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KR20130039470A - 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법 - Google Patents

백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법 Download PDF

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KR20130039470A
KR20130039470A KR1020110104041A KR20110104041A KR20130039470A KR 20130039470 A KR20130039470 A KR 20130039470A KR 1020110104041 A KR1020110104041 A KR 1020110104041A KR 20110104041 A KR20110104041 A KR 20110104041A KR 20130039470 A KR20130039470 A KR 20130039470A
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KR
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ginseng
ginseng extract
white rice
extract
extracting
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KR1020110104041A
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김동현
류권렬
이옥찬
염명훈
조준철
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(주)아모레퍼시픽
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Abstract

본 발명은 인삼을 백미와 함께 찌는 공정을 포함하는 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법 및 이에 의한 인삼 추출물을 포함하는 피부외용제 조성물 및 건강식품 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 추출방법으로 추출된 인삼 추출물은, 세포독성이 저감되고, 피부 자극을 완화하는 효능이 인정된다.

Description

백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법{METHOD FOR EXTRACTING GINSENG EXTRACTS BY STEAMMING WITH RICE}
본 발명은 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법 및 상기 방법으로 추출된 인삼 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물 및 건강식품 조성물에 대한 것이다.
인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)은 오가피과 인삼 속에 속하는 식물로서 한국, 중국 및 일본 등지에서 2,000여년 전부터 사용되어 온 생약이며, 경험적으로 질병을 예방하고 수명을 연장시킬 목적으로 사용되어 왔다. 지금까지 알려진 인삼의 효능 및 효과는 중추신경계에 대한 작용, 항발암 작용, 항암활성, 면역기능 조절작용, 항당뇨 작용, 간기능 항진효능, 심혈관 장해개선, 항동맥경화 작용, 혈압조절 작용, 갱년기 장애 개선, 골다공증에 미치는 효과, 항스트레스 및 항피로 작용, 항산화 활성 및 노화억제 효능 등이 있다.
인삼의 대표적 생리활성 성분인 진세노사이드(Ginsenoside)는 인삼의 지상 및 지하부에 고르게 분포되어 있으며, 특히 인삼근(뿌리), 인삼잎 및 인삼열매 등 부위에 따라 진세노사이드 함량뿐만 아니라 조성도 다른 것으로 알려져 있다.
최근 천연 화장품에 대한 소비자의 관심이 증대되고 동시에 한방 소재를 활용하는 많은 화장품들이 출시되면서 인삼도 화장품의 중요한 피부효능을 가진 식물소재로 연구되고 있으나, 대부분 인삼근을 이용한 추출물 또는 인삼근의 진세노사이드 성분과 인삼다당체를 활용한 것일 뿐 인삼열매와 같은 인삼의 여러 부위의 성분에 의한 효능에 대한 것은 부족한 실정이다. 이뿐 아니라, 인삼으로부터 추출물을 수득하는 종래의 방법은 인삼의 약리성분을 유지하면서도 세포독성을 저하시키는 데에는 부적합하다는 문제점이 있었다.
