KR101877413B1 - 지방축적을 억제하는 효과가 있는 왕불류행 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하는 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 상기 왕불류행 추출물이 지방 축적을 억제하며, 항산화 활성이 있어 이를 국소적으로 도포하여 슬리밍 효과를 나타낼 수 있다. 또한, 본 발명은 왕불류행 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방, 개선 또는 치료용 조성물로, 건강기능식품 또는 약학 조성물로 사용할 수 있다.

Description

지방축적을 억제하는 효과가 있는 왕불류행 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물{Composition containing Melandrii Herba extract reducing lipid accumulation as effective component}

본 발명은 지방축적을 억제하는 효과가 있는 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것이다.

1990년대 이후 국내 경제의 발전과 과학기술의 고도성장은 특히 식생활의 풍요로움을 가져왔다. 이에 따른 서구적 식생활 패턴과 생활의 편리화로 인하여, 인스턴트식품의 섭취 및 운동 부족을 야기하여 비만의 발병률은 계속해서 증가하고 있는 실정으로, 현대인의 약 30~40%가 비만으로 알려져 있으며 고혈압, 고지혈증, 동맥 경화증, 심장질환, 당뇨병 등의 다양한 성인병을 수반할 수 있으므로 사회적 관심의 대상으로 대두하고 있는 추세이다.

비만인 사람은 자신의 체형 때문에 열등감을 느끼고, 대인관계가 원만치 못하므로 사회생활에도 지장을 초래하는 질병이기도 하지만, 최대문제는 비만에 의해 발생되는 합병증이다. 비만으로 인하여, 혈액 내의 콜레스테롤과 중성지방의 양이 증가되는 고지혈증이 발생되어 고혈압, 심혈관계 질환 및 뇌졸중의 발생이 증가하며, 말초조직과 복부지방조직에서의 중성지방 축적 또는 말초조직 중성지방의 증가로 인슐린 저항성이 유발되어 제2형 당뇨병을 발생시킬 수 있고, 비만은 관절염, 호흡기능 장애, 불임 및 월경불순, 악성종양 등과 같은 여러 가지 합병증이 유발되기 때문에 장기적인 관리와 치료가 절대적으로 필요하다. 따라서 비만은 외형적 및 심리적인 문제뿐만 아니라, 성인병 발생의 제1위험 요소이자 심각한 사회문제로 간주되고 있다.

또한, 최근 들어 생활수준의 향상으로 피부 미용에 대한 관심과 기대가 증가하면서, 여성들의 화장품, 특히 기능성 미용제품에 대한 관심이 날로 고조되고 있다. 즉, 기초화장뿐만 아니라 미적 향상 수단 및 외부 자극인 햇빛, 바람, 비 등으로부터 피부를 보호하는 수단으로서의 기능성 화장품이 각광받고 있다. 이에 따라 과지방 제거 및 피부 탄력을 부여하는 슬리밍 제품에 대한 관심도 계속 증가되고 있다. 특히, 여성의 사회적 지위 향상과 경제적 독립 등의 사회적인 환경 변화에 의해 삶의 질을 높이고자 하는 욕구가 증가하게 되므로 미의 관점에서 아름다운 몸매에 대해 관심도 또한 급격히 증가하고 있는 추세이다. 이에 따라, 과도한 피하 지방의 제거 및 피부 탄력의 증진에 효과적인 슬리밍(slimming) 및 안티 셀룰라이트(anti-cellulite) 화장품에 대한 요구도 꾸준히 높아지고 있다.

셀룰라이트는 여성의 피부 및 피하지방에서 발생하며, 과도한 지방과 노폐물의 축적으로 인한 순환 장애로 인하여 거친 오렌지 껍질 같이 울퉁불퉁한 피부가 되는 현상이다. 상기 셀룰라이트의 발생 원인은 단순한 비만과는 차이가 있으나 근본적으로는 지방세포의 증가나 비대에 그 원인이 있으므로, 지방세포 내의 지방 축적 억제 및 분해함으로써, 날씬하고 매끈한 몸매를 만드는데 큰 도움을 줄 수 있다.

