KR20010106684A

KR20010106684A - 혈액 스크리닝과 확인진단이 동시에 가능한 새로운 ｃ형간염 진단시약

Info

Publication number: KR20010106684A
Application number: KR1020000027569A
Authority: KR
Inventors: 김주호
Original assignee: 김주호
Priority date: 2000-05-22
Filing date: 2000-05-22
Publication date: 2001-12-07

Abstract

4종류의 C형 간염 바이러스 항원을 96-공 플레이트의 각 공 속에 서로 다른 위치에 흡착/결합시키는 새로운 코팅 방법을 이용하여 C형 간염 진단시약을 개발함. 본 발명으로 개발한 C형 간염 진단시약은 C형 간염의 감염여부를 진단하기 위한 기존의 혈액 screenig용 진단시약과 2차로 양성 확인을 위하여 사용되는 확인진단시약의 기능을 둘 다 동시에 할 수 있도록 개발된 새로운 개념의 C형 간염 진단시약임.

Description

혈액 스크리닝과 확인진단이 동시에 가능한 새로운 Ｃ형 간염 진단시약{The diagnostic kit for hepatitis C virus for blood screening and confirming simultaneously whether they are infected or not with the virus}

본 발명은 C형 간염 바이러스(이하 HCV라 함. 도 1)의 감염여부를 진단하는 체외 진단시약 분야에 속한다. C형 간염은 국내뿐만 아니라 세계적으로도 위험 질병 군에 속하고 있고 이 질병의 치료와 예방을 위하여 전 세계적으로 많은 연구가 진행되고 있다. C형 간염의 진단은 C형 간염 바이러스의 존재를 확인하기 위한 것으로 크게 HCV에 대한 항체 진단과 HCV의 유전물질인 RNA의 진단으로 나눌 수 있다. HCV는 실험실 조건에서 배양을 할 수 있는 기술이 많이 시도되고 있으나 아직까지는 개발되지 못하고 있고 감염환자의 혈액 내에서도 극소량만 존재하고 있어 B형 간염 진단시약처럼 HCV를 구성하는 항원단백질을 직접 측정할 수 있는 진단시약은 아직 개발되지 못하고 있다. 그러나 1989년 미국 chiron사의 Kuo 등이 처음으로 C형 간염 바이러스의 유전물질인 RNA의 염기서열을 밝힌 이래 그 염기서열에서 발현되는 HCV를 구성하는 단백질이 확인되었고(도 2), C형 간염에 감염되면 그에 해당하는 항체가 혈액중에 존재하게 되는 특성을 이용하여 HCV의 감염여부를 항체검사를 통하여 진단할 수 있는 제1세대 C형 간염 진단시약을 개발하였다. 그러나 제1세대 C형 간염 진단시약은 HCV의 항원단백질 중 비구조4 단백질(이하 NS4라 함)에 대한 항체를 검사하는 시약으로 개발되었는데 이것은 민감도가 낮은 문제점이 발생하여 민감도를 증가시키기 위하여 제2세대 C형 간염 진단시약이 개발되었다. 제2제대 C형 간염 진단시약은 HCV 항원단백질 중 핵단백질(이하 core라 함), 비구조3 단백질(이하 NS3라 함), 비구조4 단백질(이하 NS4라 함), 비구조5 단백질(이하 NS5라 함)에 대한 항체를 검사할 수 있는 진단시약이다. 여기에 사용되는 각 항원단백질은 유전공학적인 기법을 이용한 재조합 단백질이거나 항체와 반응하는 항원의 특정부위(이하 epitope이라 함)만을 합성한 단백질 조각(이하 peptide라 함)을 이용한다. 제3세대 C형 간염 진단시약은 HCV의 표피단백질인 E(envelope) 단백질이 glycosylation된 형태로 추가된 것을 말한다. 그러나 C형 간염 바이러스는 AIDS 바이러스처럼 E 단백질의 변이가 아주 심하여 E 단백질에 대한 항체를 진단하기는 사실상 어려워 진단시약의 성능 향상에 별 기여를 못하고 있다. HCV를 구성하는 단백질은 E, core, NS3, NS4, NS5 가 전부이고 따라서 항원단백질을 추가하는 것으로는 더 이상 C형 간염 진단시약을 version-up 시키기에는 기술적인 한계에 도달한 상태이다.