특허출원 공개번호 제10-2011-0058001호
상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 본 발명은 인삼의 세포독성을 저감시키고, 피부 자극이 적은 백미증법을 이용한 인삼 추출물을 얻을 수 있는 추출방법 및 상기 방법으로 추출된 인삼 추출물을 포함하여 피부 자극이 적으면서 미백 효능이 우수한 피부 외용제 조성물 및 인삼 고유의 성분을 보유하는 건강식품 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
상기와 같은 목적을 해결하기 위하여 본 발명은 인삼을 백미와 함께 찌는 공정을 포함하는 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 인삼은 인삼뿌리, 인삼열매, 인삼꽃, 인삼씨, 인삼잎 및 인삼줄기로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 인삼을 백미와 함께 찌는 공정은, 고온의 수증기에 노출시키는 공정 또는 물에 침지시켜 가열하는 공정을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출방법은, 인삼을 백미와 함께 찌는 공정 이후에, 인삼 추출물을 추출하는 공정을 더 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 인삼 추출물을 추출하는 공정은, 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 이용한 용매 추출에 의하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 유기용매는, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 인삼 추출물을 추출하는 공정의 추출온도는 10 내지 80℃인 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 인삼 추출물을 추출하는 공정의 추출시간은 6 내지 24 시간인 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 추출방법에 의해 제조된 인삼 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 추출방법에 의해 제조된 인삼 추출물을 포함하는 건강식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 추출방법으로 추출된 인삼 추출물은, 세포독성이 저감되고, 피부 자극을 완화하는 효능이 인정된다. 또한, 상기 방법으로 추출된 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물은 우수한 피부 미백 효능을 나타내어, 화장료 분야 등에서 다양하게 활용 가능하며, 상기 방법으로 추출된 인삼 추출물을 포함하는 건강기능 조성물은 독성이 적으며 혈행을 개선시켜 주며 면역력을 증가시켜주는 효능을 가질 수 있다.
이하에서는, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 용이하게 실시할 수 있도록 하기 위하여, 본 발명의 바람직한 실시예들에 관하여 상세히 설명하기로 한다.
본 발명은 인삼을 백미와 함께 찌는 공정을 포함하는 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법을 제공한다. 백미와 함께 찌는 공정인 백미증법을 통하여, 인삼 내에 함유되어 있는 독성을 제거하고, 피부 도포시 발생하는 피부 자극을 완화시키게 된다. 따라서 본 발명의 추출방법에 따라 제조된 인삼 추출물은 세포독성 및 피부 자극성이 낮다.
상기 인삼은 구체적으로 인삼뿌리, 인삼열매, 인삼꽃, 인삼씨, 인삼잎 및 인삼줄기로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것일 수 있다.
상기 인삼열매(Ginseng berry)는 인삼의 지상부 중에서 인삼근과 차별적 성분과 조성을 갖는 인삼의 열매 부위이다. 상기 인삼씨는 천연 인삼씨, 씨박(seed meal) 및 인삼씨에서 짜낸 오일(oil) 중 어느 것이라도 사용될 수 있다. 상기 인삼잎은 인삼의 사포닌과 유사한 구조와 약리효능을 가진 사포닌을 인삼근보다 2～3배 많은 10～13% 정도 함유하고 있다.
상기 인삼을 백미와 함께 찌는 공정은, 고온의 수증기에 노출시키는 공정 또는 물에 침지시켜 가열하는 공정을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인삼을 백미와 함께 찌는 공정은, 인삼을 백미와 함께 밥을 짓는 과정일 수 있다.
상기 추출방법은, 인삼을 백미와 함께 찌는 공정 이후에, 인삼 추출물을 추출하는 공정을 더 포함할 수 있다. 본 발명에서 인삼 추출물을 추출하는 공정은 당업계에서 알려진 통상의 방법들을 통해 수행될 수 있다. 예를 들어, 백미와 함께 찐 인삼에 물 또는 유기용매를 넣고, 환류 추출하여 침적시킨 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 인삼 추출물을 얻을 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 추출방법은, 인삼을 백미와 함께 찌는 공정 이후에, 용매추출을 통해 인삼 추출물을 추출하는 공정을 더 포함할 수 있다. 용매추출시 사용되는 용매의 종류는, 특별히 제한되지 않으며, 예를 들어, 물, 유기용매 또는 물과 유기용매의 혼합용매일 수 있다. 구체적으로는, 상기 용매는, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름 또는 이들 유기용매와 물의 혼합용매에서 선택될 수 있다. 상기 용매는 에탄올일 수 있으며, 보다 구체적으로는 80% 에탄올일 수 있다.