한편, 왕불류행(王不留行, Melandrii Herba)은 장구채(Melandrium firmum Rohrbach) 및 그 밖의 동속근연식물(석죽과, Caryophyllaceae)의 열매가 익었을 때 지상부를 건조한 것으로 여름, 가을에 종자가 성숙할 때 전초를 채취하여 햇볕에 말린 것이다. 가늘고 볼록한 마디가 있으며 마디에서 가지와 잎이 마주나고, 길이는 20~40cm이다. 잎은 타원형이고 끝은 뾰족하며 엷은 황갈색을 띈다. 꽃대는 가지 끝에 나며 길이 1cm의 병모양의 삭과를 맺고 그 속에 매우 작은 흑갈색, 흑색의 둥근 씨가 들어 있다. 왕불류행은 불류행(不留行), 왕불류(王不留)라고도 불리며 전국 각지에 야생하며, 지리적으로 시베리아, 중국, 만주에 분포하며 통혈맥, 유소, 정열해독, 치열, 중이염, 인후통 등에 쓰이는 약재이다. 왕불류행은 간에 주로 작용하여 위로는 유즙 분비를 촉진시키고 혈분에는 혈액순환을 돕고 어혈을 풀어주며, 경락에 작용하여 기의 순환을 원활히 한다. 월경이 고르지 못한 증상이나 가슴부위에 생긴 종기에 탁월한 효과가 있으며 철제류에 생긴 상처를 낫게 한다고 알려져 있다. 여성에게 좋은 약이지만 임산부나 태아에게는 나쁜 영향을 줄 수 있기 때문에 복용을 금지한다. 왕불류행의 주성분으로는 멜란드리제닌(melandrigenin), 깁소제닌(gypsogenin), 깁소젠산(gypsogenic acid), 퀼라산(quillaic acid) 등이 보고되어 있고, 한국공개특허 제2012-0000246호에 장구채 뿌리 추출물을 포함하는 항암제 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제0686260호에 장구채 추출물을 포함하는 간 기능 개선 및 간질환 치료용 조성물이 개시되어 있으며, 한국등록특허 제1165719호에 장구채 추출물을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있으나, 본 발명의 지방축적을 억제하는 효과가 있는 왕불류행 추출물을 함유하는 조성물에 대해서는 개시된 바 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하는 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물, 왕불류행 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 왕불류행 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하고, 상기 왕불류행 추출물이 지방 축적을 억제하는 효과가 있으며, 항산화 활성이 있다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하는 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명은 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하는 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 상기 왕불류행 추출물은 지방 축적을 억제하며, 항산화 활성이 있는 것이다. 상기 조성물을 국소적으로 도포하여 슬리밍 효과를 나타낼 수 있고, 또한 상기 왕불류행 추출물은 비만의 예방, 개선 또는 치료용 조성물로, 건강기능식품 또는 약학 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 왕불류행 추출물의 세포 생존률을 확인한 결과이다. Con은 음성대조구로서 아무것도 처리하지 않은 세포이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 왕불류행 추출물의 지방 축적 억제효과를 확인한 결과이다. Con은 음성대조구로서 아무것도 처리하지 않은 세포이고, MDI는 지방축적을 유도한 세포이다.

본 발명은 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하는 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

상기 왕불류행 추출물은 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다:

1) 왕불류행에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축하고 건조하여 추출물을 제조하는 단계.

상기 단계 1)에서 추출용매는 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 에탄올 추출물이고, 더욱더 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올 추출물이지만 이에 한정하지 않는다.

상기 제조방법에 있어서, 왕불류행의 추출은 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당 업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 건조된 왕불류행 부피의 1~20배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 7~15배 첨가하는 것이다. 추출온도는 20 내지 50℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 5~20시간인 것이 바람직하며, 7~15시간이 더욱 바람직하고, 10시간이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무 건조 또는 동결 건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 왕불류행은 지상부인 것이 바람직하고 더 바람직하게는 열매, 줄기 또는 잎 부위이지만 이에 한정하지 않는다.

상기 왕불류행 추출물은 지방 축적을 억제하는 것이 특징이므로, 국소적으로 도포하는 피부 슬리밍(slimming)용으로 사용할 수 있다.

상기 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물은 비누, 세안제, 화장수, 스킨, 로션, 영양로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스 또는 팩의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.