국내 및 세계적으로 HCV에 대한 screening용으로 개발되어 상용화 되고 있는, 모든 C형 간염 진단시약은 4∼5개의 HCV 항원단백질을 96-공(well) 플레이트(도 3-1)의 각 공(well, 도 3-2) 속에 한꺼번에 또는 순차적으로 넣어 각 공 바닥면에 흡착/결합시켜 코팅하는 방법을 사용한다. 이때의 문제점은 4∼5개의 HCV 항원단백질이 서로 무작위로 각 공의 바닥면에 흡착/결합하게 되며, 한 단백질이 한 자리에 흡착/결합하면 나머지 단백질이 그 주변에 흡착/결합하려는 성질로 인해 여러 항원 군체가 형성되게 되는 것이다(도 4). 항원 군체가 형성되면 비특이반응이 증가하게 되어 C형 간염 진단시약의 위양성이 높아지는 즉, 특이도가 감소하는 원인이 되고 있다. 또한 각 HCV 항원단백질들이 공의 바닥면에 무작위로 결합하기 때문에 어떤 항원에 대한 항체가 존재하는 지를 전혀 판별할 수 없는 것이고 이러한 문제점을 해결하기 위하여 nitrocellulose막에 각 항원들을 각각 다른 위치에 흡착/결합시켜 어떤 항원에 대한 항체가 존재하는 지를 판별하여 감염여부를 판별하는 확인진단시약이 개발되어 보조적으로 사용되고 있다. 제1세대부터 3세대까지의 C형 간염 진단시약의 가장 큰 문제점은 위양성이 상당히 많다는 것이다. 확인진단시약이 개발된 후 C형 간염 진단시약에서 양성을 보인 혈액시료들을 확인진단시약으로 재검사를 하면 약 50%정도가 음성으로 판별된다. 또한 이같은 확인진단시약도 HCV의 유전물질인 RNA를 PCR법을 이용하여 직접 분석한 결과와 비교하면 확인진단시약에서 양성이 나온 혈액시료들이 HCV RNA 검사법에서 약 20∼30%는 음성으로 나온다. 이와 같은 문제점에도 불구하고 다수의 혈액시료에서 C형 간염의 감염여부를 screening하기 위해서 C형 간염 진단시약을 계속 사용하고 있는데 이는 확인진단시약이나 HCV RNA 진단시약이 사용상의 불편함으로 인해 screening용으로 적합하지 않기 때문이다. 따라서 확인진단시약의 기능을 하면서도 혈액 screening을 동시에 할 수 있는 C형 간염 진단시약이 개발되어 현 상태에서 한단계 version-up 될 필요성이 요구되고 있다.

[도 1] C형 간염 바이러스의 구조 및 각 단백질 명칭

[도 2] C형 간염 바이러스의 유전물질인 RNA와 RNA내에서의 유전자의 배열순서

[도 3] A. 96-공 플레이트

B. 96-공 플레이트의 공

[도 4] 종래 항원 코팅기술에 의해 96-공 플레이트의 각각의 공 바닥에 여러 종류의 항원이 흡착/결합해 있는 모습

1. 공

2. 여러 종류의 항원이 공의 바닥에 흡착/결합해서 형성된 항원군체

[도 5] A. 일체형 다관체:

3. 상부덮개

4. 관

5. 진공펌프 연결부위:진공을 걸수 있도록 진공펌프에서 나온 튜브를 연결시키는 부위

6. 용액흡입용 입구: 용액저장고로부터 용액을 받아 들이기 위해 용액저장고로부터 나온 튜브를 연결시키는 부위

7. 용액분주용 출구: 각 공 속으로 용액을 분주해 주는 출구

8. 튜브: 진공펌프나 용액저장고와 다관체를 연결시키는 튜브

B. 관의 확대 그림

C. 분리형 다관체:

9. 상부덮개: 하부 다관체의 각 관 속으로 삽입되어 진공을 걸 수 있음

10. 하부 다관체: 4개의 관으로 구성되어 있고 공 속에 소공을 만드는 기능

[도 6] 다관체를 이용하여 공 속에 소공을 만드는 과정

11. 일체형 다관체

12. 공

13. 다관체가 공 속에 들어 간 모습

14. 다관체에 있는 용액분주용 출/입구를 통해 공 속에 한천용액을 분주한 모습

[도 7] 각 공 내에서 한천배지로부터 다관체를 제거하고 나서 생긴 소공

15. 소공

[도 8] 소공을 통해 코팅된 항원

16. 공 바닥에 흡착/결합한 항원

[도 9] 96-공 용 4-실 프레임(여기서는 8-공 용 4-실 프레임임)이 96공(여기서는 8공을 예로 들었음)에 끼워지는 모습

17. 8-공 용 4-실 프레임(이것이 12개 모여 96-공 용 4-실 프레임을 구성)