용매추출시 추출조건은, 10 내지 80℃ 온도 및/또는 6 내지 24 시간 동안 추출이 진행될 수 있다. 추출조건이 특별히 제한되는 것은 아니나, 상기 추출 온도 및 추출 시간을 벗어나면 추출 효율이 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다.
인삼에 대한 용매추출을 통해 얻어진 추출물에 대하여, 추가적인 가공공정이 가해질 수 있다. 예를 들어, 용매추출을 통해 얻어진 추출물을 상온에서 냉침 또는 가열한 후, 이를 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 추가적인 용매 증발, 분무 건조 또는 동결건조 과정을 거칠 수 있다.
본 발명에 따른 추출방법으로 제조된 인삼 추출물은 세포독성이 현저히 감소되면서, 동시에 우수한 피부 미백 효과를 나타낸다는 장점이 있다.
따라서, 본 발명은 상기 추출방법을 통해 얻어진 인삼 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공한다. 구체적으로는, 한약재를 백미와 함께 찌는 공정을 거쳐 추출된 인삼 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물은, 독성 감소 및 피부 자극 완화 효능이 인정된다.
본 발명에서 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물일 수 있고, 더 구체적으로 피부 미백용 조성물일 수 있다. 본 발명에서 유효성분으로 함유된 인삼 추출물은 멜라닌의 생성을 억제함으로써, 우수한 피부 미백 효과를 제공한다. 화장료 조성물에 함유된 인삼 추출물의 함량은, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 상기 인삼 추출물의 함량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.001 내지 90 중량%일 수 있으며, 구체적으로는, 0.01 내지 30 중량%, 보다 구체적으로는 0.1 내지 10 중량%일 수 있다. 상기 인삼 추출물의 함량 범위는 미백 효능을 향상시킬 수 있는 바람직한 범위를 선정한 것으로, 상기 범위보다 낮은 함량인 경우에는 피부 미백 효과가 충분치 못하며, 상기 범위 초과시에는 유효성분 첨가로 인한 미백 효능의 효율성이 저하된다.
본 발명에 따른 피부 외용제 조성물을 화장료의 형태로 제형화할 경우, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 썬 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 파우더, 에센스, 파운데이션, 메이크업 베이스 또는 팩 등의 형태로 제형화될 수 있으며, 그 제형이 특별히 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 상기에 따른 백미증법을 이용한 한방성분 추출물을 포함하는 건강식품 조성물을 제공한다. 구체적으로는, 한약재를 백미와 함께 찌는 공정을 거쳐 추출된 인삼 추출물을 포함하는 건강식품 조성물은, 인삼 고유의 약리효과, 독성 감소 및 자극 완화 효능이 인정된다.
본 발명의 건강식품 조성물은 인삼 추출물 0.001 내지 10중량%를 포함하는 것이 바람직하다. 인삼 추출물이 0.001중량% 미만인 경우에는 인삼의 효능이 충분하게 나타나지 않고, 10중량%를 넘는 경우에는 유효성분 첨가로 인한 효능의 효율성이 저하된다.
본 발명의 건강식품 조성물에 있어서, 상기 조성물은 액상 또는 고체 상태의 제형일 수 있고, 정제, 캡슐제, 연질캡슐제, 환제, 과립제, 음료(드링크제), 다이어트바, 쵸콜렛, 카라멜 제형 또는 과자류 제형일 수 있으며, 그 제형이 특별히 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 건강식품 조성물은 건강식품 조성물은 상기 유효 성분 외에도 필요에 따라 부형제, 당류, 향료, 색소, 유지류, 단백질 등을 적의 함유할 수 있다.
이하의 실시를 통하여 본 발명이 더욱 상세하게 설명된다. 단, 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서 이들만으로 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1] 백미를 사용한 인삼뿌리 추출물의 제조
백미 2 kg에 물 4 ℓ를 넣고 센 불에서 가열하였다. 밥물이 올라오기 시작할 무렵 삼베보자기에 싼 인삼뿌리 300 g(총 1.8 kg)을 백미 중앙에 넣고, 약 1 시간 정도 약한 불에서 가열하였다. 가열이 완료되면, 인삼열매, 인삼꽃, 인삼씨, 인삼잎 및 인삼줄기를 회수하여 80% 에탄올 수용액 9 ℓ를 넣고, 3 회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1 일간 침적시켰다. 그런 다음, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 인삼 추출물 134 g을 얻었다.
