원에서 선택성 검정으로서 지칭됨)으로 처리될 수 있다. 전형적으로, 특이성 검정은 비-핵 수용체 단백질에 대한 결합 정도에 대해 시험관내 또는 세포계 검정에서 핵 수용체와 결합하는 화합물을 시험하는 것을 포함한다. 선택성 검정은 상기 기술된 바와 같이 시험관내 또는 세포계 시스템에서 수행될 수 있다. 항체, 수용체, 및 효소 등을 포함하는 임의의 적합한 비-핵 수용체 단백질에 대한 핵 수용체 결합이 시험될 수 있다. 예시적 구체예에서, 비-핵 수용체결합 단백질은 세포-표면 수용체 또는 핵 수용체이다. 또 다른 예시적 구체예에서, 비-핵 수용체 단백질은 스테로이드 수용체, 예컨대 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 또는 안드로겐 수용체이다.

본원에서 사용된 용어 및 표현은 설명하기 위한 용어로서 사용된 것이고 제한하기 위한 것이 아니며, 제시되고 기술된 특징 또는 이의 일부의 등가물을 배제하는 용어 및 표현으로서 사용하기 위한 의도가 전혀 없으며, 다양한 변형이 특허청구된 본 발명의 영역 내에서 가능하다는 점을 인지해야 할 것이다. 더구나, 본 발명의 임의의 구체예 중 임의의 하나 이상의 특징은 본 발명의 영역으로부터 벗어나는 일 없이 본 발명의 임의의 다른 구체예의 임의의 하나 이상의 다른 특징과 조합될 수 있다. 예를 들어, 핵 수용체 조절제 화합물의 특징은 본원에서 기술된 질환 상태를 치료하는 방법 및/또는 약제 조성물에 대등하게 적용가능하다. 본원에서 인용된 모든 간행물, 특허, 및 특허 출원은 본 발명의 다목적으로 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다.

VIII. 실시예

실시예 1. SW1353/ MMTV -5 세포를 이용한 GR 리포터 유전자 검정

SW1353/MMTV-5는 내인성 글루코코르티코이드 수용체를 함유하는 접착성 인간 연골육종 세포주이다. 이를 바이러스 프로모터 (마우스 유방 종양 바이러스의 긴 말단 반복부)에서 유래된 글루코코르티코이드-반응성 요소 (GRE) 뒤에 위치하는 반딧불 루시퍼라제를 엔코딩하는 플라스미드 (pMAMneo-Luc)로 트랜스펙션시켰다. 안정한 세포주 SW1353/MMTV-5가 이러한 플라스미드를 유지하는데 필요한 제네티신으로 선택되었다. 따라서, 이러한 세포주는 글루코코르티코이드 (덱사메타손)에 민감하여 루시퍼라제 (EC₅₀ ^dex 10nM)의 발현을 유도하였다. 이러한 덱사메타손-유도된 반응은 시간이 지남에 따라 점차적으로 사라지며, 초기 계대로부터의 새로운 배양을 매 3개월마다 (저온 보관된 분취액으로부터) 시작하였다.

화합물 1과 같은 GR-길항제를 시험하기 위해, 5xEC₅₀ ^dex (50nM)의 존재하에 SW1353/MMTV-5 세포를 화합물의 여러 희석액과 함께 인큐베이션하고, 유도된 루시퍼라제 발현의 억제는 Topcount (Britelite Plus kit, Perking Elmer) 상에서 검출된 발광을 사용하여 측정하였다. 각 검정에 있어서, 덱사메타손에 대한 용량-반응 곡선을 시험 화합물, 예를 들어, 화합물 1의 IC₅₀으로부터 K_i를 계산하는데 필요한 EC₅₀ ^dex를 측정하기 위해 만들었다.

SW1353/MMTV-5 세포를 96-웰 플레이트에서 분배시키고 24시간 동안 배지 (제네티신 없이)에서 인큐베이션하였다. 배지 + 50nM 덱사메사손에서 시험 화합물의 희석액을 첨가하고 플레이트를 추가로 24 시간 동안 인큐베이션한 후 루시퍼라제 발현을 측정하였다.

화합물 1은 (E)-6-(4-페닐사이클로헥실)-5-(3-트리플루오로메틸벤질)-1H-피리미딘-2,4-디온 또는 6-((1r,4r)-4-페닐사이클로헥실)-5-(3-(트리플루오로메틸)벤질)피리미딘-2,4(1H,3H)-디온으로 칭하고, 하기 도시된 화학 구조를 갖는다.

화합물 1은 글루코코르티코이드 수용체 (GRII)의 길항제이다. 리포터 유전자 검정에서, 화합물 1은 GR에 대해 24nM의 K_i를 갖는다.