18. 8-공 스트립(이것이 12개 모여 96-공 플레이트를 구성)

19. 8-공 용 4-실 프레임이 8-공 스트립에 끼워진 모습

본 발명은 크게 두가지 점에서 신규성을 지닌다. 첫째는 HCV 항원단백질을 새로운 코팅방법을 이용하여 플레이트에 코팅시킨 플레이트를 제조하는 것에 관한 것이다. 즉, 96-공 플레이트의 각 공 속에 여러 종류의 HCV 항원단백질을 서로 다른 일정한 위치에 흡착/결합시켜 혈액시료 내에 어떤 항원에 대한 항체가 존재하는지를 판별할 수 있도록 고안한 것이다. 둘째는 항체 존재 여부를 항원별로 구분하여 최종확인(detection)하는 검사방법에 관한 것으로서 형광물질을 이용하여 판독하는 방법과 효소반응을 이용한 발색반응을 이용하여 판독하는 방법 등이 있다.

1. 제조방법

1) HCV 항원단백질이 코팅된 96-공 플레이트 제조

4종류의 HCV 항원단백질(core, NS3, NS4, NS5)을 앞서 특허출원(출원번호 10-2000-0024806)한 기술대로 96-공 플레이트의 각 공 속에 서로 다른 일정한 자리에 흡착/결합시켜 코팅시킨다. 더 상세하게 설명하면 먼저 스테인레스(혹은 100℃정도의 열에 강하고 단백질 등과 반응하지 않는 물질)로 된 적당한 굵기의 속이 빈 원통형 관(도 5-B)이 4개 붙어있는 다관체(multi-tube body, 도 5-A))를 96-공 플레이트의 각 공의 바닥에 완전히 밀착되도록 위치시킨다(도 6-13). 그리고 특별한 성질을 지닌 물질 즉, 용액으로 준비가 가능하고 적절한 조건에서 고체로 변하며 쉽게 제거가 가능하고 항원등과 반응하지 않는 물질을 용액상태로 준비하여 다관체가 들어 있는 각 공 속에 이 용액을 넣는다. 이와 같은 성질을 지닌 물질을 한천물질을 예로 들어서 본 발명을 설명하기로 한다. 한천용액이라 함은, 한천물질을 물에 넣고 끓여서 녹인 용액을 말한다. 한천용액이 식어서 굳어지기 전에 96-공 플레이트의 각 공에 일정한 양(약 50㎕∼100㎕)씩 분주하여 넣고(도 6-14) 상온에서 그대로 굳힌다. 한천용액이 완전히 굳은 후 다관체를 조심스럽게 각 공에서 들어올려 빼내면 다관체가 있던 부위는 그대로 원통형의 빈 공간으로 남게 된다(도 7). 이렇게 생성된 원통형의 빈 공간(이하 "소공"이라 함)에 미리 적당한 완충용액으로 일정 농도로 희석시킨 각기 다른 종류의 항원용액을 따로 따로 각 소공에 넣고 4℃에서 16시간 이상(overnight) 방치하여 각 공의 여러 자리에 흡착/결합시킨다. 남아있는 용액과 한천물질을 진공펌프를 이용하여 제거하고 적당한 세척용액으로 여러 번 세척하여 준 후 각 공의 항원이 흡착/결합되지 않고 남아 있는 나머지 부위들은 또 다른 단백질이나 탄수화물(이하 "post-coating 물질"이라 함) 등을 이용하여 흡착/결합시켜 각 공의 모든 부위가 항원(혹은 항체)이나 기타 post-coating 물질로 완전히 덮히도록 한다. 적당한 세척액으로 여러번 세척한 후 마지막으로 증류수로 세척하고 나서 적당한 온도와 습도조건으로 완전히 건조시킨다. 다관체를 이용한 흡착/결합방법은 위와 같은 방법이외에도 한천용액을 먼저 굳힌 후 분리형 다관체의 하부 다관체(도 5-C-10)를 한천용액이 굳은 채(이하 한천배지라 함)로 남아있는 각 공 속에 넣어 바닥에 닿도록 위치시키고 상부 덮개(도 5-C-9)를 이용하여 진공펌프로 하부 다관체의 각 관속에 들어 있는 한천배지 부위들만을 제거하여 소공을 생성시키는 방법도 있고 혹은 다관체만을 이용하여 항원(혹은 항체)을 직접 다관체의 가운데 빈 공간 속에 넣어서 각각의 항원을 각 공의 바닥에 서로 다른 자리에 흡착/결합시키는 방법도 본 발명에 포함된다.