[실시예 2] 백미를 사용한 인삼열매 추출물의 제조
상기 실시예 1에서 인삼뿌리 대신에 인삼열매를 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였다.
[실시예 3] 백미를 사용한 인삼꽃 추출물의 제조
상기 실시예 1에서 인삼뿌리 대신에 인삼꽃을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였다.
[실시예 4] 백미를 사용한 인삼씨 추출물의 제조
상기 실시예 1에서 인삼뿌리 대신에 인삼씨를 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였다.
[실시예 5] 백미를 사용한 인삼잎 추출물의 제조
상기 실시예 1에서 인삼뿌리 대신에 인삼잎을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였다.
[실시예 6] 백미를 사용한 인삼줄기 추출물의 제조
상기 실시예 1에서 인삼뿌리 대신에 인삼줄기를 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였다.
[비교예 1 내지 6] 일반 인삼 추출물의 제조
인삼뿌리, 인삼열매, 인삼꽃, 인삼씨, 인삼잎 및 인삼줄기 각 300 g씩(총 1.8 kg)에 80% 에탄올 수용액 9 ℓ를 넣고, 3 회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1 일간 침적시켰다. 그런 다음, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 인삼 추출물 125 g을 얻었다. 그 결과 비교예 1 내지 6(각각 인삼뿌리, 인삼열매, 인삼꽃, 인삼씨, 인삼잎 및 인삼줄기)을 얻었다.
[실험예 1] 세포 생존력 측정(Cell viability test)
상기 실시예 1 내지 6에 의해 추출된 인삼 추출물에 대한 세포 생존력을 비교 측정하였다. 실시예 1 내지 6은 본 발명의 일실시예에 따른 백미증법을 이용하여 인삼 성분들을 추출한 경우이고, 상술한 바와 같이 비교예 1 내지 6은 백미증법을 이용하지 않은 인삼 추출물을 처리한 경우이다. 또한, 실시예 1 내지 6에서 인삼 추출물을 추출한 후 남은 성분들을 처리한 경우를 각각 비교예 7 내지 12로 하였고, 백미만을 찐 경우를 비교예 13으로 하였다. 각각의 샘플을 농도별로 처리한 후 세포의 증식 정도를 측정하여 각 실시예 및 비교예에 따른 샘플들에 대한 세포 생존력을 비교 측정하였다.
　 0 ppm 5 ppm 10 ppm
실시예 1 100 117 126
실시예 2 100 111 120
실시예 3 100 114 124
실시예 4 100 110 121
실시예 5 100 112 119
실시예 6 100 111 119
비교예 1 100 98 89
비교예 2 100 89 71
비교예 3 100 86 79
비교예 4 100 90 75
비교예 5 100 91 80
비교예 6 100 87 72
비교예 7 100 60 45
비교예 8 100 71 55
비교예 9 100 73 61
비교예 10 100 83 51
비교예 11 100 77 63
비교예 12 100 81 63
비교예 13 100 102 105
상기 표 1을 참조하면, 실시예들은 비교예 1 내지 6과 비교하여, 추출물의 처리 농도에 따라 농도 의존적으로 세포 생존력이 현저히 증가되는 것을 확인할 수 있다. 또한, 실시예 1에서 인삼뿌리를 추출한 후 남은 성분들을 처리한 경우인 비교예 7은 처리 농도에 따른 세포 생존력이 크게 떨어지는 것으로 나타났다. 백미만을 찐 경우인 비교예 13의 경우에는, 처리 농도에 따라 세포 생존력의 차이가 발견되지 않았다.