실시예 2. T47D / MMTV -5 세포를 이용한 MR 및 PR 리포터 유전자 검정

T47D/MMTV-5는 내인성 미네랄로코르티코이드 및 프로게스테론 수용체 (PR)를 함유하는 접착성 인간 유방 암종 세포주이다. 상기 SW1353 세포주에 대해 기술된 바와 같이, T47D 세포를 동일한 pMAMneo-Luc 플라스미드로 트랜스펙션시키고, 안정한 세포주를 제네티신으로 선별하였다. 세포주 T47D/MMTV-5를 분리하였으며, 이는 알도스테론 (EC₅₀ 100nM) 및 프로게스테론 (EC₅₀ 10nM)에 반응하여 루시퍼라제의 발현을 유도하였다. MR 또는 PR 길항제를 평가하기 위해, T47D/MMTV-5 세포를 효능제 알도스테론 또는 프로게스테론의 EC₅₀의 5배의 존재하에 화합물의 여러 희석액과 함께 인큐베이션하였다. 각각의 검정에 있어서, 용량 반응 곡선을 알도스테론 및 프로게스테론 둘 모두에 대해 만들었다.

T47D/MMTV-5 세포를 RPMI640 배지 + 10 % 숯 스트리핑된 FCS의 96-웰 플레이트 (100 ㎕)에 분배하였다. 세포를 CO₂ 오븐에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 배지 + 효능제 (500nM 알도스테론, 50nM 프로게스테론) 중의 100㎕ 용적의 화합물 희석액을 첨가하고, 플레이트를 추가로 24시간 동안 인큐베이션한 후, 루시퍼라제 발현을 측정하였다.

화합물 1은 미네랄로코르티코이드 수용체 (MR, GRI)의 길항제이다. 리포터 유전자 검정에서, 화합물 1은 MR에 대해 148nM의 K_i를 갖는다. 화합물 1은 프로게스테론 수용체 리포터 유전자 검정에서 불활성이다.

실시예 3. 고지방 식이가 공급된 마우스에서 간 지질의 측정

C57B16/J 마우스 (그룹당 n = 8)에 3주 동안 고지방 식이 (60% 지방)를 제공한 다음 희생시켰다. 간을 수집하고 무게를 측정하였다. 간 슬라이스를 준비하고 오일 레드 O 염색 (도 1 및 3)에 의해 지질 수준을 분석하였다. 한 그룹의 마우스에는 음식에 혼합된 화합물 1 (60mg/kg/일)을 섭취시키고, 또 다른 그룹의 마우스에는 음식에 혼합된 비히클을 섭취시켰다. 화합물 1을 섭취한 마우스의 간은 낮은 수준의 지질 소적을 갖거나 전혀 갖지 않은 반면 (도 2a), 대조군 마우스는 더 많은 지질 소적을 가졌다 (도 2b). 추가적인 그룹은 음식 중의 미페프리스톤 (RU-486; 60mg/kg/일)을 섭취시켰다. 화합물 1은 GR 길항제 활성 및 일부 MR 길항제 활성을 갖는다. 데이터는 미페프리스톤이 대조군과 비교하여 증가된 지방간을 초래함을 보여준다. 화합물 1은 반대 효과를 가지며, 지방간을 유발하지 않았다.

별도의 실험 (도 4)에서, 고지방 식이 (60% 지방)를 섭취한 다음 희생시킨 마우스의 간에서 지방의 축적은 간을 균질화하고 트리글리세리드를 추출하여 측정하였다. 이러한 실험은 5개 그룹의 마우스를 포함하였다:

1 그룹 ("CHOW"): 6주 동안의 정상적인 식이;

2 그룹 ("HF-3wks"): 3주 동안의 고지방 식이;

3 그룹 ("HF-6wks"): 6주 동안의 고지방 식이;

그룹 4 ("HF + 118335-6wks"): 6주 동안 고지방 식이 및 화합물 1;

그룹 5 ("HF-118335 rev"): 3 주 동안 고지방 식이, 이어서 3주 동안의 고지방 식이 및 화합물 1.

실시예 4. GR 단백질:단백질 상호작용 검정

단백질:단백질 상호작용 검정을 이용하여 글루코코르티코이드 수용체 및/또는 미네랄로코르티코이드 수용체의 길항제로서 작용하는 시험 화합물의 능력을 측정하였다. 이들 검정법은 DiscoveRx Corp. (Fremont, CA)에 의해 제공된 상용되는 검정 플랫폼을 사용한다. DiscoveRx 기술은 루미노제닉 기질을 사용하는 β-갈락토시다제 효소 단편 상보성을 기반으로 한다. 간략하게는, 중국 햄스터 난소 세포 (CHO-K1)를 PGC1α (퍼옥시좀 증식인자 활성화된 수용체 감마 공활성화인자 1α)로 불리는 스테로이드 반응성 공활성화인자 단백질 (SRCP)과 함께 인간 재조합 GR 또는 MR을 발현하도록 조작하였다. 검정은 GR 또는 MR 활성화의 순수 결과, 즉 세포질로부터의 핵 전좌 및 세포 핵에서 공활성화인자 PGC1α와 GR 또는 MR의 상호 작용을 측정한다. 검정은 효능제 및 길항제 모드 둘 모두로 구성될 수 있다.