2) 기타 시약 구성 성분 제조

본 발명에서 개발한 진단시약은 HCV 항원단백질이 코팅되어 있는 96-공 플레이트 외에 음성표준시료와 양성표준시료, 시료희석액, 농축세척액을 공통으로 하고 판독방법에 따라서 추가시약을 달리한다. 즉, 효소를 이용한 발색반응으로 최종 결과를 판독하는 진단시약의 구성성분은 항-인간면역글로블린-HRP 복합체(이하 2차 항체 표식자라 함), 발색용 기질용액, 반응정지액, 기질발색단계에 필요한 96-공용 4-실 프레임 등이 추가로 구성된다. 또는 형광물질을 이용한 형광측정법으로 최종 결과를 판독하는 진단시약의 구성성분은 항-인간면역글로블린-형광물질 복합체가 추가로 구성된다.

2. 검사방법

상기 제조방법대로 제조한 96-공 플레이트의 각 공 속에 검사하고자 하는 검체를 시료희석액으로 일정한 배수로 희석(약 1/10∼1/20)한 후 약 100∼200㎕씩 일정한 양을 넣는다. 37℃에서 1시간 정도 반응(이하 1차 반응이라 함)시킨 후 세척액으로 세척한다. 2차 항체 표식자를 넣고 다시 37℃에서 1시간 반응시킨다(이하 2차 반응이라 함). 검체내에 HCV에 대한 항체가 존재한다면 1차 반응에서 검체내에 있는 HCV에 대한 항체는 플레이트의 각 공 속에 코팅되어 있는 HCV 항원단백질과 반응하여 포획된다. 포획된 항체는 2차 반응을 통하여 2차 항체 표식자와 반응하여 2차 항체 표식자와 복합체를 구성한다. 2차 반응 후 다시 세척액으로 세척하면 96-공 플레이트에는 1차반응과 2차 반응을 통해 형성된 항원-검체항체-2차항체표식자로 구성된 복합체만 남아있게 된다. 본 발명에서 신규로 개발한 96-공 용 4-실 프레임(four-chamber frame,도 9-17)을 96-공 플레이트에 잘 맞춰 끼우고 각각의 실(chamber) 속에 발색용 기질용액을 넣고 상온에서 30분간 암소(dark) 조건에서 반응시키고 반응정지액을 추가로 넣은 후 ELISA(효소이용 면역분석법) 판독기(reader)로 흡광도를 측정한다. 또는 FIA(형광면역분석법)을 이용하는 경우는 1차 반응과 2차 반응을 통해 96-공 플레이트에 형성된 항원-검체항체-2차항체표식자(이때 표식자는 형광물질 임)에서 직접 형광을 측정한다. 즉, 2차항체표식자로 사용된 형광물질이 일정한 광원을 흡수하여 여기된 상태에서 다시 정상상태로 돌아가면서 발산시키는 형광인 장파장을 형광분석기로 측정한다.

본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다.

다만, 다음의 실시예는 본 발명을 설명하기 위하여 제시한 한 예로서 이로써 본 발명의 범위를 제한하지는 아니한다.