표 1의 결과들을 통해, 인삼 성분들이 본 발명에 따른 백미증법을 거치면서 독성 성분들이 제거되었음을 확인할 수 있다.
[실험예 2] 쥐의 색소세포를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정
C57BL/6 마우스 유래의 쥐의 색소세포(Mel-Ab cell)(Dooley, T.P. et al, Skin pharmacol, 7, pp 188-200)를 DMEM(Eagle's minimal essential medium)에 10% 우태반 혈청, 100nM 12-O-테트라데카노일포르볼(tetradecanoylphorbol)-13-아세테이트, 1nM 콜레라 독소(cholera toxin)를 첨가한 배지에서 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였다. 배양된 Mel-Ab세포를 0.25% 트립신-EDTA로 떼어내고, 24-웰 플레이트에 105 세포/웰(cells/well)의 농도로 세포를 배양한 다음, 이틀째부터 3 일 연속으로 각 시험물질을 가하여 배양하였다.
시험물질로는 하이드로퀴논과 상기 비교예 1 내지 6의 인삼 추출물, 실시예 1 내지 6의 백미를 사용한 인삼 추출물을 각각 10 ppm의 농도로 사용하였다. 이때, 상기 하이드로퀴논은 양성대조군으로 사용하였다. 그런 다음, 배양액을 제거하고, PBS(Phosphate Buffered Saline; 인산완충용액)로 세척한 후, 1 N 수산화나트륨으로 세포를 녹여 400 nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정된 흡광도를 하기 수학식 1에 따라 멜라닌 생성 억제율을 계산하여 그 결과를 표 2에 나타내었다(Dooley의 방법).
[수학식 1]
Figure pat00001
시험물질 멜라닌 생성 억제율 (%)
비처리군(대조군) 100
비교예 1 89.9
비교예 2 92.5
비교예 3 81.1
비교예 4 94.6
비교예 5 92.9
비교예 6 92.4
실시예 1 42.7
실시예 2 48.9
실시예 3 40.8
실시예 4 49.9
실시예 5 50.2
실시예 6 48.4
하이드로퀴논(양성 대조군) 41.1
상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 백미증법을 이용한 인삼 추출물이 공지된 미백 물질인 하이드로퀴논과 유사한 정도의 멜라닌 생성 억제율을 보이는 것을 확인할 수 있다.
[실험예 3] 자극감 시험
공지된 미백 물질인 코직산과 실시예 1 내지 6의 인삼 추출물의 자극감을 비교 실험하였다. 구체적으로는, 따가움, 화끈거림 등의 자극감에 민감한 패널 15 명을 대상으로 따가움, 가려움 및 눈 시림 등의 자극감 정도를 실험하였다.
피험자에게 코직산(kojic acid, YM chemical 통해 구입)과 실시예 1 내지 6의 한방 추출물 0.5 ml씩을 좌우를 무작위로 바꾸어 적용하여 문지르고, 0.1 점 단위로 0~3.0 사이의 점수를 매기도록 하였다. 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
<평가기준>
0 ~ 0.4: 자극 없음
0.5 ~ 1.0: 약간 자극이 있음
1.1 ~ 2.0: 보통 정도의 자극이 있음
2.1 ~ 3.0: 자극이 심함
코직산 실시예 1 실시예 2 실시예
3		 실시예
4		 실시예
5		 실시예
6
따가움 0.85 0.25 0.20 0.30 0.34 0.28 0.30
화끈거림 0.50 0.53 0.50 0.52 0.56 0.50 0.52
평균 0.68 0.39 0.35 0.41 0.45 0.39 0.41
상기 표 3를 참조하면, 코직산의 경우는 따가움, 화끈거림이 어느 정도 있으며, 약간 느낄 수 있는 정도의 자극감이 있는 것으로 나타났다. 반면, 본 발명에서 사용되는 백미를 사용한 인삼 추출물은 화끈거림에 있어서는 약간 자극이 있으나, 따가움은 거의 느낄 수 없을 정도여서 평균적으로 자극이 없는 것으로 나타났다.