상기 화장료 조성물은 본 발명의 유효성분 이외에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외의 기능 성분을 추가로 포함할 수 있다. 추가적인 피부건강에 도움을 주는 원료를 포함하게 되면 본 발명의 조성물의 효과는 더욱 증진될 수 있을 것이며, 피부건강에 도움을 주는 원료의 추가 시에는 복합사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다. 상기 추가적인 기능 성분은 식품의약품안전청에서 고시된 기능성 원료이고, 일례로 오일, 당, 폴리올 등이 있으며, 상기 고시 원료는 피부 건강에 도움을 주는 고시 원료에만 국한되지 않는다.

또한, 본 발명은 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있고, 본 발명에 따른 조성물의 약학적 투여 형태는 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 주사제로 제형화할 수 있다. 상기 약학 조성물을 포함하는 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 약학 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이 외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.

또한, 본 발명은 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.

상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.

상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.

실시예 1. 왕불류행 추출물의 제조

70%(v/v) 에탄올 추출은 3g의 왕불류행 열매의 대하여, 10배의 70%(v/v) 에탄올(30㎖)을 가한 후, 실온에서 12시간 동안 진탕하면서 추출하였다. 이후, 여과지(Whatman no. 1)를 이용하여 여과하고, 진공회전증발기를 이용하여 농축하였다. 이후 가용화 성분에 따른 수율 측정은 추출물을 동결건조하여 건물 중량을 구한 다음 추출에 사용한 원료 건조량에 대한 백분율로 계산하였다. 그 결과, 8.8%의 수율을 획득하였다.

실시예 2. 세포 생존률 확인

지방세포에 대한 세포 생존률 확인은 MTT 어세이를 이용하여 측정하였다. 3T3-L1 세포를 24웰 배양 플레이트에 1×10⁵ 세포/㎖의 농도로 48시간 배양한 다음 왕불류행 추출물을 농도별(12.5, 25, 50㎍/㎖)로 처리하여 48시간 배양하였다. 각 웰에 50㎕의 MTT 용액(5mg/㎖)를 첨가한 후 3시간 동안 배양하면서 환원 반응을 유도하였으며, DMSO를 첨가하여 형성된 포르마잔(formazan) 결정을 용해하였다. 발색 정도는 분광광도계를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 도 1에 개시한 바와 같이 본 발명의 왕불류행 추출물을 처리하여도 세포 생존률이 거의 100% 수준임을 확인함으로써, 본 발명의 추출물이 세포독성이 없다는 것을 알 수 있었다.

실시예 3. 항산화 활성 확인

1) 총 폴리페놀 함량 측정

폴리페놀의 함량은 분석방법으로 널리 사용되고 있는 Gutfiger (1981)의 방법을 변형하여 측정하였다. 희석액 100㎕에 폴린-시오칼토(Folin-Ciocalteau) 반응용액 100㎕를 가하고 3분간 정치한 다음 1㎖의 0.7M Na₂CO₃ 용액을 가하였다. 이 혼합액을 1시간 동안 반응시킨 후 분광광도계를 사용하여 750nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 총 폴리페놀 함량은 탄닌산(tannic acid)으로 표준곡선을 작성하여 계산한 결과, 왕불류행 추출물의 총 폴리페놀 함량은 33.08±3.98mg/g으로 확인되었다.

2) ABTS 라디칼 소거 활성 분석

ABTS 라디칼 소거 활성 측정은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다. 즉 7mM ABTS와 2.45mM 과황화칼륨(potassium persulfate) 용액을 혼합하여 하루 동안 암소에 방치하여 ABTS+·를 형성시킨 후, 이 용액을 734nm에서 0.7~0.9가 되도록 몰 흡광계수를 이용하여 증류수로 희석하였다.

본 발명의 추출물 50㎕에 희석된 ABTS+·용액을 100㎕ 가해 흡광도의 변화를 정확히 5분 뒤에 측정하였다. ABTS+·의 항산화능은 본 발명의 왕불류행 추출물의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 계산하였고, ABTS+· 항산화 활성이 50% 감소하는데 필요한 시료의 농도인 RC₅₀값으로 나타내었다.