실시예 1. HCV 항원단백질이 코팅된 96-공 플레이트 제조

폴리스티렌 재질로 된 96-공 플레이트(도 3-1)의 각 공 속에 앞서 특허출원(출원번호 10-2000-0024806)한 기술대로 4개의 소공을 만든다. 더 상세하게 설명하면 다관체(도 5-A)를 각 공의 바닥에 완전히 밀착하도록 위치시킨다(도 6-13). 다관체는 4개의 관이 (도 5-B)과 같이 상부의 덮개부에 고정되어 있으며 각 봉의 지름은 2∼3mm이다. 다관체를 96-공 플레이트의 각 공에 밀착시킨 채로 고정시킨 후 한천물질을 4%농도로 물에 녹여서 100℃로 끓여 완전히 용해시킨다. 완전히 용해된한천용액을 다관체가 고정된 96공 플레이트의 각 공 속에 100㎕씩 넣는다. 상온에서 한천용액의 온도가 떨어져서 40℃ 전후에서 굳기 시작하여 실온에서 완전히 굳는다. 한천용액이 완전히 굳은 후 다관체를 조심스럽게 빼내면 그 자리에 4개의 소공(도 7-15)이 생긴다. 4개의 소공 각각에 4종류의 HCV 항원단백질 즉, core는 Na-carbonate 완충용액(pH9.6)에 0.1∼0.2㎍/㎖ 농도로 희석시키고 NS3는 Na-carbonate 완충용액(pH9.6)에 0.1∼0.2㎍/㎖ 농도로 , NS4는 phosphate 완충용액(pH12)에 0.05∼0.1㎍/㎖ 농도로 , NS5는 Tris-HCl 완충용액(pH7.5)에 0.25∼0.5㎍/㎖ 농도로 희석시켜서 각 소공에 20∼40㎕씩 분주하여 넣는다. 4℃에서 16시간 이상 방치하여 각 항원단백질들을 소공의 바닥면에 흡착/결합시켜 코팅시킨다. 각 항원단백질의 코팅이 끝나면 각 소공 속에 남아 있는 완충용액과 한천물질을 진공펌프로 제거한 후 세척액(PBS용액, pH7.4)으로 다시 3번 세척한다. 젤라틴을 PBS용액에 0.1% 농도로 희석시킨 젤라틴용액을 각 공 속에 100∼200㎕씩 넣어 실온에서 2시간 방치하여 각 항원단백질이 공 내에서 흡착/결합(도 8-16)하지 않은 나머지 부분을 모두 젤라틴으로 흡착/결합시켜 메운다. 다시 0.01% tween-20이 포함된 PBS세척액으로 3번 세척하고 다시 증류수로 2번 더 세척한 후 상온에서 서서히 건조시켜 4종류의 HCV 항원단백질이 코팅된 플레이트를 완성한다.

실시예 2. 효소면역분석법용 기타 시약 구성성분 제조

ㄱ) 음성표준시료

HCV 음성으로 판정된 혈청을 pooling하여 분주한 것

ㄴ) 양성표준시료

HCV 양성으로 판정된 혈청을 pooling하여 분주한 것

ㄷ) 시료희석액

10mM PBS완충용액(pH7.4)

1% 태아소혈청(fetal bovine serum)

0.2% Triton X-100

0.1mM EDTA

0.02% Thimerosal

ㄹ) 2차 항체 효소표식자 용액

항-인간면역글로블린-HRP 복합체 2∼20㎍/㎖

10mM PBS완충용액(pH7.4)

5% 태아소혈청(fetal bovine serum)

0.05% Tween-20

1mM EDTA

0.02% Thimerosal

ㅁ) 발색용 기질 용액

o-phenylene diamine(OPD) 또는 3,3',5,5'-tetramethyl benzidine(TMB) 6㎎/5㎖

50mM acetate완충용액(pH5.4)

0.003% H₂O₂

ㅂ) 반응정지액

4M H₂SO₄

ㅅ) 세척액

10mM PBS완충용액(pH7.4)

0.05% Tween-20

ㅇ) 96-공 용 4-실 프레임(도 )

실시예 3. 형광면역분석법용 기타 시약 구성성분 제조

ㄱ) 음성표준시료

HCV 음성으로 판정된 혈청을 pooling하여 분주한 것

ㄴ) 양성표준시료

HCV 양성으로 판정된 혈청을 pooling하여 분주한 것

ㄷ) 시료희석액

10mM PBS완충용액(pH7.0)

1% 태아소혈청(fetal bovine serum)

0.2% Triton X-100

0.1mM EDTA

0.02% Thimerosal

ㄹ) 2차 항체 형광표식자 용액

항-인간면역글로블린-형광물질 복합체 2∼20㎍/㎖

10mM PBS완충용액(pH7.0)

5% 태아소혈청(fetal bovine serum)

0.05% Tween-20

1mM EDTA

0.02% Thimerosal

ㅁ) 세척액

10mM PBS완충용액(pH7.4)

0.05% Tween-20

실시예 4. 효소면역분석법을 이용한 검사방법

HCV 항원단백질이 코팅되어 있는 96-공 플레이트의 각 공 속에 검사하고자 하는 검체를 시료희석액으로 10배 희석한 후 약 10㎕씩 일정한 양을 넣는다. 37℃에서 1시간정도 반응(이하 1차 반응이라 함)시킨 후 세척액으로 세척한다. 다시 2차 항체 효소표식자 용액 100㎕ 넣고 다시 37℃에서 1시간 반응시킨다(이하 2차 반응이라 함). 세척액으로 세척 후 96-공 플레이트에 맞게 제작된 96-공 용 4-실 프레임(도 9-17)을 96-공 플레이트에 끼우고(도 9-19) 각 실마다 발색용 기질용액을 50㎕ 넣고 30분간 상온에서 암소조건으로 발색반응을 시킨다. 검체에서 HCV의 각 항원단백질에 대한 항체의 존재여부는 기질발색반응 후 반응정지액을 각 실마다 30㎕씩 넣고 ELISA(효소이용 면역분석법) 판독기(reader)로 흡광도를 측정하여서 확인한다.