따라서, 본 발명에서 사용되는 백미를 사용한 인삼 추출물은 코직산과는 다른 물질로서 자극감이 거의 없기 때문에, 보다 양호한 사용성을 제공할 수 있음을 확인할 수 있다.
[실험예 4] 혈행 개선 시험- HUVEC(Human umbilical vein endothelial cell)에서의 NO 생성능
사람의 혈관내피세포에는 eNOS(endothelial nitric oxide synthase)가 존재하며, 그 활성이 증가하는 것으로 NO(산화질소)를 생성시켜 혈관을 확장시키고, 혈행을 촉진하는 역할을 하게 된다. 사람의 혈관내피세포를 배양한 후 백미증법 인삼 추출물(실시예 1 내지 6)과 일반 인삼 추출물(비교예 1 내지 6)을 배지에 처리하여 생성되는 NO의 양을 비교하였다.
혈관내피세포는 젤라틴 코팅된 24 웰 플레이트에 2.5×104cells/웰의 밀도로 부착시켰다. 세포는 성장배지에서 12시간 동안 배양했다. 혈관내피세포는 백미증법 인삼추출물과 일반추출물을 처리한 군(실시예, 비교예), 무처리군으로 12시간 동안 전처리했다. 그 후 37℃에서 FBS가 없는 M199 배지에서 10 μmol/L DAF-FM 디아세테이트(Molecular Probe, OR)로 30분 동안 처리했다. 이후 혈관내피세포를 FBS가 없는 M199 배지로 3번 씻어준 후, 패럴랠 플레이트 플로우 챔버(parallel plate flow chamber)에 넣고 수은등으로부터 분리된 빛으로 자극했다. 여기(excitation) 파장은 488 nm이고 DAF에 NO가 결합되면 515 nm에서 형광을 냈다.
하기 표 4에서 볼 수 있듯이, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 추출물은 100 ㎍/ml 농도에서 무처리군 대비 1300%~2000%의 NO 생성 정도를 나타내었고, 비교예 1의 일반 추출물은 동일한 100 ㎍/ml 농도에서 100~200%의 NO 생성 정도를 나타내었다.
NO 생성률(무처리군 대비)
실시예 1 1300~2000%
실시예 2 1200~1800%
실시예 3 1500~2500%
실시예 4 1000~1800%
실시예 5 1200~1500%
실시예 6 800~1000%
비교예 1 100~200%
비교예 2 150~300%
비교예 3 100~150%
비교예 4 200~300%
비교예 5 100~300%
비교예 6 100~200%
따라서 백미증법 인삼 추출물은 일반 인삼 추출물에 비하여 혈관내피세포에서의 NO 생성능이 월등히 우수하다는 것을 알 수 있다. 실시예 1의 추출물의 위와 같은 뛰어난 NO(산화질소) 생성능은 결국 혈관을 확장시키고 혈액순환을 촉진시키는 효과를 나타낸다.
[실험예 5] 면역력 증진 시험- TNF-α 생성 억제 효과
본 발명에 따른 백미증법 인삼 추출물이 염증성 세포활성 물질인 TNF-α 생성을 유도하는지를 아래와 같이 조사하였다. 배양액 IMDM/FBS에 비만세포주 HMC-1을 5% CO2, 37℃에서 배양한 후 3×105개의 세포가 되도록 분주하였다. 세포를 안정화시키기 위하여, 실시예 1 내지 6 및 비교예 1 내지 6의 추출물을 처리하기 전에 37℃에서 10 분 동안 미리 배양하고, 증류수 1 ㎖당 실시예 1 내지 6 및 비교예 1 내지 6의 추출물 0.01, 0.1, 1 ㎎을 녹인 수용액을 각각 0.01, 0.1 및 1.0 ㎎/㎖가 되도록 가한 다음 24 시간동안 반응시켰다. 반응 종료 후 400×g에서 원심분리하여 상층액과 세포를 분리하였다.