본 발명의 왕불류행 추출물을 첨가한 경우, ABTS 라디칼 소거 활성은 15.03±3.90%이고, 양성대조구인 비타민 C의 ABTS 라디칼 소거 활성은 15.23%로 나타났다.

3) DPPH 라디칼 소거 활성 분석

DPPH 라디칼 소거능은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다. 100㎕의 왕불류행 추출물에 0.2mM DPPH 용액 50㎕를 가하고 10분 반응시킨 후 흡광도의 변화를 517nm에서 측정하였다. DPPH 항산화능은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 계산하였고, DPPH 항산화 활성이 50% 감소하는데 필요한 시료의 농도인 RC₅₀값으로 나타내었다.

그 결과, 본 발명의 왕불류행 추출물을 첨가한 경우, DPPH 라디칼 소거 활성은 13.87±1.41%이고, 양성대조구인 비타민 C의 DPPH 라디칼 소거 활성은 10.02%로 나타났다.

실시예 4. 지방 축적 억제 효과 확인

1) 세포 배양

3T3-L1 세포는 ATCC(american type culture collection)에서 구입하여 사용하였으며, 10% FBS(Fetal bovine serum)와 100㎍/㎖의 페니실린/스트렙토마이신(Penicillin/streptomycin)을 혼합한 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다.

3T3-L1 세포배양은 10% 신생송아지혈청(Newborn calf serum), 1% 페니실린/스트렙토마이신이 첨가된 DMEM 배지에 1×10⁵ cells/㎖ 농도로 부유시켜 48시간 동안 배양하여 confluent 상태가 되도록 37℃, CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다.

지방세포분화는 분화유도배지(10% FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신, MDI[0.5mM 3-isobutyl-1-methylxanthine, 1μM 덱사메타손(Dexamethasone), 5㎍/㎖ 인슐린(Insulin)])를 2일간 교체하여 배양하였다. 2일간 분화 유도 후 1㎍/㎖의 인슐린이 함유된 10% FBS-DMEM으로 2일간 배양하였다. 그 후 2일마다 4회 10% FBS-DMEM으로 교체하였다. 왕불류행 추출물의 처리는 분화유도 배지 첨가 시 동시에 처리하였다.

2) 3 T3 - L1 세포의 지방분화 억제 효과 측정

3T3-L1 세포의 분화 정도를 알아보기 위해 오일 레드-오(oil red-O)로 염색하여 측정하였다. 분화된 세포를 관찰하기 위해서는 배양된 세포를 10% 포르말린(formalin)/PBS로 5분간 실온에서 고정한 후 이를 제거하고 60% 이소프로판올(isopropanol)을 이용하여 1회 세척 후 말렸다. 그런 다음 오일 레드-오(oil red-O)를 30분 동안 넣고 염색한 후 증류수로 4번 세척하였는데 이때 증류수가 담긴 채로 fat droplets를 현미경으로 관찰하였다. 관찰 후 99% 이소프로판올(isopropanol)을 넣고 180rpm에서 10분간 녹인 뒤 520nm에서 측정하였다.

그 결과, 도 2에 개시한 바와 같이, MDI에 의해 지방 축적이 현저하게 증가 하였으며, MDI에 의해 증가된 지방 축적이 왕불류행 추출물의 처리에 의해 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 왕불류행 추출물의 처리에 의해 약 40% 정도 지방 축적이 억제되는 것을 확인하였다.

Claims (10)

1. 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하며, 지방 축적을 억제하는 것을 특징으로 하는 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 왕불류행 추출물의 추출 용매는 물, C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
3. 삭제
4. 제1항에 있어서, 상기 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물은 국소적으로 도포하는 피부 슬리밍(slimming)용인 것을 특징으로 하는 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물은 비누, 세안제, 화장수, 스킨, 로션, 영양로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스 및 팩 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 셀룰라이트의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
6. 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하며, 지방 축적을 억제하는 것을 특징으로 하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
7. 제6항에 있어서, 상기 왕불류행 추출물 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
8. 제6항에 있어서, 상기 왕불류행 조성물은 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 주사제 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
9. 왕불류행(Melandrii Herba) 추출물을 유효성분으로 함유하며, 지방 축적을 억제하는 것을 특징으로 하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.

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