실시예 5. 형광면역분석법을 이용한 검사방법

HCV 항원단백질이 코팅되어 있는 96-공 플레이트의 각 공 속에 검사하고자 하는 검체를 시료희석액으로 10배 희석한 후 약 100㎕씩 일정한 양을 넣는다. 37℃에서 1시간정도 반응시킨 후 세척액으로 세척한다. 다시 2차 항체 형광표식자 용액 100㎕ 넣고 다시 37℃에서 1시간 반응시킨 후 세척액으로 세척한다. 영상분석 프로그램을 이용한 형광분석을 통하여 검체내에 HCV의 각 항원단백질에 대한 항체의 존재여부를 판독한다.

본 발명에 의한 새로운 C형 간염 진단시약은 경제적·사회적·기술적 측면에서 여러 가지 효과를 기대할 수 있다.

첫째는 경제적인 측면으로서 사용자들에게 상당한 경제적 이득을 제공할 수 있다. 현재 국내 및 전 세계적으로 사용되고 있는 모든 C형 간염 진단시약 등은 위양성이 상당히 많이 나오므로 즉, 양성으로 나온 확인진단시약으로 재검사하면 그 중에서 50∼60%가 음성으로 판정되므로 그에 해당하는 혈액을 폐기처분해야 한다. 혹은 2차로 고가의 확인진단시약을 구입해야 하는 2차적인 경제적인 부담을 가져야 한다. 그러나 본 발명품을 이용하면 혈액스크리닝 기능과 확인진단 기능을 동시에 하므로 위양성을 상당히 줄일 수 있고 따라서 불필요하게 폐기처분되는 혈액을 줄여서 사용자에게 경제적 이득을 제공해줄 수 있다.

둘째는 사회적 측면이다. 혈액수급과정에는 두가지 상반된 개념이 있다. 즉, 수혈로 인한 해당질병의 감염이 없어야 하는 것이 가장 중요한 사회적인 책임이고 그 다음은 헌혈자에게 올바른 결과통보를 해 주어야 하는 것이 두 번째 사회적인 책임이다. 후자의 경우 위양성으로 인한 양성통보를 받은 당사자는 상당한 정신적·경제적·시간적 피해를 보고 있는 것이 현실이다. 예를 들어 군대 입대를 위해휴학한 학생이 양성통보를 받은 경우 입대도 못하고 바로 복학도 안되는 상황에서 그것이 위양성으로 인한 오진일 경우 여러 가지 사회적 문제가 발생하고 있는 것이다. 본 발명품의 경우 특히 위양성으로 인한 사회적 문제를 상당부분 해소할 수 있는 장점을 지닌다.

셋째는 기술적인 측면이다. C형 간염 진단시약은 현재 세계적으로 제3세대까지 version-up이 되었지만 1세대부터 3세대까지의 version-up은 HCV 항원단백질의 추가를 통해서 이루어졌다. 그러나 3세대까지 version-up된 현시점에서 이미 더 이상 추가할 HCV 항원단백질이 없고 다만 항원단백질의 약간의 변형을 통하여 민감도나 특이도를 향상시키는 정도로 사소한 변형만 가능하기에 획기적으로 현재의 제3세대 C형 간염진단시약을 대체할 만한 제4세대 C형 간염 진단시약의 개발이 기술적인 한계에 부딪힌 상황이다. 따라서 본 발명은 이같은 한계를 넘어선 새로운 신기술로서 이는 또한 기타 진단시약의 개발에 상당한 파급효과를 줄 수 있다.

Claims

96-공 플레이트의 각 공 속에 여러 종류의 HCV 항원단백질을 서로 다른 일정한 자리에 흡착/결합시켜 코팅시키는 것을 특징으로 하는 방법
효소면역분석법을 이용한 검사방법을 수행할 경우 96-공 용 4-실 프레임을 이용하는 것을 특징으로 하는 방법
형광면역분석법을 이용한 검사방법을 수행할 경우 영상분석 프로그램을 이용한 형광분석을 특징으로 하는 방법