분리된 상층액 중 TNF-α의 단백질 수준을 조사하기 위하여 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)를 다음과 같이 실행하였다. TNF-α에 대한 단클론항체인 항-인간 TNF-α(1 ㎍/㎖)를 PBS(pH 7.4)로 희석하여, 96-웰 레이트에 100 ㎕씩 각각 코팅한 다음, 상온에서 12 시간 동안 방치하였다. 상기 플레이트를 0.05% 트윈이 포함된 PBS로 세척한 다음, 1% BSA, 5% 수크로오스 및 0.05% NaN3를 함유하는 PBS로 1 시간 동안 차단시켰다. 여러 차례 세척한 다음, 원심분리하여 얻은 상층액과 표준 곡선으로 사용할 재조합 TNF-α를 첨가한 후 37℃에서 시간 동안 방치하였다. 이어서 각 웰을 다시 세척하고 2차 항체 바이오틴(biotin)이 결합된 TNF-α(0.2㎍/㎖)를 첨가하여 다시 37℃에서 2시간 동안 방치하였다. 웰을 세척한 다음, 아비딘(avidine)이 연결된 과산화효소를 첨가하고 37℃에서 20 분 동안 방치하였다. 웰을 다시 세척한 다음, ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)) 기질을 첨가하고, 발색반응을 ELISA 판독기를 사용하여 405nm에서 측정하였다. 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
시험물질 TNF-α 분비 TNF-α 억제율(%)
대조군(식염수) 0.257±0.016 -
비교예 1(1 mg/㎖) 0.197±0.018 34.06
비교예 2(1 mg/㎖) 0.197±0.018 23.58
비교예 3(1 mg/㎖) 0.197±0.018 29.08
비교예 4(1 mg/㎖) 0.197±0.018 16.22
비교예 5(1 mg/㎖) 0.197±0.018 21.46
비교예 6(1 mg/㎖) 0.197±0.018 22.35
실시예 1 0.01 mg/㎖ 0.289±0.029 16.48
0.1 mg/㎖ 0.213±0.017 31.45
1 mg/㎖ 0.201±0.012 69.34
실시예 2 0.01 mg/㎖ 0.289±0.029 13.44
0.1 mg/㎖ 0.213±0.017 24.57
1 mg/㎖ 0.201±0.012 58.84
실시예 3 0.01 mg/㎖ 0.289±0.029 12.28
0.1 mg/㎖ 0.213±0.017 28.81
1 mg/㎖ 0.201±0.012 59.90
실시예 4 0.01 mg/㎖ 0.289±0.029 12.47
0.1 mg/㎖ 0.213±0.017 23.45
1 mg/㎖ 0.201±0.012 54.84
실시예 5 0.01 mg/㎖ 0.289±0.029 10.05
0.1 mg/㎖ 0.213±0.017 29.16
1 mg/㎖ 0.201±0.012 55.66
실시예 6 0.01 mg/㎖ 0.289±0.029 14.01
0.1 mg/㎖ 0.213±0.017 28.32
1 mg/㎖ 0.201±0.012 60.04
상기 표 3의 결과에서, 본 발명에 따른 실시예 1의 백미증법 인삼 추출물이 1 ㎎/㎖에서 TNF-α 생성을 가장 많이 억제시켰으며, 같은 농도의 비교예 1 대비 2배 가량 그 효능이 우수하였다. 이로써, 백미증법에 의한 인삼 추출물이 면역력이 더 우수함을 알 수 있었다.