세포 (100㎕)를 96 웰 플레이트에 플레이팅시키고, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 위치시켰다. 인큐베이터에서 세포를 제거한 후, 5㎕의 시험 화합물 또는 비히클을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 5% CO₂하에 1시간 동안 인큐베이션하였다. 덱사메타손 (792nM 용액 5㎕) 또는 비히클을 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 5% CO₂하에 6시간 동안 인큐베이션하였다. 검출 시약을 웰 당 55㎕ 첨가하고, 플레이트를 혼합하지 않으면서 암실에서 실온하에 인큐베이션하였다. EnVision^® 플레이트 판독기를 사용하여 플레이트를 발광에 대해 판독하였다 (3시간 판독). 발광 값은 36nM 덱사메타손의 억제 퍼센트 (억제 %)로서 표현하고, K_i 값은 Cheng-Prusoff 방정식을 이용하여 실험적으로 결정된 IC₅₀ 값으로부터 계산하였다. 이러한 검정에서 화합물 1은 118nM의 K_i를 갖는 것으로 측정되었다.

실시예 5. MR 단백질:단백질 상호작용 검정

세포 (100㎕)를 96 웰 플레이트에 플레이팅시키고, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에 위치시켰다. 인큐베이터에서 세포를 제거한 후, 5㎕의 시험 화합물 또는 비히클을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 5% CO₂하에 1시간 동안 인큐베이션하였다. 알도스테론 (88nM 용액 5㎕) 또는 비히클을 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 5% CO₂하에 6시간 동안 인큐베이션하였다. 검출 시약을 웰 당 55㎕ 첨가하고, 플레이트를 혼합하지 않으면서 암실에서 실온하에 인큐베이션하였다. EnVision^® (Perkin Elmer, Walthan, MA) 플레이트 판독기를 사용하여 플레이트를 발광에 대해 판독하였다 (3시간 판독). 발광 값은 4nM 알도스테론의 억제 퍼센트 (억제 %)로서 표현하고, K_i 값은 Cheng-Prusoff 방정식을 이용하여 실험적으로 측정된 IC₅₀ 값으로부터 계산하였다. 이러한 검정에서 화합물 1은 125nM의 K_i를 갖는 것으로 측정되었다.

상기 본 발명이 명확한 이해를 위해 일부 세부 사항에서 예시 및 실시예에 의해 기술되었지만, 특정 변경 및 변형이 첨부된 특허청구범위 내에서 실시될 수 있는 것으로 당업자는 인지할 것이다. 또한, 본원에 제공된 각 참조문헌은 전문이 각 참고문헌이 개별적으로 참고로 포함되는 것과 동일한 범위로 참고로 포함된다. 본 발명과 본원에 제공된 참고문헌 간에 논쟁이 있을 경우에, 본 발명이 우선시되어야 할 것이다.

Claims (10)

1. 지방간 질환의 치료가 필요한 대상체에 치료학적 유효량의 하기 화학식 Id의 화합물 및 이의 염 및 이성질체를 투여하여 지방간 질환을 치료하는 것을 포함하는, 지방간 질환을 치료하는 방법으로서, 화학식 Id의 화합물이 하기 구조를 갖는 방법:
   

   

   
   상기 식에서,
   각 R^1a는 독립적으로 H, C_1-6　알킬, 할로겐, 또는 C_1-6　할로알킬이며;
   R²는 H, 또는 C_1-6　알킬이고;
   각 R⁴는 H, C_1-6　알킬, 할로겐, 또는 C_1-6　할로알킬이다.
2. 제 1항에 있어서, 지방간 질환이 알콜 관련 간 질환 (ARLD) 또는 비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)인 방법.
3. 제 2항에 있어서, 알콜 관련 간 질환이 알콜성 지방간 질환 (AFL), 알콜성 지방간염 (ASH) 또는 알콜성 간경화인 방법.
4. 제 2항에 있어서, 비알콜성 지방간 질환이 비알콜성 지방간염 (NASH) 또는 비알콜성 간경화인 방법.
5. 제 1항에 있어서, 각 R^1a가 C_1-6　할로알킬인 방법.
6. 제 1항에 있어서, 각 R^1a가 H, Me, Et, F, Cl, 또는 -CF₃로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된 방법.
7. 제 1항에 있어서, 각 R^1a가 -CF₃인 방법.
8. 제 1항에 있어서, R²가 H인 방법.
9. 제 1항에 있어서, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 방법:
   

   

   
   

   
10. 제 1항에 있어서, 하기 화학식을 갖는 방법:
    

    

    
    

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