하기에 상기 조성물의 제형예를 설명하나, 본 발명을 한정하고자 함이 아니라 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제형예 1] 영양화장수
하기 표 6에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양화장수를 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
백미를 사용한 인삼 추출물(실시예 1) 5.0
스쿠알란 5.0
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
합계 100
[제형예 2] 영양크림
하기 표 7에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양크림을 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
백미를 사용한 인삼 추출물(실시예 2) 5.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 0.5
PEG60 경화피마자유 2.0
유동파라핀 10.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
합계 100
[제형예 3] 마사지 크림
하기 표 8에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 마사지 크림을 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
백미를 사용한 인삼 추출물(실시예 3) 5.0
밀납 10.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 0.8
PEG60 경화피마자유 2.0
유동파라핀 40.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
합계 100
[제형예 4] 팩
하기 표 9에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 팩을 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
백미를 사용한 인삼 추출물(실시예 4) 5.0
폴리비닐알콜 13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스 0.2
글리세린 5.0
알란토인 0.1
에탄올 6.0
PEG 12 노닐페닐에테르 0.3
폴리솔베이트 60 0.3
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
합계 100
[제형예 5] 연질캅셀제
백미를 사용한 인삼 추출물(실시예 1) 50mg, L-카르니틴 80~140mg, 대두유 180mg, 팜유 2mg, 식물성 경화유 8mg, 황납 4mg 및 레시틴 6mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 1캡슐당 400mg씩 충진하여 연질캅셀을 제조하였다.
[제형예 6] 정제
백미를 사용한 인삼 추출물(실시예 3) 50mg, 갈락토올리고당 200mg, 유당 60mg 및 맥아당 140mg을 혼합하고 유동층 건조기를 이용하여 과립한 후 당 에스테르(sugar ester)를 6mg을 첨가하여 타정기로 타정하여 정제를 제조하였다.
[제형예 7] 과립제
백미를 사용한 인삼 추출물(실시예 4) 50mg, 무수결정 포도당 250mg 및 전분 550mg을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하였다.
[제형예 8] 드링크제
백미를 사용한 인삼 추출물(실시예 5) 50mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300ml를 가하여 각 병에 200ml씩 충진한다. 병에 충진한 후 130℃ 에서 4~5 초간 살균하여 음료를 제조하였다.
[제형예 9] 캬라멜 제형
백미를 사용한 인삼 추출물(실시예 6) 50mg, 옥수수 시럽(corn syrup) 1.8g, 탈지우유 0.5g, 대두 레시틴 0.5g, 버터 0.6g, 식물성 경화유 0.4g, 설탕 1.4g, 마가린 0.58g, 및 식염 20mg을 혼합하여 캬라멜 성형을 하였다.
본 발명이 속한 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 내용을 바탕으로 본 발명의 범주 내에서 다양한 응용 및 변형을 행하는 것이 가능할 것이다.

Claims (10)

  1. 인삼을 백미와 함께 찌는 공정을 포함하는 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 인삼은 인삼뿌리, 인삼열매, 인삼꽃, 인삼씨, 인삼잎 및 인삼줄기로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것인 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 인삼을 백미와 함께 찌는 공정은, 고온의 수증기에 노출시키는 공정 또는 물에 침지시켜 가열하는 공정을 포함하는 것인 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 추출방법은, 인삼을 백미와 함께 찌는 공정 이후에,
    인삼 추출물을 추출하는 공정을 더 포함하는 것인 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 인삼 추출물을 추출하는 공정은, 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 이용한 용매 추출에 의하는 것인 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 유기용매는, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것인 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법.
  7. 제 4 항에 있어서,
    상기 인삼 추출물을 추출하는 공정의 추출온도는 10 내지 80℃인 것인 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법.
  8. 제 4 항에 있어서,
    상기 인삼 추출물을 추출하는 공정의 추출시간은 6 내지 24 시간인 것인 백미증법을 이용한 인삼 추출물의 추출방법.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항의 추출방법에 의해 제조된 인삼 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항의 추출방법에 의해 제조된 인삼 추출물을 포함하는 건강식품 조성물.
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